WO2016148215A1

WO2016148215A1 - Ｍｉｎｔ３阻害剤

Info

Publication number: WO2016148215A1
Application number: PCT/JP2016/058408
Authority: WO
Inventors: 毅治坂本; 元治清木; 長田　裕之; 斉藤　臣雄; 恭光近藤; 清水　猛
Original assignee: 国立大学法人東京大学; 国立研究開発法人理化学研究所
Priority date: 2015-03-17
Filing date: 2016-03-16
Publication date: 2016-09-22
Also published as: JP2016172705A

Abstract

　本発明は、下記式（１）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を含有するＭｉｎｔ３阻害剤を提供する。式（１）：

Description

Ｍｉｎｔ３阻害剤

　本発明は、Ｍｉｎｔ３阻害剤に関する。

　マクロファージ等の炎症性細胞やがん細胞では、通常酸素下でも酸素を使用しない解糖系を利用してエネルギー産生することが知られている。そして、解糖系制御において、転写因子である低酸素誘導因子（Ｈｙｐｏｘｉａ　Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　Ｆａｃｔｏｒ、ＨＩＦ）が重要な役割を果たしている。
　ＨＩＦファミリーには、ＨＩＦ－１、ＨＩＦ－２及びＨＩＦ－３があるが、ＨＩＦ－１とＨＩＦ－２ががんの悪性化に関わることが知られている。
　また、ＨＩＦは、がん細胞や炎症性細胞を活性化することで、がんの悪性化や炎症性疾患の憎悪を引き起こすことが知られている。
　さらに、マクロファージやがん細胞でＨＩＦを活性化させる分子として、Ｍｉｎｔ３が同定されている。

　ＨＩＦを標的とした薬剤の開発が行われているが、現在のところ臨床応用可能なＨＩＦ阻害剤の開発には至っていない。
　特許文献１には、ＨＩＦ活性促進／阻害化合物のスクリーニング方法が開示されている。

　また、非特許文献１～３には、ＭＴ１－ＭＭＰ／Ｍｉｎｔ３パスウェイによりＨＩＦが制御されることが開示されている。

特開２０１０－１９５６８４号公報

Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ．，２０１４，３４（１），３０－４２Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．，２０１１，２８６，１４６９１－１４７０４Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．，２０１１，２８６，３２５４２－３２５５１

　本発明者らは、新規ＨＩＦ阻害剤を開発するに辺り、ＨＩＦを特異的に活性化するＭＴ１－ＭＭＰ／Ｍｉｎｔ３パスウェイに着目した。ＭＴ１－ＭＭＰ／Ｍｉｎｔ３パスウェイを阻害することができれば、ＨＩＦの活性化を阻害することにより、がん細胞やマクロファージ、線維芽細胞及び新生血管等のがん間質細胞を制御し、がんの増殖及び／又は転移等を抑制できると考えた。また、ＨＩＦの活性化を阻害することにより、マクロファージを抑制でき炎症性疾患治療に有用であろうと考えた。

　本発明が解決しようとする課題は、がん治療や、炎症性疾患治療に用いることのできる新規Ｍｉｎｔ３阻害剤を提供することである。

　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、新規Ｍｉｎｔ３阻害剤として、式１で表される化合物が、上記課題を解決することができることを見出し、本発明を完成した。

　すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）
　下記式１で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を含有するＭｉｎｔ３阻害剤。
式１：

（式１中、
　Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、それぞれ独立して、水素、水酸基、カルボキシル基、スルフォン酸基、ハロゲン及びアルキル基からなる群から選択され、ただし、Ｒ₁とＲ₆は、一緒になって、架橋酸素を表し、連結する２つのベンゼン環と酸素含有縮合環を形成してもよく、Ｒ₂～Ｒ₅は、隣り合う２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、Ｒ₇～Ｒ₁₀は、隣りあう２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、
　Ｒ₁₁、Ｒ₁₃及びＲ₁₄は、それぞれ独立して、水素、水酸基及びカルボキシル基からなる群から選択され、Ｒ₁₂は、水素、水酸基、酸素及びカルボキシル基からなる群から選択され、ただし、Ｒ₁₁～Ｒ₁₄は、隣りあう２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、
　Ｘは、水素、カルボキシル基及びスルフォン酸基からなる群から選択され、
　Ｙは、水素であるか、環Ａとの二重結合であるか、Ｘと一緒になってスピロ環を形成し、
　Ｒ₁₂が酸素である場合、Ｒ₁₂と結合する環との結合は二重結合であり、環Ａはキノン構造であり、
　Ｒ₁₂が水素、水酸基又はカルボキシル基である場合には、環Ａはベンゼン環である。）
（２）
　下記式２で表される化合物である、（１）に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
式２：

