UA124660C2 - Об'єкт кукурудзи mon87429 і спосіб його використання - Google Patents
Об'єкт кукурудзи mon87429 і спосіб його використання Download PDFInfo
- Publication number
- UA124660C2 UA124660C2 UAA202004878A UAA202004878A UA124660C2 UA 124660 C2 UA124660 C2 UA 124660C2 UA A202004878 A UAA202004878 A UA A202004878A UA A202004878 A UAA202004878 A UA A202004878A UA 124660 C2 UA124660 C2 UA 124660C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- maize
- dna
- plant
- corn
- mom87429
- Prior art date
Links
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 title claims abstract description 356
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 title claims abstract description 337
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 240
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 title claims abstract description 240
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 103
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 92
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 62
- 102000000452 Acetyl-CoA carboxylase Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108010016219 Acetyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 108010018763 Biotin carboxylase Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 claims abstract description 24
- 239000002363 auxin Substances 0.000 claims abstract description 24
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 324
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 204
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 180
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 139
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 99
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 98
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 97
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 97
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 77
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 68
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 65
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N glyphosate Chemical compound OC(=O)CNCP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 claims description 55
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 claims description 53
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- 239000013615 primer Substances 0.000 claims description 50
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 claims description 43
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 claims description 43
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 claims description 42
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 34
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 34
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 28
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 claims description 27
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 25
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 20
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 20
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 20
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 19
- GOCUAJYOYBLQRH-UHFFFAOYSA-N 2-(4-{[3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy}phenoxy)propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)C(O)=O)=CC=C1OC1=NC=C(C(F)(F)F)C=C1Cl GOCUAJYOYBLQRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 16
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 16
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 16
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 16
- 108010020183 3-phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 claims description 15
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims description 15
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims description 15
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- OILAIQUEIWYQPH-UHFFFAOYSA-N cyclohexane-1,2-dione Chemical compound O=C1CCCCC1=O OILAIQUEIWYQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 10
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 claims description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 9
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 9
- 206010021929 Infertility male Diseases 0.000 claims description 8
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 claims description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 8
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 7
- 101000969120 Caenorhabditis elegans Metallothionein-2 Proteins 0.000 claims description 5
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 claims description 5
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 101000951943 Stenotrophomonas maltophilia Dicamba O-demethylase, oxygenase component Proteins 0.000 claims description 5
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 claims description 5
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 claims description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 5
- 101710197633 Actin-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100023774 Cold-inducible RNA-binding protein Human genes 0.000 claims description 4
- 101710082611 Glycine-rich RNA-binding protein Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 4
- CSPPKDPQLUUTND-NBVRZTHBSA-N Sethoxydim Chemical compound CCO\N=C(/CCC)C1=C(O)CC(CC(C)SCC)CC1=O CSPPKDPQLUUTND-NBVRZTHBSA-N 0.000 claims description 4
- 108010031100 chloroplast transit peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 3
- 230000008121 plant development Effects 0.000 claims description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 2
- 102100033130 T-box transcription factor T Human genes 0.000 claims 2
- 101710086566 T-box transcription factor T Proteins 0.000 claims 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims 2
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 claims 2
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 claims 2
- 101100024000 Caenorhabditis elegans mom-5 gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000728904 Iais Species 0.000 claims 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 claims 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 claims 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 claims 1
- JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N shikimic acid Chemical compound O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@@H](O)[C@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-HSUXUTPPSA-N 0.000 claims 1
- JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N shikimic acid Natural products O[C@@H]1CC(C(O)=O)=C[C@H](O)[C@@H]1O JXOHGGNKMLTUBP-JKUQZMGJSA-N 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 64
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 26
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 24
- 238000013461 design Methods 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 15
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 15
- -1 dicamba and 2 Natural products 0.000 description 14
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 13
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 13
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 11
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 8
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 6
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 description 4
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- QUTYKIXIUDQOLK-PRJMDXOYSA-N 5-O-(1-carboxyvinyl)-3-phosphoshikimic acid Chemical compound O[C@H]1[C@H](OC(=C)C(O)=O)CC(C(O)=O)=C[C@H]1OP(O)(O)=O QUTYKIXIUDQOLK-PRJMDXOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000005497 Clethodim Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 239000005558 Fluroxypyr Substances 0.000 description 3
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 3
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- SILSDTWXNBZOGF-JWGBMQLESA-N clethodim Chemical compound CCSC(C)CC1CC(O)=C(C(CC)=NOC\C=C\Cl)C(=O)C1 SILSDTWXNBZOGF-JWGBMQLESA-N 0.000 description 3
- MEFQWPUMEMWTJP-UHFFFAOYSA-N fluroxypyr Chemical compound NC1=C(Cl)C(F)=NC(OCC(O)=O)=C1Cl MEFQWPUMEMWTJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 2
- 230000024346 drought recovery Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- MPPOHAUSNPTFAJ-SECBINFHSA-N (2r)-2-[4-[(6-chloro-1,3-benzoxazol-2-yl)oxy]phenoxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC(O[C@H](C)C(O)=O)=CC=C1OC1=NC2=CC=C(Cl)C=C2O1 MPPOHAUSNPTFAJ-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- BACHBFVBHLGWSL-SNVBAGLBSA-N (R)-diclofop-methyl Chemical group C1=CC(O[C@H](C)C(=O)OC)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl BACHBFVBHLGWSL-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- ADDQHLREJDZPMT-AWEZNQCLSA-N (S)-metamifop Chemical compound O=C([C@@H](OC=1C=CC(OC=2OC3=CC(Cl)=CC=C3N=2)=CC=1)C)N(C)C1=CC=CC=C1F ADDQHLREJDZPMT-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 1
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDQWWOHKFDSADC-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4-dichloro-3-methylphenoxy)-n-phenylpropanamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)C(C)OC1=CC=C(Cl)C(C)=C1Cl BDQWWOHKFDSADC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZHCENGPTKEIGP-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4-dichlorophenoxy)propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl MZHCENGPTKEIGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QURLONWWPWCPIC-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminoethoxy)ethanol;3,6-dichloro-2-methoxybenzoic acid Chemical compound NCCOCCO.COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O QURLONWWPWCPIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YUVKUEAFAVKILW-UHFFFAOYSA-N 2-(4-{[5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy}phenoxy)propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)C(O)=O)=CC=C1OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=N1 YUVKUEAFAVKILW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOLBCHYXZDXLDS-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2,4-dichlorophenoxy)phenoxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)C(O)=O)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OOLBCHYXZDXLDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPPOHAUSNPTFAJ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[(6-chloro-1,3-benzoxazol-2-yl)oxy]phenoxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)C(O)=O)=CC=C1OC1=NC2=CC=C(Cl)C=C2O1 MPPOHAUSNPTFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMLZTMPXQOOCNI-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanol;3,6-dichloro-2-methoxybenzoic acid Chemical compound OCCN(CCO)CCO.COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O ZMLZTMPXQOOCNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDRFUUBRGGDEIZ-UHFFFAOYSA-N 3,6-dichloro-2-methoxybenzoate;dimethylazanium Chemical compound CNC.COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O JDRFUUBRGGDEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLUOWQZURZVAEN-UHFFFAOYSA-N 3,6-dichloro-2-methoxybenzoic acid;propan-2-amine Chemical compound CC(C)N.COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O DLUOWQZURZVAEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 239000005468 Aminopyralid Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- 239000005498 Clodinafop Substances 0.000 description 1
- 239000005500 Clopyralid Substances 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000746263 Conus leopardus Conotoxin Lp5.1 Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000005506 Diclofop Substances 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- ZLSWBLPERHFHIS-UHFFFAOYSA-N Fenoprop Chemical compound OC(=O)C(C)OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl ZLSWBLPERHFHIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005513 Fenoxaprop-P Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- PDYXIVPKOMYDOK-UHFFFAOYSA-N Glyphosate-monoammonium Chemical compound [NH4+].OC(=O)CNCP(O)([O-])=O PDYXIVPKOMYDOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005565 Haloxyfop-P Substances 0.000 description 1
- ANFHKXSOSRDDRQ-UHFFFAOYSA-N Isoxapyrifop Chemical compound C1CCON1C(=O)C(C)OC(C=C1)=CC=C1OC1=NC=C(Cl)C=C1Cl ANFHKXSOSRDDRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005574 MCPA Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005595 Picloram Substances 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000005600 Propaquizafop Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000005624 Tralkoxydim Substances 0.000 description 1
- WHKUVVPPKQRRBV-UHFFFAOYSA-N Trasan Chemical compound CC1=CC(Cl)=CC=C1OCC(O)=O WHKUVVPPKQRRBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005627 Triclopyr Substances 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000020990 adrenal cortex carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- NIXXQNOQHKNPEJ-UHFFFAOYSA-N aminopyralid Chemical compound NC1=CC(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NIXXQNOQHKNPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007622 bioinformatic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- VAIZTNZGPYBOGF-UHFFFAOYSA-N butyl 2-(4-{[5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy}phenoxy)propanoate Chemical group C1=CC(OC(C)C(=O)OCCCC)=CC=C1OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=N1 VAIZTNZGPYBOGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- YUIKUTLBPMDDNQ-MRVPVSSYSA-N clodinafop Chemical compound C1=CC(O[C@H](C)C(O)=O)=CC=C1OC1=NC=C(Cl)C=C1F YUIKUTLBPMDDNQ-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- JBDHZKLJNAIJNC-LLVKDONJSA-N clodinafop-propargyl Chemical group C1=CC(O[C@H](C)C(=O)OCC#C)=CC=C1OC1=NC=C(Cl)C=C1F JBDHZKLJNAIJNC-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- HUBANNPOLNYSAD-UHFFFAOYSA-N clopyralid Chemical compound OC(=O)C1=NC(Cl)=CC=C1Cl HUBANNPOLNYSAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- CPHCYTUHSKEDOI-UHFFFAOYSA-N diazanium;2-(phosphonatomethylamino)acetic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].OC(=O)CNCP([O-])([O-])=O CPHCYTUHSKEDOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVJMEWSAFHIEJX-UHFFFAOYSA-M dicamba-potassium Chemical compound [K+].COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C([O-])=O RVJMEWSAFHIEJX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HLZCHRAMVPCKDU-UHFFFAOYSA-M dicamba-sodium Chemical compound [Na+].COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C([O-])=O HLZCHRAMVPCKDU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229950010286 diolamine Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- PQKBPHSEKWERTG-LLVKDONJSA-N ethyl (2r)-2-[4-[(6-chloro-1,3-benzoxazol-2-yl)oxy]phenoxy]propanoate Chemical group C1=CC(O[C@H](C)C(=O)OCC)=CC=C1OC1=NC2=CC=C(Cl)C=C2O1 PQKBPHSEKWERTG-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- WNZCDFOXYNRBRB-UHFFFAOYSA-N florpyrauxifen-benzyl Chemical group COC1=C(Cl)C=CC(C=2C(=C(N)C(Cl)=C(C(=O)OCC=3C=CC=CC=3)N=2)F)=C1F WNZCDFOXYNRBRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- VAIZTNZGPYBOGF-CYBMUJFWSA-N fluazifop-P-butyl Chemical group C1=CC(O[C@H](C)C(=O)OCCCC)=CC=C1OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=N1 VAIZTNZGPYBOGF-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- ZEKANFGSDXODPD-UHFFFAOYSA-N glyphosate-isopropylammonium Chemical compound CC(C)N.OC(=O)CNCP(O)(O)=O ZEKANFGSDXODPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOCUAJYOYBLQRH-MRVPVSSYSA-N haloxyfop-P Chemical compound C1=CC(O[C@H](C)C(O)=O)=CC=C1OC1=NC=C(C(F)(F)F)C=C1Cl GOCUAJYOYBLQRH-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- MFSWTRQUCLNFOM-SECBINFHSA-N haloxyfop-P-methyl Chemical group C1=CC(O[C@H](C)C(=O)OC)=CC=C1OC1=NC=C(C(F)(F)F)C=C1Cl MFSWTRQUCLNFOM-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- RUCAXVJJQQJZGU-UHFFFAOYSA-M hydron;2-(phosphonatomethylamino)acetate;trimethylsulfanium Chemical compound C[S+](C)C.OP(O)(=O)CNCC([O-])=O RUCAXVJJQQJZGU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010921 in-depth analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- MFSWTRQUCLNFOM-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(4-{[3-chloro-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy}phenoxy)propanoate Chemical group C1=CC(OC(C)C(=O)OC)=CC=C1OC1=NC=C(C(F)(F)F)C=C1Cl MFSWTRQUCLNFOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BACHBFVBHLGWSL-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[4-(2,4-dichlorophenoxy)phenoxy]propanoate Chemical group C1=CC(OC(C)C(=O)OC)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl BACHBFVBHLGWSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- VDCHTAFVUAPYGO-UHFFFAOYSA-N n-methylmethanamine;2-(phosphonomethylamino)acetic acid Chemical compound CNC.OC(=O)CNCP(O)(O)=O VDCHTAFVUAPYGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000009401 outcrossing Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N picloram Chemical compound NC1=C(Cl)C(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- LIOPHZNMBKHGAV-UHFFFAOYSA-M potassium;2-(phosphonomethylamino)acetate Chemical compound [K+].OC(=O)CNCP(O)([O-])=O LIOPHZNMBKHGAV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- FROBCXTULYFHEJ-OAHLLOKOSA-N propaquizafop Chemical compound C1=CC(O[C@H](C)C(=O)OCCON=C(C)C)=CC=C1OC1=CN=C(C=C(Cl)C=C2)C2=N1 FROBCXTULYFHEJ-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 1
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N protonated dimethyl amine Natural products CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BACHBFVBHLGWSL-JTQLQIEISA-N rac-diclofop methyl Natural products C1=CC(O[C@@H](C)C(=O)OC)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl BACHBFVBHLGWSL-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 238000003044 randomized block design Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- YWICANUUQPYHOW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-(phosphonomethylamino)acetate Chemical compound [Na+].OP(O)(=O)CNCC([O-])=O YWICANUUQPYHOW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- DQFPEYARZIQXRM-LTGZKZEYSA-N tralkoxydim Chemical compound C1C(=O)C(C(/CC)=N/OCC)=C(O)CC1C1=C(C)C=C(C)C=C1C DQFPEYARZIQXRM-LTGZKZEYSA-N 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- REEQLXCGVXDJSQ-UHFFFAOYSA-N trichlopyr Chemical compound OC(=O)COC1=NC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl REEQLXCGVXDJSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000010144 wind-pollination Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
- C12N15/8223—Vegetative tissue-specific promoters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
- C12N15/8275—Glyphosate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
- C12N15/8277—Phosphinotricin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
- C12Q1/6874—Methods for sequencing involving nucleic acid arrays, e.g. sequencing by hybridisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/13—Plant traits
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
Винахід стосується молекул рекомбінантної ДНК, які є унікальними відносно об'єкта кукурудзи MON87429, а також трансгенних рослин кукурудзи, частин рослин кукурудзи, насіння кукурудзи, клітин кукурудзи, які містять об'єкт кукурудзи MON87429, а також способів використання та виявлення об'єкта кукурудзи MON87429. Трансгенні рослини кукурудзи, які містять об'єкт кукурудзи MON87429, демонструють толерантність до інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (ACC) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтази (EPSPS).
Description
кукурудзи МОМ87429, демонструють толерантність до інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСОС) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-З3-фосфатсинтази (ЕРБРБ).
Перехресні посилання на споріднені заявки
Дана заявка витребує пріоритети за попередньою заявкою на патент США Мо 62/625 537, поданою 2 лютого 2018 р., яка повністю включена в цей документ шляхом посилання.
Включення переліку послідовностей
Перелік послідовностей, який міститься у файлі з назвою «МОМ5430УУО-зедіхі» розміром 44,2 КВ (М5-М/іпдомв), створеному 17 січня 2019 р., поданий разом з цим документом у електронному вигляді та включений в цей документ за допомогою посилання.
Галузь техніки
Винахід стосується молекул рекомбінантної ДНК об'єкта кукурудзи МОМ87429. Винахід також стосується трансгенних рослин кукурудзи, частин рослин, насіння, клітин та сільськогосподарських продуктів, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, а також способів використання трансгенних рослин кукурудзи, частин рослин, насіння, клітин та сільськогосподарських продуктів, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, і способів виявлення об'єкта кукурудзи МОМ87429. Трансгенні рослини кукурудзи, частини рослин, насіння та клітини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, демонструють толерантність до інгібіторів ацетил-Код- карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, як-от хізалофоп і галоксифоп; синтетичних ауксинів, як-от дикамба та 2,4-0; інгібіторів глутамінсинтетази, як-от глюфосинат; а також інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтази (ЕРБР5), як-от гліфосат.
Передумови створення винаходу
Кукурудза (7еа тау5) є важливою сільськогосподарською культурою в багатьох частинах світу, а використання гербіцидів при виробництві сільськогосподарських культур для контролю росту бур'янів є усталеною практикою. Біотехнологічні методи використовуються з метою отримання трансгенної кукурудзи, толерантної до певного гербіциду завдяки експресії гетерологічного гену, також відомого як трансген. Ознака толерантності до гербіциду може використовуватися окремо або в комбінації з іншими ознаками, як-от толерантність до іншого гербіциду або стійкість до шкідників чи патогенів. Комбінації ознак толерантності до гербіцидів є бажаними для забезпечення можливих способів контролю росту бур'янів, які підвищують гнучкість сільгоспвиробників і дозволяють використовувати різні гербіциди для контролю росту проблемних бур'янів. Комбінацію ознак можна отримати шляхом схрещування між собою кожної
Зо окремої ознаки. Схрещування між собою окремих ознак у кукурудзі та збереження цієї комбінації в ході схрещування з різноманітним пулом елітної ідіоплазми - це трудомісткий та дорогий процес. Комбінацію ознак також можна отримати шляхом об'єднання безлічі ознак в одному місці, або локусі, в геномі, спрощуючи, таким чином, процес схрещування. Один із способів досягти цього полягає в єдиній трансгенній вставці, що містить безліч трансгенів. Комбінація ознак толерантності до безлічі гербіцидів в одному локусі в кукурудзі забезпечить корисний інструмент для контролю росту бур'янів, який буде набагато простіше й дешевше зберегти в процесі схрещування з різноманітним пулом елітної ідіоплазми.
На експресію трансгену в трансгенній рослині, частині рослини, насіння або клітині та, таким чином, на його ефективність можуть впливати багато різних чинників, як-от елементи, що використовуються в експресійній касеті трансгену, та взаємодія таких елементів. Це додатково ускладнюється в випадку трансгенної вставки, що містить дві або більше експресійні касети, коли кожна експресійна касета містить трансген, який забезпечує окрему ознаку й також називається мультигенним трансгенним об'єктом. Комерційно придатний мультигенний трансгенний об'єкт передбачає, що експресія кожного з трансгенів в трансгенній вставці буде здійснюватися так, як це необхідно для кожної ознаки. Щоб цього досягти, окремі експресійні касети спочатку розробляються та тестуються в рослинах, і для кожної ознаки відбираються найкращі експресійні касети. Потім відібрані експресійні касети для однієї ознаки об'єднують з відібраними експресійними касетами для іншої ознаки(-к) в одну конструкцію та цю конструкцію тестують з метою переконатися, що всі експресійні касети добре функціонують разом і кожний трансген експресується належним чином. Потім відібрану комбінацію експресійних касет використовують у вигляді єдиної трансгенної вставки для отримання сотень мультигенних трансгенних об'єктів, кожний з яких є результатом випадкової вставки чужорідної ДНК в різні геномні локації.
Кожний трансгенний об'єкт є унікальним. Унікальні об'єкти потім аналізують в численних поколіннях рослин, щоб відібрати кращий об'єкт для комерційного використання. На властивості об'єкта в трансгенній рослині, частині рослини, насінні або клітині та, таким чином, на його ефективність може впливати геномна локація трансгенної вставки. Об'єкти можуть мати однакову трансгенну вставку й тим не менш мати різні рівні трансгенної експресії та різні властивості в тканинах, на різних стадіях розвитку, в різній ідіоплазмі або в певних умовах бо зростання. Створення мультигенного об'єкту для комерційного використання вимагає ретельної молекулярної характеристики, тепличного тестування та польових випробувань протягом багатьох років, в різних локаціях і в різних умовах, щоб можна було зібрати великі агрономічні, фенотипічні та молекулярні дані. Отримані дані потім мають бути проаналізовані вченими й агрономами, щоб можна було вибрати об'єкт, придатний для комерційного використання.
Комерційний мультигенний об'єкт потім можна інтрогресувати у вигляді єдиного локусу, який має ознаки толерантності до безлічі гербіцидів, в нову ідіоплазму, використовуючи способи схрещування рослин.
Коротке викладення сутності винаходу
У винаході запропоновані молекули рекомбінатні ДНК, які містять послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:10, ЗЕО ІО МО:9, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:6,
ЗБОЮ МО:5, 5ЕО ІЮ МО:4, 5БО ІС МО:З3, 5ЕО ІЮ МО:2 та 5ЕО ІЮО МО: 1. В одному варіанті здійснення молекула рекомбінатної ДНК отримана з рослини, насіння або клітини, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, причому репрезентативний зразок насіння, що містить об'єкт, депонований під номером доступу АТСС РТА-124635. В іншому варіанті здійснення молекула рекомбінатної ДНК знаходиться в рослині, клітині, насінні або частині рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, причому репрезентативний зразок насіння, який містить об'єкт, депонований як АТСС РТА-124635. В іншому варіанті здійснення молекула рекомбінатної ДНК являє собою амплікон, який дозволяє діагностувати присутність об'єкта кукурудзи МОМ87 429.
У винаході запропонована конструкція ДНК, яка містить чотири експресійні касети, причому перша експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідерну послідовність та інтрон убіквітину від Егіапійи5 гамеппає, (Ії) послідовність, кодуючу фосфінотрицин М- ацетилтрансферазу, та (ІП) 3-НТО фруктозобісфосфат-альдолази від 5еїагіа Ййаїїса; друга експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідерну послідовність та інтрон убіквітину від Соїх Іасгута-|обрі, (І) послідовність, кодуючу транзитний пептид альбіносного та блідо-зеленого б хлоропласту, від Агабрідорвзі5 Паїіапа, (І) послідовність, кодуючу дикамба-монооксигеназу, та (ІМ) 3'-НТО металотіонеїн-подібного білка від Огула заїїма; третя експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідерну послідовність та інтрон убіквітину від Агипао допах, (Ії) послідовність, кодуючу транзитний пептид хлоропласту малатдегідрогенази, від Агабідорбвів ІПаїїапа, (І) послідовність, кодуючу білок ЕТ Т, та (ІМ) 3'-
Зо НТО білка неапікальної меристеми від Огула 5аїїма; та четверта експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор і лідер Самм 355, (ІІ) лідер хлорофіл а/р-зв'язуючого білка від Тгйісит аебвіїмит, (ІП) інтрон актину 1 від Огуа 5аїїма, (ІМ) послідовність, кодуючу транзитний пептид хлоропласту 5ПКО, від Агарідорзіб5 (Паїійапа, (М) послідовність, кодуючу толерантну до гліфосату 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтазу, від штаму СРА Адгобасіегійт 5р, (МІ) міРНК-мішень, специфічну до тканин чоловічих рослин, від 7еа таувз, та (МІ!) 3-НТО багатого гліцином РНК-зв'язуючого білка від Огула 5аїїма.
У винаході запропонована молекула ДНК, яка має достатню довжину суміжних нуклеотидів
ЗЕО ІЮ МО:10, щоб функціонувати як ДНК-зонд, специфічний відносно 5ЕО ІЮ МО:10, в зразку
ДНК, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи. В одному варіанті здійснення ДНК-зонд містить ЗЕО ІЮ МО:13.
У винаході запропонована пара молекул ДНК, яка містить першу молекулу ДНК та другу молекулу ДНК, причому перша та друга молекули ДНК містять фрагмент 5ЕО ІЮ МО:10 і функціонують як ДНК-праймери, коли вони використовуються разом у реакції ампліфікації з
ДНК, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, для отримання амплікону, що дозволяє діагностувати в зразку об'єкт кукурудзи МОМ87429. В одному варіанті здійснення щонайменше один ДНК-праймер містить фрагмент послідовності, вибраної з групи, яка складається з ЗЕО ІО
МО:7 та БЕО ІО МО:8. В іншому варіанті здійснення перша молекула ДНК містить 5ЕО ІЮ МО:11, а друга молекула ДНК містить ЗЕО 10 МО:12.
У винаході запропонований спосіб виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 у зразку ДНК, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи, причому спосіб включає в себе: приведення в контакт зразка з ДНК-зондом; розміщення зразка та ДНК-зонда в жорстких умовах гібридизації та виявлення гібридизації ДНК-зонда з ДНК- молекулою в зразку, причому гібридизація ДНК-зонда з ДНК-молекулою вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку ДНК.
У винаході запропонований спосіб виявлення присутності об'єкту кукурудзи МОМ87429 в зразку ДНК, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи, причому спосіб включає в себе: приведення в контакт зразка з парою молекул ДНК, які функціонують як ДНК-праймери; проведення реакції ампліфікації, достатньої для отримання амплікону ДНК, який містить послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО:10, (510) ЗЕО ІО МО:9, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО 10 МО:7, 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО І МО:5, 5ЕО 10 МО:4, 5ЕО І
МО:З, 5ЕБЕО І МО та 5ЕО ІЮ МО:1; і виявлення присутності амплікону ДНК, причому присутність амплікону ДНК вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку.
У винаході запропонований спосіб виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 у зразку, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи, причому спосіб включає в себе: приведення в контакт зразка з щонайменше одним антитілом, специфічним відносно щонайменше одного або більше білків, кодованих об'єктом кукурудзи
МОМ87429; і виявлення зв'язування антитіла з білком в зразку, причому зв'язування антитіла з білком вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку. В іншому варіанті здійснення спосіб включає в себе додаткове приведення в контакт зразка з щонайменше другим антитілом, специфічним відносно другого білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429. В іншому варіанті здійснення спосіб включає в себе додаткове приведення в контакт зразка з щонайменше другим антитілом і третім антитілом, специфічними відносно другого білка та третього білка, відповідно, кодованих об'єктом кукурудзи МОМ87429. В іншому варіанті здійснення спосіб включає в себе додаткове приведення в контакт зразка з щонайменше другим антитілом, третім антитілом і четвертим антитілом, специфічними відносно другого білка, третього білка та четвертого білка, відповідно, кодованих об'єктом кукурудзи МОМ87429.
У винаході запропонований набір для виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429, що містить ДНК-зонд, специфічний відносно 5ЕБЕО ІО МО:10, пару ДНК-праймерів, які виробляють амплікон, що дозволяє діагностувати об'єкт кукурудзи МОМ87429, або щонайменше одне антитіло, специфічне відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи
МОМм87429.
У винаході запропонована рослина, насіння, клітина, частина рослини або товар, які містять молекулу ДНК, яка містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮО МО:1, 5ЕО
ІО МО:2, 5ЕО ІЮ МО:З3, 5ЕО ІЮ МО:4, 5ЕО ІЮО МО:5, 5ЕО ІО МО:б6б, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮО МО:8,
ЗЕО ІЮ МО:9 та 5ЕО ІЮО МО:10. В одному варіанті здійснення рослина, насіння, клітина або частина рослини є толерантними до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, яка складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5- енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтази (ЕРБР5) або будь-якої їх комбінації. В іншому варіанті здійснення рослина, насіння, клітина або частина рослини є толерантними до хізалофопу, галоксифопу, дикамба, 2,4-О та глюфосинату.
