CN101394853A - 吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基胺衍生物在神经性障碍的治疗中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用本发明的化合物，包括吡唑并[1，5－a]嘧啶－7－基胺化合物及其盐，以及包含同样物质的药物组合物在治疗Eph受体相关的(例如神经性)损伤和障碍的方法。本发明也涉及通过以有效量给细胞或个体施用本发明的化合物，在细胞中调节Eph受体的活性，刺激神经的再生，并逆转神经元变性。

Description

吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺衍生物在神经性障碍的治疗中的用途
发明背景
成年哺乳动物中枢神经***(CNS)的损伤常以轴突损伤为特征，包括数种轴突不能再生至其目标，导致有所述损伤的个体的永久性瘫痪。对于遭受这样的如脊髓损伤(SCI)的CNS相关外伤的患者常不能治愈，其常伴随着像截瘫或四肢***衰弱性临床病症。
轴突再生(例如，损伤后)是通过成人CNS中的许多抑制性影响预防的，其中有抑制性髓鞘蛋白和胶质瘢痕的形成。在识别与髓鞘质抑制作用(例如，Nogo、髓鞘相关糖蛋白(MAG)、和少突胶质-髓鞘糖蛋白(OMgp))相关的分子方面已取得可观的进展，但对作为胶质细胞对损伤的响应所形成的胶质瘢痕了解得相对较少。(GrandPre，T.，等人(2000)Nature，403(6768)：439；Fournier，A.E.等人(2001)Nature409(6818)：341；Wang，K.C.，等人(2002)Nature417(6892)：941；和Wang，K.C.，等人(2002)Nature420(6911)：74)。胶质瘢痕是以星形胶质细胞增生为特征，其通常使星形胶质细胞增殖停止，并响应于损伤而变得增生，否则形成轴突再生的物理和化学障碍。(Silver，J.等人，(2004)Nat Rev Neurosci5(2)：146；和Morgenstern，D.A.等人，(2002)Prog Brain Res.137：313)。尽管一定范围的胶质细胞对结痂形成有所贡献，星形胶质细胞的响应(即，星形胶质细胞神经胶质增生)被认为是发生这种现象的主要机制。
Eph受体酪氨酸激酶亚家族被认为是最大的跨膜受体酪氨酸激酶的亚家族，且带着其配体肝配蛋白在神经发育期间负责支配适当的细胞迁移和定位，假定通过调节细胞间排斥。(Pasquale，E.(1997)Curr.Opin.Cell Biol.9：608-615)(Orioli和Klein(1997)Trends in Genetics13：354-359)。Eph受体是密切相关的，且当与其肝配蛋白配体结合时(其作用是通过细胞-对-细胞的接触调节的)有活性地发出信号，它们能正向和双向发出信号。(Murai，K.K.，等人(2003)J Cell Sci.116：2823)。
Eph受体是已知的神经发育调节剂，作用是迁移细胞或轴突的调控，发育中的大脑的不同区域中的组织类型和断层图的建立，以及突触形成和塑性的调控。Eph受体，包括EphA4和EphA7，在脊髓损伤或传入神经阻滞后被上调。(Miranda等人，(1999)Exp Neurol 156：218；Willson，等人.(2002)Cell Transplantation 11：229)；因此，其抑制作用被视为神经学障碍治疗的潜在的治疗策略。
由于SCI的复杂和多因素特性，一直需要治愈或改善由脊髓损伤引起的并发症的显著进步。已进行体内研究以评价通过阻断髓鞘质抑制剂(GrandPre，T.等人，(2002)Nature 417(6888)：547；Kim，J.E.等人，(2003)Neuron 38(2)：187)，硫酸软骨素蛋白多糖(Bradbury，E.J.等人，(2002)Nature 416(6881)：636)或这些中的两种的下游信号传导分子(Fournier，A.E.等人，(2003)J Neurosci.23(4)：1416；和Sivasankaran，R.等人，(2004)Nat Neurosci.7(3)：261)，仅获得小的成功。但是，Eph受体的试验性抑制作用在损伤和抑制的星形胶质细胞增生后已显示大量的轴突再生，导致胶质瘢痕的显著降低，并使这些受体成为对脊髓损伤和中风理想的治疗靶标，其亦导致轴突损伤和神经胶质增生。设计阻断Eph受体功能的策略与治疗学因此在CNS-相关障碍的治疗中预示显著进展，并能够推测在神经损伤诸如SCI、中风及其他神经变性障碍后带来很大的改善性恢复。
发明概述
本发明涉及使用本发明化合物用于治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的方法，和使用包含本发明化合物的药物制剂治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的方法。
本发明亦涉及通过细胞与有效量的本发明化合物接触调节细胞中Eph受体活性的方法。在某些实施方案中，Eph受体可在体外或体内被调节。
本发明亦涉及刺激和提高神经再生(诸如在脊髓损伤后的轴突再生)，并逆转由于外伤性损伤、缺氧病症、或梗死(例如，是多发性硬化病和其他神经变性疾病的病因的中风或神经变性中)的方法。其中可通过给哺乳动物施用足以刺激和改善神经再生(诸如轴突再生)或逆转神经元变性的一定量的本发明的化合物的方法。本发明的化合物可递送至正常和损伤的细胞。在一些实施方案中，本发明的化合物抑制Eph受体的磷酸化。在其他实施方案中，本发明的化合物抑制肝配蛋白配体与Eph受体的结合。
本发明亦涉及递送治疗剂至细胞的方法，诸如借助包含治疗剂(例如，连接试剂)与本发明的化合物连接的结合物。
如本文和PCT公布WO05/070431(其内容引入本文作为参考)所述，本发明的化合物，例如，吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺衍生物等可用作蛋白激酶抑制剂并因此用于蛋白激酶相关障碍的治疗。以实施例的方式，本发明的化合物用作酪氨酸激酶抑制剂，诸如肝配蛋白受体激酶抑制剂，并可因此用于治疗例如，神经性损伤和障碍。
附图说明
图1A和1B分别显示EphA4自身磷酸化和配体依赖的磷酸化的抑制作用(来自接受EphA4免疫沉淀后进行磷酸化酪氨酸的蛋白质印迹的样品)。图1A，泳道1和2表示用对照IgG-Fc或用配体肝配蛋白B3-Fc处理的细胞的样品。泳道2-6表示来自已用化合物1(100nM)预-处理的细胞的样本，然后在抑制剂(化合物1)(泳道3、4)联合存在下或缺失下(泳道5、6)用IgG-Fc或肝配蛋白B3-Fc刺激。图1B、泳道1和2显示在血清饥饿后在对照中(未处理)和肝配蛋白B3-Fc刺激的细胞中的EphA4磷酸化作用。全部其他泳道表示来自在改变浓度(如所示)的试验Eph抑制剂存在下肝配蛋白B3-Fc刺激的细胞的样本。
图2A显示证实Eph受体抑制剂(例如，化合物I(100nM))在纳摩尔浓度下能够克服轴突赘疣的抑制作用的免疫荧光图像。图2B显示实验测定的轴突赘疣抑制作用的图示。Y轴显示以微米表示的平均轴突长度。
图3显示Eph受体抑制剂阻断细胞因子(TGF-α、LIF、和IFN)诱导的星形胶质细胞迁移的试验测定图示。Y轴显示与对照(无血清＝1)相比的细胞迁移平均相对距离。白色棒表示加入化合物6。黑色棒表示未加入化合物。
图4证实了Eph受体抑制剂阻断在小鼠大脑(大脑匀浆的裂解液在接受EphA4免疫沉淀作用后进行磷酸化酪氨酸蛋白质印迹)的体内EphA4磷酸化作用。动物给予i.v.剂量的相关化合物并在给药后25分钟或1小时(0.25h或1h)处死，摘除大脑并在免疫沉淀后进行磷酸化酪氨酸蛋白质印迹。四只动物用作对照并且三只动物每只用于每种药物每个时间点。从顶部至底部，试验化合物是化合物1、化合物7、和化合物6。
图5A和图5B显示式(I)化合物的制备方法。如下文所述，图5B描述了从合成分别带相应官能团(X)的吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺核心骨架开始制备式(I)化合物，其中残基A、R2或R3分别可通过所示的已知反应引入。
图6显示化合物9和10的制备方法。
发明详述
本发明涉及包括式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，用于Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的治疗，或用于制备用于所述损伤和障碍治疗的药物组合物，式(I)化合物在所述损伤和障碍治疗中使用的方法，用于所述损伤和障碍的治疗的包含式(I)化合物的药物制剂，用于所述疾病的治疗的式(I)化合物：
Figure A200780008081D00091
其中：
R2为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或其可通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的脂族残基，
R2或R3至少一个是取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或其通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
优选的实施方案是根据上文的化合物的用途，或用于治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的其药学上可接受的盐，其中：
R2为H；低级烷基；环烷基；苄基；苯并噻吩、被低级烷基取代的吲哚基、任选被低级烷基取代的吡啶基或噻唑基；未取代的苯基或被一个或两个选自卤素、羟基、烷氧基、苄氧基、环烷基、氨基、乙酰基氨基、被一个或两个卤素取代的低级烷基磺酰胺和苯磺酰胺的取代基取代的苯基；
R3为H；任选被卤素取代的低级烷基；苯基、吡啶基、或噁唑基；
A为：(a)H；卤素；苯并噻吩基；吡啶基；甲基哌嗪基苯氧基；被低级烷基取代的吲哚基；
(b)未取代的或被一个或多个选自以下基团的取代基取代的苯基：单-、二-或三-低级烷氧基、二-低级烷基氨基、任选被烷基二-取代的吗啉基、其被一个或多个选自低级烷基、低级烷氧基、低级烷基哌嗪基、吡咯烷基、二烷基氨基和低级链烷醇的取代基取代的哌嗪基；且
R1为H。
如本文所述，本发明的化合物，例如式(I)化合物，例如，吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺衍生物等，可用于治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍。
吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺衍生物已被惊奇地证实了药物学优良的特性，尤其允许特异类型或类别或组的激酶，包括Eph受体激酶的抑制作用。除了已建立的活性外，吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺衍生物具有其骨架另外为实现精细的调整与靶激酶结合位点的特异性相互作用允许提供宽的取代模式的优点，因此打开了新的视角，并提供各种特异性程度的激酶抑制剂。鉴于这些活性，本发明的化合物可用于治疗涉及这些类型的激酶的特别异常或过度活性的疾病的治疗，例如，Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍。
更优选地，所治疗的疾病是神经性损伤或障碍，本文将更详细地描述。
在另外的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
Figure A200780008081D00111
其中：
R2为H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；脂族残基；官能团；或其通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基或脂族残基；
R3可为H、取代的或未取代的芳基、杂芳基、脂族残基、官能团、或其通过连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的脂族残基，
R2或R3至少一个为取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或其通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基，且条件是R2和A不能两者均为未取代的苯基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
一个优选的实施方案为根据上文的化合物，其中：
R2为H；低级烷基；环烷基；苄基；苯并噻吩基；被低级烷基取代的吲哚基、任选被低级烷基取代的吡啶基或噻唑基；未取代的苯基或被一个或两个选自以下基团的取代基取代的苯基：卤素、羟基、烷氧基、苄氧基、环烷基、氨基、乙酰基氨基、被一个或两个卤代基取代的低级烷基磺酰胺和苯磺酰胺；
R3为H；任选被卤代基取代的低级烷基；苯基、吡啶基、或噁唑基；
A为
H；卤代基；苯并噻吩基；吡啶基；甲基哌嗪基苯氧基；被低级烷基取代的吲哚基；
(b)未取代的或被一个或多个选自单-、二-、或三-低级烷氧基、二-低级烷基氨基、任选被烷基二-取代的吗啉基的取代基取代的苯基，
被一个或多个选自低级烷基、低级烷氧基、低级烷基哌嗪基、吡咯烷基、二烷基氨基和低级链烷醇的取代基取代的哌嗪基；且
R1为H；条件为R2和A不能两者均为未取代的苯基。
最优选地，所述的化合物选自：
6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(本文也称之为“化合物1”)；
6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(本文也称之为“化合物3”)；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇(本文也称之为“化合物4”)；
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(本文也称之为“化合物5”)；
6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-哌嗪-1-基甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(本文也称之为“化合物6”)；
6-(3-氯-苯基)-3-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7基胺(本文也称之为“化合物7”)；
N-{3-[1-(4-甲氧基-苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基氨基]-4-甲基-苯基}-3-三氟甲基-苯甲酰胺(本文也称之为“化合物8”)；
3-(3-溴-苯基)-6-(3-氯-苯基)-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(本文也称之为“化合物9”)；
6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(本文也称之为“化合物10”)；
3-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；6-(3-苄氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基}-酚；
6-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-苄氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{4-[7-氨基-3-(4-二甲基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基}-2，3-二氯-苯磺酰胺；
4-氯-苯磺酸4-[7-氨基-3-(4-二甲基氨基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-苯基酯；
6-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-溴-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-溴-苯基)-5-甲基-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(2，6-二氯-苯基)-3-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(3-甲氧基-苯基)-6-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-溴-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(4-溴-苯基)-5-苯基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-苯并[b]噻吩-3-基-6-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-苯并-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-甲氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(2-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-甲氧基-苯基)-3-吡啶-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(3-苄氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(2-苄氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(4-苄氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(2-苄氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(4-苄氧基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
4-{7-氨基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(2-苄氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(4-苄氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
4-{7-氨基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-酚；
6-(3-苄氧基-苯基)-3-[1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[7-氨基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚；
3-[7-氨基-3-吡啶-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚；
6-(3-苄氧基-苯基)-3-(2-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[7-氨基-3-(2-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚；
