BR112021008985A2

BR112021008985A2 - Agentes miméticos de interleucina divididos e seus usos

Info

Publication number: BR112021008985A2
Application number: BR112021008985-3A
Authority: BR
Inventors: Alfredo Quijano Rubio; Daniel Adriano Silva Manzano; David Baker; Umut ULGE; Marc Joseph LAJOIE
Original assignee: University Of Washington
Priority date: 2018-11-20
Filing date: 2019-11-19
Publication date: 2021-10-26
Also published as: MX2021005593A; SG11202103045SA; EA202190593A1; IL283217A; US20220017588A1; KR20210094531A; WO2020106708A1; CA3119472A1; EP3883956A1; JP2022511390A; AU2019384523A1; CN112912388A

Abstract

agentes miméticos de interleucina divididos e seus usos. trata-se de agonistas de receptor condicionalmente ativos que, quando ativados, se ligam ao heterodímero ßyc do receptor de il-2 (il-2rßyc), heterodímero ayc do receptor de il-4 (il-4rayc) ou subunidade a do receptor de il-13 (il-13ra), assim como dos componentes dos agonistas do receptor condicionalmente ativos e métodos para usar os agonistas do receptor condicionalmente ativos.

Description

AGENTES MIM TICOS DE INTERLEUCINA DIVIDIDOS E SEUS USOS REFERÊNCIA CRUZADA

[0001] Este pedido reivindica prioridade para o Pedido Provisório de Patente nº de série U.S. 62/770152, depositado em 20 de novembro de 2018, incorporado neste documento a título de referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES

[0002] O potencial considerável de interleucinas de citocinas imunes centrais, como IL-2 e IL-4, para o tratamento do câncer desencadeou vários esforços para melhorar suas propriedades terapêuticas por mutação e/ou modificação química. No entanto, como essas abordagens estão intimamente ligadas à IL-2 ou IL-4 nativa, elas não podem eliminar propriedades indesejáveis, como baixa estabilidade e ligação à subunidade do receptor de IL-2 (IL-2R ), ao heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c) ou à subunidade do receptor de IL-13 (IL-13R ).

SUMÁRIO

[0003] Em um aspecto, a divulgação fornece agonistas de receptor condicionalmente ativos de ocorrência não natural, compreendendo um primeiro componente polipeptídico e um segundo componente polipeptídico, em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não estão presentes em uma proteína de fusão, em que, no total, o primeiro polipeptídeo componente e o segundo componente polipeptídico compreendem os domínios X1, X2, X3 e X4, em que:

[0004] (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4);

[0005] (b) X2 é qualquer domínio de peptídeo helicoidal com pelo menos 8 aminoácidos de comprimento;

[0006] (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELI(LEEIARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e

[0007] (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6).

[0008] em que:

[0009] (i) os resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes;

[0010] (ii) o primeiro componente polipeptídico compreende pelo menos um de X1, X2, X3 e X4, mas não compreende cada um de X1, X2, X3 e X4; e

[0011] (iii) o segundo componente polipeptídico compreende cada um de X1, X2, X3 e X4 que não está presente no primeiro componente polipeptídico;

[0012] em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não são agonistas do receptor ativo individualmente, e em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista ativo do heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL- 13 alfa ou heterodímero de IL-4Ralfa/IL13Ralfa. Numerosas modalidades do primeiro e do segundo polipeptídeos são fornecidas aqui. Em modalidades exemplificativas,

[0013] (i) o primeiro componente polipeptídico inclui um de X1, X2, X3 e X4, e o segundo componente polipeptídico inclui os três de

X1, X2, X3 e X4 que não estão presentes no primeiro componente polipeptídico; ou

[0014] (ii) o primeiro componente polipeptídico inclui dois de X1, X2, X3 e X4, e o segundo componente polipeptídico inclui os dois de X1, X2, X3 e X4 que não estão presentes no primeiro componente polipeptídico. Em outras modalidades exemplificativas,

[0015] (i) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e o segundo polipeptídeo compreende X2, X3 e X4;

[0016] (ii) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X3 e X4;

[0017] (iii) o primeiro polipeptídeo compreende X3 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X2 e X4;

[0018] (iv) o primeiro polipeptídeo compreende X4 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X2 e X3;

[0019] (v) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X2, e o segundo polipeptídeo compreende X3 e X4;

[0020] (vi) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X3, e o segundo polipeptídeo compreende X2 e X4;

[0021] (vii) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X2 e X3;

[0022] (viii) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e X3, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X4;

[0023] (ix) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X3;

[0024] (x) o primeiro polipeptídeo compreende X3 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X2;

[0025] (xi) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X2 e X3 e o segundo polipeptídeo compreende X4;

[0026] (xii) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X2 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X3;

[0027] (xiii) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X3 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X2; ou

[0028] (xiv) o primeiro polipeptídeo compreende X2, X3 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X1.

[0029] Em outras modalidades exemplificativas, o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico podem estar associados de forma não covalente e/ou o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico podem ser indiretamente ligados um ao outro através de um receptor. Em outra modalidade exemplificativa, o primeiro componente polipeptídico compreende ainda um primeiro domínio de direcionamento e/ou o segundo componente polipeptídico compreende ainda um segundo domínio de direcionamento; em algumas modalidades, o primeiro domínio de direcionamento, quando presente, é uma fusão de tradução com o primeiro polipeptídeo, e em que o segundo domínio de direcionamento, quando presente, é uma fusão de tradução com o segundo polipeptídeo. Em algumas modalidades, os domínios de direcionamento podem se ligar a uma proteína da superfície celular.

[0030] Em outro aspecto, a divulgação fornece polipeptídeos compreendendo 1, 2 ou 3, mas não todos os 4 domínios X1, X2, X3 e X4, em que:

[0031] (a) X1, quando presente, é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI); (SEQ ID NO: 4);

[0032] (b) X2, quando presente, é qualquer domínio de peptídeo helicoidal;

[0033] (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%

ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e

[0034] (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6);

[0035] resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes. Numerosas modalidades dos polipeptídeos são fornecidas. Em algumas modalidades exemplificativas, o polipeptídeo compreende:

[0036] (i) um polipeptídeo compreendendo X1 e excluindo X2, X3 e X4;

[0037] (ii) um polipeptídeo compreendendo X2 e excluindo X1, X3 e X4;

[0038] (iii) um polipeptídeo compreendendo X3 e excluindo X1, X2 e X4;

[0039] (iv) um polipeptídeo compreendendo X4 e excluindo X1, X2 e X3;

[0040] (v) um polipeptídeo compreendendo X1 e X2, e excluindo X3 e X4;

[0041] (vi) um polipeptídeo compreendendo X1 e X3, e excluindo X2 e X4;

[0042] (vii) um polipeptídeo compreendendo X1 e X4, e excluindo X2 e X3;

[0043] (viii) um polipeptídeo compreendendo X2 e X3, e excluindo X1 e X4;

[0044] (ix) um polipeptídeo compreendendo X2 e X4, e excluindo X1 e X3;

[0045] (x) um polipeptídeo compreendendo X3 e X4,

e excluindo X1 e X2;

[0046] (xi) um polipeptídeo compreendendo X1, X2 e X3 e excluindo X4;

[0047] (xii) um polipeptídeo compreendendo X1, X2 e X4 e excluindo X3;

[0048] (xiii) um polipeptídeo compreendendo X1, X3 e X4 e excluindo X2; e

[0049] (xiv) um polipeptídeo compreendendo X2, X3 e X4 e excluindo X1.

[0050] Em outra modalidade exemplificativa, o polipeptídeo compreende ainda um domínio de direcionamento incluindo, mas sem limitação ao domínio de direcionamento, sendo uma fusão de tradução com o polipeptídeo. Em algumas modalidades, os domínios de direcionamento podem se ligar a uma proteína da superfície celular.

[0051] Em outros aspectos, a divulgação fornece ácidos nucleicos que codificam o polipeptídeo, primeiro polipeptídeo ou segundo polipeptídeo de qualquer modalidade divulgada; vetores de expressão compreendendo os ácidos nucleicos operacionalmente ligados a um promotor; células hospedeiras compreendendo os ácidos nucleicos e/ou vetores de expressão divulgados neste documento e composição farmacêutica, compreendendo o agonista de receptor condicionalmente ativo, polipeptídeo, ácido nucleico, vetor de expressão ou célula hospedeira de qualquer modalidade divulgada e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0052] A divulgação também fornece métodos para o tratamento de câncer, compreendendo a administração a um sujeito em necessidade do agonista de receptor condicionalmente ativo de qualquer modalidade aqui divulgada, sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem nas células do tumor para tratar o câncer.

[0053] Em outro aspecto, a divulgação fornece o agonista de receptor condicionalmente ativo, polipeptídeo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira ou composição farmacêutica de qualquer modalidade divulgada para uso como um medicamento para tratar câncer e/ou para modular uma resposta imune em um sujeito.

[0054] Em um aspecto adicional, a divulgação fornece métodos para agonizar o receptor de IL-2 ou o receptor de IL-4, compreendendo a administração a um sujeito do agonista de receptor condicionalmente ativo de qualquer modalidade aqui divulgada, sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem com o receptor.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0055] As seguintes figuras estão de acordo com modalidades exemplificativas:

[0056] Figuras 1A a 1C. Projeto computacional de agentes miméticos de citocinas de novo. Figura 1A) Os agentes miméticos não divididos projetados têm quatro hélices; três interações miméticas de IL-2 com hIL-2R c, enquanto a quarta mantém as três primeiras no lugar. Superior: na primeira geração de projetos, cada um dos elementos centrais de IL-2 (hélices H1-H4) foram idealizados de forma independente usando a montagem de fragmentos de um banco de dados de fragmentos ideais agrupados (tamanho: 4 a.a.); inferior: na segunda geração de projetos, os elementos centrais foram construídos usando equações paramétricas que recapitulam a forma de cada hélice desincorporada, permitindo mudanças no comprimento de cada hélice em +/- 8 a.a.; Figura 1B) Pares de hélices foram reconectados usando fragmentos de alça ideais (tamanho: 4 a.a. ou 7 a.a., para gen-1 e gen-2, respectivamente, ver Métodos), exemplos representativos são mostrados com elementos recém- construídos conectando cada par de hélices; Figura 1C) Os grampos de cabelo em hélice gerados na Figura 1B foram montados em todas as combinações possíveis para gerar estruturas de proteínas totalmente conectadas.

[0057] Figura 2. Caracterização de neoleucina-

2/15. Experimentos de ligação (Biolayer Interferometry) mostram que a neoleucina-2/15 pode ser incubada por 2 horas a 80 °C sem qualquer perda perceptível de ligação, enquanto a IL-2 humana e murina rapidamente perdem atividade.

[0058] Figuras 3A a 3C. Reengenharia de neoleucina-2/15 em um mimético de interleucina-4 (hIL-4) humano (neoleucina-4). Figura 3A) Neo-2/15 estruturalmente alinhada na estrutura de IL-4 em complexo com IL-4R e c (do código PDB 3BPL). Quatorze resíduos de IL-4 que entram em contato com IL-4R e que foram enxertados em Neo-2/15 são rotulados. Figura 3B) Neoleucina-4 (Neo-4), uma nova proteína com dezesseis mutações de aminoácidos em comparação com Neo-2/15. Essas mutações são rotuladas; treze desses foram derivados dos resíduos de IL-4 representados no painel a) que medeiam o contato com IL-4R , e três deles (H8M, K68I e I98F, sublinhados na figura) foram introduzidos por evolução direcionada usando mutagênese aleatória e triagem para variantes de alta afinidade de ligação. Figura 3C) Dados de interferometria de biocamada mostrando que Neo-4, como IL-4, se liga a IL-4R sozinho, não tem afinidade para c so inho, mas se liga a c quando IL-4R está presente na solução.

[0059] Figuras 4A a 4D. Conservação de sequência geral em resíduos de ligação para cada uma das quatro hélices comuns, combinando informações de três diferentes miméticos de IL-2 projetados de novo. Logotipos de sequência foram gerados usando dados combinados de experimentos de ligação (usando o IL-2R c de camundongo heterodimérico) a partir de três bibliotecas de mutagênese de SSM independentes para G2_neo2_40_1F_seq27, G2_neo2_40_1F_seq29 e G2_neo2_40_1F_seq36 (Figuras 11 a 13). Todas essas proteínas são agentes miméticos funcionais de novo de alta afinidade de IL-2 humana e de camundongo, alguns com topologias que diferem daquele de Neo-2/15, mas todos contendo as quatro hélices H1 (Figura 4A; Neo-2/15 1-22 é SEQ ID NO:04, IL-2 6-27 é SEQ ID NO:248, IL-15 1-15 é SEQ ID NO:249), H3 (Figura 4B; Neo-2/15 34-55 é SEQ ID NO:05, IL-2

82-103 é SEQ ID NO:250, IL-15 59-80 SEQ ID NO:251), H2 (Figura 4C; Neo- 2/15 58-76 é SEQ ID NO:07, IL-2 50-68 é SEQ ID NO:252, IL-15 34-52 é SEQ ID NO:253) e H4 (Figura 4D; Neo-2/15 80-100 é SEQ ID NO:06, IL-2 111-131 é SEQ ID NO:254, IL-15 93-113 é SEQ ID NO:255). Os logotipos mostram as informações combinadas para cada hélice de forma independente. Abaixo de cada logotipo, um gráfico de linha mostra a pontuação de probabilidade (médias mais altas mais conservadas) para cada aminoácido na sequência de Neo-2/15. A linha sólida horizontal destaca as posições onde o aminoácido Neo-2/15 tem uma pontuação de probabilidade 30% (ou seja, esses amino cidos contribuem de forma mais geral para ligação ao receptor, pois são globalmente enriquecidos nas populações de ligação em todos os miméticos de novo de IL-2 testados). A topologia de cada hélice na Neo-2/15 é mostrada à esquerda de cada logotipo. As sequências das hélices de Neo-2/15 e as das hélices correspondentes (estruturalmente alinhadas) em IL-2 e IL-15 humanas são mostradas abaixo dos gráficos, destacando a distinção das hélices de Neo-2/15 e interfaces de ligação.

[0060] Figuras 5A a 5D. Otimização experimental de G1_neo2_40. Figuras 5A a 5C) Mapas de calor para biblioteca de mutagênese de sítio único de G1_neo2_40 mostrando enriquecimento em posições específicas após rodadas consecutivas de seleção crescente com ao heterodímero de IL-2R c de 50 nM da Figura 5A), de 2 nM da Figura 5B) e de 0,1 nM da Figura 5C). Com base nesses dados de enriquecimento, uma biblioteca combinatória foi projetada com diversidade de 1,5 × 10 6 nucleotídeos. Figura 5D) Os resíduos de aminoácidos disponíveis na biblioteca combinatória inicial são representados indicando resíduos previstos como vantajosos (mostrados acima da sequência original) e deletérios (mostrados abaixo da sequência original; na representação da sequência original, o preto indica resíduos que são representados na biblioteca combinatória e cinza, resíduos não representados na biblioteca combinatória.

[0061] Figuras 6A a 6E. Otimização experimental de G2_neo2_40_1F_seq27. Mapas de calor para biblioteca de mutagênese de sítio único de G2_neo2_40_1F_seq27 mostrando enriquecimento em posições específicas após rodadas consecutivas de seleção crescente com o heterodímero de IL-2R c de 10 nM da Figura 6A), de 1 nM da Figura 6B), de 0,1 nM da Figura 6C) e de 0,1 nM da Figura 6D). Com base nesses dados de enriquecimento, uma biblioteca combinatória foi projetada com diversidade de 5,3 × 106 nucleotídeos. Figura 6E) Os resíduos de aminoácidos disponíveis na biblioteca combinatória inicial são representados indicando os resíduos que se prevê serem vantajosos; preto indica resíduos na sequência inicial representada na biblioteca combinatória.

[0062] Figuras 7A a 7E. Otimização experimental de G2_neo2_40_1F_seq29. Mapas de calor para biblioteca de mutagênese de sítio único de G2_neo2_40_1F_seq29 mostrando enriquecimento em posições específicas após rodadas consecutivas de seleção crescente com o heterodímero de IL-2R c de 10 nM da Figura 7A), de 1 nM da Figura 7B), de 0,1 nM da Figura 7C) e de 0,1 nM da Figura 7D). Com base nesses dados de enriquecimento, uma biblioteca combinatória foi projetada com diversidade de 2,9 × 106 nucleotídeos. Figura 7E) Os resíduos de aminoácidos disponíveis na biblioteca combinatória inicial são representados indicando os resíduos que se prevê serem vantajosos; preto indica resíduos na sequência inicial representada na biblioteca combinatória.

[0063] Figuras 8A a 8E. Otimização experimental de G2_neo2_40_1F_seq36. Mapas de calor para a biblioteca de mutagênese de sítio único de G2_neo2_40_1F_seq36 mostrando enriquecimento em posições específicas após rodadas consecutivas de seleção crescente com o heterodímero de IL-2R c de 10 nM da Figura 8A), de 1 nM da Figura 8B), de 0,1 nM da Figura 8C) e de 0,1 nM da Figura 8D). Com base nesses dados de enriquecimento, uma biblioteca combinatória foi projetada com diversidade de 2,7 × 106 nucleotídeos. Figura 8E) Os resíduos de aminoácidos disponíveis na biblioteca combinatória inicial são representados indicando os resíduos que se prevê serem vantajosos; preto indica resíduos na sequência inicial representada na biblioteca combinatória.

[0064] Figuras 9A a 9B. Experimentos de desnaturação térmica de dicroísmo circular (CD) para vários agentes miméticos projetados de novo de IL-2/IL-15, geração-1. Figura 9A) Curvas de desnaturação térmica e Figura 9B) varreduras de comprimento de onda.

[0065] Figuras 10A a 10B. Experimentos de desnaturação térmica de dicroísmo circular (CD) para múltiplos agentes miméticos projetados de novo de IL-2/IL-15, geração 1 otimizada experimentalmente. Figura 10A) Curvas de desnaturação térmica e Figura 10B) varreduras de comprimento de onda.

[0066] Figuras 11A a 11D. Fusão térmica de dicroísmo circular para projetos miméticos de IL-2/IL-15 geração-2. Figura 11A e Figura 11C) Curvas de desnaturação térmica e Figura 11B e Figura 11D) varreduras de comprimento de onda.

[0067] Figuras 12A a 12C. Caracterização de expressão, purificação e desnaturação térmica de neoleucina-2/15. Figura 12A) Eletroforese em gel SDS Tris-Tricina mostrando expressão e purificação sobre coluna de afinidade. Figura 12B) Dicroísmo circular a 222 nm durante fusão térmica de 25 °C a 95 °C, mostrando robusta estabilidade de temperatura. Figura 12C) Varreduras de comprimento de onda de dicroísmo circular a 25 °C, 95 °C e, em seguida, novamente a 25 °C, mostrando que a neoleucina-2/15 não se funde totalmente a 95 °C e se dobra totalmente após o resfriamento de volta a 25 °C.

[0068] Figuras 13A a 13B. Robustez de neoleucina- 2/15 para mutantes de cisteína de ponto único em posições de interface de não ligação. Figura 13A) Esquema mostrando posições mutantes pontuais em neolucina-2/15 que podem ser mutadas individualmente para cisteína sem interferir na expressão da proteína ou ligação a IL-2R c. As posições foram escolhidas para evitar interferência na ligação ao receptor. Figura 13B) Cinética de associação de mutantes de Neoleucina-2/15 cisteína com IL-2R c medida usando interferometria de biocamada. Todas as variantes se associam ao receptor de forma aproximadamente semelhante à Neo-2/15.

[0069] Figuras 14A a 14C. Caracterização de expressão, purificação e desnaturação térmica de neoleucina-4. Figura 14A) Eletroforese em gel SDS Tris-Tricina mostrando expressão e purificação sobre coluna de afinidade. Figura 14B) Dicroísmo circular a 222 nm durante fusão térmica de 25 °C a 95 °C, mostrando robusta estabilidade de temperatura. Figura 14C) Varreduras de comprimento de onda de dicroísmo circular a 25 °C, 95 °C e, em seguida, novamente a 25 °C, mostrando que a neoleucina-4 não se funde totalmente a 95 °C e se dobra totalmente após o resfriamento de volta a 25 °C.

[0070] Figuras 15A a 15C. As variantes de Neo-2/15 dividida podem reconstituir a atividade da Neoleucina-2/15 ligando-se ao receptor de IL-2 humana. a. Ensaio de ligação de Interferometria de Biocamada de Neo-2/15 dividida entre hélices H1 + H3-H2'-H4 (Neo2A1 e Neo2B1, respectivamente) para receptor de IL-2 humana. Os dados de ligação foram coletados em um Octet RED96 (ForteBio) e processados usando o software de análise de dados ForteBioTM versão 9.0.0.10. O receptor-alvo biotinilado de c humana foi imobilizado em biossensores revestidos com estreptavidina (SA ForteBio) a 1 g/ml em tampão de ligação (HEPES a 10 mM (pH 7,4), NaCl a 150 mM, EDTA a 3 mM, tensoativo P20 a 0,05%, leite em pó desnatado a 0,5%) por 300 segundos. Depois de carregar o receptor-alvo de c no biossensor, a medição de linha de base foi realizada mergulhando os biossensores em tampão de ligação sozinho, então, a cinética de ligação foi monitorada mergulhando os biossensores em poços contendo a proteína analito-alvo (etapa de associação) e, em seguida, mergulhando os sensores de volta na linha de base/tampão (dissociação). Para a etapa de associação, proteínas analíticas (ou seja, Neoleucina-2/15, Neo2A1, Neo2B1 e uma razão equimolar de Neo2A1 + Neo2B1) foram diluídas dos estoques concentrados em tampão de ligação para uma concentração final de 100 nM. IL-2R humana também foi adicionada em solução na concentração de saturação (250 nM). b. Ensaio de ligação de interferometria de biocamada de Neo-2/15 dividido em hélices H1-H3 + H2'-H4 (Neo2A2 e Neo2B2, respectivamente), seguindo o protocolo experimental mencionado. c. Ensaio de interferometria de biocamada de ligação de Neo-2/15 dividido em hélices H1-H3-H2' + H4 (Neo2A3 e Neo2B3, respectivamente), seguindo o protocolo experimental acima mencionado.

[0071] Figuras 16A a 16C. As variantes de Neo-2/15 dividida estimulam a sinalização celular por fosforilação STAT5 em linhas de células CTLL-2 murinas. a. As células CTLL-2 foram submetidas à privação de meios sem citocinas (RPMI, 10% FBS, + piruvato de sódio a 1 mM, + L- glutamina a 2 mM, P/S a 1%) por 2 horas antes do ensaio. As células foram plaqueadas em uma placa de 96 poços e ressuspensas em meio RPMI contendo diluições em série de amostras de proteínas: Neoleucina-2/15, Neo2A1, Neo2B1 e Neo2A1 + Neo2B1 em razões equimolares. As células foram estimuladas durante 15 minutos a 37 °C e imediatamente fixadas por adição de formaldeído a 1,5% e incubação de 10 minutos à temperatura ambiente. As células foram permeabilizadas por ressuspensão em metanol 100% frio durante 30 min a 4 °C. As células fixadas e permeabilizadas foram lavadas duas vezes com tampão FACS (PBS pH 7,2 contendo 0,1% de albumina de soro bovino) e incubadas com anti-STAT5 pY694 (BD Biosciences) conjugado com Alexa TM Fluor 647, diluído 1:50 em tampão FACS por 2 h em temperatura ambiente. As células foram então lavadas duas vezes em tampão FACS e a intensidade média de fluorescência (MFI) foi determinada em um citômetro de fluxo Guava easyCyte TM (Millipore). As curvas de dose-resposta foram ajustadas a um modelo logístico e metade da concentração efetiva máxima (valores de EC50) foi calculada usando o software de análise de dados GraphPad Prism após subtração do MFI de células não estimuladas e normalização para a intensidade máxima do sinal. b. Ensaio de ligação de interferometria de biocamada de Neo-2/15 dividida em hélices H1-H3 + H2'-H4 (Neo2A3 e Neo2B3, respectivamente), seguindo o protocolo experimental acima mencionado. c. Ensaio de ligação de interferometria de biocamada de Neo-2/15 dividida em hélices H1-H3-H2 + H4 (Neo2A2 e Neo2B2, respectivamente), seguindo o protocolo experimental mencionado.

[0072] Figuras 17A a 17B. As fusões de variantes Neo2/15 dividida para os domínios de direcionamento ligam-se ao receptor de IL-2. a. As variantes da proteína dividida Neo2A e Neo2B se fundiram aos domínios de direcionamento anti-EGFR e anti-Her2 DARPin. b. Ensaio de ligação de interferometria de biocamada de fusões de proteína Neo-2/15 dividida ao receptor de IL-2 de camundongo. Os dados de ligação foram coletados em um Octet RED96 (ForteBio) e processados usando o software de análise de dados ForteBioTM versão 9.0.0.10. O receptor-alvo biotinilado de c humana foi imobilizado em biossensores revestidos com estreptavidina (SA ForteBio) a 1 g/ml em tampão de ligação (HEPES a 10 mM (pH 7,4), NaCl a 150 mM, EDTA a 3 mM, tensoativo P20 a 0,05%, leite em pó desnatado a 0,5%) por 300 segundos. Depois de carregar o receptor-alvo no biossensor, a medição da linha de base foi realizada mergulhando os biossensores no tampão de ligação sozinho, então, a cinética de ligação foi monitorada mergulhando os biossensores em poços contendo a proteína-alvo (etapa de associação) e, em seguida, mergulhando os sensores de volta na linha de base/tampão (dissociação). Para a etapa de associação, proteínas analíticas (ou seja, aHer2Neo2A1 + Neo2B1-aEGFR, aHer2Neo2A2 + Neo2B2-aEGFR, aHer2Neo2A3 + Neo2B3-aEGFR) foram diluídas em quantidades equimolares de estoques concentrados em tampão de ligação para uma concentração final de 100 nM. A IL-2R de camundongo também foi adicionada em solução na concentração de saturação (250 nM).

[0073] Figuras 18A a 18C. Reconstituição direcionada de Neoleucina-2/15 dividida na superfície de células K562 que expressam Her2 e EGFR. a. As variantes da proteína dividida Neo2A e Neo2B se fundiram aos domínios de direcionamento anti-EGFR e anti-Her2 DARPin. b. Linhas de células tumorais K562 projetadas transduzidas para expressão de marcadores de superfície Her2+/eGFP+, EGFR+/iRFP+ ou Her2+/eGFP+ e

EGFR+/iRFP+. c. Ensaio de reconstituição funcional de variantes Neo2A direcionadas a Her2 (aHer2Neo2A1, aHer2Neo2A2 e aHer2Neo2A3) e variantes Neo2B direcionadas a EGFR (Neo2B1-aEGFR, Neo2B2-aEGFR e Neo2B3- aEGFR) para a superfície das quatro linhas celulares K562 mencionadas acima. Todas as linhas celulares foram misturadas em razão equivalente (50.000 de cada tipo de célula por poço) e transferidas para uma placa de fundo em V a

200.000 células/poço. As células foram incubadas por 30 minutos à temperatura ambiente com uma razão equimolar de variantes anti-Her2-Neo2, anti-Her2- Neo2A + anti-EGFR-Neo2B, a uma concentração final de 10 nM em tampão FACS (PBS (Gibco), BSA a 0,5%). As células foram então lavadas duas vezes (PBS (Gibco), BSA a 0,5%) e subsequentemente incubadas por 5 minutos com os seguintes componentes: 50 nM de receptor gama comum humano solúvel biotinilado, 50 nM de IL-2R humana solúvel e 15 nM de conjugado de estreptavidina-ficoeritrina (SAPE). As células foram lavadas novamente e analisadas por citometria de fluxo em um instrumento LSRII. As células Her2+ foram classificadas para fluorescência eGFP (Ex/Em=488/508), as células EGFR+ foram classificadas para fluorescência iRFP (Ex/Em=637/670), as células Her2+/EGFR+ foram identificadas pela expressão simultânea de eGFP e iRFP. A reconstituição da atividade da Neoleucina-2/15 e a ligação ao receptor da IL-2 foram identificadas por meio da análise da fluorescência de PE (Ex/Em=561/582) na superfície de cada subconjunto de células.

[0074] Figuras 19A a 19C. Ambos os fragmentos das variantes Neo-2/15 dividida são necessários para permitir a reconstituição funcional na superfície das células K562 que expressam Her2 e EGFR. a. Ensaio de reconstituição funcional de variantes Neo2A direcionadas a Her2 (aHer2-Neo2A1) e variantes Neo2B direcionadas a EGFR (Neo2B1-aEGFR) à superfície de quatro linhas celulares K562 que expressam os seguintes marcadores: Nenhum, Her2+/eGFP+, EGFR+/iRFP+, Her2+/eGFP+/EGFR+/iRFP+. Todas as linhas celulares foram misturadas em razão equivalente (50.000 de cada tipo de célula por poço) e transferidas para uma placa de fundo em V a 200.000 células/poço. As células foram incubadas por 30 minutos à temperatura ambiente com anti-Her2-Neo2A1, Neo2B1- antiEGFR ou anti-Her2-Neo2A1 + Neo2B1-antiEGFR para uma concentração final de 810 nM em tampão FACS (PBS (Gibco), BSA a 0,5%). As células foram então lavadas duas vezes (PBS (Gibco), BSA a 0,5%) e subsequentemente incubadas por 5 minutos com os seguintes componentes: 50 nM de receptor gama comum humano solúvel biotinilado, 50 nM de IL-2R humana solúvel e 15 nM de conjugado de estreptavidina-ficoeritrina (SAPE). As células foram lavadas novamente e analisadas por citometria de fluxo em um instrumento LSRII. As células Her2+ foram classificadas para fluorescência eGFP (Ex/Em=488/508), as células EGFR+ foram classificadas para fluorescência iRFP (Ex/Em=637/670), as células Her2+/EGFR+ foram identificadas pela expressão simultânea de eGFP e iRFP. A reconstituição da atividade da Neoleucina-2/15 e a ligação ao receptor da IL-2 foram identificadas por meio da análise da fluorescência de PE (Ex/Em=561/582) na superfície de cada subconjunto de células. Como observado, ambos os fragmentos são necessários para reconstituir a atividade da Neoleucina-2/15 funcional na superfície de células duplamente positivas. b. Mesmo ensaio descrito em (a) usando aHer2-Neo2A2 e Neo2B2-aEGFR. c. Mesmo ensaio descrito em (a) usando aHer2-Neo2A3 e Neo2B3-aEGFR.

[0075] Figuras 20A a 20B. Ilustração de modos alternativos de ação da plataforma Neo-2 dividida para ativação altamente específica de subtipos de células imunes. a. Direcionamento seletivo de Neo- 2 dividida para dois marcadores de superfície para estimular a expansão de um subtipo específico de células imunes (por exemplo, células CD8+, células T CAR ou células T regulatórias) b. Direcionamento simultâneo de tumor e células T pelo sistema de Neoleucina-2/15 dividida para induzir a proliferação específica de subconjunto de células imunes no ambiente de células tumorais-alvo.

[0076] Figura 21A. Fragmentos divididos de neoleucina-4 podem reconstituir a atividade total quando combinados.

Ensaio de ligação de interferometria de biocamada de Neo-4 dividida em hélices H1 (Neo4A1) + H3-H2'-H4 (Neo4B1) para receptor de IL-4 humana. Os dados de ligação foram coletados em um Octet RED96 (ForteBio) e processados usando o software de análise de dados ForteBio TM versão 9.0.0.10. O receptor- alvo biotinilado de c humana foi imobili ado em biossensores re estidos com estreptavidina (SA ForteBio) a 1 g/ml em tampão de ligação (HEPES a 10 mM (pH 7,4), NaCl a 150 mM, EDTA a 3 mM, tensoativo P20 a 0,05%, leite em pó desnatado a 0,5%) por 300 segundos. Depois de carregar o receptor-alvo no biossensor, a medição da linha de base foi realizada em tampão de ligação sozinho, então, a cinética de ligação foi monitorada mergulhando os biossensores em poços contendo a proteína-alvo na concentração indicada (etapa de associação) e, em seguida, mergulhando os sensores de volta em linha de base/tampão (dissociação). Para a etapa de associação, proteínas analíticas (ou seja, Neoleucina-4, Neo4A1, Neo4B1 e uma razão equimolar de Neo4A1+Neo4B1) foram diluídas a partir de estoques concentrados em tampão de ligação para uma concentração final de 100 nM, IL-4R humana também foi adicionada em solução à concentração de saturação (250 nM).

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0077] Conforme usado neste documento e a menos que indicado de outra forma, os termos um e uma significam um/uma , pelo menos um/uma ou um/uma ou mais . A menos que exigido de outra forma pelo contexto, os termos singulares usados neste documento devem incluir pluralidades e os termos plurais devem incluir o singular.

[0078] A menos que o contexto exija claramente o contrário, em toda a descrição e as reivindicações, as palavras compreender , que compreende e semelhantes de em ser interpretadas em um sentido inclusivo ou aberto, em oposição a um sentido exclusivo ou exaustivo; isto é, no sentido de incluir, por m sem limita o . Pala ras que usam o n mero singular ou plural também incluem o número plural e o singular, respectivamente. Além disso, as pala ras neste documento , acima e abai o e pala ras de importância semelhante, quando usadas neste pedido, devem se referir a este pedido como um todo e não a qualquer parte específica do pedido.

[0079] Tal como aqui utilizado, os resíduos de aminoácidos são abreviados da seguinte forma: alanina (Ala; A), asparagina (Asn; N), ácido aspártico (Asp; D), arginina (Arg; R), cisteína (Cys; C), glutâmico ácido (Glu; E), glutamina (Gln; Q), glicina (Gly; G), histidina (His; H), isoleucina (Ile; I), leucina (Leu; L), lisina (Lys; K), metionina (Met; M), fenilalanina (Phe; F), prolina (Pro; P), serina (Ser; S), treonina (Thr; T), triptofano (Trp; W), tirosina (Tyr; Y) e valina (Val; V).

[0080] Todas as modalidades de qualquer aspecto da divulgação podem ser usadas em combinação, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

[0081] Em um primeiro aspecto, a divulgação fornece agonistas de receptor condicionalmente ativos de ocorrência não natural, compreendendo um primeiro componente polipeptídico e um segundo componente polipeptídico, em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não estão presentes em uma proteína de fusão, em que, no total, o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico compreendem os domínios X1, X2, X3 e X4, em que:

[0082] (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4);

[0083] (b) X2 é qualquer domínio de peptídeo helicoidal;

[0084] (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID

NO: 5); e

[0085] (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6).

