CN101245061B

CN101245061B - N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺类一氧化氮供体型衍生物，制备方法及其用途

Info

Publication number: CN101245061B
Application number: CN2008100001174A
Authority: CN
Inventors: 董伟兵; 周微; 张广明
Original assignee: Tianjin Tasly Group Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Tasly Diyi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2007-02-13
Filing date: 2008-01-03
Publication date: 2012-09-19
Anticipated expiration: 2028-01-03
Also published as: CN101245061A

Abstract

本发明提供了一类N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺衍生物，具体涉及N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺与硝酸酯类NO(一氧化氮)供体通过酯键或酰胺键连接所得到的化合物。此类化合物由N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺与相应的硝酸酯类NO供体通过不同的连接基团偶联，发生取代反应制得。通过双重协同抗肿瘤机制，展现了良好的抑制细胞凋亡或诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

Description

N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺类一氧化氮供体型衍生物,制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺衍生物，具体涉及N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺与硝酸酯类NO供体偶联衍生物。本发明还涉及此类化合物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物方面的用途。

背景技术

蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一类在体内严格控制的具有酪氨酸激酶活性的蛋白质，它们能催化三磷酸腺苷ATP上的γ-磷酸基转移到许多与细胞生命活动有关的蛋白质的酪氨酸残基上，使其发生磷酸化，从而调控细胞生长、分化、凋亡等一系列生理过程。PTKs功能的失调则引起生物体内的一系列疾病。已有的资料表明，超过70％的原癌基因和癌基因产物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它们的异常表达将导致细胞增殖调节的紊乱，进而导致肿瘤的发生。此外，PTKs的异常表达还与肿瘤细胞的侵袭和转移、肿瘤新血管的生成、肿瘤的化疗抗性密切相关。因此，以酪氨酸激酶为靶点进行药物研发成为国际上抗肿瘤药物研究的热点。开发ATP竞争性抑制剂(ATP-competitive inhibitor)就是其中的一个重要的方向。其中嘧啶类化合物是一类ATP竞争性PTK抑制剂，虽然PTK的ATP结合域与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的ATP结合域具有高度的同源性，但是嘧啶类作为PTK抑制剂还是具有很大的选择性。苯胺基类化合物中，3位取代基的衍生物比2位和4位取代基的衍生物具有更强的抑制活性(周意明，孙黎光。酪氨酸蛋白激酶抑制剂的研究进展[J]。解剖科学进展：2000，6(3)：214-217)。其中最成功的如诺华公司以2-苯胺嘧啶为先导化合物开发的用于治疗慢性髓细胞样白血病CML和胃肠道基质瘤GISTs的格列卫(GLeevec)，，它通过竞争性抑制ATP与酪氨酸蛋白激酶Abl-Bcr的结合，特异性的阻止Abl-Bcr自身磷酸化，影响细胞信号转导，抑制肿瘤细胞的增殖。

NO(一氧化氮)是生物体内重要的信使分子和效应分子，参与多种生理和病理过程有关，具有广泛的生理功能。在细胞毒性方面，NO可直接与含有铁的酶和蛋白质作用，从而抑制这些酶所调节的细胞活性，促进细胞凋亡和阻止DNA的修复；在免疫***方面，NO介导巨噬细胞对肿瘤细胞和细胞病原体等发挥细胞毒作用外；NO可作用于线粒体呼吸链，使线粒体呼吸受阻，ATP消耗增大和产生过少，促进肿瘤细胞死亡.NO抑制原癌基因的表达，可能与蛋白激酶C有关；同时NO有胃肠道保护作用，可以减少抗肿瘤药物的胃肠道毒副作用(James F.Kerwin，Jr.Nitric Oxide：A New Paradigm for Second Messengers[J].J.Med.Chem.1995，22(38)：4342-4362.)。然而NO作为气体信号分子，在体内半衰期短，不稳定，可控性差等，所以越来越多的研究集中于利用特异性的载体与NO供体偶联，从而在机体的特定部位释放NO，达到杀死癌细胞的作用。到目前为止，NO的靶向性释放仍是研究的重点。

