WO2016146604A1 - 7-{4-[(2s)-2-({[trans-4-(aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-(phenylamino)-3-oxopropyl]phenyl}-6-methyl-4-oxo-1,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure-derivate als faktor xia inhibitoren zur behandlung von fibrinolytischen erkrankungen - Google Patents

7-{4-[(2s)-2-({[trans-4-(aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-(phenylamino)-3-oxopropyl]phenyl}-6-methyl-4-oxo-1,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure-derivate als faktor xia inhibitoren zur behandlung von fibrinolytischen erkrankungen Download PDF

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WO2016146604A1
WO2016146604A1 PCT/EP2016/055493 EP2016055493W WO2016146604A1 WO 2016146604 A1 WO2016146604 A1 WO 2016146604A1 EP 2016055493 W EP2016055493 W EP 2016055493W WO 2016146604 A1 WO2016146604 A1 WO 2016146604A1
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methyl
amino
salts
mmol
phenyl
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PCT/EP2016/055493
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French (fr)
Inventor
Ulrike RÖHN
Manuel ELLERMANN
Susanne Röhrig
Robert Alan WEBSTER
Martina Victoria Schmidt
Adrian Tersteegen
Kristin BEYER
Martina SCHÄFER
Anja BUCHMÜLLER
Christoph Gerdes
Michael Sperzel
Jan Stampfuss
Alexander Hillisch
Jens Ackerstaff
Carsten TERJUNG
Original Assignee
Bayer Pharma Aktiengesellschaft
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D215/54—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3
    • C07D215/56—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3 with oxygen atoms in position 4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the invention relates to substituted phenylalanine derivatives and processes for their preparation and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular blood loss in hyperfibrinolytic conditions, organ transplants or cardiac surgery, especially with cardiopulmonary bypass or as part of a fibrin sealant ,
  • Blood clotting is a protective mechanism of the organism that can rapidly and reliably "seal" defects in the blood vessel wall, thus preventing or minimizing blood loss, and hemostasis following vascular injury is essentially through the coagulation system, where an enzymatic cascade becomes more complex It involves numerous clotting factors, each of which, once activated, converts the next inactive precursor to its active form, transforming the soluble fibrinogen into the insoluble fibrin at the end of the cascade Traditionally, one differentiates between the intrinsic and the extrinsic system in blood coagulation, which culminate in a final common pathway, where factors Xa and IIa (thrombin) play key roles: Factor Xa bundles the signals of the two Ge since it is formed by Factor VIIa / Tissue Factor (extrinsic pathway) as well as the Tenase complex (intrinsic pathway) by reaction of Factor X. The activated serine protease Xa cleaves prothrombin to thrombin, which
  • a key component of the transition from initiation to amplification and propagation of coagulation is factor XIa.
  • Thrombin activated in positive feedback loops in addition to Factor V and Factor VIII and Factor XI to Factor XIa, which converts Factor IX to Factor IXa and on the thus generated Factor IXa / Factor VIIIa complex quickly larger amounts of Factor Xa produced. This triggers the production of large amounts of thrombin, which leads to strong thrombus growth and stabilizes the thrombus.
  • fibrinolysis Upon activation of plasminogen by tissue plasminogen activator (tPA), the active serine protease, plasmin, is formed which cleaves the polymerized fibrin and thus degrades the thrombus. This process is called fibrinolysis - with plasmin as the key enzyme.
  • tissue plasminogen activator tPA
  • PK plasma kallikrein
  • PK is a multifunctional trypsin-like serine protease for which several physiological substrates are known.
  • the PK-mediated release of bradykinin from high-molecular-weight kininogen leads to the release of t-PA, NO and prostacyclin from endothelial cells, thereby affecting fibrinolysis, blood pressure and inflammation.
  • antifibrinolytics In hyperfibrinolytic conditions, there is no sufficient closure of the wound, which results in severe, sometimes life-threatening bleeding. For the prevention and treatment of such bleeding, antifibrinolytics are available in the clinic. Antifibrinolytics inhibit specific steps of fibrinolysis. Indirect antifibrinolytics such as tranexamic acid inhibit the activation of plasminogen; Direct acting antifibrinolytic drugs block plasmin itself. Corresponding effects have been demonstrated with the plasminogen inhibitor tranexamic acid in various clinical studies.
  • W089 / 11852 describes inter alia substituted phenylalanine derivatives for the treatment of pancreatitis
  • WO 2007/070816 describes substituted thiophene derivatives as factor XIa inhibitors
  • JP 2014227401 describes substituted phenylalanine derivatives as factor XIa inhibitors.
  • the invention relates to compounds of the formula
  • R 2 is fluorine or chlorine
  • R 3 is C 1 -C 3 -alkylaminocarbonyl or C 1 -C 3 -alkoxycarbonylamino
  • R 4 is fluorine or chlorine, and their salts, their solvates and the solvates of their salts.
  • Compounds of the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts, as well as those of formula (I), hereinafter referred to as embodiment (e) and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the compounds of formula (I) mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds according to the invention may exist in different stereoisomeric forms, ie in the form of configurational isomers or optionally also as conformational isomers (enantiomers and / or diastereomers, including those in the case of atropisomers).
  • the present invention therefore encompasses the enantiomers and diastereoisomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner; Preferably, chromatographic methods are used for this, in particular HPLC chromatography on achiral or chiral phase.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • the present invention also includes all suitable isotopic variants of the compounds of the invention.
  • An isotopic variant of a compound according to the invention is understood to mean a compound in which at least one atom within the compound according to the invention is exchanged for another atom of the same atomic number but with a different atomic mass than the atomic mass that usually or predominantly occurs in nature.
  • isotopes which can be incorporated into a compound of the invention are those of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, chlorine, bromine and iodine, such as 2 H (deuterium), 3 H (tritium), 13 C, 14 C, 15 N, O, 18 O, 32 P, 33 P, 33 S, 34 S, 35 S, 36 S, 18 F, 36 C, 82 Br, 123 I, 124 I, 129 I, and 131 I.
  • isotopic variants of a compound of the invention such as in particular those in which one or more radioactive isotopes are incorporated, may be useful, for example for the study of the mechanism of action or distribution of the drug in the body; Due to the comparatively easy production and detectability, compounds labeled with 3 H or 14 C isotopes are particularly suitable for this purpose.
  • isotopes such as deuterium may result in certain therapeutic benefits as a result of greater metabolic stability of the compound, such as prolonging the body's half-life or reducing the required effective dose;
  • modifications of the compounds of the invention may therefore optionally also constitute a preferred embodiment of the present invention.
  • Isotopic variants of the compounds according to the invention can be prepared by the processes known to the person skilled in the art, for example by the methods described below and the rules given in the exemplary embodiments, by using appropriate isotopic modifications of the respective reagents and / or starting compounds.
  • Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, for example hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, phosphoric, methanesulfonic, ethanesulfonic, toluenesulfonic, benzenesulfonic, naphthalenedisulfonic, acetic, trifluoroacetic, propionic, lactic Malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • mineral acids for example hydrochloric, hydrobromic, sulfuric, phosphoric, methanesulfonic, ethanesulfonic, toluenesulfonic, benzenesulfonic, naphthalenedisulfonic, acetic, trifluoroacetic, propionic, lactic Malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having 1 to 16 carbon atoms, for example and preferably, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, V-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, V-methylpiperidine and choline.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and am
  • solvates are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs includes compounds which may themselves be biologically active or inactive, but during their residence time in the body are converted to compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
  • the enantiomers can be separated either directly after the coupling of the L-phenylalanine intermediates with the amine H2N-R 1 or at a later intermediate of the synthesis or else the compounds according to the invention can be separated.
  • the separation of the enantiomers is directly after the coupling of the L-phenylalanine intermediates with the amine H 2 NR 1 .
  • treatment includes inhibiting, delaying, arresting, alleviating, attenuating, restraining, reducing, suppressing, restraining or curing a disease, a disease, a disease, an injury or a medical condition the unfolding, the course or the progression of such States and / or symptoms of such conditions.
  • therapy is understood to be synonymous with the term “treatment”.
  • prevention means the avoidance or reduction of the risk, a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder, a development or a Progression of such conditions and / or to get, experience, suffer or have the symptoms of such conditions.
  • Alkyl is a linear or branched alkyl radical having 1 to 3 carbon atoms, by way of example and preferably methyl, ethyl, n-propyl and iso-propyl.
  • Alkoxy represents a linear or branched alkoxy radical having 1 to 3 carbon atoms, by way of example and preferably methoxy, ethoxy, n-propoxy and iso-propoxy.
  • Alkylaminocarbonyl is an amino group having one or two independently selected identical or different straight-chain or branched alkyl substituents, each having 1 to 3 carbon atoms, and which is bonded via a carbonyl group, by way of example and preferably methylaminocarbonyl, ethylaminocarbonyl, n-propylaminocarbonyl, iso-propylaminocarbonyl, V, V-dimethylaminocarbonyl, N, N -diethylaminocarbonyl, V-ethyl-V-methylaminocarbonyl, V-methyl-Vn-propylaminocarbonyl, N-iso-propyl-A-n-propylaminocarbonyl and V, V-diisopropylaminocarbonyl.
  • C 1 -C 3 -alkylaminocarbonyl is, for example, a monoalkylaminocarbonyl radical having 1 to 3 carbon atoms or a dialkylaminocarbonyl radical having in each case 1 to 3 carbon atoms per alkyl substituent.
  • Alkoxycarbonylamino represents a linear or branched alkoxy radical which is bonded via a carbonylamino group having 1 to 3 carbon atoms, by way of example and preferably for methoxycarbonylamino, ethoxycarbonylamino, n-propoxycarbonylamino and isopropoxycarbonylamino.
  • R 1 is a group of the formula stands,
  • R 2 is fluorine or chlorine
  • R 3 is methylammocarbonyl or methoxycarbonylammo
  • R 4 is chlorine
  • R 1 is a group of the formula
  • R 2 is fluorine or chlorine
  • R 3 is methylammocarbonyl or methoxycarbonylammo, and their salts, their solvates and the solvates of their salts. Also particularly preferred is 7- ⁇ 4 - [(2iS) -2- ( ⁇ [ ⁇ '-5-4- (aminomethyl) cyclohexyl] carbonyl ⁇ arnino) -3- [3-chloro-4- (methylcarbamoyl ) phenyl] amino ⁇ -3-oxopropyl] phenyl ⁇ -6-methyl-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid having the following formula
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I), or their salts, their solvates or the solvates of their salts, where the compounds of the formula
  • R 1 has the meaning given above, be reacted with an acid.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 60 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • Acids are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is hydrogen chloride in dioxane.
  • the compounds of formula (II) are known or can be prepared by
  • R 1 has the abovementioned meaning
  • X 1 is bromine or iodine, with compounds of the formula
  • Q 1 is -B (OH) 2 , a boronic acid ester, preferably boronic acid methyl ester, or is reacted under Suzuki coupling conditions, or
  • R 1 has the meaning given above, be reacted in the presence of dehydrating reagents.
  • reaction according to process [A] is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C to reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. JV, JV-diethyl, V, V'-dipropyl, V, V'-diisopropyl, V, V'-dicyclohexylcarbodiimide, V- (3-dimethylamino-isopropyl) -V'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) ( optionally in the presence of pentafluorophenol (PFP)), V-cyclohexylcarbodiimide -V'-propyloxymethyl-polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-1,2 oxazolium-3-sulphate or 2-tert.-butyl-5-methylisoxazolium perchlor
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, V-methylmorpholine, V-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preference is Diisopro- pylethylamin.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate
  • hydrogen carbonate e.g. Sodium or potassium carbonate
  • organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, V-methylmorpholine, V-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preference is Diisopro- pylethylamin.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane or trisubstituted chloromethane, hydrocarbons such as benzene, or other solvents such as nitromethane, tetrahydrofuran, dioxane, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of the solvents, preferably tetrahydrofuran or dimethylformamide or a mixture of dimethylformamide and pyridine.
  • the compound of formula (IV) is known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • reaction according to process [B] is generally carried out in inert solvents, in the presence of a catalyst, if appropriate in the presence of an additional reagent, optionally in a microwave, preferably in a temperature range from room temperature to 150 ° C at atmospheric pressure to 3 bar.
  • catalysts are conventional palladium catalysts for Suzuki reaction conditions, preferably catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate / triscyclohexylphosphine, tris (dibenzylideneacetone) dipalladium, bis (diphenylphosphonferrocenyl) palladium (II) chloride, 1,3-bis (2,6-bis) diisopropylphenyl) imidazol-2-ylidene (1,4-naphthoquinone) palladium dimer, allyl (chloro) - (1,3-dimesityl-l, 3-dihydro-2H-imidazol-2-ylidene) palladium, palladium (II) acetate / Dicyclohexyl- (2 ', 4',
  • Additional reagents are for example potassium acetate, cesium, potassium or sodium carbonate, potassium tert-butoxide, cesium fluoride or potassium phosphate, which may be present in aqueous solution, preference is given to additional reagents such as potassium acetate or a mixture of potassium acetate and sodium carbonate.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, hydrocarbons, such as benzene, xylene or toluene, or carboxamides, such as dimethylformamide or dimethylacetamide, alkylsulfoxides, such as dimethylsulfoxide, or N-methylpyrrolidone or acetonitrile, or mixtures of the solvents with alcohols, such as methanol or ethanol and / or water, preferred is toluene, dimethylformamide or dimethyl sulfoxide.
