WO2021175283A1 - 新型ep4拮抗剂的合成及其在癌症和炎症中的用途 - Google Patents

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WO2021175283A1
WO2021175283A1 PCT/CN2021/079073 CN2021079073W WO2021175283A1 WO 2021175283 A1 WO2021175283 A1 WO 2021175283A1 CN 2021079073 W CN2021079073 W CN 2021079073W WO 2021175283 A1 WO2021175283 A1 WO 2021175283A1
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methyl
ethyl
pyrazole
difluoromethyl
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PCT/CN2021/079073
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张学军
臧杨
李莉娥
沈洁
刘哲
常少华
王永刚
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湖北生物医药产业技术研究院有限公司
人福医药集团股份公司
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    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the application number is 202010144983.1, and the application date is the Chinese patent application on March 4, 2020.
  • the present invention relates to the fields of chemistry and medicine. Specifically, the present invention relates to pyrazole derivatives and their uses.
  • Prostaglandin E 2 is an endogenous biologically active lipid.
  • PGE 2 causes a wide range of upstream and downstream dependent biological responses by activating prostaglandin receptors (Legler, DF et al, hit. J Biochem .Cell Biol.2010,42,p.198-201), involved in the regulation of many physiological and pathological processes including inflammation, pain, renal function, cardiovascular system, lung function and cancer. It is reported that PGE 2 is highly expressed in cancerous tissues of various cancers, and it has been confirmed that PGE 2 is related to the occurrence, growth, and development of cancer and disease conditions in patients. It is generally believed that PGE 2 is related to the activation of cell proliferation and cell death (apoptosis), and plays an important role in the process of cancer cell proliferation, disease progression, and cancer metastasis.
  • EP4 receptor antagonists are promising as anti-inflammatory and/or analgesics for the treatment of diseases related to the PGE 2 -EP4 pathway, such as inflammatory diseases and diseases accompanied by various pains.
  • EP4 is the main receptor involved in arthritic pain in rodent models of rheumatoid arthritis and osteoarthritis (see, for example, J. Pharmacol. Exp. Ther., 325, 425 (2008)), which causes intracellular The signal molecule cAMP accumulates. Studies have detected the expression of EP4 receptor on peripheral nerve endings, macrophages and neutrophils of pain receptors, and it has been confirmed that these cell types are extremely important for endometriosis. Studies have reported that oral EP4 antagonists can reduce proteinuria in type 2 diabetic mice and inhibit the progression of diabetic nephropathy.
  • EP4 antagonists can be used to treat arthritis, including arthritic pain and endometriosis, diabetic nephropathy, and overactive bladder.
  • the existing treatments for arthritis are mainly traditional NSAIDs (non-steroidal anti-inflammatory drugs) or selective COX-2 inhibitors, which can produce cardiovascular and/or gastrointestinal side effects.
  • selective EP4 antagonists are less likely to produce cardiovascular side effects.
  • PGE 2 continuously activates EP receptors in the tumor microenvironment (produced in large quantities by tumor cells) in the tumor microenvironment (Ochs et al, J Neurochem. 2016, 136, p. 1142-1154; Zelenay, S. et al, Cell 2015,162, p.1257-1270), which will promote the accumulation and enhance the activity of a variety of immunosuppressive cells, including type 2 tumor-associated macrophages (TAMS), Treg cells and myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) .
  • TAMS type 2 tumor-associated macrophages
  • MDSCs myeloid-derived suppressor cells
  • One of the main features of the immunosuppressive tumor microenvironment is the presence of a large number of MDSCs and TAMs, which in turn are associated with gastric cancer, ovarian cancer, breast cancer, bladder cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), head and neck cancer and other types of cancer patients.
  • the overall low survival rate is closely related.
  • PGE 2 induces immune tolerance by inhibiting the accumulation of antigen-presenting dendritic cells (DC) in tumors and inhibiting the activation of tumor-infiltrating DCs (Wang et al, Trends in Molecular Medicine 2016, 22, p .1-3). All these PGE 2 mediated effects will jointly help tumor cells escape immune surveillance.
  • DC antigen-presenting dendritic cells
  • PGE 2 plays a very important role in promoting the occurrence and development of tumors.
  • Increased expression levels of PGE 2 and its related receptors EP2 and EP4 have been found in various malignant tumors including colon cancer, lung cancer, breast cancer, and head and neck cancer, and are often closely related to poor prognosis (Bhooshan, N.et al. Lung Cancer 101, 88-91). Therefore, selective blocking of EP2 and EP4 signaling pathways can inhibit tumorigenesis and development by changing the tumor microenvironment and regulating tumor immune cells.
  • EP2 and EP4 specific antagonists can prevent or inhibit tumor growth to varying degrees in animal models such as colon cancer, esophageal cancer, lung cancer and breast cancer.
  • the EP4 antagonist Grapiprant developed by Pfizer has been approved by the FDA for the treatment of arthritis in dogs.
  • Non-small cell lung cancer and breast cancer and other types of solid tumors (De Vito, V. et al. J Pharm Biomed Anal 118, 251-258).
  • E7046 an EP4 antagonist developed by Eisai, also launched a phase I clinical trial in 2015, and launched a phase Ib clinical trial of combined radiotherapy or chemotherapy for rectal cancer in 2017.
  • ONO-4578 developed by Ono Pharmaceutical, carried out phase I clinical trials for advanced or metastatic solid tumors in 2017, and phase I/II clinical trials for single-drug or combined nivolumab treatment of advanced solid tumors in 2018.
  • EP4 antagonists have made certain progress in the treatment of inflammatory diseases, pain, cancer and other fields, but there is still a need for further development of new drugs as an improvement or replacement of current drugs.
  • the present invention aims to provide a compound that can effectively antagonize EP4, which can be used as an improvement or replacement of current drugs or EP4 antagonists.
  • the present invention proposes a compound, which is a compound represented by formula V or a tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, Salt or prodrug:
  • ring A is selected from
  • Ring B is selected from
  • R 1 is selected from -CH 3 , -CHF 2 and -CF 3 ;
  • R 2 is selected from C 2 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, phenyl, trifluoromethyl, C 2 -C 6 alkyl substituted by halogen, C 3 -C 6 substituted by halogen cycloalkyl, hydroxy substituted C 2 -C 6 alkyl, cyano substituted C 2 -C 6 alkyl group, -SF 5, -XR 2a; wherein X is selected from oxygen, sulfur, -CO -, - SO 2 -, - SO-; R 2a is selected from C 1 -C 6 alkyl, halo-substituted C 1 -C 6 alkyl;
  • R 3 is selected from hydrogen, halogen, C 1 -C 2 alkyl, fluoro substituted C 1 -C 2 alkyl, phenyl;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, halogen substituted C 1 -C 6 alkyl, halogen substituted C 1 -C 6 alkoxy;
  • R 5 is selected from hydrogen and halogen
  • R 6a and R 6b are hydrogen, and the other is methyl; or R 6a and R 6b together form a cyclobutyl ring;
  • R 7 is selected from -CH 3 , -CHF 2 and -CF 3 ;
  • M is selected from oxygen, sulfur, methylene
  • the above-mentioned compound may further include at least one of the following additional technical features:
  • the above-mentioned compound is a compound represented by formula III or a tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, salt or prodrug of the compound represented by formula III:
  • R 1 is selected from -CH 3 , -CHF 2 and -CF 3 ;
  • R 7 is selected from -CH 3 , -CHF 2 and -CF 3 ;
  • M is selected from oxygen, sulfur, and methylene.
  • the compound is a compound represented by formula II or a tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, salt or prodrug of the compound represented by formula II,
  • R 1 is selected from -CH 3 , -CHF 2 and -CF 3 ; preferably, R 1 is -CHF 2 ;
  • the compound is a compound represented by formula I (a compound represented by formula I, also referred to as compound I), its tautomers, stereoisomers, hydrates, solvates, and pharmaceutically acceptable compounds.
  • R 1 is selected from -CH 3 , -CHF 2 and -CF 3 ;
  • R 2 is selected from C 2 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 2 -C 6 alkyl substituted by halogen, halogen-substituted C 3 -C 6 cycloalkyl group;
  • R 3 is selected from hydrogen, halogen, C 1 -C 2 alkyl, fluoro substituted C 1 -C 2 alkyl group;
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, halogen substituted C 1 -C 6 alkyl, halo-substituted C 1 -C 6 alkoxy.
  • the above-mentioned compound may further include at least one of the following additional technical features:
  • R 2 is selected from C 2 -C 3 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 2 -C 3 alkyl substituted by fluorine, C 3 -C 6 ring substituted by fluorine alkyl.
  • R 2 is selected from -CH 2 CH 3 , -CH(CH 3 ) 2 , cyclopropyl, -CF 2 CH 3 and -CH 2 CF 3 .
  • R 3 is selected from hydrogen, fluorine and chlorine.
  • R 4 is selected from hydrogen, halogen, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, halo-substituted C 1 -C 6 alkyl, halogen substituted C 1 -C 6 alkoxy.
  • R 4 is selected from hydrogen, fluoro, chloro, C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, fluorine or chlorine-substituted C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy substituted by fluorine or chlorine; preferably, R 4 is selected from hydrogen, fluorine, and chlorine.
  • the compound is one of the following compounds or a tautomer, stereoisomer, hydrate, solvate, pharmaceutically acceptable salt or prodrug of one of the following compounds:
  • the salt includes a pharmaceutically acceptable salt, at least one selected from the group consisting of sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, formic acid, acetic acid, propionic acid, benzenesulfonic acid, benzene Formic acid, phenylacetic acid, salicylic acid, alginic acid, anthranilic acid, camphor acid, citric acid, vinyl sulfonic acid, formic acid, fumaric acid, furoic acid, gluconic acid, glucuronic acid, glutamic acid, glycolic acid, Isethionic acid, lactic acid, maleic acid, malic acid, mandelic acid, mucic acid, pamoic acid, pantothenic acid, stearic acid, succinic acid, sulfanilic acid, tartaric acid, p-toluenesulfonic acid, malonic acid, 2- Hydroxypropionic acid, ox
  • the present invention proposes a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition comprises: a pharmaceutically acceptable excipient and the aforementioned compound.
  • the present invention proposes the use of the aforementioned compound or the aforementioned pharmaceutical composition in the preparation of a medicine for the treatment or prevention of EP4-related diseases.
  • the use may further include at least one of the following additional technical features:
  • the EP4-related disease includes at least one selected from the group consisting of inflammatory disease, pain, cancer, metabolic disease, and urinary system disease.
  • the inflammatory disease includes at least one selected from the group consisting of arthritis and rheumatoid arthritis.
  • the pain includes osteoarthritis pain and pain caused by endometriosis.
  • the compound or the aforementioned pharmaceutical composition can be administered in combination with radiotherapy and/or antibody therapy, wherein the antibody therapy is selected from one of CTLA4 antibody therapy, PDL1 antibody therapy and PD1 antibody therapy or combination.
  • the cancer includes solid cancer.
  • the cancer includes breast cancer, cervical cancer, colorectal cancer, endometrial cancer, glioblastoma, head and neck cancer, kidney cancer, liver cancer, lung cancer, medulloblastoma, ovarian cancer, Pancreatic cancer, prostate cancer, skin cancer and urethral cancer.
  • the metabolic disease includes diabetes
  • the urinary system disease includes overactive bladder.
  • the compound or pharmaceutical composition of the present invention can be used to provide patients in need with better and more effective clinical treatment drugs or programs.
  • the present invention proposes a series of EP4 antagonists with novel structures, better pharmacokinetic properties, better pharmacodynamics, and good druggability, which can effectively treat EP4-related diseases or disorders.
  • the present invention also relates to a method for treating diseases related to EP4, the method comprising administering to a patient a therapeutically effective dose of a pharmaceutical preparation containing the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the present invention also relates to a method for the treatment of inflammatory diseases, pain, cancer, metabolic diseases, and urinary system diseases, the method comprising administering to a patient a therapeutically effective dose of a pharmaceutical preparation containing the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof .
  • the present invention also relates to a method of administering the compound or pharmaceutical composition in combination with radiotherapy and/or antibody therapy to treat diseases, wherein the antibody therapy is selected from one of CTLA4 antibody therapy, PDL1 antibody therapy and PD1 antibody therapy or a combination thereof.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions, and/or dosage forms that are within the scope of reliable medical judgment and are suitable for use in contact with human and animal tissues, but not Many toxicity, irritation, allergic reactions or other problems or complications are commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt or “pharmaceutically acceptable salt thereof” refers to pharmaceutically acceptable salts of non-toxic acids or bases, including salts of inorganic acids and bases, and organic acids and bases.
  • the present invention also contemplates other salts. They can serve as intermediates in the purification of compounds or in the preparation of other salts accepted in pharmacy, or can be used in the identification, characterization or purification of the compounds of the present invention.
  • stereoisomers refers to isomers arising from different arrangements of atoms in a molecule in space.
  • the stereochemistry definitions and conventions used in the present invention generally follow SPParker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry” of Organic Compounds", John Wiley&Sons, Inc., New York, 1994.
  • the compounds of the present invention may contain asymmetric centers or chiral centers, and therefore exist in different stereoisomeric forms.
  • optically active compounds that is, they have the ability to rotate the plane of plane-polarized light.
  • the prefixes D and L or R and S are used to indicate the absolute configuration of the molecule in terms of the chiral center (or chiral centers) in the molecule.
  • the prefixes D and L or (+) and (–) are the symbols used to specify the rotation of plane-polarized light caused by the compound, where (–) or L indicates that the compound is levorotatory.
  • Compounds prefixed with (+) or D are dextrorotatory. In terms of a given chemical structure, these stereoisomers are the same except that these stereoisomers are mirror images of each other.
  • a specific stereoisomer may also be referred to as an enantiomer, and a mixture of said isomers is usually referred to as a mixture of enantiomers.
  • a 50:50 mixture of enantiomers is called a racemic mixture or a racemate. When there is no stereoselectivity or stereospecificity in a chemical reaction or method, the racemic mixture or racemate may occur Spin body.
  • the compounds of the present invention may exist in the form of one of the possible isomers or their mixtures, for example, as pure optical isomers, or as a mixture of isomers, such as racemic and non- A mixture of enantiomers, depending on the number of asymmetric carbon atoms.
  • Optically active (R)- or (S)-isomers can be prepared using chiral synthons or chiral preparations, or resolved using conventional techniques. If the compound contains a double bond, the substituent may be E or Z configuration; if the compound contains a disubstituted cycloalkyl, the substituent of the cycloalkyl may be cis or trans (cis- or trans-) structure.
  • the compounds of the present invention containing asymmetrically substituted carbon atoms can be isolated in an optically active form or a racemic form.
  • the resolution of racemic mixtures of compounds can be carried out by any of many methods known in the art.
  • An exemplary method includes fractional recrystallization using a chiral resolving acid, which is an optically active salt-forming organic acid.
  • Suitable resolving agents for the fractional recrystallization method are, for example, optically active acids, such as tartaric acid, diacetyl tartaric acid, dibenzoyl tartaric acid, mandelic acid, malic acid, lactic acid, or various optically active camphor sulfonic acids such as ⁇ - The D and L forms of camphorsulfonic acid.
  • resolving agents suitable for fractional crystallization methods include stereoisomerically pure form of ⁇ -methyl-benzylamine (for example, S and R form or diastereomerically pure form), 2-phenylglycinol, Norephedrine, ephedrine, N-methylephedrine, cyclohexylethylamine, 1,2-diaminocyclohexane, etc.
  • the resolution of the racemic mixture can also be performed by elution on a column packed with an optically active resolving agent (for example, dinitrobenzoylphenylglycine). Either high performance liquid chromatography (HPLC) or supercritical fluid chromatography (SFC) can be used.
  • tautomer refers to an isomer of a functional group resulting from the rapid movement of an atom in a molecule at two positions.
  • the compounds of the present invention may exhibit tautomerism.
  • Tautomeric compounds can exist in two or more mutually convertible species.
  • Proton shift tautomers result from the migration of covalently bonded hydrogen atoms between two atoms.
  • Tautomers generally exist in an equilibrium form, and an attempt to separate a single tautomer usually produces a mixture whose physical and chemical properties are consistent with a mixture of compounds. The position of equilibrium depends on the chemical properties of the molecule.
  • the ketone type is dominant; in phenol, the enol type is dominant.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms of the compound.
  • pharmaceutical composition means a mixture of one or more of the compounds described in the text or their physiologically/pharmaceutically acceptable salts or prodrugs and other chemical components, such as physiologically/pharmaceutically acceptable carriers And excipients.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to facilitate the administration of the compound to the organism.
  • solvate means that the compound of the present invention or its salt includes a stoichiometric or non-stoichiometric solvent bound by intermolecular non-covalent forces.
  • solvent is water, it is a hydrate.
  • prodrug refers to a compound of the invention that can be converted into a biologically active compound under physiological conditions or by solvolysis.
  • the prodrug of the present invention is prepared by modifying the functional groups in the compound, and the modification can be removed by conventional operations or in vivo to obtain the parent compound.
  • Prodrugs include compounds formed by connecting a hydroxyl group or amino group to any group in the compound of the present invention. When the prodrug of the compound of the present invention is administered to a mammalian individual, the prodrug is split to form a free hydroxyl group and a free group, respectively. The amino group.
  • the compound of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes on one or more of the atoms constituting the compound.
  • compounds can be labeled with radioisotopes, such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I), or C-14 ( 14 C). All changes in the isotopic composition of the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are included in the scope of the present invention.
  • excipients refers to pharmaceutically acceptable inert ingredients.
  • examples of types of the term “excipient” include, without limitation, binders, disintegrants, lubricants, glidants, stabilizers, fillers, diluents, and the like.
  • C 1 -C 6 alkyl should be understood to mean a linear or branched saturated monovalent hydrocarbon group having 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • the alkyl group is, for example, methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, isopropyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, 2-methylbutyl, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, neopentyl, 1,1-dimethylpropyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl Base, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 2-ethylbutyl, 1-ethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbuty
  • C 3 -C 6 cycloalkyl should be understood to mean a saturated monovalent monocyclic or bicyclic hydrocarbon ring having 3 to 6 carbon atoms, including fused or bridged polycyclic ring systems. Such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl.
  • C 1 -C 6 alkoxy is understood to -O- (C 1 - 6 alkyl), wherein “C 1 - 6 alkyl group” defined above.
  • halo or halogen refers to fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • haloalkyl groups include, but are not limited to, trifluoromethyl, trichloromethyl, pentafluoroethyl, pentachloroethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, heptafluoropropyl, and heptachloropropyl.