У винаході запропонований спосіб контролю росту бур'янів на ділянці вирощування сільськогосподарських культур, що включає в себе посадку кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, на ділянці вирощування сільськогосподарських культур і застосування до ділянки вирощування сільськогосподарських культур, або будь-якій її частині, ефективної кількості щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з інгібіторів ацетил-
КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-З-фосфатсинтази (ЕРБР5) або будь-якої їх комбінації, для контролю росту бур'янів на цій ділянці, не завдаючи при цьому шкоди кукурудзі В одному варіанті здійснення спосіб включає в себе застосування щонайменше двох або більше гербіцидів, вибраних з групи, що складається з інгібіторів ацетил-
КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтази (ЕРЗР5Б), за врожайний сезон. В іншому варіанті здійснення спосіб включає в себе застосування гербіциду, вибраного з групи, яка складається з хізалофопу, галоксифопу, дикамби, 2,4-О0, глюфосинату та гліфосату або будь-якої їх комбінації. В одному варіанті здійснення ефективна кількість дикамби становить від близько 0,1 фунта ке/акр до близько 16 фунтів ке/акр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість дикамби становить від близько 0,5 фунта ке/акр до близько 2 фунтів кеЛакр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість глюфосинату становить від близько 0,1 фунта ке/акр до близько 16 фунтів ке/акр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість глюфосинату становить від близько 0,4 фунта ке/акр до близько 1,59 фунта ке/акр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість 2,4-Ю0О0 становить від близько 0,1 фунта ке/акр до близько 10 фунтів кеЛакр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість 2,4-0 становить від близько 0,75 фунта ке/(акр до близько 1,0 фунта ке/(акр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість гербіциду ФОП становить від близько 0,01 фунта аї/акр до близько 1,0 фунта аі/акр за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість гербіциду ФОП становить від близько 0,034 фунта аї/акр до близько 0,083 фунта аї/акр хізалофопу за врожайний сезон. В одному варіанті здійснення ефективна кількість гербіциду ФОП становить від близько 0,018 фунта аї/акр до близько 0,07 фунта аї/акр галоксифопу за врожайний сезон.
У винаході запропонований спосіб контролю самосівної кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, на ділянці, що включає в себе застосування гербіцидно ефективної кількості щонайменше одного циклогександіонного (СІМ) гербіциду, причому застосування гербіциду запобігає зростанню кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. В одному варіанті здійснення циклогександіонний (СІМ) гербіцид вибраний з групи, що складається з клетодиму, сетоксидиму та тралкоксидиму.
У винаході запропонований спосіб отримання рослини, яка є толерантною до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтази (ЕРЗР5) або будь-якої їх комбінації, причому спосіб включає в себе: схрещування рослини, яка містить об'єкт кукурудзи
МОМ87429, з самою собою або з другою рослиною з отриманням насіння та ідентифікацію насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. В одному варіанті здійснення ідентифікація насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, відбувається шляхом пророщування насіння потомства з отриманням рослин потомства; обробки рослин потомства ефективною кількістю щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з хізалофопу, галоксифопу, дикамби, 2,4-О0, глюфосинату, гліфосату або будь-якої їх комбінації; та відбору рослини потомства, яке є толерантним до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5- енолпірувілшікімат-З-фосфатсинтази (ЕРБР5). В одному варіанті здійснення ідентифікація насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, відбувається шляхом виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку, отриманому з насіння потомства. В одному варіанті здійснення ідентифікація насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, відбувається шляхом виявлення присутності щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, в зразку, отриманому з насіння потомства.
У винаході запропонований спосіб отримання гібридного насіння, що включає в себе:
Зо вирощування рослини, яка містить зХЕО ІЮ МО:10; застосування ефективної кількості гліфосату до або під час розвитку тканини чоловічих органів розмноження рослини, викликаючи, таким чином, у рослини чоловічу стерильність; запліднення рослини пилком другої рослини та збір гібридного насіння з рослини. В одному варіанті здійснення гліфосат застосовують до або під час розвитку в ефективній кількості від близько 0,25 фунта ке/акр до близько 11,0 фунтів ке/акр.
В одному варіанті здійснення гліфосат застосовують до або під час розвитку в ефективній кількості від близько 0,5 фунта ке/акр до близько 2,5 фунта ке/акр в сукупності за одне або більше застосувань. В одному варіанті здійснення ефективної кількості гліфосату застосовують на стадії розвитку, вибраної з групи, що складається зі стадії М4, М5, Мб, М7, М8, М9, М10, М11,
М12, М13 та М14 розвитку рослини кукурудзи. У винаході запропоновано гібридне насіння, яке містить ЗЕО ІЮО МО:10 та отримане способом отримання гібридного насіння, який включає в себе: вирощування рослини, яка містить ЗЕО ІЮ МО:10; застосування ефективної кількості гліфосату до або під час розвитку тканини чоловічих органів розмноження рослини, викликаючи, таким чином, у рослини чоловічу стерильність; запліднення рослини пилком другої рослини та збір гібридного насіння з рослини.
У винаході запропонований спосіб визначення зиготності рослини за об'єктом кукурудзи
МОМ87429, який включає в себе: приведення в контакт зразка, що містить ДНК, отриману з рослини, з набором праймерів, здатних виробити перший амплікон, що дозволяє діагностувати присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429, і другий амплікон, що дозволяє діагностувати геномну
ДНК кукурудзи дикого типу, яка не містить об'єкт кукурудзи МОМ87429; проведення реакції ампліфікації нуклеїнових кислот; виявлення першого амплікону та другого амплікону, причому присутність обох ампліконів вказує на те, що зразок є гетерозиготним за об'єктом кукурудзи
МОМ87429, й присутність тільки першого амплікону вказує на те, що зразок є гомозиготним за об'єктом кукурудзи МОМ87429. В одному варіанті здійснення набір праймерів містить ЗЕО ІЮ
МО:11 та 5ЕО ІО МО:12.
У винаході запропонований спосіб підвищення толерантності до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, яка складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтази (ЕРБРЗ) або будь-якої їх комбінації, у рослини кукурудзи, що включає в себе: (а) отримання конструкції ДНК, яка містить чотири бо експресійні касети, причому перша експресійна касета містить у функціональному зв'язку (1)
промотор, лідерну послідовність та інтрон убіквітину від Егіапіпи5 гамеппає, (ІІ) послідовність, кодуючу фосфінотрицин М-ацетилтрансферазу, та (ІІ) 3-НТО фруктозобісфосфат-альдолази від Зеїапа йаїїса; друга експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідерну послідовність та інтрон убіквітину від Соїх Іасгута-іорі, (І) послідовність, кодуючу транзитний пептид альбіносного та блідо-зеленого 6 хлоропласту, від Агарідор5зі5 ІПаійапа, (П) послідовність, кодуючу дикамба-монооксигеназу, та (ІМ) 3-НТО металотіонеїн-подібного білка від Огула заїїма; третя експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідерну послідовність та інтрон убіквітину від Агипдо аопах, (Ії) послідовність, кодуючу транзитний пептид хлоропласту малатдегідрогенази, від Агарідорзі5 ІПаїапа, (1) послідовність, кодуючу білок ЕТ Т, та (ІМ) 3-НТО білка неапікальної меристеми від Огула з5аїїма; та четверта експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор і лідер Самм 355, (ІІ) лідер хлорофіл а/р-зв'язуючого білка від Т/йісит аевіїмит, (І) інтрон актину 1 від Огула заїїма, (ІМ) послідовність, кодуючу транзитний пептид хлоропласту 5ПКО, від Агарідорзіз ІПаїйапа, (М) послідовність, кодуючу толерантну до гліфосату 5-енолпірувілшікімат-З-фосфатсинтазу, від штаму СРА Адгобасіегішт 5р, (МІ) міРНК-мішень, специфічну до тканин чоловічих рослин, від 7еа таух, та (МІЇ) 3-НТО багатого гліцином РНК-зв'язуючого білка від Огуа 5аїїма; (Б) вставку конструкції ДНК в геном клітини кукурудзи; (с) регенерацію клітини кукурудзи в рослину кукурудзи та (4) відбір рослини кукурудзи, яка містить конструкцію ДНК. В одному варіанті здійснення відбір відбувається шляхом обробки рослини кукурудзи ефективною кількістю щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з хізалофопу, галоксифопау, дикамби, 2,4-О0О, глюфосинату або гліфосату. В одному варіанті здійснення винаходу запропонована рослина кукурудзи, насіння кукурудзи або клітина кукурудзи, толерантні до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, яка складається з інгібіторів ацетил-Код- карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшікімат-З-фосфатсинтази (ЕРБР5) або будь-якої їх комбінації, та отримані способом, у якому рослина кукурудзи, насіння кукурудзи або клітина кукурудзи містять конструкцію ДНК. У додатковому варіанті здійснення рослина кукурудзи, насіння кукурудзи або клітина кукурудзи, отримані таким способом, містять ЗЕО ІЮ
МО:10.
Зо Короткий опис графічних матеріалів
На Фіг. 1 представлена послідовність об'єкту кукурудзи МОМ87429. Горизонтальні лінії відповідають положенням ЗЕО ІЮ МО:1, БЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮО МО:3, 5ЕО ІЮО МО:4, 5ЕО ІЮО МО:5,
ЗЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, БЕО ІЮО МО:8 та 5ЕО ІЮ МО:9 відносно ЗЕО ІЮ МО:10; горизонтальні стрілки, позначені 5051062 (5ЕО ІЮ МО:11) і 5051053 (5ЕО ІО МО:12), показують приблизне положення пари праймерів, які можуть використовуватися для виявлення об'єкту кукурудзи
МОМ87429; а горизонтальна лінія, позначена РВ5037О (5ЕО І МО:13), показує приблизне положення ДНК-зонду, який може використовуватися для виявлення об'єкту кукурудзи
МОМм87429.
На Фіг. 2 показані чотири експресійні касети об'єкту кукурудзи МОМ87429 відносно ЗЕО ІЮ
МО:9 з їх відповідними генетичними елементами, позначеними як описано в таблиці 1.
На Фіг. 3 показані створення, тестування, характеристика та відбір об'єкту МОМ87429, як описано в цьому документі. Усі значення часу є приблизними.
Короткий опис послідовностей
ЗЕО І МО:С:1 - послідовність ДНК з тридцяти нуклеотидів, яка представляє 5'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи й трансгенної вставки. 5БЕО ІЮ МО:1 відповідає нуклеотидним позиціям 3 1015 по 1044 в 5ЕО ІЮ МО:10.
ЗЕО І МОс2 - послідовність ДНК з тридцяти нуклеотидів, яка представляє 3'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи й трансгенної вставки. ХЕО ІЮ МО:2 відповідає нуклеотидним позиціям з 15023 по 15052 в ЗЕО ІЮ МО:10.
ЗЕО ІЮ МО:З - послідовність ДНК з шістдесяти нуклеотидів, яка представляє 5'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи й трансгенної вставки. ХЕО ІЮ МО:З відповідає нуклеотидним позиціям з 1000 по 1059 в БЕО ІЮ МО:10.
ЗЕО ІЮ МО:4 - послідовність ДНК з шістдесяти нуклеотидів, яка представляє 3'-з'єднання геномної ДНК кукурудзи й трансгенної вставки. 5ЕО ІЮ МО:4 відповідає нуклеотидним позиціям з 15008 по 15067 в ЗЕО ІЮ МО:10.
ЗЕО ІЮ МО:5 - послідовність ДНК зі ста нуклеотидів, яка представляє 5'-з'єднання геномної
ДНК кукурудзи й трансгенної вставки. 560 ІЮ МО:5 відповідає нуклеотидним позиціям з 980 по 1079 в БЕО ІО МО:10.
ЗЕО І МО:6 - послідовність ДНК зі ста нуклеотидів, яка представляє 3'-з'єднання геномної
ДНК кукурудзи й трансгенної вставки. БЕО ІЮО МО:6 відповідає нуклеотидним позиціям з 14988 по 15087 в 5БЕО ІЮ МО:10.
ЗЕО І МО/7 - послідовність ДНК з 1350 нуклеотидів, яка представляє 1029 нуклеотидів 5' фланкуючої геномної ДНК кукурудзи та 321 нуклеотид на 5'-кінці трансгенної вставки.
ЗЕО ІО МО:8 - послідовність ДНК з 1069 нуклеотидів, яка представляє 38 нуклеотидів на 3'- кінці трансгенної вставки та 1031 нуклеотид З' фланкуючої геномної ДНК кукурудзи.
ЗЕО ІЮ МО:9 - послідовність ДНК з 14008 нуклеотидів, яка відповідає трансгенній вставці об'єкту кукурудзи МОМ87429.
ЗЕО ІО МО:10 - послідовність ДНК з 16068 нуклеотидів, яка відповідає об'єкту кукурудзи
МОМ87429; послідовність містить 5" фланкуючу геномну послідовність ДНК в позиціях з 1 по 1029, трансгенну ДНК-вставку в позиціях з 1030 по 15037 і 3" фланкуючу геномну послідовність
ДНК в позиціях з 15038 по 16068.
ЗЕБЕО 10 МО:11 - послідовність ДНК з 29 нуклеотидів, яка відповідає праймеру, що називається 5051062 і використовується для ідентифікації ДНК об'єкту кукурудзи МОМ87429 в зразку; вона відповідає позиціям з 15038 по 15066 у 5ЕО ІЮ МО:10.
ЗЕБЕО ІЮ МО:12 - послідовність ДНК з 17 нуклеотидів, яка відповідає праймеру, що називається 5051053 і використовується для ідентифікації ДНК об'єкту кукурудзи МОМ87429 в зразку; вона відповідає позиціям з 14987 по 15003 у БЕО ІЮ МО:10.
ЗЕО ІЮ МО:13 - послідовність ДНК з 16 нуклеотидів, яка відповідає зонду, що називається
РВ5О370 і використовується для ідентифікації ДНК об'єкту кукурудзи МОМ87429 в зразку; вона відповідає позиціям з 15009 по 15024 в 5ЕО ІЮ МО:10.
Докладний опис суті винаходу
Наступні визначення та способів надані для кращого опису винаходу та для інструктування фахівців у даній області техніки при здійсненні даного винаходу на практиці. Якщо не вказано інше, фахівцям в даній області техніки слід розуміти терміни відповідно до загальноприйнятого застосування.
Методики трансформації рослини використовуються для вставки чужорідної ДНК (також відомої як трансгенна ДНК) випадковим чином у хромосому генома клітини з метою отримання
Зо генетично сконструйованої клітини, яка також називається «трансгенною» або «рекомбінантною» клітиною. Використовуючи дану методику, багато окремих клітин трансформуються й в результаті кожної трансформації отримують унікальний трансгенний об'єкт завдяки випадковій вставці чужорідної ДНК в геном. Трансгенні рослини потім регенерують з кожної окремої трансгенної клітини. Це призводить до того, що кожна клітина трансгенної рослини містить унікально вставлений трансгенний об'єкт як стабільну частину свого геному. Цю трансгенну рослину можна потім використовувати для отримання рослин потомства, кожна з яких буде містити унікальний трансгенний об'єкт. Об'єкт кукурудзи
МОМ87429 був отриманий шляхом: (ї) трансформації тисяч клітин кукурудзи за допомогою конструкції ДНК, яка містить чотири експресійні касети (кожну експресійну касету відбирали в результаті індивідуального тестування з подальшим тестуванням у комбінації з іншими трьома експресійними касетами), (ії) регенерації популяції трансгенних рослин, кожна з яких містить унікальний трансгенний об'єкт, і (ії) будь-якого багаторічного відбору об'єктів, що включає в себе тестування та аналіз молекулярних властивостей, ефективності толерантності до гербіцидів і агрономічних властивостей різних фонових генотипів тисяч об'єктів серед десятків тисяч рослин. Таким чином, об'єкт кукурудзи МОМ87429 був отриманий та відібраний як унікальний кращий об'єкт, придатний для широкомасштабного застосування в комерційних агрономічних цілях.
Як використовується в цьому документі, «трансгенний об'єкт» або «об'єкт» являє собою молекулу ДНК, створену шляхом вставки молекули трансгенної ДНК в геномну ДНК клітини рослини, використовуючи способи трансформації рослини, відомі в даній області техніки.
Подібна вставка створює нову трансгенну геномну послідовність ДНК, яка складається зі вставленої чужорідної ДНК (яка називається «трансгенною вставкою») та геномної ДНК, розташованої безпосередньо поруч із трансгенною вставкою (або «фланкуючою» трансгенну вставку) по обидві сторони від місця вставки (яка називається «фланкуючою ДНК»).
Послідовність ДНК об'єкта є унікальною та своєрідною відносно цього об'єкту та може бути легко ідентифікована при порівнянні з іншими послідовностями ДНК, як наприклад, послідовностями інших об'єктів або нетрансформованою геномною ДНК кукурудзи. Об'єкт кукурудзи МОМ87429 має нову та унікальну послідовність ДНК, яка представлена у вигляді БЗЕО
ІО МО:10, що містить послідовність трансгенної вставки, представлену в вигляді 5ЕО ІЮ МО:9, 60 та 5 ї 3" фланкуючі послідовності ДНК, представлені у вигляді ЗЕО ІЮ МО:7 та 5ЕО ІЮ МО:8,
відповідно. Таким чином, об'єкт кукурудзи МОМ87429 є молекулою ДНК, яка є невід'ємною частиною хромосоми клітин і рослин трансгенної кукурудзи, які містять цей об'єкт, і тому є статичним та може передаватися клітинам і рослинам потомства.
У цьому винаході також запропоновано потомство вихідної трансформованої клітини та рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Подібне потомство можна отримати з тканинної культури клітини шляхом самозапліднення рослини кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, або шляхом статевого схрещування рослини кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, з іншою рослиною, яка може містити або не містити цей об'єкт. Таким іншим рослиною може бути трансгенна рослина, що містить аналогічний або інший об'єкт(-и), або нетрансгенна рослина, як наприклад, рослина іншого виду. Об'єкт кукурудзи МОМ87429 передається потомству від вихідного батька через кожне покоління.
Як використовується в цьому документі, термін «кукурудза» означає 7еа тауз (також називається «маїс») й охоплює всі види рослин, які можна схрещувати з 7еа таув.
У винаході запропонований об'єкт кукурудзи МОМ87429, який надає клітинам, рослинам і насінню кукурудзи, які містять цей об'єкт, толерантності до інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, як-от хізалофоп і галоксифоп; синтетичних ауксинів, як-от дикамба та 2,4-0; інгібіторів глутамінсинтетази, як глюфосинат; а також інгібітору
Б-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтези (ЕРЗРБ) гліфосату. Об'єкт кукурудзи МОМ87429 містить чотири експресійні касети. Як використовується в цьому документі, «експресійна касета» або «касета» являє собою молекулу рекомбінантної ДНК, що містить комбінацію окремих елементів, які мають експресуватися трансформованою клітиною. У таблиці 1 представлений перелік елементів, які містяться в ЗЕО ІЮ МО:10, як показано на Фіг. 2.
Таблиця 1
Опис об'єкта кукурудзи МОМ87429
Позиція в 5ЕО ІЮ в' фланкуюча ДНК 1-1029 Гослідовність ДНК, фланкуюча 5'-кінець трансгенної
Область лівої 1030-1288 Область ДНК від Адгобасіегішт ішптеїасіеп5, яка містить границі послідовність лівої границі 1289-1359 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК послідовність "
Й Й Послідовності промотора, 5-НТО та інтрони гену р-Ба. оба 1360-3541 убіквітину від Егіапіпи5 гахеппає
Проміжна 3542-3546 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК послідовність '
Й Й Кодуюча послідовність для фосфінотрицин //- М-
С5-5У. раї 3547-4098 ацетилтрансферази (РАТ)
Ще Й Послідовність 3-нНТОо гену фруктозобісфосфат- т-віяба 4099-4475 альдолази від Зеїагіа йаїїса
Проміжна . . . 4476-4537 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК се Й Послідовності промотора, 5-НТО та інтрони гену
Р-СІЇ ра 4538-6463 убіквітину від Соїх Іасгута-|обі
Проміжна 6464-6473 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК послідовність '
Кодон-оптимізована націлююча послідовність
Т5-Аг араб 6474-6677 альбіносного та блідо-зеленого б гену від Агабіаорвіб
Інаіапа
Й Й Кодуюча послідовність для білка дикамби-
С5-Зт. ото 6678-7700 монооксигенази (ОМО)
Проміжна . . . 7701-7708 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК 7799-8008 Послідовність 3-НТО металотіонеїн-подібного білка від
Огуга заїїма
Проміжна . . . 8009-8016 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Р-АЯ.иЬд 8017-9973 Послідовності промотора, 5-НТО та інтрони гену убіквітину від Агипао допах
Проміжна 9974-9986 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК послідовність д ' р У р У
Й Й Послідовність транзитного пептиду гену т5-Атай 9987-10229 малатдегідрогенази від Агарідорзів5 Іпаіапа
С5-5пЛІ1 10230-11117 Кодуюча послідовність для білка ЕТ Т
Проміжна . . . 11118-11132 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК 11133-11649 Послідовність 3-НТО білка неапікальної меристеми від
Огуга заїма
Проміжна . . . 11650-11655 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Р-Саму 355 11656-11979 Промотор і лідер з РНК 355 вірусу мозаїки цвітної капусти
Проміжна . . . 11980-12001 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Й Й Лідерна послідовність 5-НТО з хлорофіл а/р-зв'язуючого
І-та.сар 12002-12062 білка від Тийісит аевіїмит
Проміжна . . . 12063-12078 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Овтаси 12079-12558 Послідовність інтрону та НТО білка актину 1 від Огуа займа
Проміжна . . . 12559-12567 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Т8-АЕСТРО 12568-12795 Послідовність транзитного пептиду гену ЗиКО від
Агарідорзів Іпаіапа
Й Й Кодуюча послідовність для білка 5-енолпірувілшікімат-3-
С-сраврвре 12796-14163 ) фосфатсинтези (СРА-ЕРЗРУЗ
Проміжна 14164-14169 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК послідовність " 14170-14370 Послідовність міРНК-мішені, специфічної до тканин чоловічих рослин
Проміжна . . . 14371-14378 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Й Й Послідовність 3-НТО гену багатого гліцином РНК-
Т-Ов.огр3 14379-14989 зв'язуючого білка (сгр3) від Огуа займа
Проміжна . . . 14990-15030 Послідовність, яка використовується при клонуванні ДНК
Область правої 15031-15037 Область ДНК від Адгобасіегішт ішптеїасіеп5, яка містить границі послідовність правої границі
З фланкуюча ДНК 15038-16068 Фланкуюча ДНК
Як використовується в цьому документі, термін «рекомбінантний» стосується неприродних
ДНК, білка або організму, які зазвичай не зустрічаються в природі та були створені шляхом втручання людини. Як використовується в цьому документі, «молекула рекомбінантної ДНК» являє молекулу ДНК, що містить комбінацію молекул ДНК, які природним чином не зустрічаються разом, і яка є результатом втручання людини, наприклад, молекулу ДНК, яка містить комбінацію щонайменше двох молекул ДНК, гетерологічних відносно одна одної, як-от молекула ДНК, яка містить трансгени і геномну ДНК рослини, суміжну з трансгеном. Прикладом молекули рекомбінантної ДНК є молекула ДНК, яка містить щонайменше одну послідовність, вибрану з 5ЕО ІЮО МО:1-10. Як використовується в цьому документі, «рекомбінантна рослина» являє собою рослину, якої зазвичай не існує в природі, яка є результатом втручання людини та містить молекулу трансгенної ДНК. В результаті подібної геномної зміни рекомбінантна рослина являє собою щось нове та явно відрізняється від спорідненої рослини дикого типу. Прикладом рекомбінантної рослини є рослина кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Як використовується в цьому документі, термін «трансген» стосується молекули ДНК, штучним чином включеної в геном організму в результаті втручання людини, наприклад, за допомогою способів трансформації рослини. Трансген може бути гетерологічним по відношенню до організму. Термін «трансгенна вставка», як використовується в цьому документі, стосується чужорідної ДНК, вставленої за допомогою методик трансформації рослини в геном кукурудзи для отримання об'єкта кукурудзи МОМ87429. Послідовність для трансгенної вставки об'єкта кукурудзи МОМ87429 представлена у вигляді ЗЕО ІЮ МО:9. Термін «трансгенний» стосується будь-чого, що містить трасген, наприклад, термін «трансгенна рослина» стосується рослини, що містить трансген.
Як використовується в цьому документі, термін «гетерологічний» стосується першої молекули, яка зазвичай не зв'язана з другою молекулою або організмом у природі. Наприклад, молекула ДНК може походити від першого виду та бути вставленою в геном другого виду.
Молекула ДНК, таким чином, буде гетерологічною відносно геному та організму.
Як використовується в цьому документі, термін «химерний» стосується однієї молекули
ДНК, отриманої шляхом злиття першої молекули ДНК з другою молекулою ДНК, причому ані перша, ані друга молекули ДНК зазвичай не зустрічаються в цій конфігурації, будучи злитою з іншою молекулою. Химерна молекула ДНК, таким чином, являє собою нову молекулу ДНК, яка зазвичай не зустрічається в природі. Прикладом химерної молекули ДНК є молекула ДНК, яка містить щонайменше одну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:1-10.
Як використовується в цьому документі, термін «виділений» стосується видалення молекули від інших молекул, які зазвичай з нею зв'язані в нативному або природному стані. Таким чином, термін «виділений» може стосуватися молекули ДНК, яка була відокремлена від іншої(-их) молекули(молекул) ДНК, з якою вона зв'язана в нативному або природному стані. Подібна молекула ДНК може бути присутньою в рекомбінантному стані, наприклад, у вигляді молекули рекомбінантної ДНК. Таким чином, молекула ДНК, видалена зі свого природного стану та злита з іншою молекулою ДНК, з якою вона зазвичай не зв'язана, буде виділеною молекулою ДНК.
Подібну виділену молекулу ДНК можна отримати шляхом застосування біотехнологічних методик, як створення рекомбінантної ДНК або інтеграція чужорідної ДНК в хромосому клітини, рослини або насіння.
У винаході запропоновані молекули ДНК та їх відповідні послідовності ДНК. Як використовується в цьому документі, терміни «ДНК» та «молекула ДНК» стосуються молекули дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК). Молекула ДНК може бути геномною або синтетичного
Зо походження та зазвичай йде в напрямку від 5' (верхнього) кінця до 3' (нижнього) кінця. Як використовується в цьому документі, термін «послідовність ДНК» стосується нуклеотидної послідовності молекули ДНК. Використовувана номенклатура відповідає вимогам розділу 37
Кодексу федеральних правил США 51.822 та викладена в таблицях стандарту ВОІВ 57.25 (1998), додатку 2, таблицях 1 та 3. Умовно вважається, що послідовності ДНК за винаходом та їх фрагменти описані з посиланням тільки на один ланцюг з двох комплементарних ланцюгів послідовності ДНК. Відповідно до змісту або намірів, комплементарні послідовності з послідовностей, представлених в цьому документі (послідовності комплементарного ланцюга), також званих в даній області обернено комплементарними послідовностями, знаходяться в межах обсягу винаходу та явно призначені для охоплення обсягом заявленого предмету винаходу. Таким чином, як використовується в цьому документі, посилання на 5ЕО ІЮ МО:1-10 та їх фрагменти включають в себе та стосуються послідовності комплементарного ланцюга та його фрагментів.
Як використовується в цьому документі, термін «фрагмент» стосується меншого шматка цілого. Наприклад, фрагменти ЗЕО ІЮ МО:10 будуть включати в себе послідовності, які складаються з щонайменше близько 10 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 11 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 12 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 13 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 14 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 15 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 16 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 17 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 18 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 19 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 20 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 25 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 30 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 35 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 40 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 45 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 50 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 60 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 70 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 80 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 90 послідовних нуклеотидів, щонайменше близько 100 послідовних нуклеотидів з повної послідовності зЗЕО ІЮ
МО:10.
