DE60122750T2

DE60122750T2 - Amidin-Inhibitoren von Serin-Proteasen

Info

Publication number: DE60122750T2
Application number: DE60122750T
Authority: DE
Inventors: M. Richard San Francisco PASTOR; R. Dean Kensington ARTIS; G. Alan Half Moon Bay OLIVERA
Original assignee: Genentech Inc
Current assignee: Genentech Inc
Priority date: 2000-09-11
Filing date: 2001-09-05
Publication date: 2006-12-21
Anticipated expiration: 2021-09-06
Also published as: AU2001288819A1; JP2004509104A; CA2421548C; DE60122750D1; US6838479B2; CA2421548A1; US20030229133A1; EP1317429A1; ATE338030T1; US6410733B1; US20020055469A1; EP1317429B1; WO2002022575A1

Description

Gebiet der Erfindung
Die Erfindung betrifft neue Verbindungen, die Inhibitoren von Serinproteasen, wie Gewebefaktor (TF)/Faktor VIIa, Faktor Xa, Thrombin und/oder Kallikrein, darstellen, sowie pharmazeutische Zusammensetzungen mit einem Gehalt an diesen Verbindungen, die sich zur Hemmung von Serin-proteasen und zur Behandlung von durch diese vermittelten Störungen eignen.
Hintergrund der Erfindung
Eine normale Hämostase ist das Ergebnis eines komplizierten Gleichgewichts zwischen den Vorgängen der Initiation, Bildung und Auflösung von Gerinnseln. Die komplizierten Wechselwirkungen zwischen Blutzellen, speziellen Plasmaproteinen und der Gefäßoberfläche halten die Fließfähigkeit von Blut aufrecht, wobei aber im Fall einer Verletzung die Blutkoagulation lebenswichtig ist, um Körperflüssigkeiten zurückzuhalten, und einen wesentlichen Bestandteil der Wirtsabwehrmechanismen darstellt. Zahlreiche wichtige Krankheitszustände stehen im Zusammenhang mit einer abnormalen Gerinnselbildung (Thrombose) in Blutgefäßen. Beispielsweise stellt im arteriellen Gefäßsystem eine abnormale Thrombusbildung aufgrund einer Verschlechterung eines bestehenden atherosklerotischen Plaques eine Hauptursache von akuten Myokardinfarkten und instabiler Angina dar. Im venösen Gefäßsystem erleiden zahlreiche Patienten, die sich einer Operation unterziehen, insbesondere in den abdominalen und unteren Körperregionen, eine Thrombusbildung, die die Durchblutung verringert und zu einer Lungenembolie führen kann. Eine verstreute intravaskuläre Koagulopathie sowohl im venösen als auch im arteriellen System tritt üblicherweise bei septischem Schock, bei einigen viralen Infektionen und bei Krebs auf, wonach es zu einer raschen und weit verbreiteten Thrombusbildung und zu Organversagen kommt.
Die Koagulation und Gerinnselbildung (Thrombusbildung) beinhaltet die sequentielle Aktivierung von zahlreichen Zymogenen in einem Prozess, der zur Erzeugung von Thrombin führt, das seinerseits für die Umwandlung von Fibrinogen in ein undurchlässiges, vernetztes Fibringerinnsel verantwortlich ist. Die Thrombinbildung ist das Ergebnis einer Blutkoagulationskaskade, die eingehend untersucht und in zunehmendem Maße charakterisiert worden ist; (vergl. beispielsweise J. H. Lawson et al., J. Biol. Chem., Bd. 269 (1994), S. 23357. Die Koagulationsreaktionen dieser Kaskade beinhalten Initiations-, Amplifikations- und Vermehrungsphasen. Zusätzlich wurde die Kaskade in extrinsische und intrinsische Wege unterteilt. Der intrinsische Weg umfasst die Faktoren XII, XI und IX und führt zur Bildung eines Komplexes aus dem Faktor IXa mit dessen Kofaktor, nämlich Faktor VIIIa. Dieser Komplex wandelt den Faktor X in Xa um. Beim Faktor Xa handelt es sich um ein Enzym, das einen Komplex mit seinem Kofaktor, nämlich Faktor Va, bildet und rasch Prothrombin zu Thrombin umwandelt. Thrombin wandelt seinerseits Fibrinogen in Fibrin-Monomere um, die unter Bildung eines Gerinnsels polymerisieren. Der extrinsische Weg umfasst den Faktor VIIa und den Gewebefaktor, die einen Komplex bilden (TF/Faktor VIIa) und wandelt Faktor X in Xa um. Wie beim intrinsischen Weg wandelt der Faktor Xa Prothrombin in Thrombin um.
Thrombin (Faktor IIa) nimmt, wie vorstehend erwähnt, eine zentrale Position in der Koagulationskaskade ein, indem es Fibrinogen in Fibrin umwandelt. Infolgedessen wurden erhebliche Syntheseanstrengungen auf die Entwicklung von Verbindungen gerichtet, die Thrombin binden, um dessen Aktivität zu hemmen. Ein Beispiel hierfür sind N-arylsulfinierte Phenylalaninamide. Weitere Verbindungen, die als synthetische Thrombin-Inhibitoren hergestellt worden sind, sind in US-5 656 600, US-5 656 645, US-5 670 479, US-5 646 165, US-5 658 939, US-5 658 930 und WO-97/30073 beschrieben. Es wurden zahlreiche Thrombin-Inhibitoren konzipiert, um die Struktur von Hirudin nachzuahmen, einem Protein, das von medizinischen Blutegeln (Hirudo medicinalis) erzeugt wird, das Thrombin bindet und dabei die Koagulation hemmt; Stubbs und Bode, Current Opinion in Structural Biology, Bd. 4 (1994), S. 823–832. Weitere synthetische Thrombin-Inhibitoren sind in Annual Reports in Medicinal Chemistry, 1995–1997, Academic Press, San Diego, CA, beschrieben.
TF/Faktor VIIa ist ein Serin-protease-Komplex, der an der Blutkoagulation teilnimmt, indem er Faktor X und/oder Faktor IX aktiviert. Faktor VIIa wird aus dessen Vorläufer, nämlich Faktor VII, erzeugt, der in der Leber synthetisiert und in das Blut sezerniert wird, wo er als einkettiges Glycopeptid zirkuliert. Die cDNA-Sequenz für Faktor VII wurde charakterisiert (Hagen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 83 (1986), S. 2412–2416). Es sind eine Vielzahl von natürlichen und synthetischen Inhibitoren von TF/Faktor VIIa bekannt, die unterschiedliche Wirkungsstärken und Selektivitäten aufweisen, z. B. die in US-5 589 173 beschriebenen Produkte, die zur Behandlung von Myokardinfarkt verwendet werden. Der Gewebefaktor-Weg-Inhibitor (TFPI; Broze, Thromb. Haemostas., Bd. 74 (1995), S. 90) und das Nematoden-Antikoagulationspeptid c2 (NAPc2; Stanssens et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 93 (1996), S. 2149) binden Faktor Xa vor der Bildung eines quaternären Inhibitorkomplexes mit dem TF/Faktor VIIa-Komplex. Direkte kleine Protein-Inhibitoren (Dennis et al., J. Biol. Chem., Bd. 35 (1994), S. 22137) und inaktive Formen von TF/Faktor VIIa sind ebenfalls bekannt (Kirchhofer et al, Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biol., Bd. 15 (1995), S. 1098; Jang et al., Circulation, Bd. 92 (1995), S. 3041). Ferner wurden synthetische Peptide und lösliche Formen von mutantem TF hergestellt, bei denen die Bindungsaffinität erhalten bleibt, die aber eine verringerte Kofaktor-Aktivität aufweisen (Roenning et al., Thromb. Res., Bd. 82 (1996), S. 73; Kelley et al., Blood, Bd. 89 (1997), S. 3219). US-5 679 639 beschreibt Polypeptide und Antikörper, die die Serin-protease-Aktivität hemmen. US-5 580 560 beschreibt einen mutanten Faktor VIIa, der eine verbesserte Halbwertszeit aufweist. US-5 504 067 und US-5 504 064 beschreiben einen verkürzten TF zur Behandlung von Blutungen. Auch von Kunitz-Domäne-Gewebefaktor-Fusionsproteinen wurde gezeigt, dass sie bifunktionelle Antikoagulationsmittel darstellen (Lee et al., Biochemistry, Bd. 36 (1997), S. 5607–5611). Der TF/Faktor VIIa-Komplex wurde als attraktives Ziel zur Entwicklung von Inhibitoren auf der Grundlage einer Trennung zwischen chirurgischer Blutung und Verhinderung einer intravaskulären Thrombose bezeichnet (Harker et al., Thromb. Haemostas., Bd. 74 (1995), S. 464).
Faktor Xa nimmt ebenfalls eine zentrale Position bei Thrombosen ein, da er ein Produkt sowohl der intrinsischen als auch der extrinsischen Koagulationswege darstellt. Inhibitoren von Faktor Xa wurden synthetisiert, z. B. Bisamidin-Verbindungen (S. Katakura, Biochem. Biophys. Res. Commun., Bd. 197 (1993), S. 965), Verbindungen auf der Grundlage der Struktur von Arginin (WO-93/15756, WO-94/13693) und Phenyl- und Naphthylsulfonamide (WO-96/10022, WO-96/16940, WO-96/40679). Bestimmte Amidinophenylpyrrolidin-Verbindungen wurden als Faktor Xa-Inhibitoren beschrieben (US-A-6 057 342).
Eine perkutane, transluminale, koronare Angioplastie (PTCA) und eine Rekanalisierung werden als Verfahren zur Behandlung von verschlossenen Gefäßen bevorzugt. Jedoch bleibt eine arterielle Thrombose im Anschluss an diese Maßnahmen als Hauptursache für Fehlschläge bestehen. Von Antikoagulationsmitteln, einschließlich Heparin, dem am häufigsten verwendeten Antikoagulationsmittel, wurde nicht gezeigt, dass sie bei der Behandlung und Prophylaxe von akuter arterieller Thrombose oder Rethrombose vollkommen wirksam oder sicher sind. Demzufolge besteht nach wie vor ein Bedürfnis nach Verbindungen, die wirksame Inhibitoren von Enzymen in der Koagulationskaskade darstellen und die eine verbesserte Hemmwirkung und/oder Selektivität in Bezug auf ausgewählte Enzyme in der Kaskade aufweisen.
Zusammenfassende Darstellung der Erfindung
Gemäß einem Aspekt der vorliegenden Erfindung werden neue Verbindungen der Formel (I) bereitgestellt
wobei
X O, CR₆R_6', NR₆ oder S bedeutet, wobei R₆ und R₆, jeweils unabhängig voneinander H oder Alkyl bedeuten;
