WO2019240296A1 - 組織治癒剤 - Google Patents
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
- A61L2300/414—Growth factors
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- A61L2300/426—Immunomodulating agents, i.e. cytokines, interleukins, interferons
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61L2300/43—Hormones, e.g. dexamethasone
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/28—Materials or treatment for tissue regeneration for liver reconstruction
Definitions
- the present invention relates to a pharmaceutical composition for tissue healing and a method for producing the same. Specifically, the present invention relates to a tissue healing agent containing mesenchymal tissue-derived adherent cells treated with a drug or a culture supernatant thereof, and a method for producing the same.
- mesenchymal tissue-derived cells are useful for tissue healing.
- mesenchymal stem cells MSC
- MSC mesenchymal stem cells
- ASC adipose tissue
- ADMPC Adipose tissue-derived multilineage progenitor cells
- mesenchymal tissue-derived cells have been shown to be useful in regenerative medicine including tissue healing, further improvement in their healing ability is desired.
- mesenchymal tissue-derived adherent cells treated with a bioactive polypeptide or LPS (lipopolysaccharide) or the tissue healing ability of the culture supernatant thereof. was found to be extremely high, and the present invention was completed.
- a pharmaceutical composition for tissue healing comprising adherent cells derived from mesenchymal tissue or a culture supernatant thereof treated with a physiologically active polypeptide or LPS, and a pharmaceutically acceptable carrier.
- the physiologically active polypeptide is one or more polypeptides selected from the group consisting of inflammatory cytokines, inflammatory cytokine-derived polypeptides, growth factors, chemokines, hormones and interferons Pharmaceutical composition.
- the physiologically active polypeptide is interferon- ⁇ (IFN- ⁇ ), interferon gamma (IFN ⁇ ), interleukin-1 alpha (IL-1 ⁇ ), interleukin-1 beta (IL-1 ⁇ ), interleukin-17A (IL-17A), tumor necrosis factor alpha (TNF ⁇ ), tumor necrosis factor beta (TNF ⁇ ), type I interferon (INF-I), transforming growth factor ⁇ (TGF ⁇ ), epidermal growth factor (EGF) and fibroblasts
- IFN-I interferon- ⁇
- TGF ⁇ tumor necrosis factor alpha
- TGF ⁇ transforming growth factor beta
- EGF epidermal growth factor
- FGF growth factors
- Mesenchymal tissue-derived adhesive cells are mesenchymal tissue-derived stem cells (MSC), adipose tissue-derived multilineage progenitor cells (ADMPC), cells derived from placenta tissue, cells derived from umbilical cord tissue, sarcolemma tissue
- MSC mesenchymal tissue-derived stem cells
- ADMPC adipose tissue-derived multilineage progenitor cells
- the pharmaceutical composition according to any one of (1) to (3), which is a cell derived from a bone marrow, a bone marrow tissue, or a cell derived from a synovial tissue.
- the tissue healing is tissue protection, repair of tissue / cell damage, promotion of proliferation of cells constituting the tissue, suppression of inflammation of the tissue, or reconstruction of the shape of the tissue (1) to (4) Pharmaceutical composition.
- tissue healing is tissue healing in a chronic disease.
- a method for producing a pharmaceutical composition for tissue healing comprising the following steps: (A) treating mesenchymal tissue-derived adherent cells with a bioactive polypeptide or LPS; (B) A method comprising mixing the cell treated in step (a) or a culture supernatant thereof with a pharmaceutically acceptable carrier.
- the physiologically active polypeptide is one or more polypeptides selected from the group consisting of inflammatory cytokines, inflammatory cytokine-derived polypeptides, growth factors, chemokines, hormones and interferons Method.
- the physiologically active polypeptide is interferon- ⁇ (IFN- ⁇ ), interferon gamma (IFN ⁇ ), interleukin-1 alpha (IL-1 ⁇ ), interleukin-1 beta (IL-1 ⁇ ), interleukin-17A (IL-17A), tumor necrosis factor alpha (TNF ⁇ ), tumor necrosis factor beta (TNF ⁇ ), type I interferon (INF-I), transforming growth factor ⁇ (TGF ⁇ ), epidermal growth factor (EGF) and fibroblasts
- FGF growth factors
- Mesenchymal tissue-derived adherent cells are mesenchymal tissue-derived stem cells (MSC), adipose tissue-derived multilineage progenitor cells (ADMPC), cells derived from placenta tissue, cells derived from umbilical cord tissue, sarcolemma tissue 10.
- MSC mesenchymal tissue-derived stem cells
- ADMPC adipose tissue-derived multilineage progenitor cells
- cells derived from placenta tissue cells derived from umbilical cord tissue, sarcolemma tissue 10.
- the cell is derived from a bone marrow, a bone marrow tissue or a synovial tissue.
- the tissue healing is tissue protection, repair of tissue / cell damage, promotion of proliferation of cells constituting the tissue, suppression of inflammation of the tissue, wound healing, or reconstruction of the tissue shape The method described in 1.
- (12) The method according to any one of (7) to (11), wherein the tissue healing is tissue healing in a chronic disease.
- a pharmaceutical composition with extremely high tissue healing ability can be obtained.
- the pharmaceutical composition of the present invention is useful for tissue healing in chronic tissue injury or the like.
- FIG. 1 is a diagram comparing adiponectin production (left) of adipose tissue-derived multilineage progenitor cells (ADMPC) treated with IL-1 ⁇ and adiponectin production (right) of ADMPC not treated with IL-1 ⁇ . It is. The vertical axis shows the amount of adiponectin produced.
- FIG. 2 is a diagram comparing the amount of hepatocyte growth factor (HGF) produced by ADMPC treated with IL-1 ⁇ (left) and the amount of HGF produced by ADMPC not treated with IL-1 ⁇ (right). The vertical axis represents the amount of HGF produced.
- HGF hepatocyte growth factor
- FIG. 3 is a Sirius red-stained tissue section image showing reduction of intrahepatic fibers by ADMPC treated with IL-1 ⁇ in a non-alcoholic steatohepatitis (NASH) model mouse.
- the left is the result of the carrier administration group, the inside is the ADMPC administration group not treated with IL-1 ⁇ , and the right is the result of the ADMPC administration group treated with IL-1 ⁇ .
- the magnification is 50 times.
- FIG. 4 is a HE-stained tissue section image showing reduction of liver tissue injury by ADMPC treated with IL-1 ⁇ in non-alcoholic steatohepatitis (NASH) model mice.
- FIG. 5 shows reduction of liver tissue damage by ADMPC treated with IL-1 ⁇ and ADMPC not treated with IL-1 ⁇ in a non-alcoholic steatohepatitis (NASH) model mouse using NAFLDFActivity Score. It is the figure compared. p value is based on Mann-Whitney's' U test.
- FIG. 6 is a graph showing improvement in left ventricular ejection fraction by ADMPC treated with IL-1 ⁇ and ADMPC not treated with IL-1 ⁇ in a severe myocardial infarction model animal (pig).
- the vertical axis ( ⁇ EF%) represents the change (%) in the left ventricular ejection fraction before and after cell administration.
- the white bar represents the control group to which no cells were administered
- the hatched bar represents the group to which ADMPC not treated with IL-1 ⁇ was administered
- the black bar represents the group to which ADMPC treated with IL-1 ⁇ was administered.
- ADMPC + IL-1 ⁇ -treated ADMPC
- AM + placenta-derived cells
- BM + bone marrow-derived mesenchymal stem cells
- IL-1 ⁇ in chronic hepatitis model animals (rats).
- 3 is a graph showing the results of examining the reduction of liver tissue damage by ADMPC (ADMPC-), placenta-derived cells (AM-) and bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BM-).
- the vertical axis shows the area of the Sirius red stained region (fibrosis region).
- FIG. 8 shows bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BM +) and ADMPC (ADMPC +) treated with IL-1 ⁇ and bone marrow-derived mesenchyme not treated with IL-1 ⁇ in a severe myocardial infarction model animal (nude rat).
- FIG. 3 is a graph showing the results of examining the healing effect of heart tissue by systemic stem cells (BM-) and ADMPC (ADMPC-).
- the vertical axis represents the myocardial thickness after myocardial infarction.
- the p-values are as follows: control pair BM- 0.022479, control pair BM + 0.008113, BM- versus BM + 0.045328, control pair ADMPC- 0.008113, control pair ADMPC + 0.019964, ADMPC- pair ADMPC + 0.014214.
- FIG. 9 is a diagram showing a cut site of a formalin-fixed lung in Example 8.
- FIG. 10 is a graph showing the results of examining the healing effect of lung tissue by ADMPC treated with IL-1 ⁇ , its culture supernatant, and physiological saline in a pulmonary fibrosis model animal (mouse).
- the vertical axis is the score of lung fibrosis.
- the present invention relates to a medicament for tissue healing, comprising adhesive cells derived from mesenchymal tissue or a culture supernatant thereof treated with a bioactive polypeptide or LPS, and a pharmaceutically acceptable carrier.
- a composition is provided.
- the physiologically active polypeptide is a polypeptide that acts on a specific physiological regulatory function of a living body.
- Polypeptide refers to a substance in which two or more amino acid residues are bound via peptide bonds.
- LPS Various types of LPS are known, and any LPS may be used.
- the physiologically active polypeptide used in the present invention includes its mutants.
- a mutant of a physiologically active polypeptide has an activity capable of obtaining mesenchymal tissue-derived adherent cells or a culture supernatant thereof that can be used for tissue healing of the present invention when allowed to act on mesenchymal tissue-derived adherent cells. Is.
- a variant refers to a polypeptide in which the amino acid residues constituting the polypeptide are substituted, deleted, or added compared to the original peptide.
- the number of amino acid residues to be substituted, deleted or added is not particularly limited. For example, one to several amino acid residues may be substituted, deleted or added.
- the mutant polypeptide may have an amino acid sequence identity of 80% or more, preferably 90% or more, such as 95% or more 97% or 99% or more, relative to the original polypeptide.
- the mutant of the physiologically active polypeptide may be one in which an amino acid residue constituting the polypeptide is modified. The modification may be any kind of label.
- mutant of the physiologically active polypeptide may be one in which some amino acid residues are bound by other than peptide bonds.
- physiologically active polypeptide may be used in the present invention.
- Preferred physiologically active polypeptides used in the present invention are preferably one or more polypeptides selected from the group consisting of cytokines, in particular inflammatory cytokines, inflammatory cytokine-derived polypeptides, growth factors, hormones and interferons.
- Inflammatory cytokines are cytokines that are involved in the pathogenesis of inflammation.
- the inflammatory cytokine-inducing polypeptide is a polypeptide having an action of increasing the amount of inflammatory cytokine or enhancing its activity.
- Growth factors are polypeptides that promote the growth and differentiation of specific cells in the body.
- Chemokines are basic proteins that express their actions through G protein-coupled receptors and are a group of cytokines.
- Hormones are substances that are produced in vivo, transported through body fluids, and affect the activity of specific cells, tissues or organs.
- Interferons are a group of cytokines produced in response to the invasion of foreign substances such as viruses, pathogens, and tumor cells in vivo.
- Various inflammatory cytokines, inflammatory cytokine-inducing polypeptides, growth factors and interferons are known and any may be used.
- cytokines As cytokines, IL-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , IL-2 to IL-35, OSM (Oncostatin M), LIF, CNTF, CT-1, TNF- ⁇ , TNF- ⁇ , BAFF, FasL, RANKL, TRAIL
- Inflammatory cytokines include, but are not limited to, IL-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , IL-6, IL-8, IL-12, IL-18, TNF ⁇ and the like.
- inflammatory cytokine-inducing polypeptide examples include, but are not limited to, IL-17A and the like.
- Growth factors include activin A, ANGPTL5, BAFF, BD-2, BD-3, BNDF, BMP-1-7, DKK1, EGF, EG-VEGF, FGF-1-21, G-CSF, GM-CSF, HGF, IGF-1, IGF-2, platelet derived growth factor (PDGF) -AA, PDGF-AB, PDGF-BB, R-spondin-1 to 3, SCF, galectin-1 to 3, GDF-11, GDNF, Examples include, but are not limited to, pleiotrophin, TGF- ⁇ , TGF- ⁇ , TPO (thrombopoietin), TSLP, vascular endothelial growth factor (VEGF), and ciliary neurotrophic factor (CNTF).
