CN101168537A

CN101168537A - 同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法

Info

Publication number: CN101168537A
Application number: CNA2007101428007A
Authority: CN
Inventors: 吴娇; 戴好富; 梅文莉
Original assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Priority date: 2007-07-06
Filing date: 2007-07-06
Publication date: 2008-04-30

Abstract

本发明涉及一种同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法。此方法是将穿心莲全草适当粉碎后加入一定浓度的醇溶剂进行提取，将提取液过滤后，回收溶剂，使滤液中醇溶剂浓度低于20％；过滤后，取滤液经大孔树脂交换、吸附完毕，用不同浓度的醇溶剂进行梯度洗脱，使穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别解吸于不同浓度的洗脱液中；将洗脱液浓缩后，分别重结晶精制得到穿心莲内酯结晶和脱水穿心莲内酯结晶。通过此方法得到的两种晶体纯度均可达97％以上，并且此方法具有工艺简单、易操作、成本低、可以工业化生产等突出优点。

Description

同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法

技术领域

本发明涉及一种同时分离制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，特别是涉及一种利用大孔树脂同时分离制备穿心莲中这两种主要有效成分的方法。

背景技术

穿心莲主要有效成分为二萜内酯类成分，具有消炎抗菌、抗病毒感染等作用。其中以穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯含量最高，而脱水穿心莲内酯是穿心莲内酯化合物中作用最强的一个。以穿心莲内酯或脱水穿心莲内酯及其衍生物制成的药物，如穿心莲内酯片、穿琥宁注射液、炎琥宁注射液等已在临床上广泛应用。

目前对穿心莲中二萜内酯类成分进行提取的传统工艺有水提、碱水提、酸水提、醇提等。张玲等人根据提取物中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯成分含量，得出浸渍工艺＞渗漉工艺＞温浸工艺＞回流提取工艺，加热温度在55℃时内酯类成分变化不大，但长时间加热也会导致内酯环的结构破坏。因穿心莲内酯类成分难溶于水，水提法的提取效率及含量较低；而碱水提取法(CN1042077)对pH值的要求较严格，若pH值控制不当，有可能造成内酯的水解，而且这些方法提取的浸膏中有效成分含量均较低。葛发欢等人利用超临界CO₂萃取法直接提取穿心莲药材，所得浸膏中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量分别为13.03％和23.75％。此外，范云鸽等人比较了4种聚苯乙烯型的非极性大孔树脂吸附穿心莲总内酯的工艺，将穿心莲总内酯的含量提高到25.3％。中国专利申请CN1695702公开了对穿心莲乙醇提取物采用包合以及脱包合的超分子提取有效成分的方法，其超分子提取物中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量分别达到40.41％和10.20％，与常规技术相比，含量大大提高。

穿心莲内酯脱水穿心莲内酯

上述技术虽然使得穿心莲内酯类成分在提取物中的含量得到不同程度的提高，但仍未制备获得穿心莲内酯或脱水穿心莲内酯单体化合物或者这两种成分的高纯度的结晶。中国专利申请CN1935798A公开了一种穿心莲内酯的制备方法，通过此方法制备获得了高纯度的穿心莲内酯，但是没有同时制备得到脱水穿心连内酯。而本发明采用不同浓度的醇溶剂对吸附在大孔树脂上的穿心莲内酯和脱水穿心连内酯分别进行解吸，再结合重结晶技术，可以同时制备得到穿心莲内酯和脱水穿心连内酯两种结晶，不仅提高了药材利用率和产品得率，减少了浪费，同时还具有工艺简单、易操作、成本低、可以工业化生产等突出优点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，通过此方法得到的这两种晶体的纯度均可达97％以上，并且此方法具有工艺简单、易操作、成本低、可以工业化生产等突出优点。

本发明的目的可通过实施下述技术方案来实现：

本发明提供的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，按以下步骤进行：

1.溶剂提取：将穿心莲粉碎后中加入一定浓度的醇溶剂进行提取：

所述的溶剂包括水、乙醇、甲醇；其中溶剂与穿心莲草混合，按重量比计为1∶3～30；所述的溶剂可以是一种溶剂，或是任意比例的混合溶剂，其中优选的醇浓度为40～60％；所述的提取方法是冷浸或超声提取。