R₁ H, -OR₇, eine Aminosäure oder -NR₇R₇, bedeutet, wobei R₇ und R₇, jeweils unabhängig voneinander H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus, einen Heterocyclus, eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette oder eine heterocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxyl, Halogen, Cyano, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy, Aryl oder Carboxyl, bedeutet; oder R₇ und R₇, zusammen einen Heterocyclus bedeuten, der gegebenenfalls mit einem anderen Heterocyclus oder Carbocyclus kondensiert ist, wobei der Heterocyclus und Carbocyclus gegebenenfalls durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert sind;
R₂ H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus oder eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette, gegebenenfalls durch Hydroxyl, Oxo, Halogen, Cyano, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert, bedeutet; und wobei die Kohlenwasserstoffkette gegebenenfalls durch N, O, S, SO oder SO₂ unterbrochen ist;
R₃ H oder eine Schutzgruppe, die aus tert.-Butyloxycarbonyl (Boc), Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl (Teoc), 1-Methyl-1-(4-biphenylyl)-ethoxycarbonyl (Bpoc), Allyloxycarbonyl (Alloc) und Benzyloxycarbonyl (Cbz) ausgewählt ist, bedeutet;
R₄ aus der Gruppe, die aus H, Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin und Acylamino besteht, ausgewählt ist;
R₅ H bedeutet oder R₄ und R₅ zusammen einen 5- oder 6-gliedrigen carbocyclischen oder heterocyclischen Ring, der gegebenenfalls durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin oder Acylamino substituiert ist, bedeutet;
n den Wert 0 oder 1 hat; und
Salze, Solvate und Hydrate davon.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung werden pharmazeutische Zusammensetzungen bereitgestellt, die eine erfindungsgemäße Verbindung und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfassen.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird ein Verfahren zur Behandlung einer Krankheit oder eines Zustands, die durch eine Serin-protease bei einem Säuger vermittelt werden, bereitgestellt, wobei das Verfahren die Verabreichung einer wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung an den Säuger umfasst.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Erfindungsgemäß werden neue Verbindungen der Formel (I) bereitgestellt
wobei X, R₁, R₂, R₃, R₄ und R₅ die in Anspruch 1 definierten Bedeutungen haben.
Der Ausdruck "Aminosäure" bezieht sich auf in der Natur vorkommende und nicht in der Natur vorkommende α-(alpha), β-(beta), D- und L-Aminosäurereste. Bevorzugte Aminosäurereste sind hydrophob, wie Alanin, β-Alanin, Phenylalanin, Valin, Leucin und Isoleucin.
Der Ausdruck "Kohlenwasserstoffkette" bezieht sich auf gesättigte, ungesättigte, lineare oder verzweigte Kohlenstoffketten, d. h. Alkyl, Alkenyl und Alkinyl. Bevorzugte Kohlenwasserstoffketten enthalten 1–12 Kohlenstoffatome, vorzugsweise 1–6 und insbesondere 1–4 Kohlenstoffatome, d. h. Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl und Allyl.
Der Ausdruck "Carbocyclus" bezieht sich auf einen mono-, bi- oder tricyclischen Kohlenstoffring oder Ringsystem mit 4–16 Bestandteilen, wobei der Ring oder das Ringsystem gesättigt, ungesättigt oder teilweise ungesättigt sind, einschließlich aromatische Ringsysteme. Bevorzugte carbocyclische Ringe umfassen Cyclopentyl, Cyclohexyl, Phenyl und Naphthyl.
Der Ausdruck "Heterocyclus" bezieht sich auf ein mono-, bi- oder tricyclisches Ringsystem mit 5–16 Bestandteilen, wobei mindestens ein Ringatom ein Heteroatom (d. h. N, O und S sowie SO oder SO₂) ist. Das Ringsystem ist gesättigt, ungesättigt oder partiell ungesättigt und kann aromatisch sein. Zu bevorzugten Heterocyclen gehören Piperidin, Piperazin, Pyridin, Pyrazin, Pyrimidin, Pyridazin, Morpholin, Pyran, Pyrol, Furan, Thiophen (Thienyl), Imidazol, Pyrazol, Thiazol, Isothiazol, Dithiazol, Oxazol, Isoxazol, Dioxazol, Thiadiazol, Oxadiazol, Tetrazol, Triazol, Thiatiazol, Oxatriazol, Thiadiazol, Oxadiazol, Purin und benzokondensierte Derivate davon.
X bedeutet O, CR₆R_6', NR₆ oder S, wobei R₆ und R_6' unabhängig voneinander H oder Alkyl bedeuten. In einer speziellen Ausführungsform hat X die Bedeutung O. In einer weiteren speziellen Ausführungsform hat X die Bedeutung CR₆R₆', wobei R₆ und R₆' beide H bedeuten.
R₁ bedeutet H, -OR₇, eine Aminosäure oder -NR₇R₇', wobei R₇ und R₇' jeweils unabhängig voneinander H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus, einen Heterocyclus, eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette oder eine heterocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette bedeuten, die gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Hydroxyl, Halogen (d. h. F, Cl, Br, I), Cyano, Amino (d. h. NH₂ oder ein sekundäres oder tertiäres Amin), Nitro, Amidin (-C(NH)-NH₂), Guanidin (-NH-C(NH)-NH₂), Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy, Aryl oder Carboxyl substituiert sind. Unter "Carboxyl" sind hier die freie Säure-COOH sowie die Ester davon, wie Alkylester, zu verstehen. Der Ausdruck "Alkoxy" ist so zu verstehen, dass er eine gesättigte Gruppe, d. h. O-Alkyl, oder eine ungesättigte Gruppe, d. h. O-Alkenyl und O-Alkinyl, umfasst. Der Ausdruck "Aryl" ist so zu verstehen, dass er einen aromatischen Kohlenstoffring oder Ringsystem umfasst, z. B. Benzol/Phenyl, Naphthyl, Phenanthrenyl und dergl., sowie Biphenyl. In einer speziellen Ausführungsform hat R₁ die Bedeutung -OR₇, wobei R₇ eine Kohlenwasserstoffkette, wie Alkenyl, z. B. Allyl, bedeutet. In einer weiteren Ausführungsform hat R₁ die Bedeutung -NR₇R₇', wobei R₇ Aryl oder Aralkyl bedeutet, die gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Amidin, Guanidin, Cyano, Alkyl, Alkoxy, halogensubstituiertes Alkyl substituiert sind, und R_7' H oder Alkyl bedeutet. In einer bevorzugten Ausführungsform hat R₁ die Bedeutung -NR₇R_7', wobei R₇ Phenyl oder Benzyl, die durch Amidin oder Alkoxy substituiert sind, bedeutet und R_7' H oder Methyl bedeutet. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform bedeutet R₇ Benzyl, p-Amidinylphenyl, p-Methoxybenzyl oder p-Methylbenzyl und R_7' bedeutet H.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform bedeutet R₁ -NR₇R_7', wobei R₇ und R_7' zusammen einen Heterocyclus bilden, der gegebenenfalls mit einem weiteren Heterocyclus oder Carbocyclus kondensiert ist, wobei der Heterocyclus und Carbocyclus gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert sind. In einer speziellen Ausführungsform bilden R₇ und R_7' zusammen einen Piperidinring, der mit einem Benzolring kondensiert ist, wobei der kondensierte Benzolring gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Alkoxy substituiert ist. Vorzugsweise ist der kondensierte Benzolring an beiden β-Kohlenstoffpositionen durch Methoxy substituiert.
R₂ bedeutet H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus oder eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette, gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Hydroxyl, Oxo (=O), Halogen (vorzugsweise F oder Cl), Cyano, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy (vorzugsweise Methoxy) oder Carboxyl substituiert; wobei die Kohlenwasserstoffkette gegebenenfalls durch N, O, S, SO oder SO₂ unterbrochen ist. Der Ausdruck "unterbrochen" bedeutet hier, dass ein oder mehr Kohlenstoffatome innerhalb einer Kohlenwasserstoffkette durch dieses Heteroatom ersetzt sind. Wenn eine Kohlenwasserstoffkette durch zwei oder mehr Heteroatome unterbrochen ist, sind die Heteroatome vorzugsweise nicht benachbart. Im Zusammenhang mit R₂ ist das Heteroatom dem Ringstickstoffatom benachbart, an dem die Kohlenstoffkette hängt. In einer bevorzugten Ausführungsform hat R₂ die Bedeutung H, Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Cycloalkylalkyl oder Aralkyl, gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Alkyl, Amino, Amidin, Guanidin oder Nitro substituiert. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform hat R₂ die Bedeutung H, Alkyl, Aryl, Aralkyl oder Cycloalkyl und insbesondere Propyl, Phenylethyl, Cyclohexyl, o-Nitrobenzyl oder m-Methylbenzyl.
R₃ bedeutet H oder eine Schutzgruppe, die aus Boc, Fmoc, Teoc, Bpoc, Alloc und Cbz ausgewählt ist. Vorzugsweise hat R₃ die Bedeutung H.
Wenn "n" den Wert Null (0) hat, ist R₄ nicht vorhanden und X an den Benzamidinring in dieser Position gebunden. Wenn n die ganze Zahl 1 bedeutet, ist R₄ vorhanden und aus der Gruppe ausgewählt, die aus H, Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin und Acylamino ausgewählt ist. Unter dem Ausdruck "Acylamino" ist hier eine Carboxamidgruppe, -NHC(O)-Kohlenwasserstoff, zu verstehen, wobei der Kohlenwasserstoff der vorstehenden Definition entspricht und es sich vorzugsweise dabei um Alkyl handelt. Vorzugsweise hat R₄ die Bedeutung H oder Amino und insbesondere H.
R₅ bedeutet H oder R₄ und R₅ bilden zusammen einen 5- oder 6-gliedrigen carbocyclischen oder heterocyclischen Ring, der gegebenenfalls ein- oder mehrfach durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin oder Acylamino substituiert ist. In einer speziellen Ausführungsform hat R₅ die Bedeutung H. In einer weiteren speziellen Ausführungsform bilden R₄ und R₅ einen Benzolring, der mit dem Benzamidinring, an dem R₄ und R₅ hängen, kondensiert ist.
Nachstehend sind bevorzugte Verbindungen der Erfindung aufgeführt:

