BR112019021411A2 - métodos para tratar ou retardar a progressão do câncer e para melhorar a função, usos de um imunoconjugado, de um agonista, de um antagonista, composições, kit e invenção - Google Patents

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Abstract

a invenção provê métodos e composições para o tratamento do câncer, o método compreende a administração de um imunoconjugado de il-2, um agonista de cd40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo pd-1.

Description

“MÉTODOS PARA TRATAR OU RETARDAR A PROGRESSÃO DO CÂNCER E PARA MELHORAR A FUNÇÃO, USOS DE UM IMUNOCONJUGADO, DE UM AGONISTA, DE UM ANTAGONISTA, COMPOSIÇÕES, KIT E INVENÇÃO”
Campo Da Invenção [001] A presente invenção diz respeito a métodos de tratamento do câncer pela administração de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1.
Antecedentes Da Invenção [002] O câncer é uma das principais causas de morte no mundo. Apesar dos avanços nas opções de tratamento, o prognóstico de pacientes com câncer avançado permanece deficiente. Consequentemente, existe uma necessidade médica persistente e urgente de terapias ótimas para aumentar a sobrevida de pacientes com câncer sem causar toxicidade inaceitável.
[003] Resultados recentes a partir de estudos clínicos demonstraram que a terapia imune, tal como com inibidores dos pontos de checagem (checkpoints) imunes, pode prolongar a sobrevida global dos pacientes com câncer e levar a respostas duradouras. Apesar desses resultados promissores, as terapias baseadas no sistema imune atuais são eficazes apenas em uma proporção de pacientes e estratégias combinadas são necessárias para melhorar o benefício terapêutico.
[004] A interleucina-2 (IL-2), também conhecida como fator de crescimento de células T (TCGF), é uma glicoproteína globular de 15,5 kDa que desempenha um papel central na geração, sobrevida e homeostase dos linfócitos. Ela estimula a proliferação e diferenciação das células T, induz a geração de linfócitos T citotóxicos (CTLs) e a diferenciação de linfócitos do sangue periférico em células citotóxicas e células assassinas (ou células killer) ativadas por linfocinas (LAK), promove a expressão de citocinas e moléculas
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2/157 citolíticas pelas células T, facilita a proliferação e diferenciação das células B e a síntese de imunoglobulina pelas células B e estimula a geração, proliferação e ativação de células natural killer (NK) (revisado, por exemplo, em Waldmann, Nat Rev Immunol. 6, 595-601 (2009); Olejniczak e Kasprzak, Med. Sci. Monit. 14, RA179-89 (2008); Malek, Annu. Rev. Immunol. 26, 453-79 (2008)). A capacidade de expandir populações de linfócitos in vivo e aumentar as funções efetoras dessas células confere efeitos antitumorais à IL-2, e o tratamento com altas doses de IL-2 foi aprovado para uso em pacientes com carcinoma de células renais metastático e melanoma maligno.
[005] O CD40, um membro da superfamília do receptor de fator de necrose tumoral (TNFR), é um regulador crítico da resposta imune antitumoral por meio de sua expressão em células apresentadoras de antígeno (APCs) que incluem linfócitos B, células dendríticas (DCs) e monócitos (vide, por exemplo, Grewal IS et al, Ann Rev Immunol, 1998;16:111-35; Van Kooten C et al, J Leukoc. Biol, 2000;67:2-17; ou O'Sullivan B et al, Crit Rev Immunol. 2003;23(1 2):83-107). As DCs estimuladas por CD40 regulam as vias de processamento e apresentação de antígenos e migram para os linfonodos para ativar células T ingênuas (naíves). Demonstrou-se que os anticorpos para CD40 agonistas substituem a função dos linfócitos CD4+, resultando na expansão de linfócitos T citotóxicos (CTL) capazes de limpar um linfoma estabelecido em modelos de linfoma em murinos (vide, por exemplo, Sotomayor EM et al, Nature Medicine, 1999;5(7):780-7; Gladue RP et al, Cancer Immunol Immunother, 2011 ;60(7):1009-17). Os agonistas de CD40 desencadeiam a estimulação imune ativando as APCs hospedeiras, que então direcionam as respostas das células T direcionadas contra o tumor (veja, por exemplo, Vonderheide RH, Clin Cancer Res, 2007; 13:1083-8).
[006] O ligante de morte programada 1 (PD-L1) é encontrado na superfície de células imunes e tumorais e sua expressão é induzida por
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3/157 interferon gama (IFNy). Ele impede que o sistema imune destrua as células cancerosas interagindo com os receptores inibitórios de morte celular programada 1 (PD-1) e B7.1 nas células T ativadas, o que resulta em um sinal inibitório de células T.
[007] Como resultado, o direcionamento terapêutico de PD-1 e outras moléculas que sinalizam através de interações com PD-1, tal como o ligante do receptor de morte programada 1 (PD-L1) e ligante do receptor de morte programada 2 (PD-L2) são uma área de grande interesse. O PD-L1 é superexpresso em muitos cânceres e está frequentemente associado com mau prognóstico (Okazaki T et al., Intern. Immun. 2007 19(7):813) (Thompson RH et al., Cancer Res 2006, 66(7):3381). Curiosamente, a maioria dos linfócitos T infiltrantes do tumor expressam predominantemente PD-1, em contraste com os linfócitos T nos tecidos normais e linfócitos T do sangue periférico, indicando que a regulação positiva de PD-1 nas células T reativas a tumores pode contribuir com uma resposta imune antitumoral prejudicada (Blood 2009 114 (8): 1537). Isto pode ser devido à exploração da sinalização de PD-L1 mediada pelas células tumorais expressando PD-L1 que interagem com células T expressando PD-1 resultando na atenuação da ativação das células T e evasão da vigilância do sistema imunológico (Sharpe etal., Nat Rev2002) (Keir ME et al., 2008 Annu. Rev. Immunol. 26: 677). Portanto, a inibição da interação PD-L1/PD-1 pode melhorar a morte de tumores mediada pelas células T CD8+.
[008] A inibição da sinalização de PD-L1 foi proposta como um meio para aumentar a imunidade de células T no tratamento do câncer (por exemplo, imunidade para tumores) e infecção, incluindo infecções agudas e crônicas (por exemplo, persistentes). Um tratamento terapêutico ideal pode combinar o bloqueio da interação receptor/ligante de PD-1 com um ou mais agentes que aumentam a imunidade contra o tumor, por exemplo, pela ativação de células T.
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4/157 [009] Como mencionado acima, apesar da disponibilidade de certas terapias imunológicas, continua havendo a necessidade de terapias ótimas (combinadas) para tratar, estabilizar, prevenir e/ou retardar o desenvolvimento de vários tipos de câncer em pacientes.
Descrição Resumida Da Invenção [010] Em um aspecto, é fornecido um método para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de interleucina-2 (IL-2), um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1.
[011] Em outro aspecto, é fornecido um método para melhorar a função imune em um indivíduo com câncer, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de interleucina2 (IL-2), um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1.
[012] Em outro aspecto, é fornecido o uso de um imunoconjugado de IL-2 na fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, em que o medicamento compreende o imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e em que o tratamento compreende a administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
[013] Em outro aspecto, é proporcionado pela presente invenção o uso de um agonista de CD40 na fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, em que o medicamento
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5/157 compreende o agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e em que o tratamento compreende administração do medicamento em combinação com uma composição que compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
[014] Em outro aspecto, é proporcionado pela presente invenção o uso de um antagonista de ligação do eixo PD-1 na fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, em que o medicamento compreende o antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e em que o tratamento compreende a administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
[015] Em outro aspecto, é fornecida uma composição compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional para uso no tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo, em que o tratamento compreende a administração da referida composição em combinação com uma segunda composição, em que a segunda composição compreende um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com a terceira composição, em que a terceira composição compreende um antagonista do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
[016] Em outro aspecto, é fornecida uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente
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6/157 aceitável opcional para uso no tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo, em que o tratamento compreende a administração da referida composição em combinação com uma segunda composição, em que a segunda composição compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma terceira composição, em que a terceira composição compreende um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
[017] Em outro aspecto, é fornecida uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo, em que o tratamento compreende a administração da referida composição em combinação com uma segunda composição, em que a segunda composição compreende um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável e ainda em combinação com a terceira composição, em que a terceira composição compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[018] Em outro aspecto, a invenção provê um kit compreendendo um medicamento compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e uma bula compreendendo instruções para a administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
[019] Em outro aspecto, a invenção provê um kit compreendendo um medicamento compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e uma bula compreendendo instruções para administração do medicamento em combinação com uma composição
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7/157 compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
[020] Em outro aspecto, é proporcionado na presente invenção um kit que compreende um primeiro medicamento compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e um segundo medicamento compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional. Em alguns exemplos de realização, o kit compreende ainda uma bula ou folheto informativo compreendendo instruções para a administração do primeiro medicamento e do segundo medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
[021] Em outro aspecto, é fornecido um kit que compreende um medicamento que compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e uma bula que compreende instruções para administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda em combinação com uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
[022] Em outro aspecto, é proporcionado um kit compreendendo um medicamento compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e uma bula compreendendo instruções para administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda em combinação com uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, para tratar ou retardar a progressão do
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8/157 câncer em um indivíduo.
[023] Em outro aspecto, é proporcionado pela presente invenção um kit compreendendo um primeiro medicamento compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, um segundo medicamento compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e um terceiro medicamento compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional. Em alguns exemplos de realização, o kit compreende ainda uma bula ou folheto informativo compreendendo instruções para a administração do primeiro medicamento e do segundo medicamento e do terceiro medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
[024] Em outro aspecto, é proporcionado um kit compreendendo um medicamento compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e uma bula compreendendo instruções para administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
[025] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é um antagonista de ligação do eixo PD-1 humano. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste de um antagonista de ligação de PD-1, um antagonista de ligação de PD-L1 e um antagonista de ligação de PDL2. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1
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9/157 é um anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico ou um anticorpo humano. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um fragmento de ligação ao antígeno. Em alguns exemplos de realização, o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em Fab, Fab', F(ab')2 e Fv.
[026] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é um antagonista de ligação de PD-1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 inibe a ligação de PD-1 aos seus parceiros ligantes. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 inibe a ligação de PD-1 ao PD-L1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 inibe a ligação de PD-1 ao PD-L2. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 inibe a ligação ao PD-L1 e PD-L2. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é um anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em MDX 1106 (nivolumabe), MK-3475 (pembrolizumabe), CT-011 (pidilizumabe), MEDI-0680 (AMP-514), PDR001, REGN2810, e BGB-108.
[027] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é um antagonista de ligação de PD-L1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L1 inibe a ligação de PD-L1 ao PD-1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L1 inibe a ligação de PD-L1 ao B7-1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L1 inibe a ligação de PD-L1 ao PD1 e ao B7-1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste de: MPDL3280A (atezolizumabe), YW243.55.S70, MDX-1105, MEDI4736 (durvalumabe), e MSB0010718C (avelumabe). Em exemplos de realização
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10/157 específicos, o anticorpo anti-PD-L1 é MPDL3280A (atezolizumabe). Em alguns exemplos de realização, o MPDL3280A é administrado em uma dose de cerca de 800 mg a cerca de 1500 mg a cada três semanas (por exemplo, cerca de 1000 mg a cerca de 1300 mg a cada três semanas, por exemplo, cerca de 1100 mg a cerca de 1200 mg a cada três semanas). Em alguns exemplos de realização, o MPDL3280A é administrado a uma dose de cerca de 1200 mg a cada três semanas. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende uma cadeia pesada compreendendo a sequência HVR-H1 de SEQ ID NO: 19, a sequência HVR-H2 de SEQ ID NO: 20 e a sequência HVRH3 de SEQ ID NO: 21; e/ou uma cadeia leve compreendendo a sequência HVR-L1 de SEQ ID NO: 22, a sequência HVR-L2 de SEQ ID NO: 23 e a sequência HVR-L3 de SEQ ID NO: 24. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 ou 26, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende as três sequências HVR de cadeia pesada do anticorpo YW243.55.S70 e/ou as três sequências HVR de cadeia leve do anticorpo YW24355.S70 descritas na WO 2010/077634 e na Patente US 8.217.149, que são incorporadas ao presente pela referência. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende a sequência da região variável de cadeia pesada do anticorpo YW243.55.S70 e/ou a sequência da região variável de cadeia leve do anticorpo YW24355.S70.
[028] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de
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11/157 ligação do eixo PD-1 é um antagonista de ligação de PD-L2. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L2 é um anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L2 é uma imunoadesina.
[029] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-PD-L1 ou um anticorpo anti-PD-L2) e compreende uma mutação no sítio de glicosilação. Em alguns exemplos de realização, a mutação no sítio de glicosilação é uma mutação de substituição. Em alguns exemplos de realização, a mutação de substituição está no resíduo de aminoácido N297, L234, L235 e/ou D265 (numeração EU). Em alguns exemplos de realização, a mutação de substituição é selecionada a partir do grupo que consiste em N297G, N297A, L234A, L235A e D265A. Em alguns exemplos de realização, a mutação de substituição é uma mutação D265A e uma mutação N297G. Em alguns exemplos de realização, a mutação no sítio de glicosilação reduz a função efetora do anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-PD-L1 ou um anticorpo anti-PD-L2) é uma IgGi humana possuindo a substituição de Asn por Ala na posição 297 de acordo com a numeração EU.
[030] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o imunoconjugado de IL-2 compreende um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno tumoral e a um polipeptideo de IL-2.
[031] Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um anticorpo que se liga especificamente ao antígeno carcinoembrionário (CEA). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CEA compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a CDR de cadeia pesada (HCDR) 1 de SEQ ID NO:
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38, HCDR2 de SEQ ID NO: 39 e HCDR3 de SEQ ID NO: 40; e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a CDR de cadeia leve (LCDR) 1 de SEQ ID NO: 41, LCDR2 de SEQ ID NO: 42 e LCDR3 de SEQ ID NO: 43. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CEA compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35. Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um anticorpo que se liga especificamente à proteína de ativação de fibroblastos (FAP). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente à FAP compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a região determinante de complementaridade de cadeia pesada (HCDR) 1, HCDR 2 e HCDR 3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a região determinante de complementaridade da cadeia leve (LCDR) 1, LCDR 2 e LCDR 3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 47, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 48.
[032] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreendido no imunoconjugado de IL-2 é um anticorpo completo (de comprimento total). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um
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13/157 anticorpo da classe IgG, particularmente um anticorpo da subclasse IgGi. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende um domínio Fc, particularmente um domínio Fc de IgG, mais particularmente um domínio Fc de IgGi. Em alguns exemplos de realização, o domínio Fc é um domínio Fc humano. Em exemplos de realização particulares, o domínio Fc é um domínio Fc de IgGi humana.
[033] Em alguns exemplos de realização o domínio Fc compreende uma modificação que promove a associação da primeira e segunda subunidade do domínio Fc. Em alguns exemplos de realização, no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc, um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido que tem um volume de cadeia lateral maior, gerando, assim, uma protuberância (knob) dentro do domínio CH3 da primeira subunidade que é posicionável em uma cavidade (hole) dentro do domínio CH3 da segunda subunidade, e no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc, um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo aminoácido que tem um volume de cadeia lateral menor, gerando assim uma cavidade dentro do domínio CH3 da segunda subunidade, dentro da qual a protuberância do domínio CH3 da primeira subunidade é posicionável. Em alguns exemplos de realização, na primeira subunidade do domínio Fc, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de triptofano (T366W), e na segunda subunidade do domínio Fc, o resíduo de tirosina na posição 407 é substituído por um resíduo de valina (Y407V) e, opcionalmente, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de serina (T366S) e o resíduo de leucina na posição 368 é substituído por um resíduo de alanina (L368A) (numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Em alguns exemplos de realização, na primeira subunidade do domínio Fc, adicionalmente, o resíduo de serina na posição 354 é substituído por um resíduo de cisteína (S354C), e na segunda subunidade do domínio Fc,
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14/157 adicionalmente, o resíduo de tirosina na posição 349 é substituído por um resíduo de cisteína (Y349C) (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[034] Em alguns exemplos de realização, o domínio Fc compreende uma ou mais substituições de aminoácidos que reduzem a ligação a um receptor Fc, particularmente um receptor Fcy, e/ou função efetora, particularmente citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), em comparação com um Domínio Fc de IgGi nativo. Em alguns exemplos de realização, o domínio Fc compreende uma ou mais substituições de aminoácidos em uma ou mais posições selecionadas a partir do grupo de L234, L235, e P329 (numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Em alguns exemplos de realização, cada subunidade do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos L234A, L235A e P329G (numeração de acordo com o índice Kabat EU).
[035] Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo de IL-2 compreendido no imunoconjugado de IL-2 é um polipeptídeo de IL-2 humana. Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo de IL-2 é um polipeptídeo de IL-2 humana mutante compreendendo as substituições de aminoácidos F42A, Y45A e L72G (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ ID NO: 52 ). Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo IL-2 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 53.
[036] Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um único (ou seja, não mais que um) polipeptídeo de IL-2.
[037] Em um exemplo de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 44, um polipeptídeo compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 45 e um polipeptídeo compreendendo uma sequência que é pelo
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15/157 menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 46. Em um exemplo de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 44, um polipeptídeo compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 45 e um polipeptídeo compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 46. (CEA-IL2v).
[038] Em um exemplo de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 49, um polipeptídeo compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 50 e um polipeptídeo compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 51. Em um exemplo de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um polipeptídeo compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 49, um polipeptídeo compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 50 e um polipeptídeo compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 51. (FAP-IL2v).
[039] Em um exemplo de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende amunaleucina cergutuzumabe.
[040] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o agonista de CD40 é um anticorpo que se liga especificamente ao CD40. Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 é um anticorpo que se liga e ativa especificamente o CD40 humano. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58. Em alguns exemplos de realização,
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16/157 o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a região determinante de complementaridade de cadeia pesada (HCDR) 1, HCDR 2 e HCDR 3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a região determinante de complementaridade da cadeia leve (LCDR) 1, LCDR 2 e LCDR 3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 57, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 58.
[041] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CD40 é um anticorpo completo (de comprimento total). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um anticorpo da classe IgG, particularmente um anticorpo da subclasse lgG2, mais particularmente um anticorpo da subclasse IgGi humana.
[042] Em um exemplo de realização, o anticorpo compreende um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 59, e um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 60. Em um exemplo de realização, o anticorpo compreende um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 59, e/ou um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 60.
[043] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o câncer é um câncer positivo para FAP (FAP-positivo). Em alguns exemplos de realização, o câncer é um câncer positivo para CEA (CEA-positivo). Em alguns exemplos de
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17/157 realização, o câncer é câncer de cólon, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de bexiga, câncer pancreático, câncer de endométrio, câncer de mama, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de próstata ou outros cânceres aqui descritos. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo tem câncer ou foi diagnosticado com câncer. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo tem câncer localmente avançado ou metastático ou foi diagnosticado com câncer localmente avançado ou metastático. Em alguns exemplos de realização, as células de câncer no indivíduo expressam PD-L1. Em alguns exemplos de realização, a expressão de PD-L1 pode ser determinada por um ensaio imuno-histoquímico (IHQ).
[044] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e no presente documento, o tratamento ou administração do imunoconjugado IL-2, do agonista de CD40 e, opcionalmente, do antagonista de ligação do eixo PD-1, pode resultar em uma resposta no indivíduo. Em alguns exemplos de realização, a resposta é uma resposta completa. Em alguns exemplos de realização, a resposta é uma resposta sustentada após a interrupção do tratamento. Em alguns exemplos de realização, a resposta é uma resposta completa que é mantida após a interrupção do tratamento. Em outros exemplos de realização, a resposta é uma resposta parcial. Em alguns exemplos de realização, a resposta é uma resposta parcial que é mantida após a interrupção do tratamento.
[045] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o imunoconjugado de IL-2 é administrado antes do agonista de CD40, simultaneamente com o agonista de CD40 ou após o agonista de CD40. O antagonista de ligação do eixo PD-1 pode ser administrado antes, entre, após ou de maneira simultânea em relação à administração do imunoconjugado de IL-2 e agonista de CD40.
[046] Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de
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IL-2, o agonista de CD40 e, opcionalmente, o antagonista de ligação do eixo PD-1 estão na mesma composição. Em alguns exemplos de realização, ο imunoconjugado de IL-2, o agonista de CD40 e opcionalmente o antagonista de ligação do eixo PD-1 estão em composições separadas.
[047] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o imunoconjugado IL-2, o agonista CD40 e/ou o antagonista de ligação do eixo PD-1 são administrados intravenosamente, intramuscularmente, subcutaneamente, topicamente, oralmente, transdermicamente, intraperitonealmente, intraorbitalmente, por implantação, por inalação, intratecalmente, intraventricularmente ou intranasalmente. Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2, o agonista de CD40 e/ou o antagonista de ligação do eixo PD-1 são administrados por via intravenosa. Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o tratamento compreende ainda a administração de um agente quimioterápico para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo foi tratado com um agente quimioterápico antes do tratamento combinado com o imunoconjugado de IL-2, agonista de CD40 e, opcionalmente, antagonista de ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo tratado com a combinação do imunoconjugado de IL-2, agonista de CD40 e, opcionalmente, com o antagonista de ligação do eixo PD-1 é refratário a um tratamento com um agente quimioterápico. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo tratado com a combinação do imunoconjugado de IL-2, agonista de CD40 e, opcionalmente, com o antagonista de ligação do eixo PD-1 é intolerante a um tratamento com um agente quimioterápico. Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos ao longo do pedido, compreendem ainda a administração de um agente quimioterápico para tratar
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19/157 ou retardar a progressão do câncer.
[048] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, as células T CD8 no indivíduo apresentam priming (ativação de células T no primeiro encontro com o antígeno na superfície de uma APC), proliferação e/ou atividade citolítica aumentados em relação a antes da administração combinada do imunoconjugado de IL-2 , do agonista de CD40 e opcionalmente do antagonista de ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, o número de células T CD8 é elevado em relação a antes da administração da combinação do imunoconjugado IL-2, agonista CD40 e, opcionalmente, do antagonista de ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, a célula T CD8 é uma célula T CD8 específica para o antígeno (antígeno-específica). Em alguns exemplos de realização, a função Treg é suprimida em relação a antes da administração da combinação do imunoconjugado IL-2, agonista CD40 e, opcionalmente, do antagonista de ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, a exaustão de células T é diminuída em relação a antes da administração da combinação do imunoconjugado IL-2, agonista CD40 e, opcionalmente, do antagonista de ligação do eixo PD-1.
[049] Deve ser compreendido que uma, algumas, ou todas as propriedades dos diversos exemplos de realização descritos na presente invenção podem ser combinadas para formar outros exemplos de realização da presente invenção. Estes e outros aspectos da invenção serão evidentes para os técnicos hábeis no assunto. Estes e outros exemplos de realização da invenção são adicionalmente descritos pela descrição detalhada a seguir.
Breve Descrição Das Figuras
- Figura 1. Resultados de um experimento da eficácia com FAPIL2v, anticorpo monoclonal (Mab) CD40 e Mab PD-L1 como agentes únicos e como terapia combinada. A linhagem celular de carcinoma do pâncreas
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20/157 transfectante Panc02-H7-Fluc foi injetada no pâncreas de camundongos Black 6 para estudar a sobrevida em um modelo ortotópico singênico pancreático. Os compostos foram administrados nas seguintes doses: 2 mg/kg FAP-IL2v, 10 mg/kg CD40 Mab e 10 mg/kg PD-L1 Mab. Os compostos foram injetados concomitantemente por via intraperitoneal (ip) uma vez por semana durante 3 semanas. (A) curvas de sobrevida. (B) Mediana e valores de sobrevida global;
- Figura 2. Imagem de bioluminescência de camundongos mostrada na Figura 1. A diminuição do sinal de bioluminescência (fótons/segundo) representa a inibição do tumor.
Descrição Detalhada Da Invenção [050] Os inventores do presente pedido demonstraram que o tratamento combinado com imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e opcionalmente uma terapia imune anti-PD-L1 atua sinergicamente nas propriedades anticâncer e esta combinação podería proporcionar benefícios clínicos significativos em pacientes com câncer. Os dados aqui apresentados mostram que a combinação de um imunoconjugado de IL-2 com um agonista de CD40 e, opcionalmente, com uma terapia imune anti-PD-L1, resultou em maior sobrevida média e global, bem como causou a inibição do crescimento tumoral.
[051] Em um aspecto, são fornecidos métodos, composições e usos para o tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo que compreende a administração de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1.
[052] Em outro aspecto, são fornecidos métodos, composições e usos para melhorar a função imune em um indivíduo com câncer, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, um
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21/157 antagonista de ligação do eixo PD-1.
I. Definições [053] Antes de descrever a invenção em detalhes, é preciso entender que a presente invenção não está limitada as composições específicas ou sistemas biológicos, que podem, naturalmente, variar. Também é preciso entender que a terminologia utilizada neste documento tem apenas a finalidade de descrever exemplos de realizações específicos, não pretendendo ser um fator limitante.
[054] Tal como utilizado no relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um, uma” e “o, a” abrangem os referentes no plural, a menos que o conteúdo expresse claramente de outra maneira. Assim, por exemplo, a referência a “uma molécula”, inclui opcionalmente uma combinação de duas ou mais de tal molécula, e assim por diante.
[055] Conforme utilizado na presente invenção, os termos “primeiro”, “segundo”, “terceiro” e etc. com relação aos domínios de ligação ao antígeno, etc., são usados para de distinguir de modo conveniente quando existe mais do que um de cada tipo de domínio. O uso desses termos não tem a intenção de conferir uma ordem ou orientação específica, a menos que seja explicitamente declarado.
[056] O termo “cerca de” utilizado na presente invenção refere-se ao intervalo de erro habitual para o respectivo valor facilmente conhecido pelo especialista neste domínio técnico. A referência para “aproximadamente” ou “cerca de” um valor ou parâmetro no presente inclui (e descreve) exemplos que são direcionados a esse valor ou parâmetro perse.
[057] Entende-se que os aspectos e exemplos de realização da invenção aqui descrita incluem “compreendendo, “consistindo e “consistindo essencialmente de aspectos e exemplos de realização.
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22/157 [058] O termo “antagonista de ligação do eixo PD-1” refere-se a uma molécula que inibe a interação de um parceiro de ligação do eixo PD-1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, a fim de remover a disfunção de células T resultante da sinalização do eixo PD-1 - com um resultado que é a restauração ou melhora da função de células T (por exemplo, proliferação, produção de citocinas, morte da célula alvo). Conforme usado na presente invenção, um antagonista de ligação do eixo PD-1 inclui um antagonista de ligação de PD-1, antagonista de ligação de PD-L1 ou um antagonista de ligação de PD-L2. Um antagonista de ligação do eixo PD-1 “humano refere-se a um antagonista de ligação do eixo PD-1 que tem os efeitos descritos acima no eixo de sinalização da PD-1 humana.
[059] O termo “antagonista de ligação de PD-1” refere-se a uma molécula que diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere com a transdução do sinal resultante da interação entre PD-1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, como PD-L1, PD-L2. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é uma molécula que inibe a ligação do PD-1 a um ou mais de seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação de PD-1 inibe a ligação de PD-1 ao PD-L1 e/ou PD-L2. Por exemplo, os antagonistas de ligação de PD-1 incluem anticorpos anti-PD-1, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, imunoadesinas, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem com a transdução do sinal resultante da interação de PD-1 com PD-L1 e/ou PD-L2. Em um exemplo de realização, um antagonista de ligação de PD-1 reduz o sinal coestimulador negativo mediado pela sinalização mediada por proteínas da superfície celular expressas em linfócitos T através de PD-1 de modo a tornar uma célula T menos disfuncional não disfuncional (por exemplo, aumentar as respostas efetoras para reconhecimento do antígeno). Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é um anticorpo anti
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PD-1. Em um aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é o MDX1106 (nivolumabe) descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é o Merck-3475 (pembrolizumabe) descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é CT-011 (pidilizumabe) descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é o MEDI-0680 (AMP514) descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é o PDR001 descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é o REGN2810 descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação de PD-1 é o BGB-108 descrito na presente invenção.
[060] O termo “antagonista de ligação de DP-L1” é uma molécula que diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere com a transdução do sinal resultante da interação de DP-L1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, como PD-L1, B7-1. Em alguns exemplos de realização, um antagonista de ligação de PD-L1 é uma molécula que inibe a ligação do PD-L1 aos seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação de PD-L1 inibe a ligação do PD-L1 ao PD-1 e/ou B7-1. Em alguns exemplos de realização, os antagonistas de ligação de PD-L1 incluem anticorpos anti-PD-L1, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem com a transdução do sinal resultante da interação de PDL1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tais como PD-1 e/ou B7-1. Em um exemplo de realização, um antagonista de ligação de PD-L1 reduz o sinal coestimulador negativo mediado pela sinalização mediada por proteínas da superfície celular expressas em linfócitos T através de PD-L1 de modo a tornar uma célula T disfuncional menos disfuncional (por exemplo, melhorar as respostas efetoras para reconhecimento do antígeno). Em alguns exemplos de
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24/157 realização, o antagonista de ligação de PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1. Em um aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é YW243.55.S70 descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é MDX-1105 descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é MPDL3280A (atezolizumabe) descrito na presente invenção. Ainda em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é o MDX-1105 descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é o YW243.55.S70 descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é o MEDI4736 (durvalumabe) descrito na presente invenção. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é MSB0010718C (avelumabe) descrito na presente invenção.
[061] O termo “antagonista de ligação de PD-L2” refere-se a uma molécula que diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere com a transdução do sinal resultante da interação de PD-L2 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal como PD-1. Em alguns exemplos de realização, um antagonista de ligação de PD-L2 é uma molécula que inibe a ligação de PD-L2 a um ou mais de seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação de PD-L2 inibe a ligação de PD-L2 ao PD-1. Em alguns exemplos de realização, os antagonistas de PD-L2 incluem anticorpos anti-PD-L2, fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem com a transdução do sinal resultante da interação de PDL2 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal como PD-1. Em um exemplo de realização, um antagonista de ligação de PD-L2 reduz o sinal coestimulador negativo mediado pela sinalização mediada por proteínas da superfície celular expressas em linfócitos T através de PD-L2 de modo a tornar uma célula T disfuncional menos disfuncional (por exemplo, melhorar as
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25/157 respostas efetoras para reconhecimento do antígeno). Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L2 é uma imunoadesina.
[062] O termo “disfunção” no contexto da disfunção imune, refere-se a um estado de responsividade imune reduzida frente a uma estimulação antigênica. O termo inclui os elementos comuns de esgotamento e/ou anergia em que o reconhecimento do antígeno pode ocorrer, mas a resposta imune resultante não é eficaz para controlar a infecção ou o crescimento do tumor.
[063] O termo “disfuncional”, tal como utilizado na presente invenção, também inclui refratário ou não responsividade ao reconhecimento de antígeno, especificamente, a capacidade diminuída em traduzir o reconhecimento do antígeno nas funções efetoras de células T a jusante, tais como proliferação, produção de citocinas (por exemplo, IL-2) e/ou morte das células alvo.
[064] O termo “anergia” refere-se ao estado de falta de resposta frente ao estímulo pelo antígeno resultante de sinais incompletos ou insuficientes entregues através do receptor de célula T (por exemplo, aumento no Ca2+ intracelular, ausência de ativação de ras). A anergia de células T, também pode resultar após a estimulação com antígeno na ausência de coestimulação, fazendo com que a célula se torne refratária para a ativação subsequente pelo antígeno do mesmo no contexto da coestimulação. O estado de não responsividade pode ser frequentemente sobreposto pela presença de interleucina-2. As células T anérgicas não sofrem expansão clonal e/ou adquirem funções efetoras.
[065] O termo “exaustão” ou “esgotamento” refere-se à exaustão/esgotamento de células T como um estado de disfunção de células T que surge a partir da sinalização TCR prolongada que ocorre durante muitas infecções crônicas e no câncer. O termo se distingue de anergia a medida que
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26/157 tal estado não surge pela sinalização incompleta ou deficiente, mas a partir de uma sinalização prolongada. A exaustão/esgotamento é definida pela má função efetora, expressão sustentada de receptores inibitórios e um estado transcricional distinto em relação às células T de memória ou efetoras funcionais. A exaustão/esgotamento impede um controle otimizado das infecções e tumores. A exaustão/esgotamento pode resultar das vias reguladoras negativas extrínsecas (por exemplo, citocinas imunorreguladoras), bem como das vias reguladoras negativas intrínsecas (coestimulatórias) (PD-1, B7-H3, H4-B7, etc).
