WO2016115869A1 - Flt3激酶的新型抑制剂及其用途 - Google Patents

Flt3激酶的新型抑制剂及其用途 Download PDF

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WO2016115869A1
WO2016115869A1 PCT/CN2015/086318 CN2015086318W WO2016115869A1 WO 2016115869 A1 WO2016115869 A1 WO 2016115869A1 CN 2015086318 W CN2015086318 W CN 2015086318W WO 2016115869 A1 WO2016115869 A1 WO 2016115869A1
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amino
pyrazolo
pyrimidin
phenoxyphenyl
piperidin
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PCT/CN2015/086318
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刘静
刘青松
李希祥
王傲莉
吴宏
陈程
王文超
胡晨
赵铮
吴佳昕
刘娟
余凯琳
王伟
王黎
王蓓蕾
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中国科学院合肥物质科学研究院
合肥合源药业有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the present invention relates to a novel FLT3 kinase inhibitor compound, a pharmaceutical composition comprising the same, and the use of these compounds and compositions to reduce or inhibit FLT3 kinase and/or mutant FLT3 kinase activity of a cell or a subject and Uses and methods of preventing or treating a cell proliferative disorder and/or a FLT3 associated disorder in a subject.
  • Protein kinases are enzyme components of signal transduction pathways that catalyze the transfer of terminal phosphates of ATP to the hydroxyl groups of tyrosine, serine and/or threonine residues of proteins.
  • Overexpression or inappropriate expression of normal or mutated protein kinases in mammals has been the subject of extensive research and has been shown to play an important role in the development of many diseases including diabetes, angiogenesis, psoriasis. , restenosis, eye disease, schizophrenia, rheumatoid arthritis, atherosclerosis, cardiovascular disease and cancer.
  • inhibitors of protein kinases have particular applications in the treatment of human and animal diseases.
  • FLT3 Fms-like tyrosine kinase 3
  • RTK III receptor tyrosine kinase III
  • RTK III type III receptor tyrosine kinase III
  • c-Kit c-FMS and PDGFR.
  • Its protein structure includes an extracellular region consisting of five immunoglobulin (Ig)-like domains, a transmembrane region, a proximal membrane region (JM), and two cytokines separated by a kinase insertion region.
  • Aminokinase (TK) region SDLyman et al, Oncogene, 1993, 8, 815-822).
  • FLT3 mutations were first discovered in AML cells, and the mutation type was internal tandem repeat (FLT3/ITD).
  • FLT3/ITD internal tandem repeat
  • AML patients with FLT3/ITD activating mutations usually have unique clinical features such as high peripheral blood leukocyte count, poor clinical prognosis, and recurrence, and because the detection method of FLT3 activating mutation is simple and easy, more and more researchers Committed to the development of FLT3 as a routine detection of AML to guide the treatment and prognosis of patients with AML and as a means of detection of minimal residual leukemia, and as a new target for chemotherapy drugs in leukemia patients.
  • Hematological malignancies are cancers of the body's blood formation and immune system, bone marrow and lymphoid tissues. Although in normal bone marrow, FLT3 expression is restricted to early progenitor cells, but in blood In liquid malignancies, FLT3 is expressed at high levels or FLT3 mutations cause uncontrolled FLT3 receptor and downstream molecular channel induction, possibly RAS activation.
  • Hematological malignancies include leukemia, lymphoma (non-Hodgkin's lymphoma), Hodgkin's disease (also known as Hodgkin's lymphoma), and myeloma - for example, acute lymphoblastic leukemia (ALL), acute granulocytes Leukemia or acute myeloid leukemia (AML), acute promyelocytic leukemia (APL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), chronic myeloid leukemia (CML), chronic neutrophilic leukemia (CNL), acute undifferentiated cells Leukemia (AUL), degenerative developmental large cell lymphoma (ALCL), adult T-cell ALL, AML (AML/TMDS) with mixed lineage dysplasia, mixed lineage leukemia (MLL), spinal dysplasia Syndrome (MDSs), myelodysplastic (MPD), multiple myeloma (MM) and myeloma (Kottaridis, PD,
  • FLT3 and mutant FLT3 have become a research hotspot, mainly for the development of small molecule tyrosine kinase inhibitors, which inhibits the activity by competing with the FLT3 tyrosine kinase for ATP binding sites.
  • the kinase inhibitors that have entered the clinical inhibition of FLT3 are AC220 and the like.
  • the present invention provides a novel FLT3 kinase inhibitor comprising a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolite, or prodrug thereof:
  • n is an integer selected from 1 or 2;
  • n is an integer selected from 0-4;
  • X is N or CH, and when X is N, Y is a chemical bond, and when X is CH, Y is NH;
  • Z is selected from CH 2 ,
  • R is selected from C1-C8 alkyl, unsubstituted or carbon atoms optionally substituted by 1 to 3 independent R1, C3-C8 optionally substituted or substituted with 1 to 3 independent R1.
  • C1-C8 aminoalkyl substituted by R2 unsubstituted or C1-C8 cyanoalkyl, unsubstituted or carbon atom optionally substituted by 1 to 3 independent R1, optionally 1 to 3 Independent R1 substituted C1-C8 hydroxyalkyl, unsubstituted or C1-C8 alkoxy, unsubstituted or carbon atom optionally substituted by 1 to 3 independent R1, optionally 1 to 3 Independent R1 substituted or heteroatom optionally substituted by R2, C3-C8 heterocycloalkyl, unsubstituted or aryl, unsubstituted or carbon atom optionally substituted by 1 to 3 independent R1 a heteroaryl, carbamoyl, unsubstituted or C1-C8 alkyl group optionally substituted by 1 to 3 independent R1, substituted by 1 to 3 independent R1 or heteroatoms optionally substituted by R2 Acyl, unsubstituted or Atoms optionally substituted with 1
  • R1 is selected from the group consisting of halogen, amino, nitro, cyano, hydroxy, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 alkoxy, aryl, heteroaryl optionally substituted by R2, C1-C8 alkoxycarbonyl, C1-C8 alkyl (heteroaryl) optionally substituted by R2, and C1-C8 alkyl (C3-C6 heterocycloalkyl) optionally substituted by R2 ;
  • R2 is selected from the group consisting of an amino protecting group, a C1-C8 alkyl group, and a C1-C8 alkoxycarbonyl group.
  • the amino protecting group is independently selected from the group consisting of tert-butoxycarbonyl (Boc), benzyloxycarbonyl (Cbz), 9-fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC), benzyl (Bn) and p-methoxyphenyl (PMP).
  • n is preferably 1 or 2.
  • Z is preferably
  • R is preferably selected from substituted or unsubstituted C1-C6 alkyl groups (eg, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, positive) Pentyl, isopentyl, and neopentyl, etc., C1-C4 haloalkyl (such as chloromethyl, trifluoromethyl, trichloromethyl, chloroethyl, bromoethyl, trifluoroethyl , trifluoroethyl, chloropropyl, bromopropyl, chlorobutyl, and bromobutyl, etc.), C3-C6 cycloalkyl (such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, and Cyclohexyl, etc.), amino, carbamoyl, C1-C6 alkyl groups
  • m is 1 and X is N, Y is a chemical bond, and the compound of the invention is represented by formula (II):
  • n, Z and R are as defined above.
  • n is preferably 1.
  • m is 2, and X is CH, Y is NH, and the compound of the invention is represented by formula (IV):
  • n is preferably 1.
  • the invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound provided herein, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolite or pre-
  • the drug as well as a pharmaceutically acceptable carrier or excipient, and optionally other therapeutic agents.
  • the present invention provides a compound of the formula (I), (II), (III) or (IV) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolism thereof A method of preparing a substance or a prodrug.
  • the invention relates to a compound of formula (I), (II), (III) or (IV), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolite or prodrug thereof, Body Use of reducing or inhibiting FLT3 kinase and/or mutant FLT3 kinase activity, either internally or in vitro.
  • the invention relates to a compound of formula (I), (II), (III) or (IV), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolite or prodrug thereof, Or use of a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I), (II), (III) or (IV) for the manufacture of a medicament for the treatment of a cell proliferative disorder and/or a FLT3-related disorder.
  • the diseased condition is responsive to FLT3 or mutant FLT3 kinase inhibition.
  • FLT3 mutations include ITD mutations and TKD point mutations, particularly FLT3/ITD mutations.
  • Figures 1a to 1f show the effects of Compound 22, Compound 77 and Compound 84 on relatively closely related proteins and related signaling pathways of FLT3 in MV 4-11 and MOLM-14 cells, respectively.
  • Figures 2a to 2c show the results of in vitro inhibitory activity (enzyme activity) of the compounds of the present invention against FLT3, FLT3/ITD and BTK protein kinase, respectively.
  • Figures 3a to 3b show the effect of Compound 22 and Compound 84 on apoptosis of MV41-1, MOLM-13 cell lines, respectively.
  • Figures 4a to 4b show the effect of Compound 22 and Compound 84 on the cell cycle distribution of the MV4-11 cell line.
  • Figures 5a to 5b show the tumor suppressive effects of Compound 22 and Compound 77 in a MOLM-14 cell tumor-transplanted mouse model.
  • the present invention employs conventional methods such as mass spectrometry, NMR, HPLC, protein chemistry, biochemistry, recombinant DNA techniques, and pharmacology within the skill of the art.
  • mass spectrometry NMR
  • HPLC high-density polycarbonate
  • protein chemistry biochemistry
  • biochemistry recombinant DNA techniques
  • pharmacology within the skill of the art.
  • naming and laboratory operations and techniques chemically related to analytical chemistry, synthetic organic chemistry, and medical and pharmaceutical chemistry described herein are known to those skilled in the art.
  • the foregoing techniques and procedures can be implemented by conventional methods well known in the art and described in various general and more specific documents. These documents are cited and discussed in this specification.
  • Alkyl means an aliphatic hydrocarbon group which may be a branched or straight chain alkyl group. Depending on the structure, the alkyl group may be a monovalent group or a divalent group (i.e., an alkylene group). In the present invention, the alkyl group is preferably a "lower alkyl group” having 1 to 6 carbon atoms. Typical alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl, hexyl, and the like.
  • Alkoxy means an -O-alkyl group wherein alkyl is as defined herein. Typical alkoxy groups include, but are not limited to, methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, pentyloxy, hexyloxy, and the like.
  • Alkoxyalkyl means an alkyl group, as defined herein, substituted by an alkoxy group, as defined herein.
  • cyano refers to a radical of the formula -CN.
  • amino refers to the group -NH 2.
  • alkylamino refers to an amino substituent further substituted with one or two alkyl groups, in particular a group -NRR', wherein R and R' are each independently selected from hydrogen or lower alkyl, provided that - NRR' is not -NH 2 .
  • aralkylamino refers to a group -NRR' wherein R is lower aralkyl and R' is hydrogen, lower alkyl, aryl or lower aralkyl.
  • aminoalkyl refers to an alkyl substituent further substituted with one or more amino groups.
  • hydroxyalkyl or “hydroxyalkyl” refers to an alkyl substituent further substituted with one or more hydroxy groups.
  • cyanoalkyl refers to an alkyl substituent further substituted with one or more cyano groups.
  • alkylcarbonyl refers to a carbonyl group further substituted with an alkyl group.
  • alkylcarbonylalkyl refers to an alkyl group further substituted with an alkylcarbonyl group.
  • alkoxycarbonyl refers to a carbonyl group further substituted with an alkoxy group.
  • alkyl or aryl moiety of the alkylamino, aminoalkyl, hydroxyalkyl, cyanoalkyl, alkylcarbonyl, alkylcarbonylalkyl, and alkoxycarbonyl groups may be optionally substituted by one or more Substituted.
  • Alkylaminoalkyl means an alkyl group, as defined herein, substituted by an alkylamino group, as defined herein.
  • aryl means that the planar ring has a delocalized ⁇ -electron system and contains 4n+2 ⁇ electrons, where n is an integer.
  • the aryl ring may be composed of five, six, seven, eight, nine or more than nine atoms.
  • the aryl group can be optionally substituted.
  • aryl includes carbocyclic aryl (eg phenyl) and heterocyclic aryl (or "heteroaryl” or “heteroaryl”) groups (eg pyridine).
  • the term includes monocyclic or fused-ring polycyclic (ie, rings that share adjacent pairs of carbon atoms) groups.
  • aryl as used herein means that each of the atoms constituting the ring in the aryl ring is a carbon atom.
  • the aryl ring may be composed of five, six, seven, eight, nine or more than nine atoms.
  • the aryl group can be optionally substituted. Examples of aryl groups include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, phenanthryl, anthryl, fluorenyl, and fluorenyl.
  • the aryl group may be a monovalent group or a divalent group (ie, an arylene group).
  • Alkyl(aryl) or “aralkyl” means an alkyl group, as defined herein, substituted by an aryl group, as defined herein.
  • Non-limiting alkyl (aryl) groups include benzyl, phenethyl and the like.
  • cycloalkyl refers to a monocyclic or polycyclic group containing only carbon and hydrogen.
  • the cycloalkyl group includes a group having 3 to 8 ring atoms.
  • the cycloalkyl group may be a monovalent group or a divalent group (for example, a cycloalkylene group).
  • the cycloalkyl group is preferably a cycloalkyl group having 3 to 8 carbon atoms, more preferably a "lower cycloalkyl group” having 3 to 6 carbon atoms.
  • Alkyl(cycloalkyl) or “cycloalkylalkyl” refers to an alkyl group, as defined herein, substituted by a cycloalkyl group, as defined herein.
  • Non-limiting alkyl (cycloalkyl) groups include cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl and the like.
  • heteroalkyl as used herein means that one or more of the backbone chains of the alkyl groups defined herein are heteroatoms such as oxygen, nitrogen, sulfur, silicon, phosphorus or combinations thereof.
  • the heteroatom(s) may be located anywhere within the heteroalkyl group or at a position where the heteroalkyl group is attached to the remainder of the molecule.
  • heteroaryl refers to a ring heteroatom comprising one or more selected from the group consisting of nitrogen, oxygen and sulfur in the aryl group.
  • the N-containing "heteroaryl” moiety means that at least one of the backbone atoms in the ring of the aryl group is a nitrogen atom.
  • the heteroaryl group can be a monovalent group or a divalent group (ie, a heteroarylene group).
  • heteroaryl groups include, but are not limited to, pyridyl, imidazolyl, pyrimidinyl, pyrazolyl, triazolyl, pyrazinyl, tetrazolyl, furyl, thienyl, isoxazolyl, thiazolyl, oxazole , isothiazolyl, pyrrolyl, quinolyl, isoquinolyl, indolyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, oxazolyl, pyridazinyl, pyridazinyl, pyridazinyl, isoindole Mercapto, pteridinyl, fluorenyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, furyl, benzofuranyl, benzothienyl, benzothiazolyl, benzoxazolyl, quinazolinyl, naphthalene Pyridyl and
  • heterocycloalkyl as used herein means that one or more of the atoms constituting the ring in the non-aryl ring is a hetero atom selected from the group consisting of nitrogen, oxygen and sulfur.
  • the heterocycloalkyl ring may be composed of three, four, five, six, seven, eight, nine or more than nine atoms.
  • the heterocycloalkyl ring can be optionally substituted.
  • heterocycloalkyl groups include, but are not limited to, lactams, lactones, cyclic gums, cyclic thioimines, cyclic carbamates, tetrahydrothiopyrans, 4H-pyrans, tetrahydropyrans, piperidines, 1,3-dioxin, 1,3-dioxane, 1,4-dioxin, 1,4-dioxane, piperazine, 1,3-oxathiane, 1,4- Oxetane, 1,4-oxathiane, tetrahydro-1,4-thiazine, 2H-1,2-oxazine, maleimide, succinimide, bar Bitoteric acid, thiobarbituric acid, dioxopiperazine, hydantoin, dihydrouracil, morpholine, trioxane, hexahydro-1,3,5-triazine, tetrahydrothiophene, Te
  • alkyl (heteroaryl) or “heteroarylalkyl” refers to an alkyl group, as defined herein, substituted by a heteroaryl group, as defined herein.
  • alkyl (heterocycloalkyl) or “heterocycloalkylalkyl” refers to an alkyl group, as defined herein, substituted by a heterocycloalkyl group, as defined herein.
  • halo or halogen refers to fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • haloalkyl examples include alkyl, alkoxy or heteroalkyl structures in which at least one hydrogen is replaced by a halogen atom. In certain embodiments, if two or more hydrogen atoms are replaced by a halogen atom, the halogen atoms are the same or different from each other.