sowie Salze, Solvate und Hydrate davon.
Es ist ersichtlich, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen chirale Zentren aufweisen können und daher in Form von geometrischen Isomeren und Stereoisomeren vorliegen können. Alle derartigen Isomeren kommen in Betracht und fallen unter den Umfang der Erfindung, unabhängig davon, ob sie in reiner isomerer Form oder in Form von Gemischen von derartigen Isomeren sowie in Form von Razematen vorliegen. Stereoisomere Verbindungen lassen sich nach eingeführten Techniken auftrennen, z. B. durch Chromatographie, d. h. chirale HPLC, oder durch Kristallisationsverfahren.
Zu "pharmazeutisch verträglichen" Salzen gehören sowohl Säure- als auch Basenadditionssalze. Der Ausdruck "pharmazeutisch verträgliches Säureadditionssalz" bezieht sich auf Salze, bei denen die biologische Wirksamkeit und die Eigenschaften der freien Basen erhalten bleiben und die nicht vom biologischen Standpunkt aus oder anderweitig unerwünscht sind. Derartige Salze können mit anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Kohlensäure, Phosphorsäure und dergl., sowie mit organischen Säuren gebildet sein, die aus aliphatischen, cycloaliphatischen, aromatischen, arylaliphatischen, heterocyclischen Carbonsäuren und Sulfonsäuren ausgewählt werden können, wie Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Gluconsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxasäure, Äpfelsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Citronensäure, Asparaginsäure, Ascorbinsäure, Glutaminsäure, Anthranilsäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Mandelsäure, Embonsäure, Phenylessigsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Salicylsäure und dergl.
Zu pharmazeutisch verträglichen Basenadditionssalzen gehören Salze, die sich von anorganischen Basen ableiten, wie Natrium-, Kalium-, Lithium-, Ammonium-, Calcium-, Magnesium, Eisen-, Zink-, Kupfer-, Mangan-, Aluminumsalze und dergl. Besonders bevorzugt sind die Ammonium-, Kalium-, Natrium-, Calcium- und Magnesiumsalze. Salze, die von pharmazeutisch verträglichen organischen, nicht-toxischen Basen abgeleitet sind, umfassen Salze von primären, sekundären und tertiären Aminen, substituierten Aminen, unter Einschluss von natürlich vorkommenden substituierten Aminen, cyclischen Aminen und basischen Ionenaustauscherharzen, z. B. Isopropylamin, Trimethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Tripropylamin, Ethanolamin, 2-Diethylaminoethanol, Trimethamin, Dicyclohexylamin, Lysin, Arginin, Histidin, Coffein, Procain, Hydrabamin, Cholin, Betain, Ethylendiamin, Glucosamin, Methylglucamin, Theobromin, Purine, Piperazin, Piperidin, N-Ethylpiperidin, Polyaminharze und dergl. Besonders bevorzugte organische, nicht toxische Basen sind Isopropylamin, Diethylamin, Ethanolamin, Trimethamin, Dicyclohexylamin, Cholin und Coffein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich nach eingeführten Verfahren der organischen Synthese aus Ausgangsmaterialien und Reagenzien, die handelsüblich sind, oder aus Ausgangsmaterialien, die sich aus handelsüblichen Ausgangsmaterialien herstellen lassen, synthetisieren. Zahlreiche übliche chemische Techniken und Verfahren sind in folgenden Literaturstellen beschrieben: J. March, "Advanced Organic Chemistry", McGraw-Hill, New York, 1977; und J. Collman, "Principles and Applications of Organotransition Metal Chemistry", University Science, Mill Valley, 1987; sowie R. Larock, "Comprehensive Organic Transformations" Verlag, New York, 1989. Es ist ersichtlich, dass in Abhängigkeit von den speziellen Substituenten, die an den Verbindungen vorhanden sind, geeignete Maßnahmen zur Einführung und Entfernung von Schutzgruppen zusätzlich zu den hier beschriebenen Stufen erforderlich sind. Zahlreiche Schutzgruppen werden von Greene und Wuts, "Protective Groups in Organic Chemistry", 2. Auflg., John Wiley and Sons, 1991, beschrieben, wo auch ausführliche Maßnahmen zur Einführung und Entfernung von Schutzgruppen beschrieben sind. Beispielsweise gehören zu geeigneten Aminoschutzgruppen tert.-Butyloxycarbonyl (Boc), Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), 2-Trimethylsilylethyoxycarbonyl (Teoc), 1-Methyl-1-(4-biphenylyl)-ethoxycarbonyl (Bpoc), Allyloxycarbonyl (Alloc) und Benzyloxycarbonyl (Cbz). Carboxylgruppen können in Form von Fluorenylmethylgruppen oder Alkylestern, z. B. Methyl- oder Ethyl, oder Alkenylestern, wie Allyl, geschützt werden. Hydroxylgruppen können mit Trityl-, Monomethoxytrityl-, Dimethoxytrityl- und Trimethoxytritylgruppen geschützt werden.
In einer speziellen Ausführungsform, bei der X die Bedeutung O hat, lassen sich erfindungsgemäße Verbindungen gemäß Schema 1 herstellen.
Schema 1
Gemäß Schema 1 wird handelsübliches N-geschütztes Hydroxyprolin (d. h. Boc- oder Teoc-geschützt) (i) durch Umsetzung mit Triphenylphosphin (PPh₃) und DEAD in den Allylester (iii) umgewandelt und anschließend mit Allylalkohol in Gegenwart von Ti (IV)-isopropoxid umgesetzt. Der Allylester (iii) wird anschließend in einer Mitsunobu-Reaktion mit N-geschütztem meta- oder para-Hydroxybenzamidin (d. h. Boc-geschützt) in Gegenwart von PPh₃ und DEAD unter Bildung des Zwischenprodukts (v) gekuppelt. Die Allylgruppe wird mit Pd-tetrakis (PPh₃) in einer Lösung von N-Methylmorpholin (5 %) und Essigsäure (2,5 %) in Chloroform entfernt, wodurch man die freie Carbonsäure (vi) erhält, die mit dem Amin HNR₇R_7', einer Aminosäure oder einem Alkohol HO-R₇ unter Bildung der Verbindung (vii) umgesetzt wird. Für die Kupplung mit dem Amin HNR₇R_7' und der Aminosäure wird die Carbonsäure (vi) zunächst beispielsweise mit HBTU und HOBt gemäß üblichen Verfahren zur Amidbildung aktiviert. In einer speziellen Ausführungsform, bei der es sich bei R₁ in den erfindungsgemäßen Verbindungen um -NR₆-Phenyl (gegebenenfalls substituiert) handelt, wird die Carbonsäure mit NCS und Triphenylphosphin aktiviert, wonach sich die Zugabe von Anilinen anschließt. Die N-Schutzgruppe am Prolinrest wird anschließend von (vii) entfernt und die erhaltene Verbindung (viii) wird gegebenenfalls unter Bildung der Verbindung (ix) alkyliert, acyliert oder sulfonyliert. Wenn es sich bei der Schutzgruppe um Teoc (Trimethylsilylethoxycarbonyl) handelt, wird die Schutzgruppenentfernung durch Behandlung mit tbaf (etwa 0,24 M) in Tetrahydrofuran (thf) erreicht. Die Alkylierung des Zwischenprodukts (viii) wird durch eine übliche reduktive Aminierung unter Verwendung verschiedener Aldehyde, eines Katalysators und eines geeigneten Reduktionsmittels erreicht oder sie kann durch Verdrängungsreaktionen vom SN₂-Typ erreicht werden, indem man eine Behandlung mit einem Alkylhalogenid und einer üblichen nicht-nukleophilen Base vornimmt. Die Acylierung des Zwischenprodukts (viii) wird durch übliche chemische Verfahren zur Bildung von Amidbindungen erreicht, indem man die angestrebte R₂-Carbonsäure aktiviert und mit dem freien Amin von (viii) umsetzt. Alternativ kann das Amin von (viii) durch Behandlung mit verschiedenen Säurechloriden von R₂ und einer üblichen nicht-nukleophilen Base, wie Hunig-Base, acyliert werden. Eine Sulfonylierung wird erreicht, indem man das freie Amin des Zwischenprodukts (viii) mit verschiedenen Sulfonylchloriden von R₂ und einer nicht-nukleophilen Base, wie Hunig-Base, umsetzt.