  • the compound and/or composition of the present invention can effectively antagonize the activity of EP4 receptor, have better liver metabolic stability and cardiac safety advantages, and have better pharmacokinetic properties.
  • the exposure in the body is higher, the dosage is low, and the compliance is better. It has broad application prospects in the preparation of drugs for treating EP4-related diseases.
  • Fig. 1 is the results of the inhibition of tumors by the compounds according to the examples of the present invention.
  • the compounds of the present invention are all determined by nuclear magnetic resonance (NMR) and/or mass spectrometry (MS).
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometry
  • the unit of NMR shift is 10 -6 (ppm).
  • the solvent for NMR measurement is deuterated dimethyl sulfoxide, deuterated chloroform, deuterated methanol, etc., and the internal standard is tetramethylsilane (TMS).
  • HATU O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N′,N′-tetramethylurea hexafluorophosphate
  • DIPEA diisopropylethylamine, namely N,N-diisopropylethylamine
  • N equivalent concentration, for example, 1N hydrochloric acid means 1mol/L hydrochloric acid solution
  • IC 50 half maximal inhibitory concentration, refers to a concentration at which half maximal inhibition effect.
  • HBSS Hank's Balanced Salt Solution, Hank's Balanced Salt Solution
  • BSA Albumin from bovine serum, bovine serum albumin
  • IBMX 3-isobutyl-1-methyl-7H-xanthine, 3-isobutyl-1-methylxanthine
  • FLIPR Fluorescence Imaging Plate Reader, real-time fluorescence imaging analysis system
  • control compound was synthesized with reference to patent application WO2012039972A1.
  • control compounds in the following test examples all refer to the compounds described in Comparative Example 1.
  • This example is an example of product purification.
  • high performance liquid chromatography is used for purification, and the purification conditions are as follows:
  • the mobile phase A is a 1 ⁇ pure aqueous solution of trifluoroacetic acid
  • the mobile phase B is an acetonitrile solution. Gradient conditions: 0 ⁇ 3 minutes, mobile phase A keeps 90%, 3 ⁇ 18 minutes gradient elution, mobile phase A changes from 90% to 5%, 18 ⁇ 22 minutes keep mobile phase A at 5%).
  • the fifth step 3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylic acid (compound I-2F)
  • the first step 3-vinylphenol (compound I-13B)
  • the compound methyltriphenylphosphonium bromide (7.30g, 20.5mmol) was added to anhydrous tetrahydrofuran (40mL) at 0°C, potassium tert-butoxide (2.3g, 20.5mmol) was added, and the mixture was stirred at low temperature for 2h.
  • the fourth step 4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-fluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole- 4-carboxamide)ethyl)benzoic acid (compound I-13)
  • the compound 1-methoxy-3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)benzene (800mg, 0.72mmol) was added to dichloromethane (1mL) at room temperature and cooled to -78°C, Add boron tribromide (1.50g, 5.88mmol) and stir at room temperature for 4h. Dilute with water (50mL), extract with dichloromethane (50mL ⁇ 3), separate the layers, combine the organic phases, dry the organic phase with anhydrous sodium sulfate, filter, and concentrate.
  • Step 2 3-(Difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy)-1H-pyrazole-4- Formaldehyde (Compound I-15C)
  • the fourth step 4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy (Base)-1H-pyrazole-4-carboxamide)ethyl)methyl benzoate (compound I-15E)
  • the fifth step 4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy Yl)-1H-pyrazole-4-carboxamide)ethyl)benzoic acid (Compound I-15)
  • the third step 4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-hydroxyethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole- 4-carboxamide)ethyl)benzoic acid (compound I-22)

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Abstract

涉及一种有效拮抗EP4的化合物，其为式I所示化合物，或者式I所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药，其中：R1选自-CH3、-CHF2和-CF3；R2选自C2-C6烷基、C3-C6环烷基、被卤素取代的C2-C6烷基、被卤素取代的C3-C6环烷基；R3选自氢、卤素、C1-C2烷基、被氟取代的C1-C2烷基；R4选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、被卤素取代的C1-C6烷基、被卤素取代的C1-C6烷氧基。

Description

新型EP4拮抗剂的合成及其在癌症和炎症中的用途
相关申请的交叉引用
本申请基于下列申请提出，并要求这件中国专利申请的优先权，这件中国专利申请的全部内容在此引入本申请作为参考：
申请号为：202010144983.1，申请日为2020年3月4日的中国专利申请。
技术领域
本发明涉及化学及医药领域，具体地，本发明涉及吡唑衍生物及其用途。
背景技术
***素E 2(Prostaglandin E 2，PGE 2)是一种内源性生物活性脂质，PGE 2通过激活***素受体引起广泛的上下游依赖性生物应答(Legler,D.F.et al,hit.J Biochem.Cell Biol.2010,42,p.198-201)，参与调控包括炎症、疼痛、肾功能、心血管***、肺功能以及癌症等诸多生理和病理过程。据报道，PGE 2在各种癌症的癌变组织中高度表达，并且已证实PGE 2与患者的癌症和疾病状况的发生、成长和发展相关。普遍认为，PGE 2与细胞增殖和细胞死亡(凋亡)的激活相关，并且在癌细胞增殖、疾病进展和癌症转移的过程中起重要作用。
PGE 2的受体中，存在EP1、EP2、EP3和EP4这4个种类的亚型，它们广泛分布于各种组织中。这些亚型之中，PGE 2介由EP4受体干预炎症反应(包括免疫炎症反应)、平滑肌的松弛、发痛、淋巴细胞分化、血管系膜细胞的肥大或增殖、肠胃粘液的分泌等。因而，可以认为EP4受体拮抗剂有希望作为消炎和/或镇痛药治疗与PGE 2-EP4通路相关的疾病，例如炎症性疾病、伴有各种疼痛的疾病等。
EP4是类风湿性关节炎和骨关节炎啮齿动物模型中关节炎性疼痛中涉及的主要受体(参见例如J.Pharmacol.Exp.Ther.,325,425(2008))，其在活化后导致细胞内信号分子cAMP累积。已有研究在痛觉感受器的外周神经末梢、巨噬细胞及嗜中性球上检测到EP4受体的表达，经证实这些细胞类型对于子宫内膜异位症极其重要。有研究报道口服EP4拮抗剂可减轻2型糖尿病小鼠的蛋白尿，抑制糖尿病肾病的进展。另有研究报道膀胱粘膜中EP4的激活和PGE 2的产生增加可能是***炎引起膀胱过度活动的重要原因，膀胱内注射EP4拮抗剂可有效改善***炎后的膀胱过度活动。因此，选择性EP4拮抗剂可用于治疗关节炎、包括关节炎疼痛 以及子宫内膜异位症、糖尿病肾病、膀胱过度活动症。现有关节炎的治疗药以传统NSAID(非甾体抗炎药)或选择性COX-2抑制剂为主，它们可产生心血管和/或胃肠副作用。而选择性EP4拮抗剂产生心血管副作用的可能较小。
PGE 2在肿瘤微环境中持续地激活肿瘤微环境中的EP受体(由肿瘤细胞大量产生)(Ochs et al,J Neurochem.2016,136,p.1142-1154；Zelenay,S.et al,Cell 2015,162,p.1257-1270)，会促进多种免疫抑制细胞的积累并增强其活性，包括2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMS)、Treg细胞和髓系来源的抑制细胞(MDSCs)。免疫抑制肿瘤微环境的主要特征之一是存在大量的MDSCs和TAM，它们反过来又与胃癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肝细胞癌(HCC)、头颈癌和其他类型的癌症患者的总体生存率低密切相关。此外，据报道PGE 2通过抑制抗原提呈树突状细胞(DC)在肿瘤中的积聚以及抑制肿瘤浸润性DC的激活来诱导免疫耐受(Wang et al,Trends in Molecular Medicine 2016,22,p.1-3)。所有这些PGE 2介导的作用将共同帮助肿瘤细胞逃避免疫监视。PGE 2在促进肿瘤发生发展中发挥十分重要的作用。在包括结肠癌、肺癌、乳腺癌、和头颈癌等各类恶性肿瘤中都发现PGE 2及其相关受体EP2、EP4的表达水平升高，并往往和不良预后密切相关(Bhooshan,N.et al.Lung Cancer 101,88-91)。因此，选择性阻断EP2和EP4信号通路可以通过改变肿瘤微环境、调控肿瘤免疫细胞抑制肿瘤发生发展。
现有的临床前研究数据显示，EP2和EP4特异性拮抗剂在结肠癌、食道癌、肺癌和乳腺癌等动物模型中可以不同程度的预防或抑制肿瘤的生长。在进入临床的PGE 2受体药物中，辉瑞公司研发的EP4拮抗剂Grapiprant已被FDA批准用于狗的关节炎的治疗，同时于2015年进入抗肿瘤的临床II期研究，用于治疗***癌、非小细胞肺癌和乳腺癌等多种类型的实体肿瘤(De Vito,V.et al.J Pharm Biomed Anal 118,251-258)。卫材公司研发的EP4拮抗剂E7046也于2015年展开临床I期的相关研究，2017年开展联合放疗或放化疗治疗直肠癌的Ib期临床试验。Ono Pharmaceutical研发的ONO-4578于2017年开展晚期或转移性实体瘤的临床I期研究，2018年开展单药或联合nivolumab治疗晚期实体瘤的I/II期临床试验。
目前EP4拮抗剂在炎性疾病、疼痛、癌症等领域的治疗取得了一定的进展，但仍有待进一步开发新型的药物，以作为目前药物的改进或者替换。
发明内容
本发明旨在提出一种能够有效拮抗EP4的化合物，其能够作为目前药物或者EP4拮抗剂的改进或者替换。
为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物，其为式V所示化合物或式V所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
Figure PCTCN2021079073-appb-000001
其中，环A选自
Figure PCTCN2021079073-appb-000002
环B选自
Figure PCTCN2021079073-appb-000003
R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
R 2选自C 2-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、苯基、三氟甲基、被卤素取代的C 2-C 6烷基、被卤素取代的C 3-C 6环烷基、被羟基取代的C 2-C 6烷基、被氰基取代的C 2-C 6烷基、-SF 5、-X-R 2a；其中X选自氧、硫、-CO-、-SO 2-、-SO-；R 2a选自C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷基；
R 3选自氢、卤素、C 1-C 2烷基、被氟取代的C 1-C 2烷基、苯基；
R 4选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、被卤素取代的C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷氧基；
R 5选自氢、卤素；
R 6a和R 6b之一是氢，且另一个是甲基；或R 6a和R 6b一起形成环丁基环；
R 7选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
M选自氧、硫、亚甲基；
条件是，当R 2为三氟甲基、M为氧、R 6a和R 6b之一是氢，且另一个是甲基时，环A选自
Figure PCTCN2021079073-appb-000004
当R 2为三氟甲基、M为氧、环A为
Figure PCTCN2021079073-appb-000005
时，R 6a和R 6b一起形成环丁基环。
根据本发明的实施例，上述化合物还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，上述化合物为式III所示化合物或式III所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
Figure PCTCN2021079073-appb-000006
其中，R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；R 7选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；M选自氧、硫、亚甲基。
根据本发明的实施例，所述化合物为式II所示化合物或式II所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药，
Figure PCTCN2021079073-appb-000007
其中，R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；较佳地，R 1为-CHF 2；R 2选自乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、氟代乙基、氟代丙基、氟代异丙基、氟代丁基、氟代异丁基、羟基乙基、羟基异丙基、氰甲基、氰乙基、苯基、-SF 5、-X-R 2a；其中X选自氧、硫、-CO-；R 2a选自甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基；R 3选自氢、氟、氯、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基、苯基；R 4选自氢、氟、氯、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基；R 5选自氢、氟、氯；M选自氧、硫、亚甲基。
根据本发明的实施例，所述化合物为式I所示化合物(式I所示化合物，也称为化合物I)，其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药：
Figure PCTCN2021079073-appb-000008
其中，
R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；R 2选自C 2-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、被卤素取代的C 2-C 6烷基、被卤素取代的C 3-C 6环烷基；R 3选自氢、卤素、C 1-C 2烷基、被氟取代的C 1-C 2烷基；R 4选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、被卤素取代的C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷氧基。
根据本发明的实施例，上述化合物还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，R 2选自C 2-C 3烷基、C 3-C 6环烷基、被氟取代的C 2-C 3烷基、被氟取代的C 3-C 6环烷基。
根据本发明的实施例，优选地，R 2选自-CH 2CH 3、-CH(CH 3) 2、环丙基、-CF 2CH 3和-CH 2CF 3。
根据本发明的实施例，R 3选自氢、氟和氯。
根据本发明的实施例，R 4选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、被卤素取代的C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷氧基。
根据本发明的某些实施例，R 4选自氢、氟、氯、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、被氟或者氯取代的C 1-C 4烷基、被氟或者氯取代的C 1-C 4烷氧基；优选地，R 4选自氢、氟、氯。
根据本发明的实施例，所述化合物为下列化合物之一或者下列化合物之一的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药：
Figure PCTCN2021079073-appb-000009
Figure PCTCN2021079073-appb-000010
Figure PCTCN2021079073-appb-000011
Figure PCTCN2021079073-appb-000012
根据本发明的实施例，所述盐包括药学上可以接受的盐，选自下列的至少之一：硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸、盐酸、甲酸、乙酸、丙酸、苯磺酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸、褐藻酸、氨茴酸、樟脑酸、柠檬酸、乙烯磺酸、蚁酸、富马酸、糠酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、粘液酸、双羟萘酸、泛酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、对甲苯磺酸、丙二酸、2-羟基丙酸、草酸、羟乙酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、枸橼酸、赖氨酸、精氨酸、门冬氨酸、肉桂酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或三氟甲磺酸。本领域技术人员能够理解的是，除了药学可接受的盐外，本发明还可以采用其他的盐类型，可以用于在化合物纯化中或在制备其它药学上可以接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种药物组合物。根据本发明的实施例，所述药物 组合物包含：药学上可接受的赋形剂以及前面所述的化合物。
在本发明的第三方面，本发明提出了前面所述的化合物或者前面所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者预防EP4相关疾病。
根据本发明的实施例，所述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述EP4相关疾病包括选自下列的至少之一：炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿***疾病。
根据本发明的实施例，所述炎性疾病包括选自下列的至少之一：关节炎、类风湿关节炎。
根据本发明的实施例，所述疼痛包括骨关节炎疼痛、子宫内膜异位导致的疼痛。
根据本发明的实施例，化合物或者前面所述的药物组合物可以与放射疗法和/或抗体疗法联合施用，其中所述抗体疗法选自CTLA4抗体疗法、PDL1抗体疗法和PD1抗体疗法之一或其组合。
根据本发明的实施例，所述癌症包括实体癌。
根据本发明的实施例，所述癌症包括乳腺癌、***、结直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、皮肤癌和尿道癌。
根据本发明的实施例，所述代谢疾病包括糖尿病，所述泌尿***疾病包括膀胱过动症。
根据本发明的实施例，利用本发明的化合物或者药物组合物，可以为有需要的患者提供更优、更有效的临床治疗药物或方案。根据本发明的实施例，本发明提出了一系列结构新颖、药代动力学性质更优良、药效更好、成药性好的EP4拮抗剂，能够有效治疗EP4相关的疾病或病症。
本发明还涉及治疗与EP4有关的疾病方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。
本发明还涉及炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿***疾病的治疗方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的包含本发明所述化合物或其药学上可接受的盐的药物制剂。本发明还涉及将所述化合物或药物组合物与放射疗法和/或抗体疗法联合施用治疗疾病的方法，其中抗体疗法选自CTLA4抗体疗法、PDL1抗体疗法和PD1抗体疗法之一或其组合。
术语定义和说明
除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。
除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/Vis光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本申请的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH 2O等同于OCH 2。
本申请说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被理解为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“1～6的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5和6的每一个整数。当该数值范围被理解为“数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数以及该范围内的每一个小数。例如，“1～10的数”应当被理解为不仅记载了1、2、3、4、5、6、7、8、9和10的每一个整数，还至少记载了其中每一个整数分别与0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的和。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”或者“其药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。
除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体。本发明使用的立体化学定义和惯例大体上按照S.P.Parker，Ed.，McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；and Eliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry of Organic Compounds”，John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994来定义。本发明化合物可含有不对称中心或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。所预期的是，本发明化合物 的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体(atropisomer)和几何(或构象)异构体及它们的混合物，如外消旋混合物，均在本发明的范围之内。
许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀D和L或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或L表示化合物是左旋的。前缀为(+)或D的化合物是右旋的。就给定的化学结构而言，除了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对映异构体，并且所述异构体的混合物通常称作对映异构体的混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或方法中没有立体选择性或立体特异性时，可出现所述外消旋混合物或外消旋体。
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。旋光性的(R)-或(S)-异构体可使用手性合成子或手性制剂制备，或使用常规技术拆分。如果此化合物含有一个双键，取代基可能为E或Z构型；如果此化合物中含有二取代的环烷基，环烷基的取代基可能为顺式或反式(cis-或trans-)构型。
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(R)和(S)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
含有不对称取代的碳原子的本发明化合物能够以旋光活性形式或外消旋形式分离。化合物的外消旋混合物的拆分可以通过本领域已知的许多方法中的任一种来进行。示例性方法包括使用手性拆分酸的分级重结晶，该手性拆分酸是旋光活性的成盐有机酸。用于分级重结晶方法的适合的拆分剂例如是旋光活性酸，例如酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或各种旋光活性樟脑磺酸如β-樟脑磺酸的D和L形式。适合于分级结晶方法的其它的拆分剂包括立体异构纯形式的α-甲基-苄胺(例如，S和R形式或者非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、降麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1，2-二氨基环己烷等。外消旋混合物的拆分还可以通过在填充有旋光活性拆分剂(例如，二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱子上洗脱来进行。可以采用高效液相色谱(HPLC)法也可以采用超临界流体色谱法(SFC)进行。具体方法的选择以及洗脱条件、色谱柱的选择可以由本领域技术人员根据化合物的结构以及试验结果选择。进一步的，还可以使用已知构型的光学纯的起始原料或试剂，通过立体有机合成，获得本发明所描述化合物的任何对映体或非对映体。
烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可以存在于本文所述的化合物中，且所有这种稳定的异构体在本发明中均被考虑。当本文所描述化合物含有烯双键时，除非另外说明，否则，这种双键包括E和Z几何异构体。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
术语“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
术语“溶剂化物”指本发明化合物或其盐包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂，当溶剂为水时，则为水合物。
术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚( 3H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。
术语“C 1-C 6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C 1-C 3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
术语“C 3-C 6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～6个碳原子，包括稠合或桥接的多环***。如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
术语“C 1-C 6烷氧基”应理解为-O-(C 1- 6烷基)，其中“C 1- 6烷基”具有上述定义。
术语“卤代基”或“卤素”为氟、氯、溴和碘。
“卤代烷基”指包括具有特定数目的碳原子、被一或多个卤素取代的支链和直链的饱和脂族烃基(如-CvFw，其中v＝1至3，w＝1至(2v+1))。卤代烷基的实例包括，但不限于三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。
有益效果
根据本发明的实施例，本发明所述化合物和/或其组合物能够有效拮抗EP4受体活性，具有更为优良的肝代谢稳定性和心脏安全优势，具有更好的药代动力学性质，在体内暴露量更高，给药量低、顺应性更好。在制备治疗与EP4相关疾病的药物方面具有广阔的应用前景。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1是根据本发明实施例的化合物对肿瘤的抑制结果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
如无特别说明，本发明的化合物均是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定。NMR位移的单位为10 -6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(TMS)。
本发明的缩写定义如下：
BAST：双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫
m-CPBA：间氯过氧苯甲酸
L-selectride：三仲丁基硼氢化锂
Pd(dppf)Cl 2：1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯
DCM：二氯甲烷
HATU：O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯
DIPEA：二异丙基乙胺，即N,N-二异丙基乙胺
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
N：当量浓度，例如1N盐酸表示1mol/L盐酸溶液
THF：四氢呋喃
DMA：N,N-二甲基乙酰胺
DMSO：二甲基亚砜
EA：乙酸乙酯
IC 50：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
CHO：Chinese hamster ovary cells，中国仓鼠卵巢细胞
HBSS：Hank's Balanced Salt Solution，Hank's平衡盐溶液
BSA：Albumin from bovine serum，牛血清白蛋白
HEPES：羟乙基哌嗪乙硫磺酸
IBMX：3-isobutyl-1-methyl-7H-xanthine，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤
FLIPR：Fluorescence Imaging Plate Reader，实时荧光成像分析***
EC 80：concentration for 80％of maximal effect，能引起80％最大效应的浓度
除非作出相反的指示，本文例举的化合物使用ChemBioDraw Ultra 13.0命名和编号。
对照例1：对照化合物的制备
Figure PCTCN2021079073-appb-000013
对照化合物参考专利申请WO2012039972A1合成。
下文测试例的对照化合物均指对照例1所述化合物。
制备例1：中间体A的制备
(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)
methyl(S)-4-(1-(5-chloro-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(中间体A)
Figure PCTCN2021079073-appb-000014
中间体A的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000015
室温下将原料5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(5g,23.8mmol)(参照专利申请WO2011151369A1合成)，加入到DCM(200mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(5.1g,28.6mmol)，HATU(10.9g,28.6mmol)，DIPEA(4.6g,35.7mmol)，室温搅拌16h，加入水(200mL)，用DCM(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(5.6g,产率63.3％)。
LCMS(ESI)m/z:372.5[M+H] +
制备例2：酸性制备方法A
此实施例为产品纯化实施例，在此纯化过程中，采用高效液相色谱法进行纯化，纯化条件如下所示：
Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。
流动相A为1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，流动相A由90％变为5％，18～22分钟保持流动相A为5％)。
以下实施例中所述的“酸性制备方法A”均指该制备例2的酸性制备方法A。
实施例1：化合物I-1的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-1)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl )benzoic acid(化合物I-1)
Figure PCTCN2021079073-appb-000016
化合物I-1的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000017
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-1B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-1B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000018
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(370mg，1.0mmol)加入到DMF(10mL)中，加入3-乙基苯酚(I-1A)(183mg,1.5mmol)，KOH(168mg,3.0mmol)，加热至120℃，搅拌6h。冷却至室温，加入水(40mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝7，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-1B)(220mg,产率48.1％)。
LCMS(ESI)m/z:458.1[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-1)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-1)
Figure PCTCN2021079073-appb-000019
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-1B)(220mg,0.48mmol)加入到THF(4mL)中，加入水(2mL)，一水合氢氧化锂(42mg,1.0mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-1)(80mg,产率37.5％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),7.90(d,1H),7.71(d,2H),7.32(t,1H),7.25(t,1H),7.12(d,2H),7.07(d,1H),6.90(s,1H),6.76(dd,1H),4.90(t,1H),3.72(s,3H),2.61(q,2H),1.22(d,3H),1.14(t,3H).
