UA122771C2 - Гуманізоване анти-taу антитіло - Google Patents
Гуманізоване анти-taу антитіло Download PDFInfo
- Publication number
- UA122771C2 UA122771C2 UAA201700707A UAA201700707A UA122771C2 UA 122771 C2 UA122771 C2 UA 122771C2 UA A201700707 A UAA201700707 A UA A201700707A UA A201700707 A UAA201700707 A UA A201700707A UA 122771 C2 UA122771 C2 UA 122771C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- human
- tau
- beg
- binding
- rgo
- Prior art date
Links
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 146
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 145
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 82
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 82
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 110
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 50
- 101000891579 Homo sapiens Microtubule-associated protein tau Proteins 0.000 claims description 47
- 102000057063 human MAPT Human genes 0.000 claims description 47
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 26
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 25
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 claims description 14
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 12
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 7
- 101100451406 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HPM1 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims description 4
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 claims description 3
- 241001556567 Acanthamoeba polyphaga mimivirus Species 0.000 claims description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 210000005257 cortical tissue Anatomy 0.000 claims 5
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 claims 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 claims 1
- WVMBPWMAQDVZCM-UHFFFAOYSA-N N-methyl anthranilic acid Natural products CNC1=CC=CC=C1C(O)=O WVMBPWMAQDVZCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims 1
- 244000022782 cocaer Species 0.000 claims 1
- 235000008957 cocaer Nutrition 0.000 claims 1
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N ***e Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 74
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 52
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 84
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 82
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 82
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 54
- 101100460719 Mus musculus Noto gene Proteins 0.000 description 52
- 101100187345 Xenopus laevis noto gene Proteins 0.000 description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 description 40
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 18
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 14
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 13
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 12
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 12
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 11
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 208000034799 Tauopathies Diseases 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 9
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 7
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 7
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 238000009593 lumbar puncture Methods 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 208000011990 Corticobasal Degeneration Diseases 0.000 description 5
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 208000004051 Chronic Traumatic Encephalopathy Diseases 0.000 description 4
- 208000000609 Pick Disease of the Brain Diseases 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 101150113191 cmr gene Proteins 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 208000017004 dementia pugilistica Diseases 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 101150008808 mdfA gene Proteins 0.000 description 4
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 4
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710115937 Microtubule-associated protein tau Proteins 0.000 description 3
- 102100040243 Microtubule-associated protein tau Human genes 0.000 description 3
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 3
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 3
- 208000024571 Pick disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 206010010144 Completed suicide Diseases 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 101000854943 Enterobacteria phage T4 Valyl-tRNA ligase modifier Proteins 0.000 description 2
- 208000002339 Frontotemporal Lobar Degeneration Diseases 0.000 description 2
- 208000007223 Gerstmann syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 description 2
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 2
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 description 2
- 101100539341 Mus musculus Ubxn11 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 2
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 2
- 206010048327 Supranuclear palsy Diseases 0.000 description 2
- 108700023707 TUG1 Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 2
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 2
- 230000002254 contraceptive effect Effects 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 2
- 210000004558 lewy body Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 231100000706 no observed effect level Toxicity 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000013179 statistical model Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- 102100027831 14-3-3 protein theta Human genes 0.000 description 1
- 241001103870 Adia Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 101100346154 Caenorhabditis elegans oma-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100130886 Candida albicans (strain SC5314 / ATCC MYA-2876) MNT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013457 Dissociation Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 101100400545 Homo sapiens MATN1 gene Proteins 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100480715 Mus musculus Mapt gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000011644 Neurologic Gait disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 229910019567 Re Re Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100454113 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) KRE2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 206010042458 Suicidal ideation Diseases 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004810 Vascular dementia Diseases 0.000 description 1
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001295 alanines Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004227 basal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000011979 disease modifying therapy Methods 0.000 description 1
- 208000018459 dissociative disease Diseases 0.000 description 1
- 229940052760 dopamine agonists Drugs 0.000 description 1
- 239000003136 dopamine receptor stimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003371 gabaergic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 208000027700 hepatic dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000024714 major depressive disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N memantine Chemical compound C1C(C2)CC3(C)CC1(C)CC2(N)C3 BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004640 memantine Drugs 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 108010006109 methoxyresorufin-O-demethylase Proteins 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N mmai Chemical compound C1=C(C)C(OC)=CC2=C1CC(N)C2 JLESVLCTIOAHPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000004879 molecular function Effects 0.000 description 1
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 1
- 230000007138 neurofibrillary change Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006764 neuronal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004179 neuropil Anatomy 0.000 description 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011859 neuroprotective therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000000683 nonmetastatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002474 noradrenergic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001144 postural effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000004434 saccadic eye movement Effects 0.000 description 1
- 231100000279 safety data Toxicity 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 208000020352 skin basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002739 subcortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009120 supportive therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005353 urine analysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Psychology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Mycology (AREA)
Abstract
Винахід стосується виділеного антитіла або антигензв'язувального фрагмента, який специфічно зв'язується з тау.
Description
ПЕРЕХРЕСНІ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
ІО001) Надана заявка претендує на пріоритет згідно з 35 О.5.С. 119(е) заявки на патент США 62/170,036, поданої 2 червня 2015, заявки на патент США 62/080,903, поданої 17 листопада 2014, і заявки на патент США 62/018,436, поданої 27 червня 2014, зміст яких включений у цей опис в усій своїй повноті як посилання.
ВКЛЮЧЕННЯ СПИСКУ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
0002) Матеріали у списку послідовностей, що додається, включені у обсязі даної заявки у вигляді посилання. Текстовий файл списку послідовностей, що додається, який має назву:
С2М1 120 4АМО Зедиепсе І1511п9, створений 26 червня 2015, і його розмір становить 9 Кбіт.
Доступ до цього файлу можна одержати, використовуючи М'сгозой УмМога на комп'ютері, керованому операційною системою М/1 пдом/5.
ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД 0003) Наданий винахід належить до галузі гуманізованих антитіл і їх антиген-зв'язувальних фрагментів, які зв'язуються з тау, і способів застосування таких антитіл для лікування таупатій.
Зокрема, наданий винахід належить до гуманізованого антитіла і його антиген-зв'язувальним фрагментам, які зв'язуються з конкретними епітопами тау і запобігають поширенню тау.
РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
0004) Таупатії мають одну спільну властивість, яка полягає у накопичуванні у головному мозку нерозчинного гіперфосфорильованого білка тау. Більше 20 різних нейродегенеративних порушень характеризуються певним ступенем нейрофібрилярної дегенерації і можуть бути віднесені до таупатій (МийШіат»в5, 2006). Для класичних таупатій, таких як прогресуючий над'ядерний параліч (ПНП, РБ5Р) і кортикобазальна дегенерація (КБД, СВО), характерні тау включення у вигляді одиничного або множинних осередків ураження центральної нервової системи. Класичні таупатії відрізняються від інших видів таупатій, при яких тау агрегати присутні спільно з іншими нейропатологічними ознаками, такими як бета-амілоїдні (АВ) бляшки, які спостерігаються під час хвороби Альцгеймера (ХА), або тільця Леві, які спостерігаються під час хвороби Паркінсона (ХП). При таких некласичних видах таупатій питання про те, чи є тау патологія первинним фактором, що стимулює розвиток захворювання, або вона вторинна відносно неправильного укладання іншого білка і нейродегенерації, стає ще більше
Зо невизначеним.
І0005| Прогресуючий над'ядерний параліч (ПНП, також відомий як синдром Стіла-
Річардсона-Ольшевського) являє собою прогресуюче нейродегенеративне порушення, частота виникнення якого, судячи з оцінок, становить 5-7 випадків на 100000 людей (Соїре, 2014). В
США цим захворюванням уражені приблизно 20000 людей. У частоті ПНП не виявлено ніяких видимих географічних, етнічних, статевих або расових відмінностей. На ранній стадії, ПНП може мати клінічні симптоми, схожі з симптомами інших розладів мозкової діяльності, включаючи ідіопатичну хворобу Паркінсона. З цієї причини, постановка правильного діагнозу
ПНП можлива через якийсь час, як правило, через 1-3 роки після першої появи клінічних симптомів. Симптоми найчастіше починають проявлятися у віці від 50 до 70 років, і незважаючи на відмінності, які спостерігаються у клінічній картині перебігу хвороби, тривалість життя з моменту появи симптомів звичайно становить від 5 до 9 років (Нопдпіоп, 2007). Хоча клінічна картина гетерогенна, найбільш звичайним і початково описаним синдромом ПНП, який нині називається синдромом Річардсона, є наявність вираженої постуральної нестабільності і ригідності осьової мускулатури, що призводить до падінь, над'ядерного паралічу зору, що викликає ряд зорових порушень, лобовопідкіркової деменції і дисфагії що призводить до аспірації. Захворювання є прогресуючим і завжди зі смертельним кінцем (УміПат»5 апа І еев, 2009).
ІО0Об) Патологічно, пНнпП характеризується аномальним накопичуванням гіперфосфорильованих нерозчинних агрегатів білка тау у нейронах і глії у стволовій частині головного мозку, мозочку, базальних гангліях і корі головного мозку (ММ/йПат»5 апа І ее5, 2009).
Ступінь і розподіл агрегатів тау при ПНП сильно корелює з симптоматикою цього захворювання впродовж життя (5сПпопйейа еї а!., 2012). Наукові критерії національного інституту неврологічних розладів і товариства прогресуючого над'ядерного паралічу (МІМО5-5РОР), які описують синдром Річардсона, дозволяють з високим ступенем достовірності передбачати патологію, яка лежить в основі ПНП (І ймап еї а!., 1996). Утворення нейрофібрилярних клубків (НФК, МЕТ), які складаються з агрегатів тау, супроводжується втратою нейронів у різних ділянках мозку.
Виникають численні порушення нейротрансмітерів, а також, порушення, що зачіпують конкретні дофамінергічну, холінергічну, ГАМК-ергічну і норадренергічну системи.
І0007| У теперішній час відсутнє ухвалене лікування ПНП (5іатеїйои еї аї., 2010). Негативні бо результати, одержані під час вивчення ефективності лікування ПНП, виключають можливість рекомендації емпірично обгрунтованої стандартної терапії (Вохег еї аї., 2014). За відсутності будь-якої ефективної нейропротективної і хвороба-модифікувальної терапії, є нагальна незадоволена медична потреба у методах лікування ПНП.
ЇО008| Хвороба Альцгеймера (ХА) являє собою загальне хронічне прогресуюче нейродегенеративне захворювання, під час якої відбувається необоротна втрата когнітивних і поведінкових функцій. Захворювання може розвиватися впродовж більше 10 років від слабо виражених симптомів до дуже серйозних проявів. Слід зазначити, що ХА вражає приблизно 95 населення у віці старше 65 років і більше 30 95 населення у віці старше 80 років. Сама хвороба Альцгеймера патологічно проявляється у вигляді позаклітинних амілоїдних бляшок і 10 внутрішньоклітинних нейрофібрилярних клубків. Нейрофібрилярні клубки складаються, наприклад, з білка тау, зв'язує мікротрубочки, який збирається у спарених спіральних і прямих філаментах. Було висловлено припущення, що ці структури можуть бути функціонально зв'язані між собою, хоча не ясні механізми, за допомогою яких амілоїдне відкладення сприяє патологічному збиранню тау у філаменти, або навпаки.
І0009| Внутрішньоклітинні нейрофібрилярні структури під час таупатій (нейрофібрилярні клубки, дистрофічні неврити і нейропільні нитки) мають спарені спіральні філаменти (ССФ).
Основна субодиниця білка у ССФ являє собою асоційований з мікротрубочками білок тау у аномально гіперфосфорильованій формі. Нейрони з нейрофібрилярними змінами вироджуються, і ступінь цього виродження прямо корелює зі ступенем деменції у уражених індивідуумів.
ІО0О0О10) Інші види таупатій, про які відомо, що вони мають філаментні клітинні включення, що містять асоційований з мікротрубочками білок тау, включають хворобу Піку (ХПІ), групу споріднених розладів під спільною назвою лобово-скронева деменція з паркінсонізмом, пов'язаним з хромосомою 17 (ЛОДП-17), аміотрофічний бічний склероз (АБС), хворобу
Крейтцфельдта-Якоба (ХКЯ), деменцію боксерів (ДБ), синдром Герстмана-
ШтраусслераШейнкера (СГШШ), хвороба тілець Леві, хронічну травматичну енцефалопатію (ХТЕ) і хворобу Хантінгтона. Попри те, що етіологія, клінічні симптоми, патологічні відхилення і біохімічний склад філаментних клітинних включень під час цих захворювань різні, є свідчення на користь припущення про те, що механізми, які беруть участь у агрегації нормальних клітинних
Зо білків з утворенням різних філаментних включень є аналогічними. Вважається, що однією з ключових особливостей є первинна зміна у конформації асоційованого з мікротрубочками білка тау, яка ініціює утворення ядер або зерен для збирання у філаменти. Цей процес може бути обумовлений посттрансляційною модифікацією нормальних білків, мутацією або делецією у визначених генах і факторами, які зв'язуються з нормальними білками і, таким чином, змінюють їх конформацію.
СУТЬ ВИНАХОДУ
0011) Як однин з аспектів наданого винаходу надається виділене антитіло або антиген- зв'язувальний фрагмент, які специфічно зв'язуються з білком тау. Антитіло або фрагмент містять варіабельну ділянку важкого ланцюга (УН) і варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ, і кожна з ділянок МН і Мі має послідовність, вибрану з амінокислотних послідовностей, приведених на фіг. 1 і 2. Більш конкретно, ділянка МІ. може мати амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 1, 2, З і 4 |(МК1, МК2, МКЗ ї МУКА, а ділянка МН може мати амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮО МО: 5,6, 7 і 8 ЇМНІ, МН2, МНЗ ї МНАа4. У деяких варіантах здійснення наданого винаходу ділянка МІ. має амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 2 |МК21, а ділянка УН має амінокислотну послідовність
ЗБОЮ МО: 5 |МНІ)|. У деяких варіантах здійснення антитіло містить Ес-фрагмент, який може бути людським ІдС1, Ідс2, доз, Ідс4 або їх варіантами, такими як людський Ідс4, що містить мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну ділянку. Антитіло може містити константну ділянку легкого ланцюга людського каппа-ізотопу або її варіанти. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент є ЗсЕм або Раб. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент є гуманізованим антитілом або фрагментом або химерним антитілом або фрагментом. Антитіло або фрагмент можуть являти собою моноклональне антитіло. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент конкурують з НО8.5 за специфічне зв'язування з людським білком тау. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент зв'язуються з людським білком тау з рівноважною константою дисоціації (Ка), яка дорівнює щонайменше 107М.
Ї0О012| Як інший аспект наданого винаходу надається мультиспецифічне антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, які мають множину антиген-зв'язувальних ділянок.
Щонайменше одна антиген-зв'язувальна ділянка мультиспецифічного антитіла або фрагмента бо зв'язується з людським білком тау. Як альтернатива надається біспецифічне антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, які мають дві антиген-зв'язувальні ділянки. Одна з антиген- зв'язувальних ділянок біспецифічного антитіла або фрагмента зв'язується з людським білком тау. Як альтернатива, надається біспецифічне антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, де одне плече антитіла або антиген-зв'язувального фрагмента конкурує з Н.)8.5 за специфічне зв'язування з людським білком тау. Як альтернатива, надається біспецифічне антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, де одне плече антитіла або антиген-зв'язувального фрагмента складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН) і варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ), причому кожна з ділянок МН і Мі має послідовність, вибрану з амінокислотних послідовностей, приведених на фіг. 1 і 2.
ІЇ0013| Будь-яке зі згаданих вище антитіл або антигензв'язувальних фрагментів може додатково містити токсичне навантаження, необов'язково кон'югат лікарського засобу або радіонуклід.
І0014| Як ще один аспект наданого винаходу надається виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує будь-яке зі згаданих вище антитіл або антиген-зв'язувальний фрагмент, або ділянку УН, або ділянку МІ, приведені на Фіг. 1 або 2. Може бути наданий вектор (наприклад, експресуючий вектор), який містить таку молекулу нуклеїнової кислоти. Може бути надана виділена клітина-хазяїн, яка містить такий вектор. Може бути надана прокаріотична або еукаріотична клітина-хазяїн, така як клітина ссавця.
ЇО0О15| Як інший аспект наданого винаходу надається фармацевтична композиція.
Фармацевтична композиція містить будьщо зі згаданих вище антитіл або антиген-зв'язувальних фрагментів, або молекулу нуклеїнової кислоти, як описано у наданій заявці, і фармацевтично прийнятний носій.
ЇОО16| Як ще один аспект наданого винаходу надається виділена амінокислотна послідовність, яка містить послідовність одного з легких ланцюгів, приведених на Фіг. 1 і2. Як альтернатива або додатково надається виділена амінокислотна послідовність, яка містить послідовність одного з важких ланцюгів, приведених на фіг. 1 і2.