Die Amidin-Schutzgruppe von (ix) wird anschließend entfernt, wodurch man das erfindungsgemäße Endprodukt der Formel (I) erhält, wobei X die Bedeutung O hat.
In einer weiteren speziellen Ausführungsform, bei der X die Bedeutung NH hat, lassen sich erfindungsgemäße Verbindungen nach dem Schema 2 herstellen.
Schema 2
Gemäß Schema 2 wird das Ausgangsreagenz Cyanoanilin (i) mit Trifluoressigsäure (TFA), die mit HBTU und HOBt aktiviert ist, umgesetzt, wodurch man das Zwischenprodukt (ii) erhält, das mit dem Allylester des N-geschützten Hydroxyprolins (iii) gekuppelt wird, wodurch man das Zwischenprodukt (iv) erhält. Die Allylgruppe wird anschließend in die freie Carbonsäure umgewandelt und sodann mit dem Amin HNR₇R_7', einer Aminosäure oder dem Alkohol HO-R₇ umgesetzt. Die N-Schutzgruppe am Prolin wird entfernt, wonach gegebenenfalls eine Alkylierung, Acylierung oder Sulfonylierung gemäß den Angaben zu Schema 1 erfolgt. Die Trifluoroacetylgruppe wird durch Umsetzung von (viii) mit Lithiumhydroxid in thf/H₂O unter Bildung von (ix) entfernt. Das Nitril-Zwischenprodukt (ix) wird in ein Hydroxyamidin (x) umgewandelt, indem man eine Behandlung mit Hydroxylamin-hydrochlorid und TEA vornimmt. Anschließend erfolgt die Reduktion zum Amidin (xi) durch Behandlung mit Wasserstoff und einem Metall-Hydrierungskatalysator, wie Raney-Nickel oder Palladium.
Bei einer weiteren speziellen Ausführungsform, bei der X die Bedeutung CH₂ hat, lassen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen gemäß dem Schema 3 herstellen.
Schema 3
Gemäß Schema 3 wird das als Ausgangsverbindung verwendete Cyanobenzylbromid (i) in ein Phosphoniumsalz (ii) umgewandelt, indem man eine Umsetzung mit PPh₃ in Pyridin vornimmt, wonach eine Wittig-Olefinbildungsreaktion mit dem Ketoprolin-Zwischenprodukt (iii) unter Bildung des Zwischenprodukts (iv) folgt. Das Zwischenprodukt (iii) wird aus einem N-geschützten Prolinester, z. B. aus mit N-Teoc geschütztem Prolinmethylester hergestellt, der einer Swern-Oxidation in Gegenwart von Oxalylchlorid und Triethylamin (TEA) unterliegt. Das Olefin-Zwischenprodukt (iv) wird mit Pd-Katalysator und H₂ unter Bildung von (v) reduziert. Die Estergruppe wird in die freie Carbonsäure umgewandelt und sodann mit einem Amin HNR₇R_7', einer Aminosäure oder einem Alkohol HO-R₇ umgesetzt und die N-Schutzgruppe am Prolin wird entfernt, wonach gegebenenfalls eine Alkylierung, Acylierung oder Sulfonylierung gemäß den Angaben zu Schema 1 folgt. Das Nitril-Zwischenprodukt (ix) wird in ein Hydroxylamin (x) umgewandelt, indem man es mit Hydroxylamin-hydrochlorid und TEA umsetzt und anschließend zum Amidin (xi) reduziert, indem man eine Behandlung mit Wasserstoff und einem Metall-Hydrierungskatalysator, wie Raney-Nickel oder Palladium, vornimmt.
Gemäß einem Aspekt der Erfindung wird ein Verfahren zur Hemmung der Bindung einer Serin-protease (z. B. Faktor VIIa, TF/Faktor Xa-Komplex, Thrombin, Trypsin, Plasmin und Kallikrein) an einen Proteinliganden bereitgestellt, wobei das Verfahren das Kontaktieren der Serin-protease mit einer Verbindung der Formel (I) umfasst. Das Verfahren kann in vitro in Form eines Tests auf Lösungsbasis oder Zellbasis durchgeführt werden, wobei die erfindungsgemäße Verbindung der Serin-Protease in Gegenwart eines mutmaßlichen oder bekannten Liganden der Protease zugeführt wird. Die erfindungsgemäße Verbindung kann markiert sein, z. B. mit einem Radioisotop oder einem Fluorophor, wie FITC, um den Nachweis der Ligandenbindung oder der Verringerung dieser Bindung an die Protease zu erleichtern. Somit eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen für Diagnose- und Screening-Tests.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich therapeutisch und/oder prophylaktisch zur Behandlung von Krankheiten oder Zuständen, die durch Serinprotease-Aktivität vermittelt werden. Demgemäß besteht ein Aspekt der Erfindung in der Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Krankheit oder eines Zustands, die durch Serin-proteasen bei einem Säuger, z. B. einem Menschen, vermittelt werden. Die Behandlung umfasst die Verabreichung einer wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung an den Säuger. Unter "wirksamer Menge" ist eine Menge der Verbindung zu verstehen, die bei Verabreichung befähigt ist, die Aktivität der Serin-protease zu verringern; oder die Menge der Verbindung, die erforderlich ist, um bei Verabreichung die Blutkoagulation oder Thrombusbildung zu verhindern, zu hemmen oder zu verringern; oder die Menge, die dazu befähigt ist, die Schwere der Symptome zu mildern oder zu verringern, die mit der Krankheit oder dem Zustand, die durch Serin-proteasen vermittelt werden, im Zusammenhang stehen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als ein Additiv zu Blutproben oder Blutvorräten verwendet werden, um eine Koagulation zu verhindern. Demgemäß betrifft die Erfindung auch die Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung der Koagulation des Bluts eines Säugers (d. h. von menschlichem Blut). Dies umfasst die Zufuhr einer erfindungsgemäßen Verbindung zum Blut.
Die tatsächliche Verabreichungsmenge der Verbindung und der Verabreichungsweg hängen von der speziellen Krankheit oder Zustand sowie von anderen Faktoren, wie Größe, Alter, Geschlecht und ethnische Herkunft der behandelten Person, ab und werden durch routinemäßige Analyse bestimmt. Im allgemeinen liegen intravenöse Dosen im Bereich von etwa 0,01 bis 1 000 mg/kg Körpergewicht des Patienten pro Tag und vorzugsweise im Bereich von 0,1 bis 20 mg/kg und 0,3 bis 15 mg/kg. Die Verabreichung kann einmal oder mehrmals täglich über mehrere Tage, Wochen oder Jahre hinweg erfolgen oder sie kann einige Male pro Woche für mehrere Wochen oder Jahre erfolgen. Die Menge der Verbindung, die auf anderen Wegen verabreicht wird, ist so beschaffen, dass sich eine ähnliche Menge der Verbindung im Plasma wie bei den beschriebenen intravenösen Mengen ergibt, wobei die biologische Verfügbarkeit im Plasma der verabreichten speziellen Verbindung berücksichtigt wird.
