WO2020156242A1 - Shp2抑制剂及其应用 - Google Patents

Shp2抑制剂及其应用 Download PDF

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WO2020156242A1
WO2020156242A1 PCT/CN2020/072773 CN2020072773W WO2020156242A1 WO 2020156242 A1 WO2020156242 A1 WO 2020156242A1 CN 2020072773 W CN2020072773 W CN 2020072773W WO 2020156242 A1 WO2020156242 A1 WO 2020156242A1
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piperidine
thio
methylpyrimidin
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PCT/CN2020/072773
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吴颢
吴文茂
陈忠研
李玲
朱林强
张展
吴云飞
林远望
冯东杰
赵新涛
余军
束庆玉
程见洪
韩晗
郭晶
兰宏
王家炳
丁列明
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贝达药业股份有限公司
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    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
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    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring

Definitions

  • the present invention relates to a series of compounds as inhibitors of Src homology region 2 (Src homology region 2-containing protein tyrosine phosphatase 2, SHP2), and preparation methods and pharmaceutical compositions thereof.
  • the present invention also relates to the use of the above-mentioned compound or its pharmaceutical composition in the treatment of SHP2-mediated diseases.
  • Src homology region 2 protein tyrosine phosphatase 2 is a non-receptor protein tyrosine phosphatase encoded by the PTPN11 gene, and PTPN11 is the first The discovered proto-oncogene encoding tyrosine kinase (Chan R J et al.PTPN11 is the first identified proto-oncogene that encodes a tyrosine phosphatase.Blood, 2007,109:862-867), and the encoded SHP2 protein contains N-terminal SHP2 domain (N-SHP2), C-terminal SHP2 domain (C-SHP2), protein phosphatase catalytic domain (PTP), two C-terminal tyrosine residues (Y542 and Y580) and one rich Proline (Pro) motif.
  • SOS as a guanine nucleotide exchange factor (GEF)
  • GEF guanine nucleotide exchange factor
  • Ras-GTP further connects with downstream signaling systems to activate Ser/Thr kinase Raf1, etc., and then activate ERK under the action of the regulatory kinase MEK. After activation of ERK, it directly acts on target molecules in the cytoplasm or transfers to the nucleus to regulate genes Transcription to make cells proliferate or differentiate. This process may also be affected by SHP2 binding protein and substrate (SHP substrate-1, SHPS-1), Ras-GTPase activating protein (Ras-GAP) and other members of Src.
  • SHP2 binding protein and substrate SHP substrate-1, SHPS-1
  • Ras-GTPase activating protein Ras-GTPase activating protein
  • SHP2 protein not only regulates the Ras/ERK signaling pathway, it is also reported to regulate multiple signaling pathways such as JAK-STAT3, NF- ⁇ B, PI3K/Akt, RHO, and NFAT, thereby regulating cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis Features.
  • SHP2 has been proved to be related to many diseases, Tartaglia et al. (Tartaglia M et al. Mutations in PTPN11, encoding the protein tyrosine phosphatase SHP-2, cause Noonan syndrome. Nat Genet, 2001, 29:465-468) found that about 50% Patients with Noonan syndrome have missense mutations of PTPN11. In addition, studies have found that PTPN11 mutation is an important cause of JMML and a variety of leukemias (Tartaglia M et al. Nat Genet, 2003, 34: 148-150; Loh ML et al. Blood, 2004, 103: 2325-2331; Tartaglia M et al.
  • SHP2 inhibitors have received more and more attention as potential treatments.
  • Novartis's TNO155 entered phase I clinical trials for the treatment of solid tumors in 2017.
  • JAB-3068 designed and developed by Jacos entered a phase I clinical trial for the treatment of solid tumors in April 2018.
  • the RMC-4630 developed by Revolution conducted its first human clinical trial in August 2018. At present, there is no marketed product for this target at home and abroad. Therefore, the development of small molecule drugs that can target and inhibit the activity of SHP2 and provide patients with safer and more effective SHP2 inhibitors have important research significance.
  • the present invention relates to a compound used as an inhibitor of protein tyrosine phosphatase 2 (SHP2) containing Src homology region 2.
  • SHP2 protein tyrosine phosphatase 2
  • the compound of the present invention has a general structure as shown in Formula I or a pharmaceutically acceptable salt, tautomer, solvate, chelate, non-covalent complex or prodrug thereof,
  • R 1 is selected from hydrogen, hydroxy, C 1-8 alkyl, C 1-8 alkyl-containing substituent group, C 1-8 alkoxy, C 1-8 alkoxy group-containing substituent group, C 2-8 Alkenyl, substituted C 2-8 alkenyl, C 2-8 alkynyl or substituted C 2-8 alkynyl;
  • R 2 is selected from hydrogen, C 1-4 alkyl group or a substituted group containing C 1-4 alkyl;
  • R 3 is selected from hydrogen, amino, -C (O) NH 2, -C ⁇ N, hydroxy, C 1-8 alkyl, C 1-8 alkyl-containing substituent group, C 1-8 alkoxy or an C 1-8 alkoxy of the substituent;
  • R 4 is selected from hydrogen, halo, amino, amido, -C ⁇ N, carboxyl, hydroxyl, hydroxymethyl, C 1-8 alkyl, C 1-8 alkyl-containing substituent group, C 1-8 alkoxy group, a substituted group containing C 1-8 alkoxy, C 2-8 alkenyl group, a substituted group containing C 2-8 alkenyl, C 2-8 alkynyl group or a substituted group containing C 2-8 alkynyl;
  • a 1 is arbitrarily selected from CR 5 or N;
  • a 2 is arbitrarily selected from CR 6 or N;
  • a 3 is arbitrarily selected from CR 7 or N;
  • U is arbitrarily selected from C(R 8 ) 2 , O or NR 9 ;
  • R 5 , R 6 , R 7 , R 8 or R 9 are independently selected from hydrogen, halogen, amino, C 1-8 alkyl, substituted C 1-8 alkyl, C 1-8 alkoxy group, a substituted group containing C 1-8 alkoxy, C 2-8 alkenyl group, a substituted group containing C 2-8 alkenyl, C 2-8 alkynyl group or a substituted group containing C 2-8 alkynyl;
  • Ring A is optionally selected from a C 6-10 aryl group or a C 5-10 heteroaryl group, the C 5-10 heteroaryl group contains one or two N or S heteroatoms;
  • Rx is optionally selected from hydrogen, halogen, amino, substituted amino, sulfonyl, C 1-8 alkyl, substituted C 1-8 alkyl, C 1-8 alkoxy, substituted C 1-8 alkoxy, C 3-8 cycloalkyl or substituted C 3-8 cycloalkyl;
  • n 0, 1, 2, 3, or 4.
  • a 3 in formula I is N.
  • a 3 in formula I is N.
  • SHP2 inhibitory activity can be maintained, but hERG can be significantly improved.
  • R 1 in Formula I is selected from C 1-3 alkyl.
  • R 1 in Formula I is methyl
  • R 2 in Formula I is selected from hydrogen or C 1-3 alkyl.
  • R 2 in Formula I is hydrogen
  • R 3 in Formula I is selected from hydrogen, amino, or C 1-3 alkyl.
  • R 3 in Formula I is hydrogen or amino
  • R 4 of Formula I is selected from hydrogen, halo, amino, C 1-3 alkyl group or an unsubstituted C 1-3 alkyl.
  • R 4 in Formula I is hydrogen, fluorine or chlorine.
  • R 4 in Formula I is hydrogen or chlorine.
  • a 1 in formula I is selected from CR 5 or N, wherein R 5 is selected from halogen or halogen-substituted C 1-3 alkyl.
  • a 1 in formula I is selected from CR 5 or N, wherein R 5 is selected from F, Cl or trifluoromethyl.
  • a 1 in formula I is selected from CR 5 or N, wherein R 5 is selected from Cl or trifluoromethyl.
  • a 2 in formula I is selected from CR 6 or N, wherein R 6 is selected from amino or C 1-3 alkoxy.
  • a 2 in formula I is selected from CR 6 or N, wherein R 6 is selected from amino or methoxy.
  • a 3 in Formula I is selected from CH or N.
  • U in Formula I is selected from CH 2 or O.
  • ring A in formula I is selected from phenyl or C 5-6 heteroaryl, and the C 5-10 heteroaryl contains one or two N or S heteroatoms.
  • ring A in formula I is selected from phenyl
  • the formula I Arbitrarily selected from
  • the formula I Arbitrarily selected from
  • the present invention further provides some preferred technical solutions of the compound represented by formula I.
  • the compound of the present invention has the general structure shown in Formula II or a pharmaceutically acceptable salt, tautomer, solvate, chelate, non-covalent complex or prodrug thereof,
  • R 1 is selected from C 1-8 alkyl
  • R 2 is selected from hydrogen
  • R 3 is selected from H or amino
  • R 4 is selected from hydrogen and halogen
  • a 1 is selected from CR 5 ;
  • a 2 is selected from CR 6 ;
  • U is selected from C(R 8 ) 2 ;
  • R 5, R 6, R 8 are independently selected from hydrogen, halo, C 1-8 alkyl, substituted group containing C 1-8 alkyl;
  • Ring A is optionally selected from C 6-10 aryl groups.
  • the substituent-containing C 1-8 alkyl group may be a halogenated C 1-8 alkyl group, such as trifluoromethyl.
  • ring A in formula II is optionally substituted with hydrogen or C 1-8 alkoxy.
  • ring A in formula II is optionally substituted with hydrogen or methoxy.
  • R 1 in Formula II is methyl
  • R 4 in Formula II is hydrogen
  • U in Formula II is selected from CH 2 .
  • R 5 in Formula II is selected from Cl.
  • R 6 in Formula II is selected from NH 2 .
  • ring A in formula II is selected from phenyl.
  • the present invention further provides a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is selected from:
  • the present invention further provides a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is selected from:
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition characterized by comprising a therapeutically effective amount of at least one compound represented by formula I or formula II and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • the present invention further provides a pharmaceutical composition, characterized in that the mass percentage of the compound represented by structural formula I and pharmaceutically acceptable excipients is 0.0001:1-10.
  • the invention provides the application of the compound or pharmaceutical composition represented by structural formula I in the preparation of medicines.
  • the application is an application for preparing a medicine for treating, preventing, delaying or preventing cancer, cancer metastasis, cardiovascular disease, immune disease, fibrosis or eye disease.
  • the application is an application for preparing a medicine for treating diseases mediated by SHP2.
  • the disease is cancer.
  • the cancer is selected from Noonan syndrome, leopard spot syndrome, juvenile myelomonocytic leukemia, neuroblastoma, melanoma, head and neck squamous cell carcinoma, acute myeloid leukemia, breast cancer, esophageal tumor , Lung cancer, colon cancer, head cancer, gastric cancer, lymphoma, glioblastoma, gastric cancer, pancreatic cancer or a combination thereof.
  • the application is an application for preparing an SHP2 inhibitor.
  • the present invention also provides a method for treating and/or preventing diseases mediated by SHP2, which comprises administering a therapeutically effective amount of at least any one compound or pharmaceutical composition represented by structural formula I to a subject.
  • the SHP2-mediated disease is cancer.
  • the present invention also provides a method for treating cancer, which comprises administering a therapeutically effective amount of at least any one compound or pharmaceutical composition represented by structural formula I to a subject.
  • the cancer is Noonan syndrome, leopard spot syndrome, juvenile myelomonocytic leukemia, neuroblastoma, melanoma, head and neck squamous cell carcinoma, acute myeloid leukemia, breast Cancer, esophageal tumor, lung cancer, colon cancer, head cancer, stomach cancer, lymphoma, glioblastoma, gastric cancer, pancreatic cancer, or a combination thereof.
  • the treatment target is a human.
  • alkyl includes straight, branched or cyclic saturated alkyl groups.
  • alkyl includes but is not limited to methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, cyclobutyl, n-pentyl, 3 -(2-Methyl)butyl, 2-pentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, cyclopentyl, n-hexyl, 2-hexyl, 2-methylpentyl and cyclohexyl and other similar groups group.
  • C 1-8 alkyl means comprising 7 or 8 carbon atoms, a straight chain, branched chain or cyclic Formally arranged groups.
  • alkenyl and alkynyl include linear, branched or cyclic alkenyl and alkynyl groups.
  • C 2-8 alkenyl and “C 2-8 alkynyl” refer to a linear, branched or cyclic arrangement containing 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 carbon atoms ⁇ alkenyl or alkynyl.
  • alkoxy refers to the oxyether form of the aforementioned linear, branched or cyclic alkyl group.
  • aryl refers to an unsubstituted or substituted monocyclic or polycyclic aromatic group including carbon atoms. It is preferably a 6 to 10 membered monocyclic or bicyclic aromatic group. Preferably it is phenyl and naphthyl. Most preferred is phenyl.
  • heteroaryl refers to a monovalent heteroatom group formed by removing a hydrogen atom from a carbon atom of a parent heteroaromatic ring system.
  • Heteroaryl groups include: 5- to 7-membered aromatic, monocyclic, including at least one heteroatom selected from N, O or S, for example, 1 to 4 heteroatoms, or preferably 1 to 3 heteroatoms, ring The other atoms on the above are carbon; the polyheteroaryl ring includes at least one heteroatom selected from N, O or S, for example, 1 to 4 heteroatoms, or preferably 1 to 3 heteroatoms, other atoms in the ring Is carbon, and at least one of the heteroatoms is on the aromatic ring.
  • heteroaryl groups are C 3-10 heteroaryl groups, including but not limited to, pyrrolyl, furyl, thienyl, pyridyl, pyranyl, pyrazolyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, Pyrazinyl, imidazolyl, thiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, triazole, indolyl, benzofuranyl, benzothiazolyl, benzimidazolyl, benzopyrazolyl, benzene And similar groups such as triazolyl, carbazolyl, quinolinyl, isoquinolinyl, purinyl and the like.
  • the heteroaryl group and the aryl group will not cross or contain each other. Therefore, according to the above definition, if at least one all-carbon aromatic ring is fused with a heterocyclic group, the result is a heteroaryl group instead of an aryl group.
  • Cycloalkyl refers to a cyclic group that is saturated or unsaturated but not aromatic. Depending on the specific level of saturation, the terms “cycloalkyl”, “cycloalkenyl” or “cycloalkynyl” are used respectively.
  • Representative cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane, or cyclohexene and similar groups.