（式２中、
　Ｒ₂₁及びＲ₂₂は、それぞれ、隣り合う２つの基が一緒になって、置換ベンゼン環を形成し、ｍ及びｎは、それぞれ０～４の整数である。）
（３）
　ベンゼン環の置換基は、Ｒ₁₅Ｏ－基又はＣｌ₃ＣＣＨ₂ＳＯ₃－基であり、Ｒ₁₅は、水素、アルキル基、アシル基、トシル基、メシル基及びＣｌ₃ＣＣＨ₂ＳＯ₃－基からなる群から選択される、（１）又は（２）に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
（４）
　下記式３で表される化合物である、（１）に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
式３：

（式３中、
　Ｒ₂₃は、水酸基及びカルボキシル基からなる群から選択され、Ｒ₂₄及びＲ₂₅は、それぞれ独立して、水酸基、カルボキシル基及びスルフォン酸基からなる群から選択され、ｐ及びｑは、それぞれ０～４の整数である。）
（５）
　下記式４又は式５で表される化合物である、（１）～（３）のいずれかに記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
式４：

式５：

（６）
　（１）～（５）のいずれかに記載のＭｉｎｔ３阻害剤を含有する抗腫瘍用医薬。
（７）
　膵癌、卵巣癌又は乳癌に用いられる、（６）に記載の抗腫瘍用医薬。
（８）
　腫瘍増殖抑制又は転移抑制に用いられる、（６）又は（７）に記載の抗腫瘍用医薬。
（９）
　さらに他の抗がん剤を含有する、（６）～（８）のいずれかに記載の抗腫瘍用医薬。
（１０）
　抗がん剤の治療効果増強剤であって、抗がん剤投与時期に対して、事前、同時又は事後に投与する、（１）～（５）のいずれかに記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
（１１）
　（１）～（５）のいずれか記載のＭｉｎｔ３阻害剤を含有する抗炎症用医薬。

　本発明によれば、新規Ｍｉｎｔ３阻害剤を提供することができる。式１で表されるＭｉｎｔ３阻害剤は、がん治療や、炎症性疾患治療に用いることができる。

Ｍｉｎｔ３阻害活性を示す化合物を示す。化合物１～１３は、ＮＰＤｅｐｏ　Ａｒｒａｙに存在する化合物である。化合物５、８、９及び１０のＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙの結果を示す。化合物２及び５のＰｕｌｌ－ｄｏｗｎ　ａｓｓａｙの結果を示す。化合物２及び５はＭｉｎｔ３とＦＩＨ－１との結合を阻害する。化合物５の腫瘍組織における作用を示す。化合物５は腫瘍組織におけるＭｉｎｔ３とＦＩＨ－１の結合を阻害する。肺転移モデル実験の結果を示す。化合物５はマウスメラノーマ細胞Ｂ１６Ｆ１０の肺転移を抑制する。ＬＰＳエンドトキシンショックモデル実験の結果を示す。化合物５はＬＰＳによるエンドトキシンショックを抑制する。乳癌皮下移植モデル実験（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）における、単剤での評価の結果を示す。膵癌皮下移植モデル実験（ＡｓＰＣ１細胞）における、単剤での評価の結果を示す。膵癌皮下移植モデル実験（ＢｘＰＣ３細胞）における、単剤での評価の結果を示す。乳癌皮下移植モデル実験（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）における、他の抗がん剤（ドキソルビシン）との併用実験の評価の結果を示す。膵癌皮下移植モデル実験（ＡｓＰＣ１細胞）における、他の抗がん剤（ゲムシタビン）との併用実験の評価の結果を示す。卵巣癌腹膜播種モデル実験の結果を示す。

　以下、本発明を実施するための形態について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。

　本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、下記式１で表される化合物である。
式１：

　Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、それぞれ独立して、水素、水酸基、カルボキシル基、スルフォン酸基、ハロゲン及びアルキル基からなる群から選択される。
　Ｒ₁とＲ₆は、一緒になって、架橋酸素を表し、連結する２つのベンゼン環と酸素含有縮合環を形成してもよく、Ｒ₂～Ｒ₅は、隣り合う２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、Ｒ₇～Ｒ₁₀は、隣りあう２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよい。
　Ｒ₁とＲ₆は、一緒になって、架橋酸素を表し、連結する２つのベンゼン環と酸素含有縮合環を形成する場合、式１で表される化合物は、下記式６で表される。
式６：

　Ｒ₂～Ｒ₅は、隣り合う２つの基が一緒になって、ベンゼン環を形成する場合、Ｒ₂とＲ₃、Ｒ₃とＲ₄、又はＲ₄とＲ₅がベンゼン環を形成してもよい。
　Ｒ₇～Ｒ₁₀は、隣り合う２つの基が一緒になって、ベンゼン環を形成する場合、Ｒ₇とＲ₈、Ｒ₈とＲ₉、又はＲ₉とＲ₁₀がベンゼン環を形成してもよい。
　例えば、Ｒ₃とＲ₄が、ベンゼン環を形成し、Ｒ₈とＲ₉が、ベンゼン環を形成する場合、式１で表される化合物は、下記式７で表される。
式７：