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren kann die Verbindung oral (einschließlich bukkal, sublingual, durch Inhalation), nasal, rektal, vaginal, intravenös (einschließlich intraarteriell), intradermal, subkutan, intramuskulär und topisch verabreicht werden. Die Verbindungen werden zu Zusammensetzungen zubereitet, die sich für die Verabreichung eignen, z. B. mit geeigneten Trägerstoffen, Verdünnungsmitteln, Verdickungsmitteln, Hilfsstoffen und dergl., wie sie bei der Zubereitung routinemäßig verwendet werden. Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung werden pharmazeutische Zusammensetzungen bereitgestellt, die eine Verbindung der Formel (I) und einen pharmazeutisch verträglichen Trägerstoff, Exzipiens oder Hilfsstoff enthalten.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können auch zusätzliche Wirkstoffe enthalten, insbesondere zusätzliche Antikoagulationsmittel (z. B. Aspirin, Warfarin, Heparin) und/oder thrombolytische Mittel (z. B. Streptokinase, tPA, TNKase^R). Zu Dosierungsformen gehören Lösungen, Pulver, Tabletten, Kapseln, Gelkapseln, Suppositorien, topische Salben und Cremes sowie Aerosole zur Inhalation. Zubereitungen für die nicht-parenterale Verabreichung können sterile wässrige Lösungen umfassen, die ferner Puffer, Verdünnungsmittel und andere geeignete Additive enthalten können. Es können pharmazeutisch verträgliche organische oder anorganische Trägersubstanzen verwendet werden, die sich für eine nicht-parenterale Verabreichung eignen und die nicht in nachteiliger Weise mit den erfindungsgemäßen Verbindungen reagieren. Zu geeigneten pharmazeutisch verträglichen Trägerstoffen gehören (ohne Beschränkung hierauf) Wasser, Salzlösungen, Alkohol, Polyethylenglykole, Gelatine, Lactose, Amylose, Magnesiumstearat, Talcum, Kieselsäure, viskoses Paraffin, Hydroxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon und dergl. Die Zubereitungen können sterilisiert und gegebenenfalls mit Hilfsstoffen vermischt werden, z. B. mit Gleitmitteln, Konservierungsmitteln, Stabilisatoren, Netzmitteln, Emulgatoren, Salzen zur Beeinflussung des osmotischen Drucks, Puffern, farbgebenden Mitteln, Aromastoffen und/oder aromatischen Substanzen und dergl., die nicht in nachteiliger Weise mit den erfindungsgemäßen Verbindungen reagieren. Wässrige Suspensionen können Substanzen enthalten, die die Viskosität der Suspension erhöhen, einschließlich beispielsweise Natriumcarboxymethylcellulose, Sorbit und/oder Dextran. Gegebenenfalls kann die Suspension auch Stabilisatoren enthalten.
In einer bevorzugten Ausführungsform werden die erfindungsgemäßen Verbindungen durch orale Abgabe verabreicht. Zusammensetzungen für die orale Verabreichung umfassen Pulver oder Granalien, Suspensionen oder Lösungen in Wasser oder nicht-wässrigen Medien, Kapseln, Pulvertütchen, Pastillen, Tabletten oder SECs (weiche elastische Kapseln oder Caplets). Gegebenenfalls können Verdickungsmittel, Aromastoffe, Verdünnungsmittel, Emulgatoren, Dispergierhilfsmittel, Trägersubstanzen oder Bindemittel derartigen Zubereitungen zugesetzt werden. Derartige Zubereitungen können dazu herangezogen werden, die Abgabe der Verbindungen in den Ernährungskanal zur Einwirkung auf deren Schleimhäute zu erreichen. Demzufolge kann die Zubereitung aus einem Material bestehen, das einen Schutz der Verbindung gegen extreme pH-Werte des Magens oder eine Freisetzung im zeitlichen Verlauf bewirkt, um die Abgabe der Verbindung an eine spezielle Schleimhautstelle zu optimieren. Erst im Darm lösliche Überzüge für säurebeständige Tabletten, Kapseln und Caplets sind aus dem Stand der Technik bekannt und umfassen typischerweise Acetophthalat, Propylenglykol und Sorbitanmonooleat.
Es sind verschiedene Verfahren zur Herstellung von Zubereitungen für die Abgabe mit der Nahrung aus dem Stand der Technik bekannt; vergl. beispielsweise Remington's Pharmaceutical Sciences, 18. Auflg., Hrsg. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990. Die erfindungsgemäßen Zubereitungen können in an sich bekannter Weise zu üblichen Zubereitungen, wie Tabletten, beschichtete Tabletten, Pillen, Granalien, Aerosolen, Sirups, Emulsionen, Suspensionen und Lösungen, umgewandelt werden, wobei man sich inerter, nicht-toxischer, pharmazeutisch geeigneter Exzipientien oder Lösungsmittel bedient. Die therapeutisch wirksame Verbindung soll in jedem Fall in einer Konzentration von etwa 0,5 bis etwa 99 Gew.-% des Gesamtgemisches vorliegen, d. h. in Mengen, die ausreichen, um den angestrebten Dosierungsbereich zu erreichen. Die Zubereitungen werden beispielsweise hergestellt, indem man die Wirkstoffe mit Lösungsmitteln und/oder Exzipientien streckt, wobei man gegebenenfalls Emulgiermittel und/oder Dispergiermittel verwendet und wobei beispielsweise in dem Fall, in dem Wasser als Verdünnungsmittel verwendet wird, gegebenenfalls organische Lösungsmittel als Hilfslösungsmittel verwendet werden können.
Die Zusammensetzungen können auch mit Bindemitteln (z. B. vorgelierte Maisstärke, Polyvinylpyrrolidon oder Hydroxypropylmethylcellulose), Füllstoffen (z. B. Lactose, mikrokristalline Cellulose oder Calciumhydrogenphosphat), Gleitmitteln (z. B. Magnesiumstearat, Talcum oder Siliciumdioxid), Sprengmitteln (z. B. Stärke oder Natriumstärkeglykolat) oder Netzmitteln (z. B. Natriumlaurylsulfat) zubereitet werden. Tabletten können nach aus dem Stand der Technik bekannten Verfahren beschichtet werden. Die Präparate können auch gegebenenfalls Aromastoffe, farbgebende Mittel und/oder Süßungsmittel enthalten.
Erfindungsgemäße Zubereitungen, die sich für die orale Verabreichung eignen, können in Form von getrennten Einheiten, wie Kapseln, Pulvertütchen oder Tabletten, die jeweils vorgegebene Mengen der Wirkstoffe enthalten, als Pulver oder Granalien, als Lösungen oder Suspensionen in einer wässrigen oder einer nicht-wässrigen Flüssigkeit oder als Öl-in-Wasser-Emulsionen oder Wasser-in-Öl-Flüssigkeitsemulsionen dargereicht werden. Eine Tablette lässt sich durch Verpressen oder Formgebung, gegebenenfalls zusammen mit einem oder mehreren Hilfsstoffen, herstellen. Verpresste Tabletten können hergestellt werden, indem man in einer geeigneten Maschine die Wirkstoffe in frei fließender Form, z. B. in Form von Pulvern oder Granalien, gegebenenfalls im Gemisch mit einem Bindemittel, Gleitmittel, inertem Verdünnungsmittel, Konservierungsmittel oberflächenaktivem Mittel oder Dispergiermittel verpresst. Geformte Tabletten lassen sich herstellen, indem man in einer geeigneten Maschine ein Gemisch der pulverisierten Verbindung, die mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel befeuchtet ist, der Formgebung unterwirft. Die Tabletten können gegebenenfalls beschichtet oder eingekerbt werden oder sie können so zubereitet werden, dass sich eine langsame oder kontrollierte Freisetzung der darin enthaltenen Wirkstoffe ergibt.
Beispiel 1
Synthese von Benzamidinverbindungen
Stufe 1