  • the cycloalkyl group may be a C 3-10 cycloalkyl group, such as a C 3-6 cycloalkyl group.
  • Heterocyclic group refers to a saturated or unsaturated but not aromatic cyclic group, and one or more of the carbon atoms (and the connected hydrogen atoms) can be respectively the same or different hetero Atom and the corresponding attached hydrogen atom are replaced.
  • Representative heteroatoms that replace carbon atoms include, but are not limited to, N, P, O, S, and Si. When a specific degree of saturation needs to be described, the terms “heterocycloalkyl” or “heterocycloalkenyl” are used respectively.
  • heterocyclic groups include but are not limited to epoxy compounds, imidazolidine, morpholine, piperazine, piperidine, pyrazolidine, pyrrolidine, quinuclidine, tetrahydrofuran or tetrahydropyran and similar groups .
  • the heterocycloalkyl group and the cycloalkyl group will not cross or contain each other. Therefore, according to the above definition, if at least one all-carbocyclic ring is fused with a heterocycloalkyl to form a di-, poly- or spiro-ring, it will still be defined as a heterocycloalkyl.
  • heteroaryl group is fused with a heterocyclic group to form a di-, poly- or spiro-ring, it will be defined as a heterocyclic group instead of a heteroaryl group.
  • Halogen refers to fluorine (F), chlorine (Cl), bromine (Br) or iodine (I). Preferred halogen refers to fluorine, chlorine and bromine.
  • Halo refers to a fluoro, chloro, bromo or iodo group.
  • the preferred halo groups refer to fluoro and chloro.
  • substitution means that one or more hydrogen atoms in a group are replaced by the same or different substituents.
  • substituents include, but are not limited to, halogen, amino, oxo, carbonyl, alkyl, alkoxy, aryl, cycloalkyl, heterocyclyl, and heteroaryl.
  • substituents include, but are not limited to halo, amino, methyl, -CH 3, trifluoromethyl, -CH 3.
  • alkyl or aryl or its prefixes appear in the name of a substituent (such as aralkyl, or dialkylamino), it shall be the same as the aforementioned "alkyl” and "aryl”"The definition defines the substituents.
  • the specified number of carbon atoms (such as C 1-6 ) will independently represent the number of carbon atoms in an alkyl moiety or in an alkyl moiety (where the alkyl group is the prefix stem) in a larger substituent.
  • the "compound” of the present invention includes the compound represented by formula I, and all pharmaceutically acceptable forms thereof. These pharmaceutically acceptable forms include salts, solvates, non-covalent complexes, chelates or their prodrugs, or any mixture of all the above forms.
  • the “pharmaceutically acceptable” refers to those that are well known for use in animals, especially those that can be used in humans.
  • composition in the present invention includes a product containing a specific quantity of a specific component, and also includes any product directly or indirectly obtained from a specific quantity of a specific component. Therefore, a pharmaceutical composition including the compound of the present invention as an active ingredient and a method for preparing the compound are the content of the present invention.
  • “Therapeutically effective amount” means that when a compound is administered to a subject to treat and prevent and/or inhibit at least one clinical symptom of a disease, condition, symptom, indication, and/or discomfort, it is sufficient for the disease, condition, A dose that produces a certain effect in the treatment of symptoms, indications or discomfort.
  • the specific "effective therapeutic dose” may vary according to the compound, the route of administration, the age of the patient, the weight of the patient, the type of disease or discomfort to be treated, the symptoms and severity, etc. Whenever possible, an appropriate dose may be obvious to those skilled in the art, or it may be determined by conventional experimental methods.
  • the compounds provided by the present invention may exist in the form of "pharmaceutically acceptable salts".
  • the salt of the compound provided by the present invention refers to a non-toxic pharmaceutically acceptable salt.
  • the form of the pharmaceutically acceptable salt includes a pharmaceutically acceptable acid/anion or base/cation salt.
  • Pharmaceutically acceptable acid/anionic salts generally exist in the form of protonation of basic nitrogen with inorganic or organic acids.
  • Typical organic or inorganic acids include hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, perchloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, lactic acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid , Tartaric acid, citric acid, ⁇ -ketoglutaric acid, hippuric acid, benzoic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, isethionic acid, benzenesulfonic acid, oxalic acid, pamoic acid, 2-naphthalenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid Acid, cyclohexylamine sulfonic acid, salicylic acid, saccharic acid or trifluoroacetic acid.
  • Pharmaceutically acceptable base/cation salts including, but not limited to, aluminum salt, calcium salt, chloroprocaine salt, choline, diethanolamine salt
  • the prodrug of the compound of the present invention is included in the protection scope of the present invention.
  • the prodrug is a functional derivative that is easily converted into a desired compound in vivo. Therefore, the term "administration" involved in the treatment method provided by the present invention includes the administration of the compound disclosed in the present invention, or although it is not clearly disclosed but can be transformed into the compound disclosed in the present invention in vivo after administration to the subject. disease.
  • the conventional methods for selecting and preparing suitable prodrug derivatives have been recorded in books such as "Design of Prodrugs” (Design of Prodrugs, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985).
  • any substituent or variable at a specific position in one molecule is irrelevant to the definition of any substituent or variable at a specific position in other molecules. It is easy to understand that the compounds of the present invention can be selected according to the prior art of the subject to select suitable substituents or substitution forms to provide chemically stable and easy preparation and synthesis using the prior art of the subject or the method described in the present invention.
  • the present invention includes any possible solvate and polymorph.
  • the type of solvent that forms the solvate is not particularly limited, as long as the solvent is pharmacologically acceptable.
  • water, ethanol, propanol, acetone and similar solvents can be used.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to a salt prepared from a pharmaceutically acceptable non-toxic base or acid.
  • pharmaceutically acceptable non-toxic bases including inorganic bases and organic bases.
  • Salts derived from inorganic bases include aluminum, ammonium, calcium, copper (ic and ous), iron, ferrous, lithium, magnesium, manganese (ic and ous), potassium, sodium, zinc and the like. In particular, salts of ammonium, calcium, magnesium, potassium, and sodium are preferred.
  • Non-toxic organic bases that can be derivatized into pharmaceutically acceptable salts include primary, secondary and tertiary amines, as well as cyclic amines and amines containing substituents, such as naturally occurring and synthetic amines containing substituents.
  • non-toxic organic bases capable of forming salts, including ion exchange resins and arginine, betaine, caffeine, choline, N',N'-dibenzylethylene diamine, diethylamine, 2 -Diethylaminoethanol, 2-dimethylaminoethanol, ethanolamine, ethylenediamine, N-ethylmorpholine, N-ethylpiperidine, reduced glucosamine, glucosamine, histidine, haamine, isopropylamine , Lysine, methylglucamine, morpholine, piperazine, piperidine, polyamine resin, procaine, purine, theobromine, triethylamine, trimethylamine, tripropylamine, tromethamine, etc.
  • the corresponding salt can be prepared from pharmaceutically acceptable non-toxic acids, including inorganic acids and organic acids.
  • acids include, for example, acetic acid, benzenesulfonic acid, benzoic acid, camphorsulfonic acid, citric acid, ethanesulfonic acid, isethionic acid, formic acid, fumaric acid, gluconic acid, glutamic acid, hydrobromic acid, Hydrochloric acid, lactic acid, maleic acid, malic acid, mandelic acid, ⁇ -ketoglutaric acid, hippuric acid, methanesulfonic acid, mucic acid, nitric acid, pamoic acid, pantothenic acid, phosphoric acid, succinic acid, sulfuric acid, tartaric acid, p-toluenesulfonate Acid etc.
  • malic acid citric acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, methanesulfonic acid, maleic acid, phosphoric acid, sulfuric acid and tartaric acid. More preferably, phosphoric acid, hydrochloric acid and malic acid. Since the compound represented by formula I will be used as a pharmaceutical, it is preferable to use a substantially pure form, for example, at least 60% purity, more suitably at least 75% purity, particularly suitably at least 98% purity (% is a weight ratio).
  • the pharmaceutical composition provided by the present invention includes the compound represented by formula I (or a pharmaceutically acceptable salt thereof) as an active component, a pharmaceutically acceptable excipient and other optional therapeutic components or adjuvants.
  • the pharmaceutical composition of the present invention includes oral, rectal, topical and Pharmaceutical composition for parenteral (including subcutaneous administration, intramuscular injection, intravenous administration) administration.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be conveniently prepared in a unit dosage form known in the art and prepared by any preparation method known in the pharmaceutical field.
  • the compound of formula I, or prodrug, or metabolite, or pharmaceutically acceptable salt of the present invention can be combined with drugs as the active component, and mixed with a drug carrier to form a drug combination Things.
  • the pharmaceutical carrier can take various forms, depending on the desired mode of administration, for example, oral or injection (including intravenous injection). Therefore, the pharmaceutical composition of the present invention may take the form of a separate unit suitable for oral administration, such as a capsule, cachet or tablet containing a predetermined dose of the active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may take the form of powder, granule, solution, aqueous suspension, non-aqueous liquid, oil-in-water emulsion, or water-in-oil emulsion.
  • the compound represented by Formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof can also be administered by a controlled release method and/or a delivery device.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by any pharmaceutical method. Generally, this method includes the step of associating the active ingredient with the carrier constituting one or more necessary ingredients.
  • the pharmaceutical composition is prepared by uniformly and intimately mixing the active ingredient with a liquid carrier or a finely divided solid carrier or a mixture of both.
  • the product can be easily prepared into the desired appearance.
  • the pharmaceutical composition of the present invention includes a pharmaceutically acceptable carrier and a compound represented by formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the compound represented by formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and one or more other compounds having therapeutic activity in combination are also included in the pharmaceutical composition of the present invention.
  • the drug carrier used in the present invention can be, for example, a solid carrier, a liquid carrier or a gas carrier.
  • solid carriers include lactose, gypsum powder, sucrose, talc, gelatin, agar, pectin, acacia, magnesium stearate, stearic acid, mannitol, sorbitol, microcrystalline cellulose, inorganic salts , Starch, pregelatinized starch, powdered sugar, dextrin, etc.
  • liquid carriers include syrup, peanut oil, olive oil and water.
  • gas carriers include carbon dioxide and nitrogen.
  • water, ethylene glycol, oils, alcohols, flavor enhancers, preservatives, coloring agents, etc. can be used for oral liquid preparations such as suspensions, elixirs and solutions; and carriers, such as starches, sugars, Microcrystalline cellulose, diluents, granulating agents, lubricants, binders, disintegrants, etc. can be used in oral solid preparations such as powders, capsules and tablets. In view of ease of administration, tablets and capsules are preferred for oral preparations. Alternatively, standard aqueous or non-aqueous formulation techniques can be used for tablet coating.
  • Tablets containing the compound or pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by, optionally, mixing, compression or molding with one or more auxiliary components or adjuvants.
  • the active ingredient is in a free-flowing form such as powder or granules, mixed with lubricants, inert diluents, surface active or dispersing agents, and compressed in a suitable machine to obtain compressed tablets.
  • the powdered compound or pharmaceutical composition is wetted with an inert liquid diluent, and then molded in a suitable machine to form a molded tablet.
  • each tablet contains about 0.01 mg to 5 g of active ingredient, and each cachet or capsule contains about 0.1 mg to 0.5 g of active ingredient.
  • a dosage form intended for oral administration to humans contains about 0.1 mg to about 0.5 g of the active ingredient, compounded with a suitable and convenient metering auxiliary material, which accounts for about 5% to 99.99% of the total pharmaceutical composition .
  • the unit dosage form generally contains about 0.1mg to about 0.5g of effective ingredients, typically 0.1mg, 0.2mg, 0.5mg, 1mg, 2mg, 2.5mg, 5mg, 10mg, 25mg, 50mg, 100mg, 200mg, 300mg, 400mg Or 500mg.
  • the pharmaceutical composition suitable for parenteral administration provided by the present invention can be prepared as an aqueous solution or suspension by adding active components into water.
  • Suitable surfactants such as sodium lauryl sulfate, polysorbate-80 (Tween-80), polyoxyethylene hydrogenated castor oil, and poloxamer may be included.
  • glycerol liquid polyethylene glycol, and their mixtures in oil, dispersion systems can also be prepared.
  • a preservative may also be included in the pharmaceutical composition of the present invention to prevent the growth of harmful microorganisms.
  • the present invention provides pharmaceutical compositions suitable for injection use, including sterile aqueous solutions or dispersion systems.
  • the above-mentioned pharmaceutical composition can be prepared in the form of a sterile powder that can be used for immediate preparation of sterile injection.
  • the final injection form must be sterile, and for easy injection, it must be easy to flow.
  • the pharmaceutical composition must be stable during preparation and storage. Therefore, preservation against contamination by microorganisms such as bacteria and fungi is preferred.
  • the carrier can be a solvent or dispersion medium, for example, water, ethanol, polyol (such as glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol), vegetable oil, and suitable mixtures thereof.
  • the pharmaceutical composition provided by the present invention may be in a form suitable for topical administration, for example, aerosol, emulsion, ointment, lotion, dusting, or other similar dosage forms. Further, the pharmaceutical composition provided by the present invention can be in a form suitable for use in a transdermal drug delivery device.
  • These preparations can be prepared using the compound represented by formula I of the present invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, through conventional processing methods.
  • an emulsion or ointment is prepared by adding a hydrophilic material and water (the total amount of the two is about 5 wt% to 50 wt% of the compound) to prepare a cream or ointment with the desired consistency.
  • the pharmaceutical composition provided by the present invention can be made into a form suitable for rectal administration with a solid as a carrier.
  • Suppositories in which the mixture forms a unit dose are the most preferred dosage form.
  • Suitable excipients include cocoa butter and other materials commonly used in the art. Suppositories can be conveniently prepared. First, the pharmaceutical composition is mixed with softened or melted excipients, then cooled and molded.
  • the above-mentioned pharmaceutical preparations may also include, as appropriate, one or more additional adjuvant components, such as diluents, buffers, flavoring agents, binders, surfactants, and additives. Thickeners, lubricants, preservatives (including antioxidants), etc. Further, other adjuvants may also include penetration enhancers that regulate the isotonic pressure of the drug and blood.
  • additional adjuvant components such as diluents, buffers, flavoring agents, binders, surfactants, and additives. Thickeners, lubricants, preservatives (including antioxidants), etc.
  • other adjuvants may also include penetration enhancers that regulate the isotonic pressure of the drug and blood.
