WO2002051795A1 - Carbonsäureamide, diese verbindungen enthaltende arzneimittel, deren verwendung und herstellung - Google Patents

Carbonsäureamide, diese verbindungen enthaltende arzneimittel, deren verwendung und herstellung Download PDF

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WO2002051795A1
WO2002051795A1 PCT/EP2001/014841 EP0114841W WO02051795A1 WO 2002051795 A1 WO2002051795 A1 WO 2002051795A1 EP 0114841 W EP0114841 W EP 0114841W WO 02051795 A1 WO02051795 A1 WO 02051795A1
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carboxy
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Henning Priepke
Norbert Hauel
Klaus Damm
Andreas Schnapp
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Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg
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    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/14—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D295/155—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with the ring nitrogen atoms and the carbon atoms with three bonds to hetero atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
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    • C07C233/55—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by a carbon atom of a six-membered aromatic ring having the carbon atom of the carboxamide group bound to a carbon atom of an unsaturated carbon skeleton
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    • C07C2601/08—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being saturated

Definitions

  • telomeres The ends of eukaryotic chromosomes, the telomeres, consist of simple repetitive sequences, the integrity of which is essential for the function and structure of the chromosomes.
  • linear chromosomes lose a certain length of their telomeres with each round of DNA replication, a phenomenon that Watson recognized in 1972 (Watson in Nature New Biol. 239, 197-201 (1972)).
  • telomere loss is the reason for the limited replicative potential of somatic cells, while more than 85% of all human tumors reactivate an enzyme, telomerase, to compensate for the loss of telomeres and thus become immortal (see Shay and Bacchetti in European Journal of Cancer, _33, 787-791 (1997)).
  • Human telomerase is a ribonucleoprotein (RNP) composed of at least one catalytic subunit (hTERT) and one RNA (hTR). Both components have been molecularly cloned and characterized.
  • telomerase is a reverse transcriptase that uses a sequence section in hTR as a template to synthesize a strand of the telomeric DNA (Morin in Cell 59, 521-529 (1989)). Methods to identify telomerase activity as well as methods for the diagnosis and therapy of replicative senescence and immortality by modulating the telomeres and telomerase have been described (Morin in Cell 59, 521-529 (1989); Kim et al. In Science 266, 2011-2014 (1994))
  • Inhibitors of telomerase can be used for tumor therapy since, unlike tumor cells, somatic cells are not dependent on telomerase.
  • the present invention relates to the new carboxamides of the above general formula I and their salts, in particular their physiologically tolerable salts which have an inhibitory effect on telomerase, processes for their preparation, medicaments containing these compounds and their use.
  • Another object of the present invention is the use of the above carboxamides of the general formula I in the inhibition of telomerase and the preparation of a corresponding medicament.
  • R. ⁇ is a hydrogen atom, a C ⁇ alkyl or trifluoromethyl group
  • R 2 is a hydrogen, fluorine, chlorine or bromine atom or a C - ⁇ - alkyl group
  • R 3 represents a hydrogen atom or a C 1-6 alkyl group
  • a 5- or 6-membered heteroaryl group optionally substituted by a fluorine, chlorine or bromine atom, by a C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy group in the carbon skeleton, the 6-membered heteroaryl groups being one, two or three nitrogen atoms and the 5-membered heteroaryl groups, optionally by a C ⁇ . 3 -alkyl group substituted imino group, an oxygen or sulfur atom or an optionally by a C ⁇ .
  • a phenyl ring can be fused, which is also in the carbon skeleton by a fluorine, chlorine or bromine atom , by a can be substituted
  • B is a phenyl or naphthyl group, each of which is substituted by a carboxy group, by a group which can be converted into a carboxy group in vivo or by a group which is negatively charged under physiological conditions and, if appropriate, additionally by a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom or can be substituted by a C 1-6 alkyl, trifluoromethyl or methoxy group, the above-mentioned phenyl groups additionally
  • C ⁇ -alkyl group which is replaced by an amino, C- M -alkylamino-, DKC ⁇ -alky -amino-, C 3 . 7 cycloalkylamino, pyrrolidino, piperidino, morpholino, piperazino or N- (C 1 3 alkyl.) - piperazino group is substituted are substituted,
  • a convertible in vivo into a carboxy group is, for example, a hybrid droxymethyl administrat, an esterified carboxy group with an alcohol in which the alcoholic moiety is preferably a Cv ⁇ -alkanol, a phenyl-C ⁇ _ 3 -alkanol, a C. 3 9 cycloalkanol, wherein a C 5 .8-cycloalkanol may additionally be substituted by one or two Cv rAlkyl phenomenon, a C 5 _8-cycloalkanol, wherein a methylene group in the 3- or 4-position by an oxygen atom or by an optionally by a C 1 .
  • 5- alkynol with the proviso that no bond to the oxygen atom starts from a carbon atom which carries a double or triple bond, a C 3 ⁇ -cycloalkyl-C ⁇ _ 3 alkanol, a bicycloalkanol with a total of 8 to 10 carbon atoms, which is in the bicyclo - Alkyl part additionally by one or two C ⁇ .
  • 3 -alkyl groups can be substituted, a 1, 3-di-hydro-3-oxo-1-isobenzfuranol or an alcohol of the formula
  • R a a C ⁇ . 8 alkyl, C 5 . 7 ⁇ cycloalkyl, phenyl or phenyl
  • R b is a hydrogen atom, a C ⁇ -Alky! -, C 5 . 7 -Cyc ⁇ oa ⁇ kyl- or phenyl group and R c represents a hydrogen atom or a C 1 3 alkyl group,
  • an imino or amino group in vivo for example a hydroxyl group, an acyl group such as the benzoyl or pyridinoyl group or a d.i ⁇ -alkanoyl group such as the formyl, acetyl, propionyl, butanoyl, pentanoyl or He- xanoyl distr, an allyloxycarbonyl distr, a C ⁇ . 16 -alkoxycarbonyl group such as methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl, butoxycarbonyl, part.
  • an imino or amino group in vivo for example a hydroxyl group, an acyl group such as the benzoyl or pyridinoyl group or a d.i ⁇ -alkanoyl group such as the formyl, acetyl, propionyl, butanoyl, pentanoyl or He- x
  • saturated alkyl and alkoxy parts which contain more than 2 carbon atoms and which are mentioned in the definitions above or below also include their branched isomers, such as, for example, the isopropyl, tert-butyl, isobutyl group etc.
  • Ri is a hydrogen atom or a C- ⁇ . 3 -alkyl group
  • R 2 is a hydrogen, fluorine, chlorine or bromine atom or a C 1-4 alkyl group
  • R 3 represents a hydrogen atom or a methyl group
  • A one by a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom, by ad ⁇ alkyl or C ⁇ . 3- alkoxy group substituted phenyl or naphthyl group, each of which can additionally be substituted by a fluorine, chlorine or bromine atom, by a C ⁇ .3-alkyl or d-3-alkoxy group,
  • a 5- or 6-membered heteroaryl group where the 6-membered heteroaryl groups have one, two or three nitrogen atoms and the 5-membered heteroaryl groups may have a d. 3 -alkyl group substituted imino group, an oxygen or sulfur atom or one optionally substituted by a d. 3- alkyl group substituted imino group and an oxygen or sulfur atom or one or two nitrogen atoms and in addition to the above-mentioned monocyclic heteroaryl groups via two adjacent carbon atoms, a phenyl ring can be fused, and
  • B is a phenyl or naphthyl group, each of which is substituted by a carboxy group, by a group which can be converted into a carboxy group in vivo or by a group which is negatively charged under physiological conditions and, if appropriate, additionally by a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom or by a C ⁇ . 3 -Alkyl-, trifluoromethyl or methoxy group can be substituted, the above-mentioned phenyl groups additionally
  • a d_ 3 alkyl group which is replaced by an amino, d ⁇ alkylamino, di (d- 4 alkyl) amino, C 3 .
  • R T is a hydrogen atom or ad 3 -alkyl group
  • R 2 represents a hydrogen atom or a methyl group
  • R 3 is a hydrogen atom
  • a naphthyl group optionally substituted by a fluorine, chlorine or bromine atom, by a methyl or methoxy group
  • B is a naphthyl group substituted by a carboxy group
  • 3 -Alkyl-, a trifluoromethyl or a methoxy group can be substituted and additionally
  • a d. 3 -alkyl group which is replaced by an amino-, C ⁇ -alkylamino-, di- (C 1 ⁇ -alkyl) - amino-, C 3 . 7 cycloalkylamino, pyrrolidino, piperidino, morpholino, piperazino or N- (C 1. 3, alkyl) -piperazino distr is substituted, is substituted,
  • Ri, R 2 , R3 and A are as previously defined, and B has the meanings given above, where the carboxy, methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl or tetrazolyl substituent is in the 2-position and the alkyl group which is substituted as indicated above is in the 5-position of the phenyl ring,
  • Ri is a methyl group
  • R 2 is a hydrogen atom
  • R 3 is a hydrogen atom
  • A is a naphthyl group
  • B represents a 2-carboxy-phenyl group, the aforementioned 2-carboxy-phenyl group additionally in the phenyl nucleus
  • R 3 is defined as mentioned at the beginning and
  • Aminoalkyl group convertible into B means with a carboxylic acid of the general formula
  • Ri, R 2 , and A are defined as mentioned above, or their reactive derivatives.
  • the acylation is advantageously carried out using a corresponding halide or anhydride in a solvent such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, ether, tetrahydrofuran, dioxane, benzene, toluene, acetonitrile, dimethylformamide or sulfolane, optionally in the presence of an inorganic or organic base such as triethylamine, N- ethyl diisopropylamine, N-methyl-morpholine or pyridine at temperatures between -20 and 200 ° C, but preferably at temperatures between -10 and 160 ° C.
  • a solvent such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, ether, tetrahydrofuran, dioxane, benzene, toluene, acetonitrile, dimethylformamide or sulfolane
  • an inorganic or organic base such as trieth
  • the acylation can also be carried out with the free acid, optionally in the presence of an acid activating agent or a dehydrating agent, e.g. in the presence of isobutyl chloroformate, thionyl chloride, trimethylchlorosilane, hydrogen chloride, sulfuric acid, methanesulphonic acid, p-toluenesulphonic acid, phosphorus trichloride, phosphorus pentoxide, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, N.N'-dicyclohexylcarbodiimide / nodohydroxychloride, or N-dicyclohexylcarbodiimide / N-dicyclo-hydroxodiimide / n-1 , N'-carbonyldiimidazole or N, N'-thionyldiimidazole or triphenylphosphine / carbon tetrachloride, at temperatures between -20 and 200
  • B contains a substituted or unsubstituted aminoalkyl group
  • the optionally protected hydroxyalkyl derivative can be used as the starting material for the acylation.
  • suitable protective groups are the trimethylsilyl or tert-butyl-diphenyisilyl group, which can be introduced or removed by one of the processes described in the literature or below.
  • the protective group is split off and the hydroxy group is converted into a good leaving group, e.g. converted into a methylsulfonyl, triflate, benzylsulfonyl group or into a halogen atom and converted into the desired end compound by reaction with the corresponding amine and removal of any protective groups still present.
  • a and B are defined with the proviso that A or B or A and B contain a group which can be converted into a carboxy group, into a compound of the general formula I which contains a carboxy group.
  • a group which can be converted into a carboxy group is, for example, a carboxyl group protected by a protective radical, such as its functional derivatives, e.g. B. their unsubstituted or substituted amides, esters, thioesters, trimethylsilyl esters, orthoesters or imino esters, which are expediently converted into a carboxyl group by means of hydrolysis,
  • a protective radical such as its functional derivatives, e.g. B. their unsubstituted or substituted amides, esters, thioesters, trimethylsilyl esters, orthoesters or imino esters, which are expediently converted into a carboxyl group by means of hydrolysis,
  • esters with tertiary alcohols e.g. the tert. Butyl esters which are expediently converted into a carboxyl group by treatment with an acid or thermolysis, and
  • esters with aralkanols e.g. the benzyl ester, which are expediently converted into a carboxyl group by means of hydrogenolysis.