  • the compounds of the formula (VI) are known, can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds or can be prepared analogously to the processes described in the Examples section.
  • reaction according to method [C] is carried out as described for method [A].
  • the compounds of the formulas (VII) and (VIII) are known, can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds or can be prepared analogously to the processes described in the Examples section.
  • R 1 has the meaning given above, be reacted with an acid.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 60 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • Acids are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is hydrogen chloride in dioxane.
  • the compounds of formula (IX) are known or can be prepared by reacting the compound of formula
  • the compound of the formula (X) is known, can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds or can be prepared analogously to the processes described in the Examples section.
  • the compounds of the formula (V) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 has the meaning given above, and
  • X 1 is bromine or iodine, are reacted with the compound of formula (IV) in the presence of dehydrating reagents.
  • the reaction is carried out as described for method [A].
  • R 1 has the meaning given above, and X 1 is bromine or iodine, are reacted with an acid.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 60 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • Acids are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is hydrogen chloride in dioxane.
  • the compounds of the formula (XIII) are known, can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds or can be prepared analogously to the processes described in the Examples section.
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological activity spectrum and a good pharmacokinetic behavior. These are compounds that have the proteolytic activity of the serine proteases plasmin, plasma kallikrem and Influence factor XIa.
  • the compounds of the invention inhibit the enzymatic cleavage of substrates which play an essential role in the activation of the blood coagulation cascade and in fibrinolysis.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, especially blood loss in hyperfibrinolytic conditions, organ transplants or cardiac surgery, especially with cardiopulmonary bypass or as part of a fibrin sealant.
  • Prophylaxis and / or treatment can reduce or eliminate severe perioperative blood loss. Strong bleeding occurs in severe surgery, such as. Coronary artery bypass graft surgery, organ transplantation or hysterectomy, as well as trauma, haemorrhagic shock, or postpartum hemorrhage. In the aforementioned indications, it may be used perioperatively for the use of extracorporeal circulatory systems or filtration systems, e.g.
  • Cardiopulmonary machine hemofiltration, hemodialysis, extracorporeal membrane oxygenation or ventricular assistive system, e.g. Artificial heart, come.
  • Possible thrombotic complications induced by the activation of the intrinsic coagulation system in the extracorporeal circulation systems should be reduced with the compounds according to the invention.
  • the compounds of the invention can also be used as part of a fibrin sealant. Fibrin sealants are used in the bonding of wound edges instead of a traditional surgical suture and the closure of injured tissue, hemostasis, and to support and accelerate wound healing.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are the compounds of the invention for use in a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients.
  • compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • Lipid-lowering drugs in particular HMG-CoA (3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A) reductase inhibitors such as lovastatin (Mevacor), simvastatin (Zocor), pravastatin (pravachol), fluvastatin (Lescol) and atorvastatin (Lipitor) ;
  • Coronary / vasodilators in particular ACE (angiotensin converting enzyme) inhibitors such as captopril, lisinopril, enalapril, ramipril, cilazapril, benazepril, fosinopril, quinapril and perindopril, or AII (angiotensin II) receptor antagonists such as for example, embusartan, losartan, valsartan, irbesartan, candesartan, eprosartan and Temisarta, or ⁇ -adrenoceptor antagonists such as carvedilol, alprenolol, bisoprolol, acebutolol, atenolol, betaxolol, carteolol, metoprolol, nadolol, penbutolol, pindolol, propranolol and timolol, or alpha-1
  • Anticoagulant substances such as heparin (UFH), low molecular weight heparins (LMWH) such as tinzaparin, certoparin, parnaparin, nadroparin, ardeparin, enoxaparin, reviparin, dalteparin, danaparoid, semuloparin (AVE 5026), adomiparin (Ml 18) and EP-42675 / ORG42675; • as well as antiarrhythmics;
  • heparin UHF
  • LMWH low molecular weight heparins
  • Vasopressors such as norepinephrine, dopamine and vasopressin; Inotropic therapy such as Dobutamine;
  • Corticosteroids such as hydrocortisone and fludrocortisone
  • Recombinant human activated protein C such as Xigris
  • blood products such as red blood cell concentrates, platelet concentrates,
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally. For this purpose, they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otic or as an implant or stent. For these administration routes, the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • the prior art is capable of rapidly and / or modifying the compounds according to the invention which release the compounds according to the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, for example tablets (uncoated or coated tablets, for example, with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings which control the release of the compound of the invention), orally disintegrating tablets or films / wafers, films / lyophilisates, capsules (eg hard or soft gelatin capsules), dragees, granules, pellets, Powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
  • tablets uncoated or coated tablets, for example, with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings which control the release of the compound of the invention
  • tablets uncoated or coated tablets, for example, with enteric or delayed-dissolving or insoluble coatings which control the release of the compound of the invention
  • parenteral administration can be done bypassing a resorption step (eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar) or with involvement of resorption (eg, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous, or intraperitoneal).
  • a resorption step eg, intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal, or intralumbar
  • suitable application forms include injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • Inhalation medicines including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops solutions, sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets to be applied, films / wafers or capsules, suppositories, ear or ophthalmic preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shake mixtures), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as patches), Milk, pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • These adjuvants include, among others. Carriers (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (for example liquid polyethylene glycols), emulsifiers and dispersants or wetting agents (for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate), binders (for example polyvinylpyrrolidone), synthetic and natural polymers (for example albumin ), Stabilizers (eg antioxidants such as ascorbic acid), dyes (eg inorganic pigments such as iron oxides) and flavor and / or odoriferous agents.
  • Carriers for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodec
  • compositions containing at least one compound of the invention preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, and their use for the purposes mentioned above.
  • Method 1 Instrument: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; Column: Acquity UPLC BEH C18 1.7 ⁇ , 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: water + 0.1% formic acid (99%), eluent B: acetonitrile; Gradient: 0-1.6 min 1-99% B, 1.6-2.0 min 99% o B; Flow 0.8 ml / min; Temperature: 60 ° C; DAD scan: 210-400 nm.
  • Method 2 Instrument: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; Column: Acquity UPLC BEH C18 1.7 ⁇ , 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: water + 0.2% o aqueous ammonia (32%), eluent B: acetonitrile; Gradient: 0-1.6 min 1-99% B, 1.6-2.0 min 99% o B; Flow 0.8 ml / min; Temperature: 60 ° C; DAD scan: 210-400 nm.
  • Method 3 System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Column: Chromatorex C-18 125 mm ⁇ 30 mm, eluent A: 0.1%> formic acid in water, eluent B: acetonitrile, gradient: A 95% / B 5% -> A 55% / B 45%; Flow: 150 ml / min; UV detection: 254 nm.
  • Method 4 System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Column: Chromatorex C-18 125 mm ⁇ 30 mm, eluent A: 0.1%> formic acid in water, eluent B: acetonitrile; Gradient: A 90% / B 10% -> A 50% / B 50%; Flow: 150 ml / min; UV detection: 254 nm.
  • Method 5 System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Column: Chromatorex C-18 125 mm ⁇ 30 mm, eluent A: 0.1%> formic acid in water, eluent B: acetonitrile; Gradient: A 85% / B 15% -> A 45% / B 55%; Flow: 150 ml / min; UV detection: 254 nm.
  • Method 6 System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Column: Chromatorex C-18 125 mm ⁇ 30 mm, eluent A: 0.1%> formic acid in water, eluent B: acetonitrile; Gradient: A 80% / B 20% -> A 40% / B 60%; Flow: 150 ml / min; UV detection: 254 nm.
  • Method 7 System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Column: Chromatorex C-18 125 mm ⁇ 30 mm, eluent A: 0.1% formic acid in water, eluent B: acetonitrile; Gradient: A 70% / B 30% -> A 30% / B 70%; Flow: 150 ml / min; UV detection: 254 nm.
  • Method 8 System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Column: Chromatorex C-18 125 mm ⁇ 30 mm, eluent A: 0.1% Formic acid in water, eluent B: acetonitrile; Gradient: A 60% / B 40%
  • Microwave The microwave reactor used was a Biotage initiator.
  • the compounds of the invention may be in salt form, for example as trifluoroacetate, formate or ammonium salt, if the Compounds according to the invention contain a sufficiently basic or acidic functionality.
  • a salt can be converted into the corresponding free base or acid by various methods known to those skilled in the art.
  • Weaker salts can be converted to the corresponding chlorides by addition of some hydrochloride.
  • the starting compounds and examples contain an L-phenylalanine derivative as the central building block, the corresponding stereocenter is described as (S) -configuration. Unless otherwise stated, it was not examined whether in individual cases in the coupling of the L-phenylalanine intermediate with the amine H2N-R 1 partial epimerization of the stereocenter took place. Thus, a mixture of the compounds of (S) -enantiomer and (R) -enantiomer according to the invention may be present. The main component is the respectively depicted (S) -enantiomer. starting compounds
  • reaction mixture was admixed with 5.8 ml of 2 N lithium hydroxide solution and stirred at RT for 16 h.
  • water was added, adjusted to pH 3 with 2 N hydrochloric acid and the precipitate was filtered off with suction. The residue was washed with water and dried under high vacuum. 1.1 g (64% of theory) of the title compound were obtained.
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptide factor Xla substrate is used to determine the enzymatic activity of human factor XIa.
  • Factor XIa from the peptic factor XIa substrate cleaves the C-terminal aminomethylcoumarin (AMC) whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells). Subsequently, 20 ⁇ assay buffer (50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin) and 20 ⁇ factor XIa from Kordia (0.45 nM in assay buffer) are added successively.
  • assay buffer 50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • 20 ⁇ factor XIa from Kordia (0.45 nM in assay buffer
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptidic plasmin substrate is used to determine the enzymatic activity of human plasmin. Plasmin separates from the peptic plasmin substrate the C-terminal aminomethylcoumarin (AMC), whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • AMC C-terminal aminomethylcoumarin
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells).
  • assay buffer 50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • 20 ⁇ l plasmin from Kordia 20 ⁇ l plasmin from Kordia
  • the enzyme reaction is started by adding 20 ⁇ l of the plasmin substrate MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC (150 ⁇ l in assay buffer) dissolved in assay buffer, incubated for 30 min at room temperature (22 ° C.) and then a fluorescence measurement was carried out (excitation: 360 nM, emission: 460 nM).
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptidic plasma kallikrein substrate is used to determine the enzymatic activity of human plasma kallikrein.
  • Plasma kallikrein from the peptic plasma kallikrein substrate cleaves this C-terminal aminomethylcoumarin (AMC) whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells). Subsequently, 20 ⁇ assay buffer (50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin) and 20 ⁇ human plasma kallikrein from Kordia (0.6 nM in assay buffer) are successively added. added.
  • assay buffer 50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • Kordia 20 ⁇ human plasma kallikrein from Kordia
  • test substances are tested for their inhibition of other human serine proteases, such as factor Xa and trypsin.
  • factor Xa 1.3 nmol / l of Kordia
  • trypsin 83 mU / ml of Sigma
  • these enzymes are dissolved (50 mmol / l Tris buffer [C, C, C-tris (hydroxymethyl) - aminomethane], 100 mmol / l sodium chloride, 0.1%> BSA [bovine serum albumin], 5 mmol / l calcium chloride, pH 7.4) and incubated for 15 min with test substance in various concentrations in dimethyl sulfoxide and with dimethyl sulfoxide without test substance.
  • the enzymatic reaction is started by adding the appropriate substrates (5 ⁇ 1 / 1 Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC from Bachem for factor Xa and trypsin). After an incubation period of 30 min at 22 ° C, the fluorescence is measured (excitation: 360 nm, emission: 460 nm). The measured emissions of the test mixtures with test substance are compared with the control preparations without test substance (excluding dimethyl sulfoxide instead of test substance in dimethylsulfoxide) and IC 50 values are calculated from the concentration-effect relationships. a.5) Determination of the anticoagulant effect
  • the anticoagulant activity of the test substances is determined in vitro in human and animal plasma (eg mouse, rat, rabbit, porcine and canine plasma).
  • human and animal plasma eg mouse, rat, rabbit, porcine and canine plasma.
  • blood is removed using a 0.11 molar sodium citrate solution as a template in a mixing ratio of sodium citrate / blood 1/9.
  • the blood is mixed well immediately after collection and centrifuged for 15 minutes at approximately 4000 g. The supernatant is pipetted off.
  • the prothrombin time (PT, synonyms: thromboplastin time, quick test) is determined in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent using a commercially available test kit (Neoplastin® from Boehringer Mannheim or Hemoliance® RecombiPlastin from Instrumentation Laboratory). The test compounds are incubated for 3 minutes at 37 ° C with the plasma. Subsequently, coagulation is triggered by the addition of thromboplastin and the time of coagulation is determined. The concentration of test substance is determined which causes a doubling of the prothrombin time.
  • the activated partial thromboplastin time is determined in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent using a commercially available test kit (CK Perst from the company Diagnostica Stago).