  • the pharmaceutical composition containing the compound represented by Formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof can also be prepared in the form of a powder or a concentrated solution.
  • ACE-Cl 1-chloroethyl chloroformate
  • BOP Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate
  • DBU 1,8-diazabicycloundec-7-ene
  • DIPEA or DIEA N,N-diisopropylethylamine
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • EGTA ethylene glycol diaminoethyl ether tetraacetic acid
  • HEPES 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid
  • LDA lithium diisopropylamide
  • MsCl methanesulfonyl chloride
  • NBS N-bromosuccinimide
  • NMP N-methyl-2-pyrrolidone
  • Pd 2 (dba) 3 Tris(dibenzylideneacetone)dipalladium
  • PE petroleum ether
  • PPA polyphosphoric acid
  • TFA trifluoroacetic acid
  • THF Tetrahydrofuran
  • Ti(OEt) 4 Tetraethyl titanate
  • TMEDA Tetramethylethylenediamine
  • xantphos 4,5-bisdiphenylphosphine-9,9-dimethylxanthene.
  • the starting material for the synthesis of M11 is 6-methoxy-1-indanone
  • the intermediate compound M10 in Table 1 is prepared by a method similar to the foregoing intermediate 5-9 -M14.
  • Example 1 Compound (S)-2-(1-amino-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1'-yl)-5-((2-amino-3 -Chloropyridin-4-yl)sulfanyl)-3-methylpyrimidin-4(3H)-one
  • Example 2 Compound (S)-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-2-(1-amino-6-methoxy-1,3-dihydrospiro [Indene-2,4'-piperidine]-1'-yl)-3-methylpyrimidin-4(3H)-one
  • Example 3 Compound (S)-5-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-2-(1-amino-6-chloro-1,3-dihydrospiro[indene -2,4'-Piperidine]-1'-yl)-3-Methylpyrimidin-4(3H)-one
  • Example 15 Compound (S)-6-amino-2-(1-amino-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1'-yl)-5-((2 ,3-Dichlorophenyl)thio)-3-methylpyrimidin-4(3H)-one
  • Example 16 Compound (S)-6-amino-2-(1-amino-1,3-dihydrospiro[indene-2,4'-piperidine]-1'-yl)-5-((2 Preparation of -amino-3-chloropyridin-4-yl)thio)-3-methylpyrimidine-4(3H)-one:
  • the synthesis of compound 18-2 refers to the preparation method of compound 16-3.
  • SHP2 is allosterically activated by the binding of a bis-tyrosyl-phosphorylated peptide to its Src homology 2 (SH2) domain.
  • SH2 Src homology 2
  • the subsequent activation step results in the release of the SHP2 auto-inhibitory interface, which in turn activates the SHP2 protein tyrosine phosphatase (PTP) and can be used for substrate recognition and reaction catalysis.
  • PTP protein tyrosine phosphatase
  • the surrogate DiFMUP was used to monitor the catalytic activity of SHP2 in the rapid fluorescence assay format.
  • the compound of the present invention (10mM stock solution) was diluted to an appropriate multiple with 100% DMSO.
  • the final test concentration of the compound of the present invention was 10 ⁇ M, 3.3333 ⁇ M, 1.1111 ⁇ M, 0.3704 ⁇ M, 0.1235 ⁇ M, 0.0412 ⁇ M, 0.0137 ⁇ M, 0.0046 ⁇ M, 0.0015 ⁇ M , 0.00 ⁇ M;
  • Inhibition rate% [1-(Conversion_ sample -Conversion_ min )/(Conversion_ max -Conversion_ min )] ⁇ 100%
  • Conversion_sample is the conversion rate reading of the sample
  • Conversion_min is the average value of the blank control well, representing the conversion rate reading of the wells without enzyme activity
  • Conversion_max is the average value of the positive control well ratio, representing the conversion rate reading of the wells without compound inhibition.
  • the analysis software GraphPad Prism log (inhibitor) vs. response-Variable slope was used to fit the dose-response curve, and the IC 50 value of the compound to the enzyme activity was calculated.
  • the IC 50 data of some examples are shown in Table 3.
  • the compound of the present invention has an allosteric inhibitory effect on SHP2 phosphatase.
  • An in vitro cell assay was used to evaluate the effects of the compounds of the present invention on the proliferation of lung squamous cell carcinoma KYSE-520 cells and leukemia cells MV-4-11 cells.
  • the detection method used in the experiment is the CELL TITER-GLO (CTG) luminescence method, which can detect the number of living cells by quantitatively measuring ATP. Because ATP participates in a variety of enzymatic reactions in organisms, it is an indicator of living cell metabolism. Its content directly reflects the number and cell state of cells.
  • CCG CELL TITER-GLO
  • Inhibition rate% (1-(administration group value-zero adjustment group value)/(blank group value-zero adjustment group value)*100
  • the compound of the present invention has a good inhibitory effect on the proliferation of KYSE-520 cells and the proliferation of MV-4-11 cells.
  • Example C Inhibition test of hERG potassium ion channel
  • the whole cell patch clamp technique was used to detect the blocking effect of the test compound on the hERG channel.
  • the HEK293 cell line stably expressing the hERG potassium channel was cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and 0.8 mg/mL G418 at a culture temperature of 37°C and a carbon dioxide concentration of 5%.
  • the cell density In order to maintain the electrophysiological activity of cells, the cell density must not exceed 80%.
  • the cells were separated with TrypLE TM Express before the experiment, and 3*103 cells were spread on a cover glass and cultured in a 24-well plate (final volume: 500 ⁇ L). After 18 hours, the experiment was performed.
  • Cisapride positive control
  • the weighed 1.2mg cisap must be prepared into a 10mM stock solution using 243 ⁇ L DMSO.
  • the cisapride stock solution was diluted successively with DMSO at a 10-fold dilution from high to low to a 10 ⁇ M dilution.
  • the whole cell patch clamp voltage stimulation scheme for recording the whole cell hERG potassium current is as follows: when the whole cell seal is formed, the cell membrane voltage is clamped to -80mV. The clamping voltage is depolarized from -80mV to -50mV for 0.5 seconds, then stepped to 30mV for 2.5 seconds, and then quickly restored to -50mV for 4 seconds to stimulate the tail current of the hERG channel. Collect data repeatedly every 10 seconds to observe the effect of the drug on the hERG tail current. A stimulus of -50mV for 0.5 seconds was used as leakage current detection. The experimental data is collected by EPC-10 amplifier (HEKA) and stored in PatchMaster (HEKA) software.
  • HEKA EPC-10 amplifier
  • HEKA PatchMaster
  • the capillary glass tube is drawn into a recording electrode with a microelectrode drawing instrument. Operate the microelectrode manipulator under the inverted microscope to contact the recording electrode on the cell, and apply negative pressure suction to form a G ⁇ seal. After forming the G ⁇ seal, perform fast capacitance compensation, and then continue to give negative pressure to suck and break the cell membrane to form a whole-cell recording mode. Then perform slow capacitance compensation and record the film capacitance and series resistance. No leakage compensation is given.
  • the drug When the hERG current recorded by the whole cell stabilizes, the drug is administered, and each drug concentration acts for 5 minutes (or the current stabilizes). Place the cover glass covered with cells in the recording bath in the inverted microscope.
  • the test compound and the compound-free external fluid flow through the recording bath sequentially by gravity perfusion to act on the cells, and the vacuum pump is used to carry out the liquid during recording. exchange.
  • the current detected by each cell in the compound-free external fluid serves as its own control group. Test multiple cells independently and repeatedly. All electrophysiological experiments were performed at room temperature.

Abstract

一种作为含Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制剂应用的化合物(如式I所示)，及其药物组合物、制备方法，以及其在治疗SHP2介导的疾病中的用途。所述化合物通过参与调节细胞增殖、凋亡、迁移、新生血管生成等多个过程而发挥作用。

Description

SHP2抑制剂及其应用 技术领域
本发明涉及一系列作为含Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(Src homologyregion 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)抑制剂的化合物及其制备方法、药物组合物。本发明还涉及上述化合物或其药物组合物在治疗SHP2介导的疾病中的用途。
背景技术
含Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(Src homologyregion 2-containing protein tyrosine phosphatase 2,SHP2)是由一种由PTPN11基因编码的非受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶，PTPN11是首个被发现的编码酪氨酸激酶的原癌基因(Chan R J et al.PTPN11 is the first identified proto-oncogene that encodes a tyrosine phosphatase.Blood,2007,109:862-867)，其编码的SHP2蛋白包含N端的SHP2结构域(N-SHP2)、C端SHP2结构域(C-SHP2)、蛋白质磷酸酶催化结构域(PTP)，两个C端的酪氨酸残基(Y542和Y580)以及一个富含脯氨酸(Pro)的模体。
近年研究主要认为Ras/ERK通路是SHP2发挥作用最重要的一条信号转导通路，其机制(Dance M et al.The molecular functions of Shp2 in the RAS/mitogen-activated protein kinase(ERK1/2)pathway.Cell Signal,2008,20:453-459)大致为：生长因子受体活化后，其酪氨酸残基发生自体磷酸化，为Grb2和SHP2(含有SH2结构域的衔接蛋白)磷酸酪氨酸结合区域SH2提供停靠位点。Grb2与磷酸化的生长因子受体的结合导致SOS蛋白在胞膜的聚集。SOS作为一种鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor,GEF)，可以催化膜结合蛋白Ras从无活性的Ras-GDP转换为有活性的Ras-GTP。Ras-GTP再进一步与下游的信号***发生联系，激活Ser/Thr激酶Raf1等，进而在调节激酶MEK的作用下使ERK活化，ERK活化后直接作用于细胞质的靶分子或转移到细胞核内调节基因转录，使细胞增殖或分化。这一过程可能还受到SHP2结合蛋白和底物(SHP substrate-1,SHPS-1)、Ras-GTP酶活化蛋白(Ras-GAP)以及其他Src成员的影响。