  • acyl refers to a monovalent radical remaining after removal of a hydroxyl group by an organic or inorganic oxyacid having the formula R-M(O)-, wherein M is typically C.
  • substituted means that the group mentioned may be substituted by one or more additional groups, each of which is independently and independently selected from the group consisting of alkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl A hydroxy group, an alkoxy group, a cyano group, a halogen group, an amide group, a nitro group, a halogenated alkyl group, an amino group, an alkoxycarbonyl group, an alkyl group (heteroaryl group), an alkyl group (heterocycloalkyl group) and the like.
  • the term “inhibiting,” “inhibiting,” or “inhibiting,” a kinase refers to inhibition of phosphotransferase activity.
  • a “metabolite” of a compound disclosed herein is a derivative of a compound formed when the compound is metabolized.
  • active metabolite refers to a biologically active derivative of a compound formed when the compound is metabolized.
  • metabolized refers to the sum of the processes by which a particular substance is altered by an organism (including but not limited to hydrolysis reactions and reactions catalyzed by enzymes, For example, oxidation reaction). Thus, an enzyme can produce a specific structural transformation into a compound.
  • cytochrome P450 catalyzes various oxidation and reduction reactions
  • glucosinolate diphosphate catalyzes the conversion of activated glucuronic acid molecules to aromatic alcohols, aliphatic alcohols, carboxylic acids, amines, and free sulfhydryl groups.
  • Metabolites of the compounds disclosed herein can be identified by administering the compound to a host and analyzing tissue samples from the host, or by incubating the compound with hepatocytes in vitro and analyzing the resulting compound. Both methods are known in the art.
  • the metabolite of the compound is formed by an oxidation process and corresponds to the corresponding hydroxyl-containing compound.
  • the compound is metabolized to a pharmaceutically active metabolite.
  • modulate refers to interacting directly or indirectly with a target to alter the activity of the target, by way of example only, including enhancing the activity of the target, inhibiting the activity of the target, limiting the activity of the target, or prolonging the activity of the target.
  • prodrug includes compounds having moieties that can be metabolized in the body. Typically, the prodrug is metabolized in vivo to the active drug by esterase or by other mechanisms. Examples of prodrugs and their uses are well known in the art (see, for example, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19). Prodrugs can be prepared in situ during the final isolation and purification of the compound, or by separately reacting the purified compound in its free acid form or hydroxyl group with a suitable esterifying agent. The hydroxyl group can be converted to an ester by treatment with a carboxylic acid.
  • prodrug moieties include substituted and unsubstituted, branched or unbranched lower alkyl ester moieties (e.g., propionates), lower alkenyl esters, di-lower alkyl-amino lower alkyl esters (e.g.
  • acylamino lower alkyl ester eg acetoxymethyl ester
  • acyloxy lower alkyl ester eg pivaloyloxymethyl ester
  • aryl ester phenyl Ester
  • aryl lower alkyl esters eg benzyl esters
  • substituted eg substituted by methyl, halogen or methoxy substituents
  • aryl and aryl lower alkyl esters amides, lower alkyl amides , a lower alkyl amide and a hydroxy amide.
  • Preferred prodrug moieties are propionates and acyl esters.
  • Prodrugs which are converted to the active form by other mechanisms in vivo are also included.
  • the compounds of the invention are prodrugs of any of the formulae herein.
  • target protein refers to a protein molecule or a portion of a protein that can be bound by a selective binding compound.
  • the target protein is FLT3.
  • IC 50 refers to a 50% of the maximum effect is obtained in the analysis of the inhibition effect of such measurement, concentration or dosage.
  • EC 50 refers to a measured dose, concentration or amount of a compound, at a dose of 50% of maximal expression of the compound to induce, stimulate or enhance a particular reaction assays rely on specific reaction caused.
  • Novel kinase inhibitor of the present invention Novel kinase inhibitor of the present invention
  • the present invention provides a novel FLT3 kinase inhibitor comprising a compound of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolite, or prodrug thereof:
  • n is an integer selected from 1 or 2;
  • n is an integer selected from 0-4;
  • X is N or CH, and when X is N, Y is a chemical bond, and when X is CH, Y is NH;
  • Z is selected from CH 2 ,
  • R is selected from C1-C8 alkyl, unsubstituted or carbon atoms optionally substituted by 1 to 3 independent R1, C3-C8 optionally substituted or substituted with 1 to 3 independent R1.
  • C1-C8 aminoalkyl substituted by R2 unsubstituted or C1-C8 cyanoalkyl, unsubstituted or carbon atom optionally substituted by 1 to 3 independent R1, optionally 1 to 3 Independent R1 substituted C1-C8 hydroxyalkyl, unsubstituted or C1-C8 alkoxy, unsubstituted or carbon atom optionally substituted by 1 to 3 independent R1, optionally 1 to 3 Independent R1 substituted or heteroatom optionally substituted by R2, C3-C8 heterocycloalkyl, unsubstituted or aryl, unsubstituted or carbon atom optionally substituted by 1 to 3 independent R1 a heteroaryl, carbamoyl, unsubstituted or C1-C8 alkyl group optionally substituted by 1 to 3 independent R1, substituted by 1 to 3 independent R1 or heteroatoms optionally substituted by R2 Acyl, unsubstituted or A C3-C8 cycl
  • R1 is selected from the group consisting of halogen, amino, nitro, cyano, hydroxy, C1-C8 alkyl, C3-C8 cycloalkyl, C1-C8 alkoxy, aryl, heteroaryl optionally substituted by R2, C1-C8 alkoxycarbonyl, C1-C8 alkyl (heteroaryl) optionally substituted by R2, and C1-C8 alkyl (C3-C6 heterocycloalkyl) optionally substituted by R2 ;
  • R2 is selected from the group consisting of an amino protecting group, a C1-C8 alkyl group, and a C1-C8 alkoxycarbonyl group.
  • Amino The protecting group is independently selected from the group consisting of tert-butoxycarbonyl (Boc), benzyloxycarbonyl (Cbz), 9-fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC), benzyl (Bn) and p-methoxyphenyl (PMP).
  • n is preferably 1 or 2.
  • Z is preferably
  • R is preferably selected from substituted or unsubstituted C1-C6 alkyl groups (eg, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, positive) Pentyl, isopentyl, and neopentyl, etc., C1-C4 haloalkyl (such as chloromethyl, trifluoromethyl, trichloromethyl, chloroethyl, bromoethyl, trifluoroethyl , trifluoroethyl, chloropropyl, bromopropyl, chlorobutyl, and bromobutyl, etc.), C3-C6 cycloalkyl (such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, and Cyclohexyl, etc.), amino, carbamoyl, C1-C6 alkyl groups
  • m is 1 and X is N, Y is a chemical bond, and the compound of the invention is represented by formula (II):
  • n is preferably 1 or 2.
  • n is preferably 1.
  • m is 2, and X is CH, Y is NH, and the compound of the invention is represented by formula (IV):
  • n is preferably 1.
  • the present invention relates to chiral compounds which may be in any configuration or in a mixed racemate.
  • kinase inhibitors Described herein are novel kinase inhibitors.
  • Pharmaceutically acceptable salts, solvates, isomers, esters, acids, pharmaceutically active metabolites and prodrugs of this compound are also described herein.
  • the compounds described herein are administered to a subject in need thereof to be metabolized in their bodies to produce metabolites which are then used to produce the desired effect, including the desired therapeutic effect.
  • compositions described herein can be made and/or used as pharmaceutically acceptable salts.
  • pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, (1) acid addition salts formed by reacting the free base form of the compound with a pharmaceutically acceptable mineral acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, Nitric acid, phosphoric acid, metaphosphoric acid, etc.; or formed by reaction with an organic acid such as acetic acid, propionic acid, caproic acid, cyclopentanepropionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, lactic acid, malonic acid, malic acid, lemon Acid, succinic acid, maleic acid, tartaric acid, fumaric acid, trifluoroacetic acid, benzoic acid, 3-(4-hydroxybenzoyl)benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonate Acid, 1,2-ethanedisulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic
  • Acceptable organic bases include ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, trimethylamine, N-methylglucamine, and the like.
  • Acceptable inorganic bases include aluminum hydroxide, calcium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, sodium hydroxide, and the like.
  • Corresponding counterions of pharmaceutically acceptable salts can be analyzed and characterized using a variety of methods including, but not limited to, ion exchange chromatography, ion chromatography, capillary electrophoresis, inductively coupled plasma, atomic absorption spectroscopy, mass spectrometry, or any of them. combination.
  • the salt is recovered using at least one of the following techniques: filtration, precipitation with a non-solvent followed by filtration, evaporation of the solvent, or lyophilization using an aqueous solution.
  • Screening and characterization of pharmaceutically acceptable salts, polymorphs, and/or solvates can be accomplished using a variety of techniques including, but not limited to, thermal analysis, X-ray diffraction, spectroscopy, microscopy, elemental analysis.
  • Various spectral techniques used include, but are not limited to, Raman, FTIR, UVIS, and NMR (liquid and solid state).
  • Various microscopy techniques include, but are not limited to, IR microscopy and Raman microscopy.
  • the invention also relates to pharmaceutical compositions comprising a compound of formula (I), (II), (III) or (IV) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, isomer, ester, acid, metabolite or precursor thereof
  • the drug acts as the active ingredient together with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient, and optionally other therapeutic agents.
  • the agents of the invention are useful for treating or preventing a cell proliferative disorder and/or a FLT3 associated disorder, particularly a disease responsive to protein tyrosine kinase inhibition, particularly FLT3 or mutant FLT3 kinase inhibition.
  • FLT3 mutations include ITD mutations and TKD point mutations, especially ITD mutations.
  • "Treatment" of the invention can be therapeutic (eg, symptomatic treatment) and/or prophylactic.
  • the substance of the invention preferably treats or prevents a condition associated with FLT3, particularly preferably Treat or prevent conditions associated with mutant FLT3/ITD.
  • the agents of the invention are useful for treating or preventing a cell proliferative disorder selected from benign or malignant tumors including, but not limited to, the presence or development of solid tumors, B-cell lymphoma, sarcoma, lymphoma, diffuse large B cell lymphoma, follicular lymphoma, chronic lymphocytic lymphoma, chronic lymphocytic leukemia, B cell prolymphocytic leukemia, lymphoplasmacytic lymphoma / Waldenstrom macroglobulinemia Acroglobulinemia), spleen marginal zone lymphoma, plasma cell myeloma, plasmacytoma, extranodal marginal zone B-cell lymphoma, lymph node marginal zone B-cell lymphoma, mantle cell lymphoma, mediastinum (thymus) Large B-cell lymphoma, intravascular large B-cell lymphoma, primary exudative lymphoma, Burkitt lymphoma, leukemia,
  • the agents of the invention are also useful for treating or preventing FLT3-related disorders, particularly mutant FLT3/ITD related disorders including, but not limited to, hematological malignancies including leukemia, lymphoma (non-Hodgkin's lymphoma), Hodgkin Disease (also known as Hodgkin's lymphoma) and myeloma - for example, acute lymphoblastic leukemia (ALL), acute myeloid leukemia (AML), acute promyelocytic leukemia (APL), chronic lymphocytic leukemia (CLL) ), chronic myeloid leukemia (CML), chronic neutrophilic leukemia (CNL), acute undifferentiated cell leukemia (AUL), degenerative large cell lymphoma (ALCL), adult T-cell ALL, with a three-lineage ( Trilineage) AML (AML/TMDS), mixed lineage leukemia (MLL), myelodysplastic syndrome (MDSs), myelodysplastic (MP
  • compositions for enteral administration to warm-blooded animals, especially humans, such as nasal, buccal, rectal or especially orally, and compositions for parenteral administration, such as intravenous, intramuscular or subcutaneous administration, are preferred.
  • the dosage of the active ingredient will depend on the disease and variety to be treated, its age, weight and individual conditions, individual pharmacokinetic data, and mode of administration.
  • the pharmaceutical composition may optionally be used in combination with known methods of treatment, such as administration of hormones or radiation.
  • therapeutic agents include, for example, cytostatics, other anti-proliferative agents.
  • anti-proliferative agents include, but are not limited to, aromatase inhibitors, antiestrogens, topoisomerase I inhibitors, topoisomerase II inhibitors, microtubule active agents, alkylating agents, histone deacetylation Enzyme inhibitors, farnesyltransferase inhibitors, COX-2 inhibitors, MMP inhibitors, mTOR inhibitors, anti-neoplastic antimetabolites, platinum compounds, compounds that reduce protein kinase activity and further anti-angiogenic compounds , gonadotropin-releasing factor agonist, anti-androgen, bengamide, bisphosphonate, steroid, anti-proliferative antibody, 17-(allylamino)-17-demethoxygeldanamycin (17- AAG) and temozolomide (TMEMODAL).
  • aromatase inhibitors include, but are not limited to, aromatase inhibitors, antiestrogens, topoisomerase I inhibitors, topoisomerase II inhibitor
  • aromatase inhibitor as used herein relates to a compound that inhibits estrogen production, that is, the conversion of the substrates androstenedione and estradiol.
  • the term includes, but is not limited to, steroids, especially exemestane and formestane, and especially non-steroids, especially aminoglutethimide, vorozole, fadrozole, anastrozole, very especially letrozole.
  • Exemestane can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark AROMASIN (TM) .
  • Formestane can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark LENTARON (TM) .
  • Fadrozole may be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark AFEMA TM.
  • the aminoglutethimide can be administered, for example, in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ORIMETEN (TM) .
  • compositions of the invention comprising an aromatase inhibitor as an anti-neoplastic form of the agent are particularly useful for the treatment of hormone receptor positive breast tumors.
  • antiestrogens as used herein relates to compounds which antagonize the effects of estrogen at the level of estrogen receptors.
  • the term includes, but is not limited to, tamoxifen, fulvestrant, raloxifene, and raloxifene hydrochloride.
  • Tamoxifen for example, can be administered in the form as it is marketed, eg under the trademark NOLVADEX TM.
  • Raloxifene hydrochloride can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark EVISTA (TM) .
  • Fulvestrant can be formulated as described in U.S. Patent 4,695,516, or can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark FASLODEX (TM) .
  • topoisomerase I inhibitor includes, but is not limited to, topotecan, irinotecan, 9-nitrocamptothecin conjugate PNU-166148 (compound A1 in WO 99/17804).
  • Irinotecan can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark CAMPTOSAR (TM) .
  • Topotecan can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g., under the trademark HYCAMTIN (TM) .
  • topoisomerase II inhibitors includes but is not limited to anthracycline-based (antracycline) doxorubicin (including liposomal formulation, e.g. CAELYX TM), epirubicin, idarubicin and Nye Nemorubin, mitoxantrone and rosin, and podophyllotoxins etoposide and teniposide.
  • Etoposide can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ETOPOPHOS (TM) .
  • Teniposide can be, for example, drug delivery marketed, e.g. under the trademark VM 26-BRISTOL TM.
  • Doxorubicin can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ADRIBLASTIN (TM) .
  • Idarubicin may be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ZAVEDOS TM.
  • Mitoxantrone may be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark NOVANTRON TM.
  • microtubule active agent relates to microtubule stabilizing agents, including but not limited to paclitaxel and docetaxel, vinca alkaloids such as vinblastine, especially vinblastine sulfate, Discoder molide and epothilone, such as epothilone B and D.
  • Docetaxel can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark TAXOTERETM.
  • Vinblastine sulfate can be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark VINBLASTIN RP TM.
  • Vincristine sulfate can be administered, for example, in the form as it is marketed, e.g. under the trademark FARMISTION (TM) .
  • Spongolactones can be obtained, for example, as described in US Pat. No. 5,001,099.
  • alkylating agent includes, but is not limited to, cyclophosphamide, ifosfamide, and melphalan.
  • Cyclophosphamide can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark CYCLOSTIN (TM) .
  • Ifosfamide can be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark HOLOXAN TM.
  • histone deacetylase inhibitor relates to a compound that inhibits histone deacetylase and possesses anti-proliferative activity. This includes the compounds disclosed in WO 02/22577, especially N-hydroxy-3-[[(2-hydroxyethyl)[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-amino]methyl]phenyl -2E-2-acrylamide, N-hydroxy-3-[[(2-hydroxyethyl)[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-amino]methyl]benzene And 2E-2-acrylamide and a pharmaceutically acceptable salt thereof. Further especially includes suberoylanilide hydroxamic acid (SAHA).
  • SAHA suberoylanilide hydroxamic acid
  • farnesyl transferase inhibitor relates to a compound that inhibits farnesyltransferase and possesses anti-proliferative activity.