  • the test compounds are incubated for 3 minutes at 37 ° C with the plasma and the PTT reagent (cephalin, kaolin). Subsequently, coagulation is triggered by addition of a 25 mM aqueous calcium chloride solution and the time of coagulation is determined.
  • the concentration of test substance is determined which causes a 1.5-fold prolongation of the aPTT. Action data from this test are listed in Table D below: Table D
  • Tissue factor (1 pM)
  • tPA tissue plasminogen activator
  • the antithrombotic activity of FXIa inhibitors is tested in an arterial thrombosis model.
  • the thrombus formation is triggered by chemical damage to a portion of the carotid artery in the rabbit. Simultaneously, the ear bleeding time is determined.
  • the filter paper contains 100 ⁇ . a 13% solution of ferrous chloride (Sigma) in water. After 5 minutes, the filter paper is removed and the vessel rinsed twice with aqueous 0.9% sodium chloride solution. 30 minutes after the injury, the carotid artery is dissected out in the area of the damage and any thrombotic material is removed and weighed.
  • test substances are either administered intravenously via the femoral vein anesthetized or orally by gavage to the awake animals each 5 min or 2 h before damage.
  • the ear bleeding time is determined 2 minutes after the injury to the carotid artery.
  • the left ear is shaved and a defined section of 3 mm in length (blade Art.No. 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Germany) is set parallel to the longitudinal axis of the ear. Care is taken not to injure any visible vessel. Any escaping blood is collected at 15-second intervals with accurately weighed pieces of filter paper without touching the wound directly.
  • the bleeding time is calculated as the time from placement of the incision to the time when no more blood is detectable on the filter paper.
  • the leaked blood volume is calculated after weighing the pieces of filter paper.
  • the determination of the antifibrinolytic action in vivo is carried out in hyper-fibrinolytic rats. Following anesthesia and catheterization of the animals, hyper-fibinolysis is initiated by infusion of tissue plasminogen activator (tPA) (8 mg / kg / h). 10 minutes after starting the tPA infusion, the substances are administered as iV bolus. After another 15 minutes, the tPA infusion is terminated and a tail transsection performed. The subaquale bleeding (37 ° C tempered physiological sodium chloride solution) is observed over 30 minutes and determines the bleeding time.
  • tissue plasminogen activator tPA
  • the substances according to the invention can, for example, be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • composition
  • Example 1 100 mg of the compound of Example 1, 50 mg of lactose (monohydrate), 50 mg of corn starch, 10 mg of polyvinylpyrrolidone (PVP) and 2 mg of magnesium stearate.
  • lactose monohydrate
  • corn starch 50 mg of corn starch
  • PVP polyvinylpyrrolidone
  • composition Composition:
  • a single dose of 100 mg of the compound of the invention corresponds to 10 ml of oral suspension. production:
  • the rhodigel is suspended in ethanol, the compound of Example 1 is added to the suspension. While stirring, the addition of water. Until the swelling of the Rhodigels swirling is about 6 h stirred.
  • the compound of the invention is suspended in the mixture of polyethylene glycol and polysorbate with stirring. The stirring is continued until complete dissolution of the compound according to the invention.
  • i.v. solution The compound of the invention is dissolved in a concentration below the saturation solubility in a physiologically acceptable solvent (e.g., isotonic sodium chloride solution, glucose solution 5% and / or polyethylene glycol 400 / water 30% m / m). The solution is sterile filtered and filled into sterile and pyrogen-free injection containers.
  • a physiologically acceptable solvent e.g., isotonic sodium chloride solution, glucose solution 5% and / or polyethylene glycol 400 / water 30% m / m.

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Abstract

Substituierte Phenylalanin-Derivate. Die Erfindung betrifft 7-{4-[(2S)-2-({[trans-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-(phenylamino)-3-oxopropyl]phenyl}-6-methyl-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure-Derivate als Faktor Xla Inhibitoren zur Behandlung von fibrinolytischen und thromboembolischen Erkrankungen, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.

Description

7-{4-[(2S)-2-({[TRANS-4-(AMINOMETHYL)CYCLOHEXYL]CARBONYL}AMINO)-3-(PHENYLA MINO)-3-OXOPROPYL]PHENYL}-6-METHYL-4-OXO-1 ,4-DIHYDROCHINOLIN-3-CARBONSÄ URE-DERIVATE ALS FAKTOR XIA INHIBITOREN ZUR BEHANDLUNG VON
FIBRINOLYTISCHEN ERKRANKUNGEN
Die Erfindung betrifft substituierte Phenylalanin-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
Die Blutgerinnung ist ein Schutzmechanismus des Organismus, mit dessen Hilfe Defekte in der Gefäßwand rasch und zuverlässig „abgedichtet" werden können. So kann ein Blutverlust vermieden beziehungsweise minimiert werden. Die Blutstillung nach Gefäßverletzung erfolgt im Wesentlichen durch das Gerinnungssystem, bei dem eine enzymatische Kaskade komplexer Reaktionen von Plasmaproteinen ausgelöst wird. Hierbei sind zahlreiche Blutgerinnungsfaktoren beteiligt, von denen jeder, sobald aktiviert, die jeweils nächste inaktive Vorstufe in ihre aktive Form überführt. Am Ende der Kaskade steht die Umwandlung des löslichen Fibrinogens in das unlösliche Fibrin, so dass es zu einem Blutgerinnsel kommt. Traditionell unterscheidet man bei der Blutgerinnung zwischen dem intrinsischen und dem extrinsischen System, die in einem abschließenden gemeinsamen Reaktionsweg münden. Hierbei kommen den Faktoren Xa und IIa (Thrombin) Schlüsselrollen zu: Faktor Xa bündelt die Signale der beiden Gerinnungswege, da er sowohl über Faktor VIIa/Tissue Factor (extrinsischer Weg) wie auch den Tenase Komplex (intrinsischer Weg) durch Umsetzung von Faktor X entsteht. Die aktivierte Serinprotease Xa spaltet Prothrombin zu Thrombin, das über eine Reihe von Umsetzungen die Impulse aus der Kaskade auf den Gerinnungsstatus des Blutes überträgt.
In der jüngeren Vergangenheit ist die traditionelle Theorie der zwei getrennten Bereiche der Koagulationkaskade (extrinsischer beziehungsweise intrinsischer Pfad) aufgrund neuer Erkenntnisse modifiziert worden: In diesen Modellen wird die Koagulation durch Bindung von aktiviertem Faktor Vlla an Tissue Faktor (TF) initiiert. Der entstandene Komplex aktiviert Faktor X, was wiederum zur Thrombin-Generierung mit anschließender Herstellung von Fibrin und Thrombozyten- Aktivierung (via PAR-1) als verletzungsverschließende Endprodukte der Hämostase führt. Im Vergleich zur anschließenden Amplifikations-/Propagationsphase ist die Geschwindigkeit der Thrombin-Herstellung klein und durch das Auftreten von TFPI als Hemmer des TF-FVIIa-FX-Komplexes zeitlich begrenzt.
Ein zentraler Bestandteil des Übergangs von der Initiation zur Amplifikation und Propagation der Koagulation ist Faktor XIa. Thrombin aktiviert in positiven Rückkopplungsschleifen neben Faktor V und Faktor VIII auch Faktor XI zu Faktor XIa, was Faktor IX zu Faktor IXa umsetzt und über den so generierten Faktor IXa/ Faktor VIIIa-Komplex schnell größere Mengen Faktor Xa produziert. Dies löst die Produktion großer Mengen Thrombin aus, die zu starkem Thrombuswachstum führt und den Thrombus stabilisiert.
Die Bildung eines Thrombus beziehungsweise eines Blutgerinnsels wird durch die Fibrinolyse gegenreguliert. Nach Aktivierung von Plasminogen durch Tissue-Plasminogenaktivator (tPA) entsteht die aktive Serinprotease, Plasmin, die das polymerisierte Fibrin spaltet und somit den Thrombus abbaut. Dieser Prozess wird als Fibrinolyse bezeichnet - mit Plasmin als Schlüsselenzym.
Eine weitere wichtige Protease des Gerinnungssystems ist das Plasmakallikrein (PK). PK ist eine multifunktionelle, trypsinartige Serinprotease, für die mehrere physiologische Substrate bekannt sind. Die PK- vermittelte Freisetzung von Bradykinin aus hochmolekularem Kininogen führt zur Freisetzung von t-PA, NO und Prostacyclin aus Endothelzellen und beeinflußt dadurch die Fibrinolyse, den Blutdruck und das Entzündungsgeschehen.
Bei hyperfibrinolytischen Zuständen kommt es nicht zu einem ausreichenden Wundverschluß was starke, zum Teil lebensbedrohliche Blutungen zur Folge hat. Zur Prophylaxe und Therapie solcher Blutungen stehen in der Klinik Antifibrinolytika zur Verfügung. Antifibrinolytika hemmen spezifische Schritte der Fibrinolyse. Indirekt wirkende Antifibrinolytika wie Tranexamsäure hemmen die Aktivierung von Plasminogen; direkt wirkende Antifibrinolytika blockieren Plasmin selbst. Entsprechende Wirkungen konnten mit dem Plasminogeninhibitor Tranexamsäure in verschiedenen klinischen Studien gezeigt werden. Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Bereitstellung neuer Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
W089/11852 beschreibt unter anderem substituierte Phenylalanin-Derivate zur Behandlung von Pankreatitis, WO 2007/070816 beschreibt substituierte Thiophen-Derivate als Faktor XIa Inhibitoren und JP 2014227401 beschreibt substituierte Phenylalanin-Derivate als Faktor XIa Inhibitoren. Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel
Figure imgf000004_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist, R2 für Fluor oder Chlor steht,
R3 für Ci-C3-Alkylaminocarbonyl oder Ci-C3-Alkoxycarbonylamino steht, R4 für Fluor oder Chlor steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungs- beispiel(e) genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in unterschiedlichen stereoisomeren Formen existieren, d.h. in Gestalt von Konfigurationsisomeren oder gegebenenfalls auch als Konformationsisomere (Enantiomere und/oder Diastereomere, einschließlich solcher bei Atropisomeren). Die vorliegende Erfindung umfasst deshalb die Enantiomere und Dia- stereomere und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/ oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren; vorzugsweise werden hierfür chromatographische Verfahren verwendet, insbesondere die HPLC-Chromatographie an achiraler beziehungsweise chiraler Phase.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch alle geeigneten isotopischen Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen. Unter einer isotopischen Variante einer erfindungsgemäßen Verbindung wird hierbei eine Verbindung verstanden, in welcher mindestens ein Atom innerhalb der erfindungsgemäßen Verbindung gegen ein anderes Atom der gleichen Ordnungszahl, jedoch mit einer anderen Atommasse als der gewöhnlich oder überwiegend in der Natur vorkommenden Atommasse ausgetauscht ist. Beispiele für Isotope, die in eine erfindungsgemäße Verbindung inkorporiert werden können, sind solche von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor, Schwefel, Fluor, Chlor, Brom und Iod, wie 2H (Deuterium), 3H (Tritium), 13C, 14C, 15N, O, 180, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36C1, 82Br, 123I, 124I, 129I und 131I. Bestimmte isotopische Varianten einer erfindungsgemäßen Verbindung, wie insbesondere solche, bei denen ein oder mehrere radioaktive Isotope inkorporiert sind, können von Nutzen sein beispielsweise für die Untersuchung des Wirkmechanismus oder der Wirkstoff- Verteilung im Körper; aufgrund der vergleichsweise leichten Herstell- und Detektierbarkeit sind hierfür insbesondere mit 3H- oder 14C- Isotopen markierte Verbindungen geeignet. Darüber hinaus kann der Einbau von Isotopen, wie bei- spielsweise von Deuterium, zu bestimmten therapeutischen Vorteilen als Folge einer größeren metabolischen Stabilität der Verbindung führen, wie beispielsweise eine Verlängerung der Halbwertszeit im Körper oder eine Reduktion der erforderlichen Wirkdosis; solche Modifikationen der erfindungsgemäßen Verbindungen können daher gegebenenfalls auch eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung darstellen. Isotopische Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen können nach den dem Fachmann bekannten Verfahren hergestellt werden, so beispielsweise nach den weiter unten beschriebenen Methoden und den bei den Ausführungsbeispielen wiedergegebenen Vorschriften, indem entsprechende isotopische Modifikationen der jeweiligen Reagentien und/oder Ausgangsverbindungen eingesetzt werden. Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können. Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, V-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, V-Methylpiperidin und Cholin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungs- mittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff „Prodrugs" umfaßt Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).
Folgende zwei Darstellungsweisen (A) und (B) eines 1,4-disubstituierten Cyclohexylderivats sind äquivalent zueinander und gleichbedeutend und in beiden Fällen deskriptiv für ein trans-1,4- disubsituiertes Cyclohexylderivat.