LCMS(ESI)m/z:444.1[M+H] +
实施例2：化合物I-2的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-2)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-2)
Figure PCTCN2021079073-appb-000020
化合物I-2的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000021
第一步：1-氟-4-甲氧基-2-乙烯基苯(化合物I-2B)
1-fluoro-4-methoxy-2-vinylbenzene(化合物I-2B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000022
室温下将2-溴-1-氟-4-甲氧基苯(化合物I-2A)(1.02g,5.0mmol)加入到1,4-二氧六环(20mL)中，加入乙烯基氟硼酸钾(740mg,5.52mmol)，[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(430mg,0.50mmol)，碳酸钾(1.52g,11.0mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌14h。冷却至室温，加入水(200mL)稀释，用DCM(80mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(纯石油醚)得无色液体粗品1-氟-4-甲氧基-2-乙烯基苯(化合物I-2B)(680mg,产率89.9％)。
第二步：2-乙基-1-氟-4-甲氧基苯(化合物I-2C)
2-ethyl-1-fluoro-4-methoxybenzene(化合物I-2C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000023
室温下将1-氟-4-甲氧基-2-乙烯基苯(3.60g,23.7mmol)，加入到甲醇(50mL)中，加入10％钯碳(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤用甲醇(30mL×3)洗涤，合并有机相，浓缩，得无色液体粗品2-乙基-1-氟-4-甲氧基苯(化合物I-2C)(2.90g,产率79.5％)。
第三步：3-乙基-4-氟苯酚(化合物I-2D)
3-ethyl-4-fluorophenol(化合物I-2D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000024
室温下将2-乙基-1-氟-4-甲氧基苯(100mg,0.65mmol)，加入到DCM(3mL)中，冷却至-60℃，加入1mol/L的BBr 3DCM溶液(2mL)，自然升至室温，室温搅拌4h。加入水(3mL)淬灭，用DCM(5mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得无色液体3-乙基-4-氟苯酚(化合物I-2D)(60mg,产率89.9％)。
第四步：3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-2E)
3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carbaldehyde(化合物I-2E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000025
室温下将化合物5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(350mg,1.18mmol)加入到DMF(5mL)中，加入3-乙基-4-氟苯酚(379mg,2.70mmol)，碳酸钾(546mg,3.95mmol)，加热至100℃，搅拌1.5h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得无色液体粗品3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-2E)(600mg,产率100％)。
LCMS(ESI)m/z:299.1[M+H] +
第五步：3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-2F)
3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylic  acid(化合物I-2F)
Figure PCTCN2021079073-appb-000026
室温下将化合物3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(350mg,1.80mmol)加入到叔丁醇(10mL)和水(2mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(246mg,3.52mmol)，亚氯酸钠(316mg,3.52mmol)，磷酸二氢钠(281mg,2.34mmol)，室温搅拌4h。加入水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-2F)(350mg,产率94.9％)。
LCMS(ESI)m/z:315.1[M+H] +
第六步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-2G)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-2G)
Figure PCTCN2021079073-appb-000027
室温下将化合物3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(350mg,1.11mmol)加入到DMF(5mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(220mg,1.23mmol)，HATU(467mg,1.23mmol)，DIPEA(301mg,2.33mmol)，室温搅拌16h，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得无色液体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-2G)(400mg,产率75.5％)。
LCMS(ESI)m/z:476.2[M+H] +
第七步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(化合物I-2)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-2)
Figure PCTCN2021079073-appb-000028
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(400mg,0.84mmol)加入到THF(5mL)和水(5mL)和甲醇(5mL)中，加入一水合氢氧化锂(141mg,3.36mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(300mg,产率77.2％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),8.03(d,1H),7.74(d,2H),7.17(t,1H),7.14-7.10(m,3H),7.01-6.97(m,1H),6.82-6.79(m,1H),4.92(t,1H),3.73(s,3H),2.59(q,2H),1.25(d,3H),1.11(t,3H).
LCMS(ESI)m/z:462.2[M+H] +
实施例3：化合物I-3的制备
(S)-4-(1-(5-(3-环丙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-3)
(S)-4-(1-(5-(3-cyclopropylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-3)
Figure PCTCN2021079073-appb-000029
化合物I-3的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000030
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-环丙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-3B)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-cyclopropylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-3B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000031
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(145mg,0.39mmol)加入到DMA(2mL)中，加入3-环丙基苯酚(80mg,0.59mmol)，KOH(34mg,0.61mmol)，加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品(S)-4-(1-(5-(3-环丙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-3B)(20mg,产率10.9％)。
LCMS(ESI)m/z:470.6[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(5-(3-环丙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-3)
(S)-4-(1-(5-(3-cyclopropylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-3)
Figure PCTCN2021079073-appb-000032
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-环丙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-3B)(20mg,0.04mmol)加入到THF(1mL)中，加入水(1mL)，一水合氢氧化锂(2mg,0.048mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-环丙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-3)(1.5mg,产率7.7％)
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),7.92(d,1H),7.72(d,2H),7.27(t,1H),7.11(t,1H),7.10(d,2H),6.90(d,1H),6.80(t,1H),6.70(dd,1H),4.90(t,1H),3.72(s,3H),1.92-1.98(m,1H),1.23(d,3H),0.96-0.92(m,2H),0.66-0.27(m,2H).
LCMS(ESI)m/z:456.6[M+H] +
实施例4：化合物I-4的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-4)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-isopropylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-4)
Figure PCTCN2021079073-appb-000033
化合物I-4的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000034
第一步：3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-4B)
3-(difluoromethyl)-5-(3-isopropylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carbaldehyde(化合物I-4B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000035
室温下将化合物5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(500mg,2.57mmol)加入到DMF(5mL)中，加入3-异丙基苯酚(386mg,2.80mmol)，KOH(216mg,3.85mmol)，加热至150℃，搅拌4h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色液体粗品3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-4B)(750mg,产率98.9％)。
LCMS(ESI)m/z:295.1[M+H] +
第二步：3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-4C)
3-(difluoromethyl)-5-(3-isopropylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-4C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000036
室温下将化合物3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(750mg,2.55mmol)加入到叔丁醇(6mL)和水(7mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(355mg,5.07mmol)，亚氯酸钠(456mg,5.07mmol)，磷酸二氢钠(669mg,5.57mmol)，室温搅拌14h。加入水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(30mlL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-4C)(800mg,产率100％)。
LCMS(ESI)m/z:311.1[M+H] +
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-4D)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-isopropylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-4D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000037
室温下将化合物3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(800mg,2.58mmol)加入到DCM(20mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(459mg,2.56mmol)，HATU(1.40g,3.68mmol)，DIPEA(991mg,7.68mmol)，室温搅拌16h，加入DCM(40mL)稀释，用水(20mL×3)洗涤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色液体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-4D)(720mg,产率59.2％)。
LCMS(ESI)m/z:472.2[M+H] +
第四步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(化合物I-4)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-isopropylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-4)
Figure PCTCN2021079073-appb-000038
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-4D)(440mg,0.93mmol)加入到甲醇(10mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(93mg,2.32mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(93mg,产率21.7％)
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.7(s,1H),7.89(d,1H),7.70(d,2H),7.32(t,1H),7.12(t, 1H),7.10(s,1H),7.06(d,2H),6.99(s,1H),6.72-6.70(m,1H),4.91(t,1H),3.73(s,3H),2.91-2.85(m,1H),1.21(d,3H),1.17(d,6H).
LCMS(ESI)m/z:458.3[M+H] +
实施例5：化合物I-5的制备
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-5)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-5)
Figure PCTCN2021079073-appb-000039
化合物I-5的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000040
第一步：2-(3-(1,1-二氟乙基)苯基)频那醇硼酸酯(化合物I-5B)
2-(3-(1,1-difluoroethyl)phenyl)-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane(化合物I-5B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000041
室温下将1-溴-3-(1,1-二氟乙基)苯(800mg,3.62mmol)加入到1,4-二氧六环(30mL)中，加入联硼酸频那醇酯(17.0g,156.3mmol)，碘化亚铜(2.5g,13.0mmol)，L-脯氨酸(2.76g,10.86mmol)，醋酸钾(710mg,7.24mmol)，[1,1-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(295mg,0.36mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(200mL)稀释，用二氯甲烷(80mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(纯石油醚)得无色液体粗品2-(3-(1,1-二氟乙基)苯基)频那醇硼酸酯(化合物I-5B)(900mg,产率92.7％)。
第二步：3-(1,1-二氟乙基)苯酚(化合物I-5C)
3-(1,1-difluoroethyl)phenol(化合物I-5C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000042
室温下将2-(3-(1,1-二氟乙基)苯基)频那醇硼酸酯(化合物I-5B)(900mg,3.36mmol)，加入到THF(15mL)和水(15mL)中，加入一水高硼酸钠(1.01g,10.07mmol)，室温搅拌16h。加入水(200mL)稀释，用DCM(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得无色液体3-(1,1-二氟乙基)苯酚(化合物I-5C)(280mg,产率52.7％)。
第三步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-5D)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-5D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000043
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(650mg,1.75mmol)加入到DMF(12mL)中，加入3-(1,1-二氟乙基)苯酚(360mg, 2.27mmol)，氢氧化钾(147mg,2.62mmol)，加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(80mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品)(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-5D)(1.2g,粗品)。
LCMS(ESI)m/z:494.6[M+H] +。
第四步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-5)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-5)
Figure PCTCN2021079073-appb-000044
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-5D)(1.0g,2.03mmol)加入到THF(5mL)中，加入水(4mL)，一水合氢氧化锂(340mg,8.11mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-5)(88mg,产率7.9％)
LCMS(ESI)m/z:480.5[M+H] +
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),8.10(d,1H),7.71(d,2H),7.53(t,1H),7.47(d,1H),7.27(d,1H),7.11(t,1H),7.11(d,2H),7.07(dd,1H),4.88(t,1H),3.74(s,3H),1.96(t,3H),1.96(d,3H).
实施例6：化合物I-6的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-6)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(2,2,2-trifluoroethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-6)
Figure PCTCN2021079073-appb-000045
化合物I-6的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000046
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-甲酰苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-6B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-formylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-6B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000047
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(371mg,1.0mmol)加入到DMSO(5mL)中，加入3-羟基苯甲醛(122mg,1.0mmol)，K 2CO 3(270mg,2.0mmol)，碘化亚铜(76mg,0.4mmol)，菲罗琳(72mg,0.4mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得标题化合物无色液体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-甲酰苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-6B)(180mg,产率39.3％)。
LCMS(ESI)m/z:458.1[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-6C)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(2,2,2-trifluoroethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-6C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000048
室温下将(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-甲酰苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-6B)(41.4mg,0.09mmol)，加入到DMF(2mL)中，加入三苯基磷鎓基二氟乙酸内盐(64mg,0.18mmol)，加热至60℃，搅拌2h。加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.3mL,0.30mmol)，继续搅拌4h。冷却至室温，将反应液浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝8:1)得无色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-6C)(40mg,产率91.2％)。
LCMS(ESI)m/z:512.1[M+H] +
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-6)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(2,2,2-trifluoroethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-6)
Figure PCTCN2021079073-appb-000049
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-6C)(40mg,0.082mmol)加入到甲醇(2mL)中，加入水(2mL)，一水合氢氧化锂(12mg,0.3mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二 氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-6)(4.8mg,产率12.3％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.7(s,1H),7.95(d,1H),7.73(d,2H),7.43(t,1H),7.22(d,1H),7.13(t,1H),7.12(d,2H),7.10(s,1H),6.97(dd,1H),4.89(t,1H),3.74(s,3H),3.72-3.63(m,2H),1.24(d,3H).
LCMS(ESI)m/z:498.5[M+H] +
实施例7：化合物I-7的制备
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(三氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-7)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-7)
Figure PCTCN2021079073-appb-000050
化合物I-7的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000051
第一步：5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-7B)
5-chloro-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-7B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000052
室温下将化合物5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲醛(700mg,3.30mmol)加入到叔丁醇(20mL)和水(5mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(1.80g,25.7mmol)，亚氯酸钠(1.48g,16.4mmol)，磷酸二氢钠(3.10g,25.8mmol)，室温搅拌14h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗残留物，用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色固体5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-7B)(680mg,产率90.3％)。
LCMS(ESI)m/z:229.6[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-7C)
methyl(S)-4-(1-(5-chloro-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-7C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000053
室温下将化合物5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-7B)(680mg,2.98mmol)加入到DMF(20mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(537mg,3.00mmol)，HATU(1.70g,4.47mmol)，DIPEA(1.90g,14.7mmol)，室温搅拌16h，加入水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色固体(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-7C)(700mg,产率60.3％)。
LCMS(ESI)m/z:390.5[M+H] +
第三步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-7D)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-7D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000054
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-7C)(700mg,1.00mmol)加入到DMF(10mL)中，加入3-(1,1-二氟乙基)苯酚(284mg,1.00mmol)，KOH(264mg,4.63mmol)，加热至120℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-7D)(100mg,产率10.8％)。
LCMS(ESI)m/z:512.3[M+H] +
第四步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(三氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-7)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-7)
Figure PCTCN2021079073-appb-000055
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-7D)(100mg,0.19mmol)加入到THF(5mL)中，加入水(4mL)，一水合氢氧化锂(10mg,0.24mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(三氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-7)(47.2mg,产率48.5％)
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),8.58(d,1H),7.73(d,2H),7.53(t,1H),7.40(d, 1H),7.27(s,1H),7.15(d,2H),7.11(d,1H),4.85(t,1H),3.29(s,3H),1.96(t,3H),1.17(d,3H).