Послідовність ДНК для трансгенної вставки об'єкта кукурудзи МОМ87429 представлена у бо вигляді 5Е0О ІЮ МО:9. Послідовність ДНК трансгенної вставки та геномної ДНК кукурудзи,
фланкуючої кожну сторону трансгенної вставки, представлена у вигляді 560 ІЮ МО:10.
Послідовності ДНК частини фланкуючої ДНК і 5' кінця трансгенної вставки представлені у вигляді ЗЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:З3, 5ЕО ІЮО МО:5 та 5ЕО ІЮО МО:7. Послідовності ДНК частини фланкуючої ДНК і 3" кінця трансгенної вставки представлені у вигляді зЗЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІЮ
МО:4, ЗЕО ІЮ МО:6 та ЗЕО ІЮ МО:8.
Послідовність ДНК області, яка припадає на з'єднання за допомогою фосфодіетерного зв'язку одного кінця трансгенної вставки з фланкуючою геномною ДНК кукурудзи, називається в цьому документі «з'єднанням». З'єднання є точкою зв'язування трансгенної вставки з фланкуючою ДНК в одну безперервну молекулу. Одне з'єднання знаходиться на 5 кінці трансгенної вставки, а інше з'єднання - на 3' кінці трансгенної вставки, в цьому документі вони називаються 5 та 3 з'єднаннями, відповідно. «Послідовність з'єднання» стосується послідовності ДНК будь-якої довжини, яка охоплює 5' або 3' з'єднання об'єкту. Послідовності з'єднання об'єкту кукурудзи МОМ87429 будуть очевидні фахівцеві в даній області техніки, який використовує ЗЕО ІЮ МО:10. Приклади послідовностей з'єднання об'єкту кукурудзи МОМ87429 представлені у вигляді 5ЕО ІЮ МО:1-8. На Фіг. 1 проілюстровано фізичне розташування 5ЕО ІЮ
МО:1-10, розташованих від 5' до 3". Послідовності з'єднання об'єкту кукурудзи МОМ87429 можуть бути присутніми як частина геному рослини, насіння або клітини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Ідентифікація будь-якої однієї або більше з 5ЕО ІЮ МО:1-8 або 10 в зразку, отриманому від рослини, частини рослини, насіння або клітини, вказує на те, що ДНК була отримана від кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, і дозволяє діагностувати присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429.
Рослини, насіння, клітини, частини рослини та товари за винаходом можна використовувати для виявлення ДНК або молекул білка, які свідчать про присутність об'єкту. кукурудзи
МОМ87429. Запропоновані приклади молекул ДНК, які можна використовувати в якості праймерів або зондів для виявлення присутності об'єкту кукурудзи МОМ87429 в зразку. Такі праймери або зонди є специфічними відносно послідовності цільової нуклеїнової кислоти і, таким чином, придатні для ідентифікації об'єкту кукурудзи МОМ87429 способами, описаними в цьому документі. Виявлення присутності об'єкту кукурудзи МОМ87429 може здійснюватися способами, відомими в даній галузі техніки, як-от термічна ампліфікація нуклеїнової кислоти або
Зо методики гібридизації нуклеїнової кислоти (як-от нозерн-блотинг та саузерн-блотинг). «Праймер» являє собою молекулу ДНК, сконструйовану для застосування в способах відпалу або гібридизації, які передбачають реакцію ампліфікації. Реакція ампліфікації - це реакція іп міго, яка ампліфікує шаблон ДНК з отриманням амплікону. Як використовується в цьому документі, «амплікон» являє собою молекулу ДНК, яку синтезували за допомогою методик ампліфікації. Амплікони за винаходом містять послідовність ДНК, що містить одну або більше з 5ЗЕО ІЮ МО:1-10 або їх фрагменти. Пара праймерів може використовуватися з шаблоном ДНК, як-от зразок геномної ДНК кукурудзи, в реакції ампліфікації, як-от полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), для отримання амплікону, причому отриманий амплікон матиме послідовність ДНК, яка відповідає послідовності шаблону ДНК, розташованому між двома сайтами, де праймери гібридизувались з шаблоном. Праймер, як правило, сконструйований з можливістю гібридизації з цільовим комплементарним ланцюгом ДНК для утворення гібриду між праймером і цільовим ланцюгом ДНК. Присутність праймера є для полімерази точкою розпізнавання для початку подовження праймеру, використовуючи в якості шаблону цільовий ланцюг ДНК. Пари праймерів стосуються використання двох праймерів, які зв'язують протилежні ланцюги дволанцюгового нуклеотидного сегменту, з метою ампліфікації нуклеотидного сегменту між ними. Приклади послідовностей праймерів представлені у вигляді
ЗЕО ІЮО МО:11 (5051062) та 5ЕО ІЮ МО:12 (5051053). Пари праймерів, представлені як ЗЕО ІЮ
МО:11 та 5ЕО ІЮО МО:12, використовуються як перша молекула ДНК і друга молекула ДНК, причому перша молекула ДНК являє собою фрагмент послідовності ДНК ЗЕО ІЮ МО:10 трансгенної вставки, а друга молекула ДНК являє собою фрагмент фланкуючої послідовності
ДНК 5ЕО ІО МО:10, та обидві мають достатню довжину, щоб функціонувати в якості праймерів
ДНК при використанні разом у реакції ампліфікації з ДНК, яка містить об'єкт кукурудзи
МОМ87429, для отримання амплікону, що дозволяє діагностувати об'єкт кукурудзи МОМ87429 в зразку. Пари праймерів цього винаходу можуть в окремих випадках здійснення визначатися як такі, що містять першу та другу молекули ДНК, причому перша молекула ДНК являє собою фрагмент геномної частини 5ЕО І МО:10 кукурудзи, а друга молекула ДНК являє собою фрагмент трансгенної частини 5ЕО ІЮ МО:10, та обидві мають достатню довжину, щоб функціонувати в якості праймерів ДНК при використанні разом у реакції ампліфікації з ДНК, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, для отримання амплікону, що дозволяє діагностувати 60 об'єкт кукурудзи МОМ87429 в зразку.
«Зонд» являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка є комплементарною відносно ланцюга цільової нуклеїнової кислоти та використовується в способах виявлення гібридизації.
Зонди згідно з винаходом включають в себе не тільки дезоксирибонуклеїнову або рибонуклеїнову кислоти, але також поліаміди та інші матеріали зондів, які специфічно зв'язуються з цільовою послідовністю ДНК, і виявлення такого зв'язування може бути придатним для виявлення присутності або відсутності цільової послідовності ДНК. Зонд може бути приєднаний до звичайної виявленої мітки або репортерної молекули, як-от радіоактивний ізотоп, ліганд, хемілюмінесцентний агент або фермент. Приклад послідовності ДНК, придатної в якості зонду для виявлення об'єкту кукурудзи МОМ87429, представлений у вигляді 560 ІЮ
МО:13 (РВ5О370).
Способи конструювання та використання праймерів і зондів добре відомі в даній області техніки. Молекули ДНК, які містять повну довжину або фрагменти 5ЕО ІЮ МО:1-10, придатні в якості праймерів і зондів для виявлення об'єкту кукурудзи МОМ87429 і можуть бути легко сконструйовані фахівцем в даній області техніки за допомогою послідовностей, запропонованих в цьому документі.
Зонди та праймери за цим винаходом можуть мати повну ідентичність послідовності з цільовою послідовністю, хоча за допомогою звичайних способів можуть бути сконструйовані праймери та зонди, які відрізняються від цільової послідовності, що зберігають здатність гібридизуватися переважно з цільовими послідовностями. Щоб молекула нуклеїнової кислоти могла служити в якості праймеру або зонду, їй необхідно бути всього лише достатньо комплементарною в послідовності, щоб бути в змозі утворювати стабільну дволанцюгову структуру при конкретних використовуваних концентраціях розчинника й солі. Будь-який звичайний спосіб гібридизації або ампліфікації нуклеїнових кислот може використовуватися для ідентифікації присутності трансгенної ДНК об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку. Довжина зондів і праймерів, як правило, становить щонайменше близько 11 нуклеотидів, щонайменше близько 18 нуклеотидів, щонайменше близько 24 нуклеотидів або щонайменше близько 30 нуклеотидів. Такі зонди та праймери специфічно гібридизуються з цільовою послідовністю ДНК в жорстких умовах гібридизації. Звичайні умови жорсткості описані в МЕ ОСгееп апа .) Затргоок,
Мо!есшаг сіопіпд: а Іарогаїюгу тапиаї, 4 Едйоп, Соїа ріпу Нагбог І арогаюгу Ргез5, Соїа бргіпд
Зо Нагброг, МУ (2012). Як використовується в цьому документі, дві молекули нуклеїнової кислоти здатні специфічно гібридизуватися одна з одною, якщо ці дві молекули здатні утворювати антипаралельну дволанцюгову структуру нуклеїнової кислоти. Молекула нуклеїнової кислоти є «комплементом» іншої молекули нуклеїнової кислоти, якщо вони демонструють повну комплементарність. Як використовується в цьому документі, дві молекули демонструють «повну комплементарність», якщо при вирівнюванні кожний нуклеотид першої молекули є комплементарним кожному нуклеотиду другої молекули. Дві молекули є «мінімально комплементарними», якщо вони можуть гібридизуватися одна з одною досить стабільно, щоб дозволити їм залишатися анельованими одна з одною щонайменше в звичайних умовах «низької жорсткості». Аналогічно, молекули є «комплементарними», якщо вони можуть гіоридизуватися одна з одною досить стабільно, щоб дозволити їм залишатися анельованими одна з одною ов звичайних умовах «високої жорсткості». Відхилення від повної комплементарності є, таким чином, допустимими доти, доки такі відхилення не будуть повністю позбавляти молекули можливості утворювати дволанцюгову структуру.
Відповідні умови жорсткості, які сприяють гібридизації ДНК, наприклад, 6,0 х хлорид натрію/цитрат натрію (55С2) при близько 45 "С з подальшим промиванням у 2,0 х З5С при 50 "С, відомі фахівцям в даній області техніки та можуть бути знайдені в Ситепі Ргоїосої5 іп МоЇІесшаг
Віоіоду, Чопп МУйеу 4 Бопб5, ММ (1989), 6.3.1-6.3.6. Наприклад, концентрація солі на стадії промивання може бути вибрана в діапазоні від низької жорсткості близько 2,0 Х 55С при 50 "С до високої жорсткості близько 0,2 х 55С при 50 "С. Крім того, температуру на стадії промивання можна підвищувати в діапазоні від умов низької жорсткості при кімнатній температурі, близько 22"С, до умов високої жорсткості при близько 65 "С. Можна варіювати обидва значення температури та концентрації солі або ж можна підтримувати постійним одне зі значень: температуру або концентрацію солі, а інше значення змінювати.
Запропоновано білки, які можна використовувати для отримання антитіл для виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку. Такі антитіла є специфічними відносно одного або більше білків, які кодуються об'єктом кукурудзи МОМ87429. Послідовність ДНК, яка кодує такі білки, представлена у вигляді зЗЕО ІЮ МО:10, а початкові позиції та кінцеві позиції кодуючої послідовності вказані в таблиці 1. Послідовність ДНК, яка кодує кожний білок, і білок, який кодується послідовністю, використовуються для отримання антитіл для виявлення бо присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 способами, описаними в цьому документі. Виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 може здійснюватися за допомогою будь-яких методик виявлення білка, відомих в даній області техніки, як-от вестерн-блотинг, імунопреципітація, імуноферментний аналіз (ІФА), приєднання антитіла до виявленої мітки або репортерної молекули (як-от радіоактивний ізотоп, ліганд, хемілюмінесцентний агент або фермент) або ферментативна активність на репортерній молекулі. Один спосіб передбачає приведення в контакт зразка з антитілом, яке зв'язується з білюм ОМО, РАТ, ЕТ Т або СРА-ЕРБР5, яке кодуються об'єктом кукурудзи МОМ87429, а потім виявлення присутності або відсутності зв'язування антитіла. Зв'язування такого антитіла дозволяє діагностувати присутність одного або більше білків, кодованих об'єктом кукурудзи МОМ87429.
Запропоновано набори для виявлення білка та нуклеїнової кислоти з метою виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429. Варіації таких наборів також можуть бути розроблені, використовуючи композиції й способи, описані в цьому документі, а також способи, добре відомі в області виявлення білків і нуклеїнових кислот. Набори для виявлення білка та нуклеїнової кислоти можуть застосовуватися в способах схрещування з рослинами, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Такі набори містять праймери або зонди, що містять фрагменти ЗЕО ІЮ
МО:1-10 або антитіла, специфічні відносно білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429.
Один приклад набору для виявлення включає в себе щонайменше одну молекулу ДНК, яка має достатню довжину суміжних нуклеотидів ЗЕО ІЮ МО:10, щоб функціонувати в якості ДНК- зонда, придатного для виявлення присутності або відсутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку. Прикладом молекули ДНК, яку можна використовувати в якості зонда, є молекула, яка містить послідовність, представлену в вигляді 5хЕО ІЮ МО:13. Інші зонди можуть бути легко сконструйовані фахівцем в даній області техніки. Інший приклад набору для виявлення включає в себе щонайменше одну пару праймерів, використовувану для отримання амплікону, придатного для виявлення присутності або відсутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку.
Подібний спосіб може також включати в себе секвенування амплікону або його фрагменту.
Прикладами молекул ДНК, які можна використовувати в якості пари праймерів, є молекули, що містять послідовності, представлені у вигляді 5ХЕО ІЮО МО:11 ії 5ЕО ІЮ МО:12, відповідно. Інші пари праймерів можуть бути легко сконструйовані фахівцем в даній області техніки. Набори за винаходом також можуть необов'язково містити реагенти для проведення реакцій виявлення
Зо або діагностування, описаних в цьому документі. Інший приклад набору для виявлення включає в себе щонайменше одне антитіло, специфічне відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429. Наприклад, в такому наборі може використовуватися тест- смужка з технологією латеральної дифузії, що містить реагенти, які активуються при контакті кінчика смужки з водним розчином. Прикладами білків, які можуть використовуватися для отримання антитіл, є білки, кодовані послідовністю, представленою в вигляді ЗЕО ІЮ МО:10, або будь-яким її фрагментом.
У винаході запропоновані рослини кукурудзи, її потомство, насіння, клітини та частини рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, а також товари, які виробляють з їх використанням. Рослини, потомство, насіння, клітини, частини рослини й товари за винаходом містять виявлену кількість ДНК, що містить щонайменше одну з послідовностей, представлених у вигляді БЕО ІЮ МО:1-8 і БЕО ІЮ МО:10.
Рослини, потомство, насіння, клітини та частини рослини за винаходом можуть також містити одну або більше додаткових трансгенних ознак, зокрема, введених шляхом схрещування рослини кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, з іншою рослиною, яка містить додаткову трансгенну ознаку(-и). Такі ознаки включають в себе без обмеження підвищену стійкість до комах, підвищену ефективність водокористування, підвищену врожайність, підвищену посухостійкість, підвищену якість насіння, підвищену харчову цінність, виробництво гібридного насіння та/або підвищену толерантність до гербіцидів, при цьому ознака оцінюється відносно рослини кукурудзи, яка не має подібну трансгенну ознаку.
Рослини за винаходом можуть використовуватися для отримання потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. Як використовується в цьому документі, «потомство» включає в себе будь-яку рослину, насіння та клітину, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, успадкований від рослини-попередника, на що вказує рослина, яка містить молекулу ДНК, що має щонайменше одну послідовність, вибрану з БЕО ІЮ МО:1-8 і БЕ ІЮ МО:10. Рослини, насіння та клітини можуть бути гомозиготними або гетерозиготними за об'єктом кукурудзи МОМ87429.
Рослини потомства можуть бути вирощені з насіння, отриманих від рослини кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, або з насіння, отриманих від рослини кукурудзи, заплідненої пилком, який містить об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Як використовується в цьому документі, «частина рослини» за винаходом являє собою бо будь-яку частину рослини, що містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. Частини рослини містять у собі без обмеження зразки тканини, пилок, насінний зачаток, стручок, квітку, коріння, стебла, волокна та листя повністю або частинами. Частини рослини можуть бути життєздатними або нежиттєздатними.
У винаході запропонований товар, який виробляють з рослин, що містять об'єкт кукурудзи
МОМ87429. Товари за винаходом містять виявлену кількість ДНК, що містить послідовність ДНК, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО:1-10. Як використовується в цьому документі, «товар» стосується будь-якої композиції або продукту, які складаються з матеріалу, отриманого з рослини, насіння, клітини або частини рослини, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Товари включають в себе без обмеження оброблене насіння, зерна, частини рослини та борошно. Товар за винаходом буде містити виявлену кількість ДНК, яка відповідає об'єкту кукурудзи МОМ87429. Виявлення однієї або більше таких ДНК у зразку можна використовувати для визначення складу або джерела походження товару. Може використовуватися будь-який стандартний спосіб виявлення молекул ДНК, зокрема, способи виявлення, описані в цьому документі.
Об'єкт кукурудзи МОМ87429 містить чотири експресійні касети, які разом забезпечують толерантність до інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі; синтетичним ауксинам; інгібіторам глутамінсинтетази та інгібіторам 5- енолпірувілшікімат-З-фосфатсинтези (ЕРБР5Б).
Як використовується в цьому документі, інгібітори ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі (які називаються «ФОП-гербіцидами») включають в себе без обмеження клодинафоп, клодинафоп-етил, клодинафоп-пропаргіл, цигалофоп, цигалофоп-бутил, диклофоп, диклофоп-метил, диклофоп-Р, диклофоп-Р-метил, феноксапроп, феноксапроп-Р, феноксапроп-Р-етил, фентіапроп, флуазифоп, флуазифоп-бутил, флуазифоп-
Р, флуазифоп-Р-бутил, флуроксипір, галоксифоп, галоксифоп-етотил, галоксифоп-метил, галоксифоп-Р, галоксифоп-Р-метил, ізоксапірифоп, метаміфоп, пропаквізафоп, хізалофоп, хізалофоп-етил, хізалофоп-Р, хізалофоп-Р-етил, хізалофоп-Р-тефурил і трифоп.
Як використовується в цьому документі, синтетичні ауксини включають в себе без обмеження гербіциди на основі бензойної кислоти, гербіциди на основі феноксикислоти, гербіциди на основі арилпіколінатів і гербіциди на основі піридинілокси кислоти. Приклади
Ко) гербіцидів на основі бензойної кислоти включають в себе без обмеження дикамба (3,6-дихлор- 2-метоксибензойну кислоту), солі дикамби, дикамба-бутотил, диглікольамінову сіль дикамби, дикамба-диметиламоній, дикамба-діетаноламоній, дикамба-ізопропіламоній, дикамба-калій, дикамба-натрій та дикамба-троламін. Прикладами гербіцидів на основі феноксикислоти є 2,4-0 (2,4-дихлорфеноксиоцтова кислота), 2,4-ЮО-бутотил, 2,4-Ю-бутил, 2,4-ЮО-холін, 2,4-0- диметиламоній, 2,4-ЮО-діоламін, 2,4-О-етил, 2,4-0-2-етилгексил, 2,4-О-ізобутил, 2,4-ЮО-ізоктил, 2,А-0- ізопропіл, 2,4-О-ізопропіламоній, 2,4-Ю-калій, 2,4-О-натрій, 2,4-О-триїізопропаноламоній, 2,А4-Ю--роламін, кломепроп, дихлорпроп, фенопроп, МСРА, МСРА-бутотил, МеОРА- диметиламоній, МСРА-2-етилгексил, МСРА-ізопропіламоній, МСРА-калій, МСРА-натрій, МСРА- тіоетил, 2,4-ОВ, МСРВ, МСРВ-метил, МСРВ-етил-натрій і мекопроп. Прикладами гербіцидів на основі арилпіколінатів є галауксифен, галауксифен-метил і флорпірауксифен-бензил.
Прикладами гербіцидів на основі піридинілокси кислоти є триклопір, флуроксипір, амінопіралід, клопіралід та піклорам.
Як використовується в цьому документі, інгібітори глутамінсинтетази включають в себе без обмеження фосфінотрицин, глюфосинат, солі глюфосинат, глюфосинат-амоній, глюфосинат- натрій, глюфосинат-Р, І -глюфосинат-амоній та І -глюфосинат-натрій.
Як використовується в цьому документі, інгібітори 5-енолпірувілшікімат-З3-фосфатсинтези (ЕРБР5) включають в себе без обмеження гліфосат, солі гліфосату, гліфосат-ізопропіламоній, гліфосат-амоній, гліфосат-диметіламоній, гліфосат-тримезіум (- сульфозат), гліфосат-діамоній, гліфосат-калій та гліфосат-натрій.
Як використовується в цьому документі, «толерантний до гербіцидів», або «толерантність до гербіцидів», або «толерантність» означає здатність повністю або частково не піддаватися впливу присутності або застосування одного або більше гербіцидів, наприклад, протистояти токсичному ефекту гербіциду при його застосуванні. Клітина, насіння або рослина є «толерантними до гербіциду» або мають «підвищену толерантність», якщо здатні зберігати щонайменше певний нормальний ріст або фенотип у присутності одного або більше гербіцидів.
Ознака є ознакою толерантності до гербіциду, якщо його наявність здатна надати підвищену толерантність до гербіциду клітині, рослині або насінню в порівнянні з клітиною, рослиною або насінням дикого типу або контрольною клітиною, рослиною або насінням. Культури, які мають ознаку толерантності до гербіцидів, можуть продовжувати своє зростання в присутності бо гербіциду, і присутність гербіциду мінімальним чином вплине на такі культури. Білок буде забезпечувати «толерантність до гербіциду», якщо експресія цього білка може надати підвищену толерантність до гербіциду клітині, рослині або насіння в порівнянні з клітиною, рослиною або насінням дикого типу або контрольною клітиною, рослиною або насінням.
Прикладами білків толерантності до гербіцидів є фосфінотрицин М-ацетилтрансфераза, послідовність, кодуюча дикамба-монооксигеназу, білок ЕТ Т і послідовність, кодуюча толерантну до гліфосату 5-енолпірувілшікімат-3-фосфатсинтезу, від штаму СРА Адгобасіегійт 5р. Толерантність до гербіциду може являти собою повну або часткову несприйнятливість до певного гербіциду та може виражатися у вигляді відсотку (95) толерантності або несприйнятливості до певного гербіциду.
Як використовується в цьому документі, «бур'ян» являє собою будь-яке небажане явище.
Рослина може вважатися небажаною загалом для сільського господарства або рослинництва (наприклад, вид Атагапійих) або може вважатися небажаною в конкретній ситуації (наприклад, сільськогосподарська культура одного виду на полі з рослинами іншого виду, також відома як самосівна рослина). Бур'яни широко відомі в даній області техніки та відрізняються залежно від географічної місцевості, сезону, умов вирощування і часу. Переліки видів бур'янів доступні в сільськогосподарських і наукових суспільствах та ініціативах (як-от Американське наукове товариство з боротьби з бур'янами, Канадське наукове товариство з боротьби з бур'янами,
Бразильське наукове товариство з боротьби з бур'янами, Міжнародне наукове товариство з боротьби з бур'янами та Міжнародне дослідження стійких до гербіциду бур'янів), державних органах (як-от Міністерство сільського господарства США та Міністерство навколишнього середовища та енергетики Австралії), а також промислових і фермерських асоціаціях (як-от
Національна асоціація кукурудзоводів).
У винаході запропоновані способи контролю росту бур'янів на ділянці культивування кукурудзи шляхом застосування щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, яка складається з (ії) інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, як-от хізалофоп і галоксифоп; (ії) синтетичних ауксинів, як-от дикамба та 2,4-0; (іїї) інгібіторів глутамінсинтетази, як-от глюфосинат; і (ім) інгібітора 5-енолпірувілшікімат-3- фосфатсинтези (ЕРБР5) гліфосату, причому насіння або рослини, які містять об'єкт кукурудзи
МОМ87429, культивуються на ділянці до, під час або після застосування гербіциду, та
Зо застосування гербіциду запобігає росту або інгібує ріст бур'янів, не завдаючи шкоди рослинам кукурудзи. Ділянка вирощування рослин може мати або не мати бур'янів на момент застосування гербіциду. Гербіцид(-и), який використовується в способах даного винаходу, може застосовуватися самостійно або в комбінації з одним або більше гербіцидів за врожайний сезон.
Гербіцид(-и), який використовується в способах даного винаходу, може застосовуватися в комбінації з одним або більше гербіцидів в тимчасовому аспекті (наприклад, у вигляді бакової суміші або шляхом послідовного застосування), в просторовому аспекті (наприклад, в різні моменти часу протягом врожайного сезону, включно з часом до та після посадки насіння кукурудзи) або в обох аспектах. Наприклад, запропонований спосіб контролю росту бур'янів, який включає в себе посадку насіння, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, на ділянці та застосування за врожайний сезон гербіцидно ефективної кількості одного або більше з дикамби, глюфосинату, гліфосату, 2,4-О або ФОП-гербіциду самостійно або в будь-якій комбінації з іншим гербіцидом з метою контролю росту бур'янів на ділянці, не завдаючи шкоди рослинам, що містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. Подібне застосування гербіциду(-ів) може відбуватися перед посадкою (в будь-який час перед посадкою насіння, яке містить об'єкт кукурудзи
МОМ87429, включно з метою повного знищення, тобто застосування до бур'янів, які з'являються або вже зростають, перед посадкою рослин), перед сходом (в будь-який час після посадки насіння, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, і перед сходом рослин, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429) або після сходів (в будь-який час після сходів рослин, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429). За врожайний сезон можливо кілька застосувань одного або більше гербіцидів або комбінації гербіцидів разом або окремо, наприклад, два застосування (наприклад, застосування перед посадкою та застосування після сходу, або застосування перед сходом і застосування після сходу) або три або більше застосувань (наприклад, застосування перед посадкою та два застосування після сходів).
Застосування гербіциду при здійсненні способів даного винаходу може здійснюватися з рекомендованою комерційної нормою внесення або її частини або кратній величині, наприклад, з подвійною рекомендованою комерційною нормою внесення. Норми внесення гербіциду можуть бути виражені як кислотний еквівалент на фунт на акр (фунтів ке/акр) або активний інгредієнт на фунт на акр (фунтів аїі/акр) залежно від гербіциду та його складу. Застосування гербіциду може здійснюватися з рекомендованою комерційною нормою внесення або її частини бо або кратній величині. Використання акрів з нормами внесення гербіциду, як запропоновано в цьому документі, носить виключно інформативний характер; норми внесення гербіцидів у еквівалентних дозах до будь-якої з норм внесення, запропонованих в цьому документі, можуть бути використані на ділянках, більших або менших за площею, ніж акр. Застосування гербіцидів включає в себе щонайменше один гербіцид, вибраний з групи, яка складається з (Її) інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифенокси пропіонатній (ФОП) групі, як-от хізалофоп і галоксифоп; (ії) синтетичних ауксинів, як-от дикамба та 2,4-0; (іїї) інгібіторів глутамінсинтетази, як-от глюфосинат; і (ім) інгібітора 5-енолпірувілшікімат-З-фосфатсинтези (ЕРБР5Б) гліфосату.