　式７中、２つのベンゼン環ＢとＣは、置換されていてもよく、無置換でもよいが、置換基を有することが好ましい。

　Ｒ₁₁、Ｒ₁₃及びＲ₁₄は、それぞれ独立して、水素、水酸基及びカルボキシル基からなる群から選択される。
　Ｒ₁₂は、水素、水酸基、酸素及びカルボキシル基からなる群から選択される。
　Ｒ₁₁～Ｒ₁₄は、隣りあう２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよい。
　Ｒ₁₁～Ｒ₁₄は、隣り合う２つの基が一緒になって、ベンゼン環を形成する場合、Ｒ₁₁とＲ₁₂、Ｒ₁₂とＲ₁₃、又はＲ₁₃とＲ₁₄がベンゼン環を形成してもよい。
　例えば、Ｒ₁₂とＲ₁₃が、ベンゼン環を形成する場合、式１で表される化合物は、下記式８で表される。
式８：

　式８中、ベンゼン環Ｄは、置換されていてもよく、無置換でもよい。

　Ｘは、水素、カルボキシル基及びスルフォン酸基からなる群から選択される。
　Ｙは、水素であるか、環Ａとの二重結合であるか、Ｘと一緒になってスピロ環を形成する。

　Ｙが環Ａとの二重結合である場合、式１で表される化合物は、下記式９で表される。
式９：

　ＹがＸと一緒になってスピロ環を形成する場合、式１で表される化合物は、下記式１０で表される。
式１０：

　式１０中、Ｘ’は、－Ｃ（＝Ｏ）－及び－ＳＯ₂－からなる群から選択される。

　Ｒ₁₂が酸素である場合、Ｒ₁₂と結合する環との結合は二重結合であり、環Ａはキノン構造であり、式１で表される化合物は、式９で表される。
　Ｒ₁₂が水素、水酸基又はカルボキシル基である場合には、環Ａはベンゼン環であり、式１で表される化合物は、下記式１１で表される。
式１１：

　式１で表される化合物は、下記式２で表される化合物であることが好ましい。
式２：

　式２中、Ｒ₂₁及びＲ₂₂は、それぞれ、隣り合う２つの基が一緒になって、置換ベンゼン環を形成し、ｍ及びｎは、それぞれ０～４の整数であり、２の整数であることが好ましい。
　式２で表される化合物は、下記群からなる骨格を有する化合物であることが好ましい。

　上記群で表される化合物においてベンゼン環の置換基は省略して記載している。

　本発明において、ベンゼン環の置換基としては、例えば、水酸基、アミノ基、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、シクロアルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルカルボニル基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルスルフォニルオキシ基、アリールスルフォニルオキシ基、カルボキシル基、アルキルオキシカルボニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロアリール基及びヘテロシクロアルキル基等が挙げられ、好ましくは、Ｒ₁₅Ｏ－基及びＣｌ₃ＣＣＨ₂ＳＯ₃－基が挙げられる。
　Ｒ₁₅は、水素、アルキル基、アシル基、トシル基、メシル基及びＣｌ₃ＣＣＨ₂ＳＯ₃－基からなる群から選択されることが好ましい。

　アルキル基（アルキルを含む）としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｉ－プロピル基、ブチル基、ｉ－ブチル基、ｔ－ブチル基、へプチル基及びヘキシル基等が挙げられる。
　アルケニル基（アルケニルを含む）やアルキニル基（アルキニルを含む）としては、アルキル基において二重結合、三重結合を有する基が挙げられる。
　シクロアルキル基（シクロアルキルを含む）としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基及びシクロヘキシル基等が挙げられる。
　アリール基（アリールを含む）としては、例えば、置換基を有していてもよい、フェニル基及びナフチル基等が挙げられる。フェニル基やナフチル基の置換基としては、ベンゼン環の置換基として記載する、置換基であってもよい。
　アラルキル基は、アリールアルキル基のことであり、例えば、ベンジル基及びフェネチル基等が挙げられる。
　ヘテロアリール基としては、１又は複数の窒素、酸素及び／又は硫黄を含む５員又は６員の芳香族環であって、ヘテロシクロアルキル基としては、１又は複数の窒素、酸素及び／又は硫黄を含む３員～６員の飽和環である。

　式２で表される化合物としては、下記群からなる化合物であることが好ましい。

　Ｒ₃₁及びＲ₃₂は、それぞれ独立して、結合手が示すベンゼン環における置換基を表し、ｒ及びｓは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
　Ｒ₃₁及びＲ₃₂は、水酸基であることが好ましい。

