CN102949469B - 唐松草提取物制备治疗老年痴呆症药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种唐松草提取物及其制备治疗老年痴呆症药物的用途，其中提取物通过将粗壮唐松草进行超声提取和阳离子交换树脂解析步骤获得，其中超声提取的溶剂为乙醇，超声频率为40-50kHz，阳离子换树脂柱的解析用氢氧化钠水溶液，解析液用盐酸解析。本发明提供的粗壮唐松草提取物作为防治老年痴呆症疾病具有优异的效果，防治老年痴呆症效果明显，该提取物的获得的方法相比较于其他常规方法也具有优异的效果。
Description
技术领域
本发明属于药物制备领域，特别是涉及一种唐松草提取物及其制备治疗老年痴呆症药物的用途。
背景技术
阿尔茨海默病即所谓的老年痴呆症。是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状和行为障碍。据中国阿尔茨海默病协会2011年的公布调查结果显示，全球有约3650万人患有痴呆症，每七秒就有一个人患上此病，平均生存期只有5.9年，是威胁老人健康的“四大杀手”之一。
老年痴呆根据其病因主要分为脑变性疾病引起的痴呆——阿尔茨海默病性痴呆(又叫老年性痴呆，Alzheimer’s Disease，简称AD)、脑血管病引起的痴呆(血管性痴呆，Vascular Dentia，简称VaD)、混合性痴呆(Mixed Dementia，简称MixD)三大类。其次还包括路易小体痴呆(Dementia with Lewy Bodies，简称DLB)，额颞叶痴呆(Frontotemporal Dementia，简称FTD)，帕金森病性痴呆(Parkinson’s Disease，简称PD)，克罗伊茨费尔特-雅各布病痴呆(Creutzfeldt-Jakob Di sease，简称CJD)，正常颅压脑积水性痴呆(NormalPressure Hydrocephalus，简称NPH)，韦-科二氏综合征痴呆(Wernicke-Korsakoff Syndrome，简称WKS)，由维生素B12、叶酸缺乏所致的痴呆等。
老年痴呆症多起病于老年期，潜隐起病，病程缓慢且不可逆，临床上以智能损害为主。病理改变主要为皮质弥漫性萎缩，沟回增宽，脑室扩大，神经元大量减少，并可见老年斑，神经原纤维结等病变，胆碱乙酰化酶及乙酰胆碱含 量显著减少。起病在65岁以前者旧称老年病前期痴呆，或早老性痴呆，多有同病家族史，病情发展较快，颞叶及顶叶病变较显著，常有失语和失用。65岁以上发病者称晚发型痴呆，多为散发，病变发展较慢，研究发现，除了发病年龄早晚有区别外，它们在临床症状和脑病理改变方面明显不同。
目前从唐松草属的植物中提取药物的用途很多，例如，专利文献CN101919854A公开了小唐松草醛碱作为制备治疗心律失常药物的应用；专利文献CN102008558A公开了对各种贫血、原发性血小板减少、继发性血小板减少、再生障碍性贫血、白血病等症状治疗效果明显。专利文献CN1285354A公开了一种具有抗肿瘤生理活性的尖叶唐松草阿原碱及其提取方法。专利文献CN102008560A公开了丝叶唐松草提取物及其在制备口腔溃疡药物中的用途。专利文献CN102008559A公开了丝叶唐松草提取物及其在制备失眠药物中的用途。专利文献CN102366611A公开了一种治疗老年痴呆症足浴中药组合物，其包含唐松草，但是仅仅是将唐松草作为其中一种成分。专利文献CN101518270A公开了唐松草的提取物用于农业用途，如作为杀螨剂。
由于唐松草的提取物是混合物，所以其活性与唐松草的提取方法及其相关，为了获得本发明的能够防治老年痴呆症药物，本发明通过大量筛选，发现粗壮唐松草作为提取防治老年痴呆症药物的植物具有优异的效果，通过大量实验，获得了能够获得针对老年痴呆症具有防治效果的提取方法以及在治疗老年痴呆症中的有效剂量。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种治疗老年痴呆症的粗壮唐松草提取物及其用途。
具体的，本发明提供了一种治疗老年痴呆症的粗壮唐松草提取物，该提取物通过将粗壮唐松草进行超声提取和阳离子交换树脂解析步骤获得，其中超声提取的溶剂为乙醇，超声频率为40-50kHz，阳离子换树脂柱的解析用氢氧化钠 水溶液，解析液用盐酸解析。
具体的，本发明提供了一种治疗老年痴呆症的粗壮唐松草提取物，该提取物通过如下步骤的方法获得：
(1)将粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为95-99％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶10-15，浸泡100-150min，超声频率40-50kHz，提取温度50-60℃，提取时间120-180min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在40-50℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
(2)在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量5-10倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过阳离子交换树脂，用4-8％的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=2-4，在50-60℃减压浓缩，获得防治老年痴呆症疾病的药物。
本发明还提供了粗壮唐松草提取物用于制备防治老年痴呆症疾病的药物的用途，其中所述粗壮唐松草提取物通过如下步骤的方法制备得到：
(1)将粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为95-99％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶10-15，浸泡100-150min，超声频率40-50kHz，提取温度50-60℃，提取时间120-180min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在40-50℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
(2)在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量5-10倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过阳离子交换树脂，用4-8％的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=2-4，在50-60℃减压浓缩，获得防治老年痴呆症疾病的药物。
优选的，所述粗壮唐松草提取物通过如下步骤的方法制备得到：
(1)将200克粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为95％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶10，浸泡120min，超声频率50kHz，提取温度50℃，提取时间160min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在45℃下减压 浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
(2)在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量5倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过001×7阳离子交换树脂，用4％的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=3.2，在50℃减压浓缩，获得粗壮唐松草提取物。
优选的，所述粗壮唐松草提取物通过如下步骤的方法制备得到：
(1)将200克粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为99％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶15，浸泡150min，超声频率40kHz，提取温度60℃，提取时间180min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在40℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