Ділянка вирощування рослин може мати або не мати бур'янів на момент застосування гербіциду. Гербіцидно ефективна кількість ФОП-гербіцидів, яка використовується на ділянці з метою контролю росту бур'янів, має знаходитися в діапазоні від близько 0,01 фунта аї/акр до близько 1,0 фунта аї/акр за врожайний сезон (наприклад, хізалофоп може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,034 фунта аї/акр до близько 0,083 фунта аїі/акр, а галоксифоп може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,018 фунта аї/акр до близько 0,07 фунта аі/(акр). Гербіцидно ефективна кількість синтетичних ауксинів (феноксикислот), яка використовується на ділянці з метою контролю росту бур'янів, має знаходитися в діапазоні від близько 0,1 фунта ке/акр до близько 10 фунтів ке/акр за врожайний сезон (наприклад, 2,4-0 може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,75 фунта ке/акр до близько 1,0 фунта ке/акр). Гербіцидно ефективна кількість синтетичних ауксинів (піридинілокси кислот), яка використовується на ділянці з метою контролю росту бур'янів, має знаходитися в діапазоні від близько 0,05 фунта ке/акр до близько 5,0 фунтів кеЛакр за врожайний сезон (наприклад, флуроксипір може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,14 фунта ке/акр до близько 0,49 фунта ке/акр). Гербіцидно ефективна кількість синтетичних ауксинів (бензойної кислоти), яка використовується на ділянці з метою контролю росту бур'янів, має знаходитися в діапазоні від близько 0,1 фунта ке/акр аж до близько 16 фунтів кеЛакр за врожайний сезон (наприклад, дикамба може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,5 фунта ке/акр до близько 2,0 фунта ке/акр). Гербіцидно ефективна кількість інгібіторів глутамінсинтетази, яка використовується на ділянці з метою контролю росту бур'янів, має знаходитися в діапазоні від близько 0,1 фунта ке/(акр аж до близько 10 фунтів ке/"акр за врожайний сезон (наприклад, глюфосинат може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,4 фунта аї/акр до близько
Зо 1,59 фунта аї/акр). Гербіцидно ефективна кількість інгібіторів ЕР5Р5, яка використовується на ділянці з метою контролю росту бур'янів, має знаходитися в діапазоні від близько 0,5 фунта ке/лакр до близько 12 фунтів ке/акр за врожайний сезон (наприклад, гліфосат може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,75 фунта ке/акр до близько 2,25 фунта ке/акр).
У винаході запропоновані способи контролю самосівної кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, на ділянці культивування шляхом застосування гербіцидно ефективної кількості щонайменше одного циклогександіонного (0ІМ) гербіциду, як-от клетодим, сетоксидим і тралкоксидим, причому застосування гербіциду запобігає росту кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. Гербіцидно ефективна кількість СІМ-гербіциду, яка використовується на ділянці з метою контролю самосівної кукурудзи, має знаходитися в діапазоні від близько 0,03 фунта аї/акр до близько 2,75 фунта аі/акр за врожайний сезон (наприклад, клетодим може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,0625 фунта аї/акр до близько 0,125 фунта аі/акр, а сетоксидим може застосовуватися з нормою внесення від близько 0,188 фунта аї/акр до близько 0,281 фунта аї/акр).
Запропоновано способи отримання рослин і насіння, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Рослини можуть бути виведені за допомогою будь-якого способу, відомого в даній галузі, наприклад, опис способів розведення, які широко використовуються, можна знайти в МУК ЕРенпг, іп Вгеєдіпд Меїйодв5 ог Сийімаг ЮОемеюортепі, УМіїсох у). ед., Атегісап Босієїу ої Адгопоту,
Майдієоп УМ (1987). Рослини можуть бути самозапиленими (також називаються «самозаплідненими») або перехреснозапиленими (також називаються «схрещеними»).
Рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, можуть самозапилюватися з отриманням чистої лінії схрещування рослин, які є гомозиготними за об'єктом кукурудзи МОМ87429.
Самозапліднення призводить до отримання потомства, яке називається «інбредним», і може застосовуватися для отримання інбредних ліній, які є генетично однаковими. Альтернативно, рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, можуть перехресно запилюватися (схрещуватися з іншою рослиною, яка є трансгенною або нетрансгенною) з отриманням сортового або гібридного насіння. Насіння та рослини потомства, отримані способами даного винаходу, містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Один або більше гербіцидів, толерантність до яких забезпечує об'єкт кукурудзи МОМ87429, може застосовуватися для відбору потомства, яке бо містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. Альтернативно, потомство може бути проаналізовано за допомогою діагностичних способів для відбору рослин або насіння, які містять об'єкт кукурудзи
МОМ87429. Потомство може являти собою сортові або гібридні рослини; може бути вирощено з насіння, отриманого від рослини, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, або з насіння, отриманого від рослини, заплідненого пилком рослини, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429; а також може бути гомозиготною або гетерозиготною за об'єктом кукурудзи МОМ87429.
Запропоновано способи отримання гібридного насіння, використовуючи об'єкт кукурудзи
МОМ87429. Рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, демонструють експресію толерантного до гліфосату білка СР4-ЕРБР5 в усіх тканинах, за винятком тканини чоловічих органів розмноження. Це призводить до розвитку толерантності до гліфосату в вегетативних тканинах і тканинах жіночих органів розмноження, а також до чутливості до гліфосату в тканинах чоловічих органів розмноження. Подібну чутливість до гліфосату можна використовувати для індукування чоловічої стерильності шляхом відповідного застосування гліфосату. Гліфосат - це гербіцид системної дії, який транслокується з джерела в тканину кореневища рослин. Виходячи зі швидкості метаболізму гліфосату в кукурудзі, його застосування до рослин, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, до моменту розвитку тканини чоловічих органів розмноження може перешкодити утворенню пилку, скиданню пилку або викиданню пиляків. Така викликана гліфосатом чоловіча стерильність може використовуватися для підвищення ефективності вироблення гібридного насіння, наприклад, шляхом виключення або зниження потреби фізично «каструвати» рослину кукурудзи, яка використовується в якості жіночої особи при заданому схрещуванні в процесі отримання гібридного насіння.
У винаході запропонований спосіб отримання гібридного насіння, який включає в себе (а) вирощування рослини, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, (р) застосування до рослини ефективної кількості гліфосату з метою індукувати чоловічу стерильність, причому застосування гербіциду відбувається до або під час розвитку тканин чоловічих органів розмноження рослини, викликаючи, таким чином, у рослини чоловічу стерильність; (с) запліднення рослини пилком другої рослини і (4) збір гібридного насіння з рослини. В одному варіанті здійснення гліфосат застосовують до або під час розвитку в ефективній кількості від близько 0,25 фунта ке/акр до близько 11,0 фунтів ке/акр в сукупності за одне або більше застосувань. В іншому варіанті здійснення стадія запліднення може відбуватися шляхом пасивного запліднення (наприклад, запилення вітром) або за допомогою інших способів, як-от механічне запилення, запилення вручну або їх комбінації. Застосування гербіциду може відбуватися за один або більше разів до або під час розвитку тканин чоловічих органів розмноження, наприклад, на стадії, вибраної з групи, яка складається зі стадій М4, М5, Мб, М7, М8, М9, М10, М11, М12, М13 ії М14 розвитку рослини кукурудзи, і може перешкоджати щонайменше утворенню пилку, скиданню пилку або викиданню пиляків. Чоловіча стерильність може бути частковою або повною. В одному варіанті здійснення ефективна кількість гліфосату складатиме від близько 0,5 фунта ке/акр до близько 2,5 фунта ке/акр в сукупності (за одне застосування або розділене на два або більше застосувань) і застосовуватися на стадіях з М4 по У8 або аж до 100 одиниць ступеню зростання (дгом/іпа дедгее ипії5 - 50) до цвітіння.
Рослини, потомство, насіння, клітини та частини рослини винаходу можуть також містити один або більше додаткових ознак кукурудзи або трансгенних об'єктів, зокрема, введених шляхом схрещування рослини кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, з іншою рослиною кукурудзи, яка містить додаткові ознаки або трансгенні об'єкти. Такі ознаки або трансгенні об'єкти включають в себе без обмеження підвищену стійкість до комах, підвищену ефективність водокористування, підвищену врожайність, підвищену посухостійкість, підвищену якість насіння, підвищену харчову цінність, виробництво гібридного насіння та толерантність до гербіцидів, при цьому ознака оцінюється відносно рослини кукурудзи, яка не має подібної трансгенної ознаки. Трансгенні об'єкти кукурудзи відомі фахівцеві в даній області техніки; наприклад, перелік таких ознак пропонується Службою інспекції здоров'я тварин і рослин (Апітаї апа Ріапі Неайй Інзресіюп 5егуісе - АРНІ5) Міністерства сільського господарства США (півд еїаїез Юераптепі ої Аагісийите - ОЗОБА), і його можна знайти у них на веб-сайті за адресою м/лмлму.арпіз.изаа.дом. Таким чином, два або більше трансгенні об'єкти можуть бути об'єднані в рослині або насіння потомства шляхом схрещування двох батьківських рослин, кожна з яких містить один або більше трансгенних об'єктів, збору насіння потомства та відбору насіння або рослин потомства, які містять два або більше трансгенних об'єктів; дані стадії потім можна повторювати до тих пір, поки не буде отримана бажана комбінація трансгенних об'єктів у потомстві. Зворотне схрещування до батьківської рослини та ауткросинг з нетрансгенною рослиною також передбачаються, як і вегетативне розмноження.
Було зроблено депонування репрезентативного зразка насіння, яке містить об'єкт кукурудзи бо МОМ87429, відповідно до Будапештського договору в Американській колекції типових культур
(АТССФ) за адресою 10801 Опімегейу Вошемага, Мапаззав, Мігдіпіа, США, 2ір Соде 20110.
Номер показника патентного депонування АТСС (номер доступу) для насіння, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, - РТА-124635, а дата депонування - 12 грудень 2018 р. Депонування буде зберігатися в депозитарії протягом 30 років, або 5 років з моменту останнього запиту, або протягом терміну дії патенту залежно від того, що буде довше.
Як використовується в цьому документі, термін «що містить» означає «що включає в себе без обмеження».
Приклади
Подальші приклади включені з метою більш повно описати винахід. Наводиться узагальнення створення та тестування тридцяти п'яти експресійних конструкцій, отримання понад п'ятнадцяти тисяч унікальних об'єктів, а також аналізу сотень тисяч окремих рослин за сім років за допомогою строгих молекулярних, агрономічних і польових випробувань, необхідних для створення та кінцевого відбору об'єкта кукурудзи МОМ87429.
Фахівцям в даній галузі техніки має бути зрозуміло, що в конкретних розкритих прикладах може бути виконано безліч модифікацій, і все ж може бути отриманий аналогічний результат.
Деякі агенти, які є як хімічно, так і фізіологічно пов'язаними, можуть бути заміщені агентами, описаними в цьому документі, в той самий час досягаючи таких самих або аналогічних результатів. Всі подібні заміщення та модифікації, очевидні фахівцям в даній області техніки, вважаються такими, що знаходяться в межах обсягу винаходу.
Приклад 1. Тестування експресійних касет, розробка конструкцій і тестування рослин КО
Даний приклад описує розробку та тестування тридцяти п'яти різних конструкцій в рослинах кукурудзи. Кожна конструкція містила чотири експресійні касети, кожна експресійна касета використовувалася для експресії різного трансгену. Дане тестування проводилося з метою відбору найкращої конструкції для використання з метою експресії всіх чотирьох трансгенів у кукурудзі. Кожна конструкція мала унікальну конфігурацією, розрізняючись за орієнтацією та експресійними елементами експресійних касет.
Різні окремі експресійні касети з різними комбінаціями експресійних елементів і трансгенами були сконструйовані, клоновані в вектори трансформації рослин та протестовані на ефективність ознак в рослинах кукурудзи для створення пулу найкращих окремих експресійних
Зо касет. Використовуючи цей пул окремих експресійних касет, 35 різних конструкцій були створені таким чином, що кожна з них містила чотири експресійні касети (кожна експресійна касета містила трансгени для РАТ, ОМО, СР4А-ЕР5РЗ5 або ЕТ) і могла бути використана для тестування чотиристоронньої комбінації різних експресійних касет. Комбінації експресійних касет розрізнялися за експресійними елементами, кодуючої білок послідовністю та орієнтацією. Це призвело до тестування двох експресійних касет РАТ, 6 експресійних касет ОМО, 5 експресійних касет ЕТ, 18 експресійних касет СРА-ЕРБРБ. 35 конструкцій, що містять чотири експресійні касети, клонували в вектори трансформації рослин та ці вектори використовували для Адгобасіегішт-опосередкованої трансформації незрілих зародків кукурудзи І Н244, використовуючи способи, відомі в даній області техніки, з отриманням 15326 унікальних об'єктів трансформації, кожний з яких отримували шляхом випадкового введення трансгенної вставки в геном кукурудзи. Рослини КО потім регенерували з трансгенних клітин і рослини з нормальними фенотипічними характеристиками, які мають коріння, переносили в грунт для вирощування та подальшої оцінки. 15326 рослин КО аналізували на предмет присутності однієї копії трансгенної вставки та відсутності послідовності векторного остова. Рослини з однією копією вставки переходили далі для тестування ефективності толерантності до гербіцидів. Рослини КО з однією копією оцінювали в теплиці на толерантність до хізалофопу (0,16 фунта аї/акр гербіциду Ав55иге ПФ), а потім до бакової суміші глюфосинату (0,98 фунта ке/акр гербіциду Ідпіет 280), дикамби (2,0 фунта ке/акр гербіциду Сіагйут) або 2,4-Ю0 (2,0 фунта ке/акр гербіциду 2,4-О Атіпе 4Ф) (або будь-якої їх комбінації), які розпилюються на стадії росту М1//2. Рослини, які були пошкоджені » 3095, відкидали.
З початкових 15326 унікальних об'єктів трансформації, отриманих за допомогою 35 векторів трансформації, 1945 унікальних об'єктів відібрали після аналізу числа копій і даних розпилення гербіцидів. Дані представлені в Таблиці 2. Рослини КО для відібраних об'єктів самозапилювалися з отриманням насіння К1 або схрещувалися з отриманням насіння Е1, яке переходило до польових випробувань першого сезону.
Таблиця 2
Ефективність інбредних рослин після польових випробувань першого сезону пи х т Я ПОТ то ПООООНЯ КО У них т: с Я ПОТ: ПОЛЯ ПО СУД пи хх В По ЕЕ У по ПО: ХО
Приклад 2. Польові випробування першого сезону
Польові випробування проводили протягом багатьох років для об'єктів, які пройшли далі після аналізу КО за кожною з 35 конструкцій, а потім аналізували властивості кожної рослини відносно кожної конструкції протягом першого сезону польових випробувань в сукупності. Таким чином, кожна конструкція була представлена багатьма унікальними об'єктами. Це дозволило протестувати більшу кількість конструкцій в польових випробуваннях першого сезону, при цьому тільки конструкції з кращими якостями проходили далі після випробувань першого сезону. Окремі польові випробування першого сезону проводили для рослин Ка2 (гомозиготні за кожним об'єктом) відносно (1) ефективності толерантності до глюфосинату ж дикамби, хізалофопу та 2,4-Ю0 у інбредних рослин, (2) ефективності системи гібридизації Раундап (Воипадир НуБбгідаілайоп Зувієт - КН5З) і (3) випробування підвищенням норми внесення гербіцидів на толерантність до більш високих норм внесення застосовуваних гербіцидів хізалофопу, 2,4-О0, глюфосинату та дикамби.
Проводили скринінг ефективності інбредних рослин з метою оцінити толерантність до гербіцидів глюфосинату «т дикамби, хізалофопу та 2,4-ОЮ0. Обробка гербіцидом включала в себе: застосування бакової суміші глюфосинату з нормою внесення 0,8 фунта аї/акр і дикамби з нормою внесення 2,0 фунта ке/акр; хізалофопу з нормою внесення 0,16 фунта аї/акр або 2,4-О з нормою внесення 2,0 фунта аї/акр. Ділянки візуально оцінювали на пошкодження культури через 10-14 днів після обробки гербіцидом за шкалою 0-100, де «0» означав відсутність пошкодження культури, а «100» - повне знищення культури. Також оцінювали такі показники: висота рослини (РНТ), висота колоса (ЕНТ), днів до появи 5095 ниток шовку (5500), днів до появи 5095 пилку (Р5ОЮ), маса лушпиння (ЗНМ), натурна маса (ТМ/Т), вологовміст (М5Т) та вихід зерна (ХІІ 0). Всі дані піддавалися дисперсійному аналізу та поділу середніх значень при р-е0,05. Використовували загальні середні значення для безлічі рослин, які містять один і той самий об'єкт, а ефективність інбредних рослин узагальнювали для глюфосинат т дикамби, хізалофоп і 2,4-О як чудова (4), хороша (3), задовільна (2), низька (1) або не застосовується (н/з). Дані представлені в Таблиці 3.
Таблиця З
Ефективність інбредних рослин після польових випробувань першого сезону
Скринінг ефективності КНЗ у рослин проводили з метою визначити відмінності толерантності до гліфосату та викликаної гліфосатом стерильності волоті в інбредного матеріалу. Для скринінгу використовували одноразову обробку гербіцидом, яка включала в себе гліфосат з нормою внесення 1,5 фунта ке/акр, що застосовується на стадії М2, з подальшою нормою внесення 0,75 фунта ке/(акр приблизно до стадії М8 (875 днів ступеню зростання), а потім приблизно до стадії М10 (1025 днів ступеню зростання). Ділянки візуально оцінювали на 95 пошкодження культури (СІРМ2, СІРМ8, СІРМ1О та СІРМТ) за 10-14 днів після застосування гербіциду за шкалою від 0 до 100 і проводили кінцеву оцінку пошкоджень на стадії МТ (після появи волоті). Ділянки також візуально оцінювали на 956 появи ниток шовку (ЗЕЗ9А (590) та
ЗЕБЗОС (590 плюс 4 дні) ЗЕБОЕ (590 плюс 8 днів)| та 96 викидання пиляків МАЕЗО9А (590),
АЕБЗ9С (590 плюс 4 дні) та АЕ5ОЕ (590 плюс 8 днів))| за аналогічною шкалою від 0 до 100, де «0» означає відсутність появи ниток шовку або викидання пиляків, а «100» - повна поява ниток шовку або викидання пиляків. Оцінювали й інші агрономічні параметри, як у разі скринінгу ефективності інбредних рослин. Використовували загальні середні значення для безлічі рослин, які містять один і той самий об'єкт, а оцінку толерантності до гліфосату, стерильності волоті та виходу узагальнювали як чудова (4), хороша (3), задовільна (2), низька (1) або не застосовується (н/з). Дані представлені в Таблиці 4.
Таблиця 4
Ефективність КН5 після польових випробувань першого сезону
Випробування підвищенням норми внесення гербіциду проводили для оцінки толерантності культури на рівні конструкції до більш високих норм внесення застосовуваних гербіцидів: хізалофопу, 2,4-О0, глюфосинату та дикамби наступним чином. Обробки хізалофопом включали в себе: 1) хізалофоп з нормою внесення 0,32 фунта аї/акр (4Х) плюс 0,25965 об./0б. неіонної поверхнево-активної речовини (МІ5), що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 2) хізалофоп з нормою внесення 0,64 фунта аї/акр (8Х) плюс 0,2595 об./об.
МІ5, що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; або 3) хізалофоп з нормою внесення 1,28 фунта аї/акр (16Х) плюс 0,2595 о0об./06б. МІ5, що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8. Обробки 2,4-0 включали в себе: 1) 2,4-О0 амін з нормою внесення 2 фунта аї/акр плюс 0,2595 об./об. неіонної поверхнево-активної речовини (МІ5), що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 2) 2,4-О амін з нормою внесення 4 фунта аї/акр плюс 0,2595 об./о06б. МІ5, що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 3) 2,4-О амін з нормою внесення 8 фунтів аі/акр плюс 0,2595 об./06б. МІ5, що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; або 4) 2,4-О0 амін з нормою внесення 16 фунтів аі/акр плюс 0,2595 об./06. МІ5, що застосовуються на стадіях МЕ-М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії МВ. Обробки глюфосинатом включали в себе: 1) глюфосинат з нормою внесення 1,0 фунт аі/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 2) глюфосинат з нормою внесення 2,0 фунта аї/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 3) глюфосинат з нормою внесення 4,0 фунта аї/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; або 4) глюфосинат з нормою внесення 8,0 фунтів аї/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії МВ. Обробки дикамбою включали в себе: 1) дикамба з нормою внесення 2,0 фунта, застосовувана на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії У8; 2) дикамба з нормою внесення 4,0 фунта, застосовувана на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 3) дикамба з нормою внесення 8,0 фунтів, застосовувана на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8; 4) дикамба з нормою внесення 16,0 фунтів, застосовувана на стадії М2, а потім на стадії М4, а потім на стадії М8.
Ділянки візуально оцінювали на пошкодження культури, і отримували агрономічні параметри, як у випадку скринінгу ефективності інбредних рослин. Використовували загальні середні значення для безлічі рослин, які містять один і той самий об'єкт, а ефективність толерантності до гербіцидів узагальнювали для кожного з чотирьох гербіцидів як чудова (4), хороша (3), задовільна (2), низька (1) або не застосовується (н/з). Дані представлені в Таблиці 5.
Таблиця 5
Випробування підвищенням норми внесення гербіциду в рамках польових випробувань першого сезону
Дані за сукупними властивостями рослин К2, отримані з кожної з 35 конструкцій, компілювали та аналізували відносно (1) випробування ефективності інбредних рослин на толерантність до глюфосинату ж дикамби, хізалофопу та 2,4-О, (2) випробування ефективності
ЕН5 на толерантність до гліфосату, стерильність волоті та вихід, а також (3) випробування підвищенням норми внесення гербіцидів на толерантність до більш високих норм внесення застосовуваних гербіцидів хізалофопу, 2,4-О0, глюфосинату та дикамби. Використовуючи ці дані, з 35 протестованих конструкцій відібрали 3 конструкції (НТ4-14, НТ4-32 і НТ4-34) для подальшого дослідження. Об'єкти для цих З конструкцій потім переходили до польових випробувань другого сезону.
Приклад 3. Молекулярний аналіз
Молекулярний аналіз проводили одночасно з польовими випробуваннями для об'єктів, які пройшли далі. Ампліфікацію та секвенування ДНК використовували для підтвердження послідовності вставки, числа копій вставки та відсутності остову у вставці. У геномі кукурудзи картували сайт вставки для кожного об'єкту. Аналіз методом нозерн-блотингу проводили для виявлення та вимірювання транскриптів мРНК генів раї, ато, Й ї і ср4-ервр5. М-кінцеве секвенування білків РАТ, ЮМО, ЕТ Т та СР4А-ЕРБР5, очищених з трансгенних рослин,
проводили для підтвердження послідовності рекомбінантного білка. Аналіз методом вестерн- блотингу з метою виявлення білків РАТ, ОМО, ЕТ Т та СРА4А-ЕРБРЗ проводили для зразків трансгенних рослин. Поглиблений аналіз методом саузерн-блотингу проводили для геномної
ДНК, отриманої від рослин КІ, з метою підтвердження числа копій та відсутності остову.
Приклад 4. Подальші польові випробування
Подальші польові випробування (польові випробування другого сезону та наступних сезонів) проводили протягом багатьох років для об'єктів, які пройшли далі після польових випробувань першого сезону конструкцій НТ4-14, НТ4-32 та НТ4-34. Властивості багатьох окремих рослин за кожним об'єктом у кожному польовому випробуванні аналізували в сукупності. Таким чином, кожний об'єкт був представлений багатьма унікальними рослинами.
Це дозволило проаналізувати властивості кожного об'єкта в багатьох умовах, в різних локаціях і географічних місцевостях, а також відносно різних характеристик.
Польові випробування проводили для інбредних рослин (гомозиготних за об'єктом) та гібридних рослин |(гемізиготних за об'єктом) з метою оцінити (1) ефективність ознак толерантності до комерційних норм внесення глюфосинату, дикамби, хізалофопу та 2,4-0, (2) агрономічні властивості, (3) ефективність системи гібридизації Раундап (КН5) на толерантність до гліфосату, а також (4) випробування підвищенням норми внесення гербіцидів на толерантність до більш високих норм внесення застосовуваних гербіцидів хізалофопу, 2,4-0, глюфосинату та дикамби.
У ході польових випробувань 1 сезону 30 об'єктів протестували для конструкції НТ4і-14, 41 об'єкт протестували для конструкції НТ4-32, а 21 об'єкт протестували для конструкції НТ4-34.
Використовуючи зведені дані цих випробувань, були відібрані об'єкти для подальшого дослідження. У ході польових випробувань 2 сезону 15 об'єктів протестували для конструкції
НТ4і-14, 38 об'єктів протестували для конструкції НТ4-32, а 38 об'єктів протестували для конструкції НТ4-34 (ця цифра включала в себе деякі об'єкти, які не були протестовані в рамках польових випробувань 1 сезону через брак насіння в цьому сезоні). Об'єкти для конструкції НТ4- 14 були охарактеризовані за допомогою молекулярного аналізу, як описано в прикладі 3, і ці дані також використовували для відбору об'єктів. Зведені дані цих випробувань та поглиблену молекулярну характеристику об'єктів для конструкції НТ4-14 використовували для відбору З об'єктів для подальшого дослідження для конструкції НТ4-14. Зведені дані цих випробувань використовували для відбору 24 об'єктів для подальшого дослідження для конструкції НТ4-32, а також для прийняття рішення про припинення подальших випробувань для будь-яких об'єктів для конструкції НТ4-34. У ході польових випробувань З сезону протестували З об'єкти для конструкції НТ4-14 і 24 об'єкти для конструкції НТ4-34. Зведені дані цих випробувань використовували для відбору 2 об'єктів для подальшого дослідження для конструкції НТ4А-14, а також для прийняття рішення про припинення подальших випробувань для будь-яких об'єктів для конструкції НТ4-32. Польові випробування 4 сезону використовували для порівняння кінцевих двох об'єктів у великій кількості локацій, за різних умов, а також у гібридній та інбредній ідіоплазмі, щоб отримати дані, необхідні для відбору кращого об'єкту. У таблиці 6 представлена кількість унікальних об'єктів, протестованих для кожної конструкції в ході польових випробувань, які проводилися в кожному сезоні.
Таблиця 6
Резюме подальших польових випробувань
Польовийсезон3. 17711113 11111124 |Ї11110с1
Польовийсезоні4 //-/-/:/:///177777711121 11111101 Ї111101 (Відбіростаточнихоб'єктів.д | 1777777 Ї77771710111111Ї111101
Польові випробування агрономічних властивостей проводилися в той самий сезон, що й польові випробування ефективності ознаки. У всіх польових випробуваннях використовувався повністю рандомізований блоковий дизайн, і вони проводилися в різних локаціях. Польові випробування проводилися в локаціях Північної Америки та Південної Америки. Як для польових випробувань ефективності, так і для польових випробувань агрономічних властивостей протягом всього сезону польових випробувань ставили агрономічну оцінку, а в кінці сезону визначали вихід (ефективний вихід або агрономічний вихід). Польові випробування ефективності проводили для оцінки пошкодження культури протягом 10-14 днів після застосування гербіциду. Цільовою оцінкою пошкодження культури для подальшого дослідження об'єкта був показник менше 1095. Для польових випробувань агрономічних властивостей ділянки зберігали вільними від бур'янів, і жодний з випробуваних гербіцидів не застосовували за врожайний сезон. Польові випробування агрономічних властивостей гібридних рослин включали в себе контролі у вигляді порівнюваної гібридної рослини (гібридний контроль), отриманої за допомогою таких самих батьківських ліній кукурудзи, які використовувалися для отримання трансгенного гібридного схрещування, проте не містить трансгенний об'єкт. Інбредні контролі були інбредними рослинами, порівнюваними із трансгенними інбредними лініями.
