BR112014009890A2 - derivados de purina e seu uso no tratamento de doença - Google Patents

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Andreas Lerchner
Peter Meier
Branko Radetich
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Abstract

derivados de purina e seu uso no tratamento de doença. a invenção refere-se aos novos compostos heterocíclicos da fórmula (i) (i) em que todas as variáveis são como definidas na especificação, à sua preparação, ao seu uso médico, em particular ao seu uso no tratamento de câncer e distúrbios neurodegenerativos, e aos medicamentos compreendendo-os.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERI- VADOS DE PURINA E SEU USO NO TRATAMENTO DE DOENÇA". Campo da invenção
[001] A invenção refere-se aos derivados de purina e sais farma- ceuticamente aceitáveis dos mesmos, processos para sua preparação, seu uso no tratamento de doenças, seu uso, ou sozinhos ou em com- binação com pelo menos um agente terapêutico adicional e opcional- mente em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, para a fabricação de preparações farmacêuticas, uso das preparações farmacêuticas para o tratamento de doenças, e um método de trata- mento das referidas doenças, compreendendo administrar os deriva- dos de purina a um animal de sangue quente, especialmente um ser humano. Antecedentes da Invenção
[002] A superfamília de fosfatidilinositol-3-cinases compreende 4 diferentes proteínas cinase ou lipídios relacionados com PI3K. Classe |, Il e Ill são cinases de lipídio que diferem em virtude de de suas es- pecificidades de substrato enquanto as PI3SKs de classe IV (também chamadas PIKKs) são proteínas cinases. Fosfatidilinositol-3-cinases de classe | compreendem uma família de cinases de lipídio que catali- sa a transferência do fosfato para a posição D-3' de lipídios de inositol para produzir fosfoinositol-3-fosfato (PIP), fosfoinositol-3,4-difosfato (PIP2) e fosfoinosito|-3,4,5-trifosfato (PIP;3) que, por sua vez, age como segundos mensageiros nas cascatas de sinalização acoplando-se pro- teínas contendo homologia à plecstrina, FYVE, Phox e outros domí- nios de ligação de fosfolipídio em uma variedade de complexos de si- nalização, frequentemente na membrana de plasma ((Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)). Das PI3Ks de classe |, as PI3Ks de classe IA são heterodímeros compostos uma subunidade de p110 catalítica
(isoformas a, B, 5) constitutivamente associada com uma subunidade regulatória que pode ser p85a, p55a, p50a, p85B ou p55y. A subclasse de classe IB tem um membro de família, um heterodímero composto de uma subunidade de p110y catalítica associada com uma de duas subunidades regulatórias, p101 ou p84 (Fruman et al, Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998); Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)). Os domínios modulares das subunidades de p85/55/50 incluem os domí- nios de homologia à Src (SH2) que ligam os resíduos de fosfotirosina em um contexto de sequência específica em tirosina cinases citoplas- máticas e receptor ativado, resultando na ativação e localização de PI3Ks de classe IA. A PI3SK de classe |B é ativada diretamente por re- ceptores acoplados à proteína G que ligamum repetório diverso de |i- gantes de peptídeo e não peptídeo (Stephens et al., Ce//l 89:105 (1997)); Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)). Consequentemente, os produtos de fosfolipídios resultantes de PI3K de classe | ligam os receptores a montante com atividades celulares a jusante incluindo proliferação, sobrevivência, quimotaxia, tráfego celu- lar, motilidade, metabolismo, respostas alérgicas e inflamatórias, transcrição e translação (Cantley et a/., Cell 64:281 (1991); Escobedo e Williams, Nature 335:85 (1988); Fantl et al., Cell 69:413 (1992)).
[003] Na maioria dos casos, PIP, e PIP3 recrutam o Akt, o produ- to do homólogo humano do oncogênio viral v-Akt, para a membrana plasmática onde ele age como um ponto nodal para a maioria das sé- ries de reação de sinalização intracelular importantes para crescimento e sobrevivência (Fantl et al., Ce// 69:413-423(1992); Bader et al., Natu- re Rev. Cancer 5:921 (2005); Vivanco e Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)). A regulação aberrante de PI3SK, que frequentemente aumenta a sobrevivência através da ativação de Akt, é um dos even- tos mais prevalentes em câncer humano e mostrou-se ocorrer em múl- tiplos níveis. O gene supressor de tumor PTEN, que desfosforila os fosfoinositídeos na posição 3' do anel anel inositol e ao fazê-lo antago- niza a atividade de PI3K, é funcionalmente deletado em uma varieda- de de tumores. Em outros tumores, os genes para a isoforma p110a, PIK3CA, e para AKkt são ampliados e a expressão de proteína aumen- tada de seus produtos de gene foi demonstrada em diversos cânceres humanos. Além disso, mutações e translocação de p85a que servem para super-regulação o complexo de p85-p110 foram descritasm em cânceres humanos. Além disso, mutações de sentido incorreto somáti- cas em PIK3CA que ativam as séries de reação de sinalização a ju- sante foram descritas em frequências significantes em uma ampla di- versidade de cânceres humanos (Kang at al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005); Samuels et al., Science 304:554 (2004); Sa- muels et al., Cancer Cell 7:561-573 (2005)). Estas observações mos- tram que a desregulação de fosfoinositol-3 cinase e os components a jusante e a montante desta série de reação de sinalização é uma das desregulações mais comum associadas com cânceres humanos e doenças proliferativas (Parsons et al., Nature 436:792 (2005); Hennes- sey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)).
[004] alvo mamífero de rapamicina (mMTOR) é um membro da PI3K de calsse IV. MTOR constrói uma rede de sinalização que trans- duz os sinais de nutriente e vários outros estímulos para regular uma ampla faixa de funções celulares incluindo crescimento celular, prolife- ração, sobrevivência, autofagia, vários tipos de diferenciação e meta- bolismo. Em células mamiíferas, a proteína de mMTOR é constatada complexada em duas entidades distintas, chamadas de mMTORC1 e MTORC?2. O complexo de mMTORC1, isto quer dizer MTOR associado com raptor, foi o objeto de numerosos estudos. Ele é mMTORC1 que integra os fornecimentos de fator de nutriente e crescimento, e é por sua vez responsável pela regulação de crescimeto celular, principal- mente através de reguladores de síntese de proteína tais como 4EBP1 ou RPS6. A regulação de MTORC1 requer a ativação de PI3K e Akt para ativação, significando que MTORC1 é um efetor da série de rea- ção de PISK. mTOR quando associado no complexo 2 de mMTOR (MTORC2) mostrou ser responsável pela ativação de Akt por fosforila- ção de S473 (numeração de AKkt 1) (Sarbassov et al, Science 307:7098 (2005)). MTORC? é, portanto, aqui considerado como um ativador a montante de AKkt. Interessantemente mTOR pode, portanto, ser considerado como sendo importante tanto a jusante quanto a mon- tante de Akt. A inibição catalítica de MTOR pode, portanto, representar um modo exclusivo de controlar um bloqueio muito forte na série de reação de PISK-AKkt, controlando-se os efetores tanto a jusante quanto a montante.
[005] Uma ligação entre a autofagia e inibição de MTOR também demonstrou (Ravikumar et al., Nat Genet. 36(6):585-95 (2004)). A au- tofagia é essencial para homeostasia neuronal e sua disfunção foi li- gada à degeneração. A perda de autofagia em neurônios causa doen- ça neurodegerativa me camundongos (Komatsu et a/., Nature 441:880- 4 (2006); Hara et al., Nature 441:885-9 (2006)) sugerindo um papel crítico para autofagia para manter a homeostasia de proteína em neu- rônios. Doenças neurodegenerativas são caracterizadas por inclusões de proteínas mal duplicadas como uma das marcas. Indução de auto- fagia realça a depuração de proteínas mal dobradas e, desse modo, é proposta como terapia para proteinopatias neurodegenerativas.
[006] Doença de Huntington (HD) é um distúrbio neurodegenera- tivo dominante autossômico onde uma mutação de gene IT15 codifi- cando a proteína Huntingtina (Htt) à expansão de Poliglutamina em Exon1 de Htt. Agregação intracelular desta proteína Htt mutante e a- trofia cerebral (em particular córtex e estriato) são as marcas principais de HD. Ela clinicamente induz a distúrbio de movimento e disfunção cognitiva, além de distúrbios psiquiátricos e perda de peso.
[007] Inibição de mMTOR induz autofagia e reduz a agregação de Htt mutante e morte celular mediada por Htt mutante em modelos in vitro e in vivo de HD (Ravikumar et al, Nat Genet. 36(6):585-95 (2004)). A inibição de MTOR, portanto, fornece uma oportunidade para intervenção farmacêutica e modulação dos processos celulares inter- rompidos característicos de HD.
[008] Em vista dos acima, inibidores de MTOR são considerados ser de valor no tratamento de doenças proliferativas, tais como câncer, e outros distúrbios, em particular, HD.
[009] A presente invenção se refere aos novos derivados de puri- na tendo atividade inibitória de MTOR, sua preparação, uso médico e aos medicamentos compreendendo-os. Sumário da Invenção
[0010] Em um primeiro aspecto, a invenção se refere a um com- posto de fórmula (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mes- mo, Ps Non RE o a MA wo 1
RGE OE (1) em que R' é selecionado do grupo que consiste em EF,
FR ÁS FR ES So PS Es . Reis — ú re ú e. ú
(RP), , Hn"N HN BAD 2) Di É = Roo RA : em que
R'*? em cada ocorrência independentemente representa flú- or ou metila;
m representa O, 1, 2 ou 3;
R** e R?º independentemente representam hidrogênio ou flúor;
R?' representa flúor;
R?? em cada ocorrência independentemente representa flú- or, metóxi, hidroximetila ou metoxicarbonila;
q representa O, 1 ou 2 e r representa O, 1, 2 ou 3 contanto que q + r não seja O;
R?, R?à, Rº, Rà, Rº, R/, Rº e Rº independentemente repre- senta hidrogênio, C, 3alquila ou fluoro-C, zalquila; ou Rº e Rº juntamen- te formam uma ponte de metileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etileno;
n e p independentemente representam O, 1 ou 2;
R*º, RU, RP, R$, R$, RÉ, R$ e R em cada ocorrência in- dependentemente representam hidrogênio, C,i3alquila, fluoro-C,. zalquila ou hidróxi-C,.3alguila; ou R'* e R'* juntamente formam uma ponte de etileno; ou R*? e R** juntamente formam uma ponte de etile- no; ou R** e R*, juntamente com o átomo de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidropiranila; e
Y representa O, CHR?, CR2R?º ou NR”,
em que
R? representa hidroxila ou fluoro-C,.3alquila; ou R? e R”?, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidrofuranila fundido; R* e R* independentemente representam hidrogênio ou halogênio; ou Rº e R”, juntamente com o átomo de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra- hidropiranila; e R?º representa C,.;alquila ou oxetanila; e
[0011] um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, selecionado da seguinte lista de compostos: 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-[1 4Joxazepan-4- il-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(3-propil-morfolin- 4-i1)-9H-purina; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-i1]-8- aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-i1]-8- aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 2-(3-etil-morfolin-4-il)-8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4- il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-metil-piperazin- 1-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(6-0xa-2-aza- spiro[3.5]non-2-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-oxetan-3-il- piperazin-1-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(tetra-hidro- furo[3 ,4-c]pirrol-5-il)-9H-purina; 2-(hexa-hidro-furo[3,4-c]piridin-5-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-2-(3-isopropil-morfolin-4-i1)-6-(3-metil-
morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-trifluorometil- piperidin-1-il)-9H-purina; 2-(2,6-dimetil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(7-0Xxa-1-aza- spiro[3.5]non-1-il)-9H-purina; f4-[8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-2-il]- morfolin-2-il)-metanol; e 14-[8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-2-il]- morfolin-2-il)-metanol. Definições
[0012] Como usado aqui, o termo "halogênio" ou "halo" se refere um flúor, cloro, bromo, e iodo.
[0013] Como usado aqui, o termo "C,.;zalquila" se refere a uma porção hidrocarboneto não ramíificado ou ramíificado totalmente satu- rado tendo tendo até 3 átomos de carbono. Exemplos representativos de C,.3alquila incluem metila, etila, n-propila e iso-propila.
[0014] Como usado aqui, o termo "hidróxi-C, zalquila" se refere a um grupo C,.zalquila como definido aqui acima, substituído por um ra- dical hidróxi. Exemplos representativos de hidróxi-C,.salquila incluem, porém não estão limitados à hidroxil-metila, 2-hidróxi-etila, 2-hidróxi- propila e 3-hidróxi-propila.
[0015] Como usado aqui, o termo "fluoro-C,.3alquila" se refere a um radical C,.zalquila, como definido acima, substituído por um ou mais radicais flúor. Exemplos de fluoro-C,.3alquila incluem trifluorome- tila, difluorometila, fluorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 1-fluorometil-2- fluoroetila e 3,3-difluoropropila.
[0016] Como usado aqui, o termo "um, uma (a)," "um, uma (an),;" "o, a" e termos similares usados no contexto da presente invenção
(especialmente no contexto das reivindicações) devem ser construídos para abranger tanto o singular quanto plural a menos que de outro modo indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto. O uso de quaisquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, "tal como") fornecidos aqui, destina-se meramente a melhor iluminar a invenção e não representar uma limitação no escopo da invenção de outro modo reivindicado.
[0017] O termo "os compostos da presente invenção" (a menos que especificamente identificado de outro modo) refere-se aos com- postos de fórmula (1), compostos dos exemplos, sais farmaceutica- mente aceitáveis de tais compostos, e/ou hidratos ou solvatos de tais compostos, bem como, todos os estereoisômeros (incluindo diastere- oisômeros e enantiômeros), tautômeros e compostos isotopicamente rotulados (incluindo deutério). O termo "agentes da invenção" destina- se a ter o mesmo significado como "os compostos da presente inven- ção".
[0018] Como usado aqui, o termo "inibir", "inibição" ou "inibindo" se refere à redução ou supressão de uma determinada condição, sinto- ma, ou distúrbio, ou doença, ou um significante descréscimo na ativi- dade de linha de base de uma atividade ou processo biológico.
[0019] Como usado aqui, o termo "isômeros" se refere a diferentes compostos que têm a mesma fórmula molecular, porém diferem na disposição e configuração dos átomos. Também, como usado aqui, o termo "um isômero ótico" ou "um estereoisômero" se refere a quais- quer uma das várias configurações estéreo isoméricas que podem e- xistir para um determinado composto da presente invenção e incluem isômeros geométricos. Deve-se entender que que um substituinte po- de ser ligado em um centro quiral de um átomo de carbono. O termo "quiral" se refere às moléculas que têm propriedade de não sobreponi- bilidade em seu par de sua imagem refletida, enquanto o termo "aqui-
ral" se refere às moléculas que são sobreponíveis em seu par de ima- gem. Portanto, a invenção inclui enantiômeros, diastereômeros ou ra- cematos do composto. "Enantiômeros" são um par de estereoisômeros que são imagens refletidas não sobreponíveis umas das outras. Uma mistura de 1:1 de um par de enantiômeros é uma mistura "racêmica". O termo é usado para designar uma mistura racêmica onde apropria- do. "Diaestereoisômeros" são estereoisômeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, porém que são imagens não refletidas uns dos outros. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema Cahn- Ingold- Prelog R-S. Quando um composto é um enanti- ômero puro, a estereoquímica em cada carbon quiral pode ser especi- ficada por R ou S. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida, podem ser designados (+) ou (-) dependendo da dire- ção (dextro- ou levogiratório) na qual eles giram a luz polarizada plana no comprimento de onda de linha D de sódio. Certos compostos des- critos aqui, contêm um ou mais eixos ou centros assimétricos e po- dem, desse modo, dar origem aos enantiômeros, diastereômeros, e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquímica absoluta, como (R)- ou (S)-.
[0020] Como usado aqui, o termo "veículo farmaceuticamente a- ceitável" inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensoativos, antioxidants, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotônicos, agentes de retardo de absorção, sais, conservantes, fármacos, estabi- lizantes de fármaco, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegra- ção, lubrificantes, agentes adoçantes, agentes aromatizantes, tinturas, e similares e combinações dos mesmos, como deve ser conhecido por aqueles versados na técnica (veja, por exemplo, Remington's Pharma- ceutical Sciences, 18 º Edição Mack Printing Company, 1990, páginas 1289 a 1329). Exceto à medida que qualquer veículo convencional é incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições tera- pêuticas ou farmacêuticas é contemplado.
[0021] Como usado aqui, o termo "prevenção" de qualquer doença ou distúrbio se refere à administração de um composto da invenção a um indivíduo, antes que quaisquer dintomas da doença ou distúrbio sejam evidentes.
[0022] Como usado aqui, os termos "sal" ou "sais" se referem a um sal de adição de ácido de um composto da invenção. "Sais" inclu- em em particular "sais farmaceuticamente aceitáveis". O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" se referem a sais que retêm a eficácia e propriedades biológicas dos compostos desta invenção e, que tipi- camente não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis.
[0023] Como usado aqui, o termo "indivíduo" se refere a um ani- mal. Tipicamente, o animal é um mamífero. Um indivíduo também se refere a, por exemplo, primatas (por exemplo, humanos, machos ou fêmeas), vacas, ovelhas, bodes, cavalos, cachorros, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixes, pássaros, similares. Em certas modalida- des, o indivíduo é um primata. Ainda em outras modalidades, o indiví- duo é um ser humano.
[0024] Como usado aqui, um indivíduo está "em necessidade de" um tratamento, se tal indivíduo se beneficiar-se biológica, medicamen- te ou em qualidade de vida a partir de tal tratamento.
[0025] O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente invenção se refere a uma quantidade do com- posto da presente invenção que eliciará a resposta biológica ou médi- ca de um indivíduo, por exemplo, redução ou inibição de uma enzima ou uma atividade de proteína, ou melhora de sintomas, alívio de con- dições, diminuição ou retardo da progressão de doença, ou prevenção de uma doença, etc. Em uma modalidade não limitante, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade do com-
posto da presente invenção que, quando administrada a um indivíduo, é eficaz para (1) pelo menos parcialmente aliviar, inibir, prevenir e/ou melhorar uma condição, ou um distúrbio ou uma doença (i) mediada por mMTOR ou (ii) associada com atividade de com mMTOR, ou (iii) ca- racterizada por atividade (normal ou anormal) de MTOR; (2) reduzir ou inibir a atividade de MTOR. Em outra modalidade não limitante, o ter- mo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrada a uma célula, ou um tecido, ou um material biológico não celular, ou um meio, é eficaz para pelo menos parcialmente, reduzir ou inibir a atividade de mMTOR. O significado do termo "uma quantidade terapeuticamente efi- caz" como ilustrado nas modalidades acima para mMTOR também se aplica do mesmo modo a quaisquer outras proteí- nas/peptídeos/enzimas relevantes, tais como PI3Ks de classe |V.