下列专利中包含与这一发明具有相似结构的苯胺基嘧啶衍生物例子：EP 0564409、WO066613、WO099187、US 0248918。

发明内容

本发明的目的在于提供一类具有双重协同抗肿瘤机制的N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺衍生物，即N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺与硝酸酯类NO供体偶联衍生物。

本发明是与通式(I)相关的化合物：

其中，R₁代表

R₂选自：碳原子数2-10的直链或支链烷基；o，m，p-(CH₂)_m-Ph-(CH₂)_n-，其中m＝0-6，n＝1-4。

进一步优选通式(I)化合物，R₂选自：碳原子数2-10的直链烷基；碳原子数3-6的支链烷基；o，m，p-(CH₂)_m-Ph-(CH₂)_n-，其中m＝0-2，n＝1-3。

化合物编号和结构的具体对应关系如下表：

上述定义中的Ph代表苯基；o，m，p-Ph-CH₂-分别代表邻位、间位、对位取代的苯基；下同。

特别优选通式(I)化合物，R₂选自：碳原子数为2、5、10的直链烷基，碳原子数为3或5的支链烷基，o，m，p-Ph-CH₂-。

最优选通式(I)化合物自下列化合物：

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基乙酯

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基-1-甲基乙酯

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基丁酯

2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-3-硝氧甲基苯酯

4-[(2-硝氧基乙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺

4-[(6-硝氧基己氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺

4-[(2-硝氧基丙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺

4-[[(4-硝氧基甲基)]苯氧基甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺

通式(I)化合物制备的药学上可以接受的盐，所说药学上可接受的盐是与盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸；琥珀酸，马来酸，酒石酸，苯磺酸所形成的盐。药学上可接受的盐可以本领域常规的成盐方法制备。

本发明中可以用包含治疗有效量的通式(I)的抗癌活性成分化合物和药剂学上可接受的载体制成组合物。组合物可以本领域常规的制剂手段制备。

本发明的又一目的是提供通式(I)化合物在治疗细胞凋亡疾病或诱导肿瘤细胞凋亡中的应用。

本发明进一步的目的是提供通式(I)化合物在治疗慢性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、胃肠道基质瘤、***癌等疾病中的应用。

本发明的另一目的在于提供这类化合物的制备方法。

本发明提供如下技术方案：

先导化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)的合成路线如下，参见[US5521184和Zoltán Szakács，Szabolcs Béni，Zoltán Varga，Lászlo

Kéri，Béla Noszál.Acid-Base profiling of Imatinib(Gleevec)and its fragment[J].J.med.chem，2005，48(1)：253-254.]

侧链硝酸酯类NO供体，即硝酸酯取代的醇类，可通过相应的二醇在乙酸、乙酸酐存在下通过硝酸硝化得到，具体参见[George N.Ziakas，Eleni A.Rekka，Antonios M.Gavalas，Phaedra T.Eleftheriou，Karyofillis C.Tsiakitzis and Panos N.Kourounakis.Nitric oxide releasingderivatives of tolfenamic acid with anti-inflammatory activity and safe gastrointestinal profile[J].Bioorgganic&Medicinal Chemistry，2005，13：6485-6492.]

其中n＝2-10

其中n＝3-6

化合物I_1-17的合成：硝酸酯取代的醇类或酚类化合物与卤代乙酸在惰性溶剂中，在DCC(二环己基碳二亚胺)和催化量的DMAP(4-二甲胺基吡啶)存在下发生酯化反应，制得相应的卤代硝酸酯，其中的惰性溶剂优选为二氯甲烷；卤代乙酸优选为溴乙酸。然后在惰性溶剂中，碱性条件下，在季铵盐的存在下，与N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺发生取代反应，其中的惰性溶剂优选为THF(四氢呋喃)；其中的碱优选为TEA(三乙胺)；其中的季铵盐优选为TBAB(四丁基溴化铵)。