[0086] em que:

[0087] (i) os resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes;

[0088] (ii) o primeiro componente polipeptídico compreende pelo menos um de X1, X2, X3 e X4, mas não compreende cada um de X1, X2, X3 e X4; e

[0089] (iii) o segundo componente polipeptídico compreende cada um de X1, X2, X3 e X4 que não está presente no primeiro componente polipeptídico;

[0090] em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não são agonistas do receptor individualmente ativo, e em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista ativo do heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa ou heterodímero de IL-4Ralfa/IL13Ralfa.

[0091] Conforme mostrado nos exemplos a seguir, como descrito em detalhes no pedido PCT nº de série PCT/US2019/038703, depositado em 29 de junho de 2019, e como descrito em Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019, polipeptídeos que incluem todos os X1-X4 foram mostradas anteriormente como sendo (a) agentes miméticos de IL-2 e interleucina-15 (IL-15) que se ligam ao heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), mas não têm sítio de ligação para IL-2R ou IL-15R , ou (b) agentes miméticos de IL-4 que se ligam ao heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c) ou subunidade do receptor de IL-13 (IL-13R ) (IL-4 natural e os agentes miméticos de IL-4 aqui descritos apresentam reação cruzada com o receptor de IL-13, formando um heterodímero de IL-4R /IL13R ). Os polipeptídeos de comprimento total mostraram ser hiperestáveis, ligam-se a IL-2R c ou IL-4R c humana e de camundongo com maior afinidade do que as citocinas naturais e induzem sinalização celular a jusante independente de IL-2R e IL-15R , ou independente de IL-13R . Os polipeptídeos de comprimento total podem ser usados, por exemplo, para tratar o câncer.

[0092] Em contrapartida, a presente divulgação demonstra surpreendentemente agonistas de receptor condicionalmente ativos compreendendo o primeiro e segundo polipeptídeos separados recitados que individualmente não são agonistas de receptor, mas que podem interagir de forma não covalente para formar um agonista ativo do heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa ou heterodímero IL-4Ralfa/IL13Ralfa. A afinidade dessa interação não co alente entre os componentes de di is o (ou seja: o primeiro polipept deo e o segundo polipeptídeo) é tal que a interação ocorre apenas na presença do receptor apropriado, e também apenas quando ambos os componentes de divisão são colocalizados. Assim, os agonistas de receptor condicionalmente ativos da presente divulgação podem ser usados para quaisquer usos para os quais os polipeptídeos que incluem todo o X1-X4 podem ser usados. Além disso, os agonistas do receptor condicionalmente ativos permitem a reconstituição dependente da colocalização do agonista e, assim, a ativação condicional do receptor.

[0093] O termo mimético de proteína, tal como aqui utilizado, refere-se a uma proteína que imita certos aspectos da função de outra proteína. As duas proteínas normalmente têm sequências de aminoácidos diferentes e/ou estruturas diferentes. Fornecidos aqui, entre outras coisas, agentes miméticos condicionalmente ativos de IL-2 e IL-15. Os aspectos da função de IL-2 e IL-15 que esses agentes miméticos condicionalmente ativos imitam é a indução da heterodimerização de IL-2R c, le ando à fosforilação de

STAT5. Devido ao fato de que IL-2 e IL-15 sinalizam através da heterodimerização de IL-2R c, esses agentes miméticos condicionalmente ativos imitam essa função biológica de IL-2 e IL-15. Esses agentes miméticos condicionalmente ativos podem ser referidos aqui como agentes miméticos de IL-2, de IL-15 ou de IL-2 e IL-15.

[0094] Também são fornecidos agentes miméticos condicionalmente ativos de IL-4. Esses agentes miméticos condicionalmente ativos são capazes de imitar certas funções da IL-4. A função de IL-4 que esses agentes miméticos imitam é a indução de heterodimerização de IL-4R c (e/ou heterodimerização de IL-4R /IL-13R ).

[0095] Em uma modalidade, o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista do heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c). Em outra modalidade, o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista do heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa ou heterodímero de IL-4Ralfa/IL13Ralfa.

[0096] HIL-2 nativo compreende quatro hélices conectadas por longas voltas irregulares. A hélice N-terminal (H1) interage com as subunidades beta e gama, a terceira hélice (H3) interage com a subunidade beta e a hélice C-terminal (H4) com a subunidade gama; a superfície de interação da subunidade alfa é formada pela segunda hélice irregular (H2) e duas voltas longas, uma conectando H1 a H2 e a outra conectando H3 e H4. As proteínas idealizadas foram projetadas e produzidas nas quais H1, H3 e H4 são substituídas por domínios estruturais idealizados, incluindo, mas sem limitação as hélices e fitas beta (referidas como domínios X1, X3 e X4, respectivamente) exibindo uma interface IL-2R c ou IL-4R c inspirada em H1, H3 e H4, e na qual H2 é substituída por uma hélice idealizada (referida como domínio X2) que oferece melhor empacotamento. Como mostrado nos exemplos, estudos mutacionais extensivos foram realizados, demonstrando que a sequência de aminoácidos de cada domínio de peptídeo pode ser extensivamente modificada sem perda de ligação ao receptor de IL-2 ou IL-4, e que os domínios podem ser colocados em qualquer ordem enquanto retêm a ligação condicional ao receptor de IL-2 ou IL-4. Os polipeptídeos podem compreender aminoácidos L e glicina, aminoácidos D e glicina, ou combinações dos mesmos. Conforme descrito neste documento, as proteínas idealizadas podem ser divididas em dois polipeptídeos que separadamente têm ligação desprezível ao receptor relevante, mas quando misturados juntos podem reconstituir a atividade do receptor. As proteínas são normalmente divididas em locais que não interferem na função da proteína (por exemplo, seções de ligante em modalidades com ligantes). Além disso, assim como os domínios X1, X2, X3 e X4 nas proteínas não divididas podem ser enrolados juntos em qualquer ordem, as proteínas divididas podem compreender qualquer combinação dos domínios.

[0097] Assim, X1, X2, X3 e X4 podem estar em qualquer ordem no primeiro e no segundo polipeptídeo; em modalidades não limitativas:

[0098] (i) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e o segundo polipeptídeo compreende X2, X3 e X4;

[0099] (ii) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X3 e X4;

[0100] (iii) o primeiro polipeptídeo compreende X3 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X2 e X4;

[0101] (iv) o primeiro polipeptídeo compreende X4 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X2 e X3;

[0102] (v) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X2, e o segundo polipeptídeo compreende X3 e X4;

[0103] (vi) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X3, e o segundo polipeptídeo compreende X2 e X4;

[0104] (vii) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X2 e X3;

[0105] (viii) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e

X3, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X4;

[0106] (ix) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X3;

[0107] (x) o primeiro polipeptídeo compreende X3 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X2;

[0108] (xi) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X2 e X3 e o segundo polipeptídeo compreende X4;

[0109] (xii) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X2 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X3;

[0110] (xiii) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X3 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X2; ou

[0111] (xiv) o primeiro polipeptídeo compreende X2, X3 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X1.

[0112] Quando o primeiro polipeptídeo e/ou o segundo polipeptídeo incluem mais de um domínio de X1, X2, X3 e X4, os domínios podem, em algumas modalidades, ser separados por ligantes de aminoácidos de qualquer comprimento adequado ou composição de aminoácidos. Não há requisitos para ligantes; em uma modalidade, não há ligantes presentes entre qualquer um dos domínios. Em outras modalidades, um ligante de aminoácido pode estar presente entre 0, 1 ou 2 junções entre os domínios X1, X2, X3 e X4 no primeiro polipeptídeo e/ou no segundo polipeptídeo. Os ligantes de aminoácidos podem ser de qualquer comprimento considerado apropriado para um uso pretendido. Em alguns aspectos, um ligante está no N- terminal ou C-terminal e é referido como um ligante apesar de não ligar dois domínios juntos. Em alguns aspectos, o ligante é referido como um ligante, uma vez que estava presente em uma proteína não dividida ligando dois domínios.

[0113] Em todas essas modalidades, X1, X3 e X4 podem ter qualquer comprimento adequado, o que significa que cada domínio pode conter qualquer número adequado de aminoácidos adicionais que não os peptídeos de SEQ ID NOS: 4, 5 e 6, respectivamente. Os resíduos entre parênteses são opcionais e, portanto, podem estar presentes ou ausentes. Como será entendido pelos versados na técnica, isso significa, por exemplo, que os 6 aminoácidos N-terminais e os 5 resíduos de aminoácidos C-terminais de (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) são opcionais. Como será mais bem compreendido pelos versados na técnica: (i) se um aminoácido N- terminal estiver ausente, será o aminoácido mais N-terminal (isto é: o resíduo P N-terminal SEQ ID NO: 4); (ii) se dois aminoácidos N-terminais estiverem ausentes, serão os dois aminoácidos mais N-terminais (isto é: o dipeptídeo PK N-terminal em SEQ ID NO: 4); (iii) se um resíduo de aminoácido C-terminal estiver ausente, será o aminoácido mais C-terminal (isto é: o resíduo I C-terminal em SEQ ID NO: 4); (iv) se dois resíduos de aminoácidos C-terminais estiverem ausentes, serão os dois aminoácidos mais C-terminais mais aminoácidos (isto é: o dipeptídeo NI C-terminal em SEQ ID NO: 4), etc. Assim, será claro para aqueles versados na técnica que um ou mais resíduos de aminoácidos opcionais podem estar ausentes, e que os aminoácidos ausentes dos resíduos opcionais são contíguos do terminal de peptídeo relevante, como exemplificado acima.

[0114] Em uma modalidade, X1 compreende um peptídeo com identidade para o comprimento total do peptídeo ((PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4); X3 compreende um peptídeo com identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e X4 compreende um peptídeo com identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6), respectivamente, de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100%.

[0115] Em várias modalidades, X1 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo ((PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4), X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com a identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6), respectivamente, de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100%.

[0116] Em modalidades específicas;

[0117] (i) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) de pelo menos 70%, X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com a identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5) de pelo menos 70%; e X4 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6) de pelo menos 70%;

[0118] (ii) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) de pelo menos 70%, X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com a identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5) de pelo menos 70%; e X4 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou

(E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6) de pelo menos 70%;

[0119] (iii) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) de pelo menos 85%, X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com a identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5) de pelo menos 85%; e X4 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6) de pelo menos 85%;

[0120] (iv) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4), X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com a identidade de 100% para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e X4 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6);

[0121] (v) X1 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) de pelo menos 85%, X3 é um peptídeo compreendendo um aminoácido sequência com identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) de pelo menos 85%; e X4 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) de pelo menos 85%; ou

[0122] (vi) X1 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4), X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e X4 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo em relação ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6).

[0123] Nessas modalidades, diferentes versões de SEQ ID NO: 4, 5 e 6 são mostradas que têm a mesma sequência de aminoácidos primária, mas diferem na posição dos resíduos opcionais, conforme indicado pelos parênteses.

[0124] Em outras modalidades:

[0125] X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320);

[0126] X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e/ou

[0127] X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

[0128] Em outra modalidade, onde os resíduos opcionais de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6 estão presentes,

[0129] (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4);

[0130] (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5); e

[0131] (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

[0132] Em outra modalidade, onde os resíduos opcionais da SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6 estão presentes,

[0133] (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320);

[0134] (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e

[0135] X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO:

322).

[0136] Em várias modalidades em que os resíduos opcionais de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 6 estão presentes, X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4), X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo com o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), respectivamente, de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100%.

[0137] Em modalidades específicas;

[0138] (i) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 65%; X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 65%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), de pelo menos 65%;

[0139] (ii) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 75%; X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES

(SEQ ID NO: 321) de pelo menos 75%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), de pelo menos 75%;

[0140] (iii) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 80%; X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 80%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), de pelo menos 80%;

[0141] (iv) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 90%; X3 é um peptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 90%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), de pelo menos 90%;

[0142] (v) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de 100%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES

(SEQ ID NO: 321) de 100%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322), de 100%.

[0143] (vi) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) de pelo menos 80%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) de pelo menos 80%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) de pelo menos 80%;

[0144] (vii) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) de pelo menos 90%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) de pelo menos 90%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6), de pelo menos 90%;

[0145] (viii) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) de 100%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) de 100%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) de 100%;

[0146] (ix) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo

QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 80%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 80%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), de pelo menos 80%;

[0147] (x) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 90%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 90%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322), de pelo menos 90%; ou

[0148] (xi) X1 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de 100%; X3 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de 100%; e X4 é um peptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos com identidade para o comprimento total do peptídeo DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322), de 100%.

[0149] Em uma modalidade, os agentes miméticos de IL-2/15 agonistas de receptor condicionalmente ativos são agonistas de receptor condicionalmente ativos e

[0150] (i) X1 inclui 1, 2, 3, 4 ou todos os 5 dos seguintes: L no resíduo 7, H no resíduo 8, H no resíduo 11, Y no resíduo 14; M no resíduo 18, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 4 com base na presença de resíduos opcionais; e/ou

[0151] (ii) X3 inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou todos os 8 dos seguintes: D no resíduo 3, Y no resíduo 4, F no resíduo 6, N no resíduo 7, L no resíduo 10, I no resíduo 11, E no resíduo 13 ou E no resíduo 14, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 5 com base na presença de resíduos opcionais. Em uma outra modalidade, (iii) X4 inclui I no resíduo 19, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 6 com base na presença de resíduos opcionais.

[0152] Nas SEQ ID NOs: 4, 5 e 6, vários resíduos de aminoácidos estão marcados em negrito. Em (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4): os resíduos de aminoácidos E10, L13, Y14, D15 e L17 (numerados com base na presença de resíduos opcionais) são marcados em negrito; em (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5): resíduos de aminoácidos L1, Y4, N7, L10, I11 e I15 (numerados com base na presença de resíduos opcionais) são marcados em negrito; e em (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) os resíduos de aminoácidos I12, Q16 e W18 (numerados com base na presença de resíduos opcionais) estão marcados em negrito.

[0153] Em uma modalidade:

[0154] (a) substituições de aminoácidos (AA) em X1 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 4 ocorrem em não mais de 3 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 1 resíduo AA marcado em negrito, ou não ocorrem em resíduos AA marcados em negrito;

[0155] (b) substituições de AA em X3 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 5 ocorrem em não mais de 3 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 1 AA resíduo marcado em fonte em negrito, ou não ocorrem em resíduos AA marcados em fonte em negrito; e/ou

[0156] (c) substituições de AA em X4 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 6 ocorrem em não mais do que 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais do que 1 resíduo AA marcado em negrito, ou não ocorrem nos resíduos AA marcados em negrito.

[0157] Em outra modalidade, as substituições de AA em X2 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 7 não ocorrem nos resíduos AA marcados em negrito.

[0158] Em outra modalidade de agentes miméticos de IL-2 agonistas de receptor condicionalmente ativos, as substituições de aminoácidos em relação aos domínios de peptídeo de referência (isto é: SEQ ID NO: 4, 5 ou 6) não ocorrem em resíduos AA marcados em fonte em negrito. Conforme mostrado abaixo, as SEQ ID NOs: 4, 5 e 6 incluem, cada uma, resíduos em negrito que estão envolvidos na ligação ao receptor:

[0159] (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4): os resíduos de aminoácidos E10, L13, Y14, D15 e L17 (numerados com base na presença de resíduos opcionais) são invariantes nessa modalidade;

[0160] (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) resíduos de aminoácidos L1, Y4, N7, L10, I11 e I15 (numerados com base na presença de resíduos opcionais) são invariantes nessa modalidade; e

[0161] (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) resíduos de aminoácidos I12, Q16 e W18 (numerados com base na presença de resíduos opcionais) são invariantes nessa modalidade.

[0162] Em uma outra modalidade, o resíduo de aminoácido W13 é invariante quando X2 compreende um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais. Em uma modalidade, o resíduo opcional está presente; em outra modalidade, o resíduo opcional está ausente.

[0163] Em outra modalidade de agentes miméticos de

IL-2 agonistas de receptor condicionalmente ativos, substituições de aminoácidos em relação aos domínios de peptídeo de referência (isto é: SEQ ID NO: 4, 5 ou 6) não ocorrem em mais de 3, 2 ou 1 resíduos AA marcado em fonte em negrito.

[0164] Em outra modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-4/IL-13 de agonistas do receptor condicionalmente ativos, e

[0165] X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8);

[0166] X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 37% 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento, o peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e

[0167] X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10).

[0168] em que

[0169] (i) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e

[0170] (ii) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

[0171] Em outra modalidade, (iii) X4 inclui F no resíduo 19.

[0172] Em várias modalidades, X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total de PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8), X3 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total de LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9), e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total de EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10) que são cada um pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100%. Em modalidades específicas,

[0173] (i) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao longo do seu comprimento e relação ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao longo de seu comprimento em relação ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10);

[0174] (ii) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao longo de seu comprimento em relação ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10);

[0175] (iii) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo de seu comprimento em relação ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10); ou

[0176] (iv) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo de seu comprimento em relação ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo do seu comprimento em relação ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10);

[0177] em cada caso, em que

[0178] (A) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e (B) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

[0179] Em outra modalidade de agentes miméticos de IL-4/IL-13 de agonistas de receptor condicionalmente ativos, substituições de aminoácidos em relação aos domínios de peptídeo de referência (isto é: SEQ ID NO: 8, 9 ou 10) não ocorrem em resíduos AA marcados em fonte em negrito. Conforme mostrado abaixo, as SEQ ID NOs: 8, 9 e 10 incluem, cada uma, resíduos em fonte em negrito:

[0180] PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8): resíduos de aminoácidos E10, E11, A12, L13, K14, D15, A16 e L17 são invariantes nessa modalidade

[0181] LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID

NO: 9): resíduos de aminoácidos F4, A5, K6, R7, F8, E9, R10 e N11 são invariantes nessa modalidade

[0182] EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10): resíduos de aminoácidos I11, I12, T13, I14, L15, Q16, S17, W18, F19 e F20 são invariantes nessa modalidade

[0183] Em uma outra modalidade, o resíduo de aminoácido W13 é invariante quando X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7).

[0184] Em outra modalidade, as substituições de aminoácidos em relação aos domínios de peptídeo de referência são substituições de aminoácidos conservativas. Tal como aqui utilizado, substituição conservativa de aminoácidos significa que um determinado aminoácido pode ser substituído por um resíduo com características físico- químicas semelhantes, por exemplo, substituindo um resíduo alifático por outro (tal como Ile, Val, Leu ou Ala um pelo outro), ou substituição de um resíduo polar por outro (tal como entre Lys e Arg; Glu e Asp; ou Gln e Asn). Outras substituições conservativas, por exemplo, substituições de regiões inteiras com características de hidrofobicidade semelhantes, são conhecidas. Os polipeptídeos que compreendem substituições conservativas de aminoácidos podem ser testados em qualquer um dos ensaios aqui descritos para confirmar que uma atividade desejada, por exemplo, atividade de ligação ao antígeno e especificidade de um polipeptídeo nativo ou de referência é retida. Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com as semelhanças nas propriedades das suas cadeias laterais (em AL Lehninger, em Biochemistry, segunda edição, páginas 73 a 75, Worth Publishers, Nova York (1975)): (1) não polar: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) polar sem carga: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) ácidos: Asp (D), Glu (E); (4) básico: Lys (K), Arg (R), His (H). Alternativamente, os resíduos de ocorrência natural podem ser divididos em grupos com base nas propriedades comuns da cadeia lateral: (1) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácidos: Asp, Glu; (4) básico: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; (6) aromático: Trp, Tyr, Phe. As substituições não conservadoras implicarão na troca de um membro de uma dessas classes por outra classe. Substituições conservativas particulares incluem, por exemplo; Ala em Gly ou em Ser; Arg em Lys; Asn em Gln ou em H é; Asp em Glu; Cys em Ser; Gln em Asn; Glu em Asp; Gly em Ala ou Pro; His em Asn ou em Gln; Ile em Leu ou em Val; Leu em Ile ou em Val; Lys em Arg, em Gln ou em Glu; Met em Leu, em Tyr ou em Ile; Phe em Met, em Leu ou em Tyr; Ser em Thr; Thr em Ser; Trp em Tyr; Tyr em Trp; e/ou Phe em Val, em Ile ou em Leu.

[0185] Em uma modalidade, os resíduos de aminoácidos em X1 em relação à SEQ ID NO: 4 são selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0186] Posição 01: A F I L M P Q R S W

[0187] Posição 02: A D E G V K

[0188] Posição 03: D E F W K

[0189] Posição 04: D E K N P R W

[0190] Posição 05: D E H I K L M S

[0191] Posição 06: A D E G L P S W Q

[0192] Posição 07: D E L Q Y I

[0193] Posição 08: A F H W Y M T

[0194] Posição 09: C F P A

[0195] Posição 10: C D E F K P

[0196] Posição 11: D F H E

[0197] Posição 12: A D E P S T V

[0198] Posição 13: H I L M P R V W

[0199] Posição 14: F R W Y K

[0200] Posição 15: D E N Y

[0201] Posição 16: A C L M S

[0202] Posição 17: F I L M P R

[0203] Posição 18: G M Q Y S

[0204] Posição 19: I L M P Q V

[0205] Posição 20: A K L M Q R S

[0206] Posição 21: G K N P R S W

[0207] Posição 22: D E I K M N W Y

[0208] Em uma modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-4 condicionalmente ativos e a posição 7 é I, a posição 8 é M ou T, a posição 11 é E, a posição 14 é K e a posição 18 é S.

[0209] Em outra modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-2 condicionalmente ativos e 1, 2, 3, 4 ou 5 dos seguintes não são verdadeiros: a posição 7 é I, a posição 8 é M ou T, a posição 11 é E, a posição 14 é K e a posição 18 é S.

[0210] Em outra modalidade, os resíduos de aminoácidos em X3 em relação à SEQ ID NO: 5 são selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0211] Posição 01: A L

[0212] Posição 02: D E G K M T

[0213] Posição 03: D E N Y R

[0214] Posição 04: C D G T Y F

[0215] Posição 05: A F H S V W Y

[0216] Posição 06: A F I M T V Y K

[0217] Posição 07: D K N S T R

[0218] Posição 08: A C G L M S V F

[0219] Posição 09: C H K L R S T V E

[0220] Posição 10: F I L M Y R

[0221] Posição 11: I L N T Y

[0222] Posição 12: F K L M S V

[0223] Posição 13: A D F G I N P Q S T E W

[0224] Posição 14: A E F G H S V

[0225] Posição 15: C I L M V W

[0226] Posição 16: A D G S T V

[0227] Posição 17: H K L N R

[0228] Posição 18: C D G I L Q R T W

[0229] Posição 19: D F M N W

[0230] Posição 20: A C E F G M S Y

[0231] Posição 21: D E G H L M R S T V W

[0232] Posição 22: A D G K N S Y

[0233] Em outra modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-4/IL-13 condicionalmente ativos e a posição 3 é R, a posição 4 é F, a posição 6 é K, a posição 7 é R, a posição 10 é R, a posição 11 é N, a posição 13 é W e a posição 14 é G.

[0234] Em outra modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-2 condicionalmente ativos e 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou todos os 8 dos seguintes não são verdadeiros: a posição 3 é R, a posição 4 é F, a posição 6 é K, a posição 7 é R, a posição 10 é R, a posição 11 é N, a posição 13 é W e a posição 14 é G.

[0235] Em qualquer uma de tais modalidades, os agonistas de receptor condicionalmente ativos permitem ainda uma cisteína na posição 17 em relação à SEQ ID NO: 5, além dos resíduos de aminoácidos de H, K, L, N e R, ou na posição 20 em relação à SEQ ID NO: 5 além dos resíduos de aminoácidos de A, C, E, F, G, M, S e Y. Consequentemente, nesta modalidade, resíduos de aminoácidos em X3 em relação à SEQ ID NO: 5 podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0236] Posição 01: A L

[0237] Posição 02: D E G K M T

[0238] Posição 03: D E N Y R

[0239] Posição 04: C D G T Y F

[0240] Posição 05: A F H S V W Y

[0241] Posição 06: A F I M T V Y K

[0242] Posição 07: D K N S T R

[0243] Posição 08: A C G L M S V F

[0244] Posição 09: C H K L R S T V E

[0245] Posição 10: F I L M Y R

[0246] Posição 11: I L N T Y

[0247] Posição 12: F K L M S V

[0248] Posição 13: A D F G I N P Q S T E W

[0249] Posição 14: A E F G H S V

[0250] Posição 15: C I L M V W

[0251] Posição 16: A D G S T V

[0252] Posição 17: H K L N R C

[0253] Posição 18: C D G I L Q R T W

[0254] Posição 19: D F M N W

[0255] Posição 20: A C E F G M S Y C

[0256] Posição 21: D E G H L M R S T V W

[0257] Posição 22: A D G K N S Y

[0258] Em outra modalidade, os resíduos de aminoácidos em X4 em relação à SEQ ID NO: 6 são selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0259] Posição 01: D E G K V

[0260] Posição 02: D I M S

[0261] Posição 03: E G H K

[0262] Posição 04: E G I K Q R S

[0263] Posição 05: A D E G H S V

[0264] Posição 06: C D E G I M Q R T V

[0265] Posição 07: C E L M P R T

[0266] Posição 08: A F L M W

[0267] Posição 09: A G L N Q R T

[0268] Posição 10: A C D E F H I W

[0269] Posição 11: I M N S V W

[0270] Posição 12: I K L S V

[0271] Posição 13: C L M R S T

[0272] Posição 14: I L P T Y

[0273] Posição 15: F G I L M N V

[0274] Posição 16: H K Q R

[0275] Posição 17: C F K S W Y

[0276] Posição 18: K Q T W

[0277] Posição 19: C G N I

[0278] Posição 20: C F G L Y

[0279] Posição 21: A F G H S Y

[0280] Em outra modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-4/IL-13 condicionalmente ativos e a posição 19 é I. Em outra modalidade, os agonistas do receptor condicionalmente ativos são agentes miméticos de IL-2 condicionalmente ativos e a posição 19 não é I.

[0281] Em qualquer uma dessas modalidades, os agonistas de receptor condicionalmente ativos permitem ainda uma cisteína na posição 3 em relação à SEQ ID NO: 6, além dos resíduos de aminoácidos de E, G, H e K. Consequentemente, nessa modalidade, os resíduos de aminoácidos em X4 em relação à SEQ ID NO: 6 podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0282] Posição 01: D E G K V

[0283] Posição 02: D I M S

[0284] Posição 03: E G H K C

[0285] Posição 04: E G I K Q R S

[0286] Posição 05: A D E G H S V

[0287] Posição 06: C D E G I M Q R T V

[0288] Posição 07: C E L M P R T

[0289] Posição 08: A F L M W

[0290] Posição 09: A G L N Q R T

[0291] Posição 10: A C D E F H I W

[0292] Posição 11: I M N S V W

[0293] Posição 12: I K L S V

[0294] Posição 13: C L M R S T

[0295] Posição 14: I L P T Y

[0296] Posição 15: F G I L M N V

[0297] Posição 16: H K Q R

[0298] Posição 17: C F K S W Y

[0299] Posição 18: K Q T W

[0300] Posição 19: C G N I

[0301] Posição 20: C F G L Y

[0302] Posição 21: A F G H S Y

[0303] Conforme observado neste documento, o domínio X2 é um domínio estrutural e, portanto, qualquer sequência de aminoácidos que conecta (isto é: no mesmo polipeptídeo ou mediante interação não covalente do primeiro e segundo polipeptídeos) os outros domínios relevantes e permite que eles dobrem pode ser usada. O comprimento necessário dependerá das especificações do primeiro polipeptídeo e do segundo polipeptídeo sendo usado e pode ser de 8 aminoácidos ou mais. Em uma modalidade exemplificativa e não limitativa, X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 20%, 27%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento para KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7) ou KDEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7). Em uma modalidade, as alterações de aminoácidos em relação à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 7 são substituições de aminoácidos conservativas. Em outra modalidade, o resíduo de aminoácido W13 é invariante. Em uma outra modalidade, os resíduos de aminoácidos em X2 em relação à SEQ ID NO: 7 são selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0304] Posição 01: A H L M R S V K

[0305] Posição 02: A D E Q R S T V W Y

[0306] Posição 03: C E G K L N Q R W

[0307] Posição 04: A F G N S T V Y

[0308] Posição 05: A E G I M R V

[0309] Posição 06: C E K L N R V

[0310] Posição 07: A C E I L S T V W

[0311] Posição 08: H K L M S T W Y

[0312] Posição 09: A I L M Q S R

[0313] Posição 10: A I M S W Y

[0314] Posição 11: C I K L S V

[0315] Posição 12: C E K L P Q R T

[0316] Posição 13: A D H N W

[0317] Posição 14: A C G I L S T V M

[0318] Posição 15: A E G I K L M R V

[0319] Posição 16: G H L R S T V

[0320] Posição 17: A I L V

[0321] Posição 18: A C D E G H I K M S

[0322] Posição 19: D E G L N V T

[0323] Em outra modalidade, os polipeptídeos são agentes miméticos de IL-4/IL-13 e a posição 11 é I. Em outra modalidade, os polipeptídeos são agentes miméticos de IL-2 e a posição 11 não é I.

[0324] Em qualquer uma dessas modalidades, o polipeptídeo permite ainda uma cisteína nas posições 5 ou 16 em relação à SEQ ID NO: 7.

[0325] Alternativamente, em qualquer uma dessas modalidades, o polipeptídeo permite ainda uma cisteína nas posições 1, 2, 5, 9 ou 16 em relação à SEQ ID NO: 7´.

[0326] Consequentemente, os resíduos de aminoácidos em X2 em relação à SEQ ID NO: 7 podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em:

[0327] Posição 01: A H L M R S V K C

[0328] Posição 02: A D E Q R S T V W Y C

[0329] Posição 03: C E G K L N Q R W

[0330] Posição 04: A F G N S T V Y

[0331] Posição 05: A E G I M R V C

[0332] Posição 06: C E K L N R V

[0333] Posição 07: A C E I L S T V W

[0334] Posição 08: H K L M S T W Y

[0335] Posição 09: A I L M Q S R C

[0336] Posição 10: A I M S W Y

[0337] Posição 11: C I K L S V

[0338] Posição 12: C E K L P Q R T

[0339] Posição 13: A D H N W

[0340] Posição 14: A C G I L S T V M

[0341] Posição 15: A E G I K L M R V

[0342] Posição 16: G H L R S T V C

[0343] Posição 17: A I L V

[0344] Posição 18: A C D E G H I K M S

[0345] Posição 19: D E G L N V T

[0346] Em várias modalidades específicas:

[0347] (i) X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao longo do seu comprimento em relação a KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7);

[0348] (ii) X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo do seu comprimento em relação a KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7);

[0349] (iii) X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo do seu comprimento em relação a KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7);

[0350] (iv) X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7) de pelo menos 65%; X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 65%; X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 65%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322) de pelo menos 65%;

[0351] (v) X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7) de pelo menos 75%; X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 75%; X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 75%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMNAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322) de pelo menos 75%;

[0352] (vi) X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7) de pelo menos 80%; X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 80%; X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 80%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322) de pelo menos 80%;

[0353] (vii) X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7) de pelo menos 90%; X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320) de pelo menos 90%; X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321) de pelo menos 90%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322) de pelo menos 90%; ou

[0354] (viii) X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7); X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4)

ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade para o comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322).

[0355] Em modalidades exemplificativas de (i) a (viii) acima, os resíduos de aminoácidos opcionais listados na SEQ ID NO: 7 estão presentes. Em modalidades exemplificativas de (i) a (viii) acima, os peptídeos para X1, X3 e X4 são mostrados nas SEQ ID NOs: 4, 5 e 6. Em modalidades exemplificativas de (i) a (viii) acima, os peptídeos para X1, X3 e X4 são mostrados nas SEQ ID NOs: 320, 321 e 322.

[0356] Em várias modalidades:

[0357] (i) o primeiro componente polipeptídico inclui um de X1, X2, X3 e X4, e o segundo componente polipeptídico inclui os três de X1, X2, X3 e X4 que não estão presentes no primeiro componente polipeptídico; ou

[0358] (ii) o primeiro componente polipeptídico inclui dois de X1, X2, X3 e X4, e o segundo componente polipeptídico inclui os dois de X1, X2, X3 e X4 que não estão presentes no primeiro componente polipeptídico.

[0359] Em outras modalidades;

[0360] (a) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e exclui X2, X3 e X4; e o segundo polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X3-Z1-X2-Z2-X4 e excluindo X1;

[0361] (b) o primeiro polipeptídeo compreende X4 e exclui X1, X2 e X3; e o segundo polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X1-Z1-X3-Z2-X2 e excluindo X4; ou

[0362] (c) o primeiro polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X1-Z1-X3 e excluindo X2 e X4; e o segundo polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X2-Z1-X4 e excluindo X1 e X3;

[0363] em que cada um de Z1 e Z2 independentemente é um ligante de aminoácido opcional. Z1 e/ou Z2 podem compreender qualquer número de resíduos de aminoácidos para separar domínios dentro do primeiro e/ou segundo polipeptídeo conforme considerado apropriado para um uso pretendido. Os ligantes 1 e/ou Z2 podem ser de qualquer comprimento e composição de aminoácidos adequados. Em uma modalidade, Z1 e Z2 estão ambos ausentes; em outra modalidade, 1 e 2 estão ambos presentes; em uma outra modalidade, um de Z1 e Z2 está presente e o outro está ausente.

[0364] Em outras modalidades, X1, X2, X3 e X4, respectivamente, compreendem um peptídeo pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntico, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo (SEQ ID NOs: 4-7), onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes:

[0365] X1: PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4)

[0366] X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7)

[0367] X3: (LE)DYAFNFELILEEIARLF(ESG) (SEQ ID NO: 5)

[0368] X4: (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6)

[0369] Em outras modalidades, X1, X2, X3 e X4 são peptídeos compreendendo sequências de aminoácidos pelo menos 80% idênticas, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo (SEQ ID NOs: 4-7), onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes:

[0370] X1: PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID

NO: 4)

[0371] X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7)

[0372] X3: (LE)DYAFNFELILEEIARLF(ESG) (SEQ ID NO: 5)

[0373] X4: (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6)

[0374] Em outras modalidades, X1, X2, X3 e X4 são peptídeos compreendendo sequências de aminoácidos pelo menos 90% idênticas, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo (SEQ ID NOs: 4-7), onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes:

[0375] X1: PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4)

[0376] X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7)

[0377] X3: (LE)DYAFNFELILEEIARLF(ESG) (SEQ ID NO: 5)

[0378] X4: (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

[0379] Em outras modalidades, X1, X2, X3 e X4, respectivamente, são 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idênticos, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes:

[0380] X1: QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320)

[0381] X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7)

[0382] X3: LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321)

[0383] X4: DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322).