[0026] Como usado aqui, o termo "tratar", "tratando" ou "tratamen- to" de qualquer doença ou distúrbio refere-se em uma modalidade, à melhora da doença ou distúrbio (isto é, diminuição ou interrupção ou redução do desenvolvimento da doença ou pelo menos um dos sinto- mas clínicos da mesma). Em outra modalidade, "tratar", "tratando" ou "tratamento" se refere à modulação da doença ou distúrbio, fisicamen- te, (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologica- mente, (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambas. Descrição Detalhada da Invenção
[0027] A presente invenção fornece compostos e formulações far- macêuticas dos mesmos que, podem ser úteis no tratamento ou pre- venção de doenças, condições e/ou distúrbios modulados pela inibição de mTOR. Modalidade 1: um composto de fórmula (1), ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo, como descrito aqui anteriormente. Modalidade 2: um composto de fórmula (1), ou um sal farmaceutica-
mente aceitável do mesmo, cond. o Ee ST ;* E FS Ad i ss ea INES,
HO TRETA RE OR ARE
LED ÇA (1) em que R' é selecionado do grupo que consiste em vi $ Set et AARÃO (R), — HN i A A Rº É " Rº e (R2)/ ; em que
[0028] R'* em cada ocorrência independentemente representa flú- or ou metila;
[0029] m representa O, 1, 2 ou 3;
[0030] R** e Rº independentemente representa hidrogênio ou flú- or;
[0031] — R? representa flúor;
[0032] R*? em cada ocorrência independentemente representa flú- or, metóxi, hidroximetila ou metoxicarbonila;
[0033] q representa 0, 1 ou 2 e r representa 0, 1, 2 ou 3 contanto que q + r não seja O;
[0034] R?, Rºà, Rº, Rà, Rº, R/, Rº e Rº independentemente repre- senta hidrogênio, C,.3alquila ou fluoro-C.3alquila; ou Rº e Rº juntamen-
te formam uma ponte de metileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etileno;
[0035] n e p independentemente representam O, 1 ou 2;
[00368] — Rº, RU, R?, Rº, R$, R$, R$ e RU em cada ocorrência independentemente representam hidrogênio, C,;3alquila, fluoro-C,. zalquila ou hidróxi-C,.;alquila; ou R'* e R'º juntamente formam uma ponte de etileno; ou R*? e R** juntamente formam uma ponte de etile- no; ou R** e R*, juntamente com o átomo de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidropiranila; e
[0037] — Yrepresenta O, CHR??, CR?R* ou NR”,
[0038] em que
[0039] — R? representa hidroxila ou fluoro-C,.zalquila; ou R? e R"?, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidrofuranila fundido;
[0040] R** e Rº independentemente representa hidrogênio ou ha- logênio; ou Rº e R*, juntamente com o átomo de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidropiranila; e
[0041] — R% representa C, zalquila ou oxetanila.
[0042] Modalidade 3: um composto de acordo com a modalidade 1 ou modalidade 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R' representa a.
FAS Nel
[0043] Modalidade 4: um composto de acordo com a modalidade 3, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que m repre- senta O.
[0044] Modalidade 5: um composto de acordo com a modalidade 1 ou modalidade 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R' representa
= Rº ho
[0045] Modalidade 6: um composto de acordo com a modalidade 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R'* e Rºº both representam hidrogênio.
[0046] Modalidade 7: um composto de acordo com a modalidade 1 ou modalidade 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R' representa (Rº),
HN (RP
[0047] Modalidade 8: um composto de acordo com a modalidade 7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que q repre- senta O ou 1 er representa O, 1 ou 2.
[0048] Modalidade 9: um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R?, R?, Rº, Ré, Rº, R/, Rº e Rº independentemente re- presenta hidrogênio ou metila; ou Rº e R$ juntamente formam uma ponte de metileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etile- no; ou Rº e Rô juntamente formam uma ponte de etileno.
[0049] Modalidade 10: um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y representa O.
[0050] Modalidade 11: um composto de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y representa CHR?? ou CR2R”,
[0051] Modalidade 12: um composto, ou um sal farmaceuticamen- te aceitável do mesmo, de acordo com a modalidade 1, que é selecio-
nado de:
2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina;
2-(3-metil-morfolin-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-8-(1H- pirazol-3-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-[1 4Joxazepan-4- il-9H-purina;
8-[4-(1 H-Imidazol-2-il)-fenil]-2,6-bis-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purina;
8-(6-fluoro-1H-indol-4-i1)-2-(3-metil-morfolin-4-i1)-6-(3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina;
14-[2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-8-il]-1H-indol-6-il)- metanol;
2-(3-metil-morfolin-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il- 9H-purina;
2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina;
2,6-Di-morfolin-4-il-8-piridin-2-il-9H-purina;
2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-i1)-8-(1H-pirazol-3-il)-9H-purina;
2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)-8-(1H-pirazol-3-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(3-propil-morfolin- 4-i1)-9H-purina;
8-[8-(1 H-indol-4-il1)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-i1]-8- aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol;
8-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-i1]-8- aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol;
2-(3-etil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4- il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-metil-piperazin- 1-i1)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(6-0xa-2-aza- spiro[3.5]non-2-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-0xetan-3-il- piperazin-1-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(tetra-hidro- furo[3 ,4-c]pirrol-5-il)-9H-purina;
2-(hexa-hidro-furo[3,4-c]piridin-5-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-2-(3-isopropil-morfolin-4-il)-6-(3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-trifluorometil- piperidin-1-il)-9H-purina;
2-(2,6-dimetil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(7-0xa-1-aza- spiro[3.5]non-1-il)-9H-purina;
14-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-2-il]- morfolin-2-il)-metanol;
(4-[8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purin-2-i1]- morfolin-2-il)-metanol;
5-[2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-8-il]-piridin-2- ilamina;
5-[2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-8-il]-piridin-2- ilamina;
5-[2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-8-il]-pirimidin-2-il- amina;
8-[4-(1H-Imidazol-2-il)-fenil]-2,6-bis-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purina;
8-(6-metóxi-1H-indol-4-i1)-2-(3-metil-morfolin-4-il)-6-(3-metil- morfolin-4-i1)-9H-purina;
metil ésterdo ácido — 4-[2,6-Bis-(3-metil-morfolin-4-il)-9H- purin-8-il]-1H-indol-6-carboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[0052] Modalidade 12: um composto, ou um sal farmaceuticamen- te aceitável do mesmo, de acordo com a modalidade 1, que é selecio- nado de: 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina; 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-8- (1H-pirazol-3-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2- [1,4]oxazepan-4-il-9H-purina; 8-[4-(1H-Imidazol-2-i1)-fenil]-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4- il)-9H-purina; 8-(6-fluoro-1H-indol-4-i1)-2-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina; 14-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purin-8-il]-1H-indol- 6-il)-metanol; 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-8- piridin-2-il-9H-purina; 2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina; 2,6-Di-morfolin-4-il-8-piridin-2-il-9H-purina; 2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-8-(1H-pirazol-3-il)-9H- purina; 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-(1H-pirazol-3-i1)-9H- purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-((R)-3-propil- morfolin-4-il)-9H-purina; 8-[8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purin-2- i1]-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purin-2- i1]-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 2-((R)-3-etil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-
morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-metil- piperazin-1-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-11)-2-(6-0xa-2-aza- espiro[3.5]non-2-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-0xetan-3-il- piperazin-1-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(tetra-hidro- furo[3,4-c]pirrol|-5-il)-9H-purina;
2-(hexa-hidro-furo[3,4-c]piridin-5-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-2-((R)-3-isopropil-morfolin-4-il)-6-((R)-3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-11)-2-(4- triluorometil-piperidin-1-il)-9H-purina;
2-((28,6R)-2,6-dimetil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-11)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(7-0Xxa-1-aza- espiro[3.5]non-1-il)-9H-purina;
1(S)-4-[8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purin-2-il]-morfolin-2-il)-metanol;
1(R)-4-[8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purin-2-il]-morfolin-2-il)-metano]|;
5-[2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-8-il]-piridin-2- ilamina;
5-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-8-il]-piridin-2- ilamina;
5-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-8-il]-pirimidin- 2-il-amina;
8-[4-(1H-Imidazol-2-i1)-fenil]-2,6-bis-((S)-3-metil-morfolin-4-
il)-9H-purina; 8-(6-metóxi-1H-indol-4-i1)-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina; metil éster de ácido 4-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H- purin-8-il]-1H-indol-6-carboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[0053] Em razão de um ou mais de um átomo de carbon assimé- trico, que pode estar presente em um composto da fórmula (Il), um composto correspondente da fórmula (1) pode existir em forma otica- mente ativa pura ou na forma de uma mistura de isômeros óticos, por exemplo, na forma de uma mistura racêmica. Todos os tais isômeros óticos puros e todas as suas misturas, incluindo as misturas racêmi- cas, são parte da presente invenção.
[0054] Dependendo da escolha dos materiais de partida e proce- dimentos, os compostos podem estar presentes na forma de um dos possíveis isômeros ou como misturas dos mesmos, por exemplo, co- mo isômeros óticos puros, ou como misturas de isômeros, tais como misturas de racematos e diaestereoisômeros, dependendo do número de átomos de carbono assimétricos. A presente invenção destina-se a incluir todos os tais possíves isômeros, incluindo misturas racêmicas, misturas diastereoméricas e formas oticamente puras. Os isômeros oticamente ativos (R)- e (S)- podem ser preparados usando sintons quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos usando técnicas convencio- nais. Se o composto contiver uma ligação dupla, o substituinte poderá estar na configuração E ou Z. Se o composto contiver uma cicloalquila dissubstituída, o substituinte de cicloalquila poderá ter uma configura- ção cis- ou trans. Onde um composto compreendendo um ou mais centros quirais é representado aqui com a estereoquímica indicada na estrutura representada, em seguida o isômero ótico individual é pre- tendido. Onde um composto compreendendo um ou mais centros qui-
rais é representado aqui sem a estereoquímica indicada na estrutura representada, em seguida nenhum isômero ótico específico é preten- dido e a estrutura química representada pode representar qualquer isômero ótico ou mistura de isômeros tendo aquela estrutura, por e- xemplo, uma mistura racêmica ou diasteriomérica.
[0055] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos como um estereoisômero isolado em que o composto tem um es- tereocentro e o estereoisômero está na configuração R.
[0056] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos como um estereoisômero isolado em que o composto tem um es- tereocentro e o estereoisômero está na configuração S.
[0057] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos como um estereoisômero isolado em que o composto tem dois estereocentros e o estereoisômero está na configuração R R.
[0058] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos como um estereoisômero isolado em que o composto tem dois estereocentros e o estereoisômero está na configuração R S.
[0059] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos como um estereoisômero isolado em que o composto tem dois estereocentros e o estereoisômero está na configuração S R.
[0060] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos como um estereoisômero isolado em que o composto tem dois estereocentros e o estereoisômero está na configuração S S.
[0061] Em uma modalidade, é fornecido um composto dos exem- plos, em que o composto tem um ou dois estereocentros, como uma mistura racêmica.
[0062] É possível que os intermediários e os compostos da pre- sente invenção podem existir em diferentes formas tautoméricas, e todas as tais formas são abrangidas no escopo da invenção. O termo "tautômero" ou "forma tautomérica" se refere aos isômeros estruturais de diferentes energias que são interconversíveis por meio de uma bar- reira de baixa energia. Por exemplo, tautômeros de próton (também conhecidos como tautômeros prototrópicos) incluem interconversões por meio de migração de um próton, tais como isomerizações de ceto- enol e imina-enamina. Um exemplo específico de um tautômero de próton é a porção imidazol onde o próton pode migrar entre os dois nitrogênios de anel. Tautômeros de valência incluem interconversões por reorganização de alguns dos elétrons de ligação.
[0063] Os compostos da presente invenção podem ser capazes de formar sais de ácido em virtude da presença de grupos amino ou gru- pos similares a eles.
[0064] Em uma modalidade, a invenção se refere a um composto da fórmula (1) como definido aqui, em forma livre. Em outra modalida- de, a invenção se refere a um composto da fórmula (|) como definido aqui, em forma de sal. Em outra modalidade, a invenção se refere a um composto da fórmula (|) como definido aqui, em forma de sal de adição de ácido. Em uma outra modalidade, a invenção se refere a um composto da fórmula (1) como definido aqui, em forma de sal farma- ceuticamente aceitável. Ainda em uma outra modalidade, a invenção se refere a um composto da fórmula (|) como definido aqui, em forma de sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. Ainda em uma outra modalidade, a invenção se refere a qualquer um dos compostos dos exemplos em forma livre. Ainda em uma outra modalidade, a in- venção se refere a qualquer um dos compostos dos exemplos em for- ma de sal. Ainda em uma outra modalidade, a invenção se refere a qualquer um dos compostos dos exemplos em forma de sal de adição de ácido. Ainda em uma outra modalidade, a invenção se refere a qualquer um dos compostos dos exemplos em forma de sal farmaceu- ticamente aceitável. Ainda em outra modalidade, a invenção se refere a qualquer um dos compostos dos exemplos em forma de sal de adi-
ção de ácido farmaceuticamente aceitável.
[0065] Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis po- dem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, por e- xemplo, sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, brome- to/bromidrato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, canforsulfona- to, cloreto/cloridrato, clorteofilonato, citrato, etanodissulfonato, fumara- to, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, iodidrato/iodeto, iseti- onato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitra- to, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato de hidrogênio/fosfato de di-hidrogênio, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfossalicilato, tartarato, tosilato e trifluoroaceta- to.
[0066] Ácidos inorgânicos dos quais sais podem ser derivados in- cluem, por exemplo, ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido sul- fúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e similares.
[0067] Ácidos orgânicos dos quais sais podem ser derivados in- cluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandéli- co, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossul- fônico, ácido sulfosalicílico, e similares.
[0068] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sntetizados de uma porção acídica, por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados por rea- ção de formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são tipicamente realizadas em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois. Geralmente, uso de meios não aquosos, como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol, ou acetonitrila é desejável, onde praticá-
vel. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20 ? edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); e em "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002).
[0069] Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo seus sais, podem também ser obtidos na forma de seus hidratos, ou incluem outros solventes usados para sua cristalização. Os compostos da presente invenção podem inerentemente ou por planejamento for- mar solvatos com solventes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo água); portanto, pretende-se que a invenção abranja tanto as formas solvatadas e não solvatadas. O termo "solvato" se refere a um com- plexo molecular de um composto da presente invenção (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos) com uma ou mais molécu- las de solvente. Tais moléculas de solvente são aquelas comumente usadas na técnica farmacêutica, que são conhecidas ser inócuas para o receptor, por exemplo, água, etanol, e similares. O termo "hidrato" se refere ao complexo onde a molécula de solvente é água.
[0070] Compostos da invenção, isto é, compostos de fórmula (1) que contêm grupos capazes de agir como doadores e/ou receptores para ligações de hidrogênio, podem ser capazes de formar cocristais com formadores de cocristais adequados. Estes cocristais podem ser preparados de compostos de fórmula (|) procedimentos de formação de cocristais conhecidos. Tais procedimentos incluem moagem, aque- cimento, cossublimação, cofusão, ou contato em solução de compos- tos de fórmula (1) com o formador de cocristal sob condições de crista- lização e isolamento de cocristais, desse modo, formados. Formadores de cocristals adequados incluem aqueles descritos no WO 2004/078163. Portanto, a invenção também fornece cocristais com- preendendo um composto de fórmula (1).
[0071] Os compostos da presente invenção, incluindo sais, hidra- tos e solvatos dos mesmos, podem inerentemente ou por planejamen- to formar polimorfos dos mesmos.
[0072] Qualquer formula determinada aqui destina-se, também, a representar formas não rotuladas bem como formas isotopicamente rotuladas dos compostos. Compostos isotopicamente rotulados têm estrutura descritas pelas fórmulas fornecidas aqui, exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atômi- ca ou número de massa selecionados. Exemplos de isótopos que po- dem ser incorporados em compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor, e cloro tal co- mo ?H, ?H, Cc, Pc, Pc, *N, EF 2p, Pp, *s, Cl, PF] respectivamen- te. A invenção inclui vários compostos isotopicamente rotulados como definido aqui, por exemplo, aqueles em que isótopos radioativos, tais como *H e **C, ou aqueles em que isótopos não radioativos, tais como ?H e “C estão presentes. Tais compostos isotopicamente rotulados são úteis em estudos metabólicos (com **C), estudos cinéticos de rea- ção (com, por exemplo, ?H ou *H), técnicas de detecção ou imagea- mento, tais como tomografia de emissão de pósitron (PET) ou tomo- grafia computadorizada por fotônica única (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de tecido de fármaco ou substrato, ou no tratamento radioativo de pacientes. Em particular, um *?F ou composto rotulado pode ser particularmente desejável para estudos PET ou SPECT. Compostos isotopicamente rotulados de fórmula (|) podem geralmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica ou por processos análogos àqueles descritos nos exemplos e preparações acompanhantes usando reagentes isotopi- camente rotulados no lugar do reagente não rotulado anteriormente empregado.
[0073] Além disso, substituição com isótopos mais pesados, parti-
cularmente deutério (isto é, “H ou D) pode fornecer certas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exem- plo, meia vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagem reduzidos ou uma melhora no índice terapêutico. Entende-se que o deutério nes- te contexto é considerado como um substituinte de um composto da fórmula (1). A concentração de tal isotope mais pesado, especificamen- te deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento isotópico. O termo "fator de enriquecimento isotópico" como usado aqui significa a relação entre a abundância isotópica e a abundância natural de um isótopo específico. Se um substituinte em um composto desta inven- ção for denotado deutério, tal composto terá um fator enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutéricem cada átomo de deutério desig- nado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo me- nos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorpora- ção de deutério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério), ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorpo- ração de deutério).
[0074] Solvatos farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a invenção incluem aqueles em que o solvente de cristalização pode ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, d;-acetona, d;-DMSO.
[0075] Os compostos da presente invenção podem ser sintetiza- dos por rotinas sintéticas que incluem processos análogos àqueles bem conhecidos nas técnicas químicas, particularmente à luz da des- crição contida aqui. Os materiais de partida são geralmente disponí- veis de fonts comerciais tal como Sigma-Aldrich ou são facilmente preparados usando métodos be conhecidos por aqueles versados na técnica (por exemplo, preparados por métodos geralmente descritos em Louis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, Nova lorque (1967-1999 ed.), ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, incluindo su- plementos (também disponíveis por meio do banco de base online Beilstein)).
[0076] Em um outro aspecto, a invenção se refere a um processo para a preparação de um composto da fórmula (|), em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, compreendendo
[0077] (a) a reação de um composto de fórmula (Il)
XL
EU AO: POr as (11) em que Y, R?, R?, R$, Ri, R$, R, R?, Rº, RR”, RR", RP, R*, R*, R*, R"º, R, ne p são como definidos para a fórmula (1), com um compos- to de fórmula (III), (IV) ou (V) "Pr OH HD IO n " (111) (IV) (V) em que R' é como definidos para a fórmula (1), or
[0078] (b) a reação de um composto de fórmula (VI) Roo, EL: A 2º o NES ua (VI)
em que R', R?, Rà, Rº, Rº, Rº, R'/, Rê e Rº são como definidos para a fórmula (1) e Hal representa halogênio, por exemplo, cloro, com um composto de fórmula (VII) o çã
ENA
E R nº Ti (VII) em que Y, R", R, R2, RP, RÉ, Rº, Rº, RU, ne p são como defini- dos para a fórmula (1), e
[0079] (c) a redução, oxidação ou outra funcionalização opcional do composto resultante,
[0080] (d) a clivagem de qualquer grupo(s) de proteção presente,
[0081] (e) a recuperação do composto de da fórmula (1) obtenível em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável,
[0082] (f) a separação opcional de misturas de isômeros oticamen- te ativos em suas formas isoméricas oticamente ativas individuais.
[0083] As reações podem ser realizadas de acordo com métodos convencionais. Por exemplo, a reação descrita na etapa (a) acima po- de ser realizada na presença de um catalisador de metal adequado, por exemplo, Pd(PPh3), ou PdCl2(dppf), opcionalmente uma base ade- quada, por exemplo, fluoreto de césio, um solvente adequado, por e- xemplo, tolueno ou NEt;3, acetonitrila/água, e em uma temperatura a- dequada, por exemplo, 90 a 150 €.
[0084] A reação descrita na etapa (b) acima pode ser realizada na presença de base adequada, por exemplo, DIPEA, um solvente ade- quado, por exemplo, 1-butanol, e em uma temperatura adequada, por exemplo, 70 a 90 CT.
[0085] A outra redução opcional, oxidação ou outra funcionaliza- ção de compostos de fórmula (1) pode ser realizada de acordo com os métodos bem conhecidos por aqueles versados na técnica.
[0086] Dentro do escopo deste texto, apenas um grupo facilmente removível que não é um constituinte do produto final desejado particu- lar dos compostos da presente invenção é designado um "grupo de proteção", a menos que o contexto indica de outro modo. A proteção de grupos funcionais por tais grupos de proteção, os próprios grupos de proteção, e suas reações de clivagem são descritos, por exemplo, em trabalhos de referência padrões, tais como J. F. W. McOmie, "Pro- tective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres e Nova lorque 1973, em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Terceira edição, Wiley, Nova lorque 1999, em "The Peptides"; Volume 3 (editores: E. Gross e J. Meienhofer), Aca- demic Press, Londres e Nova lorque 1981, em "Methoden der organis- chen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4º edi- ção, Volume 15/1l, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, e em H.-D. Jakubke e H. Jeschkeit, "Aminosâuren, Peptide, Proteine" (Amino a- cids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, e Basel 1982. Uma característica dos grupos de proteção é que eles podem ser facilmente removidos (isto é, sem a ocorrência de reações secundárias indesejadas) por exemplo, por solvólise, redução, fotólise ou alternativamente sob condições fisiológicas (por exemplo, por cliva- gem enzimática).