化合物I_1-14，R代表碳原子数2-10的直链烷基，碳原子数3-6的支链烷基。

化合物I_18-33的合成：N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺经对卤甲基苯甲酰卤酰化，再与硝酸酯取代的醇类或酚类化合物在相转移催化剂存在下发生醚化反应。其中的相转移催化剂优选为季铵盐，进一步优选为TBAB(四丁基溴化铵)；其中的对卤代甲基苯甲酰卤优选为对氯甲基苯甲酰氯。

化合物I_18-33，R代表碳原子数2-10的直链烷基，碳原子数3-6的支链烷基，或相应的酚类。

具体实施方式

以下通过具体实施例和试验例进一步阐述本发明，不以任何形式构成对本发明的限制。

试验例1抗癌活性试验

试验材料：癌细胞株及培养基：HL-60(promyelocytic leukemia)，K562(promyelocyticleukemia)，PC-3(prostate)，HT-29(colon)，DU145(colon)用RPMI1640培养液(Gibco-BRL)配成悬液，加入10％经加热灭活的胎牛血清(FCS，Gibco)，100IU/ml青霉素100IU/ml链霉素；癌细胞株均购买于美国组织培养中心(ATCC，Rocksville，Maryland，USA).

试剂：MTT(3-[4，5-dimethylthiazol-2-yl]-2，5-diphenyltetrazolium bromide；Sigma)

仪器：96孔平板(CONING)，自动化分光光度平板读数计(Dynatech MR5000)。

药物：按照实施例1～5方法制备的I₁～I₅，Gleevec

实验方法：

向96孔平板的每孔内加入0.1mL含有1000个细胞的由RPMI1640培养液配成的悬浮液，然后于37℃，CO₂(5％)培养箱中培养24小时，加入含有不同受试化合物的培养基，于37℃，CO₂(5％)，培养2天，每孔加入50μl MTT溶液(2mg/ml)，37℃下培养4小时，吸出上清液，每孔加入150μl DMSO，振摇15分钟，平板通过自动化分光光度平板读数计，于540nm波长处测量每个孔的光密度(OD)。以孔中细胞未加受试化合物测得的光密度作为对照品，以下式分别计算每个化合物的细胞存活率，细胞生存能力与药物浓度作曲线，细胞存活率为50％即为IC50值。(其中加药细胞孔OD值是孔中加入细胞、药物时测得的OD值，空白药物孔OD值是孔中加入药物，未加细胞时测得的OD值，对照细胞OD值是孔中加入细胞，未加药物时测得的OD值)。

实验结果：

采用MTT法，研究了8个目标化合物体外对六种人体瘤细胞株的生长抑制作用，其中包括两种直肠癌细胞株(DU-145，HT-29，)，***癌细胞株(PC-3)，髓性细胞白血病细胞株(HL-60，K562)，结果见表1。

表1受试化合物在各癌细胞株中的IC₅₀(μg/ml)

结论：

从抗癌活性试验结果可以看出，受试化合物对六种人体瘤细胞株的生长均具有一定的抑制作用。其中对白血病细胞株的抑制作用明显高于其他几种细胞株，说明该类化合物主要的潜在用途是做为抗白血病药物使用，化合物I₆，I₁₅，I₃₂对髓性细胞白血病细胞株(HL-60，K562)的抑制作用最显著，具有深入研究的价值；几种受试化合物表现出对***癌要强于其他两种直肠癌细胞系的抑制作用，显示可作为抗***癌的药物使用。

实施例1

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基乙酯(I₁)

2-硝氧基乙醇

冰浴、氮气保护下，将乙二醇(2.48g，40mmol)溶于100ml乙酸乙酯中，依次加入浓硝酸(4.36g，45mmol)，冰醋酸12ml，醋酸酐10ml。室温搅拌过夜。10％碳酸氢钠水溶液调pH至中性，分出有机层，饱和食盐水洗，无水碳酸钾干燥，浓缩得黄色油状粗品。柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得1.78g。