Для порівняння даних польових випробувань проводили метааналіз, використовуючи сукупність даних польових випробувань всіх рослин за кілька сезонів, у декількох локаціях. Як приклад, в таблиці 7 проілюстровано число реплікації за кілька сезонів, для яких повторювали спостереження за двома відібраним об'єктам НТ4-14, а також загальне число окремих рослин, протестованих у межах кожного випробування для кожного об'єкта.
Таблиця 7
Реплікації польових випробувань
Метааналіз декількох польових випробувань ефективності гібридних рослин проводили для порівняння показників пошкодження гібридних рослин. В якості прикладу, в таблиці 8 представлена оцінка пошкодження за кілька сезонів за двома відібраними об'єктами НТ4А-14, отримана на стадії М8 (при цьому аналіз на стадії МВ охоплює сукупне пошкодження після застосування гербіциду на стадіях М2, М4, Мб і М8), причому статистично найменша значуща різниця спостерігається при 9595 довірчому рівні (НЗР при р«0,05). Рослини, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, як і рослини, що містять об'єкт 2, добре проявили себе в ході цих випробувань.
Таблиця 8
Метааналіз оцінки пошкодження в польових випробуваннях ефективності гібридних рослин
Метааналіз декількох польових випробувань ефективності гібридних рослин виконали для порівняння виходу у вигляді бушелів/акр. В якості прикладу, в таблиці 9 представлений вихід для гібридних рослин за кілька сезонів за двома відібраними об'єктами НТ4-14, причому
Зо статистично найменша значуща різниця спостерігається при 9595 довірчому рівні (НЗР при р «0,05). Рослини, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, як і рослини, що містять об'єкт 2, добре проявили себе в ході цих випробувань.
Таблиця 9
Метааналіз виходу в польових випробуваннях ефективності гібридних рослин
Вихід (бушелів/акр) НЗР (ре«0,05)
МОМ87429
ОБ'ЄКТ 2
МОМ87429
ОБ'ЄКТ 2
МОМ87429 210,9
ОБ'ЄКТ 2 211,5
Польові випробування підвищенням норми внесення гербіцидів, що застосовуються в більш високих у порівнянні з комерційними нормами внесення, проводили для гібридних та інбредних рослин, що містять один трансгенний об'єкт. Гербіциди глюфосинат (в діапазоні від 1,6 до 6,4 фунтів аї/акр), дикамба (в діапазоні від 2,0 до 16 фунтів аї/акр), хізалофоп (в діапазоні від 0,32 до 1,28 фунта аї/акр), 2,4-О (в діапазоні від 2,0 до 8,0 фунтів аї/акр) та гліфосат (з нормою внесення 3,0 фунта ке/акр) застосовували в ході польових випробувань для тестування підвищенням норми внесення ефективності ознаки толерантності до гербіцидів. У кінці сезону гібридні рослини польових випробувань підвищенням норми внесення гербіцидів збирали та визначали вихід (бушелів/акр). В якості прикладу, в таблиці 10 представлені дані за виходом гібридних і інбредних рослин у різних випробуваннях для двох відібраних об'єктів НТ4-14, причому статистично найменша значуща різниця спостерігається при 9595 довірчому рівні (НЗР при р«е0,05). Рослини, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, як і рослини, що містять об'єкт 2, добре проявили себе в ході випробувань виходу гібридних та інбредних рослин для всіх обробок гербіцидами. Результати свідчать про те, що подальші польові випробування дозволили визначити перевагу об'єкта кукурудзи МОМ87429 перед об'єктом 2 з точки зору виходу інбредних рослин.
Таблиця 10
Вихід у ході польових випробувань ефективності підвищенням норми внесення гербіцидів для гібридних/нбредних рослин
Гербіцид Вихід (бушелів/акр) | /НЗР (р«0,05)
Гібридна рослина
Гібридна
Гібридна , й Гібридна . Гібридна ,
Гібридна рослина й Інбредна рослина
Проводили польові випробування агрономічних властивостей гібридних рослин, виконували агрономічні вимірювання протягом сезону та в кінці сезону визначали агрономічний вихід.
Метааналіз серед польових випробувань агрономічних властивостей гібридних рослин за кілька сезонів і в декількох локаціях використовували з метою порівняння виходу гібридного контролю та гібридних рослин. В якості прикладу, в таблиці 11 представлені дані за виходом (бушелів/акр) для двох відібраних об'єктів НТ4-14, причому статистично найменша значуща різниця спостерігається при 9595 довірчому рівні (НЗР при р «0,05. Рослини, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, як і рослини, що містять об'єкт 2, добре проявили себе в ході цих випробувань, статистична різниця за виходом гібридних рослин не була виявлена для рослин, що містять будь-який з цих об'єктів, при порівнянні з контрольними рослинами.
Таблиця 11
Метааналіз виходу в польових випробуваннях агрономічних властивостей гібридних рослин (Польовийсезон1| Контроль -відсутній | 222: | 9 (Польовийсезонї| МОМ87429...-:-//А И | -:(К 220.......- |ЙЮКрНнН9 СС (Польовийсезонї| ОБЄКТ2 -(: | (| 224....:-СУКА| :( 9
Польові випробування ефективності інбредних рослин проводили відносно толерантності до гліфосату та системи гібридизації Раундап (КН) і наприкінці сезону визначали вихід. Гліфосат застосовували з нормою внесення 1,5 фунта ке/акр для контролю росту бур'янів з подальшими двома застосуваннями гліфосату для досягнення стерильності з нормою внесення 0,75 фунта ке/акр приблизно на стадії М8, а потім з нормою внесення 0,75 фунта ке/акр приблизно на стадії
М10. Метааналіз серед польових випробувань ефективності інбредних рослин за кілька сезонів і в декількох локаціях використовували з метою порівняння виходу для рослин. В якості прикладу, в таблиці 12 представлені дані за виходом (бушелів/акр) для двох відібраних об'єктів
НТА-14, причому статистично найменша значуща різниця спостерігається при 9595 довірчому рівні (НЗР при р «0,05). Випробування польового сезону 2 і польового сезону 3 показали статистично значуще зниження виходу для рослин, що містять об'єкт 2, в порівнянні з рослинами, які містять об'єкт МОМ87429. Ці дані вказують на кращий результат випробувань ефективності виходу інбредних рослин, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Таблиця 12
Метааналіз виходу в польових випробуваннях ефективності інбредних рослин, оброблених гліфосатом /Польовийсезон2 | ОБЄКТ2 | 9950 2 | 180
Проводили польові випробування агрономічних властивостей інбредних рослин і наприкінці сезону визначали вихід для необроблених рослин. Випробування включали в себе контролі інбредних ліній, порівнювані з трансгенними інбредними лініями. Метааналіз серед польових випробувань агрономічних властивостей інбредних рослин за кілька сезонів і в декількох локаціях проводили з метою порівняння виходу для спареного контролю і трансгенних
Зо інбредних рослин. В якості прикладу, в таблиці 13 представлені дані за виходом (бушелів/акр) для двох відібраних об'єктів НТ4-14, причому статистично найменша значуща різниця спостерігається при 9595 довірчому рівні (НЗР при р «0,05). Статистичної різниці за інбредним агрономічним виходом між контрольними рослинами та рослинами, що містять об'єкт кукурудзи
МОМ87429, виявлено не було. Навпаки, у випробуваннях польового сезону З спостерігалося статистично значуще зниження виходу для рослин, що містять об'єкт 2, у порівнянні з контрольними рослинами і рослинами, що містять об'єкт кукурудзи МОМ8 7429. Ці дані вказують на кращий результат у випробуваннях агрономічного інбредного виходу для рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Таблиця 13
Метааналіз виходу в польових випробуваннях агрономічних властивостей інбредних рослин / Польовийсезон' | Контроль-відсутній | 1052 | 89 Польовийсезон!ї | МОМ87429../-: | 1041 | 77/89 г щЩщ ЗК о Польовийсезонї | ОБЄКТ2 | 1025 | 89
Випробування ефективності гібридних рослин проводили в чотирьох локаціях в Аргентині для оцінки толерантності рослин до глюфосинату, дикамби, хізалофопу, галоксіфопу, 2,4-О0 та гліфосату. Рослини, що містять МОМ87429, схрещували з рослинами, що містять як об'єкт кукурудзи МОМ88017, так і об'єкт кукурудзи МОМ89034, з отриманням потомства, що містить всі три об'єкти (МОМ87429 х МОМ88017 х МОМ89034). Обробки гербіцидами включали в себе: 1) необроблений контроль; 2) глюфосинат з нормою внесення 0,448 кг аї/га, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 3) глюфосинат з нормою внесення 0,896 кг аі/га, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 4) дикамбу з нормою внесення 0,56 фунта ке/акр, яка застосовується на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 5) дикамбу з нормою внесення 1,12 фунта ке/акр, яка застосовується на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; б) хізалофоп з нормою внесення 0,09 кг ке/га, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Уб; 7) хізалофоп з нормою внесення 0,18 кг ке/га, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 8) галоксифоп з нормою внесення 0,1 кг ке/га, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 9) галоксифоп з нормою внесення 0,2 кг ке/га, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 10) 2,4-О з нормою внесення 1,12 фунта аї/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; 11) 2,4-О з нормою внесення 2,24 фунта ке/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб; або 12) гліфосат з нормою внесення 2,24 фунта ке/акр, застосовуваний на стадії М2, а потім з аналогічною нормою внесення на стадії Мб. Отримані дані включали в себе пошкодження культури через 10-14 днів після застосування гербіциду на стадіях М2 і Мб, а також кінцеву оцінку на стадії МТ, кількість днів до появи 5095 пилку, кількість днів до появи 5090
Зо ниток шовку, висоту рослини, висоту колоса, масу лушпиння, натурну масу, вміст вологи та вихід зерна. Всі дані піддавалися дисперсійному аналізу та поділу середніх значень при р«е0,05.
Толерантність до гербіцидів рослин, що містять МОМ87429 х МОМ88017 х МОМ89034, була чудовою («1095 пошкодження культури) за всіма нормами внесення протестованих гліфосату, глюфосинату, дикамби, хізалофопу, галоксіопу та 2,4-О0О. Норми внесення гербіцидів для обробки рослин не вплинули на візуальну оцінку пошкодження культури. Висота колоса при кожній з обробок істотно не відрізнялася в порівнянні зі стандартною обробкою гербіцидом 12 (гліфосат з нормою внесення 2,24 фунта ке/акр). Не спостерігалося значного зменшення висоти рослин або натурної маси, підвищення вологості зерна, затримки дозрівання (вимірюваного як збільшення кількості днів до появи 5095 пилку або ниток шовку), зниження виходу зерна у рослин, які містять МОМ87429 х МОМ88017 х МОМ89034, за будь-якої з обробок порівняно з необробленими рослинами. Гібридні рослини, отримані шляхом схрещування рослини, яка містить МОМ87429, з рослиною, яка містить об'єкт, що забезпечує толерантність до гліфосату в чоловічих тканинах (як-от комерційно доступні об'єкти кукурудзи МОМ88017 або МКбО3), мають чудову вегетативну толерантність до гліфосату, глюфосинату, дикамби, хізалофопу, галоксифопу та 2,4-О при застосуванні з комерційно заявленими нормами внесення.
Протягом трьох років польових випробувань проводили дослідження контролю рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, використовуючи клетодим. У цих випробуваннях оцінювалися способи контролю самовільного зростання гербіцидом ІМ, який застосовується до рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Рослини обробляли клетодимом з комерційно заявленими нормами внесення та спостерігали повний контроль рослин, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Дані, отримані в результаті молекулярного аналізу і польових випробувань інбредних та гібридних рослин для оцінки (1) ефективності ознак толерантності до комерційних норм внесення глюфосинату, дикамби, хізалофопу та 2,4-О0, (2) агрономічних властивостей, (3) ефективності системи гібридизації Раундап (КН) і толерантності до гліфосату, а також (4) випробування підвищенням норми внесення гербіцидів на толерантність до більш високих норм внесення застосовуваних гербіцидів хізалофопу, 2,4-О, глюфосинату та дикамби, аналізували за всіма об'єктами, протестованими для конструкцій НТ4-14, НТА-32 та НТ4-34. Аналіз сукупних даних продемонстрував у цілому кращі показники об'єкта кукурудзи МОМ87429 в порівнянні з іншими об'єктами і призвів до відбору цього об'єкту для комерційного використання.
Приклад 5. Молекулярна характеристика об'єкта кукурудзи МОМ87429
Об'єкт кукурудзи МОМ87429 піддавали обширній молекулярній характеристиці після відбору для комерційного використання. Трансгенна вставка об'єкта кукурудзи МОМ87429 містить елементи та послідовності, описані в таблиці 1.
Проводили аналіз послідовностей ДНК об'єкта кукурудзи МОМ87429. Проводили аналіз методом саузерн-блотингу для підтвердження, що рослини, які містять об'єкт кукурудзи
МОМ87429, містили одну неушкоджену копію всієї трансгенної вставки без остову вектора трансформації. Фланкуючу ДНК секвенували на 5' і 3' кінцях вставки, а відповідні з'єднання визначали за допомогою методик захоплення послідовності, збагачення, секвенування, зворотної ПЛР і прогулянки геномом. Послідовності фланкуючої ДНК для об'єкта кукурудзи
МОМ87429 порівнювали з відомою фізичною зборкою геному кукурудзи. Інформацію про послідовність сайту вставки використовували для біоінформаційного аналізу хромосомної локації об'єкта. Цілісність сайту вставки визначали за допомогою ПЛР серед алелю дикого типу, використовуючи праймери, специфічні відносно фланкуючих областей об'єкта кукурудзи
Зо МОМ87429. Сайт вставки дикого типу використовували для порівняння унікального сайту трансгенного інтегрування для об'єкта кукурудзи МОМ87429 з еталонним геномом кукурудзи.
Щоб гарантувати відсутність внесення будь-яких змін або мутацій в будь-яку з областей трансгену в ході трансформації, всю трансгенну вставку об'єкта кукурудзи МОМ87429 виділяли з рослини та секвенували. Інформація про послідовність для 5 з'єднання, З' з'єднання та трансгенної вставки представлена в цьому документі у вигляді 5Е0 ІЮ МО:1-10.
Проводили РНК-аналіз рослин, що містять конструкцію об'єкта кукурудзи МОМ87429. Аналіз методом нозерн-блотингу проводили для загальної РНК, виділеної з зерен рослин, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Він підтвердив розмір транскрипту та кількість продуктів мРНК раї, ато, Я ї та ср4-ерзр5. Рівні експресії РНК для СР4-ЕРБРБЗ також вимірювали за допомогою ПЛР в режимі реального часу, використовуючи зразки, отримані з тканини рослин, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429. Швидку ампліфікацію кінців кКДНК (КАСЕ) використовували для ідентифікації продуктів розщеплення СР4-ЕРБРЗ з метою підтвердити, що розщеплення транскрипту СРА-ЕРБРО5 відбувається тільки в волотях рослин, які містять об'єкт кукурудзи
МОМ87429, і що це викликано чоловічими ендогенними малими інтерферуючими РНК (міРНК) специфічним до послідовності чином. Низькомолекулярний аналіз методом нозерн-блотингу проводили з метою продемонструвати, що міРНК СР4-ЕРБР5, які можуть знизити толерантність до гліфосату в тканині, відмінній від тканини волоті, відсутні.
Проводили білковий аналіз рослин, які містять конструкцію об'єкта кукурудзи МОМ87429.
Використовуючи очищені імуноафінним методом білкові екстракти з зерен, виконували М- кінцеве секвенування експресованих білків РАТ, ОМО, ЕТ Т та СР4-ЕРБР5, щоб підтвердити справжню М-кінцеву амінокислотну послідовність. Аналіз методом вестерн-блотингу виконували для білкових екстрактів з зерен, що містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, з метою підтвердити, що один білок очікуваного розміру виробляється для РАТ, ЮМО, ЕТ Т та СРА-ЕРБРБ5, відповідно. ІФА використовували, що визначити вміст білків РАТ, ОМО, ЕТ Т та СР4-ЕРБРБ в листі, насінні, коренях і пилку рослин.
Приклад 6. Виявлення об'єкта кукурудзи МОМ87429
Виявлення об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку можна виконати за допомогою методик виявлення ДНК, РНК або білків. Приклади способів виявлення та матеріали представлені нижче. Завдяки способам виявлення можна встановити присутність або відсутність об'єкта бо кукурудзи МОМ87429 в зразку. Виявлення може вказати на число геномних копій об'єкта кукурудзи МОМ87429 (тобто гемізиготність, гомозиготність або гетерозиготність) в зразку геномної ДНК.
Був розроблений специфічний відносно об'єкта спосіб термічної ампліфікації за кінцевою точкою Арріїей Віозузіет5"м ТАОМАМОЕ (Тпепто Рібзпег 5сіепійіс) для ідентифікації об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку. ДНК-праймери та зонди, використовувані в аналізі за кінцевою точкою, є праймери 5051062 (5БО ІЮ МО:11), 5051053 (5БО ІЮО МО:12) та мічений зонд
РВ5О370 6-РАМ'М (5ЕО ІЮ МО:13). 6--АМ являє собою флуоресцентний барвник виробництва
Арріїей Віозузіетв5 (Бозіеєг Спу, СА), прикріплений до ДНК-зонду. У випадку зондів ТАОМАМ мМОовВ'м 5 екзонуклеазна активність ДНК-полімерази Тад розщеплює зонд з 5'-кінця між флуорофором і гасителем. При гібридизації з цільовим ланцюгом ДНК гаситель і флуорофор є досить розділеними, щоб згенерувати флуоресцентний сигнал, вивільняючи, таким чином, флуоресценцію. 5051062 та 5051053 при використанні в подібних реакційних способах і разом з РВ5О370 виробляють амплікон ДНК, який дозволяє діагностувати об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Контролі в цьому аналізі мають включати в себе позитивний контроль, що містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, негативний контроль, отриманий від нетрансгенної кукурудзи, і негативний контроль, який не містить шаблону ДНК. Крім того, контроль в реакції ПЛР оптимально має включати в себе праймери внутрішнього контролю та зонд внутрішнього контролю, специфічні відносно гену з однією копією в геномі кукурудзи. Ці аналізи оптимізовані для використання з ПЛР-системою Арріїеєй Віозубзіет5 СепеАтрФ РСК Зузіет 9700 (Тпегто
Еїзпег Зсіепійіс) на максимальній швидкості, проте може використовуватися й інше обладнання.
Приклад умов, використовуваних у способах ТАОМАМ для виявлення об'єкта кукурудзи
МОМ87429, є таким. Етап 1. Вода 18 МОм, скоригована відносно кінцевого обсягу 5 мкл. Етап 2: 2,28 мкл 2Х універсального майстер-міксу (дДНТФ, фермент, буфер) до 1Х кінцевої концентрації. Етап 3: 0,05 мкл об'єктового праймера-ї (5051062) і об'єктового праймера-2 (5051053) (ресуспендованих у воді 18 МОм до концентрації 100 мкМ для кожного праймера) до кінцевої концентрації 0,9 мкМ. Етап 4: 0,01 мкл об'єктового зонду РВ50370 6-РАМ МОВ (ресуспендованого в воді 18 МОм до концентрації 100 мкМ) до кінцевої концентрації 0,2 мкМ.
Етап 5: 0,05 мкл суміші праймера-ї внутрішнього контролю та праймера-2 внутрішнього контролю (ресуспендованих у воді 18 МОм до концентрації 100 ДМ для кожного праймера) до
Зо кінцевої концентрації 0,9 мкМ. Етап б: 0,01 мкл зонда внутрішнього контролю МІС тм (ресуспендованого в воді 18 МОм до концентрації 100 ДМ) до кінцевої концентрації 0,2 мкМ.
Етап 7: 2,5 мкл екстрагованої ДНК (шаблон) для кожного зразка з одним із таких принципів: (а) зразки листя, які підлягають аналізу; (Б) негативний контроль (нетрансгенна ДНК); (с) негативний контрольний зразок води (без шаблону) і (4) позитивний контрольний зразок ДНК кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429. Етап 8. Умови в термоциклері: один цикл при 95 7С протягом 20 секунд; сорок циклів при 95 "С протягом З секунд, потім при 60 "С протягом 20 секунд і останній цикл при 10 "С.
Аналіз на зиготність розроблений, щоб визначити, чи є рослина, яка містить об'єкт кукурудзи
МОМ87429, гетерозиготною або сгомозиготною за об'єктом або алелем дикого типу.
Використовуючи інформацію про послідовність, представлену в цьому документі, може бути розроблений аналіз реакції ампліфікації. Наприклад, подібний ПЛР-аналіз буде включати в себе дизайн з щонайменше трьох праймерів: праймера-1, праймера-2 та праймера-3, де праймер-ї є специфічним відносно геномної ДНК кукурудзи на 3' фланзі об'єкта кукурудзи МОМ87429; праймер-2 є специфічним відносно трансгенної вставки об'єкта кукурудзи МОМ87429; а праймер-3 є специфічним відносно алелю дикого типу. При використанні у вигляді пари праймерів у реакції ампліфікації праймер-ї та праймер-2 виробляють ПлЛР-амплікон, специфічний відносно об'єкту кукурудзи МОМ87429. При використанні в вигляді пари праймерів у реакції ампліфікації праймер-1 і праймер-3 виробляють ПЛР-амплікон, специфічний відносно алелю дикого типу. У ПЛР-реакції, виконаної на геномній ДНК кукурудзи, відповідні ПЛР- амплікони, отримані з праймера-ї та праймера-2, а також з праймера-1ї та праймера-3, відрізнятимуться за послідовністю та розміром амплікону. Коли три праймери включені в ПЛР- реакцію з ДНК, екстрагованої з рослини, гомозиготної за об'єктом кукурудзи МОМ87429, буде отриманий тільки амплікон праймера-1 та праймера-2 (специфічний відносно вставки кукурудзи
МОМ87429). Коли три праймери включені в ПЛР-реакцію з ДНК, екстрагованої з рослини, гетерозиготної за об'єктом кукурудзи МОМ87429, буде отриманий як амплікон праймера-1 та праймера-2 (специфічний відносно вставки кукурудзи МОМ87429), так і амплікон праймера-1 та праймера- З (специфічний відносно алелю дикого типу або відсутності вставки кукурудзи
МОМ87429). Коли три праймери змішуються разом в ПЛР -реакції з ДНК, екстрагованої з рослини, нульовій за об'єктом кукурудзи МОМ87429 (тобто дикого типу), буде отриманий лише бо амплікон праймера-ї та праймера-3 (специфічний відносно алелю дикого типу). Амплікони,
отримані за допомогою ПЛР-реакції, можуть бути ідентифіковані або визначені будь-яким способом, відомим у даній області техніки.
Ще одним аналізом на зиготність за об'єктом кукурудзи МОМ87429 є теплова реакція ампліфікації ТЛОМАМ. У випадку даного типу крім праймерів, як було описано вище, аналіз буде включати два флуоресцентно мічених зонди. Зонд-1 буде специфічним відносно об'єкту кукурудзи МОМ87429, а зонд-2 - специфічним відносно рослини кукурудзи, яка є нульовою за об'єктом кукурудзи МОМ87429 (дикого типу), і при цьому два зонди містять різні флуоресцентні мітки, наприклад, 6-ЕАМ- мітку або МІС "м-мітки. При використанні в реакції ТАОМАМ праймер- 1 - праймер-2 ж зонд-1 згенерують перший флуоресцентний сигнал, специфічний відносно об'єкту кукурудзи МОМ87429, праймер-ї - праймер-3 - зонд-2 згенерують другий флуоресцентний сигнал, специфічний відносно кукурудзи дикого типу. Коли три праймери та два зонди включені в реакцію ТАОМАМ з ДНК, екстрагованої з рослини, гомозиготної за об'єктом кукурудзи МОМ87429, буде згенерований тільки перший флуоресцентний сигнал (специфічний відносно праймера-ї ї- праймера-2 ї зонда-1). Коли три праймери включені в реакцію ТАОМАМ з ДНК, екстрагованої з рослини, гетерозиготної за об'єктом кукурудзи
МОМ87429, буде згенерований як перший флуоресцентний сигнал (специфічний відносно праймера-ї ї праймера-2 ж зонда-1), так і другий флуоресцентний сигнал (специфічний відносно праймера-1 ї- праймера-3 ж зонда-2). Коли три праймери змішуються разом у реакції
ТАОМАМ з ДНК, екстрагованої з рослини, нульовою за об'єктом кукурудзи МОМ87429 (дикого типу), буде згенерований тільки другий флуоресцентний сигнал (специфічний відносно праймера-1 ж праймера-3 «т зонда-2г).
Іншим способом виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку рослини є аналіз методом саузерн-блотингу. Фахівцю в даній області техніки буде зрозуміло, як сконструювати зонд(-и) для гібридизації методом саузерн-блотингу, специфічний відносно об'єкта кукурудзи МОМ87429, і другий зонд для гібридизації методом саузерн-блотингу, специфічний відносно рослин кукурудзи, нульової за об'єктом кукурудзи МОМ87429 (дикого типу). У ході аналізу методом саузерн-блотингу сигнал, виявлений тільки від першого зонда для гіоридизації методом саузерн-блотингу, вказуватиме на рослину, гомозиготну за об'єктом кукурудзи МОМ87429; сигнал, виявлений від першого зонда для гібридизації методом саузерн- блотингу та другого зонду для гібридизації методом саузерн-блотингу, вказуватиме на рослину, гетерозиготну за об'єктом кукурудзи МОМ87429; а сигнал, виявлений тільки від другого зонду для гібридизації методом саузерн-блотингу, вказуватиме на те, що ДНК була екстрагована з рослини, нульової за об'єктом кукурудзи МОМ87429 (дикого типу).
Інший приклад набору для виявлення включає в себе щонайменше одне антитіло, специфічне відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429.
Наприклад, в такому наборі може використовуватися тест-смужка з технологією латеральної дифузії, що містить реагенти, які активуються при контакті кінчика смужки з водним розчином.
Прикладами білків, які можуть використовуватися для отримання антитіл, є білки, кодовані послідовністю, представленою в вигляді 5ЕО ІЮ МО:10, або будь-яким її фрагментом.
Спосіб виявлення білка розроблений для визначення того, звідки був отриманий зразок: від рослини, насіння, клітини або частини рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429.
Щонайменше одне антитіло, специфічне відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, використовується для виявлення білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, в зразку. У наборі для виявлення, що складається з одного або більше антитіл, специфічних відносно одного або більше білків, кодованих об'єктом кукурудзи
МОМ87429, може використовуватися тест-смужка з технологією латеральної дифузії, яка містить реагенти, які активуються при контакті кінчика смужки з водним розчином. Зразки тканини кукурудзи можуть подрібнювати, а білок екстрагувати для аналізу, використовуючи воду або водний буфер (наприклад, фосфатно-сольовий буфер, що містить детергент і бичачий сироватковий альбумін). Після центрифугування водний супернатант аналізують за допомогою
ІФА в сендвіч-форматі на тест-смужці з технологією латеральної дифузії, що містить абсорбуючу прокладку. Виявлення активується шляхом занурення кінчика тест-смужки в водний розчин, що містить зразок, який необхідно протестувати. Водний розчин піднімається вгору тест-смужкою завдяки капілярній дії та солюбілізує мічені золотом антитіла на тест-смужці.
Мічені золотом антитіла є специфічними відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, і зв'язуватимуться з епітопом на білку в зразку з утворенням комплексу антитіло-антиген. Комплекс міченого золотом антитіла з антигеном потім піднімається вгору тест-смужкою до нітроцелюлозної мембрани. Мембрана містить тестову лінію іммобілізованих антитіл, які зв'язуються з другим окремим епітопом на білку, кодованому
Зо об'єктом кукурудзи МОМ87429, в результаті чого на тест-смужці з'являється видима лінія, якщо в зразку присутній білок, кодований об'єктом кукурудзи МОМ8 7429.