[0087] Sais dos compostos da presente invenção tendo pelo me- nos um grupo de formação de sal podem ser preparados de uma ma- neira conhecida por aqueles versados na técnica. Por exemplo, sais de adição de ácido dos compostos da presente invenção são obtidos de maneira usual, por exemplo, por tratamento dos compostos com um ácido ou um reagente de permuta de ânion adequado.
[0088] Sais podem ser convertidos nos compostos livres de acordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Sais de adição ácidos podem ser convertidos, por exemplo, por tratamento com um agente básico adequado.
[0089] Quaisquer misturas resultantes de isômeros podem ser se- paradas com base nas diferenças fisicoquímicas dos constituintes, nos isômeros óticos ou geométricos substancialmente puros ou isômeros óticos, diastereômeros, racematos, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracional.
[0090] Para aqueles compostos contendo um átomo de carbono assimétrico, os compostos existem em formas isoméricas oticamente ativas individuais ou como misturas dos mesmos, por exemplo, como misturas racêmicas ou diastereoméricas. Misturas diastereoméricas podem ser separadas em seus diaestereoisômeros individuais com base em suas diferenças fisicoquímicas por métodos bem conhecidos por aqueles versados na técnica, tais como por cromatografia e/ou cristalização fracional. Os enantiômeros podem ser separados por conversão das mistura enantiomérica em uma mistura diastereomérica por reação com um composto oticamente ativo apropriado (por exem- plo, auxiliar quiral tal como um álcool quiral ou cloreto de ácido Mo- sher), separando os diaestereoisômeros e convertendo (por exemplo, hidrolizando) os diaestereoisômeros individuais nos enantiômeros cor- respondentes puros. Os enantiômeros podem também ser separados por uso de uma coluna de HPLC quiral comercialmente disponível.
[0091] A invenção também inclui qualquer variante dos presentes processos, em que os componentes da reação são usados na forma de seus sais ou materiais oticamente puros. Os compostos da inven- ção e intermediários podem também ser convertidos um no outro de acordo com os métodos geralmente conhecidos por aqueles versados na técnica.
[0092] Para propósitos ilustrativos, os esquemas de reação descri- tos abaixo fornecem rotinas potenciais para sintetizar os compostos da presente invenção bem como intermediários-chave. Para uma descri-
ção mais detalhada das etapas de reação individuais, veja a seção de Exemplos abaixo. Aqueles versados na técnica apreciarão que outras rotinas sintéticas podem ser usadas para sintetizar os compostos in- ventivos. Embora os materiais de partida e reagentes específicos se- jam descritos nos esquemas e descritos abaixo, outros materiais de partida e reggentes podem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de derivados e/ou condições de reação. Além disso, a maioria dos dos compostos preparados pelos métodos descritos abai- xo pode ser também modificada à luz desta inveção usando química conhecida bem conhecida por aqueles versados na técnica. Esquema 1. Procedimento geral 1, para Síntese de Compostos de Purina E e o É EX nao : e NE, RR MEF n
EE O O e PAT: EEE ue ce gado nu A PAR = " ET. be 1 né É E To TREO No : a OS N Mme Base, solvente mao ns, Base, solvente, Fe E a calor vem TA ". mo RH NO ” NA n R Le “o Te
RUN O ZANIN No Sun o TE TO São q A À R Ze — E À dO 1 x NT ale Base, solvente BO BE Las . o PA Fa no”, A Rigo ge RE
E QE e A + A Rn. Fl Ho ng O e DADA Dea Sã " 1 nl Not Nm Cm a Tamo zeé E TEA E. a ur o, FP. É
E ET RES Agente de acoplamento , ' Base, solvente - ii o Asa,
[0093] Geralmente, os compostos de fórmula (|) podem ser prepa- rados de acordo com o esquema | em quatro etapas, partindo de ma- terial comercialmente disponível (VIII). Como para as etapas individu- ais no esquema mostrado acima, a etapa um envolve a preparação do intermediário (X) por remoção de cloro com um nucleófilo tal como in- termediários de morfolino funcionalizado (IX). O intermediário (XI) po- de ser preparado por reação do intermediário (X) com intermediário (VII) na presença de base adequada tal como diisopropiletil amina, solvente tal como dimetil acetamida e calor.
A etapa três envolve bro- mação de intermediário (XI) no intermediário (II) utilizando bromo em um solvente apropriado tal como diclorometano.
Os compostos alvo de fórmula (1) podem ser preparados por acoplamento do intermediário (11) com uma variedade de ésteres ou ácidos borônicos comercialmente disponíveis ou sintetizados de estruturas (Ill) ou (IV), ou derivados de tributilstanila de fórmula (V), usando catalisadores de metal mais fre- quentemente exemplificados por complexos de paládio comercialmen- te disponíveis.
Esquema 2. Procedimento geral 2, para Síntese de Compostos de Purina Ro É E É NÃ É É gol - o E . Pau PANA cr REU a " Y r A le FP E un — nn é TM 7 4 X Ps " Base, solvente % - Poe So Base, solvente [is] Tm)
R R Ra FE “| . À Pb E o ÇA do. A . - Agêno. É 4 E ú . Tv Dm SIDA nn “ Mm) so o ST No Ned o. Agente de acoplamento NO Base, solvente eo .: PR Ros ci R o É, Ro e - SE e Te met Es E UA ra " e He EU AS Neo kh. Ee e É TF e oe AE E CA AME: PR Base, solvente, - Fc KH TOA calor ar. L/ Abe Em MO Fel
[0094] Geralmente, os compostos de fórmula (|) podem ser prepa- rados de acordo com o Esquema 2 em quatro etapas, partindo de ma- terial comercialmente disponível (VIII). Como para as etapas individu- ais no esquema mostrado acima, a etapa um envolve a preparação do intermediário (X) por remoção de cloro com um nucleófilo tal como a intermediários de morfolino funcionalizado de fórmula (IX). Intermediá- rio (XII) pode ser preparado por bromação de intermediário (X) na pre- sença de um solvente apropriado tal como diclorometano. A etapa três envolve o acoplamento de intermediário (XIl) com uma variedade de ésteres ou ácidos borônicos comercialmente disponíveis ou sintetiza-
dos de estruturas (Ill) ou (IV), ou derivados de tributilstanila de fórmula (V), usando catalisadores de metal mais frequentemente exemplifica- dos por complexos de paládio comercialmente disponíveis. Os com- postos alvo de fórmula (|) podem ser preparados por tratamento do intermediário (XII!) com intermediários de morfolino funcionalizado (VII) na presença de base adequada tal como diisopropiletil amina, solvente tal como dimetil acetamida e calor ou sob irradiação por micro-ondas. Esquema 3. Procedimento geral para síntese de ésteres borôni- cos.
IS CÊ B—B ó o R—Br —— RE É xIv Catslisador, solvente, base, o W
[0095] Ésteres borônicos de fórmula (IV) podem ser preparados de acordo com o esquema 3 em uma etapa onde R' é como descrito na fórmula (1). A etapa envolve a reação de arilbrometo ou heteroarilbro- meto substituído de fórmula (XIV) com bis(pinacolato)diboro na pre- sença de um catalisador de paládio comercialmente disponível, um solvente tal como dioxano, e em uma temperatura variando de 80ºC a 120ºC.
[0096] A invenção também inclui qualquer variante dos presentes processos, em que os componentes da reação são usados na forma de seus sais ou material oticamente puros. Os compostos da invenção e intermediários podem também ser convertidos uns nos outros de a- cordo com os métodos geralmente conhecidos por aqueles versados na técnica.
[0097] Compostos da fórmula (1), em forma livre ou em forma de sal farmaceuticamente aceitável, aqui a seguir, frequentemente referi- dos como "agentes da invenção", exibem propriedades farmacológicas valiosas, quando testados in vitro, e podem, portanto, ser úteis nos medicamentos, em terapia ou para uso como ferramentas de pesquisa de produtos químicos, por exemplo, como compostos.
[0098] Os agentes da invenção são inibidores de MTOR. As pro- priedades de inibição de um composto da invenção com respeito a mMTOR podem ser avaliadas em testes como descrito aqui a seguir. Ensaios Biológicos Teste 1: Ensaio de ligação de ATP de mTOR com base em TR-FRET quanto ao MTOR humano recombinante
[0099] Diluições seriais de 8 pontos de compostos (10 mM de ma- téria-prima) são realizadas em 90% de DMSO em uma "placa mestre" de 384 cavidades e 50 nL são transferidos em placas de ensaio de 384 cavidades (pequeno volume de poliestireno branco; Matrix/Thermo Scientific Cat. No. ft4365).
[00100] O volume final do ensaio é de 10 ul e a ordem de adição é como segue: 50 nL de diluição de compostos; ul de uma mistura de GST-MTOR e anticorpo de anti- GST de európio com ou sem o inibidor de PISBK/MTOR PI-103 (3-(4-(4- morfolinil )pirido[3',2' :4,5]furo[3,2-d]pirimidin-2-il)fenol, Calbiochem); 5 uL de traçador-314.
Incubado durante 60 minutos em temperatura ambiente.
[00101] TR-FRET avaliado em leitora Biotek Synergy2 em:
[00102] Excitação 340 nm/emissão 665 nm
[00103] Excitação 340 nm/emissão 620 nm
[00104] O tampão de ensaio consiste em HEPES a 50 mM pH 7,5, MgCl2 a 5 mM, EGTA a 1 mM, 0,01% de Plurônico F-127. Traçador - 314 (inibidor de cinase competitiva de ATP rotulado por Alexa Fluor& 647; Cat. No. PV6087), anticorpo európio anti-GST (Cat. No PV5594) e mTOR humano truncado rotulado por GST terminal de N (FRAP1) (Cat. No PV4754) são disponíveis de Invitrogen.
[00105] As seguintes concentrações finais são usadas: 3 nM de GST-MTOR; 1 nM de anticorpo európio anti-GST; +/- 10 UM de PIl-103; e nM de traçador-314.
[00106] As concentrações finais de compostos diluídos são de 9091; 2730; 910; 273; 91; 27; 9; e 3 nM. A concentração final de DM- SO é de 0,45%
[00107] Os seguintes controles são usados: Sinal elevado: veículo de solvente, GST-MTOR, anticorpo Eu-anti-GST, traçador-314;
[00108] Baixo sinal: veículo de solvente, GST-MTOR, anticorpo Eu- anti-GST, PI-103, traçador-314.
[00109] 3. Determinações de IC;o podem ser realizadas como se- gue:
[00110] Sinal bruto a 340/665 é dividido pelo sinal bruto a 340/620 para fornecer uma relação de emissão.
[00111] A relação de emissão é convertida na porcentagem de ini- bição para cada concentração de composto. Os valores ICs9 são calcu- lados ajustando-se a curva de resposta à dose sigmoidal para uma plotagem de estágio de leitura de ensaio sobre a concentração de composto. Todos os ajustes e análises são realizados com o programa XLfit4 (ID Business Solutions, Guildford, UK). Teste 2: Ensaio de MTOR Celular
[00112] Um ensaio com base em célula (formato de 384 cavidades) foi desenvolvido para determinação dos efeitos do composto na ativi- dade de mMTOR cinase celular em MEFs (fibriblastos enbriônicos de camundongo), células derivadas de camundongos sem TSC1 (com- plexo 1 de Tuberosclerose) um potente supressor de atividade de MTOR cinase. Devido à ausência de TSC1, a MTOR cinase é constitu-
tivamente ativada resultando em fosforilação permanentemente real- çada de Thr 389 de S6 cinase 1 (S6K1) que é um dos alvos a jusantes de mTOR (Kwiatkowski D.J., Zhang H., Bandura J.L. et al. (2002)] À mouse model of TSC1 reveals sex-dependent lethality from liver hemangiomas, and up-regulation of p70S6 kinase activity in TSC null cells. Hum.Mol.Gen. 11: 525-534). Dia O:
[00113] Semeadura celular: TSC1-- MEFs subconfluentes são cultivadas em glicose elevada de DMEM suplementada com 10 % de FCS inativado por calor e 2 % de Hepes. mTOR é constitutivamente ativa nestas células induzindo à fosforilação permanentemente realçada de p70S6 cinase. As células são colhidas por tripsinização, ressuspensas em meio de crescimento, contadas e ajustadas em
133.333 células/ml. 30 ul são adicionados por cavidade a uma placa de 384 cavidades usando um instrumento Multidrop (Thermo scientific), resultando em 4000 células/cavidade. As placas são incubadas a 37º / 5% de CO, durante 20 horas (para permitir assentar-se e aderir-se à superfície). Dia 1:
[00114] Tratamento com composto: Oito diluições seriais de 3 vezes de compostos teste (iniciando em 1,8 mM) são preparadas em 90 % de DMSO e compiladas em placas mestre de 384 cavidades (Greiner). Um inibidor de pan-pPI38K/mMTOR (0,8 mM de 8-(6-metóxi- piridin-3-il)-3-metil-1-(4-piperazin-1-il-3-trifluorometil-fenil)-1,3-di-hidro- imidazo[4,5-c]quinolin-2-bena em 90 % de DMSO) é adicionado às cavidades para o controle inferior. 90% de DMSO são adicionados para os controles elevados. Compostos são fornecidos como disparos de 250 nl (Hummingbird) em microplacas de polipeopileno de 384 cavidades (placas de composto). 50 ul de meio de crescimento são adicionados às placas de composto (diluoção 1:200) com o Multidrop.
Após agitação (1 minuto a 2000 rpm), 10 ul da primeira diluição são em seguida transferidos para uma placa celular com um pipetor Matrix Plate Mate 2x3 (diluição final1:4). Após 1 hora de tratamento, o meio é removido da placa e 20 ul de tampão de lise Surefire são adicionados por cavidade com o Multidrop.
[00115] Ensaio Surefire: Os lisados celulares são congelados durante 15 minutos, descongelados com agitação e transferidos para Proxiplaca de 384 cavidades experimental (5 ul/cavidade) para o ensaio Surefire P-P70S6K (T389) (Perkin Elmer &TGR70S50). À primeira mistura é composta do tampão de reação (contendo o anticorpo específico), do tampão de ativação e das contas receptoras (40 volumes, 10 volumes e 1 volume, respectivamente). 5 ul por cavidade são adicionados aos lisados com um Zephyrê SPE Workstation (Caliper Life Sciences) e incubados durante 2 horas com agitação em temperatura ambiente. Após este período de incubação, a segunda mistura de tampão de diluição e de contas doadoras (20 volumes e 1 volume, respectivamente) é adicionada à placa com o mesmo instrumento (2 ul/cavidade). Após 2 horas, a placa pode ser lida com uma EnvVision& Multilabel Reader (Perkin Elmer). Visto que as contas são sensíveis à luz, sua transferência e incubação são executadas em uma sala escura (luz verde). Dia 2:
[00116] Análise de dados: Os dados brutos são usados para gerar curvas de resposta à dose para os compostos teste e os valores ICs,º calculados a partir destes. Teste 3: Ensaio de Autofagia
[00117] A autofagia é uma série de reação catabólica que degrada o volume de citosol em compartimentos lisossômicos permitindo ami- noácidos e ácidos graxos serem reciclados. Um dos reguladores cha- ve de autofagia é o alvo mamífero de rapamicina (mMTOR), uma seri-
naltreonina cinase conservada que suprime a iniciação do processoa autofágico quando os nutrientes, fatores de crescimento e energia es- tão disponíveis. Para quantificar a indução de autofagia por inibidores de mTOR, usamos um mCherry-GFP-LC3 repórter que é acessível para liberação retroviral em células mamíferas, expressão estável e análise por microscopia de fluorescência. mCherry-GFP-LC3 Repórter
[00118] A sequência de aminoácido da construção de mCherry- GFP-LC3 é mostrada abaixo (SEQ ID NO: 1). A sequência de mCherry é sublinhada, a sequência de GFP esta em negrito e a sequência de LC3A está em caixa.
MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAK LKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWER VMNFEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEA SSERMYPEDGALKGEIKORLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNV NIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHSTGGMDELYKPVATMVSKGEELFT GVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPT LVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTR AEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKN GIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSK DPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYKSGLRSRAQASNSAVDIMPSDRFP]
[00119] Descritos aqui a seguir são, um protocol de imageamento e algoritmo de reconhecimento de imagem para visualizar e avaliar as mudanças na série de reação autofágica. Quantificação de autofagia usando análise e imageamento de teor ele-
vado
[00120] Dia0: Semeadura de célula. Células H4 mCherry-GFP-LC3 subcofluentes são colhidas por tripsinização, ressuspensas em meio de crescimento, e contadas (células H4: linhagem celular de neurogli- oma humana (ATCC)). Uma suspensão celular de 66'000 células/mL é preparada e 30 ul são adicionados nas cavidades de uma placa de 384 cavidades usando uma pipeta eletrônica de múltiplos canais. Isto resulta em 2000 células/cavidade sendo semeadas. As placas celula- res são nrevemente centrifugadas e colocadas a 37ºC e 5% de CO,.
[00121] Dia1: Tratamento com composto. As respostas à dose de composto são preparados em DMSO. As respostas à dose são em se- guida diluídas 1:50 em meio. 10 ul do composto diluído são adiciona- dos a 30 ul de células, produzindo uma diluição final de 1:200 do com- posto original e final de 0,5% de DMSO. Os tratamentos com compos- to são realizados em triplicatas. As placas de 384 cavidades são colo- cadas a 37ºC e 5% de CO,. O tratamento com composto é realizado durante 16 a 18 horas (veja a observação 1).
[00122] Dia2: Fixação Celular. As células são fixadas por adição de fixador de Mirsky concentrado de 10 ul/cavidade 5x suplementado com 25upg/mL de Hoechst33342. Isto resulta em um volume total de 50 UL por cavidade e uma concentração de fixador de Mirsky de 1xe 5 Vg/mL de Hoechst33342. A placa de 384 cavidades é brevemente cen- trifugada e incubada durante 1 hora em temperatura ambiente. As cé- lulas são em seguida lavadas usando uma placa de 384 cavidades la- vadora usando um protocol que aspira o volume baixando para 10 upl/cavidade antes de dispersar 100 ul/cavidade de 1X TBS. As eta- pas de aspiração e dispersão são repetidas 4 vezse e um volume final de 100 ul/cavidade é deixado. A placa é selada usando uma folha de PCR adesiva.
[00123] Imageamento. A base da placa é limpa com etanol a 70% e em seguida imageada usando um microscópio de epifluorescência au- tomatizado InCell 1000. Ampliação de 20x é usada e 4 áreas diferen- tes (campos) são imageadas por cavidade, isto tipicamente captura um total de cerca de 400 células por cavidade. Imagens de Hoe- chst33342 são adquiridas usando uma excitação de 360 nm (filtro D360 40x), uma emissão de 460 nM (filtto HQ460 40M) e um tempo de exposição de 150 ms. Imagens de GFP são adquiridas usando uma excitação de 475 nm (filtro S475 20x), uma emissão de 535 nM (filtro HQ535 50M) e um tempo de exposição de 1 segundo. Imagens de mCherry são adquiridas usando uma excitação de 535 nm (filtro HQ535 50x), uma emissão de 620 nM (filtro HQO620 60M) e um perío- do de exposição de 1 segundo. Uma imagem de passagem de faixa quádupla é usada para todas as imagens.
[00124] Análise de imagem. O software InCell Analysis é usado pa- ra analisar as imagens usando o algoritmo de análise de múltiplos al- vos. Primeiro, os núcleos sãos detectados na imagem de Hoe- chst33342 usando segmentação top-hat e uma área nuclear mínima de 50 um?. As células são definidas usando um colar de 10 um em torno dos núcleos. Segundo, puncta (organelas) são identificadas nas imagens de mCherry dentro das células usando usando segmentação multi-top-hat. Terceiro, a máscara da puncta mCherry é transferida na imagem de GFP. Quarto, a intensidade de fluorescência de GFP no interior da máscara de puncta mCherry é medida (intensidade de refe- rência).