- PDGF platelet derived growth factor
- TGF- ⁇ TGF- ⁇
- TPO thrombopoietin
- TSLP vascular endothelial growth factor
- VEGF vascular endothelial growth factor
- Chemokines include, but are not limited to, CCL1 to CCL28, CXCL1 to CXCL10, and the like.
- Hormones include: Calcitonin, Parathrone, Glucagon, Erythropoietin, Leptin, ANP, BNP, CNP, Oxytocin, Vasopressin, TRH (thyroid stimulating hormone releasing hormone), TSH (thyroid hormone releasing hormone), CRH (adrenal hormone releasing hormone) ACTH (adrenocorticotropic hormone), GRH (gonadotropin releasing hormone), FSH (follicle stimulating hormone), LH (luteinizing hormone), SOM (somatostatin), GRH (growth hormone releasing hormone), GH (growth hormone), Examples include, but are not limited to, PRH (prolactin releasing hormone), PIH (prolactin inhibitory hormone), Prolactin (prolactin) and the like. There.
- interferons examples include, but are not limited to, IFN- ⁇ , IFN- ⁇ , IFN- ⁇ , INF-I, and the like.
- Preferred physiologically active peptides used in the present invention are inflammatory cytokines, inflammatory cytokine-inducing polypeptides, growth factors and interferons.
- IFN- ⁇ , IFN- ⁇ , IL-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , IL-17A, TNF ⁇ , TNF- ⁇ , INF-I, TGF ⁇ , EGF, and FGF are exemplified, but not limited thereto.
- Tissue healing refers to returning the tissue to a normal state or bringing it close to a normal state.
- the cells in the pharmaceutical composition of the present invention or the culture supernatant thereof are useful for tissue protection and promotion of proliferation of cells constituting the tissue, the pharmaceutical composition of the present invention is useful for tissue healing in chronic diseases. Is preferably used.
- the tissue to be cured by the pharmaceutical composition of the present invention is any tissue of an animal and is not particularly limited.
- tissues include, but are not limited to, liver, pancreas, kidney, muscle, bone, cartilage, bone marrow, stomach, intestine, blood, nerve, skin, mucous membrane, heart, lung, hair and the like.
- Preferred tissues to be cured by the pharmaceutical composition of the present invention are liver, nerve, skin, mucous membrane, heart, lung and the like. Therefore, the pharmaceutical composition of the present invention is preferably used for the treatment of, for example, cirrhosis, hepatitis, NASH (non-alcoholic steatohepatitis), and is effective for diseases in the chronic phase.
- the cell or culture supernatant thereof as an active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention is an adherent cell derived from a mesenchymal tissue or a culture supernatant thereof treated with a bioactive polypeptide or LPS.
- the pharmaceutical composition of the present invention may be administered to a subject of the same species as the animal species from which the cell or culture supernatant as the active ingredient is derived, or may be administered to a different subject.
- the pharmaceutical composition of the present invention comprising human-derived mesenchymal tissue-derived adhesive cells or culture supernatant thereof treated with an inflammatory cytokine inducer may be administered to a human subject.
- the cells or the culture supernatant thereof in the pharmaceutical composition of the present invention may be derived from the same person as the subject to be administered, or may be derived from a person different from the subject to be administered. .
- Adherent cells derived from mesenchymal tissue may be commercially available and distributed from institutions such as American Type Culture Collection (ATCC) (USA), NITE (Japan), etc. Also good.
- mesenchymal tissue-derived adhesive cells may be obtained from mesenchymal tissue. Means and methods for obtaining mesenchymal tissue-derived adhesive cells from mesenchymal tissue are known.
- Preferred mesenchymal tissue-derived adhesive cells include mesenchymal tissue-derived stem cells (MSC) such as adipose tissue-derived stem cells (ASC), adipose tissue-derived multilineage progenitor cells (ADMPC), Muse cells, bone marrow tissue, placenta Examples include, but are not limited to, cells derived from tissue, umbilical cord tissue, amniotic tissue, cartilage tissue, periosteum tissue, synovial tissue, skeletal muscle tissue, sac coat tissue, stem cells and stromal cells, and menstrual cells.
- MSC mesenchymal tissue-derived stem cells
- ASC adipose tissue-derived stem cells
- ADMPC adipose tissue-derived multilineage progenitor cells
- Muse cells bone marrow tissue
- placenta include, but are not limited to, cells derived from tissue, umbilical cord tissue, amniotic tissue, cartilage tissue, periosteum tissue, synovial tissue
- mesenchymal tissues When cells are obtained from mesenchymal tissue, they may be isolated from any mesenchymal tissue.
- mesenchymal tissues include adipose tissue, bone marrow tissue, placenta tissue, umbilical cord tissue, amniotic tissue, cartilage tissue, periosteum tissue, synovial tissue, skeletal muscle tissue, sarcolemma tissue, menstrual blood, etc. It is not limited.
- Preferred mesenchymal tissues include adipose tissue, bone marrow tissue, synovial tissue, placenta tissue, umbilical cord tissue, and sac coat tissue.
- Adipose tissue is particularly preferable in that it contains a large amount of the body and can take out many cells.
- Adhesive cells can be obtained by taking out the mesenchymal tissue from the body, placing the tissue in a culture vessel and culturing, and selectively obtaining cells adhering to the vessel.
- the mesenchymal tissue can be extracted using a known means / method such as excision or suction.
- the extracted mesenchymal tissue may be cultured as it is, or if necessary, the extracted mesenchymal tissue may be chopped or parsed, and then the erythrocytes may be removed and the resulting cell population cultured. Good.
- These treatment methods and means, and cell culture means and methods are known and can be appropriately selected.
- Adherent cells derived from mesenchymal tissue may be obtained, for example, by treating cells attached to a culture container with an enzyme such as trypsin.
- adherent cells derived from mesenchymal tissue with a physiologically active polypeptide or LPS can be performed by contacting the cells with cytokines by a known method. Typically, this treatment can be performed by culturing adherent cells derived from mesenchymal tissue for a certain period of time in a medium containing an appropriate concentration of physiologically active polypeptide or LPS.
- adherent cells derived from mesenchymal tissue are cultured in a medium supplemented with inflammatory cytokines or inflammatory cytokines of several nanograms / ml to several hundred nanograms / ml.
- the medium used for the culture may be a known medium.
- the culture time and culture temperature can also be appropriately selected.
- the mesenchymal tissue-derived adhesive cells may be cultured to increase the number of cells, and then treated with a physiologically active polypeptide or LPS.
- a desired subpopulation may be obtained from a population of adherent cells derived from mesenchymal tissue, and the subpopulation may be cultured as necessary to increase the number of cells and then treated with a bioactive polypeptide or LPS. .
- physiologically active polypeptide or LPS used for treating adhesive cells derived from mesenchymal tissue may be used, or two or more types may be used.
- Adherent cells from mesenchymal tissue treated with a bioactive polypeptide or LPS are one or more factors that contribute to tissue repair (such as polypeptides, growth factors, and / or enzymes involved in tissue healing) Increases the expression and production of or becomes expressed and produced.
- factors include adiponectin, HGF, CSF2 (GM-CSF), CSF3 (G-CSF), LIF, MMP family factor, FGF family factor, ADAM family factor, angiopoietin-like protein family factor, pleiotrophin, Examples include, but are not limited to, R-spondin family factors and VEGF family factors.
- CSF2 and CSF3 contribute not only to the activation of hematopoietic stem cells but also to tissue repair by being involved in stem cell proliferation and / or angiogenesis in many tissues, organs and organs including brain, heart, lung and liver Therefore, cells that express and produce many of these factors are preferred.
- the increase in expression and production of the above factors may be, for example, 10 times or more, preferably 30 times or more, more preferably 50 times or more, and even more preferably 100 times or more compared to before the treatment.
- a culture supernatant of mesenchymal tissue-derived adhesive cells treated with a physiologically active polypeptide or LPS may be obtained by the following method.
- Mesenchymal tissue-derived adhesive cells are cultured in a medium containing a physiologically active polypeptide or LPS, and the culture supernatant is obtained.
- Adherent cells derived from mesenchymal tissue are cultured in a medium containing a physiologically active polypeptide or LPS, and the obtained cells are transferred to another medium and cultured to obtain a culture supernatant.
- the culture in the medium containing the physiologically active polypeptide or LPS may be performed in the same manner as the treatment with the physiologically active polypeptide or LPS described above.
- Cell culture conditions such as medium composition, culture time, culture temperature, and the like can be appropriately selected and changed according to the type of cells, the required number, usage, and the like.
- the culture supernatant may be concentrated using a known concentration method such as centrifugation, filter filtration, ammonium sulfate precipitation, or dry freezing.
- the pharmaceutical composition of the present invention can be produced by mixing adhesive cells derived from mesenchymal tissue treated with a physiologically active polypeptide or LPS as described above or a culture supernatant thereof with a pharmaceutically acceptable carrier. It can.
- a pharmaceutically acceptable carrier are known and can be appropriately selected and used.
- the pharmaceutical composition of the present invention when used as an injection, the cells may be suspended in a carrier such as purified water, physiological saline, or phosphate buffered physiological saline.
- the pharmaceutical composition containing the culture supernatant of the present invention is preferable in that it does not cause an event such as clogging of blood vessels or injection needles when administered.
- the dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, and may be a liquid, a semi-solid, or a solid.
- the administration method of the pharmaceutical composition of the present invention is not limited, and may be performed by local injection, intravenous injection, infusion, etc., may be applied to the affected area, may be administered to the affected area by a catheter, and surgery May be transplanted directly into a tissue such as the liver by a conventional technique.
- the pharmaceutical composition of the present invention may be transplanted in the form of a cell sheet, a cell mass, a stratified cell sheet or the like.
- the administration route and dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be appropriately determined in consideration of the type and site of tissue to be cured, the degree of disease, the condition of the subject, and the like.
- the pharmaceutical composition of the present invention may contain cells other than mesenchymal tissue-derived adhesive cells treated with a physiologically active polypeptide or LPS. Moreover, the pharmaceutical composition of the present invention may contain components other than the culture supernatant of adherent cells derived from mesenchymal tissue treated with a physiologically active polypeptide or LPS.
- the present invention provides the use of mesenchymal tissue-derived adherent cells or culture supernatants thereof treated with a bioactive polypeptide or LPS for the manufacture of a medicament for tissue healing.
- the present invention provides the use of mesenchymal tissue-derived adherent cells or culture supernatants thereof treated with a bioactive polypeptide or LPS for tissue healing.
- the present invention provides tissue healing in a subject in need of tissue healing, comprising administering to the subject an adherent cell derived from a mesenchymal tissue treated with a bioactive polypeptide or LPS or a culture supernatant thereof.
- tissue healing in a subject in need of tissue healing, comprising administering to the subject an adherent cell derived from a mesenchymal tissue treated with a bioactive polypeptide or LPS or a culture supernatant thereof.
- the present invention provides: A method for producing a pharmaceutical composition for tissue healing comprising the following steps: (A) treating mesenchymal tissue-derived adherent cells with a bioactive polypeptide or LPS; (B) A method comprising mixing the cell treated in step (a) or a culture supernatant thereof with a pharmaceutically acceptable carrier.
- the present invention provides a method for producing a cell for tissue healing, comprising treating an adhesive cell derived from a mesenchymal tissue with a physiologically active polypeptide or LPS.
- the present invention provides a method for treating cells for tissue healing, comprising treating adhesive cells derived from mesenchymal tissue with a bioactive polypeptide or LPS, and then obtaining a culture supernatant.
- a method for producing Qing is provided.
- Example 1 Treatment effect of ADMPC with IL-I ⁇ (1) Experimental method (i) Collection of adipose tissue from human subjects Provision of extra adipose tissue to be discarded during liposuction surgery from 6 women who received informed consent It was. The protocol was similar to Kobe University graduate School of Medicine Review Boards for Human Research.
- ADMPC is then seeded in human fibronectin-coated dishes in medium (60% DMEM-low glucose, 40% MCDB201, 10 ⁇ g / mL EGF, 1 nM dexamethasone, 100 ⁇ M ascorbic acid, and 5% FBS) for 3 to 8 passages. Instead, cultured ADMPC was obtained.