  • the hydrolysis is expediently carried out either in the presence of an acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, trichloroacetic acid, trifluoroacetic acid or mixtures thereof or in the presence of a base such as lithium hydroxide, sodium hydroxide or potassium hydroxide in a suitable solvent such as water, water / methanol, water / Ethanol, water / isopropanol, methanol, ethanol, water / tetrahydrofuran or water / dioxane at temperatures between -10 and 120 ° C, eg at temperatures between room temperature and the boiling point of the reaction mixture.
  • an acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, trichloroacetic acid, trifluoroacetic acid or mixtures thereof
  • a base such as lithium hydroxide, sodium hydroxide or potassium hydroxide
  • a suitable solvent such as water, water / methanol
  • the transfer of a tert. Butyloxycarbonyl group in a carboxy group can also preferably by treatment with an acid such as trifluoroacetic acid, formic acid, p-toluenesulfonic acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, phosphoric acid or polyphosphoric acid optionally in an inert solvent such as methylene chloride, chloroform, benzene, toluene, diethyl ether, tetrahydrofuran or dioxane Temperatures between -10 and 120 ° C, for example at temperatures between 0 and 60 ° C, or thermally optionally in an inert solvent such as methylene chloride, chloroform, benzene, toluene, tetrahydrofuran or dioxane and preferably in the presence of a catalytic amount of an acid such as p -Toluenesulfonic acid, sulfuric acid, phosphoric acid or polyphosphoric acid are preferably carried
  • the conversion of a benzyloxy or benzyloxycarbonyl group into a carboxy group can also be carried out hydrogenolytically in the presence of a hydrogenation catalyst such as palladium / carbon in a suitable solvent such as methanol, ethanol, ethanol / water, glacial acetic acid, ethyl acetate, dioxane or dimethylformamide, preferably at temperatures between 0 and 50 ° C , for example at room temperature, and a hydrogen pressure of 1 to 5 bar.
  • a hydrogenation catalyst such as palladium / carbon
  • a suitable solvent such as methanol, ethanol, ethanol / water, glacial acetic acid, ethyl acetate, dioxane or dimethylformamide
  • the subsequent sulfonation is advantageously carried out with a corresponding halide in a solvent such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, ether, tetrahydrofuran, dioxane, benzene, toluene, acetonitrile or sulfolane, optionally in the presence of an inorganic or organic base such as triethylamine, N-ethyl-diisopropylamine, N. -Methyl-morpholine or pyridine at temperatures between -20 and 200 ° C, but preferably at temperatures between -10 and 160 ° C.
  • a solvent such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, ether, tetrahydrofuran, dioxane, benzene, toluene, acetonitrile or sulfolane
  • an inorganic or organic base such as triethylamine,
  • a compound of the general formula I which contains a tetrazole group is preferably carried out in a solvent such as benzene, toluene or dimethylformamide at temperatures between 80 and 150 ° C., preferably at 120 and 130 ° C.
  • a solvent such as benzene, toluene or dimethylformamide
  • the required hydrochloric acid is expediently released during the reaction from an alkali azide, for example from sodium azide, in the presence of a weak acid such as ammonium chloride.
  • the reaction can also be carried out with another salt or derivative of hydrochloric acid, preferably with aluminum azide or tributyltin azide, in which case the tetrazole compound thus obtained is then released from the salt contained in the reaction mixture by acidification with a dilute acid such as 2N hydrochloric acid or 2N sulfuric acid ,
  • the subsequent acylation or sulfonation or the subsequent conversion into a corresponding pro-drug compound is preferably carried out with an appropriate acid halide in a solvent such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, ether, tetrahydrofuran, dioxane, benzene, toluene, acetonitrile or sulfolane Presence of an inorganic or organic base such as triethylamine, N-ethyl-diisopropylamine, N-methyl-morpholine or pyridine at temperatures between -20 and 200 ° C, but preferably at temperatures between -10 and 160 ° C.
  • a solvent such as methylene chloride, chloroform, carbon tetrachloride, ether, tetrahydrofuran, dioxane, benzene, toluene, acetonitrile or sulfolane
  • an inorganic or organic base such
  • the subsequent conversion of a carboxy group into a group which can be converted into a carboxy group in vivo is preferably carried out by esterification with an appropriate alcohol or by alkylation of the carboxy group.
  • the esterification is advantageously carried out in a solvent or solvent mixture such as methylene chloride, benzene, toluene, chlorobenzene, tetrahydrofuran, benzene / tetrahydrofuran or dioxane, but preferably in an excess of the alcohol used in the presence of a dehydrating agent, for example in the presence of hydrochloric acid, sulfuric acid, chlorine ants - Isobutyl acid ester, thionyl chloride, trimethylchlorosilane, hydrochloric acid, sulfuric acid, methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, phosphorus trichloride, phosphorus pentoxide, 2- (1 H-benzotriazol-1-
  • the subsequent reduction is preferably carried out in the presence of a complex metal hydride such as lithium aluminum hydride or lithium triethyl borohydride in a solvent such as tetrahydrofuran at the boiling point of the solvent used.
  • a complex metal hydride such as lithium aluminum hydride or lithium triethyl borohydride
  • a solvent such as tetrahydrofuran
  • any reactive groups present such as hydroxyl, carboxy, amino, alkylamino or imino groups, can be protected during the reaction by customary protective groups which are split off again after the reaction.
  • the trimethylsilyl, tert.butyldiphenylsilyl, acetyl, benzoyl, methyl, ethyl, tert-butyl, trityl, benzyl, methylsulfonyl or tetrahydropyranyl group comes as a protective radical for a hydroxyl group
  • protective radicals for a carboxy group the trimethylsilyl, methyl, ethyl, tert-butyl, benzyl or tetrahydropyranyl group, and
  • an amino, alkylamino or imino group the formyl, acetyl, trifluoroacetyl, ethoxycarbonyl, tert.
  • the subsequent subsequent splitting off of a protective radical used is carried out, for example, hydrolytically in an aqueous solvent, for example in water, isopropanol / water, acetic acid / water, tetrahydrofuran / water or dioxane / water, in the presence of an acid such as trifluoroacetic acid, hydrochloric acid or sulfuric acid or in the presence an alkali base such as sodium hydroxide or potassium hydroxide or aprotic, for example in Presence of iodotrimethylsilane, at temperatures between 0 and 120 ° C, preferably at temperatures between 10 and 100 ° C.
  • an aqueous solvent for example in water, isopropanol / water, acetic acid / water, tetrahydrofuran / water or dioxane / water, in the presence of an acid such as trifluoroacetic acid, hydrochloric acid or sulfuric acid or in the presence an alkali base such as sodium hydro
  • a benzyl, methoxybenzyl or benzyloxycarbonyl radical is cleaved off, for example, by hydrogenolysis, e.g. with hydrogen in the presence of a catalyst such as palladium / carbon in a suitable solvent such as methanol, ethanol, ethyl acetate or glacial acetic acid, optionally with the addition of an acid such as hydrochloric acid at temperatures between 0 and 100 ° C, but preferably at room temperatures between 20 and 60 ° C , and at a hydrogen pressure of 1 to 7 bar, but preferably from 3 to 5 bar.
  • a 2,4-dimethoxybenzyl radical is preferably cleaved in trifluoroacetic acid in the presence of anisole.
  • a tert-butyl or tert-butyloxycarbonyl radical is preferably cleaved off by treatment with an acid such as trifluoroacetic acid or hydrochloric acid or by treatment with iodotrimethylsilane, optionally using a solvent such as methylene chloride, dioxane, methanol or diethyl ether.
  • a trifluoroacetyl radical is preferably split off by treatment with an acid such as hydrochloric acid, if appropriate in the presence of a solvent such as acetic acid at temperatures between 50 and 120 ° C. or by treatment with sodium hydroxide solution optionally in the presence of a solvent such as tetrahydrofuran at temperatures between 0 and 50 ° C.
  • a phthalyl radical is preferably cleaved in the presence of hydrazine or a primary amine such as methylamine, ethylamine or n-butylamine in a solvent such as methanol, ethanol, isopropanol, toluene / water or dioxane at temperatures between 20 and 50 ° C.
  • the compounds of general formula I obtained can be separated into their enantiomers and / or diastereomers.
  • compounds with at least one optically active carbon atom can be separated into their enantiomers.
  • the compounds of general formula I obtained which occur in racemates can be converted into their optical antipodes and by known methods (see Allinger NL and Eliel EL in "Topics in Stereochemistry", Vol. 6, Wiley Interscience, 1971)
  • the compounds of the formula I obtained can be converted into their salts, in particular for pharmaceutical use into their physiologically tolerable salts with inorganic or organic acids.
  • suitable acids for this are hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, methanesulfonic acid, phosphoric acid, fumaric acid, succinic acid, lactic acid, citric acid, tartaric acid or maleic acid.
  • the new compounds of formula I thus obtained if they contain an acidic group such as a carboxy group, can, if desired, subsequently be converted into their salts with inorganic or organic bases, in particular for their pharmaceutical use into their physiologically tolerable salts.
  • bases which can be used here are sodium hydroxide, potassium hydroxide, arginine, lysine, cyclohexylamine, ethanolamine, diethanolamine and triethanolamine.
  • the carboxamides of the general formula I and their salts in particular their physiologically tolerable salts, have an inhibitory effect on telomerase.
  • the cells were suspended in 5 times the volume of hypotonic buffer (10 mM HEPES / KOH, pH 7.8; 10 mM KCI; 1.5 mM MgCl 2 ) and then left at 4 ° C. for 10 minutes. After centrifugation for 5 minutes at 1000 xg, the cell pellet was suspended in twice the volume of hypotonic buffer in the presence of 1 mM DTE and 1 mM PMSF and broken up with a dounce homogenizer. The homogenate was made isotonic with 0.1 volume of 10-fold salt buffer (300 mM HEPES / KOH, pH 7.8; 1.4 M KCI; 30 mM MgCl 2 ).
  • the cell nuclei were separated from the components of the cytoplasm by centrifugation and then in a 2-fold volume of nuclear extraction buffer (20 mM HEPES / KOH, pH 7.9; 420 mM KCI; 1.5 mM MgCI 2 ; 0.2 mM EDTA; 0.5 mM DTE; 25% glycerol) suspended.
  • the cores were broken up with a Dounce homogenizer and incubated for 30 minutes at 4 ° C with gentle stirring. Insoluble components were separated by centrifugation for 30 minutes at 10,000 rpm (SS-34 rotor).
  • the core extract was then dialyzed for 4-5 hours against buffer AM-100 (20 mM Tris / HCl, pH 7.9; 100 mM KCI; 0.1 mM EDTA; 0.5 mM DTE; 20% glycerol).
  • the core extracts obtained were frozen in liquid nitrogen and stored at -80 ° C.
  • the reaction was then stopped by adding 50 ⁇ l RNase Stop buffer (10 mM Tris / HCL, pH 8.0; 20 mM EDTA; 0.1 mg / ml RNase A 100 U / ml RNase T1; 1000 cpm of an ⁇ - 32 P-dGTP labeled, 430 bp DNA fragment) ended and incubated for a further 15 minutes at 37 ° C.
  • RNase Stop buffer 10 mM Tris / HCL, pH 8.0; 20 mM EDTA; 0.1 mg / ml RNase A 100 U / ml RNase T1; 1000 cpm of an ⁇ - 32 P-dGTP labeled, 430 bp DNA fragment
  • Proteins present in the reaction mixture were cleaved by adding 50 ⁇ l Proteinase K buffer (10 mM Tris / HCL, pH 8.0; 0.5% SDS; 0.3 mg / ml Proteinase K) and then incubating for 15 min at 37
  • the DNA was purified by double phenol-chloroform extraction and by adding 2.4 M ammonium acetate; 3 ⁇ g tRNA and 750 ⁇ l ethanol precipitated. The precipitated DNA was then washed with 500 ⁇ l 70% ethanol, dried at room temperature, in 4 ⁇ l formamide sample buffer (80% (V / V) formamide; 50 mM Tris-borate, pH 8.3; 1 mM EDTA; 0.1 (w / v ) Xylene cyanol; 0.1% (w / V) bromophenol blue) and electrophoretically separated on a sequence gel (8% polyacrylamide, 7 M urea, 1 x TBE buffer). The DNA synthesized by telomerase in the absence or presence of potential inhibitors was identified and quantified using phospho-imager analysis (Molecular Dynamics). The radio-labeled DNA fragment added with the RNase Stop buffer served as an internal control for the yield.
