CN101401897A - 重楼皂苷提取液的除杂纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含植物有效成分的提取液的除杂纯化方法。本发明所述的重楼皂苷提取液的除杂纯化方法由以下步骤组成:一、将重楼属植物,碎成粗粉,经溶媒提取后过滤除去残渣及杂质,得到重楼皂苷粗提取液,所述溶媒为水和有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一种或几种的混合物;二、将步骤(一)的粗提取液浓缩成密度在25℃时为1.01~1.05的悬浊液;三、将悬浊液用无机陶瓷膜过滤,无机陶瓷膜材质为二氧化锆膜,膜孔径为0.05~0.2μm,得截留液和透过液,收集截留液,即得经除杂纯化的重楼皂苷提取液。本发明工艺较传统的重楼皂苷的除杂纯化方法工艺简单,易于操作,得到的提取物活性成分(重楼皂苷)含量高,吸湿性低等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种含植物有效成分的提取液的除杂纯化方法。
背景技术
无机陶瓷膜分离技术作为一项现代纯化技术,在植物及中药材分离除杂领域中已表现出极好的发展前景,涉及注射液、口服液、浸膏、药酒等剂型的制备,药液的除菌、除热原等方面经无机陶瓷膜微滤得到的透过液都能使产品达到质量标准要求。除此之外,还有人用无机陶瓷膜对料液进行预处理,收集透过液上大孔树脂柱,除去提取料液的多糖、果胶、淀粉、纤维等难溶性成分,可以使料液在柱中流畅不易结块,达到除杂目的。该工艺涉及到两个工艺过程,效率不是很高。除此之处有人也用其它一些方法,开展提取液的除杂工艺研究,如醇沉、水沉、加絮凝剂等。各种新方法都在不断进行尝试研究,并使工艺流程更加高效、经济。
随着科技的进步,提取液除杂纯化工艺有多种技术方案。CN1481857专利仅涉及到“重楼皂苷的提取方法”,CN1490320专利公开了“重楼总皂苷的制备方法”,其中提到的膜过滤过程,只是利用膜的过滤性能,除颗粒性杂质;CN1927230专利公开“一种单味中药或中药复方有效部分的提取纯化方法”,所提到的纯化方法主要强调了大孔树脂除杂纯化工艺过程;CN1364864专利公开了“一种利用陶瓷膜的生物发酵液分离方法”,描述了陶瓷膜微滤单元流出的透过液即为未浓缩的产物;CN1528768专利公开了“膜集成技术处理薯蓣皂素废水并回收葡萄糖和盐酸的方法”,所用膜为有机纳滤膜,目的是除提取液中的盐酸;CN1364864专利公开了“一种陶瓷膜处理洗毛废水回收羊毛脂的方法”,利用陶瓷膜循环过滤***过滤浓缩洗毛废水,得到的浓缩液引入粗分离心机,分离出不含泥砂的粗羊毛脂,这里强调了过滤过程,是为了进行固液分离。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷,提供一种利用物质的溶解性以及无机陶瓷膜的微滤特性,能够有效地进行杂质分离的重楼皂苷提取液的除杂纯化方法。
本发明所述的重楼皂苷提取液的除杂纯化方法由以下步骤组成:
一、将重楼属植物,碎成粗粉,经溶媒提取后过滤除去残渣及杂质,得到重楼皂苷粗提取液,所述溶媒为水和有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一种或几种的混合物;
二、将步骤(一)的粗提取液浓缩成密度在25℃时为1.01~1.05的悬浊液;
三、将悬浊液用无机陶瓷膜过滤,无机陶瓷膜材质为二氧化锆膜,膜孔径为0.05~0.2μm,得截留液和透过液,收集截留液,截留液浓缩、干燥,即得经除杂纯化的重楼皂苷提取物;
步骤(二)所述的悬浊液是将重楼皂苷粗提取液进行浓缩,使浓缩后的体积升为所用重楼属植物公斤重量的2~8倍,同时使浓缩液中有机溶剂的体积百分比浓度≤10%;每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶1~5g,即得所需的悬浊液。
所述的重楼属植物为南重楼、北重楼、云南重楼、毛叶重楼、巴山重楼、花叶重楼、七叶一枝花、黑籽重楼、短梗重楼等的干燥根茎。
经过陶瓷膜微滤处理,呈颗粒状的皂苷类有效成分保留在截留液中,而溶解在悬浊液中的多糖、淀粉、果胶等杂质则通过膜进入到透过液,从而达到除杂纯化的目的。由于透过液中也会含有少部分皂苷类有效成分,为了提高得率,可以对透过液进行进一步处理:
步骤四、将步骤(三)所得的透过液,上D-101型大孔树脂柱吸附,用2~4倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,再用2~4倍柱体积的75%~95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,乙醇洗脱液与步骤(三)得到的截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物。
本发明方法是对重楼皂苷提取液的除杂纯化方法,重楼皂苷粗提取液为上述重楼属植物经溶媒提取后得到的溶液,重楼属植物经常规方法提取,如:加热回流提取、浸渍提取或渗漉提取,提取液过滤除去泥沙及药渣得到重楼皂苷粗提取液,经浓缩后过二氧化锆陶瓷膜得到的截留液即为经除杂纯化的重楼皂苷提取液。