　式２で表される化合物としては、下記群からなる化合物であることがより好ましい。

　式１で表される化合物は、下記式４で表される化合物であるか、
式４：

下記式５で表される化合物であることが好ましい。
式５：

　式１で表される化合物として、式１で表される化合物に存在する水酸基、カルボキシル基及びスルフォン酸基等を、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　Ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．に記載されている方法又はそれに準ずる方法に従って、あるいは、公知の方法に従って、誘導化した化合物としてもよい。
　中でも、式４で表される化合物又は式５で表される化合物は、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　Ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　ｂｙ　Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．に記載されている方法又はそれに準ずる方法に従って、あるいは、公知の方法に従って、フェノール性水酸基を誘導化した化合物としてもよい。すなわち、式４で表される化合物又は式５で表される化合物において、ＯＨ基は、Ｒ₁₅Ｏ－基（Ｒ₁₅は水素以外である。）で置換されていてもよい。
　また、式１で表される化合物、中でも、式４で表される化合物又は式５で表される化合物は、当業界に公知の方法に従って、プロドラッグとして誘導化した化合物としてもよい。

　式１で表される化合物は、下記スキーム及びその変法により製造することができる。
スキーム１：

スキーム２：

　スキーム１において、Ｒ₃₃は、Ｒ₃₁及びＲ₃₂に相当する基である。また、スキーム１において、無水フタル酸に代えて、２，３－ナフタレンジカルボン酸無水物を用いてもよい。
　具体的には、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，７７，３４９２－３５００及びＣｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００５，５９７４－５９７６等の公知文献を参考にして、式１で表される化合物を製造することができる。

　式１で表される化合物は、下記式３で表される化合物であってもよい。
式３：

　式３中、Ｒ₂₃は、水酸基及びカルボキシル基からなる群から選択される。
　Ｒ₂₄及びＲ₂₅は、それぞれ独立して、水酸基、カルボキシル基及びスルフォン酸基からなる群から選択される。
　ｐ及びｑは、それぞれ０～４の整数である。

　本発明の式１で表される化合物を含有するＭｉｎｔ３阻害剤は、抗腫瘍用医薬として用いることができる。
　Ｍｉｎｔ３は、ＭＴ１－ＭＭＰ／Ｍｉｎｔ３　ａｘｉｓによりＨＩＦ－１を活性化していると考えられる。そこで、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤により、ＨＩＦ－１不活性化を引き起こし、解糖系や血管新生の低下により、造腫瘍能の低下やがん転移の低下を引き起こすと考えられる。また、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、ＭＴ１－ＭＭＰ／Ｍｉｎｔ３　ａｘｉｓ　によるＨＩＦ－２活性化を抑制することが考えられる。
　したがって、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、ＭＴ１－ＭＭＰの発現するがん細胞腫や間質細胞が標的となる。
　また、間質細胞としては、マクロファージ、線維芽細胞及び血管内皮細胞等が挙げられる。
　マクロファージ、線維芽細胞及び血管内皮細胞等のがん間質細胞は増殖因子、サイトカイン及び／又はケモカイン等の産生を介してがんの増殖、浸潤及び／又は転移を促進する。また、各細胞種に特異的なメカニズムとして、マクロファージによるがん悪性化機構の一部は炎症反応に含まれる。線維芽細胞はコラーゲン等細胞外基質の産生を介してがん組織の線維化を促進し、硬化したがん組織によりインテグリンシグナルやＨｉｐｐｏパスウェイ等を介してがんの浸潤性を促進するか、抗がん抵抗性を付与する。血管内皮細胞は血管新生を介してがん組織に酸素、栄養を供給するためがんの増殖及び転移を促進する。
　本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、それぞれの間質細胞の活性化を抑えることで上述のがん悪性化機構を抑制することが期待される。

　抗腫瘍用医薬として、特に限定されるものではないが、例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、脳腫瘍、頭頚部癌、食道癌、胃癌、虫垂癌、大腸癌、肛門癌、胆嚢癌、胆管癌、膵癌、消化管間質腫瘍、肺癌、肝癌、中皮腫、甲状腺癌、腎臓癌、前立腺癌、神経内分泌腫瘍、黒色腫、乳癌、子宮体癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、軟部肉腫、カポジ肉腫、筋肉腫、腎臓癌、膀胱癌及び睾丸癌等に用いることができるが、中でも、がん細胞腫としては、膵癌、グリオブラストーマ、非小細胞肺癌、乳癌、頭頸部癌、胃癌、卵巣癌及び肝細胞癌等が挙げられる。
　中でも、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、膵癌、卵巣癌及び乳癌に用いられることが好ましい。
　また、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、腫瘍増殖抑制又は転移抑制に用いられることが好ましい。中でも、術後の腫瘍増殖抑制又は転移抑制に用いられることがより好ましい。

