BR112015020706A2

BR112015020706A2 - novo bacteriófago e composição antibacteriana compreendendo o mesmo

Info

Publication number: BR112015020706A2
Application number: BR112015020706A
Authority: BR
Inventors: Mi Shin Eun; Duk Bae Gi; Won Kim Jae
Original assignee: Cj Cheiljedang Corp
Priority date: 2013-02-27
Filing date: 2014-02-24
Publication date: 2019-11-19
Also published as: ES2652336T3; CN105324481A; BR112015020706B1; EP2961833B1; US20160083696A1; KR101381796B1; EP2961833A1; CN105324481B; EP2961833A4; JP2016509838A; JP6059827B2; PH12015501890B1; US9862935B2; PH12015501890A1; WO2014133289A1

Abstract

"novo bacteriófago e composição antibacteriana compreendendo o mesmo- a presente invenção se refere a um novo bacteriófago dcj20 (kccm 1 1362p). a presente invenção se refere ainda a uma composição antibacteriana, compreendendo o bacteriófago (hcj20 (kccmi 1362p) como um ingrediente ativo. além disso, a presente invenção proporciona uri método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por escherichia coli (etec) em animais, exceto humanos, utilizando o bacteriófago (1cí20 (kccm 11362p) ou a composição antibacteriana compreendendo o bacteriófago (1)cj20 (kccmi 1362p) como um ingrediente ativo.

Description

“NOVO BACTERIÓFAGO E COMPOSIÇÃO ANTIBACTERIANA COMPREENDENDO O MESMO”

Campo Técnico

A presente invenção se refere a am novo bacteriófago com uma atividade bactericida 5 específica contra a bactéria Tscherfehw w/í enterotoxigênlca (ETEC), e uma composição antibacteriana compreendendo o mesmo. A presente invenção se refere .ainda a um método de prevenção e tratamento de doenças de animais utilizando o novo bacteriófago ou a composição antibacteriana.

Antecedentes da Invenção

A Tscheríehífí coti (aqui referida como KcoZi), é ma pequena bactéria gram-negativa em forma de bastonete, pertencente ao gênero -da &cbericbia e à família da Bfí/embíícferíiiceae, sendo uma das floras normais existentes no intestino de diversos animais, inclusive de mamíferos. Sabe-se que a maioria das estirpes de são nãopatogênicas e podem causar infecções oportunistas, mas algumas estirpes altamente 15 patogênicas causam diversas doenças intestinais e septicemia em animais* incluindo humanos.

Um exemplo de Keo/í pode compreender a enterotoxigêníca (ETEC), Λ'οοΖΖ enteropatogênica (EPEC), E.coh' enterohemorrégica (EHEC), Ιί,ζ-oZr enteroagregativa (EAEC), 2ço/í entemínvasíva (ÉlEC), necrotoxigênica (NTEC), ou similares. Sabe-se 20 que dentre estas, particularmente a ETEC, pode gerar doenças infecciosas associadas a Ε,οοΖί em suínos.

Atualmente, como um grande número de suínos pertence a urna raça coletiva na indústria de carne de porco, a. colíbacilose em suínos tem sido vista frequentemente como uma das doenças mais perturbadoras (Documento- não patemário l). Recentemente, a 25 ocorrência de colibacilose em suínos tem aumentado na Coréia* o que tem causado um

2/28 retardamento no crescimento e morte de suínos, filhotes devido a sintomas como diarréia, causando assim prejuízos econômicos enormes aos fazendeiros (Documento não patentário 2).

A fim de prevenir e tratar a colíbacilose em suínos, vários antibióticos tem sido administrados no estado da técnica, porém, quando são úial administrados, podem dar margem à resistência da droga e permanecer no corpo do animal. Portanto, atualmente, o uso de antibióticos nestes casos tem encontrado algumas restrições em todo o mundo (Documento não patentário 3),

Por sua vez, o bacteriófago é um tipo especializado de vírus que infecta e destróí somente bactérias, e pode se autonreplícar somente dentro de bactérias hospedeiras. O bacteriófago apresenta forte especificidade hospedeira em comparação com os antibióticos e, recentemente, o aparecimento de uma estirpe resistente a antibióticos tornou-se um grave problema, de tal modo .que o interesse no uso prático do bacteriófago tem aumentado (Documentos não patentáríos 4 e 5).

Portanto, pesquisas relativas a bacteriófagos têm sido at.ivam.ente conduzidas em vários países de todo o mundo- e, além de pedidos de patentes para bacteriófagos, houve um aumento gradual nos pedidos de aprovação encaminhados ao Food and Drug Administration (FDA) para composições contendo bacteriófagos.

Com relaç-lo aos bacteriófagos disponíveis no-estado técnica, o Documento Patentário l revela 7 tipos de bacteriófagos para controlar a Kco/í OI37:.H, e o Documento Patentário 2 revela um bacteriófago com ama atividade- bactericida especifica contra a MóçWnforereims awx Além destes, o Documento Patentário 3 descreve uma proteína lítie-a derivada de um bacteriófago que destrói especificamente a estrutura do peptidoglica.no da membrana celular bacteriana. c bactérias Usadas pela, proteína litka.

Bntréntanto, apesar da existência dos referidos documentos no estado da técnica, uma

3/28 tecnologia associada. com o bacteriófago para prevenir e/ou tratar doenças infecciosas causadas pela .ETEC, que é um problema importante na indústria anima!, incluindo a indústria de came de suínos, é ainda insuficiente,· de tal modo que um bacteriófago e uma tecnologia associada ao bacteriófago devem ser desenvolvidos;

Documentos disponíveis no estado da ténka

Docu m en tos Patentã rios

-Documento Patentário 1: Patente americana Np. 6.485,902

-Documento Patentário 2: Patente coreana registrada No. 10-0910961 BI

-Documento Patentário 3: Patente coreana publicada No. i 0-2009-0021475 Λ

Docamen tos não Patentários

-Documento não Patentário 1: Fomg // ΛηΑ. Sw/we PzWuctww 8eò?weç, ÓW/ /^SSshíng 353-35.9, /998.

-Documento não Patentário 2: £« C/wl /-fong, rest? cfe mes/ratlo, DtmlooA· NdWàw £/fecí qfEgg i o/fc ?>? £αζ·/ν Ifeaseá P/gteís, 2993.

-Documento não Patentário 3: À/as<m //S m o/., 7m?rA^; m 33:388-292, / 995.