  • the inhibitors of Examples 1 to 5 inhibited the telomerase activity by more than 50% at a concentration of 5 ⁇ M.
  • the carboxamides of the general formula I are suitable for the treatment of pathophysiological processes which are characterized by an increased telomerase activity.
  • Tumor diseases such as carcinomas, sarcomas and leukaemias including skin cancer (eg, squamous cell carcinoma, basal cell carcinoma, melanoma), small cell lung carcinoma, non-small cell lung cancer, salivary gland carcinoma, esophagus carcinoma, laryngeal carcinoma, oral cavity carcinoma, thyroid carcinoma, gastric carcinoma, colorectal carcinoma, pancreatic carcinoma, pancreatic carcinoma, liver carcinoma, breast carcinoma, uterus carcinoma , vaginal carcinoma, ovarian carcinoma, prostate carcinoma, testicular carcinoma, bladder carcinoma, renal carcinoma, Wilms tumor, retinoblastoma, astrocytoma, oligodendroglioma, meningioma, neuroblastoma, myeloma, medulloblastoma, neurofibrosarcoma,
  • skin cancer eg, s
  • the compounds can also be used to treat other diseases which have an increased cell division rate or increased telomerase activity, such as e.g. epidermal hyperproliferation (psoriasis), inflammatory processes (rheumatoid arthritis), diseases of the immune system etc.
  • diseases which have an increased cell division rate or increased telomerase activity such as e.g. epidermal hyperproliferation (psoriasis), inflammatory processes (rheumatoid arthritis), diseases of the immune system etc.
  • the compounds are also useful for the treatment of parasitic diseases in humans and animals, e.g. Worm or fungal diseases as well as diseases caused by protozoan pathogens, such as Zooflagellata (Trypanosoma, Leishmania, Giardia), Rhizopoda (Entamoeba spec), Sporozoa (Plasmodium spec, Toxoplasma spec), Ciliata etc.
  • Worm or fungal diseases as well as diseases caused by protozoan pathogens, such as Zooflagellata (Trypanosoma, Leishmania, Giardia), Rhizopoda (Entamoeba spec), Sporozoa (Plasmodium spec, Toxoplasma spec), Ciliata etc.
  • the carboxamides of the general formula I can optionally be used in combination with other pharmacologically active compounds and forms of therapy which achieve a reduction in the size of the tumor, and can be incorporated into the usual galenical forms of use.
  • these can be, for example, in tumor therapy in monotherapy or in combination with radiation, surgery or other anti-tumor therapeutic agents, for example in combination with topoisomerase inhibitors (for example etoposide), mitotic inhibitors (for example paclitaxel, vinblastine), cell cycle inhibitors (for example ' flavopyridol), inhibitors of signal transduction (for example farnesyl transferase inhibitors), compounds which interact with nucleic acids (for example cis-platinum, cyclophosphamide, adriamycin), hormone antagonists (e.g. tamoxifen), inhibitors of metabolic processes (e.g. 5-FU etc.), cytokines (e.g. interferons), tumor vaccines, antibodies etc.
  • the daily dose is 0.1 to 3 g per os or intravenously, divided into one to four times a day.
  • the compounds of the general formula I optionally in combination with the other active substances mentioned above, together with one or more inert customary carriers and / or diluents, e.g.
  • Butyldiphenylhydroxysilane contaminated title compound butyldiphenylhydroxysilane contaminated title compound.
  • Potassium hydroxide solution was added dropwise and then stirred at room temperature for 6 h.
  • the title compound was then precipitated by adding 2M HCl, filtered off, washed and dried.
  • the active ingredient, CaHPO ⁇ milk sugar and corn starch are moistened evenly with an aqueous PVP solution.
  • the mass is passed through a 2 mm sieve, dried in a convection oven at 50 ° C and sieved again.
  • the granules are pressed on a tabletting machine.
  • the active ingredient is mixed with the excipients and moistened with an aqueous gelatin solution. After sieving and drying, the granules are mixed with magnesium stearate and pressed into cores.
  • the cores produced in this way are covered with a casing by known processes.
  • Colorant can be added to the coating suspension or solution.
  • the active ingredient is mixed with the excipients and moistened with an aqueous PVP solution.
  • the moist mass is passed through a 1.5 mm sieve and dried at 45 ° C. After drying, it is sieved again and the magnesium stearate is added. This mixture is pressed into cores.
  • the active ingredient and corn starch are mixed and moistened with water.
  • the moist mass is sieved and dried.
  • the dry granules are sieved and mixed with magnesium stearate.
  • the final mixture is filled into size 1 hard gelatin capsules.

Abstract

Die vorliegende Anmeldung betrifft Carbonsäureamide der allgemeinen Formel (I), in der A, B und R1 bis R3 wie im Anspruch (1) definiert sind, Verfahren zu ihrer Herstellung, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung sowie deren Herstellung.

Description

Carbonsäureamide, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel, deren Verwendung und Herstellung
Die letzte Dekade der onkologischen Forschung ermöglichte erstmals ein molekulares Verständnis der an der Tumorentstehung beteiligten regulatorischen Mechanismen. Wie zum Beispiel die Funktion von Onkogenen, Tumor-Suppressorgenen, Wachstumsfaktoren, Rezeptoren, Signal-Transduktionskaskaden, pro- und anti-apoptotischer Gene, bei der Kontrolle von Zellwachstum, Differenzierung, Migration und Zelltod. Diese neuen Erkenntnisse zeigten aber auch, daß Krebs auf molekularer Ebene eine multifaktorielle Krankheit ist, während derer Entstehung Gewebe durch unterschiedliche Mechanismen maligne entarten können. Diese Heterogenität der malignen Zellen wiederum erklärt die klinischen Probleme der Tumortherapie.
Schon im Jahr 1965 wurde durch Hayflick (Hayflick, Exp. Cell Res._37, 614-636 (1965)) postuliert, daß die begrenzte proliferative Lebensdauer normaler somatischer Zellen, die replikative Seneszenz, als Tumorsuppressor-Mechanismus fungieren kann. Diese Hypothese wurde durch experimentelle Arbeiten unterstützt, die zeigten, daß das Überkommen der replikativen Seneszenz eine Voraussetzung für die maligne Transformation von Zellen ist (Newbold et., al. in Nature, 299, 633-636 (1989); Newbold and Overell in Nature,_304 648- 651 (1983)).
Jedoch ergab sich erst in den letzten Jahren ein Verständnis der molekularen Mechanismen aufgrund derer somatische Zellen den Zustand der replikativen Seneszenz erreichen.
Die Enden eukaryotischer Chromosomen, die Telomere, bestehen aus einfachen repetitiven Sequenzen, deren Integrität essentiell für die Funktion und die Struktur der Chromosomen ist. Jedoch verlieren lineare Chromosomen bei jeder Runde der DNA Replikation eine bestimmte Länge ihrer Telomere, ein Phänomen das von Watson schon 1972 erkannt wurde (Watson in Nature New Biol. 239, 197-201 (1972)). Der kumulative Verlust telomerer DNA über viele Zellteilungen hinweg stellt den Grund des begrenzten replikativen Potentials somatischer Zellen dar, während mehr als 85% aller Tumore des Menschen ein Enzym, die Telomerase, reaktivieren, um den Verlust von Telomeren zu kompensieren und somit immortal werden (siehe Shay und Bacchetti in European Journal of Cancer,_33, 787-791 (1997)). Die Telomerase des Menschen ist ein Ribonukleoprotein (RNP) das sich aus mindestens einer katalytischen Untereinheit (hTERT), sowie einer RNA (hTR) zusammensetzt. Beide Komponenten wurden molekular kloniert und charakterisiert. Biochemisch ist Telomerase eine reverse Transkriptase, die einen Sequenzabschnitt in hTR als Matrize verwendet, um einen Strang der telomeren DNA zu synthetisieren (Morin in Cell 59, 521-529 (1989)). Methoden, Telomeraseaktivität zu identifizieren, als auch Methoden für die Diagnose und Therapie replikativer Senenzenz und Immortalität durch Modulation der Telomere und Telomerase wurden beschrieben (Morin in Cell 59, 521-529 (1989); Kim et al. in Science 266, 2011-2014 (1994))
Inhibitoren von Telomerase können zur Tumor-Therapie verwendet werden, da somatische Zellen, im Gegensatz zu Tumorzellen, nicht von Telomerase abhängig sind.
Ferner wird in der US-Patentschrift Nr. 3,940,422 u.a. die Verbindung trans-3,4-Dimethoxy- zimtsäure-N-anthranilsäure-amid beschrieben, welche insbesondere antiallergische Eigenschaften aufweist.
Es wurde nun gefunden, daß die Carbonsäureamide der allgemeinen Formel
Figure imgf000003_0001
deren Isomere, insbesondere deren trans-lsomere, und deren Salze, insbesondere deren physiologisch verträglichen Salze, überraschenderweise eine Hemmwirkung auf die Telomerase aufweisen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die neuen Carbonsäureamide der obigen allgemeinen Formel I und deren Salze, insbesondere deren physiologisch verträgliche Salze, welche eine Hemmwirkung auf die Telomerase aufweisen, Verfahren zu ihrer Herstellung, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung. Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der obigen Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I bei der Hemmung der Telomerase und die Herstellung eines entsprechenden Arzneimittels.
In den neuen Carbonsäureamiden der obigen allgemeinen Formel I bedeutet
R.ι ein Wasserstoffatom, eine C^-Alkyl- oder Trifluormethylgruppe,
R2 ein Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatom oder eine C-^-Alkylgruppe,
R3 ein Wasserstoffatom oder eine C^s-Alkylgruppe,
A eine durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom, durch eine
Figure imgf000004_0001
C3.7-Cycloalkyl-, Phenyl-, Cn-3-Alkoxy-, Cyano-, Trifluormethyl- oder Nitrogruppe substituierte Phenyl- oder Naphthylgruppe, wobei die vorstehend erwähnten monosubstituierten Phenyl- und Naph- thylgruppen zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine C-|.3-Alkyl- oder Ci-3-Alkoxygruppe und die vorstehend erwähnten disubstituierten Phenylgruppen zusätzlich durch eine C^-Alkyl- oder d-3-Alkoxygruppe substituiert sein können,
eine Naphthylgruppe,
eine Chroman- oder Chromengruppe, in der eine Methylengruppe durch eine Carbonyl- gruppe ersetzt sein kann,
oder eine im Kohlenstoffgerüst gegebenenfalls durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine C^-Alkyl- oder C^-Alkoxygruppe substituierte 5- oder 6-gliedrige Heteroaryl- gruppe, wobei die 6-gliedrigen Heteroarylgruppen ein, zwei oder drei Stickstoffatome und die 5-gliedrigen Heteroarylgruppen eine gegebenenfalls durch eine Cι.3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe, ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder eine gegebenenfalls durch eine Cι.3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe und ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder ein oder zwei Stickstoffatome enthalten und zusätzlich an die vorstehend erwähnten monocyc- lischen Heteroarylgruppen über zwei benachbarte Kohlenstoffatome ein Phenylring ankondensiert sein kann, welcher ebenfalls im Kohlenstoffgerüst durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine
Figure imgf000004_0002
substituiert sein kann, und B eine Phenyl- oder Naphthylgruppe, die jeweils durch eine Carboxygruppe, durch eine in- vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe oder durch eine unter physiologischen Bedingungen negativ geladene Gruppe substituiert sind und gegebenenfalls zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch eine C^s-Alkyl-, Trifluormethyl- oder Methoxygruppe substituiert sein können, wobei die vorstehend erwähnten Phenylgruppen zusätzlich
durch eine C^-Alkylgruppe, die durch eine Amino-, C-M-Alkylamino-, DKC^-alky -amino-, C3.7-Cycloalkylamino-, Pyrrolidino-, Piperidino-, Morpholino-, Piperazino- oder N-(C1.3-Alkyl)- piperazinogruppe substituiert ist, substituiert sind,
wobei die bei der Definition der vorstehend erwähnten Reste erwähnten Amino- und Iminogruppen zusätzlich durch einen in-vivo abspaltbaren Rest substituiert sein können.
