CN100467015C - 一种治疗肾气虚证的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗肾气虚证的药物组合物及其质量控制方法，本发明药物组合物及其颗粒制剂具有调和阴阳，温阳补肾，安神固精，扶正固本的功能，临床用于阳痿，遗精，腰腿酸痛，精神不振，夜尿频多，畏寒怕冷；妇女月经过多，白带清稀诸症。在本发明颗粒剂质量控制方法中，增订蛇床子、补骨脂、何首乌与甘草的专属性薄层鉴别方法和蛇床子的含量测定方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，特别涉及一种治疗肾气虚证的药物组合物及其制备方法。
背景技术
阳萎，遗精，腰腿酸痛，精神不振，夜尿频多，畏寒怕冷，妇女月经过多，白带清稀，上述表现属于“肾气虚证”属于中医“虚损病”范畴。其产生，多因禀赋薄弱，体质不强，因虚致劳，或因病致虚，日久不复，成为虚劳；或因烦劳过度，损及五脏，均可形成虚损，本病为中老年人的多发病，常见病，当前由于人口老龄化趋势的发展，本病发病率逐年攀升，提供新的疗效确切的药物是有必要的。
发明内容
本发明目的在于提供一种药物组合物，本发明的另一个目的在于提供该药物组合物颗粒剂的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的。
本发明药物组合物是由如下重量份的原料药制成的：
蛇床子20-40重量份 川芎20-40重量份 菟丝子50-80重量份
补骨脂20-40重量份 茯苓20-40重量份 红参15-25重量份
小茴香10-20重量份 五味子30-40重量份 金樱子60-120重量份
白术10-20重量份 当归40-60重量份 覆盆子25-40重量份
制何首乌60-90重量份 车前子10-20重量份 熟地黄60-120重量份
枸杞子50-80重量份 山药40-60重量份 淫羊藿60-120重量份
胡芦巴60-120重量份 黄芪40-60重量份 肉苁蓉40-60重量份
炙甘草10-20重量份。
优选如下重量份的原料药：
蛇床子28重量份 川芎28.3重量份 菟丝子66重量份
补骨脂28.5重量份 茯苓30重量份 红参20重量份
小茴香14.4重量份 五味子36重量份 金樱子94.6重量份
白术14.2重量份 当归46.8重量份 覆盆子32.9重量份
制何首乌74.4重量份 车前子16.5重量份 熟地黄94重量份
枸杞子66重量份 山药46.3重量份 淫羊藿94.6重量份
胡芦巴94重量份 黄芪51.4重量份 肉苁蓉47.3重量份
炙甘草14.2重量份。
或：
蛇床子25重量份 川芎35重量份 菟丝子60重量份
补骨脂35重量份 茯苓25重量份 红参23重量份
小茴香12重量份 五味子38重量份 金樱子70重量份
白术27重量份 当归42重量份 覆盆子38重量份
制何首乌65重量份 车前子18重量份 熟地黄70重量份
枸杞子75重量份 山药42重量份 淫羊藿110重量份
胡芦巴70重量份 黄芪55重量份 肉苁蓉42重量份
炙甘草18重量份。
或：
蛇床子35重量份 川芎25重量份 菟丝子75重量份
补骨脂25重量份 茯苓35重量份 红参17重量份
小茴香18重量份 五味子32重量份 金樱子110重量份
白术12重量份 当归55重量份 覆盆子27重量份
制何首乌80重量份 车前子12重量份 熟地黄110重量份
枸杞子55重量份 山药56重量份 淫羊藿70重量份
胡芦巴110重量份 黄芪45重量份 肉苁蓉55重量份
炙甘草12重量份。
本发明药物组合物的制备方法为：
以上二十二味原料药，将蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，照中国药典2000年版一部附录I O流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用60-80％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，滤过，滤液备用；将红参粉碎成粗粉，用10-30％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流1-2次，每次1-2小时，合并回流液，回收乙醇，滤过，滤液备用；取其余覆盆子等十六味，与红参药渣一起，加水煎煮1-2次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.10，放冷，加入乙醇，使含醇量为70％，搅匀，冷却静置，取上清液回收乙醇，合并上述滤液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.33的清膏，加入蔗糖粉，制成颗粒，干燥，分装成袋，即得本发明药物组合物颗粒剂。
本发明颗粒剂的质量控制方法包括如下鉴别和/或含量测定方法中的一种或几种：
鉴别：A、取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以25-35:1的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B、取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录V1 B)试验，吸取鉴别A项下的供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上，以3-5：1的石油醚-醋酸乙酯为展开剂，其中石油醚温度为60～90℃，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点。
C、取何首乌对照药材1g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取鉴别A项下的供试品溶液与对照药材溶液各10μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以10-20:1-3:1甲苯-醋酸乙酯-甲酸放置分层的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
D、取鉴别A项下醋酸乙酯提取后的水溶液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在100～200目、3g、内径10mm的中性氧化铝小柱上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草0.2g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以10-20:1:1:1-3醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