LCMS(ESI)m/z:498.3[M+H] +
实施例8：化合物I-8的制备
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-8)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-8)
Figure PCTCN2021079073-appb-000056
化合物I-8的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000057
第一步：5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-8B)
5-chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carbaldehyde(化合物I-8B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000058
室温下将1,3-二甲基-5-羟基吡唑(5.5g,49.1mmol)加入到DMF(10.9g)中，冷却至0℃，加 入POCl 3(53.0g,346.4mmol)，自然升至室温，加热至120℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(200mL)稀释，用EA(200mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色液体5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-8B)(4.3g,产率55.4％)。
LCMS(ESI)m/z:159.6[M+H] +
第二步：5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-8C)
5-chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-8C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000059
室温下将化合物5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-8B)(3.20g,20.2mmol)加入到叔丁醇(50mL)和水(15mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(11.3g,161.4mmol)，亚氯酸钠(9.10g,101.1mmol)，磷酸二氢钠(19.4g,161.6mmol)，室温搅拌14h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得标题化合物无色液体粗残留物，用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色固体5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-8C)(3.10g,产率87.9％)。
LCMS(ESI)m/z:175.6[M+H] +
第三步：(S)-4-(1-(5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8D)
methyl(S)-4-(1-(5-chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-8D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000060
室温下将化合物5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-8C)(1.20g,6.89mmol)加入到DMF(30mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(1.23g,6.87mmol)，HATU(3.90g,10.1mmol)，DIPEA(4.50g,34.8mmol)，室温搅拌16h，加入水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油 醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色固体(S)-4-(1-(5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8D)(1.90g,产率82.2％)。
LCMS(ESI)m/z:336.6[M+H] +
第四步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8E)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-8E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000061
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8D)(335mg,1.00mmol)加入到DMF(10mL)中，加入3-(1,1-二氟乙基)苯酚(158mg,1.00mmol)，KOH(150mg,2.67mmol)，加热至120℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得标题化合物无色液体粗品(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8E)(170mg,产率37.1％)。
LCMS(ESI)m/z:458.5[M+H] +
第五步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-8)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-8)
Figure PCTCN2021079073-appb-000062
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8E)(500mg,1.09mmol)加入到THF(5mL)中，加入水(4mL)，一水合氢氧化锂(340mg,8.11mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-8)(53mg,产率10.9％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),7.73(d,2H),7.71(d,1H),7.52(t,1H),7.37(d,1H),7.21(s,1H),7.14(d,2H),7.01(dd,1H),4.91(t,1H),3.59(s,3H),2.27(s,3H),1.96(t,3H),1.22(d,3H).
LCMS(ESI)m/z:444.5[M+H] +
实施例9：化合物I-9的制备
(S)-4-(1-(5-(3-乙基苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-9)
(S)-4-(1-(5-(3-ethylphenoxy)-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-9)
化合物I-9的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000063
化合物I-9的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000064
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-乙基苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-9B)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-ethylphenoxy)-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-9B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000065
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-8D)(100mg,0.30mmol)加入到DMF(3mL)中，加入3-乙基苯酚(36mg,0.30mmol)，KOH(49mg,0.86mmol)，加热至120℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得标无色液体粗品(S)-4-(1-(5-(3-乙基苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-9B)(60mg,产率47.7％)。
LCMS(ESI)m/z:422.6[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(5-(3-乙基苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-9)
(S)-4-(1-(5-(3-ethylphenoxy)-1,3-dimethyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-9)
Figure PCTCN2021079073-appb-000066
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-乙基苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-9B)(60mg,0.14mmol)加入到THF(2mL)中，加入水(2mL)，一水合氢氧化锂(6mg,0.14mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙基苯氧基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-9)(10mg,产率17.2％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d 6)δ12.6(s,1H),7.72(d,2H),7.50(d,1H),7.31(t,1H),7.12(d,2H),7.04(d,1H),6.85(s,1H),6.71(dd,1H),4.92(t,1H),3.56(s,3H),2.67(q,2H),2.27(s,3H),1.24(d,3H),1.14(t,3H).
LCMS(ESI)m/z:408.6[M+H] +
实施例10：化合物I-10的制备
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-10)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-10)
Figure PCTCN2021079073-appb-000067
化合物I-10的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000068
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-10B)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-acetyl-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-10B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000069
室温下将化合物1-(2-氟-5-羟基苯基)乙烷-1-酮(1.58g,10.8mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(2.0g,5.4mmol)，氢氧化钾(450mg,8.1mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-10B)(346mg,产率13％)。
LC-MS,M/Z(ESI):490.2[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-10C)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-10C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000070
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-10B)(346mg,0.71mmol)加入到(二乙氨基)三氟化硫(10mL)中，加热至50℃，搅拌16h。冷却至0℃，加入水(50mL)稀释，用EA(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色粗品(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-10C)(390mg,产率100％)。
LC-MS,M/Z(ESI):512.2[M+H] +
第三步：(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-10)
(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-difluoroethyl)-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-10)
Figure PCTCN2021079073-appb-000071
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-10C)(390mg,0.76mmol)，加入到四氢呋喃(10mL)、甲醇(10mL)和水(3mL)中，加入氢氧化锂(64mg,1.52mmol)，室温搅拌36h。用1N盐酸调节pH＝7，浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-10)(116mg,产率31％)。
LC-MS,M/Z(ESI):498.1[M+H] +
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.10(s,1H),8.19(d,1H),7.75(d,2H),7.39(t,1H),7.26(t,1H),7.15(d,2H),7.13(d,1H),7.12(t,1H),4.90(t,1H),3.75(s,3H),2.01(t,3H),1.22(d,3H).
实施例11：化合物I-11的制备
(S)-4-(1-(5-(4-氯-3-乙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-11)
(S)-4-(1-(5-(4-chloro-3-ethylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-11)
Figure PCTCN2021079073-appb-000072
化合物I-11的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000073
第一步：(S)-4-(1-(5-(4-氯-3-乙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-11B)
methyl(S)-4-(1-(5-(4-chloro-3-ethylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-11B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000074
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(371mg，1.00mmol)加入到二甲亚砜(3mL)中，加入4-氯-3-乙基苯酚(156mg，1.00mmol)，氢氧化钾(112mg，2.00mmol)，加热至120℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品(S)-4-(1-(5-(4-氯-3-乙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-11B)(80mg，产率16％)。
LC-MS,M/Z(ESI):492.3(M+1)。
第二步：(S)-4-(1-(5-(4-氯-3-乙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-11)
(S)-4-(1-(5-(4-chloro-3-ethylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-11)
Figure PCTCN2021079073-appb-000075
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(4-氯-3-乙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-11B)(80mg,0.16mmol)加入到四氢呋喃(1mL)中，加入水(1mL)，一水合氢氧化锂(21mg,0.48mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(4-氯-3-乙基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-11)(13.3mg,产率17％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.04(d,1H),7.73(d,2H),7.41(d,1H),7.11(t,1H),7.10(d,2H),7.08(d,1H),6.82(d,1H),4.91(t,1H),3.73(s,3H),2.67(q,2H),1.24(d,3H),1.11(t,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):478.3(M+1)
实施例12：化合物I-12的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-5-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-12)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-5-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-12)
Figure PCTCN2021079073-appb-000076
化合物I-12的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000077
第一步：1-氟-3-甲氧基-5-乙烯基苯(化合物I-12B)
1-fluoro-3-methoxy-5-vinylbenzene(化合物I-12B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000078
室温下将1-溴-3-氟-5-甲氧基苯(2.0g,9.7mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)中，加入乙烯基氟硼酸钾(1.6g,11.7mmol)，[1,1-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯(1.4g,1.96mmol)，碳酸钾(2.7g,19.6mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(200mL)稀释，用二氯甲烷(80mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(纯石油醚)得无色液体1-氟-3-甲氧基-5-乙烯基苯(化合物I-12B)(600mg,产率40％)。
第二步：1-乙基-3-氟-5-甲氧基苯(化合物I-12C)
1-ethyl-3-fluoro-5-methoxybenzene(化合物I-12C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000079
室温下将1-氟-3-甲氧基-5-乙烯基苯(300mg,1.97mmol)，加入到甲醇(20mL)中，加入10％钯碳(200mg)，通入H 2，室温搅拌16h。过滤用甲醇(30mL×3)洗涤，合并有机相，浓缩，得无色液体粗品1-乙基-3-氟-5-甲氧基苯(化合物I-12C)(200mg,产率66％)。
第三步：3-乙基-5-氟苯酚(化合物I-12D)
3-ethyl-5-fluorophenol(化合物I-12D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000080
室温下将1-乙基-3-氟-5-甲氧基苯(200mg,1.3mmol)，加入到二氯甲烷(2mL)中，冷却至0℃，加入BBr 3(1mol/L的二氯甲烷溶液，2mL)，自然升至室温，室温搅拌4h。加入水(3mL)淬灭，用二氯甲烷(5mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓 缩，得粗品无色液体3-乙基-5-氟苯酚(化合物I-12D)(180mg,产率99％)。
第四步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-5-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-12E)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-5-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-12E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000081
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(250mg,0.67mmol)加入N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入3-乙基-5-氟苯酚(180mg,1.28mmol)，碳酸钾(270mg,1.96mmol)，碘化亚铜(50mg,0.26mmol)，1,10-菲罗啉(90mg,0.50mmol)加热至120℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得无色液体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-5-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-12E)(200mg,产率62％)。
LC-MS,M/Z(ESI):476.2(M+1)。
第五步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-5-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-12)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-5-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-12)
Figure PCTCN2021079073-appb-000082
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-5-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(200mg,0.42mmol)加入到四氢呋喃(10mL)和水(5mL)中，加入一水合氢氧化锂 (53mg,1.26mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，制备得标题化合物白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-5-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(130mg,产率67％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.10(d,1H),7.74(d,2H),7.16(d,2H),7.11(t,1H),6.93(d,1H),6.72(s,1H),6.69(d,1H),4.92(t,1H),3.73(s,3H),2.58-2.54(m,2H),1.25(d,3H),1.13(t,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):462.1(M+1)
实施例13：化合物I-13的制备
4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-13)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-fluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-13)
Figure PCTCN2021079073-appb-000083
化合物I-13的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000084
第一步：3-乙烯基苯酚(化合物I-13B)
3-vinylphenol(化合物I-13B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000085
0℃下将化合物甲基三苯基溴化膦(7.30g,20.5mmol)加入到无水四氢呋喃(40mL)中，加入叔丁醇钾(2.3g,20.5mmol)，低温下搅拌2h。滴加3-羟基苯甲醛(1.0g,8.20mmol)和四氢呋喃(15mL)的溶液，滴加完毕，自然升至室温，搅拌16h。加入水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得黄色液体3-乙烯基苯酚(化合物I-13B)(500mg,产率49％)。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-乙烯基苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-13C)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-vinylphenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-13C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000086
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(600mg,1.62mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(18mL)中，加入3-乙烯基苯酚(化合物I-13B)(388mg,3.23mmol)，氢氧化钾(181mg,3.23mmol)，微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(60mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-乙烯基苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-13C)(200mg,产率27％)。
LC-MS,M/Z(ESI):456.2(M+1)。
第三步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-13D)
methyl  4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-fluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-13D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000087
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-乙烯基苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-13C)(100mg,0.22mmol)加入到乙腈(25mL)中，加入选择性氟化试剂(233mg,0.66mmol)，四三苯基磷钯(25mg,0.02mmol)，三乙基硅烷(40.0mg,0.33mmol)，氮气保护下室温搅拌16h。加入水(60mL)稀释，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得白色固体4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-13D)(65.0mg,产率62％)。
LC-MS,M/Z(ESI):476.3(M+1)
第四步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-13)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-fluoroethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-13)
Figure PCTCN2021079073-appb-000088
室温下将原料4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-13D)(150mg,0.19mmol)加入到四氢呋喃(24mL)中，加入水(12mL)和甲醇(12mL)，加入氢氧化锂(15.0mg,0.36mmol)，室温搅拌4h。反应液浓缩，经酸性方法A制备得白色固体4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-13)(50.0mg,产率32％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.03(d,1H),7.72(d,2H),7.45(t,1H),7.25(t, 1H),7.11(d,2H),6.98(t,1H),6.94(t,1H),5.78(dd,1H),4.89(m,1H),3.73(s,3H),3.60(s,1H),1.55(dd,3H),1.24(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):462.3(M+1)
实施例14：化合物I-14的制备
(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-14)
(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-14)
Figure PCTCN2021079073-appb-000089
化合物I-14的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000090
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-(5-(3-甲醛苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-formylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)ben zoate(化合物I-14B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000091
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(574mg,1.54mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入3-羟基苯甲醛(378mg,3.09mmol)，碘化亚铜(60mg,0.31mmol)，1,10-菲罗琳(114mg,0.62mmol)，碳酸铯(1.50g,4.62mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得淡黄色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-(5-(3-甲醛苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14B)(280mg,产率40％)。
LC-MS,M/Z(ESI):458.3[M+H] +。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(2,2-二氟乙烯基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14C)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(2,2-difluorovinyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-14C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000092
室温下将化合物(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-(5-(3-甲醛苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14B)(280mg,0.61mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入三苯基膦(200mg,0.76mmol)，二氟氯乙酸钠(140mg,0.92mmol)，氮气保护下微波加热至100℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离 纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(2,2-二氟乙烯基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14C)(120mg,产率40％)。
LC-MS,M/Z(ESI):492.4[M+H] +。
第三步：(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14D)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-14D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000093
室温下将化合物(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(2,2-二氟乙烯基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14C)(120mg,0.24mmol)加入到甲醇(20mL)中，加入10％钯碳(20mg)，通入氢气，室温搅拌16h。过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14D)(120mg,产率99％)。
LC-MS,M/Z(ESI):494.4[M+H] +。
第四步：(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-14)
(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-14)
Figure PCTCN2021079073-appb-000094
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-14D)(120mg,0.24mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中， 加入氢氧化锂(31mg,0.72mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-(2,2-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-14)(90mg,产率77％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),7.95(d,1H),7.74(d,2H),7.39(t,1H),7.25(t,1H),7.16(d,2H),7.13(d,1H),7.04(d,1H),6.91(t,1H),6.34(dt,1H),4.91(t,1H),3.71(s,3H),3.22(q,2H),1.22(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):480.4[M+H] +
实施例15：化合物I-15的制备
4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-15)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-15)
Figure PCTCN2021079073-appb-000095
化合物I-15的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000096
第一步：3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯酚(化合物I-15B)
3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenol(化合物I-15B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000097
室温下将化合物1-甲氧基-3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯(800mg,0.72mmol)加入到二氯甲烷(1mL)中，冷却至-78℃，加入三溴化硼(1.50g,5.88mmol)，室温下搅拌4h。加入水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色液体3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯酚(化合物I-15B)(640mg,产率86％)。
第二步：3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-15C)
3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carbaldehyde(化合物I-15C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000098
室温下将化合物5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(660mg,3.37mmol)加入到N,N二甲基甲酰胺(6mL)中，加入3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯酚(640mg,3.37mmol)，碳酸钾(930mg,6.72mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌8h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得淡黄色液体3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-15C)(1.0g,产率18％)。
LC-MS,M/Z(ESI):349.2[M+H] +。
第三步：3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-15D)
3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-15D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000099
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲醛(800mg,2.30mmol)加入到叔丁醇(8mL)和水(8mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(322mg,4.60mmol)，亚氯酸钠(414mg,4.60mmol)，磷酸二氢钠(617mg,5.06mmol)，室温搅拌8h。加入水(15mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-15D)(850mg,产率100％)。
LC-MS,M/Z(ESI):365.1[M+H] +。
第四步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-15E)
methyl4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-15E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000100
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(850mg,2.34mmol)加入到N,N二甲基甲酰胺(10mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(418mg,2.34mmol)，O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(1.3g,3.50mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(900mg,7.0mmol)，室温搅拌16h，加入水(40mL)稀释，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得淡黄色液体4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-15E)(1.0g,产率81％)。
LC-MS,M/Z(ESI):526.3[M+H] +。
第五步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-15)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(1,1,1-trifluoropropan-2-yl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-15)
Figure PCTCN2021079073-appb-000101
室温下将原料4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-15E)(1.0g,1.90mmol)加入到四氢呋喃(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(200mg,4.76mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-15)(356mg,产率37％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),7.97(dd,1H),7.73(d,2H),7.43(dd,1H),7.28(d,1H),7.25(t,1H),7.13(d,2H),7.11(d,1H),6.99(t,1H),4.90(t,1H),3.89-3.85(m,1H),3.73(s,3H),1.41(d,3H),1.21(t,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):512.3[M+H] +
实施例16：化合物I-16的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4,5-二氟乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-16)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4,5-difluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-16)
Figure PCTCN2021079073-appb-000102
化合物I-16的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000103
第一步：1-(苄氧基)-2,3-二氟-5-甲氧基苯(化合物I-16B)
1-(benzyloxy)-2,3-difluoro-5-methoxybenzene(化合物I-16B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000104
室温下将化合物1,2,3-三氟-5-甲氧基苯(8.5g,52.4mmol)加入到甲苯(100mL)中，加入苄醇(11.3g,104mmol)，氢氧化钾(5.86g,104mmol)，加热至120℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(500mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝7-8，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V),20:1)得无色液体1-(苄氧基)-2,3-二氟-5-甲氧基苯(化合物I-16B)(5.2g,产率40％)。
第二步：2,3-二氟-5-甲氧基苯酚(化合物I-16C)
2,3-difluoro-5-methoxyphenol(化合物I-16C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000105
室温下将化合物1-(苄氧基)-2,3-二氟-5-甲氧基苯(5.2g,20.8mmol)加入到四氢呋喃(100mL)中，加入10％钯碳(520mg)，通入氢气，室温搅拌16h。过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得无色液体粗品2,3-二氟-5-甲氧基苯酚(化合物I-16C)(3.8g,产率100％)。
第三步：三氟甲磺酸2,3-二氟-5-甲氧基苯酯(化合物I-16D)
2,3-difluoro-5-methoxyphenyl trifluoromethanesulfonate(化合物I-16D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000106
室温下将化合物2,3-二氟-5-甲氧基苯酚(500mg,3.12mmol)加入到二氯甲烷(20mL)中，加入三氟甲磺酸酐(881mg,3.12mmol)，吡啶(493mg,6.25mmol)，室温搅拌4h。加入饱和碳酸氢钠(20mL)，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品三氟甲磺酸2,3-二氟-5-甲氧基苯酯(化合物I-16D)(600mg,产率66％)。
第四步：1,2-二氟-5-甲氧基-3-乙烯基苯(化合物I-16E)
1,2-difluoro-5-methoxy-3-vinylbenzene(化合物I-16E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000107
室温下将化合物三氟甲磺酸2,3-二氟-5-甲氧基苯酯(600mg,2.05mmol)加入到1,4-二氧六环(50mL)中，加入乙烯基三氟硼酸钾(1.25g,9.37mmol)，碳酸钾(1.30g,9.37mmol)，二氯[1,1'-二(二苯基膦)二茂铁]钯(254mg,0.31mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(200mL)稀释，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝100:1)得标题化合物淡黄色液体1,2-二氟-5-甲氧基-3-乙烯基苯(化合物I-16E)(200mg,产率57％)。
第五步：1-乙基-2,3-二氟-5-甲氧基苯(化合物I-16F)
1-ethyl-2,3-difluoro-5-methoxybenzene(化合物I-16F)
Figure PCTCN2021079073-appb-000108
室温下将化合物1,2-二氟-5-甲氧基-3-乙烯基苯(130mg,0.82mmol)加入到甲醇(15mL)中，加入10％钯碳(20mg)，通入氢气，室温搅拌16h。过滤，浓缩，得淡黄色液体1-乙基-2,3-二氟-5-甲氧基苯(化合物I-16F)(100mg,产率76％)。
第六步：3-乙基-4,5-二氟苯酚(化合物I-16G)
3-ethyl-4,5-difluorophenol(化合物I-16G)
Figure PCTCN2021079073-appb-000109
室温下将化合物1-乙基-2,3-二氟-5-甲氧基苯(100mg,0.58mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中，0℃下加入三溴化硼(726mg,2.90mmol)，搅拌3h。加入水(20mL)稀释，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色液体粗品3-乙基-4,5-二氟苯酚(化合物I-16G)(60mg,产率66％)。
第七步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4,5-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-16H)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4,5-difluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-16H)
Figure PCTCN2021079073-appb-000110
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯 (600mg,1.61mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入3-乙基-4,5-二氟苯酚(450mg,3.0mmol)，氢氧化钾(210mg,3.9mmol)，微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4,5-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-16H)(350mg,产率44％)。
LC-MS,M/Z(ESI):494.4[M+H] +。
第八步：(S)-4-(1-3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4,5-二氟乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-16)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4,5-difluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-16)