Unter einer in-vivo in eine Carboxygruppe überführbaren Gruppe ist beispielsweise eine Hy- droxymethylgruppe, eine mit einem Alkohol veresterte Carboxygruppe, in der der alkoholische Teil vorzugsweise ein Cvβ-Alkanol, ein Phenyl-Cι_3-alkanol, ein C3.9-Cycloalkanol, wobei ein C5.8-Cycloalkanol zusätzlich durch ein oder zwei Cv-rAlkylgruppen substituiert sein kann, ein C5_8-Cycloalkanol, in dem eine Methylengruppe in 3- oder 4-Stellung durch ein Sauer- stoffatom oder durch eine gegebenenfalls durch eine C1.3-Alkyl-, Phenyl-C1_3-alkyl-, Phenyl- Cι.3-alkoxycarbonyl- oder C2.6-Alkanoylgruppe substituierte Iminogruppe ersetzt ist und der Cycloalkanolteil zusätzlich durch ein oder zwei C^-Alkylgruppen substituiert sein kann, ein C4.7-Cycloalkenol, ein C3^-Alkenol, ein Pheny!-C3.5-a!kenol, ein C3.5-Alkinol oder Phenyl- C3.5-alkinol mit der Maßgabe, daß keine Bindung an das Sauerstoffatom von einem Kohlenstoffatom ausgeht, welches eine Doppel- oder Dreifachbindung trägt, ein C3^-Cycloalkyl- Cι_3-alkanol, ein Bicycloalkanol mit insgesamt 8 bis 10 Kohlenstoffatomen, das im Bicyclo- alkylteil zusätzlich durch eine oder zwei Cι.3-Alkylgruppen substituiert sein kann, ein 1 ,3-Di- hydro-3-oxo-1-isobenzfuranol oder ein Alkohol der Formel
Ra-CO-O-(RbCRc)-OH,
in dem
Ra eine Cι.8-Alkyl-, C5.7~Cycloalkyl-, Phenyl- oder Phenyl-
Figure imgf000005_0001
Rb ein Wasserstoffatom, eine C^-Alky!-, C5.7-Cyc\oa\kyl- oder Phenylgruppe und Rc ein Wasserstoffatom oder eine C|„3-Alkylgruppe darstellen,
unter einer unter physiologischen Bedingungen negativ geladenen Gruppe eine Carboxy-, Hydroxysulfonyl-, Phosphono-, Tetrazol-5-yl-, Phenylcarbonylaminocarbonyl-, Trifluorme- thylcarbonylaminocarbonyl-, C^e-Alkylsulfonylamino-, Phenylsulfonylamino-, Benzylsulfo- nylamino-, Trifluormethylsulfonylamino-, C^-Alkylsulfonylaminocarbonyl-, Phenylsulfonyl- aminocarbonyl-, Benzylsulfonylaminocarbonyl- oder Perfluor-d-e-alkylsulfonylaminocar- bonylgruppe
und unter einem von einer Imino- oder Aminogruppe in-vivo abspaltbaren Rest beispielsweise eine Hydroxygruppe, eine Acylgruppe wie die Benzoyl- oder Pyridinoylgruppe oder eine d.iβ-Alkanoylgruppe wie die Formyl-, Acetyl-, Propionyl-, Butanoyl-, Pentanoyl- oder He- xanoylgruppe, eine Allyloxycarbonylgruppe, eine Cι.16-Alkoxycarbonylgruppe wie die Meth- oxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl-, Propoxycarbonyl-, Isopropoxycarbonyl-, Butoxycarbonyl-, teil. Butoxycarbonyl-, Pentoxycarbonyl-, Hexoxycarbonyl-, Octyloxycarbonyl-, Nonyloxycar- bonyl-, Decyloxycarbonyl-, Undecyloxycarbonyl-, Dodecyloxycarbonyl- oder Hexadecyloxy- carbonylgruppe, eine Phenyl-CLβ-alkoxycarbonylgruppe wie die Benzyloxycarbonyl-, Phenyl- ethoxycarbonyl- oder Phenylpropoxycarbonylgruppe, eine C^-Alkylsulfonyl- C2^-alkoxycar- bonyl-, C ^3-Alkoxy-C2^-alkoxy-C ^-alkoxycarbonyl- oder Ra-CO-O-(RbCRc)-O-CO-Gruppe, in der Ra bis Rc wie vorstehend erwähnt definiert sind,
zu verstehen.
Desweiteren schließen die in den vor- bzw. nachstehenden Definitionen erwähnten gesättigten Alkyl- und Alkoxyteile, die mehr als 2 Kohlenstoffatome enthalten, auch deren verzweigte Isomere wie beispielsweise die Isopropyl-, tert.Butyl-, Isobutylgruppe etc. ein.
Bevorzugte Verbindungen der obigen allgemeinen Formel I sind diejenigen, in denen
R-i ein Wasserstoffatom oder eine C-ι.3-Alkylgruppe,
R2 ein Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatom oder eine C^-Alkylgruppe,
R3 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe, A eine durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom, durch eine d^-Alkyl- oder C-ι.3-Alkoxy- gruppe substituierte Phenyl- oder Naphthylgruppe, die jeweils zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine Cι.3-Alkyl- oder d-3-Alkoxygruppe substituiert sein kann,
eine Naphthylgruppe,
eine Chroman- oder Chromengruppe, in der eine Methylengruppe durch eine Carbonyl- gruppe ersetzt sein kann,
oder eine 5- oder 6-gliedrige Heteroarylgruppe, wobei die 6-gliedrigen Heteroarylgruppen ein, zwei oder drei Stickstoffatome und die 5-gliedrigen Heteroarylgruppen eine gegebenenfalls durch eine d.3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe, ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder eine gegebenenfalls durch eine d.3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe und ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder ein oder zwei Stickstoffatome enthalten und zusätzlich an die vorstehend erwähnten monocyclischen Heteroarylgruppen über zwei benachbarte Kohlenstoffatome ein Phenylring ankondensiert sein kann, und
B eine Phenyl- oder Naphthylgruppe, die jeweils durch eine Carboxygruppe, durch eine in- vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe oder durch eine unter physiologischen Bedingungen negativ geladene Gruppe substituiert sind und gegebenenfalls zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch eine Cι.3-Alkyl-, Trifluormethyl- oder Methoxygruppe substituiert sein können, wobei die vorstehend erwähnten Phenylgruppen zusätzlich
durch eine d_3-Alkylgruppe, die durch eine Amino-, d^-Alkylamino-, Di-(d-4-alkyl)- amino-, C3.7-Cycloalkylamino-, Pyrrolidino-, Piperidino-, Morpholino-, Piperazino- oder N-(Cι„3-Alkyl)-piperazinogruppe substituiert ist, substituiert sind, bedeuten,
deren Isomere und deren Salze.
Besonders bevorzugte Verbindungen der obigen allgemeinen Formel I sind diejenigen, in denen
RT ein Wasserstoffatom oder eine d-3-Alkylgruppe, R2 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe,
R3 ein Wasserstoffatom,
A eine durch Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatome, durch d.5-Alkyl- oder Methoxygruppen mono- oder disubstituierte Phenylgruppe, wobei die Substituenten gleich oder verschieden sein können, oder
eine gegebenenfalls durch durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine Methyl- oder Methoxygruppe substituierte Naphthylgruppe,
eine Chromengruppe, in der eine Methylengruppe durch eine Carbonylgruppe ersetzt ist, oder
eine gegebenenfalls durch eine Methylgruppe substituierte Benzofuryl-, Benzothienyl-, Chinolyl- oder Isochinolylgruppe und
B eine durch eine Carboxygruppe substituierte Naphthylgruppe oder
eine durch eine Carboxy-, Methoxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl- oder Tetrazolylgruppe substituierte Phenylgruppe, die gegebenenfalls durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch eine d.3-Alkyl-, eine Trifluormethyl- oder eine Methoxygruppe substituiert sein kann und zusätzlich
durch eine d.3-Alkylgruppe, die durch eine Amino-, C^-Alkylamino-, Di-(C1^-alkyl)- amino-, C3.7-Cycloalkylamino-, Pyrrolidino-, Piperidino-, Morpholino-, Piperazino- oder N-(C1.3-Alkyl)-piperazinogruppe substituiert ist, substituiert ist, bedeuten,
deren Isomere und deren Salze.
Ganz besonders bevorzugte neue Verbindungen der obigen allgemeinen Formel I sind diejenigen, in denen
Ri, R2, R3 und A wie zuvor definiert sind, und B die zuvor angegebenen Bedeutungen hat, wobei sich der Carboxy-, Methoxy- carbonyl-, Ethoxycarbonyl- oder Tetrazolyl-Substituent in 2-Position und die Alkylgruppe, die wie oben angegeben substituiert ist, in 5-Position des Phenylrings befindet,
bedeuten, deren Isomere und deren Salze,
insbesondere jedoch diejenigen Verbindungen der allgemeinen Formel I, in denen
Ri eine Methylgruppe,
R2 ein Wasserstoffatom,
R3 ein Wasserstoffatom,
A eine Naphthylgruppe
und B eine 2-Carboxy-phenylgruppe bedeuten, wobei die vorstehend erwähnte 2-Carboxy- phenylgruppe zusätzlich im Phenylkern
in 5-Position durch eine Methylgruppe, die durch eine Amino-,
Figure imgf000009_0001
Di- (d-3-alkyl)-amino-, Cyclopentylamino- oder Pyrrolidinogruppe substituiert ist, substituiert ist,
deren Isomere und deren Salze.
Als besonders bevorzugte Verbindungen seien beispielsweise folgende erwähnt:
(1) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-dimethylaminomethyl-phenyl)-amid,
(2) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-[2-carboxy-5-(pyrrolidin-1-yl)methyl-phenyl]-amid,
(3) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-ethylaminomethyl-phenyl)-amid,
(4) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-isopropylaminomethyl-phenyl)-amid, (5) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-cyclopentylaminomethyl-phenyl)- amid,
sowie deren Salze.
Die Carbonsäureamide der obigen allgemeinen Formel I erhält man beispielsweise nach folgenden an und für sich bekannten Verfahren:
a. Acylierung eines Amins der allgemeinen Formel
R,
,N- B ' ( I I )
H in der
R3 wie eingangs erwähnt definiert ist und
B' B oder eine durch Umwandlung einer Hydroxyalkyl- in eine gegebenenfalls substituierte
Aminoalkylgruppe in B überführbare Gruppe bedeutet, mit einer Carbonsäure der allgemeinen Formel
Figure imgf000010_0001
in der
Ri, R2, und A wie eingangs erwähnt definiert sind, oder deren reaktionsfähigen Derivate.
Die Acylierung wird zweckmäßigerweise mit einem entsprechenden Halogenid oder Anhydrid in einem Lösungsmittel wie Methylenchlorid, Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff, Ether, Tetra- hydrofuran, Dioxan, Benzol, Toluol, Acetonitril, Dimethylformamid oder Sulfolan gegebenenfalls in Gegenwart einer anorganischen oder organischen Base wie Triethylamin, N-Ethyl- diisopropylamin, N-Methyl-morpholin oder Pyridin bei Temperaturen zwischen -20 und 200°C, vorzugsweise jedoch bei Temperaturen zwischen -10 und 160°C, durchgeführt.
Die Acylierung kann jedoch auch mit der freien Säure gegebenenfalls in Gegenwart eines die Säure aktivierenden Mittels oder eines wasserentziehenden Mittels, z.B. in Gegenwart von Chlorameisensäureisobutylester, Thionylchlorid, Trimethylchlorsilan, Chlorwasserstoff, Schwefelsäure, Methansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Phosphortrichlorid, Phosphor- pentoxid, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid/N-Hydroxysuccinimid oder 1-Hydroxy-benztriazol, N,N'-Carbonyldiimidazol oder N,N'-Thionyldiimidazol oder Triphenylphosphin/Tetrachlorkohlenstoff, bei Temperaturen zwischen -20 und 200°C, vorzugsweise jedoch bei Temperaturen zwischen -10 und 160°C, durchgeführt werden.
Wenn B eine substituierte oder unsubstituierte Aminoalkylgruppe enthält, kann als Edukt für die Acylierung das gegebenenfalls geschützte Hydroxyalkyl-Derivat verwendet werden. Als Schutzgruppen kommen beispielsweise die Trimethylsilyl- oder tert.Butyl-diphenyisilylgruppe in Frage, die nach einem der in der Literatur oder im folgenden beschrieben Verfahren eingeführt bzw. abgespalten werden können.