(2)在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量10倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过TS-92型号阳离子交换树脂，用8％的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=3.8，在60℃减压浓缩，获得粗壮唐松草提取物。
本发明提供的粗壮唐松草提取物作为防治老年痴呆症疾病具有优异的效果，防治老年痴呆症效果明显，该提取物的获得的方法相比较于其他常规方法也具有优异的效果。
具体实施方式
为了理解本发明，下面以实施例进一步说明本发明，但不限制本发明。
实施例1粗壮唐松草提取物1的制备
(1)将200克粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为95％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶10，浸泡120min，超声频率40kHz，提取温度50℃，提取时间160min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在45℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
(2)在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量5倍的水搅拌成粗提取物 悬浮液，将该悬浮液通过001×7阳离子交换树脂，用4％的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=3.2，在50℃减压浓缩，获得粗壮唐松草提取物1。
实施例2粗壮唐松草提取物2的制备
(1)将200克粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为99％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶15，浸泡150min，超声频率35kHz，提取温度60℃，提取时间180min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在40℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
(2)在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量10倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过TS-92型号阳离子交换树脂，用8％的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=3.8，在60℃减压浓缩，获得粗壮唐松草提取物2。
实验实施例1
为了测试粗壮唐松草提取物是否能够调节Aβ水平，将夹心式酶联免疫吸附测定法(ELISA)用于测定分泌的Aβ(Aβ42和/或Aβ40)水平。在本实施例中，将表达野生型APP695的H4细胞以200,000个细胞/孔接种在6孔平板上并在37℃与5％二氧化碳下孵育过夜。用10mg/l、50mg/l、100mg/l、150mg/l、200mg/l、250mg/l浓度的实施例1和2提取物的1.5ml培养基将细胞处理48小时。将来自处理的细胞上清液收集入埃彭道夫管并进行分析。测试实施例1和实施例2的提取物对H4细胞中Aβ42和Aβ40含量的影响，所述数值表示与标准对照后Aβ42和Aβ40含量变化比率。
表1：实施例1和实施例2的提取物对H4细胞中Aβ42的影响
表2：实施例1和实施例2的提取物对H4细胞中Aβ40的影响
表1和表2表明通过实施例1和实施例2制备的粗壮唐松草提取物能够有效地降低H4细胞中的Aβ42和Aβ40的含量。同时对APP淀粉样蛋白过表达的稳定的细胞系H4用wasted bottle检测实施例1和2提取物，有明显反映。
本发明的实施例1和2的提取物能够实现对老年痴呆症细胞模型的良好效果。
实验实施例2
将正常组和模型组每天灌胃生理盐水0.2ml/10g，药物组灌胃给药实施例1的提取液0.2ml/10g。正常组是正常小鼠，模型组和药物组是获得记忆障碍的小鼠，每组20只，18-22克，按照体重随机分组。对记忆的保护时间取平均值，数值单位为秒。
表3唐松草提取物对记忆障碍小鼠的实验结果
到第14天的时候，药物组的测试成绩与模型组比较差别显著(p<0.01)
结果表明，实施例1的粗壮唐松草提取物对获得记忆障碍小鼠有明显的保护作用。
Claims (3)
1.粗壮唐松草提取物用于制备防治老年痴呆症疾病的药物的用途，其中所述粗壮唐松草提取物通过如下步骤的方法制备得到：
（1）将粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为95-99％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶10-15，浸泡100-150min，超声频率40-50kHz，提取温度50-60℃，提取时间120-180min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在40-50℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
（2）在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量5-10倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过阳离子交换树脂，用4-8%的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=2-4，在50-60℃减压浓缩，获得防治老年痴呆症疾病的药物。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述粗壮唐松草提取物通过如下步骤的方法制备得到：
（1）将200克粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为95％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶10，浸泡120min，超声频率50kHz，提取温度50℃，提取时间160min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在45℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
（2）在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量5倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过001×7阳离子交换树脂，用4%的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=3.2，在50℃减压浓缩，获得粗壮唐松草提取物。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述粗壮唐松草提取物通过如下步骤的方法制备得到：
（1）将200克粉碎的粗壮唐松草叶粉置于超声提取器中，乙醇浓度为99％，粗壮唐松草与溶剂的重量比为1∶15，浸泡150min，超声频率40kHz，提取温度60℃，提取时间180min，超声提取后的提取液进行抽滤，清液在40℃下减压浓缩得粗壮唐松草粗提取物；
（2）在粗壮唐松草粗提取物中加入粗提取物重量10倍的水搅拌成粗提取物悬浮液，将该悬浮液通过TS-92型号阳离子交换树脂，用8%的氢氧化钠水溶液对阳离子交换树脂进行解析获得解析液；用盐酸酸化所述解析液到pH=3.8，在60℃减压浓缩，获得粗壮唐松草提取物。
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