- IL-1 ⁇ treatment In a medium (60% DMEM-low glucose, 40% MCDB201, 10 ⁇ g / mL EGF, 1 nM dexamethasone, 100 ⁇ M ascorbic acid, and 5% FBS) so that IL-1 ⁇ is 10 ng / ml. Added. 2. above.
- the cultured ADMPC obtained in (1) above was cultured in the IL-1 ⁇ -containing medium for 72 hours, and adiponectin and hepatocyte growth factor (HGF) produced in the medium were measured.
- Adiponectin was measured using an abcam ELISA kit (catalog number ab99968).
- the measurement of HGF was performed using an ELISA kit (catalog number DHG00) manufactured by R & D System.
- ADMPC was cultured in the above medium to which no IL-1 ⁇ was added.
- FIG. 1 shows the measurement results of adiponectin production. While adiponectin production from ADMPC not treated with IL-1 ⁇ was not observed, it was confirmed that adiponectin was produced from ADMPC treated with IL-1 ⁇ .
- the measurement result of the amount of HGF production is shown in FIG. Compared with the amount of HGF produced from ADMPC not treated with IL-1 ⁇ , the amount of HGF produced from ADMPC treated with IL-1 ⁇ was increased by about 1.7 times.
- Example 2 In Vivo Tissue healing Effect of ADMPC Treated with IL-1 ⁇ -Reduction of Liver Tissue Injury (1) Experimental Method Example 1 of collecting adipose tissue from a human subject, isolation and culture of ADMPC, and IL-1 ⁇ treatment The IL-1 ⁇ concentration in the medium was 5 ng / ml.
- ADMPC treated with IL-1 ⁇ was suspended in a carrier to give 1.2 ⁇ 10 5 cells / ml. This was administered to the NASH model mouse (STAM (registered trademark) mouse) via the tail vein and examined for healing of the liver tissue.
- Streptozotocin was administered intradermally to animals in each group at the start of the test, a normal diet was given, a high fat diet was given from 4th to 9th week, and euthanized at 9th week.
- Administration of ADMPC (3 ⁇ 10 5 cells / kg) or carrier was performed once every 6 weeks.
- the obtained liver tissue section was subjected to Sirius red staining and hematoxylin-eosin (HE) staining.
- HE hematoxylin-eos
- FIG. 4 shows the results of HE staining of a liver tissue section of a mouse obtained 9 weeks after the start of the test.
- liver tissue represented by vacuolation It was confirmed that the injury was reduced.
- ADMPC treated with IL-1 ⁇ is effective in healing damaged tissues, protecting tissues, repairing tissues / cell damage, suppressing inflammation in tissues, and proliferation of cells constituting the tissues. It turns out that it contributes to promotion. It is considered that the tissue shape can be reconstructed and the wound can be healed by the tissue healing. Moreover, since these effects were seen in mice in which liver damage was induced by streptozotocin and a high fat diet, it can be said that ADMPC treated with IL-1 ⁇ is effective for tissue healing in chronic diseases. .
- Example 3 In Vivo Tissue Healing Effect of ADMPC Treated with IL-1 ⁇ —Improvement of Cardiac Function
- a severe myocardial infarction model was prepared using an 8-week-old pig by 2-stage embolization / reperfusion method. Specifically, a 6F guide catheter is percutaneously transluminally routed from the femoral artery to the left coronary artery entrance, and a guide wire is inserted into the first diagonal branch (AHA classification # 9) under the guide. Preconditioning was performed by ballooning.
- a guidewire is inserted into the left anterior descending coronary artery (AHA classification # 6 to # 8), and ballooning is performed on the left anterior descending branch (AHA classification # 6) immediately below the left coronary artery bifurcation To obtain a myocardial ischemic basin.
- AHA classification # 6 to # 8 the left anterior descending coronary artery
- AHA classification # 6 the left anterior descending branch
- ADMPC non-activated cell
- IL ⁇ 1 ⁇ -activated ADMPC the cells activated with IL-1 ⁇ (cultured for 72 hours)
- the cell administration group was administered 3 ⁇ 10 5 cells / kg body weight to the transcoronary artery with a catheter.
- ADMPC and IL-1 ⁇ activated ADMPC were prepared in the same manner as in Example 1.
- Example 4 In vivo tissue healing effect of IL-1 ⁇ -treated ADMPC, bone marrow-derived mesenchymal stem cells, placenta-derived cells-reduction of liver tissue fibrosis (1) Experimental method (i) Collection of adipose tissue from human subjects Infor Six women who received unconventional donations provided extra adipose tissue that was discarded during liposuction surgery. The protocol was similar to Kobe University graduate School of Medicine Review Boards for Human Research. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells and placenta-derived cells were purchased from Lonza.
- ADMPC is then seeded in human fibronectin-coated dishes in medium (60% DMEM-low glucose, 40% MCDB201, 10 ⁇ g / mL EGF, 1 nM dexamethasone, 100 ⁇ M ascorbic acid, and 5% FBS) for 3 to 8 passages. Instead, cultured ADMPC was obtained.
- Bone marrow-derived mesenchymal stem cells and placenta-derived cells are seeded in human fibronectin-coated dishes in medium (60% DMEM-low glucose, 40% MCDB201, 10 ⁇ g / mL EGF, 1 nM dexamethasone, 100 ⁇ M ascorbic acid, and 5% FBS). And it was used for experiment after 3 passages.
- IL-1 ⁇ treatment In a medium (60% DMEM-low glucose, 40% MCDB201, 10 ⁇ g / mL EGF, 1 nM dexamethasone, 100 ⁇ M ascorbic acid, and 5% FBS) so that IL-1 ⁇ is 5 ng / ml. Added. 2. above.
- the cultured ADMPC, bone marrow-derived mesenchymal stem cells and placenta-derived cells obtained in (1) above were cultured in the above-mentioned IL-1 ⁇ -containing medium for 72 hours.
- ADMPC, bone marrow-derived mesenchymal stem cells, and placenta-derived cells were cultured in the above medium without IL-1 ⁇ added.
- ADMPC, bone marrow-derived mesenchymal stem cells and placenta-derived cells treated with IL-1 ⁇ were suspended in a carrier to give 1.2 ⁇ 10 5 cells / ml. This was administered to an animal model of chronic hepatitis caused by administration of a hepatitis-inducing drug, and the healing of the liver tissue was examined.
- a chronic hepatitis model animal by hepatitis-inducing drug administration was obtained by injecting carbon tetrachloride at 300 ⁇ L / kg intraperitoneally twice a week for 4 weeks to 8-week-old F344 rats to obtain chronic hepatitis model rats.
- ADMPC treated with IL-1 ⁇ and untreated, bone marrow-derived mesenchymal stem cells or placenta-derived cells (3 ⁇ 10 5 cells / kg) and a carrier were administered via the tail vein.
- the liver was removed by euthanization under deep anesthesia, and fixed with 10% neutral buffered formalin. These liver samples were embedded in paraffin to obtain sliced sections, and the obtained liver tissue sections were subjected to Sirius red staining.
- ADMPC, bone marrow-derived mesenchymal stem cells or placenta-derived cells treated with IL-1 ⁇ are effective in healing damaged tissues. It is considered that the tissue shape can be reconstructed and the wound can be healed by the tissue healing.
- ADMPC, bone marrow-derived mesenchymal stem cells or placenta-derived cells treated with IL-1 ⁇ were treated with tissue healing in chronic diseases. It can be said that it is effective.
- Embodiment 5 In vivo tissue healing effect of IL-1 ⁇ -treated ADMPC or bone marrow-derived mesenchymal stem cells-Improvement of heart tissue (1) Experimental method Open heart of 8-week-old nude rat deeply anesthetized with general anesthetic Was exposed, and the descending branch of the coronary artery was completely ligated to produce an acute myocardial infarction model. Two weeks later, using myocardial infarction model rats, under general anesthesia, IL-1 ⁇ -treated ADMPC or bone marrow-derived mesenchymal stem cell sheets were transplanted to the left ventricular wall, respectively. Four weeks after transplantation, the mice were sacrificed and the hearts were removed and fixed with 10% neutral buffered formalin. These heart samples were cut into round slices, embedded in paraffin, sliced sections were obtained, and after HE staining, the thickness of the anterior wall of the left wall, which is the site of myocardial infarction, was measured.
- (Ii) Sheet transplantation to myocardial infarction model rat A myocardial infarction model rat was prepared by ligating the coronary artery of a nude rat. Two weeks later, the thoracotomy was performed again, and two cell sheets each cultured with ADMPC or bone marrow-derived mesenchymal stem cells added or not added to IL-1 ⁇ were transplanted into the injured area. In the control group, sham operation was performed in which only thoracotomy was performed.
- Example 6 Treatment effect of various mesenchymal tissue-derived adhesive cells with various physiologically active polypeptides
- umbilical cord-derived mesenchymal stem cells (umbilical cord-derived MSC), adipose tissue-derived stem cells (ADSC), knee cartilage
- ADSC adipose tissue-derived stem cells
- ADMPC adipose tissue-derived multilineage progenitor cells
- spore-derived MSC spore-derived MSC
- bone marrow-derived mesenchymal stem cells bone marrow-derived MSC
- Various cytokines, chemokines, growth factors and hormones were used as bioactive polypeptides.
- cytokines IL-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , IL3-IL35, Oncostatin M, LIF, CNTF, CT-1, TNF ⁇ , TNF ⁇ , BAFF, FasL, RANKL, TRAIL, INF- ⁇ , IFN- ⁇ , IFN- ⁇ ), chemokines (CCL1 to CCL28, CXCL1 to CXCL10), growth factors (AvinA, ANGPLT5, BD-2, BD-3, BDNF, BMP-1 to BMP-7) , DKK1, EGF, EG-VEGF, FGF-1 to FGF-21, G-CSF, HGF, IGF-1, IGF-2, PDGF-AA, PDGF-BB, R-spondin-1, R-spondin-2 , R-spondin-3, SCF, galectin 1, galectin 2, galectin 3, DF-11, GDNF, pleiotrophin, TGF ⁇ , TGF ⁇ , TPO
- IL-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , TNF ⁇ , TNF ⁇ , IFN- ⁇ , IFN- ⁇ are used as bioactive polypeptides.
- FGF15 was used.
- the physiologically active polypeptide is referred to as “drug”.
- the test cells were subjected to medium replacement in a drug-added medium (final concentration 100 ng / mL) or a drug-free medium (control), and further cultured continuously for 3 days (72 hours). After 72 hours of medium replacement, 600 uL of RLT Buffer was added and recovered, and RNA was extracted.
- Example 7 In vivo tissue healing effect of culture supernatant of ADMPC treated with IL-1 ⁇ -reduction of liver tissue injury (1) Experimental method Collection of adipose tissue from human subjects, isolation and culture of ADMPC, and IL-1 ⁇ treatment was carried out in the same manner as in Example 2.
- the culture supernatant of ADMPC treated with IL-1 ⁇ was concentrated by centrifuging for 30 minutes using 3,000 NMWL of Amicon Ultra-15 centrifugal filter unit, and this was added to a NASH model mouse (STAM® mouse). ) was administered 50 ⁇ L tail vein per individual, and hepatic tissue healing was examined.
- Streptozotocin was administered intradermally to animals in each group at the start of the test, a normal diet was given, a high fat diet was given from 4th to 9th week, and euthanized at 9th week.
- Administration of ADMPC culture supernatant and carrier treated with IL-1 ⁇ was performed once every 6 weeks.
- the obtained liver tissue section was subjected to Sirius red staining and hematoxylin-eosin (HE) staining.
- liver NAFLD Activity score of the mouse administered with the ADMPC culture supernatant treated with IL-1 ⁇ was significantly lower than that of the mouse administered with the carrier, and the liver tissue injury represented by vacuolation, inflammation, and fat formation was confirmed to be greatly reduced.
- the culture supernatant of ADMPC treated with IL-1 ⁇ is effective in healing damaged tissues, and protects tissues, repairs tissue and cell damage, suppresses inflammation of tissues, and constitutes tissues. It was found that it contributes to the promotion of cell growth. It is considered that the tissue shape can be reconstructed and the wound can be healed by the tissue healing. Moreover, since these effects were observed in mice in which liver damage was induced by streptozotocin and a high fat diet, ADMPC culture supernatants treated with IL-1 ⁇ were effective for tissue healing in chronic phase diseases. It can be said that there is.