10 g (84 mmol) 3-Hydroxybenzonitril und 17,2 g (252 mmol) Imidazol wurden in 300 ml dmf gelöst. Diese Lösung wurde mit 38,0 g (252 mmol) tert.-Butyldimethylsilylchlorid (tbdms-Cl) versetzt und das Reaktionsgemisch wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Entfernen des Dimethylformamids durch Einengen unter Vakuum wurde das Produkt in einer großen Menge Ethylacetat in Lösung gebracht. Die organische Phase wurde sodann 2-mal mit Wasser und 2-mal mit Kochsalzlösung gewaschen. Anschließend wurde die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Das rohe Gemisch wurde sodann durch Flash-Chromatographie unter Verwendung eines Ether-Lösungsmittelsystems gereinigt. Man erhielt 18,6 g (Ausbeute 95 %) der Verbindung (ii).
Stufe 2
12 g (51,2 mmol) der Verbindung (ii) wurden in 150 ml Ethanol gelöst. Diese Lösung wurde mit 18,0 g (255 mmol) Hydroxylamin-hydrochlorid und 45,0 ml (255 mmol) Triethylamin versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei 60 °C gerührt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch unter Vakuum eingeengt, in Ethylacetat in Lösung gebracht und mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Man erhielt 12,0 g (Ausbeute 88 %) Rohmaterial.
Stufe 3
12,0 g (42 mmol) des rohen Produkts (iii) wurden in 200 ml Ethanol gelöst. Die Lösung wurde mit 3,6 ml (60 mmol) Essigsäure und 6,0 ml Essigsäureanhydrid versetzt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch mit 2,0 g 10 Palladium-auf-Kohlenstoff versetzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch unter eine Wasserstoffatmosphäre gesetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Hierauf wurde das Reaktionsgemisch durch Celite filtriert, unter Vakuum eingeengt und 2-mal azeotrop mit Benzol destilliert. Man erhielt 11,7 g (Ausbeute 90 %) der Verbindung (iv).
Stufe 4
10,0 g (3,7 mmol) ArgoGel-Wang-Harz wurden in 80 ml Dichlormethan suspendiert. Das Harz wurde mit 4,0 g (20 mmol) Nitrophenylchlorformiat und anschließend mit 2,2 ml (20 mmol) N-Methylmorpholin versetzt. Die Harzsuspension wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Nach Filtration und 3 Waschvorgängen mit Dichlormethan erhielt man das Harz (v).
Stufe 5
Anschließend wurde das Harz (v) in 80 ml Acetonitril suspendiert und mit 3,10 g (10 mmol) der Verbindung (iv) versetzt, wonach sich die Zugabe von 5,8 ml (20 mmol) 2-tert.-Butylimino-2-diethylamino-1,3-dimethylperhydro-1,3,2-diazaphosphorin anschloss. Sodann wurde das Harz 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Suspension wurde filtriert und das Harz wurde 2-mal mit Acetonitril, 2-mal mit Methanol, 2-mal mit 20 % Essigsäure in Dichlormethan, 2-mal mit Dichlormethan und 2-mal mit Methanol gewaschen. Man erhielt das Harz (vi).
Stufe 6
Das Harz (vi) wurde 30 Minuten in 80 ml einer 0,25 M tbaf-Lösung in thf suspendiert. Anschließend wurde die Suspension filtriert und 3-mal mit Tetrahydrofuran, 2-mal mit 20 % Essigsäure in Dichlormethan, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit Dichlormethan gewaschen. Man erhielt die Verbindung (vii).
Stufe 7
10,0 g (43,2 mmol) N-Boc-trans-L-Hydroxyprolin wurden in 400 ml Tetrahydrofuran gelöst. 14,7 g (56,2 mmol) Triphenylphosphin wurden zugegeben. Sodann wurde das Reaktionsgemisch auf 0 °C gekühlt und unter Verwendung eines Tropftrichters innerhalb von 5 Minuten tropfenweise mit 8,9 ml (56,2 mmol) DEAD versetzt. Nach 30-minütigem Belassen bei 0 °C wurde das thf durch Einengen unter Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde in Ether gelöst und über Nacht bei 4 °C belassen, um das als Nebenprodukt gebildete Triphenylphosphinoxid umzukristallisieren. Das umkristallisierte Produkt wurde filtriert und die Kristalle 2-mal mit Ether gewaschen. Das Filtrat wurde bis zur Bildung eines trüben Produkts mit Hexan versetzt und über Nacht bei 4 °C belassen, um das Produkt umzukristallisieren. Die Kristalle wurden durch Filtration gewonnen und 2-mal mit kaltem Hexan gewaschen. Man erhielt 6,4 g (Ausbeute 70 %) der Verbindung (viii).
Stufe 8
6,4 g (30 mmol) der Verbindung (viii) wurden in 100 ml Allylalkohol gelöst. Das Reaktionsgemisch wurde auf 0 °C abgekühlt. 144 mg (6,0 mmol) Natriumhydrid wurden zugegeben. Sodann wurde das Reaktionsgemisch durch Entfernung des Eisbads auf Raumtemperatur erwärmt. Nach Erreichen von Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch mit 3,6 ml (60 mmol) Essigsäure versetzt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch mit 900 ml Ethylacetat verdünnt und 2-mal mit Wasser und 2-mal mit Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Sodann wurde das rohe Gemisch durch eine Siliciumdioxid-Schicht unter Verwendung von Ether/Ethylacetat (1:1) gereinigt. Man erhielt 6,5 g (24 mmol, Ausbeute 80 %) des Produkts (ix) in Form eines Öls.
Stufe 9
4,0 g (15,3 mmol) der Verbindung (ix) wurden in 80 ml eines 1:1-Gemisches aus thf und dcm gelöst. Diese Lösung wurde mit 10,0 g (3,5 mmol) des Harzes (vi) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit einem Eisbad auf 0 °C gekühlt. Sodann wurden 4,0 g (15,3 mmol) Triphenylphosphin zugegeben, wonach 2,4 ml (15,3 mmol) Diethylazidodicarboxylat zugetropft wurden. Anschließend ließ man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte es über Nacht. Anschließend wurde abfiltriert. Das Harz wurde 2-mal mit Tetrahydrofuran, 2-mal mit 20 % Essigsäure in Dichlormethan, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit Dichlormethan gewaschen. Man erhielt das Harz (x).
Stufe 10
11,0 g (3,5 mmol) des Harzes (x) wurden in 80 ml 5 % Essigsäure und 2,5 N-Methylanilin in Dichlormethan suspendiert. 3,2 g (2,8 mmol) Tetrakis-(triphenylphosphin)-palladium(0) wurden zugegeben und die Reaktionssuspension wurde 30 Minuten bewegt. Nach der Filtration wurde das Harz 2-mal mit 20 Diisopropylethylamin (dipea) in Dichlormethan, 2-mal mit dcm, 2-mal mit 20 Essigsäure in dcm, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit dcm gewaschen. Man erhielt das Harz (xi).
Stufen 11 und 12
Eine übliche parallele Aminaddition an das Harz (11) wurde folgendermaßen durchgeführt: 100 mg (0,035 mmol) des Harzes (11) wurden auf eine Quest RV-Vorrichtung, die mit einem magnetischen Rührstab ausgerüstet war, aufgesetzt. 2,0 ml einer 0,6 M Vorratslösung von HBTU und HOBt in Dimethylacetamid (dma) wurden zum Harz gegeben. Die Suspension wurde 10 Minuten bewegt. Sodann erfolgte die Zugabe von 2,0 ml einer 0,6 M Vorratslösung von dipea in dma. 5 Minuten nach der dipea-Zugabe wurden 1,2 mmol des gewählten Amins zugegeben und das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten bewegt. Sodann ließ man das Harz ablaufen und wusch es 2-mal mit dma, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit Dichlormethan.