[00125] Os parâmetros de 'organelas' refletem a puncta positiva de mCherry do mCherry-GFP-LC3 repórter e são usados para calcular "LC3 punctal/célula'. Para este propósito, o número de organelas é cal- culado por célula e calculado uma média sobre todas as células em uma determinada cavidade (média por base de célula). Os números de LC3 puncta positiva de mCherry (eixo y) são plotados em comparaçãi aos valores de resposta à dose do composto (eixo x) e os valores EC50 são calculados para cada composto. Os valores EC50 represen- tam a potência de composto em termos de ativação de autofagia (por exemplo, aumento da contagem de LC3 puncta positiva de mCherry). Observações
[00126] A modulação de autofagia e redistribuição de mCherry- GFP-LC3 podem ser facilmente observadas após um período de tra- tamento com composto de 3 a 4 horas. Entretanto, efeitos mais robus- tos são observados com períodos de tratamento de 16 a 18 horas.
[00127] Os compostos dos exemplos mostraram os valores apre- sentados na tabela 1 abaixo, quando testados nos ensaios acima. Tabela 1 me o | sreno de Neaeão | ensaio coílar | 7922: ECide Exemplo | demTOR(nM) | deTtaso(nm | Autofagia (nM) Fr ss CE e | | PC o e o PE TE Ts Cs TT = 1 | e de | ensaio de ligação | ensaio celular | Tº9'º 3: ECsode Exemplo | demtoR(nv) | deTtsase(nm | Autofagia (NM) sa a am n.d. = não determinado; n.m. = não mensurável
[00128] Como indicado pelos resultados de testes descritos aqui anteriormente, os compostos da presente invenção podem ser úteis para o tratamento de doenças, condições e distúrbios modulados pela inibição da enzima mMTOR; consequentemente, os compostos da pre- sente invenção (incluindo ascomposições e processos usados neles) podem ser usados na fabricação de um medicamento para aplicações terapêuticas descritas aqui. Consequentemente, outra modalidade da presente invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente a- ceitável do mesmo, e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuti-
camente aceitável.
[00129] Uma formulação típica é preparada misturando-se um com- posto da presente invenção e um veículo, diluente ou excipiente. Veí- culos, diluentes, e excipientes adequados são bem conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem materiais tais como carboidra- tos, ceras, polímeros solúveis e/ou dilatáveis em água, materiais hidro- fílicos ou hidrofóbicos, gelatina, óleos, solventes, água, e similares. O veículo, diluente ou excipiente particular usado dependerá dos meios e propósito para o qual o composto da presente invenção está sendo aplicado. Os solventes são geralmente selecionados com base nos solventes reconhecidos por pessoas versadas na técnica como segu- ros para serem administrados a um mamífero. Em geral, solventes se- guros são solventes aquosos não tóxico tais como água e outros sol- ventes não tóxicos que são solúveis ou miscíveis em água. Solventes aquosos adequados incluem água, etanol, propileno glicol, polietileno glicóis (por exemplo, PEG400, PEG300), etc. e misturas dos mesmos. As formulações podem também incluir um ou mais tampões, agentes de estabilização, tensoativos, agentes umectantes, agentes lubrifican- tes, emulsificantes, agentes de suspensão, conservantes, antioxidan- tes, agentes opacificantes, deslisantes, auxiliares de processamento, corantes, adoçantes, agentes perfumantes, agentes aromatizantes e outros aditivos conhecidos para fornecer uma apresentação elegante do fármaco (isto é, um composto da presente invenção ou composição farmacêutica do mesmo) ou auxiliar na preparação do produto farma- cêutico (isto é, medicamento).
[00130] As formulações podem ser preparadas usando procedimen- tos convencionais de dissolução e mistura. Por exemplo, a substância de fármaco volumosa (isto é, composto da presente invenção ou forma estabilizada do composto (por exemplo, complexo com um derivado de ciclodextrina ou outro agente de complexação conhecido)) é dissolvido em um solvente adequado na presença de um ou mais dos excipien- tes. O composto da presente invenção é tipicamente formulado em formas de dosagem farmacêutica para fornecer uma dosagem facil- mente controlável do fármaco e para fornecer ao paciente um produto elegante e facilmente manipulável.
[00131] A composição farmacêutica (ou formulação) para aplicação pode ser embalada de uma variedade de modos, dependendo do mé- todo usado para administração do fármaco. Geralmente, um artigo pa- ra distribuição inclui um recipiente tendo depositado nele a formulação farmacêutica em uma forma apropriada. Recipientes adequados são bem conhecidos por aqueles versados na técnica e incluem materiais tais como garrafas (plástico e vidro), selos, ampolas, bolsas plásticas, cilindros de metal, e similares. O recipiente pode também incluir um dispositivo à prova de violação para impedir acesso indiscreto para os teores da embalagem. Além disso, o recipiente tem depositado sob ele um rótulo que descreve os teores do recipiente. O rótulo pode também incluir advertências apropriadas.
[00132] Em uma modalidade, a invenção se refere ao tratamento de doenças proliferativas celulares tais como crescimento de tumor e/ou célula cancerosa mediado por MTOR. As doenças podem incluir aque- las mostrandp superexpressão ou ampliação de PI3K alfa, Rheb, mu- tação somática de PIK3CA ou mutações da linhagem germinal ou mu- tação somática de PTEN, TSC1, TSC2, ou mutações e translocação de p85a que funcionam para sub-regular o complexo p85-p110. Em particular, os compostos são úteis no tratamento de cânceres huma- nos ou de animal (por exemplo, murino), incluindo, por exemplo, sar- coma; câncer de pulmão; brônquios; próstata; mama (incluindo cânce- res de mama esporádicos e sofredores de doença de Cowden); câncer de pâncreas; gastrointestinal; cólon; reto; carcinoma de cólon; adeno- ma colorretal; tiroide; fígado; duto da bílis intra-hepática; hepatocelular;
glândula adrenal; estômago, gástrico; glioma; glioblastoma; endome- trial; melanoma; rim, pelve renal; bexiga urinária; corpo uterino; colo uterino; vagina; ovário; mieloma múltiplo; esôfago; uma leucemia; leu- cemia mielogenosa aguda; leucemia mielogenosa crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; cérebro; um carcinoma do cérebro; cavi- dade oral e faringe; laringe; intestino delgado; linfoma de não Hodgkin; melanoma; adenoma de cólon viloso; uma neoplasia; uma neoplasia de caráter epitelial; linfomas; um carcinoma mamário; carcinoma de célula basal; carcinoma de célula escamosa; ceratose actínica; doen- ças de tumor, incluindo tumores sólidos; um tumor do pescoço e cabe- ça; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com meta- plasia mieloide; e doença de Walden stroem.
[00133] Em outras modalidades, a condição ou distúrbio é selecio- nado do grupo que consiste em: policitemia vera, trombocitemia es- sencial, mielofibrose com metaplasia mieloide, asma, COPD, ARDS, síndrome de Loffler, pneumonia eosinofílica, infestação parasítica (em particular metazoária) (incluindo eosinofilia tropical), aspergilose bron- copulmonar, poliarterite nodosa (incluindo síndrome de Churg- Strauss), granuloma eosinofílico, distúrbios relacionados com eosinófi- los que afetam as vias aéreas ocosionados por reação ao fármaco, psoríase, dermatite de contato, dermatite aótipca, alopécia areata, eri- tema multiforme, dermatite herpetiforme, escleroderma, vitiligo, angeí- te de hipersensibilidade, urticária, penfigoide bolhoso, lúpus eritemato- so, pemphisus, epidermolise bolhosa adquirida, distúrbios hematológi- cos autoimunes (por exemplo, anemia hemolítica, anemia aplásica, anemia de glóbulos vermelhos pura e trombocitopenia idiopática), lú- pus eritematoso sistêmico, policondrite, escleroderma, granulomatose de Wegener, dermatomiosite, hepatite ativa crônica, miastenia grave, síndrome de Steven-Johnson, espru idiopática, doença do intestino inflamatório autoimune (por exemplo, colite ulcerativa e doença de
Crohn), oftalmopatia endócrina, doença de Grave, sarcoidose, alveoli- te, pneumonite hipersensibilidade crônica, esclerose múltipla, cirrose biliar primária, uveite (anterior e posterior), fibrose pulmonar interstici- al, artrite psoriática, glomerulonefrite, doenças cardiovasculares, ate- rosclerose, hipertensão, trombose venosa profunda, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio, angina instável, tromboembolismo, em- bolismo pulmonar, doenças trombolíticas, isquemia arterial aguda, o- clusões trombóticas periféricas, e doença da artéria coronária, lesões de reperfusão, retinopatia, tal como retinopatia diabética ou retinopatia induzida por oxigênio hiperbárica, e condições caracterizadas por pressão intraocular elevada ou secreção de humor aquoso ocular, tal como glaucoma.
[00134] Síndromes adicionais com uma ligação molecular estabili- zada ou potencial à desregulação de atividade de mMTOR cinase são, por exemplo, descritas em "K. Inoki et al. ; Disregulation of the TSC- mMTOR pathway in human disease, Nature Genetics, volume 37, 19 a 24"; "D.M. Sabatini; NTOR and cancer: insights into a complex relati- onship, Nature Reviews, volume 6, 729-734"; e em "B.T. Hennessy et al.; Exploiting the PISK/Akt pathway for cancer drug discovery, Nature Reviews, volume 4, 988-1004", e são como segue:
[00135] Rejeição de transplante de órgão ou tecido, por exemplo, para o tratamento de receptores de, por exemplo, transplantes de co- ração, pulmão, coração-pulmão combinados, fígado, rim, pancreáticos, de pele ou córnea; doença do enxerto versus hospedeiro, tal como se- guinte ao transplante de medula óssea; Restenose Esclerose tuberosa Linfangioleiomiomatose Retinite pigmentose e outros distúrbios degenerativos reti- nais
[00136] Doenças autoimunes incluindo encefalomielite, diabetes melito dependente de insulina, lúpus, dermatomiosite, artrite e doen- ças reumáticas
[00137] Leucemia Linfoblástica aguda resistente a esteroide
[00138] Doenças fibróticas incluindo escleroderma, fibrose pulmo- nar, fibrose renal, fibrose cística Hipertensão pulmonar Imunomodulação Esclerose múltipla Síndrome de VHL Complexo de Carney Polipose adenomatosa familiar Síndrome de polipose juvenil Síndrome de Birt-Hogg-Duke Cardiomiopatia hipertrófica familiar Síndrome de Wolf-Parkinson-White
[00139] Distúrbios neurodegenerativos tais como doença de Parkin- son, doença de Huntington, doença de Alzheimer e demências causa- das por mutações de tau, ataxia espinocerebelar tipo 3, doença do mo- toneurônio causada por mutações de SOD1, lipofucinoses ceroide neuronais/doença de Batten (neurodegeneração pediátrica)
[00140] Doenças oftalmológicas tais como degeneração macular úmida e seca, uveites, incluindo uveite autoimune, retinopatia, tal co- mo retinopatia diabética ou retinopatia induzida por oxigênio hiperbári- co, e glaucoma
[00141] Emaciação muscular (atrofia, caquexia) e miopatias tais como doença de Danon.
[00142] Infecções bacterianas e virais incluindo infecção por M. tu- berculose, estreptococo de grupo A, HSV tipo |, HIV
[00143] Neurofibromatose incluindo Neurofibromatose tipo 1, e
[00144] Síndrome de Peutz-Jeghers, doença de Cowden.
[00145] Os compostos com uma atividade inibitória em mTORC1 mostraram benefício na imunomodulação e no tratamento de doenças proliferativas tais como como carcinoma celular renal avançado ou Tu- bero-esclerose (TSC), distúrbios associados com mutação da linha germinativa.
[00146] Paraos usos acima, a dosagem requerida, evidentemente, variará dependendo do modo de administração, da condição particular a ser tratada e do efeito desejado. Em geral, resultados satisfatórios são indicados ser obtidos sistemicamente em dosagens diárias de cer- ca de 0,03 a cerca de 100,0 mg/kg por peso corporal, por exemplo, cerca de 0,03 a cerca de 10,0 mg/kg por peso corporal. Uma dosagem diária indicada no mamífero grande, por exemplo, humanos, está na faixa de cerca de 0,5 mg a cerca de 3 g, por exemplo, cerca de 5 mg a cerca de 1,5 g, convenientemente administrada, por exemplo, em do- ses divididas tendo até quatro vezes ao dia ou em forma retardada. Formas de dosagem unitárias adequadas para administração oral compreendem de aproximadamente 0,1 a cerca de 500 mg, por exem- plo, cerca de 1,0 a cerca de 500 mg de ingrediente ativo.
[00147] Em geral, os compostos da presente invenção serão admi- nistrados como composições farmacêuticas por qualquer uma das se- guintes rotinas: administração oral, sistêmica (por exemplo, transdér- mica, intranasal ou por supositório), ou parenteral (por exemplo, intra- muscular, intravenosa ou subcutânea). A maneira preferida de admi- nistração é a oral usando um regime de dosagem conveniente diário que pode ser ajustado de acordo com o grau de aflição. As composi- ções podem adotar a forma de comprimidos, pílulas, cápsulas, semis- sólidos, pós, formulações de liberação prolongada, soluções, suspen- sões, elixires, aerossóis, ou quaisquer outras composições apropria- das. Outra maneira preferida para administração dos compostos da presente invenção é inalação. Este é um método eficaz para liberação de um agente terapêutico diretamente para o trato respiratório.
[00148] Consequentemente, a invenção também fornece: um método para prevenção ou tratamento de condições, distúrbios ou doenças mediadas pela ativação da PI3K (por exemplo, PI3 cinase alfa) e/ou enzimas mMTOR, por exemplo, tal como acima in- dicado, em um indivíduo em necessidade de tal tratamento, cujo mé- todo compreende administrar ao referido indivíduo uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, é fornecido um mé- todo para prevenção ou tratamento de câncer, um distúrbio neurode- generativo ou uma doença oftalmológica, em um individuo em neces- sidade de tal tratamento, cujo método compreende administrar ao refe- rido indivíduo, uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em outra modalidade, o distúrbio neurodegenerativo é doença de Parkinson, Huntington ou Alzheimer. Ainda em outra modalidade, o distúrbio neu- rodegenerativo é doença de Huntington.
um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuti- camente aceitável do mesmo, para uso como um medicamento, por exemplo, em quaisquer condições, distúrbios ou doenças indicados aqui, em particular para uso em uma ou mais doenças mediadas por fosfatidilnositiol 3-cinase. Em uma modalidade, é fornecido um com- posto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento ou prevenção de câncer, um distúrbio neurodegenerativo ou uma doença oftalmológica. Em outra modalida- de, o distúrbio neurodegenerativo é doença de Parkinson, Huntington ou Alzheimer. Ainda em outra modalidade, o distúrbio neurodegenera- tivo é doença de Huntington.
o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como um ingrediente farma- cêutico ativo em um medicamento, por exemplo, para o tratamento ou prevenção de quaisquer condições, distúrbios ou doenças indicados aqui, em particular para o tratamento ou prevenção de uma ou mais doenças mediadas por fosfatidilnositiol 3-cinase. Em uma modalidade, é fornecido o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como um ingrediente farma- cêutico ativo em um medicamento para o tratamento ou prevenção de câncer, um distúrbio neurodegenerativo ou uma doença oftalmológica. Em outra modalidade, o distúrbio neurodegenerativo é doença de Par- kinson, Huntington ou Alzheimer. Ainda em outra modalidade, o distúr- bio neurodegenerativo é doença de Huntington.
o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para a fabricação de um me- dicamento para o tratamento ou prevenção de uma ou mais doenças mediadas por fosfatidilnositiol 3-cinase. Em uma modalidade, é forne- cido o uso de um composto da presente invenção, ou um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo, para a fabricação de um medica- mento para o tratamento ou prevenção de câncer, um distúrbio neuro- degenerativo ou uma doença oftalmológica. Em outra modalidade, o distúrbio neurodegenerativo é doença de Parkinson, Huntington ou Al- zheimer. Ainda em outra modalidade, o distúrbio neurodegenerativo é doença de Huntington.
[00149] Um agente da invenção pode ser administrado como único ingrediente farmacêutico ativo ou como uma combinação com pelo menos um outro ingrediente farmacêutico ativo eficaz, por exemplo, no tratamento ou prevenção de câncer ou um distúrbio neurodegenerati- vo. Tal combinação farmacêutica pode ser na forma de uma forma de dosagem unitária, cuja forma de dosagem unitária compreende uma quantidade predeterminada de cada um de pelo menos dois compo-
nentes ativos em associação com pelo menos one excipientes, diluen- tes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis. Alternativamente, a combinação farmacêutica pode ser na forma de uma embalagem compreendendo pelo menos dois componentes ativos separadamente, por exemplo, um pacote ou um dispositivos aplicador adaptado para a administração concomitante ou separada de pelo menos dois compo- nentes ativos, em que estes componentes ativos são separadamente dispostos. Em um outro aspecto, a invenção se refere a tais combina- ções farmacêuticas.
[00150] Em um outro aspecto, a invenção, portanto, se refere a um produto de combinação compreendendo um agente da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente tera- pêutico.
[00151] Em uma modalidade, o produto de combinação é uma composição farmacêutica compreendendo um agente da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente tera- pêutico, e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente acei- tável.
[00152] Em uma modalidade, o produto de combinação é um Kit compreendendo duas ou mais composições farmacêuticas separadas, pelo menos uma das quais contém um agente da invenção. Em uma modalidade, o kit compreende meios para manter separadamente as referidas composições, tais como um recipiente, garrafa dividida, ou pacote de folhas dividido. Um exemplo de tal kit é uma embalagem de bolhas, como tipicamente usado para embalagem de comprimidos, cápsulas e similares. O Kkit da invenção pode ser usado para adminis- trar diferentes dormas de dosagem, por exemplo, oral e parenteral, para administração das composições separadas em diferentes interva- los de dosagem, ou para titulação das composições separadas em comparação a uma outra. Para auxiliar a complacência, o Kkit da inven-
ção tipicamente compreende direções para a administração.
[00153] Em vista de sua atividade inibitória de MTOR, os compos- tos da invenção, sozinhos ou em combinação, podem ser úteis no tra- tamento de câncer. Em uma modalidade, a invenção, portanto, se refe- re a um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com outro agente terapêutico em que o outro agente terapêutico é selecionado do grupo de agentes anticân- cer estabelecidos abaixo: inibidores de cinase: por exemplo, inibidores de cinases Receptoras de Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR) cinases tal como quinazolinas de molécula pequena, incluindo gefitinibe (US 5457105, US 5616582, e US 5770599), ZD-6474 (WO 01/32651), erlo- tinibe (Tarceva&, US 5,747,498 e WO 96/30347), e lapatinibe (US
6.727.256 e WO 02/02552); inibidores de cinase Receptora de Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGFR), incluindo SU-11248 (WO 01/60814), SU 5416 (US 5.883.113 e WO 99/61422), SU 6668 (US 5.883.113 e WO 99/61422), CHIR-258 (US 6.605.617 e US
6.774.237), vatalanibe ou PTK-787 (US 6.258.812), VEGF-Trap (WO 02/57423), — B43-Genisteína — (WO-09606116), fenretinida (p- hidroxifenilamina de ácido retinoico) (US 4.323.581), IM-862 (WO 02/62826), bevacizumabe ou Avastin& (WO 94/10202), KRN-951, 3-[5- (metilsulfonilpiperadina = metil)-indolil]-quinolona, AG-13736 e AG- 13925, pirrolo[2,1-f][1,2,4]triazinas, ZK-304709, Veglin&, VMDA-3601, EG-004, CEP-701 (US 5.621.100), Cand5 (WO 04/09769); inibidores de Erb2 tirosina cinase tais como pertuzumabe (WO 01/00245), trastu- zumabe, e rituximabe; inibidores de AKkt proteína cinase, tal como RX- 0201; inibidores de Proteína Cinase C (PKC), tais como LY-317615 (WO 95/17182), e perifosina (US 2003171303); inibidores de Raf/Map/MEK/Ras cinase incluindo sorafenibe (BAY 43-9006), ARQ- 350RP, LErafAON, BMS-354825 AMG-548, e outros descritos no WO
03/82272; Inibidores de Cinase Receptora de Fator de Crescimento de Fibroblasto (FGFR); Inibidores de Cinase Dependente de Célula (CDK), incluindo CYC-202 ou roscovitina (WO 97/20842 e WO 99/02162); inibidores de cinase Receptora de Fator de Crescimento Derivado de Plaqueta (PDGFR) tais como CHIR-258, 3G3 mAb, AG- 13736, SU-11248 e SU6668; e inibidores de Bcr-Abl cinase e proteí- nas de fusão tais como STI-571 ou GleevecO (imatinibe).