[066] “Função de células T melhorada” significa induzir, provocar ou estimular uma célula T a ter uma função biológica prolongada ou amplificada, ou renovar ou reativar as células T esgotadas ou inativas. Exemplos de melhora da função de células T incluem: aumento da secreção de interferon-γ a partir de células T CD8+, aumento da proliferação, aumento da responsividade a um antígeno (por exemplo, depuração viral, patógeno ou depuração tumoral) em relação a tais níveis antes da intervenção. Em um exemplo de realização, o nível de melhora é de pelo menos 50%, alternativamente, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 120%, 150%, 200%. O modo de medir esta melhora é conhecido por um técnico hábil no assunto.
[067] Um “distúrbio disfuncional de célula T” é um distúrbio ou condição de células T caracterizado pela diminuição da responsividade ao estímulo antigênico. Em exemplos de realização específicos, o distúrbio disfuncional de célula T é um distúrbio que está especificamente associado com um aumento inadequado da sinalização por meio de PD-1. Em outro exemplo de realização, o distúrbio disfuncional de células T é aquele em que as células T são anérgicas ou possuem capacidade reduzida para secretar citocinas, proliferar, ou executar a atividade citolítica. Em um aspecto específico, a redução da responsividade resulta em um controle ineficaz de um
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27/157 agente patogênico ou tumor que expressa um imunógeno. Exemplos de distúrbios disfuncionais de células T caracterizados pela disfunção de células T incluem a infecção aguda não resolvida, infecção crônica e imunidade tumoral.
[068] “Imunidade tumoral” refere-se ao processo no qual os tumores evadem a depuração e reconhecimento imunológico. Assim, como um conceito terapêutico, a imunidade tumoral é “tratada” quando tal evasão é atenuada, e os tumores são reconhecidos e atacados pelo sistema imune. Exemplos de reconhecimento tumoral incluem ligação ao tumor, diminuição do tumor e depuração do tumor.
[069] A “imunogenicidade” refere-se à capacidade de uma determinada substância de suscitar uma resposta imune. Os tumores são imunogênicos e a melhora ou aumento da imunogenicidade tumoral auxilia na depuração das células tumorais pela resposta imune. Exemplos de aumento da imunogenicidade do tumor incluem tratamento com um imunoconjugado de IL2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1.
[070] “Resposta prolongada” refere-se ao efeito prolongado sobre a redução do crescimento tumoral após a cessação do tratamento. Por exemplo, o tamanho do tumor pode permanecer o mesmo ou diminuir, em comparação com o tamanho inicial na fase de administração. Em alguns exemplos de realização, a resposta prolongada tem uma duração que é pelo menos a mesma duração do tratamento, pelo menos 1,5X, 2,0X, 2,5X, 3,0X o tempo ou duração do tratamento.
[071] O termo “composição farmacêutica” refere-se a uma preparação que está em uma forma que permita que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz, e que não contenha componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação deveria ser administrada. De preferência, essas composições são estéreis.
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28/157 [072] Um “veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a um ingrediente em uma composição farmacêutica que não seja um ingrediente ativo e que não seja tóxico para um sujeito. Um veículo farmaceuticamente aceitável inclui, mas não está limitado a, um tampão, excipiente, estabilizante ou conservante.
[073] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “tratamento” refere-se à intervenção clínica concebida para alterar o curso natural do indivíduo a célula sendo tratado durante o curso da patologia clínica. Efeitos desejáveis de tratamento incluem a diminuição da velocidade de progressão da doença, melhora ou paliação do estado da doença, remissão ou prognóstico melhorado. Por exemplo, um indivíduo é “tratado” com sucesso quando um ou mais sintomas associados ao câncer são reduzidos ou eliminados, incluindo, mas não se limitando a, redução da proliferação (ou destruição) das células cancerosas, diminuição dos sintomas resultantes da doença, aumento da qualidade de vida daqueles que sofrem da doença, diminuição da dose de outros medicamentos necessários para tratar a doença e/ou prolongando a sobrevida dos indivíduos.
[074] Conforme utilizado na presente invenção, “retardar a progressão de uma doença” significa adiar, dificultar, reduzir, retardar, estabilizar e/ou postergar o desenvolvimento da doença (tal como câncer). Este atraso pode ser de diferentes comprimentos de tempo, dependendo da história natural da doença e/ou do indivíduo sendo tratado. Como é evidente para um técnico hábil no assunto, um atraso suficiente ou significativo pode, efetivamente, incluir a prevenção, de modo que o indivíduo não desenvolva a doença. Por exemplo, uma fase tardia do câncer, tal como o desenvolvimento de metástases, pode ser retardada.
[075] Uma “quantidade eficaz” é pelo menos a quantidade mínima necessária para realizar uma melhora mensurável ou a prevenção de
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29/157 uma doença específica. Uma quantidade eficaz na presente invenção pode variar de acordo com fatores como estado da doença, idade, sexo e peso do paciente, e a capacidade do anticorpo em suscitar uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade eficaz é também aquela em que qualquer efeito tóxico ou prejudicial do tratamento é superado pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Para o uso profilático, os resultados benéficos ou desejados incluem resultados, como a eliminação ou redução do risco, diminuição da gravidade, ou atraso no aparecimento da doença, incluindo sintomas bioquímicos, histológicos e/ou comportamentais da doença, e suas complicações patológicas intermédias apresentando fenótipos durante o desenvolvimento da doença. Para o uso terapêutico, os resultados benéficos ou desejados incluem resultados clínicos, como a diminuição de um ou mais sintomas resultantes da doença, o aumento da qualidade de vida daqueles que sofrem da doença, a diminuição da dose de outros medicamentos necessários para tratar a doença, o aumento no efeito de outra medicação, tal como pelo direcionamento, atraso da progressão da doença, e/ou prolongamento da sobrevida. No caso do câncer ou tumor, a quantidade eficaz da droga pode ter o efeito na redução do número de células de câncer, redução do tamanho do tumor; inibição (ou seja, reduzir até certo ponto e preferencialmente parar) a infiltração de células do câncer em órgãos periféricos; inibição (ou seja, reduzir até certo ponto e preferencialmente parar) a metástase do tumor, inibição, em alguma extensão, do crescimento tumoral e/ou alivio em alguma extensão de um ou mais sintomas associados com o distúrbio. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações. Para os propósitos da presente invenção, uma quantidade eficaz de fármaco, composto, ou composição farmacêutica é uma quantidade suficiente para realizar o tratamento profilático ou terapêutico, seja direta ou indiretamente. Tal como é compreendido no contexto clínico, uma quantidade eficaz de um fármaco, composto, ou
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30/157 composição farmacêutica pode ou não ser conseguida em conjugação com outra droga, composto, ou composição farmacêutica. Assim, uma “quantidade eficaz” pode ser considerada no contexto da administração de um ou mais agentes terapêuticos, e um único agente pode ser considerado para ser administrado em uma quantidade eficaz se, em conjunto com um ou mais agentes diferentes, um resultado desejável pode ser ou é alcançado.
[076] Conforme utilizado no presente, os termos “em conjunto com” ou “juntamente com” referem-se à administração em uma modalidade de tratamento em adição a outra modalidade de tratamento. Assim, “em conjunto com” refere-se à administração de uma modalidade de tratamento antes, durante, ou após a administração da outra modalidade de tratamento ao indivíduo.
[077] Um “distúrbio” é qualquer condição beneficiada pelo tratamento incluindo, mas não se limitando a, distúrbios ou doenças crônicas e agudas, incluindo aquelas condições patológicas que predispõem o mamífero ao distúrbio em questão.
[078] O termo “distúrbio hiperproliferativo celular” e “distúrbio proliferativo” referem-se a distúrbios que estão associados em algum grau com a proliferação celular anormal. Em um exemplo de realização, um distúrbio da proliferação celular é o câncer. Em um exemplo de realização, um distúrbio da proliferação celular é um tumor.
[079] O termo “tumor”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a todo crescimento e proliferação de células neoplásicas, seja estas malignas ou benignas, e todas as células e tecidos pré-cancerosos. Os termos “câncer”, “canceroso”, “distúrbio da proliferação celular”, “distúrbio proliferativo” e “tumor” não são mutuamente exclusivos tal como referido na presente invenção.
[080] Os termos “câncer” e “canceroso” referem-se, ou
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31/157 descrevem a condição fisiológica em mamíferos que normalmente é caracterizada pelo crescimento de células de maneira não regulada. Exemplos de cânceres incluem, mas não estão limitados a, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, leucemias ou malignidades linfoides. Exemplos mais específicos de tais cânceres incluem, mas não se limitam a, câncer de células escamosas (por exemplo, câncer de células escamosas epiteliais), câncer de pulmão, incluindo o câncer pulmonar de pequenas células e câncer pulmonar de células não pequenas, adenocarcinoma de pulmão e carcinoma escamoso, câncer de peritônio, câncer hepatocelular, câncer gástrico ou de estômago, incluindo, por exemplo, o câncer gastrointestinal e câncer de estroma gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer de colo do útero, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer do trato urinário, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer de reto e câncer colorretal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândulas salivares, câncer de rim ou renal, câncer de próstata, câncer vulvar, câncer da tireoide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma peniano, melanoma, melanoma disseminativo superficial, melanoma lentigo maligno, melanomas lentiginosos acrais, melanomas nodulares, mieloma múltiplo e linfoma de células B (incluindo de baixo grau/linfoma folicular não Hodgkin (LNH); linfocítico de pequenas células (SL) LNH de grau intermediário / LNH folicular; LNH de grau intermédio difuso; LNH imunoblástico de alto grau; LNH linfoblástico de alto grau; LNH de células pequenas não clivadas de alto grau; LNH do tipo doença volumosa; linfoma de células do manto; linfoma relacionado com a AIDS , e macroglobulinemia de Waldenstrom); leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia linfoblástica aguda (LLA); leucemia de células pilosas; leucemia mieloblástica crônica e doença linfoproliferativa pós-transplante (DLPT), bem como a proliferação vascular anormal associada com facomatoses, edema (tal como aqueles relacionados com tumores cerebrais) e síndrome de Meigs, câncer cerebral, bem como
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32/157 câncer da cabeça e pescoço e metástases associadas. Em alguns exemplos de realização, os cânceres que são passíveis de tratamento pelos anticorpos da invenção incluem o câncer da mama, câncer colorretal, câncer retal, câncer pulmonar de células não pequenas, glioblastoma, linfoma não-Hodgkin (LNH), câncer de células renais, câncer de próstata, câncer de fígado câncer pancreático, sarcoma de tecido mole, sarcoma de Kaposi, carcinoma carcinoide, câncer de cabeça e pescoço, câncer de ovário, mesotelioma e mieloma múltiplo. Em certos exemplos de realização, o câncer é selecionado a partir de: câncer de pulmão de células pequenas, glioblastoma, neuroblastomas, melanoma, carcinoma de mama, câncer gástrico, câncer colorretal (CRC) e carcinoma hepatocelular. No entanto, em certos exemplos de realização o câncer é selecionado a partir de: câncer de pulmão de células não pequenas, câncer colorretal, glioblastoma e carcinoma de mama, incluindo formas metastáticas desses cânceres. Em alguns exemplos de realização, o câncer é um câncer positivo para CEA (CEA-positivo).
[081] O termo “agente citotóxico”, conforme utilizado no presente, refere-se a qualquer agente que seja prejudicial para as células (por exemplo, capaz de provocar a morte celular, inibir a proliferação ou de outro modo impedir uma função celular). Agentes citotóxicos incluem, mas não estão limitados a, isótopos radioativos (por exemplo, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu); agentes quimioterápicos; agentes inibidores do crescimento; enzimas e seus fragmentos, tais como enzimas nucleolíticas; e toxinas como toxinas de molécula pequena ou toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal, incluindo fragmentos e/ou variantes das mesmas. Agentes citotóxicos exemplares podem ser selecionados a partir de agentes antimicrotúbulos, complexos de coordenação de platina, agentes alquilantes, agentes antibióticos, inibidores da topoisomerase II, antimetabolitos, inibidores da
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33/157 topoisomerase I, hormônios e análogos hormonais, inibidores da via de transdução de sinal, inibidores da angiogênese não receptores tirosina quinase, agentes imunoterapêuticos, agentes pró-apoptóticos, inibidores de LDH-A, inibidores da biossíntese de ácidos graxos, inibidores da sinalização do ciclo celular, inibidores de HDAC, inibidores de proteassoma e inibidores do metabolismo do câncer. Em um exemplo de realização, o agente citotóxico é um taxano. Em um exemplo de realização, o taxano é paclitaxel ou docetaxel. Em um exemplo de realização, o agente citotóxico é um agente de platina. Em um exemplo de realização, o agente citotóxico é um antagonista de EGFR. Em um exemplo de realização, o antagonista de EGFR é A/-(3-etinilfenil)-6,7-£>/s (2metoxietoxi)quinazolin-4-amina (por exemplo , erlotinibe). Em um exemplo de realização, o agente citotóxico é um inibidor RAF. Em um exemplo de realização, o inibidor RAF é um inibidor de BRAF e/ou CRAF. Em um exemplo de realização, o inibidor RAF é o vemurafenibe. Em um exemplo de realização, o agente citotóxico é um inibidor de PI3K.
[082] Um “agente quimioterápico” inclui compostos úteis no tratamento do câncer. Exemplos de agentes quimioterápicos incluem erlotinibe (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), bortezomibe (VELCADE®, Millennium Pharm.), disulfiram, gaiato de epigalocatequina, salinosporamide A, carfilzomib, 17-AAG (geldanamicina), radicicol, lactato desidrogenase A (LDH-A), fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), sunitib (SUTENT®, Pfizer/Sugen), letrozol (FEMARA®, Novartis), mesilato de Imatinib (GLEEVEC®, Novartis), finasunate (VATALANIB®, Novartis), oxaliplatina (ELOXATIN®, Sanofi), 5-FU (5fluorouracila), leucovorin, Rapamicina (Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), Lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), Lonafamib (SCH 66336), sorafenib (NEXAVAR®, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, agentes alquilantes, tais como tiotepa e e ciclofosfamida CYTOXAN®; sulfonatos de alquila tais como busulfana, improsulfana e piposulfana;
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34/157 aziridinas tais como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etilenoiminas e metilamelaminas, incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilolomelamina; acetogeninas (especiamente bullatacina e bullatacinona); uma camptotecina (incluindo topotecano e irinotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); adrenocorticosteroides (incluindo prednisona e prednisolona); acetato de ciproterona; 5a-redutases incluindo finasterida e dutasterida); vorinostat, romidepsina, panobinostat, ácido valpróico, dolastatina mocetinostat; aldesleucina, duocarmicina (incluindo seus análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; a sarcodictina; espongistatina; mostardas de nitrogênio tais como clorambucila, clomafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalana, novembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosouréias, tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina e ranimustina; antibióticos, tais como o antibiótico enedina (por exemplo caliqueamicina, especialmente caliqueamicina y1l e caliqueamicina w1l (vide, por exemplo, Agnew, Chem Intl. Ed. Engl.f\994), 33: 183-186); dinemicina, incluindo a dinemicina A; bifosfonatos, como por exemplo clodronato; uma esperamicina; bem como o cromóforo neocarzinostatina e cromóforos de antibióticos enedina relacionados à cromoproteínas), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-Lnorleucina, ADRIAMYCIN® (doxorubicina), morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina e deoxidoxorubicina), epirubicina, esorubicina, idarubicina, marcellomicina, mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina,
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35/157 potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimexa, zinostatina, zorubicina; antimetabolitos como metotrexato e 5-fluorouracil (5-FU); análogos do ácido fólico como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos das purinas como, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos da pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; andrógenos, tais como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; antiadrenais, tais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor de ácido fólico tal como ácido frolínico; aceglatona; glicosídeo de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfomitina; acetato de eliptínio; uma epotilona; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiuréia; lentinana; lonidamina; maitansinoides tais como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamnol; nitacrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilínico; 2—etilidrazida; procarbazina; complexo polissacarídico PSK® (JHS Natural Products, Eugene, Oregon); razoxano; rizoxina; sizofurano; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2’2”-triclorotrietilamina; (especialmente a toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosida (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, TAXOL® (paclitaxel, Bristol- Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ (livre de Cremofor), formulação do paclitaxel desenvolvidas com nanoparticulas de albumina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, IL) e TAXOTERE® (docetaxel, doxetaxel; Sanofi-Aventis); clorambucila; GEMZAR® (gemcitabina); 6tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina tais como cisplatina e carboplatina; vinblastina; etoposida (VP-16); ifosfamida;
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36/157 mitoxantrona; vincristina; NAVELBINE® (vinorelbina), novantrona; teniposida; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®); ibandronato; CPT-11; inibidor da topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides tais como ácido retinoico; e os sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de quaisquer agentes mencionados acima.
[083] Como agentes quimioterápicos também estão incluídos; (i) agentes anti-hormonais que agem para regular ou inibir a ação hormonal sobre tumores, tais como antiestrógenos e moduladores seletivos de receptores de estrógeno (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo o NOLVADEX® tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, iodoxifeno, 4hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona, e FARESTON toremifeno; (ii) inibidores da aromatase que inibem a enzima aromatase, o qual regula a produção de estrógeno pelas glândulas adrenais, como por exemplo, 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, MEGASE® acetato de megestrol, AROMASIN® (exemestana, Pfzer) formestano, fadrozolo, RIVISOR® (vorozolo), FEMARA® (letrozolo, Novartis), e ARIMIDEX® (anastrozole; AstraZeneca); (iii) anti-andrógenos, tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida e goserelina; buserelina, tripterelina, acetato de medroxiprogesterona, dietilestilbestrol, premarina, fluoximesterona, todo ácido transretinóico, fenretinida, bem como, troxacitabina (um análogo da citisona 1,3-dioxolano nucleosideo); (iv) inibidores da proteína quinase, (v) inibidores do lipídio quinase, (vi) oligonucleotídeos antisense, particularmente aqueles que inibem a expressão de genes envolvidos na via de sinalização da proliferação celular aberrante, tais como, PKC-alfa, Ralf e H-Ras; (vii) ribozimas, tais como inibidores de expressão da VEGF, (por exemplo, ribozima AGIOZYME®) e inibidores da expressão de HER2, (viii) vacinas tais como, vacinas de terapia gênica, por exemplo, vacina ALLOVECTIN®, vacina LEUVECTIN®, e vacina VAXID®; inibidor da topoisomerase 1 LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; e
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37/157 (ix) sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis e derivados de quaisquer agentes mencionados acima.
[084] Como agente quimioterápico também estão incluídos anticorpos como alemtuzumabe (Campath), bevacizumabe
Genentech); cetuximabe (ERBITUX®, Imclone); panitumumabe
Amgen), rituximabe (RITUXAN Genentech/Biogen Idee), (AVASTIN®, (VECTIBIX®, pertuzumabe (OMNITARG®, 2C4, Genentech), trastuzumabe (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomabe (Bexxar, Corixia), e o conjugado anticorpo-fármaco, gemtuzumabe ozogamicina (MYLOTARG®, Wyeth). Anticorpos monoclonais humanizados com potencial terapêutico como agentes em combinação com os compostos da invenção incluem: apolizumabe, aselizumabe, atlizumabe, bapineuzumabe, bivatuzumabe mertansine, cantuzumabe mertansine, cedelizumabe, certolizumabe pegol, cidfusituzumabe, cidtuzumabe, daclizumabe, eculizumabe, efalizumabe, epratuzumabe, erlizumabe, felvizumabe, fontolizumabe, gemtuzumabe ozogamicina, inotuzumabe ozogamicina, ipilimumabe, labetuzumabe, lintuzumabe, matuzumabe, mepolizumabe, motavizumabe, motovizumabe, natalizumabe, nimotuzumabe, nolovizumabe, numavizumabe, ocrelizumabe, omalizumabe, palivizumabe, pascolizumabe, pecfusituzumabe, pectuzumabe, pexelizumabe, ralivizumabe, ranibizumabe, reslivizumabe, reslizumabe, resivizumabe, rovelizumabe, ruplizumabe, sibrotuzumabe, siplizumabe, sontuzumabe, tacatuzumabe tetraxetano, tadocizumabe, talizumabe, tefibazumabe, tocilizumabe, toralizumabe, tucotuzumabe celmoleucina, tucusituzumabe, umavizumabe, urtoxazumabe, ustekinumabe, visilizumabe e a anti-interleucina-12 (ABT874/J695, Wyeth Research and Abbott Laboratories') que é um anticorpo lgG1 λ de comprimento total geneticamente modificado para reconhecer a proteína p40 da interleucina-12.
[085] O agente quimioterápico também inclui “inibidores de
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EGFR”, que se referem a compostos que se ligam ou de outro modo interagem diretamente com o EGFR e impedem ou reduzem a sua atividade de sinalização, e é alternativamente referido como “antagonista de EGFR”. Exemplos de tais agentes incluem anticorpos e moléculas pequenas que se ligam ao EGFR. Exemplos de anticorpos que ligam ao EGFR incluem MAb 579 (ATCC CRL HB 8506), MAb 455 (ATCC CRL HB8507), MAb 225 (ATCC CRL 8508), MAb 528 (ATCC CRL 8509) (vide, Patente US 4.943. 533, Mendelsohn et aí) e variantes deste, tal como o 225 quimerizado (C225 ou Cetuximabe; ERBUTIX®) e 225 humano “reshaped’ (H225) (vide, documento WO 96/40210, Imclone Systems Inc.); IMC-11F8, um anticorpo humano completo, anticorpo contra EGFR (Imclone); anticorpos que se ligam ao EGFR tipo II mutante (Patente US 5.212.290); anticorpos quimérico e humanizado que se ligam ao EGFR conforme descrito na patente US 5.891.996; anticorpos humanos que se ligam ao EGFR, tal como o ABX-EGF ou Panitumumabe (vide, documento WO98/50433, Abgenix/Amgen); EMD 55900 (Stragliotto et at. Eur. J. Cancer 32A:636-640 (1996)); EMD7200 (matuzumabe) um anticorpo EGFR humanizado direcionado contra EGFR que compete tanto com EGF quanto com TGF-alfa para se ligar ao EGFR (EMD/Merck); anticorpo EGFR humano, HuMax-EGFR (GenMab); anticorpos completamente humanos conhecidos como E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 e E7.2.3 e aqueles descritos na Patente US 6.235.883; MDX-447 (Medarex Inc); e mAb 806 ou mAb 806 humanizados (Johns et al., J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004)). O anticorpo anti-EGFR pode ser conjugado com um agente citotóxico, formando assim um imunoconjugado (vide, por exemplo, a patente EP659439A2, Merck GmbH). Os antagonistas de EGFR incluem pequenas moléculas tais como os compostos descritos nas patentes US 5.616.582, US 5.457.105, US 5.475.001, US 5.654.307, US 5.679.683, US 6.084.095, US 6.265.410, US 6.455.534,US 6.521.620, US 6.596.726,US 6.713.484, US 5.770.599, US 6.140.332, US
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5.866.572, US 6.399.602, US 6.344.459, US 6.602.863, US 6.391.874, US 6.344.455, US 5.760.041, US 6.002.008 e US 5.747.498, assim como as seguintes publicações PCT: WO98/14451, W098/50038, W099/09016 e WO99/24037. Os antagonistas de EGFR tipo pequenas moléculas incluem OSI-774 (CP-358774, erlotinib, TACERVA®, Genentech/OSI Pharmaceuticals); PD 183805 (Cl 1033, 2-propenamida, dicloridrato de N-[4-[(3-cloro-4-fluorofenil) amino]- 7-[3-(4-morfolinil)propoxi]-6-quinazolinil], Pfizer Inc.); ZD1839, gefitinib (IRESSA), 4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi) quinazolina, AstraZeneca); ZM 105180 ((6-amino-4-(3-metilfenil-amino)quinazolina, Zeneca); BIBX-1382 (A/8-(3-cloro-4-fluoro-fenil)-AZ2-(1-metilpiperidina-4-il)-pirimida [5,4-d] pirimidina-2 ,8-diamina, Boehringer Ingelheim); PKI-166 ((fí)-4-[4-[(1-feniletil)amino]-1/-/-pirrolo [2,3-d]pirimidina-6-il]-fenol), (F?)6-(4-hidroxifenil)-4-[(1 -feniletil)amino]-7/-/-pirrol [2,3-d] pirimidina); CL-387785 (A/-[4 - [(3-bromofenil) amino]-6-quinazolinil]-2-butinamida) e EKB-569 (A/-[4-[(3cloro-4-fluorofenil)amino]-3-ciano-7-etoxi-6-quinolinil]-4-(dimetilamina)-2butenamida) (Wyeth); AG1478 (Pfizer); AG1571 (SU 5271; Pfizer); inibidores duplos de tirosina -quinase EGFR/HER2 tais como lapatinib (TYKERB®, GSK572016 ou A/-[3-cloro-4-[(3 fluorofenil)metoxi]fenil]-6[5[[[2metilsulfonil) etil] amino]metil]-2-furanil]-4-quinazolinamina).
[086] Os agentes quimioterápicos também incluem “Inibidores da tirosina-quinase” incluindo os fármacos direcionados a EGFR citados no parágrafo anterior; molécula pequena inibidora de tirosina-quinases de HER2 tal como TAK165 disponível pela Takeda; CP-724714, um inibidor seletivo oral da tirosina quinase do receptor ErbB2 (Pfizer e OSI); inibidores duplos de HER, tais como EKB-569 (disponível pela Wyeth) que se liga preferencialmente a EGFR mas inibe células que superexpressam HER2 e EGFR; lapatinib (GSK572016; disponível pela Glaxo-SmithKline), um inibidor oral da tirosinaquinase de EGFR e HER2; PKI-166 (disponível pela Novartis); inibidores pan
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HER tais como canertinib (CI-1033; Pharmacia); Inibidores de Raf-1, tais como o agente antisense ISIS-5132, disponibilizado pela ISIS Pharmaceuticals, que inibe a sinalização de Raf-1; inibidores de TK-alvo não-HER, como o mesilato de imatinib (GLEEVEC®, disponível pela Glaxo SmithKline); inibidores de tirosina quinase multialvo tais como sunitinibe (SUTENT®, disponível pela Pfizer); Inibidores de tirosina-quinase do receptor de VEGF, tais como vatalanibe (PTK787/ZK222584, disponível pela Novartis/Schering AG); Inibidor de quinase I regulado por MAPK extracelular CI-1040 (comercializado pela Pharmacia); quinazolinas, tais como PD 153035,4- (3-cloroanilino) quinazolina; piridopirimidinas; pirimidopirimidinas; pirrolopirimidinas, tais como CGP 59326, CGP 60261 e CGP 62706; pirazolopirimidinas, 4-(fenilamino)-7H-pirrol[2,3d]pirimidinas; curcumina (diferucoil metano, 4,5-b/s (4-fluoroanilino)ftalimida); tirfostinas contendo porções nitrotiofeno; PD-0183805 (Warner-Lamber); moléculas antisense (por exemplo, aquelas que se ligam ao ácido nucleico codificante de HER); quinoxalinas (Patente US 5.804.396); trifostinas (Patente US 5.804.396); ZD6474 (Astra Zeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); inibidores pan-HER como CI-1033 (Pfizer); Affinitac (ISIS 3521; Isis/Lilly); mesilato de imatinib (GLEEVEC®); PKI 166 (Novartis); GW2016 (Glaxo SmithKline); CI-1033 (Pfizer); EKB-569 (Wyeth); Semaxinib (Pfizer); ZD6474 (AstraZeneca); PTK-787 (Novartis/Schering AG); INC-1C11 (Imclone), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®); ou como descrito em qualquer uma das seguintes publicações de patentes: Patente US 5.804.396; WO 1999/09016 (American Cyanamid); WO 1998/43960 (American Cyanamid); WO 1997/38983 (Warner Lambert); WO 1999/06378 (Warner Lambert); WO 1999/06396 (Warner Lambert); WO 1996/30347 (Pfizer, Inc); WO 1996/33978 (Zeneca); WO 1996/3397 (Zeneca) e WO 1996/33980 (Zeneca).
[087] Os agentes quimioterápicos também incluem dexametasona, interferon, colquicina, metoprina, ciclosporina, anfotericina,
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41/157 metronidazol, alemtuzumabe, alitretinoína, alopurinol, amifostina, trióxido de arsênio, asparaginase, BCG vivo, bevacuzimabe, bexaroteno, cladribina, clofarabina, darbepoetina alfa, denileucina, dexrazoxano, epoetina alia, elotinib, filgrastim, acetato de histrelina, ibritumomabe, interferon alfa-2a, interferon alfa2b, lenalidomida, levamisol, mesna, metoxsalen, nandrolona, nelarabina, nofetumomabe, oprelvequina, palifermina, pamidronato, pegademase, pegaspargase, pegfilgrastim, pemetrexede dissódico, plicamicina, porfimero sódico, quinacrina, rasburicase, sargramostim, temozolomida, VM-26, 6-TG, toremifeno, tretinoína, ATRA, valrubicina, zoledronato e ácido zoledrônico e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
[088] Os agentes quimioterápicos também incluem hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, acetato de cortisona, pivalato de tixocortol, triancinolona acetonida, álcool triancinolona, mometasona, aminaconídeo, budesonida, desonida, fluocinonida, fluocinolona acetonida, betametasona, fosfato sódico de betametasona, dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, fluocortolona, hidrocortisona 17-butirato, 17-valerato de hidrocortisona, dipropionato de aclometasona, valerato de betametasona, dipropionato de betametasona, prednicarbato, 17-butirato de clobetasona, 17propionato de clobetasol, caproato de fluocortolona, pivalato de fluocortolona e acetato de fluprednideno; peptídeos anti-inflamatios imunosseletivos (ImSAID) tais como fenilalanina-glutamina-glicina (FEG) e a sua forma isomérica D(feG) (IMULAN BioTherapeutics, LLC); drogas antirreumáticas, como azatioprina, ciclosporina (ciclosporina A), D-penicilamina, sais de ouro, hidroxicloroquina, leflunomideminociclina, sulfasalazina, bloqueadores do fator de necrose tumoral alfa (TNFa) como etanercept (Enbrel), infliximabe (Remicade), adalimumabe (Humira), certolizumabe pegol (Cimzia), golimumabe (Simponi), bloqueadores da interleucina 1 (IL-1), como anakinra (Kineret), bloqueadores da coestimulação de células T, como o abatacept (Orencia), bloqueadores da
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Interleucina 6 (IL-6), como tocilizumabe (ACTEMRA®); bloqueadores da interleucina 13 (IL-13), como o lebrikizumabe; Bloqueadores de interferon alfa (IFN), como Rontalizumabe; bloqueadores de integrina Beta 7, como o rhuMAb Beta7; Bloqueadores da via IgE, como o anti-M1 prime; LTa3 homotrimérica secretada e bloqueadores de LTal/βΣ heterotrimeros ligados à membrana, como antilinfotoxina alfa (LTa); isótopos radioativos (por exemplo , At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu); agentes investigacionais diversos, tais como tioplatina, PS-341, fenilbutirato, ET-18- OCH3, ou inibidores da farnesil transferase (L-739749, L-744832); polifenóis como quercetina, resveratrol, piceatannol, gaiato de epigalocatequina, teaflavinas, flavanóis, procianidinas, ácido betulinico e seus derivados; inibidores da autofagia tais como cloroquina; delta-9-tetrahidrocanabinol (dronabinol, MARINOL®); beta-lapacona; lapacol; colquicinas; ácido betulinico; acetilcamptotecina, escopolectina e 9-aminocamptotecina); podofilotoxina; tegafur (UFTORAL®); bexaroteno (TARGRETIN®); bisfosfonatos como clodronato (por exemplo, BONEFOS® ou OSTAC®), etidronato (DIDROCAL®), NE-58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETA®), alendronato (FOSAMAX®), pamidronato (AREDIA®), tiludronato (SKELID®) ou risedronato (ACTONEL®); e receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR); vacinas como a vacina THERATOPE®; perifosina, inibidor de COX-2 (por exemplo, celecoxibe ou etoricoxibe), inibidor de proteossoma (por exemplo, PS341); CCI-779; tipifarnib (R11577); orafenibe, ABT510; Inibidor de Bcl-2, como o oblimersen sódico (GENASENSE®); pixantrona; inibidores da farnesiltransferase como lonafarnibe (SCH 6636, SARASAR™); e sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um agentes e fármacos citados acima; bem como combinações de dois ou mais agentes e fármacos citados acima, tal como CHOP, uma abreviação para uma terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina e prednisolona; e
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FOLFOX, uma abreviatura de um regime de tratamento com oxaliplatina (ELOXATIN™) combinado com 5-FU e leucovorina.