Eine übliche parallele Anilinaddition an das Harz (xi) wurde folgendermaßen durchgeführt: 100 mg des Harzes (xii) wurden auf die Quest RV-Vorrichtung aufgesetzt. 2,0 ml einer 0,6 M Vorratslösung von Triphenylphosphin in dcm wurden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde unter Verwendung eines Quest-Kühlers auf 0 °C abgekühlt. Sodann folgte die Zugabe von 2,0 ml einer 0,6 M Vorratslösung von N-Chlorsuccinimid in Acetonitril. Das Gemisch wurde 15 Minuten bei 0 °C bewegt. Sodann ließ man das Reaktionsgemisch ablaufen und wusch es 3-mal mit Dichlormethan, wobei die Kühlung aufrechterhalten wurde. Anschließend wurden 3,0 ml einer 0,3 M Lösung des gewählten Anilins in Acetonitril zugegeben. Sodann ließ man das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen, indem man den Quest-Kühler entfernte. Sodann wurde das Reaktionsgemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur bewegt. Nach dem Ablaufen wurde das Harz 3-mal mit Methanol, 2-mal mit 20 % Essigsäure in dcm, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit dcm gewaschen.
Stufe 13
Die Abspaltung der Verbindung und die N-Boc-Spaltung der Harze vom Typ (xii) wurde durch Inkubation des Harzes in 3,0 ml unverdünnter Trifluoressigsäure durchgeführt. Das tfa wurde in Szintillationsfläschchen gegeben und 1-mal mit 3,0 ml Trifluoressigsäure gewaschen. Die Proben wurden sodann eingeengt und durch Umkehrphasen-HPLC gereinigt. Man erhielt Verbindungen der Klasse (xiii). Typische Reinigungsausbeuten betrugen 3,0 bis 5,0 mg.
Stufe 14
15,4 g (117,4 mmol) trans-L-Hydroxyprolin und 16,21 g (153 mmol) Natriumcarbonat wurden in 250 ml Wasser gelöst. 43,3 g (153 mmol) 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-p-nitrophenylcarbonat wurden in 250 ml Dioxan gelöst. Diese Lösung wurde innerhalb von 10 Minuten in die vorerwähnte wässrige Lösung getropft. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch unter Vakuum eingeengt und mit einer reichlichen Menge an Ethylacetat und 1,0 M Citronensäure verdünnt. Die organische Phase wurde gewonnen. Die wässrige Phase wurde 2-mal mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt, 2-mal mit Wasser und 2-mal mit Kochsalzlösung gewaschen. Sodann wurde die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Sodann wurde das rohe Gemisch durch Flash-Chromatographie gereinigt. Man erhielt 32,3 g des Produkts (xiv) (Ausbeute 60 %).
Stufe 15
9,0 g (32,8 mmol) der Verbindung (xiv) wurden in 340 ml Tetrahydrofuran gelöst und auf 0 °C gekühlt. Nach Zugabe von 11,2 g (42,6 mmol) Triphenylphosphin folgte die tropfenweise Zugabe von 6,7 ml (42,6 mmol) DEAD innerhalb von 5 Minuten. Sodann wurde das Reaktionsgemisch 30 Minuten bei 0 °C gerührt und anschließend unter Vakuum eingeengt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch mit Ether verdünnt und 2-mal mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung, 2-mal mit Wasser und 2-mal mit Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und durch Flash-Chromatographie unter Verwendung von Ether/Hexan (1:1) gereinigt. Man erhielt 6,7 g (Ausbeute 80 %) des Produkts (xv).
Stufe 16
6,0 g (22,6 mmol) der Verbindung (xv) wurden in 100 ml Allylalkohol gelöst. Diese Lösung wurde mit 3,0 ml (10 mmol) Titanisopropoxid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 60 °C erwärmt und über Nacht gerührt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch mit 900 ml Ethylacetat verdünnt und 2-mal mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung, 2-mal mit Wasser und 2-mal mit Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet und unter Vakuum eingeengt. Das rohe Produkt wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt. Man erhielt 6,0 g (Ausbeute 85 %) der Verbindung (xvi).
Stufe 17
4,6 g (14,6 mmol) der Verbindung (xvi) wurden in 45 ml thf/dcm (1:1) gelöst. Die Lösung wurde mit 6,0 g (2,2 mmol) des Harzes (vi) versetzt. Die Suspension wurde auf 0 °C gekühlt. Sodann wurde die Suspension bei 0 °C mit 2,4 ml (15,0 mmol) DEAD versetzt, wonach sich die Zugabe von 4,0 g (14,6 mmol) Triphenylphosphin anschloss. Man ließ das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte es über Nacht. Sodann ließ man das Harz ablaufen und wusch es 2-mal mit thf, 2-mal mit 20 % Essigsäure in dcm, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit dcm. Man erhielt das Harz (xvii).
Stufen 18 und 19
Die Entfernung der Allyl-Schutzgruppe und die anschließende Amin- und Anilin-Addition an den Carbonsäurerest wurde unter Anwendung der für die Stufen 10–12 beschriebenen Verfahren zur Herstellung des Harztyps (xix) durchgeführt.
Stufe 20
100 mg der Harze vom Typ (xix) wurden sodann in 2,0 ml thf suspendiert. Diese Suspension wurde mit 1,0 ml einer 1,0 M tbaf-Lösung in thf versetzt. Die Reaktionsgemische wurden 1 Stunde bewegt. Nach dem Abtropfenlassen wurden die Harze 3-mal mit thf, 3-mal mit 20 % Essigsäure in dcm, 3-mal mit Methanol und 3-mal mit dcm gewaschen. Man erhielt die Harze vom Typ (xx).
Stufe 21
Anschließend wurden die Harze vom Typ (xx) gemäß den folgenden Verfahren acyliert, sulfonyliert und alkyliert: 1) Acylierung: In einem getrennten, 20 ml fassenden Szintillationsfläschchen wurden 3,0 ml von 0,3 M Lösungen der gewählten Carbonsäure, HBTU, HOBt und dipea in Dimethylacetamid hergestellt und 10 Minuten auf einem Schüttler bewegt. Diese Cocktails wurden sodann direkt zu 100 mg Harzen vom Typ (B), die in Quest RV-Vorrichtungen geladen waren, gegeben. Die Reaktionsgemische wurden 30 Minuten bewegt, abgetropft und 3-mal mit dma, Methanol und Dichlormethan gewaschen. 2) Sulfonylierung: 100 mg Harz vom Typ (B) wurden auf Quest RV aufgesetzt. Die Harze wurden in 3,0 ml thf suspendiert. Die Suspensionen wurden mit 1,0 mmol des gewählten Sulfonylchlorids und 1,0 mmol dipea versetzt. Die Reaktionsgemische wurden 30 Minuten bewegt und abgetropft, 3-mal mit dma, 3-mal mit Methanol und 3-mal mit dcm gewaschen. 3) Alkylierung: 100 mg Harz vom Typ (B), das in der Quest RV-Vorrichtung geladen war, wurde mit 1,0 mmol des gewählten Aldehyds in 3,0 ml 1 % Essigsäure in dmf versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten bewegt, wonach sich die Zugabe von 1,3 mmol Natriumcyanoborhydrid als Pulver anschloss. Die Reaktionsgemische wurden weitere 2 Stunden bewegt und anschließend abgetropft. Sodann wurden die Harze 3-mal mit Methanol, 2-mal mit 20 % Essigsäure in dcm, 2-mal mit Methanol und 2-mal mit dcm gewaschen. Man erhielt die Harze der Klasse (xxi).
Stufe 22
Harze vom Typ (xxi) wurden sodann durch Behandlung mit 3,0 ml reiner tfa gespalten. Die tfa-Spaltungscocktails wurden in Szintillationsfläschchen gesammelt. Sodann wurden die Harze mit einer 3,0 ml-Portion tfa gespült. Anschließend wurden die Proben unter Vakuum eingeengt und einer Reinigung durch Umkehrphasen-HPLC unterworfen.
Beispiel 2
Gewebefaktor/Faktor VIIa-Antagonistentest
Dieses Verfahren wird zur Bestimmung der Hemmkonstante (Ki) für eine erfindungsgemäße Verbindung verwendet.
Materialien