3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-吡啶-4-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氨基-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(2-氨基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(4-甲基-噻唑-2-基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-苯并[b]噻吩-3-基-3-[4-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(3-甲氧基-苯基)-6-噻吩-3-基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-苄氧基-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[7-氨基-3-(3-甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-酚；
(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸乙酯
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-酚；
6-(2-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(2-氯-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-溴-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-溴-苄基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-溴-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3-吗啉-4-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；
6-苄基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；
6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3，4-二氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3，4-二氟-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-[7-氨基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-吡啶-2-醇；
6-苄基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(3，4-二甲氧基-苯基)-6-(3-氟-苄基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(2-甲氧基-5-哌嗪-1-基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(2-甲氧基-5-吗啉-4-基-苯基)-5-甲基-6-(3-吗啉-4-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-N，N′，N′-三甲基-乙烷-1，2-二胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-N，N′，N′-三甲基-丙烷-1，3-二胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[5-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-2-甲氧基-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-{2-甲氧基-5-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-N′，N′-二甲基-乙烷-1，2-二胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-N′，N′-二甲基-丙烷-1，3-二胺；
3-[5-(4-氨基-哌啶-1-基)-2-甲氧基-苯基]-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-{2-甲氧基-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-苯基}-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-甲氧基-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；
6-(3-氯-苯基)-3-[5-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-2-甲氧基-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(1-甲基-哌啶-4-基氨基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
3-(5-[1，4′]联哌啶-1′-基-2-甲氧基-苯基)-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-氟-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[5-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[5-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(2-氟-5-吗啉-4-基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[5-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-氟-5-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-氟-5-(1-甲基-哌啶-4-基氨基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-{2-氟-5-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-苯基}-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-{2-氟-5-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇；
3-[5-(4-氨基-哌啶-1-基)-2-氟-苯基]-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-氟-5-(哌啶-4-基氨基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-{2-氟-5-[甲基-(1-甲基-哌啶-4-基)-氨基]-苯基}-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-N，N′，N′-三甲基-乙烷-1，2-二胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-N，N′，N′-三甲基-丙烷-1，3-二胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-N′，N′-二甲基-乙烷-1，2-二胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-N′，N′-二甲基-丙烷-1，3-二胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[5-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-氟-5-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-N-乙基-N′，N′-二甲基-乙烷-1，2-二胺；
N-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-4-氟-苯基}-N′-甲基-丙烷-1，3-二胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[2-氟-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[4-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-(2-氟-4-吗啉-4-基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{4-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-3-氟-苯基}-N，N′，N′-三甲基-乙烷-1，2-二胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[4-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-{2-氟-4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-哌啶-1-基]-苯基}-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
6-(3-氯-苯基)-3-[4-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-2-氟-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺；
N-{4-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-3-氟-苯基}-N，N′，N′-三甲基-丙烷-1，3-二胺；
及其可药用盐。
许多本发明的优选化合物，包括以上列举中的一些，被另外描述于表1中：
Figure A200780008081D00221
Figure A200780008081D00231
Figure A200780008081D00241
Figure A200780008081D00251
Figure A200780008081D00261
Figure A200780008081D00271
Figure A200780008081D00281
Figure A200780008081D00291
Figure A200780008081D00301
Figure A200780008081D00311
Figure A200780008081D00341
Figure A200780008081D00351
在本发明的实施方案中，本发明的化合物用于与Eph受体相关(例如，神经性)的损伤和障碍的治疗方法。
在本发明的另一个实施方案中，由本发明的化合物制备的药物组合物被用于与Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的治疗方法中。药物组合物优选地包含本发明的化合物与可接受的药物载体。载体在本文中详细描述。
在本发明的另一个实施方案中，本发明的化合物被用于接触细胞，以便调节其中的Eph受体的活性。细胞可在体外或体内被接触，以有效量的本发明化合物调节其中的Eph受体。
在本发明的又一个实施方案中，本发明的化合物被用于刺激和改善神经再生(诸如轴突再生)的方法中，并逆转由于外伤性损伤、中风、多发性硬化症和神经变性疾病的神经元变性。其中一种可实现的方法是通过对哺乳动物施用有效地刺激和改善神经再生(诸如轴突再生)或逆转神经元变性的本发明化合物。本发明的化合物可递送至正常和损伤的细胞。在一些实施方案中，本发明的化合物抑制Eph受体的磷酸化作用。在其他实施方案中，本发明的化合物抑制肝配蛋白配体与Eph受体的结合。
在本发明的又一个实施方案中，本发明的化合物被用于递送治疗剂至细胞的方法，诸如通过包含与本发明化合物连接的所述治疗剂的结合物。如本文更详细地描述，治疗剂可以是连接试剂。
又一个实施方案是按照上文制备化合物的方法，其包括：
将腈类A-CH2-C≡N与甲酸乙酯在有机溶剂存在下反应以生成取代的3-氧代-丙腈，
将步骤(a)的取代的3-氧代-丙腈与肼一水合物在有机溶剂中缩合以生成式(III)的2H-吡唑-3-基胺：
Figure A200780008081D00361
在乙醇化物和甲酸乙酯存在下甲酰化取代的腈以制备式(II)的3-氧代-丙腈：
Figure A200780008081D00362
将式(II)的3-氧代-丙腈和式(III)的2H-吡唑-3基胺在有机溶剂的存在下缩合以生成式(I)化合物。
本发明特别涉及本发明的化合物，包括式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物或其可药用盐，在Eph受体相关(例如，神经性)的损伤和障碍的治疗或用于制备用于所述损伤和障碍的治疗的药物组合物，式(I)化合物在所述损伤和障碍治疗中的使用方法，或包含用于所述损伤和障碍的治疗的式(I)化合物的药物制剂：
Figure A200780008081D00363
其中：
R2为H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；取代的或未取代的脂族残基；官能团；或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3为H，取代或未取代的芳基，取代的或未取代的杂芳基，取代或未取代的脂族残基，官能团，或通过连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的脂族残基，R2或R3至少一个为取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基、或取代的或未取代的杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
本发明特别涉及式(I)化合物或其可药用盐，在Eph受体相关(例如，神经性)的损伤和障碍的治疗或用于制备用于所述损伤和障碍的治疗的药物组合物，式(I)化合物在所述损伤和障碍治疗中的使用方法，或包含用于所述损伤和障碍的治疗的式(I)化合物的药物制剂，用于所述损伤和障碍的治疗的式(I)化合物，其中R2为H；取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；取代的或未取代的脂族残基；官能团；或取代的或未取代的芳基、通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或可通过连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的脂族残基，
R2或R3的至少一个为取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基，条件是R2和A不能均为未取代的苯基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
本发明亦涉及治疗激酶依赖疾病的方法，包括给温血动物，特别是人施用式(I)的吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物。本发明亦涉及包含式(I)化合物吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺的药物制剂，特别是用于激酶依赖疾病的治疗，新的式(I)吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物，制备式(I)吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺化合物、和用于其制备的新的起始原料和中间体的方法。本发明亦涉及式(I)化合物在用于制备治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤或障碍的药物制剂的用途。
定义
上文和下文使用的一般术语优选地具有本公开的上下文中的以下含义，除非另有说明：
本文所用的以下缩略语代表本申请中的常用术语(在圆括号内)，包括但不限于实施例部分：DMSO(二甲基亚砜)；ES-MS(电喷雾质谱)；EtOAc(乙酸乙酯)；HPLC(高压液相色谱)；mL(毫升)；NMR(核磁共振)；RT(室温)；AtRET(以分钟表示的HPLC保留时间(方法A))；BtRET(以分钟表示的HPLC保留时间(方法B))；CtRET(以分钟表示的HPLC保留时间(方法C))；DtRET(以分钟表示的HPLC保留时间(方法D))；TFA(三氟醋酸)；
THF(四氢呋喃)；TMSCI(氯化三甲基甲硅烷基)。
如本文所用，“Eph受体”意指属于Eph家族的受体酪氨酸激酶，包括EphA2、EphA4、EphA5、EphA7、EphB2和EphB4。该家族被综述在例如Pasquale，E，(1997)Curr.Opin.Cell Biol.9：608-615；和Orioli和Klein(1997)Trends in Genetics 13：354-359中。
如本文所用，术语“治疗”包括预防或预防性治疗以及治愈性或疾病抑制性治疗，包括处于神经性障碍的危险的患者的治疗、以及疾病和损伤的患者的治疗。该术语还包括用于延迟疾病进展的治疗。
“Eph受体相关损伤和障碍”包括神经性损伤和障碍，包括但不限于脊髓损伤(SCI)；四肢麻痹、偏瘫、和截瘫，包括损伤引起的和遗传形式的；神经病变；CNS相关障碍(例如，细菌和病毒性脑膜炎)；和神经变形障碍(例如，阿尔茨海默病、脑弓形虫病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、和多发性硬化症)。
“Eph-受体相关损伤和障碍”亦包括由缺氧病症、或如中风的梗塞导致的神经元变性。该病症可导致运动、感觉和认知功能缺陷，大部分由于损伤轴突不能再生且经历突触重新组织。与SCI一样，中风后在梗塞点形成神经胶质瘢痕，并且抑制EphA4(例如，如本发明的化合物)可抑制瘢痕化并因此能够使得连接的再生和重新组织得到改善。使用星形细胞-海马神经元共培养物的中风的体外模型，已显示星形细胞间缝隙连接对缺氧应力后的神经元存活是非常重要的。(Blanc，E.M.等人(1998)J Neurochem，70(3)：958)。由于Eph受体已知涉及缝隙连接处的信号传导，这表示EphA4在缺血中风中的另一个潜在含义(Mellitzer，G.，等人，(1999)Nature，400(6739)：77)。
如本文所用，“本发明的化合物”包括，式(I)化合物，包括吡唑并[1，5a]嘧啶-7-基胺衍生物。本发明化合物亦指本文的“化合物(数字)”所指的那些化合物。
“芳基”是具有6至14个碳原子的芳香基团，特别是苯基、萘基、茚基、薁基、或蒽基，且为未取代的或被一个或多个，优选地一个或两个取代基取代，其中取代基选自下文定义的官能团的任意基团，并包括：低级卤素、烷基、取代的烷基、卤素低级烷基例如三氟甲基、低级链烯基、低级炔基、低级烷酰基、低级烷氧基、羟基、醚化或酯化的羟基、氨基、单-或二取代的氨基、氨基低级烷基、氨基低级烷氧基；乙酰基氨基；脒基、卤素、硝基、氰基、氰基低级烷基、羧基、酯化的羧基特别是低级烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、正丙氧基羰基或异丙氧基羰基、烷酰基、苯甲酰基、氨基甲酰基、N-单-或N，N-二取代的氨基甲酰基、氨基甲酸酯、烷基氨基甲酸酯、脒基、胍基、脲、脲基、巯基、磺基、低级烷硫基、磺氨基、磺酰胺、苯磺酰胺、磺酸盐、苯基、苄基、苯氧基、苄氧基、苯硫基、苯基-低级烷硫基、烷基苯硫基、低级烷基亚磺酰基、苯基亚磺酰基、苯基-低级烷基亚磺酰基、烷基苯基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、苯基磺酰基、苯基-低级烷基磺酰基、烷基苯基磺酰基、卤素-低级烷基巯基、卤素-低级烷基磺酰基、诸如特别是三氟甲烷磺酰基、二羟基硼(-B(OH)2)、杂环基、和在紧邻环的C-原子处结合的低级亚烷基二氧基，诸如亚甲基二氧基、膦酰基(-P(＝O)(OH)2)、羟基-低级烷氧基磷酰基或二-低级烷氧基磷酰基、氨基甲酰基、单-或二-低级烷基氨基甲酰基、单-或二-(羟基-低级烷基)-氨基甲酰基、或-NR4R5，其中R4和R5可以是相同的或不同的，且独立地为H；低级烷基(例如甲基、乙基或丙基)；或R4和R5连同N原子构成包含1-4个氮、氧或硫原子的3至8元杂环(例如，哌嗪基、低级烷基-哌嗪基、吖丁啶基、吡咯烷基、哌啶子基、吗啉基、咪唑啉基)。