[089] Os agentes quimioterápicos também incluem medicamentos anti-inflamatórios não esteroides com efeitos analgésicos, antipiréticos e anti-inflamatórios. Os AINEs incluem inibidores não seletivos da enzima ciclo-oxigenase. Exemplos específicos de AINEs incluem aspirina, derivados do ácido propiônico tais como ibuprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno, flurbiprofeno, oxaprozina e naproxeno, derivados do ácido acético tais como indometacina, sulindac, etodolac, diclofenac, derivados do ácido enólico tais como piroxicam, meloxicam, tenoxicam, droxicam, lornoxicam e isoxicam, derivados do ácido fenâmico tais como o ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico, ácido flufenâmico, ácido tolfenâmico e inibidores da COX-2 como celecoxib, etoricoxib, lumiracoxib, parecoxib, rofecoxib, rofecoxib e valdecoxib. Os AINEs podem ser indicados para o alívio sintomático de condições como a artrite reumatoide, artrose, artropatias inflamatórias espondilite anquilosante, artrite psoriática, Síndrome de Reiter, artrite gotosa aguda, dismenorréia, dor óssea metastática, dor de cabeça e enxaqueca, dor pós-operatória, dor leve a moderada devido à inflamação e lesão tecidual, pirexia, cólicas de íleo e renal.
[090] O termo “radioterapia” significa o uso de raios gama ou raios beta direcionados para induzir um dano suficiente em uma célula de modo a limitar a sua capacidade de funcionar normalmente, ou para destruir completamente a célula. Será apreciado que existem diversas maneiras conhecidas no estado da técnica para determinar a dose e a duração do tratamento. Os tratamentos típicos são fornecidos por uma administração única e as doses típicas variam de 10 a 200 unidades (Grays) por dia.
[091] Um “sujeito” ou “indivíduo” para fins de tratamento referemse a qualquer animal classificado como mamífero, incluindo humanos, animais
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44/157 domésticos e de criação, de zoológico, desportivos ou animais de companhia, tais como cães, cavalos, gatos, bovinos, e etc. Preferencialmente, o mamífero é humano. Um indivíduo ou sujeito pode ser um paciente.
[092] O termo “anticorpo” é utilizado na presente invenção no sentido mais amplo e abrange especificamente anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpos, desde que exibam a atividade biológica desejada.
[093] Um anticorpo “isolado” é aquele que foi separado a partir de um componente de seu ambiente natural, ou seja, não está em seu meio natural. Não é necessário qualquer nível particular de purificação. Por exemplo, um anticorpo isolado pode ser removido do seu ambiente nativo ou natural. Os anticorpos produzidos de forma recombinante em células hospedeiras são considerados isolados para a finalidade da invenção, visto que são anticorpos nativos ou recombinantes que foram separados, fracionados, ou parcial ou substancialmente purificados por qualquer técnica adequada. Em alguns exemplos de realização, um anticorpo é purificado a mais de 95% ou 99% de pureza, conforme determinado, por exemplo, por métodos eletroforéticos (por exemplo, SDS-PAGE, focalização isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou cromatográficos (por exemplo, cromatografia de troca iônica ou HPLC de fase inversa). Para uma revisão de métodos para a avaliação da pureza do anticorpo, vide, por exemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007).
[094] “Anticorpos nativos” são normalmente glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150.000 D, compostas de duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Cada cadeia leve é ligada a uma cadeia pesada por uma ligação dissulfeto covalente, enquanto a quantidade de ligações de dissulfeto varia entre as cadeias pesadas de
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45/157 diferentes isótopos de imunoglobulina. Cada cadeia leve e pesada também contém pontes de dissulfeto intracadeias regularmente espaçadas. Cada cadeia pesada tem em uma extremidade um domínio variável (Vh), seguido por um número de domínios constante. Cada cadeia leve contém um domínio variável em uma extremidade (Vl) e um domínio constante na sua outra extremidade; o domínio constante da cadeia leve é alinhado ao primeiro domínio constante da cadeia pesada, e o domínio variável da cadeia leve é alinhado ao domínio variável da cadeia pesada. Acredita-se que resíduos de aminoácido específicos formam uma relação entre os domínios variáveis da cadeia leve e cadeia pesada.
[095] A expressão “domínio constante” refere-se a porção de uma molécula de imunoglobulina possuindo uma sequência de aminoácidos mais conservada em relação à outra porção (domínio variável) da imunoglobulina, que contém o sítio de ligação ao antígeno. O domínio constante compreende os domínios Ch1, Ch2 e Ch3 (coletivamente, CH) da cadeia pesada e o domínio CL da cadeia leve.
[096] O termo “região variável” ou “domínio variável” refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvido na ligação do anticorpo ao antígeno. Os domínios variáveis da cadeia pesada e cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo geralmente têm estruturas semelhantes, com cada domínio compreendendo quatro regiões conservadas denominadas regiões estruturais ou arcabouços (frameworks FRs) e três regiões hipervariáveis (HVRs). (Vide, por exemplo, Kindt etal. Kuby Immunology, 6a ed., W.H. Freeman & Co., página 91 (2007)). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação ao antígeno. Conforme utilizado na presente invenção em conexão com sequências de regiões variáveis, a expressão “numeração de Kabat” refere-se ao sistema de numeração estabelecido por Kabat et al., Sequences of Proteins
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46/157 of Immunological Interest, 5- Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).
[097] A “classe” de um anticorpo ou imunoglobulina refere-se ao tipo de domínio constante ou região constante presente em sua cadeia pesada. Existem cinco classes principais de anticorpos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, e várias delas podem ser divididas em subclasses (isotipos), por exemplo, IgGi, lgG2, IgGa, lgG4, IgAi e lgA2. Os domínios constantes de cadeia pesada que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas são denominados de α, δ, ε, γ, e μ, respectivamente.
[098] As estruturas de subunidade e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas e descritas de maneira geral, por exemplo, em Abbas et al. Cellular and Mol. Immunology, 4- Ed. (W. B. Saunders, Co., 2000).
[100] As expressões “anticorpo completo”, “anticorpo de comprimento total”, “anticorpo intacto” e “anticorpo inteiro” são utilizadas no presente documento de forma alternada, e se referem a um anticorpo na sua forma substancialmente intacta, e não como fragmentos de anticorpos conforme descrito abaixo. As expressões se referem particularmente a um anticorpo com cadeias pesadas que possui uma região Fc.
[101] “Fragmentos de anticorpos” compreendem uma porção de um anticorpo intacto, compreendendo preferivelmente a região de ligação ao antígeno deste. Em alguns exemplos de realização, o fragmento de anticorpo descrito na presente invenção é um fragmento de ligação ao antígeno. Exemplos de fragmentos de anticorpos incluem Fab, Fab’, F(ab’)2 e fragmentos Fv, diacorpos, anticorpos lineares, moléculas de anticorpos de cadeia única e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos.
[102] A digestão de anticorpos pela papaína produz dois fragmentos idênticos de ligação ao antígeno, denominados fragmentos “Fab”,
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47/157 cada qual com um único sítio de ligação ao antígeno, e um fragmento “Fc” residual, cujo nome reflete a sua capacidade de rápida cristalização. O tratamento com a pepsina gera um fragmento F(ab’)2 que contém dois sítios de ligação a antígenos e ainda é capaz de reticular o antígeno.
[103] “Fv” é o menor fragmento de anticorpo que contém um sítio de ligação ao antígeno completo. Em uma realização, uma cadeia de duas espécies de Fv consiste em um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e em um de cadeia leve em estreita associação não covalente. Em uma espécie de Fv de cadeia única (scFv), um domínio variável de cadeia pesada e um de cadeia leve podem ser covalentemente ligados por um peptídeo ligante flexível de tal forma que a cadeias leves e pesadas possam se associar em uma estrutura “dimérica” análoga àquela em uma espécie Fv de duas cadeias. É nesta configuração que as três HVRs de cada domínio variável interagem para definir um sítio de ligação ao antígeno sobre a superfície do dímero VH-VL. Coletivamente, as seis HVRs conferem a especificidade de ligação ao antígeno para o anticorpo. Entretanto, mesmo um único domínio variável (ou metade de um Fv que compreende apenas três HVRs específicos para um antígeno), possui a capacidade de reconhecer e ligar ao antígeno, embora em menor afinidade do que o site de ligação inteiro.
[104] O fragmento Fab contém o domínio constante de cadeia leve e pesado e também contém o domínio constante da cadeia leve e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. Os fragmentos Fab’ diferem dos fragmentos Fab pela adição de alguns resíduos no carbóxi-terminal do domínio CHi de cadeia pesada, incluindo uma ou mais cisteínas da região de articulação do anticorpo. Fab’-SH é a designação da presente invenção para o Fab’ em que o(s) resíduo(s) de cisteína dos domínios constantes sustenta(m) um grupo tiol livre. Os fragmentos de anticorpos F(ab’)2 foram produzidos originalmente como pares de fragmentos Fab’ que possuem dobradiças de
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48/157 cisteínas entre si. Outros acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpos são também conhecidos.
[105] Fragmentos de anticorpo “Fv de cadeia única” ou “scFv” compreendem os domínios Vh e Vl de anticorpo, no qual estes domínios estão presentes em uma única cadeia de polipeptídeo. Geralmente, o polipeptídeo scFv compreende ainda um polipeptídeo ligante entre os domínios VH e VL, permitindo que o scFv forme a estrutura desejada para ligação ao antígeno. Para uma revisão de scFv vide, por exemplo, Plückthun, em “The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol. 113, Eds Rosenburg e Moore., Springer-Verlag, Nova Iorque, (1994), págs. 269-315.
[106] O termo “diacorpos” (ou o termo em inglês diabodies) refere-se a fragmentos de anticorpos com dois sítios de ligação ao antígeno, de modo que tais fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) na mesma cadeia polipeptídica (VH-VL). Por meio do uso de um ligante que é muito curto para permitir o pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a parear com os domínios complementares de outra cadeia, e criar dois sítios de ligação ao antígeno. Os diacorpos (diabodies) podem ser bivalentes ou biespecíficos. Diacorpos são descritos de maneira mais detalhada, por exemplo, na Patente EP 404.097; Publicação WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); e Hollinger etal., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 6444-6448 (1993). Os triacorpos (triabodies) e tetracorpos (tetrabodies) também estão descritos em Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134.
[107] O termo “anticorpo monoclonal” conforme utilizado no presente refere-se a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogênea, ou seja, os anticorpos individuais compreendidos em uma população são idênticos e/ou se ligam ao(s) mesmo(s)
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49/157 epítopo(s), exceto por possíveis anticorpos variantes, por exemplo, contendo mutações de ocorrência natural ou que podem surgir durante a produção do anticorpo monoclonal, tais variantes geralmente estão presentes em pequenas quantidades. Ao contrário das preparações com anticorpo policlonal, que incluem tipicamente diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monoclonal é direcionado a um único determinante sobre um antígeno. Portanto, o adjetivo “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser interpretado como uma necessidade de se produzir o anticorpo por qualquer método específico. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem utilizados de acordo com a presente invenção podem ser feitos por uma variedade de técnicas, incluindo, mas não se limitando aos métodos de hibridoma, métodos de DNA recombinante, métodos de exibição por fago, e métodos que utilizam animais transgênicos contendo a totalidade ou parte dos loci de imunoglobulinas humanas, e tais métodos e outros métodos exemplares para produzir anticorpos monoclonais descritos na presente divulgação.
[108] Os anticorpos monoclonais da presente invenção incluem especificamente anticorpos “quiméricos” nos quais uma porção da cadeia leve e/ou pesada é idêntica com, ou homóloga a, sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie especifica, ou pertencendo a uma classe ou subclasse de anticorpo específica, enquanto o restante da cadeia é idêntico com, ou homóloga as, sequências correspondentes em anticorpos derivados de outras espécies, ou pertencendo a outra classe ou subclasse de anticorpo, bem como fragmentos destes anticorpos, desde que eles exibam a atividade biológica desejada (vide, por exemplo, a Patente US 4.816.567; e Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:6851-6855 (1984)). Anticorpos quiméricos
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50/157 incluem anticorpos PRIMATIZED®, onde a região de ligação ao antígeno do anticorpo é derivada de um anticorpo produzido, por exemplo, por macacos imunizados com o antígeno de interesse.
[109] Formas “humanizadas” de anticorpos não humanos (tal como, murino) são anticorpos quiméricos que contém uma sequência mínima derivada de uma imunoglobulina não humana. Em um exemplo de realização, um anticorpo humanizado é uma imunoglobulina humana (anticorpo receptor) em que resíduos de uma HVR do receptor foram substituídos pelos resíduos de uma HVR de uma espécie não humana (anticorpo doador) tal como camundongo, rato, coelho ou primata não humano possuindo a especificidade, afinidade e/ou capacidade desejada(s). Em alguns casos, os resíduos FR da imunoglobulina humana são substituídos por resíduos não humanos correspondentes. Adicionalmente, anticorpos humanizados podem conter resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor ou no anticorpo doador. Estas modificações são produzidas para refinar o desempenho do anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas das alças (loops) hipervariáveis correspondem aos de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as FRs são de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado poderá também compreender opcionalmente pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente a de uma imunoglobulina humana. Para maiores detalhes, vide, por exemplo, Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); e Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). Veja também, por exemplo, Vaswani e Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995); Hurle e Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994); e Patentes US 6.982.321 e US 7.087.409.
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51/157 [110] Um “anticorpo humano” é aquele que possui uma sequência de aminoácido que corresponde à sequência de um anticorpo produzido por um humano e/ou foi produzido pelo uso de qualquer técnica para a produção de anticorpos humanos conforme descrito no presente. Esta definição de um anticorpo humano exclui especificamente um anticorpo humanizado, que compreende resíduos não humanos de ligação ao antígeno. Os anticorpos humanos podem ser produzidos utilizando várias técnicas conhecidas no estado da técnica, incluindo bibliotecas de exibição por fagos. Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581 (1991). Também estão disponíveis para a preparação de anticorpos monoclonais humanos os métodos descritos em Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, pág. 77 (1985) e Boerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95 (1991). Veja também van Dijk e van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol, 5:368-74 (2001). Os anticorpos humanos podem ser preparados pela administração do antígeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir tais anticorpos em resposta ao desafio antigênico, mas cujos locus endógenos foram desativados, por exemplo, o xenocamundongo (xenomice) imunizado (vide, por exemplo, Patente US 6.075.181 e US 6.150.584 com relação a tecnologia XENOMOUSE®). Vide também, por exemplo, Li et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 103:3557-3562 (2006) sobre anticorpos humanos gerados por meio da tecnologia de hibridoma de células B humanas.
[111] O termo “região hipervariável” ou “HVR” conforme utilizado no presente refere-se a cada uma das regiões de um domínio variável de anticorpo que é hipervariável na sequência (“região determinante de complementaridade” ou “CDRs”) e/ou forma alças (loops) estruturalmente definidas (“alças hipervariáveis”) e/ou contém resíduos de contanto ao antígeno (“contato ao antígeno”). Geralmente, os anticorpos compreendem seis HVRs;
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52/157 sendo três na VH (H1, H2, H3), e três na VL (L1, L2, L3). HVRs exemplares na presente invenção incluem:
(a) alças hipervariáveis que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2) e 96101 (H3) (Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987);
(b) CDRs que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 24-34 (L1), 50-56 (L2), 89-97 (L3), 31-35b (H1), 50-65 (H2), e 95-102 (H3) (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5- Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991));
(c) contatos ao antigênio que ocorrem nos resíduos de aminoácidos 27c-36 (L1), 46-55 (L2), 89-96 (L3), 30-35b (H1), 47-58 (H2), e 93-101 (H3) (MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996); e (d) combinações de (a), (b) e/ou (c), incluindo resíduos de aminoácidos HVR 46-56 (L2), 47-56 (L2), 48-56 (L2), 49-56 (L2), 26-35 (H1), 26-35b (H1), 49-65 (H2), 93-102 (H3) e 94-102 (H3).
[112] Salvo quando indicado de outra forma, os resíduos HVR e outros resíduos do domínio variável (por exemplo, resíduos FR) são numerados na presente invenção de acordo com Kabat etal., Supra.
[113] As expressões “região de arcabouço”, “região estrutural” ou “FR” (de framework) referem-se aos resíduos de domínios variáveis que não são resíduos da região hipervariável (HVR) A FR de um domínio variável consiste geralmente em quatro domínios FR: FR1, FR2, FR3 e FR4. Assim, as sequências HVR e FR geralmente aparecem na seguinte ordem na VH (ou VL): FR1-H1 (L1)-FR2-H2 (L2)-FR3-H3 (L3)-FR4.
[114] Os termos “numeração do resíduo de domínio variável
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53/157 como em Kabat” ou “numeração da posição do aminoácido como em Kabat” e variações destes, se refere ao sistema de numeração utilizado para os domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al. supra. Usando este sistema de numeração, a sequência de aminoácido linear real pode conter menos ou mais aminoácidos, o que corresponde a redução ou inserção em uma FR ou HVR do domínio variável. Por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada pode incluir um único aminoácido inserido (resíduo 52A, de acordo com Kabat) após o resíduo 52 da H2 e resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b, 82c, etc., de acordo com Kabat), após o resíduo 82 da FR de cadeia pesada. A numeração de Kabat dos resíduos pode ser determinada para um dado anticorpo pelo alinhamento nas regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat “padrão”.
[115] O sistema de numeração de Kabat é geralmente usado quando ao se referir a um resíduo no domínio variável (aproximadamente, os resíduos 1-107 da cadeia leve e resíduos 1-113 da cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al. Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). O “sistema de numeração EU” ou “índice EU” é geralmente usado quando se faz referencia a um resíduo em uma região constante de cadeia pesada da imunoglobulina (por exemplo, o índice EU relatado em Kabat et al. Supra). O “índice EU como em Kabat” refere-se a numeração EU do resíduo do anticorpo humano lgG1.
[116] Conforme utilizado na presente invenção, os termos “se liga”, “se liga especificamente” ou é “específico para” referem-se às interações mensuráveis e reprodutíveis, tais como a ligação entre um alvo e um anticorpo, que é determinante da presença do alvo na presença de uma população heterogênea de moléculas, incluindo moléculas biológicas. Por exemplo, um
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54/157 anticorpo que se liga ou que se liga especificamente a um alvo (que pode ser um epítopo) é um anticorpo que se liga a este alvo com maior afinidade, avidez, mais prontamente e/ou com maior duração do que a sua ligação a outros alvos, ou seja, a ligação é seletiva para o antígeno e pode ser discriminada a partir de interações indesejadas ou inespecíficas. Em uma realização, a extensão de ligação de um anticorpo a uma proteína não relacionada é inferior a cerca de 10% da ligação do anticorpo ao seu alvo quando mensurada, por exemplo, por ressonância plasmônica de superfície (SPR). Em determinados exemplos de realização, um anticorpo que se liga especificamente ao alvo tem uma constante de dissociação (Kd) < 1 μΜ, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM ou < 0,1 nM. Em determinados exemplos de realização, um anticorpo se liga especificamente a um epítopo sobre uma proteína que é conservada entre diferentes espécies. Em outro exemplo de realização, a ligação específica pode incluir, mas não requer ligação exclusiva.
[117] O termo “domínio de ligação ao antígeno” refere-se à parte de uma molécula de ligação ao antígeno que compreende a área que se liga especificamente e é complementar a parte ou todo o antígeno. Um domínio de ligação ao antígeno pode ser fornecido, por exemplo, por um ou mais domínios variáveis de anticorpo (também denominado de regiões variáveis). Preferencialmente, um domínio de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve de anticorpo (VL) e uma região variável de cadeia pesada de anticorpo (VH).
[118] O termo “domínio Fc” ou “região Fc” é usado no presente para definir uma região C-terminal de uma cadeia pesada de imunoglobulina contendo pelo menos uma porção da região constante. O termo inclui regiões de Fc de sequências nativas e regiões Fc variantes. Embora os limites da região Fc de uma cadeia pesada de IgG possam variar levemente, a região Fc da cadeia pesada da IgG humana é normalmente definida como se estendendo
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55/157 a partir da Cis226, ou a partir da Pro230 até a região carboxi-terminal da cadeia pesada. Entretanto, os anticorpos produzidos por células hospedeiras podem ser submetidos a divagem pós-traducional de um ou mais, especialmente um ou dois, aminoácidos a partir da extremidade C-terminal da cadeia pesada. Por esse motivo, um anticorpo produzido por uma célula hospedeira pela expressão de uma molécula de ácido nucleico específica que codifica uma cadeia pesada de comprimento total pode incluir a cadeia pesada de comprimento total, ou pode incluir uma variante clivada da cadeia pesada de comprimento total (também referida no presente como “cadeia pesada variante clivada”). Este pode ser o caso em que os dois aminoácidos C-terminais finais da cadeia pesada são glicina (G446) e lisina (K447, numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Portanto, a lisina C-terminal (Lis447), ou a glicina Cterminal (GIÍ446) e a lisina (K447) da região Fc, podem ou não estar presentes. As sequências de aminoácidos das cadeias pesadas, incluindo os domínios Fc (ou uma subunidade de um domínio Fc, conforme definido na presente invenção) são indicadas no presente sem o dipeptídeo glicina-lisina C-terminal, se não indicado de outra forma. Em um exemplo de realização da invenção, uma cadeia pesada que inclui uma subunidade de um domínio Fc, conforme especificado no presente, por exemplo, compreendida em um imunoconjugado útil na invenção, compreende um dipeptídeo glicina-lisina C-terminal adicional (G446 e K447, numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização da invenção, uma cadeia pesada que inclui uma subunidade de um domínio Fc, conforme especificado no presente, por exemplo, compreendida em um imunoconjugado útil na invenção, compreende um resíduo glicina C-terminal adicional (G446, numeração de acordo com o índice EU de Kabat). As composições da invenção compreendem uma população de anticorpos ou imunoconjugados. A população de anticorpos ou imunoconjugados pode compreender moléculas possuindo uma cadeia pesada
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56/157 de comprimento total (completa) e moléculas com uma cadeia pesada variante clivada. A população de anticorpos e imunoconjugados pode consistir de uma mistura de moléculas possuindo uma cadeia pesada de comprimento total e moléculas possuindo uma cadeia pesada variante clivada, em que pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% dos anticorpos ou imunoconjugados têm uma cadeia pesada variante clivada. Em um exemplo de realização da invenção, uma composição compreendendo uma população de anticorpos ou imunoconjugados compreende um anticorpo ou imunoconjugado que compreende uma cadeia pesada que inclui uma subunidade de um domínio Fc, conforme especificado no presente com um dipeptídeo glicina-lisina C-terminal adicional (G446 e K447, numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização da invenção, uma composição compreendendo uma população de anticorpos ou imunoconjugados compreende um anticorpo ou imunoconjugado que compreende uma cadeia pesada que inclui uma subunidade de um domínio Fc, conforme especificado no presente com um resíduo glicina C-terminal adicional (G446, numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização, tal composição compreende uma população de anticorpos ou imunoconjugados compreendida de moléculas que compreendem uma cadeia pesada incluindo uma subunidade de um domínio Fc conforme especificado no presente; moléculas compreendendo uma cadeia pesada incluindo uma subunidade de um domínio Fc conforme especificado no presente com um resíduo glicina C-terminal adicional (G446, numeração de acordo com o índice EU de Kabat); e moléculas compreendendo uma cadeia pesada incluindo uma subunidade de um domínio Fc conforme especificado no presente com um dipeptídeo glicina-lisina C-terminal adicional (G446 e K447, numeração de acordo com o índice EU de Kabat). A menos que especificado de outra maneira, a numeração dos resíduos de aminoácidos na região Fc ou região
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57/157 constante está de acordo com o sistema de numeração EU, também chamado o índice EU, conforme descrito em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5- Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991 (veja também acima). Uma “subunidade” de urn domínio Fc, conforme utilizado no presente, refere-se a um dos dois polipeptídeos que formam o domínio Fc dimérico, ou seja, um polipeptideo compreendendo as regiões constantes C-terminais de uma cadeia pesada da imunoglobulina, capaz de realizar autoassociação estável. Por exemplo, uma subunidade de um domínio Fc de IgG compreende uma CH2 de IgG e um domínio constante CH3 de IgG.
[119] “Fundido” significa-se que os componentes (por exemplo, um anticorpo e um polipeptideo IL-2) estão ligados por meio de ligações peptídicas, seja diretamente ou através de um ou mais peptídeos ligantes.
[120] Uma “modificação que promove a associação da primeira e segunda subunidade do domínio Fc” é uma manipulação da estrutura peptídica ou modificações pós-traducionais de uma subunidade do domínio Fc que reduz ou evita a associação de um polipeptideo que compreende a subunidade do domínio Fc com um polipeptideo idêntico para formar um homodímero. Uma modificação que promove a associação, conforme utilizado no presente inclui, particularmente, as modificações feitas em cada uma das duas subunidades de domínio Fc separadamente (ou seja, a primeira e a segunda subunidade do domínio Fc), em que as modificações são complementares entre si, de modo a promover a associação das duas subunidades do domínio Fc. Por exemplo, uma modificação que promove a associação pode alterar a estrutura ou a carga de uma ou ambas as subunidades do domínio Fc de modo a fazer a sua associação estéricamente ou eletrostaticamente favorável, respectivamente. Assim, a (hetero)dimerização ocorre entre um polipeptideo que compreende a primeira subunidade do domínio Fc e um polipeptideo que compreende a
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58/157 segunda subunidade do domínio Fc, que devem ser não idênticas no sentido de que outros componentes fundidos a cada uma das subunidades (por exemplo, porções de ligação ao antígeno) não sejam iguais. Em alguns exemplos de realização a modificação que promove a associação compreende uma mutação de aminoácidos no domínio Fc, especificamente, uma substituição de aminoácidos. Em um exemplo de realização específico, a modificação que promove a associação compreende uma mutação de aminoácidos separada, especificamente uma substituição de aminoácidos em cada uma das duas subunidades do domínio Fc.
[121] Um “receptor Fc de ativação” ou “receptor Fc ativador” é um receptor Fc que, após o acoplamento por uma região Fc de um anticorpo, desencadeia eventos de sinalização que estimulam as células que carregam o receptor a executarem funções efetoras. Receptores Fc de ativação incluem FcyRllla (CD16a), FcyRI (CD64), FcyRlla (CD32), e FcaRI (CD89).
[122] O termo “funções efetoras”, quando usado em referência a anticorpos, refere-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc de um anticorpo, que variam de acordo com o isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpos incluem: ligação de C1q e citotoxicidade dependente de complemento (CDC); ligação ao receptor Fc; citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC); fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP); secreção de citocina; captação de antígeno mediada pelo complexo imune pelas células apresentadoras de antígeno; regulação negativa dos receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de célula B) e ativação de célula B.
[123] A citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC) é um mecanismo imune que conduz à lise de células-alvo revestidas com anticorpo pelas células efetoras do sistema imune. As células alvo são células às quais os anticorpos ou seus derivados, que compreendem
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59/157 uma região Fc se ligam especificamente, em geral, através da parte da proteína que é N-terminal com a região Fc. Conforme utilizado no presente, o termo “ADCC reduzida” é definido como qualquer uma redução no número de células-alvo que são lisadas em um determinado tempo, em uma dada concentração de anticorpo no meio que circunda as células-alvo por meio do mecanismo de ADCC definido acima, e/ou um aumento na concentração de anticorpo no meio que circunda as células-alvo necessário para atingir a lise de um determinado número de células-alvo em um dado momento pelo mecanismo de ADCC. A redução na ADCC é relativa à ADCC mediada pelo mesmo anticorpo produzido pelo mesmo tipo de células hospedeiras, usando os mesmos métodos-padrão de produção, purificação, formulação e armazenamento (que são conhecidos pelos técnicos hábeis no assunto), mas que não foram mas que não foram modificadas por engenharia genética. Por exemplo, a redução da ADCC mediada por um anticorpo que compreende no seu domínio Fc uma substituição de aminoácidos que reduz a ADCC, é relativo à ADCC mediada por um mesmo anticorpo sem esta substituição de aminoácidos no domínio Fc. Ensaios adequados para mensurar a ADCC são bem conhecidos no estado da técnica (vide, por exemplo, a publicação PCT WO 2006/082515 ou publicação WO 2012/130831).
[124] Tal como utilizado na presente invenção, os termos “desenvolvido”, “manipulado”, “modificado”, “modificado por engenharia genética” devem incluir qualquer tipo de manipulação da estrutura central do peptideo ou as modificações pós-traducionais de um polipeptídeo de ocorrência natural ou recombinante ou fragmento deste. A manipulação ou modificação inclui modificações na sequência de aminoácidos, do padrão de glicosilação, ou do grupo de cadeia lateral dos aminoácidos individuais, bem como combinações destas abordagens.
[125] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “
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60/157 imunoconjugado “ refere-se a uma molécula de polipeptídeo que inclui pelo menos uma molécula de IL-2 e pelo menos um anticorpo. A molécula de IL-2 pode ser unida ao anticorpo por uma variedade de interações e em uma variedade de configurações, conforme descrito na presente invenção. Em exemplos de realização específicos, a molécula de IL-2 é fundida ao anticorpo através de um peptídeo ligante. Os imunoconjugados particulares úteis na invenção consistem essencialmente em uma molécula de IL-2 e um anticorpo unido por uma ou mais sequências de ligação.
[126] “Redução” (e variações gramaticais das mesmas, como “reduzida” ou “reduzindo”), por exemplo, redução da ligação, refere-se a uma diminuição na respectiva quantidade, medida por métodos adequados conhecidos no estado da técnica. Para maior clareza, o termo inclui também a redução para zero (ou abaixo do limite de detecção do método analítico), ou seja, a abolição completa ou eliminação. Por outro lado, “aumento” refere-se a um aumento na quantidade respectiva. “Ligação reduzida”, por exemplo, referese a uma diminuição da afinidade para a respectiva interação, medida, por exemplo, por SPR, e inclui também a redução da afinidade para zero (ou abaixo do limite de detecção do método analítico), ou seja, a abolição completa da interação. Por outro lado, “ligação aumentada” refere-se a um aumento na afinidade de ligação para a respectiva interação.
[127] O termo “interleucina-2” ou “IL-2”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a qualquer IL-2 nativa a partir de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, humanos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), salvo quando indicado de outra forma. O termo abrange IL-2 não processada, bem como qualquer forma de IL-2 que resulta do processamento na célula. O termo também abrange variantes de IL-2 que ocorrem naturalmente, por exemplo, as variantes por splicing alternativo ou variantes alélicas. A sequência de
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61/157 aminoácidos de uma IL-2 humana exemplar é exibida na SEQ ID NO: 52. A IL2 humana não processada compreende um peptideo sinal de 20 aminoácidos N-terminal possuindo a SEQ ID NO: 55, que está ausente na molécula de IL-2 madura.
[128] O termo “IL-2 mutante” ou “polipeptídeo de IL-2 mutante”, conforme utilizando na presente invenção, pretende abranger quaisquer formas mutantes de várias formas da molécula de IL-2, incluindo a IL-2 completa (de comprimento total), formas truncadas de IL-2 e formas em que a IL-2 está ligada a outra molécula, tal como por fusão ou conjugação química. Os termos “completa” e “de comprimento total” quando utilizados em referência à IL-2 pretendem designar a molécula madura e natural de IL-2. Por exemplo, IL-2 humana de comprimento total (ou completa) refere-se a uma molécula que possui 133 aminoácidos (veja, por exemplo, a SEQ ID NO: 52). As várias formas de mutantes de IL-2 são caracterizadas por terem pelo menos uma mutação de aminoácido que afeta a interação da IL-2 com o CD25. Essa mutação pode envolver a substituição, deleção, truncamento ou modificação do resíduo de aminoácido tipo selvagem normalmente localizado nessa posição. Os mutantes obtidos por substituição de aminoácidos são preferidos. Salvo quando indicado de outra forma, uma IL-2 mutante pode ser referida no presente como uma sequência peptídica de IL-2 mutante, um polipeptídeo de IL-2 mutante, uma proteína de IL-2 mutante ou um análogo de IL-2 mutante.
[129] A designação de várias formas de IL-2 na presente invenção é feita em relação à sequência mostrada na SEQ ID NO: 52. Várias designações podem ser utilizadas na presente invenção para indicar a mesma mutação. Por exemplo, uma mutação da fenilalanina na posição 42 por alanina pode ser indicada como 42A, A42, A42, F42A ou Phe42Ala.
[130] Por “molécula de IL-2 humana”, conforme utilizado no presente, entende-se uma molécula de IL-2 compreendendo uma sequência de
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62/157 aminoácidos que é pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 91%, pelo menos cerca de 92%, pelo menos cerca de 93%, pelo menos cerca de 94%, pelo menos cerca de 95% ou pelo menos cerca de 96% idêntica à sequência de IL-2 humana de SEQ ID NO: 52. De modo específico, a identidade de sequência é de pelo menos cerca de 95%, mais particularmente de pelo menos cerca de 96%. Em exemplos de realização específicos, a molécula de IL-2 humana é uma molécula de IL-2 completa (de comprimento total).