[0384] Em outras modalidades, X1, X2, X3 e X4, respectivamente, são peptídeos compreendendo sequências de aminoácidos pelo menos 80% idênticas, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes:

[0385] X1: QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320)

[0386] X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7)

[0387] X3: LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321)

[0388] X4: DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322).

[0389] Em outras modalidades, X1, X2, X3 e X4, respectivamente, são peptídeos compreendendo sequências de aminoácidos pelo menos 90% idênticas, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes:

[0390] X1: QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320)

[0391] X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7)

[0392] X3: LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321)

[0393] X4: DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 322).

[0394] Em uma modalidade, um ou mais ou todos os aminoácidos opcionais estão presentes; em outra modalidade, um ou mais ou todos os aminoácidos opcionais estão ausentes. Em outras modalidades:

[0395] (i) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 320 de pelo menos 55%; X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 de pelo menos 55%, X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 321 de pelo menos 55%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 322 de pelo menos 55%;

[0396] (ii) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 320 de pelo menos 75%; X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 de pelo menos 75%, X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 321 de pelo menos 75%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 322 de pelo menos 75%;

[0397] (iii) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 320 de pelo menos 80%; X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 de pelo menos 80%, X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 321 de pelo menos 80%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 322 de pelo menos 80%;

[0398] (iv) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 320 de pelo menos 90%; X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7 de pelo menos 90%, X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 321 de pelo menos 90%; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo identidade para o comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 322 de pelo menos 90%; ou

[0399] (vi) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade em relação ao comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 320; X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade e relação ao comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 7; X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade em relação ao comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5 ou SEQ ID NO: 321; e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos tendo 100% de identidade em relação ao comprimento total da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 322.

[0400] Em modalidades exemplificativas de (i) a (vi) acima, os peptídeos para X1, X3 e X4 são mostrados em SEQ ID NOs: 4, 5 e 6. Em modalidades exemplificativas de (i) a (vi) acima, os peptídeos para X1, X3 e X4 são mostrados em SEQ ID NOs: 320, 321 e 322.

[0401] Em outra modalidade, o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo são pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%,

50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idênticos a um par de primeiro e segundo polipeptídeos mostrados abaixo (resíduos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do dom nio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido):

[0402] (i)

[0403] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 256) e

[0404] Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

TNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTA SEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 257)

[0405] (ii)

[0406] Primeiro polipeptídeo X1-X3-X2

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD QKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS (SEQ ID NO: 258) e

[0407] Segundo polipeptídeo X4 TTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 259);

[0408] (iii)

[0409] Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD (SEQ ID NO: 260) e

[0410] Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 261)

[0411] (iv)

[0412] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNS (SEQ ID NO: 262)

[0413] Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

TNSPPAEEQLERFAKRFERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTT ASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 263)

[0414] (v)

[0415] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXX (SEQ ID NO: 311) e

[0416] Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

XXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXX XEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 264)

[0417] (vi)

[0418] Primeiro polipeptídeo X1-X3-X2

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESGX XKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS (SEQ ID NO: 265) e

[0419] Segundo polipeptídeo X4 XXXXXDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 266);

[0420] (vii)

[0421] Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESXX GD (SEQ ID NO: 267) e

[0422] Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 268)

[0423] (viii)

[0424] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXX (SEQ ID NO: 269)

[0425] Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

XXXXXXXXQLERFAKRFERNLWGIARLFESGXXKDEAEKAKRMIEWMKRIKTX XXEDEQEEMANAIITILQSWFFS(SEQ ID NO: 270)

[0426] (ix)

[0427] Primeiro polipeptídeo >Neo4_H1-H3

[0428] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQ LERFAKRFERNLWGIARLFESGD (SEQ ID NO: 312)

[0429] Segundo polipeptídeo >Neo4_H2-H4

[0430] DQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTASEDEQEE

MANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 313)

[0431] (x)

[0432] Primeiro polipeptídeo >Neo4_H1-H3

[0433] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXQ LERFAKRFERNLWGIARLFESXX (SEQ ID NO: 314)

[0434] Segundo polipeptídeo >Neo4_H2-H4

[0435] XXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXXXEDEQEE MANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 315)

[0436] (xi)

[0437] Primeiro polipeptídeo Neo4_H1-H3 -H2

[0438] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQ LERFAKRFERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTA (SEQ ID NO: 316)

[0439] Segundo polipeptídeo Neo4_H4

[0440] TTASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 317)

[0441] (xii)

[0442] Primeiro polipeptídeo Neo4_H1-H3 -H2

[0443] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXX LERFAKRFERNLWGIARLFESXXXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXX (SEQ ID NO: 318)

[0444] Segundo polipeptídeo Neo4_H4

[0445] XXXXXDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 319)

[0446] (xiii)

[0447] Primeiro polipeptídeo (X1)

[0448] PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVGGSS (SEQ ID NO: 323), ou SKEAIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 324), ou

[0449] PIQLHAEHALYDALMILNIV (SEQ ID NO: 325)

[0450] Segundo polipeptídeo (X3-X2 -X4)

[0451] PKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEK AKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 326); ou

[0452] GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSS GGKDEAEKAKRMKEWMKRITGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 327); ou

[0453] GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSS GGGGEAEKAKRMKEWMKRIGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 328).

[0454] Em modalidades exemplificativas, o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo são peptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica a um par de primeiro e segundo polipeptídeos mostrados nas modalidades (i) - (viii) acima (resíduos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do dom nio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido).

[0455] Em modalidades exemplificativas, o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo são peptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica a um par de primeiro e segundo polipeptídeos mostrados nas modalidades (i) - (viii) acima (resíduos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do dom nio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido).

[0456] Em modalidades exemplificativas, o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo são peptídeos compreendendo uma sequência de aminoácidos 100% idêntica a um par de primeiro e segundo polipeptídeos mostrados nas modalidades (i) - (viii) acima (resíduos sublinhados ou res duos X s o opcional e cada res duo do dom nio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido).

[0457] Em várias outras modalidades, X1, X2, X3 e X4, respectivamente, compreendem um peptídeo pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntico a, respectivamente, domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1 (embora listados como domínios H1, H2, H3 e H4) presentes na sequência de aminoácidos das SEQ ID NOs: 11-94, 190-216, 247 e SEQ ID NOs: 275-300.

[0458] A Tabela 1 fornece duas SEQ ID NOs para muitas das variantes: uma primeira SEQ ID NO: que lista as posições do ligante como opcionais e variáveis (mostradas em sublinhado na tabela), e uma segunda SEQ ID NO: que inclui as posições do ligante como requeridas. A Tabela 1 mostra a disposição de domínios para o polipeptídeo das SEQ ID NOs: 11-94, 190-216, 247 e SEQ ID NOs: 275-300 (ver a segunda coluna), enquanto a sequência mostra ligantes de aminoácidos sublinhados separando domínios. Ver, por exemplo, SEQ ID NO: 11, tendo a disposição de domínio H1->H4->H2 - >H3 (correspondendo a uma disposição X1-X4-X2-X3):

[0459] STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNEN

LNRAITAAQSWISTGKIDLDKAEDIRRNSDQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILL EAR (SEQ ID NO: 11)

[0460] Como será evidente para os versados na técnica com base nessa disposição, na SEQ ID NO: 11, o domínio X1 é STKKWQLQAEHALLDWQMALNK (SEQ ID NO: 271), o domínio X4 é ENLNRAITAAQSWIS (SEQ ID NO: 272), o domínio X2 é LDKAEDIRRNSDQARREAEK (SEQ ID NO: 273) e o domínio X3 é RDLISNAQVILLEAR (SEQ ID NO: 274). Da mesma forma, a sequência de aminoácidos de cada domínio X1, X2, X3 e X4 SEQ ID NOs: 11-94, 190-216, 247 e SEQ ID NOs: 275-300 será clara para aqueles versados na técnica com base nos ensinamentos aqui. Como será entendido por aqueles versados na técnica, os aminoácidos X1, X2, X3 e/ou X4 podem incluir (1, 2, 3, 4, 5 ou mais) aminoácidos adicionais no N-terminal N e/ou no C-terminal em relação aos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados em SEQ ID NOs: 11-94, 190-216, 247 e SEQ ID NOs: 275-300. TABELA 1

Nome Disposição de Sequência domínio G1_neo2_33 H1->H4->H2 ->H3 STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNE

NLNRAITAAQSWISTGKIDLDKAEDIRRNS

DQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILLEAR (SEQ ID NO: 11)

STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNE NLNRAITAAQSWISTGKIDLDKAEDIRRNS

DQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILLEAR (SEQ ID NO: 103) G1_neo2_34 H1->H4->H2 ->H3 STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNE

NLNRAITAAQSCISTGKCDLDKAEDIRRNS

DQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILLEAR (SEQ ID NO: 12)

STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNE NLNRAITAAQSCISTGKCDLDKAEDIRRNS

DQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILLEAR (SEQ ID NO: 104) G1_neo2_35 H1->H4->H2 ->H3 STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNE

NLNRAITAAQSWISTGKIDCDKAEDIRRNS

DQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILLEAC (SEQ ID NO: 13)

STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNE NLNRAITAAQSWISTGKIDCDKAEDIRRNS

DQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILLEAC (SEQ ID NO: 105) G1_neo2_36 H1->H4->H2 ->H3 STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE

LNRAITDAQSWISTGKIDLDRAEELARNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALELK (SEQ ID NO: 14)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE LNRAITDAQSWISTGKIDLDRAEELARNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALELK (SEQ ID NO: 106)

G1_neo2_37 H1->H4->H2 ->H3 STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE

LNRCITDAQSWISTGKIDLDRAEECARNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALELK (SEQ ID NO: 15)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE LNRCITDAQSWISTGKIDLDRAEECARNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALELK (SEQ ID NO: 107) G1_neo2_38 H1->H4->H2 ->H3 STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE

LNRAITDAQSCISTGKCDLDRAEELARNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALELK (SEQ ID NO: 16)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE LNRAITDAQSCISTGKCDLDRAEELARNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALELK (SEQ ID NO: 108) G1_neo2_39 H1->H4->H2 ->H3 STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE

LNRAITDAQSWISTGKIDLDRAEELCRNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNACVIALELK (SEQ ID NO: 17)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEE LNRAITDAQSWISTGKIDLDRAEELCRNLE

KVRDEALKRGIDVRDLVSNACVIALELK (SEQ ID NO: 109) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKLQLQAEHALLDAQMMLNRSPEPNE

KLNRIITTMQSWISTGKIDLDGAKELAKEV

EELRQEAEKRGIDVRDLASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 18)

STKKLQLQAEHALLDAQMMLNRSPEPNE KLNRIITTMQSWISTGKIDLDGAKELAKEV

EELRQEAEKRGIDVRDLASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 110) G1_neo2_41 H1->H4->H2 ->H3 STKKLQLQAEHALLDAQMMLNRSPEPNE

KLNRIITTMQSCISTGKCDLDGAKELAKEV

EELRQEAEKRGIDVRDLASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 19)

STKKLQLQAEHALLDAQMMLNRSPEPNE KLNRIITTMQSCISTGKCDLDGAKELAKEV

EELRQEAEKRGIDVRDLASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 111)

G1_neo2_42 H1->H4->H2 ->H3 STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNES

LNRMITWLQSWISTGKIDLDNAQEMAKEA

EKIRKEMEKRGIDVRDLISNIIVILLELS (SEQ ID NO: 20)

STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNES LNRMITWLQSWISTGKIDLDNAQEMAKEA

EKIRKEMEKRGIDVRDLISNIIVILLELS (SEQ ID NO: 112) G1_neo2_43 H1->H4->H2 ->H3 STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNES

LNRMITWLQSCISTGKCDLDNAQEMAKEA

EKIRKEMEKRGIDVRDLISNIIVILLELS (SEQ ID NO: 21)

STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNES LNRMITWLQSCISTGKCDLDNAQEMAKEA

EKIRKEMEKRGIDVRDLISNIIVILLELS (SEQ ID NO: 113) G1_neo2_44 H1->H4->H2 ->H3 STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNES

LNRMITWLQSWISTGKIDLDNAQEMCKEA

EKIRKEMEKRGIDVRDLISNICVILLELS (SEQ ID NO: 22)

STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNES LNRMITWLQSWISTGKIDLDNAQEMCKEA

EKIRKEMEKRGIDVRDLISNICVILLELS (SEQ ID NO: 114) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDAFMMLNVVPEPNEK _1A LNRIITTMQSWIYTGKIDADGAKELAKEVE

ELEQEYEKRGIDVEDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 23)

STKKTQLLAEHALLDAFMMLNVVPEPNEK LNRIITTMQSWIYTGKIDADGAKELAKEVE

ELEQEYEKRGIDVEDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 115) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDAHMMLNMLPEPNEK _1B LNRIITTMQSWIHTGKIDGDGAQELAKEVE

ELEQEYEKRGIDVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 24)

STKKTQLLAEHALLDAHMMLNMLPEPNEK LNRIITTMQSWIHTGKIDGDGAQELAKEVE

ELEQEYEKRGIDVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 116)

G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDAFMMLNMVPEPNEK _1C LNRIITTMQSWIFTGKIDGDGAKELAKEVE

ELEQEFEKRGIDVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 25)

STKKTQLLAEHALLDAFMMLNMVPEPNEK LNRIITTMQSWIFTGKIDGDGAKELAKEVE

ELEQEFEKRGIDVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 117) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDALMMLNMVPEPNEK _1D LNRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 26)

STKKTQLLAEHALLDALMMLNMVPEPNEK LNRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 118) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDAHMMLNVVPEPNEK _1E LNRIITTMQSWIYTGKIDRDGAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 27)

STKKTQLLAEHALLDAHMMLNVVPEPNEK LNRIITTMQSWIYTGKIDRDGAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 119) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDALMMLNLLPEPNEKL _1F NRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQELAKEVEE

LEQEHEKRGIDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 28)

STKKTQLLAEHALLDALMMLNLLPEPNEKL NRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQELAKEVEE

LEQEHEKRGIDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 120) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDAYMMLNMVPEPNEK _1G LNRIITTMQSWILTGKIDSDGAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 29)

STKKTQLLAEHALLDAYMMLNMVPEPNEK LNRIITTMQSWILTGKIDSDGAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 121) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTHLLAEHALLDAYMMLNVMPEPNEK

_1H LNRIITTMQSWIFTGKIDGDGAKELAKEVE

ELEQEFEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 30)

STKKTHLLAEHALLDAYMMLNVMPEPNEK LNRIITTMQSWIFTGKIDGDGAKELAKEVE

ELEQEFEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 122) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLAEHALLDAYMMLNLVPEPNEK _1I LNRIITTMQSWIFTGKIDADGAQELAIEVEE

LEQEYEKRGIDVDDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 31)

STKKTQLLAEHALLDAYMMLNLVPEPNEK LNRIITTMQSWIFTGKIDADGAQELAIEVEE

LEQEYEKRGIDVDDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 123) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLMAEHALLDAFMMLNVLPEPNEK _1J LNRIITTMQSWIFTGKIDGDDAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 32)

STKKTQLMAEHALLDAFMMLNVLPEPNEK LNRIITTMQSWIFTGKIDGDDAQELAKEVE

ELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 124) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLIEHALLDALDMSRNLPEPNEKL _1F_H1 SRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQQLAKEVEE

LEQEHEKRGEDVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 33)

STKKTQLLIEHALLDALDMSRNLPEPNEKL SRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQQLAKEVEE

LEQEHEKRGEDVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 125) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLLEHALLDALHMRRNLPEPNEK _1F_H2 LSRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQELAKEVE

ELEQEHEKRGRDVEDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 34)

STKKTQLLLEHALLDALHMRRNLPEPNEK LSRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQELAKEVE

ELEQEHEKRGRDVEDDASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 126) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLIEHALLDALNMRKKLPEPNEKL _1F_H3 SRIITDMQSWIFTGKIDGDGAQQLAKEVEE

LEQEHEKRGGDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 35)

STKKTQLLIEHALLDALNMRKKLPEPNEKL SRIITDMQSWIFTGKIDGDGAQQLAKEVEE

LEQEHEKRGGDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 127) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLLEHALLDALHMSRELPEPNEKL _1F_H4 NRIITDMQSWIFTGKIDGDGAQDLAKEVEE

LEQEHEKRGGDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 36)

STKKTQLLLEHALLDALHMSRELPEPNEKL NRIITDMQSWIFTGKIDGDGAQDLAKEVEE

LEQEHEKRGGDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 128) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLIEHALLDALHMSRKLPEPNEKL _1F_H5 SRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQHLAKEVEE

LEQEHEKRGGEVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 37)

STKKTQLLIEHALLDALHMSRKLPEPNEKL SRIITTMQSWIFTGKIDGDGAQHLAKEVEE

LEQEHEKRGGEVEDEASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 129) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKKTQLLIEHALLDALHMKRKLPEPNEKL _1F_H6 NRIITNMQSWIFTEKIDGDGAQDLAKEVEE

LEQEHEKRGQDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 38)

STKKTQLLIEHALLDALHMKRKLPEPNEKL NRIITNMQSWIFTEKIDGDGAQDLAKEVEE

LEQEHEKRGQDVEDYASNLKVILLELA (SEQ ID NO: 130) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STEKTQLAAEHALRDALMLKHLLNEPNEK _1F_M1 LARIITTMQSWQFTGKIDGDGAQELAKEV

EELQQEHEVRGIDVEDYASNLKVILLHLA (SEQ ID NO: 39)

STEKTQLAAEHALRDALMLKHLLNEPNEK LARIITTMQSWQFTGKIDGDGAQELAKEV

EELQQEHEVRGIDVEDYASNLKVILLHLA (SEQ ID NO: 131) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STKNTQLAAEDALLDALMLRNLLNEPNEK _1F_M2 LARIITTMQSWQFTEKIDGDGAQELAKEVE

ELQQEHEERGIDVEDYASNLKVILLQLA

(SEQ ID NO: 40)

STKNTQLAAEDALLDALMLRNLLNEPNEK LARIITTMQSWQFTEKIDGDGAQELAKEVE

ELQQEHEERGIDVEDYASNLKVILLQLA (SEQ ID NO: 132) G1_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 STEKTQHAAEDALRDALMLRNLLNEPNEK _1F_M3 LARIITTMQSWQFTEKIDGDGAQELAKEVE

ELQQEHEVRGIDVEDYASNLKVILLQLA (SEQ ID NO: 41)

STEKTQHAAEDALRDALMLRNLLNEPNEK LARIITTMQSWQFTEKIDGDGAQELAKEVE

ELQQEHEVRGIDVEDYASNLKVILLQLA (SEQ ID NO: 133) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TQKKQQLLAEHALLDALMILNMLKTSSEAV _1F_seq02 NRMITIAQSWIFTGTSNPEEAKEMIKMAEQ

AEEEARREGVDTEDYVSNLKVILKEIA (SEQ ID NO: 42)

TQKKQQLLAEHALLDALMILNMLKTSSEAV NRMITIAQSWIFTGTSNPEEAKEMIKMAEQ

AEEEARREGVDTEDYVSNLKVILKEIA (SEQ ID NO: 134) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TTKKYQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEK _1F_seq03 MNRIITTMQSWIFTGTFDPDQAEELAKLVE

ELREEFRKRGIDTEDYASNLKVILKELS (SEQ ID NO: 43)

TTKKYQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEK MNRIITTMQSWIFTGTFDPDQAEELAKLVE

ELREEFRKRGIDTEDYASNLKVILKELS (SEQ ID NO: 135) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TTKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLN _1F_seq04 RIITTLQSWIFRGEIDPDRARELAKLLEEIR EEMRKRGIDTEDYVSNMIVIIRELA (SEQ ID NO: 44)

TTKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLN

RIITTLQSWIFRGEIDPDRARELAKLLEEIR EEMRKRGIDTEDYVSNMIVIIRELA (SEQ ID NO: 136) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLAEHVLLDLLMMLNLSSESNEKM _1F_seq05 NRLITIVQSWIFTGTIDPDQAEEMAKWVEE

LREEFRKRGIDTEDYASNVKVILKELS

(SEQ ID NO: 45)

TKKKIQLLAEHVLLDLLMMLNLSSESNEKM NRLITIVQSWIFTGTIDPDQAEEMAKWVEE

LREEFRKRGIDTEDYASNVKVILKELS (SEQ ID NO: 137) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKYQLLIEHLLLDALMVLNMSSESNEKL _1F_seq06 NRIITILQSWIFTGTWDPDLAEEMEKLMQE

IEEELRRRGIDTEDYMSNMRVIIKELS (SEQ ID NO: 46)

TKKKYQLLIEHLLLDALMVLNMSSESNEKL NRIITILQSWIFTGTWDPDLAEEMEKLMQE

IEEELRRRGIDTEDYMSNMRVIIKELS (SEQ ID NO: 138) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKLQLLVEHLLLDMLMILNMSSESNEKL _1F_seq07 NRLITELQSWIFRGEIDPDKAEEMWKIMEE IEKELRERGIDTEDYMSNAKVIIKELS (SEQ ID NO: 47)

TKKKLQLLVEHLLLDMLMILNMSSESNEKL

NRLITELQSWIFRGEIDPDKAEEMWKIMEE IEKELRERGIDTEDYMSNAKVIIKELS (SEQ ID NO: 139) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TSKKQQLLAEHALLDALMILNISSESSEAV _1F_seq08 NRAITWLQSWIFKGTVNPDQAEEMRKLAE

QIREEMRKRGIDTEDYVSNLEVIAKELS (SEQ ID NO: 48)

TSKKQQLLAEHALLDALMILNISSESSEAV NRAITWLQSWIFKGTVNPDQAEEMRKLAE

QIREEMRKRGIDTEDYVSNLEVIAKELS (SEQ ID NO: 140) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKYQLLIEHLLLDLLMVLNMSSESNEKI _1F_seq09 NRLITWLQSWIFTGTYDPDLAEEMYKILEE

LREEMRERGIDTEDYMSNMRVIVKELS (SEQ ID NO: 49)

TKKKYQLLIEHLLLDLLMVLNMSSESNEKI NRLITWLQSWIFTGTYDPDLAEEMYKILEE

LREEMRERGIDTEDYMSNMRVIVKELS (SEQ ID NO: 141) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKWQLLIEHLLLDLLMILNLSSESNEKLN _1F_seq10 RLITWLQSWIFTGTYDPDLAEEMKKMMDE IEDELRERGIDTEDYMSNAKVIIKELS (SEQ ID NO: 50)

TKKKWQLLIEHLLLDLLMILNLSSESNEKLN

RLITWLQSWIFTGTYDPDLAEEMKKMMDE IEDELRERGIDTEDYMSNAKVIIKELS (SEQ ID NO: 142) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLN _1F_seq11 RIITTMQSWIFTGTIDPDQAEELSKLVEEIR EEMRKRGIDTEDYVSNLKVILDELS (SEQ ID NO: 51)

TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLN

RIITTMQSWIFTGTIDPDQAEELSKLVEEIR EEMRKRGIDTEDYVSNLKVILDELS (SEQ ID NO: 143) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TEKKLQLLVEHALLDALMILNLWSESNEKL _1F_seq12 NRIITTMQSWIFTGRIDPDKAEELAKLVEEL REEARERGIDTEDYVSNLKVILKELS (SEQ ID NO: 52)

TEKKLQLLVEHALLDALMILNLWSESNEKL

NRIITTMQSWIFTGRIDPDKAEELAKLVEEL REEARERGIDTEDYVSNLKVILKELS (SEQ ID NO: 144) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKYQLLMEHLLLDLLMVLNMSSESNEK _1F_seq13 LNRLITIIQSWIFTGTWDPDKAEEMAKMLK

EIEDELRERGIDTEDYMSNMIVIMKELS (SEQ ID NO: 53)

TKKKYQLLMEHLLLDLLMVLNMSSESNEK LNRLITIIQSWIFTGTWDPDKAEEMAKMLK

EIEDELRERGIDTEDYMSNMIVIMKELS (SEQ ID NO: 145) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TTKKIQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKM _1F_seq14 NRIITTMQSWIFEGRIDPDQAQELAKLVEE

LREEFRKRGIDTEDYVSNLKVILEELS (SEQ ID NO: 54)

TTKKIQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKM NRIITTMQSWIFEGRIDPDQAQELAKLVEE

LREEFRKRGIDTEDYVSNLKVILEELS (SEQ ID NO: 146) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKL _1F_seq15 NRIITTMQSWIFTGTIDPDQAEELAKLVREL REEFRKRGIDTEDYASNLEVILRELS (SEQ ID NO: 55)

TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKL

NRIITTMQSWIFTGTIDPDQAEELAKLVREL REEFRKRGIDTEDYASNLEVILRELS (SEQ ID NO: 147) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSKSNEKLN _1F_seq16 RIITTMQSWIFNGTIDPDRARELAKLVEEIR DEMEKNGIDTEDYVSNLKVILEELA (SEQ ID NO: 56)

TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSKSNEKLN

RIITTMQSWIFNGTIDPDRARELAKLVEEIR DEMEKNGIDTEDYVSNLKVILEELA (SEQ ID NO: 148) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKYQLLIEHVLLDLLMLLNLSSESNEKM _1F_seq17 NRLITILQSWIFTGTYDPDKAEEMAKLLKE LREEFRERGIDTEDYISNAIVILKELS (SEQ ID NO: 57)

TKKKYQLLIEHVLLDLLMLLNLSSESNEKM

NRLITILQSWIFTGTYDPDKAEEMAKLLKE LREEFRERGIDTEDYISNAIVILKELS (SEQ ID NO: 149) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKL _1F_seq18 NRIITTMQSWIFTGTIDPDRAEELAKLVEEL REEFRKRGIDTEDYASNLKVILKELS (SEQ ID NO: 58)

TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKL

NRIITTMQSWIFTGTIDPDRAEELAKLVEEL REEFRKRGIDTEDYASNLKVILKELS (SEQ ID NO: 150) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKL _1F_seq19 NRIITTMQSWIFNGTIDPDQARELAKLVEE

LREEFRKRGIDTEDYASNLKVILEELA (SEQ ID NO: 59)

TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKL NRIITTMQSWIFNGTIDPDQARELAKLVEE

LREEFRKRGIDTEDYASNLKVILEELA (SEQ ID NO: 151) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKLQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKL _1F_seq20 NRIITTMQSWIFTGTVDPDQAEELAKLVEE IREELRKRGIDTEDYVSNLKVILKELS (SEQ ID NO: 60)

TKKKLQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKL NRIITTMQSWIFTGTVDPDQAEELAKLVEE

IREELRKRGIDTEDYVSNLKVILKELS (SEQ ID NO: 152) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TTKKYQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKL _1F_seq21 NRIITTMQSWIFTGTFDPDQAEELAKLVRE

IREEMRKRGIDTEDYVSNLEVILRELS (SEQ ID NO: 61)

TTKKYQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKL NRIITTMQSWIFTGTFDPDQAEELAKLVRE

IREEMRKRGIDTEDYVSNLEVILRELS (SEQ ID NO: 153) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLN _1F_seq22 RIITTMQSWIFTGTIDPDRAEELAKLVREIR EEMRKRGIDTEDYVSNLEVILRELS (SEQ ID NO: 62)

TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLN

RIITTMQSWIFTGTIDPDRAEELAKLVREIR EEMRKRGIDTEDYVSNLEVILRELS (SEQ ID NO: 154) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKYQLLIEHLLLDLLMILNLSSESNEKLN _1F_seq23 RLITWLQSWIFRGEWDPDKAEEWAKILKEI REELRERGIDTEDYMSNAIVIMKELS (SEQ ID NO: 63)

TKKKYQLLIEHLLLDLLMILNLSSESNEKLN

RLITWLQSWIFRGEWDPDKAEEWAKILKEI REELRERGIDTEDYMSNAIVIMKELS (SEQ ID NO: 155) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TDKKLQLLVEHLLLDLLMMLNLSSKSNEK _1F_seq24 MNRLITIAQSWIFTGKVDPDLAREMIKLLE

ETEDENRKNGIDTEDYVSNARVIAKELE (SEQ ID NO: 64)

TDKKLQLLVEHLLLDLLMMLNLSSKSNEK MNRLITIAQSWIFTGKVDPDLAREMIKLLE

ETEDENRKNGIDTEDYVSNARVIAKELE (SEQ ID NO: 156) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKIQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKM _1F_seq25 NRIITTMQSWIFTGTIDPDQAEELAKLVEEL KEEFKKRGIDTEDYVSNLKVILKELS (SEQ ID NO: 65)

TKKKIQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKM NRIITTMQSWIFTGTIDPDQAEELAKLVEEL KEEFKKRGIDTEDYVSNLKVILKELS (SEQ

ID NO: 157) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKYQLLIEHALLDALMILNLWSESNEKL _1F_seq26 NRIITTMQSWIFTGTYDPDKAEELEKLAKEI EDEARERGIDTEDYMSNLRVILKELS (SEQ ID NO: 66)

TKKKYQLLIEHALLDALMILNLWSESNEKL

NRIITTMQSWIFTGTYDPDKAEELEKLAKEI EDEARERGIDTEDYMSNLRVILKELS (SEQ ID NO: 158) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKKAQLLAEHALLDALMLLNLSSESNERL _1F_seq27 NRIITWLQSIIFTGTYDPDMVKEAVKLADEI

EDEMRKRGIDTEDYVSNLRVILQELA (SEQ ID NO: 67)

TKKKAQLLAEHALLDALMLLNLSSESNERL NRIITWLQSIIFTGTYDPDMVKEAVKLADEI

EDEMRKRGIDTEDYVSNLRVILQELA (SEQ ID NO: 159) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TQKKNQLLAEHLLLDALMVLNQSSESSEV _1F_seq28 ANRIITWAQSWIFEGRVDPNKAEEAKKLA

KKLEEEMRKRGIDMEDYISNMKVIAEEMS (SEQ ID NO: 68)

TQKKNQLLAEHLLLDALMVLNQSSESSEV ANRIITWAQSWIFEGRVDPNKAEEAKKLA

KKLEEEMRKRGIDMEDYISNMKVIAEEMS (SEQ ID NO: 160) G2_neo2_40 H3->H2 ->H4->H1 EDYYSNLKVILEELAREMERNGLSDKAEE _1F_seq29 WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN

RLITYIQSQIFEISERIRETDQEKKEESWKK WQLLLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 69)

EDYYSNLKVILEELAREMERNGLSDKAEE WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN

RLITYIQSQIFEISERIRETDQEKKEESWKK WQLLLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 161) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLLEHILLDALMLLNLXXXXXXNT _1F_seq30 ESKFEDYISNAEVIAEELAKLMESXXLSDE

AEKFKKIKQWLREVWRIWXXXXWSTLED KARELLNRIITTIQSQIFY (SEQ ID NO: 70)

PEKKRQLLLEHILLDALMLLNLLETNPQNT ESKFEDYISNAEVIAEELAKLMESLGLSDE AEKFKKIKQWLREVWRIWSSTNWSTLED

KARELLNRIITTIQSQIFY (SEQ ID NO: 162) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLLEHILLDLLMILNMXXXXXXNT _1F_seq31 ESEMEDYWSNVRVILRELARLMEEXXXKE

LSELMERMRKIVEKIRQIVTXXXXLDTARE WLNRLITWIQSLIFR (SEQ ID NO: 71)

PEKKRQLLLEHILLDLLMILNMIETNRENTE SEMEDYWSNVRVILRELARLMEELNYKEL

SELMERMRKIVEKIRQIVTNNSSLDTARE WLNRLITWIQSLIFR (SEQ ID NO: 163) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHALLDALMLLNIIETNSKNT _1F_seq32 ESKMEDYVSNLEVILTEFKKLAEKLNFSEE

AERAERMKRWARKAYQMMTLDLSLDKAK EMLNRIITILQSIIFN (SEQ ID NO: 72)

PEKKRQLLAEHALLDALMLLNIIETNSKNT ESKMEDYVSNLEVILTEFKKLAEKLNFSEE

AERAERMKRWARKAYQMMTLDLSLDKAK EMLNRIITILQSIIFN (SEQ ID NO: 164) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHLLLDVLMMLNGNASLKDY _1F_seq33 ASNAQVIADEFRELARELGLTDEAKKAEKII

EALERAREWLLNNKDKEKAKEALNRAITIA QSWIFN (SEQ ID NO: 73)

PEKKRQLLAEHLLLDVLMMLNGNASLKDY ASNAQVIADEFRELARELGLTDEAKKAEKII

EALERAREWLLNNKDKEKAKEALNRAITIA QSWIFN (SEQ ID NO: 165) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLLEHLLLDLLMILNMLRTNPKNIE _1F_seq34 SDWEDYMSNIEVIIEELRKIMESLGRSEKA

KEWKRMKQWVRRILEIVKNNSDLEEAKE WLNRLITIVQSEIFE (SEQ ID NO: 74)

PEKKRQLLLEHLLLDLLMILNMLRTNPKNIE SDWEDYMSNIEVIIEELRKIMESLGRSEKA

KEWKRMKQWVRRILEIVKNNSDLEEAKE WLNRLITIVQSEIFE (SEQ ID NO: 166) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 WEKKRQLLLEHLLLDLLMILNMWRTNPQN _1F_seq35 TESLMEDYMSNAKVIVEELARMMRSQGL

EDKAREWEEMKKRIEEIRQIIQNNSSKERA KEELNRLITYVQSEIFR (SEQ ID NO: 75)

WEKKRQLLLEHLLLDLLMILNMWRTNPQN TESLMEDYMSNAKVIVEELARMMRSQGL

EDKAREWEEMKKRIEEIRQIIQNNSSKERA KEELNRLITYVQSEIFR (SEQ ID NO: 167)

G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PKKKIQLLAEHALLDALMILNIVKTNSQNAE _1F_seq36 EKLEDYASNVEVILEEIARLMESGDQKDEA

EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANR IITLLQSWIFS (SEQ ID NO: 76)

PKKKIQLLAEHALLDALMILNIVKTNSQNAE EKLEDYASNVEVILEEIARLMESGDQKDEA

EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANR IITLLQSWIFS (SEQ ID NO: 168) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHALLDALMILNXXXXXXQN _1F_seq37 AEEKLEDYMSNVEVIMEEFARMMRXXXX