І0017| Як ще один аспект наданого винаходу надається виділене гуманізоване антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, які специфічно зв'язуються з епітопом, що містить амінокислотну послідовність ОСС МТ (5БО ІО МО: 9). Антитіло або антиген-зв'язувальний
Зо фрагмент можуть містити СОК ділянок МН і МІ. з донорського антитіла. У деяких варіантах здійснення антитіло містить Ес-фрагмент, наприклад, Ес-фрагмент, одержаний з Ідс1, Ідс2,
Іча3, ІдД04 або його варіанту. Ес-фрагмент може являти собою людський Ідс4 або його варіант, наприклад, людський Іде4, що містить мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну ділянку. Антитіло може містити константну ділянку легкого ланцюга людського каппа-ізотопу або її варіанти. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент являє собою 5сЕм або Раб. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент являє собою гуманізоване антитіло або фрагмент або химерне антитіло або фрагмент. Антитіло або фрагмент можуть бути моноклональним антитілом. Антитіло або фрагмент можуть являти собою біспецифічне антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, де одне плече антитіла або фрагмента специфічно зв'язується з епітопом, що містить амінокислотну послідовність ОбОССМТ (5ЕО І
МО: 9). У деяких варіантах здійснення надається імунокон'югат, який містить одне з вказаних вище антитіл або фрагментів, зв'язаних з компонентом, який детектується або терапевтичний. 0018) Як інший аспект надається виділене гуманізоване антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент, які специфічно зв'язуються з епітопом, що містить амінокислотну послідовність
СУТМнНОроО (5ЕО ІЮО МО: 10). Антитіло або фрагмент можуть мати СОК ділянок МН і МІ. з донорського антитіла. У деяких варіантах здійснення антитіло або його фрагмент містять Ес- фрагмент, такий як Ес-фрагмент ІдС1, Ідс2, ІдОЗ, Ідс4 або його варіант. Есфрагмент може являти собою людський /дса і його варіанти, що містять мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну ділянку. Антитіло може містити константну ділянку легкого ланцюга. У деяких варіантах
БО здійснення винаходу антитіло або фрагмент являють собою 5сСЕм або Бар. Надається біспецифічне антитіло або антигензв'язувальний фрагмент, де одне плече антитіла специфічно зв'язується з епітопом, що містить амінокислотну послідовність ЗУТМНОБО (ЗЕО ІЮ МО: 10). У деяких варіантах здійснення імунокон'югат, який містить будь-яке зі згаданих вище антитіл або фрагментів, зв'язаний з компонентом, який детектується або терапевтичний.
І0019| Як ще один аспект наданого винаходу надається спосіб профілактики або лікування таупатії у суб'єкта, що містить введення людині, яка потребує лікування таупатії, одного або більше антитіл або фрагментів, описаних у наданій заявці. Антитіла або антиген-зв'язувальний фрагмент вводять в умовах і у кількості, ефективній для профілактики або лікування таупатії.
Таупатія може являти собою одне з наступного: хворобу Альцгеймера (ХА), прогресуючий бо над'ядерний параліч (ПНП), кортікобазальну дегенерацію (КБД), хворобу Піку (ХПі), групу споріднених розладів під спільною назвою лобово-скронева деменція з паркінсонізмом, пов'язаним з хромосомою 17 (ЛОДП-17), аміотрофічний бічний склероз (АБС), хворобу
Крейтцфельдта-Якоба (ХКЯ), деменцію боксерів (ДБ), синдром Герстмана-
ШтраусслераШейнкера (СГШШ), хвороба тілець Леві, хронічну травматичну енцефалопатію (ХТЕ) і хворобу Хантінгтона.
І0020| Надається спосіб лікування таупатії, що містить введення анти-тау антитіла або фрагмента суб'єктові, який потребує лікування, причому антитіло або антиген-зв'язувальний фрагмент специфічно зв'язуються з білком тау і містять варіабельну ділянку важкого ланцюга (МН) і варіабельну ділянку легкого ланцюга (МІ), причому кожна з ділянок МН і МІ має послідовність, вибрану з амінокислотних послідовностей, приведених на фіг. 1 і 2, і антитіло або фрагмент вводять суб'єктові у дозі від приблизно 0,1 мг/кг до приблизно 250 мг/кг, альтернативно від приблизно 1 мг/кг до приблизно 25 мг/кг У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або фрагмент мають ділянку МІ, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІЮ МО: 1, 2, З і 4 (МК, МК2, МКЗ і МК4|; альтернативно або додатково, антитіло або фрагмент мають ділянку МН, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з ЗЕО ІО МО: 5, 6, 7 і 8 (МНІ1, МН2, МН3З і МНА).
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
00211 На фіг. 1 показані послідовності варіабельних ділянок мишиного антитіла Н.)8.5, а також 4 послідовності гуманізованих варіантів для кожного з важких і легких ланцюгів (4 послідовності МН і 4 послідовності МІ Л/К). На ФІГ. 1 показані послідовності МИМІ. (5ЕО І
МО: 11); МКтТ (ЗЕО ІО МО: 1), МК2 (ЗЕО І МО: 2), МКЗ (ЗЕО ІО МО: 3); МК4А (5ЕО ІО МО: 4);
МиМН (5ЕО ІО МО: 12), МНІ (ЗЕО ІЮ МО: 5); МН2 (ЗЕО ІЮ МО: 6); МНЗ (ЗЕО ІО МО: 7); МН4А (5ЗЕО
ІО МО: 8). (0022) На Фіг. 2А показана послідовність з послідовностей гуманізованих варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга МНІ (ЗЕО ІО МО: 13). На Фіг. 28 показана послідовність з послідовностей гуманізованих варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга УН2 (5ЕО ІЮ
МО: 14). На Фіг. 2С показана послідовність з послідовностей гуманізованих варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга МНЗ (ЗЕО ІО МО: 15). На Фіг. 20 показана послідовність варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга МНА (5ЕО ІЮ МО: 16). Варіабельна ділянка
Зо важкого ланцюга щеплена до константної ділянки важкого ланцюга людського Ід04, що містить мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну ділянку. На Фіг. 2Е показана послідовність з послідовностей гуманізованих варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга МІ 1 (5ЕО 10
МО: 17). На Фіг. 2Е показана послідовність з послідовностей варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга М/2 (ЗЕО ІО МО: 18). На Фіг. 22 показана послідовність з послідовностей варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга МІ З (5ЕО ІО МО: 19). На Фіг. 2Н показана послідовність з послідовностей варіабельної і константної ділянок важкого ланцюга МІ 4 (5ЕО ІЮ
МО: 20). 0023) На фіг. З приведені дані експресії, одержані з двох циклів транзієнтної експресії клітин, трасфікованих полінуклеотидом, який кодує ділянки МН і УК. Результати підсумовані для 13 гуманізованих анти-тау антитіл, утворених на основі різних комбінацій гуманізованих варіабельних ділянок важких і легких ланцюгів, що мають різні спостережувані рівні експресії. (0024) На фіг. 4 приведені дані аналізу активності у форматі ІФА (ЕГІЗА), виконаного для оцінювання здатності заявлених анти-тау антитіл конкурувати з початковим мишиним Н.8.5 (батьківським) антитілом за зв'язування з людським білком тау.
ІО025| На фіг. 5 приведені результати аналізу методом поверхневого плазмонного резонансу (ППР), які визначають кінетику зв'язування шести кращих експресуючих гуманізованих конструкцій з людським тау.
І0026| На фіг. 6 показано зв'язування чотирьох варіантів гуманізованих антитіл з розчинним людським тау у сендвіч варіанті ІФА.
І0027| На фіг. 7А-7Н показано зв'язування гуманізованих і контрольних антитіл у тканині, одержаної від мишей дикого типу (негативний тканинний контроль), мишей РЗО15 (які експресують людський тау, що має мутацію РЗО15, і у яких розвивається асоційована з віком тау патологія), а також людей або з хворобою Альцгеймера, або прогресуючим над'ядерним паралічем (ПНП). Фіг. 7А. Зв'язування химери (позитивний контроль) у мишиній і людській тканині. Фіг. 7В. Зв'язування неспецифічного людського Ід04 (негативний контроль) у мишиній і людській тканині. Фіг. 7С. Зв'язування МНІЛ/К2 у мишиній і людській тканині. Фіг. 70.
Зв'язування МНІ1/Л/КЗ у мишиній і людській тканині. Фіг. 7Е.
Зв'язування МН2/Л/Ка2 у мишиній і людській тканині. Фіг. 7Р.
Зв'язування МН2/УКЗ у мишиній і людській тканині. Фіг. 705. Зв'язування МНЗ/УК2 у мишиній і 60 людській тканині. Фіг. 7Н. Зв'язування МНЗ/Л/КЗ у мишиній і людській тканині.
ІО028| На фіг. 8 показано картування епітопа для мишиного Нуу8.5 антитіла відносно амінокислотної послідовності людського тау. На Фіг. 8 показані послідовності тау людини, макака-резус та миші (З5ЕО ІО МО: 21, 22, 23 відповідно).
І0029| На фіг. 9 у деталях показано картування епітопа у Нув8.5 і С2М-8Е12, що грунтується на пептидах. Картування свідчить про те, що епітоп зв'язування у С2М-8Е12 являє собою 25рОаоамТзо (ЗЕБО ІЮ МО: 9) і відповідає епітопу мишиного батьківського НУ8.5. На Фіг. 9 показані послідовності пептидів РЕР 2875800 - РЕР 2875830 (ЗЕО ІЮ МО: 24 - 54 відповідно).
І0ОЗ301| На фіг. 10 показані результати зв'язування різних антитіл до людського тау або з людським тау, або з тау макакарезуса. Результати показують, що С2М-8Е12 і Н.ув.5 не зв'язуються з тау макака-резуса, при цьому демонструють позитивне зв'язування з людським тау. Ну8.7 викликається як з людським тау, так і з тау макака-резуса.
І0ОЗ31) На фіг. 11 показано зв'язування гуманізованого антитау антитіла з тау у СМР (С5БЕ), одержаної від хворих, що страждають на різні таупатії. Оцінювали зв'язування С2М-8Е12 з тау у зразках СМР, одержаних від пацієнтів з діагнозом різних таупатій.
ОПИС ВИНАХОДУ
0032) Є вагомі експериментальні свідчення і біологічні обгрунтування на користь стратегії, орієнтованої на тау імунотерапію як способу боротьби 3 тау патологією під час нейродегенерації. По-перше, у нормальному стані тау є добре розчинним, нативно розгорнутим, внутрішньоклітинним білком, так що антитіло, що знаходиться поза клітиною, навряд чи зможе вплинути на нормальні функції тау. По-друге, навантаження тау патології корелює з прогресуючою дисфункцією нейронів, втратою синапсів і зниженням функціональних можливостей організму у людини і у моделях таупатії у трансгенних мишей. По-третє, при патологічних станах тау стає неправильно згорнутим і утворює агрегати у вигляді внутрішньонейрональних нейрофібрилярних клубків (НФК), які складаються з патологічних тау- фібрил. Під час людських таупатій ця патологія прогресує від однієї ділянки мозку до іншої у специфічних для захворювання патернах. Експериментальні дані свідчать про те, що агрегати тау можуть поширюватися від клітини до клітини, індукуючи подальшу агрегацію тау і поширення тау патології у головному мозку. Ці дані показують, що агрегати, утворені в одній клітині, вивільняються у позаклітинний простір і можуть сприяти агрегації у сусідніх або
Зо зв'язаних клітинах. Нарешті, у рівні техніки показано, що анти-тау антитіла можуть запобігати або уповільнювати прогрес тау патології у мозку мишей, що несуть мутовану людську форму тау. 0033) "Гуманізоване антитіло" являє собою антитіло або його варіант, похідну, аналог або фрагмент, який був модифікований з метою зменшення ризику появи імунної відповіді у людини на нелюдське антитіло після його введення. Гуманізоване антитіло, як використовується у наданій заявці, імуноспецифічно зв'язується з тим же або схожим епітопом, що і нелюдське антитіло (донорське антитіло). У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить каркасну (ЕК) ділянку, що має по суті амінокислотну послідовність людського антитіла, і визначальну комплементарність ділянку (СОК), яка має по суті амінокислотну послідовність нелюдського антитіла. Термін "по суті" у контексті СОК належить до СОК, що має амінокислотну послідовність щонайменше на 80 95, переважно щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 9595, щонайменше на 9895 або щонайменше на 9995 ідентичну амінокислотній послідовності СОК нелюдського антитіла. Гуманізоване антитіло містить по суті всі з щонайменше одного, а звичайно два варіабельні домени (Раб, Раб, Е(аб)2, Рарс, гм), в яких всі або по суті всі ділянки СОК відповідають ділянкам нелюдського імуноглобуліну (тобто донорського антитіла), і всі або по суті всі з каркасних ділянок є каркасними ділянками консенсусної послідовності людського імуноглобуліну. Переважно, гуманізоване антитіло також містить щонайменше частину константної ділянки (Ес) імуноглобуліну, як правило, людського імуноглобуліну. У наданому винаході надається гуманізоване антитіло, яке містить нову каркасну ділянку. 0034) У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить як легкий ланцюг, так і щонайменше варіабельний домен важкого ланцюга. Антитіло також може включати ділянки
СНІ, шарнірну, СН2, СНЗ і СНА важкого ланцюга. У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований легкий ланцюг. У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований важкий ланцюг. У конкретних варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга і/або гуманізований важкий ланцюг. 0035) Антитіло може бути вибране з будь-якого класу імуноглобулінів, включаючи 19М, 1до, 190, 1д9А їі Т9Е, і будьякого ізотипу, включаючи, без обмеження, Ідс1, Ідс2, ІдсЗ і Ідсаі. 60 Гуманізоване антитіло може містити послідовності з більше ніж одного класу або ізотипу, а для оптимізації бажаних ефекторних функцій можуть бути вибрані конкретні константні ділянки методами, добре відомими в даній галузі техніки.
ІЇ0036| Антитіло або його антиген-зв'язувальний фрагмент вибирають з групи, яка складається 3: зв'язаного дисульфідними зв'язками Ем, моноклонального антитіла, одноланцюгового варіабельного фрагмента (ЗсЕм), химерного антитіла, СОкКприщепленого антитіла, діатіла, гуманізованого антитіла, мультиспецифічного антитіла, Раб (антиген- зв'язувального фрагмента), біспецифічного антитіла, Е(ар)2 (двоплечового, антиген- зв'язувального фрагмента, як правило, одержуваного шляхом розщеплення антитіла пепсином),
ЕРар" (результат розщеплення Е(ар)2 на два антиген-зв'язувальних фрагменти, як правило, за допомогою поділу у м'яких умовах), або Ем (антигензв'язувальний варіабельний фрагмент).
ІЇ0037| Термін "химерне антитіло" належить до антитіл, які містять послідовності варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів одного виду і послідовності константних ділянок іншого виду, наприклад, антитіла, які мають варіабельні ділянки мишиного важкого і легкого ланцюгів, зв'язані з людськими константними ділянками. (0038) "Ділянка УН", "ділянка МІ" або "ділянка МК" належить до варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН), варіабельної ділянки легкого лямбда-ланцюга (МІ) або варіабельної ділянки легкого каппа-ланцюга (УК), відповідно. Ділянки МН і Мі. можуть бути додатково підрозділені на ділянки гіперваріабельності, які називаються визначальними комплементарність ділянками (СОК), які перемежаються більш консервативними ділянками, які називаються каркасними ділянками (ЕК). Кожна МН і Мі складається з трьох СОК і чотирьох ЕК, розташованих у наступному порядку від аміно-кінця до карбокси-кінця: ЕВІТ, СОВА, ЕН2, СОН2, ЕВЗ, СОВЗ, ЕВ.
Імуноглобулінові молекули бувають різного типу (наприклад, 1до, 19Е, 19М, 190, 19А їі 19У), класу (наприклад, Ідс1, Ідс2, ІдСЗ, Ідс4, 1ДдДА1 і 1дАг) або підкласу. 00391 Термін "каркасна ділянка" або "послідовність каркасної ділянки" належить до інших послідовностей варіабельної ділянки мінус СОМ. Оскільки точне визначення послідовності СОМ може бути виконано у рамках різних систем, то зміст послідовності каркасної ділянки, залежить від відповідних різних способів інтерпретації. Шість СОК (СОБ-І1, СОВ-І2 ії СОБ-ІЇ З легкого ланцюга і СОБК-НІ, СОВ-Н2 і СОБ-НЗ важкого ланцюга) також розділяють каркасні ділянки у
Зо легкому ланцюгу і важкому ланцюгу на чотири підділянки (ЕКТ, ЕК2, ЕКЗ і ЕК4) на кожному ланцюгу, причому СОКІ1 розташовується між ЕК1 і ЕК2, СОКО2 між ЕКЗ і ЕКЗ, а СОКЗ між ЕКЗ і
ЕК4. Без позначення конкретних підділянок як ЕК1, ЕК2, ЕКЗ або ЕКА4, каркасна ділянка, згідно з іншими поглядами, являє собою об'єднані ЕК всередині варіабельної ділянки імуноглобулінового ланцюга, яка зустрічається одна у природі. "ЕК" являє собою одну з чотирьох підділянок, а "ЕК5" являє собою дві або більше з чотирьох підділянок, що складають каркасну ділянку. 0040 Багато гуманізованих імуноглобулінів, які були описані раніше (Чопез еї аІ., Метптоєуєп еї аІ,, Кіесптапп еї аї.), містять каркасну ділянку, яка ідентична каркасній ділянці конкретного людського імуноглобулінового ланцюга, акцептор, і три СОК, одержані з нелюдського імуноглобулінового ланцюга. "Гуманізоване анти-тау" антитіло означає антитіло, яке утворене з нелюдського (донорського) антитіла, здатного зв'язуватися з тау, і це зв'язування переноситься на людське антитіло (акцептор).