  • COX-2 inhibitor relates to compounds which inhibit the cyclooxygenase type 2 enzyme (COX-2) and possess anti-proliferative activity, such as Celebrex, Viofx and Quamila. Cox (COX189).
  • MMP inhibitor relates to a compound that inhibits matrix metalloproteinase (MMP) and possesses anti-proliferative activity.
  • mTOR inhibitors relates to inhibit the mammalian target of rapamycin (of mTOR) and have antiproliferative activity of the compounds, such as sirolimus (Rapamune), everolimus (Certican TM ), CCI-779 and ABT578.
  • anti-neoplastic antimetabolite includes, but is not limited to, 5-fluorouracil, tegafur, capecitabine, cladribine, cytarabine, fludarabine phosphate, fluorouridine, gemcitabine , 6-mercaptopurine, hydroxyurea, methotrexate, edatrexate and salts of such compounds, in addition to ZD1694 (rALTITREXED TM), LY231514 ( ALIMTA TM), LY264618 (LOMOTREXOL TM) and OGT719.
  • platinum compound as used herein includes, but is not limited to, carboplatin, cisplatin, and oxaliplatin.
  • Carboplatin can be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark CARBOPLAT TM.
  • Oxaliplatin can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ELOXATIN (TM) .
  • a compound that reduces protein kinase activity and a further anti-angiogenic compound includes, but is not limited to, compounds that reduce activity such as vascular endothelial growth factor (VEGF), epidermal growth factor (EGF), c-Src, protein.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • EGF epidermal growth factor
  • c-Src protein.
  • Kinase C platelet-derived growth factor (PDGF), Bcr-Abl, c-Kit, FLT3, insulin-like growth factor I receptor (IGF-IR), and cyclin-dependent kinase (CDK), which differ from reduced protein kinases
  • IGF-IR insulin-like growth factor I receptor
  • CDK cyclin-dependent kinase
  • Compounds which reduce VEGF activity are, in particular, compounds which inhibit the tyrosine kinase activity of VEGF receptors, in particular VEGF receptors, and compounds which bind to VEGF, in particular those compounds, proteins and monoclonal antibodies which are generally and specifically disclosed in the following literature. : WQ98/35958 (description of the compound of formula I), WO 00/09495, WO 00/27820, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819, WO 01/55114, WO 01/58899 and EP 0769947; M. Prewett et al. in Cancer Research 59 (1999) 5209-5218, Z. Zhu et al., Cancer Res.
  • Compounds which reduce EGF activity are, in particular, compounds which inhibit EGF binding, in particular those which are generally and specifically disclosed in the following documents: WO97/02266 (description of the compound of formula IV), EP0564409, WO99/03854, EP0520722, EP0566226, EP0787722, EP0837063 WO98/10767, WO97/30034, WO97/49688, WOWO97/38983 and especially WO96/33980.
  • Compounds that reduce c-Src activity include, but are not limited to, compounds that inhibit c-Src protein tyrosine kinase activity and SH2 interaction inhibitors, such as those disclosed in WO97/07131 and WO97/08193, as defined below.
  • Compounds that inhibit c-Src protein tyrosine kinase activity include, but are not limited to, compounds belonging to the following structural classes: pyrrolopyrimidins, especially pyrrolo[2,3-d]pyrimidines; purines; pyrazolopyrimidines, especially Pyrrolo[3,4-d]pyrimidine; pyrazolopyrimidines, especially pyrazolopyrrolo[3,4-d]pyrimidines and pyridopyrimidines, especially pyridopyrrolo[2,3-d]pyrimidines .
  • the term relates to those compounds disclosed in WO 96/10028, WO 97/28161, WO 97/32879 and WO 97/49706.
  • Compounds which reduce the activity of IGF-IR are especially those compounds disclosed in WO 02/92599.
  • Decreasing the protein kinase activity of the particular compound and may further be used in combination with the compounds of the present invention are Imatinib (Gleevec / Glivec), PKC412 , Iressac TM (ZD1839), AEE788 and pharmaceutically acceptable salts thereof (see WO03 / 13541), PTK787 and Its pharmaceutically acceptable salts (see also WO 98/35958), ZD6474, GW2016, CHIR-200131, CEP-7055/CEP-5214, CP-547632, KRN-633 and SU5416.
  • Anti-angiogenic compounds having mechanisms of action different from those that reduce protein kinase activity include, but are not limited to, for example, thalidomide (THALOMID), celecoxib (Celebrex), and ZD6126.
  • Goserelin-releasing factor agonist includes, but is not limited to,jurixix, serotonin, and acetate-containing relin.
  • Goserelin disclosed in US4100274 for example, may be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ZOLADEX TM.
  • Abarelix can be formulated, for example, as described in US 5,743,901.
  • antiandrogen as used herein includes, but is not limited to, bicalutamide (CASODEX (TM )) which can be formulated, for example, as described in US 4,634,505.
  • bengamide relates to bengamide and its derivatives having anti-proliferative properties.
  • bisphosphonate as used herein includes, but is not limited to, pamidronic acid, alendronic acid.
  • Estrogenic acid can be administered, for example, in the form as it is marketed, e.g. under the trademark DIDRINEL (TM) .
  • the clodronic acid can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark BONEFOS (TM) .
  • Tiluronic acid can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark SKELID (TM) .
  • Pamidronic acid can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark AREDIA (TM) .
  • Alendronic acid can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark FOSAMAX (TM) .
  • Ibandronic acid may be, for example, be administered in the form as it is marketed, e.g. under the trademark BONDRANAT TM.
  • Risedronic acid can be administered, for example, in the form as it is marketed, for example under the trademark ACTONOL (TM) .
  • Zoledronic acid can be administered, e.g., in the form as it is marketed, e.g. under the trademark ZOMETA (TM) .
  • steroid includes hydrocortisone, dexamethasone (Decadron), methylhydronenisone, and prednisolone.
  • antiproliferative antibodies includes, but is not limited to trastuzumab (Trastuzumab) (Herceptin TM), trastuzumab -DM1, erlotinib (Terceva TM), bevacizumab (Avastin TM), rituximab (of Rituxan) , PRO64553 (anti-CD40) and 2C4 antibodies.
  • the compounds of formula (I), (II), (III) or (IV) can be used in combination with standard leukemia therapies, especially for the treatment of AML.
  • a compound of formula (I), (II), (III) or (IV) may be administered in combination with, for example, a farnesyl transferase inhibitor and/or other drugs useful for the treatment of AML, such as daunorubicin , doxorubicin, Ara-C, VP-16, teniposide, mitoxantrone, idarubicin, carboplatin and PKC412.
  • the structure of the active ingredient as determined by the code, generic name or trade name may be from the current version of the standard work "Merck Index” or from a database, such as Patents International (eg IMS World Publications).
  • the amount of a given drug when treating a patient in accordance with the present invention depends on a number of factors, such as the particular dosage regimen, the type of disease or disorder and its severity, and the subject in need of treatment. Or the uniqueness of the host (eg, body weight), however, depending on the particular circumstances, including, for example, the particular drug that has been employed, the route of administration, the condition being treated, and the subject or host being treated, the dosage administered can be known in the art. The method is routinely decided. Generally, the dosage administered will typically range from 0.02 to 5000 mg/day, for example from about 1 to 1500 mg per day, for dosages used in adult treatment.
  • the desired dose may conveniently be presented as a single dose, or concurrently (or in a short period of time) or in divided doses at appropriate intervals, such as two, three, four or more divided doses per day. It will be understood by those skilled in the art that although the above dosage ranges are given, the specific effective amount can be appropriately adjusted depending on the condition of the patient and in connection with the diagnosis of the physician.
  • provided herein are methods of making the kinase inhibitor compounds described herein and methods of use thereof.
  • the compounds described herein can be synthesized using the protocols synthesized below.
  • Compounds can be synthesized by methods analogous to those described below, using the appropriate starting materials.
  • reaction product can be isolated and purified using conventional techniques including, but not limited to, filtration, distillation, crystallization, chromatography, and the like. These products can be characterized using conventional methods, including physical constants and map data.
  • a is synthesized using a, wherein a can be prepared by methods known in the art or commercially available.
  • b is synthesized as a, (S)-N-tert-butoxycarbonyl-3-piperidinol is used to obtain intermediate b in the R configuration.
  • Intermediate b (0.1 g) was treated with 4N EtOAc in EtOAc (1 mL) EtOAc.
  • Example 127 Effect on cancer cell proliferation
  • FLT3/ITD mutant gene and wild-type FLT3 gene human acute myeloid leukemia cell line MOLM-14 (expressing FLT3/ITD mutant gene and wild-type FLT3 gene), human acute myeloid leukemia cell line OCI-AML-3 (Expressing the FLT3A680V mutant gene), human acute myeloid leukemia cell line U937 (expressing the wild-type FLT3 gene), and mouse proB cell BaF3, all of which were purchased from ATCC.
  • Mouse TEL-BaF3-FLT3/ITD (activated kinase stably expressing FLT3/ITD mutation), mouse TEL-BaF3-FLT3-D835Y (activated kinase stably expressing FLT3D835Y mutation), mouse TEL-BaF3-BMX (Stable expression of BMX kinase), mouse TEL-FLT3-BaF3 (stable expression of FLT3 kinase), mouse BaF3-FLT3-ITD-D835Y (activated kinase stably expressing FLT3/ITD D835Y mutation), mouse BaF3-FLT3-ITD -F691L (activated kinase stably expressing FLT3/ITD F691L mutation), mouse TEL-cKIT-BaF3 (stable expression of cKIT kinase), mouse BaF3-tel-cKit-N882K (activated kinas
  • the above cell lines were constructed by our laboratory by PCR to amplify human FLT3/ITD, FLT3D835Y, BMX, FLT3, FLT3/ITD D835Y, FLT3/ITD F691L, cKIT, cKIT N882K, cKIT D816V, cKIT T670I, MET.
  • the above compounds of different concentrations were separately added to the above cells. And incubated for 72 hours with Cell (Promega, USA) Chemical Self-Luminescence Cell Viability Assay Kit for detecting the number of viable cells by quantitatively measuring ATP in living cells. The experimental results are shown in Table 2.
  • Example 128 Compound 22, Compound 77, and Compound 84 up and down the FLT3 in cells Impact of the signal path
  • Human acute myeloid leukemia cell line MV4-11 (expressing FLT3/ITD mutant gene) carrying human FLT3 gene and/or FLT3/ITD mutant gene and human acute myeloid leukemia cell line MOLM-14 (expressing FLT3/ITD)
  • Compound 22, Compound 77, Compound 84 and the control compound FLT3 kinase inhibitor AC220 (AC220 purchased from Hao Yuan Chemexpress) were tested in a mutant gene and a wild-type FLT3 gene cell line by measuring a number of cellular biochemical endpoints and functional endpoints.
  • control compound FLT3 kinase inhibitor AC220 was able to strongly inhibit protein kinase FLT3 and phosphorylation of protein STAT5 and protein C-Myc, which are closely related to FLT3/ITD. From the comparison of the experimental results, we can also see that the compound 77 and the compound 84 of the present invention are more effective than the control compound FLT3 kinase inhibitor AC220.
  • Example 128 demonstrates that Compound 22, Compound 77, and Compound 84 all strongly inhibit the phosphorylation of protein kinase FLT3, affecting the phosphorylation of the protein STAT5 downstream of the protein kinase FLT3 signaling pathway, thereby inhibiting the carrying of FLT3 and/or FLT3/ITD.
  • Example 129 In vitro inhibitory activity (enzyme activity) assay
  • Compound 33, Compound 30, Compound 14, Compound 20, Compound 22, Compound 23, Compound 25, Compound 26, Compound 27, Compound 5, Compound 6, Compound 7, Compound 8, Compound 9, Compound were determined in an in vitro enzyme activity assay. 10.
  • the constructed vector was transfected into the SF9 packaging virus, and the SF9 expressing protein was infected with the virus.
  • ADP was converted to ATP by the addition of 10 ⁇ L of kinase assay reagent, and the newly synthesized ATP was detected using a coupled luciferase/luciferin reaction, and the IC50 values were calculated using Envision readings (Table 3).
  • Example 130 Effect of Compound 22 and Compound 84 on Apoptosis in Cells
  • compound 22 and compounds were detected in acute myeloid leukemia cells MOLM-13 and MV4-11 cells carrying the FLT3 gene and/or FLT3/ITD mutant gene.
  • Example 130 demonstrates that Compound 22 and Compound 84 are capable of causing apoptosis in acute myeloid leukemia cells carrying the FLT3 gene and/or the FLT3/ITD mutant gene.
  • MV4-11 cell line of leukemia cells After 24 hours, the cells were collected, washed twice with 1X PBS buffer, fixed with 75% ethanol at -20 °C for 24 hours, washed twice with 1X PBS buffer, and buffered with 0.5 mL of 1X PBS.
  • the solution and 0.5 mL of PI staining solution purchased from BD Bioscience, USA) were added to the cells and the cells were stained in the dark at 37 ° C for 15 minutes, and the cell cycle distribution was measured by flow cytometry (BD FACS Calibur) (Fig. 4). .
  • Example 131 demonstrates that Compound 22 and Compound 84 are able to block acute myeloid leukemia cell MV4-11 cells carrying the FLT3/ITD mutant gene in the G0-G1 phase and have a strong influence on the cell cycle distribution (Fig. 4). .
  • Example 132 Treatment of acute myeloid leukemia using Compound 22 and Compound 77
  • a vehicle ie, methyl fiber.
  • a water-based suspension purchased from Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
  • a second group of oral administration of 12.5 mg/kg of a methylcellulose-based aqueous suspension of Compound 22 and/or Compound 77
  • the group was orally administered with 25 mg/kg of the methylcellulose-based aqueous suspension formulation of Compound 22 and/or Compound 77 per day
  • the fourth group was orally administered with 50 mg/kg of the methyl fiber of Compound 22 and/or Compound 77 per day.
  • a water-based suspension preparation; the day of the first administration was recorded as day 0, and continuous administration was observed for 2 to 3 weeks (Fig. 5).
  • Fig. 5a The experimental results are shown in Fig. 5.
  • Fig. 5b After treatment with the compound 22, the tumor growth of the mice was significantly inhibited, and the tumor volume growth of the mice was significantly slowed (Fig. 5a); after treatment with the compound 77, the mice were small. Tumor growth was strongly inhibited in the mice (Fig. 5b), and the tumor volume growth of the mice in the 25 mg/kg/day group was significantly slowed, and the tumors in the 50.0 mg/kg/day group were hardly increased.
  • the data of the tumor-transplanted mouse model in this example demonstrate that Compound 22 and Compound 77 can exert a very strong inhibitory effect on the growth of acute myeloid leukemia (AML) tumors in mice.
  • AML acute myeloid leukemia
  • the present invention provides a novel FLT3 kinase inhibitor compound which can be used to reduce or inhibit FLT3 kinase and/or mutant FLT3 kinase activity of a cell or a subject, and/or to prevent or treat cell proliferation in a subject A condition and/or a FLT3-related condition.
  • a novel FLT3 kinase inhibitor compound which can be used to reduce or inhibit FLT3 kinase and/or mutant FLT3 kinase activity of a cell or a subject, and/or to prevent or treat cell proliferation in a subject A condition and/or a FLT3-related condition.
  • it can be made into a corresponding drug suitable for industrial applications.