-Documento não Patentário 4: Cè?/«M e/trl, Jrek .Immunol Iter*. 2:375-783, /987

-Documento não Patentário 5: ÓWrg Him Kím et u/., NbveZ ,4/ferm?fò?e l/?nòá)//cv. /fodíi W· 7 No. /5, 208.5. .88 8..

Divulgação

Problema Téeníeo

Os inventores da presente invenção realizaram estudos para solucionar problemas como a presença de bactérias resistentes a antibióticos, a presença de antibióticos remanescentes na carne e similares, além de prevenir e tratar eficientemente doenças infecciosas causadas por E.eo/ç e como resultado, os inventores da presente invenção 25 isolaram o novo bacteriófago «ICJ20 (KCCM I1362P) que possui uma atividade bactericida

4/28 específica contra a ETEC presente na natureza.

Além disso, os inventores da presente invenção- identificaram características morfológicas, bioquímicas e genéticas do novo bacteríófago e confirmaram que o bacteríófago tem uma excelente resistência á ácidos, resistência ao calor, e a condições similares, desenvolvendo assim um antibiótico, um desinfetante, um aditivo alimentar, e outras composições usando o novo bacteríófago. Além disso, es inventores da presente invenção desenvolveram uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por e um método para prevenir ou tratar a doença utilizando a composição.

A presente invenção visa proporcionar um novo bacteríófago ΦΟ20 (KCCM11362P) com uma atividade bactericida específica contra a ETEC.

A presente invenção visa proporcionar ainda uma composição para a prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas por ETEC contendo o bacteríófago 4>CJ20 (K.CCM 11362P) como um ingrediente ativo.

Ademais, a presente invenção visa proporcionar um antibiótico, um aditivo alimentar, um aditivo para água potável, um desinfetante ou um produto de limpeza contendo o bacteríófago ΦΟ20 (K-CCMl 1362P) como um ingrediente ativo.

Além disso, a presente invenção visa proporcionar um método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas por ETEC cm animais, exceto humanos, utilizando o bacteríófago ΦΟ20 (KCCMH362P) ou ama composição contendo o bacteríófago ΦΟ'20 (KCCMII362P) como um ingrediente ativo..

Solução Técnica

De acordo com uma configuração,, a presente invenção proporciona um novo bacteríófago· 4>CJ20 (KCCMII362P) com uma atividade bactericida esoecífica contra a /fie&vvduo co/z enterotoxigéníca (ETEC).

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De acordo com outra configuração, a presente invenção proporciona uma- composição para a prevenção oü tratamento de doenças infecciosas causadas por ETEC, a dita, composição contendo o bacteriòfago <i>CJ20 (KCCMII362P) como um ingrediente ativo-, conforme acima descrito.

De acordo com outra configuração, a presente invenção proporciona um antibiótico, um aditivo alimentar, um aditivo pata água potável, um desinfetante: ou um produto de limpeza contendo o bacteriòfago $0120 (KCCMI 1362P) como um ingrediente ativo, conforme acima descrito.

De acordo com outra- configuração, a presente invenção proporciona um método de 10 prevenção ou tratamento de doença infecciosa causada por ETEC, compreendendo a administração do bacteriòfago <1020 (KCCMU362P) ou da composição contendo o mesmo, conforme acima descrito, como um ingrediente ativo para, animais, exceto humanos. Efeitos Va.ntaj òsos

O bactèriófàgo 4>CJ20 (KCCM11362P) de acordo com a presente invenção tem o 15 efeito específico de matar a /Pheríehw co/i enterotoxigêmea (ETEC).

Além disso, o bacteriòfago ΦΟ20 (KCCMi 1362P) de acordo com a presèitte invenção apresenta excelente resistência a ácidos e ao calor, de tal modo que o bacteriòfago d>CJ20 (KC-C.Ml 1362P) pode ser usado para prevenir ou tratar doenças infecciosas por ETEC em vários níveis de- te.mpeiatu.ra ou de pH, podendo ser utilizado como um antibiótico, 2.0 um aditivo alimentar, um aditivo para água potável, urn desinfetante, um produto de limpeza ou similar.

Ademais, de acordo com a presente invenção, é possível prevenir ou tratar doenças infecciosas causadas por ETEC através da. administração do 'bacteriòfago $CJ20 (KCCMÍI362P) ou da composição contendo o mesmo como um ingrediente ativo para 25 animais, exceto humanos.

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Descrição das Figuras

A. FIG. .1 é umá fotografia, obtida de um microscópio de elétrons, do novo bacteriófago ΦΟ2.0 (KCCMI 13Õ2P, doravante denominado “ΦΟ20”).

A FIG. 2 mostra o resultado de ama eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) do novo bacteriófago d>CJ20.

A FIG. 3 ilustra o resultado de uma eletroforese em gel de poliaeríbmida-dodecil sulfato de sódio (SD.S-PAGE) do bacteriófago <3>CJ2O.

A FIG. 4 é um gráfico mostrando o resultado de um teste de resistência ao ácido do novo bacteriófago ΦΟ20.

A FIG. 5 e ura gráfico mostrando o resultado de um teste de resistência ao calor do novo bacteriófago 4>CJ20.

Configuração Ideal

A. seguir, a presente invenção será descrita em detalhes. Considerações óbvias e facilmente Interpretáveis pelos peritos na arte serão omitidas no presente relatório descritivo.

Especificamente, uma configuração da presente invenção proporciona um novo bacteriófago Φ€42ΰ (KCCMI. 1362P), com uma atividade bactericida específica contra a Exrbme/bu cn/f (ETEC).

A ETEC, que è uma bactéria gram-uegativa em forma de bastonete, é uma bactéria aeróbica ou lácultativarneate anaeróbica decomposítora de lactose ou frutose capaz de produzir ácido e gás. A ETEC cresce bem em um meio comum ou medio, podendo crescer entre 7 a 48*C, sendo que uma temperatura. ótima de crescimento varia entre 35 e 37^eC. Além disso, a ETEC pode crescer num nível de pH de 4,5 a 9,0.

Uma vez que a ETEC produz enterotoxínas similares à F/ório cAo/croe, no caso de infecção por ETEC, serão exibidos sintomas da doença similares ao da cólera. As toxinas produzidas são divididas em dois tipos, uma enterotoxina termoiábil (ET) e uma enterotoxína

7/28 termocstável (ST), A enterotoxina tennolábil é uma enterotoxina que perde sua atividade quando aquecida a 6(FC durante 10 minutos, e a enterotoxina termoesiáv&l é uma enterotoxina que não perde sua atividade tão facilmente, sendo, resistente ainda que aquecida a ΙΟΟΎ durante 30 minutos.