- Example 8 In Vivo Tissue Healing Effect of IL-1 ⁇ Treated ADMPC and Its Culture Supernatant—Reduction of Lung Tissue Injury (1) Experimental Method Adipose tissue collection from human subjects, ADMPC isolation and culture, and IL-1 ⁇ The treatment was carried out in the same manner as in Example 2.
- BLM solution was administered intratracheally to mice. Specifically, 3 types (Medetomidine hydrochloride 0.3 mg / kg, midazolam 4 mg / kg, butorphanol tartrate 5 mg / kg) mixed anesthetic 3 mL / kg subcutaneously under anesthesia administered to the neck of the mouse on the BLM solution administration day An incision was made to expose the trachea. Next, a nozzle of a liquid endotracheal administration device (IA-1C, Penn Century) was inserted from the mouth, and after confirming that it was in the trachea, a BLM solution (14 ⁇ g / 25 ⁇ L / lung) was injected.
- IA-1C liquid endotracheal administration device
- the extracted lung was fixed with 10% neutral buffered formalin after being expanded and fixed at 20 cm water column pressure with 10% neutral buffered formalin.
- Formalin-fixed lungs are cut out as shown in FIG. 9, Masson Trichrome (MT) stained specimens are prepared, and each lobe of the lung is scored for fibrosis by classifying the degree according to the following evaluation criteria. It was. Evaluation criteria for lung fibrosis are shown in Table 10.
- the lung fibrosis scores obtained from the left and right lung anterior lobe, middle lobe, posterior lobe, and accessory lobe specimens were weighted average to obtain the lung fibrosis score of the animal.
- the present invention is useful in the field of pharmaceuticals for tissue healing and in the field of research for diseases requiring tissue healing.
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Abstract
本発明は、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清、および医薬上許容される担体を含む、組織治癒のための医薬組成物、ならびに該医薬組成物の製造方法を提供する。
Description
本発明は、組織治癒のための医薬組成物およびその製造方法に関する。詳細には、薬剤処理された間葉系組織由来接着細胞またはその培養上清を含む組織治癒剤およびその製造方法に関する。
間葉系組織由来細胞が組織治癒に有用であることが示されている。なかでも間葉系幹細胞(MSC)は再生医療への臨床応用に向けて盛んに研究が行われている。例えば脂肪組織は幹細胞(ASC)の供給源とされており(非特許文献1)、ASCが様々な領域において治療効果があることが知られている(非特許文献2)。また、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)も肝疾患の治療に効果的であることが示されている(特許文献1)。
このように、間葉系組織由来細胞が組織治癒を包含する再生医療において有用であることが示されているが、その治癒能のさらなる向上が望まれている。
Zuk PA, Zhu M, Ashjian P, et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol Biol Cell 2002; 13: 4279-4295.
Japanese Journal of Transfusion and Cell Therapy, Vol. 59, No. 3: 450-456, 2013
間葉系組織由来細胞の組織治癒能をさらに向上させることが課題であった。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、生理活性ポリペプチドまたはLPS(リポ多糖)で処理された間葉系組織由来の接着細胞またはその培養上清の組織治癒能が極めて高いことを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は以下のものを提供する。
(1)生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清、および医薬上許容される担体を含む、組織治癒のための医薬組成物。
(2)生理活性ポリペプチドが、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ケモカイン、ホルモンおよびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(1)記載の医薬組成物。
(3)生理活性ポリペプチドが、インターフェロン-β(IFN-β)、インターフェロンガンマ(IFNγ)、インターロイキン-1アルファ(IL-1α)、インターロイキン-1ベータ(IL-1β)、インターロイキン-17A(IL-17A)、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)、腫瘍壊死因子ベータ(TNFβ)、I型インターフェロン(INF-I)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)、上皮成長因子(EGF)および線維芽細胞増殖因子(FGF)からなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(1)または(2)記載の医薬組成物。
(4)間葉系組織由来の接着性細胞が間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胎盤組織に由来する細胞、臍帯組織に由来する細胞、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞である(1)~(3)のいずれかに記載の医薬組成物。
(5)組織治癒が組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制または組織形状の再構築である(1)~(4)のいずれかに記載の医薬組成物。
(6)組織治癒が慢性期の疾患における組織治癒である(1)~(5)のいずれかに記載の医薬組成物。
(7)組織治癒のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程:
(a)間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理し、次いで、
(b)工程(a)にて処理された細胞またはその培養上清を医薬上許容される担体と混合する
を含む方法。
(8)生理活性ポリペプチドが、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ケモカイン、ホルモンおよびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(7)記載の方法。
(9)生理活性ポリペプチドが、インターフェロン-β(IFN-β)、インターフェロンガンマ(IFNγ)、インターロイキン-1アルファ(IL-1α)、インターロイキン-1ベータ(IL-1β)、インターロイキン-17A(IL-17A)、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)、腫瘍壊死因子ベータ(TNFβ)、I型インターフェロン(INF-I)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)、上皮成長因子(EGF)および線維芽細胞増殖因子(FGF)からなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(7)または(8)記載の方法。
(10)間葉系組織由来の接着性細胞が間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胎盤組織に由来する細胞、臍帯組織に由来する細胞、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞である(7)~(9)のいずれかに記載の方法。
(11)組織治癒が組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制、創傷治癒または組織形状の再構築である(7)~(10)のいずれかに記載の方法。
(12)組織治癒が慢性期の疾患における組織治癒である(7)~(11)のいずれかに記載の方法。
(1)生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清、および医薬上許容される担体を含む、組織治癒のための医薬組成物。
(2)生理活性ポリペプチドが、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ケモカイン、ホルモンおよびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(1)記載の医薬組成物。
(3)生理活性ポリペプチドが、インターフェロン-β(IFN-β)、インターフェロンガンマ(IFNγ)、インターロイキン-1アルファ(IL-1α)、インターロイキン-1ベータ(IL-1β)、インターロイキン-17A(IL-17A)、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)、腫瘍壊死因子ベータ(TNFβ)、I型インターフェロン(INF-I)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)、上皮成長因子(EGF)および線維芽細胞増殖因子(FGF)からなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(1)または(2)記載の医薬組成物。
(4)間葉系組織由来の接着性細胞が間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胎盤組織に由来する細胞、臍帯組織に由来する細胞、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞である(1)~(3)のいずれかに記載の医薬組成物。
(5)組織治癒が組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制または組織形状の再構築である(1)~(4)のいずれかに記載の医薬組成物。
(6)組織治癒が慢性期の疾患における組織治癒である(1)~(5)のいずれかに記載の医薬組成物。
(7)組織治癒のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程:
(a)間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理し、次いで、
(b)工程(a)にて処理された細胞またはその培養上清を医薬上許容される担体と混合する
を含む方法。
(8)生理活性ポリペプチドが、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ケモカイン、ホルモンおよびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(7)記載の方法。
(9)生理活性ポリペプチドが、インターフェロン-β(IFN-β)、インターフェロンガンマ(IFNγ)、インターロイキン-1アルファ(IL-1α)、インターロイキン-1ベータ(IL-1β)、インターロイキン-17A(IL-17A)、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)、腫瘍壊死因子ベータ(TNFβ)、I型インターフェロン(INF-I)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)、上皮成長因子(EGF)および線維芽細胞増殖因子(FGF)からなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである(7)または(8)記載の方法。
(10)間葉系組織由来の接着性細胞が間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胎盤組織に由来する細胞、臍帯組織に由来する細胞、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞である(7)~(9)のいずれかに記載の方法。
(11)組織治癒が組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制、創傷治癒または組織形状の再構築である(7)~(10)のいずれかに記載の方法。
(12)組織治癒が慢性期の疾患における組織治癒である(7)~(11)のいずれかに記載の方法。
本発明によれば、極めて組織治癒能の高い医薬組成物が得られる。本発明の医薬組成物は、慢性期の組織傷害等における組織治癒に有用である。
本発明は、1の態様において、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清、および医薬上許容される担体を含む、組織治癒のための医薬組成物を提供する。ここで、生理活性ポリペプチドは、生体の特定の生理的調節機能に対して作用するポリペプチドである。ポリペプチドは、2つ以上のアミノ酸残基がペプチド結合を介して結合した物質をいう。LPSは様々な種類のものが知られており、いずれのLPSを用いてもよい。
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドは、その変異体も包含する。生理活性ポリペプチドの変異体は、間葉系組織由来接着細胞に作用させた場合に本発明の組織治癒に使用できる間葉系組織由来接着細胞またはその培養上清を得ることができる活性を有するものである。