Testpuffer: 100 mM Hepes, pH-Wert 7,8, 140 mM NaCl, 0,1 % PEG-8000, 0,02 % Tween-80, 5 mM CaCl₂
Koagulationsfaktor: rekombinanter humaner Faktor VIIa (NB # 25942-16)
Cofaktor: löslicher Gewebefaktor (1–219)
Substrat: Chromozym-tPA (Boehringer Mannheim, Kat. # 1093 037); Rekonstitution auf 20 mM in H₂O; Verdünnung auf 4 mM in Testpuffer mit CaCl₂ vor der Verwendung.
Proben: Die Proben wurden auf 3 % DMSO in Testpuffer verdünnt (ohne CaCl₂).

Verfahren

1. Eine Lösung von 2 μg/ml (90 nM) Gewebefaktor und 1,5 ug/ml (30 nM) Faktor VIIa in Testpuffer mit CaCl₂ wird hergestellt.
2. Eine 15-minütige Inkubation bei Raumtemperatur wird durchgeführt.
3. Jede Vertiefung wird mit 50 μl Probe versetzt.
4. Jede Vertiefung wird mit 50 μl Gewebefaktor/Faktor VIIa-Lösung versetzt.
5. Es wird eine 15-minütige Inkubation bei Raumtemperatur unter mäßigem Bewegen vorgenommen.
6. Jede Vertiefung wird mit 50 μl Substrat versetzt.
7. Die Platten werden 20–25 Sekunden bewegt.
8. Die Absorption bei 405 nm wird alle 10 Sekunden insgesamt 5 Minuten lang bei Raumtemperatur aufgezeichnet.
9. Der Vmax-Wert über 10 Punkte wird berechnet.

Beispiel 3
Faktor Xa-, Thrombin- und Plasmakallikrein-Tests
Diese Verfahren werden zur Bestimmung der Hemmkonstante (Ki) für eine erfindungsgemäße Verbindung herangezogen.
Materialien

Testpuffer: 100 mM Hepes, pH-Wert 7,8, 140 mM NaCl, 0,1 % PEG-8000, 0,02 % Tween-80
Koagulationsfaktor: humaner Faktor Xa, Thrombin oder Plasmakallikrein (Hematologic Technologies); Verdünnung auf 0,45 μg/ml (9,8 nM) in Testpuffer.
Substrat: S-2222, S-2366 oder S-2302 (vergl. die nachstehenden Ausführungen – Chromogenix Inc.,). Es wird in H₂O auf 5 mM rekonstituiert. Vor der Verwendung wird eine Verdünnung auf 1,5 mM in Testpuffer vorgenommen.
Proben: Die Proben werden im Testpuffer auf 3 % DMSO verdünnt.

Verfahren

1. Jede Vertiefung wird mit 50 μl Probe versetzt.
2. Jede Vertiefung wird mit 50 μl des entsprechend verdünnten Koagulationsfaktors versetzt.
3. Unter mäßigen Bewegen wird eine 5-minütige Inkubation bei Raumtemperatur durchgeführt.
4. Jede Vertiefung wird mit 50 μl des entsprechend verdünnten Substrats versetzt.
5. Die Platten werden 20–25 Sekunden bewegt.
6. Die Absorption bei 405 nm wird alle 10 Sekunden insgesamt 5 Minuten lang bei Raumtemperatur aufgezeichnet.
7. Der Vmax-Wert über 10 Punkte wird berechnet.

Tabelle 1 Enzym, Substrat und Endkonzentrationen
Tabelle 2 Bindungsaffinität an Serin-proteasen
Tabelle 2 (Forts.)
Tabelle 2 (Forts.)

Claims

Verbindung der Formel (I)
wobei X O, CR₆R_6', NR₆ oder S bedeutet, wobei R₆ und R_6' jeweils unabhängig voneinander H oder Alkyl bedeuten; R₁ H, -OR₇, eine Aminosäure oder -NR₇R_7' bedeutet, wobei R₇ und R_7' jeweils unabhängig voneinander H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus, einen Heterocyclus, eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette oder eine heterocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxyl, Halogen, Cyano, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy, Aryl oder Carboxyl, bedeutet; oder R₇ und R_7' zusammen einen Heterocyclus bedeuten, der gegebenenfalls mit einem anderen Heterocyclus oder Carbocyclus kondensiert ist, wobei der Heterocyclus und Carbocyclus gegebenenfalls durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert sind; R₂ H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus oder eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette, gegebenenfalls durch Hydroxyl, Oxo, Halogen, Cyano, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert, bedeutet; und wobei die Kohlenwasserstoffkette gegebenenfalls durch N, O, S, SO oder SO₂ unterbrochen ist; R₃ H oder eine Schutzgruppe, die aus tert.-Butyloxycarbonyl (Boc), Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl (Teoc), 1-Methyl-1-(4-biphenylyl)-ethoxycarbonyl (Bpoc), Allyloxycarbonyl (Alloc) und Benzyloxycarbonyl (Cbz) ausgewählt ist, bedeutet; R₄ aus der Gruppe, die aus H, Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin und Acylamino besteht, ausgewählt ist; R₅ H bedeutet oder R₄ und R₅ zusammen einen 5- oder 6-gliedrigen carbocyclischen oder heterocyclischen Ring, der gegebenenfalls durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin oder Acylamino substituiert ist, bedeutet; n den Wert 0 oder 1 hat; und Salze, Solvate und Hydrate davon.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X O bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X CH₂ bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₁ eine Aminosäure oder -NR₇R_7' bedeutet, wobei R₇ und R_7' jeweils unabhängig voneinander H oder eine Kohlenwasserstoffkette, einen Carbocyclus, einen Heterocyclus, eine carbocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette oder eine heterocyclisch substituierte Kohlenwasserstoffkette, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxyl, Halogen, Cyano, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy, Aryl oder Carboxyl, bedeutet; oder R₇ und R_7' zusammen einen Heterocyclus bedeuten, der gegebenenfalls mit einem weiteren Heterocyclus oder Carbocyclus kondensiert ist, wobei der Heterocyclus und Carbocyclus gegebenenfalls durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert sind.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei R₁ NR₇R_7' bedeutet und R₇ Aryl oder Aralkyl, gegebenenfalls substituiert durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Amidin, Guanidin, Cyano, Alkyl, Alkoxy, halogensubstituiertes Alkyl, bedeutet; und R_7' H oder Alkyl bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei R₁ NR₇R_7' bedeutet und R₇ Phenyl oder Benzyl, substituiert durch Amidin oder Alkoxy, bedeutet; und R_7' H oder Methyl bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei R₁ NR₇R_7' bedeutet und R₇ und R_7' zusammen einen Heterocyclus bilden, der gegebenenfalls mit einem weiteren Heterocyclus oder Carbocyclus kondensiert ist, wobei der Heterocyclus und Carbocyclus gegebenenfalls durch Hydroxyl, Halogen, Amino, Nitro, Amidin, Guanidin, Alkyl, halogensubstituiertes Alkyl, Alkoxy oder Carboxyl substituiert sind.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei R₇ Benzyl, p-Amidinylphenyl, p-Methoxybenzyl oder p-Methylbenzyl bedeutet, und R_7' H bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 8, wobei R₇ und R_7' zusammen einen Piperidinring bedeuten, der mit einem Benzolring kondensiert ist, wobei dieser kondensierte Benzolring gegebenenfalls durch Alkoxy substituiert ist.
Verbindung nach Anspruch 9, wobei der kondensierte Benzolring an beiden β-Kohlenstoffpositionen durch Methoxy substituiert ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₂ H, Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Cycloalkylalkyl oder Aralkyl, gegebenenfalls substituiert mit Alkyl, Amino, Amidin, Guanidin oder Nitro, bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 11, wobei R₂ H, Alkyl, Aryl, Aralkyl oder Cycloalkyl bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 11, wobei R₂ Propyl, Phenylethyl, Cyclohexyl, o-Nitrobenzyl oder m-Methylbenzyl bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₃ H bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei n den Wert 1 hat und R₄ H, Hydroxyl, Amino oder Alkanoylamino bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei n den Wert 1 hat und R₄ und R₅ beide H bedeuten.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₄ und R₅ zusammen einen Benzolring bilden.
Verfahren zur Hemmung der Bindung einer Serin-protease an einen Proteinliganden, umfassend das in vitro-Kontaktieren der Serin-protease mit einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1–17.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1–17 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Krankheit oder eines Zustands, die bei einem Säuger durch eine Serin-protease vermittelt werden.
Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1–17 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung der venösen oder arteriellen Thrombusbildung bei einem Säuger.