Figure PCTCN2021079073-appb-000111
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4,5-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(325mg,0.66mmol)加入到四氢呋喃(15mL)，甲醇(3mL)和水(3mL)中，加入氢氧化锂(32mg,1.32mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4,5-二氟乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(170mg,产率54％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.15(d,1H),7.76(d,2H),7.24(t,1H),7.18(d,2H),7.01(t,1H),6.80(d,1H),4.94(t,1H),3.74(s,3H),2.62(q,2H),1.27(d,3H),1.11(t,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):480.4[M+H] +
实施例17：化合物I-17的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-甲基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-17)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-methylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxami do)ethyl)benzoic acid(化合物I-17)
Figure PCTCN2021079073-appb-000112
化合物I-17的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000113
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-溴-4-甲基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17B)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-bromo-4-methylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-17B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000114
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(500mg,1.35mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入3-溴-4-甲基苯酚 (380mg,2.02mmol)，碘化亚铜(100mg,0.52mmol)，1,10-菲罗琳(180mg,1.0mmol)，碳酸铯(1.30g,4.05mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得淡黄色固体(S)-4-(1-(5-(3-溴-4-甲基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17B)(270mg,产率38％)。
LC-MS,M/Z(ESI):522.3[M+H] +。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-甲基-3-乙烯基苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17C)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(4-methyl-3-vinylphenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-17C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000115
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-(3-溴-4-甲基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17B)(260mg,0.50mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)中，加入二氯[1,1'-二(二苯基膦)二茂铁]钯(73mg,0.10mmol)，乙烯基三氟硼酸钾(100mg,0.75mmol)，碳酸钾(140mg,1.0mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-甲基-3-乙烯基苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17C)(160mg,产率68％)。
LC-MS,M/Z(ESI):470.3[M+H] +。
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-甲基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17D)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-methylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)et hyl)benzoate(化合物I-17D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000116
室温下将化合物(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-甲基-3-乙烯基苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(160mg,0.34mmol)加入到甲醇(10mL)中，加入10％钯碳(20mg)，通入氢气，室温搅拌16h。过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-甲基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17D)(150mg,产率93％)。
LC-MS,M/Z(ESI):472.3[M+H] +。
第四步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-甲基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-17)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-methylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-17)
Figure PCTCN2021079073-appb-000117
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-甲基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-17D)(150mg,0.32mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中，加入氢氧化锂(24mg,1.0mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-甲基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(85mg,产率58％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),7.90(d,1H),7.69(d,2H),7.25(t,1H),7.13(d,1H),7.11(d,2H),6.85(d,1H),6.64(dd,1H),4.93(t,1H),3.71(s,3H),2.55(q,2H),2.23(s,3H),1.24(d,3H),1.07(t,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):458.3[M+H] +
实施例18：化合物I-18的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-18)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-ethylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-18)
Figure PCTCN2021079073-appb-000118
化合物I-18的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000119
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-18B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-ethylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-18B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000120
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(371mg,1.0mmol)加入到二甲基亚砜(3mL)中，加入4-乙基苯酚(122mg,1.0mmol)， 氢氧化钾(114mg,2.0mmol)，微波加热至120℃，搅拌20min。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体粗品(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-18B)(175mg,产率38％)。
LC-MS,M/Z(ESI):458.3[M+H] +。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-18)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-ethylphenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-18)
Figure PCTCN2021079073-appb-000121
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-18B)(175mg,0.38mmol)加入到四氢呋喃(2mL)，甲醇(2mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(3mg,0.16mmol)，室温搅拌12h。用1N盐酸调节pH＝4，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-乙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-18)(40mg,产率24％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),7.95(d,1H),7.71(d,2H),7.24(d,2H),7.21(t,1H),7.11(d,2H),6.92(d,2H),4.91(t,1H),3.72(s,3H),2.62(q,2H),1.24(d,3H),1.19(t,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):444.3[M+H] +
实施例19：化合物I-19的制备
(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-19)
(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-19)
Figure PCTCN2021079073-appb-000122
化合物I-19的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000123
第一步：5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-19B)
5-(4-acetylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carbaldehyde(化合物I-19B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000124
室温下将化合物5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(1.0g,5.15mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入4-乙酰基苯酚(1.05g,7.73mmol)，碘化亚铜(918mg,5.15mmol)，1,10-菲罗琳(1.05g,7.73mmol)，碳酸钾(1.42g,10.3mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌2h。 冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得淡黄色液体粗品5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-19B)(270mg,产率18％)。
LC-MS,M/Z(ESI):295.1[M+H] +。
第二步：5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-19C)
5-(4-acetylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-19C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000125
室温下将化合物5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-19B)(400mg,1.36mmol)加入到叔丁醇(9mL)和水(3mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(476mg,6.80mmol)，亚氯酸钠(369mg,4.08mmol)，磷酸二氢钠(408mg,3.40mmol)，室温搅拌14h。加入水(15mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-19C)(350mg,产率100％)。
LC-MS,M/Z(ESI):311.1[M+H] +。
第三步：(S)-4-(1-(5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-19D)
methyl(S)-4-(1-(5-(4-acetylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-19D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000126
室温下将化合物3-(二氟甲基)-5-(3-异丙基苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(350mg,1.13mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(242mg,1.36mmol)，O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(650mg,1.71mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(437mg,3.67mmol)，室温搅拌16h，加入水(40mL)稀释，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色液体(S)-4-(1-(5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-19D)(500mg,产率94％)。
LC-MS,M/Z(ESI):472.2[M+H] +。
第四步：(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-19E)
methyl(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-19E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000127
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-(4-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-19D)(50mg,0.53mmol)加入到双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(5mL)中，加热至50℃，搅拌48h。冷却至室温，将反应液滴加至饱和碳酸氢钠(50mL)溶液中，用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺) 乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-19E)(250mg,产率96％)。
LC-MS,M/Z(ESI):494.5[M+H] +。
第五步：(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-19)
(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-difluoroethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-19)
Figure PCTCN2021079073-appb-000128
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-19E)(250mg,0.51mmol)加入到四氢呋喃(4mL)，甲醇(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(61mg,2.55mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(4-(1,1-二氟乙基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-19)(19mg,产率8％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.11(d,1H),7.71(d,2H),7.60(d,2H),7.25(t,1H),7.12(d,2H),7.08(d,2H),4.90(t,1H),3.73(s,3H),2.01(t,3H),1.23(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):480.5[M+H] +
实施例20：化合物I-20的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3,4,5-三氟苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-20)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3,4,5-trifluorophenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-20)
Figure PCTCN2021079073-appb-000129
化合物I-20的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000130
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3,4,5-三氟苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-20B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3,4,5-trifluorophenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-20B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000131
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(370mg,1.0mmol)加入到N,N二甲基甲酰胺(10mL)中，加入3,4,5-三氟苯酚(222mg,1.5mmol)，氢氧化钾(168mg,3.0mmol)，加热至120℃，搅拌6h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体粗品(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3,4,5-三氟苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-20B)(80mg,产率17％)。
LC-MS,M/Z(ESI):484.1[M+H] +。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3,4,5-三氟苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-20)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3,4,5-trifluorophenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-20)
Figure PCTCN2021079073-appb-000132
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3,4,5-三氟苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(80mg,0.16mmol)加入到四氢呋喃(2mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(17mg,0.40mmol)，加热至50℃，搅拌2h。冷却至室温，用1N盐酸调节pH＝4，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3,4,5-三氟苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-20)(7mg,产率9.0％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.24(d,1H),7.78(d,2H),7.24(d,2H),7.22(t,1H),7.09(d,1H),7.02(d,1H),4.96(t,1H),3.73(s,3H),1.30(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):470.1[M+H] +
实施例21：化合物I-21的制备
(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-21)
(S)-4-(1-(5-(3-acetyl-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-21)
Figure PCTCN2021079073-appb-000133
化合物I-21的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000134
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-21B)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-acetyl-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-21B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000135
室温下将化合物1-(2-氟-5-羟基苯基)乙烷-1-酮(1.58g,10.8mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(2.0g,5.4mmol)，氢氧化钾(450mg,8.1mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(30mL)，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-21B)(346mg,产率13％)。
LC-MS,M/Z(ESI):490.2[M+H]+
第二步：(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-21)
(S)-4-(1-(5-(3-acetyl-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-21)
Figure PCTCN2021079073-appb-000136
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-21B)(65mg,0.13mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(5mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(20mg,0.47mmol)，室温下搅拌5h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-21)(30mg,产率66％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.18(d,1H),7.72(d,2H),7.38-7.32(m,2H),7.29-7.24(m,1H),7.26(t,1H),7.16(d,2H),4.91(t,1H),3.73(s,3H),2.54(d,3H),1.24(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):476.1[M+H] +
实施例22：化合物I-22的制备
4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-22)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-hydroxyethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-22)
Figure PCTCN2021079073-appb-000137
化合物I-22的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000138
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-22B)
methyl(S)-4-(1-(5-(3-acetylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-22B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000139
室温下将化合物1-(3-羟基苯基)乙烷-1-酮(275mg,2.02mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(500mg,1.35mmol)，碘化亚铜(100mg,0.52mmol)，1,10-菲罗琳(180mg,1.0mmol)，碳酸铯(1.30g,4.05mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(30mL)，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-22B)(300mg,产率47％)。
LC-MS,M/Z(ESI):472.3[M+H]+
第二步：(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-22C)
(S)-4-(1-(5-(3-acetylphenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-22C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000140
室温下将原料(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-22B)(290mg,0.62mmol)加入四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中，加入氢氧化锂(45mg,1.87mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-22C)(180mg,产率64％)。
LC-MS,M/Z(ESI):458.3[M+H] +。
第三步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-22)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-(1-hydroxyethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-22)
Figure PCTCN2021079073-appb-000141
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-22C)(170mg,0.37mmol)加入到甲醇(15mL)和水(15mL)中，加入硼氢化钠(15mg,0.39mmol)，室温搅拌2h。用1N盐酸调节pH＝4，浓缩，经酸性制备方法A得白色固体4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-22)(168mg,产率98％)。
LC-MS,M/Z(ESI):460.3[M+H] +。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),7.92(d,1H),7.73(d,2H),7.36(t,1H),7.26(t,1H),7.18(d,1H),7.13(d,2H),7.11(t,1H),6.83(dd,1H),5.26(d,1H),4.92(t,1H),4.71(s,1H),3.72(s,3H),1.28(dd,3H),1.22(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):478.1[M+H] +
实施例23：化合物I-23的制备
4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-23)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-fluoro-3-(1-hydroxyethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-23)
Figure PCTCN2021079073-appb-000142
化合物I-23的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000143
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-23B)
methyl (S)-4-(1-(5-(3-acetyl-4-fluorophenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-23B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000144
室温下将化合物1-(2-氟-5-羟基苯基)乙烷-1-酮(1.58g,10.8mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(2.0g,5.4mmol)，氢氧化钾(450mg,8.1mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(30mL)，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-23B)(346mg,产率13％)。
LC-MS,M/Z(ESI):490.2[M+H] +
第二步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-23C)
methyl4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-fluoro-3-(1-hydroxyethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-23C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000145
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-(3-乙酰基-4-氟苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-23B)(100mg,0.20mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，冷却至0℃，加入硼氢化钠(23mg,0.60mmol)，室温搅拌3h。加入水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(80mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得白色固体粗品4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(1-羟基 乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-23C)(75mg,产率75％)。
LC-MS,M/Z(ESI):492.1[M+H] +。
第三步：4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-23)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-fluoro-3-(1-hydroxyethyl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-23)
Figure PCTCN2021079073-appb-000146
室温下将原料4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-23C)(75mg,0.15mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(5mL)和水(1mL)中，加入一水合氢氧化锂(20mg,0.47mmol)，室温下搅拌5h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体4-((1S)-1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(1-羟基乙基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-23)(48mg,产率66％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.02(d,1H),7.74(d,2H),7.25(t,1H),7.21-7.10(m,4H),6.90-6.81(m,1H),4.96-4.86(m,2H),3.72(s,3H),3.67(s,1H),1.28(d,3H),1.24(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):478.1[M+H] +
实施例24：化合物I-24的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-24)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-fluoro-3-(2-hydroxypropan-2-yl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-24)
Figure PCTCN2021079073-appb-000147
化合物I-24的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000148
第一步：4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯酚(化合物I-24B)
4-fluoro-3-(2-hydroxypropan-2-yl)phenol(化合物I-24B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000149
室温下将化合物2-氟-5-羟基苯甲酸甲酯(340mg,2.0mmol)加入到1mol/L甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(5mL)中，搅拌16h。加入饱和氯化铵溶液(10mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯酚(化合物I-24B)(340mg,产率100％)。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-24C)
methyl (S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-fluoro-3-(2-hydroxypropan-2-yl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-24C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000150
室温下将化合物4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯酚(化合物I-24B)(340mg,2.0mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(9mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(495mg,1.34mmol)，碘化亚铜(100mg,0.52mmol)，1,10-菲罗琳(180mg,1.0mmol)，碳酸铯(1.30g,4.05mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(30mL)，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-24C)(120mg,产率32％)。
LC-MS,M/Z(ESI):506.3[M+1] +。
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-24)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(4-fluoro-3-(2-hydroxypropan-2-yl)phenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-24)
Figure PCTCN2021079073-appb-000151
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-24C)(120mg,0.24mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，和水(1mL)中，加入氢氧化锂(20mg,0.47mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(4-氟-3-(2-羟基丙烷-2-基)苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-24)(22mg,产率19％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),7.96(d,1H),7.73(d,2H),7.33(t,1H),7.26(t,1H),7.17(d,2H),7.14(t,1H),6.85(t,1H),4.92(t,1H),3.73(s,3H),3.72(s,1H),1.44(s,6H),1.25(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):492.3[M+1] +
实施例25：化合物I-25的制备
(S)-4-(1-(5-(3-(氰甲基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-25)
(S)-4-(1-(5-(3-(cyanomethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-25)
Figure PCTCN2021079073-appb-000152
化合物I-25的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000153
第一步：(S)-4-(1-(5-(3-(氰甲基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-25)
(S)-4-(1-(5-(3-(cyanomethyl)phenoxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-25)
Figure PCTCN2021079073-appb-000154
室温下将化合物2-(3-羟基苯基)乙腈(72mg,0.40mmol)加入到N,N二甲基甲酰胺(2mL)中， 加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(100mg,0.27mmol)，氢氧化钾(30mg,0.53mmol)，氮气保护下微波加热至170℃，搅拌5min。冷却至室温，加入水(5mL)，搅拌0.5h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-(3-(氰甲基)苯氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(10mg,产率8％)。
1H NMR(400mHz,CDCl3)δ12.7(s,1H),7.93(d,2H),7.38(t,1H),7.25(t,1H),7.19(d,1H),7.16(d,2H),6.94(s,1H),6.82(t,1H),6.35(d,1H),5.18(t,1H),3.73(s,2H),3.70(s,3H),1.41(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):455.5[M+H] +
实施例26：化合物I-26的制备
(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-26)
(S)-4-(1-(5-([1,1'-biphenyl]-4-yloxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-26)
Figure PCTCN2021079073-appb-000155
化合物I-26的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000156
第一步：(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基) 苯甲酸甲酯(化合物I-26B)
methyl(S)-4-(1-(5-([1,1'-biphenyl]-4-yloxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-26B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000157
室温下将化合物[1,1'-二苯基]-4-酚(458mg,2.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(500mg,1.35mmol)，氢氧化钾(227mg,4.05mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(30mL)，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体粗品(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-26B)(500mg,产率73％)。
LC-MS,M/Z(ESI):506.4[M+H]+
第二步：(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-26)
(S)-4-(1-(5-([1,1'-biphenyl]-4-yloxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-26)
Figure PCTCN2021079073-appb-000158
室温下将原料(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-26B)(450mg,0.89mmol)加入到四氢呋喃(10mL)，甲醇(5mL)和水 (4mL)中，加入氢氧化锂(108mg,4.5mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-26)(70mg,产率16％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.08(d,1H),7.71(d,2H),7.69(d,2H),7.63(d,2H),7.48(t,2H),7.38(t,1H),7.26(t,1H),7.15(d,2H),7.12(d,2H),4.92(t,1H),3.76(s,3H),1.25(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):492.4[M+H] +
实施例27：化合物I-27的制备
(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-3-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-27)
(S)-4-(1-(5-([1,1'-biphenyl]-3-yloxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-27)
Figure PCTCN2021079073-appb-000159
化合物I-27的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000160
第一步：(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-3-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-27B)
methyl(S)-4-(1-(5-([1,1'-biphenyl]-3-yloxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)eth yl)benzoate(化合物I-27B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000161
室温下将化合物[1,1'-二苯基]-3-醇(458mg,2.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(500mg,1.35mmol)，氢氧化钾(227mg,4.05mmol)，氮气保护下微波加热至120℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(30mL)，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体粗品(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-3-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-27B)(450mg,产率66％)。
LC-MS,M/Z(ESI):506.4[M+H] +
第二步：(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-3-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-27)
(S)-4-(1-(5-([1,1'-biphenyl]-3-yloxy)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-27)
Figure PCTCN2021079073-appb-000162
室温下将原料(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-4-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-27B)(400mg,0.79mmol)加入到四氢呋喃(10mL)，甲醇(5mL)和水(5mL)中，加入氢氧化锂(96mg,4.0mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(5-([1,1'-二苯基]-3-基氧基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-27)(115mg,产率30％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.07(d,1H),7.68(d,2H),7.62(d,2H),7.50-7.44(m,4H),7.41(d,1H),7.31(s,1H),7.25-6.96(m,4H),4.89(t,1H),3.77(s,3H),1.19(d, 3H).