[131] O termo “mutação de aminoácidos” tal como é utilizado na presente invenção pretende abranger substituições, deleções, inserções e modificações de aminoácidos. Qualquer combinação de substituição, deleção, inserção e modificação pode ser feita para se chegar à construção final, desde que a construção final possua as características desejadas, por exemplo, ligação reduzida ao CD25. As deleções de sequências de aminoácidos e as inserções incluem deleções e inserções de aminoácidos amino- e/ou carboxiterminal. Um exemplo de uma deleção terminal é a deleção do resíduo de alanina na posição 1 da IL-2 humana completa. As mutações de aminoácidos preferidas são as substituições de aminoácidos. Para o propósito de alterar, por exemplo, as características de ligação de um polipeptídeo IL-2, são particularmente preferidas as substituições de aminoácidos não conservadoras, ou seja, a substituição de um aminoácido por outro aminoácido que possui propriedades estruturais e/ou químicas diferentes. As substituições de aminoácidos preferidas incluem a substituição de um aminoácido hidrofóbico por um aminoácido hidrofílico. As substituições de aminoácidos incluem a substituição por aminoácidos de ocorrência não natural ou por aminoácidos de ocorrência natural derivados dos vinte aminoácidos padrão (por exemplo, 4hidroxiprolina, 3-metil-histidina, ornitina, homo-serina, 5-hidroxilisina). As mutações de aminoácidos podem ser geradas usando métodos genéticos ou químicos bem conhecidos no estado da técnica. Os métodos genéticos podem
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63/157 incluir a mutagênese sítio-dirigida, PCR, síntese de genes e técnicas similares. Está contemplado que os métodos de alteração do grupo da cadeia lateral de um aminoácido por outro que não seja por engenharia genética, tal como a modificação química, também pode ser útil.
[132] Conforme utilizando na presente invenção, uma forma “tipo selvagem” de IL-2 é uma forma de IL-2 que é a mesma que o polipeptídeo de IL-2 mutante exceto que a forma tipo selvagem possui um aminoácido tipo selvagem em cada posição de aminoácidos do polipeptídeo IL-2 mutante. Por exemplo, se a IL-2 mutante é a IL-2 completa (ou seja, IL-2 não fundida ou conjugada com qualquer outra molécula), a forma tipo selvagem desse mutante é a IL-2 nativa completa (de comprimento total). Se a IL-2 mutante for uma fusão entre a IL-2 e outro polipeptídeo codificado a jusante de IL-2 (por exemplo, uma cadeia de anticorpo), a forma tipo selvagem dessa IL-2 mutante é a IL-2 com uma sequência de aminoácido tipo selvagem, fundida com o mesmo polipeptídeo a jusante. Além disso, se a IL-2 mutante for uma forma truncada de IL-2 (a sequência mutada ou modificada dentro da porção não truncada de IL-2), então a forma tipo selvagem dessa IL-2 mutante é uma IL-2 igualmente truncada que possui uma sequência tipo selvagem. Com o objetivo de comparar a afinidade de ligação ao receptor de IL-2 ou a atividade biológica de várias formas de IL-2 mutantes com a forma correspondente de IL-2 do tipo selvagem, o termo tipo selvagem abrange formas de IL-2 compreendendo uma ou mais mutações de aminoácidos que não afetam a ligação ao receptor de IL2 em comparação com a IL-2 nativa de ocorrência natural, como, por exemplo, uma substituição de cisteína em uma posição correspondente ao resíduo 125 da IL-2 humana por alanina. Em alguns exemplos de realização, a IL-2 tipo selvagem para os propósitos da presente invenção compreende a substituição de aminoácido C125A (vide a SEQ ID NO: 54). Em certos exemplos de realização de acordo com a invenção, o polipeptídeo IL-2 de tipo selvagem com
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64/157 o qual ο polipeptídeo mutante IL-2 é comparado compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 52. Em outros exemplos de realização o polipeptídeo IL-2 tipo selvagem ao qual o polipeptídeo IL-2 mutante é comparado compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 54.
[133] O termo “CD25” ou “subunidade α do receptor a de IL2”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a qualquer CD25 nativo a partir de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, humanos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), salvo quando indicado de outra forma. O termo abrange formas não processadas de CD25 “de comprimento total”, bem como qualquer forma de CD25 que resulte da transformação/processamento na célula. O termo também abrange formas variantes de CD25 que ocorrem naturalmente, por exemplo, as variantes por splicing alternativo ou variantes alélicas. Em certos exemplos de realização o CD25 é CD25 humano. A sequência de aminoácidos do CD25 humano é encontrada, por exemplo, na entrada UniProt ns. P01589 (versão 185).
[134] O termo “receptor de IL-2 de alta afinidade” conforme utilizado no presente refere-se à forma heterotrimérica do receptor de IL-2, que consiste da subunidade γ do receptor (também conhecida como subunidade γ do receptor de citocina comum, γ0, ou CD132, vide a entrada UniProt ns. P14784 (versão 192)), a subunidade β do receptor (também conhecida como CD122 ou p70, vide a entrada UniProt ns. P31785 (versão 197)) e a subunidade α do receptor (também conhecida como CD25 ou p55, vide a entrada UniProt n°. P01589 (versão 185)). O termo “receptor de IL-2 de afinidade intermediária” por outro lado refere-se ao receptor de IL-2 que inclui apenas a subunidade γ e a subunidade β, sem a subunidade α (para uma revisão vide, por exemplo, Olejniczak e Kasprzak, Med Sei Monit 14, RA179189 (2008)).
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65/157 [135] “Afinidade” refere-se à força da soma total de interações não covalentes entre um sítio de ligação único de uma molécula (por exemplo, anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um ligante). A expressão “afinidade de ligação” a menos que indicado de outro modo, refere-se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação de 1:1 entre os membros do par de ligação (por exemplo, uma porção de ligação ao antígeno e um antígeno, ou um receptor e seu ligante). A afinidade de uma molécula X para o seu parceiro Y pode geralmente ser representada pela constante de dissociação (Kd), que é a relação entre a velocidade de dissociação e de associação (kOff e kon, respectivamente). Deste modo, as afinidades equivalentes podem compreender diferentes constantes de velocidade, desde que a razão entre as constantes de velocidade continue a ser a mesma. A afinidade pode ser mensurada por meio de métodos bem estabelecidos no estado da técnica, incluindo os métodos descritos na presente invenção. Um método particular para mensurar a afinidade é a ressonância plasmônica de superfície (SPR). A afinidade do polipeptideo IL-2 mutante ou tipo selvagem para várias formas do receptor de IL-2 pode ser determinada de acordo com o método estabelecido no documento WO 2012/107417 por ressonância plasmônica de superfície (SPR), usando instrumentação padrão, tal como um instrumento BIAcore (GE Healthcare) e subunidades do receptor como àquelas que podem ser obtidas por expressão recombinante (vide, por exemplo, Shanafelt et al., Nature Biotechnol. 18, 1197-1202 (2000)). Alternativamente, a afinidade de ligação de IL-2 mutantes para diferentes formas do receptor de IL2 pode ser avaliada usando linhagens de células conhecidas por expressarem uma ou a outra forma do receptor. Exemplos de realização específicos ilustrativos e exemplares para a medição da afinidade de ligação são descritos a seguir na presente invenção.
[136] Por “célula T reguladora” ou “célula Treg” entende-se um
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66/157 tipo especializado de células T CD4+ que pode suprimir as respostas de outras células T. As células Treg são caracterizadas pela expressão da subunidade α do receptor IL-2 (CD25) e do fator de transcrição “forkhead box P3’ (FOXP3) (Sakaguchi, Annu Rev Immunol 22, 531-62 (2004)) e desempenham um papel crítico na indução e manutenção da autotolerância periférica aos antígenos, incluindo aqueles expressos por tumores. As células Treg requerem de IL-2 para a função e desenvolvimento e indução de suas características supressoras.
[137] Conforme utilizado na presente invenção, o termo “células efetoras” refere-se a uma população de linfócitos que medeia os efeitos citotóxicos da IL-2. As células efetoras incluem as células T efetoras, tais como células T citotóxicas CD8+ , células NK, células assassinas ativadas por linfocinas (LAK) e macrófagos/monócitos.
[138] A “porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos” com relação a uma sequencia polipeptídica é definido no presente como o percentual de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência polipeptídica de referência, após o alinhamento das sequências e introdução de intervalos (gaps), se necessário, para atingir o percentual máximo de identidade de sequências, sem considerar nenhuma substituição conservadora como parte da identidade de sequências. O alinhamento para fins de determinação da porcentagem de identidade de sequências de aminoácidos pode ser obtido de diversas formas que estão dentro do conhecimento do estado da técnica, por exemplo, pelo uso de softwares de computador publicamente disponíveis, tais como os programas BLAST, BLAST-2, Clustal W, Megalign (DNASTAR) ou o pacote de programas FASTA. Os técnicos hábeis no assunto podem determinar parâmetros apropriados para o alinhamento de sequências, incluindo qualquer algoritmo necessário para atingir o alinhamento máximo ao longo do comprimento total das sequências
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67/157 que estão sendo comparadas. Entretanto, para os fins aqui mencionados, os valores de % de identidade de sequência de aminoácidos são gerados usando o programa ggsearch do pacote FASTA versão 36.3.8c ou posterior com a matriz de comparação BLOSUM50. O pacote do programa FASTA é de autoria de W.R. Pearson e D.J. Lipman (1988), “Improved Tools for Biological Sequence Analysis, PNAS 85:2444-2448; W. R. Pearson (1996) “Effective protein sequence comparison Meth. Enzymol. 266:227- 258; e Pearson et. al. (1997) Genomics 46:24-36, e está disponível publicamente em http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml. Alternativamente, um servidor público acessível em http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi pode ser usado para comparar sequências usando o programa ggsearch (global protein.protein) e as opções padrão (BLOSUM50; open: -10; ext: -2; Ktup = 2) para garantir que um alinhamento global, e não local, seja realizado. A porcentagem de identidade de aminoácidos é fornecida no cabeçalho do alinhamento de saída.
[139] Conforme utilizado no presente o termo “polipeptídeo” refere-se a uma molécula constituída por monômeros (aminoácidos) linearmente ligados por ligações de amida (também conhecidas como ligações peptídicas). O termo “polipeptídeo” refere-se a qualquer cadeia de dois ou mais aminoácidos e não se refere a um comprimento específico do produto. Desse modo, peptídeos, dipeptídeos, tripeptídeos, oligopeptídeos, “proteína”, “cadeia de aminoácidos”, ou qualquer outro termo utilizado para se referir a uma cadeia de dois ou mais aminoácidos, estão incluídas na definição de “polipeptídeo”, e o termo “polipeptídeo” pode ser usada em vez de, ou de forma intercambiável com, qualquer um destes termos. 0 termo “polipeptídeo” também tem a intenção de se referir aos produtos de modificações pós-expressão do polipeptídeo, incluindo, sem se limitar, a glicosilação, acetilação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos protetores/bloqueadores conhecidos,
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68/157 divagem proteolítica, ou pela modificação com aminoácidos de ocorrência não natural. Um polipeptídeo pode ser derivado de uma fonte biológica natural ou produzido por tecnologia recombinante, mas não é necessariamente traduzido a partir de uma dada sequência de ácido nucleico. Ele pode ser gerado por qualquer modo, incluindo a síntese química. Os polipeptídeos podem ter uma estrutura tridimensional definida, embora eles necessitem necessariamente ter tal estrutura. Os polipeptídeos com a estrutura tridimensional definida são referidos como enovelados, e os polipeptídeos que não possuem uma estrutura tridimensional definida, mas que ao invés disso podem adotar um elevado número de diferentes conformações, são referidos como não enovelados.
[140] O termo “molécula de imunoglobulina” refere-se a uma proteína que tem a estrutura de um anticorpo que ocorre naturalmente. Por exemplo, imunoglobulinas da classe IgG nativas são glicoproteínas heterotetraméricas de cerca de 150.000 daltons, compostas por duas cadeias leves e duas cadeias pesadas que são ligadas por ligações de bissulfeto. A partir da extremidade N- para a C-terminal, cada cadeia pesada tem um domínio variável (VH), também denominado de domínio pesado variável ou região variável de cadeia pesada, seguido por três domínios constantes (CH1, CH2 e CH3), também denominados de região constante de cadeia pesada. Do mesmo modo, a partir da extremidade N- para a C-terminal, cada cadeia leve tem um domínio variável (VL), também denominado de domínio leve variável ou região variável de cadeia leve, seguido por um domínio constante leve (CL), também denominado de região constante de cadeia leve. A cadeia pesada de uma imunoglobulina pode ser atribuída a um dentre cinco tipos, denominados de a (IgA), δ (IgD), ε (IgE), γ (IgG), ou μ (IgM), alguns dos quais podem ser ainda divididos em subtipos, por exemplo, γι (IgGi), γ2 (lgG2), Y3 (IgGa), γ4 (lgG4), ai (IgAi) e 02 (lgA2). A cadeia leve de uma imunoglobulina pode ser atribuída a um dentre dois tipos claramente distintos, denominados kappa (κ) e
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69/157 lambda (λ), com base nas sequências de aminoácidos de seus domínios constantes. Uma imunoglobulina consiste essencialmente de duas moléculas Fab e um domínio Fc, ligados pela região de dobradiça da imunoglobulina.
[141] Um “agonista de CD40” conforme utilizado na presente invenção inclui qualquer fração agonística da interação CD40/CD40L. Normalmente, estas porções serão anticorpos CD40 agonísticos ou polipeptídeos CD40L agonísticos. Um “agonista” combina-se com um receptor em uma célula e inicia uma reação ou atividade semelhante ou igual àquela iniciada por um ligante natural do receptor. Um “agonista de CD40” pode induzir uma ou todas, mas não se limitando, as seguintes respostas: proliferação e/ou diferenciação de células B; regulação positiva da adesão intercelular através de moléculas como a ICAM-1, E-seletina, VCAM e similares; secreção de citocinas pró-inflamatórias tais como IL-1, IL-6, IL-8, IL12, TNF e similares; transdução de sinal através do receptor CD40 por vias como TRAF (por exemplo, TRAF2 e/ou TRAF3), MAP-quinases como NIK (quinase indutora de NF-kB), quinases l-kappa B (IKK/.beta.), fator de transcrição NF-kB, Ras e a via MEK/ERK, via PI3K AKT, via P38 MAPK e similares; transdução de um sinal antiapoptótico por moléculas como XIAP, mcl-1, bcl-x e similares; geração de células B e/ou T de memória; produção de anticorpos de células B; troca de isotipo de célula B, regulação positiva da expressão da superfície celular do MHC Classe II e CD80/86 e similares. Por atividade agonista, entende-se uma atividade agonista de pelo menos 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou 100% maior que a atividade agonista induzida por um controle negativo, medido em um ensaio de resposta de células B. Em outro exemplo de realização, um agonista de CD40 tem uma atividade agonista que é pelo menos duas vezes maior ou pelo menos três vezes maior que a atividade agonista induzida por um controle negativo, conforme medido em um ensaio de resposta de células B. Desse
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70/157 modo, por exemplo, quando a resposta de células B de interesse é a proliferação de células B, a atividade agonista seria a indução de um nível de proliferação de células B que é pelo menos 2 vezes maior ou pelo menos 3 vezes maior do que o nível de proliferação de células B induzida por um controle negativo.
II. Imunoconjugados de IL-2 [142] Exemplos de imunoconjugados de IL-2 úteis para os métodos, usos, composições e kits da invenção, e métodos para a fabricação dos mesmos, estão descritos nas publicações PCT WO 2012/107417 e WO 2012/146628, cada uma integralmente incorporada ao presente por referência.
[143] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o imunoconjugado de IL-2 compreende um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno tumoral e a um polipeptídeo de IL-2.
Polipeptídeos de IL-2 Compreendidos Em Imunoconjugados [144] Os imunoconjugados úteis na presente invenção compreendem um polipeptídeo de IL-2. Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo de IL-2 é um polipeptídeo de IL-2 humana. Em alguns exemplos de realização, o polipeptídeo de IL-2 é um polipeptídeo de IL-2 humana em que a cisteína na posição 125 é substituída por um aminoácido neutro, tal como a serina (C125S), alanina (C125A), treonina (C125T) ou valina (C125V).
[145] Os imunoconjugados particularmente úteis para a presente invenção compreendem um polipeptídeo mutante de IL-2 com propriedades vantajosas para imunoterapia. Em particular, as propriedades farmacológicas da IL-2 que contribuem para a toxicidade, mas não são essenciais para a eficácia da IL-2, são eliminadas no polipeptídeo mutante da IL-2. Tais polipeptídeos de IL-2 mutantes são descritos em detalhes no documento WO 2012/107417, que é integralmente incorporado ao presente por referência.
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Conforme discutido acima, formas diferentes do receptor de IL-2 consistem em subunidades diferentes e exibem diferentes afinidades para IL-2. O receptor de IL-2 de afinidade intermediária, consistindo nas subunidades β e γ do receptor, é expresso em células efetoras em repouso e é suficiente para sinalização da IL-2. O receptor de IL-2 de alta afinidade, compreendendo adicionalmente a subunidade α do receptor, é expresso principalmente em células T reguladoras (Treg), bem como em células efetoras ativadas, em que seu envolvimento com IL-2 pode promover a imunossupressão mediada por células Treg ou a morte celular induzida por ativação (AICD), respectivamente. Assim, sem pretender estar ligado a teoria, reduzir ou abolir a afinidade de IL-2 para subunidade α do receptor de IL-2 deve reduzir a regulação negativa da função das células efetoras induzida pela IL-2 pelas células T reguladoras e o desenvolvimento de tolerância aos tumores pelo processo da AICD. Por outro lado, manter a afinidade com o receptor de IL-2 de afinidade intermediária deve preservar a indução da proliferação e a ativação de células efetoras, como células NK e T, pela IL-2.
[146] O polipeptídeo de interleucina-2 (IL-2) mutante compreendido no imunoconjugado útil na presente invenção compreende pelo menos uma mutação de aminoácido que abole ou reduz a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2 e preserva a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante para o receptor de IL-2 de afinidade intermediária, cada um comparado com um polipeptídeo de IL-2 tipo selvagem.
[147] As formas mutantes de IL-2 humana (hlL-2) com afinidade reduzida para CD25 podem, por exemplo, ser geradas por substituição de aminoácidos nas posições de aminoácidos 35, 38, 42, 43, 45 ou 72 ou combinações das mesmas (numeração em relação à sequência da IL humana SEQ ID NO: 52). Exemplos de substituições de aminoácidos incluem K35E,
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K35A, R38A, R38E, R38N, R38F, R38S, R38L, R38G, R38Y, R38W, F42L,
F42A, F42G, F42S, F42T, F42Q, F42E, F42N, F42D, F42R, F42K, K43E,
Y45A, Y45G, Y45S, Y45T, Y45Q, Y45E, Y45N, Y45D, Y45R, Y45K, L72G,
L72A, L72S, L72T, L72Q, L72E, L72N, L72D, L72R e L72K. Mutantes de IL-2 particulares úteis nos imunoconjugados para a presente invenção compreendem uma mutação de aminoácido na posição de aminoácido correspondente ao resíduo 42, 45 ou 72 da IL-2 humana, ou uma combinação das mesmas. Em um exemplo de realização, a referida mutação de aminoácido é uma substituição de aminoácidos selecionada a partir do grupo de F42A, F42G, F42S, F42T, F42Q, F42E, F42N, F42D, F42R, F42K, Y45A, Y45G, Y45S, Y45T, Y45Q, Y45E, Y45N, Y45D, Y45R, Y45K, L72G, L72A, L72S, L72T, L72Q, L72E, L72N, L72D, L72R e L72K, mais especificamente uma substituição de aminoácidos selecionada a partir do grupo de F42A, Y45A e L72G. Esses mutantes exibem afinidade de ligação substancialmente semelhante para o receptor de IL-2 de afinidade intermediária e têm afinidade substancialmente reduzida para a subunidade α do receptor de IL-2 e para o receptor de IL-2 de alta afinidade em comparação com uma forma tipo selvagem do IL-2 mutante.
[148] Outras características de mutantes úteis podem incluir a capacidade de induzir a proliferação de células T e/ou NK que possuem o receptor de IL-2, a capacidade de induzir sinalização de IL-2 em células T e/ou NK que carregam o receptor de IL-2, a capacidade de gerar interferon (IFN)-y como citocina secundária pelas células NK, a capacidade reduzida de induzir a elaboração de citocinas secundárias - particularmente IL-10 e TNF-α - pelas células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), a capacidade reduzida de ativar a regulação de células T, a capacidade reduzida de induzir a apoptose em células T e um perfil de toxicidade reduzido in vivo.
[149] Os polipeptídeos de IL-2 mutantes específicos úteis nos
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73/157 imunoconjugados de IL-2 para a presente invenção compreendem três mutações de aminoácidos que abolem ou reduzem a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2, mas preservam a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante em relação ao receptor de IL-2 de afinidade intermediária. Em um exemplo de realização, as referidas três mutações de aminoácidos estão em posições correspondentes ao resíduo 42, 45 e 72 da IL-2 humana. Em um exemplo de realização, as referidas três mutações de aminoácidos são substituições de aminoácidos. Em um exemplo de realização, as referidas três mutações de aminoácidos são substituições de aminoácidos selecionadas a partir do grupo de F42A, F42G, F42S, F42T, F42Q, F42E, F42N, F42D, F42R, F42K, Y45A, Y45G, Y45S, Y45T, Y45Q, Y45E, Y45N , Y45D, Y45R, Y45K, L72G, L72A, L72S, L72T, L72Q, L72E, L72N, L72D, L72R e L72K. Em um exemplo de realização específico, as referidas três mutações de aminoácidos são as substituições de aminoácidos F42A, Y45A e L72G (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ ID NO: 52).
[150] Em alguns exemplos de realização, a referida mutação de aminoácidos reduz a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2 em pelo menos 5 vezes, especificamente em pelo menos 10 vezes, mais especificamente em pelo menos 25 vezes. Nos exemplos de realização em que há mais de uma mutação de aminoácido que reduz a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2, a combinação dessas mutações de aminoácidos pode reduzir a afinidade do polipeptídeo IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2 em pelo menos 30 vezes, pelo menos 50 vezes ou até pelo menos 100 vezes. Em um exemplo de realização, a referida mutação de aminoácido ou combinação de mutações de aminoácidos abole a afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2, de modo que nenhuma
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74/157 ligação é detectável por ressonância plasmônica de superfície.
[151] Uma ligação substancialmente semelhante ao receptor de afinidade intermediária, ou seja, a preservação da afinidade do polipeptídeo de IL-2 mutante em relação ao referido receptor, é alcançada quando o polipeptídeo IL-2 mutante exibe mais de cerca de 70% da afinidade de uma forma tipo selvagem da IL-2 mutante para o receptor de IL-2 de afinidade intermediária. Os mutantes de IL-2 úteis na invenção podem exibir mais do que cerca de 80%, ou mais do que cerca de 90% dessa afinidade.
[152] A redução da afinidade da IL-2 pela subunidade a do receptor de IL-2 em combinação com a eliminação da O-glicosilação de IL-2 resulta em uma proteína IL-2 com propriedades melhoradas. Por exemplo, a eliminação do sítio de O-glicosilação resulta em um produto mais homogêneo quando o polipeptídeo de IL-2 mutante é expresso em células de mamífero, tais como células CHO ou HEK.
[153] Assim, em determinados exemplos de realização, o polipeptídeo mutante de IL-2 compreende uma mutação de aminoácido adicional que elimina o local de O-glicosilação da IL-2 em uma posição correspondente ao resíduo 3 da IL-2 humana. Em um exemplo de realização a referida modificação de aminoácido adicional que elimina o sítio de Oglicosilação da IL-2 em uma posição correspondente ao resíduo 3 da IL-2 humana é uma substituição de aminoácido. Exemplos de substituições de aminoácidos incluem T3A, T3G, T3Q, T3E, T3N, T3D, T3R, T3K e T3P. Em um exemplo de realização específico, a referida mutação de aminoácido adicional é a substituição de aminoácido T3A.
[154] Em alguns exemplos de realização o polipeptídeo IL-2 mutante é essencialmente uma molécula de IL-2 completa (de comprimento total). Em alguns exemplos de realização o polipeptídeo IL-2 mutante é uma molécula de IL-2 humana. Em um exemplo de realização, o polipeptídeo de IL
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75/157 mutante compreende a sequência de SEQ ID NO: 52 com pelo menos uma mutação de aminoácido que abole ou reduz a finidade do polipeptideo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2, mas preserva a afinidade do polipeptideo IL-2 mutante para o receptor de IL-2 de afinidade intermediária, em comparação com um polipeptideo IL-2 compreendendo a SEQ ID NO: 52 sem a referida mutação. Em outro exemplo de realização, o polipeptideo de IL2 mutante compreende a sequência de SEQ ID NO: 54 com pelo menos uma mutação de aminoácido que abole ou reduz a finidade do polipeptideo de IL-2 mutante para a subunidade α do receptor de IL-2, mas preserva a afinidade do polipeptideo IL-2 mutante para o receptor de IL-2 de afinidade intermediária, em comparação com um polipeptideo IL-2 compreendendo a SEQ ID NO: 54 sem a referida mutação.
[155] Em um exemplo de realização específico, o polipeptideo de IL-2 mutante pode provocar uma ou mais respostas celulares selecionadas a partir do grupo que consiste em: proliferação em uma célula de linfócito T ativada, diferenciação em uma célula de linfócito T ativada, atividade de células T citotóxicas (CTL), proliferação em uma célula B ativada, diferenciação em uma célula B ativada, proliferação em uma célula natural killer (NK), diferenciação em uma célula NK, secreção de citocinas por uma célula T ativada ou célula NK e citotoxicidade antitumoral por células assassinas (killer) ativadas por linfocinas (LAK)/NK.
[156] Em um exemplo de realização, o polipeptideo IL-2 mutante tem uma capacidade reduzida de induzir a sinalização de IL-2 em células T reguladoras, em comparação com um polipeptideo IL-2 tipo selvagem. Em um exemplo de realização, o polipeptideo mutante de IL-2 induz menos morte celular induzida por ativação (AICD) em células T, em comparação com um polipeptideo IL-2 tipo selvagem. Em um exemplo de realização, o polipeptideo de IL-2 mutante tem um perfil de toxicidade in vivo reduzido, em comparação
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76/157 com um polipeptídeo IL-2 tipo selvagem. Em um exemplo de realização, o polipeptídeo de IL-2 mutante tem uma meia-vida sérica prolongada, em comparação com um polipeptídeo IL-2 tipo selvagem.
[157] Um polipeptídeo IL-2 mutante particular útil nos imunoconjugados IL-2 para a presente invenção compreende quatro substituições de aminoácidos em posições correspondentes aos resíduos 3, 42, 45 e 72 da IL-2 humana. As substituições específicas de aminoácidos são T3A, F42A, Y45A e L72G. Conforme demonstrado no documento WO 2012/107417, o referido polipeptídeo de IL-2 mutante quádruplo não exibe ligação detectável para CD25, capacidade reduzida de induzir apoptose em células T, capacidade reduzida de induzir sinalização de IL-2 em células Treg e um perfil de toxicidade in vivo reduzido. Entretanto, ele retém a capacidade de ativar a sinalização de IL-2 em células efetoras, induzir a proliferação de células efetoras e gerar IFN-γ como citocina secundária pelas células NK.
[158] Além disso, o referido polipeptídeo de IL-2 mutante tem propriedades vantajosas adicionais, tais como a hidrofobicidade de superfície reduzida, boa estabilidade, e bom rendimento de expressão, conforme descrito no documento WO 2012/107417. De modo inesperado, o referido polipeptídeo IL-2 mutante também fornece uma meia-vida sérica prolongada, em comparação com a IL-2 tipo selvagem.
[159] As IL-2 mutantes úteis na invenção, além de terem mutações na região da IL-2 que forma a interface IL-2 - CD25 ou no sítio de glicosilação, podem ter também uma ou mais mutações na sequência de aminoácidos fora dessas regiões. Tais mutações adicionais na IL-2 humana podem proporcionar vantagens adicionais, como o aumento da expressão ou estabilidade. Por exemplo, a cisteína na posição 125 pode ser substituída por um outro aminoácido neutro, tal como serina, alanina, treonina ou valina, obtendo-se IL-2 C125S, IL-2 C125A, IL-2 C125T ou IL-2 C125V,
Petição 870190102359, de 11/10/2019, pág. 203/299 /157 respectivamente, conforme descrito na patente US 4.518.584. Conforme descrito nessa patente, pode-se também excluir o resíduo de alanina Nterminal da IL-2 obtendo-se tais mutantes como des-A1 C125S ou des-A1 C125A. Alternativamente ou em conjunto, a IL-2 mutante pode incluir uma mutação em que a metionina que normalmente ocorre na posição 104 da IL-2 humana tipo-selvagem é substituída por um aminoácido neutro, tal como alanina (vide a Patente US 5.206.344). Os mutantes resultantes, por exemplo, des-A1 M104A IL-2, des-A1 M104A C125S IL-2, M104A IL-2, M104A C125A IL2, des-A1 M104A C125A IL-2, ou M104A C125S IL-2 (estes e outros mutantes podem ser encontrados na Patente US 5.116.943 e em Weiger et al., Eur J Biochem 180, 295-300 (1989)) podem ser utilizados em conjunto com as mutações específicas da IL-2 descritas acima.
[160] Assim, em determinados exemplos de realização, o polipeptídeo da IL-2 mutante compreende uma mutação adicional de aminoácido em uma posição correspondente ao resíduo 125 da IL-2 humana. Em um exemplo de realização, a referida mutação adicional de aminoácidos é a substituição de aminoácidos C125A.
[161] O técnico hábil no assunto será capaz de determinar quais mutações adicionais podem fornecer vantagens adicionais para a finalidade da invenção. Por exemplo, ele compreenderá que mutações de aminoácidos na sequência de IL-2 que reduzem ou abolem a afinidade da IL-2 para o receptor de IL-2 de afinidade intermediária, como D20T, N88R ou Q126D (consulte, por exemplo, US 2007/0036752), podem não ser adequadas para a inclusão no polipeptídeo IL-2 mutante.
[162] Em um exemplo de realização, o polipeptídeo de IL-2 mutante compreende não mais que 12, não mais que 11, não mais que 10, não mais que 9, não mais que 8, não mais que 7, não mais que 6, ou mais que 5 mutações de aminoácidos em comparação com a sequência de IL-2 tipo
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78/157 selvagem correspondente, por exemplo, a sequência de IL-2 humana de SEQ ID NO: 52. Em um exemplo de realização específico, o polipeptídeo de IL-2 mutante compreende não mais do que 5 mutações de aminoácidos em comparação com a sequência de IL-2 tipo selvagem correspondente, por exemplo, em comparação com a sequência de IL-2 humana de SEQ ID NO: 52.
[163] Em um exemplo de realização, o polipeptídeo de IL-2 mutante compreende a sequência de SEQ ID NO: 53. Em um exemplo de realização, o polipeptídeo de IL-2 mutante consiste na sequência de SEQ ID NO: 53.
Formatos De Imunoconjugados [164] Os imunoconjugados úteis na presente invenção compreendem uma molécula de IL e um anticorpo. Tais imunoconjugados aumentam significativamente a eficácia da terapia com IL-2 direcionando diretamente a IL-2 para, por exemplo, um microambiente tumoral. Um anticorpo compreendido no imunoconjugado pode ser uma imunoglobulina ou anticorpo inteiro, ou uma porção ou variante do mesmo que tenha uma função biológica, tal como afinidade de ligação específica ao antígeno.