[00154] —Antiestrogênios: tais como Moduladores de Receptor de Estrogênio Seletivos (SERMs) incluindo tamoxifeno, toremifeno, raloxi- feno; inibidores de aromatase incluindo Arimidex& ou anastrozol; Sub- reguladores de Receptor de Estrogênio (ERDs) incluindo FaslodexO& ou fulvestrant.
[00155] —Antiandrogênios: tal como flutamida, bicalutamida, finasteri- da, aminoglutetamida, cetoconazol, e corticosteroides.
[00156] Outros inibidores: tal como inibidores de proteína farnesil transferase incluindo tipifarnibe ou R-115777 (US 2003134846 e WO 97/21701), BMS-214662, AZD-3409, e FTI-277; inibidores de topoiso- merase incluindo merbarona e diflomotecan (BN-80915); inibidores de proteína fusiforme de cinesina mitótica (KSP) incluindo SB-743921 e MKI-833; moduladores de proteassoma tais como bortezomibe ou Vel- cadeO (US 5,780,454), XL-784; e inibidores de ciclooxigenase 2 (COX- 2) incluindo fármacos anti-inflamatórios não esteroidais | (NSAIDs).
[00157] Fármacos quimioterapêuticos de câncer: tais como anas- trozol (ArimidexO), bicalutamida (CasodexO), sulfato de bleomicina (BlenoxaneO&), busulfano (MyleranO), injeção de busulfan (BusulfexO), capecitabina (Xeloda&O), N4-pentoxicarbonil-5-deóxi-S-fluorocitidina, carboplatina (Paraplatin&O), carmustina (BICNUG), clorambucil (Leuke- ranO), cisplatina (PlatinolO), cladribina (LeustatinO&O), ciclofosfamida (CytoxanO ou NeosarGO), citarabina, citosina arabinosida (Cytosar-UGO), injeção de lipossoma de citarabina (DepoCytO), dacarbazina (DTIC-
DomeO), dactinomicina (Actinomicina D, Cosmegan), cloridrato de daunorubicina (CerubidineO), injeção de lipossoma de citrato de dau- norubicina (DaunoXomeO), dexametasona, docetaxel (TaxotereO), cloridrato de doxorubicina (AdriamycinO, RubexO), etoposídeo (Vepe- sidO), fosfato de fludarabina (FludaraO), S-fluorouracil (AdrucilO, Efu- dexO), flutamida (EulexinO), tezacitibina, Gencitabina (difluorodeoxici- tidina), hidroxiureia (HydreaG), Idarubicina (IdamycinO), ifosfamida (I- FEXO), irinotecan (CamptosarO), L-asparaginase (ELSPARO), cálcio de leucovorina, melfalano (AlkeranO), 6-mercaptopurina (PurinatholO), metotrexato (Folex6O), mitoxantrona (NovantroneO), milotarg, paclitaxel (TaxolO), phoenix (Yttrium90/MX-DTPA), pentostatina, polifeprosan 20 com implante de carmustina (GliadelO), citrato de tamoxifeno (Nolva- dexO), teniposida (VumonO), 6-tioguanina, tiotepa, tirapazamina (Tira- zone), cloridrato de topotecan para injeção (HycamptinO), vinblastina (VelbanO), vincristina (OncovinO), e vinorelbina (NavelbineO).
[00158] Agentes de alquilação: tal como VNP-40101M ou cloretizi- na, oxaliplatina (US 4.169.846, WO 03/24978 e WO 03/04505), glufos- famida, mafosfamida, etopofos (US 5,041,424), prednimustina; treosul- fano; busulfano; irofluven (acilfulveno); penclomedina; pirazoloacridina (PD-115934); O6-benzilguanina; decitabina (5-aza-2-deoxicitidina); brostalicina; mitomicina C (MitoExtra); TLK-286 (TelcytaO); temozolo- mida; trabectedina (US 5.478.932); AP-5280 (Platinate formulation of Cisplatin); porfiromicina; e clearazida (meclorethamina).
[00159] Agentes quelantes: tal como tetratiomolibdate (WO 01/60814); RP-697; Chimeric T84.66 (cT84.66); gadofosveset (Vaso- vistO&); deferoxamina; e bleomycin opcionalmente em combinação com eletroporação (EPT).
[00160] Modificadores de resposta biológica: tal como imuno modu- ladores, incluindo estaurosprina e análogos macrocíclicos dos mes- mos, incluindo UCN-01, CEP-701 e midostaurina (veja, WO 02/30941,
WO 97/07081, WO 89/07105, US 5.621.100, WO 93/07153, WO 01/04125, WO 02/30941, WO 93/08809, WO 94/06799, WO 00/27422, WO 96/13506 e WO 88/07045); squalamina (WO 01/79255); DA-9601 (WO 98/04541 e US 6.025.387); alentuzumabe; interferons (por exem- plo, IFN-a, IFN-b etc.); interleucinas, especificamente IL-2 ou aldesleu- cina bem como IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, 11-10, 11-11, IL-12, e variantes biológicas ativas das mesmas tendo sequências de aminoácido maiores do que 70% da sequência humana nativa; altre- tamina (Hexalen&O); SU 101 ou leflunomide (WO 04/06834 e US
6.331.555); imidazoquinolinas tais como resiquimod e imiquimod (US
4.689.338, 5.389.640, 5.268.376, 4.929.624, 5.266.575, 5.352.784,
5.494.916, 5.482.936, 5.346.905, 5.395.937, 5.238.944, e 5.525.612); e SMIPs. incluindo benzazóis. Antraquinonas, tiosemicarbazonas, e triptantrinas (WO 04/87153, WO 04/64759, e WO 04/60308).
[00161] Vacinas contra câncer: incluindo Avicine& (Tetrahedron Lett. 26:2269-70 (1974)); oregovomabe (OvaRexO); TheratopeO (STn- KLH); Vacinas contra Melanoma; GI-4000 séries (GI-4014, GI-4015, e GI-4016), que são direcionadas a cinco mutações na proteína Ras; GlioVax-1; MelaVax; Advexinêk ou INGN-201 (WO 95/12660); Sig/E7/LAMP-1, codificando HPV-16 E7; Vacina MAGE-3 ou M3TK (WO 94/05304); HER-2VAX; ACTIVE, que estimula as células T espe- cíficas para tumores; vacina contra câncer GM-CSF; e vacinas com base em Listeria monocytogenes.
[00162] Terapia antissenso: incluindo composições antissenso, tais como AEG-35156 (GEM-640); AP-12009 e AP-11014 (oligonucleotí- deos antisentido específicos de TGF-beta2); AVI-4126; AVI-4557; AVI- 4472; oblimersen (Genasense6); JFS2; aprinocarsen (WO 97/29780); GTI-2040 (oligo antissenso de R2 ribonucleotídeo reductase mRNA) (WO 98/05769); GTI-2501 (WO 98/05769); oligodeoxinucleotídeos an- tissenso de c-Raf encapsolados por lipossoma (LErafAON) (WO
98/43095); e Sirna-027 (produto terapêutico com base em RNAi alve- jando mMRNA de VEGFR-1).
[00163] Desse modo, em outra modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo; um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um composto selecionado de inibidores de cinase, antiestrogênios, antiandrogênios, fármacos quimioterapêuticos de câncer, agentes de alquilação, agentes quelantes, modificadores de resposta biológica, e um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmaceuti- camente aceitáveis.
[00164] Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e everolimo (AfinitorO).
[00165] Em vista de sua atividade inibitória de MTOR, os compos- tos da invenção, sozinhos ou em combinação, podem ser úteis no tra- tamento de distúrbios neurodegenerativos. Em uma modalidade, a in- venção, portanto, se refere a um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com outro agente terapêutico em que o outro agente terapêutico é selecionado de: inibidores de acetilcolinesterase: tais como donepezil (Ari- cept'Y), rivastigmina (Exelon'Y) e galantamina (Razadyne'“); antagonistas de glutamato: tal como memantina (Namen- da"");
medicamentos antidepressivos: para mau humor e irritabili- dade tal como citalopram (CelexaTt“), fluoxetina (Prozac'Y), paroxeína (PaxilTY), sertralina (Zoloft'"Y) e trazodona (DesyrelTY); ansiolíticos: para ansiedade, inquietação, comportamento verbalmente disruptivo e resistência, tal como lorazepam (Ativan'") e oxazepam (Serax'T“Y); medicamentos antipsicóticos: para alucinações, delírio, agressão, agitação, hostilidade e não cooperativismo, tais como aripi- prazol (AbilifyTY), clozapina (Clozaril'Y), haloperidol (Haldol'Y), olan- zapina (Zyprexa'Y), quetiapina (SeroquelT“), risperidona (RisperdalTY) e ziprasidona (Geodon'“Y); estabilizantes de humor: tais como carbamazepina (Tegre- tol TM) e divalproex (Depakote""Y); agonistas de alfa - 7 nicotínicos; antagonistas de MGIuR5; agonistas de H3; e vacinas de terapia amiloide.
[00166] Desse modo, em outra modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo; um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um composto selecionado de inibidores de acetilcolinesterase, antagonistas de glutamato, medicamentos antidepressivos, ansiolíticos, medicamentos antipsicóticos, estabilizantes de humor, agonistas de alfa - 7 nicotínicos, antagonistas de MGIuR5,
agonistas de H3, and um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmaceuti- camente aceitáveis.
[00167] Consequentemente, a invenção fornece em outros aspec- tos:
[00168] uma combinação farmacêutica, por exemplo, para uso em qualquer um dos métodos descritos aqui, compreendendo uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente te- rapêutico, para administração simultânea ou sequencial.
[00169] um produto de combinação compreendendo um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente terapêutico.
[00170] um produto de combinação compreendendo um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente terapêutico como uma preparação combinada para uso em terapia, por exemplo, para uso em qualquer uma das te- rapias descritas aqui. Em uma modalidade, a terapia é o tratamento ou prevenção de câncer ou um distúrbio neurodegenerativo. Em outra modalidade, a terapia é o tratamento ou prevenção de doença de Par- kinson, Huntington ou Alzheimer. Ainda em outra modalidade, a tera- pia é o tratamento ou prevenção de doença de Huntington.
[00171] uma composição farmacêutica compreendendo um com- posto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, outro agente terapêutico, e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
[00172] um método como definido acima compreendendo a coad- ministração, por exemplo, concomitantemente ou em sequência, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente terapêutico, por exemplo, como acima indicado.
[00173] uma combinação farmacêutica, por exemplo, um Kit, com- preendendo a) um primeiro agente que é um composto da presente invenção como descrito aqui, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e b) outro agente terapêutico, por exemplo, como acima indicado; pelo qual tal kit pode compreender instruções para sua ad- ministração.
[00174] Os seguintes exemplos dos compostos da presente inven- ção ilustram a invenção. Métodos para a preparação de tais compos- tos são descritos aqui a seguir.
EXEMPLOS Abreviações EtOAc acetato de etila AcOH ácido acético brs singleto amplo CDCI3 clorofórmio deuterado CsF fluoreto de césio d dupleto CHACl diclorometano DIPEA di-isopropiletil amina DMSO dimetilsulfóxido DMSO-d; dimetilsulfóxido deuterado dppf 1,1'-Bis(difenilfosfino)ferroceno EtoH etanol LC-MS cromatografia líquida-espectro de massa MeOH metanol m multipleto MS espectrometria de massa NEt;3 trietilamina RMN ressonância magnética nuclear
THRMN ressonância magnética nuclear de próton Pd(PPh3)a tetracis(trifenilfosfina)paládio PPh;z trifenil fosfina Ss singleto TFA ácido triluoroacético THF tetra-hidrofurano UV ultravioleta EtoH etanol CDCI;3 clorofórmio deuterado SiO, sílica gel MgSO, sulfato de magnésio Na7SO, sulfato de sódio Pd paládio aq aquoso TBME terc-butilmetiléter mL mililitro LDA litiodiisopropilamina Raney-Ni Níquel Raney ax axial eq equatorial MHz megahertz Rt tempo de retenção Na>sS2O;3 tiossulfato de sódio
MÉTODOS ANALÍTICOS
[00175] RMNRMRN: Os espectros de próton são registrados em um espectrômetro Bruker Avance ou espectrômetro Varian Oxford 400 a menos que de outro modo observado. Desvios químicos são reporta- dos em ppm com relação ao dimetil sulfóxido (5 2,50), ou clorofórmio (5 7,26). Uma pequena quantidade da amostra seca (2-5 mg) é dissol- vida em um solvente deuterado apropriado (1 mL).
[00176] LC/MS:
[00177] A amostra é dissolvida em solvente adequado tal como MeCN, DMSO ou MeOH e é injetada diretamente no coluna usando um manipulador de amostra automatizado. A análise é realizada usan- do um dos seguintes métodos: Método 1 de LC-MS Coluna: Acquity HSS T3, 1,8 um, 2,1 x 50 mm; Eluente: água (+ 0,05% de ácido fórmico + 3,75 mM de acetato de amônio): acetonitrila (+ 0,04% de ácido fórmico), de 98:2 a 2:98 e 1,4 minutos, manteve 98% durante 0,75 minutos; Taxa de fluxo/Temperatura: 1,2 ml/minutos a 50 CT. método 2 de LC-MS Coluna: Machery-Nagel Nucleosil 100-3 C18 (70 x 4,6 mm); Solventes/Gradiente: A: 0,05% de TFA em água; B: 0,05% de TFA em acetonitrila; de 95% de A / 5% de B a 5% de A / 95% de B em 8 minutos.
Taxa de fluxo/Temperatura: 1,4 ml/minutos a 45 CT. Síntese de Intermediários de Amina
[00178] Os intermediários de amina são comercialmente disponí- veis ou podem ser preparados como descrito na literatura, ou de uma maneira análoga, ou podem ser preparados como descrito aqui poste- riormente, ou de uma maneira análoga. Síntese de Intermediários de Amina Bicíclica Amina Bicíclica 1: Terc-butil éster de ácido 3-Hidróxi-8-aza- biciclo[3.2.1]Joctano-8-carboxílico “* df ss Es Arca e É : À 7º v RT;EL, Y É A uma solução de terc-butil éster de ácido 3-0x0-8-aza- biciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico (1,03 g, 4,57 mmol) em EtoH (20 mL) foi adicionado NaBH, gota a gota. A mistura foi agitada durante
4,5 horas em temperatura ambiente sob nitrogênio, seguido por uma segunda adição de NaBH, (0,36 g, 9,60 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 17,5 horas e uma última adição de NaBH, (0,36 g, 9,60 mmol) foi realizada. A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, em seguida, uma solução satu- rada de cloreto de amônio foi adicionada e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As frações orgânicas combinadas foram secadas sobre Na>SO;, filtradas e concentradas. O cru foi purificado por cromatogra- fia rápida em sílica gel usando ciclo-hexano/EtOAc como eluente para produção, após evaporação, para os isômeros axiais e equatoriais (186 mg, 17,9%) e (205 mg, 19,7%) como sólidos branco. 1H RMN (600 MHz, CDCI3): 4,57 (d, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,89 (d, 1Hax), 1,89 - 1,71 (m, 5H), 1,65 - 1,54 (m, 1H), 1,47 - 1,28 (m, 11H) e 4,60 (d, 1H) 3,99 (m, 2H), 3,91 (m, 1Heg), 2,18 - 2,03 (m, 2H), 1,92 - 1,72 (m, 4H), 1,67 — 1,56 (m, 2H), 1,39 (s, 9H) Amina bicíclica 2: 8-Aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol Ds HCl a 4M em dioxano EA / >ot Hen TOR, mn Ara o
[00179] Uma solução de HCI (AN em dioxano,0,82 mL, 3,27 mmol) foi adicionada a uma suspensão de terc-butil éster de ácido 3-hidróxi- 8-aza-biciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico em acetonitrila. A mistura foi agitada a 70 ºC durante 1 hora, resfriada e concentrada. O produto (138 mg, 93%) foi isolado como um sal de ácido hidroclórico.
[00180] 1H RMN (600 MHz, CDCI;3): 9,07 — 8,49 (m, 1H), 3,94 (m, 2H), 3,85 (m, 1H), 1,97 - 1,74 (m, 6H), 1,60 (t, 2H)
[00181] O isômero axial (137 mg, 93%) foi preparado do mesmo modo.
[00182] 1H RMN (600 MHz, CDCI;3): 9,01 — 8,44 (m, 1H), 3,89 (m,
3H), 2,29 (d, 2H), 2,07 (dt, 2H), 1,96 - 1,84 (m, 2H), 1,83 - 1,71 (m, 2H) Síntese de Intermediários de Indol
[00183] Os intermediários são comercialmente disponíveis ou po- dem ser preparados como descrito na literatura, ou de uma maneira análoga, ou podem ser preparados como descrito aqui posteriormente, ou de uma maneira análoga. Indol 1: 4-Bromo-6-metóxi-1H-indol Br
LO >o N N-(3-Bromo-5-metóxi-fenil)-N-hidróxi-acetamida
[00184] 3-Bromo-S5-nitroanisol (1,5 g, 6,46 mmol) foi dissolvido em mL de 1,2-dicloroetano e 20 mL de etanol, e a mistura foi resfriada para O (C. Níquel Raney (30 mg) e hidrato de hidrazina (0,79 mL, 12,9 mmol) foram adicionados em um período de 10 minutos, e a reação foi agitada durante 4 horas em temperatura ambiente, quando 50 mg de níquel Raney foram adicionados. Após agitação durante 16 horas, mais 50 mg de níquel Raney foram adicionados, e após outra agitação durante 4 horas, mais 50 mg de níquel Raney foram adicionados. À agitação foi continuada durante 4 horas em temperatura ambiente, quando o material de partida desapareceu completamente. A mistura reacional foi filtrada através de celite, e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer N-(3-bromo-5-metóxi-fenil)-N- hidroxilamina como um sólido, que foi dissolvido em 80 mL de tolueno. Bicarbonato de sódio (597 mg, 7,11 mmol) foi adicionado, seguido por cloreto de acetila (0,51 mL, 7,11 mol). A agitação em temperatura am- biente foi continuada durante 20 horas. A mistura reacional foi em se- guida filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de coluna (40 g de SiO,; EtOAc/heptano em um gradiente de 5/95 a 1/3) para produzir o composto do título como um sólido (360 mg, 21% durante 2 etapas). LC-MS em 254 nm; [M+H] 260,0/262,1; tempo de retenção 0,82 minutos; (Método 1 de LCMS). 1H-RMN (600 MHz; DMSO-dº):10,85 (brs, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,26 (dd, 1H), 6,94 (dd, 1H), 3,77 (s, 3H), 2,22 (s, 3H). (b) 4-Bromo-6-metóxi-1H-indol
[00185] —N-(3-Bromo-5-metóxi-fenil)-N-hidróxi-acetamida (360 mg, 1,384 mmol) foi dissolvido em acetato de vinila (1,92 mL, 20,8 mmol), e LiaPdCl, (18,2 mg, 69 umol) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada durante 3 horas a 60 “C. A mistura reaciona| foi diluída com EtOAc e salmoura; a camada orgânica foi separada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um sólido, que foi dissolvido em 20 mL de MeOH. NaOH aquoso a 1 N (2,61 mL, 2,61 mmol) foi adicionado, e a reação foi agitada durante duas horas em temperatura ambiente. À mistura reacional foi extinguida por adição de HCI a 2 N (1,3 mL, 2,6 mmol), seguido por adição de 500 mg de Na-CO;z. Após adição de 50 mL de EtOAc, as camadas orgânicas foram separadas, secadas sobre Na7SO;, filtradas, e concentradas. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (20 g de SiO,, EtOAc/heptano em um gradiente de 0/100 a 1/4) para produzir o composto do título como um líquido (145 mg, 46% durante 2 etapas). *H-RMN (600 MHz; DMSO-dº): 11,26 (brs, 1H), 7,31 (dd, 1H), 6,93 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 6,29 (dd, 1H), 3,78 (s, 3H). Indol 2: 4-cloro-6-fluoro-1H-indol
T [LS
EEE r já H 1-cloro-3-fluoro-5-nitro-benzeno
[00186] Tetra-hidrato de perborato de sódio (7,69 g, 50,0 mmol) foi suspenso em 30 mL de ácido acético, e esta suspensão foi aquecida para 55 C. 3-cloro-S-fluoroanilina (1,46 g, 10 mmol) foi dissolvido em
20 mL de ácido acético e adicionado em um período de uma hora. À reação foi agitada durante 1 hora a 55 C e em seguida resfriada para a temperatura ambiente. 300 mL de TBME foram adicionados, e a mis- tura reacional foi filtrada. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seguido por 20 mL de aqueous Na7sS,O;3, seguido por salmoura. A ca- mada orgânica foi secada sobre Na,SO, e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resíduo, que foi purificado por cromatogra- fia de coluna (40 g de SiO>; ciclo-hexano) para produzir o composto do título como um sólido (320 mg, 18%). *H-RMN (400 MHz; DMSO- dº):8,20 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 8,07 (d, 1H).