2.将步骤1得到的提取液过滤后，回收溶剂，使滤液中醇溶剂浓度低于20％；再过滤后，取滤液流经大孔树脂柱进行交换、吸附，其流速为0.8～3BV/h；

3.经步骤2交换、吸附完毕，分别用水和由低至高的不同浓度的醇溶剂作为洗脱液进行梯度洗脱。先用水或低于35％的醇溶剂将大部分高极性的杂质洗脱去除，然后用35～50％的醇溶剂将穿心莲内酯洗脱下来并收集，再用55～100％的醇溶剂将脱水穿心莲内酯洗脱下来并收集，通过硅胶板薄层层析与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，从而获得分别富集了穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的洗脱液。

4.将经步骤3得到的富集了穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的洗脱液分别浓缩后，运用重结晶技术精制得到纯度可达97％以上的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯结晶。

其他详细细节在本领域常见。

具体实施方式

实施例1：

50g穿心莲全草粉碎后，其粒径达到4mm，加入150mL 50％乙醇水溶液混合，浸渍提取3次，分别提取3、2、1天。提取液过滤减压回收溶剂至穿心莲内酯仍处于溶解状态，加水适量稀释，过滤或离心弃去沉淀，将滤液通过南开大学化工厂生产的非极性DA201-A大孔树脂，滤液经树脂柱交换、吸附的流速为3mL/min；交换完毕后，分别用水、35％、45％、55％、60％乙醇洗脱，洗脱过程用硅胶板薄层层析与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，高效液相色谱仪检测洗脱液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，45％乙醇洗脱液中主要含有穿心莲内酯，含量为46.99％，用80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到穿心莲内酯晶体0.255g，纯度达97.8％；55％乙醇洗脱液中主要含有脱水穿心莲内酯，含量为79.74％，用80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到晶体0.039g，纯度达98.6％。

用过的树脂柱则用10％乙醇冲洗后可反复使用，乙醇可减压回收。采用本方法使穿心莲内酯的含量从上样前的3.6％提高到大孔树脂富集后的46％，回收率为98％；脱水穿心莲内酯的含量从0.6％提高到79％，回收率为97％。

实施例2：

50g穿心莲全草粉碎后，其粒径达到5mm，装入提取器中，加入200mL 50％乙醇水溶液混合，然后将混合溶液放在超声波发生器容器内，用超声波对穿心莲草粉进行超声提取。所用超声频率为20KHz，功率为50W～10000W，超声提取时间为60分钟，温度为40度。提取液过滤减压回收溶剂至穿心莲内酯仍处于溶解状态，加水适量稀释，过滤或离心弃去沉淀，将滤液通过南开大学化工厂生产的非极性DA201-B大孔树脂，滤液经树脂柱交换、吸附的流速为3mL/min；交换完毕后，分别用水、30％、50％、70％、90％洗脱，洗脱过程用硅胶板薄层层析与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，高效液相色谱仪检测洗脱液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，50％乙醇洗脱液中主要含有穿心莲内酯，含量为48.39％，用80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到穿心莲内酯晶体0.245g，纯度达97.8％；70％乙醇洗脱液中主要含有脱水穿心莲内酯，含量为80.23％，用80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到晶体0.037g，纯度达98.4％。

用过的树脂柱则用10％乙醇冲洗后可反复使用，乙醇可减压回收。采用本方法使穿心莲内酯的含量从上样前的4.2％提高到大孔树脂富集后的48％以上，回收率为96％；脱水穿心莲内酯的含量从0.57％提高到80％以上，回收率为95％。