Claims (41)
1. Молекула рекомбінантної ДНК, яка містить послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІО МО:10, 5ЕО ІЮ МО:9, 5ЕО 10 МО:8, 5ЕО 10 МО:7, 5ЕО ІЮ МО:6, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО 10 МО:4, 5ЕО ІЮО МО:3, 5ЕБО ІЮ МО:2 та 5ЕО ІЮО МО, де присутність вказаної рекомбінантної молекули ДНК вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО І МО:10.
2. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що молекула рекомбінантної ДНК отримана з рослини, насіння або клітини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, ії де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
3. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що молекула рекомбінантної ДНК знаходиться в рослині, клітині, насінні або частині рослини, які містять об'єкт кукурудзи МОМ87429, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає ЗЕО І МО:10.
4. Молекула рекомбінантної ДНК за п. 1, яка відрізняється тим, що молекула рекомбінантної ДНК являє собою амплікон, який дозволяє діагностувати присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає ЗЕО ІЮО МО:10.
5. Конструкція ДНК, яка містить чотири експресійні касети, причому перша експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідер та інтрон убіквітину, від Елапійив гауеппає, (І) послідовність, яка кодує фосфінотрицин-М-ацетилтрансферазу, та (ПІ) 3-НТО фруктозобісфосфат-альдолази, від беїапа Лайса; друга експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідер та інтрон убіквітину, від Со/х /астгута-іобі, (ІІ) послідовність, яка кодує транзитний пептид альбіносного та блідо-зеленого 6 хлоропласта, від Агабрідйорвзів ІНаапа, (ПІ) послідовність, яка кодує дикамба-монооксигеназу, та (ІМ) 3-НТО металотіонеїнподібного білка, від Огула займа; третя експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідер та інтрон убіквітину, від Аглилоо аопах, (І) послідовність, яка кодує транзитний пептид хлоропласта малатдегідрогенази, від Агарідорвзів ІНа!апа, (І) послідовність, яка кодує білок ЕТ Т, і (ІМ) 3'-НТО білка неапікальної меристеми, від Огуга займа; та четверта експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор і лідер Самм 355, (ІІ) лідер хлорофіл а/б-зв'язуючого білка, від Тийсит аезймит, (ІІ) інтрон актину 1, від Огула займа, (ІМ) послідовність, яка кодує транзитний пептид хлоропласта 5ПКО, від Агабідорвіх (Палйапа, (М) послідовність, яка кодує толерантну до гліфосату 5- енолпірувілшикімат-з-фосфатсинтазу, від штаму СР4 Адгтобасіепит 5р, (МІ) міРНК-мішень, специфічну до тканин чоловічих рослин, від 2еа таув, та (МІЇ) 3-НТО багатого гліцином РНК- зв'язуючого білка, від Огула займа.
б. Молекула ДНК, яка має достатню довжину суміжних нуклеотидів ЗЕО ІЮ МО:10, щоб функціонувати як ДНК-зонд, специфічний відносно 5ЕО ІЮ МО:10, у зразку ДНК, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи.
7. Молекула ДНК за п. 6, яка відрізняється тим, що ДНК-зонд містить ЗЕО ІЮ МО:13.
8. Пара молекул ДНК, яка містить першу молекулу ДНК та другу молекулу ДНК, причому перша та друга молекули ДНК містять фрагмент 5ЕО ІЮ МО:10 і функціонують як ДНК-праймери, коли вони використовуються разом у реакції ампліфікації з ДНК, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, для отримання амплікону, що дозволяє діагностувати в зразку об'єкт кукурудзи МОМ87429, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає ЗЕО ІЮ МО:10.
9. Пара молекул ДНК за п. 8, яка відрізняється тим, що щонайменше один ДНК-праймер містить фрагмент послідовності, вибраної з групи, яка складається з 5ЕО ІЮО МО:7 та 5ЕО ІЮ МО:8.
10. Пара молекул ДНК за п. 8, яка відрізняється тим, що перша молекула ДНК містить ЗЕО ІЮ МО:11, а друга молекула ДНК містить ЗЕО ІЮ МО:12.
11. Спосіб виявлення присутності об'єкту кукурудзи МОМ87429 в зразку ДНК, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи, який включає в себе: а) приведення в контакт зразка з ДНК-зондом за п. 6; р) вміщення зразка та ДНК-зонда в жорсткі умови гібридизації та с) виявлення гібридизації ДНК-зонда з ДНК-молекулою в зразку, причому гібридизація ДНК- зонда з ДНК-молекулою вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку ДНК, їі де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
12. Спосіб виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку ДНК, отриманому від 60 рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи, який включає в себе:
а) приведення в контакт зразка з парою молекул ДНК за п. 8; Б) проведення реакції ампліфікації, достатньої для отримання амплікону ДНК, який містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:10, 5ЕО ІО МО:9, 5ЕО І МО:8, ЗЕО ІЮ МО:7, ЗЕО ІЮО МО:б, ЗЕО ІЮО МО:5, 5ЕО ІЮО МО:4, 5ЕО ІЮ МО:З3, 5ЕО ІЮ МО:2 і ЗЕО І МО:1; та с) виявлення присутності амплікону ДНК, причому присутність амплікону ДНК вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
13. Спосіб виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку, отриманому від рослини кукурудзи, насіння кукурудзи або клітини кукурудзи, причому спосіб включає в себе: а) приведення в контакт зразка зі щонайменше одним антитілом, специфічним відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ8 7429; і р) виявлення зв'язування антитіла з білком у зразку, причому зв'язування антитіла з білком вказує на присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
14. Спосіб за п. 13, який додатково включає в себе щонайменше друге антитіло, специфічне відносно другого білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО І МО:10.
15. Набір для виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429, який містить ДНК-зонд, специфічний відносно ЗЕО ІЮ МО:10, пару ДНК-праймерів, які виробляють амплікон, що дозволяє діагностувати об'єкт кукурудзи МОМ87429, або щонайменше одне антитіло, специфічне відносно щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
16. Рослина, насіння, клітина або частина рослини, які містять молекулу ДНК, що містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО:1, 5ЕО ІЮ МО:2, 5ЕО ІО МО:3, ЗЕО ІО МО:4, 5ЕО ІЮ МО:5, 5ЕО ІЮО МО:6, 5ЕО ІЮ МО:7, 5ЕО ІЮ МО:8, 5ЕО ІЮО МО:9 та 5ЕО ІЮ МО:10.
17. Рослина, насіння, клітина або частина рослини за п. 16, які відрізняються тим, що рослина, насіння, клітина або частина рослини є толерантними до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в Зо арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕРБР5) або будь-якої їх комбінації.
18. Рослина, насіння, клітина або частина рослини за п. 17, які відрізняються тим, що рослина, насіння, клітина або частина рослини є толерантними до хізалофопу, галоксифопу, дикамби, 2,А-О, глюфосинату та гліфосату.
19. Спосіб контролю росту бур'янів на ділянці вирощування сільськогосподарських культур, який включає в себе: а) посадку кукурудзи, що містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, на ділянці вирощування сільськогосподарських культур; і р) застосування до ділянки вирощування сільськогосподарських культур, або будь-якої її частини, ефективної кількості щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3- фосфатсинтази (ЕРБР5Б) або будь-якої їх комбінації, для контролю росту бур'янів на цій ділянці, не завдаючи при цьому шкоди кукурудзі.
20. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що застосування ефективної кількості щонайменше одного гербіциду включає в себе застосування щонайменше двох або більше гербіцидів, вибраних з групи, яка складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕРБР5Б), за урожайний сезон.
21. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що застосування ефективної кількості щонайменше одного гербіциду включає в себе застосування гербіциду, вибраного з групи, яка складається з хізалофопу, галоксифопу, дикамби, 2,4-О0, глюфосинату та гліфосату або будь-якої їх комбінації.
22. Спосіб за п. 21, який відрізняється тим, що ефективна кількість дикамби становить від близько 0,5 фунта ке/акр до близько 2 фунтів ке/акр за врожайний сезон.
23. Спосіб за п. 21, який відрізняється тим, що ефективна кількість глюфосинату становить від близько 0,4 фунта аї/акр до близько 1,59 фунта аї/акр за врожайний сезон.
24. Спосіб за п. 21, який відрізняється тим, що ефективна кількість 2,4-О становить від близько 0,75 фунта ке/акр до близько 1,0 фунта ке/акр за врожайний сезон.
25. Спосіб за п. 21, який відрізняється тим, що ефективна кількість хізалофопу становить від 60 близько 0,034 фунта аї/акр до близько 0,083 фунта аї/акр за врожайний сезон.
26. Спосіб за п. 21, який відрізняється тим, що ефективна кількість галоксифопу становить від близько 0,018 фунта аї/акр до близько 0,07 фунта аї/акр за врожайний сезон.
27. Спосіб контролю самосійної кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, на ділянці, що включає в себе застосування гербіцидно ефективної кількості щонайменше одного циклогександіонного (СІМ) гербіциду, причому застосування гербіциду запобігає росту кукурудзи, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, і де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
28. Спосіб за п. 27, який відрізняється тим, що застосування гербіцидно ефективної кількості щонайменше одного циклогександіонного (СІМ) гербіциду включає в себе застосування циклогександіонного (СІМ) гербіциду, вибраного з групи, яка складається з клетодиму, сетоксидиму та тралкоксидиму.
29. Спосіб визначення потомства рослини, яке є толерантним до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, яка складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕР5Р5) або будь-якої їх комбінації, який включає в себе: а) схрещування рослини, яка містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, з самою собою або з другою рослиною з отриманням насіння, та р) ідентифікацію насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО І МО:10.
30. Спосіб за п. 29, який відрізняється тим, що ідентифікація насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10, включає в себе: а) пророщування насіння потомства з отриманням рослин потомства; Б) обробку рослин потомства ефективною кількістю щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з хізалофопу, галоксифопу, дикамби, 2,4-О, глюфосинату та гліфосату або будь-якої їх комбінації; та с) відбір рослини потомства, яка є толерантною до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається З інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в Зо арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕРБР5) або будь-якої їх комбінації.
31. Спосіб за п. 29, який відрізняється тим, що ідентифікація насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, включає в себе виявлення присутності об'єкта кукурудзи МОМ87429 в зразку, отриманому з насіння потомства, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
32. Спосіб за п. 29, який відрізняється тим, що ідентифікація насіння потомства, яке містить об'єкт кукурудзи МОМ87429, включає в себе виявлення присутності щонайменше одного білка, кодованого об'єктом кукурудзи МОМ87429, в зразку, отриманому з насіння потомства, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
33. Спосіб отримання гібридного насіння, який включає в себе: а) вирощування рослини, що містить ЗЕО ІЮ МО:10; р) застосування ефективної кількості гліфосату до або під час розвитку тканин чоловічих органів розмноження рослини, викликаючи, таким чином, у рослини чоловічу стерильність; с) запліднення рослини пилком другої рослини і а) збирання гібридного насіння з рослини.
34. Спосіб за п. 33, який відрізняється тим, що застосування ефективної кількості гліфосату включає в себе застосування гліфосату до або під час розвитку в ефективній кількості від близько 0,5 фунта ке/акр до близько 2,5 фунта ке/акр.
35. Спосіб за п. 33, який відрізняється тим, що застосування ефективної кількості гліфосату включає в себе застосування гліфосату на стадії розвитку, вибраної з групи, що складається зі стадії М4, М5, Мб, М7, М8, М9, М10, М11, М12, М13 ї М14 розвитку рослини кукурудзи.
36. Гібридне насіння, отримане способом за п. 33, яке відрізняється тим, що містить ЗЕО ІЮ МО:10.
37. Спосіб визначення зиготності рослини за об'єктом кукурудзи МОМ87429, який включає в себе: а) приведення в контакт зразка, що містить ДНК, отриману з рослини, з набором праймерів, здатних виробити перший амплікон, який дозволяє діагностувати присутність об'єкта кукурудзи МОМ87429, і другий амплікон, який дозволяє діагностувати геномну ДНК кукурудзи дикого типу, яка не містить об'єкта кукурудзи МОМ87429; бо р) проведення реакції ампліфікації нуклеїнових кислот і с) виявлення першого амплікону та другого амплікону, причому присутність обох ампліконів вказує на те, що зразок є гетерозиготним за об'єктом кукурудзи МОМ87429, а присутність тільки першого амплікону вказує на те, що зразок є гомозиготним за об'єктом кукурудзи МОМ87429, де вказаний об'єкт кукурудзи МОМ87429 включає 5ЕО ІЮ МО:10.
38. Спосіб за п. 37, який відрізняється тим, що набір праймерів містить ЗЕО ІЮ МО:11 та 5ЕО ІО МО:12.
39. Спосіб підвищення толерантності у рослини кукурудзи, яка є толерантною до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з інгібіторів ацетил-КоА-карбоксилази (АСС) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3З-фосфатсинтази (ЕРБРБ) або будь-якої їх комбінації, який включає в себе: отримання конструкції ДНК, яка містить чотири експресійні касети, причому перша експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідер та інтрон убіквітину від Елапіпив гауеппаеє, (ІІ) послідовність, яка кодує фосфінотрицин М-ацетилтрансферазу, та (ПІ) 3-НТО фруктозобісфосфат-альдолази, від беїапа Лайса; друга експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідер та інтрон убіквітину, від Со/х /астгута-іобі, (ІІ) послідовність, яка кодує транзитний пептид альбіносного та блідо-зеленого 6 хлоропласта, від Агабрідйорвів ІНаапа, (ПІ) послідовність, яка кодує дикамба-монооксигеназу, та (ІМ) 3-НТО металотіонеїнподібного білка, від Огула займа; третя експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор, лідер та інтрон убіквітину, від Аглилоо аопах, (І) послідовність, яка кодує транзитний пептид хлоропласта малатдегідрогенази, від Агарідорвів ІНа!апа, (І) послідовність, яка кодує білок ЕТ Т, і (ІМ) 3'-НТО білка неапікальної меристеми, від Огуга займа; та четверта експресійна касета містить у функціональному зв'язку (І) промотор і лідер Самм 355, (І) лідер хлорофіл а/б-зв'язуючого білка, від Тийсит аезймит, (ІІ) інтрон актину 1, від Огула займа, (ІМ) послідовність, яка кодує транзитний пептид хлоропласта 5ПКО, від Агабідорвіх (Палйапа, (М) послідовність, яка кодує толерантну до гліфосату 5- енолпірувілшикімат-зЗ-фосфатсинтазу, від штаму СР4 Адгтобасіепит 5р, (МІ) міРНК-мішень, специфічну до тканин чоловічих рослин, від 7еа тауз, (МІЇ) 3-НТО багатого гліцином РНК- зв'язуючого білка, від Огула займа; вставку конструкції ДНК у геном клітини кукурудзи; Зо регенерацію клітини кукурудзи в рослину кукурудзи і відбір рослини кукурудзи, яка містить конструкцію ДНК.
40. Спосіб за п. 39, який відрізняється тим, що відбір включає в себе обробку рослини кукурудзи ефективною кількістю щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, що складається з хізалофопу, галоксифопу, дикамби, 2,4-О глюфосинату та гліфосату.
41. Рослина кукурудзи, насіння кукурудзи або клітина кукурудзи, які є толерантними до щонайменше одного гербіциду, вибраного з групи, яка складається з інгібіторів ацетил-Код- карбоксилази (АСС) в арилоксифеноксипропіонатній (ФОП) групі, синтетичних ауксинів, інгібіторів глутамінсинтетази та інгібіторів 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (ЕР5Р5) або будь-якої їх комбінації, і отримані способом за п. 39, в якому рослина кукурудзи, насіння кукурудзи або клітина кукурудзи містять конструкцію ДНК. ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ «110» Мопзапіо ТесппоЇоду І 1 С -120» Трансгенний об'єкт кукурудзи МОМ87429 та способи його використання «1305 МОМ5:4З0УМО -1605 13 «170» Раїепіп версія 3.5 «21051 «2115 30 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005 1 ссасісної Надшсаї діссдддааа 30 «21052 «2115 30 «212» ДНК 213» Штучна послідовність
«223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «40052 сддаюсасаа асіаїадсаа аідіддіста 30 «2105 3 «2115 60 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005 З асносаааа агадассасі спдшоді Нсаїдіссд ддаааїсіас аддаїсадс 60 «2105 4 «2115 60 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005» 4 дсасаасааа сдсассдоїд сасааасіаї адсаадюо дісташні агаіадсаад 60 «21055 -2115100 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005 5 адаїасісї ашоднас асндсаааа аїадассасі спуоашоді Нсащіссо 60 ддаааїсіас аддаїгсадс аадацдіаю агддісаата 100 «21056 -2115100 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005 6 ащдасодіссс дсдаїсдссс дсасаасааа сдсассддід сасааасіаї адсаадідю 60 частащшії аїаїадсааяд даддісада іІааааїаата 100 -2105 7 «2115 1350 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005 7 аїсіасаддд сдсдсадсода сідасасаїд ддасссасдад дсаааддсад саддсадасіс 60 дсдсодсдада дсасдсаадс ассдайдас дсдсодїдссс стідісдо адаасдадод 120 тдсосдаїсо іссдідсад дндадасоду ссаддсдоада сссасссаїї ддсдссаїдс 180 сдсдсдадса дсадсіддсс сдсасадаї сааадуднада дідддсіада адсдаадасс 240 Тадіссаадс дасдшсі іссшше со НШсеш агашесн з00 ашацші аншисайці (Шаннс аааїсіаааї пдаасісаа діоюадаї! 360 саїасшоа апйаааїйссі сасаїйсадаа іаїсадіадод ааіадааїаї ІШаасіаї 420 адшаш ісісіації аїасааіси поснці саншааа ссісаашо 480 Тааацаїа! стааайсса айшддіса Надіаїасі ссіасіаана ісаїшайн 540 днаюдаааї дсасасасаа іааасіссаа сндаюдааї адаїаїсіаї Нансіааї 600 їаашай дшодіада дісааааї аддааасаса сасаїанодї Шещшсїї 660 Шадааааа юдіашії андіюдддас аадаасіааа адісассіса ааайнааага 720 сісащіаїа ашдодаїйа ісїідааша сіаншаї пснсаїаї ашааша 780 панаац ншснаї (дддсснас аснаюдада ісагададас аіддагса 840 дюдсаїаса адндаааїй! асідссаааа аїдісідіса іІасасааїсс аідідшоа 900 шоаюдасс адсададссі дасіасісіа аїссдїаці ададаассаа одсісссасда 960 дасадасіса ащіаїссда даїасісна ШоднНаса сідсааааа іадассасіс 1020 пошоі їсащісс9д9 даааїсіаса юдаїсадса адацдіаїда гддісааваї 1080 ддадааааад ааадацдіааї ї(ассаації Шісаайс ааааашіаяд аідіссдсад 1140 сонанаїа аааїдааасді асашіоаї аааасдасаа ацйасдаїсс дісдіаша 1200 їаддсдааад сааіааасаа ацансіаа йсддааас Шашсда сдгідісіаса 1260 нсасдісса ааїдддддсі їІадададаа асіїсасдаї ндасосодас іаасіаадса 1320 сіадсдіасд ддасссадаї аїсдаайса 1350 2105» 8 «2115 1069 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «400» 8 даїсдсссдс асаасааасд сассддідса сааасіаїад саваішідаої станшаї 60 агадсаадід аддісадаїа аааїааіааа іІаааагсай аааїшШагїа гіадсаадідї 120 ддістації Ідсндіааа сіасададаа іагагагаю Наааісоді адаасааця 180 дсіашааа сіаааадаїй! іаааааааас ааадаїаааа аашищша аасісатші 240 сісдададса дссадсаїдс Нссдассід сададсадс дашюсіссід дідассдсас 300 даасддаасс Іддсссдаїд чаданно саїсаасадс ассідіаюс аасдаїсаїс 360 саассаааса іасіїсдсії дадодаїсса сдссіасаас діссдсдсіс діссаїдсаа 420 ссааасасас даааштщцюії ссаїдідісс саандааад аадщіайнс донаасаас 480 ддаадісаїа ассдадссад аіагададаї адаассадаї сіаїсаїасс аадаасассс 540 сіссаадаї! сіадасідса аддааадаїгс сасісдідсуд аадасдасса адащіаїаа 600 даїссааідд адсаассаїа сддаадаада дасіасдщао дадасідадо апаїстат 660 саааїасіас сссдайодіс Іассіаадда адісадіасд іаассаїдсс ссадсссссї 720 дсссіссдаї іссаааава даааадаїас іІсцаадаа аасдааца адааашюааа 780 нпааодсдаад ааддасіїсс Псідаадії дсааададда ддсайсода ададсадаїй! 840 шШсісодсда асснааааа дсіаассааї асіаїдсаад саадсіаїаа ссассіссіс 900 асіссюаодї даїсісдасі сдааїсісда ддасдадайнс ІШаадода ддададсідї 960 аасассссад діданасна ддоашессс сНадіассії ссашоюа ссіанаїса 1020 сашщіоддій ддашаадаа аааддсасса аасідадда ассаадссс 1069 «2105 9 «-2115 14008 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Трансгенна вставка «4005» 9 нсащшіссд ддаааїсіас агдаїсадс ааідадіа аддісаага ддадааааа 60 дааададіаа НМассаайі нНисаай сааааающіа даїдіссдса асойанаї 120 аааашдааад їасаннода іІаааасдаса аацасодаїс сдісдіїацш аїаддсдааа 180 дсааіаааса аанайсіа айсддаааї сшанісод асдіцдієсіас айсасодісс 240 аааддадас Чадашюацда аасіїсасда Шодсодсда сіаасіаадс асіадсаїас 300 дддасссада іаїсдаайнс аадсідассуд ссассдосаа асаассасда ашодіааю 360 дасіаддса аайнсіссді ндасадідї дідссддсса апйасасой шосодіої 420 ссіссдасаа аашодссії Пааааасаа ІШаїаада даадсіссда адаїаааада 480 ссдісааші іасаададіюд аадісдісіа сісссіссаї сссааааааї діаансіаа 540 діаїдадно їанапйай шШодасааа аддацдіаїас сасаадаа!