SEEAENAERIKKWVRKASSXXXSEEQRE MMNRAITLMQSWIFE (SEQ ID NO: 77)

PEKKRQLLAEHALLDALMILNILQTNPQNA EEKLEDYMSNVEVIMEEFARMMRNGDRS

EEAENAERIKKWVRKASSTASSEEQREM MNRAITLMQSWIFE (SEQ ID NO: 169) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHLLLDALMVLNMXXXXXXN _1F_seq38 TEEKLEDYISNMKVIIKEMIELMRSLXXXEE

AEKWKEALKAVEKIXXXXDSETARELANRI ITLAQSAIFY (SEQ ID NO: 78)

PEKKRQLLAEHLLLDALMVLNMLTTNSKN TEEKLEDYISNMKVIIKEMIELMRSLGRLEE

AEKWKEALKAVEKIGSRMDSETARELANR IITLAQSAIFY (SEQ ID NO: 170) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHALLDALMFLNLXXXXXXQ _1F_seq39 AEEKIEDYASNLRVIAEELARLFENLXXXD

EAQKAKDIKELAERARSXXSSEKRKEAMN RAITILQSMIFR (SEQ ID NO: 79)

PEKKRQLLAEHALLDALMFLNLVETNPDQ AEEKIEDYASNLRVIAEELARLFENLGRLD

EAQKAKDIKELAERARSRVSSEKRKEAMN RAITILQSMIFR (SEQ ID NO: 171) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHALLDALMILNIIRTNSDNTE _1F_seq40 SKLEDYISNLKVILEEIARLMESLGLSDEAE

KAKEAMRLADKAGSTASEEEKKEAMNRVI TWAQSWIFN (SEQ ID NO: 80)

PEKKRQLLAEHALLDALMILNIIRTNSDNTE SKLEDYISNLKVILEEIARLMESLGLSDEAE

KAKEAMRLADKAGSTASEEEKKEAMNRVI TWAQSWIFN (SEQ ID NO: 172) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHALLDALMMLNILRTNPDN

_1F_seq41 AEEKLEDYWSNLIVILREIAKLMESLGLTDE

AEKAKEAARWAEEARTTASKDQRRELAN RIITLLQSWIFS (SEQ ID NO: 81)

PEKKRQLLAEHALLDALMMLNILRTNPDN AEEKLEDYWSNLIVILREIAKLMESLGLTDE

AEKAKEAARWAEEARTTASKDQRRELAN RIITLLQSWIFS (SEQ ID NO: 173) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PEKKRQLLAEHLLLDALMILNIIETNEQNAE _1F_seq42 SKLEDYISNAKVILDEFREMARDLGLLDEA

KKAEKMKRWLEKMRSNASSDERREWAN RMITTAQSWIFN (SEQ ID NO: 82)

PEKKRQLLAEHLLLDALMILNIIETNEQNAE SKLEDYISNAKVILDEFREMARDLGLLDEA

KKAEKMKRWLEKMRSNASSDERREWAN RMITTAQSWIFN (SEQ ID NO: 174) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TNKKAQLHAEFALHDALMLLNLSSESNER _1F_seq27_ LNRIITWLQSIIFYGTYDPDMVKEAVKDAD S3 EIEDEMRKRGIDTEDYVSNLRLILQELA (SEQ ID NO: 83)

TNKKAQLHAEFALHDALMLLNLSSESNER LNRIITWLQSIIFYGTYDPDMVKEAVKDAD

EIEDEMRKRGIDTEDYVSNLRLILQELA (SEQ ID NO: 245) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TNKEAQLHAEFALYDALMLLNLSSESNER _1F_seq27_ LNRIITWLQSIIFYETYDPDMVKEAVKLADE S18 IEDEMRKRKIDTEDYVVNLRLILQELA (SEQ ID NO: 84)

TNKEAQLHAEFALYDALMLLNLSSESNER LNRIITWLQSIIFYETYDPDMVKEAVKLADE

IEDEMRKRKIDTEDYVVNLRLILQELA (SEQ ID NO: 175) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TKKDAELLAEFALYDALMLLNLSSESNERL _1F_seq27_ NEIITWLQSIIFYGTYDPDMVKEAVKLADEI S22 EDEMRKRGIDTEDYVSNLRLILQELA (SEQ ID NO: 85)

TKKDAELLAEFALYDALMLLNLSSESNERL

NEIITWLQSIIFYGTYDPDMVKEAVKLADEI EDEMRKRGIDTEDYVSNLRLILQELA (SEQ ID NO: 176) G2_neo2_40 H1->H4->H2 ->H3 TNKKAQLHAEFALYDALMLLNLSSESNER

_1F_seq27_ LNDIITWLQSIIFTGTYDPDMVKEAVKLADE S24 IEDEMRKRKIDTEDYVVNLRYILQELA (SEQ ID NO: 86)

TNKKAQLHAEFALYDALMLLNLSSESNER LNDIITWLQSIIFTGTYDPDMVKEAVKLADE

IEDEMRKRKIDTEDYVVNLRYILQELA (SEQ ID NO: 177) G2_neo2_40 H3->H2 ->H4->H1 EDYYSNLKLILEELAREMERNGLSDKAEE _1F_seq29_ WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN S6 RLITYIQSQIFEVLHGVGETDQEKKEESWK KWDLLLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 87)

EDYYSNLKLILEELAREMERNGLSDKAEE WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN

RLITYIQSQIFEVLHGVGETDQEKKEESWK KWDLLLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 178) G2_neo2_40 H3->H2 ->H4->H1 EDYYSNLKVILEELAREMERNGLSDKAEE _1F_seq29_ WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN S7 ELITYIQSQIFEVIEREGETDQEKKEESWK KWELHLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 88)

EDYYSNLKVILEELAREMERNGLSDKAEE WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN

ELITYIQSQIFEVIEREGETDQEKKEESWK KWELHLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 179) G2_neo2_40 H3->H2 ->H4->H1 EDYYSNLKLILEELAREMERNGLSDKAEE _1F_seq29_ WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN S8 RLITYIQSQIFEVLEGVGETDQEKKEESWK KWELHLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 89)

EDYYSNLKLILEELAREMERNGLSDKAEE WRQWKKIVERIRQIRSNNSDLNEAKELLN

RLITYIQSQIFEVLEGVGETDQEKKEESWK KWELHLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 180) Neoleucina- H1->H3->H2 ->H4 PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAE 2/15 EKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEA (ou seja, EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAI G2_neo2_40 ITILQSWIFS (SEQ ID NO: 90, versão 1) _1F_seq36_ PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAE

S11) EKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEA

EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAI ITILQSWIFS (SEQ ID NO: 90, versão 2)

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAE EKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEA

EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAI ITILQSWIFS (SEQ ID NO: 181) G2_neo2_40 H1->H3->H2 ->H4 PKKKIQLLAEHALFDLLMILNIVKTNSQNAE _1F_seq36_ EKLEDYAYNAGVILEEIARLFESGDQKDEA S12 EKAKRMKEWMKRIKDTASEDEQEEMANE IITILQSWNFS (SEQ ID NO: 91)

PKKKIQLLAEHALFDLLMILNIVKTNSQNAE EKLEDYAYNAGVILEEIARLFESGDQKDEA

EKAKRMKEWMKRIKDTASEDEQEEMANE IITILQSWNFS (SEQ ID NO: 182) Neoleucina- H1->H3->H2 ->H4 PKKKIQLYAEHALYDALMILNIVKTNSPPAE 2/15-H8Y- EELEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEA K33E EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAI ITILQSWIFS (SEQ ID NO: 94)

PKKKIQLYAEHALYDALMILNIVKTNSPPAE EELEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEA

EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAI ITILQSWIFS (SEQ ID NO: 246) Neoleucina- H1->H3->H2 ->H4 PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAE 2/15 EKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEA (K32 é EKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAI considerado ITILQSWIFS (SEQ ID NO: 247) como sendo um resíduo do ligante opcional nessa sequência retratada) IL4_G2_neo PKKKIQITAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRFERNL 2_40_1F_se WGIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEM q36_S11 ANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 92)

PKKKIQITAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRFERNL

WGIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEM ANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 183)

Neoleucina- PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRFERNL 4 WGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTASEDEQEEMA (ou seja, NAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 93) IL4_G2_neo PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRFERNL 2_40_1F_se WGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTASEDEQEEMA q36_S11_MI NAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 184) F) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R50C EEIACLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 275) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E53C EEIARLFCSGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 276) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_D56C EEIARLFESGCQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 277) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_K58C EEIARLFESGXXCDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 278) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_D59C EEIARLFESGXXKCEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 279) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E62C EEIARLFESGXXKDEACKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 280) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R66C EEIARLFESGXXKDEAEKAKCMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 281) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E69C EEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKCWMKRIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 282) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R73C EEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 283) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_T77C EEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTCASEDEQEEMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 284) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E82C EEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA

NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 285) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E85C EEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQECMA NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 286) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R50C_ EEIACLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA R73C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 287) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E53C_ EEIARLFCSGXXKDEAEKAKRMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA R73C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 288) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_D56C_ EEIARLFESGCQKDEAEKAKRMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA R73C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 289) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_K58C_ EEIARLFESGXXCDEAEKAKRMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA R73C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 290) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_D59C_ EEIARLFESGXXKCEAEKAKRMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA R73C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 291) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R66C_ EEIARLFESGXXKDEAEKAKCMKEWMKCIKTXXXEDEQEEMA R73C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 292) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R50C_ EEIACLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 293) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E53C_ EEIARLFCSGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 294) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_D56C_ EEIARLFESGCQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 295) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_K58C_ EEIARLFESGXXCDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 296) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_D59C_ EEIARLFESGXXKCEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 297) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL

2/15_E62C_ EEIARLFESGXXKDEACKAKRMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 298) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_R66C_ EEIARLFESGXXKDEAEKAKCMKEWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 299) Neoleucina- PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELIL 2/15_E69C_ EEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKCWMKRIKTXXXEDCQEEMA E82C NAIITILQSWIFS* (SEQ ID NO: 300)

[0461] Em uma modalidade específica, X1, X2, X3 e X4, respectivamente, são 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idênticos, respectivamente, aos domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1 (embora listados como domínios H1, H2, H3 e H4) presentes na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90 versão 1 ou 2, que têm a mesma sequência de aminoácidos primária, mas que diferem ligeiramente em resíduos de ligante opcionais/variáveis. Em várias modalidades, essa modalidade pode incluir variantes dos domínios X1, X2, X3 e/ou X4 presentes na SEQ ID NO: 90 versão 1 ou 2 que incorporam as mutações em relação à sequência de aminoácidos primária SEQ ID NO: 90 mostrada em SEQ ID NOs: 275-300.

[0462] Em uma modalidade de qualquer modalidade ou combinação de modalidades aqui divulgadas, X1, X2, X3 e X4 são domínios alfa-helicoidais. Em outra modalidade, o comprimento de aminoácido de cada um de X1, X2, X3 e X4 é, independentemente, pelo menos cerca de 8, 10, 12, 14, 16, 19 ou mais aminoácidos de comprimento. Em outras modalidades, o comprimento de aminoácido de cada um de X1, X2, X3 e X4 é, independentemente, não mais do que 1.000, 500, 400, 300, 200, 100 ou 50 aminoácidos de comprimento. Em várias outras modalidades, o comprimento de aminoácido de cada um de X1, X2, X3 e X4 é independentemente entre cerca de 8 a 1.000, 8 a 500, 8 a 400, 8 a 300, 8 a 200, 8 a 100, 8 a 50, 10 a 1.000, 10 a 500, 10 a 400, 10 a 300, 10 a 200, 10 a 100, 10 a 50, 12 a 1.000, 12 a 500, 12 a 400, 12 a 300, 12 a 200, 12 a 100, 12 a 50, 14 a 1.000, 14 a 500, 14 a 400, 14 a 300, 14 a 200, 14 a 100, 14 a 50, 16 a 1.000, 16 a 500, 16 a 400, 16 a 300, 16 a 200, 16 a 100, 16 a 50, 19 a 1.000, 19 a 500, 19 a 400, 19 a 300, 19 a 200, 19 a 100 ou cerca de 19 a 50 aminoácidos de comprimento.

[0463] Em uma modalidade, o primeiro componente polipeptídico e/ou o segundo componente polipeptídico incluem pelo menos uma ligação dissulfeto.

[0464] Em outra modalidade, o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico estão associados de forma não covalente. Como observado aqui, o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não são agonistas de receptor ativos individualmente, e em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista ativo do heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa ou heterodímero IL-4Ralfa/IL13Ralfa. Assim, nessa modalidade, o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo podem interagir para formar um agonista ativo. Essa interação pode ser qualquer interação adequada, como uma interação não covalente. A interação pode compreender a ligação não covalente direta do primeiro e do segundo polipeptídeos, ou uma interação indireta. Em uma modalidade, o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico estão indiretamente ligados um ao outro através de um receptor, tal como um heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), um heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa ou um heterodímero IL-4Ralfa/IL13Ralfa.

[0465] Os métodos de determinação da ligação a receptores são conhecidos na técnica e descritos aqui, por exemplo, ensaios de ligação de interferometria de biocamada. Em algumas modalidades, quando o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem em seu receptor pretendido, eles colocalizam para se ligar a esse receptor com uma afinidade de ligação de 1.000 nm ou menos, 200 nm ou menos, 100 nm ou menos, 50 nM ou menos ou 25 nM ou menos. Por exemplo, um mimético de IL-2 dividida da presente invenção irá colocalizar para se ligar ao heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c) com uma afinidade de ligação de 1.000 nm ou menos, 200 nm ou menos, 100 nm ou menos, 50 nM ou menos ou 25 nM ou menos. Da mesma forma, como um exemplo, um mimético de IL-4 dividida da presente invenção irá colocalizar para se ligar ao heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c) com uma afinidade de ligação de 1.000 nm ou menos, 200 nm ou menos, 100 nm ou menos, 50 nM ou menos ou 25 nM ou menos. Em alguns aspectos, o agonismo do receptor ao qual os agentes miméticos divididos colocalizam e se ligam é medido por fosforilação de STAT5.

[0466] Em outro aspecto, a divulgação fornece polipeptídeos compreendendo 1, 2 ou 3, mas não todos os 4 domínios X1, X2, X3 e X4, em que:

[0467] (a) X1, quando presente, é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI); (SEQ ID NO: 4);

[0468] (b) X2, quando presente, é qualquer domínio de peptídeo helicoidal;

[0469] (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e

[0470] (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6); e

[0471] resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes.

[0472] Os polipeptídeos deste aspecto podem ser usados, por exemplo, para gerar os agonistas do receptor condicionalmente ativos de qualquer modalidade ou combinação de modalidades aqui divulgadas (isto é: os polipeptídeos deste aspecto são o primeiro polipeptídeo ou o segundo polipeptídeo dos agonistas do receptor condicionalmente ativos da divulgação). Assim, como ficará claro para os versados na técnica, todas as modalidades e combinações de modalidades do primeiro e segundo polipeptídeos divulgados acima, todas as modalidades e combinações de modalidades dos domínios X1, X2, X3 e X4 descritos acima são igualmente aplicáveis aos polipeptídeos deste aspecto da divulgação. Em uma modalidade,

[0473] (a) substituições de aminoácidos (AA) em X1 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 4 ocorrem em não mais de 3 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 1 resíduo AA marcado em negrito, ou não ocorrem em resíduos AA marcados em negrito;

[0474] (b) substituições de AA em X3 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 5 ocorrem em não mais de 3 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais de 1 AA resíduo marcado em fonte em negrito, ou não ocorrem em resíduos AA marcados em fonte em negrito; e/ou

[0475] (c) substituições de AA em X4 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 6 ocorrem em não mais do que 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em não mais do que 1 resíduo AA marcado em negrito, ou não ocorrem nos resíduos AA marcados em negrito.

[0476] Em outra modalidade, as substituições de AA em X2 em relação à sequência AA de SEQ ID NO: 7 não ocorrem nos resíduos AA marcados em negrito.

[0477] Em várias modalidades, o polipeptídeo pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em:

[0478] (i) um polipeptídeo compreendendo X1 e excluindo X2, X3 e X4;

[0479] (ii) um polipeptídeo compreendendo X2 e excluindo X1, X3 e X4;

[0480] (iii) um polipeptídeo compreendendo X3 e excluindo X1, X2 e X4;

[0481] (iv) um polipeptídeo compreendendo X4 e excluindo X1, X2 e X3;

[0482] (v) um polipeptídeo compreendendo X1 e X2, e excluindo X3 e X4;

[0483] (vi) um polipeptídeo compreendendo X1 e X3, e excluindo X2 e X4;

[0484] (vii) um polipeptídeo compreendendo X1 e X4, e excluindo X2 e X3;

[0485] (viii) um polipeptídeo compreendendo X2 e X3, e excluindo X1 e X4;

[0486] (ix) um polipeptídeo compreendendo X2 e X4, e excluindo X1 e X3;

[0487] (x) um polipeptídeo compreendendo X3 e X4, e excluindo X1 e X2;

[0488] (xi) um polipeptídeo compreendendo X1, X2 e X3 e excluindo X4;

[0489] (xii) um polipeptídeo compreendendo X1, X2 e X4 e excluindo X3;

[0490] (xiii) um polipeptídeo compreendendo X1, X3 e X4 e excluindo X2; e

[0491] (xiv) um polipeptídeo compreendendo X2, X3 e X4 e excluindo X1.

[0492] Em uma modalidade, o polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica a um primeiro polipeptídeo ou um segundo polipeptídeo listado abaixo (resíduos sublinhados são opcionais e cada resíduo opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido):

[0493] (i)

[0494] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 256) e

[0495] Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

[0496] (ii)

[0497] Primeiro polipeptídeo X1-X3-X2

[0498] Segundo polipeptídeo X4 TTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 259);

[0499] (iii)

[0500] Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD (SEQ ID NO: 260) e

[0501] Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 261)

[0502] (iv)

[0503] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNS (SEQ ID NO: 262)

[0504] Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

TNSPPAEEQLERFAKRFERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTT

ASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 263)

[0505] (v)

[0506] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXX (SEQ ID NO: 311) e

[0507] Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

[0508] (vi)

[0509] Primeiro polipeptídeo X1-X3-X2

[0510] Segundo polipeptídeo X4 XXXXXDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 266);

[0511] (vii)

[0512] Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESXX GD (SEQ ID NO: 267) e

[0513] Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 268)

[0514] (viii)

[0515] Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXX (SEQ ID NO: 269)

[0516] Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

[0517] (ix)

[0518] Primeiro polipeptídeo >Neo4_H1-H3

[0519] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQ LERFAKRFERNLWGIARLFESGD (SEQ ID NO: 312)

[0520] Segundo polipeptídeo >Neo4_H2-H4

[0521] DQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTASEDEQEE MANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 313)

[0522] (x)

[0523] Primeiro polipeptídeo >Neo4_H1-H3

[0524] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXQ LERFAKRFERNLWGIARLFESXX (SEQ ID NO: 314)

[0525] Segundo polipeptídeo >Neo4_H2-H4

[0526] XXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXXXEDEQEE MANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 315)

[0527] (xi)

[0528] Primeiro polipeptídeo Neo4_H1-H3 -H2

[0529] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQ LERFAKRFERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTA (SEQ ID NO: 316)

[0530] Segundo polipeptídeo Neo4_H4

[0531] TTASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 317)

[0532] (xii)

[0533] Primeiro polipeptídeo Neo4_H1-H3 -H2

[0534] PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXX LERFAKRFERNLWGIARLFESXXXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXX (SEQ ID NO: 318)

[0535] Segundo polipeptídeo Neo4_H4

[0536] XXXXXDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 319);

[0537] (xiii)

[0538] Primeiro polipeptídeo (X1)

[0539] PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVGGSS (SEQ ID NO: 323), ou SKEAIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 324), ou

[0540] PIQLHAEHALYDALMILNIV (SEQ ID NO: 325)

[0541] Segundo polipeptídeo (X3-X2 - X4)PKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDE QEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 326); ou

[0542] GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSS GGKDEAEKAKRMKEWMKRITGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 327); ou

[0543] GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSS GGGGEAEKAKRMKEWMKRIGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 328).

[0544] Em modalidades exemplificativas, o polipeptídeo compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica a um primeiro ou segundo polipeptídeos mostrados nas modalidades (i) - ( iii) acima (res duos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do domínio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido).

[0545] Em modalidades exemplificativas, o polipeptídeo compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica a um primeiro ou segundo polipeptídeos mostrados nas modalidades (i) - ( iii) acima (res duos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do domínio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido).

[0546] Em modalidades exemplificativas, o polipeptídeo compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos 100% idêntica a um primeiro ou segundo polipeptídeos mostrados nas modalidades (i) - ( iii) acima (res duos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do domínio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido).

[0547] Em outra modalidade, X1, X2, X3 e X4, quando presentes, compreendem a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%,

30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, a domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1) presentes dentro da sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 11-94, 190-216, 247 e SEQ ID NOs: 275-300. Em uma modalidade específica, X1, X2, X3 e X4, quando presentes, compreendem a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, a domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1 (embora listados como domínios H1, H2, H3 e H4) presentes na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 90 versões 1 ou 2, que têm a mesma sequência de aminoácidos primária, mas que diferem ligeiramente em resíduos de ligante opcionais/variáveis. Em várias modalidades, essa modalidade pode incluir variantes dos domínios X1, X2, X3 e/ou X4 presentes na SEQ ID NO: 90 versão 1 ou 2 que incorporam as mutações em relação à sequência de aminoácidos primária SEQ ID NO: 90 mostrada nas SEQ ID NOs: 275-300.

[0548] Os primeiros polipeptídeos, segundos polipeptídeos e polipeptídeos aqui descritos podem ser sintetizados quimicamente ou expressos de forma recombinante (quando o polipeptídeo é geneticamente codificado). Os polipeptídeos podem ser ligados a outros compostos, tais como compostos de estabilização para promover um aumento da meia-vida in vivo, incluindo, mas sem limitação à albumina, PEGuilação (ligação de uma ou mais cadeias de polietilenoglicol), HESilação, PASilação, glicosilação ou pode ser produzido como uma fusão Fc ou em variantes desimunizadas. Essa ligação pode ser covalente ou não covalente. Por exemplo, a adi o de por es contendo polietilenoglicol ( PEG ) pode compreender a liga o de um grupo PEG ligado ao grupo maleimida ( PEG-MAL ) a um res duo de cisteína do polipeptídeo. Exemplos adequados de PEG-MAL são metóxi PEG-MAL de 5 kD; metóxi PEG-MAL de 20 kD; metóxi (PEG)2-MAL de 40 kD; metóxi PEG(MAL)2 de 5 kD; metóxi PEG(MAL)2 de 20 kD; metóxi PEG(MAL)2 de 40 kD; ou qualquer combinação dos mesmos. Ver também Patente nº U.S.

8.148.109. Em outras modalidades, o PEG pode compreender PEGs de cadeia ramificada e/ou múltiplas cadeias de PEG.

[0549] Em uma modalidade, o composto de estabilização, incluindo, mas sem limitação a uma porção contendo PEG, está ligado a um resíduo de cisteína no polipeptídeo. Em outra modalidade, o resíduo de cisteína está presente no domínio X2. Em algumas modalidades, o resíduo de cisteína está presente, por exemplo, em qualquer uma de uma série de posições no domínio X2. Em algumas dessas modalidades, o domínio X2 tem pelo menos 19 aminoácidos de comprimento e o resíduo de cisteína está nas posições 1, 2, 5, 9 ou 16 em relação a esses 19 aminoácidos. Em uma outra modalidade, o composto de estabilização, incluindo, mas sem limitação a uma porção contendo PEG, está ligado ao resíduo de cisteína por meio de um grupo maleimida.

[0550] Em uma outra modalidade, os primeiros polipeptídeos, segundos polipeptídeos e polipeptídeos podem compreender ainda um domínio de direcionamento. Nessa modalidade, o agonista do receptor condicional pode ser direcionado a um alvo de interesse. O domínio de direcionamento pode ser covalentemente ou não covalentemente ligado ao primeiro polipeptídeo, segundo polipeptídeo e/ou polipeptídeo. Em modalidades em que o domínio de direcionamento é ligado não covalentemente, qualquer meio adequado para tal ligação não covalente pode ser usado, incluindo, mas sem limitação a ligantes de estreptavidina-biotina.

[0551] Em outra modalidade, o domínio de direcionamento, quando presente, é uma fusão de tradução com o polipeptídeo. Nessa modalidade, o polipeptídeo e o domínio de direcionamento podem confinar diretamente um ao outro na fusão de tradução ou podem ser ligados por um ligante polipeptídico adequado para uma finalidade pretendida. Exemplos de tais ligantes incluem, mas sem limitação aos divulgados nos documentos WO2016178905, WO2018153865 (em particular, na página 13) e WO

2018170179 (em particular, nos parágrafos [0316] a [0317]). Em outras modalidades, ligantes adequados incluem, mas sem limitação a ligantes de peptídeo, como GGGGG (SEQ ID NO: 95), GSGGG (SEQ ID NO: 96), GGGGGG (SEQ ID NO: 97), GGSGGG (SEQ ID NO: 98), GGSGGSGGGSGGSGSG (SEQ ID NO: 99), GSGGSGGGSGGSGSG (SEQ ID NO: 100), GGSGGSGGGSGGSGGGGSGGSGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 101) e [GGGGX]n (SEQ ID NO: 102), em que X é Q, E ou S e n é 2-5.

[0552] Os domínios de direcionamento são domínios polipeptídicos ou pequenas moléculas que se ligam a um alvo de interesse. Em uma modalidade não limitativa, o domínio de direcionamento se liga a uma proteína da superfície celular; nessa modalidade, a célula pode ser qualquer tipo de célula de interesse que inclui uma proteína de superfície que pode ser ligada por um domínio de direcionamento adequado. Em uma modalidade, as proteínas da superfície celular estão presentes na superfície das células selecionadas do grupo que consiste em células tumorais, células de componentes vasculares tumorais, células do microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunológicas infiltrantes ou elementos do estroma), outras células cancerosas e células (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas, células NK ou macrófagos). Quando a proteína de superfície celular está sobre a superfície de uma célula tumoral, célula de componente vascular ou célula de microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunes infiltrantes ou elementos do estroma), qualquer marcador de superfície celular de célula tumoral, célula de componente vascular ou célula de microambiente tumoral pode ser alvejado incluindo, mas sem limitação a EGFR, EGFRvIII, Her2, HER3, EpCAM, MSLN, MUC16, PSMA, TROP2, ROR1, RON, PD-L1, CD47, CTLA-4, CD5, CD19, CD20, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD45, CAMPATH-1, BCMA, CS-1, PD-L1, B7-H3, B7-DC, HLD-DR, antígeno carcinoembriônico (CEA), TAG-72, EpCAM, MUC1, proteína de ligação ao folato, A33, G250, antígeno de membrana específica da próstata (PSMA), ferritina, GD2, GD3, GM2, Le y, CA-125, CA19-9, fator de crescimento espidérmico,

p185HER2, receptor de IL-2, EGFRvIII (de2-7 EGFR), proteína de ativação de fibroblastos, tenascina, uma metaloproteinase, endosialina, fator de crescimento endotelial vascular, avB3, WT1, LMP2, HPV E6, HPV E7, Her-2/neu, MAGE A3, não mutante p53, NY-ESO-1, MelanA/MART1, mutante Ras, gp100, mutante p53, PR1, bcr-abl, tironsinase, survivina, PSA, hTERT, uma proteína de ponto de interrupção de translocação de sarcoma, EphA2, PAP, ML-IAP, AFP, ERG, NA17, PAX3, ALK, receptor de andrógeno, ciclina B 1, ácido polisiálico, MYCN, RhoC, TRP-2, fucosila GM1, mesotelina (MSLN), PSCA, MAGE Al, sLe (animal), CYP1B1, PLAV1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1, RGS5, SART3, STn, anidrase carbônica IX, PAX5, proteína 17 do esperma OY-TESL, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, Legumaína, Tie 3, VEGFR2, MAD- CT-1, PDGFR-B, MAD-CT-2, ROR2, TRAIL1, MUC16, MAGE A4, MAGE C2, GAGE, EGFR, CMET, HER3, MUC15, CA6, NAPI2B, TROP2, CLDN6, CLDN16, CLDN18.2, CLorf186, RON, LY6E, FRA, DLL3, PTK7, STRA6, TMPRSS3, TMPRSS4, TMEM238, UPK1B, VTCN1, LIV1, ROR1, antígeno 1 relacionado a Fos, BMPR1B (receptor de proteína morfogenética óssea tipo IB, número de acesso no Genbank NM- 001203); E16 (LAT1, SLC7A5, número de acesso no Genbank NM-003486); STEAP1 (seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata, número de acesso no Genbank NM-012449); 0772P (CA125, MUC16, número de acesso no Genbank AF361486); MPF (MPF, MSLN, SMR, fator de potencialização de megacariócitos, mesotelina, número de acesso no Genbank NM-005823); Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, família de transportadores de soluto 34 (fosfato de sódio), membro 2, transportador de fosfato 3b dependente de sódio tipo II, número de acesso no Genbank NM-006424); Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm. 42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, domínio sema, sete repetições de trombospondina (tipo 1 e semelhante ao tipo 1), domínio transmembranar (TM) e domínio citoplasmático curto, (semaforina) 5B, número de acesso no Genbank AB040878); PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, gene 2700050C12 RIKEN cDNA, número de acesso no Genbank AY358628); ETBR (receptor de endotelina tipo

B, número de acesso no Genbank AY275463); MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315, número de acesso no Genbank NM 017763); STEAP2 (HGNC.sub.--8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gene associado ao câncer de próstata 1, proteína associada ao câncer de próstata 1, seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata 2, seis proteínas transmembranares da próstata, número de acesso no Genbank AF455138); TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal catiônico de potencial receptor transiente, subfamília M, membro 4, número de acesso no Genbank NM 017636); CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, fator de crescimento derivado de teratocarcinoma, número de acesso no Genbank NP003203 ou NM003212); CD21 (CR2 (receptor 2 do complemento) ou C3DR (receptor do vírus C3d/Epstein Barr) ou Hs. 73792, número de acesso ao Genbank M26004); CD79b (IGb (beta associado a imunoglobulina), B29, número de acesso ao Genbank NM 000626); FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (domínio SH2 contendo proteína âncora de fosfatase 1a), SPAP1B, SPAP1C, número de acesso ao Genbank NM030764); HER2 (número de acesso ao Genbank M11730); NCA (número de acesso ao Genbank M18728); MDP (número de acesso ao Gnebank BC017023); IL20R.alfa. (Número de acesso ao Genbank AF184971); Brevican (número de acesso ao Genbank AF229053); Ephb2R (número de acesso ao Genbank NM004442); ASLG659 (número de acesso ao Genbank AX092328); PSCA (número de acesso ao Genbank AJ297436); GEDA (número de acesso ao Genbank AY260763); BAFF-R (número de acesso ao Genbank NP443177.1); CD22 (número de acesso ao Genbank NP-001762.1); CD79a (CD79A, CD79.alfa., alfa associado a imunoglobulina, uma proteína específica de células B que interage covalentemente com Ig beta (CD79B) e forma um complexo na superfície com moléculas de Ig M, transduz um sinal envolvido na diferenciação de células B, número de acesso ao Genbank NP001774.1); CXCR5 (receptor de linfoma de Burkitt 1, um receptor acoplado à proteína G que é ativado pela quimiocina CXCL13, funções na migração de linfócitos e defesa humoral, desempenha um papel na infecção por HIV-2 e talvez no desenvolvimento de

AIDS, linfoma, mieloma e leucemia, número de acesso ao Genbank NP001707.1); HLA-DOB (subunidade beta da molécula MHC de classe II (antígeno Ia) que se liga a peptídeos e os apresenta a linfócitos T CD4+, número de acesso ao Genbank NP002111.1); P2X5 (canal 5 de íon bloqueado por ligante do receptor purinérgico P2X, um canal de íon bloqueado por ATP extracelular, pode estar envolvido na transmissão sináptica e neurogênese, a deficiência pode contribuir para a fisiopatologia da instabilidade idiopática do detrusor, número de acesso ao Genbank NP002552.2); CD72 (antígeno de diferenciação de células B CD72, Lyb-2, número de acesso ao Genbank NP001773.1); LY64 (antígeno linfocitário 64 (RP105), proteína de membrana tipo I da família de repetição rica em leucina (LRR), regula a ativação de células B e apoptose, a perda de função está associada ao aumento da atividade da doença em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico, número de acesso ao Genbank NP005573.1); FCRH1 (proteína 1 semelhante a receptor Fc, um receptor putativo para o domínio Fc de imunoglobulina que contém domínios semelhantes a Ig tipo C2 e ITAM, pode ter um papel na diferenciação de linfócitos B, número de acesso ao Genbank NP443170.1); ou IRTA2 (translocação do receptor da superfamília de imunoglobulina associada 2, um imunorreceptor putativo com possíveis papéis no desenvolvimento de células B e linfomagenesia; ocorre desregulação do gene por translocação em algumas doenças malignas de células B, número de acesso ao Genbank NP112571.1).

[0553] Em outra modalidade, o domínio de direcionamento se liga a marcadores de superfície de células imunológicas. Nessa modalidade, o alvo pode ser proteínas de superfície celular em qualquer célula imunológica adequada, incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas, células NK ou macrófagos. O domínio de direcionamento pode ter como alvo qualquer marcador de superfície de célula imunológica adequado (seja uma célula imunológica endógena ou projetada, incluindo, mas sem limitação a células CAR-T projetadas), incluindo, mas sem limitação a CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD21, CD25, CD37, CD30, CD33,

CD40, CD68, CD123, CD254, PD-1, B7-H3 e CTLA-4. Em outra modalidade, o domínio de direcionamento se liga a PD-1, PDL-1, CTLA-4, TROP2, B7-H3, CD33, CD22, anidrase carbônica IX, CD123, Nectina-4, antígeno de fator de tecido, CD154, B7-H3, B7-H4, FAP (proteína de ativação de fibroblastos) ou MUC16, e/ou onde o domínio de direcionamento se liga a PD-1, PDL-1, CTLA-4, TROP2, B7-H3, CD33, CD22, anidrase carbônica IX, CD123, Nectina- 4, antígeno de fator de tecido, CD154, B7-H3, B7-H4, FAP (proteína de ativação de fibroblastos) ou MUC16.