[165] Os benefícios da terapia com imunoconjugados são evidentes. Por exemplo, um anticorpo compreendido em um imunoconjugado reconhece um epítopo específico do tumor e resulta no direcionamento da molécula de imunoconjugado para o local do tumor. Portanto, altas concentrações de IL-2 podem ser entregues no microambiente do tumor, resultando na ativação e proliferação de uma variedade de células efetoras imunológicas mencionadas na presente invenção, usando uma dose muito mais baixa do imunoconjugado em relação a dose necessária de IL-2 não conjugada. Além disso, como a aplicação de IL-2 na forma de imunoconjugados permite doses mais baixas da própria citocina, o potencial de efeitos colaterais indesejáveis da IL-2 é restrito e o direcionamento da IL-2 para
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79/157 um local específico no corpo por meio de um o imunoconjugado também pode resultar em uma redução da exposição sistêmica e, portanto, resultando menos efeitos colaterais do que o obtido pela administração de IL-2 não conjugada. Além disso, o aumento da meia-vida circulante de um imunoconjugado em comparação com a IL-2 não conjugada contribui com a eficácia do imunoconjugado. Entretanto, essa característica de imunoconjugado da IL-2 pode agravar novamente os possíveis efeitos colaterais da molécula de IL-2: Devido à meia-vida significativamente maior na circulação do imunoconjugado de IL-2 na corrente sanguínea em relação à IL-2 não conjugada, a probabilidade da IL-2 ou outras porções da molécula da proteína de fusão de ativar componentes geralmente presentes na vasculatura são aumentadas. A mesma preocupação se aplica a outras proteínas de fusão que contêm IL-2 fundida com outra porção, como Fc ou albumina, resultando em uma meia-vida prolongada de IL-2 na circulação. Portanto, um imunoconjugado compreendendo um polipeptídeo mutante de IL-2, como descrito na presente invenção e no documento WO 2012/107417, com toxicidade reduzida em comparação com as formas de IL-2 tipo selvagem, é particularmente vantajoso.
[166] Assim, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado de IL-2 compreendendo um polipeptídeo de IL-2 mutante conforme descrito anteriormente, e um anticorpo que se liga a um antígeno alvo. Em um exemplo de realização, o polipeptídeo IL-2 (mutante) e o anticorpo formam uma proteína de fusão, ou seja, o polipeptídeo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica com o anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende um domínio Fc composto por uma primeira e uma segunda subunidade. Em um exemplo de realização específico, o polipeptídeo IL-2 (mutante) é fundido no aminoácido amino-terminal ao aminoácido carboxi-terminal de uma das subunidades do domínio Fc, opcionalmente através de um peptídeo ligante. Em alguns exemplos de
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80/157 realização, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total (completo). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é uma molécula de imunoglobulina, particularmente uma molécula de imunoglobulina da classe IgG, mais particularmente uma molécula de imunoglobulina da subclasse de IgGi. Em um destes exemplos de realização, o polipeptídeo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica amino-terminal com uma das cadeias pesadas de imunoglobulina. Em certos exemplos de realização, o anticorpo é um fragmento de anticorpo. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é uma molécula Fab ou uma molécula scFv. Em um exemplo de realização, o anticorpo é uma molécula Fab. Em outro exemplo de realização, o anticorpo é uma molécula scFV. O imunoconjugado também pode compreender mais do que um anticorpo. Quando mais do que um anticorpo está compreendido no imunoconjugado, por exemplo, um primeiro e um segundo anticorpo, cada anticorpo pode ser independentemente selecionado de várias formas de anticorpos e fragmentos de anticorpo. Por exemplo, o primeiro anticorpo pode ser uma molécula Fab e o segundo anticorpo pode ser uma molécula scFv. Em um exemplo de realização específico, cada um dos referidos primeiro e segundo anticorpos é uma molécula scFv ou cada um dos referidos primeiro e segundo anticorpos é uma molécula Fab. Em um exemplo de realização específico, cada um dos referidos primeiro e segundo anticorpos é uma molécula Fab. Em um exemplo de realização, cada um dos referidos primeiro e segundo anticorpos se liga ao mesmo antígeno alvo.
[167] Formatos de imunoconjugados exemplares estão descritos na publicação PCT WO 2011/020783, que é integralmente incorporada ao presente por referência. Estes imunoconjugados compreendem pelo menos dois anticorpos. Assim, em um exemplo de realização, o imunoconjugado útil para a presente invenção compreende um polipeptídeo IL-2 (mutante) conforme descrito na presente invenção, e pelo menos um primeiro e um
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81/157 segundo anticorpo. Em um exemplo de realização específico, o referido primeiro e segundo anticorpo são selecionados independentemente do grupo que consiste em uma molécula de Fv, particularmente uma molécula scFv e uma molécula Fab. Em um exemplo de realização específico, o referido polipeptideo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica amino-terminal ou carboxi-terminal com o referido primeiro anticorpo e o referido segundo anticorpo compartilha uma ligação peptídica amino-terminal ou carboxi-terminal com i) o polipeptideo IL-2 (mutante) ou ii) o primeiro anticorpo. Em um exemplo de realização específico, o imunoconjugado consiste essencialmente em um polipeptideo IL-2 (mutante) e primeiro e segundo anticorpos, particularmente moléculas Fab, unidos por uma ou mais sequências ligantes. Tais formatos têm a vantagem de se ligarem com alta afinidade ao antígeno alvo, mas fornecem apenas ligação monomérica ao receptor de IL-2, evitando assim direcionar o imunoconjugado para células imunes portadoras do receptor de IL-2 em outros locais que não o local alvo. Em um exemplo de realização específico, um polipeptideo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica do carboxiterminal com um primeiro anticorpo, particularmente uma primeira molécula Fab, e compartilha ainda uma ligação peptídica amino-terminal com um segundo anticorpo, particularmente uma segunda molécula Fab. Em outro exemplo de realização, um primeiro anticorpo, particularmente uma primeira molécula Fab, compartilha uma ligação peptídica carboxi-terminal com um polipeptideo IL-2 (mutante) e compartilha ainda uma ligação peptídica aminoterminal com um segundo anticorpo, particularmente uma segunda molécula Fab. Em outro exemplo de realização, um primeiro anticorpo, particularmente uma primeira molécula Fab, compartilha uma ligação peptídica amino-terminal com um primeiro polipeptideo IL-2 (mutante) e compartilha ainda um peptídeo carboxi-terminal com um segundo anticorpo, particularmente uma segunda molécula Fab. Em um exemplo de realização particular, um polipeptideo IL-2
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82/157 (mutante) compartilha uma ligação peptídica carboxi-terminal com uma primeira região variável de cadeia pesada e compartilha ainda uma ligação peptídica amino-terminal com uma segunda região variável de cadeia pesada. Em outro exemplo de realização, um polipeptídeo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica carboxi-terminal com uma primeira região variável de cadeia leve e compartilha ainda uma ligação peptídica amino-terminal com uma segunda região variável de cadeia leve. Em outro exemplo de realização, uma primeira região variável de cadeia pesada ou leve é unida por uma ligação peptídica carboxi-terminal a um polipeptídeo IL-2 (mutante) e é ainda unida por uma ligação peptídica amino-terminal a uma segunda região variável de cadeia pesada ou leve. Em outro exemplo de realização, uma primeira região variável de cadeia pesada ou leve é unida por uma ligação peptídica amino-terminal a um polipeptídeo IL-2 (mutante) e é ainda unida por uma ligação peptídica carboxi-terminal a uma segunda região variável de cadeia pesada ou leve. Em um exemplo de realização, um polipeptídeo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica do carboxi-terminal com uma primeira cadeia pesada ou leve de Fab e compartilha ainda uma ligação peptídica amino-terminal com uma segunda cadeia pesada ou leve de Fab. Em outro exemplo de realização, uma primeira cadeia pesada ou leve de Fab compartilha uma ligação peptídica do carboxi-terminal com um polipeptídeo IL-2 (mutante) e compartilha ainda uma ligação peptídica amino-terminal com uma segunda cadeia pesada ou leve de Fab. Em outros exemplos de realização, uma primeira cadeia pesada ou leve de Fab compartilha uma ligação peptídica amino-terminal com um polipeptídeo IL-2 (mutante) e ainda compartilha uma ligação peptídica carboxi-terminal com uma segunda cadeia pesada ou leve de Fab. Em um exemplo de realização, o imunoconjugado compreende um polipeptídeo IL-2 (mutante) compartilhando uma ligação peptídica amino-terminal com uma ou mais moléculas scFv e compartilhando ainda uma ligação peptídica carboxi-terminal com uma ou mais
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83/157 moléculas de scFv.
[168] Os formatos particularmente adequados para os imunoconjugados úteis na presente invenção compreendem, no entanto, uma molécula de imunoglobulina como anticorpo. Tais formatos de imunoconjugados estão descritos no documento WO 2012/146628, que é integralmente incorporado ao presente por referência.
[169] Consequentemente, em exemplos de realização específicos, o imunoconjugado compreende um polipeptídeo IL-2 (mutante), tal como descrito na presente invenção e uma molécula de imunoglobulina que se liga a um antígeno alvo, particularmente uma molécula de IgG, mais particularmente, uma molécula de IgGi. Em um exemplo de realização, o imunoconjugado compreende não mais do que um polipeptídeo IL-2 (mutante). Em um exemplo de realização, a molécula de imunoglobulina é humana. Em um exemplo de realização, a molécula de imunoglobulina compreende uma região constante humana, por exemplo, um domínio CH1, CH2, CH3 e/ou CL humano. Em um exemplo de realização, a imunoglobulina compreende um domínio Fc humano, particularmente um domínio Fc de IgGi humana. Em um destes exemplos de realização, o polipeptídeo IL-2 (mutante) compartilha uma ligação peptídica amino-terminal ou carboxi-terminal com a molécula de imunoglobulina. Em um exemplo de realização, o imunoconjugado é essencialmente constituído por um polipeptídeo de IL-2 (mutante) e uma molécula de imunoglobulina, particularmente uma molécula de IgG, mais particularmente, uma molécula de IgGi, unidos por uma ou mais sequências ligantes. Em um exemplo de realização específico, o polipeptídeo IL-2 (mutante) é fundido no aminoácido amino-terminal ao aminoácido carboxiterminal de uma das cadeias pesadas de imunoglobulina, opcionalmente através de um peptídeo ligante.
[170] O polipeptídeo IL-2 (mutante) pode ser fundido ao anticorpo
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84/157 diretamente ou através de um peptídeo ligante, compreendendo um ou mais aminoácidos, tipicamente cerca de 2-20 aminoácidos. Os peptídeos ligantes são conhecidos no estado da técnica e estão descritos na presente invenção. Os peptídeos ligantes adequados não imunogênicos incluem, por exemplo, os peptídeos ligantes (G4S)n, (SG4)n, (G4S)n ou G4(SG4)n. “n” é geralmente um número inteiro de 1 a 10, normalmente de 2 a 4. Em um exemplo de realização, o peptídeo ligante tem um comprimento de pelo menos 5 aminoácidos, em um exemplo de realização, um comprimento de 5 a 100, em um exemplo de realização adicional de 10 a 50 aminoácidos. Em um exemplo de realização específico, o peptídeo ligante tem um comprimento de 15 aminoácidos. Em um exemplo de realização, o referido peptídeo ligante é (GxS)n ou (GxS)nGm com G = glicina, S = serina; e (x = 3, n = 3, 4, 5 ou 6, e m = 0, 1,2 ou 3) ou (x = 4, n = 2, 3, 4 ou 5 e m = 0, 1,2 ou 3), em um exemplo de realização x = 4en = 2ou 3, e em um exemplo de realização adicional x = 4, n = 3. Em um exemplo de realização específico, o referido peptídeo ligante é (G4S)3 (SEQ ID NO: 67). Em um exemplo de realização, o peptídeo ligante possui (ou consiste de) a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67.
[171] Em um exemplo de realização específico, o imunoconjugado compreende uma molécula de IL-2 (mutante) e uma molécula de imunoglobulina, particularmente uma molécula de imunoglobulina da subclasse IgGi, que se liga a um antígeno alvo, em que a molécula de IL-2 (mutante) é fundida em seu aminoácido amino-terminal ao aminoácido carboxiterminal de uma das cadeias pesadas de imunoglobulina através do peptídeo ligante de SEQ ID NO: 67.
[172] Em um exemplo de realização específico, o imunoconjugado compreende uma molécula de IL-2 (mutante) e um anticorpo que se liga a um antígeno alvo, em que o anticorpo compreende um domínio Fc, particularmente um domínio Fc de IgGi humana, composto por uma
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85/157 primeira e uma segunda subunidade, e a molécula de IL-2 (mutante) é fundida em seu aminoácido amino-terminal ao aminoácido carboxi-terminal de uma das subunidades do domínio Fc através do peptídeo ligante de SEQ ID NO: 67.
Anticorpos Compreendidos em Imunoconjugados [173] O anticorpo compreendido no imunoconjugado útil na invenção se liga a um antígeno alvo, particularmente um antígeno alvo humano, e é capaz de direcionar o polipeptídeo IL-2 (mutante) para um sítio alvo onde o antígeno é expresso, particularmente um tumor.
[174] Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um anticorpo que se liga especificamente ao antígeno carcinoembrionário (CEA).
[175] Um nome alternativo para “CEA” inclui CEACAM5. O termo “CEA”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a qualquer CEA nativo a partir de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, seres humanos), primatas não humanos (por exemplo, macacos cinomolgos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. Os termos abrangem CEA “completo” ou “de comprimento total” e não processado, bem como qualquer forma de CEA que resulte da transformação na célula (por exemplo, proteína madura). O termo também abrange isoformas e formas variantes de CEA que ocorrem naturalmente, por exemplo, as variantes por splicing alternativo ou variantes alélicas. Em um exemplo de realização, o CEA é CEA humano. A sequência de aminoácidos do CEA humano é exibida na UniProt (www.uniprot.org) sob o ns de acesso P06731, ou no NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq.: NP-004451.2.
[176] Os anticorpos CEA adequados que podem ser utilizados no imunoconjugado da invenção estão descritos na publicação PCT WO 2012/117002, que é integralmente incorporada ao presente pela referência.
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86/157 [177] 0 imunoconjugado pode compreender dois ou mais anticorpos, que podem se ligar ao mesmo antígeno ou a antígenos diferentes. Entretanto, em exemplos de realização específicos, cada um desses anticorpos se liga ao CEA. Em um exemplo de realização, o anticorpo compreendido no imunoconjugado da invenção é monoespecífico. Em um exemplo de realização específico, o imunoconjugado compreende um anticorpo monoespecífico único, particularmente uma molécula de imunoglobulina monoespecífica.
[178] O anticorpo pode ser qualquer tipo de anticorpo ou fragmento do mesmo que retenha a ligação específica ao CEA, particularmente o CEA humano. Os fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a, moléculas Fv, molécula scFv, molécula Fab e moléculas F(ab')2. Em exemplos de realização específicos, no entanto, o anticorpo é um anticorpo completo. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende um domínio Fc, composto por uma primeira e uma segunda subunidade. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é uma imunoglobulina, particularmente uma imunoglobulina da classe IgG, mais particularmente uma imunoglobulina da subclasse IgGi.
[179] Em algumas realizações, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[180] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CEA compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a CDR de cadeia pesada (HCDR) 1 de SEQ ID NO: 38, HCDR2 de SEQ ID NO: 39 e HCDR3 de SEQ ID NO: 40; e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a CDR de cadeia leve (LCDR) 1 de SEQ ID NO: 41, LCDR2 de SEQ ID NO: 42 e LCDR3 de SEQ ID NO: 43. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve é uma região variável humanizada. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve compreende regiões de arcabouço (FR)
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87/157 humanas.
[181] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma HCDR 1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38, uma HCDR 2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39, uma HCDR 3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40, uma LCDR 1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41, uma LCDR 2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 42 e uma LCDR 3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43.
[182] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma HCDR 1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 38, uma HCDR 2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 39, e uma HCDR 3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 40 e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma LCDR 1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 41, uma LCDR 2 compreendendo o aminoácido sequência de SEQ ID NO: 42 e uma LCDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 43. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve é uma região variável humanizada. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve compreende regiões de arcabouço (FR) humanas.
[183] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo
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88/157 menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34; e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35.
[184] Em um exemplo de realização específico, o anticorpo compreende; (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35.
[185] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um anticorpo humanizado. Em um exemplo de realização, o anticorpo é uma molécula de imunoglobulina compreendendo uma região constante humana, particularmente uma molécula de imunoglobulina da classe IgG compreendendo um domínio CH1, CH2, CH3 e/ou CL humano. Sequências exemplificativas de domínios constantes humanos são fornecidas nas SEQ ID NOs 68 e 69 (domínios CL kappa e lambda humanos, respectivamente) e SEQ ID NO: 70 (domínios constantes de cadeia pesada CH1-CH2-CH3 de lgG1 humana). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 69, particularmente a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 68. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de
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SEQ ID NO: 70. De modo específico, a região constante de cadeia pesada pode compreender mutações de aminoácidos no domínio Fc conforme descrito na presente invenção.
[186] Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 compreende um anticorpo que se liga especificamente à proteína de ativação de fibroblastos (FAP).
[187] Um nome alternativo para a “FAP” inclui a Seprase. O termo “FAP”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a qualquer FAP nativa a partir de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, seres humanos), primatas não humanos (por exemplo, macacos cinomolgos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. Os termos abrangem FAP “completo” ou “de comprimento total” e não processado, bem como qualquer forma de FAP que resulte da transformação na célula (por exemplo, proteína madura). O termo também abrange isoformas e formas variantes de FAP que ocorrem naturalmente, por exemplo, as variantes por splicing alternativo ou variantes alélicas. Em um exemplo de realização, a FAP é FAP humana. A sequência de aminoácidos da FAP humana é exibida na UniProt (www.uniprot.org) sob o ns de acesso Q12884, ou no NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq.: NP_004451.
[188] Os anticorpos FAP adequados que podem ser utilizados no imunoconjugado da invenção estão descritos na publicação PCT WO 2012/020006, que é integralmente incorporada ao presente pela referência.
[189] O imunoconjugado pode compreender dois ou mais anticorpos, que podem se ligar ao mesmo antígeno ou a antígenos diferentes. Entretanto, em exemplos de realização específicos, cada um desses anticorpos se liga a FAP. Em um exemplo de realização, o anticorpo compreendido no imunoconjugado é monoespecífico. Em um exemplo de realização específico, o
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90/157 imunoconjugado compreende um anticorpo monoespecífico único, particularmente uma molécula de imunoglobulina monoespecífica.
[190] O anticorpo pode ser qualquer tipo de anticorpo ou fragmento do mesmo que retenha a ligação específica à FAP, particularmente a FAP humana. Os fragmentos de anticorpo incluem, mas não estão limitados a, moléculas Fv, molécula scFv, molécula Fab e moléculas F(ab')2. Em exemplos de realização específicos, no entanto, o anticorpo é um anticorpo completo. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende um domínio Fc, composto por uma primeira e uma segunda subunidade. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é uma imunoglobulina, particularmente uma imunoglobulina da classe IgG, mais particularmente uma imunoglobulina da subclasse IgGi.
[191] Em algumas realizações, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[192] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente à FAP compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a região determinante de complementaridade de cadeia pesada (HCDR) 1, HCDR 2 e HCDR 3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a região determinante de complementaridade da cadeia leve (LCDR) 1, LCDR 2 e LCDR 3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve é uma região variável humana. Em alguns exemplos
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91/157 de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve compreende regiões de arcabouço (FR) humanas.
[193] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente à FAP compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e uma HVRL1, HVR-L2 e HVR-L3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada (HCDR) 1, HCDR 2 e HCDR 3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve (LCDR) 1, LCDR 2 e LCDR 3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48.
[194] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47; e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48.
[195] Em um exemplo de realização específico, o anticorpo
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92/157 compreende; (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48.
[196] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um anticorpo humano. Em um exemplo de realização, o anticorpo é uma molécula de imunoglobulina compreendendo uma região constante humana, particularmente uma molécula de imunoglobulina da classe IgG compreendendo um domínio CH1, CH2, CH3 e/ou CL humano. Sequências exemplificativas de domínios constantes humanos são fornecidas nas SEQ ID NOs 68 e 69 (domínios CL kappa e lambda humanos, respectivamente) e SEQ ID NO: 70 (domínios constantes de cadeia pesada CH1-CH2-CH3 de lgG1 humana). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 69, particularmente a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 68. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região constante de cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 70. De modo específico, a região constante de cadeia pesada pode compreender mutações de aminoácidos no domínio Fc conforme descrito na presente invenção.
Domínio Fc [197] Em exemplos de realização específicos, o anticorpo compreendido nos imunoconjugados úteis na invenção compreende um domínio Fc, composto por uma primeira e uma segunda subunidade. O domínio Fc de um anticorpo consiste em um par de cadeias polipeptídicas compreendendo domínios de cadeia pesada de uma molécula de
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93/157 imunoglobulina. Por exemplo, o domínio de Fc de uma molécula de imunoglobulina G (IgG) é um dímero, e cada subunidade compreende domínios constantes de cadeia pesada de IgG - CH2 e CH3. As duas subunidades do domínio de Fc são capazes de realizar associação estável entre si. Em um exemplo de realização, o imunoconjugado útil na invenção compreende não mais que um domínio Fc.
[198] Em um exemplo de realização, o domínio Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado é um domínio Fc de IgG. Em um exemplo de realização particular, o domínio Fc é um domínio Fc de IgGi. Em outro exemplo de realização, o domínio Fc é um domínio Fc de lgG4. Em um exemplo de realização mais específico, o domínio Fc é um domínio Fc de lgG4 que compreende uma substituição de aminoácido na posição S228 (numeração do índice EU de Kabat), particularmente a substituição de aminoácido S228P. Esta substituição de aminoácidos reduz in vivo a troca braço Fab de anticorpos lgG4 (vide Stubenrauch et al., Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010)). Em um exemplo de realização particular adicional, o domínio Fc é um domínio Fc humano. Em um exemplo de realização ainda mais específico, o domínio Fc é um domínio Fc de IgGi humana. Uma sequência exemplar de uma região Fc de IgGi humana é fornecida na SEQ ID NO: 66.
Modificações do domínio Fc para promoção da heterodimerização [199] Os imunoconjugados úteis na invenção compreendem um polipeptídeo IL-2 (mutante), particularmente um único (não mais que um) polipeptídeo IL-2, fundido a uma ou a outra das duas subunidades do domínio Fc, portanto as duas subunidades do domínio Fc estão tipicamente compreendidas em duas cadeias polipeptídicas não idênticas. A coexpressão recombinante desses polipeptídeos e a subsequente dimerização conduzem a várias combinações possíveis dos dois polipeptídeos. Para melhorar o
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94/157 rendimento e a pureza de tais imunoconjugados na produção recombinante, será vantajoso introduzir no domínio Fc do anticorpo uma modificação que promova a associação dos polipeptídeos desejados.
[200] Consequentemente, em exemplos de realização específicos, o domínio Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado compreende uma modificação que promove a associação da primeira e da segunda subunidade do domínio Fc. O local de interação proteína-proteína mais amplo entre as duas subunidades de um domínio Fc da IgG humana está no domínio CH3 do domínio Fc. Assim, em um exemplo de realização a referida modificação é no domínio CH3 do domínio Fc.
[201] Existem diversas abordagens para modificações no domínio CH3 do domínio Fc com o intuito a impor a heterodimerização, que são bem descritas, por exemplo, nas publicações WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012058768, WO 2013157954, WO 2013096291. Tipicamente, em todas essas abordagens, o domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc e o domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc são ambos modificados de uma maneira complementar, de modo que cada domínio CH3 (ou a cadeia pesada compreendendo tal domínio) não mais se homodimeriza consigo, mas é forçado a se heterodimerizar com o outro domínio CH3 complementarmente modificado (de modo que o primeiro e o segundo domínio CH3 se heterodimerizam e não são formados homodímeros entre os dois primeiros ou os dois segundos domínios CH3).
[202] Em um exemplo de realização específico, a referida modificação que promove a associação da primeira e segunda subunidade do domínio Fc é uma modificação do tipo “Knob-into-hole, compreendendo uma modificação “Knob (protuberância) em uma das duas subunidades do domínio
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Fc e uma modificação “hole (cavidade) na outra subunidade do domínio Fc.
[203] A tecnologia knob-into-hole está descrita, por exemplo, nas Patentes US 5.731.168; US 7.695.936; e em Ridgway et al, Prot Eng. 9, 617621 (1996) e Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001). De modo geral, o método envolve a introdução de uma protuberância (“knob) na interface de um primeiro polipeptídeo e uma cavidade/orifício (“hole) correspondente na interface de um segundo polipeptídeo, de tal modo que a protuberância pode ser posicionada na cavidade a fim de promover a formação de heterodímero e impedir a formação de homodímero. As protuberâncias são construídas pela substituição de aminoácidos com cadeias laterais pequenas na interface do primeiro polipeptídeo por aminoácidos com cadeias laterais maiores (por exemplo, a tirosina ou triptofano). As “cavidades” compensatórias de tamanho idêntico ou similar ao das protuberâncias são criadas na interface do segundo polipeptídeo pela substituição de aminoácidos com cadeias laterais grandes por aminoácidos com cadeias laterais menores (por exemplo, alanina ou treonina).
[204] Consequentemente, em um exemplo de realização específico, no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado um resíduo aminoácido é substituído por um resíduo aminoácido que possui um volume de cadeia lateral maior, gerando, assim, uma protuberância dentro do domínio CH3 da primeira subunidade que pode ser posicionada dentro de uma cavidade no interior do domínio CH3 da segunda subunidade; e no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo aminoácido que possui um volume de cadeia lateral menor, gerando assim uma cavidade dentro do domínio CH3 da segunda subunidade dentro da qual a protuberância dentro do domínio CH3 da primeira subunidade pode ser posicionada.
[205] Preferencialmente o dito resíduo de aminoácido com uma
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96/157 cadeia lateral de volume maior é selecionado a partir do grupo que consiste de arginina (R), fenilalanina (F), tirosina (Y) e triptofano (W).
[206] Preferencialmente o dito resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral de volume menor é selecionada a partir do grupo que consiste de alanina (A), serina (S), treonina (T) e valina (V).
[207] A protuberância (knob) e a cavidade (hole) podem ser feitas através da alteração de ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos, por exemplo, por mutagênese sítio-específica, ou por síntese peptídica.
[208] Em um exemplo de realização específico, no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc (a subunidade “knob), o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de triptofano (T366W), e no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc (a subunidade “hole), o resíduo tirosina na posição 407 é substituído por um resíduo de valina (Y407V). Em um exemplo de realização, na segunda subunidade do domínio Fc, adicionalmente, o resíduo treonina na posição 366 é substituído por um resíduo serina (T366S) e o resíduo leucina na posição 368 é substituído por um resíduo de alanina (L368A) (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[209] Em um exemplo de realização adicional, na primeira subunidade do domínio Fc, adicionalmente, o resíduo de serina na posição 354 é substituído por um resíduo de cisteína (S354C) ou o resíduo ácido glutâmico na posição 356 é substituído por um resíduo cisteína (E356C) (particularmente o resíduo serina na posição 356 é substituído pelo resíduo de cisteína), e na segunda subunidade do domínio Fc, adicionalmente, o resíduo de tirosina na posição 349 é substituído por um resíduo de cisteína (Y349C) (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). A introdução destes dois resíduos de cisteína resulta na formação de uma ponte de bissulfeto entre as duas subunidades do domínio Fc, estabilizando adicionalmente o dímero (Carter, J Immunol Methods 248, 7-15 (2001)).
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97/157 [210] Em um exemplo de realização específico, a primeira subunidade do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos S354C e T366W, e a segunda subunidade do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos Y349C, T366S, L368A e Y407V (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[211] Em alguns exemplos de realização, a segunda subunidade do domínio Fc compreende adicionalmente as substituições de aminoácidos H435R e Y436F (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[212] Em um exemplo de realização específico, o polipeptideo mutante de IL-2 é fundido (opcionalmente através de um peptídeo ligante) à primeira subunidade do domínio Fc (compreendendo a modificação “knob). Sem desejar estar limitado pela teoria, a fusão do polipeptideo IL-2 mutante à subunidade contendo modificações “knob do domínio Fc irá (adicionalmente) minimizar a geração imunoconjugados compreendendo dois polipeptídeos IL-2 mutantes (choque estérico de dois polipeptídeos contendo modificações “knob”).
[213] São contempladas outras técnicas como alternativas para a modificação de CH3 a fim de realizar a heterodimerização que estão descritas, por exemplo, nas publicações WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012/058768, WO 2013/157954, WO 2013/096291.
[214] Em um exemplo de realização a abordagem para a heterodimerização descrita na EP 1870459 459A1 é alternativamente utilizada. Esta abordagem se baseia na introdução de aminoácidos carregados com cargas opostas em posições específicas de aminoácidos na interface do domínio CH3/CH3 entre as duas subunidades do domínio Fc. Um exemplo de realização específico para o anticorpo compreendido no imunoconjugado são
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98/157 as mutações de aminoácidos R409D; K370E em um dos dois domínios CH3 (do domínio Fc) e as mutações de aminoácidos D399K; E357K no outro domínio CH3 do domínio Fc (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[215] Em outro exemplo de realização, o anticorpo compreendido no imunoconjugado compreende a mutação de aminoácidos T366W no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc e as mutações de aminoácidos T366S, L368A, Y407V no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc e adicionalmente mutações de aminoácidos R409D; K370E no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc e mutações de aminoácidos D399K; E357K no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
[216] Em outro exemplo de realização, o anticorpo compreendido no imunoconjugado compreende as mutações de aminoácidos S354C, T366W no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc e as mutações de aminoácidos Y349C, T366S, L368A, Y407V no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc, ou o referido anticorpo compreende mutações de aminoácidos Y349C, T366W no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc e mutações de aminoácidos S354C, T366S, L368A, Y407V nos domínios CH3 da segunda subunidade do domínio Fc e adicionalmente mutações de aminoácidos R409D; K370E no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc e mutações de aminoácidos D399K; E357K no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc (todas as numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[217] Em um exemplo de realização, a abordagem de heterodimerização descrita na WO 2013/157953 é alternativamente utilizada. Em um exemplo de realização um primeiro domínio CH3 compreende a mutação de aminoácidos T366K e o segundo domínio CH3 compreende a mutação de aminoácidos L351D (numerações de acordo com o índice EU de
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Kabat). Em outro exemplo de realização o primeiro domínio CH3 compreende ainda a mutação de aminoácido L351K. Em um exemplo de realização adicional o segundo domínio CH3 compreende adicionalmente uma mutação de aminoácido selecionada a partir de Y349E, Y349D e L368E (preferencialmente L368E) (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[218] Em um exemplo de realização, a abordagem de heterodimerização descrita no WO 2012/058768 é alternativamente utilizada. Em um exemplo de realização um primeiro domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido L351Y, Y407A e um segundo domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido T366A, K409F. Em outro exemplo de realização o segundo domínio CH3 compreende adicionalmente uma mutação de aminoácidos na posição T411, D399, S400, F405, N390 ou K392, por exemplo, selecionada a partir de a) T411N, T411R, T411Q, T411K, T411D, T411E ou T411W, b) D399R, D399W, D399Y ou D399K, c) S400E, S400D, S400R, ou S400K, d) F405I, F405M, F405T, F405S, F405V ou F405W, e) N390R, N390K ou N390D, f) K392V, K392M, K392R, K392L, K392F ou K392E (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização adicional, um primeiro domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido L351Y, Y407A e um segundo domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido T366V, K409F. Em um exemplo de realização adicional, um primeiro domínio CH3 compreende a mutação de aminoácido Y407A e um segundo domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido T366A, K409F. Em um exemplo de realização adicional, o segundo domínio CH3 compreende adicionalmente as mutações de aminoácido K392E, T411E, D399R e S400R (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[219] Em um exemplo de realização, a abordagem de heterodimerização descrita na WO 2011/143545 é alternativamente utilizada, por exemplo, com a modificação de aminoácido em uma posição selecionada a
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100/157 partir das posições 368 e 409 (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[220] Em um exemplo de realização, a abordagem de heterodimerização descrita na WO 2011/090762, que também usa a tecnologia knobs-into-holes descrita acima é alternativamente utilizada. Em um exemplo de realização um primeiro domínio CH3 compreende a mutação de aminoácido T366W e o segundo domínio CH3 compreende a mutação de aminoácido Y407A. Em um exemplo de realização um primeiro domínio CH3 compreende a mutação de aminoácidos T366Y e o segundo domínio CH3 compreende a mutação de aminoácidos Y407T (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[221] Em um exemplo de realização, o anticorpo compreendido no imunoconjugado ou seu domínio Fc é da subclasse lgG2 e a abordagem de heterodimerização descrita na WO 2010/129304 é alternativamente utilizada.