І0041| Термін "СОК" належить до визначальної комплементарність ділянки всередині варіабельних послідовностей антитіла. У кожній з варіабельних ділянок важкого ланцюга і легкого ланцюга містяться три СОК, які для кожної з варіабельних ділянок позначаються як
СО, СОК2 і СОКЗ. Амінокислотні послідовності цих СОК для ділянок МН і МІ /К заявленого винаходу представлені на фіг. 1. 0042) У даному описі термін одноланцюговий Ем, який називається також одноланцюгове антитіло, належить до рекомбінантних конструктам антитіла, одержаним шляхом виділення зв'язувальних доменів (як важкого, так і легкого ланцюгів) зв'язувального антитіла і забезпечення зшивального фрагмента, який дозволяє зберегти функцію зв'язування. Лінкерний пептид, який вставляється між двома ланцюгами забезпечує стабілізацію варіабельних доменів, не порушуючи правильне збирання і утворюючи активну зв'язувальну ділянку. Цей лінкер може бути довжиною від 5 до 30 амінокислот і звичайно складається з повторів амінокислотної послідовності (ЗЕО ІЮ МО: 55) "ооо 5" (С1у)45ег). По суті, утворюється радикально укорочене антитіло, яке має тільки варіабельний домен, необхідний для зв'язування антигену. 0043) Діатіла, триатіла і тетратіла і варіанти більш високого порядку, як правило, створюють шляхом зміни довжини вказаного вище лінкерного пептиду від нуля до декількох амінокислот.
Такі варіанти є полівалентними, мультиспецифічними антитілами, у яких домени МН і МІ 60 експресуються на поліпептидному ланцюгу з використанням лінкера, який є занадто коротким для спаровування двох доменів на одному і тому ж ланцюгу, тим самим забезпечуючи спаровування доменів з комплементарними доменами іншого ланцюга з утворенням двох антиген-зв'язувальних ділянок (див., наприклад, Ноїїїдег, Р., еї аІ. (1993) Ргос. Маї!. Асай. 5бі.
ИБА 90:6444-6448; РоЦак, В.
У., еї а. (1994) Бігисішиге 2: 1121-1123). Такі зв'язувальні ділянки антитіл відомі у даній галузі (Копіептапп апа Оибеї єадв., Апіїроду Епдіпеегіпд (2001) Зргіпдег-Мепад. Мем/ мок. р. 790 (ІЗВМ 3-540-41354-5)). Як альтернатива, у даній галузі також добре відомо, що полівалентні зв'язувальні варіанти антитіл можуть бути одержані з використанням ланок, що самозбираються, з'єднаних з варіабельним доменом.
І0044| Біспецифічні, триспецифічні або антитіла з множинною специфічністю створюються шляхом об'єднання важких і легких ланцюгів одного антитіла з важкими і легеими ланцюгами одного іншого або декількох інших антитіл. Ці ланцюги можуть бути ковалентно зв'язаними.
Наприклад, термін "біспецифічне антитіло" належить до антитіла повної довжини, яке одержується методом квадрома (див. Міїзівїп апа СиепПо (1983) Маїшге 305(5934):53740), шляхом хімічної кон'югації двох різних моноклональних антитіл (див. 5іаег еї аї. (1985) Маїшиге 314(6012): 628-31) або за допомогою підходу "виступ-у-западину" (Кпор-іпіо-поїє) або за допомогою аналогічних підходів, які дозволяють вносити мутацію у Ес-фрагмент (див. Ноїїдег еї аі. (1993) Ргос. Май). Асад. сі. ОБА 90(14):6444-6448), одержуючи множину різних видів імуноглобулінів, з яких тільки один є функціональним біспецифічним антитілом. З точки зору молекулярної функції, біспецифічне антитіло зв'язує один антиген (або епітоп) на одному з двох зв'язувальних плечах (одна пара НСЛ/ С), а на іншому плечі (інша пара НС/ С) зв'язує інший антиген (або епітоп). Біспецифічне антитіло має два різних антигензв'язувальних плеча (в обох специфічностях і СОК послідовностях) і Є моновалентним для кожного антигену, з яким воно зв'язується. 0045) Декілька мишиних антитіл, здатних зв'язувати тау, одержували методами, відомими у даній галузі. Див. Нойтап еї аї., УМО2014/08404. Далі, ці антитіла піддавали скринінгу для виявлення антитіл зі специфічною біологічною активністю, яка дозволяє розглядати їх як придатні кандидати для терапевтичного застосування. 0046) У одному з аспектів наданий винахід надає композитні гуманізовані антитіла. Метод
Зо створення Композитного Людського Антитіла"М дозволяє одержувати гуманізовані антитіла шляхом ідентифікації потенційних Т-клітинних епітопів у послідовностях варіабельних ділянок (М ділянок) донорського антитіла і створення антитіла або антиген-зв'язувальних фрагментів таким чином, що зв'язування з потенційними Т-клітинними епітопами виключається (див. ЕР2, 388,871). На відміну від інших методів гуманізації, в яких як лакцептори' легкого і важкого ланцюгів для відповідних визначальних комплементарність ділянок (СОК) з донорського антитіла (як правило, мишиного) використовується одна каркасна ділянка людської М ділянки легкого і важкого ланцюгів або каркасна ділянка людської консенсусної послідовності,
Композитні Людські Антитіла"М містять множину сегментів послідовностей ("композити"), одержаних з М ділянок, які не є спорідненими до численних людських антитіл.
І0047| Сегменти послідовностей, одержані з бази даних, неспоріднених людських М ділянок вибирають після визначення амінокислот, які вважаються критичними для зв'язування антигену початковим антитілом. Всі вибрані сегменти послідовностей, одержані з бази даних людських М ділянок, фільтрують на наявність потенційних СО4-- Т-клітинних епітопів за допомогою засобів комп'ютерного моделювання, відомих у даній галузі техніки. Композитні Людські Антитіла"м зберігають афінність і специфічність краще, ніж стандартні гуманізовані антитіла, завдяки близькій відповідності сегментів людської послідовності всім секціям М ділянок початкового антитіла. Композитні Людські Антитіла!Мм збіднені Т-клітинними епітопами, і, отже, їх можна розглядати як гуманізовані і деімунізовані.
Ї0048| У одному з варіантів здійснення людські варіабельні ділянки у людському акцепторному 190 замінюють мишиними варіабельними ділянками з донорського антитіла, одержуючи химерне антитіло. (0049) У іншому варіанті здійснення СОК послідовності у людському акцепторному Тдо замінюють послідовностями мишиних СОК з донорського антитіла, одержуючи гуманізоване антитіло. Для видалення потенційних Т-клітинних епітопів і залишків у каркасних ділянках, які вважаються важливими для збереження зв'язувальних характеристик донорського антитіла, у гуманізоване антитіло вносять додаткові зміни. Фахівцю у даній галузі відомо, що для гуманізації антитіла можуть бути використані інші способи, такі як щеплення СОН.
І0О50) У іншому варіанті здійснення гуманізують нелюдські антитіла, здатні зв'язуватися з людським тау. бо І0051| Антитіла за даним винаходом можуть проявляти змінену афінність зв'язування і/або змінену імуногенність у порівнянні з донорськими антитілами. У деяких варіантах здійснення химерні або гуманізовані антитіла мають по суті таку ж афінність зв'язування з тау епітопом, як донорське антитіло. 00521 У іншому варіанті здійснення одноланцюговий варіабельний фрагмент, заснований на гуманізованому антитілі, описаному у наданій заявці, наприклад, гуманізованому анти-тау антитілі, може зв'язуватися у вигляді мономера.
Ї0053| У іншому варіанті здійснення, використовуючи фрагменти антитіла, може бути досягнене полівалентне зв'язування за допомогою діатіл, триатіл, тетратіл і інших варіантів більш високого порядку, які можуть бути одержані.
ІЇ0054| У іншому варіанті здійснення важкий і легкий ланцюги гуманізованого анти-тау антитіла можуть бути об'єднані з важким і легеим ланцюгами інших антитіл з утворенням біспецифічних або інших додаткових мультиспецифічних антитіл.
І00О55) Далі, гуманізовані антитіла за винаходом, наприклад, гуманізоване анти-тау антитіло також може бути у вигляді фрагмента антитіла, наприклад, Бар, мономера Раб", димера Е(ар)2 або повної молекули імуноглобуліну.
І0056| У одному варіанті здійснення наданий винахід надає виділений пептид, який складається з амінокислотної послідовності ФСУ (5ЕО ІО МО: 9). Цей пептид являє собою коровий епітоп для описаних у даній заявці антитіл, таких як С2М-8Е12 або Н.)8.5. У одному з аспектів наданого винаходу пептид включає Х(о-вроссамХ(о8) (ЗЕО ІО МО: 56), де Х являє собою будь-яку амінокислоту. Попри те, що у ілюстративному прикладі показані 15 міри (див.
Фіг. 11), фахівцю у даній галузі техніки буде очевидно, що наданий винахід включає пептиди різної довжини. Відповідно, заявлені антитіла або фрагменти можуть специфічно зв'язуватися з епітопом, який містить амінокислотну послідовність бОССМТ (5ЕО ІО МО: 9). Епітоп може бути лінійним або являти собою конформаційні епітопи і може містити від приблизно б до 22 амінокислот. 0057) У інших варіантах здійснення заявлені способи належать до лікування таупатії за допомогою антитіла або антиген-зв'язувального фрагмента, де антитіло або фрагмент вводять у визанченій дозі суб'єкту з таупатією. 0058) Придатні дози антитіла або антиген-зв'язувального фрагмента можуть бути виражені
Зо у мг лікарського засобу на кг ваги тіла суб'єкта. Придатні дози антитіла або його антигензв'язувального фрагмента включають щонайменше приблизно 0,1 мг/кг, як альтернатива від приблизно 0,2 мг/кг, як альтернатива приблизно 0,25 мг/кг, як альтернатива приблизно 0,3 мг/кг, як альтернатива приблизно 0,5 мг/кг, як альтернатива приблизно 0,75 мг/кг, як альтернатива приблизно 1 мг/кг, як альтернатива приблизно 1,25 мг/кг, як альтернатива приблизно 1,5 мг/кг, як альтернатива приблизно 2 мг/кг, як альтернатива приблизно 5 мг/кг, як альтернатива приблизно 7,5 мг/кг, як альтернатива приблизно 10 мг/кг, як альтернатива приблизно 12,5 мг/кг, як альтернатива приблизно 15 мг/кг, як альтернатива приблизно 20 мг/кг, як альтернатива приблизно 25 мг/кг, як альтернатива приблизно 30 мг/кг, як альтернатива приблизно 50 мг/кг, як альтернатива приблизно 100 мг/кг. Придатні дози антитіла або його антиген-зв'язувального фрагмента можуть становити не більше ніж приблизно 250 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 200 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 175 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 150 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 125 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 100 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 75 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 50 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 25 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 20 мг/кг, як альтернатива не більше ніж приблизно 15 мг/кг. Будь-які з вказаних вище мінімальних і макисмальних значень можуть бути об'єднані для визначення діапазону (наприклад, від приблизно 0,1 мг/кг до приблизно 250 мг/кг) за умови, що мінімальне значення діапазону менше, ніж його максимальне значення.
Ї0ОО59| Придатні дози антитіла або антиген-зв'язувального фрагмента можуть бути виражені у мг лікарського засобу, який вводиться суб'єкту. Придатні дози гуманізованого антитіла або антиген-зв'язувального фрагмента включають щонайменше приблизно 2,5 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 5 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 10 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 15 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 20 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 25 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 30 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 40 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 50 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 60 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 70 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 80 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 90 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 100 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 125 мг, як бо альтернатива щонайменше приблизно 150 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 175 мг,
як альтернатива щонайменше приблизно 200 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 250 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 100 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 125 мг, як альтернатива щонайменше приблизно 300 мг. Придатні дози антитіла або антиген- зв'язувального фрагмента можуть становити не більше ніж приблизно 2500 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 2000 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 1500 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 1000 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 750 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 500 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 400 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 300 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 275 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 250 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 200 мг, як альтернатива не більше ніж приблизно 150 мг. Будь-які зі згаданих вище мінімальних і максимальних значень можуть бути об'єднані для визначення діапазону (наприклад, від приблизно 5 мг до приблизно 2500 мг) за умови, що мінімальне значення діапазону менше, ніж його максимальне значення. 0060) С2М-8Е12 являє собою гуманізоване рекомбінантне Ідс4 антитіло до людського тау. 904 остов у С2М-8Е12 містить мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну ділянку, яка зводить до мінімуму утворення напів-антитіл. С2М-8Е12 зв'язується з амінокислотами 25-30 у людському тау (БОССМТ)БЗЕО ІО МО: 9), послідовність якого присутня у всіх сплайсингових варіантах людського тау, а також з амінокінцевими фрагментами тау. Антитіло зв'язується як з мономерним тау, так і агрегованим тау у тканині головного мозку людини, який страждає на таупатію. С2М-8Е12 є дуже стабільним з незначним ступенем агрегації або деградації. Загальні фізичні властивості С2М-8Е12 представлені у таблиці 1.
ЖХабнимця 3 фрунннтуннтессессессессоя вання ин ї СЕ шими мх 1 М ЩЕ БІДУ УжовЧчаКнМО вОлВОЮУ
Е товзЗинність | 130 мг/м
Ї0ОО61| Попри те, що винахід описаний з посиланням на приклади, що додаються, очевидно, що можливі різні модифікації і зміни у даному винаході без відходу від суті або обсягу наданого винаходу. Додатки до наданої заявки є ілюстративними прикладами даного винаходу і включені у надану заявку у всій своїй повноті як посилання.
Приклад 1
І0062| Цей приклад описує дії з гуманізації мишиного антитау антитіла НУ8.5 і одержані
Зо результати. В результаті цих дій були одержані чотири гуманізовані варіабельні ділянки легкого ланцюга (МІ. або УК) і чотири гуманізовані варіабельні ділянки важкого ланцюга (МН). 0063) Гуманізація, як правило, належить до методів зменшення імовірності потенційної імуногенності, пов'язаної з використанням нелюдського моноклонального антитіла для лікування хронічного захворювання. Два способи, що звичайно використовуються для зменшення імовірності імуногенності, являють собою щеплення СОР. і деімунізацію. Мишине антитіло НО8.5 деімунізували методом, розробленим компанією Апійоре.
І0064| Щеплення СОКЕ є одним з підходів у рамках білкової інженерії. Говорячи коротко, він заснований як на розумінні загальної архітектури антитіла, так і на її схожості у різних видів.
Мишині і людські антитіла мають схожу спільну/консервативну архітектуру. Структурно антитіло підрозділяється на константні і варіабельні ділянки. Варіабельна ділянка може бути додатково розділена на так звані каркасні ділянки і ділянки СОК. Як можна бачити, варіабельна ділянка складається з чотирьох каркасних (ЕРм/К) і трьеох СОК ділянок. У варіабельних доменах легких і важких ланцюгів розташування каркасних і СОК ділянок однакове.
ЇОО65| У разі щеплення СОК, нелюдські константні ділянки заміняють людськими константними ділянками, утворюючи так зване химерне антитіло. Крім того, мишині ділянки
СОК переносять у людські каркасні ділянки; одержаний варіабельний домен являє собою суміш людських каркасних ділянок і мишиних СОК. Як останній етап, переносять декілька залишків з мишиних каркасних ділянок, які імовірно є важливими для збереження афінності (не показані).
ІЇ0О6б| Деімунізація: Метод Композитного Людського Антитіла/!М компанії Апійоре називається методом деїмунізації, який використовується у поєднанні з ідентифікацією як СОК ділянок, так і ключових амінокислот у межах рамки зчитування, які імовірно впливають на зв'язування. Одержані повністю гуманізовані антитіла зберігають афінність зв'язування і специфічність початкового моноклонального антитіла, і до того ж позбавлені СО4кТ-клітинних епітопів, що дозволяє уникати небажаної імуногенності у організмі людини.
І0067| Композитні Людські Антитіла!"М утворюють шляхом об'єднання множини сегментів послідовностей людського антитіла, одержаних з Бази даних компанії Апійоре, яка містить 100000 послідовностей варіабельних ділянок неспоріднених повністю людських антитіл.
Початкове моделювання послідовностей варіабельних ділянок антитіла НуУ8в.5 використовується для визначення амінокислот, які є критичними для зв'язування антитіла і які потім використовуються для обмеження вибору сегментів людських послідовностей. Після цього аналізують окремі сегменти послідовностей і стики між сусідніми сегментами за допомогою двох запатентованих методів комп'ютерного моделювання (іТоре"мМ ії ТСЕЮОМ) для вибору послідовностей повністю людських варіабельних ділянок, які позбавлені СО4- Т-клітинних епітопів. ДНК, кодуючу варіабельні ділянки для Композитних Людських Антитіл, синтезують, клонують у експресуючому векторі з людськими константними ділянками і трансфікують у клітини ссавця для одержання гуманізованих антитіл. (0068) Гуманізація НУ8.5: Структурні моделі М ділянок антитау-412 мишиного антитіла Н.)8.5 одержували за допомогою швейцарського РОВ і аналізували для визначення важливих "незамінних" амінокислот у М ділянках, які, імовірно, є суттєвими для збереження зв'язувальних властивостей антитіла. Аналіз виявив ряд незамінних залишків у каркасній ділянці як кандидати для включення у повністю гуманізовані М ділянки. Сегменти послідовностей людських варіабельних ділянок вибирали так, щоб вони включали один або більше з цих залишків.