LC-MS,M/Z(ESI):492.4[M+H] +
实施例28：化合物I-28的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-28)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(pentafluoro-λ 6-sulfanyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-28)
Figure PCTCN2021079073-appb-000163
化合物I-28的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000164
第一步：3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-28B)
3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(pentafluoro-λ 6-sulfanyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carbaldehyde(化合物I-28B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000165
室温下将化合物5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(500mg,2.57mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入3-(五氟-λ 6-硫基)苯酚(386mg,2.80mmol)，氢氧化钾(216mg,3.85mmol)，加热至150℃，搅拌4h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色液体粗品3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-28B)(750mg,产率98％)。
LC-MS,M/Z(ESI):379.1[M+H] +。
第二步：3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-28C)
3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(pentafluoro-λ 6-sulfanyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-28C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000166
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲醛(化合物I-28B)(750mg,2.55mmol)加入到叔丁醇(6mL)和水(7mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(355mg,5.07mmol)，亚氯酸钠(456mg,5.07mmol)，磷酸二氢钠(669mg,5.57mmol)，室温搅拌14h。加入水(15mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得淡黄色固体粗品3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-28C)(800mg,产率100％)。
LC-MS,M/Z(ESI):395.1[M+H] +。
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-28D)
methyl (S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(pentafluoro-λ 6-sulfanyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-28D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000167
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-28C)(800mg,2.58mmol)加入到二氯甲烷(20mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(459mg,2.56mmol)，O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(1.40g,3.68mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(991mg,7.68mmol)，室温搅拌16h，加入二氯甲烷(40mL)稀释，用水(20mL×3)洗涤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得淡黄色液体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-28D)(720mg,产率59％)。
LC-MS,M/Z(ESI):556.1[M+H] +。
第四步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-28)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(pentafluoro-λ 6-sulfanyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-28)
Figure PCTCN2021079073-appb-000168
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-28D)(440mg,0.93mmol)加入到甲醇(10mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钠(93mg,2.32mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(五氟-λ 6-硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-28)(93mg,产率22％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),8.18(d,1H),7.74(d,2H),7.73(d,1H),7.71(d, 1H),7.65(t,1H),7.26(d,1H),7.23(t,1H),7.21(d,2H),4.89(t,1H),3.78(s,3H),1.11(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):542.1[M+H] +
实施例29：化合物I-29的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-((三氟甲基)硫)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-29)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-((trifluoromethyl)thio)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-29)
Figure PCTCN2021079073-appb-000169
化合物I-29的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000170
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-((三氟甲基)硫)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-29B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-((trifluoromethyl)thio)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-29B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000171
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(186mg,0.50mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入3-((三氟甲基)硫)苯酚(120mg,0.60mmol)，氢氧化钾(45mg,0.80mmol)，加热至120℃，搅拌12h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-((三氟甲基)硫)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-29B)(20mg,产率7.5％)。
LC-MS,M/Z(ESI):530.2[M+H] +。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-((三氟甲基)硫)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-29)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-((trifluoromethyl)thio)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-29)
Figure PCTCN2021079073-appb-000172
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-((三氟甲基)硫)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-29B)(20mg,0.04mmol)加入到四氢呋喃(2mL)，甲醇(2mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(3mg,0.16mmol)，加热至50℃，搅拌4h。冷却至室温，用1N盐酸调节pH＝4，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-((三氟甲基)硫)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-29)(14mg,产率72％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d 6)δ12.8(s,1H),8.16(d,1H),7.74(d,2H),7.57(t,2H),7.39(s,1H),7.22-6.69(m,4H),4.91-4.84(m,1H),3.74(s,3H),1.21(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):516.2[M+H] +
实施例30：化合物I-30的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-30)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(methylthio)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-30)
Figure PCTCN2021079073-appb-000173
化合物I-30的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000174
第一步：3-(甲硫基)苯酚(化合物I-30B)
3-(methylthio)phenol(化合物I-30B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000175
室温下将化合物(3-甲氧基苯基)(甲基)硫醚(4.0g,26mmol)加入到30％氢溴酸醋酸溶液(12mL)和48％氢溴酸水溶液(3mL)中，N 2保护下加热回流，搅拌6h。冷却至室温，加入水(100mL)稀释，用***(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品3-(甲硫基)苯酚(化合物I-30B)(3.8g,产率100％)。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-30C)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(methylthio)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-30C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000176
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(700mg,1.89mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入3-(甲硫基)苯酚(528mg,3.77mmol)，氢氧化钾(318mg,5.67mmol)，微波加热至150℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体粗品(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-30C)(800mg,产率89％)。
LC-MS,M/Z(ESI):476.5[M+H] +。
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-30)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(methylthio)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-30)
Figure PCTCN2021079073-appb-000177
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-30C)(800mg,1.68mmol)加入到四氢呋喃(10mL)，甲醇(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(121mg,5.0mmol)，加热至50℃，搅拌4h。冷却至室温，用1N盐酸调节pH＝4，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-30)(165mg,产率21％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.03(d,1H),7.74(d,2H),7.34(t,2H),7.14(d,2H),7.11(t,1H),6.97(t,1H),6.70(d,1H),4.91(t,1H),3.73(s,3H),2.45(s,3H),1.24(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):462.5[M+H] +
实施例31：化合物I-31的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲磺酰基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-31)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(methylsulfonyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-31)
Figure PCTCN2021079073-appb-000178
化合物I-31的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000179
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-30)(80mg,0.17mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(83mg,0.48mmol)，室温搅拌3h。将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲磺酰基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-31)(64mg,产率75％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.21(d,1H),7.77(d,2H),7.75(d,1H),7.70(t,1H),7.59(t,1H),7.37(d,1H),7.25(t,1H),7.15(d,2H),4.87(t,1H),3.77(s,3H),3.19(s,3H),1.19(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):494.1[M+H] +
实施例32：化合物I-32的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲亚磺酰基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-32)
4-((1S)-1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(methylsulfinyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-32)
Figure PCTCN2021079073-appb-000180
化合物I-32的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000181
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲硫基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-30)(60mg,0.13mmol)加入到四氢呋喃(5mL)中，加入30％双氧水(1mL)，加热至60℃，搅拌7h。冷却至室温，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(甲亚磺酰基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-32)(35mg,产率75％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.15(d,1H),7.73(d,2H),7.61(d,1H),7.50(t,1H),7.36(s,1H),7.25(t,1H),7.15(d,1H),7.13(d,2H),4.87(t,1H),3.75(s,3H),2.69(s,3H),1.20(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):478.2[M+H] +
实施例33：化合物I-33的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-33)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(2,2,2-trifluoroethoxy)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-33)
Figure PCTCN2021079073-appb-000182
化合物I-33的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000183
第一步：1-(苄氧基)-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯(化合物I-33B)
1-(benzyloxy)-3-(2,2,2-trifluoroethoxy)benzene(化合物I-33B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000184
室温下将化合物3-(苄氧基)苯酚(600mg,3.0mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入2,2,2-三氟乙烷-1-磺酸三氟酯(840mg,3.6mmol)，碳酸钾(1.24g,9.0mmol)，加热至60℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得无色液体1-(苄氧基)-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯(化合物I-33B)(380mg,产率45％)。
第二步：3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯酚(化合物I-33C)
3-(2,2,2-trifluoroethoxy)phenol(化合物I-33C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000185
室温下将化合物1-(苄氧基)-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯(化合物I-33B)(520mg,1.84mmol)加入到乙醇(10mL)中，加入10％钯碳(50mg)，加入一滴甲酸，通入氢气，搅拌12h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得标题化合物白色固体3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯酚(化合物I-33C)(210mg,产率59％)。
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-33D)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(2,2,2-trifluoroethoxy)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-33D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000186
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(371mg,1.0mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯酚(化合物I-33C)(210mg,1.1mmol)，碘化亚铜(191mg,1.0mmol)，碳酸铯(1.0g,3.1mmol)，1,10-菲罗琳(72mg,0.40mmol)，微波加热至120℃，搅拌2h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-33D)(120mg,产率8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):528.2[M+H] +。
第四步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-33)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(2,2,2-trifluoroethoxy)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-33)
Figure PCTCN2021079073-appb-000187
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-33D)(120mg,0.23mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(5mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(20mg,0.83mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-33)(45mg,产率72％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.02(d,1H),7.74(d,2H),7.38(t,1H),7.16(t,1H),7.14(d,2H),6.93(d,1H),6.76(t,1H),6.65(d,1H),4.92(t,1H),4.78(dd,2H),3.72(s,3H),1.25(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):514.2[M+H] +
实施例34：化合物I-34的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合 物I-34)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(2,4-difluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-34)
Figure PCTCN2021079073-appb-000188
化合物I-34的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000189
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-34B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(2,4-difluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-34B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000190
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(370mg,1.0mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入2,4-二氟苯酚(195mg,1.5mmol)，氢氧化钾(168mg,3.0mmol)，加热至120℃，搅拌6h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体粗品(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-34B)(160mg,产率34％)。
LC-MS,M/Z(ESI):466.1[M+H] +。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-34)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(2,4-difluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-34)
Figure PCTCN2021079073-appb-000191
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-34B)(160mg,0.34mmol)加入到四氢呋喃(4mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(32mg,0.76mmol)，加热至50℃，搅拌2h。冷却至室温，用1N盐酸调节pH＝4，将反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(2,4-二氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-34)(11mg,产率7.0％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),8.28(d,1H),7.78(d,2H),7.45(t,1H),7.21(d,2H),7.17(t,1H),7.04(d,1H),7.02(d,1H),4.88(t,1H),3.76(s,3H),1.26(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):452.1[M+H] +
实施例35：化合物I-35的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)硫)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-35)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((3-(trifluoromethyl)phenyl)thio)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-35)
Figure PCTCN2021079073-appb-000192
化合物I-35的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000193
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)硫)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-35B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((3-(trifluoromethyl)phenyl)thio)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-35B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000194
室温下将化合物3-(三氟甲基)苯硫酚(215mg,1.20mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入氢化钠(80mg,2.00mmol)，搅拌0.5h。加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(375mg,1.00mmol)，加热至120℃，搅拌8h。冷却至室温，加入水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)硫)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-35B)(350mg,产率67％)。
LC-MS,M/Z(ESI):514.2(M+1)。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)硫)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-35)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((3-(trifluoromethyl)phenyl)thio)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-35)
Figure PCTCN2021079073-appb-000195
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)硫)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-35B)(220mg,0.43mmol)加入到四氢呋喃(5mL)中，加入水(5mL)和甲醇(5mL)，氢氧化锂(30mg,1.25mmol)，加热至50℃，搅拌18h。反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)硫)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-35)(105mg,产率49％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.68(d,1H),7.79(d,2H),7.63(d,1H),7.58(t,2H),7.39(d,2H),7.27(t,1H),7.14(t,1H),5.10-5.03(m,1H),3.89(s,3H),1.38(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):500.2(M+1)
实施例36：化合物I-36的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-36)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(4-(trifluoromethyl)benzyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-36)
Figure PCTCN2021079073-appb-000196
化合物I-36的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000197
第一步：(4-(三氟甲基)苄基)溴化锌(化合物I-36B)
(4-(trifluoromethyl)benzyl)zinc(II)bromide(化合物I-36B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000198
室温下将锌粉(2.60g,40.0mmol)加入无水四氢呋喃(15mL)中，氮气保护下加热1,2-二溴乙烷(0.02mL)，加热至60℃，加入三甲基氯硅烷(0.02mL)，继续搅拌15min，冷却至0℃，滴加化合物4-(三氟甲基)苄基溴(4.80g,20.0mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液，滴加完毕加热至60℃，搅拌1h。冷却至室温，得(4-(三氟甲基)苄基)溴化锌的四氢呋喃溶液1mol/L(20mL)(化合物I-36B)。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-36C)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(4-(trifluoromethyl)benzyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-36C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000199
室温下将化合物(4-(三氟甲基)苄基)溴化锌的四氢呋喃溶液(化合物I-36B)(2.70mL,2.70mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(500mg,1.35mmol)，4,4′-二叔丁基-2,2′-联吡啶(35mg,0.13mmol)，氯化镍乙二醇二甲醚络合物(30mg,0.13mmol)，氮气保护下微波加热至100℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-36C)(180mg,产率27％)。
LC-MS,M/Z(ESI):496.3[M+1]+。
第三步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-36)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(4-(trifluoromethyl)benzyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-36)
Figure PCTCN2021079073-appb-000200
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-36C)(150mg,0.30mmol)加入到48％的溴化氢醋酸溶液中(3mL)中，加热至65℃，搅拌16h。冷却至室温，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-36)(90mg,产率62％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.47(d,1H),7.86(d,2H),7.62(d,2H),7.41(d,2H),7.33(d,2H),7.23(t,1H),5.12(t,1H),4.37(dd,2H),3.77(s,3H),1.41(s,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):482.3[M+1] +
实施例37：化合物I-37的制备