(b) N-(3-cloro-5-fluoro-fenil)-N-hidróxi-acetamida
[00187] 1-cloro-3-fluoro-S-nitro-benzeno (320 mg, 1,82 mmol) foi dissolvido em 5 mL de 1,2-dicloroetano e 5 mL de etanol, e a mistura foi resfriada para O (CO. Níquel Raney (30 mg, 2,0 m mol) e hidrato de hidrazina (0,11 mL, 1,82 mmol) foram adicionados em um período de minutos, e a reação foi agitada durante 4 horas em temperatura ambiente, quando 50 mg de níquel Raney foram adicionados. Após agitação durante 16 horas, mais 50 mg de níquel Raney foram adicio- nados, e após outra agitação durante 4 horas, mais 50 mg de níquel Raney foram adicionados. A agitação foi continuada durante 4 horas em temperatura ambiente, quando o material de partida desapareceu completamente. A mistura reacional foi filtrada através de celita, e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer N-(3-bromo- 5-fluoro-fenil)-N-hidroxilamina como um sólido, que foi dissolvido em mL de tolueno. Bicarbonato de sódio (160 mg, 1,91 mmol) foi adi- cionado, seguido por cloreto de acetila (136 uL, 1,91 mmol) em 0,5 mL de tolueno. A agitação em temperatura ambiente foi continuada duran- te 20 horas. A mistura reacional foi em seguida filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (40 g de SiO,; EtOAc/ heptano em um gradiente de 5/95 a 1/3)
para produzir o composto do título como um sólido (214 mg, 53% du- rante 2 etapas). LC-MS em 254 nm; [M+H] 204,1; tempo de retenção 0,83 minutos; (Método 1 de LCMS), *H-RMN (DMSO-dº): 10,95 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,51 (dd, 1H), 7,19 (d, 1H), 2,24 (s, 3H). (c) 4-cloro-6-fluoro-1H-indol
[00188] —N-(3-cloro-5-fluoro-fenil)-N-hidróxi-acetamida (200 mg, 982 umol) foi dissolvido em acetato de vinila (1,81 mL, 19,6 mmol), e Li2PdCl, (25,7 mg, 98 umol) foi adicionado. A mistura reacional foi agi- tada durante 3 horas a 60 C. A mistura reacional foi diluída com EtO- Ac e salmoura; a camada orgânica foi separada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um sólido, que foi dissolvido em 8 mL de MeOH. NaOH aquoso a 1 N (1,89 mL, 1,89 mmol) foi adicionado, e a reação foi agitada durante duas horas em temperatura ambiente. À mistura reacional foi extinguida por adição de HCI a 2 N (0,95 mL, 1,9 mmol), seguido por adição de 300 mg de Na-CO;z. Após adição de 50 mL de EtOAc, as camadas orgânicas foram separadas, secadas sobre Na>SO,;, filtradas, e concentradas. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (12 g de SiO>; EtOAc /heptano em um gradiente de 0/100 a 1/4) para produzir o composto do título como um líquido (72 mg, 45% durante 2 etapas). *H-RMN (DMSO-d9): 11,52 (brs, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,05 (d, 1H), 6,45 (d, 1H). Síntese de Intermediários de Éster Borônico
[00189] Os intermediários de éster borônico usados na preparação dos compostos da presente invenção são comercialmente disponíveis ou podem ser preparados como descrito na literatura, ou de uma ma- neira análoga, ou podem ser preparados como descrito aqui posteri- ormente, ou de uma maneira análoga. Éster borônico 1: 6-metóxi-4-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaboro]lan-2-i])-1H-indol
[00190] A uma solução de 4-bromo-6-metóxi-1H-indol (200 mg, 885 umol) em dioxano (5 mL) foi adicionado sob argônio, bis(pinacolato)diboro (247 mg, 973 umol) seguido por triciclo- hexilfosfina (14,9 mg, 53 umol), bis(dibenzilidenoacetona)Pd (15,3 mg, 27 umol) e acetato de potássio (130 mg, 1,33 mmol). A mistura reacio- nal foi agitada durante 18 horas a 65 C sob argôni o. A mistura reacio- nal foi em seguida diluída por adição de 30 mL de EtOAc e 20 mL de salmoura. Os solventes orgânicos foram separados, secados sobre NazSO;, filtrados, e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (20 g de SiO,, terc- butilmetiléter/heptano em uma relação de 3/7) para fornecer o produto (190 mg, 79%). *H-RMN (DMSO-dº): 10,89 (brs, 1H), 7,22 (dd, 1H), 7,03 (dd, 1H), 7,00 (d, 1H), 6,64 (dd, 1H), 3,77 (s, 3H), 1,33 (s, 12H). Exemplo 1: 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H- purina o
O
OE —N N nNÊ NÓ Ave 2-cloro-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina
[00191] 2,6-dicloro-9H-purina (2,36 g, 12,5 mmol), cloridrato de (R)- 3-metilmorfolina (1,89 g, 13,8 mmol), e diisopropiletilamina (5,46 mL, 31,3 mmol) foram dissolvidos em 15 mL de isopropanol, e a mistura reacional foi agitada durante 18 horas a 75 C. A mistura reacional foi em seguida diluída com 200 mL de CH2Clz. Os solventes orgânicos foram lavados com Na2CO; aquoso, seguido por água e salmoura. Se- cagem sobre Na7zSO,, filtragem e concentração sob pressão reduzida forneceram um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna (150 g de SiO,, CH.CI/EtoH/NH3 aquoso em uma relação de
96/4/0,1) para fornecer o produto como um sólido (2,87 g, 91%).
[00192] LC-MS em 254 nm; [M+H] 254,1/256,1; tempo de retenção 0,72 minuto; (Método 1 de LCMS),
[00193] H RMN (DMSO-ds): 13,25 (1H, brs), 8,17 (1H, s), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,96 (dd, 1H), 3,76 (d, 1H), 3,67 (dd, 1H), 3,51 (ddd, 1H), 1,31 (d, 3H) b) 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina
[00194] 2-cloro-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina (1,02 g, 4 mmol), diisopropiletilamina (1,40 mL, 8 mmol), e cloridrato de (R)-3- metilmorfolina (826 mg, 6 mmol) foram agitados em 2-butanol (5 mL) em um tubo de micro-ondas fechado sob argônio a 50 C, todos os ingredientes foram dissolvidos. A reação foi em seguida agitada a 180 ºC durante 100 horas. A mistura reacional foi em seguida resfriada pa- ra a temperatura ambiente e diluída com 200 mL de CH,CI,.
[00195] A camada orgânica foi lavada com NaxCO; aquoso e sal- moura. Secagem sobre Na-SO,, filtragem e concentração sob pressão reduzida forneceram um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna (120 g de SiO,z, CH.CI/EtOH/NH;3 aquoso em um gradiente com uma relação de 100/0/0,1 a 94/6/0,1) para fornecer o produto co- mo uma espuma (1,11 g, 87%).
[00196] LC-MS em 254 nm; [M+H] 319,0; tempo de retenção 0,71 minuto; (Método 1 de LCMS),
[00197] '*H RMN (DMSO-ds): 12,44 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,51 (dd, 1H), 4,15 (dd, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,94 (dd, 1H), 3,89 (dd, 1H), 3,73 (d, 1H), 3,69 (d, 1H), 3,65 (dd, 1H), 3,58 (dd, 1H), 3,50 (ddd, 1H), 3,42 (dd, 1H), 3,07 (ddd, 1H), 1,27 (d, 3 H) 1,15 (d, 3 H). c) 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9-(tetra-hidro-piran-2-i1)-9H- purina
[00198] 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina (600 mg, 1,89 mmol) foi dissolvido em EtOAc (25 mL) sob argônio. Após adição de 3,4-di-hidro-2H-pirano (172 ul, 1,89 mmol), anidrido de ácido trifluoro acético (27 ul, 188 umol), e ácido trifluoro acético (319 ul, 4,15 mmol), a mistura reacional foi aquecida para 70 (O. Após 6 horas, 3,4-di-hidro- 2H-pirano (1,44 mL, 15,7 mmol) foi adicionado. A reação foi em segui- da agitada durante 22 horas a 70 C e em seguida re síriada para a temperatura ambiente. 500 mg de NasxCO; sódio foi adicionado e agi- tação continuada durante 10 minutos. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, a camada orgânica foi separados, secados sobre Na7zSO,, filtrados e concentrada sob pressão reduzida para fornecer um resí- duo, que foi purificado por cromatografia de coluna (40 g de SiO,, hep- tano/EtOAc em um gradiente de 9/1 a 2/3) para fornecer o produto como uma espuma (600 mg, 79%).
[00199] LC-MS em 254 nm; [M+H] 403,3; tempo de retenção 1,11 minuto; (Método 1 de LCMS). d) 8-Bromo-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9-(tetra-hidro-piran-2- il)-9H-purina
[00200] —Di-isopropilamina (290 ul, 2,04 mmol) foi dissolvida em 4 mL de THF a -60 CT, quando butil lítio em hexano foi adicionado (1,27 mL, 2,04 mmol) para formar LDA. 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9- (tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina (585 mg, 1,45 mmol) foi dissolvido em 8 mL de THF e adicionado à mistura reacional a — 78*C dentro de um período de 10 minutos. A reação foi agitada durante 1 hora a — 78 O. Dibromotetracloroetano (947 mg, 2,91 mmol) em 4 mL de THF foi adi- cionado dentro de um período de 10 minutos. A reação foi agitada du- rante 2 horas a — 78. A reação foi extinguida por adição de NH,CI aquoso, saturado e aquecida para temperatura ambiente. A mistura foi diluída com 80 mL de EtOAc e 50 mL de salmoura. As camadas orgâ- nicas foram separadas, secadas sobre NasSO,, filtradas, e concentra- das para fornecer um resíduo, que foi purificado por cromatografia de coluna (30 g de SiO»>, heptano/TBME in a ratio 7/3) para fornecer o produto como uma espuma (546 mg, 78%).
[00201] LC-MS em 254 nm; [M+H] 481,3/483,2; tempo de retenção 1,37 minuto; (Método 1 de LCMS).
[00202] *H RMN (DMSO-d;s): 5,50 (dd, 1H), 5,4-4,5 (brs, 2H), 4,48 (brs, 1H), 4,13 (dd, 1H), 4,01 (d, 1H), 3,93-3,87 (m, 2H), 3,74-3,66 (m, 2H), 3,64-3,55 (m, 3H), 3,5-3,0 (brs, 1H), 3,46 (ddd, 1H), 3,40 (dd, 1H), 3,11-3,03 (m, 1H), 3,00-2,90 (m, 1H), 1,96 (d, 1H), 1,78 (d, 1H), 1,70- 1,48 (m, 3H), 1,24 (d, 3H), 1,14 (d, 3H). e) 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9-(tetra-hidro- piran-2-il)-9H-purina
[00203] 8-Bromo-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9-(tetra-hidro- piran-2-il)-9H-purina (40 mg, 83 umol) foi dissolvido em 2 mL de tolueno sob argônio em um frasconete de micro-ondas, e 2- (tributilstanil)-piridina (36 mg, 83 umol) e PA(PPh3), (4,8 mg, 4,2 pumol) foram adicionados. O frasconete de micro-ondas foi tampado, e a mistura reacional foi agitada durante 3 horas a 120 (C. O frasconete foi resfriado para a temperatura ambiente e aberto. A mistura foi diluída com EtOAc (20 mL) e salmoura. A camada orgânica foi separada, se- cada sobre Na7sSO;,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (12 g de SiO», hep- tano/TBME em um gradiente de 4/1 a 2/3) para fornecer o produto co- mo um sólido (35 mg, 88%).
[00204] LC-MS em 254 nm; [M+H] 480,3; tempo de retenção 1,34 minuto; (Método 1 de LCMS),
[00205] H RMN (DMSO-d;): 8,68 (d, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,94 (dad, 1H), 7,46 (dd, 1H), 6,53 (dd, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,58-4,48 (m, 1H), 4,18 (dd, 1H), 3,99-3,86 (m, 3H), 3,78-3,69 (m, 2H), 3,69-3,64 (m, 1H), 3,64-3,56 (m, 1H), 3,5-3,0 (brs, 1H), 3,55-3,39 (m, 3H), 3,28-3,17 (m, 1H), 3,15-3,05 (m, 1H), 2,00-1,92 (m, 1H), 1,85 (dd, 1H), 1,65-1,45 (m,
3H), 1,28 (d, 3H), 1,18 (d, 3H). f) 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina
[00206] 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9-(tetra-hidro- piran-2-i1)-9H-purina (33 mg, 69 umol) foi dissolvido em 3 mL de THF. HCI aquoso a 2N (344 ul, 688 umol) foi adicionado, e a reação foi agi- tada durante 2 horas em temperatura ambiente. 100 mg de NaxCO; e mL de CH2Cl> foram adicionados, e a mistura reacional foi agitada durante 20 minutos. A camada orgânica foi separada, secada sobre Na7SO;, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (12 g de SiO>, heptano/EtOAc em um gradiente de 100/0 a 3/2) para fornecer o produto como um só- lido (24 mg, 88%).
[00207] LC-MS em 254 nm; [M+H] 396,3; tempo de retenção 1,03 minuto; (Método 1 de LCMS),
[00208] HH RMN (DMSO-d;s): 12,98 (s, 1 H), 8,62 (d, 1 H), 8,12 (d, 1H), 7,89 (ddd, 1H), 7,40 (ddd, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,57 (dd, 1H), 4,20 (d, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,97 (dd, 1H), 3,89 (dd, 1H), 3,76 (d, 1H), 3,71-3,66 (m, 2H), 3,57 (dd, 1H), 3,53 (ddd, 1H), 3,41 (dda, 1H), 3,09 (ddd, 1H), 1,30 (d, 3 H) 1,17 (d, 3 H) Exemplo 2: 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)- 8-(1H-pirazol-3-il)-9H-purina o
CX N N o
ND 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-11)-9H-purina
[00209] —2-cloro-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purina (712 mg, 2,81 mmol), diisopropiletilamina (0,98 mL, 5,61 mmol), e cloridrato de (S)-3- metilmorfolina (579 mg, 4,21 mmol) foram agitados em 2-butanol (3 mL) em um tubo de micro-ondas de 5 mL fechado sob argônio a 50 O, todos os ingredientes foram dissolvidos. A reação foi em seguida agi- tada a 175 ºC durante 48 horas. A camada orgânica foi diluída com 200 mL de CH2Cl; e lavada com salmoura. Secagem sobre NazsSO,, filtragem e concentração sob pressão reduzida forneceram um resí- duo, que foi purificado por cromatografia de coluna (40 g de SiO,, CH2CI/EtoH/NH3 aquoso em um gradiente de 100/0/0,1 a 90/10/0,1) para fornecer o produto como um sólido (588 mg, 66%).
[00210] LC-MS em 254 nm; [M+H] 319,2; tempo de retenção 0,70 minuto; (Método 1 de LCMS),
[00211] *H RMN (DMSO-d;s): 12,42 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,50 (dd, 1H), 4,09 (d, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,92 (dd, 1H), 3,87 (d, 1H), 3,71 (d, 1H), 3,67 (d, 1H), 3,64 (dd, 1H), 3,56 (dd, 1H), 3,48 (ddd, 1H), 3,40 (dd, 1H), 3,05 (ddd, 1H), 1,24 (d, 3 H) 1,12 (d, 3 H). b) 8-Bromo-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purina
[00212] — 2-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purina (786 mg, 2,47 mmol) foi dissolvido em CH2Cl> (25 mL). Bromo (0,16 mL, 3,09 mmol) diluído em 2 mL de CH2CI> foi adicionado lenta- mente dentro de um período 2 minutos. A mistura reacional foi agitada durante 6 horas em temperatura ambiente. Aqueous NasS2O;3 (10 mL) foi adicionado à mistura reacional, e a agitação foi continuada durante minutos. A camada orgânica foi lavada com salmoura e NaHCO; aquoso. Secagem sobre NazSO,, filtragem e concentração sob pres- são reduzida forneceram um resíduo, que foi purificado por cromato- grafia de coluna (40 g de SiO,, heptano/EtOAc em um gradiente de 2/3 a 4/1) para fornecer o produto como uma espuma (455 mg, 46%).
[00213] LC-MS em 254 nm; [M+H] 399,1/397,2; tempo de retenção 0,94 minuto; (Método 1 de LCMS).
[00214] c) 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-metil-morfolin-4-il)- 8-(1H-pirazol-3-il)-9H-purina
[00215] —8-Bromo-2-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin- 4-i1)-9H-purina (50 mg, 126 umol) foi dissolvido em dimetoxietano (2 mL) e água (0,2 mL), seguido por adição de ácido 1H-pirazol-3- ilborônico (21,1 ma, 189 umol), PdCl-(dppf) (9,21 mg, 13 umol) e NEt; (53 ul, 378 umol) sob argônio. A mistura reacional foi aquecida para 85 ºC durante 23 horas. A mistura reacional foi em seguida diluída com EtOAc, a camada orgânica foi separados, lavada com salmoura, seca- da sobre MgSO;, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resí- duo foi purificado por cromatografia de coluna (12 g de SiO,, EtOAc) para fornecer o produto (19 mg, 39% de produção).
[00216] LC-MS em 254 nm; [M+H] 385,3; tempo de retenção 0,81 minuto; (Método 1 de LCMS).
[00217] HRMN (DMSO-d;s): 13,13 (s, 1H), 12,72 (s, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 6,73 (s, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,54 (d, 1H), 4,13 (d, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,95 (d, 1H), 3,89 (d, 1H), 3,74 (d, 1H), 3,71-3,64 (m, 2H), 3,57 (d, 1H), 3,51 (dd, 1H), 3,41 (dd, 1H), 3,07 (dd, 1H), 1,26 (d, 3 H) 1,15(d, 3 H) Exemplo 3: 8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2- [1,4]oxazepan-4-il-9H-purina
PE ses
FNE ra, Tx hs N ? 8-Bromo-2-cloro-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina
[00218] A uma solução de 2-cloro-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purina (950 mg, 3,74 mmol) em CH2Cl, (19 mL) foi adicionado bromo (0,23 mL, 4,49 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 19 horas. Tiossulfato de sódio saturado foi adicionado. A ca- mada aquosa foi extraída com diclorometano duas vezes. As camadas orgânicas combinadas e secadas sobre Na,SO, e o solvente foi remo- vido sob pressão reduzida. o cru foi purificado por cromatografia de coluna rápida (O a 70% gradiente de EtOAc/ciclo-hexano) para forne- cer produto como um sólido branco (495 mg, 39%). LC-MS em 254 nm; [M+H] 334.1; tempo de retenção 0,89 minuto; (Método 1 de LCMS).