І0069| Попередній набір сегментів людських послідовностей, які можуть бути використані для утворення повністю гуманізованих антитіл НОв8.5, вибирали і аналізували методом іТоретМ для аналізу зв'язування пептидів з алелями людського МНС класу 11 методом комп'ютерного моделювання (Регїту еї аї., 2008), а також за допомогою ТСЕО М (бази цих Т-клітинних епітопів)
Т-клітинних епітопів відомих антитіл з аналогічними послідовностями (Вгузоп еї аї., 2010).
Відкидали сегменти послідовностей, які були ідентифіковані як значущі нелюдські в'яжучі гаметичного типу з людським МНС класу 11, або які мали значущі попадання відносно ТСЕЮ М,
Комбінації сегментів послідовностей також аналізували для гарантії того, що стики між
Зо сегментами не містять потенційні Тклітинні епітопи. Потім вибрані сегменти об'єднували, одержуючи послідовності М ділянок легкого і важкого ланцюгів для синтезу. Для Н.в.5 розробили і сконструювали чотири ланцюги УН і чотири ланцюги УК.
І00701| На фіг. 1 показані послідовності варіабельних ділянок мишиного антитіла НУв.5, а також 4 послідовності гуманізованих варіантів для кожного з важких і легких ланцюгів (4 послідовності МН і 4 послідовності МІ Л/К). Амінокислотні послідовності цих чотирьох ланцюгів
МН ї чотирьох ланцюгів УК приведені на фіг. 1. Послідовності СОК, визначені по Кабату та ін., виділені червоним кольором (підкреслені). Зміни у каркасних ділянках у порівнянні з початковою мишиного послідовністю виділені синім кольором і жирним шрифтом. 0071) У таблиці В-1 підсумовані дані про кількість змін у каркасних ділянках, введених у кожний варіант варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів.
Таслице й-ї ооберіайеньний 00 Кількість замін уЛЕН | каркапній пілянці ї нини у ни по
НО ОО КО, : чи і З шш: нн ни ши: шшш пи пи шини нини нин нин 00721 На фіг. 2 показані послідовності гуманізованих варіабельної і константної ділянок для кожного з важких і легких ланцюгів (4 послідовності МН і 4 послідовності МІ Л/К). Варіабельну ділянку важкого ланцюга прищеплюють до константної ділянки важкого ланцюга людського
Ід904, що містить мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну ділянку. Варіабельну ділянку легкого ланцюга прищеплюють до константної ділянки людського легкого каппа-ланцюга. У цій таблиці також приведені теоретично обчислена ізоелектрична точка (Р11) і молекулярна вага (Мм/, МУМ).
І0073)| На фіг. З показані дані експресії, одержані з 2 циклів транзієнтної експресії клітин, трасфікованих полінуклеотидами, що кодують ділянки МН і УК. Результати по 13 гуманізованим анти-тау антитілам підсумовані. Різні комбінації важких і легких ланцюгів дають помітно різні рівні експресії. Що спостерігалися. У 1-му циклі всі варіанти ділянок МН і МІ. об'єднували один з одним (показані результати тільки для 13 з 16, протестованих). У другому циклі було протестовано б кращих експресуючих комбінацій, що спостерігалися в 1 циклі. Експресія показана в мкг антитіла, виміряна на 1 мл культурального середовища. Більш високі рівні експресії є переважними, оскільки це свідчить про те, що антитіло має правильне збирання, секретується, як і очікувалося, є нетоксичним і в цілому стабільним.
І0074| На фіг. 4 наведені дані з аналізу активності. Для одержання додаткової характеристики гуманізованих варіантів анти-тау антитіла, за допомогою аналізу активності оцінювали здатність антитіл конкурувати з початковим мишиним Н/8.5 (батьківським антитілом) за зв'язування з людським тау у форматі методу ІФА. Формат аналіз включає покриття пластини
ЕГІЗБА людським тау, після чого забезпечують можливість тестованому антитілу, а також біотинильованому Н.8.5, конкурувати за зв'язування з тау. Аналіз дозволяє вимірювати відносну величину ІС5О для кожного гуманізованого варіанту антитіла. Значення ІС50О нормують відносно значення для химерного НуУ8б.5 для порівняння результатів, одержаних для різних пластин. Ці дані показують, що процес гуманізації не привів до значних змін у здатності гуманізованих антитіл зв'язувати людський тау.
Приклад 2
ІЇ0075| У цьому дослідженні описано використання Віасоге Т200 для вимірювання і порівняння характеристик зв'язування під час взаємодії шести повністю гуманізованих (МНІ/У/УК2, МНІ/Л/КЗ, МнН2ЛУК2, МнН2г/ЛУКЗ, МНЗ/ЛУК? ї МНЗ/Л/КЗ, описаних вище у прикладі 1) моноклональних антитіл і одного химерного моноклонального антитіла, одержаного на основі
Нов.5, з рекомбінантним людським білком тау-412. Мета даного дослідження полягала у використанні приладу Віасоге Т200 на ефекті поверхневого плазмонного резонансу для
Зо визначення з високим розрізненням кінетичних характеристик взаємодії між тау-412 і сім'ю вказаними ІттАб.
Ї0076| Антитіла зберігали при температурі 49С. Тау-412 зберігали при -209С згідно з інструкцією виробника. Після відновлення, розчин тау-412 зберігали на льоду і використовували впродовж 24 годин. Аліквоти відновленого тау-412 заморожували впродовж 30 хвилин після відновлення і зберігали при -2096.
І0077| Під час роботи приладу Віасоге використовували програмне забезпечення Віасоге
Т200 емаІнайноп зоїмаге м1.0 (ррзаїа, Змедеп). Усі матеріали купували у компанії Віасоге, якщо не вказане інше: 0078) Всі експерименти розробляли за допомогою експертного програмного забезпечення
Віасоге. Використовували наступні методи компанії Віасоге: іммобілізація; кінетика/афінність; і десорбція і очищення.
І0079| Перед прогоном будь-яких зразків, а також в ході дослідження, проводили перевірку системи (Набір 2 для профілактичного обслуговування Віасоге). Всі системи тестували (насос для реагентів, рефрактометр, ін'єкції, селектори шуму, мікшування і буфери) для забезпечення гарантії того, що прилад функціонує згідно з критеріями, встановленими виробником.
І0080| Після встановлення чіпу СМ5/білок А запускали систему і потім нормували, використовуючи нормалізуючий розчин ВІА (Набір 2 для профілактичного обслуговування
Віасоге). Всі зразки проганяли при 252С, при цьому штатив зі зразками тримали у інкубаторі при
590. Чіп додавали у систему з НВ5-ЕР, що використовується як робочий буфер.
І0081| Зразки тАБ зберігали у тому вигляді, як вони були одержані і розбавляли до 100 нМ для всіх прогонів у методі іммобілізації (захоплення). Антиген тау-412 відновлювали з сухого порошку, використовуючи воду МіШ-С), до кінцевої концентрації 1 мг/мл; у прогонах для визначення кінетичних характеристик використовували додаткові розведення. Масу і молекулярну вагу тау-412, використовуваного під час розрахунку концентрації, одержували від виробника реагенту (100 мкг/флакон і 42,9 кДа). Білок-носій до цього розчину не додавався.
Флакони з антигеном відновлювали тільки за необхідністю і до моменту їх використання зберігали у вигляді порошку при температурі -202С. Після відновлення, розчин антигену тримали на льоду не більше 24 годин.
І0082| Для цього дослідження був вибраний аналіз захоплення білком А. Ефективність поверхні з білюом А перевершувала як таку поверхні з анти-людським білком А/б, білком с і білком ЇЇ, які також були протестовані. Чіп з білюм А готували шляхом іммобілізації, використовуючи стандартну хімічну реакцію зв'язування аміну. Іммобілізацію виконували при концентрації білка 5 мкг/мл у 10 мМ ацетатному буфері (рН 4,5) до одержання цільової відповіді величиною 500 КИ на сенсорному чіпі 5 серії СМ5 (Віасоге). 0083) Остаточні рівні відповіді для всіх чіпів з білком А, позначені Ес5 показані в таблиці -1.
Тайлер ее ши нини сини нини з ишннИ осот тт тт уд тт тт Ас сннкАкА нкс : Ж Е Віплск А і ТОВ, З ;
А Білок А : 04,
І0084| Для кінетичних експериментів, кількість іммобілізованого/захопленого ліганду має бути обмеженою, щоб уникнути ефектів масопереносу на поверхні чіпу. Для кінетичних експериментів поверхня в ідеалі повинна мати максимальний рівень зв'язування аналіту (Ктах), який дорівнює 50-100 КИ. Таким чином, кількість ліганду для іммобілізації розраховують рівнянням 1: аналіт - зн янхувальна здатність
АУУ аналітх . вВ-- - Ь ш2хЗ 5 с іммобіліюований ліганд (МО. Ят
ЧЕ ліганду 0085) Приймаючи середній ММУ для аналіту тау-412, що дорівнює 42,9 кДа (одержано від
Зо виробника реагентів), для ліганду, що дорівнює 150 кДа (розраховане значення для антитіл) (тАБ), Атах, що дорівнює 100 КИ, ії стехіометрію (Зт), що дорівнює 1, для захоплення всіх тестованих антитіл встановлювали цільове значення, що дорівнює 300 КО. Рівні захоплення, одержані у дослідженні, варіювали від х280 до 400 КИ. Для другого і третього прогонів регулювали кількість антитіла, яке ін'єктується, щоб наблизитися до бажаного рівня захоплення, зЗО0в. (0086) Неспецифічне зв'язування (НСЗ) може бути обумовлене або аналітом, або домішками у аналіті що вступають у взаємодію або з лігандом (неспецифічне і таке, що важко виявляється), білюом захоплення, або з поверхнею сенсорного чіпу. При аналізі відповіді на порожній поверхні Ес1 після 300 секундної ін'єкції відносно високої концентрації (40 нм) тау-412,
НОСЗ не спостерігалося ні з карбоксидекстрановою поверхнею, ні з поверхнею з білком захоплення А. При концентрації тау-412 5100 нм спостерігали значуще НСЗ з карбоксидекстрановою поверхнею чіпу; проте для подальшого кінетичного аналізу концентрації у межах цього діапазону не були затребувані.
І0087| Здійснювали визначення умов відновлення, при цьому оптимальні умови для відновлення химерних і МН1//К2 антитіл на поверхні з білююом А виявилися наступними: три ін'єкції по 240 секунд 10 мМ гліцин-НСІ буфера (рН 1,7) з подальшою одиничною 300-секундною ін'єкцією 4М МасІі», всі, що вводяться зі швидкістю 40 мкл/хв. Після останньої ін'єкції для відновлення слідував етап 600 секундного очікування для стабілізації поверхні перед початком наступного циклу зв'язування. (0088) Пошук буфера не проводився, оскільки початкові тести показали, що вибраний буфер "НВ5-ЕР' забезпечував відтворювану систему, придатну для кінетичного аналізу. (0089) Ефективність поверхні аналізували за допомогою повторних контрольних ін'єкцій 2,5
НМ тау-412 на початку, в середині і у кінці кінетичного прогону. Стабільне зв'язування спостерігали впродовж всього кінетичного прогону, приділяючи особливу увагу питанню придатності системи для кінетичного аналізу.
І0090| Обмеження масопереносу відбувається за наявності важливого компонента, який асоціюється зі швидкістю перенесення аналіту на поверхню і з поверхні чіпу. Там, де масоперенос є значним, результати кінетичного аналізу можуть бути неточними. Зниження густини іммобілізованого ліганду або збільшення швидкості потоку може знизити обмеження масопереносу. Для даного дослідження була вибрана швидкість потоку, яка дорівнює 40 мкл/хв, виходячи з попереднього досвіду використання поверхонь з низькою густиною і антигенів зі схожими значеннями Муу.
І0091| Контрольний експеримент по реакції зв'язування використовували для оцінювання взаємодії ліганд-аналіт для перевірки на наявність відхилень від моделі зв'язування 1-к-1.
Аналіт ін'єктували на поверхню впродовж різних періодів часу (часу контакту), і аналізували швидкість дисоціації для визначення, чи змінюється вона залежно від часу контакту. Якщо така залежність спостерігається, це вказує на наявність другої події взаємодії після первинної події зв'язування, яка призводить до стабілізації комплексу на поверхні.
І0092| Виходячи з попереднього експерименту, в якому використовувалися формати для аналізу захоплення, спостережуваної стехіометрії зв'язування, що дорівнює 1,5, і того факту, що модель 1-к-ї4 могла б з визначеною долею достовірності відповідати кінетичним даним, контроль реакцій зв'язування не проводили, у зв'язку з відсутністю додаткового доказу на підтримку більш складних кінетичних взаємодій.
Зо І0093| Модель зв'язування 1-к-1 використовували для апроксимації одержаних кінетичних даних (рівняння 2). Через відмінності у кількості захопленого антитіла, параметр Ктах встановлювали локально, на відміну від глобального аналізу, для кожного кінетичного аналізу зв'язування антитіла. - ке г І
Кі я--
ІЇ0094| Характеристика антитіла: Одержані характеристики і контрольні експерименти, проведені для вивчення поверхні з білюом захоплення А підтвердили, що вона є придатною системою для визначення кінетичних значень взаємодій з тау-412. Стехіометрію зв'язування оцінювали за допомогою ін'єкції насиченого розчину тау-412 (1000 нМ) при 277 КО для захопленого МН1//К2 на досліджуваній поверхні з білком А. Дві послідовні ін'єкції 1000 нМ тау- 412, судячи з усього, забезпечували у результаті насичене зв'язування при 122 КО. Це дало 15095 стехіометрію зв'язування, що перевищує очікувану для зв'язування однієї молекули антитіла з однією молекулою тау-412. Причини цього можуть полягати у зв'язуванні антитіла з двома молекулами тау-412 або у олігомеризації тау-412 на поверхні чіпу. 0095) Кінетичні дані одержували при швидкості потоку 40 мкл/хв для мінімізації будь-яких потенційних ефектів масопереносу. У кінетичному прогоні було запрограмовано по два повтори холостої проби (без антигену) і аналіта з концентрацією 2,5 нМ для перевірки стабільності як поверхні, так і аналіту під час кінетичних циклів. Для початкових кінетичних прогонів, виконували 2-кратні розведення тау-412 в межах від 40 нМ до 0,156 нМ. Для кінетичного аналізу і подальших прогонів вибирали діапазон концентрацій аналіту від 20 нМ до 0,625 нМ. Цей діапазон покривав множину концентрацій аналіту вище і нижче зареєстрованого Ко.
І0096| Фазу асоціації контролювали впродовж 500 секунд, щоб забезпечити можливість досягнення стійкого стану аналіту при деяких більш високих концентраціях. Для одержання достатнього зниження сигналу (210 95) під час фази дисоціації кінетичного циклу, дисоціацію виміряли впродовж 1200 секунд. Як вже обговорювалося у розділі 5, після кожної стадії відновлення, забезпечували можливість для стабілізації є впродовж 600 секунд. Сигнал з контрольного каналу Ес1 віднімали з сигналів з Есе, ЕсЗ і Есі.
І0097| Кінетичні параметри для взаємодії тау-412 з сім'ю тАБ, виміряні з використанням системи з білком захоплення А на Віасоге Т200, приведені у Таблиці Е-2. Для коригування відмінностей у рівні захоплення антитіла між кожним циклом зв'язування, використовували локальний параметр Ктах у моделі зв'язування 1-к-1. Кінетичний аналіз виконували у трьох незалежних прогонах, використовуючи свіжі препарати тау-412 і антитіла. У прогоні 1 і прогонах 23 використовували різні флакони антигену тау-412; тому зареєстровані помилки, що асоціюються з середньою відповіддю, імовірно, пов'язані зі змінами при приготуванні аналіту і відмінностями у налаштуваннях аналізу і прогону. Від прогону 1 до прогонів 2-3, підбирали кількість антитіла, що ін'єктується, так, щоб наблизитися до цільових рівнів захоплення, 300 КИ.
Для прогону 1 химерне антитіло проганяли три рази, і аналіз всіх трьох наборів даних показаний у таблиці Е-2. 96 СМ для Ко, одержаного з цих трьох наборів даних, становив 4,3 95, вказуючи на те, що результати знаходяться в межах варіативності аналізу, що розглядається.