Im Anschluß an die Acylierung wird die Schutzgruppe abgespalten und die Hydroxygruppe nach an sich bekannnten Verfahren in eine gute Abgangsgruppe, wie z.B. in eine Methylsul- fonyl-, Triflat-, Benzylsulfonylgruppe oder in ein Halogenatom überführt und durch Reaktion mit dem entsprechenden Amin und Abspaltung eventuell noch vorhandener Schutzgruppen zu der gewünschten Endverbindung umgesetzt.
b. Zur Herstellung eines Carbonsäureamids der allgemeinen Formel I, das eine Carboxygruppe enthält:
Überführung einer Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000011_0001
in der Ri bis R3, A und B mit der Maßgabe wie eingangs erwähnt definiert sind, daß A oder B oder A und B eine in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe enthalten, in eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Carboxygruppe enthält.
Als eine in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe kommt beispielsweise eine durch einen Schutzrest geschützte Carboxylgruppe wie deren funktionelle Derivate, z. B. deren unsubstituierte oder substituierte Amide, Ester, Thioester, Trimethylsilylester, Orthoester oder Imi- noester, welche zweckmäßigerweise mittels Hydrolyse in eine Carboxylgruppe übergeführt werden,
deren Ester mit tertiären Alkoholen, z.B. der tert. Butylester, welche zweckmäßigerweise mittels Behandlung mit einer Säure oder Thermolyse in eine Carboxylgruppe übergeführt werden, und
deren Ester mit Aralkanolen, z.B. der Benzylester, welche zweckmäßigerweise mittels Hydrogenolyse in eine Carboxylgruppe übergeführt werden, in Betracht.
Die Hydrolyse wird zweckmäßigerweise entweder in Gegenwart einer Säure wie Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Trichloressigsäure, Trifluoressigsäure oder deren Gemischen oder in Gegenwart einer Base wie Lithiumhydroxid, Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid in einem geeigneten Lösungsmittel wie Wasser, Wasser/Methanol, Was- ser/Ethanol, Wasser/Isopropanol, Methanol, Ethanol, Wasser/Tetrahydrofuran oder Was- ser/Dioxan bei Temperaturen zwischen -10 und 120°C, z.B. bei Temperaturen zwischen Raumtemperatur und der Siedetemperatur des Reaktionsgemisches, durchgeführt.
Die Überführung einer tert. Butyloxycarbonylgruppe in eine Carboxygruppe kann auch durch Behandlung mit einer Säure wie Trifluoressigsäure, Ameisensäure, p-Toluolsulfonsäure, Schwefelsäure, Salzsäure, Phosphorsäure oder Polyphosphorsäure gegebenenfalls in einem inerten Lösungsmittel wie Methylenchlorid, Chloroform, Benzol, Toluol, Diethylether, Tetra- hydrofuran oder Dioxan vorzugsweise bei Temperaturen zwischen -10 und 120°C, z.B. bei Temperaturen zwischen 0 und 60°C, oder auch thermisch gegebenenfalls in einem inerten Lösungsmittel wie Methylenchlorid, Chloroform, Benzol, Toluol, Tetrahydrofuran oder Dioxan und vorzugsweise in Gegenwart einer katalytischen Menge einer Säure wie p-Toluolsulfon- säure, Schwefelsäure, Phosphorsäure oder Polyphosphorsäure vorzugsweise bei der Siedetemperatur des verwendeten Lösungsmittels, z.B. bei Temperaturen zwischen 40 und 120°C, durchgeführt werden. Die Überführung einer Benzyloxy- oder Benzyloxycarbonylgruppe in eine Carboxygruppe kann auch hydrogenolytisch in Gegenwart eines Hydrierungskatalysators wie Palladium/Kohle in einem geeigneten Lösungsmittel wie Methanol, Ethanol, Ethanol/Wasser, Eisessig, Essigsäureethylester, Dioxan oder Dimethylformamid vorzugsweise bei Temperaturen zwischen 0 und 50°C, z.B. bei Raumtemperatur, und einem Wasserstoffdruck von 1 bis 5 bar durchgeführt werden.
Erhält man erfindungsgemäß eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Hydroxy- gruppe enthält, so kann diese mittels eines Sulfonylhalogenids in eine entsprechende Sulfonyloxyverbindung übergeführt werden, oder
eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Cyanogruppe enthält, so kann diese mittels Stickstoffwasserstoffsäure in eine entsprechende Tetrazolylverbindung übergeführt werden, oder
eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Amino- oder Iminogruppe mit einem basischen Wasserstoffatom enthält, so kann diese mittels Acylierung oder Sulfonierung in eine entsprechend acylierte Verbindung oder in eine entsprechende Pro-Drug-Verbindung übergeführt werden, oder
eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Carboxygruppe enthält, so kann diese in eine Verbindung, die eine in-vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe enthält, übergeführt werden, oder
eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine oder zwei Carboxygruppen enthält, so kann diese mittels Reduktion mit einem komplexen Metallhydrid in eine Verbindung, die eine oder zwei Hydroxymethylgruppen enthält, übergeführt werden.
Die nachträgliche Sulfonierung wird zweckmäßigerweise mit einem entsprechenden Halogenid in einem Lösungsmittel wie Methylenchlorid, Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff, Ether, Tetrahydrofuran, Dioxan, Benzol, Toluol, Acetonitril oder Sulfolan gegebenenfalls in Gegenwart einer anorganischen oder organischen Base wie Triethylamin, N-Ethyl-diisopropylamin, N-Methyl-morpholin oder Pyridin bei Temperaturen zwischen -20 und 200°C, vorzugsweise jedoch bei Temperaturen zwischen -10 und 160°C, durchgeführt. Die nachträgliche Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Tetrazol- gruppe enthält, wird vorzugsweise in einem Lösungsmittel wie Benzol, Toluol oder Dimethylformamid bei Temperaturen zwischen 80 und 150°C, vorzugsweise bei 120 und 130°C, durchgeführt. Hierbei wird zweckmäßigerweise die erforderliche Stickstoffwasserstoffsäure während der Umsetzung aus einem Alkaliazid, z.B. aus Natriumazid, in Gegenwart einer schwachen Säure wie Ammoniumchlorid freigesetzt. Die Umsetzung kann auch mit einem anderen Salz oder Derivat der Stickstoffwasserstoffsäure, vorzugsweise mit Aluminiumazid oder Tributylzinnazid, erfolgen, wobei man dann die gegebenenfalls so erhaltene Tetrazol- verbindung aus dem im Reaktionsgemisch enthaltenem Salz durch Ansäuern mit einer verdünnten Säure wie 2N Salzsäure oder 2N Schwefelsäure freisetzt.
Die nachträgliche Acylierung oder Sulfonierung oder die nachträgliche Überführung in eine entsprechende Pro-Drug-Verbindung wird vorzugsweise mit einem entsprechenden Säure- halogenid in einem Lösungsmittel wie Methylenchlorid, Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff, Ether, Tetrahydrofuran, Dioxan, Benzol, Toluol, Acetonitril oder Sulfolan gegebenenfalls in Gegenwart einer anorganischen oder organischen Base wie Triethylamin, N-Ethyl-diiso- propylamin, N-Methyl-morpholin oder Pyridin bei Temperaturen zwischen -20 und 200°C, vorzugsweise jedoch bei Temperaturen zwischen -10 und 160°C, durchgeführt.
Die nachträgliche Überführung einer Carboxygruppe in eine in-vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe wird vorzugsweise durch Veresterung mit einem entsprechenden Alkohol oder durch Alkylierung der Carboxygruppe durchgeführt. Hierbei wird die Veresterung zweckmäßigerweise in einem Lösungsmittel oder Lösungsmittelgemisch wie Methylenchlorid, Benzol, Toluol, Chlorbenzol, Tetrahydrofuran, Benzol/Tetrahydrofuran oder Dioxan, vorzugsweise jedoch in einem Überschuß des eingesetzten Alkohols in Gegenwart eines wasserentziehenden Mittels, z.B. in Gegenwart von Salzsäure, Schwefelsäure, Chiorameisen- säureisobutylester, Thionylchlorid, Trimethylchlorsilan, Salzsäure, Schwefelsäure, Methan- sulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Phosphortrichlorid, Phosphorpentoxid, 2-(1 H-Benzotriazol- 1-yI)-1 ,1,3,3-tetramethyluronium-tetrafluorborat, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N,N'-Di- cyclohexylcarbodiimid/N-Hydroxysuccinimid, N,N'-Carbonyldiimidazol- oder N,N'-Thionyl- diimidazol, Triphenylphosphin/Tetrachlorkohlenstoff oder Triphenylphosphin/Azodicarbon- säurediethylester gegebenenfalls in Gegenwart einer Base wie Kaliumcarbonat, N-Ethyl- diisopropylamin oder N,N-Dimethy!amino-pyridin zweckmäßigerweise bei Temperaturen zwischen 0 und 150°C, vorzugsweise bei Temperaturen zwischen 0 und 80°C, und die Alkylierung mit einem entsprechenden Halogenid zweckmäßigerweise in einem Lösungs- mittel wie Methylenchlorid, Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid oder Aceton gegebenenfalls in Gegenwart eines Reaktionsbeschleunigers wie Natrium- oder Kaliumiodid und vorzugsweise in Gegenwart einer Base wie Natriumcarbonat oder Kalium- carbonat oder in Gegenwart einer tertiären organischen Base wie N-Ethyl-diisopropylamin oder N-Methyl-morpholin, welche gleichzeitig auch als Lösungsmittel dienen können, oder gegebenenfalls in Gegenwart von Silberkarbonat oder Silberoxid bei Temperaturen zwischen -30 und 100°C, vorzugsweise jedoch bei Temperaturen zwischen -10 und 80°C, durchgeführt.
Die anschließende Reduktion wird vorzugsweise in Gegenwart eines komplexen Metallhydrids wie Lithiumaluminiumhydrid oder Lithiumtriethylborhydrid in einem Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran zweckmäßigerweise bei der Siedetemperatur des verwendeten Lösungsmittel durchgeführt.
Bei den vorstehend beschriebenen Umsetzungen können gegebenenfalls vorhandene reaktive Gruppen wie Hydroxy-, Carboxy-, Amino-, Alkylamino- oder Iminogruppen während der Umsetzung durch übliche Schutzgruppen geschützt werden, welche nach der Umsetzung wieder abgespalten werden.
Beispielsweise kommt als Schutzrest für eine Hydroxygruppe die Trimethylsilyl-, tert.Butyl- diphenylsilyl-, Acetyl-, Benzoyl-, Methyl-, Ethyl-, tert-Butyl-, Trityl-, Benzyl-, Methylsulfonyl- oder Tetrahydropyranylgruppe,
als Schutzreste für eine Carboxygruppe die Trimethylsilyl-, Methyl-, Ethyl-, tert-Butyl-, Benzyl- oder Tetrahydropyranylgruppe, und
als Schutzreste für eine Amino-, Alkylamino- oder Iminogruppe die Formyl-, Acetyl-, Trifluoracetyl-, Ethoxycarbonyl-, tert. Butoxycarbonyl-, Benzyloxycarbonyl-, Benzyl-, Methoxybenzyl- oder 2,4-Dimethoxybenzylgruppe und für die Aminogruppe zusätzlich die Phthalylgruppe in Betracht.
Die gegebenenfalls anschließende Abspaltung eines verwendeten Schutzrestes erfolgt beispielsweise hydrolytisch in einem wässrigen Lösungsmittel, z.B. in Wasser, Isopro- panol/Wasser, Essigsäure/Wasser, Tetrahydrofuran/Wasser oder Dioxan/Wasser, in Gegenwart einer Säure wie Trifluoressigsäure, Salzsäure oder Schwefelsäure oder in Gegenwart einer Alkalibase wie Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid oder aprotisch, z.B. in Gegenwart von Jodtrimethylsilan, bei Temperaturen zwischen 0 und 120°C, vorzugsweise bei Temperaturen zwischen 10 und 100°C.