上述鉴别方法A中展开剂苯-醋酸乙酯优选比例30:1；鉴别方法B中展开剂石油醚-醋酸乙酯优选比例4：1；鉴别方法C中展开剂甲苯-醋酸乙酯-甲酸优选比例15:2:1；鉴别方法D中展开剂醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸优选比例15:1:1:2；
含量测定：照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与***适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以60-70:30-40乙腈-水为流动相；检测波长为322nm，理论板数按蛇床子素峰计算不低于3000；
精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1ml含4ug的溶液，即得对照品溶液；
取本品装量差异项下内容物，研细，取2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流8小时放冷，移至蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每袋含蛇床子按蛇床子素(C15H16O3)计，不得少于0.10mg。
上述含量测定方法中流动相乙腈-水的优选比例为65:35。
本发明药物组合物及其颗粒制剂具有调和阴阳，温阳补肾，安神固精，扶正固本的功能，临床用于阳萎，遗精，腰腿酸痛，精神不振，夜尿频多，畏寒怕冷；妇女月经过多，白带清稀诸症。
本发明颗粒剂质量控制方法增订了蛇床子、补骨脂、何首乌与甘草的专属性薄层鉴别方法和蛇床子的含量测定方法，更好地控制了产品质量，经试验研究本发明所提供的质量控制方法稳定性和重现性好，质量稳定。蛇床子具温肾壮阳的功效，为方中的主药。采用高效液相色谱法，测定蛇床子所含蛇床子素的含量，作为本品的含量测定方法。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈-水(65:35)为流动相：检测波长为322nm；平均回收率为95.17％；平均偏差为1.10％。
实验例1 本发明颗粒治疗虚损病(肾气虚证)30例总结报告
根据本发明药物原料组成、功效与主治，选择虚损病(肾气虚证)为观察证候，对其进行了临床试验观察，以对该药临床疗效与安全性进行再评价。现将试验结果总结报告如下。
临床试验病例来自于门诊和部分住院患者。共观察虚损病肾气虚证患者30例，全部符合病例选择标准。
一、临床疗效分析
1、中医证候疗效：临床治愈9例(占30％)，显效11例(占36.7％)，有效7例(占23.3％)，无效3例(占10％)，总有效率90％。
2、中医症状疗效，见表1、表2
表1 治疗前后中医主症疗效比较
经Ridit检验，治疗前后中医主症改善比较，有显著统计学差异P<0.05。
表2 治疗前后中医次症疗效比较
经Ridit检验，治疗前后中医次症改善比较，有显著统计学差异P<0.05。
3、舌、脉象改善，见表3
表3 舌、脉象改善比较
经X2检验，治疗后舌、脉象改善比较，无显著统计学差异P>0.05。
4、病情与疗效，见表4
表4 病情与疗效相关分析
经Ridit检验，试验组不同病情疗效比较，无显著统计学差异P>0.05。
5、病程与疗效，见表5
表5 两级病程与疗效相关分析
经Ridit检验，试验组不同病程疗效比较，无显著统计学差异P>0.05。
6、年龄与疗效，见表6
表6 年龄与疗效相关分析
经Ridit检验，不同年龄段疗效比较，无显著统计学差异P>0.05。
7、性别与疗效，见表7
表7 性别与疗效相关分析
| 性别 | 例数 | 临床治愈 | 显效 | 有效 | 无效 | 总有效率％ |
| 男 | 19 | 6 | 7 | 5 | 1 | 94.74 |
| 女 | 11 | 3 | 4 | 2 | 2 | 81.82 |
经Ridit检验，不同性别疗效比较，无显著统计学差异P>0.05。
二、安全性观察
1、安全性检查结果，见表8
表8 安全性检查结果
2、不良反应
此次临床观察未发现全身皮肤粘膜、胃肠道及其它不良反应。
中止临床情况：此次临床观察，无中止试验病例。
剔除试验病例情况：此次临床观察，无剔除试验病例。
三、结论
经过对30例虚损病肾气虚证患者的临床试验，结果显示：试验过程中未发现试验药物所致的不良反应，试验前后血、尿、便常规化验，肝、肾功能及心电图检查，未发现毒副作用。
对虚损病肾气虚证的疗效：本发明颗粒愈显率66.7％，有效率23.3％，总有效率90.00％。结果提示本发明颗粒临床使用安全，疗效可靠。
相关性分析表明：试验组疗效与年龄、性别、病情、病程无相关性。
结论认为：本发明颗粒治疗虚损病肾气虚证疗效可靠，临床使用安全。
实验例2 本发明颗粒剂蛇床子的薄层色谱鉴别
仪器与试药：蛇床子素对照品(0822-200003中国生物制品检定所提供)；薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)；醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺蛇床子的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺蛇床子的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(手铺板，厚0.3mm)上，以苯-醋酸乙酯(30:1)为展开剂，室温展开，展距8cm，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照色谱在相应位置上无干扰。
实验例3 本发明颗粒剂补骨脂的薄层色谱鉴别