实施例3：

50g穿心莲全草粉碎后，其粒径达到2mm，加入250mL 60％乙醇水溶液混合，浸渍提取3次，分别提取3、2、1天。提取液过滤减压回收溶剂至穿心莲内酯仍处于溶解状态，加水适量稀释，过滤或离心弃去沉淀，将滤液通过南开大学化工厂生产的非极性DA201-B大孔树脂，滤液经树脂柱交换、吸附的流速为3mL/min；交换完毕后，分别用水、30％、45％、60％、70％乙醇洗脱，洗脱过程用硅胶板薄层层析与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，高效液相色谱仪检测洗脱液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，45％乙醇洗脱液中主要含有穿心莲内酯，含量为48.57％，80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到穿心莲内酯晶体0.252g，纯度达98.8％；60％乙醇洗脱液中主要含有脱水穿心莲内酯，含量为78.48％，80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到晶体0.038g，纯度达99.3％。

用过的树脂柱则用10％乙醇冲洗后可反复使用，乙醇可减压回收。采用本方法使穿心莲内酯的含量从上样前的4.1％提高到大孔树脂富集后的48％以上，回收率为97％；脱水穿心莲内酯的含量从0.63％提高到78％以上，回收率为97％。

实施例4：

50g穿心莲全草粉碎后，其粒径达到5mm，装入提取器中，加入200mL 70％乙醇水溶液混合，然后将混合溶液放在超声波发生器容器内，用超声波对穿心莲草粉进行超声提取。所用超声频率为20KHz，功率为50W～10000W，超声提取时间为60分钟，温度为45度。提取液过滤减压回收溶剂至穿心莲内酯仍处于溶解状态，加水适量稀释，过滤或离心弃去沉淀，将滤液通过南开大学化工厂生产的非极性DA201-C大孔树脂，滤液经树脂柱交换、吸附的流速为3mL/min；交换完毕后，分别用水、30％、40％、45％、50％、55％、60％乙醇洗脱，洗脱过程用硅胶板薄层层析与穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯标准品进行对照决定收集洗脱液的起始点，高效液相色谱仪检测洗脱液中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，45％乙醇洗脱液中主要含有穿心莲内酯，含量为46.17％，用80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到穿心莲内酯晶体0.255g，纯度达97.6％；55％乙醇洗脱液中主要含有脱水穿心莲内酯，含量为81.62％，用80％乙醇水溶解过滤后重结晶，得到晶体0.039g，纯度达99.7％。

用过的树脂柱则用10％乙醇冲洗后可反复使用，乙醇可减压回收。采用本方法使穿心莲内酯的含量从上样前的4.8％提高到大孔树脂富集的46％以上，回收率为98％；脱水穿心莲内酯的含量从0.6％提高到81％以上，回收率为96％。

Claims

1.一种同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于按以下步骤进行：

(1)溶剂提取：将穿心莲粉碎后中加入一定浓度的醇溶剂进行提取；

(2)将提取液过滤后，回收溶剂，使滤液中醇溶剂浓度低于20％；再过滤后，取滤液流经大孔树脂柱进行交换、吸附，其流速为0.8～3BV/h；

(3)经树脂交换、吸附完毕，用不同浓度的醇溶剂作为洗脱液进行梯度洗脱，使穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别解吸于不同浓度的洗脱液中；

(4)将分别含有穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的洗脱液适当浓缩后，进行重结晶，精制得到穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯结晶。

2.按照权利要求1所述的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于：所述步骤1中使用的溶剂包括水、乙醇、甲醇；其中溶剂与穿心莲药材粗粉混合，按重量比计为1∶3～30。

3.按照权利要求1所述的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于：所述步骤1中使用的溶剂可以是一种溶剂，或是任意比例的混合溶剂，其中优选的醇浓度为40～60％。

4.按照权利要求1所述的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于：所述步骤1中采用的提取方法可以是冷浸提取，或超声提取，其中冷浸提取时间为1～15d，超声提取时间为30min～120min。

5.按照权利要求1所述的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于：所述步骤3中使用的溶剂包括水、乙醇、甲醇。

6.按照权利要求1所述的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于：所述步骤3中用于解吸树脂中的穿心莲内酯的洗脱液，其醇溶剂的浓度为35～50％；用于解吸树脂中的脱水穿心莲内酯的洗脱液，其醇溶剂的浓度为55～100％。

7.按照权利要求1所述的同时制备穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的方法，其特征在于：所述的大孔树脂型号为DA201-A、B、C。