芳基更优选地为未取代的或独立地被一个或两个选自增溶基团的取代基取代的苯基，增溶基团选自卤代基(诸如Cl或Br)；羟基；低级烷基(诸如C1-C3低级烷基)；芳基(诸如苯基或苄基)；氨基；氨基低级烷基(诸如二甲基氨基)；乙酰基氨基；氨基低级烷氧基(诸如乙氧基氨基)；低级烷基(诸如甲基)；烷氧基(诸如甲氧基或苄氧基，其中苄基环可以是被取代的或未被取代的，诸如3，4-二氯苄氧基)；磺氨基；取代的或未取代的磺酰胺(诸如苯并磺酰胺、氯代苯磺酰胺或2，3-二氯苯磺酰胺)；取代的或未被取代的磺酸盐(诸如氯-苯磺酸盐)；取代的脲(诸如3-三氟-甲基-苯基脲或4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基-脲)；烷基氨基甲酸酯或氨基甲酸酯(诸如乙基-N-苯基-氨基甲酸酯)或-NR4R5，其中R4和R5可以是相同的或不同的，且独立地为H；低级烷基(例如甲基、乙基或丙基)；或R4和R5连同N原子构成包含1-4个氮、氧或硫原子的3至8元杂环(例如，哌嗪基、低级烷基-哌嗪基、吡啶基、吲哚基、噻吩基、吗啉基、正-甲基哌嗪基、苯并噻吩基、吖丁啶基、吡咯烷基、哌啶子基、或咪唑啉基)；
杂芳基基团优选地为单环，但可以是双环或三环，且包含3-24个、优选为4-16个环原子，其中至少一个或多个、优选地为一至四个环碳被选自O、N或S的杂原子替换。优选地杂芳基基团选自吡啶基、吲哚基、嘧啶基、吡唑基、噁唑基、噻吩基、苯并噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、吡唑基、吲唑基、嘌呤基、吡嗪基、哒嗪基、4H-喹啉基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、喹啉基、indolizinyl、3H-吲哚基、异吲哚基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、***基、四唑基、呋咱基和苯并[d]吡唑基。
更优选地杂芳基基团选自吡啶基、吲哚基、嘧啶基、吡唑基、噁唑基、噻吩基或苯并噻吩基。
杂芳基基团可以是未取代的或被一个或多个选自上文定义的用于芳基的取代基的取代基、最优选地被羟基、卤素、低级烷基、诸如甲基或低级烷氧基、诸如甲氧基或乙氧基取代。
本文所用的“脂族的“，是指任何非芳香的基于碳的残基。脂族残基的实例包括取代的或未取代的烷基、环烷基、链烯基和炔基。
“烷基”包括低级烷基，优选至多7个碳原子的烷基，优选为从1至5并包括5，且为直链或支链的；优选地，低级烷基为戊基，诸如正戊基、丁基、诸如正-丁基、仲-丁基、异丁基、叔-丁基、丙基、诸如正-丙基或异丙基、乙基或甲基。优选地低级烷基为甲基、丙基或叔-丁基。
环烷基基团优选地为环戊基、环己基或环庚基，并可为未取代的或被一个或多个、特别是一个或两个、选自上文定义的用于芳基的取代基，最优选地被低级烷基，诸如甲基、低级烷氧基、诸如甲氧基或乙氧基、或羟基所取代。
链烯基和炔基优选地具有至多7个碳原子，优选地从1至5并包括5个碳原子，并可以是直链或支链的。
烷基、环烷基、链烯基和炔基可以是取代的或未取代的，并可被至多3个包括其他烷基、环烷基、链烯基、炔基、任何上文定义的用于芳基的取代基或任何下文定义的官能团的取代基取代。
“卤代基”或“卤素”优选地为氟、氯、溴或碘，最优选地为氟、氯或溴。
本文使用的术语“连接原子或基团”包括烷基、(诸如-CH2-)、氧基-O-；酮基-CO-；硫代-S-；磺酰基-SO2-；亚砜-SO-；胺-NH-或-NR-；羧酸；醇；酯(-COO-)；酰胺(-CONR-、CONHR′-)；磺酰胺(-SO2NH-、-SO2NR′-)；砜(-SO2-)；亚砜(-SO-)；氨基-基团；脲(-NH-CO-NH-、-NR-CO-NH-、-NH-CO-NR-、-NR-CO-NR-)；醚(-O-)；氨基甲酸酯(-NH-CO-O-、-NR-CO-O-)；或反酰胺磺酰胺和酯(-NH-CO-、-NR-CO-、-NH-SO2-、-NR-SO2-、-OOC-)。
本文使用的术语“官能团”包括：羧酸；羟基；卤素；氰基(-CN)；醚(-OR)；酮(-CO-R)；酯(-COOR)；酰胺(-CONH2、-CONHR、CONRR′)；硫醚(-SR)；磺酰胺(-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR′)；砜(-SO2-R)；亚砜(-SO-R)；胺(-NHR、NR’R)；脲(-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHR)；醚(-O-R)；卤素；氨基甲酸酯(-NH-CO-OR)；醛官能团(-CHO)；然后还有反酰胺；磺酰胺和酯类(-NH-CO-R、-NH-SO2-R、-OOC-R)；
R和R’是相同的或不同的且可以是H或任何上文定义的脂基、芳基或杂芳基部分。
其中复数形式用于化合物、盐、药物制剂、疾病等时，其意思亦指单个化合物、盐等。
盐特别为式I化合物的药学上可接受的盐。
此类盐形成如酸加成盐，优选是由具有碱性氮原子的式I化合物与有机或无机酸形成的盐，特别是药学上可接受的盐。适当的无机酸为例如卤酸(例如盐酸)、硫酸或磷酸。适当的有机酸为例如羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二酸、羟基乙酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸(如谷氨酸或天冬氨酸)、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、邻苯二甲酸、苯基乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲烷-或乙烷-磺酸、2-羟基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、2、3或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸或其它有机质子酸(如抗坏血酸)。
在负电荷基团，诸如羧基或磺酸基存在下，盐可以是与碱形成的，例如金属盐或铵盐，诸如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钙盐，或与氨或适合的有机胺诸如叔单胺例如三乙胺或三(2-羟基乙基)胺，或杂环碱，例如N-乙基-哌啶或N，N’-二甲基哌嗪的铵盐。
当碱性基团和酸基团存在于相同的分子时，式(I)化合物亦可以形成内盐。
对于分离或纯化目的，也可以采用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。但对于治疗的用途，只能采用药学上可接受的盐或游离化合物(以药物制剂的形式应用)，所以优选采用以上这些盐。
鉴于游离形式及其盐形式的化合物之间的密切关系，包括可用作中间体的盐，例如在化合物、互变异构体或互变异构体的混合物及其盐，任何涉及上文和下文的化合物特别是式(I)化合物的纯化或鉴别中，只要是适合的和有用的，并且如果未另外提及，可理解为亦指这些化合物的其相应的互变异构体，特别是式(I)的化合物、这些化合物的互变异构体的混合物，特别是式(I)化合物、或这些中任何的盐。
在“化合物...、其互变异构体、或其盐”等被提及的地方，这意味着“化合物...其互变异构体，或化合物或互变异构体的盐”。
任何不对称的碳原子可以存在(R)-、(S)-或(R，S)-构型，优选地以(R)-或(S)-构型存在。环上在饱和键原子处的的取代基，如果可能，可以存在顺-(＝Z-)或反(＝E-)式。化合物可以因此存在异构体的混合物或优选为纯的异构体，优选地为对映异构体-纯非对映异构体或纯对映异构体。
式(I)化合物具有有价值的药理学性质并用于激酶依赖疾病的治疗，例如用作治疗神经性疾病的药物。
式(I)化合物具有有价值的药理学性质并用于Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的治疗，例如作为治疗神经性疾病的药物。CNS-相关损伤和障碍
中枢神经***的损伤通常导致即使有也是非常有限的受损轴突的再生，伴随随后的永久性功能损伤。尽管一些CNS神经元似乎丧失了出生后轴突再生的内在能力，许多其他的，诸如皮质脊髓束(CST)神经元，似乎能够再生，但因为损伤部位的环境被抑制而不能再生。(Goldberg等人，(2002)Science 296：1860)。CNS再生的主要障碍是髓鞘质抑制剂和星形细胞神经胶质增生的存在。
在成人CNS中的许多抑制性影响，包括抑制性髓鞘蛋白和胶质瘢痕的形成，使得轴突不能再生。尽管已在设别与髓鞘质抑制作用相关的分子方面有大量进展(例如，Nogo、髓鞘相关糖蛋白(MAG)、和少突胶质细胞-髓鞘糖蛋白(OMgp))，靶向于用于治疗或改善神经性障碍的这些蛋白是尚未完成的任务。脊髓损伤后阻断个体髓鞘蛋白或其体内的常见受体可导致部分轴突再生、和功能恢复伴随的改进；但是，仅少量百分数的轴突再生长，凸现了去除其他障碍以再生达到更完全的治疗的需要(Simonen M.，等人.(2003)Neuron 38：201；Zheng B.，等人.(2003)Neuron 38：213)。
神经胶质瘢痕的主要成分是星形神经细胞胶质增生，借此正常的休眠的星形细胞显示了对损伤的剧烈的响应(Stichel CC，等人(1998)CellTissue Res 294：1)。它们变得肥大、增殖、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的上调表达，并在损伤部位并超出损伤部位形成了神经胶质进程稠密的网络。在相同的时间，星形细胞分泌了多种细胞因子并产生细胞粘附和细胞外骨架分子，其中一些是对再生抑制性的(例如，硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)和胶原IV)。阻断所述星形细胞产物的沉积作用可促进轴突再生(Stitchel CC，等人)。
因为当前大多数的脊髓损伤相关的尝试的治疗学已集中在克服髓鞘质的抑制剂或神经胶质瘢痕的成分，针对于抑制Eph受体的药物(例如，本发明的化合物)是促进神经再生的新策略的代表。
Eph受体和肝配蛋白
Eph受体酪氨酸激酶亚家族似乎是最大的跨膜受体酪氨酸激酶亚家族，并且其配体、肝配蛋白负责在神经发育期间控制适当的细胞迁移和定位，推测是通过调节细胞间排斥进行的(Pasquale，E.(1997)Curr.Opin.CellBiol.9：608-615)(Orioli和Klein(1997)Trends in Genetics 13：354-359)。Eph家族负责皮质脊髓束和前联合的形成。(Kullander K.，等人，(2001a)Neuron 29：73；Henkemeyer M等人，(1996)Cell 86：35)。
Eph受体是密切相关的，且当与其肝配蛋白配体结合时积极地发出信号(其作用受细胞-对-细胞接触调节)，它们能够向前和双向进行信号传导。(Murai，K.K.，等人，(2003)J Cell Sci.116(14)：2823)。
这些受体是以3种功能结构域为特征：细胞内酪氨酸激酶催化结构域，单一跨膜结构域，和细胞外配体结合结构域。
通过Eph受体的配体肝配蛋白的结合诱导在酪氨酸残基的磷酸化，其建立了用于包含SH2结构域的信号传导蛋白的结合位点并活化信号传导途径的阵列。肝配蛋白被认为通过聚集它们并诱导自动磷酸化作用活化Eph受体，同时可溶性单体肝配蛋白被认为抑制Eph受体活化。(Davis等人，(1994)Science 266：816)。
十六个已知Eph受体基于序列同源性被分成两个亚组(EphA和EphB)。EphA受体优先地结合糖基化磷脂酰肌醇(GPI)-结合的肝配蛋白-A配体，而EphB优先地受体与跨膜肝配蛋白-B配体结合。但是，肝配蛋白配体是相当混杂的，并倾向于在Eph受体活化方面缺少选择性。(Murai，K等人，(2003)Molecular and Cellular Neuroscience 24：1000)。例如，EphA4除了结合肝配蛋白A配体家族的成员以外，可结合(并因此被活化)配体肝配蛋白B2和B3。
Eph受体家族成员及其肝配蛋白配体基于文献中的所见，是有希望作为用于神经性障碍和损伤的治疗靶，包括作为促进轴突再生的靶。例如，因为Eph-肝配蛋白信号传导似乎通过接触排斥调节轴突导向，诱导神经元生长锥体的塌陷(WahlS.等人，(2000)J Cell Biol 149：263；Kullander等人)，且该家族成员在神经损伤后在成人中被上调(Moreno-Flores MT等人，(1999)Neuroscience 91：193；Willson CA等人，(2002)Cell Transplant 11：229)，异常表达或缺少Eph受体可证实在测定成人CNS中损伤的结果中是关键的。
EphA4
EphA4来自EphA家族的受体酪氨酸激酶，其在发育和成人神经***中具有重要的功能。连同在神经发育期间其已知的表达模式(Mori，T.等人，(1995)Brain Res Mol Brain Res 29：325；Ohta，K等人，(1996)Mechanismsof Development 54：59；Soans，C.等人，(1994)Oncogene 9：3353)，EphA4在显示广泛的突触重建的大脑区中被表达(Murai，K等人，(2003)NatureNeurosci 6：153)。在成人中，EphA4被富集在海马区和皮层中，这两个大脑结构对学习和记忆是关键的。受体亦富集在迁移神经嵴细胞、生长轴突投射、和显示广泛的可塑性的成熟的大脑结构中。(Murai等人)。
最近的研究涉及在脊髓损伤、轴突抑制作用和星形神经细胞胶质增生的两个关键方面的EphA4。(Goldshmit，Y.等人，(2004)J Neurosci.24(45)：10064)。Goldshmit比较了在野生型和EphA4-/-小鼠中脊髓半切后的神经再生，并发现在后者中总体的功能改善，其以缺少星形神经细胞胶质增生及同侧轴突的再生为特征。关于通过可见到改进的机制，试验(以及文献)证实了Eph受体在轴突再生中的三个作用：
首先，如体外测定证实的，是被与轴突上的受体-配体结合的星形细胞上的EphA4调节的轴突赘疣的直接抑制作用。这类EphA4的作用可提供用于在IFN存在下观察到的星形细胞上轴突赘疣的抑制作用的机制，Glodshmit已显示上调的EphA4表达。(Fok-Seang等，(1998)Eur JNeurosci 10：2400)。这些结果提示EphA4是在星形神经细胞胶质增生期间产生的除其他抑制性成分诸如细胞外基质和髓鞘质衍生的分子以外的又一个直接抑制分子。
第二，较少观察到，机制可能是被在再生轴突上的EphA4活化，与E16皮层神经元上的相似。但是，EphA4被发现仅在星形细胞和运动神经元上被高度表达，并且于损伤的成人脊髓中下行轴突上以低水平存在。
EphA4发挥抑制作用的第三机制涉及其在活化星形细胞中的关键作用，导致神经胶质增生和神经胶质瘢痕的形成。这类活化作用似乎取决于对细胞因子刺激的响应性且可能取决于Rho活化作用。细胞因子诱导的响应可能对EphA4受体在星形细胞中表达的上调作用、允许提高配体的结合作用和受体的活化作用是有贡献的。细胞因子-诱导的星形细胞增殖作用和肥大由EphA4的反式激活引起的亦是可能的，如FGF2-和PDGF-诱导的肝配蛋白B分子的磷酸化已显示的(Chong等人，(2000)Mol Cell Biol 20：724)，导致Rho活化和细胞骨架的重排。神经胶质活化的差异似乎是星形细胞特异性的，因为在巨噬细胞-微神经胶质活化中没有明显的差异。Eph和肝配蛋白已被报道在星形细胞和脑膜成纤维细胞之间的相互作用中起作用，神经胶质瘢痕的成纤维细胞除外。(Bundesen LQ等人，(2003)JNeurosci 23：7789)。
合成方法
如图5A所示，式(I)化合物与Alicade，E；De Mendoza，J；Garcia-Marquina，JM；Almera，C；J.Heterocycl.Chem.11，423(1974)描述的方法相似地进行制备
(a)将腈A-CH2-C≡N，与甲酸乙酯在有机溶剂存在下反应生成取代的3-氧代-丙腈，
(b)步骤(a)的取代的3-氧代-丙腈与肼一水合物在有机溶剂中缩合生成式(III)的2H-吡唑-3-基胺。
Figure A200780008081D00471
将取代的腈在乙醇盐和甲酸乙酯存在下甲酰化以制备式(II)的3-氧代-丙腈：
(c)将式(II)的3-氧代-丙腈与式(III)的2H-吡唑-3-基胺在有机溶剂存在下生成式(I)化合物。
具体地，式(I)化合物通过将3-氧代-丙腈(II)与相应的2H-吡唑-3-基胺(III)在乙醇HCl存在下缩合进行制备。2H-吡唑-3-基胺(III)通过肼一水合物与相应的溶解在有机溶剂，诸如EtOH、二噁烷或AcOH中的3-氧代-丙腈并在升高温度(优选地100℃)下缩合数小时而制备。制备标题化合物吡唑并部分的优选方法是在乙酸中在100℃下搅拌肼一水合物与相应的3-氧代-丙腈2-3h，接着加入HCl水溶液并进一步另外回流反应混合物20min。在其中R1不为H的情况下，使用相应的取代的肼，3-氧代-丙腈(I)和(II)由相应的腈通过经典甲酰化反应使用新鲜制备的乙醇钠和甲酸乙酯而合成(在EtOH中回流1h)。或者，不进行与3-氧代-丙腈的缩合反应，可使用相应的3，3-二烷氧基-丙腈(与Seneci，P.，Nicola，M.，Inglesi，M.，Vanotti，E.，Resnati，G.Synth.Commun.29(2)，311-341(1999)描述的方法相似)或3-二甲基氨基-丙烯腈。
或者，如图5B所示，式(I)化合物可通过首先合成带相应官能团X的吡唑并[1，5a]嘧啶-7基胺核心骨架而制备，其中残基A、R2、或者R3分别可通过已知反应引入。
图5B的R1、R2、R3和X如式(I)化合物所定义。
并且，如果需要，在反应(a)、(b)或(c)后，得到的式(I)化合物转化成不同的式(I)化合物；得到的式(I)化合物的盐转化成游离化合物或不同盐或者得到的游离式(I)化合物转化成盐、和/或者分离得到的式(I)化合物异构体混合物成为单一异构体；
其中对于所有反应在起始材料中提及的不应参与反应的官能团，如果需要，通过易于除去的保护基团以保护的形式存在，并且接着除去任何保护基团。
以下反应条件分别是优选的：
在本说明书的范围内，只有不构成特定的所需式I终产物的、容易除去的基团才被称为“保护基”，上下文另有说明除外。官能团被这类保护基所保护、保护基本身和适于除去它们的反应例如在标准参考著作中有描述，例如J.F.W.McOmie，“有机化学中的保护基”(Protective Groups inOrganic Chemistry，Plenum出版社，伦敦和纽约1973)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有机合成中的保护基”(Protective Groups in Organic Synthe-sis，第3版，Wiley，纽约，1999)；“肽类”(The Peptides；第3卷，编辑：E.Gross和J.Meienhofer，Academic出版社，伦敦和纽约，1981)；“有机化学方法”(Methoden der organischen Chemie，Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag，斯图加特，1974；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit，“氨基酸、肽和蛋白质”(
Figure A200780008081D0049082901QIETU
，Peptide，Protein VerlagChemie，Weinheim，Deerfield Beach和巴塞尔，1982)；和Jochen Lehmann，“碳水化合物化学：单糖及衍生物”(Chemie der Kohlenhydrate：Monosaccharide und Derivate，Georg Thieme Verlag，斯图加特，1974)。保护基的特征是它们能够被容易地除去(即没有所不需要的次级反应)，例如借助溶剂解、还原、光解或者在生理条件下(例如酶裂解)。
