CN110141605A - 一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法。制备步骤如下：a）将血水草药用部位粉碎，与碱性物质混合，加入水混匀，静置过夜；b）调节pH，收集沉淀，进行干燥，采用醇提取，浓缩过滤；c）滤液经过冷藏，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取；d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。本方法主要是对血水草的药材的有效部位中的生物碱提取纯化，将生物碱转变为离子对，过滤，产品总生物碱含量达到60%以上，所获得的纳米粒子的最小直径500nm，主体分部为1‑15μm。工艺环保无污染，过程简洁，适用于大生产。总生物碱的纳米粒子吸收率高，生物利用度高，且在饲料添加剂、药品及食品领域将有更广泛的应用。

Description

一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法。
背景技术
天然产物及其衍生物是当今世界临床用药的主要来源之一，而中草药是寻求新的活性组分的宝贵资源。生物碱是中草药中一大类重要的活性成分，具有庞大的数量、复杂的结构和丰富的生理功能。
传统的生物碱提取方法通常采用浸渍、回流、渗漉、煎煮等方法，这些方法本质上都属于溶剂法。随着现代分离技术的飞速发展，一些新技术、新方法也被应用到生物碱的提取工艺中来。如超声辅助提取技术、微波辅助萃取技术、超临界流体萃取技术等，这些现代提取技术的应用，有望解决传统提取过程中存在的能耗大、污染重、杂质多、效率较低等问题，因此这些优势显著的新方法也成为当今分离技术的研究热点。
生物碱的分离与精制也有许多经典的方法，如溶剂萃取法、沉淀法与结晶法等。尽管这些技术较为成熟，但效率不高，成本收益率较低，因此，一些先进的分离纯化技术也就应运而生，发展迅速。近年出现的新技术包括色谱分离技术如制备液相色谱，高速逆流色谱，凝胶柱色谱等、树脂吸附技术大孔树脂吸附，离子交换树脂吸附、分子印迹、膜分离技术等。这些新兴的分离技术克服了传统方法存在的溶剂、能源消耗大且效率不高的问题，有效地改善了生物碱的分离与纯化效果，使生物碱的制备向着高效、节能、规模化的方向发展。
血水草是罂粟科白屈菜族血水草属植物，是我国独属、独种的特有物种，系多年生草本植物，广泛分布于我国浙江、江西、四川、湖南等南方各省区，根及根茎入药。国内对血水草的研究多见于化学成分和药理方面，对其总生物碱提取分离及纯化工艺的报道很少。龙丽娜用溶剂套用法提取，模拟工业生产中组罐的提取工艺提取血水草的总生物碱，产品品质不理想，且效率较低。中国发明专利一种血水草总生物碱的提取工艺（申请号或专利号CN201010182943.2）、一种分离白屈菜、血水草或飞龙掌血总生物碱的方法（申请号或专利号CN CN200710098448.1）等均采用常规的提取方式，对生物碱的提取率不高，且耗时、不易产业化等。
发明内容
要解决的技术问题：本发明的目的是提供一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，采用超临界反向萃取非药用成分的方式，通过改变萃取介质极性，且改变离子对的性质获取血水草中的总生物碱。此方法几乎不产生废水，过程中环保，提取率高。
技术方案：一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，包括以下步骤：
a）将血水草药用部位粉碎，与碱性物质混合，加入水混匀，静置过夜；
b）调节pH，收集沉淀，进行干燥，采用醇提取，浓缩过滤；
c）滤液经过冷藏，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
进一步的，所述的步骤a）中血水草的药用部位为地上生长部位，粉碎至粒径为60~100目。
进一步的，所述的步骤a）中碱性物质为Ca(OH)2、NaHCO3、NaOH、KOH中的一种或几种，添加比例为0.1~2%；所述水的添加比例为30~60%。
进一步的，所述的步骤b）中pH调节至3~4，所述醇为90-95%乙醇溶液，提取温度为60-72℃。
进一步的，所述的步骤c）中冷藏温度为5~8℃，冷藏时间为8-12h；所述的喷入方式为底部向上部喷射，流速为0.01-1L/min。
进一步的，所述的步骤c）中超临界结晶釜的条件为：温度为15~25℃，压力为15~35MPa，介质为CO2或2~10%乙醇-CO2混合流体，流动方向为自上而下，流速为0.5-3L/min。
进一步的，所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-15μm，所制备的总生物碱的含量大于60%。
进一步的，所述制备的血水草总生物碱纳米颗粒可用于饲料添加剂、保健食品和药品。
进一步的，所制备的总生物碱检测方法采用HPLC-DAD，条件为：色谱柱：C18(200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈+水=30+70（V/V）（每100ml水中加0.1ml磷酸）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μl。
有益效果：
1.本发明方法几乎不产生废水，过程中环保，提取率高。
2.本发明方法获得产品总生物碱的含量超过60%，提取率大于60%。
3.本发明方法制备的生物碱纳米颗粒可用于饲料添加剂、保健食品和药品领域，尤其可用于治疗宠物寄生虫等领域。
具体实施方式
实施例1
一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，包括以下步骤：
a）将血水草地上生长部位粉碎至粒径为100目，与0.1wt%Ca(OH)2混合，加入30wt%水混匀，静置过夜；
b）调节pH至3，收集沉淀，进行干燥，采用95%乙醇溶液提取，提取温度为60℃，浓缩过滤；
c）滤液经过5℃冷藏8h，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取，喷入方式为底部向上部喷射，流速为0.01L/min；超临界结晶釜的条件为：温度为15℃，压力为15MPa，介质为CO2，流动方向为自上而下，流速为0.5L/min；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
总生物碱检测方法采用HPLC-DAD，条件为：色谱柱：C18 (200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水=30：70（V/V）（每100ml水中加0.1ml磷酸）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μl。
所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-15μm，所制备的总生物碱的含量为60.5%。
实施例2
一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，包括以下步骤：
a）将血水草地上生长部位粉碎至粒径为60目，与0.5wt%NaHCO3混合，加入40wt%水混匀，静置过夜；
b）调节pH至3，收集沉淀，进行干燥，采用90%乙醇溶液提取，提取温度为63℃，浓缩过滤；
c）滤液经过6℃冷藏9h，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取，喷入方式为底部向上部喷射，流速为0.05L/min；超临界结晶釜的条件为：温度为17℃，压力为20MPa，介质为2%乙醇-CO2混合流体，流动方向为自上而下，流速为1L/min；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
总生物碱检测方法采用HPLC-DAD，条件为：色谱柱：C18 (200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水=30：70（V/V）（每100ml水中加0.1ml磷酸）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μl。
所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-13.5μm，所制备的总生物碱的含量为60.9%。
实施例3
一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，包括以下步骤：
a）将血水草地上生长部位粉碎至粒径为80目，与1wt%NaOH混合，加入45wt%水混匀，静置过夜；
b）调节pH至3.5，收集沉淀，进行干燥，采用95%乙醇溶液提取，提取温度为65℃，浓缩过滤；
c）滤液经过6℃冷藏10h，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取，喷入方式为底部向上部喷射，流速为0.5L/min；超临界结晶釜的条件为：温度为20℃，压力为25MPa，介质为6%乙醇-CO2混合流体，流动方向为自上而下，流速为1.5L/min；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
总生物碱检测方法采用HPLC-DAD，条件为：色谱柱：C18 (200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水=30：70（V/V）（每100ml水中加0.1ml磷酸）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μl。
所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-13.5μm，所制备的总生物碱的含量为61.7%。
实施例4
一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，包括以下步骤：
a）将血水草地上生长部位粉碎至粒径为80目，与1.5wt%KOH混合，加入50wt%水混匀，静置过夜；
b）调节pH至4收集沉淀，进行干燥，采用95%乙醇溶液提取，提取温度为68℃，浓缩过滤；
c）滤液经过7℃冷藏11h，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取，喷入方式为底部向上部喷射，流速为0.8L/min；超临界结晶釜的条件为：温度为22℃，压力为30MPa，介质为8%乙醇-CO2混合流体，流动方向为自上而下，流速为2.5L/min；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
总生物碱检测方法采用HPLC-DAD，条件为：色谱柱：C18 (200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水=30：70（V/V）（每100ml水中加0.1ml磷酸）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μl。
所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-14μm，所制备的总生物碱的含量大于61.5%。
实施例5
一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，包括以下步骤：
a）将血水草地上生长部位粉碎至粒径为100目，与0.5wt%Ca(OH)2、0.5wt%NaHCO3、0.5wt%NaOH、0.5wt%KOH混合，加入60wt%水混匀，静置过夜；
b）调节pH至3~4，收集沉淀，进行干燥，采用95%乙醇溶液提取，提取温度为72℃，浓缩过滤；
c）滤液经过8℃冷藏12h，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取，喷入方式为底部向上部喷射，流速为1L/min；超临界结晶釜的条件为：温度为25℃，压力为35MPa，介质为10%乙醇-CO2混合流体，流动方向为自上而下，流速为3L/min；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
总生物碱检测方法采用HPLC-DAD，条件为：色谱柱：C18 (200mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水=30：70（V/V）（每100ml水中加0.1ml磷酸）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μl。
所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-15μm，所制备的总生物碱的含量为61.5%。