Nos casos em que a concentração de ETEC atinge de 10'cfú (unidade de formação de colônia) a 1 D«cfu por unidade de volume (Iml) de fluido seroso enquanto a ETEC se prolifera numa porção superior do intestino, a ETEC pode causar doenças infecciosas por como a colíbacilose.

Um bacteriófago é um vírus espeeífíeo da bactéria que infecta bactérias especificas para suprimir e inibir o crescí mento da bactéria, e representa um vírus compreendendo ác ido desoxirribonucleico (DNA) em cadela simples ou dupla, ou ácido ribonudeico (RN A) como um material genético.

O bacteriófago ΦΟ20 de acordo com a presente invenção, que é um bacteriófago com especificidade para infectar seletivamente a ETEC, tem uma estrutura de cápsíde isomêtrica e uma cauda não contrátíl e, ntorfologicamente, pertence ã /Wovôvdbe.

O bacteriófago ΦΟ2.0, que è um bacteriófago isolado .recentemente pelos inventores da presente invenção, foi depositado, no Centro Coreano de Cultura de Microorganismos (361-22!.. Hongjedong. Seodamun-g.u, Seoul. República da Coréia) sob o ndmero de depósito K.CCM 11362P em 30 de janeiro de 2013.

Em outro aspecto geral, a presente invenção proporciona uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por ETEC contendo o bacteriófago TCJ20 como um ingrediente ativo.

Uma vez que o bacteriófago ΦΟ20 apresenta uma atividade antibacteríana capaz de matar espec-ificamente ETEC, o bacteriófago Φ€.Ι2() pode ser utilizado para prevenir ou tratar doenças geradas pela infecção de ETEC. Como um exemplo de doença infecciosa causada

8/28 por ETEC, podemos citar preferivelmente a collbacílose, mais espec.ifieamen.te a colibacíiose em suínos, mas não se limitando a eia.

termo ^colibacíiose” tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a uma doença cansada pela infecção de um animal com .K.cok' patogênico, e. apresenta 5 sintomas, como a sepsis, diarréia ídiarréia neonatal e diarréia pós desmame), toxemia (edema e angíopatia cérebro-espínhal), ou similares. Dentre estas, a sepsia é «ma infecção sistêmica aguda que ocorre frequentemente de 2 a 3 dias após o nascimento e possuí um alto índice de mortalidade. A diarréia éo resultado mais comum· das. infecções pela via gastrointestinal, que ocorre durante o período de lactação dentro de 1-2 semanas após o nascimento e 10 imediatamente após o período de desmame, causando morte ou retardamento do crescimento.

A toxemia ocorre principalmeme quando os leitões têm de 8 a 12 semanas após o periodo de desmame, e è frequentemente acompanhada por edema e sinais neurológicos, seguida de morte repentina.

O termo ’’prevenção tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a 1.5 todas as ações relativas ao fornecimento do bacteriófago d>C.I20 e/ou da. composição contendo o mesmo como ingrediente ativo para animais, exceto humanos, a fim de suprimir a doença correspondente ou retardar a ocorrência da doença,

O termo ’’tratamento'’ tal como empregado no presente relatório descritivo, se refere a todas as ações relativas ao fornecimento do bacteriófago <I>C,I20 e/ou da composição 20 contendo o mesmo como ingrediente ativo para animais, exceto humanos, a fim de permitir a melhora ou alivio dos sintomas da doença, causada pela infecção.

A composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas pela bactéria ETEC de acordo com a presente Invenção pode conter o bacteriófago ΦΟ20 com um teor preferível de 5xl(È a 5xl0^: pfu / ®Á mais preferivelmente, lxl0^&a ix!0^k: pfu 25 ZWí.

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A composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas pela bactéria E'1'EC de acordo com a presente invenção pode conter ainda ura excipíente tármaceeticamente aceitável, e ser formulado eny conjunto com o excipíente, para dessa forma ser fornecido como alimento, um fármaco, um aditivo alimentar, ura aditivo para água potável, e similares. 0 termo excipíente farmacêutico aceitável”, tal eorao empregado no presente relatório descritivo, significa um veículo ou um diluente que não estimula o organismo vivo e não inibe a. atividade biológica e as propriedades de uma composição administrada.

Não. há limitações específicas para o tipo de excipíente utilizável de acordo com a presente invenção, e qualquer excipíente pode ser utilizado desde que seja geralmente utilizado na técnica e desde que seja fermaceutleamente aceitável, Como um exemplo não restritivo do excipíente, podemos citar solução- salina, água estéril, soro fisiológico tam penado, solução de Ringer, uma solução injetável de albumina, uma solução de dextrose, uma solução de inaltodextrina, glicerol, etanoi, e outros similares. Tais excipíentes podem ser uti lizados isoladamente ou como ama mistura de pelo menos dois deles.

Além disso, se necessário, outros aditivos em geral, tais como um amioxidante, uma solução tampão, e/ou um agente bacteriostático, etc., podem ser ainda adicionados s utilizados, e uma composição pode ser formulada para, injeção, tal como solução aquosa, suspensão, emulsão, ou similares, pílulas, cápsulas, grânulos, comprimidos, ou similares e, adíeionalmente, por adição de um diluente, um díspersaníe. um surfàctante, um aglutínante, um lubrificante e/ou similares, para então ser utilizados,

Não há limitações específicas para o método de administração da composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas por ETEC, mas qualquer método geral men te utilizado na arte pode ser utilizado. Como um exemplo- não limitative do método de administração, a composição -pode ser administrada por via oral ou parentériea.

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Como um exemplo não restritivo da formulação pnra a administração por via. oral, podemos citar trociscos, pastilhas, comprimidos, suspensões aquosas, suspensões oleosas, pó preparado, grânulos preparados, emulsões, cápsulas duras, cápsulas moles, xaropes, elixires ou similares.