为提高采用本发明方法制备重楼皂苷的提取率,还可以将上述方法中经陶瓷膜过滤的透过液经大孔树脂柱吸附,用柱体积2~4倍的蒸馏水洗脱,弃去洗脱液,再用2~4倍柱体积的75%~95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,与过陶瓷膜的截留液合并,浓缩,干燥,得到经除杂纯化的重楼皂苷提取物。
本发明工艺较传统的重楼皂苷的除杂纯化方法工艺简单,易于操作,得到的提取物活性成分(重楼皂苷)含量高,吸湿性低等优点。
本发明方法的特点在于将提取液刻意制备成悬浮液,再用陶瓷膜处理。根据这一设计原理,我们开展了中药重楼皂苷成分的提取分离研究工作。
本发明方法与醇沉除杂方法比较如下:
1.重楼皂苷粗提取液的制备
100公斤云南重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以1000、500、500公斤70%乙醇提取5、4、3小时,提取液过滤除去残渣及杂质,后合并得重楼皂苷粗提取液。
2.除杂纯化工艺比较
2.1醇沉除杂
取重楼皂苷粗提取液,浓缩至流浸膏,用5~10倍90%的乙醇溶解,低温静置过夜,过滤,收集滤液,浓缩,干燥,得浸膏粉。
2.2本发明二氧化锆(ZrO2)陶瓷膜除杂
取重楼皂苷粗提取液,浓缩使其密度为1.01~1.10(25℃下用密度计测定),浓缩后的体积(升)相当于所用重楼属植物质量(公斤)的2~8倍,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶1~5g,制成悬浊液。控制悬浊液中溶媒的体积百分比浓度≤10%。
悬浊液上无机陶瓷膜进行微滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.05-0.2μm。收集截留液;透过液经D-101大孔树脂吸附收集,用柱体积2~4倍的蒸馏水洗脱,弃去洗脱液,再用2~4倍柱体积的75%~95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,与过陶瓷膜的截留液合并,浓缩,干燥,得浸膏粉。
3.工艺过程及结果分析
3.1云南重楼的干燥根茎中皂苷类成分的分析
在本工艺研究实验中,我们以重楼皂苷I、II、III、IV、V、VI六个成份为监测指标,用以比较两种除杂纯化工艺的差异。
采用HPLC方法对本研究实验选用的云南重楼的干燥根茎中的重楼皂苷I、II、III、IV、V、VI六个成份进行分析,六个重楼皂苷标准样品的HPLC线性见表1。
表1 6种重楼皂苷标准样品HPLC线性关系
用PLC检测结果见表2:
表2 云南重楼的干燥根茎中6种皂苷组份含量分析
3.2两种工艺过程分析
取同批次云南重楼的干燥根茎各100公斤,分别按重楼皂苷粗提取液的制备工艺流程提取,及进行除杂纯化处理。醇提除杂工艺选择:醇提混合液浓缩、醇沉上清液、醇沉上清液浓缩液、浸膏粉及药渣等5个步骤取样;二氧化锆陶瓷膜除杂工艺选择:醇提混合液浓缩、膜过滤截留液、膜过滤透过液、大孔树脂洗脱液、截留液+洗脱液混合浓缩、浸膏粉及药渣等7个取样点,比较两个工艺过程,结果见表3、表4。
表3 醇沉除杂工艺中各取样点的成分分析
表4 二氧化锆陶瓷膜除杂工艺中各取样点的成分分析
根据皂苷类成分含量分析结果,结合物料分析,可以直观地比较出两种工艺的优劣,比较结果见表5、表6。
表5 两种除杂工艺中各取样点的比较
表6 两种除杂工艺所得浸膏比较
4.结论
从上述分析可以看出,在浸膏得率及浸膏活性成份含量方面,无机陶瓷膜工艺都比传统的醇沉工艺较好。与一般提取工艺比较,用该方法处理得到的浸膏,从得率、含量、吸湿性、外观颜色等方面进行比较,在工艺流程和品质上都有较大的优势。本发明方法具有:皂苷类成分含量高、得率高,产物吸湿性低,工艺简单易于操作等优点。
具体实施方式
结合具体实施例仅是进一步说明本发明专利内容,但本发明专利并不限于此。
实施例1:取100公斤云南重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以1000、500、500公斤70%乙醇提取5、4、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶1g,制成悬浊液,控制悬浊液中乙醇含量低于5%,使最终溶液密度为1.01(25℃下用密度计测定),体积为0.40立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.05μm,收集截留液,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物5.4公斤,重楼总皂苷含量13.7%。