[0554] Em todas essas modalidades, os domínios de direcionamento podem ser quaisquer polipeptídeos adequados que se ligam a alvos de interesse e podem ser incorporados ao polipeptídeo da divulgação. Em modalidades não limitativas, o domínio de direcionamento pode incluir, mas sem limitação a um scFv, um F(ab), um F(ab') 2, um receptor de células B (BCR), um DARPin, um aficorpo, um monocorpo, um nanocorpo, diacorpo, um anticorpo (incluindo um anticorpo monoespecífico ou biespecífico); um oligopeptídeo de direcionamento de célula incluindo, mas sem limitação a peptídeos de ligação de integrina RGD, ligantes projetados de novo, aptâmeros, um peptídeo de biciclo, conotoxinas, moléculas pequenas, como ácido fólico e um vírus que se liga à superfície da célula.

[0555] Os primeiros polipeptídeos, segundos polipeptídeos e polipeptídeos da divulgação podem incluir resíduos adicionais no N-terminal, C-terminal ou ambos que não estão presentes nos primeiros polipeptídeos, segundos polipeptídeos e polipeptídeos da divulgação; estes resíduos adicionais não estão incluídos na determinação da identidade percentual dos polipeptídeos ou domínios peptídicos da divulgação em relação ao polipeptídeo de referência. Esses resíduos podem ser quaisquer resíduos adequados para um uso pretendido, incluindo, mas sem limitação a marcas de detecção (ou seja: proteínas fluorescentes, marcas de epítopos de anticorpos, etc.), adaptadores, ligantes adequados para fins de purificação (marcas de His, etc.) domínios peptídicos que adicionam funcionalidade aos polipeptídeos, etc.

Os resíduos adequados para a ligação de tais grupos podem incluir resíduos de cisteína, lisina ou p-acetilfenilalanina ou podem ser marcadores, tais como marcadores de aminoácidos adequados para reação com transglutaminases conforme divulgado nas Patentes nº U.S. 9.676.871 e 9.777.070.

[0556] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece ácidos nucleicos, incluindo ácidos nucleicos isolados, que codificam os primeiros polipeptídeos, segundos polipeptídeos e polipeptídeos da presente divulgação que podem ser codificados geneticamente. A sequência de ácido nucleico isolada pode compreender RNA ou DNA. Tais sequências de ácido nucleico recombinante podem compreender sequências adicionais úteis para promover a expressão e/ou purificação da proteína codificada, incluindo, porém sem limitação, sequências poliA, sequências Kozak modificadas e sequências que codificam tags de epítopo, sinais de exportação e sinais secretores, sinais de localização nuclear e sinais de localização da membrana plasmática. Será evidente para os versados na técnica, com base nos ensinamentos deste documento, quais sequências de ácido nucleico irão codificar os polipeptídeos da invenção.

[0557] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece vetores de expressão compreendendo o ácido nucleico de qualquer aspecto da invenção operacionalmente ligado a uma sequência de controle adequada. Vetor de e press o inclui etores que ligam operati amente uma região ou gene de codificação de ácido nucleico a quaisquer sequências de controle capa es de efetuar a e press o do produto do gene. Sequ ncias de controle operacionalmente ligadas s sequências de ácidos nucleicos da invenção são sequências de ácidos nucleicos capazes de efetuar a expressão das moléculas de ácidos nucleicos. As sequências de controle não precisam ser contíguas às sequências de ácidos nucleicos, desde que funcionem para direcionar sua expressão. Assim, por exemplo, sequências não traduzidas ainda transcritas e intervenientes podem estar presentes entre uma sequência promotora e as sequências de ácido nucleico e a sequência promotora ainda pode ser considerada ligada operacionalmente sequ ncia codificante. Outras sequências de controle incluem, porém sem limitação, sinais de poliadenilação, sinais de terminação e locais de ligação ao ribossomo. Tais vetores de expressão incluem, mas sem limitação a vetores de expressão baseados em plasmídeo e viral. A sequência de controle usada para conduzir a expressão das sequências de ácido nucleico divulgadas em um sistema de mamífero pode ser constitutiva (conduzida por qualquer um de uma variedade de promotores, incluindo, mas sem limitação a, CMV, SV40, RSV, actina, EF) ou induzível (conduzida por qualquer um de uma série de promotores indutíveis incluindo, mas sem limitação a, tetraciclina, ecdisona, responsivo a esteroides). O vetor de expressão pode ser replicável nos organismos hospedeiros como um epissoma ou por integração no DNA cromossômico do hospedeiro. Em várias modalidades, o vetor de expressão pode compreender um plasmídeo, vetor baseado em vírus (incluindo, mas sem limitação a um vetor retroviral ou vírus oncolítico), ou qualquer outro vetor de expressão adequado. Em algumas modalidades, o vetor de expressão pode ser administrado nos métodos da divulgação para expressar os polipeptídeos in vivo para benefício terapêutico. Em modalidades não limitativas, os vetores de expressão podem ser usados para transfectar ou transduzir alvos terapêuticos celulares (incluindo, mas sem limitação a células CAR-T ou células tumorais) para efetuar os métodos terapêuticos aqui divulgados.

[0558] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece células hospedeiras que compreendem os vetores de expressão e/ou ácidos nucleicos aqui divulgados, em que as células hospedeiras podem ser procarióticas ou eucarióticas. As células podem ser transitoriamente ou estavelmente modificadas para incorporar o vetor de expressão da invenção, usando técnicas incluindo, mas sem limitação a transformações bacterianas, coprecipitação de fosfato de cálcio, eletroporação ou mediada por lipossoma, mediada por DEAE dextrano, mediada por policatiônica, ou transfecção mediada por vírus. (Ver, por exemplo, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press); Culture of Animal

Cells: A Manual of Basic Technique, 2a Ed. (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. Nova York, NY)). Um método de produção de um polipeptídeo de acordo com a invenção é uma parte adicional da invenção. O método compreende as etapas de (a) cultivar um hospedeiro de acordo com este aspecto da invenção em condições que conduzam à expressão do polipeptídeo, e (b) opcionalmente, recuperar o polipeptídeo expresso. O polipeptídeo expresso pode ser recuperado do extrato livre de células, mas preferencialmente eles são recuperados do meio de cultura.

[0559] Em outro aspecto, a presente divulgação fornece composições farmacêuticas, compreendendo um ou mais agonistas de receptor condicionalmente ativos, polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras de qualquer aspecto ou modalidade da divulgação e um transportador farmaceuticamente aceitável. As composições farmacêuticas da divulgação podem ser usadas, por exemplo, nos métodos da divulgação descritos abaixo. A composição farmacêutica pode compreender além da composição e transportador (a) um lioprotetor; (b) um tensoativo; (c) um agente de volume; (d) um agente de ajuste de tonicidade; (e) um estabilizador; (f) um conservante e/ou (g) um tampão.

[0560] Em algumas modalidades, o tampão na composição farmacêutica é um tampão Tris, um tampão histidina, um tampão fosfato, um tampão citrato ou um tampão acetato. A composição farmacêutica também pode incluir um lioprotetor, por exemplo, sacarose, sorbitol ou trealose. Em certas modalidades, a composição farmacêutica inclui um conservante, por exemplo, cloreto de benzalcônio, benzetônio, clorexidina, fenol, m-cresol, álcool benzílico, metilparabeno, propilparabeno, clorobutanol, o-cresol, p-cresol, clorocresol, nitrato fenilmercúrico, timerosal, ácido benzoico e várias misturas dos mesmos. Em outras modalidades, a composição farmacêutica inclui um agente de volume, como glicina. Em ainda outras modalidades, a composição farmacêutica inclui um tensoativo, por exemplo, polissorbato-20, polissorbato- 40, polissorbato-60, polissorbato-65, polissorbato-80, polissorbato-85,

poloxâmero-188, monolaurato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano, monostearato de sorbitano, sorbitano monooleato, trilaurato de sorbitano, tristearato de sorbitano, trioleasto de sorbitano ou uma combinação dos mesmos. A composição farmacêutica também pode incluir um agente de ajuste de tonicidade, por exemplo, um composto que torna a formulação substancialmente isotônica ou iso-osmótica com sangue humano. Agentes de ajuste de tonicidade exemplificativos incluem sacarose, sorbitol, glicina, metionina, manitol, dextrose, inositol, cloreto de sódio, arginina e cloridrato de arginina. Em outras modalidades, a composição farmacêutica inclui adicionalmente um estabilizador, por exemplo, uma molécula que, quando combinada com uma composição à base de proteína, impede ou reduz substancialmente a instabilidade química e/ou física da proteína na forma liofilizada ou líquida. Estabilizadores exemplares incluem sacarose, sorbitol, glicina, inositol, cloreto de sódio, metionina, arginina e cloridrato de arginina.

[0561] Os agonistas de receptor condicionalmente ativos, polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras podem ser o único agente ativo na composição farmacêutica, ou a composição pode compreender ainda um ou mais outros agentes ativos adequados para um uso pretendido.

[0562] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece métodos para o tratamento do câncer, compreendendo a administração a um sujeito em necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz do agonista de receptor condicionalmente ativo, polipeptídeo, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras de qualquer modalidade ou combinação de modalidades aqui divulgadas sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem nas células do tumor para tratar o câncer. Em modalidades para administrar os agonistas de receptor condicionalmente ativos, o primeiro e o segundo polipeptídeo podem ser administrados juntos ou podem ser administrados em formulações farmacêuticas separadas.

[0563] Tal como aqui utili ado, tratar ou tratamento significa realizar um ou mais dos seguintes: (a) reduzir o tamanho ou volume de tumores e/ou metástases no sujeito; (b) limitar qualquer aumento no tamanho ou volume de tumores e/ou metástases no sujeito; (c) aumentar a sobrevivência; (d) reduzir a gravidade dos sintomas associados ao câncer; (e) limitar ou prevenir o desenvolvimento de sintomas associados ao câncer; e (f) inibir o agravamento dos sintomas associados ao câncer.

[0564] Os métodos podem ser usados para tratar qualquer câncer adequado, incluindo, mas sem limitação a câncer de cólon, melanoma, câncer de células renais, câncer de células escamosas de cabeça e pescoço, câncer gástrico, carcinoma urotelial, linfoma de Hodgkin, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de células pequenas de pulmão, carcinoma hepatocelular, câncer de pâncreas, câncer colorretal de carcinoma de células de Merkel, leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma não Hodgkin, mieloma múltiplo, câncer de ovário, câncer cervical e quaisquer tipos de tumor selecionados por um teste diagnóstico, como instabilidade de microssatélites, carga de mutação tumoral, nível de expressão de PD-L1 ou o ensaio de imunoscore (conforme desenvolvido pela Society for Immunotherapy of Cancer).

[0565] O sujeito pode ser qualquer sujeito que tenha câncer. Em uma modalidade, o sujeito é um mamífero, incluindo, porém sem limitação, humanos, cachorros, gatos, cavalos, gado, etc.

[0566] Em uma modalidade, o primeiro domínio de direcionamento se liga a um marcador de célula e o segundo domínio de direcionamento se liga a um segundo marcador de célula distinto, e em que a coexpressão desses dois marcadores nas mesmas células ou nas células próximas ocorre mais comumente no tumor do que em outros tecidos, e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao primeiro marcador de célula e ligação do segundo domínio de direcionamento ao segundo marcador de célula.

Essa modalidade, por exemplo, emprega dois domínios de direcionamento que se ligam a marcadores separados que não são enriquecidos em células tumorais, mas para os quais a coexpressão é enriquecida no tumor.

[0567] Em outra modalidade, o primeiro componente polipeptídico compreende um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente polipeptídico compreende um segundo domínio de direcionamento, em que o primeiro domínio de direcionamento se liga a um primeiro marcador de célula tumoral e o segundo domínio de direcionamento se liga a um segundo marcador de célula tumoral que pode ser o mesmo ou diferente do primeiro marcador de células tumorais, e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao primeiro marcador de células tumorais e ligação do segundo domínio de direcionamento ao segundo marcador de células tumorais.

[0568] Em outra modalidade, o primeiro componente polipeptídico compreende um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente polipeptídico compreende um segundo domínio de direcionamento, em que o primeiro domínio de direcionamento se liga a um marcador de célula tumoral e o segundo domínio de direcionamento se liga a um marcador de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas ou macrófagos), e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao marcador de célula tumoral e ligação do segundo domínio de direcionamento ao marcador de célula imune.

[0569] Em uma modalidade, o primeiro domínio de direcionamento se liga a um marcador de célula e o segundo domínio de direcionamento se liga a um segundo e distinto marcador de célula, e em que a coexpressão desses dois marcadores ocorre mais comumente em células tumorais do que em alguns outros tipos de células, e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao primeiro marcador de célula e ligação do segundo domínio de direcionamento ao segundo marcador de célula na mesma célula. Essa modalidade, por exemplo, emprega dois domínios de direcionamento que se ligam a marcadores separados que não são enriquecidos em células tumorais, mas para os quais a coexpressão é enriquecida no tumor.

[0570] Em outra modalidade, o primeiro componente polipeptídico compreende um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente polipeptídico compreende um segundo domínio de direcionamento, em que o primeiro domínio de direcionamento se liga a um primeiro marcador de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, T reguladoras células, células dendríticas ou macrófagos) e o segundo domínio de direcionamento se liga a um segundo marcador de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas ou macrófagos) que podem ser iguais ou diferentes do que o primeiro marcador de célula imune, e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao primeiro marcador de célula imune e a ligação do segundo domínio de direcionamento ao segundo marcador de célula imune.

[0571] Em um aspecto adicional, a presente divulgação fornece métodos para modular uma resposta imune em um sujeito pela administração a um sujeito de um agonista de receptor condicionalmente ativo, polipeptídeo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira ou a composição farmacêutica da presente divulgação. Em uma modalidade, o método compreende a administração a um sujeito de um agonista de receptor condicionalmente ativo sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem nas células imunes para modular uma resposta imune.

[0572] Tal como aqui utili ado, uma resposta imunol gica sendo modulada refere-se a uma resposta por uma célula do sistema imunológico, tal como uma célula B, célula T (CD4 ou CD8), célula T reguladora, célula apresentadora de antígeno, célula dendrítica, monócito,

macrófago, célula NKT, célula NK, basófilo, eosinófilo ou neutrófilo, a um estímulo. Em algumas modalidades, a resposta é específica para um antígeno particular (uma resposta espec fica do ant geno ) e se refere a uma resposta de uma célula T CD4, célula T CD8 ou célula B por meio de seu receptor específico do antígeno. Em algumas modalidades, uma resposta imunológica é uma resposta de células T, como uma resposta CD4+ ou uma resposta CD8+. Essas respostas por essas células podem incluir, por exemplo, citotoxicidade, proliferação, produção de citocinas ou quimiocinas, tráfego ou fagocitose e podem ser dependentes da natureza da célula imunológica que sofre a resposta. Em algumas modalidades das composições e métodos aqui descritos, uma resposta imunológica sendo modulada é mediada por células T.

[0573] Em alguns aspectos, a resposta imunológica é uma resposta imunológica anticâncer. Em alguns de tais aspectos, um mimético de IL-2 condicionalmente ativo aqui descrito é administrado a um sujeito com câncer para modular uma resposta imune anticâncer no sujeito.

[0574] Em alguns aspectos, a resposta imunológica é uma resposta imunológica reparadora de tecidos. Em alguns de tais aspectos, um mimético de IL-4 condicionalmente ativo descrito aqui é administrado a um sujeito em necessidade para modular uma resposta imune reparativa de tecido no sujeito.

[0575] Em alguns aspectos, a resposta imunológica é uma resposta imunológica de cicatrização de feridas. Em alguns de tais aspectos, um mimético de IL-4 condicionalmente ativo descrito aqui é administrado a um sujeito em necessidade para modular uma resposta imune de cicatrização de feridas no sujeito.

[0576] Em alguns aspectos, métodos são fornecidos para modular uma resposta imunológica a um segundo agente terapêutico em um sujeito. Em alguns de tais aspectos, o método compreende a administração de um polipeptídeo da presente divulgação em combinação com uma quantidade eficaz do segundo agente terapêutico ao sujeito. O segundo agente terapêutico pode ser, por exemplo, um agente quimioterapêutico ou um agente imunoterapêutico específico para o antígeno. Em alguns aspectos, o agente imunoterapêutico específico do antígeno compreende células T receptoras de antígeno quiméricas (células CAR-T). Em alguns aspectos, o polipeptídeo da presente divulgação aumenta a resposta imunológica do sujeito ao agente terapêutico. A resposta imunológica pode ser aumentada, por exemplo, melhorando a resposta das células T (incluindo a resposta das células CAR-T), aumentando a resposta imunológica inata das células T, diminuindo a inflamação, inibindo a atividade das células T reguladoras ou suas combinações.

[0577] Em alguns aspectos, um mimético de citocina condicionalmente ativo da presente invenção, por exemplo, um mimético de IL- 4 condicionalmente ativo como aqui descrito, será impregnado ou de outra forma associado a um biomaterial e o biomaterial será introduzido a um sujeito. Em alguns aspectos, o biomaterial será um componente de um dispositivo médico implantável e o dispositivo será, por exemplo, revestido com o biomaterial. Esses dispositivos médicos incluem, por exemplo, enxertos vasculares e arteriais. Os biomateriais associados a IL-4 e/ou IL-4 condicionalmente ativas podem ser usados, por exemplo, para promover a cicatrização de feridas e/ou a reparação e regeneração de tecidos.

[0578] Em outro aspecto, a divulgação fornece métodos para agonizar o receptor de IL-2 ou o receptor de IL-4, compreendendo a administração a um sujeito do agonista de receptor condicionalmente ativo de qualquer modalidade ou combinação de modalidades aqui divulgadas, sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem com o receptor.

[0579] Tal como aqui utili ado, uma quantidade terapeuticamente efica se refere a uma quantidade do agonista de receptor condicionalmente ativo, polipeptídeo, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras que é eficaz para tratar e/ou limitar a doença a ser tratada (por exemplo, câncer). O agonista do receptor condicionalmente ativo,

polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras são tipicamente formulados como uma composição farmacêutica, tal como as divulgadas acima, e podem ser administrados por qualquer via adequada, incluindo, mas sem limitação a, por via oral, por inalação por spray, ocularmente, intravenosamente, subcutaneamente, intraperitonealmente e intravesicularmente em formulações de unidades de dosagem convencionais contendo carreadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis. Em uma modalidade particular, os polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras são administrados por via mucosa, incluindo, mas sem limitação a administração intraocular, inalada ou intranasal. Em outra modalidade particular, os polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras são administrados por via oral. Essas modalidades particulares podem ser administradas por meio de gotículas, nebulizadores, sprays ou outras formulações adequadas.

[0580] Qualquer intervalo de dosagem adequado pode ser usado conforme determinado pelo pessoal médico assistente. Os regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta desejada ideal (por exemplo, uma resposta terapêutica ou profilática). Uma gama de dosagem adequada para os agonistas ou polipeptídeos do receptor condicionalmente ativos pode, por exemplo, ser 0,1 ug/kg a 100 mg/kg de peso corporal; alternativamente, pode ser de 0,5 µg/kg a 50 mg/kg; 1 ug/kg a 25 mg/kg ou 5 ug/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Em algumas modalidades, a dose recomendada pode ser inferior a 0,1 mcg/kg, especialmente se administrada localmente. Em outras modalidades, a dose recomendada pode ser baseada no peso/m2 (ou seja, área de superfície corporal) e/ou pode ser administrada em uma dose fixa (por exemplo, 0,5 a 100 mg). Os agonistas de receptor condicionalmente ativos, polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras podem ser entregues em um único bolus ou podem ser administrados mais de uma vez (por exemplo, 2, 3, 4, 5 ou mais vezes), conforme determinado por um médico assistente.

[0581] Os agonistas de receptor condicionalmente ativos, polipeptídeos, ácidos nucleicos, vetores de expressão e/ou células hospedeiras podem ser administrados como o único agente profilático ou terapêutico, ou podem ser administrados em conjunto com (ou seja: combinado ou separadamente) um ou mais outros agentes profiláticos ou terapêuticos, incluindo, mas sem limitação a ressecção tumoral, quimioterapia, radioterapia, imunoterapia, etc.

[0582] Numerosas modificações e variações da presente divulgação são possíveis à luz dos ensinamentos acima.

EXEMPLOS EXEMPLO 1.

[0583] Uma abordagem computacional para projetar agentes miméticos de citocinas de novo é descrita que recapitula os locais funcionais das citocinas naturais, mas de outra forma não estão relacionados na topologia ou sequência de aminoácidos. Essa estratégia foi usada para projetar agentes miméticos não divididos de novo de IL-2 e interleucina-15 (IL-15) que se ligam ao heterodímero c do receptor de IL-2 (IL-2R c), mas não têm sítio de ligação para IL-2R ou IL-15R . Os projetos são hiperestáveis, ligam-se à IL-2R c humana e de camundongo com maior afinidade do que as citocinas naturais e induzem sinalização celular a jusante independente de IL-2R e IL-15R . As estruturas de cristal de um mimético otimizado experimentalmente, neoleucina-2/15, estão muito próximas do modelo de design e fornecem a primeira informação estrutural sobre o complexo de IL-2R c murina. Neoleucina-2/15 tem atividade terapêutica altamente eficaz em comparação com IL-2 em modelos murinos de melanoma e câncer de cólon, com toxicidade reduzida e sem sinais de imunogenicidade.

[0584] Muitas citocinas interagem com várias subunidades de receptor diferentes e, como a maioria das proteínas que ocorrem naturalmente, contêm características estruturais não ideais que comprometem a estabilidade, mas são importantes para a função. Um protocolo computacional foi desenvolvido no qual os elementos estruturais que interagem com a (s) subunidade (s) receptor (es) desejada (s) são fixados no espaço, e uma cadeia principal de proteína globular idealizada é construída para suportar esses elementos. A montagem do fragmento combinatório foi usada para suportar epítopos lineares curtos com construção paramétrica de hélices desincorporadas acopladas com fechamento de laço baseado em conhecimento (Figura 1a-b). A abordagem foi testada tentando projetar de novo proteínas idealizadas estáveis com superfícies de interação que imitam aquelas de IL-2 humana (hIL-2) e IL-15 humana (hIL-15) para o IL-2R c humano (hIL-2R c), mas totalmente sem a superfície de interação do receptor alfa de IL-2 (IL-2R ).

[0585] Projeto computacional de agentes miméticos de IL-2/IL-15 de não separação que se ligam e ativam IL-2RβƔc: hIL-2 nativo compreende quatro hélices conectadas por laços longos irregulares. A hélice N-terminal (H1) interage com as subunidades beta e gama do receptor IL-2, a terceira hélice (H3) interage com a subunidade beta e a hélice C-terminal (H4) com a subunidade gama; a superfície de interação da subunidade alfa é formada pela segunda hélice irregular (H2) e duas voltas longas, uma conectando H1 a H2 e a outra conectando H3 e H4. Foi projetada uma proteína idealizada que recapitula a interface formada por H1, H3 e H4 com beta e gama e que substitui H2 por uma hélice regular que oferece melhor empacotamento. As hélices H1, H3 e H4 (ver Figura 1a) foram usadas como um modelo para o local de ligação, enquanto a hélice H2 foi reconstruída (H2') usando um banco de dados de fragmentos agrupados altamente representados (ver Métodos). Os pares de hélices foram conectados com laços extraídos do mesmo banco de dados (ver Figura 1b), os grampos de cabelo helicoidais resultantes combinados em estruturas principais totalmente conectados (ver Figura 1c) e cálculos de projeto de sequência de estrutura principal flexível combinatória Rosetta TM foram realizados na presença de hIL-2R c (ver Métodos). Os quatro principais projetos computacionais e oito variações grampeadas de dissulfeto único (ver Tabela 2) foram selecionados para caracterização experimental por exibição de levedura (ver Métodos). Oito projetos foram encontrados para ligar receptor de IL-2 quimérico beta-gama marcado com fluorescência em baixas concentrações nanomolares.

A melhor concepção não dissulfureto (G1_neo2_40) foi sujeita à mutagênese de saturação local seguido de seleção e combinação de substituições que aumentam a afinidade para a IL-2R c murina (mIL-2R c, ver a Figura 5). Projetos otimizados (foram expressos de forma recombinante em E. coli e verificou-se que eliciam a sinalização de pSTAT5 in vitro em células murinas responsivas à IL-2 em baixas concentrações nanomolares ou mesmo picomolares (Tabela 3, ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019), mas tinha estabilidade térmica relativamente baixa (Tm ~<45 °C, ver Figuras 9 e 10). Para melhorar a estabilidade, o protocolo de projeto computacional foi repetido a partir da estrutura principal do projeto de primeira rodada de maior afinidade (G1_neo2_40_1F, topologia: H1->H4->H2 ->H3), acoplando o processo de construção de laço com variação paramétrica no comprimento da hélice (+/- 8 aminoácidos, consulte a Figura 1a painel inferior). Essa segunda abordagem melhorou a qualidade dos modelos, permitindo a exploração de substancialmente mais combinações de laços conectando cada par de hélices.

Os quatorze melhores projetos da segunda geração, junto com vinte e sete reprojetos de sequência Rosetta TM de G1_neo2_40_1F (ver Tabela 4), foram caracterizados experimentalmente e todos, exceto um, se ligaram ao receptor de IL-2 em baixas concentrações nanomolares.

Os três projetos de maior afinidade e estabilidade (um reprojeto de sequência e dois novos agentes miméticos) foram submetidos à mutagênese de saturação local para ligação de mIL-2R c (Figuras 6 a 8), seguido por seleção e combinação de substituições de aumento de afinidade para IL-2R c humana e de camundongo.

Os projetos amadurecidos (ver Tabela 5) mostraram ligação aprimorada, mantendo hiperestabilidade (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019)). O projeto superior, neoleucina-2/15 (também referido aqui como Neo- 2/15), é uma proteína de 100 resíduos com uma nova topologia e sequência bastante diferente da IL-2 humana ou murina (29% de identidade de sequência para hIL-2 em 89 resíduos e 16% de identidade de sequência para mIL-2 em 76 resíduos alinhados, em alinhamento estrutural com base em topologia agnóstica).

[0586] Caracterização funcional da neoleucina- 2/15: Neoleucina-2/15 se liga com alta afinidade à IL-2R c humana e de camundongo, mas não interage com IL-2R ( er Silva et al., Nature 565, páginas 186, janeiro 10, 2019). As afinidades de Neoleucina-2/15 para os receptores de IL-2 humana e de camundongo (receptores de IL-2R e IL-2R c) são significativamente mais elevadas do que as das citocinas de IL-2 correspondentes nativas. Em contraste com a IL-2 nativa, a Neoleucina-2/15 induz a sinalização independente de IL-2R em células responsivas à IL-2 humana e murina e em células T primárias murinas (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). Neoleucina-2/15 ativa células IL-2R mais potentemente do que a IL-2 humana ou murina nativa de acordo com sua maior afinidade de ligação. Em células primárias, a neoleucina-2/15 é mais ativa em células IL-2R - e menos ativa em IL-2R + em comparação com Super-2, presumivelmente devido à sua completa falta de ligação à IL-2R . Neoleucina- 2/15 é hiperestável (ver Figura 12) e não perde afinidade de ligação para hIL- 2R c após incubação a 80 °C por 2 horas, enquanto hIL-2 e Super-2 são completamente inativadas após 10 minutos (meio-tempo de inativação = ~4,2 min e ~2,6 min, respectivamente, Figura 2). Da mesma forma, em culturas de células primárias ex vivo, a neoleucina-2/15 impulsionou a sobrevivência das células T efetivamente após serem fervidas por 60 minutos a 95 °C, enquanto essas condições inativaram IL-2 e Super-2 (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). Estudos de desnaturação térmica foram realizados em muitos outros agentes miméticos projetados, demonstrando sua estabilidade térmica também (consulte a Figura 11). Essa estabilidade sem precedentes para uma molécula semelhante à citocina, além de eliminar a necessidade de armazenamento em cadeia a frio, sugere uma robustez para mutações (ver Figura 8 e 13), fusões genéticas e modificação química excedendo em muito a da IL-2 nativa (ver Figura 3).

[0587] Aplicações terapêuticas de neoleucina- 2/15: O uso clínico de IL-2 tem sido limitado principalmente pela toxicidade. Embora as interações responsáveis pela toxicidade de IL-2 em humanos não sejam completamente compreendidas, em modelos murinos a toxicidade é independente de células T e melhorada em animais deficientes na cadeia de IL-2R (CD25+). Assim, muitos esforços têm sido direcionados para a reengenharia de IL-2 para enfraquecer as interações com IL-2R , mas as mutações no local de ligação de CD25 podem ser altamente desestabilizadoras. A baixa estabilidade inerente de IL-2 e sua dependência fortemente desenvolvida em CD25 têm sido barreiras para a tradução de compostos de IL-2 reprojetados. Outros esforços se concentraram na IL-15, uma vez que ela provoca sinalização semelhante à IL-2 por dimerização do IL-2R c, mas não tem afinidade para o CD25. No entanto, IL-15 é dependente da apresentação trans pelo receptor de IL-15 (CD215), que é exibido principalmente em células apresentadoras de antígeno e células assassinas naturais. A baixa estabilidade da IL-15 nativa e sua dependência da apresentação trans também têm sido barreiras substanciais para os esforços de reengenharia.

[0588] Estudos de escalonamento de dose em camundongos ingênuos mostram que mIL-2 expande preferencialmente células T regulatórias, consistente com a ligação preferencial a células CD25+, enquanto a neoleucina-2/15 impulsiona principalmente a expansão de células T CD8+ e não induz ou induz minimamente a expansão de células T regulatórias apenas na dose mais alta testada. Da mesma forma, em um modelo murino de inflamação das vias aéreas, que normalmente induz uma pequena porcentagem de células T CD8+ residentes no tecido, a neoleucina-2/15 produz um aumento nas células T Thy1.2- CD44+ CD8+ sem aumentar o antígeno CD4+ Foxp3+ Tregs específicos nos órgãos linfoides (dados não mostrados; ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019).

[0589] A eficácia terapêutica da neoleucina-2/15 foi testada no melanoma B16F10 fracamente imunogênico e nos modelos de camundongos com câncer de cólon CT26 mais imunogênicos.

O tratamento de agente único com neoleucina-2/15 levou a atrasos dependentes da dose no crescimento do tumor em ambos os modelos de câncer.

No câncer de cólon CT26, o tratamento com agente único mostrou eficácia melhorada em relação à observada para mIL-2 recombinante (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). No melanoma B16F10, o cotratamento com o anticorpo antimelanoma TA99 (anti-TRP1) levou a atrasos significativos no crescimento do tumor, enquanto o tratamento com TA99 sozinho teve pouco efeito (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). Em experimentos de sobrevivência de longo prazo (8 semanas), a neoleucina-2/15 em combinação com TA99 mostrou toxicidade substancialmente reduzida e um efeito terapêutico geral superior em comparação com mIL-2 (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). Os camundongos tratados com a combinação mIL- 2 e TA99 perderam peso de forma constante e sua saúde geral declinou a ponto de exigir a eutanásia, enquanto um pequeno declínio foi observado com a combinação de neoleucina-2/15 e TA99 (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). Consistente com um benefício terapêutico, o tratamento com neoleucina-2/15 levou a um aumento significativo nas razões CD8: T reg intratumorais (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019), que foi previamente correlacionado com respostas imunes antitumorais eficazes 58 . Os aumentos das razões CD8: Treg pela neoleucina-2/15 são dependentes da dose e do antígeno (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019); efeitos terapêuticos ideais foram obtidos em doses mais altas e em combinação com outras imunoterapias (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). Em conjunto, esses dados mostram que a neoleucina- 2/15 exibe o benefício homeostático previsto derivado da sua atividade imunopotenciadora semelhante à IL-2, mas sem os efeitos adversos associados à ligação preferencial de CD25 +. A eficácia terapêutica da neoleucina-2/15 foi testada em um modelo CAR-T.

Camundongos NSG inoculados com 0,5 × 10 6 células tumorais RAJI não foram tratados, foram tratados com 0,8 × 10 6 células CAR-T anti-CD19 (infundidos 7 dias após a inoculação das células tumorais) ou foram tratados de forma semelhante com células CAR-T anti-CD19 mais 20 µg/dia de IL-2 humana ou neoleucina-2/15 nos dias 8-14 após a inoculação do tumor. Como esperado, a Neoleucina-2/15 mostrou aumentar significativamente o efeito antitumoral da terapia com células CAR-T, retardando o crescimento do tumor e estendendo a sobrevivência do camundongo ((ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019)).

[0590] O projeto de novo de agentes miméticos de proteínas tem o potencial de transformar o campo da terapêutica baseada em proteínas, permitindo o desenvolvimento de moléculas biossuperiores com propriedades terapêuticas aprimoradas e efeitos colaterais reduzidos, ao contrário de IL-2 recombinante e variantes projetadas de hIL-2, neoleucina-2/15 pode ser expressa de forma solúvel em E. coli (ver Figura 17), retém a atividade em alta temperatura, não interage com IL-2R e é robusta a mudanças de sequência substanciais que permitem a engenharia de novas funções (Figura 7).

[0591] Modularidade robusta de neoleucina-2/15. Agrafamento de dissulfeto e reengenharia em um mimético de IL-4: Neoleucina-2/15 é altamente modular, permitindo ajustar facilmente suas propriedades, como aumentar sua estabilidade ou modificar sua preferência de ligação. Essa modularidade e robustez foram aproveitadas pela introdução, por projeto computacional, de grampos de dissulfeto único que aumentam a estabilidade e preservam a função de neoleucina-2/15. Em um exemplo, uma ponte dissulfeto foi introduzida pesquisando pares de posições com arranjos geométricos favoráveis seguido por minimização de estrutura principal flexível. O projeto final introduziu um único dissulfeto entre os resíduos 38 e 75, que estabiliza as hélices H3 e H2. Essa estratégia aumentou a estabilidade da neoleucina-2/15 (Tm > 95 °C), mantendo sua sequência e função praticamente inalterada (ver Silva et al., Nature 565, página 186, 10 de janeiro de 2019). As propriedades de modularidade da neoleucina-2/15 foram usadas para modificar sua preferência de ligação. Todas as citocinas da família da interleucina-2 interagem com o c e compartilham uma arquitetura comum. Portanto, foi hipotetizado que a neoleucina-2/15 poderia ser transformada em outra citocina mimética da família IL-2 alterando apenas os aminoácidos na metade do sítio de ligação que interage com IL-2R (hélices H1 e H3). Como prova de um conceito, a interleucina-4 humana (hIL-4) foi escolhida como alvo, uma vez que compartilha extensa homologia estrutural com a IL-2 e tem aplicações potenciais na medicina regenerativa. Neo-2/15 foi modificada para se ligar ao receptor de IL-4 humana (compreendendo IL-4R e c) e não ao receptor de IL-2 humana (compreendendo IL-2R e c) alinhando o modelo de Neo-2/15 na estrutura de IL-4 humana ligada ao seu receptor de IL-4, e mutando 14 resíduos em Neo-2/15 para combinar os aminoácidos de IL-4 nas posições estruturais que medeiam as interações entre IL-4 e IL4r (Figura 3). A ligação foi ainda otimizada pela evolução direcionada usando mutagênese aleatória e triagem de variantes de alta afinidade de ligação, que introduziram duas substituições de aminoácidos adicionais e modificou um dos quatorze resíduos originais enxertados da proteína IL-4, criando assim uma nova proteína Neoleucina-4 com um total de dezesseis mutações de Neoleucina-2/15. O projeto otimizado resultante, neoleucina-4 (ver Tabela 6), foi expresso de forma recombinante e purificado a partir de E. coli e testado para ligação. Neoleucina-4 liga-se com alta afinidade ao receptor de IL-4R , liga-se cooperativamente ao IL-4R c (ver Figura 3), e não se liga com nenhuma afinidade ao receptor de IL-2 (dados não mostrados). Neoleucina-4 retém as propriedades termoestáveis superiores de neoleucina- 2/15 (ver Figura 14b, c), e se liga ao receptor de IL-13 como esperado, dada a reatividade cruzada natural de IL-4 para o receptor de IL-13 (dados não mostrados).