具有至少一种成盐基团的式(I)化合物的盐可以本身已知的方式制备，具有酸性基团的式(I)化合物的盐可以例如通过用金属化合物，诸如适当有机羧酸的碱金属盐，例如2-乙基己酸钠盐，与有机碱金属或碱土金属化合物，诸如相应的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，诸如氢氧化钠或钾、碳酸钠或碳酸氢钠，与相应的钙化合物或与氨或适当的有机胺的化合物处理形成，优选地使用化学计量的量或仅少量过量的成盐试剂。式(I)化合物的酸加成盐以常规方法获得，例如，通过用酸或适当的阴离子交换试剂处理化合物。包含酸和碱成盐基团的式(I)化合物的内盐，例如游离羧基和游离氨基基团，可以例如通过盐的中和，诸如酸加成盐至等电点，例如用弱碱，或通过用离子交换剂处理而形成。
以常规方法可将盐转化为游离化合物；金属和氨盐可被例如通过适当酸的处理转化，酸加成盐，例如通过用适当的碱性试剂处理。
根据本发明可获得的异构体混合物可以本质上已知的方法分离成单个异构体；非对映异构体可通过在多相溶剂混合物之间的分配、重结晶和/或色谱分离而分离，例如通过硅胶或通过例如带反向柱的中等压力的液相色谱，并且消旋体可被例如，通过与光学纯的成盐试剂成盐而分离，并且非对映异构体的混合物的分离可以这样进行，例如，通过分级结晶的方法，或通过具有光学活性柱材料的色谱法。
可处理中间体和最终产物并/或按照标准方法进行纯化，例如使用色谱方法、分配的方法、(重)结晶等。
一般方法条件
以下一般适用于上文和下文提及的全部方法，同时上文或下文具体提及的反应条件是优选的：
所有上述方法步骤均可以在本身已知的反应条件下进行，优选具体提及的那些反应条件，不存在或者通常存在溶剂或稀释剂，优选对所用试剂而言是惰性的并且可溶解它们的溶剂或稀释剂；不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂，例如离子交换剂，如阳离子交换剂，例如H+型阳离子交换剂，这取决于反应和/或反应物的性质；在降低的、正常的或升高的温度下，例如约-100℃至约190℃的温度，优选约-80℃至约150℃的温度，例如-80℃至-60℃、室温、-20℃至40℃或回流温度；在大气压下或者在密封的容器中，如果适当的话在压力下，和/或在惰性气氛中，例如在氩或氮气氛下。
反应的全部阶段，形成的异构体的混合物可分离成单一的异构体，例如，非对映异构体或对映异构体，或分成任何所需的异构体的混合物，例如消旋体或非对映异构体的混合物，例如与“另外的方法步骤”下描述的方法相似。
可以从中选择适合于任意特定反应的那些溶剂的溶剂包括具体提及的那些，或者例如水；酯，如低级烷基-低级链烷酸酯，例如乙酸乙酯；醚，如脂族醚，例如***，或环状醚，例如四氢呋喃或二噁烷；液体芳族烃，如苯或甲苯；醇，如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈，如乙腈；卤代烃，如二氯甲烷或氯仿；酰胺，如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺；碱，如杂环含氮碱，例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮；羧酸酸酐，如低级链烷酸酸酐，例如乙酸酐；环状、直链或支链烃，如环己烷、己烷或异戊烷；或者这些溶剂的混合物，例如水溶液，方法描述中另有说明者除外。这类溶剂混合物还可以用在后处理如色谱法或分配中。
化合物，包括其盐，亦可以水合物的形式获得，或者它们的晶体可例如包含结晶所用的溶剂。可存在不同的晶体形式。
本发明还涉及下述形式的方法：其中，在方法的任意阶段可作为中间体得到的化合物被用作原料并进行剩余的方法步骤；或者其中，原料在反应条件下生成或者以衍生物的形式、例如以被保护的形式或以盐的形式被使用，或者可根据本发明的方法得到的化合物在方法条件下生成并原位进一步加工。在本发明的方法中，优选使用那些产生本发明开篇时所述的特别有价值的新的式(I)化合物的原料。
本发明优选的实施方案
在下列优选的实施方案，一般措辞可以被上下文所提供的相应更具体的定义所代替，从而得出本发明更优选的实施方案。
优选的是式(I)化合物、其互变异构体或药学上可接受的盐的用途，其中要治疗的Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍是取决于肝配蛋白受体激酶(例如，EphA4激酶)的神经性障碍或损伤。
本发明特别涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐的用途和式(I)化合物在激酶依赖性疾病的治疗或用于制备治疗激酶依赖性疾病的药物制剂的用途，
其中：
R2为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3可以为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的脂族残基；
R2或R3至少一个为取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳族残基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
本发明还涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐的用途和式(I)化合物在激酶依赖性疾病的治疗或用于制备治疗激酶依赖性疾病的药物制剂的用途，
Figure A200780008081D00521
其中：
R2为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3可以为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的脂族残基；
R2或R3至少一个为取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳族残基；
条件是R2和A不能都为未取代的苯基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
更优选的是式(I)化合物或其药学上可接受的盐，如这类的或特别用于温血动物，特别是人类的诊断或治疗性处理，其中
连接原子或基团选自：烷基、(诸如-CH2-)；氧基-O-；酮基-CO-；硫代-S-；磺酰基-SO2-；亚砜类-SO-；胺类-NH-或-NR-；羧酸；醇；酯(-COO-)；酰胺(-CONR-、-CONHR′-)；磺酰胺(-SO2NH-、-SO2NR′-)；(-SO3-)；亚砜类(-SO-)；氨基基团；脲类(-NH-CO-NH-、-NR-CO-NH-、-NH-CO-NR-、-NR-CO-NR-)；醚类(-O-)；氨基甲酸酯(-NH-CO-O-、-NR-CO-O-)；或反酰胺磺酰胺和酯(-NH-CO-、-NR-CO-、-NH-SO2-、-NR-SO2-、-OOC-)；带烷基(诸如-CH2-)；氧基-O-；酮基-CO-；磺酰基-SO2-；磺酰胺(-SO2NH-、-SO2NR′-)；(-SO3-)；和脲(-NH-CO-NH-、-NR-CO-NH-、-NH-CO-NR-、-NR-CO-NR-)是特别优选的，
且官能团选自：羧酸；羟基；卤素；氰基(-CN)；醚(-OR)；酮(-CO-R)；酯(-COOR)；酰胺(-CONH2、-CONHR、-CONRR′)；硫醚(-SR)；磺酰胺(-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR′)；砜(-SO2-R)；亚砜(-SO-R)；胺(-NHR、NR’R)；脲(-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHR)；醚(-O-R)；卤素；氨基甲酸酯(-NH-CO-OR)；醛官能团(-CHO)；然后也包含反酰胺；磺酰胺和酯(-NH-CO-R、-NH-SO2-R、-OOC-R)；带卤素；羟基；醚(-OR)；酰胺(-CONH2、-CONHR、-CONRR′)；磺酰胺(-SO2NH2、-SO2NHR、-SO2NRR′)；胺(-NHR、NR’R)；和脲(-NH-CO-NH2、-NH-CO-NHR)；是特别优选的。
特别优选的是式(I)化合物或其药学上可接受的盐，如这类的或特别用于温血动物，特别是人类的诊断或治疗处理，其中
A为H；卤代基(诸如Br)；或芳基(诸如苯基或苄基)或杂环基(诸如吡啶基、吲哚基或苯并噻吩基)，
其中芳基或杂芳基可以是取代的或未取代的有多达4个，优选多达2个取代基，其中取代基是相同或不同的并且是独立地选自卤代基(诸如Cl或Br)；羟基；氨基；氨基低级烷基(诸如二甲基氨基)；氨基低级烷氧基(诸如乙氧基胺)；低级烷基(诸如甲基)；低级烷氧基(诸如甲氧基)；取代的或未取代的磺酰胺(诸如苯并磺酰胺、氯苯磺酰胺或二氯苯磺酰胺)；氨基甲酸酯；R4R5，其中R4和R5可以是相同的或不同的并且独立地为H；低级烷基(例如甲基、乙基或丙基)；或R4和R5与N原子一同构成包含1-4个氮、氧或硫原子的3至8元杂环(例如哌嗪基或低级烷基哌嗪基)其中R4和R5连同N构成杂环基环，所述环可以被1、2、或更多的本文所述的任意取代基取代，优选哌嗪基、吡咯烷基、烷基诸如甲基、或羟基烷基诸如乙烷基。R4和R5连同N构成的杂环基的实例包括可以是未取代的或被甲基或二甲基取代的吗啉基；可以是未取代的或被1、2或3个优选为甲基、氧基或乙醇的取代基取代的哌嗪基；或可以是未取代的或被1、2或3个优选为吡咯烷基、胺、烷基胺、甲基胺、二烷基胺、二甲基胺或二乙基胺的取代基取代的哌啶基；
R2为H、C1-C3低级烷基(诸如甲基)或者芳基(诸如苯基或者苄基)或者杂环基(诸如吡啶基、吲哚基、噻吩基、噻唑基或苯并噻吩基)，其中芳基或杂环基可以是取代的或未取代的，最多可达4个、优选可达2个取代基，其中取代基是相同的或不同的，并且独立地选自卤代基(诸如Cl、F或Br)；羟基；氨基；氨基低级烷基；C1-C3低级烷基；烷氧基(诸如甲氧基和苄氧基，其中苄基环可以是取代的或未取代的，诸如3，4-二氯苄基氧基)；磺酰氨基；取代的或未取代的苯并磺酰胺(诸如2，3-二氯苯磺酰胺)；取代的或未取代的磺酸酯(诸如氯-苯磺酸酯)；取代的或未取代的脲(诸如3-三氟甲基-苯基脲或4-吗啉-4-基-3-三氟甲基-苯基-脲)或氨基甲酸酯(诸如乙基-N-苯基氨基甲酸酯)；
R3为H；C1-C3烷基；苯基；吡啶基或噁唑-5-基。
特别优选地是式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的药物制剂中的用途。同样优选地是式(I)化合物，或其药学上可接受的盐，如上文所示用于治疗Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍。
药物组合物
本发明亦涉及包含式(I)化合物的药物组合物在Eph受体相关(例如，神经性)损伤和障碍的治疗性(本发明更广义的方面也包括预防性)处理中的用途。
本发明的药理学上可接受的化合物可以用于例如药物组合物的制备，其中包含与一种或多种无机或有机的固体或液体可药用载体一起或与之混合的有效量的式I化合物或其可药用盐作为活性成分。
本发明还涉及药物组合物，其适合施用于温血动物、尤其是人(或者来自温血动物、尤其是人的细胞或细胞系，例如淋巴细胞)，用于治疗(其在在本发明的更广义的方面包括防止(＝预防))对激酶活性抑制有响应的疾病，其包含与至少一种可药用载体一起的、对所述抑制而言有效量的式(I)化合物或其可药用盐。
本发明的药物组合物是用于对温血动物(尤其是人)经肠内(如经鼻、直肠或口服)施用或胃肠道外(如肌内或静脉内)施用的那些药物组合物，其包含单独的或与显著量的可药用载体一起的有效剂量的药理学活性成分。活性成分的剂量取决于温血动物的种属、体重、年龄和个体状况、个体药动学数据、所治疗的疾病和施用方式。
本发明还涉及治疗对激酶的的抑制有响应的疾病的方法；该方法包括给由于上述疾病之一需要该治疗的温血动物、例如人施用预防或尤其是治疗有效量的式(I)化合物。
施用于温血动物、例如体重约70kg的人的式(I)化合物或其可药用盐的剂量优选是每人每天约3mg至约10g，更优选约10mg至约1.5g，最优选约100mg至约1000mg，该剂量优选被分为1-3个单剂量，所述单剂量可以例如具有相同的大小。通常，儿童接受成人剂量的一半。
药物组合物包含约1％至约95％、优选约20％至约90％活性成分。本发明的药物组合物例如可以是单位剂型，例如安瓿、小瓶、栓剂、糖衣丸、片剂或胶囊剂的形式。
本发明的药物组合物以本身已知的方式制备，例如通过常规的溶解、冻干、混合、制粒或成型方法制备。
优选使用活性成分的溶液以及混悬液，尤其是等张的水性溶液或混悬液，例如在包含单独的或与载体例如甘露醇一起的活性成分的冻干组合物的情况下，有可能在临用前形成这类溶液或混悬液。药物组合物可以被灭菌和/或可以包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂，并且以本身已知的方式制备，例如通过常规的溶解或冻干方法制备。所述溶液或混悬液可以包含增加粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶。
在油中的混悬液包含常规用于注射目的的作为油组分的合成或半合成植物油。尤其可以提及的是液体脂肪酸酯，它们含有作为酸组分的具有8-22个、尤其是12-22个碳原子的长链脂肪酸，例如月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸，或者相应的不饱和酸，例如油酸、反油酸、芥酸、巴西酸(brasidic acid)或亚油酸，如果需要，可加入抗氧化剂，例如维生素E、β-胡萝卜素或3，5-二-叔丁基-4-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分具有最多6个碳原子，并且是单或多羟基、例如单、二或三羟基醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或者其异构体，还有尤其是乙二醇和甘油。因此提及下列脂肪酸酯的实例：油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、“Labrafil M 2375”(聚氧乙烯甘油三油酸酯，Gattefossé，巴黎)、“Miglyol 812”(链长为C8-C12的饱和脂肪酸的甘油三酯，Hüls AG，德国)，还有尤其是植物油，例如棉子油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、豆油，更尤其是花生油。
注射组合物在无菌条件下以常规方式制备；这同样适用于将组合物引入安瓿或小瓶中并密封容器。
用于口服施用的药物组合物可以通过以下方法得到：合并活性成分与固体载体，如果需要的话将所得混合物制粒，并且将混合物加工成片剂、糖衣丸芯或胶囊剂，如果需要或必要的话在加入适当的赋形剂后进行所述加工。还有可能将它们掺入塑性载体中，以使得活性成分以测量的量进行扩散或释放。
适宜的载体尤其有填充剂，如糖类例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制品和/或磷酸钙类例如磷酸三钙或磷酸氢钙；和粘合剂，如淀粉糊例如使用玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉或马铃薯淀粉的淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要的话还有崩解剂，如上述淀粉和/或羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐如海藻酸钠。赋形剂尤其有流动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石粉、硬脂酸或其盐例如硬脂酸镁或硬脂酸钙；和/或聚乙二醇。糖衣丸芯具有适宜的、任选肠溶的包衣，尤其是使用浓糖溶液，其可以包含***胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛；或者在适宜有机溶剂中的包衣溶液；或者对于制备肠溶衣而言，使用适宜的纤维素制品如乙基纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯的溶液。胶囊剂是由明胶制成的干填充胶囊和由明胶与增塑剂制成的软密封胶囊，所述增塑剂例如甘油或山梨醇。干填充胶囊可以包含颗粒形式的活性成分，例如还包含填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或助流剂如滑石粉或硬脂酸镁，如果需要的话还有稳定剂。在软胶囊中，活性成分优选溶解或混悬在适宜的油性赋形剂中，例如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇，还有可能加入稳定剂和/或抗菌剂。可以向片剂或糖衣丸的包衣或胶囊壳中加入染剂或色素，例如用于区分目的或者指示活性成分的不同剂量。
组合
本发明的化合物亦可优先地与已知能克服赘疣抑制作用的过程的其它活性剂联合使用，诸如Rho激酶抑制剂；经典PKC亚型的抑制剂；阻断NogoA或Nogo受体的抗体；软骨素酶ABC或可将GAG侧链裂解为蛋白多糖的其他试剂；和提高神经元的内在生长能力的药物(例如，cAMP和bcl-2)。
以非专有实施例的方式，本发明的化合物可用于与其他能够阻断髓鞘质抑制剂Nogo、髓鞘相关的糖蛋白(MAG)、或少突胶质细胞-髓鞘糖蛋白OMgp的药物的联合治疗。
由代码、通用名或商品名确定的活性成分的结构可以从标准汇编“默克索引”的现行版本或者从数据库例如Patents International(例如IMSWorld Publications)获得。
上述可以与式I化合物组合使用的化合物可以如现有技术、例如上文所引用的文献中所描述的那样进行制备和施用。
以下实施例仅仅是说明性的，并且不表示以任何方式限制本权利要求的范围。
实施例
实施例1：EphA4方式和作用机制
为了区别肝配蛋白能够在轴突再生的背景中的前向和双向信号传导，产生用于野生型的慢病毒表达载体和激酶死EphA4并在纯化的星形细胞中被过度表达。皮质层神经元在两种星形细胞群上形成一层，并且分析和比较轴突赘疣。已被证实阻断EphA4与相关配体的相互作用，接着抑制受体活化作用的生物学肽(Murai，K.K.等人，(2003)Mol Cell Neurosci24(4)：p.1000)，检验其在星形细胞/皮层神经元培养体系中EphA4抑制活性。神经元配体/肝配蛋白介导的EphA4抑制作用的识别通过使用RNA干扰***地阻断候选肝配蛋白在神经元中的表达以击倒肝配蛋白或使用优势负肝配蛋白构建物并接着在野生型星形细胞上形成衣层。这些试验合起来阐明了EphA4活化作用的方式。
为了阐明由EphA4活化作用触发的细胞内事件，细胞因子诱导的星形细胞的活化作用被用于探索精确的激活的信号传导路径。培养的星形细胞在EpjA4阻断肽存在或不存在下，用炎性细胞因子(其已被证实涉及活化星形细胞)LIF或IFN处理，将细胞裂解，并且通过蛋白质印迹使用适当的磷酸化抗体用于主要信号传导路径的活化(MAPK、PI3K、JNK、STAT、RhoA)来分析细胞。涉及通过EphA4轴突赘疣抑制作用的信号传导用在可商购的主要信号传导路径的药理学抑制剂及EphA4抑制肽的存在与缺失下星形细胞或CNS髓鞘质或脊髓提取物上培养皮层神经元加以评价。
实施例2：自磷酸化与配体依赖磷酸化测定
原代星形细胞培养物由新生小鼠皮层构建，并纯化以便获得约95-98纯星形细胞培养物。为了检测自磷酸化作用，细胞在药理学抑制剂存在或缺失下孵育，并且之后直接裂解并接受免疫沉淀作用和蛋白质印迹分析(如图1A所示)。对于配体依赖型磷酸化作用(如图1B所示)，培养物然后血清饥饿36小时，以诱导基底受体磷酸化，然后用同源配体的可溶形式，在候选激酶抑制剂或阻断肽(其被以不同浓度加入)存在与缺失下，用不同的时间长度进行刺激。将细胞裂解，并且裂解液接受EphA4免疫沉淀作用并接着以蛋白质印迹，使用磷酸化酪氨酸抗体分析受体磷酸化水平。
实施例3：轴突赘疣/轴突再生的体外测定