Таблиця Б-2
Ка(1/М8) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 50(Ко) икс 11
Мні/Ук2 2,80х105 | 4,40х102 | блл1х107 | 2,80х107 рр
ЩІ
Мні/ук2 3,25х105 | 1,00х102 | б,З2х10и | 8,20х107 вро /З ши що Ка(1/М5) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 5Д(Ко) ШІ
ПМ
Середнє 3,02х109 3,19х104 6б21х109 | 1,48х109 2,06 0,17 значення п п я ПО ПОЛЯ ПОЛЯ ПОЛОН ПОН КОН КОХ
Ка(1/М8) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 50(Ко) икс 11
МНІ/УКЗ 2,80х105 | 910х102 | вб,2бх107 | 8,50х107 колиш лив
ЩІ
УНТУКЗ 2,95х105 | 4,40х102 | 5,72х107 | 2,70х107 рр де-10 т2 ши Ка(1/М5) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 5Д(Ко) шо
ПМ
Середнє 2,87х105 | 1,07х102 | 5,99х104 | 3,76х109 2.09 0,21 значення п п я ПО ПОЛЯ ПОЛЯ ПОЛОН ПОН КОН КОХ
Ка(1/М8) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 50(Ко) икс 11
Мнг/укг 2,62х105 | 4,30х102 | 6б,28х104 | 2,80х107 в
ЩІ 12
Мнг/укг 2,84х105 | 4,10х102 | 5,87х107 | 2,60х107 р рев т2 14 ши Ка(1/М5) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 5Д(Ко) шо
ПМ
Середнє 2,73х105 1,59Хх104 6,08х107 | 2,94х105 2,23 0,24 значення п п я ПО ПОЛЯ ПОЛЯ ПОЛОН ПОН НО КОХ
Ка(1/М5) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | З0(Ко) икс 11
Мнг/УКЗ 2,68х105 | 8,80х102 | 6,53х104 | 9,00х107 рр л 16
Унг/УКЗ 2,92х105 | 4,40х102 | 5,33х107 | 2,60х107 во т2 18 ши Ка(1/М5) ЗЕ(Ка) Ка(1/8) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | 50(Ко) шо
ПМ значення пед п о ПО ПОЛЯ ПОН КОНЯ НОЯ ПОН НО
Ка(1/М5) ЗЕ(Ка) Ка(1/5) ЗЕ(Ка) | Ко(пм) | З0(Ко) икс 11
УнЗ/Ук2 2,62х105 | 3,20х102 | 5.4вх104 | 2,20х107 рр л 20
УНК 2,9ох105 | 83,70х107 | 485х107 | 22охто7 | 167 | | 071 | де.
1 ле|11171711171111171111 11122 ші ек рев ев
ПМ ше ре реа ет значення не п ПНЯ ПОЛЯ ПОЛЯ ПОЛОН КОНЯ КОНЯ КОНЯ КОХ икс 11
Во БА Пі Б Бі Бош Піни ННЯ ПЕНІ
ЩІ 24 се дея вся то 2 26 ші вк рве ев
ПМ ше ре ери и значення не п ПНЯ ПОЛЯ ПОЛЯ ПОЛОН КОНЯ КОНЯ КОНЯ КОХ икс 11
Посів Вісь Пі іі Бососій Піо НИ ПІЗНЯ ЧА л 29 ее оре ря ие сят тю 2 31 я БА сії Баш ій Воші Піни НИ ПЕН Й /З 33 нини ВА Бл Пл ПИ Пл Бад ПЗ ННЯ НАННЯ
ПМ ше! Ге етряєтвєть ЕТ значення
І0098| Значення Сі показують, наскільки добре дані асоціації і дисоціації відповідають запропонованій моделі зв'язування 1-к-4ї: чим нижче значення, тим краща відповідність.
Асоційоване значення ЗЕ для констант швидкостей зображують невизначеність, пов'язану з підгонкою даних до описаної моделі і не відображають загальну невизначеність для істинних кінетичних значень. Дані по середній відповіді являють собою середні кінетичні значення і асоційовані 50 для 2 або З незалежних аналізів. 00991 Згідно з середніми значеннями КО, приведеними у таблиці Е-2, антитіла можуть бути ранжирувані за афінністю таким чином:
УНЗ/УК2г» УНЗ//КЗ»химерне» МУН2Л/КЗ» МНТ1/Л/КЗ» МНІ1/ЛУ/К2»МН2ЛІК2г. ую СМ асоційований з середніми кінетичними параметрами у діапазоні від 10-20 9б, і, таким чином, цілком імовірно, що всі антитіла мають практично однакову афінність, і що відмінності є виключно результатом похибки аналізу. В цілому, відмінності у зв'язуванні між антитілами можуть бути пов'язані з похибкою аналізу, і передбачається, що значення КО гуманізованих антитіл не відрізняються значущо від таких для химерного антитіла.
ІЇ00100| Показані порівняння кінетичних значень, визначених за допомогою аналізу захоплення білком А на Віасоге Т200 для взаємодії цих антитіл з тау-412,. Виявилось, що химерне антитіло має профіль зв'язування, який значущо відрізняється від профілю гуманізованих антитіл, незважаючи на їх схожість за афінністю. Графік залежності Ка від Ка, показує відносні кінетичні значення взаємодії тестованих антитіл з тау-412, визначені за допомогою аналізу захоплення білком А на Віасоге 1200. Пунктирні діагоналі представляють лінії ізоафінності. Слід зазначити, що осі відображають різні діапазони даних з метою покращення чіткості відображення гуманізованих антитіл на графіку.
ЇОТО1| На фіг. 5 приведені результати аналізу методом поверхневого плазмонного резонансу (ППР), який визначає кінетику зв'язування шести кращих експресуючих гуманізованих конструкцій з людським білком тау. Тестоване антитіло іммобілізують на чіпі ППР, і потім чіп омивають потоком людського тау з різними концентраціями. Для кожного з варіантів обчислюють швидкості асоціації і дисоціації, а також афінність на підставі виміряних подій зв'язування. Химерний варіант теж тестували.
Приклад З
І01021| На фіг. 6 показано зв'язування чотирьох варіантів гуманізованих антитіл з розчинним людським тау у сендвіч варіанті ІФА. Методи аналізу, які засновані на пасивній адсорбції, можуть потенційно привести до недостовірних результатів зв'язування. Для визначення вказаної проблеми був використаний метод, заснований на застосуванні розчинів для вимірювання активності зв'язування варіантів гуманізованих антитіл. У форматі цього аналізу антиген (людський тау) захоплюється моноклональним антитілом до людського тау, який розпізнає епітоп, відмінний від епітопа, що розпізнається Н.)8.5. Подальше зв'язування гуманізованих анти-тау антитіл з захопленим людським тау залежить від концентрації антигену, тоді як контролі Ідс4 ізотопів взагалі не показують зв'язування. Цей аналіз показує, що зв'язування гуманізованих анти-тау антитіл з людським тау специфічний, і що антитіла зв'язуються з розчинним людським тау.
Приклад 4
ІОТОЗІ На фіг. 7 (А-7Н показано зв'язування гуманізованих і контрольних антитіл у тканинах мишей дикого типу (негативний тканинний контроль), мишей РЗО15 (які експресують людський тау, що має мутацію РЗО15, і у яких розвивається асоційована з віком тау патологія), а також людей або з хворобою Альцгеймера, або з Прогресуючим над'ядерним паралічем (ПНП). Метою даного дослідження було підтвердження збереження здатності гуманізованих антитіл зв'язуватися з агрегованим тау у тканині у порівнянні з химерною формою Н.8.5. На знімках приведені репрезентативні зображення фарбування мишиного і людського мозку з різними варіантами гуманізованого антитіла Ну8.5. Тестували мишей РЗО15 у віці 4 і 9 місяців, і обидві часові точки показують наявність патологічних агрегатів тау, причому 9 місячні миші мають більше патологій тау, ніж 4-місячні миші. У разі забарвлювання людського мозку, вивчали зразок тканини мозку, одержаний від одного пацієнта з ПНП, і зразок тканини мозку, одержаний від одного пацієнта з ХА. На ФІГ. 7А показано забарвлювання химерного НО8б.5 для мишиної тканини і людської тканини з ХА. На ФІГ. 7В показано забарвлювання для антитіла негативного контролю (неспецифічний людський Ідс4). На ФІГ. 7С - 7Н показано забарвлювання для шести гуманізованих антитіл. Всі гуманізовані варіанти мишиного антитіла Ну8В.5 зв'язуються з агрегатами тау, виявленими у головному мозку мишей РЗО15, а також агрегатами тау, виявленими у тканинах головного мозку пацієнтів з діагнозом або ХА, або ПНП.
Приклад 5
ІО104| На фіг. 8 показані епітопи Н.)8.5 у людському тау. Епітоп картован за допомогою дріжджового дисплея. Для здійснення цього методу, використовуючи дріжджі, експресували різні пептиди, які охоплюють послідовність людського тау. Зв'язування антитіла Н.8.5. у
Зо дріжджах виміряли у культурі методом імунофлуоресценції. Спостерігали зв'язування у дріжджах, що експресують варіанти тау, які включали перші 34 амінокислоти, при цьому зв'язування було відсутнє, якщо дріжджі експресували тільки перші 32 амінокислоти тау. Це служить підтвердженням того, що епітоп знаходиться у межах перших 34 амінокислот. Окрім цього, НУ8.5 зв'язується якщо пептид включає амінокислоти 27-135, але зв'язування відсутнє, якщо пептид охоплює амінокислоти 30-135. Це служить підтвердженням того, що епітоп включає амінокислоти, наступні за амінокислотою 27. Виходячи з цих даних, епітоп міститься у межах послідовності 2734 людського тау (ЗУИТМНОБО)(ЗЕО ІО МО: 10). На Фіг. 8 також показані послідовності тау макака-резуса і миші, і червоним кольором відмічені амінокислотні зміни відносно людського тау.
ІО105І На фіг. 9 більш детально показано засноване на пептидах картування епітопа у Н.)8.5 і С2М-8Е2. Утворювали бібліотеку лінійних пептидів довжиною 15 амінокислот, що охоплюють всю послідовність людського тау (1МАК, 412 амінокислоти). Додатково також продукували подвійні аланінові варіанти цих пептидів, у яких амінокислоти 10 і 11 замінювали аланіном. Для бібліотеки подвійних аланінових пептидів, будьякі, що зустрічаються у природі аланіни у положенні 10 або 11 замінювали на гліцин. Всі пептиди наносили на пептидну матрицю, потім вносили зразки Ну8.5 або С2М-8Е12, і виміряли зв'язування. Епітоп(и) зв'язування тау обох антитіл були достовірно картовані за допомогою цих пептидних матриць. Епітоп зв'язування для
С2М8Е12 являє собою 250Ос(аМІзо (ЗЕБО ІО МО: 9) і співпадає з епітопом мишиного батьківського Н.)8.5. Зв'язування НуУ8.5 і С2М-8Е12 з пептидами тау сильно зменшується, коли амінокислоти О, 0, М або Т у епітопі замінені аланіном, що говорить про їх ключову роль у зв'язуванні антитіла. Проте, коли два центральні гліцини у епітопі були замінені аланіном, зв'язування антитіл з пептидами тау не зменшилося істотним чином (РЕР 2875811). Імовірно, цей факт не свідчить про те, що ці амінокислоти не є важливими для зв'язування, швидше це пов'язано з консервативною природою заміщень між аланіном і гліцином. Епітоп картували, використовуючи ці детально описані методи, які трохи відрізняються від картування за допомогою дріжджового дисплея (фіг. 8А). Ця відмінність пов'язана з відмінністю у аналізах зв'язування: у системі дріжджового дисплея використовуються пептиди більшого розміру. Метод використовування матриці пептидів довжиною 15 амінокислот за своїми результатами перевершує метод дріжджового дисплея. 60 Приклад 6
ІО1О6Ї На фіг. 10 показані результати зв'язування різних антитіл до людського тау або з людським тау, або з тау макакарезуса. Тестували мишині антитіла НО8.5 і НОб8в.7 до людського тау, нарівні з гуманізованим варіантом МНІ1//К2 (також згадуваним як С2М-8Е12). На Фіг.8 показано, що заявлена послідовність епітопа зв'язування ЗУТМ(НЛ)ІОВО (5ЕО ІО МО: 57) відрізняється у людського тау і тау макака-резуса однією амінокислотою у положенні 32. На Фіг. 8 показано, що заявлена послідовність епітопа зв'язування ОО(С/Е)ОУТ (5ЕБЕО ІЮО МО: 58) відрізняється у людського тау і тау макака-резуса однією амінокислотою у положенні 27. Для визначення, чи впливають ці відмінності у амінокислотах між двома видами тау на зв'язувальну здатність антитіл. Ну8.5/С2М-8Е12, проводили наступний експеримент. Зв'язування С2М-8Е12,
Ноув.5 (мишиний попередник С2М-8Е12) і НОбвФ.7 (мишине антитіло до людського тау, яке зв'язується з епітопом тау, в якому амінокислотна послідовність людини і макака-резуса ідентичні на 100 95) виміряли для людського тау і тау макака-резуса шляхом нанесення на 96 лункові планшети ЕГІ5А або людського тау, або тау макака-резуса при різних концентраціях.
Результати показали, що С2М-8Е12 їі Нув8.5 не зв'язуються з тау макака-резуса, але показують позитивне зв'язування з людським тау. Як очікувалося, НУв8.7 зв'язується як з людським тау, так і з тау макака-резуса.
Приклад 7
ІЇО107| На фіг. 11 показано зв'язування гуманізованого антитау антитіла з тау у СМР, одержаної від людей з різними таупатіями. Оцінювали зв'язування С2М-8Е12 з тау у зразках
СМР, одержаних від пацієнтів з діагнозом різних таупатій, а також від пацієнтів того ж віку і молодих/здорових пацієнтів, використаних як контроль. Для демонстрації зв'язування С2М-8Е12 з тау у людській СМР, одержаної від пацієнтів з ХА, КБД, ЛОД або ПНП, а також від суб'єктів такого ж віку і молодих/дорослих суб'єктів, використаних як контроль, застосовували метод сендвіч-ІФА. С2М8Е12 використовували як антитіла покриття для захоплення тау у зразках СМР.
Біотинильовані мишині моноклональні антитіла НУб.7 до тау використовували як антитіла- маркери. Лунки покривали контрольним людським /д04, що виконує у експерименті роль негативного контролю. Спостережувані сигнали з лунок з С2М-8Е12 сильно відрізнялися від сигналів з лунок, покритих контрольним /д(34, що говорить про специфічне зв'язування С2М- 8Е12 з тау у зразках людського СМР. Використовуючи стандартну криву (рекомбінантний тау),
Зо можна одержати кількісну інформацію про концентрацію тау у цих зразках СМР.
Приклад 8 0108) Це дослідження являє собою рандомізоване, подвійне сліпе дослідження фази 1 з використанням плацебо як контроль і одноразової зростаючої дози (5АЮ), призначене для проведення у десяти (10) центрах. Воно розроблено для оцінювання безпеки, переносимості, імуногенності і фармакокінетики (ФК) введення одноразової дози С2М-8Е12, а також для визначення МПД для використання у майбутніх повторних дослідженнях.
ЇО109| Основна мета даного дослідження полягає у визначенні безпеки, переносимості, імуногенності і максимально переносимої дози (МПД) одноразової дози С2М-8Е12 для суб'єктів з
ПНП. Оцінювання безпеки включає фізичне і неврологічне обстеження, лабораторні дослідження по клінічній безпеці і у аналізі імуногенності, побічних ефектів, життєво важливих ознак і супутніх лікарських препаратів.
І0110| Другорядною метою є визначення: системних фармакокінетичних параметрів при прийомі одноразової дози, які включають: максимальну концентрацію у плазмі після одиничної інфузії площа під кривою (АОС) після одиничної інфузії; час досягнення максимальної концентрації після інфузії; період напіввиведення С2М-8Е12 у кінцевій фазі; розподіл С2М-8Е12 у спинномозковій рідині (СМР); і взаємодія з біологічною мішенню шляхом вимірювання рівнів розчинного тау у крові і СМР, а також оцінювання наявності комплексів С2гМ-8Е12-тау.
ІЇО111| Дане дослідження призначено для реєстрації 32 суб'єктів з ПНП (24 у терапевтичній групі і 8 у групі плацебо). Суб'єкти розподіляються за 8 блоками по 4 пацієнти у кожному, де у кожному блоці випадковим чином відбирають одного пацієнта, якому вводиться плацебо, а у З оцінюється МІД. У разі прояву ДЛТ (дозолімітувальної токсичності) можуть бути залучені додаткові суб'єкти. Проте у процесі підвищення дози жодна з доз не має бути пропущена.
І0112| Метод неперервного переоцінювання (сопіїпцаі! геаззез5тепі теїйпод, СКМ) для підвищення дози використовується у тому вигляді, як описано у розділі статистичної моделі.
Для визначення імовірності прояву ДЛТ використовується логістична модель. 0113) С2М-8Е12 доставляється у клініку у вигляді замороженої рідини у окремих бутлях при номінальній концентрації 20 мг/мл. Кожний бутель містить 300 мг С2М-8Е12 і має зберігатися у замороженому стані при температурі від -709С до -8096. (0114) Пацієнти піддаються відбору для оцінювання відповідності критеріям включення і 60 виключення. Відбір також включає аналіз крові, СМР і МРТ. В день введення дози (день 0)
внутрішньовенно вводиться одноразова доза С2М-8Е12, і впродовж 24 годин після введення дози пацієнти знаходяться під ретельним наглядом у медичному закладі, який включає аналіз зразків крові на безпеку і оцінювання ФК параметрів. Впродовж наступних 3-х днів, а також одного і двох тижнів після інфузії, проводиться додаткове клінічне обстеження і відбір зразків крові. Через 4 дні після інфузії для додаткового оцінювання безпеки виконується МРІ і здійснюється відбір зразків СМР. Обстеження пацієнтів триває через кожні 28 днів, протягом не менше двох місяців з дня введення дози (наприклад, до дня 56). Після чого проводяться щомісячні вимірювання до появи будь--ого з наступних подій: (1) С2М-8Е12 більше не виявляється у крові; (11) спонсор визначає час завершення дослідження; (111) суб'єкт приймає рішення про дострокове припинення участі у дослідженні. 0115) Мета дослідження фази 1 полягає у визначенні МПД згідно з оцінюванням безпеки, включаючи клінічні лабораторні тести, обстеження фізичного і неврологічного стану, а також прояв несприятливих подій, для визначення рекомендованого діапазону доз для оцінювання у подальшому дослідженні на фазі 2/МАЮ. Випадковий розподіл суб'єктів і включення групи, що одержує плацебо, дозволяє уникнути помилки випадкової вибірки і збільшує імовірність того, що відомі і невідомі чинники ризику будуть розподілені між терапевтичними групами рівномірно.