2-硝氧乙基溴乙酸酯

2-硝氧基乙醇(1.42g，13.27mmol)溶于40ml无水二氯甲烷中，冰浴下加入溴乙酸(1.83g，13.27mmol)，搅拌溶解，分批加入DCC(2.74g，13.30mmol)和催化量的DMAP。澄清溶液变为白色乳状液，室温搅拌2.5小时。过滤，浓缩。残留物溶于二氯甲烷中，饱和碳酸氢钠洗，无水硫酸钠干燥。柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得浅黄色油状物1.69g，

N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(1.25g，4.51mmol)和三乙胺(690μL，4.96ml)加入到50ml四氢呋喃中搅拌20分钟，加入2-硝氧乙基溴乙酸酯(1.34g，5.88mmol)和催化量的TBAB回流5小时，过滤，饱和碳酸氢钠洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1柱层析得淡黄色固体1.12g，收率：58.64％，mp：101.3-105.6℃。

ESI-MS m/z：426[M+1]⁺，448[M+Na]⁺；

IR(KBr，v(cm^-1))：3407(N-H)，3038(C-H，Ar)，1724(C＝O)，1579(C＝C)，1453(N-H)，1118(C-O-C)，1007(N-H)

¹H-NMR δ(ppm)：9.3(d，1H，J＝1.81，NH)，8.7(m，2H)，8.4(m，2H，)，7.5(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.4(d，1H，J＝5.13)，6.9(d，1H，J＝8.20)，6.8(d，1H，J＝2.07)，6.3(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.9(s，1H)，4.7(dd，2H，J1＝3.24，J2＝5.40)，4.4(dd，2H，J1＝3.15，J2＝5.47)，3.9(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)

实施例2

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯(I₅)

参照实例1制备方法，由1，6-己二醇为起始原料制备N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯，收率：58.64％，mp：123.07-124.8℃。

ESI-MS m/z：481，504[M+Na]⁺；

¹H-NMR δ(ppm)：9.3(d，1H，J＝1.81，NH)，8.7(m，2H)，8.4(m，2H，)，7.5(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.4(d，1H，J＝5.13)，6.9(d，1H，J＝8.20)，6.8(d，1H，J＝2.07)，6.3(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，4.76(dd，2H，J1＝3.24，J2＝5.40)，4.43(m，8H)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)，1.89(m，2H)

实施例3

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯(I9)

参照实例1制备方法，由1，10-癸二醇为起始原料制备，N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯，收率53.43％，mp：145.3-146.7℃。

ESI-MS m/z：524[M+1]⁺，546[M+Na]⁺；

实施例4

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基-1-甲基乙酯(I₁₁)

1-羟基-2-硝氧基丙烷

冰浴、氮气保护下，将1，2-丙二醇(3.04g，40mmol)溶于100ml乙酸乙酯中，依次加入浓硝酸(8.73g，80mmol)，冰醋酸20ml，醋酸酐20ml室温搅拌过夜。10％碳酸氢钠水溶液冲洗接近中性，饱和食盐水洗，无水碳酸钾干燥，浓缩得黄色油状粗品。柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得258g.收率53.31％

溴乙酸-2-硝氧基丙酯

1-羟基-2-硝氧基丙烷(1.21g，10.0mmol)溶于40ml无水二氯甲烷中，冰浴下再加入溴乙酸(1.67g，12.01mmol)，搅拌溶解，分批加入DCC(2.06g，10mmol)和催化量的DMAP。澄清溶液变为白色乳状液，室温搅拌4.5小时。过滤，浓缩。残留物溶于二氯甲烷中，饱和碳酸氢钠冲洗，无水硫酸钠干燥。柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝2∶1)得浅黄色油状物2.12g，收率：88.43％。

N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(1.25g，4.51mmol)和三乙胺(690μL，4.96ml)加入到50ml四氢呋喃中，搅拌20分钟，加入溴乙酸-2-硝氧基丙酯(1.42g，5.88mmol)和催化量的TBAB回流6小时，过滤，饱和碳酸氢钠洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，乙酸乙酯∶石油醚＝4∶1柱层析的淡黄色固体1.02g，收率：51.51％mp：124.6-125.7℃。