A fim de formular a composição de -acordo com a presente invenção .na forma de um comprimido, uma cápsula, ou similar, a formulação pode conter ainda um aglutinante tal como a lactose, saearose, sorbitol, manitol, amido, amilopectina,. celulose, .gelatina; um excípiente tal como fosfato dicáleico. ou similar; um desinte-grante tal como amido de milho, amido de batata, doce, ou similar; um lubrificante tal como estearato de magnésio, estearato de cálcio, estearil iumarato de sódio, cera de polietilenoglicol. on similares. No caso de formulação em cápsula, a formulação pode conter ainda nm exelpíente líquido tal como óleo gorduroso, além dos materiais acima mencionados,

Como u-m método de administração parenterica, é possível utilizar um método de administração íntravenoso, um método de administração abdominal,, um método de administração intramuscular, um método de administração por via subcutânea, um método de administração local, etc.. Além disso, também pode ser utilizado um método de aplicação ou pulverização da composição sobre o local da doença, mas a presente invenção não se limita a estes métodos,

Um exemplo de formulação para administração parentética pode compreender formulações injetáveis para injeção subcutânea, injeção intravenosa, injeção intramuscular, ou similares; formulações para .supositórios; formulações para pulverização, tais como formulações de aerossol que podem ser inaladas através do sistema respiratório, ou similares, mas a presente invenção não se limita a estas formulações. A fim de formular a composição para injeção, a composição de acordo com a presente invenção pode ser misturada com um estabilizador ou uma solução tampão em água para, dessa forma, preparar uma solução ou

11/28 uma suspensão e, em seguida, a solução preparada ou a suspensão pode ser formulada em uma dose individual para uma -a.mpo.la ou frasco. No caso da formulação da composição para pulverização, tal cano a formulação de- aerossol ou similares, um propulsor ou similar pode ser misturado juntamente com um aditivo para que a composição condensada em água ou em 5 pó seja dispersa,

Uma aplicação adequada, spray, ou dose de administração- da composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas por ETEC pode ser diferentemente· determinada dependendo de fatores tais como a idade, peso, sexo, grau dos sintomas da doença, um tipo, de alimento, a taxa de excreção dos animais sujeitos- â administração, ou lô similares, bem como um método de formulação da composição, um método de administração, um tempo de administração e/ou via de administração. Geralmente, um veterinário com conhecimentos na técnica pode facilmente determinar e prescrever uma dose eficaz para o tratamento pretendido.

Em outro aspecto geral, a presente- invenção pode- proporcionar am antibiótico 15 contendo o bacteriófago ΦΟ20 como um ingrediente ativo.

O termo antibiótico, tal como empregado no presente- relatório descritiva, significa um agente capaz de ser fornecido aos animais, Incluindo seres humanos, em forma de droga, para assim matar as bactérias, e corresponde a um conceito compreendendo coletivamente um conservante, um desinfetante, e um agente antibacteriano.

O antibiótico contendo o bacteriófago ΦΕ.Ι20 como ingrediente ativo, de acordo com a presente invenção pode ter uma elevada especificidade para a ETEC se comparado com um antibiótico convencional e por isso não- mata bactérias benéficas, mas apenas bactérias patogênicas especificas, não induzindo resistência às drogas, de modo que o antibiótico de acordo com a presente invenção pode ser fornecido como um novo antibiótico tendo um 25 tempo de vida maior comparado aos antibióticos disponíveis no estado técnica.

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Em outro aspecto geral a presente invenção pode proporcionar um aditivo alimentar e um aditivo para água potável-contendo o bacteriófago Φ€120 como um ingrediente ativo.

O aditivo alimentar e o aditivo para água potável de acordo com a presente invenção podem ser utilizados de uma maneira em. qne o bacteriófago ΦΟ20 ou a composição 5 contendo o mesmo seja preparado individualmente como um aditivo alimentar ou para água e em .seguida misturado a um alimente ou água potável, ou de uma forma em que o bacteriófago ΦΕ120 ou a composição contendo o mesmo seja diretamente adicionada no momento da preparação do alimento ou da água potável.

() bacteriófago d»CJ-20 ou a composição contendo o mesmo utilizada como aditivo 10 alimentar ou para água potável de acordo com a presente invenção pode ser usado na forma líquida ou seca, preferivelmente em forma de pó seco.

Um método de secagem para a preparação do aditivo alimentar e do aditivo para água potável sob a.forma de pó seco de acordo com a presente invenção não apresenta limitações e um método comumente utilizado pelos peritos na arte pode ser utilizado. Como exemplos 15 não limitaíivos- do método de secagem, podemos usar um método de .secagem natural com ar, um método de secagem natural, um método de secagem por pulverização, um método de secagem por congelamento, -ou métodos similares. Um destes métodos pode ser utilizado sozinho ou pelo menos dois destes métodos podem ser utilizados em conjunto.

Outro micróbio não patogênico pode ser adicionado ao aditivo alimentar ou aditivo 20 para água potável. Como exemplo não restritivo do micróbio a ser adicionado, é possível escolher um micróbio selecionado dentre um grupo compreendendo .ZWl/Zuv sp., capaz de •produzir, protease, lipase e/ou enzima de conversão de açúcar, tal como ZtodZ/í/x &ΦόΖΑ ou similares; um s/x com atividade fisiológica e atividade de degradação para um material orgânico em condições anaeróbicas, tal como o estômago de vaca; fungo de mofo 25 com capacidade de aumentar o peso de um animal doméstico, a produção de leite, e a

13/28 digestão de alimentos eomo orgsw, ou similares; e leveduras como

Srec/mromyces' cewãte, ou similares, Um ou a combinação de pelo menos dois destes micróbios podem ser utilizados.

O aditivo alimentar ou aditivo para água potável contendo o bacteriófago 4>CJ20 como ingrediente ativo, de acordo com a presente invenção, pode ainda conter outros aditivos, conforme necessário. Como um exemplo não restritivo de aditivo., é'possível. utilizar um aglutinanfe, um emulsifieante, um conservante, e .similares, os quais são adicionados para evitar a deterioração do alimento ou da água; amínoácidos, vitaminas, enzimas, probíóticos, agentes aromatizamos, composições nitrógenadas nâo proteicas, silicates., soluções tampão., 10 agentes corantes, agentes extra (antes, oligossacarídeos, e similares, que são adicionados de modo a. aumentar a utilidade do alimento ou da água potável. O aditivo pode incluir ainda um agente de mistura para alimentes., ou similar. Um ou a combinação de pdo menos dois destes aditivos podem ser utilizados.

O aditivo alimentar pode ser adicionado num. teor de 0,05 a 10, preferivelmente de 0,1 15 a 2 partes por peso. com base em 100 partes por peso do alimento. O aditivo para água potável pode ser adicionado num teor entre 0,(XKH a 0,01, preferivelmente de 0,001 a 0,005 partes por peso com base em 100 partes por peso de água potável A atividade do bacteriófago ΦΟ'20 contra a ETEC pode ser suficientemente demonstrada nas faixas acima mencionadas..