цо аїаїсаїсдї 600 садснада іссіщшаЗд їааадсцнода дснсісіаа аадіададаа ападааааа 660 ааїсасдцші наїодісії дашсіадс сіссасаааа Ісшодщш їасацнй 720 аищаші доашсадаа дісснайі агацідсіа ашоддсадс асіаааагс 780 днададада одссіааасаа аадссішсе аааасдассі Ідадссада! їдандаща 840 ссаааашо андісаааа спаддсаад ссаадації адсадсіай (ддшаодіа 900 ссаааашо ссаащдаїсі ойсшщодс сійсаасс дднаїсад ссдіаснса 960 дснайсіс іІсісасадаа сасіанодаа іІсадссдааа адссассдса даасаддасс 1020 адіаісісас ааадаосаїйд ссаааїаїас іІсассдїсад Ідадсссодії їІаасдасаїс 1080 дасаадісіа асддссасса ассадсдаас сассадсдіс аадсіадсса адсдаадсад 1140 асдассдада сундасасс Нддасосодода саїсісісід дсоссссісіс дададійсся 1200 сіссассісс асіддчщодсо дшШссаавді ссунссдсс Іссідсіссі ссісасасдад 1260 сасдааассяд Ісасддсасс ддсадсасдо додайссії Ісссассдсі сспсссш 1320 сссіссісу сссоссцій їадагадсса дссссаїссс садсіїсісї ссссаассіс 1380 адсісісіс зЯпунсдда дсдсасасас аасссодаїсс ссааїссссі саїсісіссі 1440 сдсдадссіс дісдаїсссс дсіисаадої асддсодаїса іссісссні сістасснсе 1500 Існеісіад асіаддісду сдаїссаюа Падаассід сіадіїсіді Іісстднн 1560 ссдіддсщс даддіасааї адаїсіда асойащдаї данаасцо ісаїасіссі 1620 асадшіосо дістатадід сішаддас аїсаацйіода ссіддсісді Ісдадаїсод 1680 сдаїссаща Наддасссі адасоадідда чісддонад аїссдсдсід Шоідназд 1 740 тададдаю сдассщшас Нсадасасд несщацоі їааснодіса дсассюодда 1800 дассідддаї дднсїадсі ддісодсада дадаїсдаї нсаюдаїсі дсідіаїсії 1860 ашсонад дносіщша аїсіаїссаї датанадс їіаассіаюа їаїдднода 1920 Ісдідсіадс їасдіссіді дісаїаайй Надсасс сша даішаїс 1980 щацпоодаосі діадаїсада діаїасції ісадаасіасс їасіддайах ашанааа 2040 шоааїсід їахідіцдіс асаїаїа!гсі іІсаїаайаа ааддайдода аадаїагаю 2100 дагадатаса щіоносід (дддішас їдвдтасша Надаїйагас аюснадаї 2160 асаюаадса асаїдащії асаднсааї аансндії Іассіааіаа асаааїіаадод 2220 агадащіаї аносіоа чішдсща їасшойна даїатааю спадаїана 2280 Щдаасдсааса іссідсіасу дшааїааї їандщаї аїсіааіада саадссідсі 2340 ІшШаанцаї шодаїавас пддащдаїйо осаїасадса дсіашюіод дайшааа 2400 їасссадсаї саїдадсад садасссід сспадіаїдд сідшан дсідадасі 2460 їспища Подіасіса ссіндіад Шоддідасі сисідсадод (дсаассаїд 2520 Ісїссддада ддадассаді їдадацада ссадсіасад садсідаїа! аддссосодії 2580 тдідаїагсод паассана сайдадасо істасадіда асшаддас ададссасаа 2640 асассасаад адіддайноа ідаїсіадад аддносааяд агадатассс Пдоноаїй 2700 асщачданао аддаійної дасідвдай десНасодсід ддсссіддаа дасіаддаас 2760 дснасдаїї ддасаднода дадіасідії їасдідісас аїаддсаїса аадданодас 2820 сіаддаїсса сайдіасас асашосії аадісіаїдд аддсдсаадяа іІШаадісї 2880 аюойцосід пагадаоссі Іссааасодаї ссаїсідна дойосаїда дасшодаа 2940 їТІасасадссс ддадіасайнй дсдсдсадсі ддаїасаадс ададаг дсаюащії 3000 дУаншодс ааададайй щдадносса осіссіссаа дассаоцнад дссаднасс 3060 садаюєющаї асдсдсідсі адіадссаад іассіассіс даддоасасас іаддсаді 3120 дюссаїаїї асадднсад айддссо99до асааададіа сасідсдай Насіаїссі 3180 сддіадсід діасіасадо Нсасайса садопнасі ассіддсе щаїадеї 3240 діасіасадо юйцосісі ааїадсісад дсідассса адіаададса дідсааайс 3300 ссаашсса даааасадда ддассіссаа аддаснсаа ідіаайсаа ашсшса 3360 дадаїссй Ідсаадддас юдащіааа аїасішаї ааіааїссаа дссайодс 3420 нсісааааа ааддаааада аааааащшо пдсдасссу дссуащдасод ссасдадсда 3480 асіссісад дадсадасіс дсанаїсда юддадсісіа ссааасіддс ссіаддсай 3540 аассіассаї ддаїсасаїс діаааааааа аасссіасса ддаїссіаї сідішси 3600 шасссюда аададюдаад ісаїсаїсаї ашассаю дсодсодсоїад дадсасисо 3660 Ісдаадассс аїаддддаас одіасісоса ссдідонаї йссіоїаї діаазаїсодд 3720 ащдоадоададс адісддсіад днодіссса ісодіасідо Ісдіссссіа дідсосіада 3780 тдсодсдайці Ндіссісаа аваасісні! сісіааїіа асааісаїас дсаааши 3840 тдсдіайсд адааааааад аадансіаї сід шодаааца сіссааша 3900 таддаддадс ссушаася дсдісдасаа аїсіаасода сассаассад сдаададсяо 3960 аасссассад сдссаадсіа дссаадсдаа дсадасддсс дадасосіда сасссндсс 4020 пдасосдас аїсіссдісд сіддсісдсі ддсісідасс сспсодсдад аднссддіс 4080 сассіссасс щідісдди іссаасіссоу Носдсснс асадддасі дНсосоне 4140 аїссоайддс додсаїссдда аайдсоїд9 саїададсас дддосссісс ісісасасдо 4200 сасддаассод іІсасдадсіс асддсассду садсасдаса дддайссії ссссассасс 4260 дсісснссс Шесейес іІсосссдсса ісаїаааїад ссассссісс садснсосії 4320 сдссасаїсс ісісаїсаїс Нсісісдід їІадсасдсдс адсссдаїсс ссааїссссі 4380 сіссісдсда дссісдісда Ісссісдсії сааддіаа стаїсдіссі гіссісісісі 4440 сісшассі їаісіадаїс ддсдаїссаї данпаддосс їдсіаднсї ссонсадіді 4500 пдісдаїщда сідщадоса сааїадайсс дісддсона дадонад ссмцісадс 4560 Існосодаїс їдїдонссі Наддааадуд санааша аїсссщаїд дисдадаїс 4620 дуюаїссаї дднадіасс сіааодсіоїюд дацдчісдадії їадаїссосо сіднсдіад 4680 дсдаїсщії сщтанона аснаїсаді ассідсдааї ссісдаді іІсїадсідаї 4740 ісддадаїса даїсдайсс анаїсідсі аїасаїсно Шсойдсс їаддсіссодї 4800
Нааїсіаїс саїсдіада юйНадссії щдаташдай содаїсоддсі адсіащісс 4860 тддаасца андісадої ссіааціїї аддаадасід Нссааасса іІстсіддаї 4920 Нпанааай юдаїсідда досасаї асасснсаї аайааааю даддааайа 4980 Істїснаїсі Шадаїтаю даїадодсаї! їаіаїдаїдс юшдаднії асіадіасії 5040 Існадааїа їадіасійй Шадасдда азайдагїаї діаїасацці діадаїасаї 5100 дааодсаасаї дсідсющіад ісіааіаайн ссіднсаїс іаагааїсаа діащшіата!ї 5160 асо пшанодої ашданая аїазагасаї дспадаїас агїасадаад 5220 садсаюсід сіасадша аїсацацу Шаїссааї ааасааасаї дсіишааї 5280 нпаснодаї аїдснодаї дасддаазаї дсададац іаадіассса осаїсадад 5340 саюдсаюдас ссідсонад їагасідій ашодснода дасісшсї Шоїадава 5400 сісасссіді Шсіддща іссіасідса ддідассоді сдссаїддсс ассдссасса 5460 сіассдссас сдсідсонс Іссддсдща щдадсодісдо сасідадасо сдсаддаїсі 5520 асісснсад ссассіссад ссисідсід сойссссдс їаадссдісі Ісдансаада 5580 дссюаадсі дааасадісс дсасдсосна сссддсдссі ддассагадд ссансонд 5640 їсадаїсаї дсісассіїс днаддааса ссіддіасої сдссдсісіс ссідаддадс 5700 щдадсдадаа дсссндодді сосассаїсс їадасасісс оПадсссії їіассдссадс 5760 сідасдасаї адіддсддсс сідсндаса ісідсссоса їадонсодсі ссдсісадсд 5820 асдаосаїссі сдісаасдду саїснсаді дсссдіасса сддосіддаа Шоаасддсо 5880 дюдасадід щіссасаас ссдсасддса асдасосасд дссадснсс сісаасоца 5940 ддісанесс юйаїсдад сдсдасдсас даїсіддаї сіддссіддс дасссадсіс 6000 дассдаїсс аддадссай сссдаснсу дноссосаї ддасссадсс іаїсддаса9у 6060 Ісддсдавца сдддсасодіс данаїаасі агаадсіссії щіддасаас снаюддай 6120 дадоссасаос іІсадіасоїд сассдддсіа асосісадас Ідасодссій дассдісісд 6180 ааадддадої саїсдісддс дасддадада псаддсосі дадаадаїс ссіддадоса 6240 сдсссісіді дсісаддсу аадшсіса даддсдсдаа сасдсссодід дасассідда 6300 асдасаїссд сіддааіаад дісіссосода Ідсідаасії саїсассайї дсдсссдадао 6360 дсасасссаа ададсадіса аїссасадса дадддассса їайснаса ссддааассяо 6420 аддсіадно ссасіаснс Нсодсісаї сасддаайі сдддаїадас даїссддада 6480 юдаасддіі існсдаїсі ддсаадсодс аадсісісдї сааддаадаї аадаїтдісо 6540 юдададаосіаї сдадсаїадд сососсіасо Пдаддсдаа сддіанадду сссдсдаїдс 6600 щдіссідсда сдаддссдса онададідї сдсдсдадаї адаааадсід дадсадсіад 6660 аддссдссід апаацйаад дссааддсода іІсіаїдасід аайдссааї дсассадссі 6720 дістасаюа ідааїаааїйа аададіссаї ссадідідаї досісадсс ющідадчі 6780 щасідааїс саїсадічіа оон дщісаасс аідюдааї саддідісаа 6840 аааїсдіддс юдаааїсса ідіддшсеї адсшайщі аааной юдаааїа:ї 6900 аааїацойн Ноашіаюі дааїщшасі сісісацші ісісносас Ісассансі 6960 ацагадіаа ШІЩШаад соддссосіда аїссдіс сасдаюадію ідіссааїса 7020 дюааїаагс іїіаднадіда адссадаадії ссаїадідсс ссідсісід Ісассаїава 7080 іссадісаа ссдсассааї Поссаїсіс даасідднсе аїдішай садонодіа 7140 аадаацші дссаайсаа щіаонада їашссаїд ісайаді асашасса 7200 ашшага псіддсіад ааааддадаа ддідасаїс Шсоддаада ісаадаїсаа 7260 Наїсаадіа іІсадсаасад сасстаадо нодадідса Падноїса Ндадааїаа 7320 дсіадсіаї Ісайдсасі ддсанйадад асадададдод сдадссадії Ідасаїдаоса 7380 аацадсаса дісааасідд атасддаі асддадддад доддсасіаїд аайшодаді 7440 дасддадодда дддасасіаї зааннод сшдсідас дддасасосс асіаїддатд 7500 ааацддаса аааїасдааї айсааддаї дааачіддіс чдшоаїад псадддаю 7560 аааціцісії Наддсааас Шдаддаса аадноссіа ІШосайца аасдаавава 7620 Шаїагасс ссаааааааа дааїасасаї сіссасіссуд адссддсаю ддоддісссс 7680 асіадісадс сасідіаю9 сдссдасіад сісаасддсс асдаассадс саассассад 7740 сдсаассіаа асддсдіааа сондасодс аїсісісісї сдссссдісї сдаадсісс 7800 дсассдсісд сідаїсдсід сссдасодссо сісаїдсідд асісшссо щасадсис 7860 сдсдааацо сдіддддад аддададасяа даассдісас ддсасіддаї Іссноссса 7920 сссдудснода ссддссссіс сісоссісса іІаааїадоса ссссдіссіс дсосіссісіс 7980 сссассісаї сіссіссіїї сссдідаасс дідаасасаа сссдасссад аїссссісії 8040 дсдадсійсо ісдаїсссіс сіссдсдіса аддіасддад сісіссісс сссіїсісі 8100 сіадаїсдас аіюнащії ашссаїда нпосндай ддащдааїсо ааїдайси 8160 аддассіадд адасідона даїсійнодс дісідше діададаї шодідіаа 8220 даїсададісд днссдсіді Наасною агдсіадюї чайшода адчашоад 8280 понааїсії ддадааной ддададонсі саїаддсдда нНаїадаца адісдсссдс 8340 асдашосо щдаснаца ддіадсіадо опадаїсід сісддаці!ї Іїісайунас 8400 нпандадазд аїаащдіадс їаассшас Нодїсаїсі ашіа!сісо їайсоїай 8460 саїсідднс даддосіа даїадацсд ссщащшої ссодаїсдааї ддаїадсаї 8520 ссдсдосна Шодіадід Нсюдайда шдісосіс їадаїсідад юддааїаата 8580 Насаїсіса асашцйасі адаааснод Шаїадсіс садашаса дшаїйсі 8640 ташіаадої Шааацаа адашаїйдс їасідсідсі сондаїссі Мадсаїсса 8700 ссідададаас аїдсаюдсаї сюйцаснс шідаїаа юснадата дчнонадіа 8760 тазасюсід Понсдаїд аїсснсадо адаасаїдс аїдагсащі їасноцші 8820 тазадсіс їдсіднсді дщансщша діасіассіа ссідаїсаїс Носаїдіїї 8880 ссідсноії ададанааї їдайаддсі тасснона ссіддщдай сиссндса 8940 ддадодасс сддассдаю дсаасадсаа саїсадсне ісідінса асіашсїї 9000 саїснНасіс сааадсіадс Іссаїассас айсаадасі ссааїсщід ааансаасі 9060 садісссіад синсассодаї сісаааїсаа ссісісісаї сіссддаїсі дайссісн 9120 сенНадссаа дасісіасдс ддаНссдіаа сдааадсаса аасаїсідас аадаадссії 9180 асддайсаа ааїісаасдсі аїдсасдсдо содсідасісс іІсісассаас аадіаїсдсі 9240 Ннаїсдасодї дсадссдсід асаддсдісс Ісдаїдсада дапасадас аіддасідс 9300 дддадссісї сдаїдасадс аснддаай адаїссідсда соссшсас ассіассаад 9360 щаїсіасії Іссдддісаа дсіаїісасіа асдадсадса саїсдсонс Ісссдссодді 9420 Ісддсссі ддасссдод ссдаїснаа ададіаісда ддасіаїсса даддідсада 9480 Заїасоддсд сдаддсдаас дададсадсс донсаїс9д ададасіда сасассдаїї 9540 ссассійссі ддасодсіссд ссідссдссо ддвідащдасд адсіаїсоаа дідссддаві 9600 аддаддюа сасаддсне сісіссайді асадідссід ддадасасіс іІсдссіасда 9660 тдсаадсіас саїсдааддс Нааасаїдо іссасісддс дасдаадаїс Псдоддісаї 9720 щіассаддс дасіаанду содснсісда асассадсої дааадчідаг дасдюддасяа 9780 ссддадаїад ададасщдід сасссасіса іІсддасоса іссіднасд ддааддсодсо 9840 сасісіїасід саассадайо їасідссада адаїссадду аашасддас дсддадісда 9900 адісссіції дсаайсси їІасдадсасд ссассаацдії сдасисасс Ідссоддчдісс 9960 ддаддаадаа ддассаадіс сіддідюаЯд асаассідід їассаїдсас сдсдссдісс 10020 сддасіасас щоадаааїйс адаїассіда сссдсассас сдддсоддда дасаадссаї 10080 сосуандасо аіссоНааї їааіїсдадід щааоддааді даасідадіс Ісаадааіаа 10140 ааасідсаад їаїдосодсіс сайссаїду аадассюса ідсаїссіаї азаідси 10200 нащшіїсаа днодадаас іа ції дісшааді юдадіасіс їіаадсіайс 10260 даїсіддада Насідії Шаагаааа ашодаацсвіо іаїсідіссї дашаанад 10320 Шшсаадааа дссаадсаї Шодадісі аддаюааса аадісдісса ада(дсаада 10380 адісіадад аддїадсіас айсіддаа айуносаї снссшсі Ісааїатата 10440 тазацдісс їашсаїаа ідісайсіа дссадсіаїс їаїайсіаї аїаїссаш 10500 ссудпоссаї асшайса сіадноса ісдадідадс юдсаносіс ідіасіасаї 10560 оанаснодаї ашідноїй саїааасаса сасайнааїа адагсадаї (дідаааааї 10620 асодсдіссда іссіассіді сасіїсаїса аааддасаді адааааддаа ддщасассі 10680 асааадсса ісайдсдаї аааддааада сіаїсайса адаїдссісі дссдасадід 10740 дісссааада (ддассссса сссасдадда дсаїсдаюда аааадаадас діссаасса 10800 сдіснсааа дсаадіюддаї даїдідаїа снссасіда саїааддда! дасдсасааї 10860 сссасіаїсс Псдсаадас сснссісіа їІаїааддаад йсасаї Нддададда 10920 сасдсюдааа ісассадісі сісісіасаа даїсоддодаї сісіадсссі адаассаїсі 10980 Іссасасасі саадссасас їайодадаа сасасаддда саасасасса іаадаїссаа 11040 дддаддссіс сдссодссодсс ддіаассасс ссдссосісі ссісшей Ісіссдн 11100 пшссдіс Ісддісісда Ісшодссі ддіааша дащдадсдад аддсддсне 11160 дюсасассс адаісддаідс дсдддадчадо сдоддаїсісу сддсідадаос ісісдссдде 11220 дюдаїссо99д сссдодаїсіс дсддддаа доадсісісду ашіадаїсі дсдаїссдсс 11280 аноно9999 дададацад дддашааа ашссодссо дсіааасаа даісаддаад 11340 аддддаааад досасіаюад Шаїації їазаїаціє (дсідснсо Іісаддсеснаяд 11400 ашдідсіада Ісшсше Нснищої ддаатадаай юааїсссіс адсацойнсе 11460 аїсддіадії Шсішса щдашоюа сааадсадс сісддсдда дсшщаї 11520 аддіадаавдії даїсаассаї ддсдсаадії адсадааїсі дсаадіої дсадаассса 11580 Ісіснаїсі ссааїсісіс даааїссаді саасдсаааї сісссНаїс ддашеїсід 11640 аадасдсадс адсаїссасду адснаїсса ашсдісдї сдщдаддаї! даадаадавді 11700 дддаїдасодїі їаайддсіс щдадсіїсді ссіснаадо ісадісне дшссаса 11 760 дсоюсаїдс йсаїддадс Нсаїсіаду ссадсіасід ссаддаацдіс їІадсдддсіс 11820 адіддсассод Ідсдсаїссс ддсдаїааа адіацйісас асаддадсії садісода 11880 ддасносіа діддададас дадаагсасі чддашосно аддасдаада юпнаїсаас 11940 ассддаїаадд сдаїсаадс ааддаїосс адааіссдаа аадададсда їасдіддаїс 12000 аїсдасдаю ноаїаасодд аддайносіс дсісссдаад сдссаснда сшоадодаас 12060 дсадсіасд9 даїдссадісі їастадада сіддіаддса іадасії дасісіасс 12120 нсаїсдад асдсдадссі сасіаадада ссааїдддас дадідсідаа іссссідаду 12180 дадчаїдаододід іІссадаїаа агсідаддаї дащаїсдіс Нссдайнас іссдаддс 12240 сссаадассс ссасдссааї сасдіасада айссдаїдо сдісадсаса оддісаадіса 12300 дсодіасісс ддсоддоссі саасасассі ддааісасаа ссаїдайноа асссаїсаю 12360 асіададасс асасддадаа даюнодсад дашсодосо сіааїсіаас ддісдааасс 12420 дасдссдасд дсдідаддас ааїссдсну даддосадаяд діааасідас дассааціє 12480 аїсдаціюдс сіддадаїсс сісдіссаса дсушШессс іІсдіадсідс дНасісдіє 12540 сеіддайсід адідасдаї ссюааїйціс сісаїдааїгс саасіадаас содссісаїс 12600 сісасандс аддадчащцаа осідасаїс дадонаїса аїссіаддії ддсаддадчоа 12660 дадааціда ссдаїсідса саїосайсї адіасасіса аадасаїдас сдісссдад 12720 даїсосаосіс саїссаїдаї сдасдадіас сссайсісд ссопдсідс дсдашосс 12780 дададсодсаа сідіааідаа сдассндад дчадндадод пааддадад дасадасіюд 12840 їссдсддща сдаацдодссі даадсіааас ддсоюддасі дсдасдаадд дааасаїсс 12900 спдіадісс діддісдссс адасдддаад вчаднодада аїдснсода ассідсюіо 12960 дсдасосасс Ноаїсаїад ааїсдссаїд ісацісідо дащдадасі ідісіссдад 13020 ааїссддщда ссундасода іосіассаїд аїсдссассі ссшссіда дисагддас 13080 сісадасад асіддоддос саадаїсодад сідісідата сіааддссдс Пдасасою 13140 адасдасдас сдюдсаїцаї дадааїсас адасдасдаа сасдсаїдіс дсаїсдссді 13200 ссісшоіа Ісасасадса ісассісії сдсісіасіа сісссссдад сааісассда 13260 ссааїіаасас саассаїсаа ссісссссді сдссдссдсс йсассдісс Іссссісаса 13320 ссаїадаасі дсааащісс дссідсадда ддоддсссаї соїддссаді їаїсснадс 13380 таїссдщіс адаагсаїсі їаїсаїсдад іІсдадісдії аїсдщісса аіддсісісї 13440 сдадісдада адсссісіаї ссаїссаїсс адіднадаої днснсадіс сощдашюнйна 13500 ссадаацо адпсдсн донаою шодаасідс Попостаї стаїсддааї 13560 дааадаааї адаадасаад дадааааааа ададіїсдаа адішойс дсаїгассаїа 13620 ташсснс сдаїдсодсдс дшансс іІсдсісадса дсаадацої Ндаїсодага 13680 пдсадсаад саанасаса аїааагїаза!ї юсіасасід діасіїсааа сіасасідаї 13740 ддЧісадідаї Шсааїадс аїдаассца анйдаасаїс ідідіадсії асаїсіссії 13800 сдааадсідс ааїдсндад аасіддааа дааайсйцо Юаїддсада адсіайсас 13860 Ідісснсос дсашаса діссаїасад асасадсаї! Іссайодс асаадаїада 13920 даасаасааї садссіша ддісааїссс аадідюдсаї дасаїсссодс даїсоасссдс 13980 асаасааасду сассддідса сааасіаї 14008 «210510 «2115 16068 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Химерна молекула ДНК геномної ДНК кукурудзи та трансгенна ДНК «4005 10 аїсіасаддд сдсдсадсода сідасасаїд ддасссасдад дсаааддсад саддсадасіс 60 дсдсодсдада дсасдсаадс ассдайдас дсдсдїдссс сішдіс99 адаасдадда 120 тдсосдаїсо іссдідсад дндадасоду ссаддсдоада сссасссаїї ддсдссаїдс 180 сдсдсдадса дсадсіддсс сдсасадаї сааадднода чіддасіада адсдаадасс 240 Тадіссаадс дасдшсі іссшше со НШсеш агашесн з00 ашацші аншисайці (Шанс аааїсіааа!ї Ноаасісаа діоюадаї 360 саїасшоа апйаааїйссі сасаїйсадаа іаїсадіадод ааіадааїаї ІШаасіаї 420 адшаш ісістації азасааіси посНшіІ сайшааа ссісаашо 480 Тааацаїа! стааайсса айшддіса Надіаїасі ссіасіаана ісаїшайн 540 днаюдаааї дсасасасаа іааасіссаа сндаюдааї адаїаїсіаї Нансіааї 600 їаашайцй дшщодіада дісааааї аддааасаса сасаїаної ШеШшей 660 Шадааааа юдіашії андіюдддас аадаасіааа адісассіса ааайнааага 720 сісащіаїа ашдодаїйа ісїідааша сіаншаї псисаїаї ашааша 780 панаац ншснаї (дддсснас аснаюдада ісагададас аіддагса 840 дюдсаїаса адндаааїй! асідссаааа аїдісщдіса іІасасааїсс дідювчваод 900 шоаюдасс адсададссі дасіасісіа аїссдїаці ададаассаа одсісссасда 960 дасадасіса ащіаїссда даїасісйуд шШоойцаса спдсааааа іадассасіс 1020 пошоі їсащісс9д9 даааїсіаса юдаїсадса адацдіаїда гддісааваї 1080 ддадааааад ааададіааї ї(ассаації Шісаайс ааааащіаяд аідіссдсад 1140 сонанаїа аааїдааасді асашіодаї аааасдасаа ацйасдаїсс дісдіаша 1200 їаддсдааад сааіааасаа ацансіаа йсддааас Шашсда сдгідісіаса 1260 нсасдісса ааїдддддсі їІадададаа асіїсасдаї нНдасосодас їаасіаадса 1320 сіадсдіасд ддасссадаї аїсдаайса адсідассдс сассддсааа саассасдаа 1380 шаїаащя їасіаддсаа айсіссдії юддсодаіод юссдассаа Пасасоацш 1440 посодідіс сіссдасааа ашодссій іааааасааї Шаїаадад аадсіссдда 1500 даїааааддс сдісаайції асаададіюда адісдісіас Ісссіссаїс ссаааааа!д 1560 таайсіаад тададної анпацацш Пподасаааа ддадіаїасс асаадааюа 1620 тТаїсаїсадіс аїдснадаї ссишаді ааадсідад снисісіааа адіададааа 1680 падаааааа аїсасації дщдаїсна ашсіадсс Іссасааааї сшодани 1740 асашша шодаша дшсадаад іссйпаша їаїдідсіад Шдоасадса 1800 сНааааїсд падададад ссіааасааа адссшса ааасдассії дадссадайн 1860 дунададдс саааашоа нодісаааас Паддсаадс саадаїша дсадсіайі 1920 дашодатас саааашос саадаїйсід несшідсс Шсаассоу дшШаїсадс 1980 сдіаснсад сНайсісі сісасадаас асіайдааї садссдаааа дссассдсад 2040 аасаддасса діаїсісаса ааіддсащс саааїатасі сассдісаді дадсссацй 2100 аасоддсдісд асаацдісіаа сддссассаа ссадсдаасс ассадсдіса адсіадссаа 2160 дсдаадсада сддссдадас діндасассі їддсодсоддодс аїсісіса сссссісісд 2220 ададнссдс іссассісса сіддіддс9о Шессаадіс сонссодссі ссідсіссіс 2280 сісасасддс асдааассді сасддсассу дсадсасоад9 дданссц сссассдсіс 2340 сцссеше ссіссісдс ссдссуШшІ аааіадссад ссссаїсссс адснсісіс 2400 сссаассіса дснсісісуд пуНсддад сдсасасаса асссдаїссс сааїссссіс 2460 дісісіссіс дсдадссісо ісдаїссссу сисаадаіа сдосодаїсаї ссісссщше 2520 Іїстасснсї снсістада сіаддісддс даїссаїдадї їаддассідс їадйсідн 2580 ссіднше сащдаосідсо аддіасаайа даїсідащюа соцпаща!