　また、本発明においては、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤を単独で投与するだけではなく、他の薬剤との併用によっても、治療効果を得ることができる。
　中でも、他の抗がん剤との併用することで、予期し得ない抗腫瘍活性を有することが見出された。本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、他の抗がん剤と併用することが好ましい。
　併用し得る抗がん剤としては、公知の抗がん剤であれば特に限定されるものではないが、膵癌、グリオブラストーマ、非小細胞肺癌、乳癌、頭頸部癌、胃癌、卵巣癌及び肝細胞癌等に用いられる公知の抗がん剤が好ましい。
　抗がん剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、エトポシド、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、メトトレキサート、フルオロウラシル、テガフール、ドキシフルリジン、カペシタビン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、マイトマイシンＣ、トポテカン、カンポテシン、イリノテカン、シタラビン、ビルラビシン、アクラルビシン、ミトキサントロン、ゲムシタビン、カンポテシン、シスプラチン、タモキシフェン、トレミフェン、ゴセレリン、リュープロレリン、ファオドロゾール、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、メドロキシプロゲステロン、メピチオスタン、メチルテストステロン、エチニルエストラジオール、パミドロン酸、ゾレドロン酸、トラスツズマブ、エルロチニブ及びＴＳ－１等が挙げられる。
　中でも、アンスラサイクリン系薬剤、タキサン系薬剤及びヌクレオシド系薬剤等が好ましく用いることができる。

　本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、抗がん剤の治療効果増強剤として、抗がん剤投与時期に対して、事前、同時又は事後に投与する方法で用いることができるが、この効果増強剤としての利用は大きな利点がある。
　最近のがん研究の進展によって、がん組織は分化度で発現遺伝子が異なるヘテロな細胞集団であることが分かってきた。このようながん組織に対して薬物療法を行う場合、悪性度の高い細胞集団を目標に抗がん剤が選択されるのが普通であるが、ヘテロな細胞集団である以上、がん組織全体に治療効果を及ぼすためには一定の工夫が必要となる。がん組織が周囲のマクロファージ、線維芽細胞及び血管内皮細胞等から生存と増殖の支援を受けていることが明らかになっている（いわゆるがん細胞ニッチ）ので、この部分に作用する本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、抗がん剤の治療効果増強剤として効果的に治療効果を引き出すことができる。

　本発明の式１で表される化合物を含有するＭｉｎｔ３阻害剤は、抗炎症用医薬として用いることができる。
　Ｍｉｎｔ３は、ＭＴ１－ＭＭＰ／Ｍｉｎｔ３　ａｘｉｓによりＨＩＦ－１及びＨＩＦ－２を活性化していると考えられる。そこで、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤により、ＨＩＦの介在する炎症性疾患の治療又は予防に用いることができる。
　中でも、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、マクロファージ介在性の炎症性疾患に用いることができ、また、敗血症等の治療又は予防に用いることができる。
　本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、他の炎症性疾患治療又は予防薬と併用してもよい。

　本発明のＭｉｎｔ３阻害剤は、「薬理学的に許容される塩」であってもよく、「薬理学的に許容される塩」としては、特に限定されるものではなく、例えば、有機酸や無機酸との塩、有機塩基や無機塩基との塩、アミノ酸との塩等が挙げられる。
　有機酸や無機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、ステアリン酸、コハク酸、エチルコハク酸、マロン酸、ラクトビオン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、メタンスルフォン酸、エタンスルフォン酸、２－ヒドロキシエタンスルフォン酸、ベンゼンスルフォン酸、パラトルエンスルフォン酸、ラウリル硫酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、アジピン酸、システイン、Ｎ－アセチルシステイン、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、ヨウ化水素酸、ニコチン酸、シュウ酸、ピクリン酸、チオシアン酸、ウンデカン酸、アクリル酸ポリマー及びカルボキシビニルポリマー等が挙げられる。
　有機塩基としては、例えば、モルホリン及びピペリジン等が挙げられ、無機塩基との塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩及びカルシウム塩等が挙げられる。
　Ｍｉｎｔ３阻害剤は、場合により、光学異性体であってもよく、光学異性体の混合物（ラセミ体を含む）であってもよい。また、結晶多形を有していてもよく、溶媒和物や水和物であってもよい。

　本発明の抗腫瘍用医薬は、医薬組成物の形態で使用することができる。医薬組成物は、従来公知の方法により製造することができるが、Ｍｉｎｔ３阻害剤に加え、薬剤上許容される担体が含まれていてもよい。
　「薬剤上許容される担体」としては、特に限定されるものではないが、安定化剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、抗酸化剤、矯味剤、着色剤、香料その他の薬剤学的に許容される添加剤が挙げられる。

　医薬組成物は、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入等も含む）、経皮及び経粘膜への投与を含み、治療上適切な投与経路に適合するように製剤化される。

　本発明のＭｉｎｔ３阻害剤の投与量は、投与される患者の状態、投与方法等により適宜決定されるが、一日に患者の体重あたり約０．１μｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇを投与するのが好ましい。投与回数は、単回でも複数回であってもよく、好ましくは、一日に１～４回の投与計画で、好ましくは一日に１回又は２回投与される。