Die Abspaltung eines Benzyl-, Methoxybenzyl- oder Benzyloxycarbonylrestes erfolgt jedoch beispielsweise hydrogenolytisch, z.B. mit Wasserstoff in Gegenwart eines Katalysators wie Palladium/Kohle in einem geeigneten Lösungsmittel wie Methanol, Ethanol, Essigsäure- ethylester oder Eisessig gegebenenfalls unter Zusatz einer Säure wie Salzsäure bei Temperaturen zwischen 0 und 100°C, vorzugsweise jedoch bei Raumtemperaturen zwischen 20 und 60°C, und bei einem Wasserstoffdruck von 1 bis 7 bar, vorzugsweise jedoch von 3 bis 5 bar. Die Abspaltung eines 2,4-Dimethoxybenzylrestes erfolgt jedoch vorzugsweise in Trifluoressigsäure in Gegenwart von Anisol.
Die Abspaltung eines tert.-Butyl- oder tert.-Butyloxycarbonylrestes erfolgt vorzugsweise durch Behandlung mit einer Säure wie Trifluoressigsäure oder Salzsäure oder durch Behandlung mit Jodtrimethylsilan gegebenenfalls unter Verwendung eines Lösungsmittels wie Methylenchlorid, Dioxan, Methanol oder Diethylether.
Die Abspaltung eines Trifluoracetylrestes erfolgt vorzugsweise durch Behandlung mit einer Säure wie Salzsäure gegebenenfalls in Gegenwart eines Lösungsmittels wie Essigsäure bei Temperaturen zwischen 50 und 120°C oder durch Behandlung mit Natronlauge gegebenenfalls in Gegenwart eines Lösungsmittels wie Tetrahydrofuran bei Temperaturen zwischen 0 und 50°C.
Die Abspaltung eines Phthalylrestes erfolgt vorzugsweise in Gegenwart von Hydrazin oder eines primären Amins wie Methylamin, Ethylamin oder n-Butylamin in einem Lösungsmittel wie Methanol, Ethanol, Isopropanol, Toluol/Wasser oder Dioxan bei Temperaturen zwischen 20 und 50°C.
Die als Ausgangsstoffe verwendeten Verbindungen der allgemeinen Formeln II bis IV sind teilweise literaturbekannt, dies können jedoch nach literaturbekannten Verfahren hergestellt werden.
Ferner können die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel I, wie bereits eingangs erwähnt wurde, in ihre Enantiomeren und/oder Diastereomeren aufgetrennt werden. So können beispielsweise Verbindungen mit mindestens einem optisch aktiven Kohlenstoffatom in ihre Enantiomeren aufgetrennt werden.
So lassen sich beispielsweise die erhaltenen Verbindungen der allgemeinen Formel I, welche in Racematen auftreten, nach an sich bekannten Methoden (siehe Allinger N. L. und Eliel E. L. in "Topics in Stereochemistry", Vol. 6, Wiley Interscience, 1971) in ihre optischen Antipoden und Verbindungen der allgemeinen Formel I mit mindestes 2 stereogenen Zentren auf Grund ihrer physikalisch chemischen Unterschiede nach an sich bekannten Methoden, z.B. durch Chromatographie und/oder fraktionierte Kristallisation, in ihre Diastereomeren auftrennen, die, falls sie in racemischer Form anfallen, anschließend wie oben erwähnt in die Enantiomeren getrennt werden können.
Desweiteren können die erhaltenen Verbindungen der Formel I in ihre Salze, insbesondere für die pharmazeutische Anwendung in ihre physiologisch verträglichen Salze mit anorganischen oder organischen Säuren, übergeführt werden. Als Säuren kommen hierfür beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Methansulfonsäure, Phosphorsäure, Fumarsäure, Bernsteinsäure, Milchsäure, Zitronensäure, Weinsäure oder Maleinsäure in Betracht.
Außerdem lassen sich die so erhaltenen neuen Verbindungen der Formel I, falls diese eine saure Gruppe wie eine Carboxygruppe enthalten, gewünschtenfalls anschließend in ihre Salze mit anorganischen oder organischen Basen, insbesondere für die pharmazeutische Anwendung in ihre physiologisch verträglichen Salze, überführen. Als Basen kommen hierbei beispielsweise Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Arginin, Lysin, Cyclohexylamin, Ethanol- amin, Diethanolamin und Triethanolamin in Betracht.
Wie bereits eingangs erwähnt, weisen die Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I und deren Salze, insbesondere deren physiologisch verträglichen Salze, eine Hemmwirkung auf die Telomerase auf.
Die Hemmungwirkung der Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I auf die Telomerase wurde wie folgt untersucht:
Material und Methoden: 1.Herstellung von Kernextrakten aus HeLa Zellen: Die Herstellung von Kernextrakten erfolgte in Anlehnung an Dignam (Dignam et al. in Nucleic Acids Res. J, 1475-1489 (1983)). Alle Arbeitsschritte wurden bei 4°C durchgeführt, alle Geräte sowie Lösungen waren auf 4°C vorgekühlt. Mindestens 1 x 109 in Suspensionskultur wachsende HeLa-S3 Zellen (ATCC Katalognummer CCL-2.2) wurden durch Zentrifugation für 5 Minuten bei 1000 x g geemtet und einmal mit PBS Puffer gewaschen (140 mM KCI; 2J mM KCI; 8.1 mM Na2HPO4; 1.5 mM KH2PO4). Nach Bestimmen des Zellvolumens wurden die Zellen im 5-fachen Volumen hypotonischen Puffer (10 mM HEPES/KOH, pH 7.8; 10 mM KCI; 1.5 mM MgCI2) suspendiert und anschließend für 10 Minuten bei 4°C belassen. Nach Zentrifugation für 5 Minuten bei 1000 x g wurde das Zellpellet im 2-fachen Volumen hypotonischen Puffer in Gegenwart von 1 mM DTE und 1 mM PMSF suspendiert und mit einem Dounce-Homogenisator aufgebrochen. Das Homogenat wurde mit 0.1 Volumen 10-fach Salzpuffer (300 mM HEPES/KOH, pH 7.8; 1.4 M KCI; 30 mM MgCI2) isotonisch eingestellt. Die Zellkerne wurden mittels Zentrifugation von den Bestandteilen des Zytoplasmas abgetrennt und anschließend im 2-fachen Volumen Kernextraktionspuffer (20 mM HEPES/KOH, pH 7.9; 420 mM KCI; 1.5 mM MgCI2; 0.2 mM EDTA; 0.5 mM DTE; 25% Glyzerin) suspendiert. Die Kerne wurden mit einem Dounce- Homogenisator aufgebrochen und für 30 Minuten bei 4°C unter schwachem Rühren inkubiert. Nicht-lösliche Bestandteile wurden durch Zentrifugation für 30 Minuten bei 10.000 UPM (SS-34 Rotor) abgetrennt. Anschließend wurde der Kernextrakt für 4-5 Stunden gegen Puffer AM-100 (20 mM Tris/HCI, pH 7.9; 100 mM KCI; 0.1 mM EDTA; 0.5 mM DTE; 20% Glyzerin) dialysiert. Die erhaltenen Kernextrakte wurden in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei -80°C gelagert.
2. Telomerase Test: Die Aktivität von Telomerase in Kernextrakten aus HeLa Zellen wurde in Anlehnung an Morin bestimmt (Morin in Cell 59, 521-529 (1989)). Der Kernextrakt (bis zu 20 μl pro Reaktion) wurde in einem Volumen von 40 μl in Gegenwart von 25 mM Tris/HCI pH 8.2, 1.25 mM dATP, 1.25 mM TTP, 6.35 μM dGTP; 15 μCi α-32P-dGTP (3000 Ci/mmol), 1 mM MgCI2, 1 mM EGTA, 1.25 mM Spermidin, 0.25 U RNasin, sowie 2.5 μM eines Oligo- nukleotid-Primers (zum Beispiel TEA-fw [CAT ACT GGC GAG CAG AGT T], oder TTA GGG TTA GGG TTA GGG) für 120 Minuten bei 30°C inkubiert (= Telomerasereaktion). Sollte die Inhibitionskonstante potentieller Telomerase-Inhibitoren bestimmt werden, so wurden diese noch zusätzlich jeweils im Konzentrationsbereich von 1 nM bis 100 μM zur Telomerasereaktion zugesetzt.
Anschließend wurde die Reaktion durch Zusatz von 50 μl RNase Stop Puffer (10 mM Tris/HCL, pH 8.0; 20 mM EDTA; 0.1 mg/ml RNase A 100 U/ml RNase T1 ; 1000 cpm eines α- 32P-dGTP markierten, 430 bp DNA-Fragmentes) beendet und für weitere 15 Minuten bei 37°C inkubiert. Im Reaktionsansatz vorhandene Proteine wurden durch Zusatz von 50 μl Proteinase K Puffer (10 mM Tris/HCL, pH 8.0; 0.5% SDS; 0.3 mg/ml Proteinase K) und einer anschließenden Inkubation für 15 min bei 37°C gespalten. Die DNA wurde durch 2-fache Phenol-Chloroform Extraktion gereinigt und durch Zusatz von 2.4 M Ammoniumacetat; 3 μg tRNA und 750 μl Ethanol gefällt. Anschließend wurde die präzipitierte DNA mit 500 μl 70% Ethanol gewaschen, bei Raumtemperatur getrocknet, in 4 μl Formamid Probenpuffer (80% (V/V) Formamid; 50 mM Tris-Borat, pH 8.3; 1 mM EDTA; 0.1 (w/v) Xylen Cyanol; 0.1% (w/V) Bromphenolblau) aufgenommen und auf einem Sequenzgel (8% Polyacrylamid, 7 M Harnstoff, 1 x TBE Puffer) elektrophoretisch aufgetrennt. Die durch Telomerase in Abwesenheit oder Anwesenheit potentieller Inhibitoren synthetisierte DNA wurde mittels Phospho- Imager Analyse (Molecular Dynamics) identifiziert und quantifiziert. Hierbei diente das mit dem RNase Stop Puffer zugesetzte, radioaktiv markierte, DNA Fragment als interne Kontrolle für die Ausbeute.
Die Inhibitoren der Beispiele 1 bis 5 hemmten bei einer Konzentration von 5 μM die Telomeraseaktivität zu mehr als 50%.
Vorstehend wurden folgende Abkürzungen verwendet:
bp Basenpaare
DNA Desoxyribonucleinsäure
DTE 1 ,4-Dithioerythrit dATP Desoxyadenosintriphosphat dGTP Desoxyguanosintriphosphat
EDTA Ethylendiamin-tetraessigsäure
EGTA Ethylenglykol-bis-(2-aminoethyl)-tetraessigsäure
HEPES 4-(2-Hydroxyethyl)-piperazin-1-ethansulfonsäure
PMSF Phenylmethansulfonylfluorid
RNase Ribonuclease
Rnasin® Ribonuclease-Inhibitor (Promega GmbH, Mannheim) tRNA transfer-Ribonucleinsäure
TTP Thymidintriphosphat
TRIS Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan
TBE TRIS-borat-EDTA UpM Umdrehungen pro Minute
Auf Grund ihrer biologische Eigenschaften eignen sich die Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I zur Behandlung pathophysiologischer Prozesse, die durch eine erhöhte Telomerase-Aktivität gekennzeichnet sind. Das sind z.B. Tumorerkrankungen wie Karzinome, Sarkome sowie Leukämien einschließlich Hautkrebs (z.B. Plattenepithelkarzinom, Basaliom, Melanom), Kleinzelliges Bronchialkarzinom, Nicht-kleinzelliges Bronchialkarzinom, Speicheldrüsenkarzinom, Speiseröhrenkarzinom, Kehlkopfkarzinom, Mundhöhlenkarzinom, Schilddrüsenkarzinom, Magenkarzinom, Kolorektales Karzinom, Pankreaskarzinom, Bauchspeicheldrüsenkarzinom, Leberkarzinom, Brustkarzinom, Uteruskarzinom, Vaginalkarzinom, Ovarialkarzinom, Prostatakarzinom, Hodenkarzinom, Blasenkarzinom, Nierenkarzinom, Wilms Tumor, Retinoblastom, Astrocytom, Oligodendrogliom, Meningiom, Neuroblastom, Myelom, Medulloblastom, Neurofibrosarkom, Thymom, Osteosarkom, Chondrosarkom, Ewing Sarkom, Fibrosarkom, Histiozytom, Dermatofibrosarkom, Synovialom, Leiomyosar- kom, Rhabdomyosarkom, Liposarkom, Hodgkin Lymphom, Non-Hodgkin Lymphom, chronische myeloische Leukämie, chronische lymphatische Leukämie, akute promy- elozytische Leukämie, akute lymphoblastische Leukämie und akute myeloische Leukämie.