本测定是用于评价在星形细胞上的Eph受体表达对胚胎皮层神经元轴突赘疣的抑制作用或存在于髓鞘质中的肝配蛋白配体对出生后皮层神经元的轴突赘疣抑制作用。E16(胚胎第16天)皮层神经元在汇合的在4-孔室载玻片中铺层的星形细胞单层上铺层。药理学抑制剂被加至基质中并且每个神经元的最长的轴突的长度在每种条件下测定(图2A描绘了在化合物1存在下铺层的神经元的实例并且用神经元标记物Tuj-1使之可视)，并比较了在无任何药理活性剂存在下星形细胞上的平均轴突的长度。图2B描绘了化合物6和化合物7(全部在100nM浓度下试验)在星形细胞上铺层的皮层培养物中观察到的轴突赘疣作用的定量。
实施例4：星形胶质细胞增生的体外测定-星形细胞划痕损伤
测定星形细胞是由新生C57BL/6小鼠(P1-P2)的大脑皮层制备的。细胞保持在有10％FBS的Dulbecco’s改进的Eagle’s培养基中。4-7周龄星形细胞铺在用聚-D-赖氨酸包被的2孔室载玻片中以融合，用于划痕测定，并血清饥饿。血清饥饿48hr后，用200μl尖端刮星形细胞单层并用PBS洗涤两次以去除细胞碎片。调节的基质(+/-细胞因子)加在损伤的星形细胞中。划痕的显微图像以10×放大倍数在刚刚刮后和刮后0.24h、48h或72h的时间点捕捉，刮的相同区域成像，并用含1μg/ml的DAPI的甲醇固定以监控星形细胞的迁移和增殖。
实施例5：机制的证据
试验证实了本发明的化合物跨过血脑屏障并有效地阻断EphA4受体的体内磷酸化作用。雄性NMRI小鼠以10mg/kg体重的剂量注射相关化合物并在给药后的25分钟或1小时处死(图4中显示0.25h或1h)。去除大脑并且称量每个大脑的一半，并在适当体积的裂解缓冲液中匀化30秒(10秒脉冲、10秒断开3次)。匀浆12000g离心30分钟。估计上清液的蛋白量(使用BCA)并且用于每种条件等量的蛋白在接受EphA4免疫沉淀后进行磷酸化-酪氨酸蛋白质印迹。使用四只对照动物并且每个时间点使用三只试验动物用于每个试验化合物(化合物1、2、6、和7)。
实施例6：高通量筛选(HTS)
可开发高通量筛选以寻找选择性和特异性的EphA4活性的药理学抑制剂。这类化合物，如本发明的化合物，包括阻断EphA4与其配体的相互作用和/或特异性阻断EphA4激酶活化的激酶抑制剂或结合拮抗剂。这类化合物，如本发明的化合物，可在神经胶质增生和轴突再生的背景下充当有效地阻断EphA4活性的抑制剂。
实施例7：在小鼠SCI模型中的体内靶验证
本文所述的现有的EphA4抑制肽/从HTS的采样，例如本发明的化合物诸如化合物1、6、和7可用于体内脊髓损伤(SCI)试验以测定在促进轴突再生中的效果。小鼠分成三组：未损伤的；基质输注损伤的；和药物/肽输注损伤的。损伤组的动物承受脊髓半切手术。药物或基质(例如，包含本发明化合物的一钟)经渗透泵鞘内施用，且顺向示踪物被用于追踪损伤轴突的解剖学再生。可进行适当的行为和电生理分析以评价感觉与运动功能的恢复。
除了上文描述的SCI模型试验以外，EphA4抑制剂，例如本发明的化合物，亦可在Nogo信号传导受到损害的条件下被检验，用于看是否可带来导致功能恢复改善的协同作用。
实施例8-122：合成
以下实施例使用本文列出的缩略语，除非另外指明，以下条件：在未给出温度处，反应在环境(室)温度下发生，且溶剂的比例，例如洗脱剂或溶剂混合物是以体积比体积给出(v/v)。
闪式色谱是使用硅胶(Merck；40-63μm)进行的。对于薄层色谱，使用预包衣硅胶(Merck60F254)板。成分的检测是用UV灯进行的(254nm)。HPLC是在Agilent HP 1100使用Nucleosil100-3C18HD125 x 4.0mm柱[1mL/min.；20-100％NeCN/0.1％TFA在7分钟)(方法A)进行的；SpectraSystem SP8800/UV2000使用Nucleosil100-5C18AB 250 x 4.6mm柱(2mL/min.；2-100％MeCN/0.1％TFA在10分钟)(方法B)；使用Chromalith Speed ROD RP1850-4.6mm柱(Merck)(2mL/min.；2-100％MeCN/0.1％TFA在2分钟)(方法C)；或者C8 2.1-50mm3μm柱(Waters)(2mL/min.；5-95％MeCN/0.1％TFA在2分钟)(方法D)。1H-NMR测定是在Varian Gemini400或Bruker DRX500光谱仪使用四乙基硅烷作为内标进行的。化学位移从四乙基硅烷的低场以ppm表示，耦合常数(J)以赫兹(Hz)表示。电喷雾质谱是用Fisons Instruments VG Platform II得到的。熔点是用Büchi510熔点仪测定的。商购的溶剂和化学试剂用于合成。
实施例8：3-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯酚
将溶解于THF(6mL)的6-(3-苄基氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(步骤1.1)(25mg，0.051mmol)在Pd/C(10％Engelhard4505，6mg)存在下氢化13个小时。过滤后和在减压下挥发溶剂，将残留物进行闪式色谱处理(硅胶，CH2Cl2/MeOH/NH3＝95:5:0.1)得到白色固体状的实施例1化合物(14mg，0.035mmol；70％)：ES-MS：M+H＝401.1，Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90:10:0.1)＝0.33，HPLC：AtRet＝2.77分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：9.59(s，1H，OH)，8.58/8.18(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.01(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.48(s，2H，NH2)，7.32(t，8.5Hz，1H，苯基-OH)，6.99(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.96(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，6.93(s，1H，苯基-OH)，6.80(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，3.17/2.48(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(s，3H，CH3)。
步骤1.1 6-(3-苄基氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
将溶解于EtOH(1mL)中的4-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(步骤1.2)(100mg，0.388mmol)、2-(3-苄基氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(步骤1.3)(98mg，0.388mmol)、溶解于EtOH中的HCl(2.5mM在EtOH中，1，55mmol，0.9mL)在RT下搅拌17个小时。加入H2O(4mL)和K2CO3(250mg)后，将反应混合物用CH2Cl2(20mL，2x)萃取。合并的有机相用H2O(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并进行闪式色谱(硅胶，2.5 x 15cm，CH2Cl2/MeOH＝9:1)处理得到白色固体状的步骤1.1的化合物(60mg，0.122mmol；32％)；ES-MS：M+H＝491.0，Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90:10:0.1)＝0.42；HPLC：AtRet＝4.69分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.79/8.21(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.03(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.53(s，2H，NH2)，7.44(m，5H，苄基)，7.32(t，8.5Hz，1H，苯基-OH)，7.29(s，1H，苯基-OH)，7.13(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，7.06(d，8.5Hz，1H，苯基-OH)，6.97(d，9.0Hz，2H，苯基)，5.19(s，2H，苄基)，3.17/2.48(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(s，3H，CH3)。
步骤1.2 4-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
将溶解于AcOH中的2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈(步骤1.4)(370mg，1.52mmol)、肼一水合物(0.185mL，3.8mmol)在98℃搅拌3个小时。在冷却至RT后，加入H2O(8mL)和浓HCl(0.8mL)，将反应混合物在回流下搅拌20分钟。在冷却至RT后，反应混合物通过缓慢加入NH3(25％)后调至碱性pH。滤除沉淀材料，并保留用于进一步纯化。该反应溶液用CH2Cl2(50mL，3x)萃取，干燥(Na2SO4)并减压浓缩。合并沉淀的和萃取的物质，并进行闪式色谱(硅胶，3.0 x 18cm，CH2Cl2/MeOH/NH3＝9:1:01)处理，得到白色固体状的步骤1.2化合物(277mg，1.08mmol；71％)；ES-MS：M+H＝258.1，Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90:10:0.1)＝0.28；HPLC：AtRet＝4.33分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：11.55(s/宽，1H，NH)，7.55(s，1H，pyrolyl)，7.35(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.91(d，9.0Hz，2H，苯基)，4.55(s/宽，2H，NH2)，3.10/2.46(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.23(s，3H，CH3)。
步骤1.3 2-(3-苄基氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
将Na(260mg，11.3mmol)在Ar下在20分钟的时间里溶解于无水EtOH(11mL)中。在加入(3-苄氧基-苯基)-乙腈(1.9g，8.68mmol)和甲酸乙酯(1.05mL，13.0mmol)后，将该反应混合物回流下搅拌2小时。在减压下蒸发溶剂后，加入H2O(20mL)，并加入AcOH调节pH＝4.0，反应混悬液用CH2Cl2(30mL，2x)萃取。合并的有机相用H2O(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并进行闪式色谱(硅胶，4.5 x 25cm，CH2Cl2/MeOH＝98:2)处理得到白色固体状的步骤1.3的化合物(780mg，3.11mmol；36％)；ES-MS：M-H＝250.0，Rf(CH2Cl2/MeOH＝95:5)＝0.49；HPLC：AtRet＝6.07分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.45-7.25/6.98-6.88(m/m，8H，芳基)，5.09(s，2H，CH2)，3.98(s，2H，CH2)。
步骤1.4 2-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈
将Na160mg(7.0mmol)在Ar下在10分钟溶解于无水EtOH(6mL)中。在加入[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈(步骤1.5)(1g，4.64mmol)和甲酸乙酯(0.56mL，7.0mmol)后，将反应混合物回流下搅拌1小时。在用醚(50mL，3×)洗涤反应浆状液后，将固体残留物溶于水，并通过加入AcOH调节至pH＝3.9。水溶液用CH2Cl2(50mL，3×)萃取。合并的有机相用H2O(50mL)洗涤。合并两份水相并冻干。得到的残留物从MeOH/CH2Cl2中结晶得到白色晶体状的步骤1.4的化合物(721mg，3.0mmol；64％)；ES-MS：M+H＝244.1；HPLC：AtRet＝2.43分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：化合物在溶液中互变异构体平衡：7.87/7.77(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，7.53/7.17(d/d，9.0Hz，2H，苯基)，7.84/7.82(d/d，9.0Hz，2H，苯基)，3.10(m，4H，哌嗪基)，2.57/2.51(m/m，4H，哌嗪基)，2.29/2.26(s，3H，CH3)。
步骤1.5 [4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈
溶解于1，2-二甲氧基乙烷(70mL)的(4-溴-苯基)-乙腈(5g，25.5mmol)、1-甲基-哌嗪(3.4mL、30.6mmol)、K2CO3(7.68g、35.7mmol)、Pd(AcO)2(280mg、1.275mmol)、2-(二-叔-丁基膦基)-联苯(1.14g，3.825mmol)在Ar下在85℃搅拌20个小时。在加入H2O(100mL)后，将反应混合物用CH2Cl2(100mL，3×)萃取。合并的有机相用H2O(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并进行闪式色谱(硅胶，4.5×34cm，CH2Cl2/MeOH＝95:5)处理得到步骤1.5的白色固体状的化合物(2.8g，13mmol；51％)；ES-MS：M+H＝216.1；Rf(CH2Cl2/MeOH＝9:1)＝0.47；HPLC：AtRet＝2.24分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.14/6.91(d/d，9.5Hz，2H/2H，苯基)，7.53(s，2H，NH2)，7.44(m，5H，苄基)，7.32(t，8.5Hz，1H，苯基-OH)，7.29(s，1H，苯基-OH)，3.84(s，2H，苄基)，3.09/2.42(t/t，5.0Hz，4H/4H，哌嗪基)，2.18(s，3H，CH3)。
实施例9：6-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
与实施例1的化合物制备相似，6-(3-甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺通过步骤1.2的化合物与2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(步骤2.1)的缩合而合成。收率：48％，固体粉末；ES-MS：M+H＝415.1；HPLC：AtRet＝3.45分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.59/8.23(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.06(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.55(s，2H，NH2)，7.43(t，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，7.10(d，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，7.08(s，1H，苯基-OMe)，6.80(d，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，6.98(d，9.0Hz，2H，苯基)，3.83(s，3H，CH3-O)，3.16/2.47(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.25(s，3H，CH3)。
步骤2.1 2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物制备相似地合成：收率：76％；白色粉末；ES-MS：M-H＝174.0；HPLC：AtRet＝4.75分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：化合物在溶液中形成互变异构体平衡：8.09/7.67(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，7.38-7.23(m，2H，苯基)，7.01-6.97(m，1H，苯基)，6.88-6.79(m，1H，苯基)，3.74(s/宽，3H，CH3-O)。
实施例10：6-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
6-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺与实施例1的化合物制备相似地通过步骤1.2的化合物与2-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈(步骤3.1)缩合而合成。收率：44％，固体粉末；ES-MS：M+H＝445.0；HPLC：AtRet＝3.77分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.59/8.23(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.06(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.55(s，2H，NH2)，7.43(t，8.5Hz，1H，苯基-OMe)，7.10(d，8.4Hz，1H，苯基-OMe)，7.57(s，2H，NH2)，7.01(d，9.0Hz，2H，苯基)，6.89(s，2H，苯基-OMe)，6.54(s，1H，苯基-OMe)，3.83(s，6H，CH3-O)，3.16/2.47(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(s，3H，N-CH3)。
步骤3.1 2-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(3，5-二甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成。收率：48％；白色粉末；ES-MS：M+H＝206.0；HPLC：AtRet＝4.79分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：化合物在溶液中形成互变异构体平衡：8.11/7.68(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，6.85/6.54(s/s，2H，苯基)，6.44/6.38(s/s，1H，苯基)，3.74(s/宽，6H，CH3-O)。
实施例11：步骤1.1：6-(3-苄基氧基-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
通过步骤1.1中公开的步骤制备。
实施例12-76
表1中列的以下实施例与实施例8的制备相似地合成。由于无法购得，用于实施例12-76的化合物制备的中间体的合成描述于下表II中。在标题化合物带游离氨基基团(实施例59-61)的情况下，最终产物由其相应的携带硝基官能团的前体通过在Pd/C(10％)存在下在THF/MeOH中氢化数个小时期间生成。
表II.