変異体は、元のペプチドと比較して、ポリペプチドを構成するアミノ酸残基が置換、欠失または付加されているポリペプチドをいう。置換、欠失または付加されるアミノ酸残基の数は特に限定されない。例えば、置換、欠失または付加されるアミノ酸残基は1個~数個であってもよい。また例えば、変異体ポリペプチドは、元のポリペプチドに対してアミノ酸配列同一性が80%以上、好ましくは90%以上、例えば95%以上97%以上または99%以上のものであってもよい。さらに生理活性ポリペプチドの変異体は、ポリペプチドを構成するアミノ酸残基が修飾されているものであってもよい。修飾はあらゆる種類の標識であってよい。メチル化、ハロゲン化、配糖体化などの化学修飾であってもよく、蛍光標識や放射性標識などの標識付加であってもよい。また、生理活性ポリペプチドの変異体は、一部のアミノ酸残基がペプチド結合以外によって結合されているものであってもよい。
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドはいずれのものであってもよい。本発明で用いられる好ましい生理活性ポリペプチドとしては、サイトカイン、とりわけ炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ホルモンおよびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドが好ましい。炎症性サイトカインは、炎症の病態形成に関与しているサイトカインである。炎症性サイトカイン誘導ポリペプチドは、炎症性サイトカインの量を増加させる、あるいはその活性を高める作用を有するポリペプチドである。増殖因子は、生体内の特定の細胞の増殖や分化を促進するポリペプチドである。ケモカインは、Gタンパク質共役受容体を介してその作用を発現する塩基性タンパク質であり、サイトカインの一群である。ホルモンは、生体内で生成され、体液を通じて輸送され、特定の細胞、組織または器官の活動に影響する物質である。インターフェロンは、生体内でのウイルスや病原体、腫瘍細胞といった異物の侵入に応答して産生される一群のサイトカインである。様々な炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子およびインターフェロンは公知であり、いずれのものを用いてもよい。
サイトカインとしては、IL-1α、IL-1β、IL-2~IL-35、OSM(オンコスタチンM)、LIF、CNTF、CT-1、TNF-α、TNF-β、BAFF、FasL、RANKL、TRAILなどが挙げられるが、これらに限定されない。炎症性サイトカインとしては、IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、IL-18、TNFαなどが挙げられるが、これらに限定されない。
炎症性サイトカイン誘導ポリペプチドとしては、IL-17Aなどが挙げられるが、これらに限定されない。
増殖因子としては、アクチビンA、ANGPTL5、BAFF、BD-2、BD-3、BNDF、BMP-1~7、DKK1、EGF、EG-VEGF、FGF-1~21、G-CSF、GM-CSF、HGF、IGF-1、IGF-2、血小板由来成長因子(PDGF)-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、R-スポンジン-1~3、SCF、ガレクチン-1~3、GDF-11、GDNF、プレイオトロフィン、TGF-α、TGF-β、TPO(トロンボポエチン)、TSLP、血管内皮増殖因子(VEGF)、毛様体神経栄養因子(CNTF)などが挙げられるが、これらに限定されない。
ケモカインとしては、CCL1~CCL28、CXCL1~CXCL10などが挙げられるが、これらに限定されない。
ホルモンとしては、Calcitonin、Parathormone、Glucagon、Erythropoietin、Leptin、ANP、BNP、CNP、Oxytocin、Vasopressin、TRH(甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン)、TSH(甲状腺刺激ホルモン)、CRH(副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン)、ACTH(副腎皮質刺激ホルモン)、GRH(性腺刺激ホルモン放出ホルモン)、FSH(卵胞刺激ホルモン)、LH(黄体形成ホルモン)、SOM(ソマトスタチン)、GRH(成長ホルモン放出ホルモン)、GH(成長ホルモン)、PRH(プロラクチン放出ホルモン)、PIH(プロラクチン抑制ホルモン)、Prolactin(プロラクチン)などが挙げられるが、これらに限定されない。
インターフェロンとしては、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、INF-I、などが挙げられるが、これらに限定されない。
本発明で用いられる好ましい生理活性ペプチドは、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子およびインターフェロンであり、これらのうちで好ましいものとしては、IFN-β、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-17A、TNFα、TNF-β、INF-I、TGFβ、EGFおよびFGFなどが例示されるが、これらに限定されない。
組織の治癒は、組織を正常な状態に戻す、あるいは正常な状態に近づけることをいい、組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制、創傷治癒、組織形状の再構築などを包含する。本発明の医薬組成物中の細胞またはその培養上清は、組織保護や組織を構成する細胞の増殖促進などに有用であることから、本発明の医薬組成物は、慢性期の疾患における組織治癒に好ましく用いられる。
本発明の医薬組成物によって治癒される組織は、動物のあらゆる組織であり、特に限定されない。組織の例としては、肝臓、膵臓、腎臓、筋肉、骨、軟骨、骨髄、胃、腸、血液、神経、皮膚、粘膜、心臓、肺、毛髪などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物によって治癒される好ましい組織は肝臓、神経、皮膚、粘膜、心臓、肺などである。したがって、本発明の医薬組成物は、例えば肝硬変、肝炎、NASH(非アルコール性脂肪性肝炎)などの治療に好ましく用いられ、しかも慢性期の疾患に効果的である。
本発明の医薬組成物の有効成分である細胞またはその培養上清は、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清である。
本発明の医薬組成物を、有効成分である細胞または培養上清が由来する動物種と同種の対象に投与してもよく、異種の対象に投与してもよい。例えば、炎症性サイトカイン誘導剤で処理されたヒト由来の間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清を含む本発明の医薬組成物をヒト対象に投与してもよい。本発明の医薬組成物中の細胞またはその培養上清は、投与される対象と同一人に由来するものであってもよく、投与される対象とは異なる人に由来するものであってもよい。
間葉系組織由来の接着性細胞であればいずれの細胞であっても本発明に用いることができる。間葉系組織由来の接着性細胞は市販されているものであってもよく、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)(米国)、NITE(日本)などの機関から分譲されるものであってもよい。あるいは、間葉系組織由来の接着性細胞を間葉系組織から得てもよい。間葉系組織からの間葉系組織由来の接着性細胞の取得手段・方法は公知である。
好ましい間葉系組織由来の接着性細胞としては、脂肪組織由来幹細胞(ASC)などの間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、Muse細胞、骨髄組織、胎盤組織、臍帯組織、羊膜組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織、胞衣組織に由来する細胞、幹細胞および間質細胞、ならびに経血細胞などが例示されるが、これらに限定されない。
細胞を間葉系組織から得る場合は、いずれの間葉系組織から単離してもよい。間葉系組織としては、脂肪組織、骨髄組織、胎盤組織、臍帯組織、羊膜組織、軟骨組織、骨膜組織、滑膜組織、骨格筋組織、胞衣組織、経血などが例示されるが、これらに限定されない。好ましい間葉系組織としては脂肪組織、骨髄組織、滑膜組織、胎盤組織、臍帯組織、胞衣組織が挙げられ、特に脂肪組織は体内に含まれる量が多く、細胞を多く取り出せる点で好ましい。
体内から間葉系組織を取り出して、培養容器中に組織を入れて培養し、容器に付着する細胞を選択的に取得することにより、接着性細胞を得ることができる。間葉系組織は、切除や吸引といった公知の手段・方法を用いて取り出すことができる。取り出した間葉系組織をそのまま培養してもよく、必要に応じて、取り出した間葉系組織を刻んだり、解したりした後、赤血球を除去し、得られた細胞集団を培養してもよい。これらの処理方法および手段、ならびに細胞培養手段・方法は公知であり、適宜選択することができる。間葉系組織由来の接着性細胞は、例えば培養容器に付着した細胞をトリプシンなどの酵素で処理することによって得てもよい。
生理活性ポリペプチドまたはLPSでの間葉系組織由来の接着性細胞の処理は、細胞とサイトカインを公知の方法にて接触させることによって行うことができる。典型的には、適当濃度の生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地にて、間葉系組織由来の接着性細胞を一定時間培養することにより、この処理を行うことができる。通常は、数ナノグラム/ml~数百ナノグラム/mlの炎症性サイトカインまたは炎症性サイトカインを添加した培地にて間葉系組織由来の接着性細胞を培養する。培養に使用する培地は公知のものでよい。培養時間、培養温度も適宜選択することができる。必要に応じて、間葉系組織由来の接着性細胞を培養して細胞数を増加させた後、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理してもよい。間葉系組織由来の接着性細胞の集団から所望の亜集団を得て、必要に応じて亜集団を培養して細胞数を増加させた後、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理してもよい。
間葉系組織由来の接着性細胞を処理するために用いられる生理活性ポリペプチドまたはLPSは1種類であってもよく、2種類以上であってもよい。
生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞は組織修復に寄与する1種またはそれ以上の因子(組織治癒に関与するポリペプチド、成長因子、および/または酵素など)の発現および産生を増加させ、あるいはこれらを発現および産生するようになる。かかる因子としてはアディポネクチン、HGF、CSF2(GM-CSF)、CSF3(G-CSF)、LIF、MMPファミリーの因子、FGFファミリーの因子、ADAMファミリーの因子、アンジオポエチン様タンパク質ファミリーの因子、プレイオトロフィン、R-スポンジンファミリーの因子、VEGFファミリーの因子などが挙げられるが、これらに限定されない。CSF2やCSF3は、造血幹細胞の活性化のみならず、脳、心臓、肺、肝臓を含む多くの組織・臓器・器官で幹細胞増殖および/または血管新生にも関与することで組織修復に寄与しているので、これらの因子を多く発現および産生する細胞が好ましい。上記因子の発現や産生の増加は、処理前と比較して例えば10倍以上、好ましくは30倍以上、より好ましくは50倍以上、さらに好ましくは100倍以上であってもよい。
生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞の培養上清を、以下の方法により得てもよい。
(1)生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地にて間葉系組織由来の接着性細胞を培養し、その培養上清を得る。
(2)生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地にて間葉系組織由来の接着性細胞を培養し、得られた細胞を別の培地に移して培養し、その培養上清を得る。
生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地における培養は、上で説明した生理活性ポリペプチドまたはLPSでの処理と同様にして行ってもよい。培地組成、培養時間、培養温度などの細胞の培養条件は、細胞の種類、必要数、用途などに応じて、適宜選択、変更することができる。遠心法、フィルター濾過法、硫酸アンモニウム沈殿法、乾燥凍結法などの公知の濃縮方法を用いて、培養上清を濃縮してもよい。
(1)生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地にて間葉系組織由来の接着性細胞を培養し、その培養上清を得る。
(2)生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地にて間葉系組織由来の接着性細胞を培養し、得られた細胞を別の培地に移して培養し、その培養上清を得る。
生理活性ポリペプチドまたはLPSを含む培地における培養は、上で説明した生理活性ポリペプチドまたはLPSでの処理と同様にして行ってもよい。培地組成、培養時間、培養温度などの細胞の培養条件は、細胞の種類、必要数、用途などに応じて、適宜選択、変更することができる。遠心法、フィルター濾過法、硫酸アンモニウム沈殿法、乾燥凍結法などの公知の濃縮方法を用いて、培養上清を濃縮してもよい。
本発明の医薬組成物は、上記のごとく生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理した間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清を医薬上許容される担体と混合することにより製造することができる。医薬上許容される担体は様々なものが公知であり、適宜選択して使用できる。例えば、本発明の医薬組成物を注射剤として用いる場合は、精製水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの担体に細胞を懸濁してもよい。本発明の培養上清を含む医薬組成物は、投与された場合、血管や注射針に細胞が詰まる等の事象がない点で好ましい。
本発明の医薬組成物の剤形は特に限定されず、液剤、半固形剤、固形剤であってよい。本発明の医薬組成物の投与方法も限定されず、局所注射、静脈注射、輸液などにより行ってもよく、患部に塗布する等であってもよく、カテーテルにより患部に投与してもよく、外科的手法により肝臓などの組織に直接移植してもよい。本発明の医薬組成物を細胞シート、細胞塊、重層化細胞シートなどの形態として移植してもよい。
本発明の医薬組成物の投与経路および投与量は、治癒すべき組織の種類や部位、疾患の程度、対象の状態などを考慮して適宜決定することができる。
本発明の医薬組成物は、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理した間葉系組織由来の接着性細胞以外の細胞を含んでいてもよい。また本発明の医薬組成物は、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理した間葉系組織由来の接着性細胞の培養上清以外の成分を含んでいてもよい。
本発明は、さらなる態様において、組織治癒のための薬剤の製造のための、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清の使用を提供する。