仪器与试药：补骨脂素对照品(738-8802中国生物制品检定所提供)、异补骨脂素对照品(110739-200309中国生物制品检定所提供)；薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)：醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺补骨脂的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺补骨脂的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(手铺板，厚0.3mm)上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(4:1)为展开剂，室温展开，展距8cm，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点。阴性对照色谱在异补骨脂素对照品(上方斑点)相应位置上无干扰，在补骨脂素对照品(下方斑点)相应位置上显黄色荧光斑点。
参照《中国药典》2000年版一部收载的“补骨脂”薄层鉴别项下，改用正已烷-醋酸乙酯(4:1)为展开剂，薄层图谱显示斑点分离度未有改善。
实验例4 本发明颗粒剂何首乌的薄层色谱鉴别
仪器与试药：何首乌对照药材(934-200106中国生物制品检定所提供)，薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)：醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照药材溶液的制备：取何首乌对照药材1g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺何首乌的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺何首乌的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板(手铺板，厚0.3mm)上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，室温展开，展距8cm，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。阴性对照色谱在相应位置上无干扰，。
实验例5 本发明颗粒剂甘草的薄层色谱鉴别
仪器与试药：101-1-BS电热恒温鼓风干燥箱：甘草对照药材(121303-200301中国生物制品检定所提供)；层析用中性氧化铝(上海五四化学试剂有限公司)；薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)：醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取蛇床子鉴别项下醋酸乙酯提取后的水溶液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在中性氧化铝小柱(100～200目，3g，内径10mm)上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照药材溶液的制备：取甘草对照药材0.2g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇同供试品溶液的制备方法，制成对照药材溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺甘草的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺甘草的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照色谱在主斑点相应位置上无干扰。
实验例6 本发明颗粒剂淫羊藿的薄层鉴别研究
仪器与试药：淫羊藿苷对照品(110737-200312中国生物制品检定所提供)：薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)：醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺淫羊藿的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺淫羊藿的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(手铺板，厚0.3mm)上使成条状，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)为展开剂，室温展开，展距10cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，105℃加热数分钟后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，但斑点分离不清晰。经参照《中国药典》中药薄层色谱彩色图集收载淫羊藿的鉴别方法，改用含0.1M磷酸氢二钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板、醋酸丁酯-甲酸-水(1.3:1:1)为展开剂，斑点分离仍不理想，暂不作为本品淫羊藿的薄层鉴别方法。
实验例7 本发明颗粒剂枸杞子的薄层鉴别研究
仪器与试药：枸杞子对照药材(投料用：为茄科植物宁夏枸杞LyciumbarbarumL.的干燥成熟果实，按中国药典2000年版一部检验，结果符合规定。)，薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)：醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液
2、对照药材溶液的制备：取枸杞子对照药材0.5g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺拘杞子的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺枸杞子的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板(手铺板，厚0.3mm)上，以醋酸乙酯-氯仿-甲酸(3:2:0.2)为展开剂，室温展开，展距8cm，取出，晾干，置紫灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点，阴性对照色谱在主斑点相应的们置上有干扰，暂不作为本品枸杞子的薄层鉴别方法
实验例8 本发明颗粒剂黄芪的薄层鉴别研究