　本発明の医薬組成物はキットの形態であってもよい。キットとしては、薬剤上許容される担体とのキットであってもよく、他の抗がん剤とのキットであってもよい。
　キットにより、用時の調製を行って、投与用医薬組成物とすることもできる。
　また、キットには使用説明書が添付されていてもよい。

　本発明の抗腫瘍用医薬が、他の抗がん剤との併用により用いられる場合、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤と、他の抗がん剤とは、同時に又は別時に投与してもよく、それぞれに適切な投与方法によってもよい。
　また、他の抗がん剤との合剤であってもよく、それぞれを別々に医薬組成物として投与してもよい。さらに、リポソームに包埋する等の技術による薬物送達システム（Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍ：ＤＤＳ）によって効果的に投与してもよい。

　本発明は、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤を用いた、抗腫瘍用医薬としての投与方法や、それを必要とする患者に投与するための抗腫瘍剤としての治療方法にも関する。また、本発明は、本発明のＭｉｎｔ３阻害剤と他の抗がん剤との併用療法にも関する。

　以下、実施例により本実施形態を詳細に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。実施例において示される測定方法は以下のとおりである。

　以下の実験において、マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０細胞は東北大学加齢医学研究所より分与されたものを用いた。
　また、ヒト線維芽肉腫ＨＴ１０８０細胞、ヒト乳癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞、ヒト膵癌ＡｓＰＣ１細胞、ヒト膵癌ＢｘＰＣ３細胞及びヒト卵巣癌ＳＫＯＶ３細胞はＡＴＣＣから購入した。細胞は１０％　ＦＢＳ、ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）培地（Ｂ１６Ｆ１０、ＨＴ１０８０、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）又はＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）培地（ＡｓＰＣ１、ＢｘＰＣ３、ＳＫＯＶ３）で培養した。
　ヌードマウス（ＢＡＬＢ／ｃＡ、ｎｕ／ｎｕ）及びＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスは日本クレアより購入した。

＜化合物５及び化合物６の製造方法＞

　１，６－ジヒドロキシナフタレン（３．２０ｇ、２０ｍｍｏｌ）と無水フタル酸（１．４８ｇ、１０ｍｍｏｌ）をメタンスルフォン酸（５０ｍＬ）中、窒素雰囲気下１００℃で１０時間加熱攪拌した。反応液を、室温まで冷却し、氷水（４００ｍＬ）に注いだ。得られた赤色沈殿物を濾取し、水で洗浄し乾燥させた。得られた結晶をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製を行い、化合物５（１．３５ｇ、３１％）を赤色結晶として得た。
　化合物５（４３．２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）とＫ₂ＣＯ₃（６９．１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のアセトン（１ｍＬ）懸濁液中に、ヨウ化メチル（２４．９μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を４時間加熱還流させた。反応液を冷却後、アセトンを真空により除いた。得られた結晶を酢酸エチルに溶解した。有機層は水と食塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、真空により濃縮した。さらに、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ－ｈｅｘａｎｅ：ＥｔＯＡｃ：ＣＨＣｌ₃＝１：１：０．５）により精製を行い、化合物６（２９．４ｍｇ、６４％）を赤色結晶として得た。
化合物６：
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 3.96 (s, 6H), 6.81 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.14 (m, 1H), 7.15 (d, J = 2.3. Hz, 2H), 7.36 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.61-7.68 (m, 2H), 8.10 (m, 1H), 8.65 (d, J = 9.2 Hz, 2H).
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 55.4, 83.9, 106.2, 110.6, 119.0, 119.1, 122.8, 123.7, 124.1, 124.6, 125.0, 126.5, 129.7, 135.1, 136.0, 146.8, 154.1, 159.2, 169.8.

＜化合物９の製造方法＞

　１，６－ジヒドロキシナフタレン（３２０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）と２，３－ナフタレンジカルボン酸無水物（１９８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をメタンスルフォン酸（５ｍＬ）中、窒素雰囲気下１００℃で１０時間加熱攪拌した。反応液を、室温まで冷却し、氷水（４０ｍＬ）に注いだ。得られた赤色沈殿物を濾取し、水で洗浄し乾燥させた。得られた結晶をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ＝４０：１～１０：１）により精製を行い、化合物９（８６．５ｍｇ、１８％）を赤色結晶として得た。
化合物９：
¹H NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 6.69 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.32 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 2H), 7.56 (ddd, J = 8.0, 6.9, 1.1 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.61 (ddd, J = 8.0, 6.9, 1.1 Hz, 1H), 7.79 (bd, J = 8.0 Hz, 1H), 8.19 (bd, J = 8.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.66 (bs, 1H).
¹³C NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 86.3, 110.6, 111.8, 119.5, 120.0, 123.7, 124.76, 124.80, 125.4, 125.8, 127.3, 128.6, 129.6, 130.4, 131.0, 135.0, 137.8, 138.5, 148.0, 149.7, 158.7, 171.4.