(S)-5-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)噻吩-2-甲酸(化合物I-37)
(S)-5-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)thiophene-2-carboxylic acid(化合物I-37)
Figure PCTCN2021079073-appb-000201
化合物I-37的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000202
第一步：(R,E)-N-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-37B)
(R,E)-N-(1-(5-bromothiophen-2-yl)ethylidene)-2-methylpropane-2-sulfinamide(化合物I-37B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000203
室温下将化合物1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-酮(2.05g,10.0mmol)加入到二氯甲烷(50mL)中，加入(R)-叔丁基亚磺酰(1.8g,15.0mmol)，钛酸四乙酯(5.70g,25.0mmol)，加热至50℃，搅拌20h。加入水(80mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得白色固体(R,E)-N-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-37B)(500mg,产率16％)。
第二步：(R)-N-((S)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-37C)
(R)-N-((S)-1-(5-bromothiophen-2-yl)ethyl)-2-methylpropane-2-sulfinamide(化合物I-37C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000204
室温下将化合物(R,E)-N-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-37B)(500mg,1.62mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，冷却至-78℃，加入1mol/L三仲丁基硼氢化锂四氢呋喃溶液(2.4mL,2.4mmol)，自然升至室温，搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得白色固体(R)-N-((S)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-37C)(320mg,产率64％)。
LC-MS,M/Z(ESI):310.2[M+H] +。
第三步：(S)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-氨基盐酸盐(化合物I-37D)
(S)-1-(5-bromothiophen-2-yl)ethan-1-amine hydrochloride(化合物I-37D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000205
室温下将原料(R)-N-((S)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-37C)(310mg,1.0mmol)加入到甲醇(10mL)中，加入4mol/L的盐酸二氧六环溶液(0.5mL,2.0mmol)，室温下搅拌16h。反应液浓缩，加入***(10mL)，过滤得白色固体(S)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷 -1-氨基盐酸盐(60097D)(190mg,产率78％)。
第四步：(S)-N-(1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物I-37E)
(S)-N-(1-(5-bromothiophen-2-yl)ethyl)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamide(化合物I-37E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000206
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(140mg,0.41mmol)加入到二氯甲烷(5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入(S)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-氨基盐酸盐(化合物I-37D)(118mg,0.49mmol)，加入O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(239mg,0.63mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(135mg,1.05mmol)，室温搅拌16h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得白色固体粗品(S)-N-(1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物I-37E)(170mg,产率78％)。
LC-MS,M/Z(ESI):524.2[M+H] +。
第五步：(S)-5-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-37F)
methyl(S)-5-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)thiophene-2-carboxylate(化合物I-37F)
Figure PCTCN2021079073-appb-000207
室温下将化合物(S)-N-(1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(化合物I-37E)(170mg,0.32mmol)加入到甲醇(5mL)中，加入三乙胺(320mg,3.20mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(53mg,0.06mmol)，通入一氧化碳，加热至120℃，搅拌48h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(S)-5-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-37F)(140mg,产率86％)。
LC-MS,M/Z(ESI):504.5[M+H] +。
第六步：(S)-5-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)噻吩-2-甲酸(化合物I-37)
(S)-5-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)thiophene-2-carboxylic acid(化合物I-37)
Figure PCTCN2021079073-appb-000208
室温下将原料(S)-5-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-37F)(140mg,0.28mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中，加入氢氧化锂(20mg,0.47mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-5-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)噻吩-2-甲酸(化合物I-37)(110mg,产率81％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),8.32(d,1H),7.62(t,1H),7.54(t,1H),7.42(d,2H),7.28(t,1H),7.23(t,1H),6.75(d,1H),5.51-5.04(m,1H),3.76(s,3H),1.27(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):490.5[M+H] +
实施例38：化合物I-38的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)-2,6-二氟苯甲酸(化合物I-38)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)-2,6-difluorobenzoic acid(化合物I-38)
Figure PCTCN2021079073-appb-000209
化合物I-38的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000210
第一步：(S)-(1-(3,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物I-38B)
tert-butyl(S)-(1-(3,5-difluorophenyl)ethyl)carbamate(化合物I-38B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000211
室温下将化合物(S)-1-(3,5-二氟苯基)乙烷-1-氨基盐酸盐(2.0g,10.3mmol)加入到二氯甲烷(50mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(4.5g,20.7mmol)，三乙胺(3.1g,31.0mmol)，室温搅拌16h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得白色固体(S)-(1-(3,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物I-38B)(2.2g,产率72％)。
第二步：(S)-4-(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙基)-2,6-二氟苯甲酸(化合物I-38C)
(S)-4-(1-((tert-butoxycarbonyl)amino)ethyl)-2,6-difluorobenzoic acid(化合物I-38C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000212
室温下将化合物(S)-(1-(3,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,2.50mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，冷却至-78℃，加入2.5mol/L丁基锂THF溶液(2.0mL,5.0mmol)，搅拌2h。低温下通入二氧化碳，自然升至室温，搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝2，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体粗品(S)-4-(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙基)-2,6-二氟苯甲酸(化合物I-38C)(550mg,产率90％)。
第三步：(S)-4-(1-氨基乙基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(化合物I-38D)
methyl(S)-4-(1-aminoethyl)-2,6-difluorobenzoate(化合物I-38D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000213
室温下将原料(S)-4-(1-(叔丁氧羰基)氨基)乙基)-2,6-二氟苯甲酸(化合物I-38C)(500mg,2.0mmol)加入到甲醇(100mL)中，加入浓硫酸(20mL)，加热至80℃，搅拌6h。加入水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得白色固体粗品(S)-4-(1-氨基乙基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(化合物I-38D)(1.2g,产率100％)。
第四步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(化合物I-38E)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)-2,6-difluorobenzoate(化合物I-38E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000214
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(100mg,0.30mmol)加入到二氯甲烷(8mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(化合物I-38D)(78mg,0.36mmol)，加入O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(171mg,0.45mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(58mg,0.45mmol)，室温搅拌16h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(化合物I-38E)(82mg,产率52％)。
LC-MS,M/Z(ESI):534.3[M+H] +。
第五步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)-2,6-二氟苯甲酸(化合物I-38)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)-2,6-difluorobenzoic acid(化合物I-38)
Figure PCTCN2021079073-appb-000215
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)-2,6-二氟苯甲酸甲酯(82mg,0.15mmol)加入到四氢呋喃(2mL)和水(4mL)中，加入氢氧化锂(18.9mg,0.45mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)-2,6-二氟苯甲酸(化合物I-38)(16mg,产率20％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.12(d,1H),7.61(t,1H),7.56(t,1H),7.45(s,1H),7.27(t,1H),7.25(t,1H),6.62(d,2H),4.76(t,1H),3.76(s,3H),1.13(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):520.3[M+H] +
实施例39：化合物I-39的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺基)乙基)-2-甲基苯甲酸(化合物I-39)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)-2-methylbenzoic acid(化合物I-39)
Figure PCTCN2021079073-appb-000216
化合物I-39的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000217
第一步：4-甲酰基-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39B)的合成
methyl 4-formyl-2-methylbenzoate(化合物I-39B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000218
将4-溴-3-甲基苯甲醛(化合物I-39A)(10.0g，50.2mmol)和三乙胺(15.3g，151mmol)加入到甲醇(200mL)中室温条件下加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(2.94g，4.02mmol)。然后用一氧化碳置换3次，然后在50Psi压力下65℃反应15h。冷却至室温，用硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤3次，把滤液浓缩得到粗品，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝100:1-5:1)得化合物4-甲酰基-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39B)(8.0g，产率89％)。
第二步：(S,E)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39C)的合成
methyl(S,E)-4-(((tert-butylsulfinyl)imino)methyl)-2-methylbenzoate(化合物I-39C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000219
将4-甲酰基-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39B)(8.0g,44.9mmol)和R-(+)-叔丁基亚磺酰胺(6.53g,53.9mmol)和碳酸铯(17.6g,53.9mmol)加入到二氯甲烷(200mL)中，反应液在50℃下反应15h。反应液中加水(200mL)和二氯甲烷(200mL)，水相用二氯甲烷(200mL×3)萃取。合并萃取液用饱和食盐水(100mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，旋干得粗品，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝100:1-1:1)得化合物(S,E)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39C)(10.0g，产率79％)。
第三步：4-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39D)的合成
methyl 4-((S)-1-(((S)-tert-butylsulfinyl)amino)ethyl)-2-methylbenzoate(化合物I-39D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000220
将(S,E)-4-(((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)甲基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39C)(1.0g，3.55mmol)加入到四氢呋喃(20mL)，反应液降温至-10℃，再缓慢滴加甲基氯化镁(7.1mL，21.3mmol,3mol/L),反应液在室温下反应15h。反应液中加水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，水相 用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并萃取液用饱和食盐水(100mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，旋干得粗品，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝20:1-1:1)得化合物4-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39D)(0.7g，产率66％)。
第四步：(S)-4-(1-氨基乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39E)的合成
methyl(S)-4-(1-aminoethyl)-2-methylbenzoate(化合物I-39E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000221
将4-((S)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39D)(0.7g，2.35mmol)加入到乙酸乙酯(10mL)中，室温下加入乙酸乙酯/氯化氢溶液(10mL)，反应液在室温下反应2h，反应液旋干得(S)-4-(1-氨基乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39E)(0.4g，产率88％)。
第五步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺基)乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39F)的合成
methyl methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)-2-methylbenzoate(化合物I-39F)
Figure PCTCN2021079073-appb-000222
将(S)-4-(1-氨基乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39E)(0.1g，0.52mmol)，O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(0.24g，0.62mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.20g，1.55mmol)，3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸(0.20g，0.62mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，室温下反应12h。反应液中加水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，乙酸乙酯(100mL×4)萃取。合并萃取液用饱和食盐水(50mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，旋干得粗品，粗品用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝20:1-1:1)得(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺基)乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物 I-39F)(0.15g，产率59％)。
第六步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺基)乙基)-2-甲基苯甲酸(化合物I-39)的合成
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-5-(3-ethyl-4-fluorophenoxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)-2-methylbenzoic acid(化合物I-39)
Figure PCTCN2021079073-appb-000223
将(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺基)乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物I-39F)(0.15g，0.31mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(5mL)和水(1mL)中，室温下加入氢氧化锂(0.03g，1.23mmol)，反应液在室温下反应2h。将反应液旋干，粗品中中加入水(50mL)和乙酸乙酯(100mL)，然后用1N盐酸调节pH为7，再用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(50mL)洗涤有机相，硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。将粗品通过硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)，得到白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺基)乙基)-2-甲基苯甲酸(化合物I-39)(83mg，产率57％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.94(d,J＝7.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(dd,J＝7.6,6.4Hz,2H),6.99–6.94(m,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,1H),6.80–6.75(m,1H),4.84–4.79(m,1H),3.69(s,3H),2.36(s,3H),2.53(dd,J＝14.8,7.4Hz,2H)1.19(d,J＝7.0Hz,3H),1.06(t,J＝7.6Hz,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):476.3[M+H] +。
实施例40：化合物I-40的制备
4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)环丁基)苯甲酸(化合物I-40)
4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)cyclobutyl)benzoic acid(化合物I-40)
Figure PCTCN2021079073-appb-000224
化合物I-40的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000225
第一步：N-环丁烯-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-40B)
N-cyclobutylidene-2-methylpropane-2-sulfinamide(化合物I-40B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000226
室温下将化合物环丁酮(5.0g,71.4mmol)加入到二氯甲烷(100mL)中，加入叔丁基亚磺酰胺(10.3g,85.6mmol)，钛酸四乙酯(32.6g,143mmol)，加热至40℃，搅拌24h。冷却至室温，加入水(150mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得淡黄色液体N-环丁烯-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-40B)(6.5g,产率53％)。
第二步：N-(1-(4-溴苯基)环丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-40C)
N-(1-(4-bromophenyl)cyclobutyl)-2-methylpropane-2-sulfinamide(化合物I-40C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000227
室温下将化合物1,4-二溴苯(14.0g,59.8mmol)加入到四氢呋喃(150mL)中，冷却至-78℃，加入2.5mol/L丁基锂四氢呋喃溶液(24.0mL,60.0mmol)，搅拌40min，氮气保护下滴加N-环丁烯-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-40B)(7.0g,40.4mmol)的四氢呋喃(150mL)溶液，自然升至室温，搅拌2.5h。加入饱和氯化铵水溶液(200mL)稀释，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得黄色固体N-(1-(4-溴苯基)环丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-40C)(1.8g,产率64％)。
LC-MS,M/Z(ESI):330.0[M+H] +。
第三步：4-(1-((叔丁基亚磺酰)氨基)环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40D)
methyl 4-(1-((tert-butylsulfinyl)amino)cyclobutyl)benzoate(化合物I-40D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000228
室温下将原料N-(1-(4-溴苯基)环丁基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(化合物I-40C)(1.80g,5.47mmol)加入到甲醇(30mL)中，加入三乙胺(2.76g,27.4mmol)，1,1'-双二苯基膦基二茂铁二氯化钯(450mg，0.55mmol)，通入一氧化碳，加热至85℃，搅拌24h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(二氯甲烷:甲醇(V/V)＝10:1)得黄色液体4-(1-((叔丁基亚磺酰)氨基)环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40D)(1.30g,产率77％)。
第四步：4-(1-氨基环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40E)
methyl 4-(1-aminocyclobutyl)benzoate(化合物I-40E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000229
室温下将化合物4-(1-((叔丁基亚磺酰)氨基)环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40D)(600mg,1.94mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中，加入4mol/L的盐酸二氧六环溶液(2.0mL,8.0mmol)，室温下搅拌4h，加入饱和碳酸氢钠溶液(30mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得无色液体粗品4-(1-氨基环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40E)(350mg,产率88％)。
LC-MS,M/Z(ESI):206.5[M+H] +。
第五步：4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40F)
methyl4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)cyclobutyl)benzoate(化合物I-40F)
Figure PCTCN2021079073-appb-000230
室温下将化合物3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酸(100mg,0.30mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入4-(1-氨基环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40E)(74mg,0.36mmol)，加入O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(125mg,0.33mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(85mg,0.66mmol)，室温搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得白色固体4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40F)(60mg,产率39％)。
LC-MS,M/Z(ESI):524.5[M+H] +。
第六步：4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)环丁基)苯甲酸(化合物I-40)
4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-(3-(trifluoromethyl)phenoxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)cyclobutyl)benzoic acid(化合物I-40)
Figure PCTCN2021079073-appb-000231
室温下将原料4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)环丁基)苯甲酸甲酯(化合物I-40F)(60mg,0.12mmol)加入到四氢呋喃(1mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(20mg,0.47mmol)，室温下搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝2，反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)环丁基)苯甲酸(化合物I-40)(16mg,产率27％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.7(s,1H),8.52(s,1H),7.74(d,2H),7.68(d,1H),7.62(d,1H),7.50(s,1H),7.34(t,1H),7.25(d,2H),7.18(t,1H),3.78(s,3H),2.33-2.28(m,2H),2.16-2.13(m,2H),1.70-1.65(m,1H),1.59-1.54(m,1H).
LC-MS,M/Z(ESI):510.5[M+H] +
实施例41：化合物I-41的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((5-甲基噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-41)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((5-methylthiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-41)
Figure PCTCN2021079073-appb-000232
化合物I-41的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000233
第一步：3-((3-(二氟甲基)-4-甲醛基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-41B)
methyl3-((3-(difluoromethyl)-4-formyl-1-methyl-1H-pyrazol-5-yl)oxy)-5-methylthiophene-2-carboxylate(化合物I-41B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000234
室温下将化合物5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(120mg,0.62mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入3-羟基-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(143mg,0.74mmol)，碳酸铯(403mg,1.24mmol)，碘化亚铜(24.0mg,0.12mmol)，1,10-菲罗啉(45.0mg,0.25mmol)，微波加热至130℃，搅拌1h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸 乙酯(V/V)＝3:1)得无色液体3-((3-(二氟甲基)-4-甲醛基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-41B)(32.0mg,产率16％)。