实施例2:取80公斤云南重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以800、400、400公斤60%乙醇提取5、4、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶2g,制成悬浊液,控制悬浊液中乙醇含量低于7%,使最终溶液密度为1.01(25℃下用密度计测定),体积为0.35立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.05μm,收集截留液,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物4.0公斤,重楼总皂苷含量13.2%。
实施例3:取50公斤七叶一枝花的干燥根茎,碎成粗粉,分别以500、400、400公斤80%乙醇提取8、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶3g,制成悬浊液,控制悬浊液中乙醇含量低于10%,使最终溶液密度为1.02(25℃下用密度计测定),体积为0.15立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.10μm,收集截留液,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物2.3公斤,重楼总皂苷含量12.9%。
实施例4:取50公斤南重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以500、400、400公斤75%甲醇提取7、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶3.5g,制成悬浊液,控制悬浊液中甲醇含量低于10%,使最终溶液密度为1.05(25℃下用密度计测定),体积为0.15立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.10μm,收集截留液;透过液上大孔树脂柱,以2.5倍柱体积的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再用2倍柱体积的95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液与截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物2.4公斤,重楼总皂苷含量13.5%。
实施例5:取50公斤花叶重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以500、400、400公斤80%丙酮提取7、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶4g,制成悬浊液,控制悬浊液中丙酮含量低于9%,使最终溶液密度为1.03(25℃下用密度计测定),体积为0.28立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.12μm,收集截留液;透过液上大孔树脂柱,以2.5倍柱体积的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再用2倍柱体积的80%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液与截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物2.2公斤,重楼总皂苷含量13.2%。
实施例6:取80公斤黑籽重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以800、500、500公斤75%正丁醇提取7、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶4.5g,制成悬浊液,控制悬浊液中正丁醇含量低于7%,使溶液密度为1.05(25℃下用密度计测定),体积为0.32立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.15μm,收集截留液;透过液上大孔树脂柱,以2倍柱体积的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再用2倍柱体积的85%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液与截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物3.9公斤,重楼总皂苷含量13%。
实施例7:取80公斤短梗重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以800、500、500公斤85%乙醇提取7、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶5g,制成悬浊液,控制悬浊液中乙醇含量低于7%,使溶液密度为1.07(25℃下用密度计测定),体积为0.35立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.2μm,收集截留液;透过液上大孔树脂柱,以3倍柱体积的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再用2.5倍柱体积的85%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液与截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物4公斤,重楼总皂苷含量13.2%。