本発明は、さらなる態様において、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清の、組織治癒のための使用を提供する。
本発明は、さらなる態様において、生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清を対象に投与することを含む、組織治癒必要とする対象における組織治癒方法を提供する。
本発明は、さらにもう1つの態様において、
組織治癒のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程:
(a)間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理し、次いで、
(b)工程(a)にて処理された細胞またはその培養上清を医薬上許容される担体と混合する
を含む方法
を提供する。
組織治癒のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程:
(a)間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理し、次いで、
(b)工程(a)にて処理された細胞またはその培養上清を医薬上許容される担体と混合する
を含む方法
を提供する。
本発明は、さらにもう1つの態様において、間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理することを含む、組織治癒のための細胞を製造する方法を提供する。本発明は、さらにもう1つの態様において、間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理し、次いで培養上清を得ることを含む、組織治癒のための細胞の培養上清を製造する方法を提供する。
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものではない。
実施例1.IL-IβによるADMPCの処理効果
(1)実験方法
(i)ヒト対象からの脂肪組織の採取
インフォームドコンセントを受けた女性6人から脂肪吸引手術中に廃棄される余分な脂肪組織の提供を受けた。プロトコールは、Kobe University Graduate School of Medicine Review Boards for Human Researchに準ずるものであった。
(1)実験方法
(i)ヒト対象からの脂肪組織の採取
インフォームドコンセントを受けた女性6人から脂肪吸引手術中に廃棄される余分な脂肪組織の提供を受けた。プロトコールは、Kobe University Graduate School of Medicine Review Boards for Human Researchに準ずるものであった。
(ii)ADMPCの単離および培養
脂肪組織を刻み、次に、0.008% リベレース(Roche Lifescience)含有ハンクス緩衝塩類溶液(HBSS)中、37℃のウォーターバスにて振盪しながら1時間消化した。消化産物をCell Strainer(BD Bioscience)で濾過し、800xgにて10分間遠心した。リンパ球分離液(d=1.077)(Nacalai tesque)を用い、比重法により赤血球を除去し、得られたADMPCを含む細胞集団を、10% ウシ胎児血清(Hyclone)を含むDMEM中に細胞を播種して細胞を付着させた後、洗浄し、EDTAで処理して、ADMPCを得た。次に、ADMPCを、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、3から8継代し、培養ADMPCを得た。
脂肪組織を刻み、次に、0.008% リベレース(Roche Lifescience)含有ハンクス緩衝塩類溶液(HBSS)中、37℃のウォーターバスにて振盪しながら1時間消化した。消化産物をCell Strainer(BD Bioscience)で濾過し、800xgにて10分間遠心した。リンパ球分離液(d=1.077)(Nacalai tesque)を用い、比重法により赤血球を除去し、得られたADMPCを含む細胞集団を、10% ウシ胎児血清(Hyclone)を含むDMEM中に細胞を播種して細胞を付着させた後、洗浄し、EDTAで処理して、ADMPCを得た。次に、ADMPCを、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、3から8継代し、培養ADMPCを得た。
(iii)IL-1β処理
IL-1βを10ng/mlとなるように、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)に添加した。上の2.で得られた培養ADMPCを、上記IL-1β含有培地にて72時間培養し、培地中に産生されたアディポネクチンおよび肝細胞増殖因子(HGF)を測定した。アディポネクチンの測定はabcam社のELISAキット(カタログ番号ab99968)を用いて行った。HGFの測定はR&D System社のELISAキット(カタログ番号DHG00)を用いて行った。コントロール系では、IL-1βを添加しない上記培地でADMPCを培養した。
IL-1βを10ng/mlとなるように、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)に添加した。上の2.で得られた培養ADMPCを、上記IL-1β含有培地にて72時間培養し、培地中に産生されたアディポネクチンおよび肝細胞増殖因子(HGF)を測定した。アディポネクチンの測定はabcam社のELISAキット(カタログ番号ab99968)を用いて行った。HGFの測定はR&D System社のELISAキット(カタログ番号DHG00)を用いて行った。コントロール系では、IL-1βを添加しない上記培地でADMPCを培養した。
(2)実験結果
アディポネクチン産生量の測定結果を図1に示す。IL-1β処理されなかったADMPCからのアディポネクチン産生は認められなかったのに対し、IL-1β処理されたADMPCからアディポネクチンが産生されることが確認された。
アディポネクチン産生量の測定結果を図1に示す。IL-1β処理されなかったADMPCからのアディポネクチン産生は認められなかったのに対し、IL-1β処理されたADMPCからアディポネクチンが産生されることが確認された。
HGF産生量の測定結果を図2に示す。IL-1β処理されなかったADMPCからのHGF産生量と比べて、IL-1β処理されたADMPCからのHGF産生量は約1.7倍に増加していた。
実施例2.IL-1β処理されたADMPCのインビボでの組織治癒効果-肝組織傷害の軽減
(1)実験方法
ヒト対象からの脂肪組織の採取、ADMPCの単離および培養、およびIL-1β処理を実施例1と同様にして行ったが、培地中のIL-1β濃度を5ng/mlとした。
(1)実験方法
ヒト対象からの脂肪組織の採取、ADMPCの単離および培養、およびIL-1β処理を実施例1と同様にして行ったが、培地中のIL-1β濃度を5ng/mlとした。
IL-1βで処理したADMPCを担体に懸濁し、1.2x105個/mlとした。これをNASHモデルマウス(STAM(登録商標)マウス)に尾静脈投与し、肝組織の治癒について調べた。動物を以下の3群に分けた:IL-1βで処理したADMPC投与群(n=9)、IL-1βで処理していないADMPC投与群(n=9)、および担体投与群(n=10)。試験開始時に各群の動物にストレプトゾトシンを皮内投与し、通常食を与え、4週目から9週目にかけて高脂肪食を与え、9週目に安楽死させた。ADMPC(3x105個/kg)または担体の投与は6週目に1回行った。得られた肝組織切片をシリウスレッド染色およびヘマトキシリン-エオシン(HE)染色に供した。
(2)実験結果
(i)肝組織切片のシリウスレッド染色
試験開始9週目に得たマウスの肝組織切片のシリウスレッド染色の結果を図3に示す。担体を投与したマウスおよびIL-1βで処理していないADMPCを投与したマウスの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPCを投与したマウスの肝臓において、シリウスレッドにて染色される肝臓内線維の沈着が減少したことが確認された。
(i)肝組織切片のシリウスレッド染色
試験開始9週目に得たマウスの肝組織切片のシリウスレッド染色の結果を図3に示す。担体を投与したマウスおよびIL-1βで処理していないADMPCを投与したマウスの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPCを投与したマウスの肝臓において、シリウスレッドにて染色される肝臓内線維の沈着が減少したことが確認された。
(ii)肝組織切片のHE染色
試験開始9週目に得たマウスの肝組織切片のHE染色の結果を図4に示す。担体を投与したマウスおよびIL-1βで処理していないADMPCを投与したマウスの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPCを投与したマウスの肝臓において、空胞化に代表される肝組織の傷害が軽減されたことが確認された。
試験開始9週目に得たマウスの肝組織切片のHE染色の結果を図4に示す。担体を投与したマウスおよびIL-1βで処理していないADMPCを投与したマウスの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPCを投与したマウスの肝臓において、空胞化に代表される肝組織の傷害が軽減されたことが確認された。
(iii)NAFLED activity score(E. M. Brunt et al. Hepatology. 2011 March; 53(3): 810-820)による肝組織治癒効果の評価
試験開始9週目に得たマウスの肝組織の傷害の程度を、NAFLED activity scoreに従って評価した。NAFLED activity scoreの評価方法を表1に示す。
試験開始9週目に得たマウスの肝組織の傷害の程度を、NAFLED activity scoreに従って評価した。NAFLED activity scoreの評価方法を表1に示す。
結果を図5に示す。担体を投与したマウスおよびIL-1βで処理していないADMPCを投与したマウスの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPCを投与したマウスの肝臓のNAFLD Activity scoreは有意に低く、空胞化、炎症、脂肪化に代表される肝組織の傷害が大幅に軽減されたことが確認された。
これらの結果から、IL-1βで処理したADMPCは、傷害を受けた組織の治癒に効果的であり、組織の保護、組織・細胞傷害の修復、組織の炎症抑制、組織を構成する細胞の増殖促進に資するものであることがわかった。これらの組織治癒が行われることによって、組織形状の再構築や創傷治癒が可能になると考えられる。しかも、これらの効果は、ストレプトゾトシンおよび高脂肪食により肝障害を誘発されたマウスにおいて見られたことから、IL-1βで処理したADMPCは、慢性期の疾患における組織治癒に効果的であるといえる。
実施例3.IL-1β処理されたADMPCのインビボでの組織治癒効果-心機能の改善
(1)実験方法
2段階塞栓・再還流法にて8週齢のブタを用いて重症心筋梗塞モデルを作製した。具体的には、大腿動脈から経皮経管的に6Fのガイドカテーテルを左冠動脈入口部にかけ、そこからガイドワイヤーを第1対角枝(AHA分類の#9)に挿入し、ガイド下にてバルーニング(閉塞再開通)でプレコンディショニングを行った。1週間後、ガイドワイヤーを左冠動脈前下降枝(AHA分類の#6~#8)に挿入し、左冠動脈回旋枝分岐部直下の左前下降枝(AHA分類の#6)にてバルーニング(閉塞再開通)を行い、心筋虚血流域を得た。その4週間後(最初の閉塞再開通からは5週間後)に心臓超音波検査にて心駆出率が40%以下の個体を重症心不全モデルとして試験に供することとした。
(1)実験方法
2段階塞栓・再還流法にて8週齢のブタを用いて重症心筋梗塞モデルを作製した。具体的には、大腿動脈から経皮経管的に6Fのガイドカテーテルを左冠動脈入口部にかけ、そこからガイドワイヤーを第1対角枝(AHA分類の#9)に挿入し、ガイド下にてバルーニング(閉塞再開通)でプレコンディショニングを行った。1週間後、ガイドワイヤーを左冠動脈前下降枝(AHA分類の#6~#8)に挿入し、左冠動脈回旋枝分岐部直下の左前下降枝(AHA分類の#6)にてバルーニング(閉塞再開通)を行い、心筋虚血流域を得た。その4週間後(最初の閉塞再開通からは5週間後)に心臓超音波検査にて心駆出率が40%以下の個体を重症心不全モデルとして試験に供することとした。
2回目の塞栓・再還流から4週間後に、動物を対象コントロール(細胞非投与)群、活性化していない細胞(ADMPC)投与群、IL-1βにて活性化した細胞(72時間培養)(IL-1β活性化ADMPC)投与群に分け、細胞投与群には3×105個/体重kgをカテーテルにて経冠動脈に投与した。ADMPCおよびIL-1β活性化ADMPCの調製は実施例1と同様にして行った。投与直前、投与後3カ月にて心臓MRIを施行し(Signa EXCITE XI TwinSpeed 1.5T Ver.11.1, GE Healthcare)、解析ソフトとしてCardiac Vx (GE Healthcare)を用い、拡張末期左室容積と収縮末期左室容積を計測した。
下式:
左室駆出率=100x(拡張末期左室容積-収縮末期左室容積)/(拡張末期左室容積)
を用いて左室駆出率(%EF)を算出し、投与後3か月値と投与直前値との差をΔEF(%)として表した(図6)。
下式:
左室駆出率=100x(拡張末期左室容積-収縮末期左室容積)/(拡張末期左室容積)
を用いて左室駆出率(%EF)を算出し、投与後3か月値と投与直前値との差をΔEF(%)として表した(図6)。
(2)実験結果
図6に示す通り、対照群では左室駆出率が減少したのに対して、細胞を投与した2群では左室駆出率は改善しており、特にIL-1βにて活性化した細胞を投与し場合、左室駆出率が著しく改善した。
図6に示す通り、対照群では左室駆出率が減少したのに対して、細胞を投与した2群では左室駆出率は改善しており、特にIL-1βにて活性化した細胞を投与し場合、左室駆出率が著しく改善した。
これらの結果は、IL-1βで処理したADMPCは、重症の心筋梗塞によって傷害を受けた心組織を治癒し、心機能を著しく改善することを示すものである。
実施例4.IL-1β処理されたADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞、胎盤由来細胞のインビボでの組織治癒効果-肝組織線維化の軽減
(1)実験方法
(i)ヒト対象からの脂肪組織の採取
インフォームドコンセントを受けた女性6人から脂肪吸引手術中に廃棄される余分な脂肪組織の提供を受けた。プロトコールは、Kobe University Graduate School of Medicine Review Boards for Human Researchに準ずるものであった。なお、骨髄由来間葉系幹細胞、胎盤由来細胞はLonza社より購入した。
(1)実験方法
(i)ヒト対象からの脂肪組織の採取
インフォームドコンセントを受けた女性6人から脂肪吸引手術中に廃棄される余分な脂肪組織の提供を受けた。プロトコールは、Kobe University Graduate School of Medicine Review Boards for Human Researchに準ずるものであった。なお、骨髄由来間葉系幹細胞、胎盤由来細胞はLonza社より購入した。
(ii)ADMPCの単離および培養