ІО116) Комітет з моніторингу безпеки даних (КМБД) розглядає дані по безпеці про міру їх надходження. Комітет з моніторингу безпеки може складатися як мінімум з двох незалежних лікарів, одного біостатиста, одного лікаря з досвідом роботи з ПНП і одного представника від спонсора, який не має права голосу. Якщо у будь-якого суб'єкта, що бере участь у дослідженнях, проявиться СНЯ (серйозне небажане явище), вивчаються всі доступні дані з безпеки по даному суб'єкту з метою визначення, чи відповідає ця подія визначенню ДЛТ, і чи була встановлена МПД. Якщо МПД не була встановлена, і пацієнт продовжує брати участь у дослідженні, КМБД надає рекомендації спонсорові про наявність необхідності у додаткових діях або необхідності зміни протоколу для забезпечення у подальшому безпеки пацієнтів. Спонсор приймає остаточне рішення про будь-які зміни або про передчасне закінчення дослідження.
ІО117| Дозолімітувальна токсичність визначається таким чином: (ї) будь-яке небажане явище (НЯ) ступеня З або вище згідно з критерієм м2 загальної токсичності у ревматології, відносно якої є обгрунтована імовірність того, що ця подія викликана С2М-8Е12; (ії) будь-яке НЯ ступеня 2
Зо при системноорганному класі порушень нервової системи і психіки згідно з критерієм загальної токсичності національного інституту раку США для НЯ ма4.0. (СТСАЕ), яке вважається клінічно значущим, і відносно якого є обгрунтована імовірність того, що ця подія викликана С2гМ-8Е12; або (ії) будь-яка токсичність, пов'язана з інфузією (наприклад, алергічні реакції/гіперчутливість), що виникла у процесі інфузії СгМ-8Е12 або впродовж 24 годин після завершення інфузії, яку не можна оперативно усунути шляхом зменшення швидкості інфузії ійабо за допомогою підтримувальної терапії. 0118) Підвищення дози: Розподіл суб'єктів за когортами дози, що вводиться, здійснюється згідно з наступними правилами: (1) у кожному блоці з 4 пацієнтів одному пацієнтові призначають плацебо; (2) для щонайменше 3 пацієнтів потрібна повна інформація про токсичність для рівня дози перед її підвищенням до більш високого рівня; (3) максимальне збільшення при підвищенні з однієї когорти у наступну становить 1 рівень дози; і (4) щонайменше 12 суб'єктів (З блоки) повинні одержувати дозу на рівні дози, що дорівнює МПД. (0119) У кожній когорті з 4 пацієнтів, пацієнтам послідовно вводять дози з мінімальним інтервалом щонайменше у два дні між введеннями дози наступним суб'єктам з тим, щоб забезпечити додатковий захід безпеки.
ІО120| Першій когорті присвоюється аї. Статистична модель оновлюється після одержання повної інформації про токсичність по кожній когорті. Згідно з правилом, одна додаткова когорта може бути введена до одержання повної інформації по всім суб'єктам самої останньої когорти.
Неповні дані по токсичності допускаються не більше ніж для 3-х пацієнтів до реєстрації і рандомізації наступної когорти.
ІО121| Кожній наступній когорті призначається доза, яка оцінюється на можливість її віднесення до МПД згідно з приведеним вище визначенням. У разі повільного приросту модель може бути оновлена, після реєстрації кожного пацієнта і кожного наступного пацієнта, що одержав поточну оцінену МПД.
ІО0122)| Досліджувана популяція: Це дослідження проводиться за участю чоловіків і жінок з прогресуючим над'ядерним паралічем (ПНП) у віці від 50 до 85 років.
ІО123| Критерії включення: Для включення у дослідження кожний суб'єкт має проявити бажання в участі і бути здатним на надання згоди, прийнятої на основі одержаної інформації. До початку протоколу лікування вона буде служити підтвердженням того, що кожний суб'єкт бо здатний дати згоду з протоколом лікування. Суб'єкти запрошуються для участі у дослідженні, і після підписання форми про згоду, прийняту на основі одержаної інформації, проводиться процедура відбору. Якщо суб'єкти не відповідають критеріям включення або відповідають будь- якому з критеріїв виключення, вони не зараховуються для відбіркового оцінювання або у графік лікування.
І0124| Кожний суб'єкт має відповідати наступним критеріям для зарахування як учасника у цьому дослідженні: чоловік або жінка; вік від 50 до 85 років; відповідність можливим або імовірним критеріям МІМО5-5РОР, модифікованим для ММІРР5 і АПО8-231 клінічних випробувань, у тому числі: (4) над'ядерний параліч зору або зниження швидкості саккад, (ії) нестійка хода або падіння впродовж перших З років прояву симптомів; МРТ головного мозку при скринінгу відповідає ПНІ (х4 мікрогеморрагій, відсутність великих інсультів або важкого захворювання білої речовини мозку); бали за рейтинговою шкалою ПНП від 20 до 50; здатність, перебуваючи у початковому стані, надати згоду, прийняту на основі одержаної інформації, на участь або, у разі нездатності дати згоду, прийняту на основі одержаної інформації, можливість одержання підтвердження на ділянці і наявність авторизованого медичного представника, який може дати таку згоду; наявність партнера за дослідженням, який наглядає за пацієнтом щонайменше 5 годин на тиждень, який може супроводжувати пацієнта під час відвідувань і згоден на участь у дослідженні; можливе одержання інших супутніх не-біологічних методів лікування, але доза має бути стабільною протягом щонайменше 30 днів до реєстрації; в змозі зробити 5 кроків з наданням мінімальної допомоги (стабілізація однієї руки або використання тростини/ходунків); стабільний прийом лікарських препаратів при паркінсонізмі щонайменше впродовж 2 місяців до відбору, включаючи леводоп, агоністи дофаміну, разагалін, інгібітори
КОМТ, амантадин, мемантин або інгібітори холіноестерази; згода на проведення максимум 3-х поперекових пункцій впродовж 4-18 місяців, б поперекових пункцій, якщо суб'єкт бере участь у дослідженні в обох фазах: 1/5АО і 2/МАЮ; одержання від суб'єкта підписаної і датованої письмової згоди на основі одержаної інформації; згода на використання методів контрацепції, вказаних у протоколі (див. нижче).
ІО125| Суб'єкти, які відповідають будь-якому з наступних критеріїв виключаються з дослідження: ознаки прогресуючого неврологічного розладу, які краще відповідають критеріям для типів неврологічних розладів, відмінних від ПНП, у тому числі: (а) відповідають критеріям
Зо імовірної хвороби Альцгеймера або (Б) відповідають діагностичним показникам деменції при хворобі Паркінсона з тільцями Леві, множинної системної атрофії (МСА) або аміотрофічного бічного склерозу (АБС); будь-які злоякісні новоутворення (окрім неметастатичної базально- клітинної карциноми шкіри) впродовж 5 років скринінгу; клінічно значуща ниркова або печінкова дисфункція при скринінгу згідно з професійним оцінюванням дослідника; клінічно значуще порушення серцево-судинної системи впродовж трьох місяців до початку дослідження, згідно з професійним оцінюванням дослідника; клінічно значущі аномальні результати гематологічних або хімічних лабораторних тестів під час скринінгу згідно з професійним оцінюванням дослідника; проходження будь-якої попередньої терапії моноклональними антитілами з будь- якої причини впродовж останніх 90 днів або введення будь-якого іншого досліджуваного агента у попередні 30 днів або 5 періодів напіврозпаду (залежно від того, що довше). Попереднє введення С2М-8Е12 не належить до цих критеріїв виключення і, отже, не впливає на відхилення суб'єкта від участі у дослідженні на фазі 2/УМАЮ; одержання на даний момент будь-якої іншої біологічної або імуномодулювальної терапії; тривалість захворювання більше 5 років з моменту появи симптомів; об'єм середнього мозку "8600 мм3 на знімку МРТ; проживання у закладах з кваліфікованим медичним доглядом або доглядом за недоумкуватими пацієнтами; наявність чітких показників захворювання рухових нейронів при обстеженні, згідно з БАС патологією (описано у носіїв СООКЕ72 з наявністю КБС); діагностика інших значущих неспоріднених неврологічних або психічних розладів, які можна віднести до когнітивних порушень (наприклад, активна форма епілепсії, інсульт, судинна деменція), згідно з професійним оцінюванням дослідника; запущена глибока депресія при початковому оцінюванні згідно з клінічним оцінюванням і результатами у СО5; випадки інших глибоких психічних розладів; будь-які раніше наявні випадки суїцидальних спроб; важкі когнітивні порушення, оцінені за шкалою ММ5Е («17), які, на думку дослідника, виключають збір результатів вимірювання; нездатність брати участь у протоколі оцінювання; значущі, аномальні значення, одержані в цілому зі зразків крові, взятих під час відбору, які будть викликати загрозу безпеці або заважати відповідній інтерпретації даних дослідження; поточна або така, що нещодавно мала місце (впродовж чотирьох тижнів до відбору) клінічно значуща бактеріальна, грибкова або мікробактеріальна інфекція; нездатність переносити МРТ сканування під час скринінгу або будь-яке інше протипоказання до МРТ; будь- яке протипоказання або нездатність переносити спинномозкову пункцію при відборі, у тому бо числі введення антикоагулянтних препаратів, таких як варфарин. Щоденне введення 81 мг аспірину або аналогічних антикоагулянтів може бути дозволено за умови, що доза є стабільною впродовж 30 днів до скринінгу; суб'єкти, які, на думку дослідника, не можуть або навряд чи зможуть дотримуватися графіку дозування або оцінювання дослідження; участь у іншому інтервенційному клінічному випробуванні впродовж 3-х місяців відбору; лікування за допомогою іншого досліджуваного препарату впродовж 30 днів відбору; будь-які, що існували раніше ОТСЕ тривалістю більше 450 мс; суб'єкт є працівником або членом сім'ї спонсора або співробітником місця проведення дослідження або членом його сім'ї.
ІО126| Суб'єкти мають дати згоду на застосування (і/або застосування їх партнером) прийнятних методів контрацепції, починаючи з початкового візиту впродовж всього дослідження і впродовж 56 днів після останньої дози досліджуваного препарату у останній період лікування.
Прийнятні методи контрацепції перераховані нижче.
І0127| Досліджуваний лікарський засіб: На фазі 1/5А0 дослідження використовується С2М- 8Е12 з ОР лота Мо 1018775 - матеріал з банку клітин для дослідження (КСВ), що використовується нині під індексом 119404 для розширеного доступу (Ехрапдей Ассез5 ІМО).
Віо знаходиться у 25 мМ ацетатному буфері (рН 5,5) з концентрацією 20 мг/мл Плацебо:
Плацебо готується аналогічно С2М-8Е12, але не містить лікарський засіб, що вивчається, як активна речовина.
ІЇ0128| Обгрунтування дози: Максимальну рекомендовану початкову дозу (МРСОД) розраховують згідно з посібником управління по контролю за харчовими продуктами і лікарськими препаратами (ЕСА) для промислового "Оцінювання безпечної стартової дози у клінічних випробуваннях для терапії у дорослих здорових добровольців". Згідно з посібником, для досліджуваних терапевтичних білків з молекулярною масою »100000 дальтон, які вводяться внутрішньовенно, МРОД слід оцінювати шляхом нормалізації по всіх видах, а не шляхом масштабування площі поверхні тіла. Виходячи з рівня, при якому не спостерігається ефект (МОЕЇ), що дорівнює 250 мг/кг у токсикологічному дослідженні на мишах, доза до 25 мг/кг обмежена стандартним коефіцієнтом безпеки 10.
ІО129| Стартова доза для дослідження на фазі 1/5А0О становить 2,5 мг/кг для в/в введення.
Ця стартова доза у 10 разів нижча, ніж максимально дозволена стартова доза згідно з 4тижневим токсикологічним дослідженням на мишах, і у 6 разів нижча, ніж поточна максимальна
Зо доза (15 мг/кг), що вводиться згідно з протоколом лікування людини у режимі розширеного доступу і застосування препарату з міркувань гуманності відносно С2М-8Е12 (див. брошуру дослідника). 0130) Виходячи з попередніх ФК параметрів плазми, одержаних у одиничному дослідженні пацієнтів, можна оцінити відсоток тау у СМР, який зв'язується з С2М-8Е12 через різні проміжки часу після введення 2,5 мг/кг дози С2М-8Е12. Для проведення такого обчислення передбачається, що концентрація гуманізованих антитіл у СМР становить 0,195 від їх концентрації у плазмі крові, і що концентрація тау у СМР становить 500 пг/мл. Виходячи з цього припущення, доза, що дорівнює 2,5 мг/кг буде давати у перший місяць концентрацію С2М-8Е12 у
СМР у 3-40 разів вище за молярну концентрацію тау у СМР. Враховуючи Ко для С2М8Е12, при дозі, що дорівнює 2,5 мг/кг, 3-2695 тау у СМР буде зв'язано з антитілом. Аналогічне моделювання здійснювали на основі ФК даних, одержаних під час введення пацієнтам найвищої дози на сьогоднішній день (15 мг/кг) і оцінили, що середній рівень зв'язування тау впродовж 28 днів становить приблизно 50 95 (максимальне зв'язування - 72 95, а мінімальне - 40 95). Імовірно, у головному мозку присутня надмірна кількість позаклітинного тау, не доступного через СМР компартмент, але з яким антитіло здатне зв'язуватися. Отже, підвищення дози здійснюють до 25 мг/кг для оцінювання безпеки дози, яка може забезпечити значущу взаємодію з мішенню у головному мозку.
ІО131| Якщо не схвалено дослідником, впродовж періоду лікування суб'єкт не повинен одержувати: ніяке інше біологічне або імуномодулювальне лікування; ніякий інший агент, що проходить клінічне випробування; варфарин; будь-який антикоагулянт (окрім щоденного прийому 81 мг аспірину) у стані, при якому тимчасове припинення лікування до відбору проб
СМР може виявитися небезпечним для здоров'я. 0132) Згода на основі одержаної інформації: Після одержання згоди на основі одержаної інформації кожний суб'єкт проходить відбір з метою підтвердження його відповідності критеріям включення і відсутності будь-яких протипоказань для одержання лікування згідноз цим протоколом. Зокрема, кожний суб'єкт оцінюється при відборі шляхом проведення клінічного і неврологічного обстеження для підтвердження діагнозу. Короткий відбір за когнітивними здібностями проводиться за допомогою шкали бального оцінювання симптомів ПНП і шкали депресії шляхом опитування для одержання визначеного медичного і лікарського анамнезу. бо Якщо суб'єкт задовольняє всім критеріям включення, при цьому показання, що відповідають критеріям виключення, відсутні, проводиться подальше дослідження. Візит по відбору призначається за 28-7 днів до початкового/день 0 візиту. 0133) Оцінювання фармакокінетичних параметрів: Для аналізу ФК параметрів відбирають зразки у різні моменти часу, як зазначено нижче у таблиці 3.
Таблиця З ! введек ! хв говинх | Бгтдип гадия години тоди ! кКкодимн | годрин цнів Ж : : | і (У У разі дострокового припинення, остаточний зразок крові одержують під час візиту за достроковим припиненням для остаточного оцінювання ФК параметрів; (Ж) в межах 15 хвилин після закінчення інфузії; (Ф) після 28-го дня зразки для аналізу ФК відбирають кожні 28 днів до появи будь-якої з наступних подій: (ї) припинення дослідження; (ії) відсутність рівнів С2М-8Е12, що детектуються у крові.
І0134| Оцінювання небажаних реакцій (НР): З метою контролю НЯ проводиться наступне оцінювання: життєво важливих показників (артеріальний тиск, пульс/частота серцевих скорочень, температура, частота дихання, ЗРО); повне неврологічне обстеження, у тому числі оцінювання когнітивних показників (тести на оцінювання психічного статусу); лабораторні тести: (1) гематологічний аналіз крові: загальний аналіз крові (СВС) з підрахуванням формених елементів, гематокриту і гемоглобіну (НБ), кількість тромбоцитів; (2) біохімічний аналіз крові: електроліти сироватки крові, глюкоза, сечова кислота, азот сечовини крові (АСК), креатинін, загальний білок, альбумін, білірубін (загальний, прямий і непрямий), лужна фосфатаза, лактатдегідрогеназу (ЛДГ), ферменти печінки (АСТ, АЛТ і ГГ), залізо, аналіз холестерину, КФК, амілаза, ліпаза і; (3) аналіз параметрів коагуляції: протромбіновий час (ПЧ), МНВ ії частковий тромбопластиновий час (ЧТУ); аналіз сечі, включаючи вимірювання вмісту НЬ, МВС і білка; ЕКГ - неперервний моніторинг або ЕКГ у 12 відведеннях; одержання МРТ зображення мозку, у тому числі методом інверсія-відновлення з послабленням сигналу від рідини (РІГ АЇК); відбір зразків
СМР з підрахуванням кількості клітин крові (М/ВС і КВС) і вимірювання рівня загального білка і глюкози. 0135) Визначення С2М-8Е12 у людській плазмі і СМР: Для вимірювання концентрації С2М- 8Е12 у плазмі крові і СМР були розроблені сендвіч-ІФА методи аналізу. Ці тести перевіряли на достовірність на різних планшетах у лабораторіях Чарльз Рівер (Спагієх КІТмег) (див. таблицю
Коо) 4).