Em outro aspecto geral, a presente invenção proporciona um alimento ou água potável preparados pela adição de um aditivo alimentar ou de água potável contendo o bacteriófago ΦΟ20 eomo ingrediente ativo, ou pela adição direta do bacteriófago ΦΟ20.

O alimento utilizado na presente invenção náo apresenta limitações, de tal sorte qüe qualquer outro alimento comumente usado pelos peritos na arte pode ser utilizado. Um 25 exemplo não restritivo do alimento pode incluir alimentos vegetais eomo grãos, raízes e

14/28 íhuas, subprodutos de processamento de alimentos, algas, fibras, subprodutos farmacêuticos, gorduras, amidos, eucurbitáceas- ou subprodutos de cereais; e alimentos para animais, tais como proteínas, materiais· inorgânicos, gorduras, minerais, proteínas de células individuais, plânctons animais ou alimentos. Um ou a combinação de pelo menos dois destes alimentos.

podem ser utilizados.

A água potável usada na presente invenção não apresenta limitações, de tal sorte que qualquer água potável pode ser usada na presente invenção.

Em outro aspecto- geral, a presente invenção pode fornecer um desinfetante ou um. produto de limpeza contendo o bacterióihgo $CJ20 como um ingrediente ativo.· Uma 10 formulação do desinfetante ou produto, de limpeza não apresenta limitações, de tal sorte que o desinfetante ou o produto de limpeza podem ser preparados com qualquer formulação conhecida na arte.

O desinfetante pode ser pulverizado de modo a eliminar a ETEC em uma região onde vivem os animais, em um matadouro, em. uma área, de mortalidade, em uma cozinha ou em 15 um equipamento-de cozinha, ou similares, não estando a presente invenção limitada a estes exemplos.

Em outro aspecto geral, a presente invenção proporciona um método de prevenção ou tratamento de doenças infecciosas utilizando o bacteriófago Φ€.Ι20 ou a composição contendo o bacteriófago ΦΟ20 como um ingrediente ati vo.

21) Especifícamente, o método de prevenção- ou tratamento de doenças infecciosas de acordo com a presente invenção pode incluir a administração do bacteriófago ΦΟ20 ou da composição contendo o bacteriófago 0CJ2O como ingrediente ativo para animais infectados por ETEC ou que estejam expostas a risco de infecção por ETEC, exceto humanos, em uma dosagem farmacêutica eficaz. Será perféitamente compreendido pelos peritos na arte que, quando a composição farmacêutica e administrada ao paciente, a dose total diária adequada

15/28 pode ser determinada por um médico assistente ou veterinário de acordo com sua avaliação médica.

Uma dose especifica farmaceutícamente eficaz do bacteriófago- ΦΟ20 ou da composição contendo o bacteriófago ΦΟ20 como ingrediente ativo para um determinado 5 animal, pode ser determinada considerando-se o tempo de administração e a. via de administração do bacteriófago 4>C.I20 ou da composição contendo o bacteriófago <DCJ20, uma taxa de secreção da composição, o período de duração do tratamento, ou fatores similares, somados ao tipo e ao grau de resposta desejada, a idade, peso, estado geral de saúde, sexo, ou dieta de determinado animal.. Além disso, a dose farmaceutícamente eficaz 10 pode ser alterada de acordo com diversos fatores, tais como os ingredientes das drogas ou de outras composições usadas simultaneamente ou separadamente, e- outros fatores similares bem conhecidos no campo médico,

O bacterióta-go 4>CJ20 de acordo com a presente invenção ou a composição contendo o bacteriófago ΦΟ20 como ingrediente ativo pode ser administrado como uma forma 15 farmacêutica (spray nasal) para-animais ou aplicado direíameníe em um alimento ou na água potável dos animais. Além disso, o bacteriófago $CJ2Ô ou a composição contendo o mesmo podem ser misturados em uni alimento ou na água potável em forma de aditivo alimentar ou aditivo para água potável, e então administrados.

A via de administração e o método de administração do bacteriófago 9>CJ20 de 20 acordo com a presente invenção ou da composição contendo o bacteriófago $CJ20 como ingrediente ativo não são especificamente limitadas, mas qualquer via de administração e método de administração podem ser utilizados, desde que o bacteriófago ®CJ20 ou a composição contendo o mesmo possam chegar ao tecido desejado. Isto é, o bacteriófago <&C.!2Ü ou a composição contendo o bacteriófago <bCJ20 como o ingrediente atívo pode, ser 25 administrado através de várias vias oral ou parentérica. Como um exemplo não restritivo da

16/28 via de administração, é possível utilizar a via oral, retál, local, intravenosa, Intraperitoneal, intramuscular, Intra-arterial, subcutànea e administração nasal ou inalação.

Λ seguir, a presente invenção- será descrita em detalhes através de exemnlos. No entanto, estes exemplos visam apenas ilustrar a presente invenção sem o propósito d.e limitar 5 o escopo da presente invenção aos exemplos apresentados.

[Exemplo 1] Isolamento do bacteriófago infectando ΕΊΈ€ <ExempIos 1-1>

Seleção dp .bacteriófago e isolamento de utp único bacteriófago

Foi obtida uma amostra de 50sid de fezes-de parco e amostras colhidas no ambiente da. 10 Sa-mwbam Gps. Breeding Agri, na área de Gwangcheon, Hong seong-gun, na província de Chungchong, República da. Coréia, e as amostras foram centrifugadas a 4.000 rpm por 10 minutos, o sobrenadante foi filtrado com um filtro de 0,45.» para preparar ama solução de amostra, e depois um método de sobreposição de ágar macio foi realizado utilizando a solução de amostra preparada. O método de sobreposição de ágar macio é um método de 15 observação de urna ação de Use do bacteriófago utilizando células hospedeiras, crescendo em ágar de supçrfieie (sobre um meio sólido com 0.77o de ágar).