Figure imgf000006_0001
(A) (B) Dies gilt insbesondere für das Strukturelement des Tranexamsäureamids, beispielsweise N-[(?ra«s- 4- {[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl und ?ra«s-4-(Aminomethyl)- cyclohexyl]carbonyl} . In der vorliegenden Erfindung wird die Darstellung (A) verwendet.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel
Figure imgf000007_0001
sowie alle L-Phenylalanin-Intermediate sind an dem in der obigen Formel mit einem * markierten Stereozentrum als (S)-Konfiguration beschrieben, da L-Phenylalanin-Derivate als zentrale Bausteine in die Synthese eingebracht werden. Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann es bei der Kupplung der L-Phenylalanin-Intermediate mit dem Amin H2N-R1 zur teilweisen Epimerisierung an dem mit einem * markierten Stereozentrum kommen. Damit kann ein Gemisch der erfindungsgemäßen Verbindungen aus (S)-Enantiomer und (R)-Enantiomer entstehen. Die Hauptkomponente ist das jeweils abgebildete (S)-Enantiomer. Die Gemische aus (S)-Enantiomer und (R)-Enantiomer können nach dem Fachmann bekannten Methoden, zum Beispiel durch Chromatograpie an chiraler Phase, in ihre Enantiomere getrennt werden.
Die Enantiomere können entweder direkt nach der Kupplung der L-Phenylalanin-Intermediate mit dem Amin H2N-R1 oder auf einer späteren Zwischenstufe der Synthese oder aber die erfindungsgemäßen Verbindungen an sich können getrennt werden. Bevorzugt ist die Trennung der Enantiomere direkt nach der Kupplung der L-Phenylalanin-Intermediate mit dem Amin H2N-R1.
Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff "Behandlung" oder "behandeln" ein Hemmen, Verzögern, Aufhalten, Lindern, Abschwächen, Einschränken, Verringern, Unterdrücken, Zurückdrängen oder Heilen einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung, der Entfaltung, des Verlaufs oder des Fortschreitens solcher Zustände und/oder der Symptome solcher Zustände. Der Begriff "Therapie" wird hierbei als synonym mit dem Begriff "Behandlung" verstanden.
Die Begriffe "Prävention", "Prophylaxe" oder "Vorbeugung" werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung synonym verwendet und bezeichnen das Vermeiden oder Vermindern des Risikos, eine Krankheit, ein Leiden, eine Erkrankung, eine Verletzung oder eine gesundheitliche Störung, eine Entfaltung oder ein Fortschreiten solcher Zustände und/oder die Symptome solcher Zustände zu bekommen, zu erfahren, zu erleiden oder zu haben.
Die Behandlung oder die Prävention einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung können teilweise oder vollständig erfolgen. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl steht für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl und iso-Propyl.
Alkoxy steht für einen linearen oder verzweigten Alkoxyrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, bei- spielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy und iso-Propoxy.
Alkylaminocarbonyl steht für eine Amino-Gruppe mit einem oder zwei unabhängig voneinander gewählten gleichen oder verschiedenen geradkettigen oder verzweigten Alkylsubstituenten, die jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatome aufweisen, und die über eine Carbonylgruppe gebunden ist, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, n- Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, V, V-Dimethylaminocarbonyl, N,N- Diethylaminocarbonyl, V-Ethyl- V-methylaminocarbonyl, V-Methyl- V-n-propylaminocarbonyl, N- iso-Propyl-A -n-propylaminocarbonyl und V, V-Diisopropylaminocarbonyl. Ci-C3-Alkylamino- carbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminocarbonylrest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent. Alkoxycarbonylamino steht für einen linearen oder verzweigten Alkoxyrest, der über eine Carbonylamino-Gruppe gebunden ist, mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonylamino, Ethoxycarbonylamino, n-Propoxycarbonylamino und iso- Propoxycarbonylamino.
In den Formeln der Gruppe, die für R1 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein # steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CEL-Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das R1 gebunden ist. Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000009_0001
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R2 für Fluor oder Chlor steht,
R3 für Methylammocarbonyl oder Methoxycarbonylammo steht,
R4 für Chlor steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000009_0002
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R2 für Fluor oder Chlor steht,
R3 für Methylammocarbonyl oder Methoxycarbonylammo steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Besonders bevorzugt ist auch 7- {4-[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}arnino)- 3- {[3-chlor-4-(methyl-carbamoyl)phenyl]amino} -3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4- dihydrochinolin-3-carbonsäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000010_0001
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 7- {4-[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)- 3- {[3-chlor-4-(methyl-carbamoyl)phenyl]amino} -3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4- dihydrochinolin-3-carbonsäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000010_0002
Besonders bevorzugt ist auch 7-(4- {(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)- 3-[(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)amino]-3-oxopropyl}phenyl)-6-methyl-4- oxo-l,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000011_0001
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 7-(4- {(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)- 3-[(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)amino]-3-oxopropyl}phenyl)-6-methyl-4- oxo- 1 ,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000011_0002
Besonders bevorzugt ist auch 7- {4-[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)- 3-( {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl} amino)-3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4- dihydrochinolin-3-carbonsäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000012_0001
OH oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 7- {4-[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)- 3-( {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl} amino)-3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4- dihydrochinolin-3-carbonsäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000012_0002
Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt. Ganz besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche. Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei die Verbindungen der Formel
Figure imgf000013_0001
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 60°C bei Normaldruck. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Dioxan.
Säuren sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Chlorwasserstoff in Dioxan. Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem
[A] Verbindungen der Formel
Figure imgf000014_0001
in welcher
oben angegebene Bedeutung hat,
mit der Verbindung der Formel
Figure imgf000014_0002
in Gegenwart von Dehydratisierangsreagenzien umgesetzt werden, oder
[B] Verbindungen der Formel
Figure imgf000014_0003
in welcher R1 die oben angegebene Bedeutung hat, und X1 für Brom oder Iod steht, mit Verbindungen der Formel
Figure imgf000015_0001
Q1 für -B(OH)2, einen Boronsäure-Ester, bevorzugt Boronsäurepmakolester, oder steht, unter Suzuki-Kupplungsbedingungen umgesetzt werden, oder
[C] die Verbindung der Formel
Figure imgf000015_0002
mit Verbindungen der Formel
H2N— R (VIII), in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien umgesetzt werden.
Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. JV,JV- Diethyl-, V, V'-Dipropyl-, V, V'-Diisopropyl-, V, V'-Dicyclohexylcarbodiimid, V-(3-Dimethylamino- isopropyl)- V'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC) (gegebenenfalls in Gegenwart von Penta- fluorphenol (PFP)), V-Cyclohexylcarbodiimid- V'-propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphos- phonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotria- zol- 1 -yl)-N,N,N', TV'-tetra-methyluronium-hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat (TPTU), (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethylamino- methyliumfluoroborat (TBTU) oder 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)- V, V, V', V'-tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat (HATU), oder 1 -Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol- 1-yloxy- tris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder Ethyl-cyan(hydroxy- imino)acetat (Oxyma), oder (l-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino- mo holino-carbenium hexafluorophosphat (COMU), oder N-[(Dimethylamino)(3_f/- [ l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]-N-methylmethanaminium-hexafluorophosphat, oder 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid (T3P), oder Mischungen aus diesen, bevorzugt ist N-[(Dimethylamino)(3/ -[l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]- N-methylmethan-aminium-hexafluorophosphat oder 2,4,6-Tripropyl- 1 ,3,5,2,4,6-trioxatri- phosphinan-2,4,6-trioxid (T3P).
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, V-Methylmorpholin,V-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Diisopro- pylethylamin.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Tri- chlormethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische der Lösungsmittel, bevorzugt ist Tetrahydrofuran oder Dimethylformamid oder ein Gemisch aus Dimethylformamid und Pyridin. Die Verbindung der Formel (IV) ist bekannt oder läßt sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Umsetzung nach Verfahren [B] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Katalysators, gegebenenfalls in Gegenwart eines Zusatzreagenzes, gegebenenfalls in einer Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 150°C bei Normaldruck bis 3 bar.
Katalysatoren sind beispielsweise für Suzuki-Reaktionsbedingungen übliche Palladium- Katalysatoren, bevorzugt sind Katalysatoren wie z.B. Dichlorbis(triphenylphosphin)-palladium, Tetrakistriphenylphosphinpalladium(O), Palladium(II)acetat/Triscyclohexylphosphin, Tris(dibenzylidenaceton)dipalladium, Bis-(diphenylphosphanferrocenyl)-palladium-(II)-chlorid, l,3-Bis(2,6-diisopropylphenyl)imidazol-2-yliden(l,4-napthtochinon)palladiumdimer, Allyl(chlor)- (l,3-dimesityl-l,3-dihydro-2H-imidazol-2-yliden)palladium, Palladium(II)acetat/Dicyclohexyl- (2',4',6'-triisopropyl-biphenyl-2-yl)-phosphin, [1,1 -Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen]- palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder XPhos Prekatalysator [(2'-Aminobiphenyl- 2-yl)(chlor)palladium-Dicyclohexyl(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)phosphan (1 : 1)], bevorzugt ist Tetrakistriphenylphosphin-palladium(O), [l,l-Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen]- palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder XPhos Prekatalysator [(2'-Aminobiphenyl- 2-yl)(chlor)palladium-Dicyclohexyl(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)phosphan (1 : 1)].
Zusatzreagenzien sind beispielsweise Kaliumacetat, Cäsium-, Kalium- oder Natriumcarbonat, Kalium-tert.-butylat, Cäsiumfluorid oder Kaliumphosphat, wobei diese in wässriger Lösung vorliegen können, bevorzugt sind Zusatzreagenzien wie Kaliumacetat oder eine Mischung aus Kaliumacetat und Natriumcarbonat.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2- Dimethoxyethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol oder Toluol, oder Carbonsäureamide wie Dimethylformamid oder Dimethylacetamid, Alkylsulfoxide wie Dimethylsulfoxid, oder N- Methylpyrrolidon oder Acetonitril, oder Gemische der Lösungsmittel mit Alkoholen wie Methanol oder Ethanol und/oder Wasser, bevorzugt ist Toluol, Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid. Die Verbindungen der Formel (VI) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder können analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die Umsetzung nach Verfahren [C] erfolgt wie für Verfahren [A] beschrieben. Die Verbindungen der Formeln (VII) und (VIII) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder können analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel (III) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000018_0001
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 60°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Dioxan.
Säuren sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Chlorwasserstoff in Dioxan. Die Verbindungen der Formel (IX) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem die Verbindung der Formel
Figure imgf000019_0001
mit Verbindungen der Formel (VIII) umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [C] beschrieben.
Die Verbindung der Formel (X) ist bekannt, läßt sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder kann analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000019_0002
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, und
X1 für Brom oder Iod steht, mit der Verbindung der Formel (IV) in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [A] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (XI) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000020_0001
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, und X1 für Brom oder Iod steht, mit einer Säure umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 60°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Dioxan.
Säuren sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Chlorwasserstoff in Dioxan.
Die Verbindungen der Formel (XII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000020_0002
in welcher X1 für Brom oder Iod steht, mit Verbindungen der Formel (VIII) umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt wie für Verfahren [C] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (XIII) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder können analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die Herstellung der Ausgangsverbindungen und der Verbindungen der Formel (I) kann durch das folgende Syntheseschema verdeutlicht werden.
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000022_0002
Figure imgf000022_0003
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum und ein gutes pharmakokinetisches Verhalten. Es handelt sich dabei um Verbindungen, die die proteolytische Aktivität der Serinproteasen Plasmin, Plasmakallikrem und Faktor XIa beeinflussen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen hemmen die enzymatische Spaltung von Substraten, die eine wesentliche Rolle bei der Aktivierung der Blutgerinnungskaskade und bei der Fibrinolyse einnehmen.
Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers. Durch die Prophylaxe und/oder Behandlung kann ein starker perioperativer Blutverlust reduziert oder aufgehoben werden. Starke Blutungen treten bei schweren Operationen, wie z. B. Koronararterien-Bypass-Chirurgie, Organtransplantationen oder Hysterektomie, sowie bei Trauma, bei haemorrhagischem Schock oder bei postpartaler Hämorrhagie auf. In den zuvor genannten Indikationen kann es perioperativ zum Einsatz von extrakorporalen Kreislaufsytemen oder Filtersystemen, wie z.B. Herzlungenmaschine, Hemofiltration, Hämodialyse, extrakorporale Membranoxygenierung oder ventrikuläres Unterstützungssystem, wie z.B. Kunstherz, kommen. Mögliche thrombotische Komplikationen, induziert durch die Aktivierung des intrinsischen Gerinnungssystems in den extrakorporalen Kreislaufsystemen, sollen mit den erfindungsgemäßen Verbindungen reduziert werden. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch als Bestandteil eines Fibrinklebers eingesetzt werden. Fibrinkleber finden Einsatz bei der Verklebung von Wundrändern anstelle einer klassischen chirurgischen Naht und zum Verschluss von verletztem Gewebe, bei der Blutstillung sowie der Unterstützung und Beschleunigung der Wundheilung.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:
• Lipidsenker, insbesondere HMG-CoA-(3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A)-Reduktase- Inhibitoren wie beispielsweise Lovastatin (Mevacor), Simvastatin (Zocor), Pravastatin (Pravachol), Fluvastatin (Lescol) und Atorvastatin (Lipitor);
• Koronartherapeutika/V asodilatatoren, insbesondere ACE-(Angiotensin-Converting-Enzyme)- Inhibitoren wie beispielsweise Captopril, Lisinopril, Enalapril, Ramipril, Cilazapril, Benazepril, Fosinopril, Quinapril und Perindopril, oder AII-(Angiotensin II)-Rezeptor- Antagonisten wie beispielsweise Embusartan, Losartan, Valsartan, Irbesartan, Candesartan, Eprosartan und Temisarta, oder ß-Adrenozeptor- Antagonisten wie beispielsweise Carvedilol, Alprenolol, Bisoprolol, Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Carteolol, Metoprolol, Nadolol, Penbutolol, Pindolol, Propanolol und Timolol, oder alpha- 1 - Adrenozeptor- Antagonisten wie beispielsweise Prazosin, Bunazosin, Doxazosin und Terazosin, oder Diuretika wie beispielsweise Hydrochlorothiazid, Furosemid, Bumetanid, Piretanid, Torasemid, Amilorid und Dihydralazin, oder Calciumkanal-Blocker wie beispielsweise Verapamil und Diltiazem, oder Dihydropyridin-Derivate wie beispielsweise Nifedipin (Adalat) und Nitrendipin (Bayotensin), oder Nitropräparate wie beispielsweise Isosorbid-5-mononitrat, Isosorbid- dinitrat und Glyceroltrinitrat, oder Substanzen, die eine Erhöhung von cyclischem Guanosin- monophosphat (cGMP) bewirken, wie beispielsweise Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase, wie beispielsweise Riociguat;
• antikoagulatorisch wirksame Substanzen (Antikoagulantien) wie beispielsweise Heparin (UFH), niedermolekulare Heparine (NMH) wie beispielsweise Tinzaparin, Certoparin, Parnaparin, Nadroparin, Ardeparin, Enoxaparin, Reviparin, Dalteparin, Danaparoid, Semuloparin (AVE 5026), Adomiparin (Ml 18) und EP-42675/ORG42675; • sowie Antiarrhythmika;
• verschiedene Antibiotika oder antifungale Medikamenten, entweder als kalkulierte Therapie (vor Vorliegen des mikrobiellen Befundes) oder als spezifische Therapie;
• Vasopressoren wie beispielsweise Norepinephrine, Dopamine und Vasopressin; · Inotrope Therapie wie beispielsweise Dobutamin;
• Kortikosteroide wie beispielsweise Hydrokortison und Fludrokortison;
• rekombinantes humanes aktivierte Protein C wie beispielsweise Xigris;
• Blutprodukte wie beispielsweise Erythrozytenkonzentrate, Thrombozytenkonzentrate,
Erythropietin und Fresh Frozen Plasma. Unter„Kombinationen" im Sinne der Erfindung werden nicht nur Darreichungsformen, die alle Komponenten enthalten (sog. Fixkombinationen) und Kombinationspackungen, die die Komponenten voneinander getrennt enthalten, verstanden, sondern auch gleichzeitig oder zeitlich versetzt applizierte Komponenten, sofern sie zur Prophylaxe und/oder Behandlung derselben Krankheit eingesetzt werden. Ebenso ist es möglich, zwei oder mehr Wirkstoffe miteinander zu kombinieren, es handelt sich dabei also jeweils um zwei- oder mehrfach-Kombinationen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat beziehungsweise Stent. Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen. Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszu- bereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Bevorzugt ist die parenterale Applikation.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizie- rende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Poly- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthe- tische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nicht- toxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 500 mg je 24 Stunden. Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt beziehungsweise Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise " 10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.
A) Beispiele Abkürzungen: bs / br. s. breites Singulett (bei NMR)
bd breites Duplett (bei NMR)
cat. katalytisch
CI chemische Ionisation (bei MS)
dd Dublett vom Dublett (bei NMR)
DMF Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid
dt Dublett vom Triplett (bei NMR)
d. Th. der Theorie (bei Ausbeute)
EI Elektronenstoß-Ionisation (bei MS)
eq. Äquivalent(e)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)
h Stunde (n)
HATU 0-(7-Azabenzotriazol- 1 -yl)-NNN',N -tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie m Multiplett (bei NMR)
M molar
min Minute(n)
MS Massenspektrometrie
N normal
NMR Kernresonanzspektrometrie
q Quartett (bei NMR)
quant. quantitativ
quint Quintett (bei NMR)
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC)
s Singulett (bei NMR)
TFA Trifluoressigsäure
THF Tetrahydrofuran
UV Ultraviolett-Spektrometrie HPLC- und LC/MS-Methoden:
Methode 1 (LC-MS): Instrument: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; Säule: Acquity UPLC BEH C18 1.7 μηι, 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: Wasser + 0.1% Ameisensäure (99%), Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-1.6 min 1-99% B, 1.6-2.0 min 99%o B; Fluss 0.8 ml/min; Temperatur: 60°C; DAD scan: 210-400 nm.
Methode 2 (LC-MS): Instrument: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; Säule: Acquity UPLC BEH C18 1.7 μηι, 50 mm x 2.1 mm; Eluent A: Wasser + 0.2%o wässriger Ammoniak (32%), Eluent B: Acetonitril; Gradient: 0-1.6 min 1-99% B, 1.6-2.0 min 99%o B; Fluss 0.8 ml/min; Temperatur: 60°C; DAD scan: 210-400 nm. Methode 3 (HPLC): System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Säule: Chromatorex C-18 125 mm x 30 mm, Eluent A: 0.1%> Ameisensäure in Wasser, Eluent B: Acetonitril, Gradient: A 95% / B 5% — > A 55% / B 45%; Fluss: 150 ml/min; UV-Detektion: 254 nm.
Methode 4 (HPLC): System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Säule: Chromatorex C-18 125 mm x 30 mm, Eluent A: 0.1%> Ameisensäure in Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: A 90% / B 10% -> A 50% / B 50%; Fluss: 150 ml/min; UV-Detektion: 254 nm.
Methode 5 (HPLC): System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Säule: Chromatorex C-18 125 mm x 30 mm, Eluent A: 0.1%> Ameisensäure in Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: A 85% / B 15% -> A 45% / B 55%; Fluss: 150 ml/min; UV-Detektion: 254 nm.
Methode 6 (HPLC): System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Säule: Chromatorex C-18 125 mm x 30 mm, Eluent A: 0.1%> Ameisensäure in Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: A 80% / B 20% -> A 40% / B 60%; Fluss: 150 ml/min; UV-Detektion: 254 nm.
Methode 7 (HPLC): System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Säule: Chromatorex C-18 125 mm x 30 mm, Eluent A: 0.1% Ameisensäure in Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: A 70% / B 30% -> A 30% / B 70%; Fluss: 150 ml/min; UV-Detektion: 254 nm. Methode 8 (HPLC): System: Labomatic HD-3000 HPLC gradient pump, Labomatic Labocol Vario-2000 fraction collector; Säule: Chromatorex C-18 125 mm x 30 mm, Eluent A: 0.1% Ameisensäure in Wasser, Eluent B: Acetonitril; Gradient: A 60% / B 40%
Fluss: 150 ml/min; UV-Detektion: 254 nm.
Mikrowelle: Als Mikrowellenreaktor wurde ein Gerät vom Typ Biotage Initiator verwendet.
Bei Aufreinigungen von erfindungsgemäßen Verbindungen per präparativer HPLC nach den oben beschriebenen Methoden, in denen die Elutionsmittel Zusatzstoffe wie beispielsweise Trifluoressigsäure, Ameisensäure oder Ammoniak enthalten, können die erfindungsgemäßen Verbindungen in Salz-Form, beispielsweise als Trifluoracetat, Formiat oder Ammonium-Salz anfallen, sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen eine ausreichend basische beziehungsweise saure Funktionalität enthalten. Ein solches Salz kann durch verschiedene dem Fachmann bekannte Methoden in die entsprechende freie Base beziehungsweise Säure überführt werden. Schwächere Salze können durch Zugabe von etwas Hydrochlorid in die entsprechenden Chloride überführt werden. Wenn bei den im Folgenden beschriebenen Synthese-Intermediaten und Ausführungsbeispielen der Erfindung eine Verbindung in der Form eines Salzes der korrespondierenden Base beziehungseise Säure aufgeführt ist, so ist die exakte stöchiometrische Zusammensetzung eines solchen Salzes, wie es nach dem jeweiligen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren erhalten wurde, in der Regel nicht bekannt. Sofern nicht genauer spezifiziert, sind daher Namens- und Strukturformel-Zusätze wie beispielsweise "Hydrochlorid", "Trifluoracetat", "Natrium-Salz" bzw. "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+" bei solchen Salzen nicht stöchiometrisch zu verstehen, sondern haben allein deskriptiven Charakter bezüglich der enthaltenen salzbildenden Komponenten.
Sinngemäß gleiches gilt für den Fall, dass Synthese-Intermediate oder Ausführungsbeispiele oder Salze hiervon nach den beschriebenen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren in Form von Solvaten, wie beispielsweise Hydraten, erhalten wurden, deren stöchiometrische Zusammensetzung (sofern definierter Art) nicht bekannt ist.
Wenn die Ausgangsverbindungen und Beispiele als zentralen Baustein ein L-Phenylalanin-Derivat enthalten, ist das entsprechende Stereozentrum als (S)-Konfiguration beschrieben. Wenn nicht weiter angegeben, wurde nicht überprüft, ob in Einzelfällen bei der Kupplung der L-Phenylalanin- Intermediate mit dem Amin H2N-R1 eine teilweise Epimerisierung des Stereozentrums stattfand. Damit kann ein Gemisch der erfindungsgemäßen Verbindungen aus (S)-Enantiomer und (R)- Enantiomer vorliegen. Die Hauptkomponente ist das jeweils abgebildete (S)-Enantiomer. Ausgangsverbindungen
Beispiel 1A
Dimethyl- {[(3-brom-4-methylphenyl)amino]methylen}malonat
Figure imgf000031_0001
Eine Lösung von 9.44 g (49.2 mmol) 3-Brom-4-methylanilin und 11.14 g (63.98 mmol) Dimethylmethoxymethylenmalonat in 37 ml Xylen wurde 4 h bei 130°C gerührt und dann auf RT abgekühlt. Der Niederschlag wurde abgesaugt, mit Xylen gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde eingeengt, der Rückstand in Methanol aufgeschlemmt, abgesaugt und getrocknet. Man erhielt 12.5 g (78% d. Th.) der Titelverbindung. Ή NMR (400 MHz, DMSO-rf6): δ = ppm 2.30 (s, 3 H), 3.66 (m, 3 H), 3.72 (br. s., 3 H), 7.32 (m, 2 H), 7.69 (d, 1 H), 8.35 (d, 1 H), 10.59 (m, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.29 min; MS (ESIpos): m/z = 328.1 [M+H]+.