SHP2蛋白不仅调节Ras/ERK信号通路，另有报道其还调节JAK-STAT3、NF-κB、PI3K/Akt、RHO和NFAT等多条信号通路，进而调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理学功能。
SHP2被证明与多种疾病相关，Tartaglia等(Tartaglia M et al.Mutations in PTPN11,encoding the protein tyrosine phosphatase SHP-2,cause Noonan syndrome.Nat Genet,2001,29:465-468)发现大约50％的努南综合征患者伴有PTPN11的错义突变。另外，研究发现PTPN11突变是JMML以及多种白血病发病的重要原因(Tartaglia M et al.Nat Genet,2003,34:148-150；Loh ML et al.Blood,2004,103:2325-2331；Tartaglia M et al.Br J Haematol,2005,129:333-339；Xu R et al.Blood,2005,106:3142-3149.)。随着对PTPN11/SHP2研究的深入，发现其与肺癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤、甲状腺癌等多种癌症的发生均有的关系(唐春兰等.中国肺癌杂志，2010,13:98-101；Higuchi M et al.Cancer Sci,2004,95:442-447；Bentires-Al j M et al.Cancer Res,2004,64:8816-8820；Martinelli S et al.Cancer Genet Cytogenet,2006,166:124-129.)。
因此，SHP2抑制剂作为潜在的治疗手段得到了越来越多的关注。目前在开发的SHP2抑制剂有多种，诺华开发的TNO155在2017年进入治疗实体瘤的I期临床试验。加科思设计开发的JAB-3068于2018年4月进入治疗实体瘤的I期临床试验。Revolution开发的RMC-4630于2018年8月进行首次人体临床试验。目前，该靶点在国内外还未见上市品种，因此，开发出能够靶向抑制SHP2活性的小分子药物，为患者提供更加安全有效的SHP2抑制剂具有重要的研究意义。
发明内容
本发明涉及一种作为含Src同源区2蛋白质酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制剂应用的化合物。本发明所述化合物具有如式I所示通式结构或其药学上可接受的盐、互变异构体、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物，
Figure PCTCN2020072773-appb-000001
其中，
R 1选自氢、羟基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基；
R 2选自氢、C 1-4烷基或含取代基的C 1-4烷基；
R 3选自氢、氨基、-C(O)NH 2、-C≡N、羟基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基或含取代基的C 1-8烷氧基；
R 4选自氢、卤素、氨基、酰胺基、-C≡N、羧基、羟基、羟甲基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基；
A 1任意地选自CR 5或N；
A 2任意地选自CR 6或N；
A 3任意地选自CR 7或N；
U任意地选自C(R 8) 2、O或NR 9；
其中，R 5、R 6、R 7、R 8或R 9独立地选自氢、卤素、氨基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基；
环A任意地选自C 6-10芳基或C 5-10杂芳基，所述C 5-10杂芳基含有一个或两个N或S杂原子；
Rx任意地选自氢、卤素、氨基、含取代基的氨基、磺酰基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 3-8环烷基或含取代基的C 3-8环烷基；
n为0、1、2、3或4。
优选地，式I中的A 3为N。出乎意料地，当A 3为N而不是CR 7时，不仅可以保持SHP2抑制活性，而且可以显著改善hERG。
一些实施方式中，式I中的R 1选自C 1-3烷基。
一些实施方式中，式I中的R 1为甲基。
一些实施方式中，式I中的R 2选自氢或C 1-3烷基。
一些实施方式中，式I中的R 2为氢。
一些实施方式中，式I中的R 3选自氢、氨基或C 1-3烷基。
一些实施方式中，式I中的R 3为氢或氨基。
一些实施方式中，式I中的R 4选自氢、卤素、氨基、C 1-3烷基或含取代基的C 1-3烷基。
一些实施方式中，式I中的R 4为氢、氟或氯。
一些实施方式中，式I中的R 4为氢或氯。
一些实施方式中，式I中的A 1选自CR 5或N，其中R 5选自卤素或卤素取代的C 1-3烷基。
一些实施方式中，式I中的A 1选自CR 5或N，其中R 5选自F、Cl或三氟甲基。
一些实施方式中，式I中的A 1选自CR 5或N，其中R 5选自Cl或三氟甲基。
一些实施方式中，式I中的A 2选自CR 6或N，其中R 6选自氨基或C 1-3烷氧基。
一些实施方式中，式I中的A 2选自CR 6或N，其中R 6选自氨基或甲氧基。
一些实施方式中，式I中的A 3选自CH或N。
一些实施方式中，式I中的U选自CH 2或O。
一些实施方式中，式I中的环A选自苯基或C 5-6杂芳基，所述C 5-10杂芳基含有一个或两个N或S杂原子。
一些实施方式中，式I中的环A选自苯基、
Figure PCTCN2020072773-appb-000002
一些实施方式中，式I中的
Figure PCTCN2020072773-appb-000003
任意地选自
Figure PCTCN2020072773-appb-000004
Figure PCTCN2020072773-appb-000005
一些实施方式中，式I中的
Figure PCTCN2020072773-appb-000006
任意地选自
Figure PCTCN2020072773-appb-000007
Figure PCTCN2020072773-appb-000008
本发明进一步提供了式I所示化合物的一些优选技术方案。例如，本发明所述化合物具有如式II所示通式结构或其药学上可接受的盐、互变异构体、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物，
Figure PCTCN2020072773-appb-000009
其中，
R 1选自C 1-8烷基；
R 2选自氢；
R 3选自H或氨基；
R 4选自氢、卤素；
A 1选自CR 5；
A 2选自CR 6；
U选自C(R 8) 2；
其中，R 5、R 6、R 8独立地选自氢、卤素、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基；
环A任意地选自C 6-10芳基。
在一些实施方式中，所述含取代基的C 1-8烷基可以是卤代C 1-8烷基，例如三氟甲基。
一些实施方式中，式II中的环A任意地被氢或C 1-8烷氧基取代。
一些实施方式中，式II中的环A任意地被氢或甲氧基取代。
一些实施方式中，式II中的R 1为甲基。
一些实施方式中，式II中的R 4为氢。
一些实施方式中，式II中的U选自CH 2。
一些实施方式中，式II中的R 5选自Cl。
一些实施方式中，式II中的R 6选自NH 2。
一些实施方式中，式II中的环A选自苯基。
本发明进一步提供了一种化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
(1)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(2)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(3)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(4)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(5)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(6)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)嘧啶-4(3H)-酮；
(7)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((6-氨基-3-氯吡啶-2-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(8)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(9)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(10)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(11)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(12)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(13)(S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(14)(S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(15)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl)硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或
(27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
优选地，本发明进一步提供了一种化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
(1)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(2)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(3)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(4)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(8)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(9)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(10)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(11)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(12)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(13)(S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(14)(S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl)硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
(26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或
(27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
本发明还提供了一种药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的至少一种式I或式II所示化合物和至少一种药学上可接受的辅料。
本发明进一步提供了一种药物组合物，其特征在于，所述的结构式I所示化合物和药学上可接受的辅料的质量百分比为0.0001:1-10。
本发明提供了结构式I所示化合物或药物组合物在制备药物中的应用。
本发明进一步提供了所述应用的优选技术方案：
作为优选，所述应用为用于制备治疗、预防、延迟或阻止癌症，癌症转移，心血管疾病，免疫疾病，纤维化或眼部疾病的药物的应用。
作为优选，所述应用为用于制备治疗由SHP2介导的疾病的药物的应用。
作为优选，所述疾病是癌症。
作为优选，所述癌症选自Noonan综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胃癌、胰腺癌或其组合。
作为优选，所述应用为用于制备SHP2抑制剂的应用。
本发明还提供了一种治疗和/或预防由SHP2介导的疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式I所示化合物或药物组合物。
作为优选，在上述方法中，所述SHP2介导的疾病是癌症。
本发明还提供了一种治疗癌症的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式I所示化合物或药物组合物。
作为优选，在上述方法中，所述癌症是Noonan综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胃癌、胰腺癌或其组合。
作为优选，在上述方法中，所述治疗对象为人类。
除非另有说明，本发明所用术语含义如下：
术语“烷基”包括直连、支链或环状的饱和烷基。例如，烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、环戊基、n-己基、2-己基、2-甲基戊基及环己基等类似基团。类似的，“C 1-8烷基”中的“C 1-8”是指包含有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链、支链或环状形式排列的基团。
“烯基”和“炔基”包括直链、支链或环状的烯基和炔基。同样地，“C 2-8烯基”和“C 2-8炔基”是指含有2、3、4、5、6、7或8个碳原子以直链、支链或环状形式排列的烯基或炔基。
术语“烷氧基”是指前述的直链、支链或环状烷基的氧醚形式。
术语“芳基”是指未取代或取代的包括碳原子的单环或多环芳香基团。优选为6到10元的单环或双环芳香基团。优选为苯基、萘基。最优选为苯基。
术语“杂芳基”是指，从一个母体杂芳环***的一个碳原子上移走一个氢原子所形成的单价的杂原子基团。杂芳基包括：5-到7-元芳香、单环，包括至少一个选自N、O或S的杂原子，例如，1到4个杂原子，或优选为1到3个杂原子，环上的其他原子为碳；多杂芳基环包括至少一个选自N、O或S的杂原子，例如，1到4个杂原子，或优选为1到3个杂原子，环上的其他原子为碳，且其中至少一个杂原子在芳环上。特别优选的杂芳基基团是C 3-10的杂芳基，包括但不限于，吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、吡唑基、嘧啶基、哒 嗪基、吡嗪基、咪唑基、噻唑基、恶唑基、异恶唑基、三氮唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三氮唑基、咔唑基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基等类似基团。
但是，在任何情况下，杂芳基和芳基都不会彼此交叉或相互包含。因此，根据以上定义，如果至少一个全碳芳香环与一个杂环基相稠合，得到的是杂芳基，而不是芳基。
“环烷基”指饱和的或不饱和的但不具有芳香性的环状基团。根据其饱和度的特殊水平，分别采用术语“环烷基”、“环烯基”或“环炔基”。有代表性的环烷基基团包括但不限于，环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷或环己烯等类似基团。具体的，环烷基基团可以是C 3-10的环烷基，如：C 3-6环烷基。
“杂环基”是指饱和的或不饱和的但不具有芳香性的环状基团，而且其中一个或多个碳原子(以及所连接的氢原子)可分别被相同的或不相同的杂原子和相应所连接的氢原子所取代。有代表性的取代碳原子的杂原子包括但不限于N、P、O、S和Si。当需要描述特定的饱和度时，分别采用术语“杂环烷基”或“杂环烯基”。具有代表性的杂环基基团包括但不限于环氧化合物、咪唑烷、吗啉、哌嗪、哌啶、吡唑烷、吡咯烷、奎宁环、四氢呋喃或四氢吡喃等类似基团。含取代基的杂环基也包含被至少一个含氧的(＝O)或氧化物(-O-)取代基取代的环***，如：哌啶-氮-氧化物、吗啉基-氮-氧化物、1-氧代-1-硫吗啉基和1-二氧-1-硫吗啉基。
但是，在任何情况下，杂环烷基和环烷基都不会彼此交叉或相互包含。因此，根据上述定义，如果至少一个全碳环与一个杂环烷基稠合形成一个二-、多-或螺-环，将仍然定义为杂环烷基。
另外，如果一个杂芳基与一个杂环基稠和形成一个二-、多-或螺-环，将定义为杂环基而不是杂芳基。
“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。优选的卤素是指氟、氯和溴。
“卤代基”是指氟代、氯代、溴代或碘代基团。优选的卤代基是指氟代和氯代。
“取代”是指一个基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或不同的取代基所取代。具有代表性的取代基包括但不限于卤素、氨基、氧代基、羰基、烷基、烷氧基、芳基、环烷基、杂环基、杂芳基。在一些实施例中，取代基包含但不限于卤素、氨基、甲基、-CH 3、三氟甲基、-CH 3。
无论何时，术语“烷基”或“芳基”或者其前缀词根出现在取代基名称中(如芳烷基，或二烷基氨基)，均应按前述的“烷基”和“芳基”定义对取代基进行限定性解释。碳原子的指定 数量(如C l-6)将独立的表示在一个烷基部分或在一个更大的取代基中的烷基部分(其中烷基作为前缀词根)中的碳原子的数量。
本发明所述“化合物”包括式I所示的化合物，及其所有药学上可接受的形式。这些药学上可接受的形式包括盐、溶剂化物、非共价复合物、螯合物或其前体药物、或上述所有形式的任意混合物。
所述“药学上可接受的”是指公知的用于动物的，特别是可用于人体的。
本发明中术语“组合物”包括含有特定数量的特定组分的产品，也包括任何由特定数量的特定组分直接或间接得到的产品。因此，包括本发明中的化合物作为活性组分的药物组合物和制备该化合物的方法都是本发明的内容。
“治疗有效量”是指一个化合物施用于治疗主体时治疗并且预防和/或抑制一种疾病、病情、症状、适应症和/或不适的至少一种临床症状时，足以这种疾病、病情、症状、适应症或不适的治疗产生一定效果的剂量。具体的“有效治疗剂量”可以根据化合物，给药途径、患者年龄、患者体重，所治疗的疾病或不适的类型、症状和严重程度等的不同而变化。在任意可能的情况下，一个合适的剂量对那些在本领域的专业人员可以是显而易见的，也可以是用常规实验方法确定的。
本发明提供的化合物可以以“药学上可接受的盐”的形式存在。药物应用方面，本发明提供的化合物的盐是指无毒的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的形式包括药学上可接受的酸/阴离子或碱/阳离子盐。药学上可接受的酸/阴离子盐一般以碱性氮与无机酸或有机酸质子化的形式存在。典型的有机或无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、高氯酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、α-酮戊二酸、马尿酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、羟乙基磺酸、苯磺酸、草酸、扑酸、2-萘磺酸、对甲苯磺酸、环己胺磺酸、水杨酸、糖精酸或三氟乙酸。药学上可接受的碱/阳离子盐，包括但不限于，铝盐、钙盐、氯普鲁卡因盐、胆碱、二乙醇胺盐、乙二胺盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐和锌盐。