Außerdem können die Verbindungen auch zur Behandlung anderer Krankheiten verwendet werden, die eine erhöhte Zellteilungsrate bzw. erhöhte Telomerase-Aktivität aufweisen, wie z.B. epidermale Hyperproliferation (Psoriasis), entzündliche Prozesse (Rheumatoide Arthritis), Erkrankungen des Immunsystems etc.
Die Verbindungen sind auch nützlich zur Behandlung von parasitischen Erkrankungen in Mensch und Tier, wie z.B. Wurm- oder Pilzerkrankungen sowie Erkrankungen, die durch protozoische Pathogene hervorgerufen werden, wie z.B. Zooflagellata (Trypanosoma, Leishmania, Giardia), Rhizopoda (Entamoeba spec), Sporozoa (Plasmodium spec, Toxoplasma spec), Ciliata etc.
Hierzu können die Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I gegebenenfalls in Kombination mit anderen pharmakologisch wirksamen Verbindungen und Therapieformen, die eine Verminderung der Tumorgröße erzielen, angewendet und in die üblichen galenischen Anwendungsformen eingearbeitet werden. Diese können beispielsweise in der Tumortherapie in Monotherapie oder in Kombination mit Bestrahlung, chirurgischen Eingriffen oder anderen Anti-Tumor Therapeutika, beispielsweise in Kombination mit Topoisomerase- Inhibitoren (z.B. Etoposide), Mitoseinhibitoren (z.B. Paclitaxel, Vinblastin), Zellzyklusinhibi- toren (z.B.' Flavopyridol), Inhibitoren der Signaltransduktion (z.B. Farnesyltransferase Inhibitoren), mit Nukleinsäure interagierenden Verbindungen (z.B. cis-Platin, Cyclophosphamid, Adriamycin), Hormon-Antagonisten (z.B. Tamoxifen), Inhibitoren metabolischer Prozesse (z.B. 5-FU etc.), Zytokinen (z.B. Interferonen), Tumorvakzinen, Antikörpern etc. verwendet werden. Diese Kombinationen können entweder simultan oder sequentiell verabreicht werden.
Die Tagesdosis beträgt hierbei 0,1 bis 3 g per os oder intravenös, verteilt auf ein bis viermal täglich. Hierzu lassen sich die Verbindungen der allgemeinen Formel I, gegebenenfalls in Kombination mit den oben erwähnten anderen Wirksubstanzen zusammen mit einem oder mehreren inerten üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln, z.B. mit Maisstärke, Milchzucker, Rohrzucker, mikrokristalliner Zellulose, Magnesiumstearat, Polyvinylpyrrolidon, Zitronensäure, Weinsäure, Wasser, Was- ser/Ethanol, Wasser/Glycerin, Wasser/Sorbit, Wasser/Polyäthylenglykol, Propylen- glykol, Cetylstearylalkohol, Carboxymethylcellulose oder fetthaltigen Substanzen wie Hartfett oder deren geeigneten Gemischen, in übliche galenische Zubereitungen wie Tabletten, Dragees, Kapseln, Pulver, Suspensionen oder Zäpfchen einarbeiten.
Die nachfolgende Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern:
Beispiel 1
trans-3-(Näpht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-dimethylaminomethyl-phenyl)-amid
Figure imgf000022_0001
a) 2-Amino-4-tertbutyldiphenylsilyloxymethyl-benzoesäuremethylester
1.25 g (6.90 mmol) 2-Amino-4-hydroxymethyl-benzoesäuremethylester (Synthese s. J.Med.
Chem., 1991 , 34, 2142) wurde zu einer Lösung aus 2.37 g (8.62 mmol) tert.-Butyldiphenyl- silylchlorid und 1.20 g (17.6 mml) Imidazol in 40 ml Dimethylformamid getropft und 5 h bei
Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde abdestilliert, das Rohprodukt wurde in
Wasser aufgenommen und 2 x mit Essigester extrahiert. Die organische Phase wurde mit
Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Man erhielt mit tert-
Butyldiphenylhydroxysilan verunreinigte Titelverbindung.
Ausbeute: 3J g
C25H29NO3Si (419.60)
RrWert: 0.8 (Kieselgel; Petrolether/Essigester 7:3)
Massenspektrum: (M-H)" = 419
b) 3-(Napht-2-yl)-but-3-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl-5-tertbutyldiphenylsilyloxymethyl- phenyl)-amid
3J g (max. 6.9 mmol) des 2-Amino-4-tertbutyldiphenylsilyloxymethyl-benzoesäuremethyl- ester-Rohproduktes wurde in 10 ml Dimethylformamid gelöst und sukzessiv mit 4.0 ml (28J mmol) Triethylamin und einer Lösung aus 3.5 g (15.2 mmol) trans-3-(Napht-2-yl)but-2-en- säurechlorid in 10 ml Dimethylformamid versetzt. Anschließend wurde 20 h nachgerührt, das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert, der Rückstand in Wasser suspendiert und mit Essigester extrahiert. Die organische Phase wurde mit Wasser und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Abdestillieren des Lösungs- mittels wurde das Rohprodukt chromatographisch gereinigt (Kieselgel, Essigester/Petrolether 1 :19).
Ausbeute: 1.55 g (2.53 mmol, 37%) C39H39NO4Si (613.84)
Rf-Wert: 0.4 (Kieselgel; Petrolether/Essigester 8:2) Massenspektrum: (M-H)" = 612
(M+H)+ = 614
c) trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl-5-hydroxymethyl-phenyl)-amid
Eine Lösung aus 1.55 g(2.52 mmol) 3-(Napht-2-yl)-but-3-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl-5- tert.butyldiphenylsilyloxymethyl-phenyI)-amid in 50 ml Tetrahydrofuran wurde mit 3.5 ml einer 1-M Tetrabutylammoniumfluorid-Lösung in THF versetzt und 5 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde abdestilliert, der Rückstand in Essigester aufgenommen, mit Wasser gewaschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Abdestillieren des Lösungsmittels wurde das Rohprodukt chromatographisch gereinigt (Kieselgel, Essigester/Petrolether 3:7). Ausbeute: 0.44 g (1.2 mmol, 46%) C23H2ιNO4 (375.43)
Rf-Wert: 0.2 (Kieselgel; Petrolether/Essigester 7:3) Massenspektrum: (2M + Na)+ = 773
d) trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl-5-dimethylaminomethyl-phenyl)- amid
Zu einer Lösung aus 0.37 g(0.986 mmol) trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-meth- oxycarbonyl-5-hydroxymethyl-phenyl)-amid und 0.48 ml (3.4 mmol) Triethylamin in 15 ml Tetrahydrofuran wurde tropfenweise 0.10 ml (1.29 mmol) Methansulfonsäurechlorid zugesetzt, woraufhin sofort ein weißer Niederschlag ausfiel. Es wurde 3 h nachgerührt, filtriert und das Lösungsmittel abdestilliert.
0.15 g (0.22 mmol) des Rohproduktes wurde in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst und mit 0.15 ml (2.5 mmol) Dimethylamin bei 0°C versetzt und 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde abdestilliert, der Rückstand wurde in wenig Essigester gelöst und über eine kurze Kieselgelsäule gereinigt (Eluens: erst Essigester, dann Methanol). Die Titelverbindung wurde ohne weitere Charakterisierung umgesetzt. e) trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-dimethylaminomethyl-phenyl)-amid
Zu einer Lösung aus 60 mg(0.149 mmol) trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-methoxy- carbonyl-5-dimethylaminomethyl-phenyl)-amid in 2.0 ml Methanol wurden 0.50 ml einer 2 M
Kaliumhydroxidlösung zugetropft und anschließend 6 h bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurde die Titelverbindung durch Zugabe von 2M HCI ausgefällt, abfiltriert, gewaschen und getrocknet.
Ausbeute: 11 mg (0.028 mmol, 19%)
C24H24N2O3 (388.47)
RrWert: 0.4 (Kieselgel; Essigester/Ethanol/Ammoniak 50:45:5)
Massenspektrum: (M-H)" = 387
(M+H)+ = 389
(M+Naf = 411
Beispiel 2
trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-[2-carboxy-5-(pyrrolidin-1-yl)methyl-phenyl]-amid
Figure imgf000024_0001
Hergestellt analog Beispiel 1e aus trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-[2-methoxycarbonyl-
5-(pyrrolidin-1-yl)methyl-phenyl]-amid und 2 M Kaliumhydroxidlösung in Methanol.
Ausbeute: 52% der Theorie
C26H26N2O3 (414.51)
RrWert: 0.6 (Kieselgel; Essigester/Ethanol/Ammoniak 50:45:5)
Massenspektrum: (M-H)" = 413
(M+H)+ = 415
(M+Na)+ = 437 Beispiel 3
trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-cärboxy-5-ethylaminomethyl-phenyl)-amid
Figure imgf000025_0001
Hergestellt analog Beispiel 1e aus trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl-
5-ethylaminomethyl-phenyl)-amid und 2 M Kaliumhydroxidlösung in Methanol.
Ausbeute: 34% der Theorie
C24H24N2O3 (388.47)
RrWert: 0.5 (Kieselgel; Essigester/Ethanol/Ammoniak 50:45:5)
Massenspektrum: (M-H)' = 387
Beispiel 4
Figure imgf000025_0002
trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-isopropylaminomethyl-phenyl)-amid
Hergestellt analog Beispiel 1e aus trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl- 5-isopropylaminomethyI-phenyl)-amid und 2 M Kaliumhydroxidlösung in Methanol. Ausbeute: 52% der Theorie C25H24N2O3 (402.50)
RrWert: 0.6 (Kieselgel; Essigester/Ethanol/Ammoniak 50:45:5)
Massenspektrum: (M+H)+ = 403
Beispiel 5
trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-cyclopentylaminomethyl-phenyl)-amid
Figure imgf000026_0001
Hergestellt analog Beispiel 1e aus trans-3-(Napht-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-methoxycarbonyl-
5-cyclopentylaminomethyl-phenyl)-amid und 2 M Kaliumhydroxidlösung in Methanol.
Ausbeute: 40% der Theorie
C27H28N2O3 (428.54)
RrWert: 0.5 (Kieselgel; Essigester/Ethanol/Ammoniak 50:45:5)
Massenspektrum: (M+H)+ = 429
(M+Na)+ = 451
(M-H)" = 427
Beispiel 6
Tabletten/ enthaltend 50 mg Wirkstoff
Wirkstoff 50,0 mg
Calciumphosphat 70,0 mg
Milchzucker 40,0 mg
Maisstärke 35,0 mg
Polyvinylpyrrolidon 3,5 mg
Magnesiumstearat 1 ,5 mg
200,0 mg
Herstellung:
Der Wirkstoff, CaHPOφ Milchzucker und Maisstärke werden mit einer wässrigen PVP-Lö- sung gleichmäßig befeuchtet. Die Masse wird durch ein 2-mm-Sieb gegeben, im Umluft- trockenschrank bei 50°C getrocknet und erneut gesiebt.
Nach Zumischen des Schmiermittels wird das Granulat auf einer Tablettiermaschine verpresst.
Beispiel 7
Dragees, enthaltend 50 mg Wirkstoff
Wirkstoff 50,0 mg
Lysin 25,0 mg
Milchzucker 60,0 mg
Maisstärke 34,0 mg
Gelatine 10,0 mg
Magnesiumstearat 1 ,0 mg
180,0 mg Herstellung:
Der Wirkstoff wird mit den Hilfsstoffen gemischt und mit einer wässrigen Gelatine-Lösung befeuchtet. Nach Siebung und Trocknung wird das Granulat mit Magnesiumstearat vermischt und zu Kernen verpresst.
Die so hergestellten Kerne werden nach bekannten Verfahren mit einer Hülle überzogen. Der Dragiersuspension oder -lösung kann Farbstoff zugegeben werden.