Claims (8)

1.一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a）将血水草药用部位粉碎，与碱性物质混合，加入水混匀，静置过夜；
b）调节pH，收集沉淀，进行干燥，采用醇提取，浓缩过滤；
c）滤液经过冷藏，逆流喷入超临界结晶釜中进行制取；
d）收集底部纳米颗粒，即得血水草总生物碱纳米微粒。
2.根据权利要求1所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的步骤a）中血水草的药用部位为地上生长部位，粉碎至粒径为60~100目。
3.根据权利要求1所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的步骤a）中碱性物质为Ca(OH)2、NaHCO3、NaOH、KOH中的一种或几种，添加比例为0.1~2%；所述水的添加比例为30~60%。
4.根据权利要求1所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的步骤b）中pH调节至3~4，所述醇为90-95%乙醇溶液，提取温度为60-72℃。
5.根据权利要求1所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的步骤c）中冷藏温度为5~8℃，冷藏时间为8-12h；所述的喷入方式为底部向上部喷射，流速为0.01-1L/min。
6.根据权利要求1所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述的步骤c）中超临界结晶釜的条件为：温度为15~25℃，压力为15~35MPa，介质为CO2或2~10%乙醇-CO2混合流体，流动方向为自上而下，流速为0.5-3L/min。
7.根据权利要求1所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所制备的血水草总生物碱纳米微粒大小为最小直径500nm，主体分部为1-15μm，所制备的总生物碱的含量大于60%。
8.根据权利要求7所述的一种血水草总生物碱纳米微粒的制备方法，其特征在于：所述制备的血水草总生物碱纳米颗粒可用于饲料添加剂、保健食品和药品。
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