Figure A200780008081D00662
Figure A200780008081D00663
Figure A200780008081D00671
Figure A200780008081D00681
Figure A200780008081D00691
Figure A200780008081D00701
Figure A200780008081D00711
Figure A200780008081D00731
步骤5.1： 2-(4-氯-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(4-氯-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地制备：89％：ES-MS[M-1]-＝177.9/179.9；HPLCAtRet＝5.67分钟。
步骤6.1： 2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地制备：89％；ES-MS[M-1]-＝177.9/179.9；HPLCAtRet＝5.60分钟。
步骤8.1 3-氧代-2-苯基-丁腈
3-氧代-2-苯基-丁腈与步骤1.3的化合物的制备相似地制备：62％，白色结晶，m.p.>215℃；ES-ES-MS M-H＝157.9，Rf(己烷/AcOEt＝1:1)＝0.57。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.84(d，9.0Hz，2H)，7.04(t，9.0Hz，2H)，6.68(t，9.0Hz，1H)，3.21(s/宽，1H，CH)，2.03(s，3H，CH3)。
步骤9.1 2-甲基-3-氧代-3-苯基-丙腈
2-甲基-3-氧代-3-苯基-丙腈与Yoo等人，Tetrahedron Lett.，Vol.43，No.27，pp.4813-4815(2002)的方法相似地制备。2-溴-丙腈(0.965mL，11.05mmol)和铟粉末(975mg，8.5mmol)在Ar下在THF(15mL)中搅拌1小时。在2分钟期间加入苄腈(735mg，5.6mmol)后，反应混合物在60℃下在微波炉(Emrys optimizer，personal chemistry，瑞典)中搅拌30分钟。用硅藻土过滤后，用THF(5mL)洗涤，反应溶液在减压下浓缩，并在醚(150mL)和磷酸盐缓冲液(pH＝7，150mL)之间分配。在分离有机相后，水相用醚(150mL)萃取。合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压下浓缩并进行闪式色谱(硅胶，2×18cm，己烷/AcOEt＝3:1)处理得到微黄色油状的步骤9.1化合物(300mg，1.9mmol；34％)；ES-MS：M-H＝157.9；Rf(己烷/AcOEt＝1:1)＝0.60。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.06(d，8.5Hz，2H)，7.74(t，8.5Hz，1H)，7.62(t，8.5Hz，2H)，5.17(q，8.5Hz，1H，CH)，1.52(s，3H，CH3)。
实施例24的化合物与步骤1.1的化合物的制备相似地，通过2，3-二氯-N-[4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基]-苯磺酰胺(步骤10.1)和4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(步骤10.3)的缩合而合成。
步骤10.1 2，3-二氯-N-[4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基]-苯磺酰胺
在N2气氛下下，在15分钟之内加入一份新鲜切割的钠片(2.3g总量，100mmol)至无水EtOH(230mL)，其略微放热(上升至43℃)。在全部钠溶解(约1小时)后，2，3-二氯-N-(4-氰基甲基-苯基)-苯-磺酰胺(步骤10.2)(26.27g，77mmol)和甲酸乙酯(11.2mL，139mmol)在RT下加至无色溶液中。混合物加热回流2小时。在冷却至RT后，减压除去溶剂，残留物溶解于H2O(20mL)中，再加入AcOH(200mL；pH4)。水层用CH2Cl2(2×，500mL)萃取，合并的有机相用H2O洗涤，并用Na2SO4干燥。重复用色谱纯化(硅胶，EtOAc和CH2Cl2/MeOH＝98:2)以得到2，3-二氯-N-[4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基]-苯磺酰胺(233mg，1％收率)为米色结晶：m.p.88-102℃；(CH2Cl2/MeOH＝95:5)：0.22；ES-MS[M+1]+＝368；HPLCBtRet＝5.61分钟。
步骤10.2 2，3-二氯-N-(4-氰基甲基-苯基)-苯磺酰胺
在RT下向4-氨基氰甲苯(12g，90.8mmol)的吡啶(11mL)溶液中，在20分钟内加入2，3-二氯苯-磺酰氯(22.29g，90.8mmol)在THF(80mL)的溶液。将反应回流搅拌2小时。在冷却后，减压除去溶剂，并将剩余的固体混悬在10％HCl(200mL)中。滤除粗品的结晶产物，用H2O洗涤并在60℃下干燥。最终的纯化通过将粗品化合物混悬在MeOH(250mL)中进行，加热回流，过滤并干燥，得到橙色晶体状的2，3-二氯-N-(4-氰基甲基-苯基)-苯磺酰胺(26.54g，86％)：m.p：202-206℃；(CH2Cl2/MeOH 98:2)：0.54；ES-MS[M-1]-＝338.8；HPLC BtRet＝5.85分钟。
步骤10.3 4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺由2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈(步骤10.4)和肼水合物照美国专利2,989,539(20.6.61；Anderson和Reiff，实施例18)中的描述制备。4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺：m.p.173-176℃；(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90:10:1)：0.37；ES-MS[M+1]+＝203；HPLC BtRet＝1.40分钟。
步骤10.4 2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈由(4-二甲基氨基-苯基)-乙腈、甲酸乙酯和钠照美国专利2,989,539(实施例25)中的描述制备。
2-(4-二甲基氨基-苯基)-3-氧代-丙腈：m.p.175-178℃；ES-MS[M+1]+＝189；HPLC BtRet＝2.00分钟。
实施例18的化合物与实施例17的化合物的合成相似，使用4-(4-二甲基氨基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(步骤10.3)和4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基酯(步骤11.1)制备。
步骤11.1 4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基酯
4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基酯照实施例17(步骤10.1)中的描述制备，换成使用商购的4-(氰基甲基)苯基4-氯苯-1-磺酸酯制备。
4-氯-苯磺酸4-(氰基-甲酰基-甲基)-苯基酯(162mg)；微黄色的固体；(CH2Cl2/MeOH＝95:2)：0.32；ES-MS[M+1]+＝335；HPLC BtRet＝6.23分钟。
步骤12.1 2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丁腈
2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丁腈照Smith、Breen、Haj ek和Awang，J.Org.Chem.，Vol.35，No.7，pp.2215-2221(1970)中的描述制备。
步骤14.1 2-(4-溴-苯基)-3-氧代-丁腈
2-(4-溴-苯基)-3-氧代-丁腈按照Rau，Ger.Offen.，DE 3001266(1980)的方法合成。
步骤16.1 1，2-(2，6-二氯-苯基)-3-氧代-丙腈
1，2-(2，6-二氯-苯基)-3-氧代-丙腈照Menzer、Lankau和Unverferth，Ger.Offen.，DE 19521822(1996)的描述制备。
步骤17.1 4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺和步骤22.2照Bruni等人，Heterocyclic.Chem.，Vol.32，No.1，pp.291-298(1995)中的描述制备。
步骤19.1 2-苯并[b]噻吩-3-基-3-氧代-丙腈
2-苯并[b]噻吩-3-基-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：56％；白色粉末：ES-MS：M-H＝123.9；HPLC：AtRet＝2.20分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：12.0(s/宽，1H)，8.00-7.70(m，3H)，7.45-7.35(m，2H)。
步骤21.1 3-氧代-2-噻吩-3-基-丙腈
3-氧代-2-噻吩-3-基-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：51％；白色粉末，ES-MS：M-H＝112.9；HPLC：AtRet＝2.03分钟。
化合物在溶液中形成了互变异构体平衡：1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.95/7.55(s/s，1H，CH＝/CH-OH)，7.55-7.50(m，2H)，7.30-7.20(m，1H)。
步骤22.1 4-苯并[b]噻吩-3-基-1H-吡唑-3-基胺
4-苯并[b]噻吩-3-基-1H-吡唑-3-基胺与步骤1.2的化合物的制备相似地合成：收率：80％；白色粉末：ES-MS：M+H＝216.0。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：12.0(s/宽，1H)，8.00-7.80(m，2H)，7.75(s/宽，1H)，7.60(s/宽，1H)，7.40-7.30(m，2H)。
步骤22.2 (2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈)
(2-(3-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈)照Bruni等人，Heterocyclic.Chem，Vol.32，No.1，pp.291-298(1995)中描述的那样进行制备。
步骤23.1 2-甲酰基-3-苯基-丙腈
2-甲酰基-3-苯基-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：77％；油状物；ES-MS：M-H＝158.0。
化合物在溶液中形成互变异构体的平衡：1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.40-7.15(m，5H)，2.85-2.75(m，2H)。
步骤24.1 4[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈
4[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈与步骤1.5的化合物的制备相似地合成：收率：55％；棕色固体；ES-MS：M+H＝216.7；HPLC：CtRet＝1.65分钟。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：7.30-7.25(m，1H)，6.90-6.82(m，2H)，6.80-6.75(m，1H)，3.70(s，2H)，3.25-3.15(m，4H)，2.60-2.50(m，4H)，2.35(s，3H)。
步骤24.2 2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈
2-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：100％；棕色固体；ES-MS：M+H＝244.1；HPLC：CtRet＝1.67分钟。
步骤24.3 4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺
4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺与步骤1.2的化合物的制备相似地合成：收率：36％；黄色泡沫；ES-MS：M+H＝258.2；HPLC：CtRet＝1.46分钟。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：7.45(s，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.05-7.00(m，1H)，6.95-6.90(m，1H)，6.85-6.80(m，1H)，4.00(s/宽，2H)，3.30-3.20(m，4H)，2.65-2.58(m，4H)，2.35(s，3H)。
步骤25.1 2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-氧代-丙腈
2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：59％；油状物；ES-MS：M+H＝199.1。
化合物在溶液中形成互变异构体的平衡：1H-NMR(300MHz，CDCl3)：8.00/7.95(s/s，1H)，7.60-7.20(m，5H)，3.75(s，3H)。
步骤26.1 2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(4-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：80％；白色固体；ES-MS：M-H＝174.3。
化合物在溶液中形成互变异构体的平衡：1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.80/7.58(s/s，1H)，7.55-7.50(m，1H)，7.30-7.20(m，1H)，6.90-6.80(m，2H)，3.73/3.70(s/s，3H)。
步骤27.1 2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：40％；棕色油状物；ES-MS：M-H＝174.3；HPLC CtRet＝2.01分钟。
步骤28.1 3-氧代-2-吡啶-3-基-丙腈
3-氧代-2-吡啶-3-基-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：71％；棕色固体；ES-MS：M+H＝147.2；HPLC CtRet＝1.31分钟。
步骤28.2 4-吡啶-3-基-1H-吡唑-3-基胺
4-吡啶-3-基-1H-吡唑-3-基胺与步骤1.2的化合物的制备相似地合成：收率：68％；棕色固体；ES-MS：M+H＝161.2；HPLC CtRet＝0.50分钟。
步骤30.1 [2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈
[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙腈与步骤1.5的化合物的制备相似地合成：收率：51％；棕色固体；ES-MS：M+H＝246.6；HPLC：CtRet＝1.72分钟。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：7.00-6.95(m，1H)，6.85-6.75(m，2H)，3.80(s，3H)，3.65(s，2H)，3.15-3.05(m，4H)，2.60-2.55(m，4H)，2.35(s，3H)。
步骤30.2 2-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈
2-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-3-氧代-丙腈与步骤1.4的化合物的制备相似地合成：收率：100％；棕色固体；ES-MS：M+H＝274.1；HPLC：CtRet＝1.62分钟。
步骤30.3 4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺
4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺与步骤1.2的化合物的制备相似地合成：收率：32％；棕色固体；ES-MS：M+H＝288.2；HPLC：CtRet＝1.46分钟。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：7.50(s，1H)，7.00-6.95(m，1H)，6.90-6.80(m，2H)，3.80(s，3H)，3.20-3.10(m，4H)，2.65-2.55(m，4H)，2.35(s，3H)。
步骤32.1 2-(2-苄基氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(2-苄基氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：85％；白色固体；ES-MS：M+H＝252.6；HPLC：CtRet＝2.35分钟。
化合物在溶液中形成互变异构体平衡：1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：11.6/7.78(s，1H)，7.55-7.45(m，2H)，7.40-7.20(m，5H)，7.15-7.05(m，1H)，7.00-6.90(m，1H)，5.15(s，2H)。
步骤34.1 2-(4-苄基氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(4-苄基氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：95％；白色固体；ES-MS：M-H＝250.3；HPLC：CtRet＝2.41分钟。
化合物在溶液中形成互变异构体的平衡：1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：12.0/11.7(s，1H)，7.90-7.80和7.60-7.50(m，1H)，7.40-7.25(m，6H)，7.05-6.95(m，2H)，5.10(s，2H)。
步骤44.1 4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2H-吡唑-3-基胺
4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2H-吡唑-3-基胺与步骤1.2的化合物的制备相似地合成：收率：10％；棕色泡沫；ES-MS：M+H＝213.2；HPLC：CtRet＝1.66分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.70(d，1H)，7.60(s，1H)，7.35(d，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.20-7.10(m，2H)，3.80(s，3H)。
步骤47.1 2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈
2-(2-甲氧基-苯基)-3-氧代-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：59％；白色固体；ES-MS：M+H＝175.3；HPLC：CtRet＝2.01分钟。
步骤47.2 4-(2-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
4-(2-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺与步骤1.2的化合物的制备相似地合成：收率：35％；白色固体；ES-MS：M+H＝190.1；HPLC：CtRet＝1.40分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：11.5(bs，1H)，7.50(bs，1H)，7.30(bs，1H)，7.20-7.05(m，1H)，7.00-6.85(m，2H)，4.30(bs，2H)，3.75(s，3H)。
步骤51.1 3-氧代-2-吡啶-4-基-丙腈
3-氧代-2-吡啶-4-基-丙腈与步骤1.3的化合物的制备相似地合成：收率：59％；橙色固体；ES-MS：M+H＝147.2；HPLC：CtRet＝1.00分钟。
化合物在溶液中形成互变异构体的平衡：1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：13.1/9.60(bs，1H)，9.10(bs，1H)，8.20-8.00(m，2H)，7.95-7.80(m，1H)。
步骤52.1 (Z)-3-二甲基氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙烯腈
将(3-硝基-苯基)-乙腈(1.51g，9.31mmol)、二甲氧基甲基-二甲基-胺(6.2mL，46.5mmol)在二甲苯(30mL)中搅拌回流1小时。在加入己烷(20mL)后，反应混合物冷却至0℃。滤除沉淀物质并得到步骤52.1的化合物，为棕色固体(1.76g，8.19mmol；88％)；ES-MS：M+H＝218.1；HPLC：CtRet＝2.24分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.10-8.05(m，1H)，7.90-7.85(m，1H)，7.75-7.72(m，1H)，7.70(s，1H)，7.65-7.60(m，1H)，3.30(s，6H)。
步骤52.23-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(3-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
溶解于AcOH(10mL)和BuOH(10mL)中的4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺(步骤24.3)(305mg，1.18mmol)、(Z)-3-二甲基氨基-2-(3-硝基-苯基)-丙烯腈(步骤52.1)(335mg，1.54mmol)搅拌回流16小时。在加入饱和NaHCO3水溶液后，反应化合物用EtOAc(50mL，2×)萃取。合并的有机相用H2O(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并进行闪式色谱(硅胶，2.5 x 15cm，CH2Cl2/MeOH＝9:1)处理得到步骤52.2的橙色固体状的化合物(224mg，0.52mmol；44％)；ES-MS：M+H＝430.1；HPLC：CtRet＝1.91分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.70(s，1H)，8.35-8.30(m，1H)，8.25(s，1H)，8.22-8.18(m，1H)，7.98-7.95(m，1H)，7.90(bs，2H)，7.80-7.70(m，2H)，7.65-7.60(m，1H)，7.25-7.18(m，1H)，6.80-6.75(m，1H)，3.20-3.10(m，4H)，2.50-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)。