Abstract

本发明提供了一种新型激酶抑制剂，其包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物、或前药。本发明还提供包括式(I)化合物的药物组合物及其用于预防或治疗细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症的用途和方法，特别是响应于FLT3激酶(尤其是FLT3/ITD突变型激酶)抑制的病症。

Description

FLT3激酶的新型抑制剂及其用途 技术领域
本发明涉及一种新型FLT3激酶抑制剂化合物、包括该化合物的药物组合物、以及使用这些化合物和组合物来降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶和/或突变型FLT3激酶活性以及在受试者中预防或治疗细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症的用途和方法。
背景技术
蛋白激酶是信号转导途径的酶组分，其催化ATP的末端磷酸酯转移到蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸残基的羟基。在哺乳动物中正常或突变的蛋白激酶的超量表达或不当表达已经成为广泛研究的主题，并且已经证明在许多疾病的发展中起到重要作用，所述疾病包括糖尿病、血管生成、银屑病、再狭窄、眼病、精神***症、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心血管疾病和癌症。总之，蛋白激酶的抑制剂在治疗人类和动物疾病中有特殊的应用。
FLT3(Fms-like tyrosine kinase 3)即FMS样酪氨酸激酶3，与c-Kit、c-FMS和PDGFR同属于III型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase III,RTK III)家族成员，其蛋白结构包括5个免疫球蛋白(Ig)样结构域组成的胞外区，1个跨膜区，1个近膜区(JM)，以及胞内由激酶***区分隔而成的2个酪氨酸激酶(TK)区(S.D.Lyman等,Oncogene,1993,8,815-822)。1996年首先在AML细胞中发现了FLT3突变，其突变类型是内部串联重复(FLT3/ITD)。近年来，许多研究已经证实FLT3的激活突变在AML的发生及疾病的进展中起到十分重要的病理作用。具有FLT3/ITD激活突变的AML患者通常具有外周血白细胞计数高，临床预后较差，易复发等独特的临床特征，并且由于FLT3激活突变的检测方法简单易行，故越来越多的研究者致力于将FLT3发展成为AML的常规检测手段用来指导AML患者的治疗和预后的判断以及作为微小残留白血病的检测手段，并将其作为白血病患者化疗药物的又一新的靶点。
血液学恶性肿瘤是身体的血液形成和免疫***、骨髓和淋巴组织的癌症。尽管在正常的骨髓中，FLT3表达只限于早期祖细胞，但在血 液学恶性肿瘤中，FLT3以高水平表达或者FLT3突变引起不受控制的FLT3受体和下游分子通道诱导、可能的RAS活化。血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤——例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞白血病或急性髓性白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性嗜中性细胞白血病(CNL)、急性未分化细胞白血病(AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤(ALCL)、成人T细胞ALL、伴有三谱系(trilineage)脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、混合型谱系白血病(MLL)、脊髓发育不良综合征(MDSs)、骨髓增生异常(MPD)、多发性骨髓瘤(MM)和脊髓肉瘤(Kottaridis,P.D.,R.E.Gale等人,FLT3mutations and leukaemia,British Journal of Haematology,2003,122(4):523-38；Ansari-Lari,Ali等人,FLT3mutations in myeloid sarcoma,British Journal of Haematology,2004,126(6):785-91.)。
现已证实FLT3的激活突变主要有两种：内部串联重复(internal tandem duplication,ITD)和活化环中的点突变(point mutation in the activation loop,TKD点突变)。FLT3的这两种激活突变均能引起FLT3发生自动磷酸化进而导致FLT3发生配体非依赖性的组成性激活，进一步激活其下游异常的信号转导，从而起到促进增殖和抑制凋亡的作用，使得具有此突变表型的白血病患者临床预后较差。
目前对FLT3及突变型FLT3的靶向抑制成为研究热点，主要为开发小分子酪氨酸激酶抑制剂，通过与FLT3酪氨酸激酶竞争ATP结合位点而抑制其活性。目前已经进入临床的抑制FLT3的激酶抑制剂有AC220等。
发明内容
本发明提供了一种新型FLT3激酶抑制剂，其包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物、或前药：
Figure PCTCN2015086318-appb-000001
其中：
m为选自1或2的整数；
n为选自0-4的整数；
X为N或CH，且当X为N时，Y为化学键，当X为CH时，Y为NH；
Z选自CH2、
Figure PCTCN2015086318-appb-000002
R选自氨基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C8环烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8卤代烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8氨基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8氰基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8羟基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷氧基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C8杂环烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的芳基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的杂芳基、氨基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C8环烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂 原子任选被R2取代的C3-C8杂环烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的芳基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基氨基(C1-C8)烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基(C3-C6环烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C6环烷基(C1-C8烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(C3-C6杂环烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C6杂环烷基(C1-C8烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基(芳基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(杂芳基)、以及未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8氨基烷基(氨基甲酰基)；
R1选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂原子任选被R2取代的杂芳基、C1-C8烷氧基羰基、杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(杂芳基)、和杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(C3-C6杂环烷基)；
R2选自氨基保护基、C1-C8烷基、和C1-C8烷氧基羰基。氨基保护基独立地选自叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、9-芴甲氧羰基(FMOC)、苄基(Bn)和对甲氧苯基(PMP)。
在一些实施例中，n优选为1或2。
在一些实施例中，Z优选为
Figure PCTCN2015086318-appb-000003
在一些实施例中，R优选选自取代的或未取代的C1-C6烷基(如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、和新戊基等)、C1-C4卤代烷基(如氯代甲基、三氟甲基、三氯甲基、氯代乙基、溴代乙基、三氟乙基、三氟乙基、氯代丙基、溴代丙基、氯代丁基、和溴代丁基等)、C3-C6环烷基(如环丙基、环丁基、环戊基、和环己基等)、氨基、氨基甲酰基、C1-C6氨基烷基(如任一碳原子被氨基取代的甲基、乙基、丙基、丁基、和戊基等，且N任选被R2例如C1-4烷基和氨基保护基取代)、杂芳基(如吡啶基、嘧啶基、异噁唑基、和苯并二噁茂基等，且碳原子任选被氨基取代)、C3-C6 杂环烷基(如哌嗪基、和哌啶基等、且N原子任选被C1-C4烷基和C1-C4烷氧基羰基取代)、芳基(如苯基，且碳原子任选被C1-C4烷氧基羰基、对甲基(哌嗪基)甲基取代)、C1-C4氰基烷基(例如氰基甲基、氰基乙基、氰基丙基、和氰基丁基等)、二(C1-C4烷基)-N-(C1-C4)烷基(如二甲氨基甲基、二乙氨基甲基、二甲氨基乙基、二乙氨基乙基、二甲氨基丙基、和二甲氨基丁基等)、C1-C6羟基烷基(如任一碳原子被羟基取代的甲基、乙基、丙基、丁基、和戊基等，且碳原子任选被氨基取代)、C1-C4烷基(C3-C6杂环烷基)(如吗啉基甲基、哌嗪基甲基、和哌嗪基乙基等，且N原子任选被C1-C4烷基取代)、C1-C4烷基(C3-C6环烷基)(如环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环戊基乙基、环丙基丙基、和环丙基丁基等)、C1-C4氨基烷基(氨基甲酰基)(如任一碳原子被氨基取代的乙基(氨基甲酰基)、和丙基(氨基甲酰基)等)、C1-C4烷基(杂芳基)(如碳原子任选被氨基取代的咪唑乙基、吲哚乙基、咪唑丙基、和吲哚丙基等)、和C1-C4烷基(芳基)(如碳原子任选被氨基、羟基取代的苯甲基、苯乙基、和苯丙基等)。
在一些实施方式中，m为1，且X为N，Y为化学键，本发明的化合物由式(II)表示：
Figure PCTCN2015086318-appb-000004
其中，n、Z和R如上文所定义。
在又一实施方式中，m为2，且X为N，Y为化学键，本发明的化合物由式(III)表示：
Figure PCTCN2015086318-appb-000005
其中，n、Z和R如上文所定义。在该实施方式中，n优选为1。
在另一实施方式中，m为2，且X为CH，Y为NH，本发明的化合物由式(IV)表示：
Figure PCTCN2015086318-appb-000006
其中，n、Z和R如上文所定义。在该实施方式中，n优选为1。
在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包括治疗有效量的至少一种本文提供的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，以及药学可接受的载体或赋形剂，以及任选的其它治疗剂。
在又一方面，本发明提供一种本发明的式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药的制备方法。
在又一方面，本发明涉及式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药在体 内或体外降低或抑制FLT3激酶和/或突变型FLT3激酶活性的用途。
在又一方面，本发明涉及式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药、或包括式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的药物组合物在制备用于治疗细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症的药物中的用途。
特别地，所病病症响应于FLT3或突变型FLT3激酶抑制。FLT3突变包括ITD突变和TKD点突变，尤其是FLT3/ITD突变。
附图说明
图1a至1f分别示出化合物22、化合物77及化合物84在MV 4-11及MOLM-14细胞中对FLT3相对密切相关的蛋白及相关信号通路的影响。
图2a至2c分别示出本发明的化合物对FLT3、FLT3/ITD及BTK蛋白激酶的体外抑制活性(酶活)检测结果。
图3a至3b示出化合物22和化合物84分别对MV4-11、MOLM-13细胞株的细胞凋亡的影响。
图4a至4b示出化合物22和化合物84对MV4-11细胞株的细胞周期分布的影响。
图5a至5b示出化合物22和化合物77在MOLM-14细胞肿瘤移植小鼠模型中的肿瘤抑制效果。
具体实施方式
术语
除非另外定义，所有本文使用的科技术语都具有与要求保护的主题所属领域的技术人员一般理解相同的含义。
除非另有说明，本发明采用本领域技术范围内的质谱、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学等常规方法。除非提供具体的定义，否则与本文描述的分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学等化学上相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。一般而言，前述技术和步骤可以通过本领域众所周知的和在各种一般文献和更具体文献中描述的常规方法来实施， 这些文献在本说明书中被引用和讨论。
“烷基”是指脂肪族烃基团，可以是支链或直链的烷基。根据结构，烷基可以是单价基团或双价基团(即亚烷基)。在本发明中，烷基优选是具有1-6个碳原子的“低级烷基”。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
“烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基如本文中定义。典型的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。
“烷氧基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的烷氧基取代。
本文使用的术语“氰基”是指式-CN基团。
术语“氨基”是指基团-NH2。
术语“烷基氨基”是指进一步被一个或两个烷基取代的氨基取代基，具体是指基团-NRR’，其中R和R’各自独立地选自氢或低级烷基，条件是-NRR’不是-NH2。本文的术语“芳烷基氨基”是指其中R是低级芳烷基且R’是氢、低级烷基、芳基或低级芳烷基的基团-NRR’。术语“氨基烷基”是指进一步被一个或多个氨基取代的烷基取代基。术语“羟烷基”或“羟基烷基”是指进一步被一个或多个羟基取代的烷基取代基。术语“氰基烷基”是指进一步被一个或多个氰基取代的烷基取代基。术语“烷基羰基”是指进一步被一个烷基取代的羰基。术语“烷基羰基烷基”是指进一步被一个烷基羰基取代的烷基。术语“烷氧基羰基”是指进一步被一个烷氧基取代的羰基。烷基氨基、氨基烷基、羟基烷基、氰基烷基、烷基羰基、烷基羰基烷基、以及烷氧基羰基中的烷基或芳基部分可以任选地被一个或多个取代基取代。
“烷基氨基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的烷基氨基取代。
术语“芳香基”是指平面环具有离域的π电子***并且含有4n+2个π电子，其中n是整数。芳香基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳香基可以是任选取代的。术语“芳香基”包括碳环芳基(例如苯基)和杂环芳基(或“杂芳基”或“杂芳香基”)基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即共用相邻的碳原子对的环)基团。
本文使用的术语“芳基”是指芳香基环中每一个构成环的原子都是碳原子。芳基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。 芳基可以是任选取代的。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、蒽基、芴基和茚基。根据结构，芳基可以是单价基团或双价基团(即亚芳基)。
“烷基(芳基)”或“芳烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的芳基取代。非限制性的烷基(芳基)包括苄基、苯乙基等。
术语“环烷基”是指单环或多环基，其仅含有碳和氢。环烷基包括具有3-8个环原子的基团。根据结构，环烷基可以是单价基团或双价基团(例如亚环烷基)。在本发明中，环烷基优选是具有3-8个碳原子的环烷基，更优选具有3-6个碳原子的“低级环烷基”。
“烷基(环烷基)”或“环烷基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的环烷基取代。非限制性的烷基(环烷基)包括环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基等。
本文使用的术语“杂烷基”是指本文定义的烷基中的一个或多个骨架链原子是杂原子，例如氧、氮、硫、硅、磷或它们的组合。所述杂原子(一个或多个)可以位于杂烷基内部的任意位置或在杂烷基与分子的其余部分相连的位置。
术语“杂芳基”是指芳基中包括一个或多个选自氮、氧和硫的环杂原子。含N“杂芳基”部分是指芳香基中环上至少有一个骨架原子是氮原子。根据结构，杂芳基可以是单价基团或双价基团(即亚杂芳基)。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基等。
本文使用的术语“杂环烷基”是指非芳香基环中一个或多个构成环的原子是选自氮、氧和硫的杂原子。杂环烷基环可以由三、四、五、六、七、八、九或多于九个原子构成。杂环烷基环可以是任选取代的。杂环烷基的实例包括但不限于内酰胺、内酯、环亚胶、环硫代亚胺、环氨基甲酸酯、四氢噻喃、4H-吡喃、四氢吡喃、哌啶、1,3-二噁英、1,3-二噁烷、1,4-二噁英、1,4-二噁烷、哌嗪、1,3-氧硫杂环己烷、1,4- 氧硫杂环己二烯、1,4-氧硫杂环己烷、四氢-1,4-噻嗪、2H-1,2-噁嗪、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、巴比妥酸、硫代巴比妥酸、二氧代哌嗪、乙内酰脲、二氢尿嘧啶、吗啉、三噁烷、六氢-1,3,5-三嗪、四氢噻吩、四氢呋喃、吡咯啉、吡咯烷、咪唑烷，吡咯烷酮、吡唑啉、吡唑烷、咪唑啉、咪唑烷、1,3-二氧杂环戊烯、1,3-二氧杂环戊烷、1,3-二硫杂环戊烯、1,3-二硫杂环戊烷、异噁唑啉、异噁唑烷、噁唑啉、噁唑烷、噁唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷和1,3-氧硫杂环戊烷。根据结构，杂环烷基可以是单价基团或双价基团(即亚杂环烷基)。
术语“烷基(杂芳基)”或“杂芳基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的杂芳基取代。
术语“烷基(杂环烷基)”或“杂环烷基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的杂环烷基取代。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“卤代烷基”、“卤取代的烷氧基”和“卤取代的杂烷基”包括烷基、烷氧基或杂烷基的结构，其中至少一个氢被卤原子置换。在某些实施方式中，如果两个或更多氢原子被卤原子置换，所述卤原子彼此相同或不同。
术语“酰基”是指有机或无机含氧酸去掉羟基后剩下的一价原子团，通式为R-M(O)-，其中M通常为C。
术语“羰基”是由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O)。
术语“取代的”是指所提及的基团可以被一个或多个额外的基团取代，所述额外的基团各自并且独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、氰基、卤素、酰胺基、硝基、卤代烷基、氨基、烷氧基羰基、烷基(杂芳基)、烷基(杂环烷基)等。
本文使用的术语激酶的“抑制”、“抑制的”或“抑制剂”，是指磷酸转移酶活性被抑制。
本文公开的化合物的“代谢物”是当该化合物被代谢时形成的化合物的衍生物。术语“活性代谢物”是指当该化合物被代谢时形成的化合物的生物活性衍生物。本文使用的术语“被代谢”，是指特定物质被生物体改变的过程总和(包括但不限于水解反应和由酶催化的反应， 例如氧化反应)。因此，酶可以产生特定的结构转变为化合物。例如，细胞色素P450催化各种氧化和还原反应，同时二磷酸葡萄糖甘酸基转移酶催化活化的葡萄糖醛酸分子至芳香醇、脂肪族醇、羧酸、胺和游离的巯基的转化。新陈代谢的进一步的信息可以从《The Pharmacological Basis of Therapeutics》，第九版，McGraw-Hill(1996)获得。本文公开的化合物的代谢物可以通过将化合物给予宿主并分析来自该宿主的组织样品、或通过将化合物与肝细胞在体外孵育并且分析所得化合物来鉴别。这两种方法都是本领域已知的。在一些实施方式中，化合物的代谢物是通过氧化过程形成并与相应的含羟基化合物对应。在一些实施方式中，化合物被代谢为药物活性代谢物。本文使用的术语“调节”，是指直接或间接与靶标相互作用，以改变靶标的活性，仅仅举例来说，包括增强靶标的活性、抑制靶标的活性、限制靶标的活性或者延长靶标的活性。
术语“前药”包括具有可以在体内代谢的部分的化合物。通常，前药通过酯酶或通过其它机理在体内代谢成活性药物。前药及其用途的例子在本领域内公知(参见例如Berge等人(1977)“Pharmaceutical Salts”,J.Pharm.Sci.66:1-19)。可以在化合物最终分离和纯化期间原位制备前药，或者通过单独地使纯化的化合物以其游离酸形式或羟基与合适的酯化剂反应来制备。羟基可以经羧酸处理而转换成酯。前药部分的实例包括取代和未被取代的、支链或无支链的低级烷基酯部分(例如丙酸酯)、低级烯基酯、二-低级烷基-氨基低级烷基酯(例如二甲基氨基乙基酯)、酰基氨基低级烷基酯(例如乙酰氧基甲基酯)、酰氧基低级烷基酯(例如新戊酰氧基甲基酯)、芳基酯(苯基酯)、芳基低级烷基酯(例如苄基酯)、取代的(例如被甲基、卤素或甲氧基取代基取代的)芳基和芳基低级烷基酯、酰胺、低级烷基酰胺、二低级烷基酰胺和羟基酰胺。优选的前药部分为丙酸酯和酰基酯。也包括在体内通过其它机理转化成活性形式的前药。在一些方面，本发明的化合物是任意本文通式的前药。
术语“异构体”是指化学组成相同但是原子或基团在空间排列上不同的化合物，意在包括非对映异构体、对映异构体、区域异构体(regioisomers)、结构异构体、旋转异构体、互变异构体等。对于含有 一个或多个立体中心(stereogenic center)的化合物，例如手性化合物，可以使用对映异构富集化合物、外消旋体、或非对映异构体混合物来实施本发明的方法。