仪器与试药：101-1-BS电热恒温鼓风干燥箱：黄芪甲苷对照品(0781-200210中国生物制品检定所提供)：层析用中性氧化铝(上海五四化学试剂有限公司)：薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工厂有限公司制造，批号：031215)：正丁醇等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解。加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在中性氧化铝小柱(100～200目，3g，，内径10mm)上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺黄芪的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺黄芪的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl、对照晶溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:6:2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，室温展开，展距12cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照色谱在相应位置上有干扰，暂不作为本品黄芪的薄层鉴别方法。
实验例9本发明颗粒剂人参的薄层鉴别研究
仪器与试药:101-1-BS电热恒温鼓风干燥箱；人参皂苷Rb1对照品(0704-200313中国生物制品检定所提供)；人参皂苷Re对照品(0754-200313中国生物制品检定所提供)；人参皂苷Rg1对照品(110703-200323中国生物制品检定所提供)：层析用中性氧化铝(上海五四化学试剂有限公司)：薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)：正丁醇等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在中性氧化铝小柱(100～200目，3g，内径10mm)上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照品溶液的制备：取人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。
3、阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法制成缺人参的阴性样品，取20g，按供试品的制备方法，制成缺人参的阴性对照溶液。
4、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯。甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照色谱在相应位置上有干扰，暂不作为本品人参的薄层鉴别方法。
实验例10 本发明颗粒剂当归、川芎的薄层鉴别研究
仪器与试药：当归对照药材(0927-9806中国生物制品检定所提供)；川药对照药材(0918-9603，中国生物制品检定所提供)；薄层层析硅胶G(化学纯，青岛海洋化工有限公司制造，批号：031215)；醋酸乙酯等：均为分析纯。
1、供试品溶液的制备：取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加***提取2次，每次30ml，合并***液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2、对照药材溶液的制备：取当归与川芎对照药材各0.5g，各加***30ml浸渍1小时，时加振摇，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
3、薄层层析：照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅股G薄层板(手铺板，厚0.3mm)上，以正已烷-醋酸乙酯(9:1)为展开剂，室温展开，展距8cm，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与当归对照药材与川芎对照药材色谱同一位置上，显相同蓝白色的荧光斑点。由于为非专属性，不作为本品当归、川芎的薄层鉴别方法。
实验例11 本发明颗粒剂蛇床子含量测定的研究
本品处方由22味中药组成，其中蛇床子为主药，蛇床子素是其主要有效成分，故选作含量测定指标。参照《中国药典》2005年版一部“蛇床子”项下收载的含量测定方法，采用HPLC法测定其含量，试验结果如下：
1、仪器与试药
SP8810高效液相色谱仪：Waters510高效液相色谱仪：Spectra 100紫外检测器：SP4270积分仪；SEPU3000P工作站：日立3210紫外可见分光光度计；KQ—100型超声波清洗器。蛇床子素对照品(0822—9801供含量测定用中国药品生物制品检定所)。乙腈：色谱纯(天津市四友生物医学技术有限公司)：水为超纯水：其他试剂：均为分析纯；
2、高效液相色谱条件
Hypersil ODS2(4.6×200mm，5μm)不锈钢柱：流动相：乙腈—水(65:35)：流速：1.0ml、1.2ml/min：检测波长：322nm：柱温：室温。
3、标准曲线
精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1ml含蛇床子素1.9539、3.8719、7.7438、15.4875、30.975μg的溶液。分别吸取10μl，注入高效液相色谱仪，按含量测定方法测定峰面积。结果见表9。
表9
以对照品浓度W作为横座标，测得的峰面积A作为纵座标，进行线性回归，得线性方程W＝4.69018×10-8+2.26068×10-8A：r＝1.00000：线性范围1.9539—30.975μg。
4、供试品溶液的制备
《中国药典》2005年版一部“蛇床子”含量测定项下的提取方法为“精密加入无水乙醇25ml，放置2小时，超声0.5小时”，经试验，按此方法提取肾宝颗粒，含量偏低。故重新制定本品含量测定方法中供试品溶液的制备方法。