.Eapec-ificamente, íSsé’ de amostra filtrada foi misturada com ISOfa? de uma .solução agitada da cultura (OfW 2) de ETEC (SNU105) foi obtida do Colégio de Medicina Veterinária da Universidade Nacional de Seoul e 2®(? de meio 1.0.x L-uria Bertani (LB) .20 (triptona 10 g/l; extrato de levedura 5 g/I e NaCI 10 g/l) e cultivada a 30^c’C por 18 horas. Em. seguida, a solução da cultura foi centrifugada a 4.000 rpm por 10 minutos e o sobrenadante foi filtrado eotn filtro de 0.4ffa®, Em seguida, depoi-s que uma mistura de .W de ágar á 0,7% (vv/v) e IJOuá d.a solução agitada da cultura (OEfav “ 2) de ETEC(SNU105) foram vertidas e endurecidas muna placa eom meio LB, HW da. solução de amostra foi derramada sobre a

17/28 placa, seguida por cultura a 3O’'C por 18 horas. Em seguida, confirmou-se que uma placa foi formada.

Considerando que um único tipo de bacteriòfago estava presente numa única placa, tentou-se isolar utn único bacteriòfago da placa formada. Espccificamcntc, a placa foí S colocada em 4õ0ífe de uma solução SM [NaCl (5,8 g/Γ}; MgSOJl-feO (2g/l) IM Tris-Cl (pH 7,5/5(W)] e deixada à temperatura ambiente durante 4 horas, obtendo assim a. solução do bacteriòfago. Em seguida, WOué da solução do bacteriòfago foi misturada com 5sfe de 0,7%(w/v) de ágar e 150ρίί da solução agitada da cultura (OD®, ~ 2) de ETEC(SNU 105), seguida pela realização do método de sobreposição em ágar macio usando um meio EB com 10 um diâmetro de 150 mm.. A cultura foi realizada até que a ETEC fosse complet-amente Usada. Após o término da cultura, Safe da. solução SM foram adicionados ao meio L.B e deixados á temperatura ambiente por um período de 4 horas, obtende assim a solução do bacteriòfago.

Após a solução ser recuperada, foi adicionado clorofórmio numa quantidade de 15 l%(vZv) e misturada durante 10 minutos, seguida por centrifugação a 4,000 rpm por 10 minutos, obtendo assim o sobrenadante. O sobrenadante obtido foi filtrado com um filtro de 0.45/im, obtendo-assim uma amostra final.

Cultmmn,graudg escala e purificação do bacteriòfago

O bacteriòfago obtido no Exemplo- 1-1 foi cultivado em grande escala utilizando

ETECX.SN1J105) e, em seguida, o bacteriòfago foi purificado.

Especifícamenle, depois que a cultura de ETEC(SNIJIOS) foi agitada, uma alíquota de l,5xl0^K‘cfu foi centrifugada a 4.000 rpm durante 10 minutos e depois ressuspensa em 4fa?

de solução SM. O bacteriòfago de 1,5x10* pfu foi inoculado [multiplicidade de infecção

18/28 (MOI) ~ 0,0001 J, e deixado em temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, a solução foi inocolada em I 50$<? da média LB e cultivado a 3Q*’C durante 5 horas.

Após a conclusão da cultura, foi adicionado clorofórmio numa quantidade de í%(v/v) do volume finai e o material mexido durante 20 minutos. Em seguida, foram adicionadas enzimas de restrição DNase 1 e RNase A para obter uma concentração final de lud/nfo. respectivamente, e a solução foi deixada a 3O⁰C durante 30 minutos. A seguir, foram adicionados. NaCl e glicol polietileno (PEG) para obter concentrações finais de IM e 10¾ (w/v), respectivamente, e em seguida a solução foi deixada a 4°C durante 3 horas, seguida de uma centrifitgação a 4*C e 12.000 rpm por um periodo de 20 minutos, obtendo assim os precipitados.

O precipitado obtido foi ressuspenso em 5úE da solução SM e foi deixado em temperatura ambiente durante 20 minutos» Em seguida, foi adicionado hte de clorofórmio e a solução mexida, seguida por uma cenírífugaçào a 4°C e 4.000 rpm durante 20 minutos, obtendo- assim o sobrenadante. Em seguida, o sobrenadante foi filtrado com um filtro de 0,45 a®. e foi realizada uma ultracentrifugação (35,000 rpm, l hora, 4°C) utilizando um método de gradiente de densidade de giicerol (densidade: 40%, .5% de giicerol), purificando assim o bacteríófago.

Os inventores da presente invenção denominaram o bacteríófago· obtido através da amostra de fezes de porcos com atividade bactericida especifica contra a ETEC de ’’Bacteríófago foCJSO, e depositaram o bacterióibgo no Centro Coreano de Cultura de Microrganismos (361-221. Hongjedong, Seodamun~gu, Seoul, Republica da Coréia) como am número de depósito KCCMI1362P em 30 de janeiro de 2013.

«Exemplo 2>

Exame.de in^

19/28

A fin? de confirmar se o bacteriófago <bCJ20 purificado no Exemplo I to ou não atividade Utica nas espécies de £'.co/r outras que a ETEC(SNUI05), foram realizadas infecções cruzadas com outras espécies de Exo/E

Espeeifícamente, dois tipos de estirpes de ETEC (SNUJG280 e SNIJ105) e 11 tipos 5 de estirpes nâo-patogênicas de £ten£ [MC4I00, BL2HDE3), Rosetta (DE3), 2616, 281, 1917, DH5a. GM2929, Tuner íDEM W31W e KI2GJ foram cultivadas, respeciivamente, obtendo assim soluções de cultura. Em seguida, cada uma das soluções de cultura e do bacteriófago Φ€)20 purificado foram usadas para realizar o método- de sobreposição de ágar macio, para confirmar se. uma placa foi ou não formada.

Os resultados estão ilustrados na Tabela 1 a seguir.

[ Tabela l ]

Scrotipu	iEstirpe	formação de placa
	feçatou	o
	BL2UDE:ç	o :
	iRoseQaf Dp3j	o
	.fe í s	* i
	2X1	& i : · ________________________1_____________________________________________________________________________
£.cí.fe aS.<?-p3togênfe<i	) 917	b ϊ : :
	•____________________________
	DHSíí	f^! 1
		Q
	Turner	0
	W3U(í	^â
	E12G	P
	6NUJG2SÍ)	»
ETEC		......................L............................................................................
	SNT405	9

Conforme demonstrado na Tabela 1, foi confirmado que o bacteriófago foCJ20 purificado no Exemplo 1 possui atividade lítica em 9 tipos de estirpes não-patogênicas de £Wr [MC4100, BE2UDE3), Rosetta (DE3), 1917., DH5a* GM2929, Timer (DE3), W3110 e KI2G], mas- não possuí atividade lítica nos outros 2 tipos de estirpes não-patogênicas de 5 E.c&b (2616 e 281) dentre as estirpes não-patogênicas de E.co/í.