MÉTODOS

[0592] Projeto computacional de agentes miméticos de citocina de novo: O projeto de agentes miméticos de citocina de novo começou definindo a estrutura de hIL-2 no complexo quaternário com o receptor de IL-2R c como molde para o projeto.

Após a inspeção, os resíduos que compõem o sítio de ligação foram definidos como hotspots usando metadados de RosettaTM (PDBInfoLabels). A estrutura foi alimentada no novo protocolo de projeto mimético que é programado em PyRosetta TM, e que pode detectar automaticamente os elementos da estrutura central secundária que compõem o modelo de destino e produzem as estruturas principais miméticas de novo resultantes com informações compatíveis de RosettaScripts TM completas para o projeto.

Resumidamente, o algoritmo de construção mimético funciona da seguinte maneira.

Para a primeira geração de projetos, cada um dos elementos centrais foi idealizado por reconstrução usando laços de um banco de dados agrupado de fragmentos altamente ideais (fragmentos de 4 aminoácidos). Após a idealização, o protocolo de construção mimética visa reconectar os elementos idealizados aos pares em todas as combinações possíveis.

Para fazer isso, ele usa a montagem de fragmentos combinatórios de fragmentos agnósticos de sequência do banco de dados, seguido por minimização de estrutura restrita cartesiana para soluções potenciais (ou seja, onde as extremidades N e C do fragmento construído estão perto o suficiente para ligar as duas estruturas secundárias). Após a minimização, as soluções são verificadas para conter fragmentos altamente ideais (ou seja, cada fragmento sobreposto que compõe os dois elementos conectados também está contido no banco de dados) e nenhum conflito de estrutura com o receptor-alvo (contexto). As soluções de estrutura de passagem foram então traçadas usando o mesmo banco de dados de fragmentos para determinar os aminoácidos mais prováveis em cada posição (essa informação foi codificada em metadados no projeto). Em seguida, soluções para pares de estruturas secundárias conectadas foram combinadas combinatoriamente para produzir estruturas principais totalmente conectadas usando componentes conectados da teoria dos gráficos.

Como o número de soluções cresce exponencialmente com cada par de elementos, em cada etapa de combinação de fragmentos classificamos os projetos para favorecer aqueles com interconexões mais curtas entre pares de elementos centrais, e mantivemos apenas as soluções principais para prosseguir para a próxima etapa.

Soluções totalmente conectadas foram então perfiladas por camada (interface, núcleo, superfície não núcleo, superfície), a fim de restringir as identidades dos possíveis aminoácidos para serem compatíveis com as camadas.

Finalmente, todas as informações sobre pontos ativos, aminoácidos de fragmentos integrados compatíveis e camadas foram combinadas (o ponto ativo tem precedência sobre a probabilidade de aminoácidos e a probabilidade de aminoácidos tem precedência sobre a camada). Essas estruturas principais totalmente perfiladas foram então passadas para RosettaScriptsTM para projeto e filtragem da estrutura principal flexível.

Para a segunda geração de projetos, duas abordagens foram seguidas.

Na primeira abordagem, reprojetos de sequência do melhor projeto otimizado de primeira geração foram executados (G1_neo2_40_1F,). Na segunda abordagem, novos agentes miméticos foram desenvolvidos usando G1_neo2_40_1F como o modelo-alvo.

O protocolo de projeto mimético nessa segunda geração era semelhante ao descrito para a primeira geração, mas com duas diferenças principais.

Em primeiro lugar, os fragmentos do núcleo não foram mais construídos a partir de fragmentos, mas sim pela constatação de equações paramétricas de ângulos phi e psi repetitivos (ômega fixados em 180º) que resultam em estruturas secundárias repetitivas que recapitulam cada uma das hélices-al o o mais pr imo poss el, um passo nos ângulos phi e psi foi permitido a cada X-aminoácidos para permitir às hélices a possibilidade de ter curvatura (parâmetros finais: H1:, H2:, H3, H4), o uso dessas equações paramétricas permitiu alterar o tamanho de cada um dos elementos do núcleo na estrutura-alvo à vontade (aumentar ou diminuir o tamanho), que foi acoplado (máx/min 8.a.a.) com o processo de construção do circuito e reduções no tamanho do núcleo elementos não tinham permissão para remover pontos de acesso do local de ligação.

A segunda diferença nos projetos de segunda geração, é que em vez de reconectar os elementos centrais da estrutura secundária, usamos um tamanho de fragmento de 7 aminoácidos, e nenhuma montagem combinatória de mais de um fragmento foi permitida (ou seja, um único fragmento deve ser capaz de fechar um par de estruturas secundárias). O resto do algoritmo de projeto era essencialmente semelhante ao seguido no algoritmo de geração. As funções de energia da RosetaTM utilizadas foram talaris2013 e talaris2014 , para a primeira e segunda gera o de projetos, respectivamente.

[0593] Os bancos de dados de fragmentos altamente ideais usados para o projeto das estruturas principais para os agentes miméticos de novo foram construídos com o novo aplicativo da Rosetta TM kcenters_clustering_of_fragments usando um e tenso banco de dados de estruturas de proteínas não redundantes publicamente disponíveis do banco de dados de proteínas RCSB, que era composto de 16767 PDBs para o banco de dados 4-mer usado para os projetos de primeira geração e 7062 PDBs para o banco de dados 7-mer usado para os projetos de segunda geração.

[0594] Exibição de levedura: A levedura foi transformada com genes que codificam as proteínas a serem exibidas juntamente com o vetor pETcon3 linearizado. O vetor foi linearizado por superdigestão de 100 vezes por NdeI e XhoI (New England Biolabs) e então purificado por extração em gel (Qiagen). Os genes incluíram 50 bases de sobreposição com o etor em ambas as e tremidades 5 e 3 , de modo que a recombinação homóloga colocaria os genes no quadro entre o gene AGA2 e o marcador myc no vetor. A levedura foi cultivada em meio C-Trp-Ura antes da indução em meio SGCAA como descrito anteriormente. 12 a 18 horas após a indução, as células foram lavadas em tampão de exibição resfriado (50 mM NaPO4, pH 8, 20 mM NaCl, BSA a 0,5%) e incubadas com concentrações variáveis de receptor biotinilado (IL-2R humana ou murina, IL-2R , IL-2R ou IL-4R humana) enquanto agitada a 4 °C. Após aproximadamente 30 minutos, as células foram lavadas novamente em tampão resfriado e, em seguida, incubadas em gelo por 5 minutos com anticorpo anti-c-Myc conjugado com FITC (1 ul por 3x106 células) e estreptavidina-ficoeritrina (1 ul por 100 ul de volume de levedura). A levedura foi então lavada e contada por citometria de fluxo (Accuri

C6) ou classificada por FACS (Sony SH800). Para experiências em que a incubação inicial do receptor foi conduzida com uma combinação de IL-2R biotinilado e IL-4R não biotinilado, o receptor não biotinilado foi fornecido em excesso molar.

[0595] Mutagênese e maturação de afinidade: Para mutagênese baseada em PCR propensa a erros, o projeto a ser mutado foi clonado no vetor pETcon3 e amplificado usando o kit de mutagênese II MutaGeneTM (Invitrogen), de acordo com as instruções do fabricante para produzir uma frequência de mutação de aproximadamente 1% por nucleotídeo. 1 ug deste gene mutado foi eletroporado em levedura EBY100 em conjunto com 1 ug de vetor linearizado pETcon3, com uma eficiência de transformação da ordem de 108. As leveduras foram induzidas e classificadas várias vezes em sucessão com concentrações de receptor progressivamente decrescentes até a convergência da população. As leveduras cresceram novamente em meio C-Trp- Ura entre cada tipo.

[0596] Bibliotecas de mutagênese de saturação de sítio (SSM) foram construídas a partir de DNA sintético de Genscript. Para cada aminoácido em cada modelo de projeto, iniciadores diretos e iniciadores reversos foram projetados, de modo que a amplificação por PCR resultasse em um produto de PCR 5 com um c don NNK degenerado e um produto de PCR 3 , respecti amente. A amplifica o dos produtos esquerdo e direito por iniciadores COF e COR gerou uma série de produtos de molde, cada uma consistindo em um códon NNK degenerado em uma posição de resíduo diferente. Para cada projeto, esses produtos foram agrupados para gerar a biblioteca SSM. Bibliotecas SSM foram transformadas por eletroporação em células condicionadas de Saccharomyces cerevisiae cepa EBY100, juntamente com o vetor pETCON3 linearizado, usando o protocolo previamente descrito por Benatuil et al.

[0597] Bibliotecas combinatórias foram construídas a partir de DNA sintético de Genscript contendo nucleotídeos ambíguos e similarmente transformadas em vetor pETCON3 linearizado.

[0598] Expressão de proteínas: Os genes que codificam as sequências de proteínas projetadas foram sintetizados e clonados em vetores de expressão de plasmídeo pET-28b(+) E. coli (GenScript, etiqueta 6xHis N-terminal e local de clivagem de trombina). Os plasmídeos foram então transformados em células E. coli Lemo21 quimicamente competentes (NEB). A expressão da proteína foi realizada usando caldo Terrific Broth TM e sais M, as culturas foram cultivadas a 37 °C até OD600 atingir aproximadamente 0,8, então a expressão foi induzida com 1 mM de isopropil -D-tiogalactopiranosídeo (IPTG), e a temperatura foi reduzida para 18 °C. Após a expressão por aproximadamente 18 horas, as células foram colhidas e lisadas com um microfluidizador Microfluidics M110P a 124 MPa (18.000 psi), então a fração solúvel foi clarificada por centrifugação a 24.000 g por 20 minutos. A fração solúvel foi purificada por cromatografia de afinidade de metal imobilizado (Qiagen) seguida por cromatografia de exclusão por tamanho de FPLC (SuperdexTM 75 10/300 GL, GE Healthcare). A neoleucina-2/15 purificada foi caracterizada por verificação de Espectro de Massa (MS) do peso molecular das espécies em solução (Thermo Scientific), Exclusão de Tamanho - MultiAngle Laser Light Scattering (SEC-MALLS) a fim de verificar o estado monomérico e molecular peso (Agilent, Wyatt), SDS-PAGE e níveis de endotoxina (Charles River).

[0599] Componentes do complexo de IL-2 humana e de camundongo incluindo hIL-2 (a.a. 1-133), hIL-2Ra (a.a. 1-217), hIL-2Rb (a.a. 1-214) hIL-2Rg (a.a. 1-232), mIL-2 (a.a. 1-149), ectodomínio mIL-2Ra (a.a. 1- 213), ectodomínio mIL-2Rb (a.a. 1-215), e ectodomínio mgc (a.a. 1-233) foram secretados e purificados usando um sistema de expressão de baculovírus, conforme descrito anteriormente 17,49. Todas as proteínas foram purificadas para >98% de homogeneidade com uma coluna de dimensionamento Superdex TM 200 (GE Healthcare) equilibrada em HBS. A pureza foi verificada por análise SDS-PAGE. Para a expressão de IL-2 humana biotinilada e subunidades de receptor de IL-2 de camundongo, proteínas contendo um peptídeo aceitador de biotina C-terminal (BAP)-LNDIFEAQKIEWHE (SEQ ID NO: 303) foram expressas e purificadas conforme descrito por meio de cromatografia de afinidade Ni-NTA e depois biotiniladas com a enzima BirA ligase solúvel em Bicina 0,5 mM pH 8,3, ATP 100 mM, acetato de magnésio 100 mM e biotina 500 mM (Sigma). O excesso de biotina foi removido por cromatografia de exclusão de tamanho em uma coluna Superdex 200 equilibrada em HBS.

[0600] Dicroísmo circular (CD): medições de CD ultravioleta distante foram realizadas com um espectrômetro AVIV modelo 420 em tampão PBS (pH 7,4) em uma cubeta de comprimento de caminho de 1 mm com concentração de proteína de ~0,20 mg/ml (salvo indicação em contrário no texto). A temperatura derrete de 25 a 95 °C e o sinal de absorção monitorado é de 222 nm (etapas de 2 °C/min, 30 s de equilíbrio por etapa). Varreduras de comprimento de onda (195 a 260 nm) foram coletadas a 25 °C e 95 °C, e novamente a 25 °C após redobramento rápido (~5 min).

[0601] Estudos de fosforilação STAT5: estudos in vitro: Aproximadamente 2x105 YT-1, IL-2Ra+ YT-1 ou células CTLL-2 são colocadas em cada poço de uma placa de 96 poços e ressuspensas em meio completo RPMI contendo diluições em série de hIL-2, mIL-2, Super-2 ou agentes miméticos de IL-2 projetados. As células são estimuladas por 15 min a 37 °C e imediatamente fixadas pela adição de formaldeído a 1,5% e incubação por 10 min em temperatura ambiente. A permeabilização das células é obtida por ressuspensão em metanol 100% gelado por 30 min a 4 °C. As células fixadas e permeabilizadas são lavadas duas vezes com tampão FACS (solução salina tamponada com fosfato [PBS] pH 7,2 contendo 0,1% de albumina de soro bovino) e incubadas com Alexa Fluor® 647 conjugado com anti-STAT5 pY694 (BD Biosciences) diluído em tampão FACS por 2 horas à temperatura ambiente. As células são então lavadas duas vezes em tampão FACS e MFI foi determinado em um citômetro de fluxo CytoFLEX TM (Beckman-Coulter). As curvas de dose-resposta são ajustadas a um modelo logístico e metade da concentração efetiva máxima (valores de EC 50) são calculadas usando o software de análise de dados GraphPad Prism após subtração da intensidade média de fluorescência (MFI) de células não estimuladas e normalização para a intensidade máxima do sinal. As experiências são realizadas em triplicado e realizadas três vezes com resultados semelhantes. Estudos ex vivo: Os baços e os gânglios linfáticos são colhidos a partir de camundongos C57BL/6J ou B6;129S4-Il2ratm1Dw do tipo selvagem (CD25KO) e feitos em uma suspensão de célula única em tampão de classificação (2% de soro fetal de bezerro em solução salina tamponada com fosfato de pH 7,2). As células T CD4+ são enriquecidas por meio de seleção negativa pela coloração da suspensão de células com anticorpos anti-B220, CD8, NK1.1, CD11b, CD11c, Ter119 e CD19 conjugados com biotina a 1:100 por 30 min em gelo. Após uma lavagem com tampão de classificação, o antibiotina MicroBeadsTM (Miltenyi Biotec) é adicionado à suspensão de células a 20 l por 107 células no total e incubado em gelo por 20 minutos. As células são lavadas, ressuspensas e a seleção negativa é então realizada usando ímãs EasySepTM (STEMCELL Technologies). Aproximadamente 1 x 105 células enriquecidas são adicionadas a cada poço de uma placa de 96 poços em meio RPMI completo com FCS a 5% com 10 diluições em série de mIL-2, Super-2, ou Neoleucina-2/15. As células são estimuladas por 20 minutos a 37 °C em 5% de CO2, fixadas com 4% de PFA e incubadas por 30 minutos a 4 °C. Após a fixação, as células são colhidas e lavadas duas vezes com tampão de classificação e novamente fixadas em 500 l de metanol 90% gelado em dH2O por 30 minutos em gelo para permeabilização. As células são lavadas duas vezes com tampão Perm/Wash (BD Biosciences) e coradas com anti-CD4-PerCP em tampão Perm/Wash (1:300), anti-CD44-Alexa Fluor 700 (1:200), anti-CD25-PE-C 7 (1:200) e 5 l por amostra de anti-pSTAT5-PE pY694 por 45 min em temperatura ambiente no escuro. As células são lavadas com Perm/Wash e ressuspensas em tampão de classificação para análise em um citômetro de fluxo BD LSR II (BD Biosciences).

TABELAS DE DADOS

[0602] Tabela 2: Sequências de aminoácidos para os doze melhores projetos de primeira rodada.

Dez dos projetos foram (G1_neo2_35-44) foram experimentalmente caracterizados por exibição de levedura e todos, exceto dois (G1_neo2_35 e G1_neo2_44) foram encontrados para se ligar a ILR c quimérico marcado com fluorescência em baixas concentrações nanomolares por meio de triagem de citometria de fluxo de ligantes de proteína de primeira rodada projetados.

Os projetos indicados foram expressos em levedura e incubados com 2 nM de hIL-2R c ou 0 nM de IL-2R c (dados não mostrados).

Projeto Sequência

STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNENLNRAITAAQSWI

STGKIDLDKAEDIRRNSDQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILL G1_neo2_33 EAR (SEQ ID NO: 103)

STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNENLNRAITAAQSCI

STGKCDLDKAEDIRRNSDQARREAEKRGIDVRDLISNAQVIL G1_neo2_34 LEAR (SEQ ID NO: 104)

STKKWQLQAEHALLDWQMALNKSPEPNENLNRAITAAQSWI

STGKIDCDKAEDIRRNSDQARREAEKRGIDVRDLISNAQVILL G1_neo2_35 EAC (SEQ ID NO: 105)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEELNRAITDAQSWIS

TGKIDLDRAEELARNLEKVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALE G1_neo2_36 LK (SEQ ID NO: 106)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEELNRCITDAQSWIS

TGKIDLDRAEECARNLEKVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIAL G1_neo2_37 ELK (SEQ ID NO: 107)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEELNRAITDAQSCIST

GKCDLDRAEELARNLEKVRDEALKRGIDVRDLVSNAKVIALE G1_neo2_38 LK (SEQ ID NO: 108)

STKKLQLQAEHFLLDVQMILNESPEPNEELNRAITDAQSWIS

TGKIDLDRAEELCRNLEKVRDEALKRGIDVRDLVSNACVIALE G1_neo2_39 LK (SEQ ID NO: 109)

STKKLQLQAEHALLDAQMMLNRSPEPNEKLNRIITTMQSWIS

TGKIDLDGAKELAKEVEELRQEAEKRGIDVRDLASNLKVILLE G1_neo2_40 LA (SEQ ID NO: 110)

STKKLQLQAEHALLDAQMMLNRSPEPNEKLNRIITTMQSCIS

TGKCDLDGAKELAKEVEELRQEAEKRGIDVRDLASNLKVILL G1_neo2_41 ELA (SEQ ID NO: 111)

STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNESLNRMITWLQSWIS

TGKIDLDNAQEMAKEAEKIRKEMEKRGIDVRDLISNIIVILLEL G1_neo2_42 S (SEQ ID NO: 112)

STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNESLNRMITWLQSCIS

TGKCDLDNAQEMAKEAEKIRKEMEKRGIDVRDLISNIIVILLEL G1_neo2_43 S (SEQ ID NO: 113)

STKKIQLQLEHALLDVQMALNRSPEPNESLNRMITWLQSWIS

TGKIDLDNAQEMCKEAEKIRKEMEKRGIDVRDLISNICVILLEL G1_neo2_44 S (SEQ ID NO: 114)

[0603] Tabela 3. Sequências de aminoácidos para os projetos de primeira rodada otimizados experimentalmente.

Projeto Sequência

STKKTQLLAEHALLDAFMMLNVVPEPNEKLNRIITTMQSWIY G1_neo2_40_ TGKIDADGAKELAKEVEELEQEYEKRGIDVEDDASNLKVILLE 1A LA (SEQ ID NO: 115)

STKKTQLLAEHALLDAHMMLNMLPEPNEKLNRIITTMQSWIH G1_neo2_40_ TGKIDGDGAQELAKEVEELEQEYEKRGIDVEDEASNLKVILL 1B ELA (SEQ ID NO: 116)

STKKTQLLAEHALLDAFMMLNMVPEPNEKLNRIITTMQSWIF G1_neo2_40_ TGKIDGDGAKELAKEVEELEQEFEKRGIDVEDEASNLKVILLE 1C LA (SEQ ID NO: 117)

STKKTQLLAEHALLDALMMLNMVPEPNEKLNRIITTMQSWIF G1_neo2_40_ TGKIDGDGAQELAKEVEELEQELEKRGIDVEDYASNLKVILLE 1D LA (SEQ ID NO: 118)

STKKTQLLAEHALLDAHMMLNVVPEPNEKLNRIITTMQSWIY G1_neo2_40_ TGKIDRDGAQELAKEVEELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILL 1E ELA (SEQ ID NO: 119)

STKKTQLLAEHALLDALMMLNLLPEPNEKLNRIITTMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDGDGAQELAKEVEELEQEHEKRGIDVEDYASNLKVILLE 1F LA (SEQ ID NO: 120)

STKKTQLLAEHALLDAYMMLNMVPEPNEKLNRIITTMQSWIL G1_neo2_40_ TGKIDSDGAQELAKEVEELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILLE 1G LA (SEQ ID NO: 121)

STKKTHLLAEHALLDAYMMLNVMPEPNEKLNRIITTMQSWIF G1_neo2_40_ TGKIDGDGAKELAKEVEELEQEFEKRGIDVDDDASNLKVILL 1H ELA (SEQ ID NO: 122)

STKKTQLLAEHALLDAYMMLNLVPEPNEKLNRIITTMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDADGAQELAIEVEELEQEYEKRGIDVDDYASNLKVILLEL 1I A (SEQ ID NO: 123)

STKKTQLMAEHALLDAFMMLNVLPEPNEKLNRIITTMQSWIF G1_neo2_40_ TGKIDGDDAQELAKEVEELEQELEKRGIDVDDDASNLKVILL 1J ELA (SEQ ID NO: 124)

STKKTQLLIEHALLDALDMSRNLPEPNEKLSRIITTMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDGDGAQQLAKEVEELEQEHEKRGEDVEDEASNLKVILL 1F_H1 ELA (SEQ ID NO: 125)

STKKTQLLLEHALLDALHMRRNLPEPNEKLSRIITTMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDGDGAQELAKEVEELEQEHEKRGRDVEDDASNLKVILL 1F_H2 ELA (SEQ ID NO: 126)

STKKTQLLIEHALLDALNMRKKLPEPNEKLSRIITDMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDGDGAQQLAKEVEELEQEHEKRGGDVEDYASNLKVILL 1F_H3 ELA (SEQ ID NO: 127)

STKKTQLLLEHALLDALHMSRELPEPNEKLNRIITDMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDGDGAQDLAKEVEELEQEHEKRGGDVEDYASNLKVILL 1F_H4 ELA (SEQ ID NO: 128)

STKKTQLLIEHALLDALHMSRKLPEPNEKLSRIITTMQSWIFT G1_neo2_40_ GKIDGDGAQHLAKEVEELEQEHEKRGGEVEDEASNLKVILL 1F_H5 ELA (SEQ ID NO: 129)

STKKTQLLIEHALLDALHMKRKLPEPNEKLNRIITNMQSWIFT G1_neo2_40_ EKIDGDGAQDLAKEVEELEQEHEKRGQDVEDYASNLKVILLE 1F_H6 LA (SEQ ID NO: 130)

STEKTQLAAEHALRDALMLKHLLNEPNEKLARIITTMQSWQF G1_neo2_40_ TGKIDGDGAQELAKEVEELQQEHEVRGIDVEDYASNLKVILL 1F_M1 HLA (SEQ ID NO: 131)

STKNTQLAAEDALLDALMLRNLLNEPNEKLARIITTMQSWQF G1_neo2_40_ TEKIDGDGAQELAKEVEELQQEHEERGIDVEDYASNLKVILL 1F_M2 QLA (SEQ ID NO: 132)

STEKTQHAAEDALRDALMLRNLLNEPNEKLARIITTMQSWQF G1_neo2_40_ TEKIDGDGAQELAKEVEELQQEHEVRGIDVEDYASNLKVILL 1F_M3 QLA (SEQ ID NO: 133)

[0604] Tabela 4: Sequências de aminoácidos para projetos de segunda rodada. G2_neo2_40_1F_seq02 a G2_neo2_40_1F_seq28 correspondem aos 27 reprojetos de sequência RosettaTM de G1_neo2_40_1F; G2_neo2_40_1F_seq29 a G2_neo2_40_1F_seq42 representam os 14 novos projetos miméticos de novo.

Projeto Sequência

TQKKQQLLAEHALLDALMILNMLKTSSEAVNRMITIAQSWIFTG G2_neo2_40 TSNPEEAKEMIKMAEQAEEEARREGVDTEDYVSNLKVILKEIA _1F_seq02 (SEQ ID NO: 134) G2_neo2_40 TTKKYQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKMNRIITTMQSWIFT _1F_seq03 GTFDPDQAEELAKLVEELREEFRKRGIDTEDYASNLKVILKELS

(SEQ ID NO: 135)

TTKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLNRIITTLQSWIFRGEI G2_neo2_40 DPDRARELAKLLEEIREEMRKRGIDTEDYVSNMIVIIRELA _1F_seq04 (SEQ ID NO: 136)

TKKKIQLLAEHVLLDLLMMLNLSSESNEKMNRLITIVQSWIFTG G2_neo2_40 TIDPDQAEEMAKWVEELREEFRKRGIDTEDYASNVKVILKELS _1F_seq05 (SEQ ID NO: 137)

TKKKYQLLIEHLLLDALMVLNMSSESNEKLNRIITILQSWIFTGT G2_neo2_40 WDPDLAEEMEKLMQEIEEELRRRGIDTEDYMSNMRVIIKELS _1F_seq06 (SEQ ID NO: 138)

TKKKLQLLVEHLLLDMLMILNMSSESNEKLNRLITELQSWIFRG G2_neo2_40 EIDPDKAEEMWKIMEEIEKELRERGIDTEDYMSNAKVIIKELS _1F_seq07 (SEQ ID NO: 139)

TSKKQQLLAEHALLDALMILNISSESSEAVNRAITWLQSWIFKG G2_neo2_40 TVNPDQAEEMRKLAEQIREEMRKRGIDTEDYVSNLEVIAKELS _1F_seq08 (SEQ ID NO: 140)

TKKKYQLLIEHLLLDLLMVLNMSSESNEKINRLITWLQSWIFTG G2_neo2_40 TYDPDLAEEMYKILEELREEMRERGIDTEDYMSNMRVIVKELS _1F_seq09 (SEQ ID NO: 141)

TKKKWQLLIEHLLLDLLMILNLSSESNEKLNRLITWLQSWIFTGT G2_neo2_40 YDPDLAEEMKKMMDEIEDELRERGIDTEDYMSNAKVIIKELS _1F_seq10 (SEQ ID NO: 142)

TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFTGTI G2_neo2_40 DPDQAEELSKLVEEIREEMRKRGIDTEDYVSNLKVILDELS _1F_seq11 (SEQ ID NO: 143)

TEKKLQLLVEHALLDALMILNLWSESNEKLNRIITTMQSWIFTG G2_neo2_40 RIDPDKAEELAKLVEELREEARERGIDTEDYVSNLKVILKELS _1F_seq12 (SEQ ID NO: 144)

TKKKYQLLMEHLLLDLLMVLNMSSESNEKLNRLITIIQSWIFTGT G2_neo2_40 WDPDKAEEMAKMLKEIEDELRERGIDTEDYMSNMIVIMKELS _1F_seq13 (SEQ ID NO: 145)

TTKKIQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKMNRIITTMQSWIFEG G2_neo2_40 RIDPDQAQELAKLVEELREEFRKRGIDTEDYVSNLKVILEELS _1F_seq14 (SEQ ID NO: 146)

TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFTG G2_neo2_40 TIDPDQAEELAKLVRELREEFRKRGIDTEDYASNLEVILRELS _1F_seq15 (SEQ ID NO: 147)

TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSKSNEKLNRIITTMQSWIFNGTI G2_neo2_40 DPDRARELAKLVEEIRDEMEKNGIDTEDYVSNLKVILEELA _1F_seq16 (SEQ ID NO: 148)

TKKKYQLLIEHVLLDLLMLLNLSSESNEKMNRLITILQSWIFTGT G2_neo2_40 YDPDKAEEMAKLLKELREEFRERGIDTEDYISNAIVILKELS _1F_seq17 (SEQ ID NO: 149)

TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFTG G2_neo2_40 TIDPDRAEELAKLVEELREEFRKRGIDTEDYASNLKVILKELS _1F_seq18 (SEQ ID NO: 150)

TKKKIQLLVEHALLDALMMLNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFNG G2_neo2_40 TIDPDQARELAKLVEELREEFRKRGIDTEDYASNLKVILEELA _1F_seq19 (SEQ ID NO: 151)

TKKKLQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFTG G2_neo2_40 TVDPDQAEELAKLVEEIREELRKRGIDTEDYVSNLKVILKELS _1F_seq20 (SEQ ID NO: 152)

TTKKYQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFTGT G2_neo2_40 FDPDQAEELAKLVREIREEMRKRGIDTEDYVSNLEVILRELS _1F_seq21 (SEQ ID NO: 153)

TKKKIQLLVEHALLDALMILNLSSESNEKLNRIITTMQSWIFTGTI G2_neo2_40 DPDRAEELAKLVREIREEMRKRGIDTEDYVSNLEVILRELS _1F_seq22 (SEQ ID NO: 154)

TKKKYQLLIEHLLLDLLMILNLSSESNEKLNRLITWLQSWIFRGE G2_neo2_40 WDPDKAEEWAKILKEIREELRERGIDTEDYMSNAIVIMKELS _1F_seq23 (SEQ ID NO: 155)

TDKKLQLLVEHLLLDLLMMLNLSSKSNEKMNRLITIAQSWIFTG G2_neo2_40 KVDPDLAREMIKLLEETEDENRKNGIDTEDYVSNARVIAKELE _1F_seq24 (SEQ ID NO: 156)

TKKKIQLLVEHALLDALMLLNLSSESNEKMNRIITTMQSWIFTG G2_neo2_40 TIDPDQAEELAKLVEELKEEFKKRGIDTEDYVSNLKVILKELS _1F_seq25 (SEQ ID NO: 157)

TKKKYQLLIEHALLDALMILNLWSESNEKLNRIITTMQSWIFTGT G2_neo2_40 YDPDKAEELEKLAKEIEDEARERGIDTEDYMSNLRVILKELS _1F_seq26 (SEQ ID NO: 158)

TKKKAQLLAEHALLDALMLLNLSSESNERLNRIITWLQSIIFTGT G2_neo2_40 YDPDMVKEAVKLADEIEDEMRKRGIDTEDYVSNLRVILQELA _1F_seq27 (SEQ ID NO: 159) G2_neo2_40 TQKKNQLLAEHLLLDALMVLNQSSESSEVANRIITWAQSWIFE _1F_seq28 GRVDPNKAEEAKKLAKKLEEEMRKRGIDMEDYISNMKVIAEE

MS (SEQ ID NO: 160)

EDYYSNLKVILEELAREMERNGLSDKAEEWRQWKKIVERIRQI G2_neo2_40 RSNNSDLNEAKELLNRLITYIQSQIFEISERIRETDQEKKEESW _1F_seq29 KKWQLLLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 161)

PEKKRQLLLEHILLDALMLLNLLETNPQNTESKFEDYISNAEVIA G2_neo2_40 EELAKLMESLGLSDEAEKFKKIKQWLREVWRIWSSTNWSTLE _1F_seq30 DKARELLNRIITTIQSQIFY (SEQ ID NO: 162)

PEKKRQLLLEHILLDLLMILNMIETNRENTESEMEDYWSNVRVI G2_neo2_40 LRELARLMEELNYKELSELMERMRKIVEKIRQIVTNNSSLDTAR _1F_seq31 EWLNRLITWIQSLIFR (SEQ ID NO: 163)

PEKKRQLLAEHALLDALMLLNIIETNSKNTESKMEDYVSNLEVI G2_neo2_40 LTEFKKLAEKLNFSEEAERAERMKRWARKAYQMMTLDLSLDK _1F_seq32 AKEMLNRIITILQSIIFN (SEQ ID NO: 164)

PEKKRQLLAEHLLLDVLMMLNGNASLKDYASNAQVIADEFREL G2_neo2_40 ARELGLTDEAKKAEKIIEALERAREWLLNNKDKEKAKEALNRAI _1F_seq33 TIAQSWIFN (SEQ ID NO: 165)

PEKKRQLLLEHLLLDLLMILNMLRTNPKNIESDWEDYMSNIEVII G2_neo2_40 EELRKIMESLGRSEKAKEWKRMKQWVRRILEIVKNNSDLEEA _1F_seq34 KEWLNRLITIVQSEIFE (SEQ ID NO: 166)

WEKKRQLLLEHLLLDLLMILNMWRTNPQNTESLMEDYMSNAK G2_neo2_40 VIVEELARMMRSQGLEDKAREWEEMKKRIEEIRQIIQNNSSKE _1F_seq35 RAKEELNRLITYVQSEIFR (SEQ ID NO: 167)

PKKKIQLLAEHALLDALMILNIVKTNSQNAEEKLEDYASNVEVIL G2_neo2_40 EEIARLMESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEM _1F_seq36 ANRIITLLQSWIFS (SEQ ID NO: 168)

PEKKRQLLAEHALLDALMILNILQTNPQNAEEKLEDYMSNVEVI G2_neo2_40 MEEFARMMRNGDRSEEAENAERIKKWVRKASSTASSEEQRE _1F_seq37 MMNRAITLMQSWIFE (SEQ ID NO: 169)

PEKKRQLLAEHLLLDALMVLNMLTTNSKNTEEKLEDYISNMKVI G2_neo2_40 IKEMIELMRSLGRLEEAEKWKEALKAVEKIGSRMDSETARELA _1F_seq38 NRIITLAQSAIFY (SEQ ID NO: 170)

PEKKRQLLAEHALLDALMFLNLVETNPDQAEEKIEDYASNLRVI G2_neo2_40 AEELARLFENLGRLDEAQKAKDIKELAERARSRVSSEKRKEAM _1F_seq39 NRAITILQSMIFR (SEQ ID NO: 171)

PEKKRQLLAEHALLDALMILNIIRTNSDNTESKLEDYISNLKVILE G2_neo2_40 EIARLMESLGLSDEAEKAKEAMRLADKAGSTASEEEKKEAMN _1F_seq40 RVITWAQSWIFN (SEQ ID NO: 172)

PEKKRQLLAEHALLDALMMLNILRTNPDNAEEKLEDYWSNLIVI G2_neo2_40 LREIAKLMESLGLTDEAEKAKEAARWAEEARTTASKDQRREL _1F_seq41 ANRIITLLQSWIFS (SEQ ID NO: 173)

PEKKRQLLAEHLLLDALMILNIIETNEQNAESKLEDYISNAKVILD G2_neo2_40 EFREMARDLGLLDEAKKAEKMKRWLEKMRSNASSDERREWA _1F_seq42 NRMITTAQSWIFN (SEQ ID NO: 174)

[0605] Tabela 5. Sequências de aminoácidos para os designs de segunda rodada otimizados experimentalmente.