本发明化合物的药物前体包含在本发明的保护范围内。通常，所述药物前体是很容易在体内转化成所需要的化合物的功能性衍生物。因此，本发明提供的治疗方法涉及的术语“给药”包括施用本发明公开的化合物，或虽未明确公开但对主体给药后能够在体内转化为本发明公开的化合物治疗所述的各种疾病。有关选择和制备合适药物前体衍生物的常规方法，已记载在例如《药物前体设计》(Design of Prodrugs,ed.H.Bundgaard,Elsevier,1985)这类书中。
显然的，一个分子中任何取代基或特定位置的变量的定义，与其他分子中的任何取代基或特定位置的变量的定义是无关的。很容易理解，本发明中的化合物可以根据本学科现有技术选择合适的取代基或取代形式，以提供化学上稳定且容易用本学科现有技术或本发明中所述的方法进行制备合成。
当式I所示化合物及其药学上可接受的盐为溶剂化物或多晶型的形式时，本发明包括任何可能的溶剂化物和多晶型。形成溶剂化物的溶剂类型没有特别的限定，只要该溶剂是药理学上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等类似的溶剂都可以采用。
术语“药学上可接受的盐”是指从药学上可接受的无毒的碱或酸制备的盐。当本发明提供的化合物是酸时，可以从药学上可接受的无毒的碱，包括无机碱和有机碱，制得其相应的盐。从无机碱衍生的盐包括铝、铵、钙、铜(ic和ous)、铁、亚铁、锂、镁、锰(ic和ous)、钾、钠、锌之类的盐。特别地，优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。能够衍生成药学上可接受的盐的无毒有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，也包括环胺及含有取代基的胺，如天然存在的和合成的含取代基的胺。能够成盐的其他药学上可接受的无毒有机碱，包括离子交换树脂以及精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N',N'-二苄乙烯二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N－乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺、异丙胺、赖氨酸，甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。
当本发明提供的化合物是碱时，可以从药学上可接受的无毒的酸，包括无机酸和有机酸，制得其相应的盐。这样的酸包括，如，醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、羟乙基磺酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、α-酮戊二酸、马尿酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。较优地，苹果酸、柠檬酸、氢溴酸、盐酸、甲磺酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。更优地，磷酸、盐酸和苹果酸。由于式I所示化合物将作为药物应用，所以优选使用基本上纯的形式，例如，至少60％纯度，更适当至少75％的纯度，特别适当至少98％的纯度(％是重量比)。
本发明提供的药物组合物包括作为活性组分的式I所示化合物(或其药学上可接受的盐)，一种药学上可接受的赋形剂及其他可选的治疗组分或辅料。尽管任何给定的情况下，最适合的活性组分给药方式取决于接受给药的特定的主体、主体性质和病情严重程度，但是本发明的药物组合物包括适于口腔、直肠、局部和肠外(包括皮下给药、肌肉注射、静 脉给药)给药的药物组合物。本发明的药物组合物可以方便地以本领域公知的单位剂型存在和药学领域公知的任何制备方法制备。
实际上，根据常规的药物混合技术，本发明式I所示化合物，或药物前体，或代谢物，或药学上可接受的盐，可以合并用药作为活性组分，与药物载体混合成药物组合物。所述药物载体可以采取各种各样的形式，取决于想采用的给药方式，例如，口服或注射(包括静脉注射)。因此，本发明的药物组合物可以采用适于口服给药的独立单位的形式，如包含预先确定剂量的活性组分的胶囊剂，扁囊剂或片剂。进一步地，本发明的药物组合物可采用粉末、颗粒、溶液、水性悬浮液、非水液体、水包油型乳液，或油包水型乳液形式。另外，除了上述提到的常见的剂型，式I所示化合物或其药学上可接受的盐，也可以通过控释的方式和/或输送装置给药。本发明的药物组合物可以采用任何制药学上的方法制备。一般情况下，这种方法包括使活性组分和构成一个或多个必要组分的载体缔合的步骤。一般情况下，所述药物组合物经由活性组分与液体载体或精细分割的固体载体或两者的混合物经过均匀的的密切混合制得。另外，该产品可以方便地制备成所需要的外观。
因此，本发明的药物组合物包括药学上可接受的载体和式I所示化合物，或其药学上可接受的盐。式I所示化合物，或其药学上可接受的盐，与其他一种或多种具有治疗活性联合用药的化合物的也包括在本发明的药物组合物中。
本发明采用的药物载体可以是，例如，固体载体、液体载体或气体载体。固体载体的例子，包括，乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、***胶、硬脂酸镁、硬脂酸、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素、无机盐类、淀粉、预胶化淀粉、糖粉、糊精等。液体载体的例子包括，糖浆、花生油、橄榄油和水。气体载体的例子包括二氧化碳和氮气。制备药物口服制剂时，可以使用任何方便的制药学上的介质。例如，水、乙二醇、油类、醇类、增味剂、防腐剂、着色剂等可用于口服的液体制剂如悬浮剂、酏剂和溶液剂；而载体，如淀粉类、糖类、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等可用于口服的固体制剂如散剂、胶囊剂和片剂。考虑到易于施用，口服制剂首选片剂和胶囊。可选地，片剂包衣可使用标准的水制剂或非水制剂技术。
含有本发明化合物或药物组合物的片剂可通过，可选地，可以与一种或多种辅助组分或辅药一起混合、压制或成型制备。活性组分以可以自由流动的形式如粉末或颗粒，与润滑剂、惰性稀释剂、表面活性或分散剂混合，在适当的机器中，通过压制可以制得压制片剂。用一种惰性液体稀释剂浸湿粉末状的化合物或药物组合物，然后在适当的机器中，通过成型可以制得模制片。较优地，每个片剂含有大约0.01mg到5g的活性组分，每个扁襄 剂或胶囊剂含有大约0.1mg到0.5g的活性组分。例如，拟用于人类口服给药的剂型包含约0.1mg到约0.5g的活性组分，与合适且方便计量的辅助材料复合，该辅助材料约占药物组合物总量的5％至99.99％。单位剂型一般包含约0.1mg到约0.5g的有效组分，典型的是0.1mg、0.2mg、0.5mg、1mg、2mg、2.5mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg或500mg。
本发明提供的适用于胃肠外给药的药物组合物可将活性组分加入水中制备成水溶液或悬浮液。可以包含适当的表面活性剂如十二烷基硫酸钠、聚山梨酯-80(吐温-80)、聚氧乙烯氢化蓖麻油、泊洛沙姆。在甘油、液态聚乙二醇，及其在油中的混合物，也可以制得分散体系。进一步地，防腐剂也可以，包含在本发明的药物组合物中用于防止有害的微生物生长。
本发明提供适用于注射使用的药物组合物，包括无菌水溶液或分散体系。进一步地，上述药物组合物可以制备成可用于即时配制无菌注射液的无菌粉末的形式。无论如何，最终的注射形式必须是无菌的，且为了易于注射，必须是易于流动的。此外，所述药物组合物在制备和储存过程中必须稳定。因此，优选抗微生物如细菌和真菌的污染的保存。载体可以是溶剂或分散介质，例如，水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇)、植物油，及其适当的混合物。
本发明提供的药物组合物，可以是适于局部用药的形式，例如，气溶胶、乳剂、软膏、洗液、撒粉，或其他类似的剂型。进一步地，本发明提供的药物组合物可以采用适于经皮给药装置使用的形式。利用本发明式I所示化合物，或其药学上可接受的盐，通过常规的加工方法，可以制备这些制剂。作为一个例子，乳剂或软膏剂的制备是通过在上述化合物中加入亲水性材料和水(二者总量约为化合物的5wt％到50wt％)，制得具有预期一致性的乳剂或软膏。
本发明提供的药物组合物，可以制成以固体为载体、适用于直肠给药的形式。混合物形成单位剂量的栓剂是最优选的剂型。适当的辅料包括本领域常用的可可脂和其他材料。栓剂可以方便地制备，首先药物组合物与软化或熔化的辅料混合，然后冷却和模具成型而制得。
除了上述提到的载体组分外，上述药学制剂还可以包括，适当的，一种或多种附加的辅料组分，如稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等。进一步地，其他的辅药还可以包括调节药物与血液等渗压的促渗剂。 包含有式I所示化合物，或其药学上可接受的盐的药物组合物，也可以制备成粉剂或浓缩液的形式。
具体实施方式
为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。
除非另有说明，本发明所有的一部分和百分比均按重量计算，所有温度均指摄氏度。
实施例中使用了下列缩略语：
ACE-Cl：1-氯乙基氯甲酸酯；
(Boc) 2O：二碳酸二叔丁酯；
BOP：苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐；
DBU：1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯；
DCE：1,2-二氯乙烷；
DCM：二氯甲烷；
DIPEA或DIEA：N,N-二异丙基乙胺；
DMAc：N,N-二甲基乙酰胺；
DMF：N,N-二甲基甲酰胺；
DMSO：二甲基亚砜；
EA或EtOAc：乙酸乙酯；
EGTA：乙二醇双氨乙基醚四乙酸；
EtOH：乙醇；
EtONa：乙醇钠；
h、hr或hrs：小时；
Hex：正己烷；
HEPES：4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸；
LC-MS或LCMS：液相色谱-质谱联用；
LDA：二异丙基氨基锂；
MeCN：乙腈；
MeOH：甲醇；
MeONa：甲醇钠；
min或mins：分钟；
MsCl：甲烷磺酰氯；
NEt 3：三乙胺
NBS：N-溴代琥珀酰亚胺；
NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮；
Pd 2(dba) 3：三(二亚苄基丙酮)二钯；
Pd(OAc) 2：乙酸钯(II)；
PE：石油醚；
PPA：多聚磷酸；
rt或RT：室温；
TFA：三氟乙酸；
THF：四氢呋喃；
Ti(OEt) 4：钛酸四乙酯；
TLC：薄层色谱；
TMEDA：四甲基乙二胺；和
xantphos：4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽。
中间体化合物M1的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000010
步骤1：化合物M1-3的制备
将15.00g化合物M1-1和7.08g化合物M1-2溶解于150mL二氧六环中，加入198mg Pd(OAc) 2，1.70g Xantphos和15.00g DIEA。氮气置换三次，氮气保护下反应升至85℃搅拌反应12hrs。TLC检测反应完全，将反应液过滤，滤饼用DCM(50mL×2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得20.00g化合物M1-3。
步骤2：化合物M1的制备
将20.00g化合物M1-3溶解于200mL THF中，-30℃下滴加EtONa(35mL，20％的EtOH溶液)，RT搅拌反应3hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入200mL的DCM搅拌30mins， 反应液过滤，滤饼用DCM(50mL×2)洗涤，得固体15.00g化合物M1。
中间体化合物M2的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000011
步骤1：化合物M2-2的制备
将1.00g化合物M2-1溶解于10mL的DMSO中，加入MeONa的MeOH溶液(15mL，0.5M)，然后70℃反应1hr。TLC检测反应完全，将反应液倒入30mL水中，加EtOAc萃取(40mL×3)，合并有机相，用50mL饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得1.10g淡黄色油状物化合物M2-2。
步骤2：化合物M2-3的制备
将化合物1.10g M2-2溶解于15mL二氧六环中，加入491mg化合物M1-2，46mg Xantphos，35mg Pd(OAc) 2，1.05g DIEA，混合物用氮气置换3次，加热至90℃反应5hrs。TLC检测反应完全，反应液冷却至室温，过滤，滤饼用EtOAc(5mL×3)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得1.03g淡黄色固体M2-3。
步骤3：化合物M2的制备
将1.03g化合物M2-3溶解于10mL无水THF中，降温至-30℃，将EtONa的EtOH溶液(2mL，20％)缓慢滴加入上述溶液中，-30℃搅拌反应30mins，缓慢升至室温搅拌反应2hrs。TLC检测反应完全，将反应液减压浓缩，残余物加入20mL DCM打浆30mins，过滤，滤饼用DCM(5mL×3)洗涤，取滤饼真空干燥得990mg棕色固体M2。
中间体化合物M3的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000012
步骤1：化合物M3-2的制备
将3.00g化合物M3-1和1.60g化合物M1-2溶解于30mL二氧六环中，加入243mg Pd 2(dba) 3，384g Xantphos和3.40g DIPEA，氮气置换三次，反应液升至110℃搅拌反应3hrs。TLC检测反应完全，将反应液过滤，滤饼用DCM(30mL×2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得4.80g化合物M3-2。
步骤2：化合物M3的制备
将4.80g化合物M3-2溶解于50mL THF中，-30℃下滴加EtONa(7.4mL，20％的EtOH溶液)，RT搅拌反应2hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入50mL DCM搅拌30mins，反应液过滤，滤饼用DCM(10mL×2)洗涤，抽干得3.60g化合物M3。
中间体化合物M4的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000013
步骤1：化合物M4-3的制备
将300mg化合物M4-1和174mg化合物M4-2溶解于10mL二氧六环中，加入4mg Pd(OAc) 2，34mg Xantphos和300mg DIEA。氮气置换三次，氮气保护下反应升至85℃搅拌反应12hrs。TLC检测反应完全，将反应液过滤，滤饼用DCM(10mL×2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得266mg化合物M4-3。
步骤2：化合物M4的制备
将266mg化合物M4-3溶解于5mL THF中，-30℃下滴加EtONa(0.47mL，20％的EtOH溶液)，RT搅拌反应3hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入15mL的DCM搅拌30mins，反应液过滤，滤饼用DCM(20mL×2)洗涤，得固体182mg化合物M4。
中间体化合物M5的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000014
步骤1：化合物M5-3的制备
氮气保护下，将25.00g化合物M5-1溶解于200mL的DMF中，降温至0℃，分批加入22.70g NaH，0℃保温1hr，然后将54.96g化合物M5-2缓慢滴加到反应液中，滴完后0℃下反应1hr，升温至60℃继续反应1hr。反应液降温至0℃，用500mL冰水淬灭反应，EtOAc(500mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得29.00g棕色油状物M5-3。
步骤2：化合物M5-5的制备
将29.00g化合物M5-3溶解于50mL的Ti(OEt) 4中，加入34.99g化合物M5-4，然后 加热至90℃反应12hrs。TCL检测反应完全，将反应液倒入500mL的冰水中，加入300mL EtOAc搅拌1hr，用EtOAc(300mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×4)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得39.00g棕色油状物化合物M5-5粗品。
步骤3：化合物M5-6的制备
氮气保护下，将48.00g化合物M5-5溶解于500mL无水THF中，降温至-20℃，缓慢加入6.73g NaHB 4，然后自然升温至RT搅拌2hrs。反应完毕，反应液降温至0℃，用300mL水淬灭，EtOAc(300mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得25.40g棕色油状物的化合物M5-6。
步骤4：化合物M5的制备
将10.00g化合物M5-6溶解于100mL DCM溶液中，滴加28.04g TFA溶液，然后RT下反应1hr。反应液降温至0℃，用100mL饱和NaHCO 3水溶液淬灭，EtOAc:THF＝3:1(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得7.64g棕色固体即化合物M5粗品，直接用于下一步反应。
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6):δ7.26-7.16(m,4H),5.50(d,J＝10.0Hz,1H),4.30(d,J＝10.0Hz,1H),3.04(d,J＝16.0Hz,1H),2.87-2.80(m,2H),2.67-2.58(m,3H),1.88-1.82(m,1H),1.59-1.53(m,1H),1.37-1.34(m,1H),1.21(s,9H),1.12-1.09(m,1H)。
中间体化合物M6的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000015
步骤1：化合物M6-3的制备
将10.00g化合物M6-1和19.50g化合物M6-2溶解于100mL的MeCN中，加入26.20g K 2CO 3。反应升至90℃搅拌反应3hrs。TLC检测反应完全，将反应液过滤，滤饼用EtOAc(50mL×2)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得5.90g化合物M6-3。
步骤2：化合物M6-4的制备
将1.50g化合物M6-3溶解于15mL甲苯中，滴加1.1mL PBr 3，反应液升至105℃搅拌反应12hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入15mL水，用NaOH溶液调至pH＝9，用EtOAc(30mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得1.50g化合物M6-4。
步骤3：化合物M6-6的制备
将450mg化合物M6-5溶解于6mL DMF中，0℃下分批加入271mg NaH，氮气保护下，60℃搅拌反应1hr后加入1.20g化合物M6-4，60℃搅拌反应1hr。TLC检测反应完全，加入30mL水淬灭反应，用EtOAc(25mL×2)和水(30mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得160mg化合物M6-6。
步骤4：化合物M6-7的制备