步骤53.13-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(3-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(3-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺与步骤52.2的化合物的制备相似地合成：收率：30％；红色固体；ES-MS：M+H＝430.0。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.60(s，1H)，8.35-8.30(m，1H)，8.22(s，1H)，8.20-8.10(m，1H)，8.00(d，2H，J＝7.9Hz)，7.95-7.90(m，1H)，7.85(bs，2H)，7.80-7.75(m，1H)，6.95(d，1H，J＝7.9Hz)，3.20-3.10(m，4H)，2.50-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)。
步骤54.1 (Z)-3-二甲基氨基-2-(2-硝基-苯基)-丙烯腈
(Z)-3-二甲基氨基-2-(2-硝基-苯基)-丙烯腈与步骤52.1的化合物的制备相似地合成：收率：97％；棕色固体。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.82-7.78(m，1H)，7.62-7.55(m，1H)，7.45-7.35(m，2H)，7.20(s，1H)，3.15(s，6H)。
步骤54.2 3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(2-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-6-(2-硝基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺与步骤55.2的化合物的制备相似地合成：棕色固体；ES-MS：M+H＝430.0；HPLC：DtRet＝1.61分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.55(s，1H)，8.20-8.15(m，1H)，8.05-7.95(m，3H)，7.82-7.60(m，5H)，7.00-6.95(m，2H)，3.15-3.05(m，4H)，2.45-2.40(m，4H)，2.20(s，3H)。
步骤55.1 (E)-3-二甲基氨基-2-(4-甲基-噻唑-2-基)-丙烯腈
(E)-3-二甲基氨基-2-(4-甲基-噻唑-2-基)-丙烯腈与步骤52.1的化合物的制备相似地合成：收率：74％；黑色固体；ES-MS：M+H＝194.2；HPLC：CtRet＝1.57分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.76(s，1H)，6.60(s，1H)，3.25(bs，6H)，2.35(s，3H)。
实施例68
3-{7-氨基-2-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-酚
3-{7-氨基-2-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基)-酚与实施例1的制备相似地合成，当哌唑环形成时使用甲基肼替换肼：ES-MS：M+H＝415.2；HPLC：DtRet＝1.45分钟。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：9.53(s，1H，OH)，2.56(s，3H CH3)，2.24(s，3H CH3)。
实施例69
(4-{7-氨基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基}-苯基)-氨基甲酸乙酯
溶解于EtOH(4mL)和乙醇HCl(1.6mL，2.5N)中的4-(4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(步骤1.2)(200mg，0.81mmol)和[4-(2-氰基-1-甲酰基-乙基)-苯基]-氨基甲酸乙酯(步骤62.1)(275mg，0.04mmol)在Ar下搅拌回流17小时。加入H2O(4mL)和K2CO3(250mg)后，反应混合物用CH2Cl2(20mL，2×)萃取。合并的有机相用H2O(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并进行闪式色谱(硅胶，2.5×15cm，CH2Cl2/MeOH/NH3＝95:5:0.5)处理得到白色固体状的实施例62的化合物(58mg，0.123mmol；15％)；ES-MS：M+H＝472.0；Rf(CH2Cl2/MeOH/NH3＝90:10:0.1)＝0.42；HPLC：AtRet＝4.26分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.75/8.58(s/s，1H/1H，吡唑并嘧啶基)，8.03(d，9.0Hz，2H，苯基)，7.61(d，9Hz，2H，苯基)，7.53(s，2H，NH2)，7.46(d，9Hz，2H，苯基)，7.00(d，9Hz，2H，苯基)，4.17(q，7.5Hz，2H，CH2-乙基)，3.17/2.48(m/m，4H/4H，哌嗪基)，2.24(t，7.5Hz，3H，CH3)。
步骤62a.1 [4-(氰基-1-甲酰基-甲基)-苯基]-氨基甲酸乙酯
[4-(氰基-甲基)-苯基]-氨基甲酸苄酯(步骤62a.2)(1g，3.76mmol)与步骤1.3的制备相似地被甲酰化，得到相应的氨基甲酸乙酯(借此亦将苄酯官能团转化成乙酯官能团)：无色结晶(654mg，2.66mmol，70％)。ES-MS：M+H＝233.0。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：4.12(q/宽，7.5Hz，2H，CH2-乙基)，1.23(t/宽，7.5Hz，3H，CH3-乙基)。
步骤62.2 [4-(氰基-甲基)-苯基]-氨基甲酸苄酯
将溶解于二噁烷(16mL)中的(4-氨基-苯基)-乙腈(2g，15.1mmol)与二苄基二碳酸酯(4.33g，15.1mmol)在RT下搅拌1小时。在挥干溶剂后，通过闪式色谱(硅胶，4.5×25cm，CH2Cl2/MeOH＝99:1)分离产物：白色固体(3.82g，14.4mmol；95％)；ES-MS：M-H＝265.0；Rf(CH2Cl2/MeOH＝95:5)＝0.49；HPLC：AtRet＝6.32分钟。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：9.82(s，1H，NH)，7.51-7.35(m，7H，芳基)，7.26(d，8.5Hz，2H，芳基)，5.15(s，2H，CH2)，3.95(s，2H，CH2)。
(Z-)3-二甲基氨基-2-噻唑-4-基-丙烯腈
(Z-)3-二甲基氨基-2-噻唑-4-基-丙烯腈与步骤52.1的化合物的制备相似地合成：ES-MS[M+1]+＝180.1；HPLC：CtRet＝1.91分钟。
带磺酰胺和乙酰胺官能团的化合物68、69、71、74、和75(化合物50、72和76)通过氨基前体与相应的磺酰氯或乙酸酐在吡啶存在下反应而得到制备。
实施例77和78
表2和表3的化合物按照实施例8制备。
Figure A200780008081D00843
表2-实施例77
Figure A200780008081D00851
Figure A200780008081D00871
Figure A200780008081D00881
表3-实施例78
Figure A200780008081D00883
Figure A200780008081D00891
实施例79：6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
将4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺(步骤72.2)(1.29g，5mmol)在RT下溶解于EtOH(25mL)中，接着加入2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(步骤72.3)(0.97g，5mmol)和HCl(1.25M在EtOH中；20mmol，16mL)。微黄色的溶液在搅拌下回流20h。在冷却至RT后，加H2O(80mL)以及K2CO3(2.5g)使混合物成碱性。水层用CH2Cl2(200mL，2次)萃取。合并的有机层用水(50mL，2次)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并色谱(硅胶，120g RediSep，ISCO Sg-100 CH2Cl2/MeOH/NH3＝95:5:0,1)处理得到白色晶体状的标题化合物72(1.03g，2.38mmol；48％)；mp.110-115℃；MS(ESI+)：m/z＝433(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.72分钟(***1)。
步骤72.1：2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈
将355ml乙醇在N2下加热至55℃。在30min内向该溶液中加入钠(3.91g；0.17mol)，并搅拌1.5h直至全部金属溶解。将3-氯氰甲苯(15.31g；0.1mol)和乙酸乙酯(28.53mL；0.29mol)加至无色溶液中，接着回流下搅拌5h。在完成反应后，黄色混合物冷却至rt并减压蒸发。粗品吸收至水中(200mL)并通过加入2.5g的枸橼酸而中和。水层用CH2Cl2(2次，250mL)萃取，合并的有机相用水(2次，250mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并色谱(硅胶，1kg，Merck60(0.040-0.063)，用EtOAc/己烷1:1洗脱)处理得到微黄色晶体的标题物72.1(9.7g，0.05mol；50％)；mp.92-97℃；MS(ESI+)：m/z＝302.9(M+H)+；HPLC：AtRET＝5.67分钟(***1)。
步骤72.2：4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例31步骤24.1-24.3所述制备。
实施例80：6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺(实施例8；步骤1.2)和2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例80，步骤73.1)。米色结晶；mp.113-115℃；MS(ESI+)：m/z＝433(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.56分钟(***1)。
实施例81：6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79，步骤72.1)。米色结晶；mp.116-121℃；MS(ESI+)：m/z＝463(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.68分钟(***1)。
步骤74.1：4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.2；步骤1.4和1.5)中的描述制备；换成使用5-溴-2-甲氧基-苯基乙腈和N-甲基哌嗪。微黄色的泡沫；MS(ESI+)：m/z＝288.2(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.53分钟(***2)。
实施例82：6-(3-氯-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(3-氯-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79，步骤72.1)。米色结晶；mp.215-217℃；MS(ESI+)：m/z＝463(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.63分钟(***1)。
步骤75.1：4-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺。
标题化合物照实施例8，(步骤1.2；步骤1.4和1.5)中的描述制备；换成使用4-溴-2-甲氧基-苯基乙腈和N-甲基哌嗪。绿色-棕色结晶；mp.173.7-178.1℃；MS(ESI+)：m/z＝288.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.40分钟(***2)。
实施例83：3-{7-氨基-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，-a-]嘧啶-6-基)-酚
标题化合物照实施例1中的描述，溶解6-(3-苄基氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺在甲醇中并在Pd/C存在下进行催化氢化：米色结晶；mp.217-220℃；MS(ESI+)：m/z＝431.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝2.65分钟(***1)。
步骤76.1：6-(3-苄基氧基-苯基)-3-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例8，(步骤1.2；步骤1.4和1.5)中的描述制备；换成使用4-溴-2-甲氧基-苯基乙腈和N-甲基哌嗪。微黄色的固体；MS(ESI+)：m/z＝521(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.38分钟(***1)。
实施例84：6-(2-氯-苯基)-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]-嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和(Z)-2-(2-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈。黄色固体；mp.197-200℃；MS(ESI+)：m/z＝419(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.33分钟(***1)。
步骤77.1：(Z)-2-(2-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈
N，N-二甲基甲酰胺-二甲基乙缩醛(9.06mL；64.3mMol)和2-氯氰甲苯(1.95g；12.86mMol)在搅拌下、氩气氛下加热至100℃。冷却至rt后，该混合物减压浓缩并色谱纯化(硅胶，120g RediSep，ISCO Sg-100，用EtOAc/己烷1:1洗脱)以得到黄色稠厚的油状标题化合物(2.44g，11.8mmol；92％)；MS(ESI+)：m/z＝207(M+H)+；TLC(EtOAc/己烷1:1)Rf＝0.38。
实施例85：6-(2-氯-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]-嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用(Z)-2-(2-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈(实施例84，步骤77.1)。微黄色的结晶；mp.200-203℃；MS(ESI+)：m/z＝419.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.65分钟(***1)。
实施例86：6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈。白色结晶；mp.289-291℃；MS(ESI+)：m/z＝417.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.21分钟(***1)。
步骤79.1：2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈
标题化合物照实施例79、步骤72.1中的描述制备，换成使用(4-氟-苯基)-乙腈。米色结晶；mp.77-83℃；MS(ESI+)：m/z＝176.9(M+H)+；HPLC：AtRET＝5.15分钟(***1)。
实施例87：6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例86，步骤79.1)。白色结晶；mp.204-206℃；MS(ESI+)：m/z＝417.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.34分钟(***1)。
实施例88：6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基)-2H-吡唑-3-基-胺。米色结晶；mp.180-185℃；MS(ESI+)：m/z＝516.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.96分钟(***1)。
步骤81.1：4-{3-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-苯基}-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8，(步骤1.2和1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和1-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪。微黄色的结晶；mp.213-220℃；MS(ESI+)：m/z＝341.18(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.57分钟(***1)。
实施例89：6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈。白色结晶；mp.224-226℃；MS(ESI+)：m/z＝451(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.86分钟(***1)。
步骤82.1：2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈
标题化合物照实施例79、步骤72.1中的描述制备；换成使用(3-氯-4-氟-苯基)-乙腈。白色结晶；mp.133-134℃；MS(ESI-)：m/z＝209.9(M-H)-；HPLC：AtRET＝5.79分钟(***1)。
实施例90：6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例79中的描述制备；换成使用4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例89；步骤82.1)。白色结晶；mp.264-265℃；MS(ESI+)：m/z＝451(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.72分钟(***1)。
实施例91：6-(3-溴-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例79、步骤72.1中的描述制备；换成使用2-(3-溴-苯基)-3-氧代-丁腈。白色结晶；mp.107-113℃；MS(ESI+)：m/z＝477(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.90分钟(***1)。
步骤84.1：2-(3-溴-苯基)-3-氧代-丁腈
标题化合物照实施例79、步骤72.1中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈。白色结晶；mp.96-100℃；MS(ESI-)：m/z＝235.9(M-H)-；HPLC：AtRET＝5.76分钟(***1)。
实施例92：6-(3-溴-苄基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用3-(3-溴-苯基)-2-甲酰基-丙腈。白色结晶；mp.170-171℃；MS(ESI+)：m/z＝477.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.84分钟(***1)。
步骤85.1：3-(3-溴-苯基)-2-甲酰基-丙腈
3-(3-溴苯基)丙腈(0.703mL；4.66mMol)和甲酸乙酯(1.499mL；18.64mMol)在rt下溶解于无水THF(12.5mL)中，接着加入NaH(60％在矿物油中；670mg)。在rt下17h后，加入另外的NaH(448mg)和甲酸乙酯(0.765mL)。因为这导致强放热反应，加入另外的溶剂(15mL的THF)。完成后(3天)，将反应混合物冷却至0℃，用少量冰块处理，接着加入6N HCl(3mL)以酸化混合物。加入水(50mL)后，混合物用EtOAc(3次100mL)萃取。合并的有机相用H2O(50mL，2次)、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩并色谱(硅胶，40g RediSep，ISCO Sg-100，用EtOAc/己烷1:1洗脱)处理以得到棕色油状的标题化合物(220mg；20％)；MS(ESI-)：m/z＝235.9(M-H)-；TLC EtOAc/己烷1:1)Rf＝0.28。
实施例93：6-(3-溴-苯基)-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用(Z)-2-(3-溴-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈。白色结晶；mp.195.3-197.2℃；MS(ESI+)：m/z＝463.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.05分钟(***1)。
步骤86.1：(Z)-2-(3-溴-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯腈照实施例77、步骤77.1中的描述制备：金棕色结晶；mp.102-105℃；MS(ESI+)：m/z＝251.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝6.45分钟(***1)。
实施例94：6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3-吗啉-4-基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3-吗啉-4-基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。类白色结晶；mp.165-167℃；MS(ESI+)：m/z＝420(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.49分钟(***1)。
步骤87.1：4-(3-吗啉-4-基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.2；步骤1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和吗啉。类白色结晶；mp.166-168℃；MS(ESI+)：m/z＝245.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝1.79分钟(***1)。