QbsÇfo3ÇãpjrmrfoJógfo§dp..MiJ20

O bacteriófago foCJ20 purificado no Exemplo 1 foi diluído em solução de gelatina a 0,01 % e em seguida, fixado em 2.5% de solução de giufaraldeído. O bacterióíhgo fixado foi 10 derramado sobre uma placa de mica revestida com carbono (cerca de 2,5 mm x 2,5 mm) durante 10 minutos e lavado com água destilada estéril. Uma película de carbono foi disposta sobre uma grelha de cobre, tingida com 2% de acetato de uramlo durante 30 a 6.0 segundos, seca, e observada através de um microscópio de transmissão de elétrons (JE.M-101.1, 80 kV, a ampliação: X 120.000 para. X200.000) (HG.1).

FIG. 1 mostra uma fotografia do bacteriófago ΦΟ20 feita pelo microscópio de elétrons. Foi possível observar que, como o bacteriófago ΦΟ20 tem ama eápside isoméiriea, mas não tem cauda, o bacteriófago ΦΓ.Ι20 pertence mor fofogi cam ente à PrWov/Fãfef.

< Exemplo 4>

A„an&isg..do.MmanhJo DNA..genôaiicodp4>CJ20

O DNA genômico foi extraído a partir do bacteriófago <PCJ20 purificado no Exemplo

l.

Especificamente, ,20mM do ácido e(íle.nodiammotetraçêtiço (EDTA), 50ug / de proteinase K. e 0,5%. (w/v) de dodecilsullàto de sódio (SDS) foram adicionados a uma solução da cultura do bacteriófago ΦΟ20 purificado e foram deixados a 50 ^aC durante 1 25 hora. Um volume igual de feno! (pH 8,0) foi adicionado, agitou-se, seguida de centrifugação

21/28 em temperatura ambiente e 12.000 rpm durante 10 minutos, obtendo-se assim .um sobrenadante.

O sobrenadante foi misturado com um volume Igual de PC (fenol: clorofórmio -kl) e centrifugado em temperatura ambiente e 12.000 rpm durante 10 minutos, obtendo-se assim 5 um sobrenadante. O sobrenadante fói misturado com um volume igual de clorofórmio e centrifugado em temperatura ambiente e ! 2.000 rpm por 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante. O sobrenadante -obtido foi misturado sequencialmente com 10% (v/v) de acetato de sódio 3M e um duplo volume de etauol frio a 95%. com base no volume total, e deixado a -20*C durante l hora. Subsequentemente, a centrifugação foi realizada a 0% e 1.0 12.000 rpm por 10 minutos, e o precipitado foi obtido por remoção do sobrenadante. Em seguida, 5(W -de Tris-EDTA (TE) solução tampão (pH 8,0) foi adicionado à mesma, pára assim dissolver o precipitado obtido. O DNA extraído foi diluído 10 vezes, e uma concentração foi mensurada medindo-se a absorção em OD^..

Em seguida, lc® de DNA foi carregado em 1% de eletroforese em gel de campo .1.5 pulsado (PFGE), em gel de agarose, e a eletroforese foi realizada em temperatura ambiente durante 20 horas utilizando um programa de sistema BIOllAD PEGE programa 7 (tamanho: 2.5-100 kb; tempo de comutação rampa: 0,4-2,0 segundos, forma linear; tensão direta: 180V; tensão inversa: 120 V) (FIG. 2).

A FIG. 2 é uma fotografia da eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) do DNA 20 genômíeo do bacteriófago ΦΟ20, onde pode ser confirmado que o DNA genêmico do bacteriófago 4>CJ20 tem um tamanho de cerca de 40kb. Na FIG. 2, M é o D'NA que se toma padrão para medir o peso molecular.

«Exemplo 5>

Análise do paddejaprotema .ύοΦΟ20

15u/ da solução do bacteriófago ΦΟ2() purificado em título 10^W pfu/W foi misturada com 3ué'· de uma solução de amostra 5X SDS, e aquecida durante 5 minutos. Em seguida 12%de SDS-PAGE foram processados (FIG. 3),

FIG. 3 é uma fotografia da eletrofbrese mostrando o resultado da SDS-PAGE realizada no bacteriófago ΦΟ20, e proteínas principais com tamanhos de cerca de 46,5 kDa, 43kDa, 39,5kDa e 17,1 küa foram observadas.

Análise das características genéticas do Φ€.',Ι20

A fim. de confirmar as características genéticas do bacteriófago ΦΟ20 purificado no

Exemplo .1, o DNA do bacteriófago $CJ20 foi analisado utilizando um sequenciador de titânio FLX (Roche), que é um aparelho de análise do gene. Genes foram montados em Macrogen INC utilizando- GS e o -software »w>- aemvzíder’ (Roche). A análise da sequência de um quadro aberto de leitura foi realizada. utilizando GeneMArk.hmm, G.límmer v3.O2, e o software FGENESB. A Identificação do quadro aberto de leitura- foi realizada usando BLAST? e o programa lntet?roScan.

A sequência do genoma do bacteriófago obtido apresentou várias semelhanças com as dos bacteriófagos existentes, mas foi confirmado que um bacteriófago com iodas as frações foram totalmente (100%) iguais ãs do bacteriófago da presente invenção nlo existia. Deste modo, ficou confirmado que um novo bacteriófago de acordo com a presente invenção foi 20 isolado.

A Tabela 2 representada a seguir mostra os resultados obtidos pela comparação de homólogos da sequência do geooma do baeteriólugo 4>ÇJ20 e sequências decodificadas de genomas de outros bacteriófagos» estando a sequência, parcial do genoma do ΦΟΙ20 ilustrada a seguir.

[Tabela 2]

23/28

			Objeta		Ídeaiiíisrfgs
X'ottHJ	Compri íBCíHò	ÍBÍSiO	6im	Oeseeteáo	K-V»l«e	Match.·'! <s:si	Pf.t. ‘‘Μ
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Veja [sequência do geuoma parcial do 4>C120| em anexo.

xExempIo 7>

Ieste.de estebífidadedo^^

26/28

A fim de confirmar a estabilidade do. bacteriófago ΦΟ20 em um ambiente de baixo pfl no estômago, foi realizado o teste de estabilidade sobre uma larga gama de pH (pH .3,0 / 3,5 / 4,0/5,5 / 6,4 / 7,5 / 8,3 / 9.2 e 11,0).