Beispiel 2A
Methyl-7-brom-6-methyl-4-oxo- 1 ,4-dihydrochinolin-3-carboxylat
Figure imgf000031_0002
Eine Suspension von 12.8 g (39.1 mmol) Dimethyl- {[(3-brom-4-methylphenyl)amino]methylen}- malonat in 75 ml Diphenylether wurde 2 h auf 250°C erhitzt und anschließend auf RT abgekühlt. Die Reaktionsmischung wurde mit Toluol versetzt und der Niederschlag abgesaugt. Der Niederschlag wurde mit wenig Toluol gewaschen und getrocknet. Filtrat und Waschlösung wurden vereint und ein Teil des Toluols wurde abdestilliert. Die verbliebene Lösung wurde erneut 2 h bei 250°C gerührt. Nach Abkühlen auf RT wurde mit Hexan versetzt und der entstandene Niederschlag abgesaugt, mit Hexan gewaschen und getrocknet. Man erhielt 6.9 g (60% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-rf6): δ = ppm 2.45 (s, 3 H), 3.74 (s, 3 H), 7.87 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 8.59 (s, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.82 min; MS (ESIpos): m/z = 296.0 [M+H]+. Beispiel 3A
Methyl-7-brom-6-methyl-4-oxo- 1 - { [2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3- carboxylat
Figure imgf000032_0001
Eine Lösung von 3.92 g (13.24 mmol) Methyl-7-brom-6-methyl-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3- carboxylat in 135 ml THF wurde mittels Eisbad auf 0°C gekühlt und mit 1.06 g (26.5 mmol, 60%oig) Natriumhydrid versetzt und 30 min bei RT gerührt. Anschließend wurden 3.31 g (19.9 mmol) Trimethylsilylethoxymethylchlorid zugesetzt und die Reaktionsmischung über Nacht bei RT gerührt. Dann wurde eingeengt und der Rückstand chromatographisch via Kieselgel (Laufmittel Hexan/Essigsäureethylester Gradient) gereinigt. Man erhielt 1.05 g (18% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-rf6): δ = ppm -0.10 (s, 9 H), 0.68 - 0.94 (m, 2 H), 2.48 (s, 3 H), 3.50 - 3.63 (m, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 5.74 (s, 2 H), 8.06 (s, 1 H), 8.09 - 8.24 (m, 1 H), 8.81 (s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.40 min; MS (ESIpos): m/z = 428.1 [M+H]+. Beispiel 4A
Methyl-6-methyl-4-oxo-7-(4,4,5,5-tetramethyl-l ,3,2-dioxaborolan-2-yl)- 1 - { [2-(trimethylsilyl)- ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carboxylat
Figure imgf000033_0001
Eine Lösung von 500 mg (1.05 mmol) Methyl-7-brom-6-methyl-4-oxo-l- {[2-(trimethylsilyl)- ethoxy]methyl}-l,4-dihydrochinolin-3-carboxylat und 402 mg (1.6 mmol) 4,4,4',4',5,5,5',5'- Octamethyl-2,2'-bi-l,3,2-dioxaborolan in 10 ml Dimethylformamid wurde mit 259 mg (3.15 mmol) Kaliumacetat und 82 mg (0.1 mmol) l,r-Bis(diphenylphosphin)ferrocendichloropalladium(II) versetzt. Die Reaktionsmischung wurde 2 h bei 110°C gerührt, zur Trockne eingeengt und der Rückstand chromatographisch via Biotage (Gradient: Hexan/Essigsäureethylester) gereinigt. Man erhielt 102 mg (21 % d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-i ): δ = ppm -0.1 1 (s, 9 H), 0.80 - 0.89 (m, 2 H), 1.34 (s, 12 H), 2.56 - 2.61 (m, 3 H), 3.57 - 3.64 (m, 2 H), 3.78 (s, 3 H), 5.72 (s, 2 H), 7.99 (s, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 8.82 (s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.60 min; MS (ESIpos): m/z = 474.3 [M+H]+ Beispiel 5A
7-(4- {(2iS)-2-[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]-2-carboxyethyl}phenyl)-6-methyl-4-oxo-l-{[2- (trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure
Figure imgf000034_0001
Eine Lösung von lg (2.9 mmol) 4-Brom-N-(tert-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin und 1.51 g (3.2 mmol) Methyl-6-methyl-4-oxo-7-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)-l- {[2-(trimethyl- silyl)ethoxy]methyl}-l,4-dihydrochinolin-3-carboxylat in 30 ml Dimethylsulfoxid wurde mit 212 mg (0.29 mmol) [(Di(l-adamantyl)-butylphosphin)-2-(2'-amino-l, -biphenyl)]palladium(II) methanesulfonat (cataCXium-A-Pd-G3), 1.9 g (8.7 mmol) Kaliumphosphat und 4.4 ml (243 mmol) Wasser versetzt und 1 h bei 90°C gerührt. Anschließend wurde die Reaktionsmischung mit 5.8 ml 2 N Lithiumhydroxid Lösung versetzt und 16 h bei RT gerührt. Zur Aufarbeitung wurde mit Wasser versetzt, mit 2 N Salzsäure auf pH 3 eingestellt und der Niederschlag abgesaugt. Der Rückstand wurde mit Wasser gewaschen und im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 1.1 g (64% d. Th.) der Titelverbindung.
'H NMR (300 MHz, DMSO-i ): δ = ppm -0.12 (s, 9 H), 0.75 - 0.90 (m, 2 H), 1.35 (s, 9 H), 2.31 - 2.40 (m, 3 H), 2.95 - 3.03 (m, 1 H), 3.09 - 3.18 (m, 1 H), 3.52 - 3.60 (m, 2 H), 3.71 - 3.78 (m, 1 H), 5.71 - 5.81 (m, 2 H), 5.85 - 5.92 (m, 1 H), 7.20 - 7.31 (m, 4 H), 7.58 - 7.65 (m, 1 H), 8.20 (s, 1 H), 8.88 - 8.98 (m, 1 H).
LC-MS (Methode 2): Rt = 0.64 min; MS (ESIpos): m/z = 597.2 [M+H]+.
Beispiel 6A
7- {4-[(2iS)-2-[(fert-Butoxycarbonyl)amino]-3- {[3-chlor-4-(methylcarbamoyl)phenyl]amino}-3- oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 - {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3- carbonsäure
Figure imgf000035_0001
Eine Lösung von 864 mg (1.45 mmol) 7-(4- {(2iS)-2-[(fert-Butoxycarbonyl)amino]-2- carboxyethyl}phenyl)-6-methyl-4-oxo- 1 - {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3- carbonsäure und 294 mg (1.6 mmol) 4-Amino-2-chlor-N-methylbenzamid in 13 ml Dimethylformamid wurde mit 0.76 ml (4.3 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin und 3.45 ml (5.8 mmol, 50%ig in Essigsäureethylester) 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinan-2,4,6- trioxid versetzt. Die Reaktionsmischung rührte 16 h bei RT und wurde anschließend mit Wasser versetzt. Der Niederschlag wurde abgesaugt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und chromatographisch via HPLC (Methode 5) gereinigt. Man erhielt 110 mg (10% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-rfe): δ = ppm -0.12 (s, 9 H), 0.76 - 0.94 (m, 2 H), 1.34 (s, 9 H), 2.38 (s, 3 H), 2.75 (d, 3 H), 2.89 - 2.99 (m, 1 H), 3.04 - 3.14 (m, 1 H), 3.61 (s, 2 H), 4.32 - 4.48 (m, 1 H), 5.94 (s, 2 H), 7.25 - 7.58 (m, 7 H), 7.80 (s, 2 H), 8.28 (s, 2 H), 9.19 (s, 1 H), 10.28 - 10.49 (m, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 1.39 min; MS (ESIpos): m/z = 763.2 [M+H]+. Beispiel 7A
7- {4-[(2iS)-2-Amino-3-{[3-chlor-4-(methylcarbamoyl)phenyl]amino}-3-oxopropyl]phenyl}-6- methyl-4-οχο- 1 ,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure-Hydrochlorid
Figure imgf000036_0001
Eine Suspension von 34.7 mg (0.045 mmol) 7- {4-[(2S)-2-[(tert-Butoxycarbonyl)amino]-3- {[3- chlor-4-(methylcarbamoyl)phenyl]amino} -3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 - {[2- (trimethylsilyl)ethoxy]methyl}-l,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure in 1 ml Dichlormethan wurde mit 0.02 ml (0.09 mmol) einer 4M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan versetzt und 48 h bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 5 ml Acetonitril versetzt, der entstandene Niederschlag abgesaugt und im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 17 mg (67% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-rfe): δ = ppm 2.33 (s, 3 H), 2.75 (d, 3 H), 3.14 - 3.32 (m, 2 H), 4.25 4.40 (m, 1 H), 7.44 (m, 7 H), 7.57 - 7.66 (m, 1 H), 7.73 - 7.82 (m, 1 H), 8.15 - 8.25 (m, 1 H), 8.24 8.36 (m, 1 H), 8.39 - 8.56 (m, 3 H), 8.81 - 8.95 (m, 1 H), 11.02 - 11.14 (m, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.72 min; MS (ESIpos): m/z = 533.1 [M+H-HC1]+.
Beispiel 8A
7- {4-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino} chlor-4-(methylcarbamoyl)phenyl]amino} -3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4- dihydrochinolin-3-carbonsäure
Figure imgf000037_0001
Eine Suspension von 17 mg (0.031 mmol) 7-{4-[(2iS)-2-Amino-3- {[3-chlor-4-(methylcarbamoyl)- phenyljamino} -3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure- Hydrochlorid, 24 mg (0.092 mmol) ?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}- cyclohexancarbonsäure und 22 μΐ (0.12 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin in 10 ml Essigsäureethylester wurde mit 49 mg (0.077 mmol, 50%ig in Essigsäureethylester) 2,4,6- Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinan-2,4,6-trioxid versetzt und 16 h bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser versetzt und der Feststoff abgesaugt und mit wenig Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt 9.5 mg (40% d. Th.) der Titelverbindung. Ή NMR (300 MHz, DMSO-rf6): δ = ppm 0.76 - 0.99 (m, 4 H), 1.37 (s, 9 H), 1.44 - 1.60 (m, 3 H), 1.61 - 1.74 (m, 4 H), 1.81 - 1.90 (m, 1 H), 2.06 - 2.17 (m, 1 H), 2.27 - 2.36 (m, 6 H), 2.64 - 2.70 (m, 2 H), 2.71 - 2.80 (m, 6 H), 2.91 - 3.01 (m, 2 H), 3.08 - 3.15 (m, 2 H), 4.65 - 4.77 (m, 1 H), 6.63 - 6.86 (m, 1 H), 7.27 - 7.35 (m, 2 H), 7.38 - 7.43 (m, 3 H), 7.47 - 7.57 (m, 2 H), 7.79 - 7.85 (m, 1 H), 8.09 - 8.16 (m, 1 H), 8.17 - 8.22 (m, 1 H), 8.24 - 8.32 (m, 1 H), 8.77 - 8.89 (m, 1 H), 10.27 - 10.41 (m, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.14 min; MS (ESIpos): m/z = 772.2 [M+H]+.
Beispiel 9A
6-Amino-4-chlor-l,3-dihydro-2_f/-benzimidazol-2-on
Figure imgf000038_0001
5 g (22.9 mmol) 4-Chlor-6-nitro-2,3-dihydro-lH-l,3-benzodiazol-2-on wurden in 350 ml Methanol/THF 6: 1 gelöst und mit 1 g Palladium/Kohle (10%ig, ca. 50% wasserfeucht) versetzt. Anschließend wurde bei RT 1 h Wasserstoff eingeleitet. Der Katalysator wurde abfiltriert und der Rückstand mit jeweils 150 ml Methanol und THF nachgewaschen. Das Filtrat wurde einrotiert. Man erhielt 4.2 g (quant.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-rf6): δ = ppm 4.90 (br. s., 2 H), 6.18 (d, 1 H), 6.22 (d, 1 H), 10.46 (s, 1 H), 10.51 (s, 1 H).
LC-MS (Methode 2): Rt = 0.48 min; MS (ESIpos): m/z = 183.9 [M+H]+. Beispiel 10A
4-Brom-N-a/ ?Äa-(fer?-butoxycarbonyl)-N-(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)-L- phenylalaninamid
Figure imgf000038_0002
Eine Lösung von 1.22 g (3.5 mmol) 4-Brom-N-(ter?-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin , 714 mg (3.9 mmol) 6-Amino-4-chlor-l,3-dihydro-2_f/-benzimidazol-2-on und 1.85 ml (10.6 mmol) N,N- Diisopropylethylamin in 15 ml Essigsäureethylester wurde mit 5.2 ml (8.8 mmol, 50%ig in Essigsäureethylester) 2,4,6-Tripropyl- 1 ,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinan-2,4,6-trioxid versetzt und 2 h bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser versetzt, der Niederschlag abgesaugt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt 1.35 g (67% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-ok): δ = ppm 1.31 (s, 9 H), 2.72 - 2.87 (m, 1 H), 2.88 - 2.98 (m, 1 H), 4.16 - 4.32 (m, 1 H), 7.05 - 7.32 (m, 5 H), 7.47 (d, 2 H), 9.80 - 10.14 (m, 1 H), 10.84 (s, 1 H), 11.03 (s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.15 min; MS (ESIpos): m/z = 511.1 [M+H]+. Beispiel IIA 4-Brom-A^-(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)-L-phenylalaninamid-Hydrochlorid
Figure imgf000039_0001
Eine Suspension von 1.35 g (2.66 mmol) 4-Brom-N-alpha-(tert-butoxycarbonyl)-N-(7-chlor-2-oxo- 2,3-dihydro-lH-benzimidazol-5-yl)-L-phenylalaninamid in 30 ml Dichlormethan wurde mit 3.3 ml (13.3 mmol) einer 4M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan versetzt und 2 h bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril versetzt, der entstandene Niederschlag abgesaugt und im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 1.08 g (94% d. Th.) der Titelverbindung.
:H NMR (300 MHz, DMSO-rf6): 5 = ppm 3.03 - 3.11 (m, 1 H), 3.16 - 3.24 (m, 1 H), 3.57 (s, 1 H), 3.85 (br. s., 3 H), 4.20 - 4.29 (m, 1 H), 7.26 - 7.32 (m, 4 H), 7.53 (d, 2 H), 8.38 (d, 3 H), 10.94 (d, 1 H), 11.01 (s, 1 H), 11.13 (s, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.69 min; MS (ESIpos): m/z = 411.1 [M+H-HC1]+.