[222] Em um exemplo de realização alternativo, uma associação que promove a modificação da primeira e da segunda subunidade do domínio Fc compreende uma modificação que medeia efeitos de direcionamento eletrostático, por exemplo, conforme descrito na publicação PCT WO 2009/089004. Em geral, este método envolve a substituição de um ou mais resíduos de aminoácidos na interface das duas subunidades do domínio Fc por resíduos de aminoácidos carregados de modo que a formação de homodímeros se torna eletrostaticamente desfavorável, mas a heterodimerização eletrostaticamente favorável. Em tal exemplo de realização um primeiro domínio CH3 compreende a substituição do aminoácido K392 ou N392 por um aminoácido de carga negativa (por exemplo, ácido glutâmico (E), ou ácido aspártico (D), de preferência K392D ou N392D) e um segundo domínio CH3 compreende uma substituição de aminoácido D399, E356, D356, ou E357 por um aminoácido de carga positiva (por exemplo, lisina (K) ou
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101/157 arginina (R), de preferência, D399K, E356K, D356K, ou E357K e mais preferencialmente D399K e E356K). Em outro exemplo de realização o primeiro domínio CH3 compreende ainda a substituição do aminoácido K409 ou R409 por um aminoácido negativamente carregado (por exemplo, ácido glutâmico (E), ou ácido aspártico (D), de preferência K409D ou R409D). Em outro exemplo de realização o primeiro domínio CH3 compreende adicionalmente ou alternativamente a substituição do aminoácido K439 e/ou K370 por um aminoácido de carga negativa (por exemplo, ácido glutâmico (E), ou ácido aspártico (D)) (todas as numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[223] Em um exemplo de realização adicional, a abordagem de heterodimerização descrita na WO 2007/147901 é alternativamente utilizada. Em um exemplo de realização um primeiro domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido K253E, D282K, e K322D e um segundo domínio CH3 compreende as mutações de aminoácido D239K, E240K, e K292D (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[224] Em outro exemplo de realização, a abordagem de heterodimerização descrita na WO 2007/110205 pode ser alternativamente utilizada.
[225] Em um exemplo de realização, a primeira subunidade do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos K392D e K409D, e a segunda subunidade do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos D356K e D399K (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
Modificações Do Domínio Fc Que Reduzem A Ligação Ao Receptor Fc E/Ou A Função Efetora [226] O domínio Fc confere ao imunoconjugado propriedades farmacocinéticas favoráveis, incluindo uma meia-vida sérica longa que contribui para a boa acumulação no tecido alvo e uma relação de distribuição
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102/157 tecido/sangue favorável. Ao mesmo tempo, ele pode, no entanto, levar ao direcionamento indesejável do imunoconjugado para células que expressam receptores Fc ao invés de direcionar para as células contendo antígenos preferenciais. Além disso, a coativação das vias de sinalização dos receptores Fc pode levar à liberação de citocinas que, em combinação com o polipeptídeo IL-2 e a meia-vida longa do imunoconjugado, resulta na ativação excessiva de receptores de citocinas e efeitos colaterais graves sobre a administração sistêmica. De acordo com isto, foi descrito que os imunoconjugados lgG-IL-2 convencionais estão associados a reações de infusão (vide, por exemplo, King etal., J Clin Oncol. 22, 4463-4473 (2004)).
[227] Consequentemente, em exemplos de realização específicos, o domínio Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado útil na invenção exibe afinidade de ligação reduzida para um receptor Fc e/ou uma função efetora reduzida, em comparação com um domínio Fc de IgGi nativo. Em tal exemplo de realização, o domínio Fc (ou o anticorpo compreendendo o referido domínio Fc) exibe menos do que 50%, de preferência menos do que 20%, mais preferivelmente menos do que 10% e mais preferivelmente ainda menos do que 5% da afinidade de ligação para um receptor Fc, quando comparado com um domínio Fc de IgGi nativa (ou um anticorpo compreendendo um domínio Fc de IgGi nativa), e/ou menos do que 50%, de preferência menos do que 20%, mais preferencialmente menos do que 10% e mais preferivelmente menos do que 5% da função efetora, quando comparado com um domínio Fc de IgGi nativa (ou um anticorpo compreendendo um domínio Fc de IgGi nativa). Em um exemplo de realização, o domínio Fc (ou o anticorpo compreendendo o referido domínio Fc) não se liga substancialmente a um receptor de Fc e/ou induz função efetora. Em um exemplo de realização específico, o receptor Fc é um receptor Fey. Em um exemplo de realização, o receptor Fc é um receptor Fc humano. Em um exemplo de realização, o
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103/157 receptor Fc é um receptor Fc de ativação. Em um exemplo de realização específico, o receptor Fc é um receptor Fey humano de ativação, mais especificamente FcyRllla, FcyRI ou FcyRlla humanos, mais especificamente FcyRllla humano. Em um exemplo de realização, a função efetora é uma ou mais selecionada dentre o grupo de CDC, ADCC, ADCP, e secreção de citocina. Em um exemplo de realização particular, a função efetora é a ADCC. Em um exemplo de realização, o domínio Fc exibe uma afinidade de ligação substancialmente semelhante ao receptor Fc neonatal (FcRn), em comparação com um domínio Fc da IgGi nativa. Uma ligação substancialmente semelhante ao FcRn é alcançada quando o domínio Fc (ou um anticorpo compreendendo o referido domínio Fc) exibe mais do que cerca de 70%, particularmente mais do que cerca de 80%, particularmente mais do que cerca de 90% da afinidade de ligação de um domínio Fc da IgGi nativa (ou um anticorpo compreendendo o referido domínio Fc de IgGi nativa) para o FcRn.
[228] Em determinados exemplos de realização o domínio Fc é projetado para ter uma afinidade de ligação reduzida para um receptor Fc e/ou função efetora reduzida, em comparação com um domínio de Fc não modificado. Em exemplos de realização específicos, o domínio de Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado compreende uma ou mais mutações de aminoácidos que reduz a afinidade de ligação do domínio Fc a um receptor de Fc e/ou a função efetora. Normalmente, a mesma uma ou mais mutações de aminoácidos está presente em cada uma das duas subunidades do domínio Fc. Em um exemplo de realização, a mutação de aminoácidos reduz a afinidade de ligação do domínio Fc a um receptor de Fc. Em um exemplo de realização a mutação de aminoácidos reduz a afinidade de ligação do domínio Fc a um receptor Fc em pelo menos 2 vezes, pelo menos 5 vezes, ou pelo menos 10 vezes. Em exemplos de realização há mais do que uma mutação de aminoácidos que reduz a afinidade de ligação do domínio de Fc ao
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104/157 receptor Fc, a combinação destas mutações de aminoácidos pode reduzir a afinidade de ligação do domínio Fc a um receptor Fc em pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, ou pelo menos 50 vezes. Em um exemplo de realização anticorpo compreendendo um domínio Fc modificado exibe menos do que 20%, particularmente menos do que 10%, e mais particularmente menos do que 5% da afinidade de ligação para um receptor Fc quando comparado a um anticorpo compreendendo um domínio Fc não modificado. Em um exemplo de realização específico, o receptor Fc é um receptor Ρογ. Em alguns exemplos de realização, o receptor Fc é um receptor Fc humano. Em alguns exemplos de realização, o receptor Fc é um receptor Fc de ativação. Em um exemplo de realização específico, o receptor Fc é um receptor Fcy humano de ativação, mais especificamente FcyRllla, FcyRI ou FcYRIIa humanos, mais especificamente FcYRIIIa humano. Preferencialmente, a ligação a cada um destes receptores é reduzida. Em alguns exemplos de realização a afinidade de ligação a um componente do complemento, especificamente a afinidade de ligação ao C1q, também está reduzida. Em um exemplo de realização a afinidade de ligação ao receptor Fc neonatal (FcRn) não está reduzida. Uma ligação substancialmente similar ao FcRn, ou seja, a preservação da afinidade de ligação do domínio Fc para o referido receptor, é obtida quando o domínio Fc (ou um anticorpo compreendendo o referido domínio Fc) exibe mais do que cerca de 70% da afinidade de ligação de uma forma não modificada do domínio Fc (ou anticorpo compreendendo a referida forma não modificada do domínio Fc) para o FcRn. O domínio Fc, ou anticorpo compreendido no imunoconjugado compreendendo o referido domínio de ligação ao Fc, pode apresentar mais do que cerca de 80%, ou mesmo mais do que cerca de 90% de tal afinidade. Em determinados exemplos de realização o domínio Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado é modificado para ter uma redução da função efetora em comparação com um domínio Fc não
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105/157 modificado. A função efetora reduzida pode incluir, mas não está limitada a, uma ou mais das seguintes: redução da citotoxicidade dependente de complemento (CDC), redução da citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), redução da fagocitose celular dependente de anticorpos (ADCP), redução da secreção de citocinas, redução da captação de antígeno mediada por complexo imune pelas células apresentadoras de antígeno, redução da ligação de células NK, redução da ligação aos macrófagos, redução da ligação aos monócitos, redução da ligação as células polimorfonucleares, redução do sinal de indução de apoptose direta, redução da reticulação aos anticorpos ligados ao alvo, redução da maturação de células dendríticas, ou redução do priming de células T. Em um exemplo de realização a função efetora reduzida é uma ou mais selecionada de entre o grupo de redução da CDC, redução da ADCC, redução da ADCP, e redução da secreção de citocinas. Em um exemplo de realização específico, a função efetora reduzida é a ADCC. Em um exemplo de realização, a ADCC reduzida é inferior a 20% da ADCC induzida por um domínio Fc não modificado (ou um anticorpo compreendendo um domínio Fc não modificado).
[229] Em um exemplo de realização a mutação de aminoácidos, que reduz a afinidade de ligação do domínio Fc a um receptor Fc e/ou a função efetora é uma substituição de aminoácidos. Em um exemplo de realização, o domínio Fc compreende uma substituição de um aminoácido em uma posição selecionada a partir do grupo de E233, L234, L235, N297, P331 e P329 (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização mais específico, o domínio Fc compreende uma substituição de um aminoácido em uma posição selecionada a partir do grupo de L234, L235 e P329 (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em alguns exemplos de realização o domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos L234A e L235A (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em tal
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106/157 exemplo de realização, o domínio Fc é um domínio Fc de IgGi, particularmente um domínio Fc de IgGi humana. Em um exemplo de realização, o domínio Fc compreende uma substituição de aminoácido na posição P329. Em um exemplo de realização mais específico a substituição de aminoácido é a P329A ou P329G, particularmente a P329G (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização, o domínio Fc compreende uma substituição de aminoácidos na posição P329 e adicionalmente uma substituição de aminoácidos na posição selecionada dentre E233, L234, L235, N297 e P331 (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização mais específico, a outra substituição de aminoácidos é a E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D ou P331S. Em exemplos de realização específicos, o domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos nas posições P329, L234 e L235 (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em exemplos de realização particulares, o domínio Fc compreende as mutações de aminoácidos L234A, L235A e P329G (“P329G LALA”, “PGLALA” ou “LALAPG”). Especificamente, em exemplos de realização específicos, cada subunidade do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos L234A, L235A e P329G (numeração pelo índice EU de Kabat), ou seja, em cada uma das primeira e segunda subunidades do domínio Fc, o resíduo de leucina na posição 234 é substituído por um resíduo de alanina (L234A), o resíduo de leucina na posição 235 é substituído por um resíduo de alanina (L235A) e o resíduo de prolina na posição 329 é substituído por um resíduo de glicina (P329G) (numeração de acordo com o índice EU de Kabat). Em tal exemplo de realização, o domínio Fc é um domínio Fc de IgGi, particularmente um domínio Fc de IgGi humana. O combinação “P329G LALA” de substituições de aminoácidos elimina quase completamente a ligação ao receptor Fey (bem como ao complemento) de um domínio Fc de IgGi humana, tal como descrito na publicação PCT WO 2012/130831, que é integralmente
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107/157 incorporada ao presente pela referência. A publicação WO 2012/130831 também descreve métodos de preparação de tais domínios Fc mutantes e métodos para a determinação de suas propriedades, tal como funções de ligação aos receptores Fc ou funções efetoras.
[230] Anticorpos lgG4 exibem afinidade de ligação aos receptores Fc reduzida e funções efetoras reduzidas, em comparação com os anticorpos IgGi. Assim, em alguns exemplos de realização o domínio Fc do anticorpo compreendido no imunoconjugado é um domínio Fc de lgG4, particularmente um domínio Fc de lgG4 humana. Em um exemplo de realização, o domínio Fc de lgG4 compreende as substituições de aminoácidos na posição S228, especialmente a substituição de aminoácido S228P (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Para reduzir ainda mais a sua afinidade de ligação a um receptor Fc e/ou a sua função efetora, em um exemplo de realização o domínio Fc da lgG4 compreende uma substituição de aminoácido na posição L235, especificamente a substituição de aminoácido L235E (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em outro exemplo de realização, o domínio Fc da lgG4 compreende uma substituição de aminoácido na posição P329, especificamente a substituição de aminoácido P329G (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Em um exemplo de realização particular, o domínio Fc da lgG4 compreende as substituições de aminoácidos nas posições S228, L235 e P329, especificamente as substituições de aminoácidos S228P, L235E e P329G (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Tal domínio Fc de lgG4 mutante e suas propriedades de ligação aos receptores Fcy encontram-se descritos na publicação de Patente PCT WO 2012/130831, integralmente incorporada ao presente pela referência.
[231] Em um exemplo de realização particular, o domínio Fc que exibe afinidade de ligação reduzida para um receptor Fc e/ou função efetora reduzida, em comparação com um domínio Fc de IgGi nativa, é um domínio Fc
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108/157 de IgGi humana compreendendo as substituições de aminoácidos L234A, L235A e opcionalmente P329G, ou um domínio Fc de lgG4 humana compreendendo as substituições de aminoácidos S228P, L235E e opcionalmente P329G (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[232] Em determinados exemplos de realização a N-glicosilação do domínio Fc foi eliminada. Em tal exemplo de realização, o domínio Fc compreende uma mutação de aminoácidos na posição N297, particularmente uma substituição de aminoácido que substitui a asparagina por alanina (N297A) ou por ácido aspártico (N297D) (numerações de acordo com o índice EU de Kabat).
[233] Além dos domínios Fc descritos acima e na Publicação PCT WO 2012/130831, os domínios Fc com ligação reduzida para o receptor Fc e/ou com função efetora reduzida incluem também aqueles com substituição de um ou mais resíduos do domínio Fc 238, 265, 269, 270, 297, 327 e 329 (Patente US 6.737.056) (numerações de acordo com o índice EU de Kabat). Tais Fc mutantes incluem Fc mutantes com substituições em duas ou mais das seguintes posições de aminoácidos: 265, 269, 270, 297 e 327, incluindo o Fc mutante então denominado de “DANA” com substituições dos resíduos 265 e 297 por alanina (Patente US 7.332.581).
[234] Os domínios Fc mutantes podem ser preparados por deleção, substituição, inserção ou modificação de aminoácidos usando métodos genéticos ou químicos bem conhecidos no estado da técnica. Os métodos genéticos podem incluir a mutagênese sítio-especifica da sequência de DNA codificante, PCR, síntese gênica, e similares. As alterações de nucleotídeos corretas podem ser verificadas, por exemplo, por sequenciamento.
[235] A ligação aos receptores Fc pode ser facilmente determinada, por exemplo, por ELISA, ou por ressonância plasmônica de
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109/157 superfície (SPR), utilizando instrumentos convencionais, tais como um instrumento BIAcore (GE Healthcare), e os receptores Fc podem ser obtidos por expressão recombinante. Alternativamente, a afinidade de ligação dos domínios Fc ou dos anticorpos compreendendo um domínio Fc aos receptores Fc pode ser avaliada utilizando linhagens de células que expressam receptores Fc específicos, tais como as células NK humanas que expressam o receptor Fcvllla.
[236] A função efetora de um domínio Fc ou de um anticorpo compreendendo um domínio Fc, pode ser mensurada por métodos conhecidos no estado da técnica. Exemplos de ensaios in vitro para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse encontram-se descritos na Patente US 5.500.362; Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sei USA 83, 7059-7063 (1986) e Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sei USA 82, 1499-1502 (1985); Patente US 5.821.337; Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987). Alternativamente, podem ser utilizados métodos de ensaios não radioativos (vide, por exemplo, o ensaio de citotoxicidade não radioativo ACTI® para citometria de fluxo (CellTechnology, Inc. Mountain View, CA), e o ensaio de citotoxicidade não radioativo CytoTox 96® (Promega, Madison, Wl)). As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e células assassinas naturais (Natural Killer ou NK). Alternativamente, ou adicionalmente, a atividade ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, em um modelo animal tal como divulgado em Clynes et al., Proc Natl Acad Sei USA 95, 652-656 (1998).
[237] Em alguns exemplos de realização, a ligação do domínio Fc a um componente do sistema complemento, especificamente a ligação ao C1q, é reduzida. Assim, em alguns exemplos de realização quando o domínio Fc é projetado para ter função efetora reduzida, a referida função efetora reduzida inclui redução da CDC. Ensaios de ligação de C1q podem ser
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110/157 realizados para determinar se o domínio Fc, ou anticorpo compreendendo o domínio Fc, é capaz de se ligar ao C1q e, portanto, ter atividade CDC. Vide, por exemplo, ELISA de ligação ao C1q e C3c nos documentos WO 2006/029879 e WO 2005/100402. Para avaliar a ativação do complemento, um ensaio CDC pode ser executado (vide, por exemplo, Gazzano-Santoro et al, J Immunol Methods 202, 163 (1996), Cragg et al, Blood 101,1045-1052 (2003); e Cragg e Glennie, Blood 103, 2738-2743 (2004)).
[238] A determinação da ligação de FcRn e a depuração/meia vida in vivo também pode ser realizada utilizando métodos conhecidos no estado da técnica (vide, por exemplo, Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006); WO 2013/120929).
IMUNOCONJUGADOS PARTICULARES [239] Em um aspecto, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado compreendendo um polipeptideo de IL-2 mutante e um anticorpo que se liga ao CEA, em que o polipeptideo de IL-2 é uma molécula de IL-2 humana mutante compreendendo as substituições de aminoácidos F42A, Y45A e L72G (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ ID NO: 52); e em que o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35.
[240] Em um aspecto, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado compreendendo um polipeptideo de IL-2 mutante e um anticorpo que se liga ao CEA, em que o polipeptideo de IL-2 é uma molécula de IL-2 humana mutante compreendendo as substituições de aminoácidos T3A, F42A, Y45A, L72G e C125A (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ
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ID NO: 52); e em que o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35.
[241] Em um aspecto, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado compreendendo um polipeptideo de IL-2 mutante e um anticorpo que se liga ao CEA, em que o polipeptideo de IL-2 mutante compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 53; e em que o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35.
[242] Em um exemplo de realização de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima, o anticorpo é uma imunoglobulina da classe IgG, compreendendo um domínio Fc de IgGi humana composto por uma primeira e uma segunda subunidade, em que na primeira subunidade do domínio Fc, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de triptofano (T366W), e na segunda subunidade do domínio Fc, o resíduo de tirosina na posição 407 é substituído por um resíduo de valina (Y407V) e, opcionalmente, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de serina (T366S) e o resíduo de leucina na posição 368 é substituído por um resíduo de alanina (L368A) (numerações de acordo com o índice EU de Kabat); e em que cada subunidade adicional do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos L234A, L235A e P329G (numeração pelo índice EU de Kabat).
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112/157 [243] Neste exemplo de realização, o polipeptídeo mutante de IL2 pode ser fundido em seu aminoácido amino-terminal ao aminoácido carboxiterminal da primeira subunidade do domínio Fc, através de um peptídeo ligante de SEQ ID NO: 67.
[244] Um aspecto, particularmente útil na invenção é um imunoconjugado compreendendo um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100 % idêntica à sequência de SEQ ID NO: 44, um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 45 e um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 46.
[245] Um imunoconjugado particularmente útil para a presente invenção é o cergutuzumabe amunaleucina (consulte Informações sobre medicamentos da OMS (Denominação Comum Internacional para substâncias farmacêuticas), DCI recomendada: lista 75, 2016, cópia de pré-publicação (integralmente incorporada ao presente por referência).
[246] Em um aspecto adicional, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado compreendendo um polipeptídeo de IL-2 mutante e um anticorpo que se liga à FAP, em que o polipeptídeo de IL-2 é uma molécula de IL-2 humana mutante compreendendo as substituições de aminoácidos F42A, Y45A e L72G (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ ID NO: 52); e em que o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de
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113/157 aminoácidos de SEQ ID NO: 48.
[247] Em um aspecto, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado compreendendo um polipeptídeo de IL-2 mutante e um anticorpo que se liga à FAP, em que o polipeptídeo de IL-2 é uma molécula de IL-2 humana mutante compreendendo as substituições de aminoácidos T3A, F42A, Y45A, L72G e C125A (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ ID NO: 52); e em que o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48.
[248] Em um aspecto, é particularmente útil na invenção um imunoconjugado compreendendo um polipeptídeo de IL-2 mutante e um anticorpo que se liga à FAP, em que o polipeptídeo de IL-2 mutante compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 53; e em que o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 47, e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 48.
[249] Em um exemplo de realização de acordo com qualquer um dos aspectos da invenção descritos acima, o anticorpo é uma imunoglobulina da classe IgG, compreendendo um domínio Fc de IgGi humana composto por uma primeira e uma segunda subunidade, em que na primeira subunidade do domínio Fc, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de triptofano (T366W), e na segunda subunidade do domínio Fc, o resíduo de tirosina na posição 407 é
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114/157 substituído por um resíduo de valina (Y407V) e, opcionalmente, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de serina (T366S) e o resíduo de leucina na posição 368 é substituído por um resíduo de alanina (L368A) (numerações de acordo com o índice EU de Kabat); e em que cada subunidade adicional do domínio Fc compreende as substituições de aminoácidos L234A, L235A e P329G (numeração pelo índice EU de Kabat).
[250] Neste exemplo de realização, o polipeptídeo mutante de IL2 pode ser fundido em seu aminoácido amino-terminal ao aminoácido carboxiterminal da primeira subunidade do domínio Fc, através de um peptídeo ligante de SEQ ID NO: 67.
[251] Um aspecto, particularmente útil na invenção é um imunoconjugado compreendendo um polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100 % idêntica à sequência de SEQ ID NO: 49, um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 50 e um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 51.
[252] Os imunoconjugados de IL-2 úteis na presente invenção, incluindo composições contendo esses imunoconjugados de IL-2, podem ser utilizados em combinação com um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1 para tratar o câncer.
III. Agonistas de CD40 [253] Exemplos de agonistas de CD40 úteis para os métodos, usos, composições e kits da invenção, e métodos para a fabricação dos
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115/157 mesmos, estão descritos na publicação PCT 2003/040170, integralmente incorporada ao presente por referência.
[254] Em alguns exemplos de realização dos métodos, usos, composições e kits descritos acima e na presente invenção, o agonista de CD40 é um anticorpo que se liga especificamente ao CD40. Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 é um anticorpo que se liga e ativa especificamente o CD40 humano.
[255] O CD40 também é referido no estado da técnica como “membro 5 da superfamília do fator de necrose tumoral”, TNFRSF5, antígeno 40 de superfície de células B, receptor CD40L, CDw40 e p50. O termo “CD40”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a qualquer CD40 nativo a partir de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos, tais como primatas (por exemplo, seres humanos), primatas não humanos (por exemplo, macacos cinomolgos) e roedores (por exemplo, camundongos e ratos), a menos que indicado de outra forma. O termo abrange CD40 “completo” ou “de comprimento total” e não processado, bem como qualquer forma de CEA que resulte da transformação na célula (por exemplo, proteína madura). O termo também abrange isoformas e formas variantes de CD40 que ocorrem naturalmente, por exemplo, as variantes por splicing alternativo ou variantes alélicas. Em um exemplo de realização, o CD40 é CD40 humano. A sequência de aminoácidos do CD40 humano é mostrada no número de acesso UniProtKB/Swiss-Prot: P25942.
[256] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVRH1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende
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116/157 uma região variável de cadeia pesada compreendendo a região determinante de complementaridade de cadeia pesada (HCDR) 1, HCDR 2 e HCDR 3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a região determinante de complementaridade da cadeia leve (LCDR) 1, LCDR 2 e LCDR 3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve é uma região variável humana. Em alguns exemplos de realização, a região variável de cadeia pesada e/ou leve compreende regiões de arcabouço (FR) humanas.
[257] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada (HCDR) 1, HCDR 2 e HCDR 3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve (LCDR) 1, LCDR 2 e LCDR 3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58.
[258] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende (a) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de
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95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 57; e (b) uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 58.
[259] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 57, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 58.
[260] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CD40 é um anticorpo completo (de comprimento total). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo é um anticorpo da classe IgG, particularmente um anticorpo da subclasse lgG2, mais particularmente um anticorpo da subclasse lgG2 humana. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CD40 é um anticorpo humano completo da subclasse lgG2. Em um exemplo de realização, o anticorpo é um anticorpo totalmente humano da subclasse lgG2 que se liga ao CD40 humano com uma Kd de 4 x 10’10 M ou menos.
[261] Em um exemplo de realização, o anticorpo que se liga especificamente ao CD40 compreende um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 59, e um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo uma sequência que é pelo menos 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de SEQ ID NO: 60. Em um exemplo de realização, o anticorpo compreende um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 59, e/ou um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 60.
[262] Em alguns exemplos de realização, o referido agonista de CD40 é um dos anticorpos anti-CD40, conforme divulgado especificamente no
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118/157 documento W02003/040170. Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 é selecionado a partir do grupo de anticorpos designado 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15. 1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.29.1 e 24.2.1 de acordo com WO 2003/040170. Os hibridomas que secretam esses anticorpos foram depositados de acordo com o Tratado de Budapeste. Os números de depósito podem ser encontrados no parágrafo [0250] do documento WO 2003/040170. Em um exemplo de realização, o agonista de CD40 é o anticorpo 21.4.1 da WO 2003/040170. Em um exemplo de realização, o agonista de CD40 é um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos de domínio variável de cadeia pesada e leve do anticorpo 21.4.1 de WO 2003/040170. Em outro exemplo de realização, o agonista de CD40 é um anticorpo compreendendo as sequências de aminoácidos de cadeias pesada e leve do anticorpo 21.4.1 do documento WO 2003/040170.
[263] Os agonistas de CD40 úteis na presente invenção, incluindo composições contendo tais agonistas de CD40, podem ser utilizados em combinação com um imunoconjugado de IL-2 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1 para tratar o câncer.
IV. Antagonistas de Ligação do Eixo DP-1 [264] Um antagonista de ligação do eixo PD-1 pode opcionalmente ser utilizado nos métodos, usos, composições e kits das invenções. Por exemplo, um antagonista de ligação do eixo PD-1 que pode der utilizado inclui um antagonista de ligação de PD-1, antagonista de ligação de PD-L1 ou um antagonista de ligação de PD-L2. O PD-1 (receptor de morte programada 1) é também referido no estado da técnica como “morte celular programada 1”, PDCD1, CD279 e SLEB2. Um PD-1 humano exemplar é mostrado pelo número de acesso UniProtKB/Swiss-Prot: Q15116. O PD-L1 (ligante do receptor de morte programada 1) também é referido no estado da técnica como “ligante de morte celular programada 1”, PDCD1LG1, CD274, B7
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H e PDL1. Um PD-L1 humano exemplar é mostrado pelo número de acesso UniProtKB/Swiss-Prot: Q9NZQ7. O PD-L2 (ligante do receptor de morte programada 2) também é referido no estado da técnica como “ligante de morte celular programada 2”, PDCD1LG2, CD273, B7-DC, Btdc e PDL2. Um PD-L2 humano exemplar é mostrado pelo número de acesso UniProtKB/Swiss-Prot Q9BQ51. Em alguns exemplos de realização, PD-1, PD-L1 e PD-L2 são PD-1, PD-L1 e PD-L2 humanos.
[265] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de DP-1 é uma molécula que inibe a ligação do DP-1 aos seus parceiros ligantes. Em um aspecto específico, os parceiros de ligação de PD-1 são PD-L1 e/ou DP-L2. Em outro exemplo de realização, um antagonista de ligação de DP-L1 é uma molécula que inibe a ligação do DP-L1 aos seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, os parceiros de ligação de PD-L1 são PD-1 e/ou B7-1. Em outro exemplo de realização, o antagonista de ligação de DP-L2 é uma molécula que inibe a ligação do DP-L2 aos seus parceiros de ligação. Em um aspecto específico, um parceiro de ligação de PDL2 é PD-1. O antagonista pode ser um anticorpo, fragmento de ligação ao antígeno, imunoadesina, proteína de fusão ou oligopeptídeo.
[266] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 (por exemplo, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado ou um anticorpo quimérico). Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em MDX 1106 (nivolumabe), MK-3475 (pembrolizumabe), CT-011 (pidilizumabe), MEDI-0680 (AMP-514), PDR001, REGN2810, e BGB-108. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é uma imunoadesina (por exemplo, uma imunoadesina compreendendo uma porção extracelular ou de ligação ao PD-1 de PD-L1 ou PD-L2 fundida a uma região constante (por exemplo, uma região Fc de uma sequência de imunoglobulina).
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Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-1 é AMP224. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação de PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo antiPD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em YW243.55.S70, MPDL3280A (atezolizumabe), MDX-1105, MEDI4736 (durvalumabe) e MSB0010718C (avelumabe). Em um exemplo de realização preferido, o anticorpo anti-PD-L1 é atezolizumabe. O anticorpo YW243.55.S70 é um antiPD-L1 descrito do documento WO 2010/077634. MDX-1105, também conhecido como BMS-936559, é um anticorpo anti-PD-L1 descrito no W02007/005874. MEDI4736, é um anticorpo monoclonal anti-PD-L1 descrito no documento WO2011/066389 e publicação US2013/034559. O Nivolumabe, também conhecido como MDX-1106-04, MDX-1106, ONO-4538, BMS-936558 ou OPDIVO®, é um anticorpo anti-DP-1 descrito no documento W02006/121168. Pembrolizumabe, também conhecido como MK-3475, Merck 3475, lambrolizumab, KEYTRUDA®, e SCH-900475, é um anticorpo anti-DP-1 descrito no documento W02009/114335. CT-011, também conhecido como hBAT ou hBAT-1 ou pidilizumabe, é um anticorpo anti-DP-1 descrito no W02009/101611. AMP-224, também conhecido como B7-DCIg, é um receptor solúvel de fusão PD-L2-Fc descrito no documento WO2010/027827 e WO2011/066342.
[267] Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-L1. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 é capaz de inibir a ligação entre PD-L1 e DP-1 e/ou entre PD-L1 e B7-1. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 é um anticorpo monoclonal. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 é um fragmento de anticorpo selecionado a partir de grupo consistindo de fragmentos Fab, Fab'-SH, Fv, scFv e (Fab')2. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 é um anticorpo humanizado.
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Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 é um anticorpo humano.
[268] Exemplos de anticorpos anti-PD-L1 úteis para os métodos, usos, composições e kits da invenção, e métodos para a preparação dos mesmos encontram-se descritos nos pedidos de patente WO 2010/077634, W02007/005874, WO2011/066389, US2013/034559, que são integralmente incorporados ao presente pedido pela referência. Os anticorpos anti-PD-L1 úteis nesta invenção, incluindo composições contendo tais anticorpos, podem ser utilizados em combinação com um imunoconjugado IL-2 e um agonista de CD40 para tratar o câncer.
Anticorpos Anti-PD1 [269] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-1 é o MDX-1106. Nomes alternativos para o “MDX-1106” incluem MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558 ou nivolumabe. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-1 é o nivolumabe (Número de Registro CAS: 946414-94-4). Em outro exemplo de realização, é útil um anticorpo anti-PD-1 isolado compreendendo uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 1 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 2. Ainda em um exemplo de realização adicional, é útil um anticorpo anti-PD1 isolado compreendendo uma sequência da cadeia pesada e/ou cadeia leve, em que:
(a) a sequência da cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAP
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GKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQM NSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFP AVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID N0:1), e (b) As sequências da cadeia leve têm pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve: EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQ APRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVY YCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:2).
Anticorpo Anti-PD-L1 [270] Os anticorpos anti-PD-L1 descritos nos documentos WO 2010/077634 A1 e US 8.217.149 podem ser utilizados nos métodos, usos, composições e kits aqui descritos. Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende uma sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 3 e uma sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 4. Ainda em um exemplo de realização adicional, é útil um
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123/157 anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da cadeia pesada e/ou cadeia leve, em que:
(a) A sequência da cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de cadeia pesada: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAP GKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQM NSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:3), e (b) as sequências da cadeia leve têm pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência com a sequência de cadeia leve: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGK APKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:4).
[271] Em um exemplo de realização, o anticorpo anti-PD-L1 compreende um polipeptídeo da região variável de cadeia pesada compreendendo uma sequência HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que:
(a) a sequência HVR-H1 é GFTFSXiSWIH (SEQ ID NO:5);
(b) a sequência HVR-H2 é AWIX2PYGGSX3YYADSVKG (SEQ ID NO:6);
(c) a sequência HVR-H3 é RHWPGGFDY (SEQ ID NO:7);
em que adicionalmente: X1 é D ou G; X2é S ou L; X3 é T ou S. Em um aspecto específico, X é D; X2 é S e X3 é T.