(1)提取方法的选择：为考察提取方法，取同一供试品6份各1g，精密称定：①、以无水乙醇作为提取溶剂，超声处理提取0.5小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。②、以乙醇作为提取溶剂，超声处理提取0.5小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。③、以乙醇作为提取溶剂，加热回流提取4小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。④、以无水乙醇作为提取溶剂，加热回流提取4小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。⑤、以乙醇作为提取溶剂，置索氏提取器中，加热回流提取4小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。⑥、以无水乙醇作为提取溶剂，置索氏提取器中，加热回流提取4小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。按拟定的含量测定条件测定蛇床子素的含量，结果见表10。
表10
由上述结果可知，6种提取方法的里面，以“乙醇为溶媒，置索氏提取器中，加热回流4小时”较佳。
(2)提取时间的选择：取同一供试品4份各2g，精密称定：①、以乙醇作为提取溶剂，置索氏提取器中，加热回流提取4小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。②、以乙醇作为提取溶剂，置索氏提取器中，加热回流提取6小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。③、以乙醇作为提取溶剂，置索氏提取器中，加热回流提取8小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解并定容至5ml。④、以乙醇作为提取溶剂，置索氏提取器中，加热回流提取10小时，移至蒸发皿，蒸干，加甲醇溶解开定容至5ml。按拟定的含量测定条件测定床子素的含量，结果见表11。
表11
| 4小时 | 6小时 | 8小时 | 10小时 |
| 9.36ug/g | 14.17ug/g | 15.33ug/g | 14.8ug/g |
由上述结果可知，加热回流提取8小时，已经将蛇床子素基本提取完全，故采用的提取时间为8小时。结合回收试验结果，制定出技术方案所述的供试品溶液的制备方法。
5、对照品溶液的制备
精密称取蛇床子素对照品适量，甲醇制成每1ml中含4μg的溶液，即得。
6、测定条件
①测定波长的选择：取蛇床子素对照品溶液，在230～430nm波长范周内扫描，结果在322nm波长处有最大吸收。
②流动相的的选择：经试验研究选择确定流动相为乙腈—水(65:35)。
如技术方案所述，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按含量测定方法测定。
7、空白试验
取按处方比例及制法制备的缺蛇床子阴性样品，按供试品溶液的制备及测定方法进行处理和测定。结果未见空白试验有干扰。
8、精密度试验
精密吸取蛇床子素对照品溶液(3.8719μg/ml)10μl，按含量测定方法重复进样5次，测定吸收峰面积。结果见表12。
表12 精密度试验
9、重复性试验
取同一供试品，精密称取5份，按含量测定方法测定。结果见表13。
表13 重复性试验
10、稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，分别在开机2小时后的0、1、2、3、4及24小时，注入高效液相色谱仪，按含量测定方法测定。结果见表14。
表14 稳定性试验
11、加样回收试验
取供试品(批号：20040403；含蛇床子素14.70ug/g)均匀，取5份各2g，精密称定，精密加入蛇床子对照品溶液(55.11ug/ml)1ml，水浴蒸干，按技术方案拟定的含量测定方法进行测定，结果见表15。
表15 加样回收试验
12、样品含量测定
取本品3批，按含量测定项下方法进行测定，用外标法计算样品中蛇床子素的含量。结果见表16。
表16 样品含量测定
根据上述试验结果，按平均值的75％计算，确定本品每袋含蛇床子按蛇床子素(C15H16O3)计，不得少于0.10mg。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1：本发明颗粒剂
蛇床子28g 川芎28.3g 菟丝子66g 补骨脂28.5g
茯苓30g 红参20g 小茴香14.4g 五味子36g
金樱子94.6g 白术14.2g 当归46.8g 覆盆子32.9g
制何首乌74.4g 车前子16.5g 熟地黄94g 枸杞子66g
山药46.3g 淫羊藿94.6g 葫芦巴94g 黄芪51.4g
肉苁蓉47.3g 炙甘草14.2g
以上二十二味，将蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小回香粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸高剂项下的渗漉法(中国药典2000年版一部附录I O)，用70％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，滤过，滤液备用；将红参粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流二次，每次2小时，合并回流液，回收乙醇，滤过，滤液备用：取其余覆盆子等十六味，与红参药渣一起，加水煎煮二次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.10，放冷，加入乙醇，使含醇量为70％，搅匀，冷却静置48小时，取上清液回收乙醇，合并上述滤液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.33的清膏，加入蔗糖粉，制成颗粒，干燥，分装成100袋，即得。
实施例2：本发明颗粒剂的鉴别方法
A、取本发明颗粒剂20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(30:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B、取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录V1B)试验，吸取[鉴别]A项下的供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点。