脂肪組織を刻み、次に、0.008% リベレース(Roch Lifescience)含有ハンクス緩衝塩類溶液(HBSS)中、37℃のウォーターバスにて振盪しながら1時間消化した。消化産物をCell Strainer(BD Bioscience)で濾過し、800xgにて10分間遠心した。リンパ球分離液(d=1.077)(Nacalai tesque)を用い、比重法により赤血球を除去し、得られたADMPCを含む細胞集団を、10% ウシ胎児血清(Hyclone)を含むDMEM中に細胞を播種して細胞を付着させた後、洗浄し、EDTAで処理して、ADMPCを得た。次に、ADMPCを、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、3から8継代し、培養ADMPCを得た。
脂肪組織を刻み、次に、0.008% リベレース(Roch Lifescience)含有ハンクス緩衝塩類溶液(HBSS)中、37℃のウォーターバスにて振盪しながら1時間消化した。消化産物をCell Strainer(BD Bioscience)で濾過し、800xgにて10分間遠心した。リンパ球分離液(d=1.077)(Nacalai tesque)を用い、比重法により赤血球を除去し、得られたADMPCを含む細胞集団を、10% ウシ胎児血清(Hyclone)を含むDMEM中に細胞を播種して細胞を付着させた後、洗浄し、EDTAで処理して、ADMPCを得た。次に、ADMPCを、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、3から8継代し、培養ADMPCを得た。
骨髄由来間葉系幹細胞および胎盤由来細胞は、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5%FBS)にてヒトフィブロネクチンコートディッシュに播種し、3継代し実験に供した。
(iii)IL-1β処理
IL-1βを5ng/mlとなるように、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5% FBS)に添加した。上の2.で得られた培養ADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞および胎盤由来細胞を、上記IL-1β含有培地にて72時間培養した。コントロール系では、IL-1βを添加しない上記培地でADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞および胎盤由来細胞を培養した。
IL-1βを5ng/mlとなるように、培地(60% DMEM-低グルコース、40% MCDB201、10μg/mL EGF、1nM デキサメサゾン、100μM アスコルビン酸、および5% FBS)に添加した。上の2.で得られた培養ADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞および胎盤由来細胞を、上記IL-1β含有培地にて72時間培養した。コントロール系では、IL-1βを添加しない上記培地でADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞および胎盤由来細胞を培養した。
IL-1βで処理したADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞および胎盤由来細胞を担体に懸濁し、1.2x105個/mlとした。これを肝炎誘発薬剤投与による慢性肝炎モデル動物に投与し、肝組織の治癒について調べた。動物を以下の7群に分けた:IL-1βで処理したADMPC投与群(n=6)、IL-1βで処理していないADMPC投与群(n=5)、IL-1βで処理した骨髄由来間葉系幹細胞投与群(n=5)、IL-1βで処理していない骨髄由来間葉系幹細胞投与群(n=4)、IL-1βで処理した胎盤由来細胞投与群(n=5)、IL-1βで処理していない胎盤由来細胞投与群(n=5)、および担体投与群(n=5)。
肝炎誘発薬剤投与による慢性肝炎モデル動物は、8週齢のF344ラットに対し、四塩化炭素を300μL/kgずつ、毎週2回、4週間にわたり腹腔内注射し、慢性肝炎モデルラットを得た。これらラットに対して、IL-1β処理・非処理のADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞(3x105個/kg)および担体を経尾静脈的に投与した。細胞投与1週間後(試験開始後5週目)、深麻酔下にて安楽死させて肝臓を摘出、10%中性緩衝ホルマリンにて固定した。これら肝臓試料をパラフィン包埋し、薄切切片を得、得られた肝組織切片をシリウスレッド染色に供した。
(2)実験結果
(i)肝組織切片のシリウスレッド染色
試験開始5週目に得たラットの肝組織切片のシリウスレッド染色の結果を図7に示す。IL-1βで処理していないADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞を投与したラットの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞を投与したラットの肝臓において、シリウスレッドにて染色される肝臓内線維の沈着が減少したことが確認された。
(i)肝組織切片のシリウスレッド染色
試験開始5週目に得たラットの肝組織切片のシリウスレッド染色の結果を図7に示す。IL-1βで処理していないADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞を投与したラットの肝臓と比較して、IL-1βで処理したADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞を投与したラットの肝臓において、シリウスレッドにて染色される肝臓内線維の沈着が減少したことが確認された。
これらの結果から、IL-1βで処理したADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞は、傷害を受けた組織の治癒に効果的であることがわかった。これらの組織治癒が行われることによって、組織形状の再構築や創傷治癒が可能になると考えられる。しかも、これらの効果は、肝炎誘発薬剤投与による慢性肝炎モデル動物において見られたことから、IL-1βで処理したADMPC、骨髄由来間葉系幹細胞あるいは胎盤由来細胞は、慢性期の疾患における組織治癒に効果的であるといえる。
実施例5.IL-1β処理されたADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞のインビボでの組織治癒効果-心臓組織の改善
(1)実験方法
全身麻酔薬で深麻酔した8週齢のヌードラットを開胸して心臓を露出させ、冠状動脈下行枝を完全結紮して急性心筋梗塞モデルを作製した。2週間後、心筋梗塞モデルラットを使い、全身麻酔下、左肋間開胸にてIL-1β処理されたADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞シートを各々2枚左室壁に移植した。移植後4週間後に犠牲死させて心臓を摘出、10%中性緩衝ホルマリンにて固定した。これら心臓試料を輪切りにしてパラフィン包埋し、薄切切片を得、HE染色したのち、心筋梗塞作出部位である左壁前壁の厚みを測定した。
(1)実験方法
全身麻酔薬で深麻酔した8週齢のヌードラットを開胸して心臓を露出させ、冠状動脈下行枝を完全結紮して急性心筋梗塞モデルを作製した。2週間後、心筋梗塞モデルラットを使い、全身麻酔下、左肋間開胸にてIL-1β処理されたADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞シートを各々2枚左室壁に移植した。移植後4週間後に犠牲死させて心臓を摘出、10%中性緩衝ホルマリンにて固定した。これら心臓試料を輪切りにしてパラフィン包埋し、薄切切片を得、HE染色したのち、心筋梗塞作出部位である左壁前壁の厚みを測定した。
(i)細胞シートの作成
ADMCPあるいは骨髄由来間葉系幹細胞を、IL-1βを5ng/mLの濃度で含む培地中、温度感受性培養皿(株式会社セルシード)中37℃にて72時間培養した。20℃以下にて30分間インキュベーションすることにより、細胞を剥離させ、細胞シートを得た。得られたシートを以下の移植実験に用いた。
ADMCPあるいは骨髄由来間葉系幹細胞を、IL-1βを5ng/mLの濃度で含む培地中、温度感受性培養皿(株式会社セルシード)中37℃にて72時間培養した。20℃以下にて30分間インキュベーションすることにより、細胞を剥離させ、細胞シートを得た。得られたシートを以下の移植実験に用いた。
(ii)心筋梗塞モデルラットへのシートの移植
ヌードラットの冠動脈を結紮することにより、心筋梗塞モデルラットを作成した。2週間後再度開胸し、傷害領域にADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞をIL-1β添加あるいは非添加にて培養した細胞シートを各々2枚移植した。コントロール群では開胸のみ行うsham手術を行った。
ヌードラットの冠動脈を結紮することにより、心筋梗塞モデルラットを作成した。2週間後再度開胸し、傷害領域にADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞をIL-1β添加あるいは非添加にて培養した細胞シートを各々2枚移植した。コントロール群では開胸のみ行うsham手術を行った。
(iii)シートを移植した心臓の組織解析
移植後4週間にラットを安楽死させて、心臓を摘出した。摘出した心臓を4% パラホルムアルデヒド液で固定した後、70% エタノールに置換した。固定した心臓を数ミリ幅に切り出し、パラフィンで固めてブロックを作製した。得られたパラフィンブロックを、ミクロトームを用いて3μmに薄切し、スライドガラスに張り付け、乾燥させた。得られた薄切片についてヘマトキシリン・エオジン染色を以下の通り行った。
移植後4週間にラットを安楽死させて、心臓を摘出した。摘出した心臓を4% パラホルムアルデヒド液で固定した後、70% エタノールに置換した。固定した心臓を数ミリ幅に切り出し、パラフィンで固めてブロックを作製した。得られたパラフィンブロックを、ミクロトームを用いて3μmに薄切し、スライドガラスに張り付け、乾燥させた。得られた薄切片についてヘマトキシリン・エオジン染色を以下の通り行った。
(iv)ヘマトキシリン・エオジン染色
薄切片を脱パラフィンし、水で洗浄した。ヘマトキシリン液で10分間染色し、ぬるま湯で3分間色だしした。水洗後、エオジンで5分間染色した。アルコールで分別、脱水した。キシレンで透徹後封入し、顕微鏡にて観察した。梗塞領域である左室前壁の壁厚を評価した。
薄切片を脱パラフィンし、水で洗浄した。ヘマトキシリン液で10分間染色し、ぬるま湯で3分間色だしした。水洗後、エオジンで5分間染色した。アルコールで分別、脱水した。キシレンで透徹後封入し、顕微鏡にて観察した。梗塞領域である左室前壁の壁厚を評価した。
(2)実験結果
図6に示す通り、IL-1β処理されたADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞シート移植群では、IL-1β非処理のADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞シートと比較して左室壁厚は改善した。
図6に示す通り、IL-1β処理されたADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞シート移植群では、IL-1β非処理のADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞シートと比較して左室壁厚は改善した。
これらの結果は、IL-1βで処理したADMPCあるいは骨髄由来間葉系幹細胞は、重症の心筋梗塞によって傷害を受けた心組織を治癒し、心機能を著しく改善することを示すものである。
実施例6.各種生理活性ポリペプチドによる各種間葉系組織由来の接着性細胞の処理効果
(1)実験方法
試供細胞として、臍帯由来間葉系幹細胞(臍帯由来MSC)、脂肪組織由来幹細胞(ADSC)、膝軟骨滑膜由来間葉系幹細胞(滑膜由来MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胞衣由来間葉系幹細胞(胞衣由来MSC)および骨髄由来間葉系幹細胞(骨髄由来MSC)を用いた。生理活性ポリペプチドとしては各種のサイトカイン、ケモカイン、成長因子およびホルモンを用いた。
(1)実験方法
試供細胞として、臍帯由来間葉系幹細胞(臍帯由来MSC)、脂肪組織由来幹細胞(ADSC)、膝軟骨滑膜由来間葉系幹細胞(滑膜由来MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胞衣由来間葉系幹細胞(胞衣由来MSC)および骨髄由来間葉系幹細胞(骨髄由来MSC)を用いた。生理活性ポリペプチドとしては各種のサイトカイン、ケモカイン、成長因子およびホルモンを用いた。
試供細胞としてADMPCを用いる場合は、生理活性ポリペプチドとしてサイトカイン(IL-1α、IL-1β、IL3~IL35、オンコスタチンM、LIF、CNTF、CT-1、TNFα、TNFβ、BAFF、FasL、RANKL、TRAIL、INF-α、IFN-β、IFN-γ)、ケモカイン(CCL1~CCL28、CXCL1~CXCL10)、成長因子(AvinA、ANGPLT5、BD-2、BD-3、BDNF、BMP-1~BMP-7、DKK1、EGF、EG-VEGF、FGF-1~FGF-21、G-CSF、HGF、IGF-1、IGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、R-スポンジン-1、R-スポンジン-2、R-スポンジン-3、SCF、ガレクチン1、ガレクチン2、ガレクチン3、GDF-11、GDNF、プレイオトロフィン、TGFα、TGFβ、TPO、TSLP、VEGF)およびホルモン(カルシトニン、パラスロモン、グルカゴン、エリスロポイエチン、レプチン、ANP、BNP、CNP、オキシトシン、バソプレッシン、TGH、TSH、CRH、ACTH、GRH、FSH、LH、SOM、GRH、GH、PRH、プロラクチン)を用いた。試供細胞としてADSC、胞衣由来MSC、滑膜由来MSC、骨髄由来MSC、臍帯由来MSCを用いる場合は、生理活性ポリペプチドとしてIL-1α、IL-1β、TNFα、TNFβ、IFN-β、IFN-γ、FGF15を用いた。以下、生理活性ポリペプチドを「薬剤」という。
試供細胞を、薬剤添加培地(最終濃度100ng/mL)または薬剤非添加培地(コントロール)にて培地交換を行い、更に3日間(72時間)継続培養を行った。培地交換72時間後にRLT Buffer 600uLを添加して回収、RNA抽出した。
RLT Bufferサンプルは、RNeasy Mini Kit / QIAGENを用いて全RNAを抽出し、全RNAを100ng/uLになるように調製後、1アレイ当たり全RNA 150ngからラベルされたcRNAを合成した。合成したラベルされたcRNAは濃度・収量・Cy3取込率を算出し、合成サイズ(200-2000ntを増幅)を測定した。ラベルされたcRNA 600ngを60℃でフラグメンテーションを形成させ、65℃、17時間でハイブリダイゼーションを行い、アレイを洗浄してスキャンした。
コントロールサンプルと薬剤添加サンプル(1種類)のどちらかの条件で測定値の信頼できるプローブを抽出し、コントロールサンプルと比較して、発現差15倍以上のプローブを抽出した。
試供細胞を、薬剤添加培地(最終濃度100ng/mL)または薬剤非添加培地(コントロール)にて培地交換を行い、更に3日間(72時間)継続培養を行った。培地交換72時間後にRLT Buffer 600uLを添加して回収、RNA抽出した。