＜Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｓｓａｙ＞
　Ｓａｋａｍｏｔｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．，２００９，２８４（４４），３０３５０－３０３５９に記載の方法に従って、ヒト線維芽肉腫ＨＴ１０８０細胞にＨＩＦ－１αＣＡＤの転写活性をモニターできるレポータープラスミドを導入した。遺伝子導入後２４時間後に化合物を１μＭで添加し、その２４時間後にルシフェラーゼ活性を測定した。ＮＰＤｅｐｏ　Ａｒｒａｙに存在する化合物１～１３は、濃度１μＭでＭｉｎｔ３阻害活性を示した。
　ノックダウン実験では、レポータープラスミド導入２４時間前にＭｉｎｔ３に対するｓｉＲＮＡ又はコントロールｓｉＲＮＡ（Ｓａｋａｍｏｔｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．，２０１１，２８６（１６），１４６９１－１４７４０）１０ｎＭをＲＮＡｉＭＡＸ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて導入した。結果を図２に示す。

＜ＭＴＴ　ａｓｓａｙ＞
　ヒト線維芽肉腫ＨＴ１０８０細胞を９６ｗｅｌｌ　ｐｌａｔｅに５ｘ１０³ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し各化合物を１０μＭ加え培養し、４８時間後ＴｅｔｒａＣｏｌｏｒ　ＯＮＥを加え１時間後に４５０ｎｍの吸光度（６３０ｎｍをリファレンス）を測定した。化合物２及び化合物５は細胞毒性を示さないことを確認した。
　また、ヒト結腸腺癌ＨＴ２９細胞におけるＭＴＴアッセイでは、化合物５及び化合物１０は、１０μＭ以下では細胞毒性を示さなかった。

＜Ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ　ａｓｓａｙ＞
　大腸菌で作製したＨｉｓ６－Ｍｉｎｔ３（Ｈｉｓの６量体をＭｉｎｔ３のＮ末端に結合させたもの）とＧＳＴタグ又はＧＳＴ－ＦＩＨ－１（ＧＳＴタグをＦＩＨ－１のＮ末端に結合させたもの）各１μｇ、化合物２及び化合物５を１μＭ、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ｂｅａｄｓをｌｙｓｉｓ　ｂｕｆｆｅｒ（１％ＮＰ－４０、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ８．０）に加え一晩４℃で攪拌し、ビーズを洗浄後ボイルし、ウエスタンブロッティングに供し、ビーズに結合したＨｉｓ６－Ｍｉｎｔ３を検出した。結果を図３に示す。
　なお、ＦＩＨ－１は、ＨＩＦ－１及びＨＩＦ－２に対して阻害活性を有することが知られている。

　ＦＬＡＧ－ＦＩＨ－１（ＦＬＡＧタグをＦＩＨ－１のＮ末端に結合させたもの）を発現させたヒト線維肉腫ＨＴ１０８０細胞（２ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）をヌードマウス皮下に移植し腫瘍を作らせ、２週間後に２００ｍｇ／ｋｇで化合物５を腹腔投与し、０、１、２、４、８時間後の腫瘍組織を取り出し、ｌｙｓｉｓ　ｂｕｆｆｅｒ（１％ＮＰ－４０、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ８．０）に溶解後、ａｎｔｉ－ＦＬＡＧ　Ｍ２ビーズを用いて免疫沈降実験を行い、沈降物をウエスタンブロッティングに供し、抗Ｍｉｎｔ３マウス抗体（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）、抗ＦＬＡＧエピトープＭ２抗体（Ｓｉｇｍａ社製）で検出した。結果を図４に示す。

＜メラノーマ実験的肺転移モデル＞
　マウスメラノーマＢ１６Ｆ１０細胞（４ｘ１０⁵ｃｅｌｌｓ）をＣ５７ＢＬ／６マウス（６週齢、オス）尾静脈より移植した。化合物５（１００ｍｇ／ｋｇ）を腫瘍移植前日、当日、移植後１－３日の５日間腹腔投与した。腫瘍移植後１４日目の肺の転移結節をカウントした。結果を図５に示す。

＜ＬＰＳエンドトキシンショックモデル＞
　ＬＰＳ（１５ｍｇ／ｋｇ）をＣ５７ＢＬ／６マウス（６週齢、オス）に腹腔投与した。化合物５（１００ｍｇ／ｋｇ）をＬＰＳ投与前日、当日、翌日の３日間腹腔投与した。ＬＰＳ投与後のマウスの生存率を測定した。結果を図６に示す。

＜乳癌、膵癌皮下移植モデル＞
［単剤での評価］
　ヒト乳癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（１ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）、ヒト膵癌細胞ＡｓＰＣ１（１．５ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）及びヒト膵癌細胞ＢｘＰＣ３（２ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）を、それぞれヌードマウス（６週齢、メス）皮下に移植した。移植後７日（ＡｓＰＣ１）、１０日（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）又は１４日目（ＢｘＰＣ３）から化合物５（１００ｍｇ／ｋｇ）を週に５日間投与し（５日投与、２日休み）、皮下腫瘍の測定を行った。腫瘍体積は（短径２ｘ長径）／２として求めた。結果を図７～図９に示す。