Таблиця 4
Оцінювання достовірності способу імуноферментного аналізу (ІФА, 20056682 ЕНПЗА (ензим-зв'язаного імуносорбентного аналізу)) для визначення
Завершено С2М-8Е12 у людській плазмі
КгЕДТА)
Оцінювання достовірності способу імуноферментного аналізу (ІФА, 20057088 ЕГПІЗА (ензим-зв'язаного імуносорбентного аналізу)) для визначення
Завершено що У роентного. У) д
С2М4-8Е12 у людській спинномозковій рідині (0136) Визначення анти-С2М-8Е12 антитіл у людській плазмі крові: Зразки крові відбирають для оцінювання розвитку антитіл до лікарського препарату (АВА) до введення стартової дози і на 14-ий і 28-ий дні після введення препарату. Фінальне вимірювання виконують при завершенні. Для вимірювання наявності антитіл проти С2М-8Е12 у плазмі (АБА) розробили сендвіч-ІФА, заснований на ЕХЛ. Цей аналіз для виявлення реакції на АБА у людській плазмі крові перевіряли на достовірність у лабораторіях Чарльз Рівер (Спагіє5 К1мег) (таблиця 5).
Таблиця 5 20056686 Оцінювання достовірності кількісного електрохемілюмінісцентного
Завершено аналізу (ЕХЛ) для виявлення анти-С2М-8Е12 антитіл у людській плазмі
КгЕДТА)
ІО137| Клінічний і функціональний аналіз включають колумбійську шкалу оцінювання тяжкості суїциду (Соіотбіа-Зцісіде бемегйу Каїїпуд ЗсаІє): Як параметр безпеки, використовують колумбійську шкалу оцінювання тяжкості суїциду (С-З5К5) для виявлення суїцидальних схильностей (Розпег еї аїЇ.,, 2011). Геріатрична шкала депресії: За аналогією з С-55855, геріатричну шкалу депресії (505) використовують для оцінювання загального настрою у ході дослідження. Геріатрична шкала депресії (505) є аналізом на основі анкети-самозвіту з 30 пунктів, що використовується для виявлення депресії у літніх людей (Уезамаде еї аї., 1983).
Шкала бального оцінювання симптомів ПНП: Шкалу бального оцінювання симптомів ПНП (РЗ5РЕК5) використовують при відборі на включення, а також спочатку і у кінці дослідження для оцінювання змін за шкалою протягом часу (сСоЇре апа ОптапеїгісКіапа, 2007). Загальне клінічне враження: Шкали оцінювання зміни загального клінічного враження (СсіІС) і тяжкості захворювання (СОЇ) використовують для оцінювання тяжкості симптомів. Шкала повсякденної активності Шваба і Інгланда: Шкалу повсякденної активності Шваба і Інгланда (ЗЕАОІ) використовують як засіб оцінювання здатності суб'єктів виконувати повсякденну роботу (5спмар апа Еподіапа 1969). Клінічне оцінювання деменції за допомогою суми боксируваних балів при лобово-скроневій лобарній дегенерації: Клінічне оцінювання деменції за допомогою суми боксируваних балів при лобово-скроневій лобарній дегенерації (СОК-5В-ЕТІ Ю) являє собою версію тесту СОБК-58 на оцінювання когнітивних здібностей, яке включає оцінювання поведінки, манер, особи і мови (Кпортап еї аї., 2008). Коротке дослідження психічного стану: Коротке дослідження психічного стану (ММОЕ) являє собою об'єктивне опитування з 30 пунктів для вимірювання когнітивних порушень (Роївіеїп, ЕоіІ5(еіп, апа МеНид, 1975).
ІО138| Спинномозкова рідина: СМР відбирається з проміжку 3-4 шляхом люмбальної пункції. Якщо відбір зразка СМР виявився невдалим, то на розсуд місцевого медперсоналу можна провести люмбальну пункцію під контролем КТ/флюороскопії згідно з місцевим протоколом. Дані лабораторного аналізу на безпеку на основі зразків СМР аналізують на місці на відповідному клінічному майданчику після кожної люмбальної пункції/збору СМР. Ці заходи включають: підрахування клітин (М/ВС і ВС), визначення вмісту загального білка і глюкози. Інші
Зо вимірювання параметрів СМР (наприклад, концентрація С2М-8Е12, взаємодія з мішенню і інші пошукові біомаркери) аналізують у відповідним чином оснащеній лабораторії.
І0139| Одержання зображення: На початку дослідження суб'єкт також піддається процедурі
МРТ з одержанням структурного, ЕГАЇІК, дифузно-зваженого за чутливістю зображення. Аналіз зображення, одержаного після введення препарату здійснюється згідно з графіком заходів.
І0140| Дослідницький фармакогеномний аналіз: Зразок крові відбирається для виділення
ДНК на початку дослідження. Всі індивідууми піддаються розширеному аналізу послідовності
МАР Тгаплотипу для визначення статусу носія НІ(А-О) і Н2. ДНК виділяють зі зразків і вводять у визначене фармакогеномне ядро для цього дослідження. 01411 Суб'єкти беруть участь у даному дослідженні до появи будь-якої з наступних подій: (і) вони завершили свою участь і пройшли весь графік заходів; (ії) вони або дослідник вирішив що їх участь має бути завершена; або (ії) у прийнятого суб'єкта спостерігається будь-яка ДЛТ або будь-яке СНЯ, відносно якого дослідник приймає рішення про припинення подальшої участі у цьому дослідженні і виключає з участі у дослідженні на наступній 2/УМАЮ фазі. Крім того, на розсуд дослідника, суб'єкти, які перестають задовольняти будь-якому критерію включення або відповідають одному або декільком критеріям виключення в ході дослідження, можуть бути визначені як невідповідні для продовження участі у дослідженні або у подальшій участі у дослідженні на 2/МАО фазі.
СПИСОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» С2М ОІчІАСМО5ТІС5, ЦС «120» ГУМАНІЗОВАНІ АНТИ-ТАУ АНТИТІЛА «130» АВУ1221500 «1560» рРСТ/052015/938002 «151» 2015-86-26 «150» 62/1708,836 «151» 2915-06-02 «150» 62/280,983 «151» 2014-11-17 «150» 62/818,436 «151» 2614-06-27 «1605 58 «170» РабепсІп мегзіоп 3.5 «210» 1 «211» 111 «212» Білок «213» Ното 5аріепье «авба» 1
А5р І1е Маї Се Тис б1п 5ег Рго Ар бег Гей А1а Уа1 5ег Геи 01у 1 5 19 15 бін АгЕ Аза Тиб Пе 5ег Су5 АгЕ А1а 5ег о біп бек Уа1ї бег Тиг бег 29 25 зе
АгЕ Туг 5ег Туг І1е Ніх Тер Туг біп біп Гуз Рго с01у біп Рго Рго 4о 45
Гу5 Геу Гей Іе (уз Туг А1а бег Азп Ге 016 бег 01у Ма1 Рго 5ег 58 55 6о
АгЕ Ре б5ег й01у бег 01у 5ег біу Тиг Абр Ре Тиг о Те доп І1е Ні 65 79 75 ва
Рго Ге) бі бід 010 А5р Ре Аїа Тиг о Тує Туг Суб нНіз Ні 5ег Тер 85 90 95 б1и ч11е Рго Ге Те Рпе сіу біп б1іу Тйг Гуз Гей бій ІТе Гу 166 105 1189 «210» 2 «211» 111 «212» Білок «213» Ното 5арієп5 «180» 2
Азр Т1е Ма! Гей Тиг о біп 5ег Рго Азр б5ег Ге А1а Маї 5ег Геч с01у 1 5 10 15 сій Аг Аа Тс Т1е бег Су Агро А1а бег біп 5ег Маї бек Тиг 5ег
АгЕ Туг бег Туг І1е Ні Тер Туг біп б1п (Гуз Рго б1у б1іп Рго Рго 4е 45
Гуз Сец ей І1е Гуз Туг АТа б5ег Азп Ге бі б5ег б1у Уаї Рго бег 6о
АгЕ Рпе б5ег б1у б5ег о1у бег біу Те Азр Рпе Тс іеп А5п І1е Ніз 65 70 75 ве
Рго Гей й10 Рго й1и Азр Рпе А!а Тіг Туг Туг Су Ні Ні 5ег Тер 85 за 95 бій І1е Рго Геу Те Рире біу біп біу ТПг Муз Геи бі І1е Гу 106 185 1106 «210» З «211» 111 «212» Білок «213» Ното 5аріепзо «4ва» з
Ар ТІІе Маї Ге ТНг біп 5ег Рго Азр бег еп АТІа Маї 5ег і еци сІу 1 5 10 15 01 Аг А1а Трг о І1е бек Суз Агр А1Та бек б1п 5ег Ма1 бег ТЕг 5ег 29 25 30
Агя Туг 5ег Туг І1е Ні5 Тер Туг біп б1іп Гуз Рго 01у біп Рго Рго 35 40 45 уз Сей Семи І1е Гуз Туг А1Т1а бег Аб5п Гец бі 5ег біу Маі1ї Рго 5ег 58 55 60
Агв Рпе б5ег б1у б5ег 01у бег б1у Тпг Ар Рпе Тиг о Гец Те Те 5ег 65 79 75 ве бег Гец біп Рго бі А5р Рпе А1а Тиг Туг Туг Су Ні Ні бег Тер 85 90 95 бі І1е Рео Гец Тпг Рпе б1у б1іп б1у Тйг Гуз Ге 010 І1е Гуз 186 195 116 «210» 4 «211» 111 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «400» 4
А5р І1е Ма1ї Меє Тиг о біп 5ег Рго Ар бег Гей А1а Маї 5ег Ге 01у 1 5 12 15 бі Аг А1а Тпг о І1е бег о Суз Аге А1а 5ег б1іп бег Ма! 5ег Тиг бег 28 25 зе
АгЕ Туг бег Туг І1е Ні Тгр Туг біп біп Гу5 Рго с1у біп Рко Рго 35 40 45
Гуз Гей Ге Те Гу Туг А1а бег Абп Ге бі бег 01у Ма1ї Рго 5ег 50 55 6О
АгЕ Ре бег біу бег б1у бег б1у Тпг Азр Ре Тиг Ге Тиг І1е 5ег 65 79 75 ве б5ег Сен бІіп Рго бІи Азр Ріе А1а Тиг Туг Туг Суз Ні Ні 5ег Тер 85 99 95 біч І1е Рго Ге Те Ре б1у біп б1у Тіг Гуз Ге бі Те Гуз 160 185 116 «216» 5 «211» 124 «212» Білок «2135 Ното зарієп5 «400» 5 бій Уаї Сух мМаї Маї! бі бек с01у с01у б1у Ге Ма1ї б1іп Рго 01у 01у 1 5 19 15 бег Меї Гуз Сен бег Суб Маї Маії бег б1у Ре Те Ре 5ег Ази Туг 26 25 зо
Тир Маї Азп Тер Ма1ї Аг біп АТа Рго с01у ух 01у Гей біи Тгр Ма1ї
А1а біп І1е Аг Ге Суз бег Азр Ап Туг АТа Типг Ні Туг би 1 56 55 ва бег Маї Гуз б1у Ася Рпе Тиг І1е 5ег Агв Азр А5р бег Гуз 5ег 5ег 65 70 75 во
Ма1ї Туг Сей б1іп Меє Азп А5п Гей Аге А1а бій А5р 5ег б1у Те Туг 85 96 95
Туг Суз Тиг Ап Тер бій Ар Тугс Тгр с1у б1п б1у Те Тег Маї Твге 196 185 119
Уа1 бег бег А1а 5ег Тиг Гу 01у Рго 5ег Ма1 Ре 115 120 «210» 6 «211» 124 «212» Білок «213» Ното 5арієпь «400» 6 бін Маї Суб Маії Ма1! бій 5ег біу 01у біу Гей Ма1ї Сбіп Рго сІу б1у 1 5 16 15 бег Ге Гуз Ге бег Сух Ма! Маі б5ег б1у Ре Тиг Ре бег Азп Туг за
Тер маї А5п Тгр Маї Агя с1п А1а Рго біу Гуз 01у Гец 51ц Тер Ма1 48 45
Аїа б1іп І11е Агро Се Гуз бег Азр Азп Туг А1а Те Ні Тує бій бій 58 55 во бег Маї Гуз бі1у Агд Рпе ТІК І1е 5ег Агр Абр Ар бек Муз бег 5ег 65 79 75 80
Уаї Туг Се біп Меб доп бег їеуц АгЕ А1а бі Азр Тиг 01у Те Туг 85 96 95
Туг Суб Тиг о Азп Тер біс Ар Туг Тер б1у б1п б1у Те Таб Маї Те 1066 1065 116
Ма1 б5ег бег АТа бег Тиг о Гуз 01у Рго бег Ма1! Ре 115 129 «210» 7 «211» 124 «212» Білок «213» Ното заріепз «400» 7 бій Ма! біп Ма! Маї бі б5ег біу б1у б01у Гей Ма1ї біп Рго б1у Ф1у 1 5 16 15 бег Гец ух Ге 5ег Су5 Ма1ї Маї бег б1іу Рпе ТПг Рпе 5ег А5зп Туг 20 25 зе
Тер Маї А5п Тер Маї Аге біп А1а Рго б1у Гуз б1у Ге би Тгр Ма1ї 35 да 45
А1а біп І1е Аг Гей Гуз бег Азр Ап Туг А1а Тиг Ні Туг б1ц б1ц во бег Ма1 СДуз б1у Аг Ре Тиг І1е бег Аг Ар Азр о бег Гуз А5п 5ег 65 79 75 ва
Уа1 Туг Се б1п Ме Азп бег Гей Аге А1а б1и Ар Тиг А1а І1е Туг 85 96 95
Туг Суз Тиг Абзп Тер б1и Абзр Тубс Тер б1у б1п а1у Тйб Те Маї Твг 198 105 116
Уа1 бег 5ег А1а бег ТПг Гуз с1у Рго 5ег Ма1 РНе 115 129 «219» 8 «211» 124 «212» Білок «213» Ното 5аріеп5 «4080» 8 610 Маї біп їеу Ма! бі б5ег б1у б1у біу Геч Маї б1п Рго о01у 01у 1 5 10 15 бег Се Муз їен бег Суз Ма! Ма! 5ег б1у Рпе Тиг Рпйе 5ег Азп Туг зо
Тер Ма! Азп Тер Ма1ї Агро біп А1а Рго б1у їу5 бі1у Ге бі Тер Ма1 до 45
А1а б1іп Т1е Аг Гей Гуз 5ег Ар Азп Туг Аза Те Ні Туєс 01у б1ц ве 55 во бег Маї Шу5 б1у Аг Ре Тс І1е бег Аг А5р Ар бег іу5 Д5п 5ег 65 78 75 80
Се Туг Ге біп Меб Ахп бег Гец Агрв А1а бі Ар Тіг Аїа І1е Туг 85 90 95
Туг Су Тиг Абп Тер бій Др Туг Тер б01у біп б1у Те Тае Ма1ї Трбге 189 105 110
Уаї 5ег б5зег АІіа б5ег Тиг о Гуз б1у Рго б5ег Ма1! Ріє 115 120
«210» 9 «211» 6 «212» Білок «213» Ното заріепь «400» 9