ESI-MS m/z：439；

IR(KBr，v(cm^-1))：3385(N-H)，3040(C-H，Ar)，1732(C＝O)，1586(C＝C)，1457(N-H)，1200(C-O-C)，1107(N-H)，

¹H-NMR δ(ppm)：9.25(d，1H，J＝1.81，NH)，8.67(m，2H)8.4(m，2H，)，7.5(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.4(d，1H，J＝5.13)，6.9(d，1H，J＝8.20)，6.8(d，1H，J＝2.07)，6.3(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，5.14(dd，2H，J1＝4.24，J2＝7.40)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)，1.86(m，3H)

实施例5

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基丁酯(I12)

参照实例5，由1，2-丁二醇为起始原料制备得，收率：45.56％，mp：131.2-134.5℃。

ESI-MS m/z：453；

IR(KBr，v(cm^-1))：3415，3389(N-H)，3035(C-H，Ar)，1765(C＝O)，1606(C＝C)，1447(N-H)，1215(C-O-C)，1089(N-H)，

¹H-NMR δ(ppm)：9.25(d，1H，J＝1.81，NH)，8.66(m，2H)8.4(m，2H，)，7.46(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.44(d，1H，J＝5.13)，6.89(d，1H，J＝8.20)，6.82(d，1H，J＝2.07)，6.33(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，5.26(dd，2H，J1＝4.24，J2＝7.40)，4.67(m，2H)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)，1.86(m，3H)

实施例6

2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-3-硝氧甲基苯酯(I₁₆)

2-溴乙酸-3-硝氧甲基苯酯

3-硝氧甲基苯酚(0.70g，4.14mmol)溶于无水二氯甲烷中，搅拌溶解后加入DCC(0.84g，4.08mmol)和催化量的DMAP，冰浴下加入溴乙酸(0.86g，6.18mmol)，室温搅拌3小时，过滤，浓缩后加入50ml乙酸乙酯，饱和碳酸钠水溶液冲洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得油状物0.92g，收率：76.67％。

N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(1.25g，4.51mmol)和吡啶(546μL，6.77ml)加入到50ml四氢呋喃中，搅拌溶解，将2-溴乙酸-3-硝氧甲基苯酯(1.96g，3.46mmol)和催化量的TBAB加入其中，加热回流12小时，过滤，柱层析得1.42g，收率：64.84％，mp：156.7-158.6℃ESI-MS m/z：485；508[M+23]⁺

IR(KBr，v(cm^-1))：3408(N-H)，，3038(C-H，Ar)，1778(C＝O)，1596(C＝C)，1427(N-H)，1169(C-O-C)，1159(N-H)，

¹H-NMR(ppm)：9.23(d，1H，J＝1.81，NH)，8.66(m，2H)8.4(m，2H，)，7.89(m，4H)7.46(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.44(d，1H，J＝5.13)，6.89(d，1H，J＝8.20)，6.82(d，1H，J＝2.07)，6.33(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.87(s，1H)，5.29(dd，2H，J1＝3.24，J2＝8.76)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，2.1(s，3H)

实施例7

4-[(2-硝氧基乙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I₁₈)

4-氯甲基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺

N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(0.83g，3.00mmol)和三乙胺(500μL，3.60ml)加入到50ml四氢呋喃中搅拌30分钟，加入4-氯甲基苯甲酰氯(0.73g，3.86mmol)，回流4小时，过滤，乙醇重结晶得浅黄色固体0.82g，收率：63.56％。

4-氯甲基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(0.86g，2mmol)，催化量的TBAB和2-硝氧基乙醇(0.32g，2.99mmol)加入到甲苯中，60-70℃搅拌1小时。搅拌下1小时内滴加20％NaOH水溶液10ml，此温度下继续搅拌2小时，分出有机层，水层用甲苯萃取，合并有机层，依次用稀盐酸，饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除甲苯，乙酸乙酯重结晶得0.53g，收率：53.0％，mp：145.6-148.3℃。