Beispiel 12A
4-Brom- V-a/ 7Äa-[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]- V-(7-chlor- 2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)-L-phenylalaninamid
Figure imgf000040_0001
Eine Suspension von 1.08 g (2.63 mmol) 4-Brom- V-(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol- 5-yl)-L-phenylalaninamid-Hydrochlorid, 800 mg (3.1 mmol) ?ra«s-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)- amino]methyl}cyclohexancarbonsäure und 2.7 ml (15.5 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin in 15 ml Essigsäureethylester wurde mit 4.9 ml (8.4 mmol, 50%ig in Essigsäureethylester) 2,4,6- Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinan-2,4,6-trioxid versetzt, 16 h bei RT und 1 h unter Rückfluß gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser versetzt und der Niederschlag abgesaugt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt 1.71 g (69% d. Th.) der Titelverbindung. LC-MS (Methode 1): Rt = 1.20 min; MS (ESIpos): m/z = 650.5 [M+H]+. Beispiel 13A
Methyl-7-(4- {(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fert-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]- amino}-3-[(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)amino]-3-oxopropyl}phenyl)-6- methyl-4-οχο- 1 - { [2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carboxylat
Figure imgf000040_0002
Eine Lösung von 500 mg (0.77 mmol) 4-Brom- V-a/ ?Äa-[(?ra«5-4-{[(fert-butoxycarbonyl)- amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]- V-(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)-L- phenylalaninamid und 401 mg (0.85 mmol) Methyl-6-methyl-4-oxo-7-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2- dioxaborolan-2-yl)- 1 - {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carboxylat in 5 ml Dimethylsulfoxid wurde mit 63 mg (0.077 mmol) l,r-Bis(diphenylphosphin)ferrocen- dichlo alladium(II), 245 mg (2.3 mmol) Natriumcarbonat und 1.16 ml (64 mmol) Wasser versetzt und 90 min bei 90°C gerührt. Zur Aufarbeitung wurde mit Wasser versetzt und der Niederschlag abgesaugt. Der Rückstand wurde mit Wasser gewaschen, getrocknet und chromatographisch via HPLC (Methode 7) gereinigt. Man erhielt 286 mg (41% d. Th.) der Titelverbindung. Ή NMR (300 MHz, DMSO-i ): δ = ppm -0.15 (s, 9 H), 0.73 - 0.89 (m, 4 H), 1.07 - 1.31 (m, 4 H), 1.37 (s, 9 H), 1.50 - 1.75 (m, 5 H), 2.06 - 2.16 (m, 1 H), 2.30 (s, 3 H), 2.71 - 2.80 (m, 2 H), 2.88 - 2.99 (m, 1 H), 3.05 - 3.16 (m, 1 H), 3.52 - 3.63 (m, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 4.65 - 4.72 (m, 1 H), 5.68 - 5.81 (m, 2 H), 6.74 - 6.85 (m, 1 H), 7.23 (s, 1 H), 7.29 - 7.44 (m, 6 H), 7.60 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 8.14 - 8.20 (m, 1 H), 8.83 (s, 1 H), 10.11 (s, 1 H), 10.89 (s, 1 H), 11.02 - 11.17 (m, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 1.28 min; MS (ESIpos): m/z = 915.3 [M+H]+.
Beispiel 14A
7-(4- {(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}-3-[(7- chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)amino]-3-oxopropyl}phenyl)-6-methyl-4-oxo-l- {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure
CH, O Cl
Eine Lösung von 156 mg (0.17 mmol) Methyl-7-(4- {(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)- amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]amino} -3-[(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro- l/ -benzimidazol-5- yl)amino]-3-oxopropyl}phenyl)-6-methyl-4-oxo-l- {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} -l,4- dihydrochinolin-3-carboxylat in 3 ml DMSO wurde mit 0.25 ml (0.51 mmol) 2 N Natriumhydroxid Lösung versetzt und 16 h bei RT sowie 3 h bei 40°C gerührt. Die Suspension wurde mit Essigsäureethylester versetzt, der Feststoff abgesaugt, mit Essigsäureethylester gewaschen und getrocknet. Der Rückstand wurde chromatographisch via HPLC (Methode 8) gereinigt. Man erhielt 21.1 mg (14% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.33 min; MS (ESIpos): m/z = 901.5 [M+H]+. Beispiel 15A
4-Brom-N-a/ ?Äa-(fer?-butoxycarbonyl)-N- {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl}-L- phenylalaninamid
Figure imgf000042_0001
Eine Lösung von 1.34 g (3.9 mmol) 4-Brom-N-(ter?-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin , 790 mg (3.9 mmol) Methyl-N-(4-amino-2-fluor-phenyl)carbamat und 2.0 ml (11.7 mmol) N,N- Diisopropylethylamin in 15 ml Essigsäureethylester wurde mit 5.7 ml (9.75 mmol, 50%ig in Essigsäureethylester) 2,4,6-Tripropyl- 1 ,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinan-2,4,6-trioxid versetzt und 2 h bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser versetzt, der Niederschlag abgesaugt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt 1.79 g (85% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-i ): δ = ppm 1.30 (s, 9 H), 2.75 - 2.85 (m, 1 H), 2.90 - 2.99 (m, 1 H), 3.63 (s, 3 H), 4.21 - 4.31 (m, 1 H), 7.15 (d, 1 H), 7.19 - 7.32 (m, 3 H), 7.47 (m, 3 H), 7.60 (dd, 1 H), 9.16 (br. s., 1 H), 10.19 (s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.27 min; MS (ESIpos): m/z = 510.2 [M+H]+. Beispiel 16A
4-Brom-N- { 3 -fluor-4- [(methoxycarbon^
Figure imgf000043_0001
Eine Suspension von 1.79 g (3.5 mmol) 4-Brom-N-a/ ?Äa-(fert-butoxycarbonyl)-N- {3-fluor-4- [(methoxycarbonyl)amino]phenyl}-L-phenylalaninamid in 30 ml Dichlormethan wurde mit 4.4 ml (17.5 mmol) einer 4M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan versetzt und 6 h bei RT sowie 4 h bei 40°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Acetonitril versetzt, der entstandene Niederschlag abgesaugt und im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 1.37 g (95% d. Th.) der Titelverbindung.
'H NMR (300 MHz, DMSO-rf6): 5 = ppm 3.01 - 3.11 (m, 1 H), 3.15 - 3.24 (m, 1 H), 3.64 (s, 3 H), 4.16 - 4.30 (m, 1 H), 7.22 - 7.30 (m, 3 H), 7.47 - 7.54 (m, 3 H), 7.55 - 7.62 (m, 1 H), 8.37 (br. s., 3 H), 9.18 - 9.29 (m, 1 H), 11.05 (s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.81 min; MS (ESIpos): m/z = 410.2 [M+H-HC1]+. Beispiel 17A
4-Brom-N-a/ ?Äa-[(?ra«5-4-{[(fert-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]-N- {3- fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl} -L-phenylalaninamid
Figure imgf000043_0002
Eine Suspension von 1.37 g (3.3 mmol) 4-Brom-N- {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl}- L-phenylalaninamid-Hydrochlorid, 1.17 g (4.55 mmol) ?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]- methyl}cyclohexancarbonsäure und 2.6 ml (15.2 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin in 18 ml Essigsäureethylester wurde mit 6.3 ml (10.6 mmol, 50%ig in Essigsäureethylester) 2,4,6- Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphorinan-2,4,6-trioxid versetzt, 16 h bei RT und 2 h unter Rückfluß gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser versetzt und der Niederschlag abgesaugt, mit Wasser sowie etwas Essigsäureethylester gewaschen und getrocknet. Man erhielt 3.13 g (87% d. Th., Reinheit: 83%) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.35 min; MS (ESIpos): m/z = 651.3 [M+H]+.
Beispiel 18A
Methyl-7- {4-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]- amino} -3-( {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl} amino)-3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4- oxo- 1 - { [2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carboxylat
Figure imgf000044_0001
Eine Lösung von 245 mg (0.38 mmol) 4-Brom-N-a/ ?Äa-[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]- methyl}cyclohexyl)carbonyl]-N-{3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl}-L-phenyl- alaninamid und 196.5 mg (0.42 mmol) Methyl-6-methyl-4-oxo-7-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2- dioxaborolan-2-yl)- 1 - { [2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carboxylat in 3.5 ml Dimethylsulfoxid wurde mit 31 mg (0.038 mmol) l,l'-Bis(diphenylphosphin)ferrocen- dichlo alladium(II), 120 mg (1.1 mmol) Natriumcarbonat und 0.5 ml (27.7 mmol) Wasser versetzt und 2 h bei 90°C gerührt. Zur Aufarbeitung wurde filtriert und chromatographisch via HPLC (Methode 7) gereinigt. Man erhielt 138 mg (28%o d. Th.) der Titelverbindung. LC-MS (Methode 1): Rt = 1.42 min; MS (ESIpos): m/z = 916.6 [M+H]+. Beispiel 19A
7- {4-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}-3-({3- fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl}amino)-3-oxopropyl]phenyl}-6-methyl-4-oxo-l- {[2- (trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure
Figure imgf000045_0001
Eine Lösung von 138 mg (0.15 mmol) Methyl-7- {4-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)- amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]amino} -3-( {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl} - amino)-3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 - {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4- dihydrochinolin-3-carboxylat in 3 ml DMSO wurde mit 0.1 ml (0.3 mmol) 2 N Natriumhydroxid Lösung versetzt und 16 h bei RT gerührt. Die Suspension wurde mit Essigsäureethylester versetzt, der Feststoff abgesaugt, mit wenig Essigsäureethylester gewaschen und getrocknet. Die Dimethylsulfoxid/Wasser und Essigsäureethylester Phasen wurden getrennt und die wässerige Phase mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Man erhielt in Summe 74 mg (41 % d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.41 min; MS (ESIpos): m/z = 903.1 [M+H]+. Ausführungsbeispiele
Beispiel 1
7- {4-[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3- {[3-chlor-4-(m
carbamoyl)phenyl]amino} -3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4-dihydrochinolin-3- carbonsäure-Hydrochlorid
Figure imgf000046_0001
Eine Suspension von 9.5 mg (0.012 mmol) 7- {4-[(2S)-2- {[(trans-4- {[(tert-Butoxycarbonyl)amino]- methyl}cyclohexyl)carbonyl]ammo}-3- {[3-chlor-4-(methylcarbamoyl)phenyl]amino}-3- oxopropyl]phenyl}-6-methyl-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-carbonsäure in 0.5 ml Dichlormethan wurde mit 0.015 ml (0.063 mmol) einer 4M Hydrochlorid-Lösung in 1 ,4-Dioxan versetzt, 16 h bei RT und 1 h bei 40°C gerührt. Die Suspension wurde zur Trockene eingeengt und im Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 4.5 mg (52% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-rf6): δ = ppm 0.86 - 0.99 (m, 2 H), 1.11 - 1.22 (m, 1 H), 1.23 - 1.34 (m, 1 H), 1.43 - 1.53 (m, 1 H), 1.55 - 1.63 (m, 1 H), 1.69 - 1.82 (m, 3 H), 2.11 - 2.21 (m, 1 H), 2.33 (s, 3 H), 2.61 - 2.67 (m, 2 H), 2.75 (d, 3 H), 2.93 - 3.01 (m, 1 H), 3.12 - 3.19 (m, 1 H), 4.70 - 4.78 (m, 1 H), 7.32 - 7.38 (m, 2 H), 7.39 - 7.46 (m, 3 H), 7.50 - 7.54 (m, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.72 - 7.80 (m, 3 H), 7.83 - 7.86 (m, 1 H), 8.20 (s, 1 H), 8.24 - 8.31 (m, 2 H), 8.89 (d, 1 H), 10.47 - 10.52 (m, 1 H), 13.47 - 13.55 (m, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.79 min; MS (ESIpos): m/z = 672.2 [M+H-HC1]+. Beispiel 2
7-(4- {(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-[(7-chlor-2-oxo-2,^ dihydro- l/ -benzimidazol-5-yl)arnino]-3-oxopropyl}phenyl)-6-methyl-4-oxo- 1 ,4-dihydrochinolin- 3 - c arbons äure -Hydrochlorid
Eine Suspension von 26.5 mg (0.03 mmol) 7-(4- {(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]- methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}-3-[(7-chlor-2-oxo-2,3-dihydro-l/ -benzimidazol-5-yl)amino]- 3-oxopropyl}phenyl)-6-methyl-4-oxo- 1 - {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3- carbonsäure in 1.5 ml Dichlormethan wurde mit 0.022 ml (0.09 mmol) einer 4M Hydrochlorid- Lösung in 1,4-Dioxan versetzt, 16 h bei RT und anschließend 1 h bei 40°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 5 ml Acetonitril versetzt, der entstandene Niederschlag abgesaugt und chromatographisch via HPLC (Methode 4) gereinigt. Man erhielt 14 mg (70% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-i ): δ = ppm 0.86 - 1.00 (m, 2 H), 1.1 1 - 1.23 (m, 1 H), 1.23 - 1.35 (m, 1 H), 1.42 - 1.53 (m, 1 H), 1.53 - 1.62 (m, 1 H), 1.69 - 1.81 (m, 3 H), 2.1 1 - 2.20 (m, 1 H), 2.30 - 2.38 (m, 3 H), 2.62 - 2.67 (m, 2 H), 2.91 - 3.00 (m, 1 H), 3.09 - 3.16 (m, 1 H), 4.66 - 4.74 (m, 1 H), 7.25 - 7.27 (m, 1 H), 7.29 - 7.32 (m, 1 H), 7.35 (d, 2 H), 7.43 (d, 2 H), 7.58 - 7.63 (m, 1 H), 7.66 - 7.82 (m, 3 H), 8.15 - 8.29 (m, 2 H), 8.88 - 8.96 (m, 1 H), 10.16 (s, 1 H), 10.90 (s, 1 H), 1 1.08 (s, 1 H), 13.37 - 13.53 (m, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.74 min; MS (ESIpos): m/z = 671.4 [M+H-HC1]+. Beispiel 3
7- {4-[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-({3-fluor-4- [(methoxycarbonyl)amino]phenyl} amino)-3-oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 ,4- dihydrochinolin-3-carbonsäure-Hydrochlorid
Figure imgf000048_0001