LC-MS,M/Z(ESI):331.4(M+1)。
第二步：3-(二氟甲基)-5-((2-(甲氧羰基)-5-甲基噻吩-3-基)氧)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-41C)
3-(difluoromethyl)-5-((2-(methoxycarbonyl)-5-methylthiophen-3-yl)oxy)-1-methyl-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-41C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000235
室温下将化合物3-((3-(二氟甲基)-4-甲醛基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-41B)(30.0mg,0.09mmol)加入到叔丁醇(6mL)和水(3mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(18.9mg,0.27mmol)，亚氯酸钠(24.0mg,0.27mmol)，磷酸二氢钠(27.0mg,2.34mmol)，室温搅拌16h。加入水(5mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制备得白色固体3-(二氟甲基)-5-((2-(甲氧羰基)-5-甲基噻吩-3-基)氧)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-41C)(32.0mg,产率100％)。
LC-MS,M/Z(ESI):347.4(M+1)。
第三步：(S)-3-((3-(二氟甲基)-4-((1-(4-(甲氧羰基)苯基)乙基)甲酰胺)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-41D)
methyl(S)-3-((3-(difluoromethyl)-4-((1-(4-(methoxycarbonyl)phenyl)ethyl)carbamoyl)-1-methyl-1H-pyrazol-5-yl)oxy)-5-methylthiophene-2-carboxylate(化合物I-41D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000236
室温下将化合物3-(二氟甲基)-5-(3-乙基-4-氟苯氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(24.0mg,0.07mmol)加入到二氯甲烷(5mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(15.0mg,0.08mmol)， O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(40.0mg,0.10mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(14.0mg,0.10mmol)，室温搅拌16h，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得无色液体(S)-3-((3-(二氟甲基)-4-((1-(4-(甲氧羰基)苯基)乙基)甲酰胺)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(化合物I-41D)(25.0mg,产率71.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):508.6(M+1)。
第四步：(S)-3-((4-((1-(4-羧基苯基)乙基)甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸(化合物I-41E)
(S)-3-((4-((1-(4-carboxyphenyl)ethyl)carbamoyl)-3-(difluoromethyl)-1-methyl-1H-pyrazol-5-yl)oxy)-5-methylthiophene-2-carboxylic acid(化合物I-41E)
Figure PCTCN2021079073-appb-000237
室温下将原料(S)-3-((3-(二氟甲基)-4-((1-(4-(甲氧羰基)苯基)乙基)甲酰胺)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(38.0mg,0.08mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(3mL)中，加入氢氧化锂(10.0mg,0.22mmol)，室温下搅拌3h。用1N盐酸调节pH＝6，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得粗品白色固体(S)-3-((4-((1-(4-羧基苯基)乙基)甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸(化合物I-41E)(33.0mg,产率92％)。
LC-MS,M/Z(ESI):480.3(M+1)
第五步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((5-甲基噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-41)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((5-methylthiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-41)
Figure PCTCN2021079073-appb-000238
室温下将原料(S)-3-((4-((1-(4-羧基苯基)乙基)甲酰胺)-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氧)-5-甲基噻吩-2-甲酸(30.0mg,0.06mmol)加入到N-甲基吡咯烷酮(6mL)中，加入乙酸银(10.2mg,0.06mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌0.5h。将反应液过滤，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((5-甲基噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-41)(6.7mg,产率25％)。
1H NMR(400m Hz,CDCl 3)δ12.8(s,1H),7.99(d,2H),7.20(t,1H),7.20(d,2H),6.51(s,1H),6.39(d,1H),6.20(s,1H),5.22(t,1H),3.75(s,3H),2.45(s,3H),1.43(d,3H)。
LC-MS,M/Z(ESI):436.1(M+1)
实施例42：化合物I-42的制备
(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-42)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((5-(trifluoromethyl)thiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-42)
Figure PCTCN2021079073-appb-000239
化合物I-42的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000240
第一步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-42B)
methyl(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((5-(trifluoromethyl)thiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-car boxamido)ethyl)benzoate(化合物I-42B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000241
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(中间体A)(1.0g,2.69mmol)加入到二甲亚砜(5mL)中，加入5-(三氟甲基)噻吩-3-醇(908mg,5.40mmol)，碳酸钾(1.13g,8.18mmol)，碘化亚铜(206mg,1.08mmol)，1,10-菲罗啉(388mg,2.16mmol)，微波加热至120℃，搅拌4h。冷却至室温，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:3)得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-42B)(980mg,产率72％)。
LC-MS,M/Z(ESI):504.2(M+1)。
第二步：(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-42)
(S)-4-(1-(3-(difluoromethyl)-1-methyl-5-((5-(trifluoromethyl)thiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-42)
Figure PCTCN2021079073-appb-000242
室温下将原料(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-42B)(980mg,1.89mmol)加入到四氢呋喃(5mL)中，加入水(3mL)，氢氧化锂(238mg,5.67mmol)，室温搅拌3h。反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得白色固体(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-甲基-5-((3-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-42)(345mg,产率36％)。
1H NMR(400m Hz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.20(d,1H),7.79(d,2H),7.67(s,1H),7.25(d, 2H),7.23(d,1H),7.09(t,1H),4.99-4.92(m,1H),3.77(s,3H),1.29(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):490.2(M+1)
实施例43：化合物I-43的制备
(S)-4-(1-(1-甲基-3-(三氟甲基)-5-((5-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-43)
(S)-4-(1-(1-methyl-3-(trifluoromethyl)-5-((5-(trifluoromethyl)thiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-43)
Figure PCTCN2021079073-appb-000243
化合物I-43的合成路线如下所示：
Figure PCTCN2021079073-appb-000244
第一步：5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-43B)
5-chloro-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxylic acid(化合物I-43B)
Figure PCTCN2021079073-appb-000245
室温下将化合物5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲醛(700mg,3.30mmol)加入到叔丁醇 (20mL)和水(5mL)中，加入2-甲基-2-丁烯(1.80g,25.7mmol)，亚氯酸钠(1.48g,16.4mmol)，磷酸二氢钠(3.10g,25.8mmol)，室温搅拌14h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得标题化合物无色液体粗残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色固体5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-43B)(680mg,产率90％)。
LC-MS,M/Z(ESI):229.6(M+1)。
第二步：(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-43C)
methyl(S)-4-(1-(5-chloro-1-methyl-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-43C)
Figure PCTCN2021079073-appb-000246
室温下将化合物5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸(化合物I-43B)(680mg,2.98mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(537mg,3.00mmol)，O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸盐(1.70g,4.47mmol)，N,N-二异丙基乙基胺(1.90g,14.7mmol)，室温搅拌16h，加入水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得无色固体(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-43C)(700mg,产率60％)。
LC-MS,M/Z(ESI):390.5(M+1)。
第三步：(S)-4-(1-(1-甲基-3-(三氟甲基)-5-((5-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-43D)
methyl(S)-4-(1-(1-methyl-3-(trifluoromethyl)-5-((5-(trifluoromethyl)thiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoate(化合物I-43D)
Figure PCTCN2021079073-appb-000247
室温下将化合物(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(500mg,1.3mmol)加入到二甲亚砜(10mL)中，加入5-(三氟甲基)噻吩-3-醇(216mg,1.3mmol)，碳酸钾(360mg,2.6mmol)，碘化亚铜(100mg,0.5mmol)，1,10-菲罗啉(100mg,0.5mmol)，微波加热至95℃，搅拌5h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得黄色固体(S)-4-(1-(1-甲基-3-(三氟甲基)-5-((5-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-43D)(200mg,产率30％)。
LC-MS,M/Z(ESI):522.1(M+1)。
第四步：(S)-4-(1-(1-甲基-3-(三氟甲基)-5-((5-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-43)
(S)-4-(1-(1-methyl-3-(trifluoromethyl)-5-((5-(trifluoromethyl)thiophen-3-yl)oxy)-1H-pyrazole-4-carboxamido)ethyl)benzoic acid(化合物I-43)
Figure PCTCN2021079073-appb-000248
室温下将原料(S)-4-(1-(1-甲基-3-(三氟甲基)-5-((5-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(化合物I-43D)(100mg,0.19mmol)加入到四氢呋喃(30mL)中，加入水(10mL)，氢氧化锂(24mg,0.57mmol)，加热至50℃，搅拌2h。反应液浓缩，经酸性制备方法A制备得黄色固体(S)-4-(1-(1-甲基-3-(三氟甲基)-5-((5-(三氟甲基)噻吩-3-基)氧)-1H-吡唑-4-甲酰胺)乙基)苯甲酸(化合物I-43)(54mg,产率56％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.8(s,1H),8.64(d,1H),7.80(d,2H),7.68(s,1H),7.31(d,1H),7.24(d,2H),4.92(t,1H),3.80(s,3H),1.26(d,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):508.1(M+1)
生物学活性及相关性质测试例
测试例1：EP4拮抗作用测定实验
分别测试对照化合物、实施例1-43所制备的化合物对EP4的拮抗作用，测定在高表达人源EP4受体的CHO稳转细胞株中进行。
细胞经胰蛋白酶消化后，重悬于缓冲液中(1×HBSS,0.1％BSA,20mM HEPES和500μM IBMX)，每孔接种8000个细胞于384孔板，接种体积15μL。用实验缓冲液制备8X浓度的化合物的工作液，随后分别加入2.5μL 8X化合物的工作液至上述384孔板中，于37℃孵育30min。用实验缓冲液制备8X浓度的激动剂PGE 2工作液(4nM)，每孔加入2.5μL至上述384孔板中(PGE 2终浓度为0.5nM)，于37℃孵育30min。反应完成后，根据cAMP测试试剂盒(Perkin Elmer,Cat#TRF0263)说明书中的方法对细胞中的cAMP的含量进行定量。计算测试化合物的拮抗作用(IC 50值)。
表1 测试化合物对EP4的拮抗作用
测试化合物 IC 50(nM)
对照化合物 44
化合物I-1 3.7
化合物I-2 1.9
化合物I-3 2.8
化合物I-5 2.2
化合物I-6 8.2
化合物I-9 29
化合物I-28 5.7
化合物I-29 14
化合物I-30 12
化合物I-35 6.6
化合物I-42 8.6
实验结果表明，本发明化合物对EP4具有良好的拮抗作用，与对照化合物相比，大多数化合物的拮抗作用为对照化合物的5倍以上，发明化合物显示出更优异的EP4受体的拮抗作用。
测试例2：对EP4受体钙流抑制效果测定
分别测试对照化合物、实施例1-43所制备的化合物对EP4钙流的抑制效果，测定在过表达人EP4受体的293细胞中进行。
在37℃水浴中迅速解冻细胞，离心、重悬、计数。将细胞悬浮液以20μL/孔接种于2块384孔板(20,000个细胞/孔)，置于37℃，5％CO 2培养箱中过夜。准备2X Fluo-4  Direct TM(Invitrogen,Cat#F10471)上样缓冲液：向1mL FLIPR缓冲液中加入77mg丙磺舒，浓度为250mM。每管Fluo-4Direct TM crystals(F10471)加入10mL FLIPR缓冲液，和0.2mL，250mM的丙磺舒。
从培养箱中取出一块细胞板并去除培养基，加入20μL分析缓冲液和2X Fluo-4 Direct TM免洗上样缓冲液至384孔细胞培养板，最终体积为40μL。在37℃，5％CO 2培养箱中孵育50分钟，室温孵育10分钟，放入FLIPR。将10μL缓冲液转移至细胞板，读取荧光信号。将激动剂PGE 2在DMSO溶剂中配制成10mM的储备液，使用缓冲液梯度稀释10个浓度点的6X工作液。将10μL激动剂PGE 2转移至细胞板，读取荧光信号，计算EC 80值。
准备6X EC 80浓度的激动剂PGE 2，并将待测化合物在DMSO溶剂中配制成10mM的储备液，使用缓冲液梯度稀释10个浓度点6X化合物工作液。
另取一块细胞板去除培养基，加入20μL分析缓冲液和2X Fluo-4 Direct TM免洗上样缓冲液。在37℃，5％CO 2培养箱中孵育50分钟，室温孵育10分钟，放入FLIPR。将10μL化合物工作液、DMSO、EP4完全拮抗剂转移至细胞板，读取荧光信号。将10μL 6X EC 80浓度的激动剂PGE 2转移至细胞板，读取荧光信号，计算抑制率：
抑制率(％)＝100-(测试组-EP4完全拮抗剂组)/(DMSO组-EP4完全拮抗剂组)*100
根据化合物不同浓度的抑制率，计算化合物对EP4钙流抑制的IC 50值。
表2 测试化合物对EP4钙流抑制作用
测试化合物 IC 50(nM)
对照化合物 21
化合物I-1 15
化合物I-2 7.4
化合物I-3 3
化合物I-4 4.0
化合物I-5 12
化合物I-6 8.0
化合物I-8 16.5
化合物I-10 14
化合物I-11 8.0
化合物I-12 19
化合物I-13 10
化合物I-15 18
化合物I-17 18
化合物I-26 8.5
化合物I-28 8
化合物I-30 15
化合物I-33 12
化合物I-35 6
化合物I-41 16
化合物I-42 15
实验结果表明，本发明化合物对EP4钙流显示较好抑制作用，且优于对照化合物，特别是化合物I-4，与对照化合物相比其EP4钙流抑制作用提高了5倍以上；本发明化合物显示出更优异的EP4钙流抑制作用。
测试例3：放射性配体EP4受体结合测定
使用重组人EP4受体膜蛋白(从过表达人EP4受体的293细胞制备)测试对照化合物、实施例1-43所制备的化合物与放射性配体EP4的结合作用。将待测化合物和PGE 2在DMSO溶剂中配制成10mM的储备液，然后使用缓冲液(50mM HBSS,0.1％BSA,500mM NaCl)梯度稀释8个浓度点的4×工作液。将1μL化合物工作液、DMSO、PGE 2工作液分别加到测定板中，加入100μL的EP4受体膜蛋白(20μg/孔)和100μL放射性配体[ 3H]-PGE 2(PerkinElmer,Cat:NET428250UC,Lot:2469552)(终浓度1.5nM)，密封室温下孵育1小时。在室温下，用0.5％BSA，50μL/每孔浸泡Unifilter-96 GF/C滤板(Perkin Elmer)至少30min。结合完成后，使用Perkin Elmer Filtermate Harvester通过GF/C板过滤反应混合物，然后清洗滤板，在50℃下将滤板干燥1小时。干燥后，使用Perkin Elmer Unifilter-96密封胶带密封滤板孔的底部，加入50μL的MicroScint TM-20 cocktail(Perkin Elmer)，密封滤板顶部。使用Perkin Elmer MicroBeta2 Reader读取过滤器上捕获的 3H计数。
使用GraphPad Prism 5分析数据，按以下公式计算抑制率：
抑制率(％)＝100-(测试组-PGE 2组)/(DMSO组-PGE 2组)*100
根据化合物不同浓度的抑制率，计算化合物通过放射性配体EP4结合测定的IC 50和Ki值。
表3 测试化合物通过放射性配体EP4结合测定的IC 50和Ki值
测试化合物 IC 50(nM) Ki(nM)
对照化合物 30 16
化合物I-1 16 8.9
化合物I-2 5.5 3.0
化合物I-3 9.0 4.9
化合物I-4 7.4 4.0
化合物I-5 5.3 2.9
化合物I-6 11 5.8
化合物I-10 4.0 2.2
化合物I-11 6.8 3.7
化合物I-15 12 6.6
化合物I-23 13 7.0
化合物I-30 12 6.6
化合物I-33 31 17
化合物I-35 28 15
化合物I-42 13 7.3
实验结果表明，与对照化合物相比，本发明化合物与EP4受体具有更好的亲和力，且优于对照化合物，特别是化合物I-2和I-5，与对照化合物相比其与EP4受体的亲和力提高了5倍以上；本发明化合物显示出更优异的EP4受体的亲和作用。
测试例4：药代动力学试验
在本实验中，分别在小鼠、大鼠和犬个体上测试对照化合物、实施例1-43所制备的化合物的药代动力学参数。
小鼠药代动力学试验，使用雄性ICR小鼠，20-25g，禁食过夜。取3只小鼠，口服灌胃给药5mg/kg。在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血；取另外3只小鼠，静脉注射给药1mg/kg，在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品6800g，2-8℃离心6分钟，收集血浆，于-80℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行LC-MS/MS分析。主要药代动力学参数用WinNonlin7.0软件非房室模型分析。
大鼠药代动力学试验，使用雄性SD大鼠，180-240g，禁食过夜。取3只大鼠，口服灌胃给药5mg/kg。取另外3只大鼠，静脉注射给药1mg/kg。其余操作同小鼠药代动力学试验。
犬药代动力学试验，使用雄性Beagle犬，8-10kg，禁食过夜。取3只Beagle犬，口服灌胃给药3mg/kg。取另外3只Beagle犬，静脉注射给药1mg/kg。其余操作同小鼠药代动力学试验。
表4-1 小鼠静脉注射给药药代动力学试验结果
Figure PCTCN2021079073-appb-000249
Figure PCTCN2021079073-appb-000250
表4-2 小鼠口服灌胃给药药代动力学试验结果
Figure PCTCN2021079073-appb-000251
表5-1 大鼠静脉注射给药药代动力学试验结果
Figure PCTCN2021079073-appb-000252
表5-2 大鼠口服灌胃给药药代动力学试验结果
Figure PCTCN2021079073-appb-000253
表6-1 犬静脉注射给药药代动力学试验结果
Figure PCTCN2021079073-appb-000254
表6-2 犬口服灌胃给药药代动力学试验结果
Figure PCTCN2021079073-appb-000255
Figure PCTCN2021079073-appb-000256
实验结果表明，与对照化合物相比，本发明化合物的静脉给药清除率更低，口服给药暴露量更高，特别是化合物I-5，大鼠和犬口服给药后暴露量约为对照化合物的2倍，本发明化合物表现出更为优良的药代动力学性质，成药性好。
测试例5：测试化合物联合放射疗法在CT-26鼠源结肠癌肿瘤模型中的抗肿瘤作用
在本实验中，在CT-26鼠源结肠癌肿瘤模型中测试对照化合物、实施例1-43所制备的化合物联合放射疗法的抗肿瘤作用。
小鼠适应性饲养一周后，将处于对数期的CT-26细胞重悬于PBS，按100μL/只将5 x 10 5CT-26细胞接种于右侧后部处皮下，定期观察肿瘤生长情况，待肿瘤生长至平均体积60-80mm 3时，根据肿瘤体积大小采用随机分组法将荷瘤小鼠分为5组，每组10只。试验分为对照化合物(150mg/kg)、化合物I-2(150mg/kg)、化合物I-5(150mg/kg)分别联合放疗组(3Gry)联合给药组，放疗组(3Gry)单独治疗组及溶媒对照组，口服灌胃给药，每天一次，共给药23天；放射治疗为给药第一天一次性使用。每周测量2次肿瘤体积和小鼠体重，实验结束时称取瘤重。根据相对肿瘤抑制率(TGI)进行疗效评价，根据动物体重变化和死亡情况进行安全性评价。肿瘤体积和相对肿瘤抑制率计算公式如下：
肿瘤体积(tumor volume，TV)＝1/2×a×b 2，其中a、b分别为肿瘤测量的长和宽。
相对肿瘤抑制率TGI(％)＝(TWc-TWt/TWc)×100％，其中TWc为溶媒对照组平均瘤重，TWt为治疗组平均瘤重。
实验结果如图1所示，表明，对照化合物、测试化合物I-2、I-5分别联合放射治疗在开始给药后第23天时表现出显著的抑瘤作用，相对肿瘤抑制率TGI(％)分别为54％，63％和79％，相对溶媒对照组统计学上均有显著性差异(p均值小于0.05)，化合物I-5联合放射治疗组相对放疗单独治疗组统计学上有显著性差异(p小于0.05)，且优于对照化合物联合放射治疗组。放射治疗联合给药组均无动物死亡，没有表现明显的药物毒性，治疗期间耐受良好。

Claims (21)

  1. 一种化合物，其为式V所示化合物或式V所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
    Figure PCTCN2021079073-appb-100001
    其中，
    环A选自
    Figure PCTCN2021079073-appb-100002
    环B选自
    Figure PCTCN2021079073-appb-100003
    R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
    R 2选自C 2-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、苯基、三氟甲基、被卤素取代的C 2-C 6烷基、被卤素取代的C 3-C 6环烷基、被羟基取代的C 2-C 6烷基、被氰基取代的C 2-C 6烷基、-SF 5、-X-R 2a；其中X选自氧、硫、-CO-、-SO 2-、-SO-；R 2a选自C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷基；
    R 3选自氢、卤素、C 1-C 2烷基、被氟取代的C 1-C 2烷基、苯基；
    R 4选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、被卤素取代的C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷氧基；
    R 5选自氢、卤素；
    R 6a和R 6b之一是氢，且另一个是甲基；或R 6a和R 6b一起形成环丁基环；
    R 7选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
    M选自氧、硫、亚甲基；
    条件是，当R 2为三氟甲基、M为氧、R 6a和R 6b之一是氢，且另一个是甲基时，环A 选自
    Figure PCTCN2021079073-appb-100004
    当R 2为三氟甲基、M为氧、环A为
    Figure PCTCN2021079073-appb-100005
    时，R 6a和R 6b一起形成环丁基环。
  2. 如权利要求1所述的化合物，其为式III所示化合物或式III所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
    Figure PCTCN2021079073-appb-100006
    其中，
    R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
    R 7选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
    M选自氧、硫、亚甲基。
  3. 如权利要求1所述的化合物，其为式II所示化合物或式II所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
    Figure PCTCN2021079073-appb-100007
    其中，
    R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；较佳地，R 1为-CHF 2；
    R 2选自乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、氟代乙基、氟代丙基、氟代异丙基、氟代丁基、氟代异丁基、羟基乙基、羟基异丙基、氰甲基、氰乙基、苯基、-SF 5、-X-R 2a；其中X选自氧、硫、-CO-；R 2a选自甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基；
    R 3选自氢、氟、氯、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基、苯基；
    R 4选自氢、氟、氯、甲基、乙基、氟代甲基、氟代乙基；
    R 5选自氢、氟、氯；
    M选自氧、硫、亚甲基。
  4. 一种化合物，其为式I所示化合物或式I所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、盐或前药：
    Figure PCTCN2021079073-appb-100008
    其中，
    R 1选自-CH 3、-CHF 2和-CF 3；
    R 2选自C 2-C 6烷基、C 3-C 6环烷基、被卤素取代的C 2-C 6烷基、被卤素取代的C 3-C 6环烷基；
    R 3选自氢、卤素、C 1-C 2烷基、被氟取代的C 1-C 2烷基；
    R 4选自氢、卤素、C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、被卤素取代的C 1-C 6烷基、被卤素取代的C 1-C 6烷氧基。
  5. 根据权利要求4所述的化合物，其中，
    R 2选自C 2-C 3烷基、C 3-C 6环烷基、被氟取代的C 2-C 3烷基、被氟取代的C 3-C 6环烷基，优选地，R 2选自-CH 2CH 3、-CH(CH 3) 2、环丙基、-CF 2CH 3和-CH 2CF 3；
    R 3选自氢、氟和氯；
    R 4选自氢、氟、氯、C 1-C 4烷基、C 1-C 4烷氧基、被氟或者氯取代的C 1-C 4烷基、被氟或者氯取代的C 1-C 4烷氧基；优选地，R 4选自氢、氟、氯。
  6. 一种化合物，其为下列所示化合物或下列所示化合物的互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学可接受的盐或前药：
    Figure PCTCN2021079073-appb-100009
    Figure PCTCN2021079073-appb-100010
    Figure PCTCN2021079073-appb-100011
  7. 一种药物组合物，其特征在于包含药学上可接受的赋形剂以及权利要求1～6所述任意化合物。
  8. 权利要求1～6任一项所述的化合物或者权利要求7的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者预防EP4相关疾病。
  9. 权利要求1～6任一项所述的化合物或者权利要求7的药物组合物在制备药物中的用途， 所述药物用于治疗或者预防选自下列的至少之一：炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿***疾病。
  10. 权利要求9所述的用途，其中所述炎性疾病选自关节炎、类风湿关节炎。
  11. 权利要求9所述的用途，其中所述疼痛选自骨关节炎疼痛、子宫内膜异位导致的疼痛。
  12. 权利要求9所述的用途，其中所述药物与放射疗法和/或抗体疗法联合施用，其中所述抗体疗法选自CTLA4抗体疗法、PDL1抗体疗法和PD1抗体疗法之一或其组合。
  13. 权利要求9所述的用途，其中所述癌症选自实体癌，优选地，选自乳腺癌、***、结直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、皮肤癌和尿道癌。
  14. 权利要求9所述的用途，其中所述代谢疾病为糖尿病，所述泌尿***疾病选自膀胱过动症。
  15. 一种治疗或预防EP4相关疾病的方法，其特征在于，给患者给予权利要求1～6任一项所述的化合物或者权利要求7的药物组合物。
  16. 一种治疗疾病的方法，其特征在于，给患者给予权利要求1～6任一项所述的化合物或者权利要求7的药物组合物，所述疾病选自炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿***疾病。
  17. 如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述炎性疾病选自关节炎、类风湿关节炎。
  18. 如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述疼痛选自骨关节炎疼痛、子宫内膜异位导致的疼痛。
  19. 如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述癌症选自实体癌，优选地，选自乳腺癌、***、结直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、***癌、皮肤癌和尿道癌。
  20. 如权利要求16所述的方法，其特征在于，将所述化合物或药物组合物与放射疗法和/或抗体疗法联合施用，其中所述抗体疗法选自CTLA4抗体疗法、PDL1抗体疗法和PD1抗体疗法之一或其组合。
  21. 如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述代谢疾病为糖尿病，所述泌尿***疾病选自膀胱过动症。
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