ESI-MS m/z：501，523[M+23]⁺

IR(KBr，v(cm^-1))：3368(N-H)，，3028(C-H，Ar)，1753(C＝O)，1604(C＝C)，1454(N-H)，1216(C-O-C)，1143(N-H)，

¹H-NMR δ(ppm)：9.23(d，1H，J＝1.81，NH)，8.66(m，2H)8.4(m，2H，)，7.69(m，4H)7.46(dd，1H，J1＝4.76，J2＝7.94)，7.44(d，1H，J＝5.13)，6.89(d，1H，J＝8.20)，6.82(d，1H，J＝2.07)，6.33(dd，1H，J＝210，J＝8.06)，5.98(s，1H)，5.45(dd，2H，J1＝2.24，J2＝7.76)，3.94(d，2H，J1＝6.38)，3.32(m，2H)，2.1(s，3H)

实施例8

4-[(6-硝氧基己氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I₂₂)

参照实施例7，以6-硝氧基己醇为起始原料，得白色固体，收率45.5％。

ESI-MS m/z：556，[M+23]⁺

实施例9

4-[(2-硝氧基丙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I₂₆)

参照实施例7，以2-硝氧基丙醇为起始原料，收率54.5％。

ESI-MS m/z：515[M+1]⁺

实施例10

4-[[(4-硝氧基甲基)]苯氧基甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺(I₃₂)参照实施例7，以3-硝氧基苯酚为起始原料，收率56.6％。

ESI-MS m/z：562，585[M+23]⁺

Claims

1.通式(Ⅰ)化合物及其药学上可接受的盐：

R₁为

R₂选自：碳原子数2-10的直链或支链烷基，o，m，p-(CH₂)_m-Ph-(CH₂)_n-，其中m＝0-6，n＝1-4。

2.权利要求1所述通式(Ⅰ)化合物，R₂选自：碳原子数2-10的直链烷基；碳原子数3-6的支链烷基；o，m，p-(CH₂)_m-Ph-(CH₂)_n-，其中m＝0-2，n＝1-3。

3.权利要求2所述通式(Ⅰ)化合物，R₂选自：碳原子数2、5、10的直链烷基，碳原子数3、5的支链烷基，o，m，p-Ph-CH₂-。

4.权利要求1所述通式(Ⅰ)化合物，其选自：

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基乙酯，

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-6-硝氧基己酯，

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-10-硝氧基癸酯，

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基-1-甲基乙酯，

N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-硝氧基丁酯，

2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-3-硝氧甲基苯酯，

4-[(2-硝氧基乙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺，

4-[(6-硝氧基己氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺，

4-[(2-硝氧基丙氧基)甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺，

4-[[(4-硝氧基甲基)]苯氧基甲基-]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]苯甲酰胺。

5.权利要求1-4任一项所述通式(Ⅰ)化合物的制备方法，包括以下步骤：

1)R₁为

时的通式(Ⅰ)化合物：

(1)硝酸酯取代的醇类化合物与卤代乙酸在二环己基碳二亚胺存在下发生酯化反应，

(2)与N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺发生在季铵盐存在下取代反应；

2)R₁为

时的通式(Ⅰ)化合物：

(1)N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺经对卤代甲基苯甲酰卤酰化，

(2)与硝酸酯取代的醇类化合物在相转移催化剂存在下发生醚化反应。

6.根据权利要求1-4项中任一项的通式(Ⅰ)化合物和加入药剂学上可接受的载体制成的组合物。

7.权利要求1-4项中任一项的通式(Ⅰ)化合物在制备治疗细胞凋亡疾病或诱导肿瘤细胞凋亡药物中的应用。

8.权利要求1-4项中任一项的通式(Ⅰ)化合物在制备治疗慢性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、胃肠道基质瘤、***癌疾病的药物中的应用。