本文使用的术语“靶蛋白”是指能被选择性结合化合物所结合的蛋白质分子或部分蛋白质。在某些实施方式中，靶蛋白是FLT3。
本文使用的IC50是指在测量这样的效应的分析中获得最大效应的50％抑制的特定测试化合物的量、浓度或剂量。
本文使用的EC50是指测定化合物的剂量、浓度或量，其引起特定测定化合物诱导、刺激或加强的特定反应的50％的最大表达的剂量依赖反应。
本发明新型的激酶抑制剂
本发明提供了一种新型FLT3激酶抑制剂，其包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物、或前药：
Figure PCTCN2015086318-appb-000007
其中：
m为选自1或2的整数；
n为选自0-4的整数；
X为N或CH，且当X为N时，Y为化学键，当X为CH时，Y为NH；
Z选自CH2、
Figure PCTCN2015086318-appb-000008
R选自氨基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C8环烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8卤代烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8氨基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8氰基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8羟基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷氧基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C8杂环烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的芳基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的杂芳基、氨基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C8环烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C8杂环烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的芳基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基氨基(C1-C8)烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基(C3-C6环烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C6环烷基(C1-C8烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(C3-C6杂环烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C6杂环烷基(C1-C8烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基(芳基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(杂芳基)、以及未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8氨基烷基(氨基甲酰基)；
R1选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂原子任选被R2取代的杂芳基、C1-C8烷氧基羰基、杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(杂芳基)、和杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(C3-C6杂环烷基)；
R2选自氨基保护基、C1-C8烷基、和C1-C8烷氧基羰基。氨基保 护基独立地选自叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、9-芴甲氧羰基(FMOC)、苄基(Bn)和对甲氧苯基(PMP)。
在一些实施例中，n优选为1或2。
在一些实施例中，Z优选为
Figure PCTCN2015086318-appb-000009
在一些实施例中，R优选选自取代的或未取代的C1-C6烷基(如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、和新戊基等)、C1-C4卤代烷基(如氯代甲基、三氟甲基、三氯甲基、氯代乙基、溴代乙基、三氟乙基、三氟乙基、氯代丙基、溴代丙基、氯代丁基、和溴代丁基等)、C3-C6环烷基(如环丙基、环丁基、环戊基、和环己基等)、氨基、氨基甲酰基、C1-C6氨基烷基(如任一碳原子被氨基取代的甲基、乙基、丙基、丁基、和戊基等，且N任选被R2例如C1-4烷基和氨基保护基取代)、杂芳基(如吡啶基、嘧啶基、异噁唑基、和苯并二噁茂基等，且碳原子任选被氨基取代)、C3-C6杂环烷基(如哌嗪基、和哌啶基等、且N原子任选被C1-C4烷基和C1-C4烷氧基羰基取代)、芳基(如苯基，且碳原子任选被C1-C4烷氧基羰基、对甲基(哌嗪基)甲基取代)、C1-C4氰基烷基(例如氰基甲基、氰基乙基、氰基丙基、和氰基丁基等)、二(C1-C4烷基)-N-(C1-C4)烷基(如二甲氨基甲基、二乙氨基甲基、二甲氨基乙基、二乙氨基乙基、二甲氨基丙基、和二甲氨基丁基等)、C1-C6羟基烷基(如任一碳原子被羟基取代的甲基、乙基、丙基、丁基、和戊基等，且碳原子任选被氨基取代)、C1-C4烷基(C3-C6杂环烷基)(如吗啉基甲基、哌嗪基甲基、和哌嗪基乙基等，且N原子任选被C1-C4烷基取代)、C1-C4烷基(C3-C6环烷基)(如环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环丙基乙基、环丁基乙基、环戊基乙基、环丙基丙基、和环丙基丁基等)、C1-C4氨基烷基(氨基甲酰基)(如任一碳原子被氨基取代的乙基(氨基甲酰基)、和丙基(氨基甲酰基)等)、C1-C4烷基(杂芳基)(如碳原子任选被氨基取代的咪唑乙基、吲哚乙基、咪唑丙基、和吲哚丙基等)、和C1-C4烷基(芳基)(如碳原子任选被氨基、羟基取代的苯甲基、苯乙基、和苯丙基等)。
在一些实施方式中，m为1，且X为N，Y为化学键，本发明的化合物由式(II)表示：
Figure PCTCN2015086318-appb-000010
其中，n、Z和R如上文所定义。在该实施方式中，n优选为1或2。
在又一实施方式中，m为2，且X为N，Y为化学键，本发明的化合物由式(III)表示：
Figure PCTCN2015086318-appb-000011
其中，n、Z和R如上文所定义。在该实施方式中，n优选为1。
在另一实施方式中，m为2，且X为CH，Y为NH，本发明的化合物由式(IV)表示：
Figure PCTCN2015086318-appb-000012
其中，n、Z和R如上文所定义。在该实施方式中，n优选为1。
本发明所涉及带有手性的化合物，其构型可以是任意构型或者混合的外消旋体。
一方面，本文优选提供选下列的化合物，这些优选化合物的结构如表1所示。
对于各个变量，上述基团的任意组合也在本文考虑之中。可以理解的是：本文所提供的化合物上的取代基和取代模式可以由本领域技术人员进行选择，以便提供化学上稳定的且可以使用本领域已知的技术以及本文阐述的技术合成的化合物。
本文描述的是新型的激酶抑制剂。本文也描述了此化合物的药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、药物活性代谢物和前药。
在另外的或进一步的实施方式中，将本文描述的化合物给予有需要的生物体后在其体内代谢产生代谢物，所产生的代谢物然后用于产生期望的效果，包括期望的治疗效果。
本文描述的化合物可以被制成和/或被用作药学可接受的盐。药学可接受的盐的类型包括但不限于：(1)酸加成盐，通过将化合物的游离碱形式与药学可接受的无机酸反应形成，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；或与有机酸反应形成，所述有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸、反丁烯二酸、三氟乙酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、4-甲基双 环-[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、2-萘磺酸、叔丁基乙酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、水杨酸、羟基萘酸、硬脂酸、粘康酸等；(2)碱加成盐，其在母体化合物中的酸性质子被金属离子置换时形成，例如碱金属离子(例如锂、钠、钾)、碱土金属离子(例如镁或钙)或铝离子；或与有机碱配位。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三甲胺、N-甲基葡萄糖胺，等等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。
药学可接受的盐的相应的平衡离子可以使用各种方法分析和鉴定，所述方法包括但不限于离子交换色谱、离子色谱、毛细管电泳、电感耦合等离子体、原子吸收光谱、质谱或它们的任何组合。
使用以下技术的至少一种回收所述盐：过滤、用非溶剂沉淀接着过滤、溶剂蒸发，或水溶液的情况下使用冻干法。
筛选和表征药学可接受的盐、多晶型和/或溶剂化物可以使用多种技术完成，所述技术包括但不限于热分析、X射线衍射、光谱、显微镜方法、元素分析。使用的各种光谱技术包括但不限于Raman、FTIR、UVIS和NMR(液体和固体状态)。各种显微镜技术包括但不限于IR显微镜检术和拉曼(Raman)显微镜检术。
本发明的药物组合物及其用途
本发明也涉及药物组合物，它们包含式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药作为活性成分，以及药学可接受的载体或赋形剂，以及任选的其它治疗剂。
式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药以及包括其的药物组合物在下文中又称为“本发明的物质”。
本发明的物质可用于治疗或预防细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症，特别是响应于蛋白酪氨酸激酶抑制、尤其FLT3或突变型FLT3激酶抑制的疾病。FLT3突变包括ITD突变和TKD点突变，尤其是ITD突变。本发明的“治疗”可以是治疗性的(如对症治疗)和/或预防性的。本发明的物质优选可治疗或预防与FLT3相关的病症，特别优选治 疗或预防与突变型FLT3/ITD相关的病症。
具体而言，本发明的物质可用于治疗或预防细胞增殖性病症，选自良性或恶性肿瘤，包括但不限于：实体肿瘤的存在或发展、B细胞淋巴癌、肉瘤、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤/瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(
Figure PCTCN2015086318-appb-000013
acroglobulinemia)、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、白血病、淋巴瘤样肉芽肿病、乳腺导管癌、小叶癌、腺癌、黑色素瘤、B细胞增生性疾病、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、淋巴癌、胃癌、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、结直肠癌、***癌、胰腺癌、肺癌、***癌、膜腺癌、甲状腺癌、颈癌、CNS的癌症、恶性胶质瘤、骨髓增生病、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、头颈肿瘤、脑瘤、表皮过度增生、银屑病、***增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、淋巴瘤、乳腺癌或白血病、或类似疾病、或其组合。
本发明的物质还可用于治疗或预防FLT3相关病症，尤其是突变型FLT3/ITD相关病症，包括但不限于：血液学恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也称为霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤——例如，急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞白血病(AML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性粒细胞白血病(CML)、慢性嗜中性细胞白血病(CNL)、急性未分化细胞白血病(AUL)、退行发育性大细胞性淋巴瘤(ALCL)、成人T细胞ALL、伴有三谱系(trilineage)脊髓发育不良的AML(AML/TMDS)、混合型谱系白血病(MLL)、脊髓发育不良综合征(MDSs)、骨髓增生异常(MPD)、多发性骨髓瘤(MM)和脊髓肉瘤、慢性淋巴细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性 淋巴瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、或类似疾病、或其组合。
优选对温血动物、尤其人类肠内给药如鼻、口腔、直肠或尤其口服给药的组合物和肠胃外给药如静脉内、肌内或皮下给药的组合物。活性成分的剂量依赖于所要治疗的疾病和品种、其年龄、体重与个体条件、个体药动学数据和给药方式。
所述药物组合物可以任选地与已知治疗方法联合使用，例如激素或放射的施用。所述其它治疗剂包括，例如，细胞抑制剂、其他抗增殖剂。
这类抗增殖剂包括但不限于芳构化酶抑制剂、抗***、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、微管活性剂、烷基化剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂、法尼基转移酶抑制剂、COX-2抑制剂、MMP抑制剂、mTOR抑制剂、抗瘤形成性抗代谢物、铂化合物、降低蛋白激酶活性的化合物与进一步的抗血管生成化合物、***释放因子激动剂、抗雄激素、bengamide、双膦酸类化合物、类固醇、抗增殖性抗体、17-(烯丙胺基)-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)和替莫唑胺(TMEMODAL)。
本文所用术语“芳构化酶抑制剂”涉及抑制***产生、也就是底物雄烯二酮和雌二酮转化的化合物。该术语包括但不限于类固醇，尤其依西美坦和福美坦，以及特别是非类固醇，尤其氨鲁米特、伏罗唑、法倔唑、阿那曲唑，非常尤其是来曲唑。依西美坦例如可以以其市售形式给药，例如商标为AROMASINTM。福美坦例如可以以其市售形式给药，例如商标为LENTARONTM。法倔唑例如可以以其市售形式给药，例如商标为AFEMATM。氨鲁米特例如可以以其市售形式给药，例如商标为ORIMETENTM。
包含芳构化酶抑制剂作为抗瘤形式剂的本发明组合物特别可用于治疗激素受体阳性乳腺肿瘤。
本文所用的术语“抗***”涉及在***受体水平上拮抗***效应的化合物。该术语包括但不限于他莫昔芬、fulvestrant、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。他莫昔芬例如可以以其市售形式给药，例如商标为NOLVADEXTM。盐酸雷洛昔芬例如可以以其市售形式给药，例如商标为EVISTATM。Fulvestrant可以如US4659516所述配制，或者例如可 以以其市售形式给药，例如商标为FASLODEXTM。
本文所用的术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康、伊立替康、9-硝基喜树碱缀合物PNU-166148(WO99/17804中的化合物A1)。伊立替康例如可以以其市售形式给药，例如商标为CAMPTOSARTM。拓扑替康例如可以以其市售形式给药，例如商标为HYCAMTINTM。
本文所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环素类(antracycline)阿霉素(包括脂质体制剂，例如CAELYXTM)、表柔比星、伊达比星和奈莫比星(nemorubin)，蒽醌类米托蒽醌和洛素蒽醌，和鬼臼毒素类依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷例如可以以其市售形式给药，例如商标ETOPOPHOSTM。替尼泊苷例如可以以其市售式给药，例如商标为VM 26-BRISTOLTM。阿霉素例如可以以其市售形式给药，例如商标为ADRIBLASTINTM。伊达比星例如可以以其市售形式给药，例如商标为ZAVEDOSTM。米托蒽醌例如可以以其市售形式给药，例如商标为NOVANTRONTM。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定化剂，包括但不限于紫杉烷泰素(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel)，长春花属生物碱，例如长春碱，尤其硫酸长春碱，海绵内酯(discodermolide)和埃坡霉素(epothilone)，例如埃坡霉素B和D。多西他赛例如可以以其市售形式给药，例如商标为TAXOTERETM。硫酸长春碱可以以其市售形式给药，例如商标为VINBLASTIN R.P.TM。硫酸长春新碱例如可以以其市售形式给药，例如商标为FARMISTIONTM。海绵内酯例如可以如US5010099所述得到。
本文所用的术语“烷基化剂”包括但不限于环磷胺、异环磷酰胺和美法仑。环磷酰胺例如可以以其市售形式给药，例如商标为CYCLOSTINTM。异环磷酰胺例如可以以其市售形式给药，例如商标为HOLOXANTM。
术语“组蛋白去乙酰酶抑制剂”涉及抑制组蛋白去乙酰酶并且具备抗增殖活性的化合物。这包括WO 02/22577所公开化合物，尤其N-羟基-3-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺、N-羟基-3-[[(2-羟基乙基)[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯 基]-2E-2-丙烯酰胺和其药学上可接受的盐。进一步尤其包括辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语“法尼基转移酶抑制剂”涉及抑制法尼基转移酶并且具备抗增殖活性的化合物。
术语“COX-2抑制剂”涉及抑制环加氧酶2型酶(COX-2)并且具备抗增殖活性的化合物，例如塞来昔布(Celebrex)、洛芬昔布(Vioxx)和鲁米拉考昔(COX189)。
术语“MMP抑制剂”涉及抑制基质金属蛋白酶(MMP)并且具备抗增殖活性的化合物。
术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR)并且具备抗增殖活性的化合物，例如西罗莫司(Rapamune)、everolimus(CerticanTM)、CCI-779和ABT578。
术语“抗瘤形成性抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶、替加氟、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、磷酸氟达拉滨、氟脲苷(fluorouridine)、吉西他滨、6-巯基嘌呤、羟基脲、甲氨喋呤、依达曲沙和这类化合物的盐，此外还有ZD1694(RALTITREXEDTM)、LY231514(ALIMTATM)、LY264618(LOMOTREXOLTM)和OGT719。
本文所用的术语“铂化合物”包括但不限于卡铂、顺铂和奥沙利铂。卡铂例如可以以其市售形式给药，例如商标为CARBOPLATTM。奥沙利铂例如可以以其市售形式给药，例如商标为ELOXATINTM。
本文所用的术语“降低蛋白激酶活性的化合物与进一步的抗血管生成化合物”包括但不限于降低下列活性的化合物，例如血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、c-Src、蛋白激酶C、血小板衍生生长因子(PDGF)、Bcr-Abl、c-Kit、FLT3、***I受体(IGF-IR)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)，具有不同于降低蛋白激酶活性的作用机理的抗血管生成化合物。
降低VEGF活性的化合物尤其是抑制VEGF受体、尤其VEGF受体的酪氨酸激酶活性的化合物和与VEGF结合的化合物，特别是在下列文献中一般和具体公开的那些化合物、蛋白质和单克隆抗体：WQ98/35958(描述式I化合物)、WO00/09495、WO00/27820、WO00/59509、WO98/11223、WO00/27819、WO01/55114、WO01/58899 和EP0769947；M.Prewett等人在Cancer Research 59(1999)5209-5218中、Z.Zhu等人在Cancer Res.58,1998,3209-3214中和J.Mordenti等人在Toxicologic Pathology,vol.27,no.1,14-21,1999中所述的那些；WO00/37502和WO94/10202；AngiostatinTM，如M.S.O’Reilly等人，Cell 79,1994,315-328所述。
降低EGF活性的化合物尤其是抑制EGF结合的化合物，特别是在下列文献中一般与具体公开的那些化合物：WO97/02266(描述式IV化合物)、EP0564409、WO99/03854、EP0520722、EP0566226、EP0787722、EP0837063、WO98/10767、WO97/30034、WO97/49688、WOWO97/38983和尤其WO96/33980。
降低c-Src活性的化合物包括但不限于如下所定义的抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物和SH2相互作用抑制剂，例如公开在WO97/07131和WO97/08193中的那些。
抑制c-Src蛋白酪氨酸激酶活性的化合物包括但不限于属于下列结构种类的化合物：吡咯并嘧啶类、尤其吡咯并[2,3-d]嘧啶；嘌呤类；吡唑并嘧啶类、尤其吡咯并[3,4-d]嘧啶；吡唑并嘧啶类、尤其吡唑并吡咯并[3,4-d]嘧啶和吡啶并嘧啶类、尤其吡啶并吡咯并[2,3-d]嘧啶。优选地，该术语涉及公开在WO96/10028、WO97/28161、WO97/32879和WO97/49706中的那些化合物。
降低IGF-IR活性的化合物尤其是公开在WO02/92599中的那些化合物。
降低蛋白激酶活性并且也可以与本发明化合物联合使用的进一步具体化合物有Imatinib(Gleevec/Glivec)、PKC412、IressacTM(ZD1839)、AEE788和其药学可接受盐(另见WO03/13541)、PTK787和其药学上可接受的盐(另见WO98/35958)、ZD6474、GW2016、CHIR-200131、CEP-7055/CEP-5214、CP-547632、KRN-633和SU5416.