RLT Bufferサンプルは、RNeasy Mini Kit / QIAGENを用いて全RNAを抽出し、全RNAを100ng/uLになるように調製後、1アレイ当たり全RNA 150ngからラベルされたcRNAを合成した。合成したラベルされたcRNAは濃度・収量・Cy3取込率を算出し、合成サイズ(200-2000ntを増幅)を測定した。ラベルされたcRNA 600ngを60℃でフラグメンテーションを形成させ、65℃、17時間でハイブリダイゼーションを行い、アレイを洗浄してスキャンした。
コントロールサンプルと薬剤添加サンプル(1種類)のどちらかの条件で測定値の信頼できるプローブを抽出し、コントロールサンプルと比較して、発現差15倍以上のプローブを抽出した。
いずれの実験においても、生理活性ポリペプチドで処理された間葉系組織由来の接着性細胞において組織治癒に関与するポリペプチド、成長因子、および/または酵素の発現が高まったことが確認された。生理活性ポリペプチドと間葉系組織由来の接着性細胞の多くの組み合わせにおいて、CSF2および/またはCSF3が発現し、しかも高発現する傾向が見られた。これらの結果から、本発明において、広範な種類の生理活性ポリペプチドおよび間葉系組織由来の接着性細胞を使用できることがわかった。
実施例7.IL-1β処理されたADMPCの培養上清のインビボでの組織治癒効果-肝組織傷害の軽減
(1)実験方法
ヒト対象からの脂肪組織の採取、ADMPCの単離および培養、およびIL-1β処理を実施例2と同様にして行った。
(1)実験方法
ヒト対象からの脂肪組織の採取、ADMPCの単離および培養、およびIL-1β処理を実施例2と同様にして行った。
IL-1βで処理したADMPCの培養上清を、アミコンウルトラ-15遠心式フィルターユニットの3,000NMWLを使用し、30分遠心することにより濃縮し、これをNASHモデルマウス(STAM(登録商標)マウス)に個体あたり50μL尾静脈投与し、肝組織の治癒について調べた。動物を以下の2群に分けた:IL-1βで処理したADMPC培養上清投与群(n=10)、および担体投与群(n=9)。試験開始時に各群の動物にストレプトゾトシンを皮内投与し、通常食を与え、4週目から9週目にかけて高脂肪食を与え、9週目に安楽死させた。IL-1βで処理したADMPC培養上清および担体の投与は6週目に1回行った。得られた肝組織切片をシリウスレッド染色およびヘマトキシリン-エオシン(HE)染色に供した。
(2)実験結果
(i)肝組織切片のシリウスレッド染色
試験開始9週目に得たマウスの肝組織切片のシリウスレッド染色領域の結果を表8に示す。担体を投与したマウスと比較して、IL-1βで処理したADMPC培養上清を投与したマウスの肝臓において、シリウスレッドにて染色される肝臓内線維の沈着が減少したことが確認された。
(i)肝組織切片のシリウスレッド染色
試験開始9週目に得たマウスの肝組織切片のシリウスレッド染色領域の結果を表8に示す。担体を投与したマウスと比較して、IL-1βで処理したADMPC培養上清を投与したマウスの肝臓において、シリウスレッドにて染色される肝臓内線維の沈着が減少したことが確認された。
(ii)NAFLED activity score(E. M. Brunt et al. Hepatology. 2011 March; 53(3): 810-820)による肝組織治癒効果の評価
試験開始9週目に得たマウスの肝組織の傷害の程度を、NAFLED activity scoreに従って評価した。スコアの評価方法は実施例2の表1に示したものと同じである。
試験開始9週目に得たマウスの肝組織の傷害の程度を、NAFLED activity scoreに従って評価した。スコアの評価方法は実施例2の表1に示したものと同じである。
結果を表9に示す。担体を投与したマウスと比較して、IL-1βで処理したADMPC培養上清を投与したマウスの肝臓のNAFLD Activity scoreは有意に低く、空胞化、炎症、脂肪化に代表される肝組織の傷害が大幅に軽減されたことが確認された。
これらの結果から、IL-1βで処理したADMPC培養上清は、傷害を受けた組織の治癒に効果的であり、組織の保護、組織・細胞傷害の修復、組織の炎症抑制、組織を構成する細胞の増殖促進に資するものであることがわかった。これらの組織治癒が行われることによって、組織形状の再構築や創傷治癒が可能になると考えられる。しかも、これらの効果は、ストレプトゾトシンおよび高脂肪食により肝障害を誘発されたマウスにおいて見られたことから、IL-1βで処理したADMPC培養上清は、慢性期の疾患における組織治癒に効果的であるといえる。
実施例8.IL-1β処理されたADMPCおよびその培養上清のインビボでの組織治癒効果-肺組織傷害の軽減
(1)実験方法
ヒト対象からの脂肪組織の採取、ADMPCの単離および培養、およびIL-1β処理を実施例2と同様にして行った。
(1)実験方法
ヒト対象からの脂肪組織の採取、ADMPCの単離および培養、およびIL-1β処理を実施例2と同様にして行った。
ブレオマイシン(BLM)を用いてマウス肺に線維化を誘発した。BLM溶液をマウス気管内投与した。具体的には、BLM溶液投与日に3種(塩酸メデトミジン0.3mg/kg、ミダゾラム4mg/kg、酒石酸ブトルファノール5mg/kg)の混合麻酔薬3 mL/kgの皮下投与麻酔下でマウスの頸部を切開し、気管を露出させた。次いで、液体気管内投与器具(IA-1C、Penn Century社)のノズルを口から挿入し、気管内に入っていることを確認したのち、BLM溶液(14μg/25μL/lung)を噴射した。その後、切開部を縫合し、α2アドレナリン受容体拮抗薬(塩酸アチパメゾール2mg/kg)3mL/kgを皮下投与した。
BLM投与21日目(BLM投与日を投与1日と起算)に、対照コントロールには生理的食塩水、試験群にはIL-1β処理ADMPC、およびIL-1β処理ADMPC培養上清を経尾静脈的に投与した。
BLM投与35日目にイソフルラン麻酔下で腹大動脈から放血させることにより安楽死させたのち、肺を摘出した。摘出した肺は、10%中性緩衝ホルマリンで20cm水柱圧にて拡張固定後、10%中性緩衝ホルマリン液で固定保管した。
ホルマリン固定した肺を図9のように切り出し、Masson Trichrome(M.T.)染色標本を作製し、肺の各葉ごとに下記評価基準にて程度を分類することで線維化のスコア化を行った。肺線維化の評価基準を表10に示す。
BLM投与21日目(BLM投与日を投与1日と起算)に、対照コントロールには生理的食塩水、試験群にはIL-1β処理ADMPC、およびIL-1β処理ADMPC培養上清を経尾静脈的に投与した。
BLM投与35日目にイソフルラン麻酔下で腹大動脈から放血させることにより安楽死させたのち、肺を摘出した。摘出した肺は、10%中性緩衝ホルマリンで20cm水柱圧にて拡張固定後、10%中性緩衝ホルマリン液で固定保管した。
ホルマリン固定した肺を図9のように切り出し、Masson Trichrome(M.T.)染色標本を作製し、肺の各葉ごとに下記評価基準にて程度を分類することで線維化のスコア化を行った。肺線維化の評価基準を表10に示す。
左肺および右肺前葉、中葉、後葉、副葉の標本から得られた肺線維化スコアは、加重平均することで当該動物の肺線維化スコアとした。図10に示す肺線維化スコアを以下の式を用いて算出した。
加重平均した個体の肺線維化スコア=
[左肺スコア+(右肺前葉スコア+右肺中葉スコア+右肺後葉スコア+右肺副葉スコア)/4]/2
加重平均した個体の肺線維化スコア=
[左肺スコア+(右肺前葉スコア+右肺中葉スコア+右肺後葉スコア+右肺副葉スコア)/4]/2
(2)実験結果
図10に示すように、IL-1β処理されたADMPCおよびその培養上清は、肺の組織治癒に効果があることが確認された。
図10に示すように、IL-1β処理されたADMPCおよびその培養上清は、肺の組織治癒に効果があることが確認された。
本発明は、組織治癒のための医薬品の分野および組織治癒を必要とする疾病の研究分野などにおいて有用である。
Claims (12)
- 生理活性ポリペプチドまたはリポ多糖(LPS)で処理された間葉系組織由来の接着性細胞またはその培養上清、および医薬上許容される担体を含む、組織治癒のための医薬組成物。
- 生理活性ポリペプチドが、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ケモカイン、ホルモンおよびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである請求項1記載の医薬組成物。
- 生理活性ポリペプチドが、インターフェロン-β(IFN-β)、インターフェロンガンマ(IFNγ)、インターロイキン-1アルファ(IL-1α)、インターロイキン-1ベータ(IL-1β)、インターロイキン-17A(IL-17A)、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)、腫瘍壊死因子ベータ(TNFβ)、I型インターフェロン(INF-I)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)、上皮成長因子(EGF)および線維芽細胞増殖因子(FGF)からなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである請求項1または2記載の医薬組成物。
- 間葉系組織由来の接着性細胞が間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胎盤組織に由来する細胞、臍帯組織に由来する細胞、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞である請求項1~3のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 組織治癒が組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制または組織形状の再構築である請求項1~4のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 組織治癒が慢性期の疾患における組織治癒である請求項1~5のいずれか1項記載の医薬組成物。
- 組織治癒のための医薬組成物の製造方法であって、下記工程:
(a)間葉系組織由来の接着性細胞を生理活性ポリペプチドまたはLPSで処理し、次いで、
(b)工程(a)にて処理された細胞またはその培養上清を医薬上許容される担体と混合する
を含む方法。 - 生理活性ポリペプチドが、炎症性サイトカイン、炎症性サイトカイン誘導ポリペプチド、増殖因子、ケモカイン、ホルモン、およびインターフェロンからなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである請求項7記載の方法。
- 生理活性ポリペプチドが、インターフェロン-β(IFN-β)、インターフェロンガンマ(IFNγ)、インターロイキン-1アルファ(IL-1α)、インターロイキン-1ベータ(IL-1β)、インターロイキン-17A(IL-17A)、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)、腫瘍壊死因子ベータ(TNFβ)、I型インターフェロン(INF-I)、トランスフォーミング増殖因子β(TGFβ)、上皮成長因子(EGF)および線維芽細胞増殖因子(FGF)からなる群より選択される1種またはそれ以上のポリペプチドである請求項7または8記載の方法。
- 間葉系組織由来の接着性細胞が間葉系組織由来幹細胞(MSC)、脂肪組織由来多系統前駆細胞(ADMPC)、胎盤組織に由来する細胞、臍帯組織に由来する細胞、胞衣組織に由来する細胞、骨髄組織または滑膜組織に由来する細胞である請求項7~9のいずれか1項記載の方法。
- 組織治癒が組織保護、組織・細胞傷害の修復、組織を構成する細胞の増殖促進、組織の炎症抑制、創傷治癒または組織形状の再構築である請求項7~10のいずれか1項記載の方法。
- 組織治癒が慢性期の疾患における組織治癒である請求項7~11のいずれか1項記載の方法。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008153179A1 (ja) | 2007-06-14 | 2008-12-18 | Akifumi Matsuyama | 脂肪組織由来多系統前駆細胞 |
JP2010505849A (ja) * | 2006-10-06 | 2010-02-25 | ユニバーシティ オブ バージニア パテント ファウンデーション | 糖尿病性創傷治癒に有用な方法および組成物 |
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WO2016125582A1 (ja) * | 2015-02-05 | 2016-08-11 | 国立大学法人東京医科歯科大学 | 間葉系幹細胞の増殖促進剤、間葉系幹細胞の軟骨分化促進剤、間葉系幹細胞の調製方法、軟骨細胞の調製方法、及び間葉系幹細胞用培養培地 |
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010505849A (ja) * | 2006-10-06 | 2010-02-25 | ユニバーシティ オブ バージニア パテント ファウンデーション | 糖尿病性創傷治癒に有用な方法および組成物 |
WO2008153179A1 (ja) | 2007-06-14 | 2008-12-18 | Akifumi Matsuyama | 脂肪組織由来多系統前駆細胞 |
WO2012020566A1 (ja) * | 2010-08-10 | 2012-02-16 | 国立大学法人旭川医科大学 | Ape1遺伝子導入による高機能化幹細胞・前駆細胞 |
WO2016125582A1 (ja) * | 2015-02-05 | 2016-08-11 | 国立大学法人東京医科歯科大学 | 間葉系幹細胞の増殖促進剤、間葉系幹細胞の軟骨分化促進剤、間葉系幹細胞の調製方法、軟骨細胞の調製方法、及び間葉系幹細胞用培養培地 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
CHUN-MIAO WANG ,ZENG GUO ,YANG-JING XIE ,YU-YU HAO ,JI‑MIN SUN ,JIAN GU ,AI-LING WANG: "Co-treating mesenchymal stem cells with IL -1beta and TNF-a increases VCAM-1 expression and improves post-ischemic myocardial function", MOLECULAR MEDICINE REPORTS, vol. 10, no. 2, 2014, pages 792 - 798, XP009524394, ISSN: 1791-2997, DOI: 10.3892/mmr.2014.2236 * |
JAPANESE JOURNAL OF TRANSFUSION AND CELL THERAPY, vol. 59, no. 3, 2013, pages 450 - 456 |
MATSUYAMA, AKIFUMI: "Basic research on stem cells, A novel adipose tissue-derived stem cell", IGAKU NO AYUMI, vol. 229, no. 9, 2009, pages 694 - 697, XP009524396, ISSN: 0039-2359 * |
See also references of EP3808356A4 |
ZUK PAZHU MASHJIAN P ET AL.: "Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells", MOI BIOL CELL, vol. 13, 2002, pages 4279 - 4295 |
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