гд одінаасної 2640 саїасіссід садідїдсода істатадідс ІШаддаса іїсаашодас сіддсісай 2700 сдадаїсддс даїссащаді їаддасссіа ддсдаїддад Ісддонада іссдсдсіді 2760 поюйасді ададагс дассщтасі іІсадасасої ісданоїї аасіщісад 2820 сассідддад іссідддагд дісіадсід днсодсадаї дадасодаїй ісадаїсід 2880 сідїаісно Шсонадао йсосішаа ісіаїссою аїацасі аассіаюдаї 2940 ащдонсдаї соаїосіадсі асдіссідід Ісаїаації тадсаїдссс ШШЯШ 3000 дУ9ноїсї дандадсід їадагсадад їаїасідш сааасіассї асіддатата 3060 Шшайаааї ндаасюії ашіодщіса саїаїаїсії саїаанааа аддаюдаа 3120 адаїазаюця агаддіасаї чійпосющі дадішасії датастді тадаїатаса 3180 дснадаїа садаасдсаа садаюцна садіїсааіа анйсндій ассіааіааа 3240 саааіаадда їаддшщіад посіююда Ішщосідаї асшопнад агазагацдс 3300 надаїага! дааосаасаї ссюдсіасду Шааїаай андшагйа ісіааїтадас 3360 аадссідсії Шаанаїй Подаїаїасі юдаїдага сагасадсад сіащідіда 3420 айшаааї асссадсаїс аїдадсаїдс аюдасссідс снадіаїдс ідошащша 3480 спдадасії сійної даїасісас сийоїаді Надідасіс нНеїдсадаї 3540 дсаассаїйії сіссддадад дадассацдії даданадас садсіасадс адсідаїгаю 3600 дссдсоаїйй дідаїафсоі їІаассайас апдадасої сіасадідаа сшаддаса 3660 дадссасааа сассасаада діддайодаї даїсіадада ддносаада іадаїгасссі 3720 тданаона сідадайнода двадіоною осідатано спасосідд дсссюдаазд 3780 дсіаддаасод снпасдацно дасадінодаяд адіасідій асдщісаса їадосаїсаа 3840 аадноддосс їаддаїссас айдіасаса сашосна адісіадда дасасаадаї 3900 шааавісіу юдднасіці іаїаддссії ссааасодаїс саїсіонад днодсадад 3960 дсшоддодаї асасадсссду дддіасацу сдсдсадсід даїасаадса ідаюдаца 4020 саюайцйно9 даншнодаса ааддданії даднодссад сіссіссаад дссаднада 4080 ссаднассс адаїсідаїа сдсодсідсіа діадссааді ассіассісуд аддасасасі 4140 діадасадід Ідссаїаца саддіїсада Ннддссоддда сааададіас асдсдані 4200 Тасіаїссіс даїгасідао їасіасадаї іІсасайсас адонасіа ссідассіді 4260 дагдсідо їастасадаї дідсісюа агадсісадуд сідасссаа діаададсад 4320 тдсааайсс саашссад аааасаддад дассіссааа ддасіїсааї діаайсааа 4380 шешсаяд аддіссші дсаададосі ддаюіааад їасішаїйа агааіссаад 4440 ссапцоюсі ісісаааааа аддаааадаа ааааащшоі дсддсссодд ссдідасддс 4500 сасдадсодаа сіссюдсадд адсадасісо санаїсдаї ддадсістас сааасддсс 4560 сіадасайца ассіассаїд даїсасаїсу іІааааааааа асссіассаї оддаїссіаїс 4620 тд Пусссідаа ададіюддаасі саїсаїсаїа Шассаїдд сдсдсоїадяо 4680 адсасіїсдї сдаадассса їадададосяо аіасісдсас сатаоной Іссіднаю 4740 їааіаїсдда ддддаадса дісддсіаду Подісссаї сдоїтасідді сдіссссіад 4800 тдсосіадаї дсосодащії ідіссісааа аасісішс НеНааїаа сааїсатасд 4860 сааашційї дсоїайсда дааааааада адайсіаїс юки Ндааащдас 4920 їссаашаї аддаддадсс сушаасодо сдісдасааа ісіаасддас ассаассадс 4980 даададсда асссассадс дссаадсіад ссаадсдаад садасддссд адасдсідас 5040 асссндссі юдсосодоса Ісіссдісдс щдасісдсід дсісюдссс сісосдада 5100 днссодісс ассіссассі дідісодій ссаасіссоді іссдссіїсд сдідддаси 5160 днссонса іссонододсо дсаїссддаа айдсдіддс діададсаса ддосссіссі 5220 сісасасддс асддаассді сасдадсіса сддсассдас адсасдасдад ддансснео 5280 сссассассд сіссійсссі Цосснссі сдсссдссаї сагааайадс сассссіссс 5340 адсіссіс дссасаїссі сісаїсаїсі ісісісоїді адсасдсодса дсссдаїссс 5400 сааїссссіс іссісдсдад ссісдісдаї сссісдене аададіагдс їаїсдісєсії 5460 ссісісісіс ІсШассії аїстадаїсу дсдаїссаїд днададссі дсіаднсїс 5520 сансащії дісдадодс дююдадодсас ааїадаїссяа ісдасойаї даюонадс 5580 сідісаюсі спдсдаїсі дідданосії їІаддаааддс айаащшаа ісссідаюа 5640 нсдадаїсо дідаїссаїд ойпадіассс їаадсюща адісддан адаїссдсдс 5700 тднсаїада сдаїсідне щайоіаа сндісадіа ссідсоааїс сісдаідди 5760 сіадсіддії сададаїсад аїсдайсса Наїсідсіа їасаїсної псопоссі 5820 адосіссдії іааісіаїсс аїсатаюаї днадссій даїаданс даїсдюсіа 5880 дсіащіссі діддаснаа Пдісаддіс сіаанша ддаадасщі Іссааассаї 5940 сідсюдаїй! їапааайі ддаїсодаї дідїсасаїа сассіїсаїа апаааацдд 6000 аддааагаї сісНаїсії Падаїаща агаддсайі агашатюсі дідадіша 6060 сіадіасійй спадааїаї аюіаснції Надасоддаа їайдаїа їагтасащіюд 6120 їТадаїасаїд аадсаасаїд сідсідіаді сіааїаайцс сідйсаїсі ааіааїсаад 6180 ташю'аїаю нещіоі Шандаїа Шоданада їаіагаса спадаїаса 6240 їТасаюдаадс адсаїдсідс їасадшаа ісананої Паїссаана аасааасаїд 6300 спшааїй їаїсндаїа осіддаю асддааїа сададації аадіасссад 6360 саїсаюаєдс аїдсаїщдасс сідсднасді аїдсідша шосідад асісшсїйї 6420 пдіадагїас ісасссідн недаїодаї ссіасідсад дідассддіс дссаюдсса 6480 ссдссассас їІассдссасс асідсойнсі ссддсощаї дадсдісддс асідадасоас 6540 дсаддаїсіа сіссіїсадс сассіссадс сісідсідс дносссдсі аадссдісії 6600 сонсаадад ссідаадсід ааасадісєсд сасоассцас ссддсодссід дассагадас 6660 сайсоної саддідсаю сісасснсд Наддаасодс сіддіасдіс дссдсісісс 6720 сідаддадсі дадсдадаад ссснодддіс дсассаїссі адасасіссуд Надсссш 6780 ассдссадсс щдасоадсдіа дідасоадссс юсідасаї сідсссдсаї адансосіс 6840 содсісадсда сдосаїссіс дісаасдддс аїснсадю сссдіассас ддосіддааї 6900 пдасдас9д9 ддодсадоі діссасаасс сдсасддсаа сддсдсасда ссадснссс 6960 їсаасонад дісонсссії дндісдадс асдасодсасі даїсіддаїс ддссюдса 7020 асссадсісії ддссдаїсса ддадссанс ссдаснсод Поссдсодід дасссадссі 7080 аєсддасодді сддсаонНас ддодсасодісд андіаасіа іаадсіссії діддасаасс 7140 паюдюдайц ддодссасодсі садіасудщс ассодосіаа сдсісадасі дасдесща 7200 ассдісісда ааддааоддіс аїісдісддсд асаддададаї Іісаддсдсія аїдаадаїсс 7260 сіддаддсас дсссісідід сісаїддсда адцсісад аддсдсдаас асдсссдїда 7320 асодссіддаа сдасаїссдс ддааїаадад ісіссдсдаї асідаасіїс аїсдссоцна 7380 сдсссдад9ад сасасссааа дадсадісаа Іссасадсад адддасссаї анйснасас 7440 сддааассда додсіаднодс сасіаснсі Ісдасісдіє асддаашс дддагадасо 7500 ассоадаздаї ддасодідії спсдаїсії ддсаадсдса адсісісдієс ааддаадата 7560 аддідадісдї ддадодсіаїс дадсодїаддс дсодссіасої Ідаддсдаас аддіапцадас 7620 ссдсдаїдсі аіссідсдас даддссдсад Нададідісє дсосдадаїа даааадсідо 7680 адсадсіада ддссоассіда НМаанаадад ссааддсдаї стаюасіда айдссааїд 7740 сассадссід іІстасаюаї дааіаааїаа ададіссаїс садідідаїд дсісаїдссі 7800 аюїдадої дасідааїсс аїсадчіащі аа дщісаасса ідідюааїс 7860 аддщісааа ааїісдіддсі! ддаааїссаї діддшеїта дсшШаїщіа ааюнайц 7920 дюаааїага ааїайдш ща ааїшасіс ісісашії сіспдсасі 7980 сассайсіа Нагадіааї ШШаадс додссодсідаї діаїссдїсс асадідащі 8040 діссааісад Юдааїааїсі аднадоюаа дссадаацдіс саїадідссс сПосісіді 8100 сассаїаїаї ссадіїсаас сдсассаай дссаїсісу аасідайса ідішШайнс 8160 адднодіаа аїдаанно ссаайсааї діаонадаї ашссаїщі саїшадіа 8220 сашассаа ШШаїта! Істодсіада аааддадааї ддідасаїсі псодаадаї 8280 саадаїсааї іІаїсаадіаї садсаасадс ассідаадаї тдадідсаї їадйдісаї 8340 щдадааїааї дсіадсіайї сайдсасід дсанадада садададдас дадссадш 8400 дасаддсаа апйадсасад ісааасідда їасдідаїда сддадададао досасіаюа 8460 аншодоаю асаодадддад аддасасіаїд ааншодс Шосідасу ддасасдсса 8520 сіаддащда аанддасаа ааїасдааїйа йсааддаю ааадіддаісд д«Шоаїаді 8580 їсададащда ааїціцісії (дддсааасі Ядаддасда аоцоссіаї Шосанаа 8640 асдааїаїа!ї Наїайассс саааааааад ааїасасаїс Іссасіссда дссддсащі 8700 дддаїсссса сіадісадсс асідтаюдс оссдасіадс іІсаасддсса сдаассадсс 8760 аассассадс дсаассіааа сддсдіааас ойодасододса ісісісісіс дссссдісіс 8820 дааадсійссд сассодсісдс їддісдсідс ссддсдссдс ісдідсідда сісшссої 8880 ддсдасісс дсдааандс дчюдідаада ддададасодо аассдісасду дсасюдаї! 8940 сеНссссас ссдасіддс сддссссісс іІсдссіссаї аааіаддсас сссдіссісд 9000 ссіссісісс ссассісаїс Іссіссшс ссдідаассо даасасаас ссдасссада 9060 Іссссісц9 сдадснсді сдаїсссісс Іссдсдісаа додїасддадс Нсіссіссс 9120 сененсіс їадаїсдасо нано Шесадаї сндано даюдааїсда 9180 ащдайнсна ддассіадда досідонаяд аїсідносу неідщшсео їадаюдай 9240 пдащіаад аїсадаїс9о Пссосіаії їаасноїда їдстадідю акшодода 9300 адашодавді юнааїсід ддадзноно ддадонсіс діаддсддаї щіадаюдаа 9360 дісдсссдса сдашосої даснонад діадстадда Надаїсідс Ісддашії 9420 санднасі їапдадада їіаашдіадсі аассщшШасі исаїсіа шіаїсісої 9480 айсаїанс агсщдєсйнсо адоаосіад аїададсодс сідашоіс сдаїсдаац 9540 дддіадсаїс сдсдоснаї ндаїадіді істданоаї Поїсосісї адаїсюаді 9600 ддааїааїа! їасаїсісаа сайнасіа дааасцноді Нагадсісс ддашасаї 9660 шайсії агтааздаїї Паааюааа дашаюсі асідсідсіс дідаїссії 9720 Тадсаїссас сідаддааса дсаїдсаїс юйасісі шодаїааї дспадаїад 9780 понадіаї азасідсіці (дісдащда ісснсадда даасадса Юдаїсаїдії 9840 аснацшії агашсісі дсідйнсой дансшад їасіассіас сідаїсаїсі 9900 тдсашнс сідснона дадайаай данадосії асспднодс сіддідайс 9960 пссносаяд дідддїассс ддассдаща саасадсаас аїсадснсї сідійсаа 10020 сідшсне аїснасісс ааадсіадсі ссаїассаса Нсаадасіс сааїсідіда 10080 аайсаасіс адісссіадс Нсассддіс Ісаааїсаас сісісісаїс іІссодаїсід 10140 айссіснс снадссаад асістасдсу днссдіаас дааадсасаа асаїсідаса 10200 адаадссна сддайнсааа аїсаасодсіа Ідсасодсоддс асюдасіссі сісассааса 10260 адіаїсдсії їаїсдасдід садссосіда саддсдіссі сддідсадад апйасаддсоу 10320 тдааїсюдсо ддадссісіс даїдасадса спддааца даїссіддас дссшсаса 10380 ссіассааді даїсіасій ссдддісааяд сіаїсасіаа сдадсадсас аїсдсдунсі 10440 сссдссдай сддсссідід дасссддаідс сдаїснааа дадіаїсдад ддсіаїссад 10500 аддодсадаї даїасддсдс даддсдаасд ададсадссд дисаїсдда дадасіддс 10560 асассдайс сассійссю дасодсіссос сідссоассої дащдатюада дсіаїсдаад 10620 дссддадіа ддадаїдас асадоснос ісіссата садідссідо дадасасісі 10680 сдссіасдаї дсаадсіасс аісдааддсі їааасдідді ссасісддсу асдааддієсї 10740 ісддаїсаїї діассаддсо асіаайддс дснсісдаа сассадсаїд ааадідаїда 10800 асдаддасдс сддадаїада дадасідідс асссасісаї сддасосаї ссіднасдд 10860 дааддсодсодс асісіасідс аассадчдіді асідссадаа даїссаддада адасддаса 10920 сддацдісдаа дісссідну саайссцй асдадсасдс сассааднсе даснсассі 10980 дссддаїссо аіддаадаад дассаадісс іфдаююдаоа саассідіді ассаїдсасс 11040 дсодссдіссс ддасіасосі дддааанса даїассідас ссдсассасс діддсдадад 11100 асаадссдіс дсоандасоа іссдйНааї! ааісдадіої дааддаадід аасідадісї 11160 саадааїааа аасідсаадії аїддсодсісс айссадда адассідсаї дсаїссіаїга 11220 тадідсц їагунсаад Подадаасі ашщідіоно Іісшаацдії ддадіасісї 11280 аадсіансу аїсюдадаї їагусідн Каагаааад Шодаадтиої аїсідієсю 11340 Шаайаді нсаадааад ссаадсоюі Наданста ддааасаа адісдісєсаа 11400 даюдсаадаа дисіадада доїадсіаса Шсіддааа попосаїс Посшсії 11460 сааїаїазаї азтанціссі ацсаїааї дісансіад ссадсіаїсі азайсіаїа 11520 Таїссаціє сунодссаїа сшайсас їашійдсаї сдадщдасдсі асайосісї 11580 діасіасаю Насндаїа ойцоне агааасасас асайааїаа іІдаїсадац 11640 дюааааага содсдіссодаї ссіассідіє асісаїсаа ааддасадіа дааааддаад 11700 дюдсассіа саааюдссаї сайдсдаїа ааддаааддс іаїсайсаа даїоссісід 11760 ссдасавдідо іІсссааадаї ддасссссас ссасдаддад саісдіддаа ааадаадаса 11820 нссаассас діснсааад саадюдай даюаїас Нссасщас діаадддааю 11880 асодсасааїс ссасіаїссі Ісдсаадасс спссісіаї аїааддааці ісайсаїй! 11940 ддададдас асдсідаааї сассадісіс ісісіасаад аїсддодаїс ісіадсссіа 12000 даассаїсії ссасасасіс аадссасасі анддадаас асасадддас аасасассаї 12060 аадаїссаад ддаддссісс дссдссдсса діаассассс сдссссісіс сісшец 12120 сіссданш Шссаїсі сддісісдаї сшодссії ддтадашоа аідддсдада 12180 досдасіїсо їдсдсдссса даїсоддюса садаададас дадаїсісдс дасіддадсі 12240 сісдссддсо дадаїссддс ссддаїсісд сдадааая досісісдда шадаїстю 12300 сдаїссдссо нпойо99о9а ададаюда9аа ддашаааа Шссоссаї дсіааасаад 12360 аїсаддаада ддддаааацда дсасіаїдді Наїацшії агаїашсї дсідснеді 12420 саддснНада дсіадаї сшсшсї їсСнНшоІ доаїадаайці дааїсссіса 12480 дсанаойса іІсддїадні Япешісаї дашоідас ааадсадсс іІсатсодад 12540 сша дагадаадід аїсаассаїд дсдсаадна дсадааїсід сааюдщшщіо 12600 садаасссаї сісНаїсіс сааїсісісу аааїссадіс аасдсааагс ісссЦаїсу 12660 дшсісіда адасдсадса дсаїссасда дсцаїссда Шсдісаїс діддддана 12720 аадаадавід ддаюасойї аайдодсісї дадснсдіс сісйаадоді сащіснсї 12780 дшссасда содідсаїдсі ісаддадсі іІсаїстаддс садсіасідс саддаацісєсї 12840 адсоаддсіса дддсассої дсосаїсссі ддсдаїаааа діашсаса саддадсіїс 12900 адінсоддад дасцдсіад юдададасу адааїсасід дашоснода ддасоаадаї 12960 онНаїсааса ссоддіааддс даїдсаадса адоддідсса дааіссдааа ададдоасдаї 13020 асдюдагса ісдасодіді ддіаасодда дданосісу сісссдаадс дссасідас 13080 шодааасд садсіасдда аідссодісії астащадас ддіадасаї аіаїдасш 13140 дасісіассі ісаїсддіда содсдадссіс асіаададас сааідддасяа адідсюдааї 13200 ссссщдад9да ададаодші ссаддідааа Іс4аддаг аідаїсодісі іссдоНасі 13260 сідсдаддсс ссаадасссс сасдссааїс асдіасадда йссдаїддс дісадсасад 13320 дісаадісад соддіасіссі ддсдоддссіс аасасассід дааїісасаас саїдайдаа 13380 сссаїсащда сіададасса сасддадаад адндсадо дШсддсос їааїсіаасд 13440 дісдааассу асдссдасдо сдідаддаса аїссден9д9 аддодсадада їааасідасі 13500 ддссаадіса іІсдащідсс ддадаїссс ісдіссасад сушссссі соїаасідса 13560 посісдісєс сюдаїсіда щідасодаїс сюааїйщісс ісаюааїсс аасіадаасс 13620 доссісаїсс Ісасацйдса ддадаюдої дсідасаїсо адопнагсаа іІсстадайцо 13680 дсадаюдад аддашіддс сдаїісідсос дідсойста діасасісаа аддсодасс 13740 дісссдада аїсдсодсісс аїссаїдаїс дасдадіасс ссайсісдс сопдсідсі 13800 дсоашосса адддсдсаас шіааюдаас ддссидадао адндададді їІааддададі 13860 дасададсіді ссдсддщддс даададссід аадсіааасд дсоіддасід сдасдаададі 13920 дааасадіссс Ноїадіссо даїсоссса дасдддаада авонододаа їдсісоддда 13980 дсіюдсІюща сдасодсассі Юдаїсаїада аїсдссаїді сашсюаї дадддасії 14040 дісіссдада аїссддщдас сундасодаї дсіассаюда ісдссассіс сшесюаяа 14100 нпсаюдасс ісаїддсадду снададодсс аадаїсдадс дісідатас їіааддссосі 14160 Засасаїда дасдасдасс дідсащдоїо адааїсаса дасдасдаас асдсаїдісд 14220 саїсдссдіс сіснідіаї сасасадсаї сассненс дсісіасіас Ісссссдадс 14280 ааїсассдас сааіаасасс аассаїсаас сісссссдіс дссдссдссі Ісассдіссі 14340 ссссісасас саїадаасід сааащдіссд ссідсаддаї ддддсссаїс діддссадії 14400 аїссНадсі аїссдідіса дааїсаїсії аісаїсдавді сдадісона ісдідієсад 14460 тдасісісіс дадісдадаа дсссісіаїс саїссаїсса аідонадаю йссдісс 14520 даюашнйас садаанда дисдсша опагцдадщі пдаасідсі юносіаїс 14580 їаїсддааід ааадаааїа даадасааду адаааааааа дадіїсдааа чішонсо 14640 саїассаїаї ашссісс дддсодсосі дшайссї сдсісадсад сааданоїйї 14700 щаїсодаїйаї дсадсаацдс аацасасаа іаааїазай дсіасасіда їасісааас 14760 тТасасща9 дісддюаїй сааїадса Юаассійаа пдаасаїсі дідїадсесна 14820 саїсіссне дааадсідса аддсндада аспддааад ааансної дадасадаа 14880 дсіансасі діссіїсдсі дсашасад іІссаїасада сасадсац ссайдса 14940 саадаіадад аасаасааїс адссішад дісааїссса адідюдса! асдісссоса 15000 аїсдсссдса саасааасдс ассдддсас ааасіаїадс аадіоіддіє тайщшата 15060 їадсаадіюда ддісадаїаа ааіааіаааї ааааїсайна ааїшаїаї адсаадція 15120 аесташії дспдіааас іасададааї агаааці їаааісддадіа даасаайод 15180 сіашааас іІаааадаїййї ааааааааса аадаїааааа ашініда асідсдідіє 15240 Ісдададсад ссадсаїдсі Іссдассідс аїдадсадсоу адсіссідд Ідассдсаса 15300 аасоддаассі ддсссдаща аїдайос аісаасадсод ссідіаса асодаїсаїсс 15360 аассааасаї асіисдсн даддаїссас дссіасаасяо іІссдсдсісо іІссаїдсаас 15420 сааасасасд даащідіс саїдідієсс аайдааада адшщіайнсо днаасаася 15480 даадісаїаа ссдадссада іаіїададайа даассадаїс іаїсаїасса адаасасссс 15540
Іссаадайс іадасідсаа ддааадаїсс асісддсда адасдассаа дашіатаад 15600 аїссаадда дсаассаїас ддаадаадад дсіасудщдад адасідадаа Паїсіадс 15660 аааїасіасс ссданцісї ассіааддаа дісадіасодї аассадссс садсссссід 15720 сссіссдаїй ссаааїавад аааадаїасі снааюдааа асідаацаа дааащдааа!ї 15780 Таадсдаада аддасіїссі ісїідаадно сааададдаї ддсайсдаа дадсадацш 15840 нсісдсдаа сспПааааад сіаассааїа сіагдсаадс аадсіаїаас сассіссіса 15900 сіссідда аїсісдасіс дааїсісдда дсдадайнсї Шаадд999 дададсідіа 15960 асассссадао юпцаснад дашесссс Падіассіс сашадідас сіацаїсас 16020 адіддшо оШаадааа ааддсассаа аснкдадддо ссаадссос 16068 «2105 11 «2115» 29 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Хімічно синтезований олігонуклеотидний праймер ПЛР «4005 11 псіаїава ааааіадасс асасідсі 29 «210512 «211517 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Хімічно синтезований олігонуклеотидний праймер ПЛР «4005 12 садасаїсс сдсдаїс 17 «210513 «211516 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «220» «223» Хімічно синтезований олігонуклеотидний зонд ПЛР «4005 13 сасаасааас дсассд 16. - ВМЕРТИ ння чес мем з ЕС аю во я ПЕВНУ ВЕК Я. Бан в МНВК МУ. нюють ПММ ЗЕ КУ ВНУ
Фіг. 1
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862625537P | 2018-02-02 | 2018-02-02 | |
| PCT/US2019/015429 WO2019152316A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-01-28 | Maize event mon87429 and methods of use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA124660C2 true UA124660C2 (uk) | 2021-10-20 |
Family
ID=67476468
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA202004878A UA124660C2 (uk) | 2018-02-02 | 2019-01-28 | Об'єкт кукурудзи mon87429 і спосіб його використання |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10920239B2 (uk) |
| EP (1) | EP3717650A4 (uk) |
| JP (2) | JP7219282B2 (uk) |
| KR (1) | KR102258496B1 (uk) |
| CN (1) | CN111684071B (uk) |
| AR (1) | AR113735A1 (uk) |
| AU (1) | AU2019215434B2 (uk) |
| BR (1) | BR112020014164A2 (uk) |
| CA (2) | CA3151283C (uk) |
| CL (1) | CL2020001969A1 (uk) |
| CO (1) | CO2020009219A2 (uk) |
| EA (1) | EA202091620A1 (uk) |
| EC (1) | ECSP20043877A (uk) |
| MX (1) | MX2020008124A (uk) |
| PE (1) | PE20211115A1 (uk) |
| UA (1) | UA124660C2 (uk) |
| UY (1) | UY38071A (uk) |
| WO (1) | WO2019152316A1 (uk) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PE20141518A1 (es) | 2011-07-01 | 2014-11-17 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para la regulacion selectiva de la expresion de proteinas |
| BR112018001192B1 (pt) | 2015-07-22 | 2024-02-06 | Monsanto Technology Llc | Molécula de dna recombinante, método para regular seletivamente a expressão de uma proteína em um tecido reprodutivo masculino de uma planta transgênica, e uso de uma planta ou semente que compreende a referida molécula de dna recombinante |
| CA3089882A1 (en) | 2018-02-15 | 2019-08-22 | Monsanto Technology Llc | Improved management of corn through semi-dwarf systems |
| US10881057B2 (en) | 2018-02-15 | 2021-01-05 | Monsanto Technology Llc | Methods for hybrid corn seed production |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107699545A (zh) | 2008-09-29 | 2018-02-16 | 孟山都技术公司 | 大豆转基因时间mon87705及其检测方法 |
| ES2866126T3 (es) | 2009-09-17 | 2021-10-19 | Monsanto Technology Llc | Evento transgénico de soja MON 87708 y procedimientos de uso del mismo |
| MX358629B (es) | 2009-11-23 | 2018-08-28 | Monsanto Technology Llc | Evento transgenico de maiz mon 87427 y la escala de desarrollo relativo. |
| BR122021001276B1 (pt) * | 2010-01-14 | 2022-01-11 | Monsanto Technology Llc | Molécula de dna compreendendo elementos reguladores de plantas |
| AU2012237662B2 (en) * | 2011-03-25 | 2017-06-15 | Monsanto Technology Llc | Plant regulatory elements and uses thereof |
| AU2012238051B2 (en) | 2011-03-30 | 2014-04-17 | Monsanto Technology Llc | Cotton transgenic event MON 88701 and methods of use thereof |
| PE20141518A1 (es) | 2011-07-01 | 2014-11-17 | Monsanto Technology Llc | Metodos y composiciones para la regulacion selectiva de la expresion de proteinas |
| UA126903C2 (uk) * | 2012-05-08 | 2023-02-22 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Об'єкт кукурудзи mon 87411 |
| MX365442B (es) | 2014-03-20 | 2019-06-03 | Monsanto Technology Llc | Evento de maiz transgenico mon 87419 y metodos para su uso. |
| ES2914178T3 (es) | 2014-10-15 | 2022-06-07 | Monsanto Technology Llc | Genes de tolerancia a herbicidas y métodos para usar los mismos |
| BR112018001192B1 (pt) | 2015-07-22 | 2024-02-06 | Monsanto Technology Llc | Molécula de dna recombinante, método para regular seletivamente a expressão de uma proteína em um tecido reprodutivo masculino de uma planta transgênica, e uso de uma planta ou semente que compreende a referida molécula de dna recombinante |
-
2019
- 2019-01-28 AU AU2019215434A patent/AU2019215434B2/en active Active
- 2019-01-28 CN CN201980011303.4A patent/CN111684071B/zh active Active
- 2019-01-28 EP EP19747262.4A patent/EP3717650A4/en active Pending
- 2019-01-28 UA UAA202004878A patent/UA124660C2/uk unknown
- 2019-01-28 KR KR1020207021347A patent/KR102258496B1/ko active IP Right Grant
- 2019-01-28 EA EA202091620A patent/EA202091620A1/ru unknown
- 2019-01-28 JP JP2020537747A patent/JP7219282B2/ja active Active
- 2019-01-28 US US16/259,985 patent/US10920239B2/en active Active
- 2019-01-28 CA CA3151283A patent/CA3151283C/en active Active
- 2019-01-28 CA CA3086855A patent/CA3086855C/en active Active
- 2019-01-28 BR BR112020014164-0A patent/BR112020014164A2/pt unknown
- 2019-01-28 WO PCT/US2019/015429 patent/WO2019152316A1/en active Search and Examination
- 2019-01-28 MX MX2020008124A patent/MX2020008124A/es unknown
- 2019-01-28 PE PE2020001126A patent/PE20211115A1/es unknown
- 2019-02-01 AR ARP190100242A patent/AR113735A1/es unknown
- 2019-02-01 UY UY38071A patent/UY38071A/es unknown
-
2020
- 2020-07-27 EC ECSENADI202043877A patent/ECSP20043877A/es unknown
- 2020-07-27 CO CONC2020/0009219A patent/CO2020009219A2/es unknown
- 2020-07-28 CL CL2020001969A patent/CL2020001969A1/es unknown
-
2021
- 2021-01-12 US US17/147,422 patent/US20210207162A1/en active Pending
- 2021-08-12 JP JP2021131685A patent/JP7429674B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA202091620A1 (ru) | 2020-10-01 |
| MX2020008124A (es) | 2020-09-18 |
| CA3086855A1 (en) | 2019-08-08 |
| AU2019215434B2 (en) | 2020-11-05 |
| JP2021508486A (ja) | 2021-03-11 |
| ECSP20043877A (es) | 2020-08-31 |
| CA3086855C (en) | 2022-05-03 |
| US20190241903A1 (en) | 2019-08-08 |
| AU2019215434A1 (en) | 2020-06-25 |
| WO2019152316A1 (en) | 2019-08-08 |
| CL2020001969A1 (es) | 2021-01-04 |
| AR113735A1 (es) | 2020-06-03 |
| KR20200093076A (ko) | 2020-08-04 |
| CN111684071B (zh) | 2022-02-25 |
| JP2021180680A (ja) | 2021-11-25 |
| US10920239B2 (en) | 2021-02-16 |
| EP3717650A1 (en) | 2020-10-07 |
| PE20211115A1 (es) | 2021-06-23 |
| US20210207162A1 (en) | 2021-07-08 |
| JP7429674B2 (ja) | 2024-02-08 |
| CO2020009219A2 (es) | 2020-08-10 |
| EP3717650A4 (en) | 2021-09-01 |
| CA3151283A1 (en) | 2019-08-08 |
| BR112020014164A2 (pt) | 2020-12-08 |
| UY38071A (es) | 2019-08-30 |
| CN111684071A (zh) | 2020-09-18 |
| JP7219282B2 (ja) | 2023-02-07 |
| CA3151283C (en) | 2024-03-19 |
| KR102258496B1 (ko) | 2021-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11987798B2 (en) | Transgenic maize event MON 87419 and methods of use thereof | |
| US10774341B2 (en) | Cotton transgenic event MON 88701 and methods of use thereof | |
| UA124660C2 (uk) | Об'єкт кукурудзи mon87429 і спосіб його використання | |
| AU2022202219B2 (en) | Brassica Event MON94100 and Methods of Use Thereof | |
| US20230348927A1 (en) | Transgenic soybean event gm_csm63714 and methods for detection and uses thereof | |
| EA044838B1 (ru) | Трансформант кукурузы mon87429 и способы его использования | |
| TW202409284A (zh) | 轉殖基因甜菜事件ｂｖ＿ｃｓｍ６３７１３及其偵測及使用方法 | |
| EA044068B1 (ru) | Объект brassica mon94100 и способы его применения |