Beispiel 8
Dragees, enthaltend 100 mg Wirkstoff
Wirkstoff 100,0 mg
Lysin 50,0 mg
Milchzucker 86,0 mg
Maisstärke 50,0 mg
Polyvinylpyrrolidon 2,8 mg
Mikrokristalline Cellulose 60,0 mg
Magnesiumstearat 1 ,2 mg
350,0 mg
Herstellung:
Der Wirkstoff wird mit den Hilfsstoffen gemischt und mit einer wässrigen PVP-Lösung befeuchtet. Die feuchte Masse wird durch ein 1,5-mm-Sieb gegeben und bei 45°C getrocknet. Nach dem Trocknen wird erneut gesiebt und das Magnesiumstearat zugemischt. Diese Mischung wird zu Kernen verpreßt.
Die so hergestellten Kerne werden nach bekannten Verfahren mit einer Hülle überzogen. Der Dragiersuspension oder -lösung können Farbstoffe zugegeben werden. Beispiel 9
Kapseln, enthaltend 250 mg Wirkstoff
Wirkstoff 250,0 mg
Maisstärke 68,5 mg
Magnesiumstearat 1 ,5 mg
320,0 mg
Herstellung:
Wirkstoff und Maisstärke werden gemischt und mit Wasser befeuchtet. Die feuchte Masse wird gesiebt und getrocknet. Das trockene Granulat wird gesiebt und mit Magnesiumstearat gemischt. Die Endmischung wird in Hartgelatinekapseln Größe 1 abgefüllt.

Claims

Patentansprüche
1. Carbonsäureamide der allgemeinen Formel
Figure imgf000030_0001
in der
Ri ein Wasserstoffatom, eine C^-Alkyl- oder Trifluormethylgruppe,
R2 ein Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatom oder eine d.3-Alkylgruppe,
R3 ein Wasserstoffatom oder eine d.5-Alkylgruppe,
A eine durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom, durch eine Cι.6-Alkyl-, C3.7-Cycloalkyl-, Phenyl-, d-3-Alkoxy-, Cyano-, Trifluormethyl- oder Nitrogruppe substituierte Phenyl- oder Naphthylgruppe, wobei die vorstehend erwähnten monosubstiuierten Phenyl- und Naphthyl- gruppen zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine d.3-Alkyl- oder d-3-Alkoxygruppe und die vorstehend erwähnten disubstituierten Phenylgruppen zusätzlich durch eine d_3-Alkyl- oder Cι.3-Alkoxygruppe substituiert sein können,
eine Naphthylgruppe,
eine Chroman- oder Chromengruppe, in der eine Methylengruppe durch eine Carbonyl- gruppe ersetzt sein kann,
oder eine im Kohlenstoffgerüst gegebenenfalls durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine d.3-Alkyl- oder Cι.3-Alkoxygruppe substituierte 5- oder 6-gliedrige Heteroaryl- gruppe, wobei die 6-gliedrigen Heteroarylgruppen ein, zwei oder drei Stickstoffatome und die 5-gliedrigen Heteroarylgruppen eine gegebenenfalls durch eine Cι.3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe, ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder eine gegebenenfalls durch eine Cι.3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe und ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder ein oder zwei Stickstoffatome enthalten und zusätzlich an die vorstehend erwähnten mono- cyclischen Heteroarylgruppen über zwei benachbarte Kohlenstoffatome ein Phenylring ankondensiert sein kann, welcher ebenfalls im Kohlenstoffgerüst durch ein Fluor-, Chloroder Bromatom, durch eine Ct.3-Alkyl- oder Cι-3-Alkoxygruppe substituiert sein kann,
und B eine Phenyl- oder Naphthylgruppe, die jeweils durch eine Carboxygruppe, durch eine in-vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe oder durch eine unter physiologischen Bedingungen negativ geladene Gruppe substituiert sind und gegebenenfalls zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch eine C-ι_3-Alkyl-, Trifluormethyl- oder Methoxygruppe substituiert sein können, wobei die vorstehend erwähnten Phenylgruppen zusätzlich
durch eine d. -Alkylgruppe, die durch eine Amino-, d^-Alkylamino-, Di-(d-4~alkyl)- amino-, C3.7-Cycloalkylamino-, Pyrrolidino-, Piperidino-, Morpholino-, Piperazino- oder N-(d_3-Alkyl)-piperazinogruppe substituiert ist, substituiert sind,
bedeuten,
deren Isomere und deren Salze.
2. Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 , in der
Ri ein Wasserstoffatom oder eine d.3-Alkylgruppe,
R2 ein Wasserstoff-, Fluor-, Chlor- oder Bromatom oder eine Cι_3-Alkylgruppe,
R3 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe,
A eine durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom, durch eine d-e-Alkyl- oder d.3-Alk- oxygruppe substituierte Phenyl- oder Naphthylgruppe, die jeweils zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine Cι-3-Alkyl- oder d.3-Alkoxygruppe substituiert sein kann,
eine Naphthylgruppe, eine Chroman- oder Chromengruppe, in der eine Methylengruppe durch eine Carbonyl- gruppe ersetzt sein kann,
oder eine 5- oder 6-gliedrige Heteroarylgruppe, wobei die 6-gliedrigen Heteroarylgruppen ein, zwei oder drei Stickstoffatome und die 5-gliedrigen Heteroarylgruppen eine gegebenenfalls durch eine d_3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe, ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder eine gegebenenfalls durch eine d„3-Alkylgruppe substituierte Iminogruppe und ein Sauerstoff- oder Schwefelatom oder ein oder zwei Stickstoffatome enthalten und zusätzlich an die vorstehend erwähnten monocyciischen Heteroarylgruppen über zwei benachbarte Kohlenstoffatome ein Phenylring ankondensiert sein kann, und
B eine Phenyl- oder Naphthylgruppe, die jeweils durch eine Carboxygruppe, durch eine in- vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe oder durch eine unter physiologischen Bedingungen negativ geladene Gruppe substituiert sind und gegebenenfalls zusätzlich durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch eine d.3-Alkyl-, Trifluormethyl- oder Methoxygruppe substituiert sein können, wobei die vorstehend erwähnten Phenylgruppen zusätzlich
durch eine Cι_3~Alkylgruppe, die durch eine Amino-, CM-Alkylamino-, Di-(d-4-alkyl)- amino-, C3.7-Cycloalkylamino-, Pyrrolidino-, Piperidino-, Morpholino-, Piperazino- oder N-(Cι.3-Alkyl)-piperazinogruppe substituiert ist, substituiert sind,
deren Isomere und deren Salze.
3. Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 , in der
R-i ein Wasserstoffatom oder eine d.3-Alkylgruppe,
R2 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe,
R3 ein Wasserstoffatom, A eine durch Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatome, durch d.5-Alkyl- oder Methoxygruppen mono- oder disubstituierte Phenylgruppe, wobei die Substituenten gleich oder verschieden sein können, oder
eine gegebenenfalls durch durch ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom, durch eine Methyl- oder Methoxygruppe substituierte Naphthylgruppe,
eine Chromengruppe, in der eine Methylengruppe durch eine Carbonylgruppe ersetzt ist, oder
eine gegebenenfalls durch eine Methylgruppe substituierte Benzofuryl-, Benzothienyl-, Chinolyl- oder Isochinolylgruppe und
B eine durch eine Carboxygruppe substituierte Naphthylgruppe oder
eine durch eine Carboxy-, Methoxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl- oder Tetrazolylgruppe substituierte Phenylgruppe, die gegebenenfalls durch ein Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom oder durch eine d.3-Alkyl-, eine Trifluormethyl- oder eine Methoxygruppe substituiert sein kann und zusätzlich
durch eine ^-Alkylgruppe, die durch eine Amino-, d^-Alkylamino-, Di-(C1^-alkyl)- amino-, C3.7-Cycloalkylamino-, Pyrrolidino-, Piperidino-, Morpholino-, Piperazino- oder N-(d_3-Alkyl)-piperazinogruppe substituiert ist, substituiert ist,
bedeuten, deren Isomere und deren Salze.
4. Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 , in der
P , R2, R3 und A wie in Anspruch 3 definiert sind,
und B die in Anspruch 3 angegebenen Bedeutungen hat, wobei sich der Carboxy-, Methoxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl- oder Tetrazolyl-Substituent in 2-Position und die gemäß Anspruch 3 substituierte Alkylgruppe in 5-Position des Phenylrings befinden, deren Isomere und deren Salze.
5. Carbonsäureamide der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 , in der
R-i eine Methylgruppe,
R2 ein Wasserstoffatom,
Rs ein Wasserstoffatom,
A eine Naphthylgruppe
und B eine 2-Carboxy-phenylgruppe bedeuten, wobei die vorstehend erwähnte 2-Carboxy- phenylgruppe zusätzlich im Phenylkern
in 5-Position durch eine Methylgruppe, die durch eine Amino-, d-rAlkylamino-, Di- (Cι.3-alkyl)-amino-, Cyclopentylamino- oder Pyrrolidinogruppe substituiert ist, substituiert ist,
deren Isomere und deren Salze.
6. Folgende Verbindungen der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 :
(1) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-dimethylaminomethyl-phenyl)-amid,
(2) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-[2-carboxy-5-(pyrrolidin1-yl)methyl-phenyl]-amid,
(3) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-ethylaminomethyl-phenyl)-amid,
(4) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-isopropylaminomethyl-phenyl)-amid,
(5) trans-3-(Naphth-2-yl)-but-2-ensäure-N-(2-carboxy-5-cyclopentylaminomethyl-phenyl)- amid sowie deren Salze.
7. Physiologisch verträgliche Salze der Verbindungen gemäß den Ansprüchen 1 bis 6.
8. Arzneimittel, enthaltend eine Verbindung nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 6 oder ein Salz gemäß Anspruch 7 neben gegebenenfalls einem oder mehreren inerten Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln.
9. Verwendung einer Verbindung nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 6 oder ein Salz gemäß Anspruch 7 zur Herstellung eines Arzneimittels mit einer Hemmwirkung auf die Telomerase.
10. Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels gemäß Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß auf nichtchemischem Wege eine Verbindung nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 6 oder ein Salz gemäß Anspruch 7 in einen oder mehrere inerte Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel eingearbeitet wird.
11. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß den Ansprüchen 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß
a. ein Amin der allgemeinen Formel
R3
/N— B ( i i )
H in der
R3 wie in den Ansprüchen 1 bis 7 erwähnt definiert ist und
B' B oder eine durch Umwandlung einer Hydroxyalkyl- in eine gegebenenfalls substituierte
Aminoalkylgruppe in B überführbare Gruppe bedeutet, mit einer Carbonsäure der allgemeinen Formel
Figure imgf000036_0001
R-,
in der
R-ι, R2 und A wie in den Ansprüchen 1 bis 7 erwähnt definiert sind, oder mit deren reaktionsfähigen Derivaten acyliert wird oder
b. zur Herstellung eines Carbonsäureamids der allgemeinen Formel I, das eine Carboxygruppe enthält, eine Verbindung der allgemeinen Formel
Figure imgf000036_0002
R-, in der
Ri bis R3, A und B mit der Maßgabe wie in den Ansprüchen 1 bis 7 erwähnt definiert sind, daß A oder B oder A und B eine in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe enthalten, in eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Carboxygruppe enthält übergeführt wird und
gewünschtenfalls anschließend eine so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Hydroxygruppe enthält, mittels eines Sulfonylhalogenids in eine entsprechende Sul- fonyloxyverbindung übergeführt wird und/oder
eine so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Cyanogruppe enthält, mittels Stickstoffwasserstoffsäure in eine entsprechende Tetrazolylverbindung übergeführt wird und/oder eine so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Amino- oder Iminogruppe mit einem basischen Wasserstoffatom enthält, mittels Acylierung oder Sulfonierung in eine entsprechend acylierte Verbindung oder in eine entsprechende Pro-Drug-Verbindung übergeführt wird und/oder
eine so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine Carboxygruppe enthält, in eine Verbindung, die eine in-vivo in eine Carboxygruppe überführbare Gruppe enthält, übergeführt wird und/oder
eine Verbindung der allgemeinen Formel I, die eine oder zwei Carboxygruppen enthält, mittels Reduktion in eine Verbindung, die eine oder zwei Hydroxymethylgruppen enthält, übergeführt wird und/oder
erforderlichenfalls ein während der Umsetzungen zum Schütze von reaktiven Gruppen verwendeter Schutzrest abgespalten wird und/oder
eine so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I in ihre Isomere aufgetrennt wird und/oder
eine so erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel I in ihre Salze, insbesondere für die pharmazeutische Anwendung in ihre physiologisch verträglichen Salze übergeführt wird.
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