实施例8:取80公斤毛叶重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以800、500、500公斤乙醇、乙酸乙酯、水混合溶液(乙醇∶乙酸乙酯∶水体积比为5∶3∶2)提取7、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶2.5g,制成悬浊液,控制悬浊液中乙醇含量低于6%,使溶液密度为1.1(25℃下用密度计测定),体积为0.3立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.18μm,收集截留液;透过液上大孔树脂柱,以2倍柱体积的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再用2倍柱体积的80%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液与截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物3.8公斤,重楼总皂苷含量12.8%。
实施例9:取80公斤北重楼的干燥根茎,碎成粗粉,分别以800、500、500公斤甲醇、三氯甲烷、水混合溶液(甲醇∶三氯甲烷∶水体积比为3∶5∶2)提取7、5、3小时,合并提取液,过滤除药渣、泥砂等杂质,即得到重楼皂苷粗提取液,再经减压浓缩处理,回收有机溶媒,再按每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶3g,制成悬浊液,控制悬浊液中甲醇含量低于8%,使溶液密度为1.1(25℃下用密度计测定),体积为0.30立方米。悬浊液用无机陶瓷膜过滤,陶瓷膜材质为二氧化锆(ZrO2)膜,膜孔径为0.2μm,收集截留液;透过液上大孔树脂柱,以3倍柱体积的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再用2.5倍柱体积的85%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液与截留液合并,浓缩,干燥,得重楼皂苷提取物4.1公斤,重楼总皂苷含量12.7%。
Claims (2)
1、一种重楼皂苷提取液的除杂纯化方法,由以下步骤组成:
一、将重楼属植物,碎成粗粉,经溶媒提取后过滤除去残渣及杂质,得到重楼皂苷粗提取液,所述溶媒为水和有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一种或几种的混合物;
其特征在于:
二、将步骤(一)的粗提取液浓缩成密度在25℃时为1.01~1.05的悬浊液;
三、将悬浊液用无机陶瓷膜过滤,无机陶瓷膜材质为二氧化锆膜,膜孔径为0.05~0.2μm,得截留液和透过液,收集截留液,截留液浓缩、干燥,即得经除杂纯化的重楼皂苷提取物;
步骤(二)所述的悬浊液是将重楼皂苷粗提取液进行浓缩,使浓缩后的体积升为所用重楼属植物公斤重量的2~8倍,同时使浓缩液中有机溶剂的体积百分比浓度≤10%;每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶1~5g,即得所需的悬浊液。
2、一种重楼皂苷提取液的除杂纯化方法,由以下步骤组成:
一、将重楼属植物,碎成粗粉,经溶媒提取后过滤除去残渣及杂质,得到重楼皂苷粗提取液,所述溶媒为水和有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一种或几种的混合物;
其特征在于:
二、将步骤(一)的粗提取液浓缩成密度在25℃时为1.01~1.05的悬浊液;
三、将悬浊液用无机陶瓷膜过滤,无机陶瓷膜材质为二氧化锆膜,膜孔径为0.05~0.2μm,得截留液和透过液,收集截留液;
四、将步骤(三)所得的透过液,上D-101型大孔树脂柱吸附,用2~4倍柱体积的蒸馏水洗脱,洗脱液弃去,再用2~4倍柱体积的75%~95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,乙醇洗脱液与步骤(三)得到的截留液合并,浓缩,干燥,得经除杂纯化的重楼皂苷提取物;
步骤(二)所述的悬浊液是将重楼皂苷粗提取液进行浓缩,使浓缩后的体积升为所用重楼属植物公斤重量的2~8倍,同时使浓缩液中有机溶剂的体积百分比浓度≤10%;每升浓缩液加入淀粉酶或果胶酶1~5g,即得所需的悬浊液。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Open date: 20090408 |