[00219] *H RMN (400 MHz, DMSO-d;): 14,09 (br, s, 1H), 5,4-4,9 (m, 2H) 3,96 (d, 1H) 3,75 (d, 1H) 3,65 (dd, 1H) 3,42 - 3,57 (m, 1H), 3,41- 3,37 (m, 1H), 1,29 (d, 3H) b) 2-cloro-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina
[00220] Em um tubo selado, a uma solução de 8-bromo-2-cloro-6- ((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purina (495 mg, 149 mmol) em CH3;CN/H2O (11 / 1,1 mL) foi adicionado fluoreto de césio (452 mg, 2,98 mmol), ácido indol-4-borônico (266 mg, 1.64 mmol), e tetra- cis(trifenilfosfina)paládio (172 mg, 0,15 mmol). Em seguida a reação foi condição sob irradiação de micro-ondas a 160 ºC durante 30 minutos. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o cru foi purifi- cado por cromatografia de coluna rápida (20 a 100% de gradiente de EtOAc/ciclo-hexano) para fornecer 2-cloro-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina (350 mg, 63.8%) como um sólido amarelo claro. LC-MS em 254 nm; [M+H] 369,2; tempo de retenção 1,00 minu- to; (Método 1 de LCMS).
[00221] (400 MHz, DMSO-d;): 13,59 (s, 1H), 11,41 (s, 1H), 7,73 (dd, 1H), 7,58 - 7,49 (m, 2H), 7,38 - 7,20 (m, 2H), 5,14 (s, 1H), 4,05-4,01 (m, 1H), 3,79 - 3,88 (m, 1H), 3,69 - 3,79 (m, 1H), 3,57 (s, 1H), 3,60 (s, 1H), 1,41 (d, 3H) c) 8-(1H-indol-4-11)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-[1,4]Joxazepan-4-il- 9H-purina
[00222] À solução de 2-cloro-B-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina (50 mg, 0,14 mmol) em 1-butanol (300 uL) foi adicionado 1,4-0xazepano (20,6 mg, 0,20 mmol), seguido por DIPEA (47,4 uL, 0,27 mmol). A mistura foi agitada a 120 ºC durante 24 horas. Na conclusão da reação, a solução foi vertida em água. A camada a- quosa foi extraída com CH,CI, três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na7sSO,, filtradas, concentradas sob pressão reduzida e o cru foi purificado por cromatografia de coluna rá- pida (30 a 100% de gradiente de EtOAc/ciclo-hexano) para fornecer 2- ((28,6R)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)-6-morfolin-4-il-9H-purina = (385 mo, 59%) como um sólido bege. LC-MS em 254 nm; [M+H] 432,3; tempo de retenção 1,00 minuto; (Método 1 de LCMS),
[00223] H RMN (400 MHz, DMSO-d;) 12,47 (br, s,, 1H), 11,00 (br, s,, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,43 - 7,39 (m, 2H), 7,28 (br, s,, 1H), 7,16 (t, 1H), 5,45 (d, 1H), 5,08 (d, 1H), 4,10 — 3,95 (m, 1H), 3,91 - 3,85 (m, 4H), 3,82 - 3,75 (m, 4H), 3,69-3,65 (m, 2H), 3,63-3,57 (m, 1H), 3,48-3,40 (m, 1H), 1,98-1,90 (m, 2H), 1,23 - 1,48 (m, 3H)u Exemplo 4: 8-[4-(1H-Imidazo]-2-il)-fenil]-2,6-bis-((R)-3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina o O.
OD H H N N
DO 8-Bromo-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina
[00224] 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina (6387 mg, 2 mmol) foi dissolvido em 50 mL de CH2CI; e agitado sob argônio. Bro- mo (124 ul, 2,4 mmol) foi dissolvido em 2 mL de CH,CI, e adicionado em um período de 2 minutos. A reação foi agitada durante 6 horas em temperatura ambiente. 5 mL de Na7;S,O;3 aquoso foram adicionados, a mistura foi agitada durante 15 minutos, e os solventes orgânicos foram separados, lavados com salmoura e NaHCO; aquoso, secados sobre Na>zSO;, filtrados, e concentrados. O resíduo foi purificado por croma- tografia de coluna (40 g de SiIO,, heptano/EtOAc em um gradiente de 2/3 a 4/1) para fornecer uma espuma (422 mg, 53%).
[00225] HRMN (DMSO-d;s): 13,20 (1H, brs), 5,4-4,5 (brs, 2H), 4,48 (d, 1H), 4,12 (d, 1H), 3,93 (d, 1H), 3,89 (dd, 1H), 3,73 (d, 1H), 3,68 (d, 1H), 3,64 (d, 1H), 3,56 (dd, 1H), 3,48 (ddd, 1H), 3,41 (ddd, 1H), 3,4-3,1 (brs, 1H), 3,07 (ddd, 1H), 1,26 (d, 3H), 1,15 (d, 3H) b) 8-[4-(1H-Imidazo]|-2-il)-fenil]-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purina
[00226] —8-Bromo-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina (99 mg, 250 umol) foi dissolvido em 2 mL de acetonitrila e 0,2 mL de água sob argônio. Ácido 4-(1H-imidazol-2-il)fenil borônico (58,7 mg, 313 umol), CsF (57 mg, 375 umol), e PAd(PPh3), (28,9 mg, 25 umol) foram adicionados. A suspensão foi agitada a 50 ºC durante 10 minutos em um frasconete de micro-ondas fechado. Em seguida, foi irradiada du- rante 40 minutos em um aparato de micro-ondas a 150 C. O frascone- te foi resfriado e destampado, e a mistura reacional foi diluída com 50 mL de CH2Cl; e 10 mL de isopropanol. Os solventes orgânicos foram lavados com salmoura e NaHCO; aquoso, secados sobre NasSO,, fil- trados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (40 g de SiO,, CH2CI/EtoH/NH;3 aquoso em um gradiente de 100/0/0,1 a 90/10/0,1) para fornecer o produto como um sólido (58 mg, 48%).
[00227] LC-MS em 254 nm; [M+H] 461,3; tempo de retenção 0,76 minuto; (Método 1 de LCMS).
[00228] 1H RMN (600 MHz, DMSO-d;):13,03 (s, 1 H), 12,62 (s, 1H), 8,10 (d, 2H), 8,02 (d, 2 H), 7,31 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,55 (dd, 1H), 4,20 (d, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,99 (dd, 1H), 3,92 (dd,
1H), 3,79 (d, 1H), 3,74-3,68 (m, 2H), 3,61 (dd, 1H), 3,55 (ddd, 1H), 3,45 (ddd, 1H), 3,12 (ddd, 1H), 1,32 (d, 3 H), 1,19 (d, 3 H) Exemplo 5: 8-(6-fluoro-1H-indol-4-i1)-2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6- ((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina o
F CX
O 2 HN, > DN o
[00229] —4-cloro-6-fluoro-1H-indol (72 mg, 0,42 mmol) foi dissolvido em 4 mL de dioxano sob argônio. Bis(pinacolato)diboro (198 ma, 778 umol), triciclo-hexilfosfina (19,8 mg, 71 umol), bis(dibenzilidenacetona)paládio (20,3 mg, 35 umol), e acetato de potássio (104 mg, 1,06 mmol) foram adicionados sob argônio. À reação foi agitada durante 24 horas a 80 (C. A mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com 30 mL de EtOAc. A camada orgânica foi lavada com 20 mL de salmoura, secada sobre Na>zSO;, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi filtrados através de a column (40 g de SiO>; EtOAc/ heptano em um gradiente de 0/100 a 12/88) para produzir uma mistura, que foi concentrada sob pressão reduzida, e em seguida dissolvida em 2 mL de acetonitrila e 0,2 mL de água sob argônio. 8-Bromo-2-((S)-3- metilmorfolin-4-il-)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina (100 mg, 153 upmol) foi adicionado, seguido por fluoreto de césio (25,8 mg, 170 umol) e tetracis(trifenilfosfina)paládio (26 mg, 23 umol). A mistura reacional foi agitada a 135 ºC durante 2 horas em um frasconete selado. À mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e diluída com 40 mL de EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada sobre Na-SO;,, filtrada, e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (10 g de SiO>; terc-butilmetiléter) para fornecer o composto do título como uma espuma (36 mg, 19% durante 2 etapas).
[00230] LC-MS em 254 nm; [M+H] 452.3; tempo de retenção 1,06 minutos; (Método 1 de LCMS).
[00231] —H-RMN (400 MHz; DMSO-dº): 12,95 (s, 1 H), 11,33 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,23 (d, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,56 (d, 1H), 4,17 (d, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 4,00 (d, 1H), 3,91 (d, 1H), 3,80 (d, 1H), 3,75-3,68 (m, 2H), 3,60 (d, 1H), 3,57 (dd, 1H), 3,44 (dd, 1H), 3,11 (ddd, 1H), 1,35 (d, 3H), 1,18 (d, 3H). Exemplo 6: (4-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-8-i1]-1H- indol-6-il)-metano! o
CX Ho N AN 0
BE “o ÃO
[00232] Metil éster de ácido 4-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purin-8-il]-1H-indol-6-carboxílico (exemplo 32, 72 mg, 146 umol) foi dissolvido em 10 ml de THF sob argônio. LiAIH, a 1N em THF (0,22 mL, 0,22 mmol) foi adicionado a 5 O, e a reação foi agitada durante 2 horas em temperatura ambiente. A reação foi extinguida por adição de Na7sSO, aquoso saturado (1 mL). A mistura foi diluída com 30 mL de CH72Cl; e 3 mL de isopropanol. As fases orgânicas foram separadas, secadas sobre Na7sSO,, filtradas, e concentradas. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de coluna (12 g de SiOs, CH.CI/EtoH em um gradiente de 100/0 a 88/12) para fornecer o produto como um sólido (58 mg, 84%).
[00233] LC-MS em 254 nm; [M+H] 464.3; tempo de retenção 0,88 minutos; (Método 1 de LCMS).
[00234] 1H RMN (600 MHz, DMSO-d;): 12,83 (s, 1 H), 11,22 (s, 1H),7,63 (d, 1 H), 7,44 (s, 1H), 7,40 (dd, 1H), 7,18 (dd, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 5,16 (t, 1H), 4,61 (d, 2H), 4,55 (dd, 1H), 4,19 (d, 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,99 (dd, 1H), 3,90 (dd, 1H), 3,79 (d, 1H), 3,74-3,68 (m, 2H), 3,59 (dd, 1H), 3,56 (ddd, 1H), 3,44 (ddd, 1H), 3,10 (ddd, 1H), 1,35 (d, 3 H), 1,17 (d, 3 H) Exemplos 7 a 32
[00235] Exemplos 7 a89 na tabela 2 abaixo podem ser preparados usando procedimentos análogos àqueles descritos no exemplo 1, u- sando o intermediário de éster borônico ou ácido borônico apropriado.
[00236] Exemplos 10 a 11 na tabela 2 abaixo podem ser prepara- dos usando procedimentos análogos àqueles descritos no exemplo 2, usando o intermediário de éster borônico ou ácido borônico apropria- do.
[00237] Exemplos 12 a 26 na tabela 2 abaixo podem ser prepara- dos usando procedimentos análogos àqueles descritos no exemplo 3, usando o intermediário de éster borônico ou ácido borônico apropria- do.
[00238] Os exemplos 27 a 32 na tabela 2 abaixo podem ser prepa- rados usando procedimentos análogos àqueles descritos no exemplo 4, usando o intermediário de éster borônico ou ácido borônico apropri- ado. Exempl o e | Estrutura e Nome ?H RMN LC/MS Número o 1H RMN (600 MHz, C À DMSO-ds): 13,00 (s, 1 N H), 8,64 (d, 1 H), 8,14 | Método 1 N (d, 1H), 7,91 (ddd, 1H), | Tempo de 7 CAR (x 7,42 (ddd, 1H), 6,0-4,5 | retenção: 1,06 —N N As (brs, 2H), 4,59 (dd, 1H), | minuto H to 4,19 (d, 1H), 4,0-3,0 | Massa (ES+): “Oo (brs, 1H), 3,99 (dd, 1H), | 396,4 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3- | 3,91 (dd, 1H), 3,79 (d, metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H- | 1H), 3,73-3,68 (m, 2H),
purina 3,59 (dd, 1H), 3,56 (ddd, 1H), 3,43 (ddd, 1H), 3,11 (ddd, 1H), 1,31 (d, 3 H) 1,18 (d, 3 H) 1H RMN (600 MHz, DMSO-d:):12,99 (s, 1 o H), 8,62 (d, 1 H), 8,12 C J (d, 1H), 7,89 (ddd, 1H), Pim 7,40 (ddd, 1H), 6,0-4,5 s ' (brs, 2H), 4,56 (da, 1H), | Mélodo1 N Tempo de / N 7 7" 4,19 (d 1H), 4,030 retenção: 1,04 " | A (brs, 1H), 3,96 (dd, 1H), | no N NO] o 3,89 (dd, 1H), 3,76 (4d. | soa (ES): e 1H), 3,71-3,66 (m, 2H), | oo a : o 3,57 (dd, 1H), 3,53 ' 2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-1)-8- (ddd, 1H), 3,41 (ddd, piridin-2-il-9H-purina 1H), 3,09 (ddd, 1H), 1,30 (d, 3 H) 1,16 (d, 3 H)
CO N 4 Método 2 N Tempo de CSA x retenção: 4,38 —N N Sq NÓ) minutos H Massa (ES+): to 367,95 2,6-Di-morfolin-4-il-8-piridin-2-il-9H- purina 1H RMN (400 MHz, o DMSO-ds): 13,13 (s, 1H), 12,72 (s, 1 H), 7,84 C Jd. (dd, 1 H), 6,75 (dd, 1H), NO 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,6- | Método 1 un=N N AN 4,47 (m, 1H), 4,16 (dd, Tempo de LIA | 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), | retenção: 0,81 > N A. 3,96 (dd, 1H), 3,90 (dd, | minuto H DD 1H), 3,76 (d, 1H), 3,73- | Massa (ES+): A 3,64 (m, 2H), 3,59 (dd, | 385,3 2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-8- 1H), 3,52 (dd, 1H), 3,43 (1H-pirazol-3-il)-9H-purina (dd, 1H), 3,09 (dd, 1H), 1,29 (d, 3 H) 1,17 (d, 3 H)
1H RMN (600 MHz, o DMSO-d):1312 —(s, C X 1H), 12,71 (s, 1 H), 7,82 N (d, 1 H), 6,74 (d, 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), 4,52 | Método 1 OT (d, 1H), 4,16 (d, 1H), | Tempo de / 4,0-3,0 (brs, 1H), 3,95 | retenção: 0,81 n HN- N A. (d, 1H), 3,88 (d, 1H), | minuto SD 3,74 (d, 1H), 3,71-3,63 | Massa (ES+): À À (m, 2H), 3,57 (d, 1H), | 385,3 3,51 (dd, 1H), 3,41 (dd, 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-8- | 1H), 3,08 (ddd, 1H), (1H-pirazol-3-il)-9H-purina 1,27 (d, 3 H), 1,15 (d, 3 H) H RMN (600 MHz, DMSO-d;): 12,77 (br, s,, o 1H), 11,28 (br, s, 1H), 7,66 (d, 1 H), 7,46 - C X 7,43 (m, 2H), 7,25 (t, 1 N H), 7,15 (t, 1 H), 5,6-5,4 N (s, 1 H), 514,8 (m, | Método 1 | -N í 1H), 4,49 (t, 1H), 4,27 | Tempo de N A.