在0℃下将160mg化合物M6-6溶解于2mL DCE中，滴加入155mg ACE-Cl，RT搅拌反应2hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入4mL MeOH，反应升至80℃搅拌反应3hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入4mL DCM，242mg(B OC) 2O和239mg DIEA，RT搅拌反应12hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得25mg化合物M6-7。
步骤5：化合物M6的制备
由化合物M6-7制备化合物M6的步骤类似于由化合物M5-3到化合物M5的步骤。中间体化合物M7的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000016
步骤1：化合物M7-3的制备
将4.00g化合物M7-1溶解于50mL无水THF中，氮气置换三次，降温至-78℃，缓慢滴加入LDA的THF溶液(11.70mL，2.0M)，然后-78℃反应1hr，将化合物M7-2的THF(10mL)溶液缓慢滴加入上述反应液中，-78℃反应30mins，缓慢升至室温反应2hrs。TLC检测反应完全，用30mL饱和NH 4Cl溶液淬灭反应，加入50mL水，加EtOAc萃取(60mL×3)，合并有机相，用50mL饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得4.30g无色油状物M7-3。
步骤2：化合物M7-4的制备
将4.30g化合物M7-3溶解于THF/MeOH(40mL/40mL)中，加入NaOH水溶液(20mL，2.4N)，加热至80℃反应18hrs。TLC检测反应完全，反应液冷却至室温，减压浓缩蒸除有机溶剂，残余物用浓盐酸调至pH为3-4，过滤，滤饼用水(10mL×3)洗涤，将滤饼进 行真空干燥得白色固体3.40g化合物M7-4。
步骤3：化合物M7-5的制备
将3.40g化合物M7-4溶解于40mL PPA中，升温至120℃反应2hrs。TLC检测反应完全，将反应液缓慢滴加入200mL碎冰中，用2.4N NaOH水溶液调至pH为9-10，加入4.40g(B OC) 2O，RT搅拌反应18hrs。TLC检测反应完全，加EtOAc萃取(100mL×3)，合并有机相，用100mL饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得2.40g白色固体M7-5。
步骤4：化合物M7的制备
由化合物M7-5制备化合物M7的步骤类似于由化合物M5-3到化合物M5的步骤。中间体化合物M8的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000017
步骤1：化合物M8-2的制备
将10.00g化合物M8-1溶于100mL MeOH中，加入2.0mL浓硫酸，加热70℃反应3hrs。反应完毕后，旋干溶剂，加20mL水，用饱和Na 2CO 3水溶液调至pH＝9，EtOAc(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得9.23g白色固体，即化合物M8-2。
步骤2：化合物M8-3的制备
将9.23g化合物M8-2溶于150mL MeOH中，冰浴冷至0℃，分批加入6.97g NaHB 4，自然升温至RT反应5hrs。反应完毕后，加入20mL饱和NH 4Cl溶液，旋干溶剂，加入EtOAc(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得6.40g 无色液体，即化合物M8-3。
步骤3：化合物M8-4的制备
氮气保护下，将3.00g化合物M8-3溶于50mL二氯甲烷中，反应液降温至-15℃，加入2.81mL NEt 3，然后滴加1.04mL的MsCl溶液，滴加完毕后，升温至0℃反应1hr。反应完毕后，加入水分层，有机相用20mL饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得4.05g白色固体的化合物M8-4。
步骤4：化合物M8-6的制备
氮气保护下，将3.39g化合物M8-5溶于20mL无水THF中，降温至-50℃，滴加1.71g LDA溶液，滴完后-50℃保温反应1hr后。滴加3.00g化合物M8-4的无水THF(10mL)溶液，滴毕，升温至RT反应1hr。反应完毕后，加入50mL食盐水，EtOAc(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得4.61g白色固体的化合物M8-6。
步骤5：化合物M8-7的制备
将4.61g化合物M8-6溶于8mL水和40mL MeOH中，加入2.07g NaOH。升温至65℃搅拌过夜。反应完毕后，加入30mL水，旋干溶剂甲醇，浓缩物用2N盐酸调至pH＝6，EtOAc(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得3.98g白色固体，即化合物M8-7。
步骤6：化合物M8-8的制备
氮气保护下，将3.98g化合物M8-7溶于20mL无水THF中，反应液降温至-15℃，分批加入NaH(60％，0.42g)，然后-15℃保温反应1hr，然后降温至-60℃，滴加正丁基锂(1.6M，7.8mL)，保温反应1hr。反应完毕，加入50mL水，用EtOAc(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得2.36g淡黄色固体，即化合物M8-8。
步骤7：化合物M8的制备
由化合物M8-8制备化合物M8的步骤类似于由化合物M5-3到化合物M5的步骤。中间体化合物M9的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000018
步骤1：化合物M9-3的制备
氮气保护下，将2.83g化合物M9-2溶解于50mL的无水THF中，降温至-78℃，滴加LDA(2M，6mL)的THF/Hex溶液。在-78℃保温1hr，然后将1.69g化合物M9-1的THF(3mL)溶液缓慢滴加到反应液中，滴完后-78℃下反应1hr。反应液用50mL饱和食盐水淬灭反应，EtOAc(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得1.44g淡黄色油状物化合物M9-3。
步骤2：化合物M9-4的制备
氮气保护下，将900mg化合物M9-3溶解于50mL无水THF中，降温至-78℃。滴加LDA(2M，3mL)的THF/Hex溶液。在-78℃保温反应1hr。反应液用50mL饱和食盐水淬灭反应，EtOAc(30mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得300mg淡黄色固体化合物M9-4。
步骤3：化合物M9的制备
由化合物M9-4制备化合物M9的步骤类似于由化合物M5-3到化合物M5的步骤。
经由不同的反应起始原料和合适的试剂，例如合成M11的起始原料为6-甲氧基-1-茚酮，采用与前述中间体5-9类似的方法制备表1的中间体化合物M10-M14。
表1
Figure PCTCN2020072773-appb-000019
Figure PCTCN2020072773-appb-000020
实施例1：化合物(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的制备
Figure PCTCN2020072773-appb-000021
步骤1：化合物1-2的制备
将2.00g化合物1-1溶解于40mL THF中，加入NaOH(30mL，1N)，然后RT反应2hrs。TLC检测反应完全，将反应液倒入100mL水中，用6N HCl调至pH为4-5，加EtOAc萃取(100mL×4)，合并有机相，用50mL饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物用正己烷打浆得1.67g淡黄色固体1-2。
步骤2：化合物1-3的制备
将1.28g化合物1-2溶解于13mL DMF中，降温0℃，加入3.26g Cs 2CO 3，然后滴加2.13g CH 3I，滴完后升温至10℃反应1hr。TLC检测反应完全，反应液降温至0℃，加入20mL EtOAc和20mL水，分出有机相，水相继续用20mL EtOAc萃取，合并有机相，饱和NaCl(5×4mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得635mg化合物1-3。
步骤3：化合物1-5的制备
将359mg化合物1-3和448mg化合物M5溶解于6mL DMAc中，加入860mg DIPEA，氮气置换三次，微波120℃反应1hr。TLC检测反应完全，将反应液冷却至室温，加20mL水，加EtOAc(20mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl(5mL×4)洗涤，无水硫酸钠干 燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得290mg化合物1-5。
步骤4：化合物1-6的制备
将250mg化合物1-5和127mg化合物M1溶解于8mL二氧六环中，加入18mg CuI，22mg TMEDA和293mg K 3PO 4，混合物通过氮气置换三次，加热至100℃反应48hrs。反应液冷却至室温，过滤，滤饼用EtOAc(10mL×3)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得153mg化合物1-6。
步骤5：化合物1的制备
将29mg化合物1-6溶解于0.5mL EtOAc和0.5mL MeOH中，加入0.1mL 2N HCl的MeOH溶液，RT反应2hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加NaHCO 3调至pH为7-8，用EtOAc(10mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得11.9mg化合物1。
[M+H +]＝469.16。
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6):δ8.12(s,1H),7.65(d,J＝5.5Hz,1H),7.32-7.31(m,1H),7.20-7.15(m,3H),6.27(s,2H),6.02(d,J＝5.5Hz,1H),3.87(s,1H),3.71-3.65(m,2H),3.41(s,3H),3.21-3.11(m,2H),3.04(d,J＝15.5Hz,1H),2.63(d,J＝15.5Hz,1H),1.92-1.87(m,1H),1.83-1.78(m,1H),1.56-1.54(m,1H),1.17-1.14(m,1H)。
实施例2：化合物(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的制备
Figure PCTCN2020072773-appb-000022
步骤1：化合物2-1的制备
向205mg化合物M11和150mg化合物1-3的二氧六环(2mL)溶液中加入215mg DIEA，60℃下搅拌2hrs。反应液减压蒸馏除去有机溶剂，粗品经Pre-TLC(PE:EtOAc＝1:1)分离纯化，得到180mg化合物2-1。
[M+H +]:571.10。
步骤2：化合物2-2的制备
氮气保护下，向160mg化合物2-1和61mg化合物M1的DMSO(2mL)溶液中加入179mg K 3PO 4，11mg CuI和13mg TMEDA，氮气置换三次，100℃下搅拌12hrs。反应液用20mL水稀释，EtOAc(20mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和NaCl水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经Pre-TLC(DCM:MeOH＝20:1)分离纯化，得到70mg化合物2-2。
[M+H +]＝603.28。
步骤3：化合物2的制备
0℃下，向70mg化合物2-2的二氧六环(3mL)溶液中滴加盐酸的甲醇溶液(2M,0.5mL)，25℃下搅拌1hr。反应液用饱和NaHCO 3水溶液调节pH为8-9，淬灭反应，EtOAc:THF＝5:1(10mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经Pre-TLC(DCM:MeOH＝20:1)分离纯化后接着用Pre-HPLC(碱性)分离纯化，得到12mg化合物2。
[M+H+]＝499.17
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.12(s,1H),7.65(d,J＝5.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.0Hz,1H),6.90(d,J＝2.5Hz,1H),6.70(dd,J＝8.0,2.5Hz,1H),6.27(s,2H),6.02(d,J＝5.5Hz,1H),3.82(s,1H),3.73(s,3H),3.70–3.62(m,2H),3.40(s,3H),3.21–3.07(m,2H),2.96(d,J＝15.0Hz,1H),2.53(d,J＝15.0Hz,1H),1.93–1.87(m,1H),1.82–1.76(m,1H),1.56–1.53(m,1H),1.14–1.12(m,1H)
实施例3：化合物(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的制备
Figure PCTCN2020072773-appb-000023
步骤1：化合物3-1的制备
向150mg化合物M10和208mg化合物1-3的二氧六环(2mL)溶液中加入215mg DIEA， 60℃下搅拌2hrs。反应液减压蒸馏除去有机溶剂，粗品经Pre-TLC(PE:EtOAc＝1:1)分离纯化，得到200mg化合物3-1。
[M+H +]:575.08。
步骤2：化合物3-2的制备
氮气保护下，将200mg化合物3-1和76.23mg化合物M1溶解于DMSO(2mL)中，加入221.53mg K 3PO 4，13.25mg CuI和16.17mg TMEDA，氮气置换三次，100℃下搅拌12hrs。反应液用20mL水稀释，EtOAc(20mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经Pre-TLC(DCM:MeOH＝20:1)分离纯化，得到95mg化合物3-2为棕色固体。
[M+H +]＝607.21。
步骤3：化合物3的制备
0℃下，向95mg化合物3-2的二氧六环(3mL)溶液中滴加盐酸的甲醇溶液(2M,0.5mL)，25℃下搅拌1hr。反应液用饱和NaHCO 3水溶液调节pH为8-9淬灭反应，用EA:THF＝5:1(10mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后浓缩，粗品经Pre-TLC(DCM:MeOH＝20:1)分离纯化后接着用Pre-HPLC(碱性)分离纯化，得到11mg化合物3。
[M+H +]:503.13。
经由不同的反应起始原料和合适的试剂，采用与前述实施例1-3类似的方法制备表2中的化合物4-化合物14、24。
表2
Figure PCTCN2020072773-appb-000024
Figure PCTCN2020072773-appb-000025
化合物6，8，9，10，12和24的核磁数据如下：
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6):δ8.46(d,J＝4.4Hz,1H),8.17(s,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.53(dd,J＝8.2,4.5Hz,1H),7.33(m,1H),7.20-7.15(m,3H),3.90(s,1H),3.75-3.60(m,2H),3.39(s,3H),3.22-3.13(m,3H),3.05(d,J＝15.6Hz,1H),2.65(d,J＝15.5Hz,1H),1.92-1.87(m,1H),1.83-1.79(m,1H),1.57-1.54(m,1H),1.20-1.17(m,1H)。(化合物6)
1H NMR(500MHz,CDCl 3):δ8.11(s,1H),7.72(d,J＝5.5Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.13(t,J＝7.5Hz,1H),6.14(d,J＝5.5Hz,1H),4.85(s,2H),4.08(s,1H),3.67-3.61(m,2H),3.55(s,3H),3.28-3.22(m,2H),3.11(d,J＝16.0Hz,1H),2.73(d,J＝16.0Hz,1H),2.03-1.97(m,1H),1.93-1.87(m,1H),1.70-1.68(m,1H),1.43-1.40(m,1H)。(化合物8)
1H NMR(500MHz,CDCl 3):δ8.10(s,1H),7.74(d,J＝5.4Hz,1H),7.60(s,1H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),6.18(d,J＝5.4Hz,1H),4.08(s,1H),3.71-3.60(m,2H),3.54(s,3H),3.2-3.17(m,2H),3.13(d,J＝16.0Hz,1H),2.76(d,J＝16.0Hz,1H), 2.03-1.99(m,1H),1.89-1.87(m,1H),1.69-1.67(m,1H),1.38-1.34(m,1H)。(化合物9)
1H NMR(500MHz,CDCl 3):δ8.11(s,1H),7.72(d,J＝5.5Hz,1H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),6.95(d,J＝7.5Hz,1H),6.76(d,J＝8.0Hz,1H),6.15(d,J＝5.5Hz,1H),4.85(s,2H),4.00(s,1H),3.84(s,3H),3.66-3.61(m,2H),3.54(s,3H),3.28-3.19(m,2H),3.05(d,J＝16.0Hz,1H),2.64(d,J＝16.0Hz,1H),2.00-1.94(m,1H),1.93-1.88(m,1H),1.69-1.66(m,1H),1.45-1.43(m,1H)。(化合物10)
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6):δ8.12(s,1H),7.65(d,J＝5.5Hz,1H),6.93(s,1H),6.80(s,1H),6.28(s,2H),6.02(d,J＝5.0Hz,1H),3.79(s,1H),3.73(s,3H),3.72(s,3H),3.68-3.65(m,2H),3.41(s,3H),3.20-3.12(m,2H),2.93(d,J＝15.5Hz,1H),2.56(d,J＝15.5Hz,1H),1.88-1.79(m,2H),1.54-1.52(m,1H),1.23-1.20(m,1H)。(化合物12)
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ8.12(s,1H),7.52(d,J＝5.3Hz,1H),7.36–7.31(m,1H),7.21-7.16(m,3H),6.16(s,2H),6.05(t,J＝5.1Hz,1H),3.93(s,1H),3.68-3.64(m,2H),3.40(s,3H),3.20-3.11(m,2H),3.05(d,J＝15.6Hz,1H),2.66(d,J＝15.7Hz,1H),1.92-1.78(m,2H),1.56-1.53(m,1H),1.21-1.18(m,1H).(化合物24)
实施例15：化合物(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的制备
Figure PCTCN2020072773-appb-000026
步骤1：化合物15-2的制备
将1.50g化合物15-1溶解于10mL无水DMF中，冰浴下将2.36g NBS分批加入上述溶液中，缓慢升至RT反应4hrs。LC-MS检测反应完全，将反应液倒入100mL水中，搅拌30mins，过滤，滤饼用水(15mL×3)洗涤，滤饼烘干得1.57g白色固体15-2。
步骤2：化合物15-4的制备
将1.57g化合物15-2和2.56g化合物15-3加入20mL二氧六环中，加入0.27g CuI，0.33g TMEDA和4.54g K 3PO 4，混合物氮气置换三次，加热100℃反应12hrs。反应液冷却至室 温，加入50mL MeOH过滤，滤饼用MeOH(10mL×5)洗涤，滤液减压浓缩，残余物经柱层析纯化得0.50g白色固体15-4。