C、取何首乌对照药材1g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别]A项下的供试品溶液与对照药材溶液各10μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15:2:1)放置分层的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
D、取[鉴别]A项下醋酸乙酯提取后的水溶液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在中性氧化铝小柱(100～200目，3g，内径10mm)上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草0.2g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例3：本发明颗粒剂的含量测定方法
照高效液相色谱法(附录VI D)测定
色谱条件与***适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈-水(65:35)为流动相；检测波长为322nm，理论板数按蛇床子素峰计算不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1ml含4ug的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明颗粒剂装量差异项下内容物，研细，取2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流8小时放冷，移至蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含蛇床子按蛇床子素(C15H16O3)计，不得少于0.10mg。
实施例4：本发明颗粒剂的质量控制方法
鉴别A、取本发明颗粒剂20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(30:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
B、取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录V1B)试验，吸取[鉴别]A项下的供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点。
C、取何首乌对照药材1g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取[鉴别]A项下的供试品溶液与对照药材溶液各10μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15:2:1)放置分层的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
D、取[鉴别]A项下醋酸乙酯提取后的水溶液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在中性氧化铝小柱(100～200目，3g，内径10mm)上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草0.2g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(含量测定)照高效液相色谱法(附录VID)测定
色谱条件与***适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈-水(65:35)为流动相；检测波长为322nm，理论板数按蛇床子素峰计算不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1ml含4ug的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品装量差异项下内容物，研细，取2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流8小时放冷，移至蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含蛇床子按蛇床子素(C15H16O3)计，不得少于0.10mg。
Claims (2)
1、一种治疗肾气虚证的药物组合物颗粒剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
鉴别：
A、取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以25-35:1的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B、取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取鉴别A项下的供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上，以3-5：1的石油醚-醋酸乙酯为展开剂，其中石油醚温度为60～90℃，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点；
C、取何首乌对照药材1g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取鉴别A项下的供试品溶液与对照药材溶液各10μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以10-20:1-3:1甲苯-醋酸乙酯-甲酸放置分层的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；
D、取鉴别A项下醋酸乙酯提取后的水溶液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在100～200目、3g、内径10mm的中性氧化铝小柱上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草0.2g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以10-20:1:1:1-3醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：