具有不同于降低蛋白激酶活性的作用机理的抗血管生成化合物包括但不限于例如沙利度胺(THALOMID)、塞来昔布(Celebrex)和ZD6126。
本文所用的术语“***释放因子激动剂”包括但不限于abarelix、性瑞林和乙酸性瑞林。性瑞林公开在US4100274中，例如可 以以其市售形式给药，例如商标为ZOLADEXTM。Abarelix例如可以如US5843901所述配制。
本文所用的术语“抗雄激素”包括但不限于比卡鲁胺(CASODEXTM)，它例如可以如US4636505所述配制。
术语“bengamide”涉及bengamide和其具有抗增殖性质的衍生物。
本文所用的术语“双膦酸类化合物”包括但不限于依曲膦酸(pamidronic acid)、阿仑膦酸(alendronic acid)。依曲膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为DIDRINELTM。氯膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为BONEFOSTM。替鲁膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为SKELIDTM。帕米膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为AREDIATM。阿仑膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为FOSAMAXTM。伊班膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为BONDRANATTM。利塞膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为ACTONELTM。唑来膦酸例如可以以其市售形式给药，例如商标为ZOMETATM。
术语“类固醇”包括氢化可的松、***(Decadron)、甲基氢化波尼松龙和波尼松龙。
本文所用的术语“抗增殖性抗体”包括但不限于司徒曼布(Trastuzumab)(HerceptinTM)、司徒曼布-DM1、erlotinib(TercevaTM)、bevacizumab(AvastinTM)、利妥希玛(Rituxan)、PRO64553(抗-CD40)和2C4抗体。
就急性随性白血病AML的治疗而言，式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物可以与标准白血病疗法联合使用，尤其用于治疗AML的疗法。确切而言，式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物可以与例如法尼基转移酶抑制剂和/或其他可用于治疗AML的药物联合给药，例如柔红霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂和PKC412。
由代码、通用名称或商品名称所确定的活性成分的结构可以来自标准著作“默克索引”的现行版本或者来自数据库，例如Patents International(例如IMS World Publications)。
上述可以与式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物联合使用的化合 物可以如本领域例如上面引用的文献所述制备和给药。
在本发明的实施方式中，在根据本发明对患者进行治疗时，给定药物的量取决于诸多因素，如具体的给药方案、疾病或病症类型及其严重性、需要治疗的受治疗者或宿主的独特性(例如体重)，但是，根据特定的周围情况，包括例如已采用的具体药物、给药途径、治疗的病症、以及治疗的受治疗者或宿主，施用剂量可由本领域已知的方法常规决定。通常，就成人治疗使用的剂量而言，施用剂量典型地在0.02-5000mg/天，例如约1-1500mg/天的范围。该所需剂量可以方便地被表现为一剂、或同时给药的(或在短时间内)或在适当的间隔的分剂量，例如每天二、三、四剂或更多分剂。本领域技术人员可以理解的是，尽管给出了上述剂量范围，但具体的有效量可根据患者的情况并结合医师诊断而适当调节。
化合物的制备
使用本领域技术人员已知的标准合成技术或使用本领域已知的方法与本文描述的方法组合，可以合成式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物。另外，本文给出的溶剂、温度和其它反应条件可以根据本领域技术而改变。
在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的激酶抑制剂化合物的制备方法及其使用方法。在某些实施方式中，本文描述的化合物可以使用以下合成的方案合成。可以使用与下述类似的方法，通过使用适当的可选择的起始原料，合成化合物。
用于合成本文描述的化合物的起始原料可以被合成或可以从商业来源获得。本文描述的化合物和其它相关具有不同取代基的化合物可以使用本领域技术人员已知的技术和原料合成。制备本文公开的化合物的反应可以通过由本领域技术人员所认为适当的试剂和条件修改，以引入本文提供的分子中的各种部分。
如果需要，反应产物可以使用常规技术分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等方法。这些产物可以使用常规方法表征，包括物理常数和图谱数据。
使用本文描述的合成方法，以好的收率和纯度获得本文公开的化合物。按照本文公开的方法制备的化合物通过本领域已知的常规方法 纯化，例如过滤、重结晶、色谱、蒸馏及其组合。
在式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物的芳香环部分上的位点，可以易于发生各种代谢反应，因此适当的取代基被引入至芳香环结构上，例如，仅仅举例说明，卤素能还原、减小或消除这种代谢途径。
实施例
以下具体的非限制性实施例将被解释为仅仅是说明性的，并不以任何方式限制本公开。虽然无需进一步详细描述，但是可以相信本领域技术人员能基于本文的描述，完全利用本公开。
实施例化合物参见表1。制备式(II)的化合物的合成方案的非限制性实施例参见方案I。制备式(III)的化合物的合成方案的非限制性实施例参见方案II。制备式(IV)的化合物的合成方案的非限制性实施例参见方案III。
表1实施例化合物结构
Figure PCTCN2015086318-appb-000014
Figure PCTCN2015086318-appb-000015
Figure PCTCN2015086318-appb-000016
Figure PCTCN2015086318-appb-000017
Figure PCTCN2015086318-appb-000018
Figure PCTCN2015086318-appb-000019
Figure PCTCN2015086318-appb-000020
Figure PCTCN2015086318-appb-000021
Figure PCTCN2015086318-appb-000022
Figure PCTCN2015086318-appb-000023
方案I
Figure PCTCN2015086318-appb-000024
实施例1
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(环丙基)甲酮化合物1的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000025
如方案I所示，使用a合成b，其中a可通过本领域已知的方法制备或市售可得。在a合成b时，用(S)-N-叔丁氧羰基-3-哌啶醇，得到R构型的中间体b。中间体b(0.1g)用4N HCl的二氧六环溶液(1ml)处理，室温搅拌1小时，然后浓缩至干燥产品0.08g，溶于4ml二氯甲烷中，依次加入二异丙基乙胺(0.2mL)、环丙甲酸(0.03g)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯HATU(0.15g)，于室温搅拌30分钟，后加入20ml二氯甲烷稀释，依次用水、饱和食盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空旋干。残余物经柱层析提纯，得到化合物1(0.03g)，Exact Mass(计算值):454.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:455.22。
实施例2
(R)-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙烷酮化合物2的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000026
化合物2的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):482.17；MS(ESI)m/z(M+1)+:483.1722。
实施例3
(R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((三氟甲基)磺酰基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺化合物3的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000027
化合物3的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):518.13；MS(ESI)m/z(M+1)+:519.1315。
实施例4
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-磺酰胺化合物4的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000028
化合物4的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):465.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:466.1615。
实施例5
(R)-2-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-草酰胺化合物5的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000029
化合物5的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.1915。
实施例6
(S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙-1-酮化合物6的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000030
化合物6的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):523.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:524.2413。
实施例7
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙-1-酮化合物7的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000031
化合物7的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):523.23；MS(ESI)m/z(M+1)+:524.2314。
实施例8
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮化合物8的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000032
化合物8的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):572.26；MS(ESI)m/z(M+1)+:573.2615。
实施例9
(S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮化合物9的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000033
化合物9的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):572.26；MS(ESI)m/z(M+1)+:573.2614。
实施例10
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-羟基苯基)丙-1-酮化合物10的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000034
化合物10的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):549.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:550.2514。
实施例11
(S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-羟基苯基)丙-1-酮化合物11的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000035
化合物11的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):549.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:550.2516。
实施例12
(S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-甲基戊-1-酮化合物12的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000036
化合物12的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.27；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2716。
实施例13
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-3-基)甲酮化合物13的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000037
化合物13的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):491.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:492.2121。
实施例14
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(哌嗪-1-基)甲酮化合物14的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000038
化合物14的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):498.58；MS(ESI)m/z(M+1)+:499.5821。
实施例15
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶 -1-基)(嘧啶-5-基)甲酮化合物15的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000039
化合物15的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):492.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:493.2021。
实施例16
(R)-4-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯化合物16的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000040
化合物16的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):548.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:549.2221。
实施例17
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(6-氨基吡啶-3-基)甲酮化合物17的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000041
化合物17的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):506.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:507.2221。
实施例18
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3,4-亚甲二氧基苯甲酮化合物18的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000042
化合物18的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):534.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:535.2021。
实施例19
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-哌啶甲酮化合物19的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000043
化合物19的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):497.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:498.2521。
实施例20
(R)-3-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3丙腈酮化合物20的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000044
化合物20的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):453.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:454.1922。
实施例21
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(2-氨基嘧啶-5-基)甲酮化合物21的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000045
化合物21的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):507.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:508.2134。
实施例22
(R)-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮化合物22的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000046
化合物22的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):471.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:472.2431。
实施例23
1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶 -1-基)-2-羟基丙-1-酮化合物23的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000047
化合物23的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):458.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.2124。
实施例24
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-1酮化合物24的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000048
化合物24的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.2234。
实施例25
(2R,3R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲基戊-1-酮化合物25的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000049
化合物25的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.27；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2731。
实施例26
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶 -1-基)哌啶-1-基)-3-苯基丙-1-酮化合物26的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000050
化合物26的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):533.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:534.2541。
实施例27
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-甲基戊-1-酮化合物27的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000051
化合物27的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.27；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2733。
实施例28
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-4-甲基戊-1-酮化合物28的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000052
化合物28的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):485.58；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.5833。
实施例29
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(异噁唑-5-基)甲酮化合物29的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000053
化合物29的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):481.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:482.1921。
实施例30
(R)-1-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺化合物30的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000054
化合物30的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):464.16；MS(ESI)m/z(M+1)+:465.1622。
实施例31
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-吗啉乙酮化合物31的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000055
化合物31的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2531。
实施例32
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(环戊-2-基)乙酮化合物32的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000056
化合物32的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):496.26；MS(ESI)m/z(M+1)+:496.2631。
实施例33
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮化合物33的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000057
化合物33的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):511.27；MS(ESI)m/z(M+1)+:512.2731。
实施例34
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)乙酮化合物34的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000058
化合物34的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):428.20；MS(ESI)m/z(M+1)+:429.2031。
实施例35
(R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)甲酮化合物35的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000059
化合物35的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):602.31；MS(ESI)m/z(M+1)+:602.3123。
实施例36
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-氯丙酮化合物36的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000060
化合物36的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):476.17；MS(ESI)m/z(M+1)+:477.1723。
实施例37
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-溴丙酮化合物37的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000061
化合物37的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):520.12；MS(ESI)m/z(M+1)+:522.1217。
实施例38
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氯丙酮化合物38的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000062
化合物38的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):476.17；MS(ESI)m/z(M+1)+:477.1725。
实施例39
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮化合物39的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000063
化合物39的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):526.28；MS(ESI)m/z(M+1)+:527.2826。
实施例40
(R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(丙磺基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺化合物40的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000064
化合物40的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):492.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:493.1921。
实施例41
(R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(乙磺基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺化合物41的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000065
化合物41的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):478.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:479.1821。
实施例42
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)三氯乙酮化合物42的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000066
化合物42的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):478.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:479.1821。
实施例43
(R)-2-氨基-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)乙酮化合物43的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000067
化合物43的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):443.21；MS(ESI)m/z(M+1)+:444.2118。
实施例44
(R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羟基丁酮化合物44的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000068
化合物44的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):487.23；MS(ESI)m/z(M+1)+:488.2321。
实施例45
(R)-2-氨基-1-((R)3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲基丁酮化合物45的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000069
化合物45的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):485.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.2531。
实施例46
(R)-3-氨基-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙酮化合物46的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000070
化合物46的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:457.2221。
实施例47
(R)-2-氨基-1-((R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙酮化合物47的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000071
化合物47的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.2226。
实施例48
(R)-2-氨基-1-((R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙酮化合物48的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000072
化合物48的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):473.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:474.2225。
实施例49
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3,3-二甲基丁酮化合物49的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000073
化合物49的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):473.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:474.2225。
实施例50
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2-二甲基丁酮化合物50的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000074
化合物50的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):473.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:474.2226。
实施例51
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3,3,3-三氟丙酮化合物51的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000075
化合物51的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):496.18；MS(ESI)m/z(M+1)+:497.1824。
实施例52
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-环丙基乙酮化合物52的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000076
化合物52的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):468.23；MS(ESI)m/z(M+1)+:469.2327。
实施例53
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲基丁酮化合物53的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000077
化合物53的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):470.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:471.2427。
实施例54
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丁酮化合物54的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000078
化合物54的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):456.23；MS(ESI)m/z(M+1)+:457.2327。
实施例55
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2-二甲基丙酮化合物55的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000079
化合物55的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):470.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:471.2426。
实施例56
(S)-4-氨基-5-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-5-羰基戊酰胺化合物56的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000080
化合物56的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):514.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:515.2428。
实施例57
(R)-4-氨基-5-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-5-羰基戊酰胺化合物57的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000081
化合物57的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):514.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:515.2427。
实施例58
(R)-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙酮化合物58的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000082
化合物58的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):540.31；MS(ESI)m/z(M+1)+:541.3135。
实施例59
(R)-(2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羰基)乙基氨基甲酸叔丁酯59的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000083
化合物59的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):543.26；MS(ESI)m/z(M+1)+:544.2627。
实施例60