Projeto Sequência G2_neo2_40_ TNKEAQLHAEFALYDALMLLNLSSESNERLNRIITWLQSIIFYE 1F_seq27_S1 TYDPDMVKEAVKLADEIEDEMRKRKIDTEDYVVNLRLILQELA 8 (SEQ ID NO: 175) G2_neo2_40_ TKKDAELLAEFALYDALMLLNLSSESNERLNEIITWLQSIIFYG 1F_seq27_S2 TYDPDMVKEAVKLADEIEDEMRKRGIDTEDYVSNLRLILQELA 2 (SEQ ID NO: 176) G2_neo2_40_ TNKKAQLHAEFALYDALMLLNLSSESNERLNDIITWLQSIIFTG 1F_seq27_S2 TYDPDMVKEAVKLADEIEDEMRKRKIDTEDYVVNLRYILQELA 4 (SEQ ID NO: 177)

EDYYSNLKLILEELAREMERNGLSDKAEEWRQWKKIVERIRQ G2_neo2_40_ IRSNNSDLNEAKELLNRLITYIQSQIFEVLHGVGETDQEKKEE 1F_seq29_S6 SWKKWDLLLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 178)

EDYYSNLKVILEELAREMERNGLSDKAEEWRQWKKIVERIRQ G2_neo2_40_ IRSNNSDLNEAKELLNELITYIQSQIFEVIEREGETDQEKKEES 1F_seq29_S7 WKKWELHLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 179)

EDYYSNLKLILEELAREMERNGLSDKAEEWRQWKKIVERIRQ G2_neo2_40_ IRSNNSDLNEAKELLNRLITYIQSQIFEVLEGVGETDQEKKEE 1F_seq29_S8 SWKKWELHLEHALLDVLMLLND (SEQ ID NO: 180) Neolucina- 2/15 (ou seja, G2_neo2_40_ PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELI 1F_seq36_S1 LEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEE 1) MANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 181) G2_neo2_40_ PKKKIQLLAEHALFDLLMILNIVKTNSQNAEEKLEDYAYNAGVI 1F_seq36_S1 LEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKDTASEDEQEE 2 MANEIITILQSWNFS (SEQ ID NO: 182)

[0606] Neoleucina-2/15-H8Y-K33E: H1->H3->H2 - >H4

[0607] PKKKIQLYAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEE

ELEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEE MANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 94)

[0608] A ligação de Neoleucina-2/15-H8Y-K33E ao receptor de IL2 foi medida por interferometria de biocamada e verificou-se que tinha maior afinidade de ligação do que Neoleucina-2 para IL2-Rbeta, tanto quando testado contra IL2Rbeta sozinho e quando testado contra o complexo IL2Rbeta-gama. Essa afinidade aumentada foi atribuída principalmente a uma taxa de desativação melhorada de IL2-Rbeta.

[0609] Tabela 6. Sequências de aminoácidos para os projetos miméticos da interleucina-4 com base na reengenharia de neolucina- 2/15.

Projeto Sequência

PKKKIQITAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRF IL4_G2_neo2_40 ERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS _1F_seq36_S11 EDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 183) Neoleucina-4 (ou seja, PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRF IL4_G2_neo2_40 ERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTASE _1F_seq36_S11_ DEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 184) MIF) EXEMPLO 2: MÍMICOS DE CITOCINAS DIVIDIDAS PARA

IMUNOTERAPIA DIRECIONADA

[0610] As proteínas de novo são projetadas seguindo as regras de uma estrutura de proteína ideal, fornecendo-lhes propriedades bioquímicas incomuns, como termoestabilidade extrema e robustez mutacional. Portanto, proteínas projetadas de novo são candidatas ideais para uso no desenvolvimento de proteínas terapêuticas condicionalmente ativas. Aqui, relatamos o desenvolvimento de agentes miméticos de citocinas divididas para imunoterapia altamente direcionada com base na proteína mimética de IL-2 recentemente desenvolvida, Neoleucina-2/15. Esse sistema permite a entrega de proteínas terapêuticas condicionalmente ativas que reconstituem sua atividade por colocalização na superfície das células-alvo. Identificamos potenciais locais de divisão e demonstramos reconstituição bem-sucedida da atividade de Neoleucina-2/15 pela ligação aos receptores de IL-2, sinalização celular e ativação dependente de colocalização na superfície das células tumorais-alvo. Também demonstramos essa aplicação para outro mimetizador de citocina projetado de novo, Neoleucina-4.

[0611] A fim de identificar potenciais locais de divisão de Neoleucina-2/15 (Neo2), avaliamos a estrutura da proteína para encontrar posições de divisão que minimizariam os efeitos prejudiciais sobre a função da proteína. Como resultado, definimos três posições de divisão exemplificativas: (i) entre os elementos helicoidais H1 (Neo2A1) e H3 -H2-H4 (Neo2B1), (ii) entre os elementos helicoidais H1-H3 (Neo2A2) e H2-H4 (Neo2B2), (iii) entre os elementos helicoidais H1-H3 -H2 (Neo2A3) e H4 (Neo2B3) (Figura 15). Os fragmentos de Neo2 dividida foram caracterizados analisando a sua capacidade de ligação ao receptor de IL-2 humana (Figura 15) e sinalizando em células CTTL-2 responsivas à IL-2 (Figura 16). Os fragmentos individuais divididos mostraram ter ligação desprezível a IL-2R e capacidade de sinali ação na maioria dos casos, mas atividade potente na combinação equimolar dos fragmentos separados divididos.

[0612] O desenvolvimento da Neo2 dividida permite a reconstituição dependente da colocalização da proteína e, portanto, a ativação condicional da Neo2 dividida. A fim de permitir a colocalização dos fragmentos Neo2A e Neo2B, em primeiro lugar realizamos fusões genéticas para os domínios de direcionamento (Figura 17). Neo2A1, Neo2A2 e Neo2A3 foram fundidos ao C-terminal de uma proteína de repetição de anquirina direcionada a Her2 (DARPin) por um ligante flexível de 15 resíduos (GSGGSGGGSGGSGSG; SEQ ID NO: 100). Neo2B1, Neo2B2 e Neo2B3 foram fundidos ao N-terminal de uma proteína de repetição de anquirina projetada direcionada a EGFR (DARPin) por um ligante flexível de 15 resíduos (GSGGSGGGSGGSGSG; SEQ ID NO: 100). Em seguida, avaliamos sua capacidade de reconstituir a ligação para IL- 2R após combinação dos fragmentos de divisão, demonstrando que as fusões não interferiram em sua capacidade de reconstituição de Neo-2 dividida (Figura 17).

[0613] Para avaliar a ativação dependente de colocalização e seletividade de direcionamento do sistema de Neo2 dividida, realizamos um ensaio in vitro com Neo-2/15 dividida direcionado para EGFR e Her2 (Figura 18a) na superfície de linhas celulares K562 manipuladas. Usamos quatro linhas celulares projetadas: (i) sem receptores de superfície, (ii) Her2+/eGFP+, (iii) EGFR+/iRFP+, (iv) Her2+/eGFP+ EGFR+/iRFP+ (Figura 18b). As quatro linhas de células foram misturadas em proporções equivalentes e incubadas com os fragmentos de Neo2 dividida direcionados por 15 minutos. Posteriormente, as células foram lavadas e incubadas com uma mistura de receptor IL-2 biotinilada e um conjugado fluorescente estreptavidina-ficoeritrina (SAPE). Finalmente, as células foram analisadas por classificação de células ativadas por fluorescência (FACS). A reconstituição bem-sucedida da atividade de Neo-2 resultou em marcação fluorescente com PE na superfície das células alvo (Figura 18c). Observamos forte ligação do receptor de IL-2 na superfície de Her2+ e Her2+/EGFR+ quando Neo2 completo foi direcionado com um único domínio de direcionamento anti-Her2 (aHer2-Neo2). Ligação semelhante foi observada quando os fragmentos de divisão de Neo2A1 e Neo2B1 foram ambos direcionados para Her2 (aHer2-Neo2A1 + aHer2-Neo2B1), demonstrando que ambos os fragmentos poderiam ser entregues ao mesmo marcador de superfície celular, se desejado. Além disso, observamos reconstituição altamente seletiva na superfície de Her2+/EGFR+ duplo positivo quando cada fragmento dividido foi direcionado para Her2 ou EGFR (aHer2-Neo2A1 + Neo2B1-aEGFR, aHer2- Neo2A2 + Neo2B2-aEGFR, aHer2-Neo2A3 + Neo2B3-aEGFR). Estudos adicionais demonstraram que para cada combinação de fragmentos de Neo2 dividida, a presença simultânea de ambos os fragmentos foi necessária para permitir o recrutamento do receptor de IL-2 na superfície das células K562 (Figura 19). Esses resultados demonstram a alta seletividade dos agentes miméticos da citoquina dividida para reconstituir a atividade desejada especificamente na superfície das células-alvo.

[0614] As aplicações da tecnologia de simulação de citocina dividida não se limitam apenas a antígenos associados a tumor. Para determinadas aplicações, direcionar subconjuntos específicos de células imunes a serem estimulados seletivamente seria benéfico para direcionar a resposta imune para tratar doenças. Por exemplo, este pedido seria útil para aumentar especificamente a expansão de células T citotóxicas CD8+, células Natural Killer ou células T CAR projetadas para potencializar sua resposta antitumoral, mas também, direcionar as células T regulatórias para suprimir um forte sistema imunológico resposta (Figura 20a). Além disso, em alguns cenários, abordagens de direcionamento mistas podem ser implantadas, ou seja, direcionar um fragmento dividido para as células tumorais ou microambiente tumoral, enquanto o outro fragmento é entregue às células imunes (Figura 20b).

[0615] Finalmente, para demonstrar a transferibilidade da metodologia descrita aqui para outras interleucinas projetadas de novo, criamos um novo mimético de IL-4 condicionalmente ativo (Figura 21). Para conseguir isso, introduzimos com sucesso mutações específicas na Neo-2 dividida que modificam a interface de ligação ao receptor de hIL-2Beta, para ligar o receptor de hIL-4alfa.

SEQUÊNCIAS EXEMPLIFICATIVAS DE VARIANTES DE NEOLEUCINA-2/15 DIVIDIDA USADAS NO EXEMPLO 2

[0616] H1 (Neo2A1) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 256)

[0617] H3-H2'-H4 Neo2B1)

[0618] H1-H3-H2 Neo2A3

[0619] PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEE KLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS (SEQ ID NO: 258)

[0620] H4 (Neo2B3) TTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 259)

[0621] H1-H3 (Neo2A2)

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD (SEQ ID NO: 260)

[0622] H2 -H4 (Neo2B2) DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 261) SEQUÊNCIAS EXEMPLIFICATIVAS DE NEOLEUCINA-4 DIVIDIDA USADAS NO EXEMPLO 2

[0623] H1 Neo4A1) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNS (SEQ ID NO: 262)

[0624] H3-H2 -H4 (também conhecido como Neo4B1)

CONSTRUTOS EXEMPLIFICATIVOS USADOS NO EXEMPLO 2

[0625] X2-Z1-X3-Z2-X4-E01_EGFR_DARPin

[0626] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGGG)TNSP

PAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDE QEEMANAIITILQSWIFS(GSGGSGGGSGGSGSGGSGGG)DLGKKLLEAARAG QDDEVRILMANGADVNADDTWGWTPLHLAAYQGHLEIVEVLLKNGADVNAYD YIGWTPLHLAADGHLEIVEVLLKNGADVNASDYIGDTPLHLAAHNGHLEIVEVLL KHGADVNAQDKFGKTAFDISIDNGNEDLAEILQKLN

[0627] (SEQ ID NO: 304)

[0628] G3_Her2_DARPin_X1

[0629] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGSG)DLGK

KLLEAARAGQDDEVRILMANGADVNAKDEYGLTPLYLATAHGHLEIVEVLLKN

GADVNAVDAIGFTPLHLAAFIGHLEIAEVLLKHGADVNAQDKFGKTAFDISIGNG NEDLAEILQKLN(GSGGSGGGSGGSGSG)PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKT NS (SEQ ID NO: 305)

[0630] G3_Her2_DARPin_X2-Z1-X3-Z3-X4

[0631] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGSG)DLGK

KLLEAARAGQDDEVRILMANGADVNAKDEYGLTPLYLATAHGHLEIVEVLLKN GADVNAVDAIGFTPLHLAAFIGHLEIAEVLLKHGADVNAQDKFGKTAFDISIGNG NEDLAEILQKLN(GSGGSGGGSGGSGSG)TNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIA

RLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 306)

[0632] X2-Z1-X3-Z2-X4-E01_EGFR_DARPin

[0633] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGGG)TNSP

[0634] (SEQ ID NO: 307)

[0635] X2-Z2-X4-E01_EGFR_DARPin

[0636] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGGG)DQK DEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS(GSGGSGGGSG GSGSGGSGGG)DLGKKLLEAARAGQDDEVRILMANGADVNADDTWGWTPLH

LAAYQGHLEIVEVLLKNGADVNAYDYIGWTPLHLAADGHLEIVEVLLKNGADVN

ASDYIGDTPLHLAAHNGHLEIVEVLLKHGADVNAQDKFGKTAFDISIDNGNEDL AEILQKLN (SEQ ID NO: 308)

[0637] X4-E01_EGFR_DARPin

[0638] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGGG)TTAS EDEQEEMANAIITILQSWIFS(GSGGSGGGSGGSGSGGSGGG)DLGKKLLEAA

RAGQDDEVRILMANGADVNADDTWGWTPLHLAAYQGHLEIVEVLLKNGADVN

AYDYIGWTPLHLAADGHLEIVEVLLKNGADVNASDYIGDTPLHLAAHNGHLEIV EVLLKHGADVNAQDKFGKTAFDISIDNGNEDLAEILQKLN (SEQ ID NO: 309)

[0639] G3_Her2_DARPin_X1-Z1-X3

[0640] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGSG)

DLGKKLLEAARAGQDDEVRILMANGADVNAKDEYGLTPLYLATAHGHLEIVEV

LLKNGADVNAVDAIGFTPLHLAAFIGHLEIAEVLLKHGADVNAQDKFGKTAFDIS IGNGNEDLAEILQKLN(GSGGSGGGSGGSGSG)PKKKIQLHAEHALYDALMILN IVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESG SEQ ID NO: 310)

[0641] G3_Her2_DARPin_X1-Z1-X3-Z2-X2

[0642] (MGSHHHHHHGSGSENLYFQGSGSG)DLGK

KLLEAARAGQDDEVRILMANGADVNAKDEYGLTPLYLATAHGHLEIVEVLLKN GADVNAVDAIGFTPLHLAAFIGHLEIAEVLLKHGADVNAQDKFGKTAFDISIGNG NEDLAEILQKLN(GSGGSGGGSGGSGSG)PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKT

NSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTA (SEQ ID NO: 311).

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Agonista de receptor condicionalmente ativo de ocorrência não natural caracterizado pelo fato de que compreende um primeiro componente polipeptídico e um segundo componente polipeptídico, em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não estão presentes em uma proteína de fusão, em que no total o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo componente compreendem domínios X1, X2, X3 e X4, em que: (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4); (b) X2 é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6). em que: (i) os resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes; (ii) o primeiro componente polipeptídico compreende pelo menos um de X1, X2, X3 e X4, mas não compreende cada um de X1, X2, X3 e X4; e (iii) o segundo componente polipeptídico compreende cada um de X1, X2, X3 e X4 que não está presente no primeiro componente polipeptídico;

em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico não são agonistas do receptor ativo individualmente, e em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista ativo do heterodímero c do receptor de IL- 2 (IL-2R c), heterodímero c do receptor de IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa ou heterodímero IL-4Ralfa/IL13Ralfa.

2. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO:4); (b) X2 é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

3. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO:4); (b) X2 é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo

(LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

4. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI) LHAEHALYDAL(MILNI) (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4); (b) X2 é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

5. Agonista do receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4); (b) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5); e (c) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6).

6. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (b) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (c) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

7. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (b) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (c) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

8. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (b) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (c) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

9. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (b) X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (c) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S)

(SEQ ID NO: 322).

10. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que X2 tem pelo menos 8 aminoácidos de comprimento;

11. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que: X2 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes.

12. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que: (i) X1 inclui 1, 2, 3, 4 ou todos os 5 dos seguintes: L no resíduo 7, H no resíduo 8, H no resíduo 11, Y no resíduo 14; M no resíduo 18, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 4 com base na presença de resíduos opcionais; e/ou (ii) X3 inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou todos os 8 dos seguintes: D no resíduo 3, Y no resíduo 4, F no resíduo 6, N no resíduo 7, L no resíduo 10, I no resíduo 11, E no resíduo 13 ou E no resíduo 14, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 5 com base na presença de resíduos opcionais.

13. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que: (iii) X4 inclui I no resíduo 19 em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 6 com base na presença de resíduos opcionais.

14. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que: X1 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntico ao longo do seu comprimento ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 37% 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98 % ou 100% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10). em que (i) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e (ii) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

15. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que: X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10). em que (i) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e (ii) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6,

R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

16. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que: X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10). em que (i) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e (ii) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

17. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que: X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10)

em que (i) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e (ii) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

18. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que: X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8); X3 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9); e X4 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo do seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10) em que (i) X1 inclui I no resíduo 7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18; e (ii) X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

19. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizado pelo fato de que (iii) X4 inclui F no resíduo 19.

20. Agonista do receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que as substituições de aminoácidos (AA) em relação aos domínios de peptídeo de referência ocorrem em não mais do que 3 resíduos AA marcados em negrito, ou ocorrem em não mais do que 2 resíduos AA marcados em fonte em negrito, ou ocorrem em no máximo 1 resíduo AA marcado em fonte em negrito, ou não ocorrem em resíduos AA marcados em fonte em negrito.

21. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que as substituições de aminoácidos em relação aos domínios de peptídeo de referência são substituições de aminoácidos conservativas.

22. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 4 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: A F I L M P Q R S W Posição 02: A D E G V K Posição 03: D E F W K Posição 04: D E K N P R W Posição 05: D E H I K L M S Posição 06: A D E G L P S W Q Posição 07: D E L Q Y I Posição 08: A F H W Y M T Posição 09: C F P A Posição 10: C D E F K P Posição 11: D F H E Posição 12: A D E P S T V Posição 13: H I L M P R V W Posição 14: F R W Y K Posição 15: D E N Y Posição 16: A C L M S Posição 17: F I L M P R Posição 18: G M Q Y S Posição 19: I L M P Q V

Posição 20: A K L M Q R S Posição 21: G K N P R S W Posição 22: D E I K M N W Y

23. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que a posição 7 é I, a posição 8 é M ou T, a posição 11 é E, a posição 14 é K e a posição 18 é S.

24. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que 1, 2, 3, 4 ou 5 dos seguintes não são verdadeiros: a posição 7 é I, a posição 8 é M ou T, a posição 11 é E, a posição 14 é K e a posição 18 é S.

25. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 5 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: A L Posição 02: D E G K M T Posição 03: D E N Y R Posição 04: C D G T Y F Posição 05: A F H S V W Y Posição 06: A F I M T V Y K Posição 07: D K N S T R Posição 08: A C G L M S V F Posição 09: C H K L R S T V E Posição 10: F I L M Y R Posição 11: I L N T Y Posição 12: F K L M S V Posição 13: A D F G I N P Q S T E W Posição 14: A E F G H S V Posição 15: C I L M V W Posição 16: A D G S T V

Posição 17: H K L N R Posição 18: C D G I L Q R T W Posição 19: D F M N W Posição 20: A C E F G M S Y Posição 21: D E G H L M R S T V W Posição 22: A D G K N S Y

26. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que compreende uma substituição de cisteína na posição 17 ou 20 em relação à SEQ ID NO: 5.

27. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que a posição 3 é R, a posição 4 é F, a posição 6 é K, a posição 7 é R, a posição 10 é R, a posição 11 é N, a posição 13 é W e a posição 14 é G.

28. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou todos os 8 dos seguintes não são verdadeiros: a posição 3 é R, a posição 4 é F, a posição 6 é K, a posição 7 é R, a posição 10 é R, a posição 11 é N, a posição 13 é W e a posição 14 é G.

29. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 6 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: D E G K V Posição 02: D I M S Posição 03: E G H K Posição 04: E G I K Q R S Posição 05: A D E G H S V Posição 06: C D E G I M Q R T V Posição 07: C E L M P R T

Posição 08: A F L M W Posição 09: A G L N Q R T Posição 10: A C D E F H I W Posição 11: I M N S V W Posição 12: I K L S V Posição 13: C L M R S T Posição 14: I L P T Y Posição 15: F G I L M N V Posição 16: H K Q R Posição 17: C F K S W Y Posição 18: K Q T W Posição 19: C G N I Posição 20: C F G L Y Posição 21: A F G H S Y

30. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que compreende uma substituição de cisteína na posição 3 em relação à SEQ NO:

6.

31. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, caracterizado pelo fato de que a posição 19 é I.

32. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, caracterizado pelo fato de que a posição 19 não é I.

33. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento a KDEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7).

34. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 11 ou 33, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 7 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: A H L M R S V K Posição 02: A D E Q R S T V W Y Posição 03: C E G K L N Q R W Posição 04: A F G N S T V Y Posição 05: A E G I M R V Posição 06: C E K L N R V Posição 07: A C E I L S T V W Posição 08: H K L M S T W Y Posição 09: A I L M Q S R Posição 10: A I M S W Y Posição 11: C I K L S V Posição 12: C E K L P Q R T Posição 13: A D H N W Posição 14: A C G I L S T V M Posição 15: A E G I K L M R V Posição 16: G H L R S T V Posição 17: A I L V Posição 18: A C D E G H I K M S Posição 19: D E G L N V T

35. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 11, 33 ou 34, caracterizado pelo fato de que compreende uma substituição de cisteína na posição 1, 2, 5, 9, 12 ou 16 em relação à SEQ NO: 7.

36. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 34 ou 35, caracterizado pelo fato de que a posição 11 é I.

37. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 34 ou 35, caracterizado pelo fato de que a posição 11 não é I.

38. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que: (i) o primeiro componente polipeptídico inclui um de X1, X2, X3 e X4, e o segundo componente polipeptídico inclui os três de X1, X2, X3 e X4 que não estão presentes no primeiro componente polipeptídico; ou (ii) o primeiro componente polipeptídico inclui dois de X1, X2, X3 e X4, e o segundo componente polipeptídico inclui os dois de X1, X2, X3 e X4 que não estão presentes no primeiro componente polipeptídico.

39. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que (i) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e o segundo polipeptídeo compreende X2, X3 e X4; (ii) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X3 e X4; (iii) o primeiro polipeptídeo compreende X3 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X2 e X4; (iv) o primeiro polipeptídeo compreende X4 e o segundo polipeptídeo compreende X1, X2 e X3; (v) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X2, e o segundo polipeptídeo compreende X3 e X4; (vi) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X3, e o segundo polipeptídeo compreende X2 e X4; (vii) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X2 e X3; (viii) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e X3, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X4; (ix) o primeiro polipeptídeo compreende X2 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X3; (x) o primeiro polipeptídeo compreende X3 e X4, e o segundo polipeptídeo compreende X1 e X2; (xi) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X2 e X3 e o segundo polipeptídeo compreende X4; (xii) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X2 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X3; (xiii) o primeiro polipeptídeo compreende X1, X3 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X2; ou (xiv) o primeiro polipeptídeo compreende X2, X3 e X4 e o segundo polipeptídeo compreende X1.

40. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 39, caracterizado pelo fato de que: (a) o primeiro polipeptídeo compreende X1 e exclui X2, X3 e X4; e o segundo polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X3-Z1- X2-Z2-X4 e excluindo X1; (b) o primeiro polipeptídeo compreende X4 e exclui X1, X2 e X3; e o segundo polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X1-Z1- X3-Z2-X2 e excluindo X4; ou (c) o primeiro polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X1-Z1-X3 e excluindo X2 e X4; e o segundo polipeptídeo é uma proteína de fusão compreendendo X2-Z1-X4 e excluindo X1 e X3; em que cada um de Z1 e Z2 independentemente é um ligante de aminoácido opcional.

41. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, caracterizado pelo fato de que X1, X2, X3 e X4, respectivamente, compreendem a sequência de aminoácidos com pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes: X1: PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO:4)

X2: (K)DEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO:7) X3: (LE)DYAFNFELILEEIARLF(ESG) (SEQ ID NO:5) X4: (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO:6)

42. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo compreendem a sequência de aminoácidos com pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50 %, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica a um par de primeiro e segundo polipeptídeos mostrados abaixo (resíduos sublinhados ou res duos X s o opcionais e cada res duo do dom nio opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido): (i) Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 256) e Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

TNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTA SEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 257) (ii) Primeiro polipeptídeo X1-X3-X2

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD QKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS (SEQ ID NO: 258) e Segundo polipeptídeo X4 TTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 259); (iii) Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD (SEQ ID NO: 260) e Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 261)

(iv) Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNS (SEQ ID NO: 262) Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

TNSPPAEEQLERFAKRFERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTT ASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 263) (v) Primeiro polipeptídeo X1 PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXX (SEQ ID NO: 311) e Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4

XXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESGXXKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXX XEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 264) (vi) Primeiro polipeptídeo X1-X3-X2

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESGX XKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS (SEQ ID NO: 265) e Segundo polipeptídeo X4 XXXXXDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 266); (vii) Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESXX GD (SEQ ID NO: 267) e Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 268) (viii) Primeiro polipeptídeo X1 PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXX (SEQ ID NO: 269) Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4

XXXXXXXXQLERFAKRFERNLWGIARLFESGXX

KDEAEKAKRMIEWMKRIKTXXXEDEQEEMANAIITILQSWFFS(SEQ ID NO: 270) (ix) Primeiro polipeptídeo >Neo4_X1-X3

PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRF ERNLWGIARLFESGD (SEQ ID NO: 312) Segundo polipeptídeo >Neo4_X2-X4

DQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQ SWFFS (SEQ ID NO: 313) (x) Primeiro polipeptídeo >Neo4_X1-X3

PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXQLERFAKRF ERNLWGIARLFESXX (SEQ ID NO: 314) Segundo polipeptídeo >Neo4_X2-X4

XXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXXXEDEQEEMANAIITILQ SWFFS (SEQ ID NO: 315) (xi) Primeiro polipeptídeo Neo4_X1-X3'-X2

PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRF ERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTA (SEQ ID NO: 316) Segundo polipeptídeo Neo4X4 TTASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 317) (xii) Primeiro polipeptídeo Neo4_X1-X3'-X2

PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXXLERFAKRF ERNLWGIARLFESXXXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXX (SEQ ID NO: 318) Segundo polipeptídeo Neo4_X4 XXXXXDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 319); ou (xiii) Primeiro polipeptídeo (X1)

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVGGSS (SEQ ID NO: 323), ou SKEAIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 324), ou PIQLHAEHALYDALMILNIV (SEQ ID NO: 325) Segundo polipeptídeo (X3-X2 -X4)

PKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEW MKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 326); ou

GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSSGGKDEAEK AKRMKEWMKRITGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 327); ou

GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSSGGGGEAEK AKRMKEWMKRIGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 328).

43. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que X1, X2, X3 e X4, respectivamente, compreendem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40% 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, aos domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1) presentes na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11-94, 190-216, 247 e SEQ ID NOs: 275-300.

44. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico e/ou o segundo componente polipeptídico incluem pelo menos uma ligação dissulfeto.

45. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 44, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico estão associados de forma não covalente.

46. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 44, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico estão indiretamente ligados um ao outro através de um receptor.

47. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico compreende ainda um primeiro domínio de direcionamento ou o segundo componente polipeptídico compreende ainda um segundo domínio de direcionamento.

48. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico compreende ainda um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente polipeptídico compreende ainda um segundo domínio de direcionamento.

49. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento, quando presente, é uma fusão de tradução com o primeiro polipeptídeo, e em que o segundo domínio de direcionamento, quando presente, é uma fusão de tradução com o segundo polipeptídeo.

50. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 49, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e o segundo domínio de direcionamento estão ambos presentes, e em que o primeiro domínio de direcionamento e o segundo domínio de direcionamento são iguais.

51. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 49, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e o segundo domínio de direcionamento estão ambos presentes, e em que o primeiro domínio de direcionamento e o segundo domínio de direcionamento são diferentes.

52. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 51, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e/ou o segundo domínio de direcionamento se ligam a proteínas de superfície celular.

53. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que as proteínas da superfície celular estão presentes na superfície das células selecionadas do grupo que consiste em células tumorais, componentes vasculares, microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunes infiltrantes ou elementos estromais), outras células de câncer e células imunes (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T reguladoras, células dendríticas, células NK ou macrófagos), tais marcadores de superfície de células imunes incluindo, mas sem limitação a CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD21, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD68, CD123, CD254, PD-1, B7-H3 e CTLA-4.

54. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e o segundo domínio de direcionamento se ligam a uma célula tumoral, célula de componente vascular tumoral ou marcador de superfície celular do microambiente tumoral.

55. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que a célula tumoral, célula de componente vascular ou marcador de superfície celular do microambiente tumoral é selecionado a partir do grupo que inclui, mas não se limita a EGFR, EGFRvIII, Her2, HER3, EpCAM, MSLN, MUC16, PSMA, TROP2, ROR1, RON, PD-L1, CD47, CTLA-4,CD5, CD19, CD20, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD45, CAMPATH-1, BCMA, CS-1, PD-L1, B7-H3, B7-DC, HLD-DR, antígeno carcinoembriônico (CEA), TAG-72, EpCAM, MUC1, proteína de ligação ao folato, A33, G250, antígeno de membrana específico da próstata (PSMA), ferritina, GD2, GD3, GM2, Ley, CA-125, CA19-9, fator de crescimento epidérmico, p185HER2, receptor de IL-2, EGFRvIII (de2-7 EGFR), proteína de ativação de fibroblastos, tenascina, uma metaloproteinase, endosialina, fator de crescimento endotelial vascular, avB3, WT1, LMP2, HPV E6, HPV E7, Her-2/neu, MAGE A3, não mutante p53, NY-ESO-1, MelanA/MART1, mutante Ras, gp100, mutante p53, PR1, bcr-abl, tironsinase, survivina, PSA, hTERT, uma proteína de ponto de interrupção de translocação de Sarcoma, EphA2, PAP, ML-IAP, AFP, ERG,

NA17, PAX3, ALK, receptor de andrógeno, ciclina B 1, ácido polissiálico, MYCN, RhoC, TRP-2, fucosila GM1, mesotelina (MSLN), PSCA, MAGE Al, sLe (animal), CYP1B1, PLAV1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1, RGS5, SART3, STn, anidrase carbônica IX, PAX5, proteína 17 do esperma OY-TESL, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, Legumaína, Tie 3, VEGFR2, MAD- CT-1, PDGFR-B, MAD-CT-2, ROR2, TRAIL1, MUC16, MAGE A4, MAGE C2, GAGE, EGFR, CMET, HER3, MUC15, CA6, NAPI2B, TROP2, CLDN6, CLDN16, CLDN18.2, CLorf186, RON, LY6E, FRA, DLL3, PTK7, STRA6, TMPRSS3, TMPRSS4, TMEM238, UPK1B, VTCN1, LIV1, ROR1, antígeno relacionado a Fos 1, BMPR1B (receptor de proteína morfogenética óssea tipo IB, número de acesso ao Genbank NM. 001203); E16 (LAT1, SLC7A5, número de acesso no Genbank NM-003486); STEAP1 (seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata, número de acesso no Genbank NM-012449); 0772P (CA125, MUC16, número de acesso no Genbank AF361486); MPF (MPF, MSLN, SMR, fator de potencialização de megacariócitos, mesotelina, número de acesso no Genbank NM-005823); Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, família de transportadores de soluto 34 (fosfato de sódio), membro 2, transportador de fosfato 3b dependente de sódio tipo II, número de acesso no Genbank NM-006424); Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm. 42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, domínio sema, sete repetições de trombospondina (tipo 1 e semelhante ao tipo 1), domínio transmembranar (TM) e domínio citoplasmático curto, (semaforina) 5B, número de acesso no Genbank AB040878); PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, gene 2700050C12 RIKEN cDNA, número de acesso no Genbank AY358628); ETBR (receptor de endotelina tipo B, número de acesso no Genbank AY275463); MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315, número de acesso no Genbank NM 017763); STEAP2 (HGNC.sub.--8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gene associado ao câncer de próstata 1, proteína associada ao câncer de próstata 1, seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata 2, seis proteínas transmembranares da próstata, número de acesso no Genbank AF455138);

TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal catiônico de potencial receptor transiente, subfamília M, membro 4, número de acesso no Genbank NM 017636); CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, fator de crescimento derivado de teratocarcinoma, número de acesso no Genbank NP003203 ou NM003212); CD21 (CR2 (receptor 2 do complemento) ou C3DR (receptor do vírus C3d/Epstein Barr) ou Hs. 73792, número de acesso ao Genbank M26004); CD79b (IGb (beta associado a imunoglobulina), B29, número de acesso ao Genbank NM 000626); FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (domínio SH2 contendo proteína âncora de fosfatase 1a), SPAP1B, SPAP1C, número de acesso ao Genbank NM030764); HER2 (número de acesso ao Genbank M11730); NCA (número de acesso ao Genbank M18728); MDP (número de acesso ao Gnebank BC017023); IL20R.alfa. (Número de acesso ao Genbank AF184971); Brevican (número de acesso ao Genbank AF229053); Ephb2R (número de acesso ao Genbank NM004442); ASLG659 (número de acesso ao Genbank AX092328); PSCA (número de acesso ao Genbank AJ297436); GEDA (número de acesso ao Genbank AY260763); BAFF-R (número de acesso ao Genbank NP443177.1); CD22 (número de acesso ao Genbank NP-001762.1); CD79a (CD79A, CD79.alfa., alfa associado a imunoglobulina, uma proteína específica de células B que interage covalentemente com Ig beta (CD79B) e forma um complexo na superfície com moléculas de Ig M, transduz um sinal envolvido na diferenciação de células B, número de acesso ao Genbank NP001774.1); CXCR5 (receptor de linfoma de Burkitt 1, um receptor acoplado à proteína G que é ativado pela quimiocina CXCL13, funções na migração de linfócitos e defesa humoral, desempenha um papel na infecção por HIV-2 e talvez no desenvolvimento de AIDS, linfoma, mieloma e leucemia, número de acesso ao Genbank NP001707.1); HLA-DOB (subunidade beta da molécula MHC de classe II (antígeno Ia) que se liga a peptídeos e os apresenta a linfócitos T CD4+, número de acesso ao Genbank NP002111.1); P2X5 (canal 5 de íon bloqueado por ligante do receptor purinérgico P2X, um canal de íon bloqueado por ATP extracelular, pode estar envolvido na transmissão sináptica e neurogênese, a deficiência pode contribuir para a fisiopatologia da instabilidade idiopática do detrusor, número de acesso ao Genbank NP002552.2); CD72 (antígeno de diferenciação de células B CD72, Lyb-2, número de acesso ao Genbank NP001773.1); LY64 (antígeno linfocitário 64 (RP105), proteína de membrana tipo I da família de repetição rica em leucina (LRR), regula a ativação de células B e apoptose, a perda de função está associada ao aumento da atividade da doença em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico, número de acesso ao Genbank NP005573.1); FCRH1 (proteína 1 semelhante a receptor Fc, um receptor putativo para o domínio Fc de imunoglobulina que contém domínios semelhantes a Ig tipo C2 e ITAM, pode ter um papel na diferenciação de linfócitos B, número de acesso ao Genbank NP443170.1); ou IRTA2 (translocação do receptor da superfamília de imunoglobulina associada 2, um imunorreceptor putativo com possíveis papéis no desenvolvimento de células B e linfomagenesia; ocorre desregulação do gene por translocação em algumas doenças malignas de células B, número de acesso ao Genbank NP112571.1).

56. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 55, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e/ou o segundo domínio de direcionamento se ligam a um marcador de superfície de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas, células NK ou macrófagos), em que o marcador de superfície da célula imune pode incluir, mas sem limitação a CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD21, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD68, CD123, CD254, PD-1, B7-H3 e CTLA-4, e/ou em que o domínio de direcionamento se liga a PD-1, PDL-1, CTLA-4, TROP2, B7- H3, CD33, CD22, anidrase carbônica IX, CD123, Nectina-4, antígeno de fator de tecido, CD154, B7-H3, B7-H4, FAP (proteína de ativação de fibroblastos) ou MUC16.

57. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e o segundo domínio de direcionamento se ligam a marcadores de superfície de células T (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas ou macrófagos).

58. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento ou o segundo domínio de direcionamento se liga a um marcador de superfície de célula tumoral, célula de componente vascular ou célula de microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunes infiltrantes ou elementos do estroma), e em que o outro domínio de direcionamento se liga a um marcador de superfície de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas ou macrófagos), em que o marcador de superfície de célula imune pode incluir, mas não está limitado a CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD21, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD68, CD123, CD254, PD-1, B7-H3 e CTLA-4.

59. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 58, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e/ou o segundo domínio de direcionamento podem incluir, mas sem limita o a um scF , um F(ab), um F(ab ) 2, um receptor de células B (BCR), um DARPin, um aficorpo, um monocorpo, um nanocorpo, diacorpo, um anticorpo (incluindo um anticorpo monoespecífico ou biespecífico); um oligopeptídeo de direcionamento de célula incluindo, mas sem limitação a peptídeos de ligação de integrina RGD, ligantes projetados de novo, aptâmeros, conotoxinas de um peptídeo biciclo, moléculas pequenas, como ácido fólico, e um vírus que se liga à superfície da célula.

60. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 58, caracterizado pelo fato de que o primeiro domínio de direcionamento e/ou o segundo domínio de direcionamento podem incluir, mas sem limita o a um scF , um F(ab), um F(ab ) 2, um receptor de células B (BCR), um DARPin, um aficorpo, um monocorpo, um nanocorpo, diacorpo e um anticorpo (incluindo um anticorpo monoespecífico ou biespecífico).

61. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao longo de seu comprimento a KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos em parênteses são opcionais.

62. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao longo de seu comprimento a KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

63. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 60, caracterizado pelo fato de que X2 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao longo de seu comprimento a KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

64. Polipeptídeo caracterizado pelo fato de que compreende 1, 2 ou 3, mas não todos os 4 domínios X1, X2, X3 e X4, em que: (a) X1, quando presente, é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI); (SEQ ID NO: 4); (b) X2, quando presente, é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos de pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6); resíduos de aminoácidos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes.

65. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que: (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI); (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4); (b) X2, quando presente, é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

66. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que: (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI); (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4); (b) X2, quando presente, é qualquer domínio de peptídeo helicoidal;

(c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

67. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que: (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos idêntica ao comprimento total do peptídeo (PKKKIQ)LHAEHALYDAL(MILNI); (SEQ ID NO: 4) ou (PKKKI)QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4); (b) X2, quando presente, é qualquer domínio de peptídeo helicoidal; (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos idêntica ao comprimento total do peptídeo (LE)DYAFNFELILEE(IARLFESG) (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES(G) (SEQ ID NO: 5); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos idêntica ao comprimento total do peptídeo (EDEQEEMANAI)ITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 6).

68. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que (a) X1, quando presente, é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4);

(c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6).

69. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado pelo fato de que (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (d) X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 65% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

70. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

71. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

72. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 68, caracterizado pelo fato de que (a) X1, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 4) ou QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO: 320); (c) X3, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo LEDYAFNFELILEEIARLFESG (SEQ ID NO: 5) ou

LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO: 321); e (d) X4, quando presente, é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 6) ou DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO: 322).

73. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 72, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

74. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 72, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 75% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

75. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 72, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 85% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

76. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 72, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

77. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 72, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 80% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

78. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 72, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica ao comprimento total do peptídeo KDEAEKAKRMKEWMKRIKT (SEQ ID NO: 7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

79. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 78, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do grupo que consiste em: (i) um polipeptídeo compreendendo X1 e excluindo X2, X3 e X4; (ii) um polipeptídeo compreendendo X2 e excluindo X1, X3 e X4; (iii) um polipeptídeo compreendendo X3 e excluindo X1, X2 e X4; (iv) um polipeptídeo compreendendo X4 e excluindo X1, X2 e X3; (v) um polipeptídeo compreendendo X1 e X2, e excluindo X3 e X4; (vi) um polipeptídeo compreendendo X1 e X3, e excluindo X2 e X4; (vii) um polipeptídeo compreendendo X1 e X4, e excluindo X2 e X3; (viii) um polipeptídeo compreendendo X2 e X3, e excluindo X1 e X4; (ix) um polipeptídeo compreendendo X2 e X4, e excluindo X1 e X3; (x) um polipeptídeo compreendendo X3 e X4, e excluindo X1 e X2; (xi) um polipeptídeo compreendendo X1, X2 e X3 e excluindo X4; (xii) um polipeptídeo compreendendo X1, X2 e X4 e excluindo X3; (xiii) um polipeptídeo compreendendo X1, X3 e X4 e excluindo X2; e (xiv) um polipeptídeo compreendendo X2, X3 e X4 e excluindo X1.

80. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 79, sendo que o polipeptídeo é caracterizado pelo fato de que compreende X1, em que X1 inclui 1, 2, 3, 4 ou todos os 5 dos seguintes: L no resíduo 7, H no resíduo 8, H no resíduo 11, Y no resíduo 14; M no resíduo 18, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 4 com base na presença de resíduos opcionais.

81. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 80, sendo que o polipeptídeo é caracterizado pelo fato de que compreende X3, em que X3 inclui 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou todos os 8 dos seguintes: D no resíduo 3, Y no resíduo 4, F no resíduo 6, N no resíduo 7, L no resíduo 10, I no resíduo 11, E no resíduo 13 ou E no resíduo 14, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 5 com base nos resíduos opcionais presentes.

82. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 81, sendo que o polipeptídeo é caracterizado pelo fato de que compreende X4, em que X4 inclui I no resíduo 19, em que a numeração é relativa à SEQ ID NO: 6 com base nos resíduos opcionais presentes.

83. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 79, caracterizado pelo fato de que X1 está presente, em que X1 é um peptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento ao peptídeo PKKKIQIMAEEALKDALSILNI (SEQ ID NO: 8), e em que X1 inclui I no resíduo

7, T ou M no resíduo 8, E no resíduo 11, K no resíduo 14 e S no resíduo 18.

84. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 79 ou 83, caracterizado pelo fato de que X3 está presente, em que X3 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 37% 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento ao peptídeo LERFAKRFERNLWGIARLFESG (SEQ ID NO: 9), e em que X3 inclui R no resíduo 3, F no resíduo 4, K no resíduo 6, R no resíduo 7, R no resíduo 10, N no resíduo 11, W no resíduo 13 e G no resíduo 14.

85. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 79, 84 ou 84, caracterizado pelo fato de que X4 está presente, em que X4 é um peptídeo que compreende a sequência de aminoácidos pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao longo de seu comprimento ao peptídeo EDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 10).

86. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que X4 inclui F no resíduo 19.

87. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 86, caracterizado pelo fato de que as substituições de aminoácidos (AA) em relação aos domínios de peptídeo de referência ocorrem em não mais do que 3 resíduos AA marcados em negrito, ou ocorrem em não mais do que 2 resíduos AA marcados em negrito, ou ocorrem em no máximo 1 resíduo AA marcado em negrito, ou não ocorrem em resíduos AA marcados em negrito.

88. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 87, caracterizado pelo fato de que as substituições de aminoácidos em relação aos domínios de peptídeo de referência são substituições de aminoácidos conservativas.

89. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 88, caracterizado pelo fato de que X1 está presente, e em que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 4 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: A F I L M P Q R S W Posição 02: A D E G V K Posição 03: D E F W K Posição 04: D E K N P R W Posição 05: D E H I K L M S Posição 06: A D E G L P S W Q Posição 07: D E L Q Y I Posição 08: A F H W Y M T Posição 09: C F P A Posição 10: C D E F K P Posição 11: D F H E Posição 12: A D E P S T V Posição 13: H I L M P R V W Posição 14: F R W Y K Posição 15: D E N Y Posição 16: A C L M S Posição 17: F I L M P R Posição 18: G M Q Y S Posição 19: I L M P Q V Posição 20: A K L M Q R S Posição 21: G K N P R S W Posição 22: D E I K M N W Y

90. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que a posição 7 é I, a posição 8 é M ou T, a posição 11 é E, a posição 14 é K e a posição 18 é S.

91. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 89, caracterizado pelo fato de que 1, 2, 3, 4 ou 5 dos seguintes não são verdadeiros:

a posição 7 é I, a posição 8 é M ou T, a posição 11 é E, a posição 14 é K e a posição 18 é S.

92. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 91, caracterizado pelo fato de que X3 está presente e em que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 5 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: A L Posição 02: D E G K M T Posição 03: D E N Y R Posição 04: C D G T Y F Posição 05: A F H S V W Y Posição 06: A F I M T V Y K Posição 07: D K N S T R Posição 08: A C G L M S V F Posição 09: C H K L R S T V E Posição 10: F I L M Y R Posição 11: I L N T Y Posição 12: F K L M S V Posição 13: A D F G I N P Q S T E W Posição 14: A E F G H S V Posição 15: C I L M V W Posição 16: A D G S T V Posição 17: H K L N R Posição 18: C D G I L Q R T W Posição 19: D F M N W Posição 20: A C E F G M S Y Posição 21: D E G H L M R S T V W Posição 22: A D G K N S Y

93. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 92, caracterizado pelo fato de que compreende uma substituição de cisteína na posição 17 ou 20 em relação à SEQ ID NO: 5.

94. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 92 ou 93, caracterizado pelo fato de que a posição 3 é R, a posição 4 é F, a posição 6 é K, a posição 7 é R, a posição 10 é R, a posição 11 é N, a posição 13 é W e a posição 14 é G.

95. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 92 ou 93, caracterizado pelo fato de que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou todos os 8 dos seguintes não são verdadeiros: a posição 3 é R, a posição 4 é F, a posição 6 é K, posição 7 é R, a posição 10 é R, a posição 11 é N, a posição 13 é W e a posição 14 é G.

96. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 95, caracterizado pelo fato de que X4 está presente e em que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 6 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: D E G K V Posição 02: D I M S Posição 03: E G H K Posição 04: E G I K Q R S Posição 05: A D E G H S V Posição 06: C D E G I M Q R T V Posição 07: C E L M P R T Posição 08: A F L M W Posição 09: A G L N Q R T Posição 10: A C D E F H I W Posição 11: I M N S V W Posição 12: I K L S V Posição 13: C L M R S T Posição 14: I L P T Y Posição 15: F G I L M N V Posição 16: H K Q R Posição 17: C F K S W Y

Posição 18: K Q T W Posição 19: C G N I Posição 20: C F G L Y Posição 21: A F G H S Y

97. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que compreende uma substituição de cisteína na posição 3 em relação à SEQ NO: 6.

98. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 95 ou 96, caracterizado pelo fato de que a posição 19 é I.

99. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 95 ou 96, caracterizado pelo fato de que a posição 19 não é I.

100. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 99, caracterizado pelo fato de que X4 está presente e em que os resíduos de aminoácidos relativos à SEQ ID NO: 7 são selecionados a partir do grupo que consiste em: Posição 01: A H L M R S V K Posição 02: A D E Q R S T V W Y Posição 03: C E G K L N Q R W Posição 04: A F G N S T V Y Posição 05: A E G I M R V Posição 06: C E K L N R V Posição 07: A C E I L S T V W Posição 08: H K L M S T W Y Posição 09: A I L M Q S R Posição 10: A I M S W Y Posição 11: C I K L S V Posição 12: C E K L P Q R T Posição 13: A D H N W Posição 14: A C G I L S T V M Posição 15: A E G I K L M R V

Posição 16: G H L R S T V Posição 17: A I L V Posição 18: A C D E G H I K M S Posição 19: D E G L N V T

101. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 100, caracterizado pelo fato de que compreende uma substituição de cisteína na posição 1, 2, 5, 9, 12 ou 16 em relação à SEQ NO: 7.

102. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 101 ou 101, caracterizado pelo fato de que a posição 11 é I.

103. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 100 ou 101, caracterizado pelo fato de que a posição 11 não é I.

104. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 103, sendo que o polipeptídeo é caracterizado pelo fato de que compreende a sequência de aminoácidos que é pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica a um primeiro polipeptídeo ou um segundo polipeptídeo listado abaixo (resíduos sublinhados são opcionais e cada resíduo opcional, quando presente, pode compreender qualquer aminoácido): (i) Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO: 256) e Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD QKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTAS (SEQ ID NO: 258) e Segundo polipeptídeo X4 TTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 259);

(iii) Primeiro polipeptídeo X1-X3

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVKTNSPPAEEKLEDYAFNFELILEEIARLFESGD (SEQ ID NO: 260) e Segundo polipeptídeo X2-X4 DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 261) (iv) Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNS (SEQ ID NO: 262) Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

TNSPPAEEQLERFAKRFERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTT ASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 263) (v) Primeiro polipeptídeo X1 (Neo2A) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXX (SEQ ID NO: 311) e Segundo polipeptídeo: X3-X2 -X4 (Neo2B)

PKKKIQLHAEHALYDALMILNIXXXXXXXXXXXLEDYAFNFELILEEIARLFESXX GD (SEQ ID NO: 267) e Segundo polipeptídeo X2-X4

DQKDEAEKAKRMKEWMKRIKTXXXEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO: 268) (viii) Primeiro polipeptídeo X1 (Neo4A) PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXX (SEQ ID NO: 269) Segundo polipeptídeo X3-X2 -X4 (Neo4B)

XXXXXXXXQLERFAKRFERNLWGIARLFESGXXKDEAEKAKRMIEWMKRIKTX XXEDEQEEMANAIITILQSWFFS(SEQ ID NO: 270) (ix) Primeiro polipeptídeo >Neo4_X1-X3

PKKKIQIMAEEALKDALSILNIVKTNSPPAEEQLERFAKRF ERNLWGIARLFESGDQKDEAEKAKRMIEWMKRIKTTA (SEQ ID NO: 316) Segundo polipeptídeo Neo4_X4 TTASEDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO: 317) (xii) Primeiro polipeptídeo Neo4_X1-X3'-X2

PKKKIQIMAEEALKDALSILNIXXXXXXXXXXXLERFAKRF ERNLWGIARLFESXXXKDEAEKAKRMIEWMKRIKXXX (SEQ ID NO: 318) Segundo polipeptídeo Neo4_X4 XXXXXDEQEEMANAIITILQSWFFS (SEQ ID NO:319); (xiii) Primeiro polipeptídeo (X1) PKKKIQLHAEHALYDALMILNIVGGSS (SEQ ID NO:323) ou SKEAIQLHAEHALYDALMILNIVKTNS (SEQ ID NO:324), ou PIQLHAEHALYDALMILNIV (SEQ ID NO:325) Segundo polipeptídeo (X3-X2'-X4)

PKLEDYAFNFELILEEIARLFESGDQKDEAEKAKRMKEW MKRIKTTASEDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO:326); ou

GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSSGGKDEAEK AKRMKEWMKRITGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO:327); ou

GGSSGGLEDYAFNFELILEEIARLFESGGSSGGGGEAEK AKRMKEWMKRIGGSSGGDEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO:328).

105. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 103, caracterizado pelo fato de que X1, X2, X3 e X4, quando presentes, compreendem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 25%, 27%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, aos domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1) presentes na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11 a 94, 190 a 216, 247 e SEQ ID NOS: 275 a 300.

106. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, sendo que o polipeptídeo é caracterizado pelo fato de que inclui pelo menos uma ligação dissulfeto.

107. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 106, sendo que o polipeptídeo é caracterizado pelo fato de que compreende ainda um domínio de direcionamento.

108. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 107,

caracterizado pelo fato de que o domínio de direcionamento é uma fusão de tradução com o polipeptídeo.

109. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que o domínio de direcionamento se liga a uma proteína da superfície celular.

110. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a proteína da superfície celular está presente na superfície das células selecionadas do grupo que consiste em células tumorais, componentes vasculares, microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunes infiltrantes ou elementos estromais), outras células cancerosas e células (incluindo, mas sem limitação, as células T CD8+, células T reguladoras, células dendríticas, células NK ou macrófagos), tais marcadores de superfície de células imunes incluindo, mas sem limitação, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD21, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD68, CD123, CD254, PD-1, B7-H3 e CTLA-4.

111. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 107 a 110, caracterizado pelo fato de que o domínio de direcionamento se liga a um marcador de superfície de célula tumoral, célula de componente vascular ou célula do microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunes infiltrantes ou elementos do estroma).

112. Polipeptídeo, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que o marcador de superfície de célula tumoral, célula de componente vascular ou célula de microambiente tumoral (por exemplo, fibroblastos, células imunes infiltrantes ou elementos do estroma) é selecionado a partir do grupo que inclui, mas sem limitação a, EGFR, EGFRvIII, Her2, HER3, EpCAM, MSLN, MUC16, PSMA, TROP2, ROR1, RON, PD-L1, CD47, CTLA-4,CD5, CD19, CD20, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD45, CAMPATH-1, BCMA, CS-1, PD-L1, B7-H3, B7-DC, HLD-DR, antígeno carcinoembriônico (CEA), TAG-72, EpCAM, MUC1, proteína de ligação ao folato, A33, G250, antígeno de membrana específica da próstata (PSMA), ferritina,

GD2, GD3, GM2, Le y, CA-125, CA19-9, fator de crescimento espidérmico, p185HER2, receptor de IL-2, EGFRvIII (de2-7 EGFR), proteína de ativação de fibroblastos, tenascina, uma metaloproteinase, endosialina, fator de crescimento endotelial vascular, avB3, WT1, LMP2, HPV E6, HPV E7, Her-2/neu, MAGE A3, não mutante p53, NY-ESO-1, MelanA/MART1, mutante Ras, gp100, mutante p53, PR1, bcr-abl, tironsinase, survivina, PSA, hTERT, uma proteína de ponto de interrupção de translocação de sarcoma, EphA2, PAP, ML-IAP, AFP, ERG, NA17, PAX3, ALK, receptor de andrógeno, ciclina B 1, ácido polisiálico, MYCN, RhoC, TRP-2, fucosila GM1, mesotelina (MSLN), PSCA, MAGE Al, sLe (animal), CYP1B1, PLAV1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1, RGS5, SART3, STn, anidrase carbônica IX, PAX5, proteína 17 do esperma OY-TESL, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, Legumaína, Tie 3, VEGFR2, MAD-CT-1, PDGFR-B, MAD-CT-2, ROR2, TRAIL1, MUC16, MAGE A4, MAGE C2, GAGE, EGFR, CMET, HER3, MUC15, CA6, NAPI2B, TROP2, CLDN6, CLDN16, CLDN18.2, CLorf186, RON, LY6E, FRA, DLL3, PTK7, STRA6, TMPRSS3, TMPRSS4, TMEM238, UPK1B, VTCN1, LIV1, ROR1, antígeno 1 relacionado a Fos, BMPR1B (receptor de proteína morfogenética óssea tipo IB, número de acesso no Genbank NM- 001203); E16 (LAT1, SLC7A5, número de acesso no Genbank NM-003486); STEAP1 (seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata, número de acesso no Genbank NM-012449); 0772P (CA125, MUC16, número de acesso no Genbank AF361486); MPF (MPF, MSLN, SMR, fator de potencialização de megacariócitos, mesotelina, número de acesso no Genbank NM-005823); Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, família de transportadores de soluto 34 (fosfato de sódio), membro 2, transportador de fosfato 3b dependente de sódio tipo II, número de acesso no Genbank NM- 006424); Sema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm. 42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforina 5b Hlog, domínio sema, sete repetições de trombospondina (tipo 1 e semelhante ao tipo 1), domínio transmembranar (TM) e domínio citoplasmático curto, (semaforina) 5B, número de acesso no Genbank AB040878); PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, gene

2700050C12 RIKEN cDNA, número de acesso no Genbank AY358628); ETBR (receptor de endotelina tipo B, número de acesso no Genbank AY275463); MSG783 (RNF124, proteína hipotética FLJ20315, número de acesso no Genbank NM 017763); STEAP2 (HGNC.sub.--8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gene associado ao câncer de próstata 1, proteína associada ao câncer de próstata 1, seis antígenos epiteliais transmembranares da próstata 2, seis proteínas transmembranares da próstata, número de acesso no Genbank AF455138); TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, canal catiônico de potencial receptor transiente, subfamília M, membro 4, número de acesso no Genbank NM 017636); CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, fator de crescimento derivado de teratocarcinoma, número de acesso no Genbank NP003203 ou NM003212); CD21 (CR2 (receptor 2 do complemento) ou C3DR (receptor do vírus C3d/Epstein Barr) ou Hs. 73792, número de acesso ao Genbank M26004); CD79b (IGb (beta associado a imunoglobulina), B29, número de acesso ao Genbank NM 000626); FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (domínio SH2 contendo proteína âncora de fosfatase 1a), SPAP1B, SPAP1C, número de acesso ao Genbank NM030764); HER2 (número de acesso ao Genbank M11730); NCA (número de acesso ao Genbank M18728); MDP (número de acesso ao Gnebank BC017023); IL20R.alfa. (Número de acesso ao Genbank AF184971); Brevican (número de acesso ao Genbank AF229053); Ephb2R (número de acesso ao Genbank NM004442); ASLG659 (número de acesso ao Genbank AX092328); PSCA (número de acesso ao Genbank AJ297436); GEDA (número de acesso ao Genbank AY260763); BAFF-R (número de acesso ao Genbank NP443177.1); CD22 (número de acesso ao Genbank NP-001762.1); CD79a (CD79A, CD79.alfa., alfa associado a imunoglobulina, uma proteína específica de células B que interage covalentemente com Ig beta (CD79B) e forma um complexo na superfície com moléculas de Ig M, transduz um sinal envolvido na diferenciação de células B, número de acesso ao Genbank NP001774.1); CXCR5 (receptor de linfoma de Burkitt 1, um receptor acoplado à proteína G que é ativado pela quimiocina

CXCL13, funções na migração de linfócitos e defesa humoral, desempenha um papel na infecção por HIV-2 e talvez no desenvolvimento de AIDS, linfoma, mieloma e leucemia, número de acesso ao Genbank NP001707.1); HLA-DOB (subunidade beta da molécula MHC de classe II (antígeno Ia) que se liga a peptídeos e os apresenta a linfócitos T CD4+, número de acesso ao Genbank NP002111.1); P2X5 (canal 5 de íon bloqueado por ligante do receptor purinérgico P2X, um canal de íon bloqueado por ATP extracelular, pode estar envolvido na transmissão sináptica e neurogênese, a deficiência pode contribuir para a fisiopatologia da instabilidade idiopática do detrusor, número de acesso ao Genbank NP002552.2); CD72 (antígeno de diferenciação de células B CD72, Lyb-2, número de acesso ao Genbank NP001773.1); LY64 (antígeno linfocitário 64 (RP105), proteína de membrana tipo I da família de repetição rica em leucina (LRR), regula a ativação de células B e apoptose, a perda de função está associada ao aumento da atividade da doença em pacientes com lúpus eritematoso sistêmico, número de acesso ao Genbank NP005573.1); FCRH1 (proteína 1 semelhante a receptor Fc, um receptor putativo para o domínio Fc de imunoglobulina que contém domínios semelhantes a Ig tipo C2 e ITAM, pode ter um papel na diferenciação de linfócitos B, número de acesso ao Genbank NP443170.1); ou IRTA2 (translocação do receptor da superfamília de imunoglobulina associada 2, um imunorreceptor putativo com possíveis papéis no desenvolvimento de células B e linfomagenesia; ocorre desregulação do gene por translocação em algumas doenças malignas de células B, número de acesso ao Genbank NP112571.1).

113. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 107 a 100, caracterizado pelo fato de que o domínio de direcionamento se liga a um marcador de superfície de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T regulatórias, células dendríticas ou macrófagos), em que o marcador de superfície de célula imune pode incluir, mas sem limitação a CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD21, CD25, CD37, CD30, CD33, CD40, CD68, CD123, CD254, PD-1, B7-H3 e CTLA-4.

114. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 107 a 113, caracterizado pelo fato de que o domínio de direcionamento pode incluir, mas sem limita o a um scF , um F(ab), um F(ab ) 2, um receptor de células B (BCR), um DARPin, um aficorpo, um monocorpo, um nanocorpo, um diacorpo, um anticorpo (incluindo um anticorpo monoespecífico ou biespecífico); um oligopeptídeo de direcionamento de célula incluindo, mas sem limitação a peptídeos de ligação de integrina RGD, ligantes projetados de novo, aptâmeros, conotoxinas de um peptídeo de bicicleta, moléculas pequenas, como ácido fólico, e um vírus que se liga à superfície da célula.

115. Ácido nucleico caracterizado pelo fato de que codifica o polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, ou o primeiro componente polipeptídico ou o segundo componente polipeptídico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 63.

116. Vetor de expressão caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 115, operacionalmente ligado a um promotor.

117. Célula hospedeira caracterizada pelo fato de que compreende o ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 115 e/ou o vetor de expressão, de acordo com a reivindicação 116.

118. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, o polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, o ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 115, o vetor de expressão, de acordo com a reivindicação 116, ou a célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 117, e um carreador farmaceuticamente aceitável.

119. Método para tratar câncer caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um sujeito em necessidade do agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem nas células do tumor para tratar o câncer.

120. Método, de acordo com a reivindicação 119, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico compreende um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente de polipeptídeo compreende um segundo domínio de direcionamento, em que o primeiro domínio de direcionamento se liga a um primeiro marcador de célula tumoral e o segundo domínio de direcionamento se liga a uma segunda célula tumoral marcador que pode ser o mesmo ou diferente do primeiro marcador de células tumorais, e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao primeiro marcador de células tumorais e ligação do segundo domínio de direcionamento ao segundo tumor marcador de célula.

121. Método, de acordo com a reivindicação 120, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente de polipeptídeo compreende um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente de polipeptídeo compreende um segundo domínio de direcionamento, em que o primeiro domínio de direcionamento se liga a um marcador de célula tumoral e o segundo domínio de direcionamento se liga a um marcador de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T reguladoras, células dendríticas ou macrófagos), e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao marcador de célula tumoral e ligação do segundo direcionamento domínio para o marcador de célula imune.

122. Método, de acordo com a reivindicação 120, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico compreende um primeiro domínio de direcionamento e o segundo componente polipeptídico compreende um segundo domínio de direcionamento, em que o primeiro domínio de direcionamento se liga a um primeiro marcador de célula imune (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, T células reguladoras, células dendríticas ou macrófagos) e o segundo domínio de direcionamento se liga a um segundo marcador de células imunes (incluindo, mas sem limitação a células T CD8+, células T reguladoras, células dendríticas ou macrófagos) que podem ser iguais ou diferentes do que o primeiro marcador de célula imune, e em que o primeiro polipeptídeo e o segundo polipeptídeo interagem apenas após a ligação do primeiro domínio de direcionamento ao primeiro marcador de célula imune e a ligação do segundo domínio de direcionamento ao segundo marcador de célula imune.

123. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 119 a 122, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de cólon, melanoma, câncer de células renais, câncer de células escamosas de cabeça e pescoço, câncer gástrico, carcinoma urotelial, linfoma de Hodgkin, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de células pequenas pulmonares, carcinoma hepatocelular, câncer pancreático, carcinoma de células Merkel, câncer colorretal, leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, linfoma não Hodgkin, mieloma múltiplo, câncer de ovário, câncer cervical e quaisquer tipos de tumor selecionados por um teste de diagnóstico, como instabilidade de microssatélites, carga mutacional do tumor, nível de expressão de PD-L1 ou o ensaio de imunoscore (conforme desenvolvido pela Society for Immunotherapy of Cancer).

124. Agonista do receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, o polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, o ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 115, o vetor de expressão, de acordo com a reivindicação 116, ou a célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 117, ou a composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 118, caracterizado pelo fato que é para uso como um medicamento para tratar câncer e/ou para modular uma resposta imune em um sujeito.

125. Método para modular uma resposta imune em um sujeito caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao sujeito o agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, o polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, o ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 115, o vetor de expressão, de acordo com a reivindicação 116, ou célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 117, ou composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 118.

126. Método, de acordo com a reivindicação 125, caracterizado pelo fato de que a resposta imune é uma resposta imune anticâncer, uma resposta imune reparativa de tecido ou uma resposta imune de cicatrização de feridas.

127. Método, de acordo com a reivindicação 125 ou 126, caracterizado pelo fato de que o agonista de receptor condicionalmente ativo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira ou composição farmacêutica é administrado como um componente de um biomaterial.

128. Método para agonizar o receptor de IL-2 ou o receptor de IL-4 caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um sujeito o agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, sob condições em que o primeiro componente polipeptídico e o segundo componente polipeptídico interagem no receptor.

129. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista ativo de heterodímero c de receptor de IL-2 (IL- 2R c).

130. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que o primeiro componente polipeptídico e o segundo polipeptídeo interagem para formar um agonista ativo de heterodímero c de receptor IL-4 (IL-4R c), IL-13 alfa, ou heterodímero IL-4Ralfa/IL13Ralfa.

131. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos entre parênteses estão presentes.

132. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos entre parênteses estão ausentes.

133. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos entre parênteses estão presentes.

134. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, caracterizado pelo fato de que os resíduos de aminoácidos entre parênteses estão ausentes.

135. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que X1, X3 e X4, respectivamente, compreendem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ou 100% idêntica, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes: X1: PKKKIQLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO:4) X3: (LE)DYAFNFELILEEIARLF(ESG) (SEQ ID NO:5) X4: (E)DEQEEMANAIITILQSWIFS (SEQ ID NO:6).

136. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que X1, X3 e X4, respectivamente, compreendem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, ou 100% idêntica, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes: X1: QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO:320) X3: LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO:321) X4: DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO:322).

137. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, 135 e 136, caracterizado pelo fato de que X2 compreende a sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total da sequência de aminoácidos DEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO:7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

138. Agonista de receptor condicionalmente ativo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 63, caracterizado pelo fato de que X1, X2, X3 e X4, respectivamente, compreendem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, aos domínios X1, X2, X3 e X4 presentes na sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90 versão 1 ou versão 2, conforme definido na Tabela 1.

138. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, 133 ou 134, caracterizado pelo fato de que X1, X3 e X4, respectivamente, quando presentes, compreendem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica, respectivamente, ao comprimento total dos domínios X1, X2, X3 e X4 mostrados abaixo, onde os resíduos entre parênteses podem estar presentes ou ausentes: X1: QLHAEHALYDALMILNI (SEQ ID NO:320) X3: LEDYAFNFELILEEIARLFES (SEQ ID NO:321) X4: DEQEEMANAIITILQSWIF(S) (SEQ ID NO:322).

139. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, 133, 134 ou 138, caracterizado pelo fato de que X2, quando presente, compreende a sequência de aminoácidos que é pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idêntica ao comprimento total da sequência de aminoácidos KDEAEKAKRMKEWMKRIK(T) (SEQ ID NO:7), em que os resíduos entre parênteses são opcionais.

140. Polipeptídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 114, 133, 134, caracterizado pelo fato de que X1, X2, X3 e

X4, quando presentes, são pelo menos 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 100% idênticas, respectivamente, aos domínios X1, X2, X3 e X4 (conforme definido na Tabela 1) presentes na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 90 versão 1 ou versão 2, conforme definido na Tabela 1.