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124/157 [272] Em outro aspecto, o polipeptídeo compreende ainda sequências do arcabouço da região variável de cadeia pesada justapostas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVRH2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4). Em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço são derivadas da região de arcabouço de consenso humano. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço são de arcabouço de consenso III subgrupo VH. Ainda em outro aspecto, pelo menos uma das sequências da região de arcabouço (framework) é a seguinte:
HC-FR1 é EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO:8)
HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWV (SEQ ID NO:9)
HC-FR3 é RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NQ:10) HC-FR4 é WGQGTLVTVSA (SEQ ID NO:11).
[273] Ainda em outro aspecto, o polipeptídeo de cadeia pesada é adicionalmente combinado com uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que:
(a) a sequência HVR-L1 é RASQX4X5X6TX7X8A (SEQ ID NO:12);
(b) a sequência HVR-L2 é SASX9LX10S, (SEQ ID NO:13);
(c) a sequência HVR-L3 é QQX11X12X13X14PX15T (SEQ ID NO:14);
em que: X4é D ou V; X5 é V ou I; Xe é S ou N; X7 é A ou F; Xs é V ou L; X9 é F ou T; X10 é Y ou A; X11 é Y, G, F, ou S; X12 é L, Y, F ou W; X13 é Y, N, A, T, G, F ou I; Xu é Η, V, P, T ou I; X15 é A, W, R, P ou T. Ainda em um aspecto adicional, X4é D; Xsé V; Xsé S; Xzé A; Xsé V; X9 é F; X10 é Y; X11 é Y; Xi2é L; X13 é Y; Xué H;Xisé A.
[274] Em um aspecto adicional, a cadeia leve compreende ainda as sequências do arcabouço da região variável de cadeia leve justapostas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVRL2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). Ainda em um aspecto adicional, as sequências da região de arcabouço são derivadas da região de arcabouço de
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125/157 consenso humano. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço são de arcabouço de consenso VL kappa I. Ainda em outro aspecto, pelo menos uma das sequências da região de arcabouço (framework) é a seguinte:
LC-FR1 é DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO:15)
LC-FR2 é WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO:16)
LC-FR3 é GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO:17) LC-FR4 é FGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:18).
[275] Em outro exemplo de realização, é útil um anticorpo antiPD-L1 ou fragmento de ligação ao antígeno isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
a cadeia pesada compreende HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que adicionalmente:
(i) a sequência HVR-H1 é GFTFSXiSWIH; (SEQ ID
NO:5);
(ii) a sequência HVR-H2 é AWIX2PYGGSX3YYADSVKG (SEQ ID NO:6) (iii) a sequência HVR-H3 é RHWPGGFDY (SEQ ID NO:7); e a cadeia leve compreende HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que adicionalmente:
(i) a sequência HVR-L1 é RASQX4X5X6TX7X8A (SEQ ID
NO:12) (ii) a sequência HVR-L2 é SASX9LX10S; e (SEQ ID
NO:13) (iii) a sequência HVR-L3 é QQX11X12X13X14PX15T; (SEQ ID NO:14) em que: X1 é D ou G; X2 é S ou L; X3 é T ou S; X4 é D ou V; X5 é V ou I; Χβé S ou N; X?é A ou F; Xsé V ou L; X9 é F ou T; X10 é Y ou A; X11 é Y, G, F, ou S; X12 é L, Y, F ou W; X13 é Y, N, A, T, G, F ou I; Xu é Η, V, P, T ou I; X15
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126/157 é A, W, R, P ou T. Em um aspecto específico, Xi é D; X2 é S e X3 é T. Em outro aspecto adicional, X4é D; Xsé V; Xsé S; X?é A; Xsé V; X9 é F; X10 é Y; X11 é Y; X12 é L; X13 é Y; Xu é Η; X15 é A. Ainda em outro aspecto, X1 é D; X2 é S e X3 é T, X4é D; X5 é V; X6 é S; X7é A; X8 é V; X9 é F; X10 é Y; X11 é Y; X12é L; X13 é Y; Xué H e Xiõé A.
[276] Em um aspecto adicional, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais sequências da região de arcabouço (framework) justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), e a cadeia leve compreende as regiões variáveis de uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LCFR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). Ainda em um aspecto adicional, as sequências da região de arcabouço são derivadas da região de arcabouço de consenso humano. Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia pesada são derivadas de um subgrupo Kabat I, II ou III. Ainda em outro aspecto, a sequência da região de arcabouço de cadeia pesada é uma região de arcabouço de consenso VH subgrupo III. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia pesada são apresentadas como SEQ ID NOs: 8, 9, 10 e 11. Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia leve são derivadas de uma sequência de subgrupo kappa I, II, III ou IV de Kabat. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço de cadeia leve são de arcabouço de consenso VL kappa I. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia leve são apresentadas como SEQ ID NOs: 15, 16, 17 e
18.
[277] Em um aspecto ainda mais específico, 0 anticorpo compreende adicionalmente uma região constante humana ou murina. Em outro aspecto, a região constante humana é selecionado a partir do grupo
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127/157 consistindo de lgG1, lgG2, lgG2, lgG3, lgG4. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante humana é de lgG1. Em outro aspecto, a região constante murina é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2A, lgG2B, lgG3. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante murina é de lgG2A. Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo tem a função efetora mínima ou reduzida. Em um aspecto ainda mais específico, a função efetora mínima resulta de uma “mutação Fc menos efetora” ou aglicosilação. Ainda em outro exemplo de realização, a mutação Fc menos efetora é uma substituição N297A D265A e/ou N297A na região constante.
[278] Ainda em outro exemplo de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
- a cadeia pesada compreende adicionalmente uma sequência HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 possuindo pelo menos 85% de identidade de sequência com GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 19), AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 20) e RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 21), respectivamente, ou
- a cadeia leve compreende ainda uma sequência HVR-L1, HVRL2 e HVR-L3 possuindo pelo menos 85% de identidade de sequência com RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 22), SASFLYS (SEQ ID NO: 23) e QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 24), respectivamente.
[279] Em um aspecto específico, a identidade de sequência é de 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%.
[280] Em outro aspecto, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)
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128/157 (HVR-H3)-(HC-FR4), e a cadeia leve compreende as regiões variáveis de uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (LC-FR1 )-(HVR-L1 )-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço são derivadas da região de arcabouço de consenso humano. Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia pesada são derivadas de um subgrupo Kabat I, II ou III. Ainda em outro aspecto, a sequência da região de arcabouço de cadeia pesada é uma região de arcabouço de consenso VH subgrupo III. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia pesada são apresentadas como SEQ ID NOs: 8, 9, 10 e 11. Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia leve são derivadas de uma sequência de subgrupo kappa I, II, III ou IV de Kabat. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço de cadeia leve são de arcabouço de consenso VL kappa I. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia leve são apresentadas como SEQ ID NOs: 15, 16, 17 e 18.
[281] Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo compreende adicionalmente uma região constante humana ou murina. Em outro aspecto, a região constante humana é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2, lgG2, lgG3, lgG4. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante humana é de lgG1. Em outro aspecto, a região constante murina é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2A, lgG2B, lgG3. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante murina é de lgG2A. Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo tem a função efetora mínima ou reduzida. Em um aspecto ainda mais específico, a função efetora mínima resulta de uma “mutação Fc menos efetora” ou aglicosilação. Ainda em outro exemplo de realização, a mutação Fc menos efetora é uma substituição N297A D265A e/ou N297A na região constante.
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129/157 [282] Em outro exemplo de realização adicional, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
(a) a sequência da cadeia pesada tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia pesada:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAP GKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQM NSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:25), e/ou (b) a sequência da cadeia leve tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia leve:
DIQMTQSPSSLSASVG D RVTITC RASQD VSTAVAWYQQKPGK APKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:4).
[283] Em um aspecto específico, a identidade de sequência é de 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%. Em outro aspecto, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais sequências da região de arcabouço (framework) justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)(HC-FR4), e a cadeia leve compreende as regiões variáveis de uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (LCFR1 )-(HVR-L1 )-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço são derivadas da região de arcabouço de consenso humano. Em um aspecto adicional, as sequências da região de arcabouço de cadeia pesada são derivadas de um subgrupo Kabat I, II ou III. Ainda em outro aspecto, a sequência da região de arcabouço de cadeia pesada é uma região de arcabouço de consenso VH subgrupo III. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço
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130/157 da cadeia pesada são apresentadas como SEQ ID NOs: 8, 9, 10 e WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:27).
[284] Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia leve são derivadas de uma sequência de subgrupo kappa I, II, III ou IV de Kabat. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço de cadeia leve são de arcabouço de consenso VL kappa I. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia leve são apresentadas como SEQ ID NOs: 15, 16, 17 e 18.
[285] Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo compreende adicionalmente uma região constante humana ou murina. Em outro aspecto, a região constante humana é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2, lgG2, lgG3, lgG4. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante humana é de lgG1. Em outro aspecto, a região constante murina é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2A, lgG2B, lgG3. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante murina é de lgG2A. Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo tem a função efetora mínima ou reduzida. Em um aspecto ainda mais específico, a função efetora mínima resulta de produção em células procarióticas. Em um aspecto ainda mais específico, a função efetora mínima resulta de uma “mutação Fc menos efetora” ou aglicosilação. Ainda em outro exemplo de realização, a mutação Fc menos efetora é uma substituição N297A D265A e/ou N297A na região constante.
[286] Em um aspecto adicional, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4), e a cadeia leve compreende as regiões variáveis de uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-
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131/157 (LC-FR4). Ainda em um aspecto adicional, as sequências da região de arcabouço são derivadas da região de arcabouço de consenso humano. Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia pesada são derivadas de um subgrupo Kabat I, II ou III. Ainda em outro aspecto, a sequência da região de arcabouço de cadeia pesada é uma região de arcabouço de consenso VH subgrupo III. Em um aspecto adicional, pelo menos uma das sequências da região de arcabouço de cadeia pesada é a seguinte: HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO:29)
HC-FR2 WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NQ:30)
HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NQ:10)
HC-FR4 WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:27).
[287] Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia leve são derivadas de uma sequência de subgrupo kappa I, II, III ou IV de Kabat. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço de cadeia leve são de arcabouço de consenso VL kappa I. Em um aspecto adicional, pelo menos uma das sequências da região de arcabouço de cadeia leve é a seguinte:
LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQIDNO:15)
LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY (SEQIDNO:16)
LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQIDNO:17) LC-FR4 FGQGTKVEIK (SEQ ID NO:28).
[288] Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo compreende adicionalmente uma região constante humana ou murina. Em outro aspecto, a região constante humana é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2, lgG2, lgG3, lgG4. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante humana é de lgG1. Em outro aspecto, a região constante murina é selecionado a partir do grupo consistindo de lgG1, lgG2A, lgG2B, lgG3. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante murina
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132/157 é de lgG2A. Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo tem a função efetora mínima ou reduzida. Em um aspecto ainda mais específico, a função efetora mínima resulta de uma “mutação Fc menos efetora” ou aglicosilação. Ainda em outro exemplo de realização, a mutação Fc menos efetora é uma substituição N297A D265A e/ou N297A na região constante.
[289] Ainda em outro exemplo de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
a cadeia pesada compreende adicionalmente uma sequência HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 possuindo pelo menos 85% de identidade de sequência com GFTFSDSWIH (SEQ ID NO: 19), AWISPYGGSTYYADSVKG (SEQ ID NO: 20) e RHWPGGFDY (SEQ ID NO: 21), respectivamente, e/ou a cadeia leve compreende ainda uma sequência HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 possuindo pelo menos 85% de identidade de sequência com RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 22), SASFLYS (SEQ ID NO: 23) e QQYLYHPAT (SEQ ID NO: 24), respectivamente.
[290] Em um aspecto específico, a identidade de sequência é de 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%.
[291] Em outro aspecto, a região variável de cadeia pesada compreende uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)(HVR-H3)-(HC-FR4), e a cadeia leve compreende as regiões variáveis de uma ou mais sequências da região de arcabouço justapostas entre as HVRs como: (LC-FR1 )-(HVR-L1 )-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4). Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço são derivadas da
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133/157 região de arcabouço de consenso humano. Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia pesada são derivadas de um subgrupo Kabat I, II ou III. Ainda em outro aspecto, a sequência da região de arcabouço de cadeia pesada é uma região de arcabouço de consenso VH subgrupo III. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia pesada são apresentadas como SEQ ID NOs: 8, 9, 10 e WGQGTLVTVSSASTK (SEQ ID NO:31).
[292] Ainda em outro aspecto, as sequências da região de arcabouço de cadeia leve são derivadas de uma sequência de subgrupo kappa I, II, III ou IV de Kabat. Em outro aspecto, as sequências do arcabouço de cadeia leve são de arcabouço de consenso VL kappa I. Ainda em outro aspecto, uma ou mais das sequências da região de arcabouço da cadeia leve são apresentadas como SEQ ID NOs: 15, 16, 17 e 18. Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo compreende adicionalmente uma região constante humana ou murina. Em outro aspecto, a região constante humana é selecionado a partir do grupo consistindo de IgGi, lgG2, lgG2, IgGa, lgG4. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante humana é de IgGi. Em outro aspecto, a região constante murina é selecionado a partir do grupo consistindo de IgGi, lgG2A, lgG2B, IgGa. Em um aspecto ainda mais específico, a região constante murina é de lgG2A. Em um aspecto ainda mais específico, o anticorpo tem a função efetora mínima ou reduzida. Em um aspecto ainda mais específico, a função efetora mínima resulta de uma “mutação Fc menos efetora” ou aglicosilação. Ainda em outro exemplo de realização, a mutação Fc menos efetora é uma substituição N297A D265A e/ou N297A na região constante.
[293] Ainda em um exemplo de realização adicional, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
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134/157 (a) a sequência da cadeia pesada tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia pesada:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAP GKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQM NSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:25), ou (b) a sequência da cadeia leve tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia leve:
DIQMTQSPSSLSASVG D RVTITCRASQD VSTAVAWYQQKPG K APKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:4).
[294] Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo antiPD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência da região variável de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência da região variável de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo
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135/157 uma sequência da região variável de cadeia leve e uma de cadeia pesada, em que a sequência da região variável de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98 %, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; e a sequência da região variável de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25. Em alguns exemplos de realização, um, dois, três, quatro ou cinco resíduos de aminoácidos na porção N-terminal da cadeia pesada e/ou leve podem ser deletados, substituídos ou modificados.
[295] Ainda em um exemplo de realização adicional, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
(a) a sequência da cadeia pesada tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia pesada: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAP GKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQM NSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTK (SEQ ID NO:26), ou (a) a sequência da cadeia leve tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia leve: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPG KAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAT
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136/157
YYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR (SEQ ID N0:4).
[296] Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo antiPD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência da região variável de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência da região variável de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e uma de cadeia pesada, em que a sequência da região variável de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98 %, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; e a sequência da região variável de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo
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137/157 menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26. Em alguns exemplos de realização, um, dois, três, quatro ou cinco resíduos de aminoácidos na porção N-terminal da cadeia pesada e/ou leve podem ser deletados, substituídos ou modificados.
[297] Ainda em um exemplo de realização adicional, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência da região variável de cadeia leve e cadeia pesada, em que:
(a) a sequência da cadeia pesada tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia pesada: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAP GKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQM NSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:32), e/ou (b) a sequência da cadeia leve tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia leve: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPG KAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAT YYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK
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DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:33).
[298] Ainda em um exemplo de realização adicional, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que:
(a) a sequência da cadeia pesada tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia pesada: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAP GKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQM NSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTK PREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:56), e/ou (b) a sequência da cadeia leve tem, pelo menos, 85% de identidade de sequência com a sequência da cadeia leve: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPG KAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAT YYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSG TASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSK DSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC (SEQ ID NO:33).
[299] Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti
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PD-L1 isolado compreendendo uma sequência de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88 %, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo antiPD-L1 isolado compreendendo uma sequência de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88 %, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32 ou 56. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98 % ou pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33; e a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32 ou 56. Em alguns exemplos de realização, é útil um anticorpo anti-PD-L1 isolado compreendendo uma sequência de cadeia pesada e uma de cadeia leve, em que a sequência de cadeia leve tem pelo menos 85%, pelo
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140/157 menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98 % ou pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33; e a sequência de cadeia pesada tem pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32.
[300] Em alguns exemplos de realização, o anticorpo anti-PD-L1 isolado é aglicosilado. A glicosilação de anticorpos é tipicamente N-ligada ou O-ligada. N-ligada refere-se à ligação da unidade de carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As sequências de tripeptídeos asparagina-X-serina e asparagina-X-treonina, em que X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as sequências de reconhecimento para a ligação enzimática da unidade de carboidrato à cadeia lateral de asparagina. Desta forma, a presença de qualquer destas sequências de tripeptídeos no polipeptideo cria um sítio de glicosilação em potencial. A glicosilação O-ligada refere-se à ligação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose, ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também possam ser utilizados. A remoção de sítios de glicosilação a partir de um anticorpo é convenientemente acompanhada pela alteração da sequência de aminoácido, de modo que uma ou mais das sequências de tripeptídeos descritas acima (para sítios de glicosilação N-ligados) é removida. A alteração pode ser feita por substituição de um resíduo de asparagina, serina ou treonina no sítio de glicosilação por outro resíduo de aminoácido (por exemplo, glicina, alanina ou uma substituição
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141/157 conservadora).
[301] Em qualquer exemplo de realização aqui descrito, o anticorpo anti-PD-L1 isolado pode se ligar a uma PD-L1 humana, por exemplo, uma PD-L1 humana de sequência conforme mostrado pelo ns de acesso UniProtKB/Swiss-Prot Q9NZQ7.1, ou uma variante da mesma.
IV. Formulações e Composições Farmacêuticas [302] Também são fornecidas composições e formulações farmacêuticas compreendendo um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e/ou um antagonista de ligação do eixo PD-1, conforme descrito na presente invenção, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[303] As formulações e composições farmacêuticas descritas na presente invenção são preparadas misturando os ingredientes ativos (por exemplo, um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e/ou um antagonista de ligação do eixo PD-1) possuindo o grau de pureza desejado com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis (Flemington's Pharmaceutical Sciences 16â edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são em geral atóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações empregadas, e incluem, mas não estão limitados a: tampões como fosfato, citrato, e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, ácool butílico ou benzilíco; alquil parabenos tais como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina do soro, gelatina, ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, ou lisina; monossacarídeos,
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142/157 dissacarídeos, e outros carboidratos incluindo a glicose, manose, ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açucares tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal tal como sódio; complexos metálicos (tal como, complexos Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos como polietileno glicol (PEG). Exemplos de veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem ainda agentes de dispersão intersticial de fármacos, tais como glicoproteínas hialuronidase neutro-ativas solúveis (sHASEGP), por exemplo, glicoproteínas hialuronidase PH-20 humana solúvel, como a rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Certas sHASEGPs exemplares e métodos de utilização, incluindo a rHuPH20, estão descritos nas Publicações de Patente US 2005/0260186 e US 2006/0104968. Em um aspecto, uma sHASEGP é combinada com uma ou mais glicosaminoglicanases adicionais, tais como condroitinases.
[304] Formulações de anticorpos liofilizados exemplares estão descritas na Patente US 6.267.958. As formulações aquosas de anticorpos incluem as descritas na Patente US 6.171.586 e no documento WO 2006/044908, sendo que as formulações deste último incluem um tampão histidina-acetato.
[305] A composição e formulação da presente invenção também podem conter mais de um ingrediente ativo de acordo com a necessidade para a indicação específica sendo tratada, preferencialmente ingredientes ativos com atividades complementares que não sejam prejudiciais entre si. Tais ingredientes ativos estão adequadamente presentes na combinação em quantidades que são eficazes para o propósito pretendido.
[306] Os ingredientes ativos podem ser retidos (encapsulados) em microcápsulas preparadas, por exemplo, por meio de técnicas de coacervação ou por meio de polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilcelulose ou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli
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143/157 (metilmetacrilato), respectivamente, em sistemas de fornecimento de drogas coloidais (por exemplo, lipossomos, microesferas de albumina, microemulsões, nano-partículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são divulgadas em Flemington's Pharmaceutical Sciences, 16â Edição, Osol, A. Ed. (1980).
[307] Podem ser fabricadas preparações de liberação prolongada. Exemplos apropriados de preparações de liberação prolongada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos que contenham o anticorpo, que se encontram na forma de artigos moldados, por exemplo, filmes ou microcápsulas. As formulações a serem utilizadas para administração in vivo são geralmente estéreis. A esterilização pode ser facilmente obtida, por exemplo, por meio da filtragem através de membranas de filtração estéreis.
IV. Métodos de Tratamento [308] São fornecidos métodos para o tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo que compreendem a administração de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, a ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, o tratamento resulta em uma resposta no indivíduo após o tratamento. Em alguns exemplos de realização, a resposta é uma resposta parcial. Em alguns exemplos de realização, a resposta é uma resposta completa. Em alguns exemplos de realização, o tratamento resulta em uma resposta sustentada (por exemplo, uma resposta sustentada parcial ou completa) no indivíduo após o interrompimento do tratamento. Os métodos descritos na presente invenção podem encontrar uso no tratamento de condições em que é desejada uma maior imunogenicidade, tal como o aumento da imunogenicidade do tumor para o tratamento do câncer. Além disso, são fornecidos métodos para melhorar a função imune em um indivíduo com câncer, compreendendo a administração
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144/157 de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1, para o referido indivíduo.
[309] Em alguns casos, os métodos aqui fornecidos incluem a administração de uma quantidade eficaz de um antagonista de ligação do eixo PD-1 selecionado a partir do grupo que consiste em um antagonista de ligação a PD-1, um antagonista de ligação ao PD-L1 e um antagonista de ligação ao PD-L2. Em alguns casos, o antagonista de ligação ao PD-L1 é um anticorpo, tal como um anticorpo que é capaz de inibir a ligação ao PD-L1 ao PD-1 e B7.1, mas não interrompe a ligação do PD-1 ao PD-L2. Em alguns casos, o anticorpo antagonista de ligação ao PD-L1 é MPDL3280A, que pode ser administrado em uma dose de cerca de 800 mg a cerca de 1500 mg a cada três semanas (por exemplo, cerca de 1000 mg a cerca de 1300 mg a cada três semanas, por exemplo cerca de 1100 mg a cerca de 1200 mg a cada três semanas). Em alguns exemplos de realização, o MPDL3280A é administrado a uma dose de cerca de 1200 mg a cada três semanas.
[310] Como uma proposição geral, a quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) pode ser administrada a um ser humano em um intervalo de dosagem de cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal do paciente, em uma ou mais administrações. Em alguns exemplos de realização o antagonista (por exemplo, anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) é administrado em uma dose de, por exemplo, aproximadamente 0,01 a cerca de 45 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 40 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 35 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 30 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 20 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 15 mg/kg, cerca de 0,01 a cerca de 10 mg/kg cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg ou cerca de 0,01 a cerca de 1 mg/kg,
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145/157 por administração diária, por exemplo. Em alguns exemplos de realização, o antagonista (por exemplo, anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) é administrado a 15 mg/kg. Entretanto, outros regimes de dosagens podem ser úteis. Em um exemplo de realização, um antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) é administrado a um humano em uma dose de cerca de 100 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg ou cerca de 1500 mg. Em alguns exemplos de realização, um antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) é administrado em uma dose de cerca de 1150 mg a cerca de 1250 mg a cada três semanas. Em alguns exemplos de realização, um antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) é administrado em uma dose de cerca de 1.200 mg a cada três semanas. A dose pode ser administrada como uma dose única ou em doses múltiplas (por exemplo, 2 ou 3 doses), tal como infusões. A dose do anticorpo administrado em um tratamento combinado pode ser reduzida em comparação com um tratamento com único agente. Em alguns exemplos de realização, por exemplo, o método para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo compreende um regime de dosagem que compreende ciclos de tratamento, em que o indivíduo é tratado no dia 1 de cada ciclo com um antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, com um anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) a uma dose de cerca de 1200 mg, em que cada ciclo é de 21 dias (ou seja, cada ciclo é repetido a cada 21 dias). O progresso desta terapia é facilmente monitorado por meio de técnicas convencionais.
[311] Em alguns casos, os métodos fornecidos na presente invenção incluem administração de uma quantidade eficaz de um
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146/157 imunoconjugado de IL-2 (por exemplo, CEA IL2v, FAP IL2v). Em alguns casos, o imunoconjugado de IL-2 é administrado ao indivíduo em uma dose de cerca de 5 mg a cerca de 100 mg por semana (por exemplo, cerca de 10 mg a cerca de 60 mg por semana, por exemplo, cerca de 10 mg a cerca de 40 mg a cada semana). Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 é administrado a uma dose de cerca de 10 mg por semana. Como uma proposição geral, a quantidade terapeuticamente eficaz de um imunoconjugado de IL-2 administrada a um humano estará no intervalo de cerca de 5 a cerca de 100 mg (por exemplo, cerca de 5 mg, cerca de 10 mg, cerca de 15 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg cerca de 35 mg, cerca de 40 mg, cerca de 45 mg, cerca de 50 mg, cerca de 55 mg, cerca de 60 mg, cerca de 65 mg, cerca de 70 mg, cerca de 75 mg, cerca de 80 mg cerca de 85 mg, cerca de 90 mg, cerca de 95 mg ou cerca de 100 mg), seja por meio de uma ou mais administrações. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, são administrados cerca de 10 mg de imunoconjugado de IL-2. Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 é administrado a uma dose de 10 mg uma vez por semana. Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 pode ser administrado semanalmente, a cada 2 semanas, a cada 3 semanas, a cada 4 semanas, nos dias 1, 8 e 15 de cada ciclo de 21 dias ou nos dias 1,8 e 15 de cada ciclo de 28 dias.
[312] Em alguns casos, os métodos fornecidos na presente invenção incluem a administração de uma quantidade eficaz de um agonista de CD40. Em alguns casos, o agonista de CD40 é administrado ao indivíduo em uma dose de cerca de 2 mg a cerca de 100 mg por semana (por exemplo, cerca de 4 mg a cerca de 60 mg por semana, por exemplo, cerca de 4 mg a cerca de 20 mg a cada semana). Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 é administrado a uma dose de cerca de 8 mg por semana. Como uma proposição geral, a quantidade terapeuticamente eficaz de um
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147/157 agonista de CD40 administrada a um humano estará no intervalo de cerca de 2 a cerca de 100 mg (por exemplo, cerca de 2 mg, cerca de 4 mg, cerca de 5 mg, cerca de 8 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de 15 mg, cerca de 16 mg, cerca de 20 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 50 mg, cerca de 60 mg, cerca de 70 mg, cerca de 80 mg, cerca de 90 mg ou cerca de 100 mg), seja por meio de uma ou mais administrações. Por exemplo, em alguns exemplos de realização, são administrados cerca de 8 mg de agonista de CD40. Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 é administrado a uma dose de 8 mg uma vez por semana. Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 pode ser administrado semanalmente, a cada 2 semanas, a cada 3 semanas, a cada 4 semanas, nos dias 1, 8 e 15 de cada ciclo de 21 dias ou nos dias 1,8 e 15 de cada ciclo de 28 dias.
[313] Em alguns casos, o imunoconjugado IL-2 (por exemplo, CEA IL2v ou FAP IL2v), o agonista CD40 e, opcionalmente, o antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) são administrados em um único regime de dosagem. A administração destes agentes pode ser simultânea ou separada dentro do contexto do regime de dosagem. Por exemplo, em alguns casos, os métodos fornecidos na presente invenção incluem um regime de dosagem compreendendo ciclos de tratamento, em que o indivíduo recebe, no dia 1 de cada ciclo, um antagonista de ligação do eixo PD-1 a uma dose de cerca de 1200 mg, e nos dias 1, 8 e 15 de cada ciclo, um imunoconjugado de IL-2 na dose de cerca de 10 mg, e no dia 1 de cada ciclo um agonista de CD40 na dose de cerca de 16 mg, sendo cada ciclo repetido a cada 21 dias.
[314] Em alguns exemplos de realização, o indivíduo é um humano. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo está sofrendo de câncer metastático ou localmente avançado. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo tem câncer positivo para CEA (CEA-positivo). Em
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148/157 alguns exemplos de realização, o indivíduo tem câncer positivo para FAP (FAPpositivo). Em alguns exemplos de realização, o câncer é um tumor sólido. Em alguns exemplos de realização, o câncer é câncer de cólon, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de bexiga, câncer pancreático, câncer de endométrio, câncer de mama, câncer de rim, câncer de esôfago ou câncer de próstata. Em alguns exemplos de realização, o câncer de mama é um carcinoma de mama ou um adenocarcinoma de mama. Em alguns exemplos de realização, o carcinoma de mama é um carcinoma ductal invasivo. Em alguns exemplos de realização, o câncer de pulmão é um adenocarcinoma de pulmão. Em alguns exemplos de realização, o câncer de cólon é um adenocarcinoma colorretal. Em alguns exemplos de realização, as células de câncer no indivíduo expressam PD-L1. Em alguns exemplos de realização, as células cancerosas no indivíduo expressam a proteína CEA em um nível que é detectável (por exemplo, detectável utilizando métodos conhecidos no estado da técnica). Em alguns exemplos de realização, as células de câncer (particularmente células estromais do câncer, como fibroblastos) no sujeito expressam a proteína FAP em um nível que é detectável (por exemplo, detectável utilizando métodos conhecidos no estado da técnica).
[315] Em alguns exemplos de realização, o indivíduo foi tratado com uma terapia para o câncer antes do tratamento combinado com um imunoconjugado de IL-2, agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, o indivíduo tem câncer que é resistente a uma ou mais terapias contra o câncer. Em alguns exemplos de realização, a resistência à terapia para o câncer inclui a recorrência do câncer ou câncer refratário. Recorrência pode se referir ao reaparecimento do câncer, no local original ou em um novo local, após o tratamento. Em alguns exemplos de realização, a resistência a uma terapia do
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149/157 câncer inclui a progressão do câncer durante o tratamento com a terapia anticâncer. Em alguns exemplos de realização, a resistência a uma terapia do câncer inclui um câncer que não responde ao tratamento. O câncer pode ser resistente no início do tratamento ou pode se tornar resistente durante o tratamento. Em alguns exemplos de realização, o câncer está no estágio inicial ou em um estágio tardio.
[316] Em alguns exemplos de realização, a terapia combinada da invenção compreende a administração de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1. O imunoconjugado de IL-2, agonista de CD40 e antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados de qualquer maneira adequada conhecida no estado da técnica. Por exemplo, o imunoconjugado IL-2, o agonista de CD40 e o antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados sequencialmente (em momentos diferentes) ou simultaneamente (ao mesmo tempo). Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2, o agonista de CD40 e o antagonista de ligação do eixo PD-1 estão em composições separadas. Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2 está na mesma composição que o agonista de CD40 e/ou o antagonista de ligação do eixo PD-1.
[317] O imunoconjugado de IL-2, o agonista de CD40 e o antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados pela mesma via de administração ou por diferentes vias de administração. Em alguns exemplos de realização, o antagonista de ligação do eixo PD-1 é administrado intravenosamente, intramuscularmente, subcutaneamente, topicamente, oralmente, transdermalmente, intraperitonealmente, intraorbitalmente, por implantação, por inalação, intratecalmente, intraventricularmente ou intranasalmente. Em alguns exemplos de realização, o agonista de CD40 é administrado intravenosamente, intramuscularmente, subcutaneamente,
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150/157 topicamente, oralmente, transdermicamente, intraperitonealmente, intraorbitalmente, por implantação, por inalação, intratecalmente, intraventricularmente ou intranasalmente. Uma quantidade eficaz do imunoconjugado de IL-2, o agonista de CD40 e opcionalmente o antagonista de ligação do eixo PD-1 pode ser administrada para prevenção ou para o tratamento da doença. A dosagem apropriada do imunoconjugado de IL-2, do agonista de CD40 e/ou do antagonista de ligação do eixo PD-1 pode ser determinada com base no tipo de doença a ser tratada, no tipo de imunoconjugado de IL-2, no tipo de agonista de CD40 e no tipo de antagonista de ligação do eixo PD-1, da gravidade e curso da doença, da condição clínica do indivíduo, do histórico clínico e resposta ao tratamento do indivíduo, e de acordo com o critério do médico atendente.