(R)-4-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-甲酸甲酯化合物60的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000084
化合物60的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):555.26；MS(ESI)m/z(M+1)+:556.2627。
实施例61
(R)-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基-4-甲基戊-1-酮化合物61的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000085
化合物61的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):500.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:501.2527。
实施例62
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-5-氨基戊酮化合物62的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000086
化合物62的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):485.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.2526。
实施例63
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基己-1-酮化合物63的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000087
化合物63的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):500.25；MS(ESI)m/z(M+1)+:501.2528。
实施例64
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-2-氨基乙酮化合物64的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000088
化合物64的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):429.19；MS(ESI)m/z(M+1)+:430.1928。
实施例65
(R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮化合物65的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000089
化合物65的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.22；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.2225。
实施例66
(R)-(2-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-2-羰基)乙基氨基甲酸叔丁酯化合物66的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000090
化合物66的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):529.24；MS(ESI)m/z(M+1)+:530.2427。
实施例67
(R)-1-(1-(甲基磺酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺化合物67的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000091
化合物67的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):450.15；MS(ESI)m/z(M+1)+:451.1527。
实施例68
(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮化合物68的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000092
方案II
Figure PCTCN2015086318-appb-000093
如方案II所示，化合物68的合成通过使用类似于实施例1中所述的方法由a合成c，只不过将原料由(S)-N-叔丁氧羰基-3-哌啶醇替换为N-叔丁氧羰基-4-哌啶醇。将化合物c溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温搅拌2小时，后浓缩，残渣加入乙酸乙酯和水溶性的碳酸钾，有机相干燥,过滤浓缩，搅拌下加入4.0M HCl的1,4-二氧六环溶液，固体收集并用乙酸乙酯洗，后固体溶于乙酸乙酯和碳酸钾的溶液中，有机相干燥浓缩得中间体d。将化合物d(20mg,0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中，加入1-甲基哌啶-4-甲酸(7.4mg,0.05mmol)，二异丙基乙基胺(7.4mg,0.05mmol)，HATU(21.6mg,0.05mmol)，混合物室温下搅拌0.5小时，后加乙酸乙酯稀释，水洗，干燥，浓缩柱层析得12mg白色固体化合物68。Exact Mass(计算值):511.62；MS(ESI)m/z(M+1)+:512.6227。
实施例69
1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮化合物69的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000094
化合物69的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):526.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:527.6329。
实施例70
1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-吗啉乙酮化合物70的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000095
化合物70的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.59；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.5917。
实施例71
(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)甲酮化合物71的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000096
化合物71的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):602.73；MS(ESI)m/z(M+1)+:603.7325。
实施例72
1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1- 基)-2-(二甲基氨基)乙酮化合物72的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000097
化合物72的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):471.55；MS(ESI)m/z(M+1)+:472.5532。
实施例73
1-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺化合物73的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000098
化合物73的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):464.54；MS(ESI)m/z(M+1)+:465.5423。
实施例74
(R)-2-氨基-1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-甲基戊烷-1-酮化合物74的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000099
化合物74的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.6128。
实施例75
1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(甲基氨基)乙酮化合物75的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000100
化合物75的合成通过使用类似于实施例68中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):457.53；MS(ESI)m/z(M+1)+:458.5316。
实施例76
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)乙酰胺化合物76的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000101
方案III
Figure PCTCN2015086318-appb-000102
如方案II所示，化合物76的合成通过使用类似于实施例1中所述的方法由a合成e，只不过将原料由(S)-N-叔丁氧羰基-3-哌啶醇替换为N-Boc-4-氨基环己醇。将化合物e溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，室温搅拌2小时，后浓缩，残渣加入乙酸乙酯和水溶性的碳酸钾，有机相干燥,过滤浓缩，搅拌下加入4.0M HCl的1,4-二氧六环溶液，固体 收集并用乙酸乙酯洗，后固体溶于乙酸乙酯和碳酸钾的溶液中，有机相干燥浓缩得中间体f。将化合物f(20mg,0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2ml)中，加入2-(二甲基氨基)乙酸(5.1mg,0.05mmol)，二异丙基乙基胺(7.4mg,0.05mmol)，HATU(21.6mg,0.05mmol)，混合物室温下搅拌0.5小时，后加乙酸乙酯稀释，水洗，干燥，浓缩柱层析得16mg白色固体化合物76。Exact Mass(计算值):485.58；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.5816。
实施例77
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐化合物77的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000103
化合物77的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.64；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.6423。
实施例78
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)甲基磺酰胺化合物78的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000104
化合物78的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):478.57；MS(ESI)m/z(M+1)+:479.5717。
实施例79
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲基氨基)乙酰胺化合物79的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000105
化合物79的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):471.55；MS(ESI)m/z(M+1)+:472.5521。
实施例80
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-1-甲基氨基哌啶-4-甲酰胺化合物80的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000106
化合物80的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):525.64；MS(ESI)m/z(M+1)+:526.6422。
实施例81
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰胺化合物81的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000107
化合物81的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):540.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:541.6625。
实施例82
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-吗啉乙酰胺化合物82的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000108
化合物82的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.62；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.6223。
实施例83
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-氰基乙酰胺化合物83的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000109
化合物83的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):467.52；MS(ESI)m/z(M+1)+:468.5218。
实施例84
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐化合物84的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000110
化合物84的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):513.64；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.6424。
实施例85
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐化合物85的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000111
化合物85的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):513.64；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.6425。
实施例86
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基丁酰胺盐酸盐化合物86的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000112
化合物86的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2785。
实施例87
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺盐酸盐87的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000113
化合物87的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2985。
实施例88
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺化合物88的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000114
化合物88的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3065。
实施例89
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基丁酰胺盐酸盐化合物89的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000115
化合物89的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2787。
实施例90
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺盐酸盐90的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000116
化合物90的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2986。
实施例91
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺化合物91的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000117
化合物91的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3067。
实施例92
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐92的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000118
化合物92的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3063。
实施例93
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酰胺93的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000119
化合物93的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):541.69；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.3263。
实施例94
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基戊酰胺94的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000120
化合物94的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2963。
实施例95
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐95的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000121
化合物95的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3065。
实施例96
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酰胺96的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000122
化合物96的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):541.69；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.3266。
实施例97
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-丁酰胺盐酸盐化合物97的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000123
化合物97的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):485.58；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.2666。
实施例98
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)-丁酰胺盐酸盐98的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000124
化合物98的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2766。
实施例99
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)丁酰胺化合物99的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000125
化合物99的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2966。
实施例100
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-丁酰胺盐酸盐化合物100的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000126
化合物100的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):485.58；MS(ESI)m/z(M+1)+:486.2669。
实施例101
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)丁酰胺盐酸盐101的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000127
化合物101的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2769。
实施例102
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)丁酰胺化合物102的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000128
化合物102的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2963。
实施例103
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-戊酰胺盐酸盐化合物103的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000129
化合物103的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2763。
实施例104
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)-戊酰胺盐酸盐104的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000130
化合物104的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2963。
实施例105
(R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-戊酰胺105的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000131
化合物105的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3063。
实施例106
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-戊酰胺盐酸盐化合物106的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000132
化合物106的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):499.61；MS(ESI)m/z(M+1)+:500.2769。
实施例107
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)-戊酰胺盐酸盐107的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000133
化合物107的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2971。
实施例108
(S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-戊酰胺108的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000134
化合物108的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3068。
实施例109
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐化合物109的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000135
化合物109的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3074。
实施例110
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺化合物110的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000136
化合物110的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):541.69；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.3274。
实施例111
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐化合物111的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000137
化合物111的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2974。
实施例112
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐化合物112的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000138
化合物112的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3074。
实施例113
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺化合物113的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000139
化合物113的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):541.69；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.3277。
实施例114
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐化合物114的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000140
化合物114的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):513.63；MS(ESI)m/z(M+1)+:514.2976。
实施例115
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐化合物115的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000141
化合物115的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3077。
实施例116
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺化合物116的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000142
化合物116的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):541.69；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.3280。
实施例117
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐化合物117的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000143
化合物117的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):527.66；MS(ESI)m/z(M+1)+:528.3082。
实施例118
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺化合物118的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000144
化合物118的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):541.69；MS(ESI)m/z(M+1)+:542.3283。
实施例119
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺盐酸盐119的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000145
化合物119的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):580.68；MS(ESI)m/z(M+1)+:581.2983。
实施例120
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(甲氨基)乙酰胺盐酸盐120的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000146
化合物120的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):594.71；MS(ESI)m/z(M+1)+:595.3183。
实施例121
(R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(二甲氨基)乙酰胺121的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000147
化合物121的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):608.73；MS(ESI)m/z(M+1)+:609.3383。
实施例122
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺122的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000148
化合物122的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为反-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):565.67；MS(ESI)m/z(M+1)+:566.2883。
实施例123
N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺123的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000149
化合物123的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):565.67；MS(ESI)m/z(M+1)+:566.2886。
实施例124
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺盐酸盐124的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000150
化合物124的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):580.68；MS(ESI)m/z(M+1)+:581.2988。
实施例125
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(甲氨基)乙酰胺盐酸盐125的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000151
化合物125的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):594.71；MS(ESI)m/z(M+1)+:595.3187。
实施例126
(S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(二甲氨基)乙酰胺126的合成
Figure PCTCN2015086318-appb-000152
化合物126的合成通过使用类似于实施例76中所述的步骤完成，只不过将原料由N-Boc-4-氨基环己醇替换为顺-4-Boc-氨基环己醇。Exact Mass(计算值):608.73；MS(ESI)m/z(M+1)+:609.3390。
实施例127：对癌细胞增殖的影响
通过测试本发明的化合物对癌细胞生长的影响(表2)，进一步评估文中化合物对癌细胞增殖的抑制作用，及其对抑制癌细胞增殖的选择性。本实施例中选用了人急性单核细胞性白血病细胞株MV4-11(表达FLT3/ITD突变型基因)、人急性髓性白血病细胞株MOLM-13(表达 FLT3/ITD突变型基因及野生型FLT3基因)、人急性髓性白血病细胞株MOLM-14(表达FLT3/ITD突变型基因及野生型FLT3基因)、人急性髓性白血病细胞株OCI-AML-3(表达FLT3A680V突变型基因)、人急性髓性白血病细胞株U937(表达野生型FLT3基因)、小鼠原B细胞BaF3，以上细胞均购自ATCC。还选用了小鼠TEL-BaF3-FLT3/ITD(稳定表达FLT3/ITD突变的活化激酶)、小鼠TEL-BaF3-FLT3-D835Y(稳定表达FLT3D835Y突变的活化激酶)、小鼠TEL-BaF3-BMX(稳定表达BMX激酶)、小鼠TEL-FLT3-BaF3(稳定表达FLT3激酶)、小鼠BaF3-FLT3-ITD-D835Y(稳定表达FLT3/ITD D835Y突变的活化激酶)、小鼠BaF3-FLT3-ITD-F691L(稳定表达FLT3/ITD F691L突变的活化激酶)、小鼠TEL-cKIT-BaF3(稳定表达cKIT激酶)、小鼠BaF3-tel-cKit-N882K(稳定表达cKIT N882K突变的活化激酶)、小鼠BaF3-tel-cKit-D816V(稳定表达cKIT D816V突变的活化激酶)、小鼠BaF3-tel-cKit-T670I(稳定表达cKIT T670I突变的活化激酶)、小鼠TPR-MET-BaF3(稳定表达MET激酶)、小鼠TEL-BaF3-EGFR(稳定表达EGFR激酶)、小鼠BaF3-FL-EGFR-L858R(稳定表达EGFR L858R突变的活化激酶)、小鼠TEL-BaF3-BLK(稳定表达BLK激酶)、小鼠TEL-JAK1-BaF3(稳定表达JAK1激酶)。上述细胞株均由本实验室构建，构建方法为：PCR分别扩增人类FLT3/ITD、FLT3D835Y、BMX、FLT3、FLT3/ITD D835Y、FLT3/ITD F691L、cKIT、cKIT N882K、cKIT D816V、cKIT T670I、MET、EGFR、EGFR L858R、BLK、JAK1激酶区序列，并分别***到带有N端TEL或者TPR片段的MSCV-Puro载体(Clontech)，通过逆转录病毒方法，稳定转入小鼠BaF3细胞，并且撤除IL-3生长因子，最终得到依赖FLT3/ITD、FLT3D835Y、BMX、FLT3、FLT3/ITD D835Y、FLT3/ITD F691L、cKIT、cKIT N882K、cKIT D816V、cKIT T670I、MET、EGFR、EGFR L858R、BLK、JAK1转入蛋白的细胞系。
在实施例中将不同浓度(0.000508μM、0.00152μM、0.00457μM、0.0137μM、0.0411μM、0.123μM、0.370μM、1.11μM、3.33μM、10μM于DMSO中)的上述化合物分别加入到上述细胞中，并孵育72小时，用Cell
Figure PCTCN2015086318-appb-000153
(Promega，美国)化学自发光法细胞活力检测 试剂盒，通过对活细胞中的ATP进行定量测定来检测活细胞数目。实验结果见表2。
表2对细胞增殖的影响
Figure PCTCN2015086318-appb-000154
Figure PCTCN2015086318-appb-000155
续表2
Figure PCTCN2015086318-appb-000157
Figure PCTCN2015086318-appb-000158
Figure PCTCN2015086318-appb-000159
续表2
Figure PCTCN2015086318-appb-000160
Figure PCTCN2015086318-appb-000161
Figure PCTCN2015086318-appb-000162
实施例128：化合物22、化合物77和化合物84在细胞中对FLT3上下 游信号通路的影响