Para o teste, várias soluções de p-H {solução tampão de acetato de sódio (pH 4,0 / pH 5 5.5 e pH 6,4), solução tampão de cítrato de sódio CpH 3,0 e pH 3,5), solução tampão de fosfato de sódio (pH 6,9 c pH 7,4), e uma solução de Trís-HCI (pH 8,2 / pH 9,0 / pH 9,8 e pH I '1,0)] foram preparadas a uma concentração de 0,2. M, respectivamente.

Em seguida, 180í.fo de cada uma das soluções de pH foi misturada com 2(W de solução do bacteriófago com um título de 2.1X10*^í: ptu/m£ de modo que uma concentração de 10 cada solução de pH tomou-se 1 M, e cada uma das soluções de pH foi deixada em temperatura ambiente durante 2 heras. Em um grupo de controle. 20n4‘ da solução do bacteriófago (2.1xI0^;'^! pRfofo) foi misturada com 18(W da solução SM e deixada em temperatura ambiente durante 2. boras. Em seguida, a solução reacional foi diluída .passo a passo, IM da solução diluida em -cada passo foi derramada e cultivada a 30°C durante 18 1.5 horas através do método, de sobreposição em ágar macio, e o título foi medido através da presença pu ausência de lise (FIG. 4).

A FIG. 4 mostra um resultado do teste de resistência ao ácido do bacteriófago

Como mostrado na. FIG. 4, pode ser confirmado que o bacteriófego foCJ20 não perde a sua atividade e permaneceu estável em um intervalo de pH de 5,0 a 11.0 quando- comparado ao 20 grupo de etmtroíe.

Teste de estabilidade do foCJ2Q dependendo da temperatura

Foi realizado um teste para confirmar a estabilidade contra o calor gerado durante o processo de formulação do bacteriófago no caso de usar o hacteriôlágo como uma 25 formulação de aditivo alimentar dentre as formulações do bacteriófago.

Especifcamente. 1 OOM? da solução do bacteriófago ®CJ20 com uma concentração de

2,0X10¹''' pfivW foi deixada a 37°Q 42^:’C, 53°C e 60°C durante 0, 30, 60 e 120 minutos.

respectivamente. .Então as soluções- acima foram diluídas passo a passo. de cada uma das soluções diluídas em cada passo foram derramadas e cultivadas a 30^eC durante 18 horas através de um método de sobreposição em âgar macio, e o título foi medido através da presença ou ausência de lise (FIG. 5).

A FIG. 5 mostra um resultado de um teste de resistência ao calor do bacteriófago Φ(.Ι20. Coroo- mostrado- na FIG. 5, o bacteriófago ΦΟ.Ι20 manteve- sua atividade mesmo quando foí exposto a 53*C por mais de 2 horas, mas· sua atividade foi reduzida quando exposto à temperatura de 61F^!C, «Exemplo q>

Iéste.de.espearo. dejnfeeçãoJe.feOMmn..MãÊâo.â.eMweLdâGiEfo^lv^n.Jg

A fim de determinar se-o bacteriófago $CJ20 possui ou não atividade lítiea, foram realizados testes em 15 estirpes selvagens de ETEC obtidas da Escola de Medicina Veterinária da Universidade Nacional de Seoul e da Uni.versi.dade de Guelph no Canadá, outras que a ETEC(SNU 105) utilizada no experimento.

Especiflcàmente, 1(W de solução do- bacteriófago Φ€Ι20 com um título de 10'pfoME foi misturada com uma solução de 150rú de cultura agitada (OD&xi ” 2) de cada, uma da®

20' estirpes, e em seguida foram derramadas e cultivadas a 30°C durante 1.8 horas através de um método de sobreposição em âgar macio. Em seguida, observou-se se uma placa, foi ou não formada.

Os resultados estão Ilustrados na Tabela 3 a seguir.

[Tabela 3]

28/28 $««ίπρα I ,irpe sna_vàn dv Fh«.a

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; :· &NÜÍÓ5......................................P........................................................................

SNrüíÁ....................................x[ : i§

SXS.8Í4V c...........~.~-.-™i \M ALSO ................8...... ..... ............... .............

SNUF4........................................b.......................................................................

SXii<>2......................................0........................................................................

LTEC 8NÜÍ60......................................b....................................................................j

SKI !0? b


CANRffS	.·>
5X1'2618	X
SNU26U	X
8NIÁ93	&
x\i
t.......-.........-..........-............................i.......................................................................... SM U20 p

Conforme demonstrado na Tabela 3. o bacteriófago demonstra infectividade em Fserotipo K88 (SNU105, SNUI.07, SNU 160., SNUI62, SNUF4, SNU3220, CAN.R.08, e SNUJG280) assim «ο ETEC O-serotipo 0149 (SNU107, SNUF4. SNUFG28O, SNU3220, CANR08, e SNU0149), que são as causas mais comuns de diarréia em suínos nas fazendas em .geral Portanto, podemos concluir que esperar que o bacteriófago apresentará excelente eficiência no momento da efetiva aplicação do bacteriófago.

Claims

BEiyiNMÇAGÔES

1. Um novo bacteriófago <&CJ20 (KCCMI 1362P), caracterizado por apresentar unia atividade bactericide especifica contra a .Evc&mdw cofi (ETEC).

2. Uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por

3. A composição de acordo com a reivindicação 2, earactreizada pelo, fato da doença infecciosa ser a coli.bacil.osg,

4. Um antibiótico, caracterizado por compreender o bacteriófago 4>CJ2() (KCCMI 130’) da 10 reivindicação l como um ingrediente ativo.

5. Um. aditivo alimentar ou um aditivo para água potável, caracterizado por compreender o bacteriófago <I>CJ2() (KCCMI 1362P) da reivindicação I como um ingrediente ativo.

ó.

Um desinfetante ou um produto de limpeza, caracterizado por compreender o bacteriófago <1>CJ2() (KCCMI 1362P) da reivindicação I como um ingrediente ativo.

15

7. Um método de prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por ETEC, caracterizado por compreender a administração do bacteriófago ΦΟ120 (KCCM I I.362.P) da reivindicação I ou da composição da reivindicação 2, para animais,, exceto humanos.

5 ETEC, caracterizada por compreender o bacteriófago <Í>CJ20 (KCCMI 1362P) da reivindicação I corno um ingrediente ativo.

8. O método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato da doença infecciosa ser a coiibacilose.