实施例95：6-(3-氯-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。白色结晶；mp.171-172℃；MS(ESI+)：m/z＝365(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.96分钟(***1)。
步骤88.1：4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.4和1.2)中的描述制备；换成使用(4-甲氧基-苯基)-乙腈。白色结晶；mp.198-201℃；MS(ESI+)：m/z＝190(M+H)+；HPLC：AtRET＝2.85分钟(***1)。
实施例96：6-(3-氯-苯基)-3-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺。白色结晶；mp.165-167℃；MS(ESI+)：m/z＝448(M+H)+；HPLC：AtRET＝5.14分钟(***1)。
步骤89.1：4-[3-((2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉-4-基)-苯基]-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8(步骤1.2和步骤1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和(2R，6S)-2，6-二甲基-吗啉。白色结晶；mp.158-160℃；MS(ESI+)：m/z＝273.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.02分钟(***1)。
实施例97：2-(4-{3-[7-氨基-6-(3-氯-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基)-乙醇。类白色结晶；mp.108-116℃；MS(ESI+)：m/z＝463(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.62分钟(***1)。
步骤90.1：2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基)-乙醇
标题化合物照实施例9、(步骤1.2和1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和2-哌嗪-1-基-乙醇。微黄色的泡沫；mp.40-48℃；MS(ESI+)：m/z＝288.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.45分钟(***1)。
实施例98：6-苄基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-甲酰基-3-苯基-丙腈(实施例23；步骤23.1)。微黄色的结晶；mp.72-75℃；MS(ESI+)：m/z＝399.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.30分钟(***1)。
实施例99：6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-氟甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例93；步骤93.1)和2-(3-氯-苯基)-4-氟-3-氧代-丁腈。黄色结晶；mp.228-230℃；MS(ESI+)：m/z＝413(M+H)+；HPLC：AtRET＝6.65分钟(***1)。
步骤92.1：2-(3-氯-苯基)-4-氟-3-氧代-丁腈
标题化合物照实施例72、步骤72.1中的描述制备；换成使用氟乙酸乙酯。米色结晶；mp.90-96℃；MS(ESI-)：m/z＝209.9(M-H)-；HPLC：AtRET＝5.66分钟(***1)。
实施例100：6-(3-氯-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。类白色固体；mp.223-226℃；MS(ESI+)：m/z＝395.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.69分钟(***1)。
步骤93.1：4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.4和1.2)中的描述制备；换成使用(3，4-二甲氧基-苯基)-乙腈。白色结晶；mp.143-146℃；MS(ESI+)：m/z＝220.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝2.28分钟(***1)。
实施例101：6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，-5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例93；步骤93.1)和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例82；步骤82.1)。类白色固体；mp.235-238℃；MS(ESI+)：m/z＝413.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.83分钟(***1)。
实施例102：6-(3-氯-4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]-嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例88；步骤88.1)和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例82；步骤82.1)。白色结晶；mp.224-227℃；MS(ESI+)：m/z＝383(M+H)+；HPLC：AtRET＝5.08分钟(***1)。
实施例103：6-(4-氟-苯基)-3-(4-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例88，步骤88.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79；步骤79.1)。白色结晶；mp.243-244℃；MS(ESI+)：m/z＝349，1(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.56分钟(***1)。
实施例104：2-(4-{3-[7-氨基-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基)-乙醇(实施例90，步骤90.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79；步骤79.1)。类白色结晶；mp.209-212℃；MS(ESI+)：m/z＝447.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.24分钟(***1)。
实施例105：6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈。白色固体；mp.216-219℃；MS(ESI+)：m/z＝435(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.30分钟(***1)。
步骤98.1：2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈
标题化合物照实施例8、(步骤1.4和1.2)中的描述制备；换成使用(3，4-二氟-苯基)-乙腈。白色结晶；mp.147-152℃；MS(ESI+)：m/z＝195(M+H)+；HPLC：AtRET＝5.39分钟(***1)。
实施例106：6-(3，4-二氟-苯基)-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例93；步骤93.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例98；步骤98.1)。类白色固体；mp.230-235℃；MS(ESI+)：m/z＝397.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.53分钟(***1)。
实施例107：2-(4-(3-[7-氨基-6-(3-氯-4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基)-乙醇(实施例90，步骤90.1)和2-(3-氯-4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例82；步骤82.1)。类白色结晶；mp.104-107℃；MS(ESI+)：m/z＝481(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.00分钟(***1)。
实施例108：2-(4-{3-[7-氨基-6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-3-基]-苯基}-哌嗪-1-基)-乙醇
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用2-{4-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌嗪-1-基)-乙醇(实施例90，步骤90.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例98；步骤98.1)。类白色结晶；mp.172-174℃；MS(ESI+)：m/z＝465(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.71分钟(***1)。
实施例109：6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺。黄色结晶；mp.188-193℃；MS(ESI+)：m/z＝487.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.21分钟(***1)。
步骤102.1：4-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.2和1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和4-吡咯烷-1-基-哌啶。黄色结晶；mp.214-216℃；MS(ESI+)：m/z＝312.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.71分钟(***1)。
实施例110：6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-[3-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-苯基]-1H-吡唑-3-基胺(实施例102；步骤102.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79；步骤79.1)。白色结晶；mp.244-249℃；MS(ESI+)：m/z＝471.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.82分钟(***1)。
实施例111：6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡啶并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用{1-[3-(3-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基)-二乙胺。白色结晶；mp.163-168℃；MS(ESI+)：m/z＝489.0(M+H)+；HPLC：AtRET＝4.02分钟(***1)。
步骤104.1：{1-[3-(3-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基-二乙胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.2和1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和二乙基-哌啶-4-基-胺。无定型米色固体；MS(ESI+)：m/z＝314.2(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.75分钟(***1)。
实施例112：3-[3-(4-二乙基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-6-(4-氟-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用(1-[3-(3-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基)-二乙基-胺(实施例104，步骤104.1)和2-(4-氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例79；步骤79.1)。白色结晶；mp.208-210℃；MS(ESI+)：m/z＝473.1(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.63分钟(***1)。
实施例113：6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺(实施例80)(50mg；0.12mMol)溶解于CH2Cl2(10mL)中并在0℃下用3-氯苯甲酸(31.1mg；0.126mMol)处理1h，接着rt搅拌2h。减压去除溶剂后粗品混合物通过色谱纯化(硅胶，12g RediSep，ISCO Sg-100CH2Cl2/MeOH/NH3＝80:20:1)得到米色晶体状的标题化合物(44mg)；mp.210-223℃；MS(ESI+)：m/z＝449(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.31分钟(***1)。
实施例114：6-(4-氟-苯基)-5-甲基-3-[3-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基]-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
从实施例113中描述的相同的反应中分离标题化合物：米色结晶(20mg)；mp.161-169℃；MS(ESI+)：m/z＝433(M+H)+；HPLC：AtRET＝3.89分钟(***1)。
实施例115：6-(3-氯-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用{1-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基)-二甲基-胺。
步骤108.1{1-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基)-二甲胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.2和1.4和1.5)中的描述制备；换成使用(3-溴-苯基)-乙腈和二甲基-哌啶-4-基-胺。
实施例116：6-(3，4-二氟-苯基)-3-[3-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-苯基]-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用(1-[3-(5-氨基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-哌啶-4-基)-二甲基-胺(实施例108；步骤108.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例98；步骤98.1)。
实施例117：6-(3-氯-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。
步骤110.1：4-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.4和1.2)中的描述制备；换成使用(3，4，5-三甲氧基-苯基)-乙腈。
实施例118：6-(3，4-二氟-苯基)-5-甲基-3-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3，4，5-三甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例110；步骤110.1)和2-(3，4-二氟-苯基)-3-氧代-丁腈(实施例98；步骤98.1)。
实施例119：6-(3-氯-苯基)-3-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例86中的描述制备；换成使用4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺。
步骤112.1：4-(3-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺
标题化合物照实施例8、(步骤1.4和1.2)中的描述制备；换成使用(3-甲氧基-苯基)-乙腈。
实施例120：6-[7-氨基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-6-基]-吡啶-2-醇
标题化合物照实施例8中的描述制备；换成使用2-(6-羟基-吡啶-2-基)-3-氧代-丙腈和4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例93；步骤96.1)。
实施例121：6-苄基-3-(3，4-二甲氧基-苯基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基胺
标题化合物照实施例93中的描述制备；换成使用4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基胺(实施例93；步骤93.1)。
实施例122：3-(3，4-二甲氧基-苯基)-6-(3-氟-苄基)-吡唑并[1，5-a]嘧啶-7-基-胺
标题化合物照实施例121中的描述制备；换成使用2-(3-氟-苄基)-3-氧代-丙腈。
实施例123：包含式(I)化合物的片1
以下组成的片剂，包含50mg的前面实施例8-122中提及的任意一种的作为活性成分的式(I)化合物，使用常规方法制备：
 
组成：
活性成分 50mg
小麦淀粉 60mg
乳糖 50mg
胶态二氧化硅 5mg
滑石粉 9mg
硬脂酸镁 1mg
175mg
制备：将活性成分与部分小麦淀粉、乳糖和胶态二氧化硅合并，并且将该混合物压过筛。另外部分小麦淀粉与5倍量的水在水浴下混合形成糊，并且该制备的混合物首先与糊捏合直至弱塑性物质形成。
将干颗粒压过3mm目的筛，与剩余玉米淀粉、硬脂酸镁和滑石粉预筛过的混合物(1mm筛)混合并压制成略双凸片。
实施例124：包含式(I)的化合物的片2
包含100mg的实施例8-122的式(I)化合物的任何一个作为活性成分的片剂照以下组成按照标准方法制备：
 
组成：
活性成分 100mg
结晶乳糖 240mg
微晶纤维素 80mg
PVPPXL 20mg
微粉硅胶 2mg
硬脂酸镁 5mg
447mg
制备：活性成分与载体物质混合，并用压片机(Korsch EKOStempeldurchmesser 10mm)压制。
实施例125：胶囊
包含100mg实施例8-122中给出的式(I)化合物的任何一个作为活性成分的以下组成的胶囊，按照标准方法制备：
 
组成：
活性成分 100mg
微晶纤维素 200mg
PVPPXL 15mg
微粉硅胶 2mg
硬脂酸镁 1.5mg
318.5mg
制备是通过混合这些成分并填装至1号硬胶囊中进行的。

Claims (20)

1.治疗Eph受体相关损伤和障碍的方法，包括给需要这类治疗的温血动物特别是人施用式(I)化合物或其可药用盐，
Figure A200780008081C00021
其中：
R2为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或其可通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的脂族残基，
R2或R3至少一个是取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或其通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
2.根据权利要求1的方法，还包括施用化合物1至8中的任意一种。
3.根据权利要求2的方法，还包括施用化合物1。
4.根据权利要求1的方法，其中所述的被治疗的疾病是神经变性疾病。
5.根据权利要求1的方法，其中所述的Eph受体相关的损伤或障碍是四肢麻痹、偏瘫、和截瘫。
6.根据权利要求5的方法，其中所述的四肢麻痹、偏瘫、和截瘫是由损伤或外伤引起的。
7.根据权利要求5的方法，其中所述的四肢麻痹、偏瘫、和截瘫是由遗传性疾病引起的。
8.根据权利要求1的方法，其中所述的被治疗的损伤是脊髓损伤或是由脊髓损伤引起的。
9.根据权利要求1的方法，其中所述的被治疗的损伤是由脑梗塞诸如中风引起的。
10.刺激神经再生或逆转神经元变性或两者的方法，包括给温血动物特别是人施用式(I)化合物或其可药用盐，
Figure A200780008081C00031
其中：
R2为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或其可通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的脂族残基，
R2或R3至少一个是取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或其通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
11.根据权利要求10的方法，还包括施用化合物1至8中的任意一种。
12.根据权利要求11的方法，还包括施用化合物1。
13.权利要求10的方法，其中所述的温血动物患有神经元性损伤。
14.权利要求10的方法，其中所述的温血动物患有神经性障碍。
15.权利要求10的方法，其中所述的温血动物患有由遗传疾病造成的四肢麻痹、偏瘫、和截瘫。
16.权利要求10的方法，其中所述的温血动物患有脊髓损伤。
17.权利要求10的方法，其中所述的温血动物经历过脑梗塞诸如中风。
18.权利要求1的方法，其中所述的式(I)化合物在联合疗法中与与其他能够阻断髓鞘质抑制剂Nogo、髓鞘相关的糖蛋白(MAG)、或少突胶质细胞-髓鞘糖蛋白OMgp的药物的联合。
19.式(I)化合物或其可药用盐，
Figure A200780008081C00041
其中：
R2为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的脂族残基；
R3为H、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的脂族残基、官能团、或其可通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的脂族残基，
R2或R3至少一个是取代的或未取代的芳基；取代的或未取代的杂芳基；或其通过一个连接基团或原子与吡唑并[1，5a]嘧啶环连接的取代的或未取代的杂芳基或取代的或未取代的芳基残基；
A为H、卤素(诸如溴)、脂族部分、官能团、取代的或未取代的芳基或杂芳基；且
R1为H、卤素或低级烷基。
20.列于表I的化合物。
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