步骤3：化合物15-5的制备
将200mg化合物15-4和288mg化合物M5溶解于5mL DMF中，加入832mg BOP，480mg DBU，RT搅拌反应4hrs。TLC检测反应完全，将反应液加入20mL水中，加EtOAc(20mL×3)萃取，合并有机相，饱和NaCl(20mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得69mg化合物15-5。
步骤4：化合物15的制备
将69mg化合物15-5溶解于2mL MeOH中，加入0.2mL的2N HCl的甲醇溶液，RT反应2hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加饱和NaHCO 3水溶液调至pH为7-8，EtOAc(10mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得44mg化合物15。
[M+H +]:502.10。
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6):δ7.35-7.1(m,2H),7.22-7.15(m,4H),6.72-6.70(m,1H),3.89(s,1H),3.57-3.51(m,2H),3.29(s,3H),3.09-2.99(m,2H),2.64(d,J＝15.0Hz,1H),2.53(d,J＝15.0Hz,1H),1.89-1.86(m,1H),1.81-1.76(m,1H),1.55-1.52(m,1H),1.17-1.14(m,1H)。
实施例16：化合物(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000027
步骤1：化合物16-2的制备
将0.50g化合物16-1和1.19g化合物M5溶解于15ML无水N,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴下依次加入3.13g苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐、3.78g DBU，在室温下搅拌反应18小时。LCMS检测反应完全，加入25mL水，再用DCM(20mL×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水(20mL×3)洗涤，用无水硫酸钠干燥后脱溶，经柱层析 纯化(DCM:MeOH＝95％-92％)得0.59g化合物16-2。
步骤2：化合物16-3的制备
氮气保护下，将0.59g化合物16-2溶解于10mL无水N,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴下，将0.39g N-碘代丁二酰亚胺加入上述反应液中。TLC检测反应完全，加入15mL水，再用DCM(20mL×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水(10mL×3)洗涤，用无水硫酸钠干燥后脱溶，经柱层析纯化(DCM:MeOH＝95％-92％)得0.42g化合物16-3。
步骤3：化合物16-4的制备
依次将300mg化合物16-3，198mg化合物M1溶解于5mL的1,4-二氧六环中，加入25mg TMEDA，344mg K 3PO 4和21mg CuI，氮气保护95℃下搅拌反应24hrs。LCMS检测反应完全，将反应液过滤，减压浓缩，残余物用制备板纯化得77mg白色固体化合物16-4。
步骤4：化合物16的制备
将77mg化合物16-4，溶于3mL二氧六环中，滴加盐酸甲醇溶液(2N,0.3mL)，TLC跟踪反应。反应完全后，减压除去溶剂，用少量正己烷固化后，倾倒掉正己烷，加入2.0mL水溶解固体，再滴入饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝9-10，析出固体。过滤，滤饼用少量水洗涤后，真空干燥得到33.6mg白色固体化合物16。
[M+H +]＝484.17。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.62(d,J＝5.4Hz,1H),7.31(d,J＝6.9Hz,1H),7.19–7.13(m,3H),6.15(s,2H),5.97(d,J＝5.4Hz,1H),3.86(s,1H),3.56–3.49(m,2H),3.25(s,3H),3.10–2.98(m,3H),2.61(d,J＝15.6Hz,1H),1.91–1.81(m,1H),1.82–1.76(m,1H),1.54–1.52(m,1H),1.19–1.12(m,1H)。
实施例17：化合物17的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000028
步骤1：化合物17-2的制备
氮气保护下，将7.30g化合物17-1和6.77g化合物M1-2溶解于100mL二氧六环中，加入1.55g Pd 2(dba) 3，1.95g Xantphos和14.57g DIEA,升温至100℃反应16hrs。TLC检测反应完全，反应液浓缩，加入100mL乙酸乙酯和50mL水分层，分出有机相，水相继续用50mL乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物50mL(PE:EA＝4:1)打浆，得淡黄色固体8.5g化合物17-2，直接用于下一步。
步骤2：化合物17-3的制备
将8.5g化合物17-2溶解于30mL二氯甲烷中，RT下滴加EtONa(16.27g，20％的EtOH溶液)，RT搅拌反应0.5hrs。TLC检测反应完全，减压浓缩，加入10mL的二氯甲烷搅拌30mins，反应液过滤，滤饼用二氯甲烷(15mL×2)洗涤，得到类白色固体4g化合物17-3，直接用于下一步。
步骤3：化合物17-4的制备
氮气保护下，将44mg化合物18-2和23mg化合物17-3溶解于2mL二氧六环中，加入5.8mg CuI，7.1mg TMEDA和48.8mg K 3PO 4,升温至100℃反应48hrs。TLC检测反应完全，浓缩，残余物经制备薄层色谱法纯化得8.5mg白色化合物17-4。
步骤3：化合物17的制备
氮气氛围下，将8.5mg化合物17-4溶解于1.5mL二氧六环中和0.5mL MeOH中，加入盐酸甲醇溶液(2N,0.3mL)，RT搅拌反应1hrs，TLC检测反应完全，反应液减压浓缩。残余物加入H 2O(2mL)溶解，用饱和NaHCO 3调节溶液至pH＝8，固体析出，过滤，滤饼用H 2O(2mL)洗涤，取滤饼真空干燥得2.8mg类白色固体化合物17。
[M+H +]＝469.25。
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ7.88(d,J＝5.4Hz,1H),7.21-7.18(m,1H),7.10(d,J＝9.0Hz,1H),6.97-6.94(m,1H),6.54(s,2H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),3.88(s,1H),3.56–3.46(m,2H),3.28(s,3H),3.07–2.93(m,3H),2.63(d,J＝15.6Hz,1H),1.92–1.87(m,1H),1.80–1.75(m,1H)1.56–1.51(m,1H),1.14–1.12(m,1H).
中间体化合物18-2的制备：
化合物18-2的合成参考化合物16-3的制备方法。
中间体化合物19-6的制备：
Figure PCTCN2020072773-appb-000029
步骤1：化合物19-3的制备
将33.00g化合物19-1溶解于400mL无水THF中，氮气置换三次，降温至-78℃，缓慢滴加入LDA的THF溶液(64.00mL，2.0M)，然后-78℃反应1hr，将化合物19-2的THF(50mL)溶液缓慢滴加入上述反应液中，-78℃反应30mins，缓慢升至室温反应18hrs。TLC检测反应完全，用200mL饱和NH 4Cl溶液淬灭反应，加入150mL水，加EtOAc萃取(200mL×3)，合并有机相，用200mL饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得34.31g无色油状物19-3。
步骤2：化合物19-4的制备
将34.31g化合物19-3溶解于二氧六环/MeOH(400mL/160mL)中，加入NaOH水溶液(80mL，6N)，加热至100℃反应18hrs。TLC检测反应完全，反应液冷却至室温，减压浓缩蒸除有机溶剂，残余物用浓盐酸调至pH为3-4，过滤，滤饼用水(80mL×3)洗涤，将滤饼进行真空干燥得白色固体28.00g化合物19-4。
步骤3：化合物19-5的制备
将28.00g化合物19-4溶解于200mL PPA中，升温至120℃反应0.5hrs。TLC检测反应完全，将反应液缓慢滴加入400mL碎冰中，用2.4N NaOH水溶液调至pH为9-10，加入23.30g(Boc) 2O，RT搅拌反应1hrs。TLC检测反应完全，加EtOAc萃取(150mL×3)，合并有机相，用200mL饱和NaCl洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物经柱层析纯化得8.50g白色固体19-5和900mg白色固体20-1。
步骤4：化合物19-6的制备
由化合物19-5制备化合物19-6的步骤类似于由化合物M5-3到化合物M5的步骤。
由化合物20-1制备化合物20-2的步骤类似于由化合物M5-3到化合物M5的步骤
经由不同的反应起始原料和合适的试剂，采用与前述实施例16类似的方法制备表4 中的化合物18-化合物20、化合物25-化合物27。
表4
Figure PCTCN2020072773-appb-000030
化合物18-化合物20、化合物25-化合物27的核磁数据分别如下：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.62(d,J＝5.4Hz,1H),7.22-7.19(m,1H),7.11(d,J＝9.0Hz,1H),6.99-6.95(m,1H),6.15(s,2H),5.97(d,J＝5.4Hz,1H),3.91(s,1H),3.57-3.50(m,2H),3.28(s,3H),3.03-2.97(m,3H),2.60(d,J＝15.6Hz,1H),1.92-1.88(m,1H),1.80-1.76(m1H),1.56-1.54(m,1H),1.16-1.14(m,1H).(化合物18)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.62(d,J＝5.4Hz,1H),7.31(d,J＝6.9Hz,1H),7.02–6.96(m,2H),6.15(s,2H),5.97(d,J＝5.4Hz,1H),3.82(s,1H),3.55–3.49(m,2H),3.28(s,3H),3.06–2.97(m,3H),2.61(d,J＝16.1Hz,1H),1.89–1.83(m,1H),1.81–1.76(m,1H),1.55–1.52(m,1H),1.16–1.13(m,1H).(化合物19)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝5.2Hz,1H),7.22(d,J＝7.0Hz,1H),7.05– 7.03(m,1H),6.96–6.93(m,1H)，6.16(s,2H),5.97(d,J＝5.2Hz,1H),4.08(s,1H),3.49–3.39(m,2H),3.28(s,3H),3.19–3.08(m,3H),2.76(d,J＝16.0Hz,1H),2.02–1.90(m,2H),1.62–1.59(m,1H),1.44–1.41(m,1H).(化合物20)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.62(d,J＝5.4Hz,1H),7.08–7.02(m,2H),5.97(d,J＝5.4Hz,1H),4.10(s,1H),3.51–3.38(m,2H),3.28(s,3H),3.20–3.12(m,2H),2.94(d,J＝15.6Hz,1H),2.80(d,J＝15.6Hz,1H),2.03–1.88(m,1H),1.62–1.57(m,1H),1.47–1.44(m,1H),1.24–1.19(m,1H).(化合物25)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.62(d,J＝5.3Hz,1H),7.33(s,1H),7.21–7.17(m,2H),6.14(s,2H),5.97(d,J＝5.3Hz,1H),3.87(s,1H),3.56–3.49(m,2H),3.28(s,3H),3.06–2.96(m,3H),2.58(d,J＝15.7Hz,1H),1.92–1.87(m,1H),1.79–1.74(m,1H),1.56–1.53(m,1H),1.12–1.09(m,1H).(化合物26)
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ7.88(d,J＝5.2Hz,1H),7.32(d,J＝6.9Hz,1H),7.19-7.13(m,3H),6.53(s,2H),6.05(d,J＝5.3Hz,1H),3.87(s,1H),3.55-3.51(m,2H),3.29(s,3H),3.09–2.96(m,3H),2.61(d,J＝15.7Hz,1H),1.91-1.86(m,1H),1.81-1.76(m,1H),1.54-1.52(m,1H),1.16-1.13(m,1H).(化合物27)
对照例
按照WO2018172984中的EXAMPLE 48所描述的方法，制备如下对照例。
Figure PCTCN2020072773-appb-000031
药理试验
实施例A：SHP2变构抑制酶活测定
SHP2通过双-酪氨酰-磷酰化的肽与其Src同源2(SH2)结构域的结合而变构活化。该在后的活化步骤导致SHP2的自动抑制界面的释放，这又使该SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)活化并可用于底物识别和反应催化。在迅速荧光测定版式中使用替代物DiFMUP监测SHP2的催化活性。
试验步骤：
(1)化合物配制：
用100％DMSO将本发明化合物(10mM储液)稀释成合适倍数，本发明化合物最终测试浓度为10μM、3.3333μM、1.1111μM、0.3704μM、0.1235μM、0.0412μM、0.0137μM、0.0046μM、0.0015μM、0.00μM；
(2)准备酶反应工作液：
在室温下在96孔黑色聚苯乙烯板(平底、低凸缘、非结合表面)(PE,Cat#6005270)中，使用50μL的最终反应体积和以下测定缓冲条件进行磷酸酶酶活检测：60mM的HEPES，75mM NaCl，75mM KCl，0.05％BRIJ-35，1mM EDTA，5mM DTT。
(3)酶催化反应及数据监测：
取5μL的本发明化合物加到对应的96孔板中，设置不加化合物和酶只加缓冲液的做为空白试验孔。将SHP2 Activating Peptide(IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222)置于冰上融化，每孔加入25uM，然后取0.2ng SHP2蛋白样品加到对应孔板中，室温孵育1小时。加入替代底物DiFMUP(Invitrogen，Cat#D6567)加入反应，室温反应2小时后。采用分别使用340nm和450nm的激发波长和发射波长的酶标仪(Envision，Perki Elmer)监测荧光信号。
(4)数据分析：
计算公式：
抑制率％＝[1-(Conversion_ sample-Conversion_ min)/(Conversion_ max-Conversion_ min)]×100％
其中：Conversion_sample是样品的转化率读数；Conversion_min是空白对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；Conversion_max是阳性对照孔比值均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。采用分析软件GraphPad Prism的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，并计算化合物对酶活性的IC 50值。
部分实施例的IC 50数据如表3所示。
表3
Figure PCTCN2020072773-appb-000032
Figure PCTCN2020072773-appb-000033
本发明的化合物对SHP2磷酸酶具有变构抑制作用。
实施例B：细胞增殖试验
使用体外细胞试验评估本发明的化合物对肺鳞癌细胞KYSE-520细胞和白血病细胞MV-4-11细胞增殖的影响。试验中所用的检测方法是CELL TITER-GLO(CTG)发光法，该法可通过对ATP进行定量测定来检测活细胞数目。因为ATP参与生物体内多种酶促反应，是活细胞新陈代谢的一个指标，其含量直接反应了细胞的数量及细胞状态，实验过程中向细胞培养基加入CellTiter-Glo TM试剂，测量发光值，发光值与ATP量成正比，而ATP又和活细胞数正相关，因此可通过检测ATP含量考察细胞活力。
试验步骤：
(1)细胞铺板：
取一瓶对数生长期的KYSE-520细胞，消化重悬细胞后计数，调整细胞密度后接种到96孔板中，每孔接种1000个细胞，孔板置于37℃、5％CO 2的培养箱中培养24hrs后加入本发明化合物进行处理；
取一瓶对数生长期的MV-4-11细胞，消化重悬细胞后计数，调整细胞密度后接种到96孔板中，每孔接种4000个细胞，孔板置于37℃、5％CO 2的培养箱中培养24hrs后加入本发明化合物进行处理。
(2)细胞化合物处理：
配取适量本发明化合物进行细胞处理，化合物终浓度从高至低依次为1000nM、333.3nM、111.1nM、37.04nM、12.35nM、4.115nM、1.372nM、0.4572nM、0.1524nM、0nM，孔板放入37℃,5％CO 2培养箱培养120hrs。只加培养基不加细胞孔设为调零组；化合物浓度为0nM组为空白组。
(3)CTG检测：
细胞培养120hrs后每孔加入50μL的
Figure PCTCN2020072773-appb-000034
Luminescent Cell Viability Assay溶液，轻轻震荡2mins，室温继续孵育10mins，在多功能酶标仪上读取各孔的检测数值。
(4)数据分析：
根据发光值读数计算抑制率，
抑制率％＝(1-(给药组值-调零组值)/(空白组值-调零组值)*100
GraphPad Prism的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线并计算化合物抑制细胞增殖的IC 50。部分实施例化合物的实验数据如表5所示。
表5
Figure PCTCN2020072773-appb-000035
本发明的化合物对KYSE-520细胞的增殖和MV-4-11细胞的增殖具有良好的抑制作用。
实施例C：hERG钾离子通道的抑制试验
采用全细胞膜片钳技术检测待测化合物对hERG通道的阻断作用。
细胞培养
hERG钾通道稳定表达的HEK293细胞系在含有10％胎牛血清及0.8mg/mL G418的DMEM培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5％。
细胞传代：除去旧培养基并用PBS洗一次，然后加入1mL TrypLE TM Express溶液，37℃孵育0.5分钟。当细胞从皿底脱离，加入5mL 37℃预热的完全培养基。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中，1000rpm离心5分钟收集细胞。扩增或维持培养，将细胞接种于6厘米细胞培养皿，每个细胞培养皿，接种细胞量为2.5*105 cells(最终体积：5mL)。
为维持细胞的电生理活性，细胞密度必须不能超过80％。
膜片钳检测，实验之前细胞用TrypLE TM Express分离，将3*103细胞铺到盖玻片上，在24孔板中培养(最终体积：500μL)，18个小时后，进行实验检测。
细胞内外液