在携带FLT3基因和/或FLT3/ITD突变型基因的人急性髓性白血病细胞MV4-11(表达FLT3/ITD突变型基因)细胞株及人急性髓性白血病细胞株MOLM-14(表达FLT3/ITD突变型基因及野生型FLT3基因)细胞株中，通过测定许多细胞生物化学终点和功能性终点，测试了化合物22、化合物77、化合物84及对照化合物FLT3激酶抑制剂AC220(AC220购自Hao Yuan Chemexpress公司，上海)对细胞中的FLT3和/或FLT3/ITD蛋白激酶的磷酸化及其密切相关的信号通路下游STAT5蛋白磷酸化的影响以及其它相关的蛋白激酶ERK、AKT磷酸化的影响，同时我们还检测了蛋白C-Myc以及转录因子NF-κB亚单位p65磷酸化的影响(图1)。用不同浓度0μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM、3μM(于DMSO中)的化合物22、化合物77，不同浓度0μM、0.003μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM(于DMSO中)的化合物84及0.1μM(于DMSO中)的FLT3激酶抑制剂AC220分别处理携带FLT3和/或FLT3/ITD基因的急性髓性白血病细胞MV 4-11、MOLM-14细胞株4小时，收集样品。测定化合物对细胞中的STAT5、C-Myc、ERK、NF-κB p65、AKT等蛋白磷酸化的影响(图1)。
实验结果如图1所示：在MV 4-11及MOLM-14细胞系中，化合物22、化合物77及化合物84均能够强烈地抑制蛋白激酶FLT3的磷酸化。此外，在携带FLT3和/或FLT3/ITD基因的急性髓性白血病细胞MV4-11及MOLM-14细胞株中，化合物22、化合物77及化合物84均对细胞中FLT3/ITD下游蛋白STAT5的磷酸化也具有非常强烈的抑制作用，且对与FLT3蛋白激酶密切相关的蛋白C-Myc有特别明显的 降解作用。同样的实验中，对照化合物FLT3激酶抑制剂AC220能够强烈地抑制蛋白激酶FLT3及与FLT3/ITD密切相关的蛋白STAT5以及蛋白C-Myc的磷酸化。通过实验结果对比，我们还可以看出，本发明的化合物77、化合物84比对照化合物FLT3激酶抑制剂AC220药效更好。
实施例128表明化合物22、化合物77、化合物84均能够强烈的抑制蛋白激酶FLT3的磷酸化，影响细胞中蛋白激酶FLT3的信号通路下游蛋白STAT5的磷酸化，进而抑制携带FLT3和/或FLT3/ITD基因的急性髓性白血病细胞株的细胞增殖。
实施例129：体外抑制活性(酶活)检测
在体外酶活实验中测定化合物33、化合物30、化合物14、化合物20、化合物22、化合物23、化合物25、化合物26、化合物27、化合物5、化合物6、化合物7、化合物8、化合物9、化合物10、化合物11、化合物12、化合物2、化合物3、化合物4、化合物76、化合物77、化合物78、化合物48、化合物47、化合物45、化合物44、化合物43及AC220对蛋白激酶FLT3、FLT3/ITD及BTK的IC50值。将蛋白激酶FLT3、FLT3/ITD及BTK的胞内段区域克隆到昆虫表达载体pAcG2T中，利用昆虫表达体系BaculoGoldTM Baculovirus Expression System(BD Pharmingen)进行蛋白表达，并带有GST标签。将构建好的载体转染至SF9包装病毒，用病毒感染SF9表达蛋白。
取纯化的FLT3及BTK蛋白激酶9μL(6ng/μL)分别与三倍梯度稀释的上述化合物1μL室温反应4小时(药物终浓度为10μM、3μM、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、0.003μM)；
加入2μL ATP和3μL底物Poly(4:1Glu,Tyr)Peptide(Promega，美国)(终浓度分别为10μM和0.2μg/μL)，37℃反应1小时；
取5μL反应后的激酶溶液，加入5μL ADP-GloTM(Promega，美国)试剂室温反应40min以终止激酶反应并消耗完剩余的ATP；
加入10μL激酶检测试剂将ADP转化成ATP，使用偶联的萤光素酶/萤光素反应检测新合成的ATP，利用Envision读数后作图，计算IC50值(表3)。
实验结果如图2所示：本发明的上述示例性化合物对FLT3、FLT3/ITD及BTK蛋白激酶具有强烈的抑制作用。这些结果说明本发明化合物是FLT3激酶的抑制剂，同时对FLT3/ITD及BTK激酶也有抑制作用。
表3体外抑制活性(酶活)测试结果
Figure PCTCN2015086318-appb-000163
Figure PCTCN2015086318-appb-000164
实施例130：化合物22和化合物84在细胞上对细胞凋亡的影响
为了证明用药以后细胞的死亡是通过凋亡还是坏死，在携带FLT3基因和/或FLT3/ITD突变型基因的急性髓性白血病细胞MOLM-13、MV4-11细胞株中，检测了化合物22和化合物84在细胞中对与细胞凋亡密切相关的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3蛋白剪切的影响。用不同浓度0μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM(于DMSO中)的化合物22、0μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM(于DMSO中)的化合物84、0.1μM(于DMSO中)的FLT3激酶抑制剂AC220分别处理MOLM-13、MV 4-11细胞株，然后分别在12小时、24小时、48小时后收集细胞。用Western Blot检测不同浓度的药在不同时间段对DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3的剪切蛋白的影响(图3)。
实验结果如图3所示：对于携带FLT3基因和/或FLT3/ITD突变型基因的急性髓性白血病细胞株MOLM-13，当化合物22的用药浓度为0.1μM时，作用12小时后就能够看到非常明显的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP的剪切，以及特别明显的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3的剪切；化合物84的用药浓度为0.1μM时，作用24小时后能够看到特别明显的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP的剪切及特别明显的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3的剪切，同样地使用0.1μM的对照化合物FLT3激酶抑制剂AC220也能观测到同样的现象。对于携带FLT3基因和/或FLT3/ITD突变型基因的急性髓性白血病细胞MV 4-11，当化合物22的用药浓度为0.1μM时，分别作用24和48小时后，能够看到明显的DNA修复酶聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶PARP的剪切，也能看见很明显的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3的剪切。化合物84的用药浓度为0.03μM时，作用24小时后，能够观测到较为明显的DNA修复酶聚腺苷二 磷酸-核糖聚合酶PARP的剪切，也能看见含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase 3的剪切。实施例130证明了化合物22和化合物84能够引起携带FLT3基因和/或FLT3/ITD突变型基因的急性髓性白血病细胞的凋亡。
实施例131：化合物22和化合物84在细胞上对细胞周期的影响
为了研究用药后细胞被阻止在哪个生长周期，在携带FLT3/ITD突变型基因的急性髓性白血病细胞MV4-11细胞株中，测试了化合物22和化合物84对这些细胞株的细胞周期分布的影响。用不同浓度的0μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM(于DMSO中)的化合物22，0.1μM或0.01μM(于DMSO中)的FLT3激酶抑制剂AC220作用于携带FLT3/ITD突变基因的急性髓性白血病细胞MV4-11细胞株中，作用24小时后，收集细胞，1XPBS缓冲液洗涤两次，75％的乙醇于-20℃固定24小时，1XPBS缓冲液再洗涤两次，加0.5mL 1XPBS缓冲液和0.5mL的PI染色液(购自美国BD Bioscience)到细胞中并将细胞放置于黑暗避光37℃染色15分钟，用流式细胞仪(BD FACS Calibur)检测细胞周期分布(图4)。
实验结果如图4所示：在携带FLT3/ITD突变型基因的急性髓性白血病细胞株MV4-11细胞株中，随着化合物22、化合物84的药物浓度从0μM增加到0.1μM，捕获的G0-G1期的细胞也从66.99％、58.98％分别增加到95.78％、89.92％；选择性较强的FLT3激酶抑制剂AC220在0.1μM或0.01μM时捕获的G0-G1期的细胞分别为96.53％、90.49％；
实施例131证明了化合物22和化合物84能够将携带FLT3/ITD突变基因的急性髓性白血病细胞MV4-11细胞阻止在G0-G1期，并且对细胞周期的分布有很强的影响(图4)。
实施例132：使用化合物22和化合物77治疗急性髓性白血病
为了检测化合物22和化合物77在体内对肿瘤的抑制效果，引入了裸鼠皮下荷瘤模型。给30余只5周大的小鼠(Balb/c-nu雌性小鼠，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司)皮下接种MOLM-14细胞1×107个/只，每日记录小鼠的体重变化及肿瘤体积(肿瘤体积＝肿瘤 长×肿瘤宽2/2)。10天后，待小鼠肿瘤体积达到200-400mm3，将小鼠随机分成3组，每组6-10只，分别进行如下治疗：第一组每天口服灌胃溶媒(vehicle)，即甲基纤维素基水混悬液(购自国药集团化学试剂有限公司)；第二组每天口服灌胃12.5mg/kg的化合物22和/或化合物77的甲基纤维素基水混悬液制剂；第三组每天口服灌胃25mg/kg的化合物22和/或化合物77的甲基纤维素基水混悬液制剂；第四组每天口服灌胃50mg/kg的化合物22和/或化合物77的甲基纤维素基水混悬液制剂；第一次给药当天记为第0天，连续给药观察2至3周(图5)。
实验结果如图5所示，用化合物22给小鼠进行治疗后，小鼠的肿瘤生长明显受到抑制，小鼠肿瘤体积增长显著减缓(图5a)；用化合物77给小鼠进行治疗后，小鼠的肿瘤生长强烈受到抑制(图5b)，25mg/kg/天组的小鼠肿瘤体积增长显著减缓，50.0mg/kg/天组小鼠肿瘤几乎不增长。本实施例中肿瘤移植小鼠模型的数据证明化合物22和化合物77在小鼠体内能起到非常强的抑制急性髓性白血病(AML)肿瘤生长的作用。
工业应用性
本发明提供一种新型FLT3激酶抑制剂化合物，其可以用于降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶和/或突变型FLT3激酶活性，并且/或者在受试者中预防或治疗细胞增殖性病症和/或FLT3相关病症。因而，可将其制成相应的药物，适于工业应用。
尽管本文对本发明作了详细说明，但本发明不限于此，本技术领域的技术人员可以根据本发明的原理进行修改，因此，凡按照本发明的原理进行的各种修改都应当理解为落入本发明的保护范围。

Claims (19)

  1. 一种式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其具有以下结构：
    Figure PCTCN2015086318-appb-100001
    其中：
    m为选自1或2的整数；
    n为选自0-4的整数；
    X为N或CH，且当X为N时，Y为化学键，当X为CH时，Y为NH；
    Z选自CH2、
    Figure PCTCN2015086318-appb-100002
    R选自氨基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C8环烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8卤代烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8氨基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8氰基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8羟基烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷氧基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C8杂环烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的芳基、未取代的或碳原子 任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的杂芳基、氨基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C8环烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C8杂环烷基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的芳基甲酰基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基氨基(C1-C8)烷基、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基(C3-C6环烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C3-C6环烷基(C1-C8烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(C3-C6杂环烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C3-C6杂环烷基(C1-C8烷基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8烷基(芳基)、未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代或杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(杂芳基)、以及未取代的或碳原子任选被1至3个独立的R1取代的C1-C8氨基烷基(氨基甲酰基)；
    R1选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、C1-C8烷基、C3-C8环烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂原子任选被R2取代的杂芳基、C1-C8烷氧基羰基、杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(杂芳基)、和杂原子任选被R2取代的C1-C8烷基(C3-C6杂环烷基)；
    R2选自氨基保护基、C1-C8烷基、和C1-C8烷氧基羰基。氨基保护基独立地选自叔丁氧羰基、苄氧羰基、9-芴甲氧羰基、苄基和对甲氧苯基。
  2. 根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中n为1或2。
  3. 根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
    Z为
    Figure PCTCN2015086318-appb-100003
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
    R选自取代的或未取代的C1-C6烷基、C1-C4卤代烷基、C3-C6环烷基、氨基、氨基甲酰基、C1-C6氨基烷基、杂芳基、C3-C6杂环烷基、芳基、C1-C4氰基烷基、二(C1-C4烷基)-N-(C1-C4)烷基、C1-C6羟基烷基、C1-C4烷基(C3-C6杂环烷基)、C1-C4烷基(C3-C6环烷基)、C1-C4氨基烷基(氨基甲酰基)、C1-C4烷基(杂芳基)、和C1-C4烷基(芳基)。
  5. 根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
    m为1，且X为N，Y为化学键，所述化合物由式(II)表示：
    Figure PCTCN2015086318-appb-100004
  6. 根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
    m为2，且X为N，Y为化学键，所述化合物由式(III)表示：
    Figure PCTCN2015086318-appb-100005
  7. 根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，其中
    m为2，且X为CH，Y为NH，所述化合物由式(IV)表示：
    Figure PCTCN2015086318-appb-100006
  8. 根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药，选自：
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(环丙基)甲酮(1)；
    (R)-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙烷酮(2)；
    (R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-((三氟甲基)磺酰基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(3)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-磺酰胺(4)；
    (R)-2-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-草酰胺(5)；
    (S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙-1-酮(6)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-咪唑-4-基)丙-1-酮(7)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮(8)；
    (S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙-1-酮(9)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-羟基苯基)丙-1-酮(10)；
    (S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-羟基苯基)丙-1-酮(11)；
    (S)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-甲基戊-1-酮(12)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(吡啶-3-基)甲酮(13)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(哌嗪-1-基)甲酮(14)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(嘧啶-5-基)甲酮(15)；
    (R)-4-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)苯甲酸甲酯(16)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(6-氨基吡啶-3-基)甲酮(17)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3,4-亚甲二氧基苯甲酮(18)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1- 基)-4-哌啶甲酮(19)；
    (R)-3-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3丙腈酮(20)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(2-氨基嘧啶-5-基)甲酮(21)；
    (R)-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮(22)；
    1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基丙-1-酮(23)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙-1-酮(24)；
    (2R,3R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲基戊-1-酮(25)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-苯基丙-1-酮(26)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-甲基戊-1-酮(27)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-4-甲基戊-1-酮(28)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(异噁唑-5-基)甲酮(29)；
    (R)-1-(1-(甲基磺酰基)哌啶-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-吗啉乙酮(31)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(环戊-2-基)乙酮(32)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮(33)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)乙酮(34)；
    (R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)甲酮(35)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-氯丙酮(36)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-溴丙酮(37)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-氯丙酮(38)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(39)；
    (R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(丙磺基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40)；
    (R)-3-(4-苯氧基苯基)-1-(1-(乙磺基)哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(41)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)三氯乙酮(42)；
    (R)-2-氨基-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)乙酮(43)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羟基丁酮(44)；
    (R)-2-氨基-1-((R)3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲基丁酮(45)；
    (R)-3-氨基-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙酮(46)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丙酮(47)；
    (R)-2-氨基-1-((R)-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙酮(48)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3,3-二甲基丁酮(49)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1- 基)-2,2-二甲基丁酮(50)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3,3,3-三氟丙酮(51)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-环丙基乙酮(52)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-甲基丁酮(53)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)丁酮(54)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2,2-二甲基丙酮(55)；
    (S)-4-氨基-5-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-5-羰基戊酰胺(56)；
    (R)-4-氨基-5-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-5-羰基戊酰胺(57)；
    (R)-1-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙酮(58)；
    (R)-(2-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羰基)乙基氨基甲酸叔丁酯(59)；
    (R)-4-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)哌啶-1-甲酸甲酯(60)；
    (R)-1-((R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基-4-甲基戊-1-酮(61)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-5-氨基戊酮(62)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-羟基己-1-酮(63)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-2-氨基乙酮(64)；
    (R)-3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮(65)；
    (R)-(2-(3-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)吡咯烷-1-基)-2-羰基)乙基氨基甲酸叔丁酯(66)；
    (R)-1-(1-(甲基磺酰基)吡咯烷-3-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(67)；
    (4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(1-甲基哌啶-4-基)甲酮(68)；
    1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(69)；
    1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-吗啉乙酮(70)；
    (4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)甲酮(71)；
    1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(二甲基氨基)乙酮(72)；
    1-(1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(73)；
    (R)-2-氨基-1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-4-甲基戊烷-1-酮(74)；
    1-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-2-(甲基氨基)乙酮(75)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)乙酰胺(76)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐(77)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)甲基磺酰胺(78)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲基氨基)乙酰胺(79)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-1-甲基氨基哌啶-4-甲酰胺(80)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己 基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰胺(81)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-吗啉乙酰胺(82)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-氰基乙酰胺(83)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐(84)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐(85)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基丁酰胺盐酸盐(86)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺盐酸盐(87)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺(88)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基丁酰胺盐酸盐(89)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰胺盐酸盐(90)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺(91)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐(92)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酰胺(93)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基戊酰胺(94)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐(95)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-4-甲基戊酰胺(96)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-丁酰胺盐酸盐(97)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)-丁酰胺盐酸盐(98)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)丁酰胺(99)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-丁酰胺盐酸盐(100)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)丁酰胺盐酸盐(101)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)丁酰胺(102)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-戊酰胺盐酸盐(103)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)-戊酰胺盐酸盐(104)；
    (R)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-戊酰胺(105)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-戊酰胺盐酸盐(106)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(甲氨基)-戊酰胺盐酸盐(107)；
    (S)-N-(4-(4-氨基-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)环己基)-2-(二甲氨基)-戊酰胺(108)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐(109)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺(110)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐(111)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶 -1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐(112)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺(113)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基戊酰胺盐酸盐(114)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐(115)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺(116)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(甲氨基)戊酰胺盐酸盐(117)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-4-甲基-2-(二甲氨基)戊酰胺(118)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺盐酸盐(119)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(甲氨基)乙酰胺盐酸盐(120)；
    (R)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(二甲氨基)乙酰胺(121)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)顺-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺(122)；
    N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺(123)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)乙酰胺盐酸盐(124)；
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(甲氨基)乙酰胺盐酸盐(125)；和
    (S)-2-氨基-N-(4-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯酚)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶 -1-基)反-1,4-环己基)-2-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-2-(二甲氨基)乙酰胺(126)。
  9. 一种药物组合物，包括根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、异构体、酯、酸、代谢物或前药、药学上可接受的载体或赋形剂、以及任选的其它治疗剂。
  10. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物在制备用于治疗增殖性病症和/或FLT3相关病症的药物中的用途。
  11. 根据权利要求10所述的用途，其中所述病症响应于FLT3激酶或突变型FLT3激酶抑制。
  12. 根据权利要求11所述的用途，其中所述突变型FLT3激酶是FLT3/ITD突变型激酶。
  13. 根据权利要求10所述的用途，其中所述增殖性病症选自：实体肿瘤的存在或发展、B细胞淋巴癌、肉瘤、淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、B细胞前淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞淋巴瘤/瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、***边缘区B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、白血病、淋巴瘤样肉芽肿病、乳腺导管癌、小叶癌、腺癌、黑色素瘤、B细胞增生性疾病、脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、淋巴癌、胃癌、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、结直肠癌、***癌、胰腺癌、肺癌、***癌、膜腺癌、甲状腺癌、颈癌、CNS的癌症、恶性胶质瘤、骨髓增生病、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、头颈肿瘤、脑瘤、表皮过度增生、银屑病、***增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、淋巴瘤、乳腺癌或白血病、及其组合。
  14. 根据权利要求10所述的用途，其中所述FLT3相关病症选自：白血病、淋巴瘤、霍奇金病、骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性嗜中性细胞白血病、急性未分化细胞白血病、退行发育性大细胞性淋巴瘤、成人T细胞ALL、伴有三谱系脊髓发育不良的AML、混合型谱系白血病、脊髓发育不良综合征、骨髓增生异常、多发性骨髓瘤和脊髓肉瘤、慢性淋巴细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、及其组合。
  15. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物在制备用于降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶和/或突变型FLT3激酶活性的药物中的用途。
  16. 一种降低或抑制细胞或受试者的FLT3激酶和/或突变型FLT3激酶活性的方法，包括对细胞或受试者施用有效量的权利要求1-8中任一项所述的化合物或权利要求9所述的药物组合物。
  17. 一种治疗增殖性病症和/或FLT3相关病症的方法，包括对需要所述治疗的患者施用治疗有效量的权利要求1-8中任一项所述的化合物或权利要求9所述的药物组合物。
  18. 如权利要求17所述的方法，其中所述病症响应于FLT3激酶或突变型FLT3激酶抑制。
  19. 根据权利要求18所述的用途，其中所述突变型FLT3激酶是FLT3/ITD突变型激酶。
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