照高效液相色谱法测定；色谱条件与***适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以65:35乙腈-水为流动相；检测波长为322nm，理论板数按蛇床子素峰计算不低于3000；精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1ml含4ug的溶液，即得对照品溶液；取本品装量差异项下内容物，研细，取2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流8小时放冷，移至蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含蛇床子按蛇床子素计，不得少于0.10mg；
所述治疗肾气虚证的药物组合物颗粒剂的方法为：
选取原料药：
蛇床子20-40重量份 川芎20-40重量份 菟丝子50-80重量份
补骨脂20-40重量份 茯苓20-40重量份 红 参15-25重量份
小茴香10-20重量份 五味子30-40重量份 金樱子60-120重量份
白 术10-20重量份 当归40-60重量份 覆盆子25-40重量份
制何首乌60-90重量份 车前子10-20重量份 熟地黄60-120重量份
枸杞子50-80重量份 山药40-60重量份 淫羊藿60-120重量份
胡芦巴60-120重量份 黄芪40-60重量份 肉苁蓉40-60重量份
炙甘草10-20重量份；
以上二十二味，将蛇床子、淫羊藿、当归、川芎、小茴香粉碎成粗粉，照中国药典2000年版一部附录IO流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用60-80％乙醇作溶剂，浸渍48小时后，缓缓渗漉，收集渗漉液，回收乙醇，滤过，滤液备用；将红参粉碎成粗粉，用10-30％乙醇作溶剂，浸渍8小时后，回流1-2次，每次1-2小时，合并回流液，回收乙醇，滤过，滤液备用；取其余覆盆子等十六味，与红参药渣一起，加水煎煮1-2次，每次1-2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度约1.10，放冷，加入乙醇，使含醇量为70％，搅匀，冷却静置，取上清液回收乙醇，合并上述滤液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.33的清膏，加入蔗糖粉，制成颗粒，干燥，分装成袋，即得本发明药物组合物颗粒剂。
2、如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
鉴别：
A、取本品20g，加水30ml加热使溶解，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以30:1的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
B、取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加醋酸乙酯制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取鉴别A项下的供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上，以4：1的石油醚-醋酸乙酯为展开剂，其中石油醚温度为60～90℃，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的两个蓝白色荧光斑点；
C、取何首乌对照药材1g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液加醋酸乙酯提取2次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取鉴别A项下的供试品溶液与对照药材溶液各10μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以15:2:1甲苯-醋酸乙酯-甲酸放置分层的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的橙色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；
D、取鉴别A项下醋酸乙酯提取后的水溶液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水20ml洗涤，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加中性氧化铝1g，拌匀，水浴蒸干，装在100～200目、3g、内径10mm的中性氧化铝小柱上，以40％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草0.2g，加水30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一以含1％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以15:1:1:2醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：照高效液相色谱法测定
色谱条件与***适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以65:35乙腈-水为流动相；检测波长为322nm，理论板数按蛇床子素峰计算不低于3000；精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1ml含4ug的溶液，即得对照品溶液；取本品装量差异项下内容物，研细，取2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇适量，加热回流8小时放冷，移至蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇使溶解并移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含蛇床子按蛇床子素计，不得少于0.10mg。
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