细胞外液:140mM NaCl,3.5mM KCl,1mM MgCl 2·6H 2O,2mM CaCl 2,10mM D-葡萄糖,10mM HEPES,1.25mM NaH 2PO 4,NaOH调节pH＝7.4。
细胞内液:20mM KCl,115mM K-Aspartic,1mM MgCl 2·6H 2O,5mM EGTA,10mM HEPES,2mM Na 2-ATP,KOH调节pH＝7.2。
化合物的配制
用细胞外液将被测化合物储液进行稀释，配成10μΜ工作液，或者梯度稀释为0.3μΜ,1μΜ,3μΜ,10μM,30μM溶液。
目测被测化合物的溶解性，被测化合物全部溶解没有肉眼可见的沉淀。
西沙必利(阳性对照)
将称量出的1.2mg西沙必利用243μL DMSO配制成10mM的储液。
将西沙必利储液用DMSO依次以10倍的稀释倍数由高到低稀释至10μM的稀释液。
用细胞外液将10μM西沙必利稀释液进行稀释，配成10nΜ工作液。
目测西沙必利的溶解性，西沙必利全部溶解没有肉眼可见的沉淀。
实验方法参照：
全细胞膜片钳记录全细胞hERG钾电流的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于-80mV。钳制电压由-80mV除极至-50mV维持0.5秒，然后阶跃至30mV维持2.5秒，再迅速恢复至-50mV维持4秒可以激发出hERG通道的尾电流。每隔10秒重复采集数据，观察药物对hERG尾电流的作用。以0.5秒的-50mV刺激为漏电流检测。实验数据由EPC-10放大器(HEKA)进行采集并储存于PatchMaster(HEKA)软件中。
用微电极拉制仪将毛细玻璃管拉制成记录电极。在倒置显微镜下操纵微电极操纵仪将记录电极接触到细胞上，给予负压抽吸，形成GΩ封接。形成GΩ封接后进行快速电容补偿，然后继续给予负压，吸破细胞膜，形成全细胞记录模式。然后进行慢速电容的补偿并记录膜电容及串联电阻。不给予漏电补偿。
当全细胞记录的hERG电流稳定后开始给药，每个药物浓度作用至5分钟(或者电流至稳定)。将铺有细胞的盖玻片置于倒置显微中的记录浴槽中，测试化合物以及不含化合物的外液利用重力灌流的方法依次流经记录浴槽从而作用于细胞，在记录中利用真空泵进行液体交换。每一个细胞在不含化合物的外液中检测到的电流作为自己的对照组。独立重复检测多个细胞。所有电生理实验在室温下进行。
数据质量标准
以下标准用来判断数据是否可以接受：
(1)串联电阻≤20MΩ
(2)封接电阻≥1GΩ
(3)起始尾电流峰值≥400pA
(4)起始尾电流峰值大于激活电流峰值
(5)尾电流没有明显的自发性衰减(5分钟内自发性衰减小于5％)
(6)在膜电位为-80mV下无明显的漏电流(漏电流≤100pA)
数据分析
首先将每一个药物浓度作用后的电流和空白对照电流标准化
Figure PCTCN2020072773-appb-000036
然后计算每一个药物浓度对应的抑制率
Figure PCTCN2020072773-appb-000037
对每一个浓度计算平均数和标准误，并用以下的方程计算每种化合物的半抑制浓度：
Figure PCTCN2020072773-appb-000038
用以上方程对剂量依赖效应进行非线性拟合，其中c代表药物浓度，IC50为半抑制浓度，h代表希尔系数。曲线拟合以及IC 50的计算利用IGOR软件完成。
实施例化合物hERG测试结果见表6。
表6
编号 抑制率@10μM IC 50
对照例 95.12％ 1.94μM
化合物1 73.30％ 5μM
化合物2 65.08％ 6.9μM
化合物3 84.54％ /
化合物5 99.87％ /
化合物9 36.41％ /
化合物10 48.50％ /
化合物11 20.53％ /
化合物13 42.63％ /
化合物15 88.92％ /
化合物16 25.53％ >30μM
化合物24 54.50％ 13.6μM
注：“/”表示未测试。
我们出乎意料地发现，本发明的化合物在普遍对SHP2有较好的抑制活性的同时，当其通式I中A 3的位置为N而非C时，例如本发明具体实施例，化合物1、化合物2、化合物3、化合物9、化合物10、化合物11、化合物13、化合物16、化合物24对hERG有显著改善作用。
虽然本发明已通过其实施方式进行了全面的描述，但是值得注意的是，各种变化和修改对于本领域技术人员都是显而易见的。这样的变化和修改都应该包括在本发明所附权利要求的范围内。

Claims (45)

  1. 式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物，
    Figure PCTCN2020072773-appb-100001
    其中，
    R 1选自氢、羟基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基；
    R 2选自氢、C 1-4烷基或含取代基的C 1-4烷基；
    R 3选自氢、氨基、-C(O)NH 2、-C≡N、羟基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基或含取代基的C 1-8烷氧基；
    R 4选自氢、卤素、氨基、酰胺基、-C≡N、羧基、羟基、羟甲基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基；
    A 1任意地选自CR 5或N；
    A 2任意地选自CR 6或N；
    A 3任意地选自CR 7或N；
    U任意地选自C(R 8) 2、O或NR 9；
    其中，R 5、R 6、R 7、R 8或R 9独立地选自氢、卤素、氨基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 2-8烯基、含取代基的C 2-8烯基、C 2-8炔基或含取代基的C 2-8炔基；
    环A任意地选自C 6-10芳基或C 5-10杂芳基，所述C 5-10杂芳基含有一个或两个N或S杂原子；
    Rx任意地选自氢、卤素、氨基、含取代基的氨基、磺酰基、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基、C 1-8烷氧基、含取代基的C 1-8烷氧基、C 3-8环烷基或含取代基的C 3-8环烷基；
    n为0、1、2、3或4。
  2. 根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，A 3选自N。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R 1选自C 1-3烷基。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，R 1为甲基。
  5. 根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其特征在于，R 2选自氢或C 1-3烷基。
  6. 根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其特征在于，R 2为氢。
  7. 根据权利要求1-6任一项所述的化合物，其特征在于，R 3选自氢、氨基或C 1-3烷基。
  8. 根据权利要求1-7任一项所述的化合物，其特征在于，R 3为氢或氨基。
  9. 根据权利要求1-8任一项所述的化合物，其特征在于，R 4选自氢、卤素、氨基、C 1-3烷基或含取代基的C 1-3烷基。
  10. 根据权利要求1-9任一项所述的化合物，其特征在于，R 4为氢、氟或氯。
  11. 根据权利要求1-10任一项所述的化合物，其特征在于，R 4为氢、氯。
  12. 根据权利要求1-11任一项所述的化合物，其特征在于，A 1选自CR 5或N，其中R 5选自卤素或卤素取代的C 1-3烷基。
  13. 根据权利要求1-12任一项所述的化合物，其特征在于，A 1选自CR 5或N，其中R 5选自F、Cl或三氟甲基。
  14. 根据权利要求1-13任一项所述的化合物，其特征在于，A 1选自CR 5或N，其中R 5选自Cl或三氟甲基。
  15. 根据权利要求1-14任一项所述的化合物，其特征在于，A 2选自CR 6或N，其中R 6选自氨基或C 1-3烷氧基。
  16. 根据权利要求1-15任一项所述的化合物，其特征在于，A 2选自CR 6或N，其中R 6选自氨基或甲氧基。
  17. 根据权利要求1-16任一项所述的化合物，其特征在于，U选自CH 2或O。
  18. 根据权利要求1-17任一项所述的化合物，其特征在于，环A选自苯基或C 5-6杂芳基，所述C 5-10杂芳基含有一个或两个N或S杂原子。
  19. 根据权利要求1-18任一项所述的化合物，其特征在于，环A选自苯基、
    Figure PCTCN2020072773-appb-100002
    Figure PCTCN2020072773-appb-100003
  20. 根据权利要求1-19任一项所述的化合物，其特征在于，
    Figure PCTCN2020072773-appb-100004
    任意地选自
    Figure PCTCN2020072773-appb-100005
  21. 根据权利要求1-20任一项所述的化合物，其特征在于，
    Figure PCTCN2020072773-appb-100006
    任意地选自
    Figure PCTCN2020072773-appb-100007
  22. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、互变异构体、溶剂化物、螯合物、非共价复合物或前体药物，其特征在于，所述化合物具有式II所示的结构，
    Figure PCTCN2020072773-appb-100008
    其中，
    R 1选自C 1-8烷基；
    R 2选自氢；
    R 3选自H或氨基；
    R 4选自氢或卤素；
    A 1选自CR 5；
    A 2选自CR 6；
    U选自C(R 8) 2；
    其中，R 5、R 6、R 8独立地选自氢、卤素、C 1-8烷基、含取代基的C 1-8烷基；
    环A任意地选自C 6-10芳基。
  23. 根据权利要求22所述的化合物，其特征在于，环A任意地被氢或C 1-8烷氧基取代。
  24. 根据权利要求22或23所述的化合物，其特征在于，环A任意地被选自氢或甲氧基取代。
  25. 根据权利要求22-24任一项所述的化合物，其特征在于，R 1为甲基。
  26. 根据权利要求22-25任一项所述的化合物，其特征在于，R 4为氢。
  27. 根据权利要求22-26任一项所述的化合物，其特征在于，U选自CH 2。
  28. 根据权利要求22-27任一项所述的化合物，其特征在于，R 5选自Cl。
  29. 根据权利要求22-28任一项所述的化合物，其特征在于，R 6选自NH 2。
  30. 根据权利要求22-29任一项所述的化合物，其特征在于，环A选自苯基。
  31. 一种化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
    (1)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (2)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (3)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (4)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (5)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (6)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基-5-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)嘧啶-4(3H)-酮；
    (7)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((6-氨基-3-氯吡啶-2-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (8)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (9)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (10)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (11)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (12)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (13)(S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (14)(S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (15)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2,3-二氯苯基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl)硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或
    (27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
  32. 一种化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
    (1)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (2)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (3)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (4)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (8)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-溴-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (9)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-(三氟甲基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (10)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (11)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-2-(5-氨基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (12)(S)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5,6-二甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (13)(S)-2-(4-氨基-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (14)(S)-2-(5-氨基-2-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (16)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (17)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (18)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-yl)硫代)-2-(1-氨基-6-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (19)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-5-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (20)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-7-氟代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (24)(S)-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (25)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-4,7-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；
    (26)(S)-6-氨基-5-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫代)-2-(1-氨基-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮；或
    (27)(S)-6-氨基-2-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-5-((2-氨基嘧啶-4-基)硫代)-3-甲基嘧啶-4(3H)-酮。
  33. 一种药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的至少一种权利要求1-32任一项所述的化合物和至少一种药学上可接受的辅料。
  34. 根据权利要求33所述的药物组合物，其特征在于，所述的化合物和药学上可接受的辅料的质量百分比为0.0001:1-10。
  35. 权利要求1-34任一项所述的化合物或权利要求33或34所述的药物组合物在制备药物中的应用。
  36. 根据权利要求35所述的应用，其特征在于，所述药物用于治疗、预防、延迟或阻止癌症，癌症转移，心血管疾病，免疫疾病，纤维化或眼部疾病。
  37. 权利要求1-34任一项所述的化合物或权利要求33或34所述的药物组合物在制备治疗由SHP2介导的疾病的药物中的应用。
  38. 根据权利要求37所述的应用，其特征在于，所述疾病是癌症。
  39. 根据权利要求37或38所述的应用，其特征在于，所述癌症选自Noonan综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胃癌、胰腺癌或其组合。
  40. 根据权利要求39所述的应用，其特征在于，所述的药物用作SHP2抑制剂。
  41. 一种治疗和/或预防由SHP2介导的疾病的方法，其特征在于，向治疗对象施用治疗有效量的权利要求1-32任一项所述的化合物或权利要求33或34所述的药物组合物。
  42. 根据权利要求41所述的方法，其特征在于，所述SHP2介导的疾病是癌症。
  43. 根据权利要求42所述的方法，其特征在于，所述癌症选自Noonan综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性 髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胃癌、胰腺癌或其组合。
  44. 一种治疗癌症的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的权利要求1-32任一项所述的化合物或权利要求33或34所述的药物组合物，其特征在于，所述癌症是Noonan综合征、豹斑综合征、青少年髓单核细胞白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌、急性髓性白血病、乳腺癌、食道肿瘤、肺癌、结肠癌、头癌、胃癌、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、胃癌、胰腺癌或其组合。
  45. 根据权利要求41-44任一项所述的方法，其特征在于，所述治疗对象为人类。
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