à (d, 1H), 3,98 (dd, 1H), | retenção: 1,17 H N NO 3,85 (dd, 1H), 3,79 (d, | minuto HN > lo 2H), 3,72 (d, 1H), 3,59 - | Massa (ES+): 348 (m, 2H), 345 -| 462,3 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- SN ao e is morfolin-4-i1)-2-((R)-3-propil-morfolin- 1,75 - 1,68 (Mm, 1H), 4-i1)-9H-purina 1,60 - 1,53 (m, 1H), 1,37 - 1,20 (m, 5H), 0,89 (t, 3H) o H RMN (400 MHz, DMSO-d;): 12,93 (s, ( X 1H), 11,28 (br, s,, 1H), N 7,67 (d, 1H), 7,56 - 7,44 N AN (m, 2H), 7,28 (br, s,, | Método 1 7 | Ad 1H), 7,16 (t, 1H), 5,5- | Tempo de N nÔ N 5,0 (m, 1H), 4,56 (br, s,, | retenção: 0,85 HN. > H PA 2H), 4,36 (d, 1H), 4,07 - | minuto OH 3,95 (m, 3H), 3,84 - | Massa (ES+): 3,71 (m, 2H), 3,62-3,55 | 460,4 (m, 1H), 1,94 (d, 2H), 8-[8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil- 1,82 - 1,668 (m, 4H), morfolin-4-il)-9H-purin-2-i1)-8-aza- 1,66 - 1,49 (m, 2H), biciclo[3,2,1]octan-3-ol 1,45-1,31 (m, 3H)
o H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 12,87 (s, C X 1H), 11,28 (br, s., 1H), N 7,66 (d, 1H), 7,50 - 7,40 (m, 2H), 7,30-7,25 (m, | 11. O 1H), 7,16 (t, 1H), 5,6- E— de N A. 5,0 (m, 1H), 4,58-4,46 retenção: 0.86 H (m, 3H), 4,07 - 3,94 (m, | É “o, NSZ 2H), 3,88 (br, s, 1H), ado Es» 3,85 - 3,68 (m, 2H), tea ) Ho 3,58 (t 1H), 3,44-3,40 ' 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- (m, 1H), 2,26 (d, 2H), morfolin-4-il)-9H-purin-2-il-8-aza- — | 2:14-2,06 (d, 2H), 2,94 - biciclo[3,2,1]octan-3-ol Ge a 22 G a H RMN (600 MHz, DMSO-ds): 12,79 (s, º 1H), 11,27 (br, s,, 1H), C kh 7,66 (d, 1H), 7,48 - 7,42 N (m, 2H), 7,25 (br, s,, N — | 1H), 714 (4 1H), 57- | Método 1 ZON [az tm, 2H) 437 (| Tempo — de AL Ã 1H), 4,27 (d, 1H), 3,99 | retenção: 1,07 NOS NÓ (dd, 1H), 3,88 - 3,77 (m, | minuto NSZ lo 3H), 3,72 (d, 1H), 3,62 - | Massa (ES+): 3,47 (m, 2H), 3,42 (td, | 448,3 2-((R)-3-etil-morfolin-4-i1)-8-(1H- 2H), 312 - 306 (m, indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4- os 1S - o (mm, il)-9H-purina 1 1º : 15 Ns 3H), 0,87 (t, 3H) H RMN (600 MHz, o DMSO-ds) 12,81 (s, C 1H), 11,28 (br, s,, 1H), N 7,65 (d, 1H), 7,53 - 7,43 (m, 2H), 7,25 (t 1H), |... NR 7,15 (t 1H), 5,6-5,0 (m, | Método 1 7 Tempo de | A 2H), 3,99 (dd, 1H), 3,82 | ão: 0.69 NO) NÓ - 3,76 (m, 1H), 3,75 - minuto o, PZ Los 3,65 (m, 3H), 3.583,53 | 11122, (ES+): | (m, 1H), 349-346 (m, | 233 : 1H), 3,40 (t, 1H), 3,34- i 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- 329 Om, 1H), 2,39 - morfolin-4-i1)-2-(4-metil-piperazin-1- 2,27 (m, 4H), 2,26 - notreurira 2,10 (m, 3H), 1,34 (d, 3H)
H RMN (600 MHz, o DMSO-ds): 12,95 (s, 1H), 11,28 (br, s., 1H), C X 7,63 - 7,60 (m, 1H), N 7,46 - 7,40 (m, 2H), 7,25 (t 1H), 7,14 (t | Método 1 N Xp 1H), 5,65-4,85 (m, 2H), | Tempo — de 17 N A 4,00 — 3,95 (m, 1H), | retenção: 0,97 H N N 3,81 - 3,75 (m, 1H), | minuto HN > 3,73 - 3,66 (m, 3H), | Massa (ES+): 3,65 - 3,59 (m, 4H), | 460,3 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- 357 - 344 (m, 3H), morfolin-4-i1)-2-(6-0xa-2-aza- 3,42-3,38 (m, 1H), 1, 83 spiro[3,5]non-2-il)-9H-purina - 1, 68 (m, 2H), 1,55 - ' 1,43 (m, 2H), 1,34 (d, 3H) H RMN (600 MHz, o DMSO-ds): 12,83 (s, C X 1H), 11,28 (br, s,, 1H), N 7,64 (d, 1H), 7,50 - 7,42 N RN (m, 2H), 7,25 (br, s,, | Método 1 am N 1H), 7,15 (t, 1H), 5,75- | Tempo de N ANTAS 4,70 (m, 2H), 4,55 (t, | retenção: 0,72 nv H 2H), 4,47 (t, 2H), 3,99 | minuto Ê NO (dd, 1 H), 3,81 - 3,76 | Massa (ES+): V(m, 1H), 3,75 - 3, 64 | 475,3 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- (m, 5 H), 3,62 - 3, 51 morfolin-4-i1)-2-(4-oxetan-3-il- (m, 1 H), 3,46 - 3,38 (m, piperazin-1-iI)-9H-purina 2H), 2,30 (t, 4H), 1,34 (d, 3H) o H RMN (400 MHz, C dk DMSO-ds): 12,89 (s, N 1H), 11,28 (br, s,, 1H), 7,68-7,64 (m, 1H), 7,48 |. N XN - 7,44 (m, 2H), 7,28 (t, Tao de | Ad 1H), 7,16 (t 1H), 5,7- sm NOSNÔSN 4,2 (m, 2H), 4,01 (da, 1 | "Sfenção: 0,88 H minuto HN > | H), 3,89 - 3,79 (m, 3H), | assa (ES+): 377 - 366 (m, 3H) | 153 3,62 - 3,55 (m, 3H), 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- 3,54 - 3,42 (m, 2H), morfolin-4-il)-2-(tetra-hidro-furo[3,4- | 3,32 (s, 1H), 3,02 - 2,91 c]pirrol-5-il)-9H-purina (m, 2H), 1,37 (d, 3H)
H RMN (400 MHz, DMSO-ds)1281 (s, o 1H), 11,29 (br, s., 1H), C À 7,69 - 7,64 (m, 1H), N 7,49 - 7,44 (m, 2H), |. o AS Tamo a 7 , 5,6-4,8 (m, 2H), ão: N | A 3,98 - 3,90 (m, 1H), | NGão os NS N N [ss - 3,71 (m, 6H), Massa (ES+): HN 3,62 - 354 (Mm, 2H) | 1593 ' 2-(hexa-hidro-furo[3,4-clpiridin-s-in)- | 348 — 3,39 (m, 3H), | 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- 3,33 — 3,30 (m, 1H), morfolin-4-il)-9H-purina 2,49 - 2,33 (m, 2H), 1,77 (br, s., 1H), 1,52 (br, s,, 1H), 1,36 (d, 3H) H RMN (600 MHz, DMSO-ds): 12,75 (s, o 1H), 11,27 (br, s., 1H), 7,64 (d, 1H), 7,38 - 7,45 ( X (m, 2H), 7,24 (t, 1H), N 7,14 (t 1H), 5,2-4,7 (M, | vstodo 1 NAN SO 2H), 4,45 (d, "r 429 | Tempo — de Cl Í (d, 1H), 3,98 3,92 (m, retenção: 1,12 N de 2H), 3,84 - 378 (M)| no, HH N NÓ) 2H), 3,74 - 369 (M, | vassa (ES+): HN lo 1H) 360 - 353 (M, | 155; (ES+): 8-(1H-indol-4-i1)-2-((R)-3-isopropil- 1H), 343 - 335 (m, morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin- 2H), 332 - 321 (Mm, ' : 1H), 3,09 (td, 1H), 2,48 4-i1)-9H-purina - 2,30 (m, 1H), 1,34 (d, 3H), 1,00 (d, 3H), 0,77 (d, 3H) H RMN (600 MHz, o DMSO-ds): 12,84 (br, s,, ( X 1H), 11,28 (br, s,, 1H), N 7,65 (d, 1H), 7,47 - 7,43 (m, 2H), 7,25 (br, s. |, O AH, 745 (6 49, 572 | Mébdal 5,3 (m, 1H), 4,75 (d, A N Es 2H), 4,00 (d, 1H), 3, 82 RO 1,24 HN > - 3,77 (m, 1H), 376 - | Mo Es.) 3,70 (m, 1H), 357 (t | 1953 1H), 3,37 (br, s., 1H), ' 8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil- 2,86 (t, 2H), 2, 64 - 2, morfolin-4-i1)-2-(4-trifluorometil- 56 (m, 1H), 1,83 (d, piperidin-1-il)-9H-purina 2H), 1,43-1,36 (m, 3H), 1,34 (d, 3H)
o '*H RMN (600 MHz, C À DMSO-d;): 12,83 (br, s,, N 1H), 11,28 (br, s,, 1H), N SN 7,65 (d, 1H), 7,53 - 7,42 | 1s15do 1 / | (m, 2H), 7,25 (br, s,, Tempo | de N Px 1H), 7,15 (t 1H), 5,5- retenção: 1,1 23 Hg N N 5,0 (m, 2H), 4,42 (d, | É ' HN d 2H), 4,00 (d, 1H), 3,80 Massa (ES+): (d, 1H), 3,73 (d, 1H) | 1123 3,60 - 3,52 (m, 3H), 3,3 ' (m, 1H), 2,48-2,43 (m, 2-((28,6R)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)- | 24), 1,35 (d, 3H), 1,15 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- (d, 6H) morfolin-4-il)-9H-purina o ( 'H RMN (600 MHz, CLOROFORM-d): 8,42 N (br, s, 1H), 7,55 (d, N q 1H), 7,49 (d, 1H) 7,38 | Método 1 7 | Ad (br, s,, 1H), 7,31 - 7,26 | Tempo de N nÔ N (m, 2H), 4,17 - 4,07 (m, | retenção: 0,92 No H 3H), 4,01 (dd, 3H), 3,88 | minuto (d, 2H), 3,77-3,64 (m, | Massa (ES+): 3H), 3,43 (t, 3 H), 2,73 | 460,3 o (br, s, 2 H), 225 (t 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil- 2H), 1,76 (d, 2H), 1,51 morfolin-4-i1)-2-(7-0xa-1-aza- (br, s,, 3H) spiro[3,5]non-1-il)-9H-purina o H RMN (600 MHz, ( DMSO-ds): 12,87 (s, N 1H), 11,28 (br, s,, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,45 (d, N R 2H), 7,25 (br, s, 1H), |... 7 O 7,15 (t, 1H), 5,7-4,9 (m, Váodo — NOS NÉ nO) 2H), 4,80 (t, 1H), 4,53 | SMPo = H retenção: 0,82 HN 7 lo (d, 1H), 4,36 (d 1H) | inuo Y 4,00 (d, 1H), 3,91 (d. | assa (ES+): > 1H), 3,80 (d, 1H), 3,73 | 155 3 Ho (d, 1H), 3,60 - 3,46 (m, ' 3H), 344 - 3,36 (Mm, 1(8)-4-[8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3- 3H), 2,90 (t, 1H), 2,58 - metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-il]- 2,64 (m, 1H), 1,35 (d, morfolin-2-il)-metanol 3H)
o H RMN (600 MHz, DMSO-ds): 12,86 (s, C k 1H), 11,28 (br, s,, 1H), N 7,65 (d, 1H), 7,55 - 7,43 N À (m, 2H), 7,27-7,23 (m, 7 N 1H), 7,15 (t, 1H), 5,7- | Método 1 N Ad. 5,0 (m, 2H), 4,81 (t | Tempo de HH N NÓ) 1H), 4,52 (d, 1H), 4,42 - | retenção: 0,83 HN > O | 4,32 (m, 1H), 3,99 (d, | minuto 1H), 3,91 (d, 1H), 3,80 | Massa (ES+): Ho (d, 1H), 3,73 (d, 1H), | 450,3 3,56 - 3,38 (m, 6H), (R)-4-[8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3- 293 - 286 (m, 1H), metil-morfolin-4-iI)-9H-purin-2-il]- 2,64 - 2,58 (m, 1H), morfolin-2-il)-metanol 1,33 (d, 3H) 1H RMN (600 MHz, DMSO-ds):12,72 (s, 1 o H), 8,58 (d, 1 H), 7,97 C ] (dd, 1H), 6,51 (d, 1H), "m [6,36 (s 2H) 6,045|,, n (brs, 2H), 4,52 (dd, 1H), E de N N N SS 4,16 (dd, 1H), 4,0-3,0 a 27 an MDA S) (brs, 1H), 3,96 (da, 1H), | "fenção: 0,73 = NOS NÓ NH 3,90 (dd, 1H), 3,76 (d, | MÍNdfo H Massa (ES+): ue 1H), 3,72-3,64 (m, 2H), | 1113 3,60 (dd, 1H), 3,52 ' 5-[2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-il)- | (ddd, 1H), 3,44 (ddad, 9H-purin-8-il]-piridin-2-ilamina 1H), 3,09 (ddd, 1H), 1,29 (d, 3 H) 1,17 (d, 3 H) 1H RMN (600 MHz, DMSO-ds):12,72 (s, 1 o H), 8,58 (d, 1 H), 7,97 C A (dd, 1H), 6,51 (d, 1H), 6,36 (s, 2H), 6,04,5|,., v (brs, 2H), 4,52 (dd, 1H), Tempo de JR N SS 4,16 (dd, 1H), 40-30 | ão 073 en SA | AL (brs, 1H), 3,96 (dd, 1H), | (PPNÇão: À N= NO SNÊ NH 3,90 (dd, 1H), 3,76 (a, | Minuto H Massa (ES+): 1H), 3,72-3,64 (m, 2H), | 1113 3,60 (dd, 1H), 3,52 ' 5-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)- | (ddd, 1H), 3,44 (ddd, 9H-purin-8-il]-piridin-2-ilamina 1H), 3,09 (ddd, 1H), 1,29 (d, 3 H) 1,17 (d, 3 H)
AH RMN (600 MHz, o DMSO-ds): 12,84 (s, 1 C À H), 8,80 (s, 2H), 7,08 (s, 2H), 6,0-4,5 (brs, 2H), |... ú . v 4,49 (dd, 1H), 4,14 (d, Tempo de R 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), A ANA M< O 3,94 (dd, 1H), 3,88 (da, | "Sfenção: 0,78 N= NOS NÓ NH 1H), 3,74 (d, 1H), 3,71- | Minuto i H Massa (ES+): 3,63 (m, 2H), 3,58 (dd, | 53 1H), 3,50 (ddd, 1H), É 5-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)- | 3,42 (ddd, 1H), 3,07 9H-purin-8-il]-pirimidin-2-il-amina (ddd, 1H), 1,27 (d, 3 H) 1,15(d, 3H) 1H RMN (600 MHz, DMSO-d;):13,82 — (brs, o 1H), 13,11 (s, 1H), 8,17 C J (d, 2H), 8,05 (d, 2 H), 4, | 747 (s, 2H) 6,045), v (brs, 2H), 4,55 (dd, 1H), — a N Nº tW 420 (d 1H), 4,030 po É A YA | A | rs 1H), 3,99 (dd, 1H), A 0.76 N NO NÓ ONA 3,92 (dd, 1H), 3,79 (d, Massa (ES*): ee | 1H), 3,74-3,66 (Mm, 2H) | 23 : | o —M361 (dd, 1H), 355|/**" 8-[4-(1H-Imidazol-2-i)-fenil]-2,6-bis- (ddd, 1H), 3,45 (ddd, ((S)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina 1H), 3,12 (ddd, 1H), 1,33 (d, 3 H), 1,19 (d, 3 H) 1H RMN (600 MHz, o DMSO-d6): 12,87 (s, 1 C À H), 11,04 (s, 1H), 7,39 / N (d, 1H), 7,29 (dd, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,96 (s |, NR 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), ME / empo de | Ad 4,56 (d, 1H), 4,16 (d | lonão: 1,02 31 NON Do 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), [So no : 3,99 (d, 1H), 3,90 (dd, i Ó .” Cd 1H), 3,82 (s, 3H), 3,79 Es (ES+): (d, 1H), 3,75-3,67 (m, | 8-(G-metóxi-1H-indol-4-i1)-2-((S)-3- — | 2H), 3,60 (dd, 1H), 3,56 metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil- (dd, 1H), 3,44 (dd, 1H), morfolin-4-i1)-9H-purina 3,10 (ddd, 1H), 1,34 (d, 3H), 1,17 (d, 3H),
1H RMN (400 MHz, o DMSO-ds) :13,11 (s, 1 H), 11,70 (s, 1H), 8,34 voo C dk (d, 1 H), 8,09 (s, 1H), o N 7,71 (dd, 1H), 7,32 (dd, N NR 1H), 6,0-4,5 (brs, 2H), | Método 1 7 T N 4,56 (dd, 1H), 4,19 (d, | Tempo de N À 1H), 4,0-3,0 (brs, 1H), | retenção: 1,05 HH N NO 399 (dd, 1H), 3,90 (dd, | minutos HN 1H), 3,89 (s, 3H), 3,79 | Massa (ES+): (d, 1H), 3,75-3,68 (m, | 492,3 metil éster de ácido 4-[2,6-Bis-((R)- os AS PANA 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-8-il]- 1H) ' 3 n (ddd 1H) 1H-indol-6-carboxílico 1,36 (a, 3 H, 1,18 (d, 3 H)

Claims (13)

UT REIVINDICAÇÕES
1. Composto de fórmula (1), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, Ro rt: FA ad RAL 7 EL lee Cata, xo L E; Max ” o EO " NE - 1 Ããos iocallvos ni Z be
RS (1) em que R' é selecionado do grupo que consiste em
FP FR FRA AS: CPR EA Mm FAR ro ho N=/ AR BETE (R*),
HN —N 2, Ex $ mM N [| XA SS = Cah o É $ Rº » K Ro RX : em que R'** em cada ocorrência independentemente representa flú- or ou metila; m representa O, 1, 20u 3; R** e Rº independentemente representa hidrogênio ou flú- or; R?' representa flúor; R?? em cada ocorrência independentemente representa flú- or, metóxi, hidroximetila ou metoxicarbonila;
q representa O, 1 ou 2 e r representa 0, 1, 2 ou 3 contanto que q + r não seja O;
R?, R?à, R$, RÉ, Rºà, R/, Rº e Rº independentemente repre- senta hidrogênio, C,.aalquila ou fluoro-C,.3alquila; ou R? e Rº juntamen- te formam uma ponte de metileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etileno; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de etileno;
n e p independentemente representam O, 1 ou 2;
R*º, RU, RP, RB, RÉ, RÉ, Re RU em cada ocorrência in- dependentemente representam hidrogênio, C,i3alguila, fluoro-C,. zsalquila ou hidróxi-C,.3alquila; ou R* e R'* juntamente formam uma ponte de etileno; ou R'? e R** juntamente formam uma ponte de etile- no; ou R** e R*, juntamente com o átomo de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidropiranila; e
Y representa O, CHR??, CR?ºR?* ou NR,
em que
R* representa hidroxila ou fluoro-C,.3alquila; ou R? e R”?, juntamente com os átomos de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidrofuranila fundido;
R?** e R* independentemente representa hidrogênio ou ha- logênio; ou Rº*º e R%*, juntamente com o átomo de carbono aos quais eles são ligados, são ligados para formar um anel tetra-hidropiranila; e
R?* representa C, zalquila ou oxetanila;
e um composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, selecionado da seguinte lista de compostos:
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-11)-2-[1 AJoxazepan-4- il-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(3-propil-morfolin- 4-il)-9H-purina; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-i1]-8-
aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-2-i1]-8- aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 2-(3-etil-morfolin-4-il)-8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4- il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-metil-piperazin- 1-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(6-0xa-2-aza- espiro[3.5]non-2-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-oxetan-3-il- piperazin-1-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-2-(tetraidro-furo[3,4- c]Jpirrol-5-il)-9H-purina; 2-(hexaidro-furo[3,4-c]piridin-5-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-2-(3-isopropil-morfolin-4-i1)-6-(3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-trifluorometil- piperidin-1-il)-9H-purina; 2-(2,6-dimetil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-(3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-i1)-2-(7-0xa-1-aza- espiro[3.5]non-1-il)-9H-purina; f4-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)- 9IH-purin-2-il]- morfolin-2-il)-metanol; e 14-[8-(1H-indol-4-il)-6-(3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2-il]- morfolin-2-il)-metanol.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R' representa
TU PR $ Sa
TAS
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R' representa
XX Rº Lao
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R' representa (RR), HN á (RP)
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R?º, R?, R$, R, Rº?, R'/, Rº e Rº independentemente representa hidrogê- nio ou metila; ou Rº e Rº juntamente formam uma ponte de metileno; ou R? e Rº juntamente formam uma ponte de etileno; ou Rº e Rº jun- tamente formam uma ponte de etileno.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y representa O.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Y representa CHR?* ou CR? R”.
8. Composto, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, que é selecionado de:
2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina; 2-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-8-
(1H-pirazol-3-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2- [1,4]oxazepan-4-il-9H-purina; 8-[4-(1H-Imidazol-2-i1)-fenil]-2,6-bis-((R)-3-metil-morfolin-4- il)-9H-purina; 8-(6-fluoro-1H-indol-4-i1)-2-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina; 14-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purin-8-il]-1H-indol- 6-il)-metanol; 2-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8- piridin-2-il-9H-purina; 2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-il)-8-piridin-2-il-9H-purina; 2,6-Di-morfolin-4-il-8-piridin-2-il-9H-purina; 2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-8-(1H-pirazol-3-i1)-9H- purina; 2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-8-(1H-pirazol-3-i1)-9H- purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-((R)-3-propil- morfolin-4-il)-9H-purina; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-purin-2- i1]-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 8-[8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-2- iI]-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-ol; 2-((R)-3-etil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil- morfolin-4-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-metil- piperazin-1-il)-9H-purina; 8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-11)-2-(6-0xa-2-aza-
spiro[3.5]non-2-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4-0xetan-3-il- piperazin-1-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(tetra-hidro- furo[3,4-c]pirrol|-5-il)-9H-purina;
2-(hexaidro-furo[3,4-c]piridin-5-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-2-((R)-3-isopropil-morfolin-4-il)-6-((R)-3- metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-2-(4- triluorometil-piperidin-1-il)-9H-purina;
2-((28,6R)-2,6-dimetil-morfolin-4-i1)-8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-11)-2-(7-0xa-1-aza- spiro[3.5]non-1-il)-9H-purina;
1(S)-4-[8-(1H-indol-4-i1)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purin-2-il]-morfolin-2-il)-metano]|;
T(R)-4-[8-(1H-indol-4-il)-6-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H- purin-2-il]-morfolin-2-il)-metano]|;
5-[2,6-Bis-((S)-3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-8-il]-piridin-2- ilamina;
5-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)-9H-purin-8-il]-piridin-2- ilamina;
5-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-il)- 9H-purin-8-il]-pirimidin- 2-il-amina;
8-[4-(1H-Imidazol-2-il)-fenil]-2,6-bis-((S)-3-metil-morfolin-4- il)-9H-purina;
8-(6-metóxi-1H-indol-4-i1)-2-((S)-3-metil-morfolin-4-i1)-6-((R)- 3-metil-morfolin-4-il)-9H-purina;
metil éster de ácido 4-[2,6-Bis-((R)-3-metil-morfolin-4-i1)-9H-
purin-8-il]-1H-indole-6-carboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso como um medicamento.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso no tratamento ou prevenção de câncer, um distúrbio neurodegene- rativo ou uma doença oftalmológica.
11. Composição farmacêutica compreendendo composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um excipiente, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
12. Uso de composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mes- mo, para a fabricação de um medicamento para o tratamento ou pre- venção de câncer, um distúrbio neurodegenerativo ou uma doença of- talmológica.
13. Produto de combinação compreendendo composto co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo, e outro agente terapêutico.
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