[318] Em alguns exemplos de realização, os métodos podem compreender ainda uma terapia adicional. A terapia adicional pode ser a radioterapia, cirurgia (por exemplo, a lumpectomia e a mastectomia), quimioterapia, terapia gênica, terapia de DNA, terapia viral, terapia de RNA, imunoterapia, transplante de medula óssea, nanoterapia, terapia com anticorpo monoclonal, ou uma combinação das terapias citadas acima. A terapia adicional pode estar na forma de uma terapia adjuvante ou neoadjuvante. Em alguns exemplos de realização, a terapia adicional é a administração de inibidor enzimático tipo molécula pequena ou agente antimetastático. Em alguns exemplos de realização, a terapia adicional é a administração de agentes que limitam os efeitos colaterais (por exemplo, agentes destinados a reduzir a ocorrência e/ou severidade dos efeitos colaterais decorrentes do tratamento, tais como agentes antieméticos, etc.). Em alguns exemplos de realização, a terapia adicional é a radioterapia. Em alguns exemplos de realização, a terapia adicional é a cirurgia. Em alguns exemplos de realização, a terapia adicional é uma combinação de radioterapia e cirurgia. Em alguns
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151/157 exemplos de realização, a terapia adicional é a radiação gama. Em alguns exemplos de realização, a terapia adicional é a terapia que visa a via PI3K/AKT/mTOR, inibidor de HSP90, inibidor de tubulina, inibidor de apoptose e/ou um agente quimiopreventivo. A terapia adicional pode ser um ou mais dos agentes quimioterápicos descritos na presente invenção.
Outras Terapias Combinadas [319] Também são proporcionados métodos para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo compreendendo a administração ao indivíduo de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e opcionalmente um antagonista de ligação do eixo PD-1 (por exemplo, anticorpo anti-PD-L1, por exemplo, MPDL3280A) em conjunto com outro agente anticâncer ou terapia para o câncer.
[320] Em alguns exemplos de realização, um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e opcionalmente um antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados juntamente com um quimioterápico ou agente quimioterápico. Em alguns exemplos de realização, um imunoconjugado de IL2, um agonista de CD40 e opcionalmente um antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados juntamente com uma radioterapia ou agente radioterápico. Em alguns exemplos de realização, um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e opcionalmente um antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados juntamente com uma terapia direcionada ou agente terapêutico direcionado. Em alguns exemplos de realização, um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e opcionalmente um antagonista de ligação do eixo PD-1 podem ser administrados juntamente com uma imunoterapia ou agente imunoterapêutico, por exemplo, um anticorpo monoclonal.
V. Artigos de Manufatura ou Kits [321] Em outro exemplo de realização da invenção, é fornecido
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152/157 um artigo de manufatura ou um kit compreendendo um imunoconjugado de IL2, um agonista de CD40 e/ou um antagonista de ligação do eixo PD-1. Em alguns exemplos de realização, o artigo de manufatura ou kit compreende adicionalmente uma bula compreendendo instruções para o uso de um imunoconjugado de IL-2, um agonista de CD40 e/ou um antagonista de ligação do eixo PD-1 para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo ou para melhorar a função imunológica de um indivíduo com câncer. Qualquer um dos imunoconjugados de IL-2, agonistas de CD40 e/ou antagonistas de ligação do eixo PD-1 descritos na presente invenção pode ser incluído no artigo de manufatura ou no kit.
[322] Em alguns exemplos de realização, o imunoconjugado de IL-2, o agonista de CD40 e o antagonista de ligação do eixo PD-1 estão no mesmo recipiente ou em recipientes separados. Os recipientes apropriados incluem, por exemplo, garrafas, ampolas, bolsas de infusão e seringas. O recipiente pode ser formado a partir de uma variedade de materiais, tais como vidro, plástico (tal como cloreto de polivinila ou poliolefina), ou liga metálica (tal como aço inoxidável ou liga hastelloy). Em alguns exemplos de realização, o recipiente armazena a formulação e um rótulo sobre o recipiente, ou associado a ele, pode indicar as instruções para o uso. O artigo de manufatura ou kit pode incluir adicionalmente outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas e bulas com instruções para uso. Em alguns exemplos de realização, o artigo de manufatura inclui ainda um ou mais agente(s) diferente(s) (por exemplo, um agente quimioterápico e um agente antineoplásico). Os recipientes adequados para o um ou mais agente(s) incluem, por exemplo, garrafas, frascos, sacos e seringas.
[323] O relatório descritivo é considerado como sendo suficiente para permitir que um técnico hábil no assunto pratique a presente invenção.
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Várias modificações da presente invenção, além daquelas exibidas e descritas no presente, tornar-se-ão evidentes para os técnicos no assunto a partir do relatório descritivo acima e se encontrarão dentro do escopo das reivindicações anexas. Todas as publicações, de patentes e pedidos de patentes citadas são incorporadas ao presente pela referência em sua totalidade e para todos os efeitos.
Exemplos [324] A presente invenção será mais completamente compreendida com referencia aos exemplos a seguir. Tais Exemplos não devem ser interpretados como limitantes do escopo da invenção. Deve-se compreender que os exemplos e realizações descritos no presente são apenas para fins ilustrativos e que várias modificações ou alterações à luz da presente invenção serão sugeridas pelos técnicos do assunto e devem ser incluídos dentro do espírito e escopo do presente pedido e das reivindicações anexas.
Exemplo 1
Eficácia In Vivo Do Imunoconjugado IL2v Direcionado Contra FAP Em Modelo Singênico De Linhagem de Células Tumorais De Camundongo Isoladamente E Em Combinação Com Mab Anti-CD40 e Mab Anti-PD-L1 [325] O imunoconjugado IL2v direcionado contra FAP foi testado sozinho e em combinação com um anticorpo monoclonal (Mab) CD40 e Mab PD-L1 quanto a sua eficácia antitumoral em um modelo de camundongo singênico.
Modelo singênico pancreático Panc02-Fluc [326] O imunoconjugado FAP-IL2v direcionado à FAP murina substituto foi testado na linhagem de células transfectantes pancreática Panc02-Fluc de camundongo injetada intra-pancreaticamente em camundongos Black 6.
[327] As células Panc02-H7 (carcinoma pancreático de
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154/157 camundongo) foram originalmente obtidas no centro de câncer MD Anderson (Texas, EUA) e após a expansão foram depositada no banco de células interno da Roche-Glycart. A linhagem de células Panc02-H7-Fluc foi produzida internamente por técnicas de transfecção por cálcio e subclonagem. As células Panc02-H7-Fluc foram cultivadas em meio RPMI contendo 10% de SBF (Sigma), 500 pg/mL de higromicina e 1% de Glutamax. As células foram cultivadas a 37SC em atmosfera saturada de água com 5% de CO2. A passagem 14 foi usada para 0 transplante. A viabilidade celular foi de 92,8%. 1x105 células por animal foram injetadas no pâncreas dos camundongos utilizando uma seringa de tuberculina de 0,3 mL (BD Biosciences, Alemanha). Para isso, foi realizada uma pequena incisão na região abdominal esquerda do camundongo Black 6 anestesiado. A parede peritoneal foi aberta e 0 pâncreas cuidadosamente isolado com fórceps. Dez microlitros de suspensão celular (1x105 células Panc02-H7-Fluc em meio RPMI) foram injetados na cauda do pâncreas. Os cortes na pele e paredes peritoneais foram fechados com suturas absorvíveis 5/0.
[328] Camundongos Black 6 fêmeas com 8-9 semanas de idade no início do experimento (Charles River, Lyon, França) foram mantidos sob condições livres de patógenos-específicos com ciclos diários de 12 h luz/12 h escuro de acordo com as diretrizes compromissadas (GV-Solas ; Felasa; TierschG). O protocolo do estudo experimental foi analisado e aprovado pelo governo local (ZH193/2014). Após a chegada os animais foram mantidos por uma semana para se habituarem ao novo ambiente e para a observação. Foi realizado 0 monitoramento contínuo da saúde regularmente.
[329] Os camundongos receberam injeções por via intrapancreática no dia 0 do estudo com 1x105 células Panc02-Fluc, e foram randomizados e pesados. Uma semana após a injeção das células tumorais, os camundongos receberam injeções iv com FAP-IL-2v (40 pg), PD-L1-Mab (200
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155/157 pg), CD40 Mab (200 pg) e suas combinações; FAP-IL-2v + PD-L1 Mab, FAPIL-2v + CD40 Mab, FAP-IL-2v + PD-L1 Mab + CD40 Mab, uma vez por semana, durante três semanas. Os camundongos no grupo veículo foram injetados com tampão histidina.
[330] A Figura 1 mostra que a combinação FAP-IL-2v + CD40 Mab + PD-L1 Mab mediou uma eficácia superior em termos de sobrevida mediana e global melhoradas em comparação com todos as outras combinações de agentes e agentes individuais testados.
[331] Para imagiologia bioluminescente por IVIS® SPECTRUM, os camundongos receberam injeções intraperitoneais com 150 mg/kg de Dluciferina 10 minutos antes da aquisição da imagem de bioluminescência (BLI) e posteriormente anestesiados com isoflurano a 4%. Posteriormente, os camundongos são transferidos para uma câmara de isolamento, que é posicionada no espectro IVIS®. As aquisições BLI in vivo são realizadas adquirindo o sinal de luminescência por 10-50 segundos. Os dados são armazenados como radiância (fótons)/seg/cm2/sr. A análise de dados BLI in vivo é realizada com o programa de computador Living Imaged 4.4 e representada por uma curva de inibição do tumor.
[332] A Figura 2 mostra que a combinação FAP-IL-2v + CD40 Mab + PD-L1 Mab mediou uma eficácia superior em termos de diminuição do sinal de bioluminescência (fótons/segundo) em comparação com todos as outras combinações de agentes e agentes individuais testados.
[333] Um anticorpo anti-PD-L1 de camundongo baseado no anticorpo YW243.55.S70 PD-L1 descrito no documento WO 2010/077634 (sequência apresentada na Figura 11) foi utilizado nos modelos de tumor in vivo. Este anticorpo continha uma mutação DAPG para abolir a interação FcyR. A região variável de YW243.55.S70 foi ligada a um domínio constante de IgGi murino com mutações DAPG na porção Fc.
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156/157 [334] Uma versão quimérica murinizada da imunocitocina variante de IL-2 direcionada à FAP, FAP-IL2v, denominada muFAP-mulL2v, foi usada nos modelos de tumor in vivo em camundongos totalmente imunocompetentes, a fim de reduzir a formação de anticorpos antifármaco (ADA). Na molécula substituta murinizada, as mutações knob-into-holes nos domínios Fc foram substituídas por mutações DDKK no mulgGI e as mutações LALA P329G foram substituídas por mutações DAPG no mulgGI.
[335] Um anticorpo anti-CD40 de camundongo foi usado nos modelos de tumor in vivo.
[336] As sequências polipeptídicas das moléculas usadas nos modelos de tumor in vivo são as seguintes:
Construção Sequência de Aminoácidos SEQ ID NO
YW243.55.S70 PD-L1 mulgGI DAPG HC EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWV RQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTS KNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQG TLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGY FPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVP SSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICT VPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDAPEVQ FSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQD WLNGKEFKCRVNSAAFGAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTI PPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAE NYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSV LHEGLHNHHTEKSLSHSP 36
YW243.55.S70 PD-L1 mulgGI LC DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQ KPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL Q PE D F ATYYCQQ YLYH PATFG QGTKV E1KR AD AAPTVS1 FPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQ NGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTC EATHKTSTSPIVKSFNRNEC 37
CD40 mulgGI (FGK4.5) HC EVQLVESDGGLVQPGRSLKLPCAASGFTFSDYYMAWV RQAPTKGLEWVASISYDGSSTYYRDSVKGRFTISRDNA KSTLYLQMDSLRSEDTATYYCGRHSSYFDYWGQGVMV TVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFP EPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSS TWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVP EVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFS WFVDDVEVHTAQTKPREEQINSTFRSVSELPIMHQDWL NGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPP KEQMAKDKVSLTCMITNFFPEDITVEWQWNGQPAENYK NTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSP 61
CD40 mulgGI (FGK4.5) LC DTVLTQSPALAVSPGERVTISCRASDSVSTLMHWYQQK PGQQPKLLIYLASHLESGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPV EADDTATYYCQQSWNDPWTFGGGTKLELKRADAAPTV 62
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157/157
Construção Sequência de Aminoácidos SEQ ID NO
SIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSE RQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSY TCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
FAP mulgGI DAPG DDKKmulL2v HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWV RQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLV TVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFP EPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSS TWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVP EVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVAISKDDPEVQFS WFVDDVEVHTAQTKPREEQINSTFRSVSELPIMHQDWL NGKEFKCRVNSAAFGAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPP KEQMAKDKVSLTCMITNFFPEDITVEWQWNGQPAENYD NTQPIMDTDGSYFVYSDLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSPGGGGGSGGGGSGGGGSAPASS STSSSTAEAQQQQQQQQQQQQHLEQLLMDLQELLSRM ENYRNLKLPRMLTAKFALPKQATELKDLQCLEDELGPLR HVLDGTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFEC QFDDESATVVDFLRRWIAFAQSIISTSPQ 63
FAP mulgGI DAPG DDKK HC EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWV RQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLV TVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFP EPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSS TWPSQTVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVP EVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVAISKDDPEVQFS WFVDDVEVHTAQTKPREEQINSTFRSVSELPIMHQDWL NGKEFKCRVNSAAFGAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPP KKQMAKDKVSLTCMITNFFPEDITVEWQWNGQPAENYK NTQPIMKTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHE GLHNHHTEKSLSHSP 64
FAP mulgGI DAPG DDKK LC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQ KPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRL EPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIKRADAAPTVSI FPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQ NGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTC EATHKTSTSPIVKSFNRNEC 65
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Claims (52)

  1. Reivindicações
    1. MÉTODO PARA TRATAR OU RETARDAR A PROGRESSÃO DO CÂNCER em um indivíduo, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de interleucina-2 (IL-2), um agonista de CD40 e,
    opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1 ao indivíduo.
  2. 2. MÉTODO PARA MELHORAR A FUNÇÃO imune em um indivíduo com câncer, caracterizado por compreender a administração de uma quantidade eficaz de um imunoconjugado de interleucina-2 (IL-2), um agonista de CD40 e, opcionalmente, um antagonista de ligação do eixo PD-1 ao indivíduo.
  3. 3. USO DE UM IMUNOCONJUGADO de il-2 na fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, caracterizado pelo medicamento compreender o imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e em que o tratamento compreende a administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
  4. 4. USO DE UM AGONISTA de cd40 na fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, caracterizado pelo medicamento compreender o agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional e em que o tratamento compreende administração do medicamento em combinação com uma composição que compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma composição compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1
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    2/10 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
  5. 5. USO DE UM ANTAGONISTA de ligação do eixo pd-1 na fabricação de um medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo, caracterizado pelo medicamento compreender o antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e em que o tratamento compreende a administração do medicamento em combinação com uma composição compreendendo um imunoconjugado de IL2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda em combinação com uma composição compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
  6. 6. COMPOSIÇÃO compreendendo um imunoconjugado de il2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional para uso no tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo, caracterizado pelo tratamento compreender a administração da referida composição em combinação com uma segunda composição, em que a segunda composição compreende um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma terceira composição, em que a terceira composição compreende um antagonista do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
  7. 7. COMPOSIÇÃO compreendendo um agonista de cd40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional para uso no tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo, caracterizado pelo tratamento compreende a administração da referida composição em combinação com uma segunda composição, em que a segunda composição compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e ainda, opcionalmente, em combinação com uma terceira composição, em que a terceira composição compreende um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
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  8. 8. COMPOSIÇÃO compreendendo um antagonista de ligação do eixo pd-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional para uso no tratamento ou atraso da progressão do câncer em um indivíduo, caracterizado pelo tratamento compreender a administração da referida composição em combinação com uma segunda composição, em que a segunda composição compreende um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável e ainda em combinação com uma terceira composição, em que a terceira composição compreende um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
  9. 9. KIT, caracterizado por compreender um primeiro medicamento compreendendo um imunoconjugado de IL-2 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e um segundo medicamento compreendendo um agonista de CD40 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional, e opcionalmente um terceiro medicamento compreendendo um antagonista de ligação do eixo PD-1 e um veículo farmaceuticamente aceitável opcional.
  10. 10. KIT, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por compreender ainda uma bula ou folheto informativo compreendendo instruções para a administração do primeiro medicamento, do segundo medicamento e, opcionalmente, do terceiro medicamento para tratar ou retardar a progressão do câncer em um indivíduo.
  11. 11. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo imunoconjugado de IL-2 compreender um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno tumoral e a um polipeptídeo IL-2.
  12. 12. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo imunoconjugado de IL-2 compreender um anticorpo que se liga especificamente ao antígeno
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    4/10 carcinoembrionário (CEA).
  13. 13. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a CDR de cadeia pesada (HCDR) 1 de SEQ ID NO: 38, HCDR2 de SEQ ID NO: 39 e HCDR3 de SEQ ID NO: 40; e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a CDR de cadeia leve (LCDR) 1 de SEQ ID NO: 41, LCDR2 de SEQ ID NO: 42 e LCDR3 de SEQ ID NO: 43.
  14. 14. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 35.
  15. 15. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo imunoconjugado de IL-2 compreender um anticorpo que se liga especificamente à Proteína de Ativação de Fibroblastos (FAP).
  16. 16. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 47 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVRL3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 48.
  17. 17. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 15 ou 16, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 47, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 48.
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  18. 18. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 17, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo completo (de comprimento total).
  19. 19. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 18, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo da classe IgG, particularmente um anticorpo da subclasse IgGi.
  20. 20. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 19, caracterizado pelo anticorpo compreender um domínio Fc, particularmente um domínio Fc de IgG, mais particularmente um domínio Fc de IgGi, mais particularmente um domínio Fc de IgGi humana.
  21. 21. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo domínio Fc compreender uma modificação que promove a associação da primeira e da segunda subunidade do domínio de Fc.
  22. 22. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizado pelo fato de que no domínio CH3 da primeira subunidade do domínio Fc, um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido que tem um volume de cadeia lateral maior, gerando, assim, uma protuberância dentro do domínio CH3 da primeira subunidade que é posicionável em uma cavidade dentro do domínio CH3 da segunda subunidade, e no domínio CH3 da segunda subunidade do domínio Fc, um resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo aminoácido que tem um volume de cadeia lateral menor, gerando assim uma cavidade dentro do domínio CH3 da segunda subunidade, dentro da qual a protuberância do domínio CH3 da primeira subunidade é posicionável.
  23. 23. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 20 a 22, caracterizado pelo fato de que na primeira subunidade do domínio Fc, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído
    Petição 870190102359, de 11/10/2019, pág. 289/299
    6/10 por um resíduo de triptofano (T366W), e na segunda subunidade do domínio Fc o resíduo de tirosina na posição 407 é substituído por um resíduo de valina (Y407V) e, opcionalmente, o resíduo de treonina na posição 366 é substituído por um resíduo de serina (T366S) e o resíduo de leucina na posição 368 é substituído por um resíduo de alanina (L368A) (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
  24. 24. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que na primeira subunidade do domínio Fc, adicionalmente, o resíduo de serina na posição 354 é substituído por um resíduo de cisteína (S354C), e na segunda subunidade do domínio Fc, adicionalmente, o resíduo de tirosina na posição 349 é substituído por um resíduo de cisteína (Y349C) (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
  25. 25. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 20 a 24, caracterizado pelo domínio Fc compreender uma ou mais substituições de aminoácidos que reduzem a ligação a um receptor Fc, particularmente um receptor Fcy, e/ou função efetora, particularmente a citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), em comparação com um Domínio Fede IgGi nativa.
  26. 26. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 20 a 25, caracterizado pelo domínio Fc compreender uma ou mais substituições de aminoácidos em uma ou mais posições selecionadas a partir do grupo de L234, L235, e P329 (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
  27. 27. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 20 a 26, caracterizado por cada subunidade do domínio Fc compreender as substituições de aminoácidos L234A, L235A e P329G (numeração de acordo com o índice EU de Kabat).
  28. 28. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer
    Petição 870190102359, de 11/10/2019, pág. 290/299
    7/10 uma das reivindicações de 11 a 27, caracterizado pelo polipeptídeo de IL-2 ser um polipeptídeo de IL-2 humana.
  29. 29. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 28, caracterizado pelo polipeptídeo de IL-2 ser um polipeptídeo de IL-2 humana mutante compreendendo as substituições de aminoácidos F42A, Y45A e L72G (numeração em relação à sequência da IL-2 humana de SEQ ID NO: 52).
  30. 30. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 29, caracterizado pelo polipeptídeo de IL-2 compreender a sequência de SEQ ID NO: 53.
  31. 31. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo agonista de CD40 ser um anticorpo que se liga especificamente ao CD40.
  32. 32. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo uma HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 da sequência da região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 57 e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo uma HVR-L1, HVR-L2 e HVRL3 da sequência da região variável de cadeia leve de SEQ ID NO: 58.
  33. 33. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 57, e/ou uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 58.
  34. 34. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 31 a 33, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo completo (de comprimento total).
  35. 35. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer
    Petição 870190102359, de 11/10/2019, pág. 291/299
    8/10 uma das reivindicações de 31 a 34, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo da classe IgG, particularmente um anticorpo da subclasse IgGz, mais particularmente um anticorpo da subclasse IgGz humana.
  36. 36. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo antagonista de ligação do eixo PD-1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em um antagonista de ligação de DP-1, um antagonista de ligação de PD-L1 e um antagonista de ligação de PD-L2.
  37. 37. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo antagonista de ligação do eixo PD-1 ser um antagonista de ligação de PD-L1.
  38. 38. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo antagonista de ligação de DP-L1 inibir a ligação de DP-L1 ao DP-1 e ao B7-1.
  39. 39. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 37 ou 38, caracterizado pelo antagonista de ligação de PD-L1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: MPDL3280A (atezolizumabe), YW243.55.S70, MDX-1105, MEDI4736 (durvalumabe), e MSB0010718C (avelumabe).
  40. 40. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 37 a 39, caracterizado pelo antagonista de ligação ao PD-L1 ser o MPDL3280A (atezolizumabe).
  41. 41. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 37 ou 38, caracterizado pelo antagonista de ligação de PD-L1 ser um anticorpo.
  42. 42. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo anticorpo anti-PD-L1 compreender uma cadeia pesada compreendendo a sequência HVR-H1 de SEQ ID NO: 19, a
    Petição 870190102359, de 11/10/2019, pág. 292/299
    9/10 sequência HVR-H2 de SEQ ID NO: 20 e a sequência HVR-H3 de SEQ ID NO: 21; e uma cadeia leve compreendendo a sequência HVR-L1 de SEQ ID NO: 22, a sequência HVR-L2 de SEQ ID NO: 23 e a sequência HVR-L3 de SEQ ID NO: 24.
  43. 43. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 41 ou 42, caracterizado pelo anticorpo compreender uma região variável de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25 ou 26, e uma região variável de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.
  44. 44. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo antagonista de ligação do eixo PD-1 ser um anticorpo e compreender uma mutação no sítio de aglicosilação.
  45. 45. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pela mutação do sítio de aglicosilação ser uma mutação de substituição.
  46. 46. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pela mutação de substituição estar no resíduo de aminoácido N297, L234, L235 e/ou D265 (numeração EU).
  47. 47. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com a reivindicação 45 ou 46, caracterizado pela mutação de substituição ser selecionada a partir do grupo que consiste em N297G, N297A, L234A, L235A e D265A.
  48. 48. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 45 a 47, caracterizado pela mutação de substituição ser uma mutação D265A e uma mutação N297G.
  49. 49. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo câncer ser um câncer
    Petição 870190102359, de 11/10/2019, pág. 293/299
    10/10 positivo para CEA (CEA-positivo) e/ou câncer positivo para FAP (FAP-positivo).
  50. 50. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo câncer ser um câncer de cólon, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de bexiga, câncer pancreático, câncer de endométrio, câncer de mama, câncer de rim, câncer de esôfago ou câncer de próstata.
  51. 51. MÉTODO, uso, composição ou kit, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo câncer expressar PD-L1.
  52. 52. INVENÇÃO caracterizada conforme descrita acima.
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Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10596257B2 (en) 2016-01-08 2020-03-24 Hoffmann-La Roche Inc. Methods of treating CEA-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-CEA/anti-CD3 bispecific antibodies
US10961310B2 (en) 2017-03-15 2021-03-30 Pandion Operations, Inc. Targeted immunotolerance
BR112019024127A2 (pt) 2017-05-24 2020-06-23 Pandion Therapeutics, Inc. Imunotolerância alvejada
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174092B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
AU2019355252A1 (en) * 2018-10-01 2021-04-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-FAP clone 212
BR112021012101A2 (pt) 2018-12-21 2021-09-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Moléculas de ligação ao antígeno agonístico cd28 biespecífico, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método de produção de uma molécula, composição farmacêutica, uso da molécula e método de inibição do crescimento de células tumorais
CN111825770B (zh) * 2019-04-16 2023-06-09 成都医学院 长效白介素21-Fc融合蛋白及其用途
CN114679909A (zh) 2019-05-20 2022-06-28 潘迪恩运营公司 MAdCAM靶向的免疫耐受
CN115315436A (zh) 2020-01-10 2022-11-08 明峰治疗股份公司 修饰的il-2多肽及其用途
GB2602612B (en) 2020-05-13 2023-11-01 Bonum Therapeutics Inc Compositions of protein complexes and methods of use thereof
CN112540176B (zh) * 2020-07-08 2021-09-28 深圳霁因生物医药转化研究院 用于诊断fap表达异常相关疾病的试剂盒、方法及计算机可读存储介质
EP4277668A1 (en) 2021-01-13 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy
AU2022307460A1 (en) * 2021-07-09 2024-01-04 Bright Peak Therapeutics Ag Checkpoint inhibitors conjugated to il-2, and uses thereof
US20230201364A1 (en) * 2021-07-09 2023-06-29 Bright Peak Therapeutics Ag Antibody conjugates and manufacture thereof
CN115838424A (zh) * 2021-09-22 2023-03-24 上海康岱生物医药技术股份有限公司 靶向tigit的单克隆抗体

Family Cites Families (84)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4518584A (en) 1983-04-15 1985-05-21 Cetus Corporation Human recombinant interleukin-2 muteins
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5116943A (en) 1985-01-18 1992-05-26 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein
US5206344A (en) 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
AU639726B2 (en) 1989-09-08 1993-08-05 Duke University Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
GB9314893D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
DK0659439T3 (da) 1993-12-24 2002-01-14 Merck Patent Gmbh Immunkonjugater
US5679683A (en) 1994-01-25 1997-10-21 Warner-Lambert Company Tricyclic compounds capable of inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family
IL112249A (en) 1994-01-25 2001-11-25 Warner Lambert Co Pharmaceutical compositions containing di and tricyclic pyrimidine derivatives for inhibiting tyrosine kinases of the epidermal growth factor receptor family and some new such compounds
IL112248A0 (en) 1994-01-25 1995-03-30 Warner Lambert Co Tricyclic heteroaromatic compounds and pharmaceutical compositions containing them
US5804396A (en) 1994-10-12 1998-09-08 Sugen, Inc. Assay for agents active in proliferative disorders
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
ES2332984T3 (es) 1995-03-30 2010-02-16 Pfizer Products Inc. Derivados de quinazolinas.
GB9508565D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quiazoline derivative
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
WO1996040210A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors
DK0836605T3 (da) 1995-07-06 2002-05-13 Novartis Ag Pyrrolopyrimidiner og fremgangsmåder til deres fremstilling
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US5760041A (en) 1996-02-05 1998-06-02 American Cyanamid Company 4-aminoquinazoline EGFR Inhibitors
GB9603095D0 (en) 1996-02-14 1996-04-10 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
NZ332119A (en) 1996-04-12 2001-08-31 Warner Lambert Co Quinazoline compounds which are irreversible inhibitors of tyrosine kinases
PT912559E (pt) 1996-07-13 2003-03-31 Glaxo Group Ltd Compostos heterociclicos fundidos como inibidores de proteina tirosina quinase
ID18494A (id) 1996-10-02 1998-04-16 Novartis Ag Turunan pirazola leburan dan proses pembuatannya
UA73073C2 (uk) 1997-04-03 2005-06-15 Уайт Холдінгз Корпорейшн Заміщені 3-ціанохіноліни, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція
US6002008A (en) 1997-04-03 1999-12-14 American Cyanamid Company Substituted 3-cyano quinolines
EP0979281B1 (en) 1997-05-02 2005-07-20 Genentech, Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
DK0980244T3 (da) 1997-05-06 2003-09-29 Wyeth Corp Anvendelse af quinazoline forbindelser til behandling af polycystisk nyresygdom
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ZA986732B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitiors of tyrosine kinases
ZA986729B (en) 1997-07-29 1999-02-02 Warner Lambert Co Irreversible inhibitors of tyrosine kinases
TW436485B (en) 1997-08-01 2001-05-28 American Cyanamid Co Substituted quinazoline derivatives
HUP0004286A3 (en) 1997-11-06 2002-01-28 American Cyanamid Co Madison Use of quinazoline derivatives for producing pharmaceutical compositions for treating colonic polyps
BR9813365A (pt) 1997-12-05 2004-06-15 Scripps Research Inst Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato
EA003786B1 (ru) 1998-11-19 2003-10-30 Варнер Ламберт Компани N-[4-(3-хлор-4-фторфениламино)-7-(3-морфолин-4-илпропокси)хиназолин-6-ил]акриламид - необратимый ингибитор тирозинкиназ
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
AR039067A1 (es) 2001-11-09 2005-02-09 Pfizer Prod Inc Anticuerpos para cd40
US7186804B2 (en) 2001-12-04 2007-03-06 Emd Lexigen Research Center Corp. IL-2 fusion proteins with modulated selectivity
US6923958B2 (en) * 2002-03-02 2005-08-02 The Scripps Research Institute DNA vaccines encoding CEA and a CD40 ligand and methods of use thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
AU2006211037B2 (en) 2005-02-07 2012-05-24 Roche Glycart Ag Antigen binding molecules that bind EGFR, vectors encoding same, and uses thereof
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
JP5252635B2 (ja) 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
PT1999154E (pt) 2006-03-24 2013-01-24 Merck Patent Gmbh Domínios proteicos heterodiméricos modificados
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
MX350962B (es) 2008-01-07 2017-09-27 Amgen Inc Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion.
CN104548091A (zh) 2008-02-11 2015-04-29 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
BRPI0917891A2 (pt) 2008-08-25 2015-11-24 Amplimmune Inc antagonistas de pd-1 e métodos de utilização dos mesmos
LT4209510T (lt) 2008-12-09 2024-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui
CA2759233C (en) 2009-04-27 2019-07-16 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
ES2534085T3 (es) 2009-08-17 2015-04-17 Roche Glycart Ag Inmunoconjugados dirigidos
PT2504364T (pt) 2009-11-24 2017-11-14 Medimmune Ltd Agentes de ligação direcionados contra b7-h1
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
WO2011090762A1 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Emergent Product Development Seattle, Llc Heterodimer binding proteins and uses thereof
CA2797981C (en) 2010-05-14 2019-04-23 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
PT2603530T (pt) 2010-08-13 2018-01-09 Roche Glycart Ag Anticorpos anti-fap e métodos de utilização
MX352929B (es) 2010-11-05 2017-12-13 Zymeworks Inc DISEÑO DE ANTICUERPOS HETERODIMÉRICOS ESTABLES CON MUTACIONES EN EL DOMINIO Fc.
SI3489255T1 (sl) 2011-02-10 2021-11-30 Roche Glycart Ag Mutantni polipeptidi interlevkina-2
DK2681244T3 (da) 2011-03-02 2018-01-29 Roche Glycart Ag Cea-antistoffer
WO2012130831A1 (en) 2011-03-29 2012-10-04 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
DK2794905T3 (da) 2011-12-20 2020-07-06 Medimmune Llc Modificerede polypeptider til bispecifikke antistofgrundstrukturer
EP2814587B1 (en) 2012-02-15 2018-05-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
LT2838918T (lt) 2012-04-20 2019-09-10 Merus N.V. Būdai ir priemonės heterodimerinių ig-tipo molekulių gamybai
CN105073128A (zh) * 2013-04-03 2015-11-18 Ibc药品公司 用于诱导对疾病的免疫应答的组合疗法
KR20170035945A (ko) * 2014-08-14 2017-03-31 에프. 호프만-라 로슈 아게 인간 cd40을 활성화시키는 항체 및 인간 pd-l1에 대한 항체의 병용 요법
ES2774380T3 (es) * 2014-08-29 2020-07-20 Hoffmann La Roche Politerapia de inmunocitocinas de variante de IL-2 dirigida a tumor y anticuerpos frente a PD-L1 humano

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