Eine Suspension von 72 mg (0.082 mmol 7- {4-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]- methyl} cyclohexyl)carbonyl]amino} -3-( {3-fluor-4-[(methoxycarbonyl)amino]phenyl} amino)-3- oxopropyl]phenyl} -6-methyl-4-oxo- 1 - {[2-(trimethylsilyl)ethoxy]methyl} - 1 ,4-dihydrochinolin-3- carbonsäure in 2 ml Dichlormethan wurde mit 0.28 ml (1.1 mmol) einer 4M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan versetzt, 16 h bei RT und weitere 6 h bei 40°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 5 ml Acetonitril versetzt, der entstandene Niederschlag abgesaugt und chromatographisch via HPLC (Methode 4) gereinigt. Man erhielt 12 mg (19% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-i ): δ = ppm 0.82 - 0.98 (m, 2 H), 1.08 - 1.18 (m, 1 H), 1.21 - 1.32 (m, 1 H), 1.41 - 1.51 (m, 1 H), 1.51 - 1.61 (m, 1 H), 1.67 - 1.81 (m, 3 H), 2.08 - 2.20 (m, 1 H), 2.31 (s, 3 H), 2.59 - 2.67 (m, 2 H), 2.90 - 2.99 (m, 1 H), 3.08 - 3.18 (m, 1 H), 3.63 (s, 3 H), 4.63 - 4.78 (m, 1 H), 7.21 - 7.29 (m, 1 H), 7.34 (d, 2 H), 7.41 (d, 2 H), 7.44 - 7.53 (m, 1 H), 7.60 (s, 2 H), 7.67 - 7.81 (m, 3 H), 8.13 - 8.27 (m, 2 H), 8.83 - 8.91 (m, 1 H), 9.12 - 9.21 (m, 1 H), 10.33 (s, 1 H), 13.38 - 13.53 (m, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.87 min; MS (ESIpos): m/z = 671.5 [M+H-HC1] B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen oder hyperfibrinolytischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden: a) Testbeschreibungen (in vitro) a.l) Messung der FXIa-Hemmung
Zur Bestimmung der Faktor XIa-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Faktor Xla- Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Faktor XIa benutzt wird. Dabei spaltet Faktor XIa von dem peptischen Faktor XIa-Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mmol/1 Tris-Puffer pH 7.4; 100 mmol/1 Natriumchlorid; 5 mmol/1 Calciumchlorid; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ Faktor XIa der Firma Kordia (0.45 nM in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Faktor XIa Substrates Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg- AMC (10 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen ICso-Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle A aufgeführt:
Tabelle A
Beispiel-Nr. ICso [nM] Beispiel-Nr, ICse |n.Mj
1 21.5 2 6.5
3 41 a.2) Messung der Plasmin-Hemmung
Zur Bestimmung der Plasmin-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Plasmin- Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Plasmin benutzt wird. Dabei spaltet Plasmin von dem peptischen Plasmin-Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mmol/1 Tris-Puffer pH 7.4; 100 mmol/1 Natriumchlorid; 5 mmol/1 Calciumchlorid; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ Plasmin der Firma Kordia (0.3 μg/ml in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Plasmin Substrates MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC (150 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen IC50- Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle B aufgeführt:
Tabelle B (Plasmin Hemmung)
Figure imgf000050_0001
a.3) Messung der Kallikrein-Hemmung
Zur Bestimmung der Plasma-Kallikrein-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Plasma- Kallikrein-Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Plasma- Kallikrein benutzt wird. Dabei spaltet Plasma-Kallikrein von dem peptischen Plasma-Kallikrein Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mmol/1 Tris-Puffer pH 7.4; 100 mmol/1 Natriumchlorid; 5 mmol/1 Calciumchlorid; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ humanes Plasma- Kallikrein der Firma Kordia (0.6 nM in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Plasma-Kallikrein-Substrates H-Pro-Phe-Arg-AMC (15 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen IC50- Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle C aufgeführt:
Tabelle C (Kallikrein Hemmung)
Figure imgf000051_0001
a.4) Bestimmung der Selektivität
Zum Nachweis der Selektivität der Substanzen bezüglich FXIa-Hemmung werden die Prüfsubstanzen auf ihre Hemmung anderer humaner Serinproteasen wie Faktor Xa und Trypsin hin untersucht. Zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität von Faktor Xa (1.3 nmol/1 von Kordia) und Trypsin (83 mU/ml von Sigma) werden diese Enzyme gelöst (50 mmol/1 Tris-Puffer [C,C,C- Tris(hydroxymethyl)-aminomethan], 100 mmol/1 Natriumchlorid, 0.1 %> BSA [bovines Serumalbumin], 5 mmol/1 Calciumchlorid, pH 7.4) und für 15 min mit Prüfsubstanz in verschiedenen Konzentrationen in Dimethylsulfoxid sowie mit Dimethylsulfoxid ohne Prüfsubstanz inkubiert. Anschließend wird die enzymatische Reaktion durch Zugabe der entsprechenden Substrate gestartet (5 μηιο1/1 Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC von Bachem für Faktor Xa und Trypsin). Nach einer Inkubationszeit von 30 min bei 22°C wird die Fluoreszenz gemessen (Anregung: 360 nm, Emission: 460 nm). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit den Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations- Wirkungs-Beziehungen IC50- Werte berechnet. a.5) Bestimmung der antikoagulatorischen Wirkung
Die antikoagulatorische Wirkung der Prüfsubstanzen wird in vitro in Human- und Tierplasma (z. B. Maus-, Ratten-, Kaninchen- , Schwein- und Hundeplasma) bestimmt. Dazu wird Blut unter Verwendung einer 0.11 molaren Natriumcitrat-Lösung als Vorlage in einem Mischungsverhältnis Natriumcitrat/Blut 1/9 abgenommen. Das Blut wird unmittelbar nach der Abnahme gut gemischt und 15 Minuten bei ca. 4000 g zentrifugiert. Der Überstand wird abpipettiert.
Die Prothrombinzeit (PT, Synonyme: Thromboplastinzeit, Quick-Test) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (Neoplastin® von der Firma Boehringer Mannheim oder Hemoliance® RecombiPlastin von der Firma Instrumentation Laboratory) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von Thromboplastin die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine Verdoppelung der Prothrombinzeit bewirkt. Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (aPTT) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (C.K. Prest von der Firma Diagnostica Stago) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma und dem PTT Reagenz (Cephalin, Kaolin) inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von einer 25 mM wässrigen Calciumchlorid- Lösung die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine 1.5 fache Verlängerung der aPTT bewirken. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle D aufgeführt: Tabelle D
Figure imgf000053_0001
a.6) Bestimmung der fibrinolytischen Wirkung
Die anti-fibrinolytische Wirkung in vitro wird in humanem, Plättchen-freien Plasma bewertet. Tissue Faktor (TF) (1 pM) und Tissue Plasminogenaktivator (tPA) (40 nM) werden zusammen mit 12.5 mM wässriger Calciumchlorid-Lösung und Substanz in Plasma pipettiert. Nach erfolgter Clot- Bildung wird die sich anschließende Clot-Lyse über einen Zeitraum von 30 Minuten photometrisch bestimmt. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle E aufgeführt:
Tabelle E
Figure imgf000053_0002
b) Bestimmung der antithrombotischen Wirkung (in vivo) b. l) Arterielles Thrombose-Modell (Eisen(II)chlorid- induzierte Thrombose) in Kombination mit Ohrblutungszeit im Kaninchen
Die antithrombotische Aktivität der FXIa-Inhibitoren wird in einem arteriellen Thrombose-Modell getestet. Dabei wird die Thrombusbildung durch chemische Beschädigung eines Bereichs der Arteria carotis im Kaninchen ausgelöst. Simultan wird die Ohrblutungszeit bestimmt.
Männliche Kaninchen (CrhKBL (NZW)BR, Charles River) unter normaler Diät mit einem Gewicht von 2.2 - 2.5 kg Körpergewicht werden durch intramuskuläre Applikation von Xylazin und Ketamin (Rompun, Bayer, 5 mg/kg und Ketavet, Pharmacia & Upjohn GmbH, 40 mg/kg Körpergewicht) anästhesiert. Die Anästhesie wird weiterhin durch intravenöse Gabe derselben Präparate (bolus: Dauerinfusion) über die rechte Ohrvene unterstützt. Nach Freipräparation der rechten Arteria carotis wird der Gefäßschaden dadurch erzeugt, dass ein Stück Filterpapier (10 mm x 10 mm) auf einem Streifen Parafilm® (25 mm x 12 mm) um die A. carotis gewickelt wird, ohne den Blutfluß dadurch zu beeinträchtigen. Das Filterpapier enthält 100 μΐ. einer 13%igen Lösung von Eisen(II)chlorid (Sigma) in Wasser. Nach 5 min wird das Filterpapier entfernt und das Gefäß zweimal mit wässriger 0.9%iger Natriumchlorid-Lösung gespült. 30 min nach der Verletzung wird die Arteria carotis im Bereich der Schädigung herauspräpariert und eventuell vorhandenes thrombotisches Material entnommen und gewogen.
Die Prüfsubstanzen werden entweder intravenös über die Vena femoralis den anästhesierten oder oral mittels Schlundsonde den wachen Tieren jeweils 5 min beziehungsweise 2 h vor Schädigung verabreicht.
Die Ohrblutungszeit wird 2 min nach der Schädigung der Arteria carotis bestimmt. Hierzu wird das linke Ohr rasiert und ein definierter Schnitt von 3 mm Länge (Klinge Art.Nummer 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Germany) parallel zur Ohrlängsachse gesetzt. Dabei wird darauf geachtet, kein sichtbares Gefäß zu verletzen. Eventuell austretendes Blut wird in 15 Sekunden-Intervallen mit genau gewogenen Filterpapierstücken aufgenommen, ohne die Wunde direkt zu berühren. Die Blutungszeit wird berechnet als die Zeitspanne vom Setzen des Schnitts bis zu dem Zeitpunkt, an dem am Filterpapier kein Blut mehr nachweisbar ist. Das ausgetretene Blutvolumen wird nach Wiegen der Filterpapierstücke berechnet. c] Bestimmung der fibrinolytischen Wirkung (in vivo) c.l) hvper-fibrinolvtische Ratten
Die Bestimmung der antifibrinolytischen Wirkung in vivo wird in hyper-fibrinolytischen Ratten durchgeführt. Nach Narkotisierung und Kathetrisierung der Tiere wird die Hyper-Fibinolyse durch Infusion von Tissue Plasminogenaktivator (tPA) (8 mg/kg/h) ausgelöst. 10 Minuten nach Beginn der tPA-Infusion wird die Substanzen als i.V. Bolus appliziert. Nach weiteren 15 Minuten wird die tPA-Infusion beendet und eine Transsektion des Schwanzes durchgeführt. Die subaquale Blutung (in 37°C temperierter physiologischer Natriumchlorid-Lösung) wird über 30 Minuten beobachtet und die Blutungszeit bestimmt. C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zubereitungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können beispielsweise folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
Tablette: Zusammensetzung:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung: Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).
Orale Suspension: Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension. Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6 h gerührt. Oral applizierbare Lösung:
Zusammensetzung:
500 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 2.5 g Polysorbat und 97 g Polyethylenglycol 400. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 20 g orale Lösung. Herstellung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in der Mischung aus Polyethylenglycol und Polysorbat unter Rühren suspendiert. Der Rührvorgang wird bis zur vollständigen Auflösung der erfindungsgemäßen Verbindung fortgesetzt. i.v.-Lösung: Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Natriumchloridlösung, Glucoselösung 5% und/oder Polyethylenglykol 400 / Wasser 30% m/m) gelöst. Die Lösung wird steril filtriert und in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel
Figure imgf000057_0001
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist,
R2 für Fluor oder Chlor steht,
R3 für Ci-C3-Alkylaminocarbonyl oder Ci-C3-Alkoxycarbonylamino steht,
R4 für Fluor oder Chlor steht,
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000058_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist, R2 für Fluor oder Chlor steht,
R3 für Methylaminocarbonyl oder Methoxycarbonylamino steht,
R4 für Chlor steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000058_0002
steht, wobei # die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom ist, R2 für Fluor oder Chlor steht,
R3 für Methylaminocarbonyl oder Methoxycarbonylamino steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verbindung der Formel
Figure imgf000059_0001
in welcher
R1 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt wird.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Blutverlust bei hyperfibrmolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Blutverlust bei hyperfibrmolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
10. Arzneimittel nach Anspruch 9 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Blutverlust bei hyperfibrmolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers. 11. Verfahren zur Bekämpfung von Blutverlust in Menschen und Tieren durch Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, eines Arzneimittels nach Anspruch 9 oder eines nach Anspruch 7 oder 8 erhaltenen Arzneimittels.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989011852A1 (en) 1988-06-06 1989-12-14 Showa Denko Kabushiki Kaisha Agent for treating pancreatitis or the like
WO2007070816A2 (en) 2005-12-14 2007-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Thiophene derivatives as factor xia inhibitors
JP2014227401A (ja) 2013-05-24 2014-12-08 大日本住友製薬株式会社 フェニルアラニン誘導体

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