［他の抗がん剤との併用実験］
　ヒト乳癌ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（１ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）及びヒト膵癌細胞ＡｓＰＣ１（１．５ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）を、それぞれヌードマウス（６週齢、メス）皮下に移植した。移植後１０日から化合物５（１００ｍｇ／ｋｇ）、抗がん剤（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１：ドキソルビシン　１ｍｇ／ｋｇ、ＡｓＰＣ１：ゲムシタビン　２０ｍｇ／ｋｇ）を週に２回（４－３日）投与し、皮下腫瘍の測定を行った。結果を図１０及び図１１に示す。

＜卵巣癌腹膜播種モデル＞
　ヒト卵巣癌ＳＫＯＶ３細胞（２ｘ１０⁶ｃｅｌｌｓ）をヌードマウス（６週齢、メス）腹腔内に移植した。移植後７日後から週３回（２－２－３日）化合物５を１００ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。移植後２８日のマウス腹腔内の腫瘍結節をカウントした。結果を図１２に示す。

　本発明によれば、新規Ｍｉｎｔ３阻害剤を提供することができる。式１で表されるＭｉｎｔ３阻害剤は、がん治療や、炎症性疾患治療に用いることができる点で、産業上の利用可能性を有する。

Claims

　下記式１で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を含有するＭｉｎｔ３阻害剤。
式１：

（式１中、
　Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、それぞれ独立して、水素、水酸基、カルボキシル基、スルフォン酸基、ハロゲン及びアルキル基からなる群から選択され、ただし、Ｒ₁とＲ₆は、一緒になって、架橋酸素を表し、連結する２つのベンゼン環と酸素含有縮合環を形成してもよく、Ｒ₂～Ｒ₅は、隣り合う２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、Ｒ₇～Ｒ₁₀は、隣りあう２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、
　Ｒ₁₁、Ｒ₁₃及びＲ₁₄は、それぞれ独立して、水素、水酸基及びカルボキシル基からなる群から選択され、Ｒ₁₂は、水素、水酸基、酸素及びカルボキシル基からなる群から選択され、ただし、Ｒ₁₁～Ｒ₁₄は、隣りあう２つの基が一緒になって、置換又は無置換のベンゼン環を形成してもよく、
　Ｘは、水素、カルボキシル基及びスルフォン酸基からなる群から選択され、
　Ｙは、水素であるか、環Ａとの二重結合であるか、Ｘと一緒になってスピロ環を形成し、
　Ｒ₁₂が酸素である場合、Ｒ₁₂と結合する環との結合は二重結合であり、環Ａはキノン構造であり、
　Ｒ₁₂が水素、水酸基又はカルボキシル基である場合には、環Ａはベンゼン環である。）
　下記式２で表される化合物である、請求項１に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
式２：

（式２中、
　Ｒ₂₁及びＲ₂₂は、それぞれ、隣り合う２つの基が一緒になって、置換ベンゼン環を形成し、ｍ及びｎは、それぞれ、０～４の整数である。）
　ベンゼン環の置換基は、Ｒ₁₃Ｏ－基又はＣｌ₃ＣＣＨ₂ＳＯ₃－基であり、Ｒ₁₃は、水素、アルキル基、アシル基、トシル基、メシル基及びＣｌ₃ＣＣＨ₂ＳＯ₃－基からなる群から選択される、請求項１又は２に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
　下記式３で表される化合物である、請求項１に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
式３：

（式３中、
　Ｒ₂₃は、水酸基及びカルボキシル基からなる群から選択され、Ｒ₂₄及びＲ₂₅は、それぞれ独立して、水酸基、カルボキシル基及びスルフォン酸基からなる群から選択され、ｐ及びｑは、それぞれ、０～４の整数である。）
　下記式４又は式５で表される化合物である、請求項１～３のいずれか１項に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
式４：

式５：
　請求項１～５のいずれか１項に記載のＭｉｎｔ３阻害剤を含有する抗腫瘍用医薬。
　膵癌、卵巣癌又は乳癌に用いられる、請求項６に記載の抗腫瘍用医薬。
　腫瘍増殖抑制又は転移抑制に用いられる、請求項６又は７に記載の抗腫瘍用医薬。
　さらに他の抗がん剤を含有する、請求項６～８のいずれか１項に記載の抗腫瘍用医薬。
　抗がん剤の治療効果増強剤であって、抗がん剤投与時期に対して、事前、同時又は事後に投与する、請求項1～５のいずれか１項に記載のＭｉｎｔ３阻害剤。
　請求項１～５のいずれか１項に記載のＭｉｎｔ３阻害剤を含有する抗炎症用医薬。