Азр біп б1у б1у Туг тс 1 5 «210» 16 «211» 8 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 16 б1у Туг Те Меє Ні біп Азр с1п 1 5 «216» 11 «211» 111 «212» Білок «213» Ното заріепе5 «400» 11 дер І1е Маії Ге Тис о біп 5ег Рго А1а 5ег Геу А1а Ма) 5ег Ге 01у 1 5 16 15 б1іп Аге АТа Тиг Т1е бег Су5 Аг А1а 5ег біп бег Ма! бег Тиг 5ег 29 25 зе
Аге Тук бег Туг І1е Ні Тер Туг біп біп Гуз Рго б1іу біп Рго Рео 49 45
Гуз Гей Ге І1е Гуз Туг АТа бег Азп Ге 01 бег 01у Маі1ї Рго діа 6о
АгеЕ Ре 5ег б1у 5ег біу б5ег біу ТНг А5р Ріе Тпг о Гец Ап І1е Ні 65 70 75 ве
Рго Ге бі 010 б1и Азр А1їа А1їа Тайг Тугс Туг Су Ні нів бег Тер 85 90 95 бі 11е Рго Ге Тиг Ре 01у АТа б1у Тийг Гуз Сей бій Гец Гуз 162 185 116
«210» 12 «211» 124 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 12 б1и Ма! Куз ма! бі б1іи бек б1у б1у С1у Гей Ма) б1п Рго 01у 01у 1 5 16 15 бег Мебє Сух Ге бег Су5 Ма! Ма1! 5ег с1у Ре Тиг Ре 5ег дхп Туг за
Тер Маї А5п Тер Маї Аге б1іп б5ег Рго б10 Ту біу Гецч 01 Тгр Маї 46 45
А1а біп 11е Аг Гец Гу бег Азр Ап Туг АДіа Тиг ніх Туг бі бій 5О 55 6о бег Ма! Суз б1у АгЕ Ре Тиг І1е 5ег Агро А5р А5р бег їуб5 бег 5ег 65 70 75 80
Уа1 Туг Меп біп Межє Ап Азп Ге Агя АТа б1и А5р 5ег б1у І1е Туг 85 90 95
Туг Су Тиг Азп Тер 010 Азр Туг Тер с1у біп б1у Те Тиг Ге Тег 1006 1985 118
Уа! бег б5ег А1а 5ег Тиг оїуз б1у Ркго 5ег Ма1 Рпе 115 128 «210» 13 «211» 442 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «4600» 13 бі Маї (уз Ма! Маї біи 5ег б1у 01у с01у Се Маії б1п Рко б1у б1у 1 5 16 15 5ег Меї Гуз Ген б5ег Суз Ма! Ма! 5ег біу Рпе Тиг Ріре 5ег Азп Туг 20 25 зе зо
Тер Маї Азп Тер Маї Агро б1п діа Рго б1у Гуз б1у їеи б1и Тер Ма1ї
А1а б1іп Те Аге Ге Су бек А5р Азп Туг А1а Тиг Ні Туг біц бін во бег Маї Гуз б1у Аг Ре ТиПг ІТе бег Аг Азр Ар бег Гуз бег 5ег 65 79 75 80
Маї Тук Ггеи біп Мет А5п А5п Геш АгЕ АТа біи Ар бег б1у Пе Туг 85 90 95
Туг Суз Тг Азп Тер біц Ар Туб Тер б1у біп 01у Тагс Те МУаї Те 128 195 1186 уаї 5ег б5ег А1а б5ег Тіг Гуз біу Рго бег Ма1ї Рпе Рго Гец А1Та Рго 115 120 125
Сух б5ег АгЕ бег Тиг бег бій б5ег Тиг А1а діа Ге біу Су5 іеи Ма1 130 135 146
Суб Абр Тугс Ре Рго бі Рго Маї Ти" Ма! 5ег Тер Абп 5ег 01у А1Та 145 156 155 168
Се Тиг о бег б1у Ма1 Ні Те Ре Рго діа Уаї Гец б1п 5ег 5ег 01у 165 179 175 їеч Туг б5ег о Гец б5есг б5ег Ма! Ма! Тиг о Маї Рео бег 5ег б5ег Гей б1у 188 185 190
Те вуз Тис о Тує Те Суз Азп о Маї Ар Ні Гуз Рго бег Ап ТПг Гу 195 280 205
Уаї Ар Су Аги Ма1 5010 5ег Гуз Туг б1у Рго Рго Сухз Рго Рго Суб 216 215 220
Рго діа Рго біц Рйе Се біу с1у Рго 5ег Ма! Рпйе Геч Рпе Рго Рео 225 236 235 246 уз Рго Гуз Азр Тгоїеи Меї Т1е 5ег Аге Тпг Рго 610 Маї Тиг Суз 245 256 255
Уаї ма1! Маї Ар Ма1ї бег біп бі Ар Рго бій Маї біп Рпе доп Тер 269 265 279
Туг Ма1! Азр б1у Маї 010 Ма1ї Ні Азп Аза Гуз Тиг о Су5 Рго Аге 010 275 280 285 бій б1й Ре А5п о 5ег Те Тук Агро оМа1 Ма! 5ек Маї Ген Тиг Ма! Ге 298 295 389
Ні біп Ар Тер іец Ап біу Гуз бій Туг їуз Суз Гуз Ма! 5ег Азп 305 316 315 320
Сух с1у Ге Рго 5ег 5ег І1е б1ц Гуз Тиг І1е бег Гуз АЇа Гуз с1у 325 330 335 б1п Рго Агро 010 Рго б1іп Ма! Тує ТНг Гей Рго Рго бег біп б1и б1ц з40 345 3509
Меє Тиг Су Азп біп Маі бек Ге Тиг Суб Ге Уаї Сух 01у Рпе Тук 355 зва 365
Рго бег Азр І1е А1а Ма1 біи Тер бі бег Доп б1у біп Рго б1у Азп 379 375 зве
Азп о Тусб Гуз Тие Те Рго Рго Маї Гец Ар бек А5зр п01у бег Рпе РіНе 385 390 395 490
Се Туг бБег Агр Семи Тпг Ма! Ар Гуз б5ег Аг Тгр б1п с1и б1у Азп 405 416 415
Уаї Рне бек Су бег Уа1ї Меї Ні бій дА1іа Ге Ні Доп Ні Туг ТНг 420 425 430 б1п Гуз бег Ге 5ег Геи бек Гей 91у Гуз 435 ад з2
«210» 14 «211» 442 «2127у Білок «213» Ното зарієпе «400» 14 б1и Маї Суз Ма1ї Ма1! 610 бек б1у 01у б1у їеи Маї б1п Рго сіу б1у 1 5 16 15 бЗег Ген Ту Ге б5ег Суз Ма! Ма)! 5ег б1у Рпе Тпг Ре баг Ап Туг 29 25 36
Тер Маї Азп Тер Ма1 Аг біп АТа Рго біу Сух біу Геш б1и Тер Маї
А1а біп ї11е Агро Гей Гуз бег А5р Ап Туг А1а Тис Ні Туг біц б1ц 5а 55 6о б5ег Ма1 Гуз 01у АгЕ Ре Тиг І1е 5ег Аге Ар Ар бег Гу 5ег 5ег 655 79 75 80
Ма1 Туг Ге біп Меж Азп бег Те Ага А1а б1ч Ар Тіг о1у І1е Туг 85 90 95
Тут Суб Таг о Абп Тер бій Азр Тубє Тер б1у біп б1у Те ТНг о Ма1 Таг 196 185 116
Уаї 5ег бег діа бег Тиг о Су5 01у Рго 5ег Ма! Ре Рго Се АїТа Рго 115 128 125
Суз бег Дер бег Тис о бег 010 б5ег Тиг А1їа Аїа Ге 01у Сух Гей Маї 130 135 140
Суб Азр Туг Ре Рго 010 Рго Ма! ТПг о Ма1і 5ег Тгр Азп бег 01у А1а 145 150 155 168
Гей Тргобег 01у Ма1 Ні5 Тиг Рпе Рго А1а Ма1ї Гей біп бег 5ег 0б1у 165 178 175 йеи Туг бег Гец б5ег бег Ма! Ма1! Тиг Уаї Рко 5ег 5ег 5ег Сец 01у 180 185 1960
Те о Су5 Тиг о Тубє Те Суб Азп Ма1ї др Ні Гу Рго 5ег Абзп Тис Гуз 195 286 205
Уаї Азр Гуз Аге Ма1 Сб1іи бег Гу5 Туг б1іу Рго Рго Суб Рго Рго Суз 210 215 220
Рго АТа Рго бій Ре (ей біу б01у Рго 5ег Ма! Рипе їей Ре Рго Рго 225 230 235 240 ух Рко Гуз дА5р Тиг Ге Меї І1е бег Аг Те Рго б1и Ма! Тпе Су 245 256 255
Уа1ї Ма1! Маї Азр Ма1ї бег біп 5610 Азр Рго 510 Ма1ї біп Рпе А5п Тер 260 265 279
Туг Маї Азр б1у Маї б01и Ма1 Ніб5 Азп АТа Гу5 ТЬг Гуз Рго Аге о1ц 275 286 285 б1ц біп Ре Аб5п бег Тийг о Туг Аге Маї Уаї б5ег Ма! Се Тие Маї Гей 299 295 зей
Ні5 біп Азр Тер СГец Азп б1у Гуз 01 Туг Гуз Суб Гуз Ма! 5ег Абп 385 316 315 326
Гуз б1у Се Рго бег 5ег І1е 010 Су5 Тиг І1е 5ег Гуз Аїа Гу с1у 325 3за 335 біп Рго Аге бі Рго біп Маї Туг Тиг Сеу Рго Рго 5ег б1п бі б1іи 346 345 358
Ме Тпе Гуз Азп 5017 Уаї бек Сей Тиг Суз Сеи Ма1 Гуз біу Рпе Туг 355 зва 365
Рго бек Абр І1е А1їа Ма! бі Тер бій 5ег Азп біу біп Рго б1и А5п 378 375 зве
Асп Туг Гу Тиг о Тйг о Рго Рго Ма! Гей Ар бег Аб5р б1у 5ег Ре Ре 385 399 2395 дов
Ге Тук бег Ага їТец Тиг Уаії Ар Гуз бег Аге Тгр б1п б1іч о1у Азп де5 418 415
Уаї Рпе бег Су5 5ег Ма1ї Меї Ні5 01 діа Гец Ні Азп Ні Тує Тис 420 425 4368 біп Гує бек Ге б5ег Гец бег Гей 01у Гуз 435 440 «210» 15 «211» 442 «212» Білок «213» Ното зарієпь «400» 15 610 Ма! біп Ма! Ма1і б1и 5ег бі1у бі1у с1у їеу Ма! біп Рго б01у 51у 1 5 19 15 бег Гей Гуз Се бег Суз Ма1 Ма! бег б1у Ре Тиг Рпе бег Абп Туг 29 25 36
Тер Ма1! дп Тер Ма1 Аг б1іп АТа Рго б1у Гуз 01у Гей б1и Тер Маї 4а а5
А1а б1п ї11е Агро бей Гуз бег др А5п Туг А1а Те Ні Тує бій 61у 58 55 ва бег Маї Гуз біу Аге Ріе Тиг І1е бег Агро А5р Азр бег (уз Азп 5ег 65 78 75 ве
Уаї Туг Ге біп МебЄ Абп 5ег іец Аг А1їа бій Азр Тиг Аїа І1е тус 85 99 95
Туг Суб5 Тпг Азп о Тер б1и Ар Тубк Тер б1у біп 01у Тиг ТВг Уаї Тег 168 195 110
Уаї бег бег А1а бек Тиг о Гуз п01у Рго 5ег Ма! Рре Рго Гей Аїа Рго 115 128 125
Суз бег АгЕ 5ег Тіг о бег бі 5ег Ти" АТа А1а іеи сіу Суз Те Маї 136 135 148
Іуз А5р Туг Ре Рго бі Рго Маї Тпг Ма! бег Тгр Азп бег б1у А1Іа 145 156 155 160
Іеи Те бег о біу маї Ні5 Тк Ре Рго А1а Маї Гей біп бег б5ег С1у 165 176 175
Іец Туг б5ег їец бег бег УМаї Маі Тиг Ма! Рго бег б5ег бег Гей біу 188 185 190
Те Суб Те Туг ТВе Субз Аб5п о Ма1ї Азр нНіб Гуз Рго бек Д5п ТВг Гуз 195 280 295
Уаії А5р Гуз АгЕ Ма1 біи бег (уз Туг б1у Рго Рго Суз Рго Рго Суб 210 215 229
Рго А1а Рго 010 Ре Геи біу б1у Рго 5ег Маї Рпе іГец Ре Рго РгОо 225 239 235 246
Муз Рго Гуз Азр Тйг о Гец Меї І1е 5ег Аг Тиг Рго бі Ма1 Тпг Су 245 256 255
Уаї Ма1ї Ма1! Ар Ма1і 5ег біп бій А5р Рго бі Ма1! біп Рне Азп Тгр 260 265 279
Туг Маї Ар біу Маі бі УМаї Ніб5 Абп АТа їуз Те Гу Рго Аге бій 275 280 285 б1ц біп Ре Аб5п бек ТПгоТуг Агв о Ма1 Ма1ї бег Ма! Сеи Тиг Маї Ге 298 295 зоа
Ні біп Ахр Тер Гец доп б1у Гуз бі Туг Суз Суз Туз Ма! 5ег Ап 395 316 315 320
Гуз Б1у Ге Рго 5ег бег І1е 01 Гуз ТНе І1е 5ег Гуз А1а Гуз 01у 325 330 335 біп Рго Агя бій Рго біп Ма! Туг Тиг Ге Рго Рго 5ег біп би б1іи 346 345 350
Меє Тиг Гуз Ап б1п Уа1ї бег Геу Те Су5 Ге Маї Суз о1у Рпе Туг 355 зва 365
Рго бег Ар І1е А1а Ма1 бі Тер 01 5ег д5п б1у б1п Рго 61 Ап 379 375 зве
АзпоТуг Су Тс Те Рго Рго Маї Се А5р бег дор біу 5ег Ре Рпе 385 3990 395 400 їеи Туг бег АгроГец ТНгоМа1і Азр Гуз б5ег о Аге Тер біІп бід с1у Абп 485 419 415
Уа1 Рпе б5ег Сухз бег Маї Меє Ні5 бій Аіа Ге Ні Ап Ні Туг ТНг 420 425 4азе б1іп суб бег Ге б5ег Ге бег Ге б1у Гуз 435 440 «210» 16 «211» 442 «212» Білок «213» Ното заріеп5 «408» 16 бі Маї б1п бе Ма1ї 01 бег б51у б1у б1у Ге Ма1ї біп Рго с1у б1у 1 5 18 15 бек Гей Гу Геу бег Су5 Маї Уаї бег біу Рпе Тиг Ре бег дози Туг
Тер Маї Азп Тер Маї Аг б1іп А1їа Рго біу Гуз сІу Гей СІи Тгр Маї да 45
А1а біп ї11е Аг Гени гу5 бег Ар Ап Туг А1а Тис Ні Туг бін 61ц во бБег Маї Гух б1у Аге Рпе Трг І1е бег Ага Азр Азр б5ег Гуз Ап 5ег 65 70 75 ве
Се Туг Гец бій Ме А5п бег Ге Аге А1а бій Абр Те Аїа І1е Туг 85 90 95
Туг Су Тіг о Асп Тер бі д5р Туг Тер б1у біп б1у Таг Тве Маї Тег 160 165 116
Уа1 бег б5ег А1а бек Тіг Гуз біу Рго 5ег Маї Ре Рго Семи А1Та Рго 115 120 125
Суб5 бег Агв бег ТИг о бек біц бек Тпг А1а А1а Ге б1іу Су5 Гец Маї 136 135 146
Гуз Азр Туг Рре Рго бі Рго Ма1 Тиг МУа1ї 5ег Тер А5л бег б1у А1а 145 158 155 166 ен Тег обег б1у Ма1ї Ні Трг РіБе Рго діа Маї Гец біп 5ег 5ег 01у 165 170 175
Сеч Туг бек Ге) бек бег Уа1ї Ма! ТиИг Маї Рго 5ег 5ег 5ег Ген б1у 189 185 190
Тпгофуз Те о Туг ТВг о Суз Абзп о Ма1ї Азр Ні Гуз Рго бер Азп Тпг Гуз 195 296 295
Уаї Ар Гуз АгЕ Ма1 610 5ег Гуз Туг біу Рго Рго Суб Рго Рго Су 216 215 228
Рго А1а Рго 610 Ре Ге б1у б01у Рго 5ег Ма1 Рре Геи Ре Рго Рго 225 230 235 246 уз Рго Гуз Азр То Сен Меї І1е 5ег о Агя Тиг о Рго бі Ма1і Тре Су 245 258 255
Уа1 Уаї Маї А5р Маї бег б1п 012 Азр Рго б1ч Ма1ї б1іп Рпе доп Тер 260 265 278
Туг Ма1 Азр біу Ма! бі Ма1ї Ні5 А5зп А1а Гуз Тиг Гу Рго Аге 01ч 275 280 285 бі біп Ре Азп 5ег Тиг Туг дев Маї Ма! бег Ма1ї! Ге Тиг Маї Гей 290 295 зео
Ні біп Азр Тер Гей Азп біу Гуз бій Туг Гуз Суз Гуз Ма1ї бег Азп зе5 з1д 315 320 уз с1у Ге Рго бег 5ег І1е біц Гуз Тиг І1е бек Гух5 А1а ух б1у 325 зза 335 біп Рго Аге бі Рго б1п Маї Туг ТиИг Се Рго Рго 5ег б1п б1и б1и з4а 345 356
Меї Тис Гуз Азп б1п Ма1 бег Ге Тийг оСуз Ге Маї Гу5 б1у Рне Туг 355 з6о 365
Рго б5ег А5р І1е А1а Ма1! бі Тер 010 бег Азп б1у б1п Рго б1и Азп 370 375 зве
Ап оТук Суб Те Те Ргсо Рго Маї Се Азр 5ег А5р б1і1у 5ег Рпе Ре 385 з9а 395 чав
Гецч Туг бек Аг Ге Те Маї Азр Гуз бег Аг Тер біп б1и б1у Ап 405 416 415
МУаії Рпе бег Суб 5ег Ма1 Меє Ні бі Аїа Ге Ні Ахп Ні Туг ТИг 4206 425 азе б1п Гуз 5ег Ге 5ег Геи 5ег Ге б1у Гуз 435 а40 «210» 17 «211» 218 «212» Білок «213» Ното заріепз «4095 17
Ар ІТе Маї Ге Тис біп 5ег Рго А5р бег Гей А1а Ма1ї 5ег Гец б1у 1 5 16 15
610 Ага А1їа Тег І1е бег Суб Аге Аїа бег біп 5ег Ма! бег Тиг 5ег за
АгЕ Туг бек Туг І1е Ні Трр Туг біп б01п Су5 Рго 01у б1п Рко Рго ух Се їец Те Гуз Туг А1їа бег Азп Ге бі бег с01у Ма! Рго 5ег ва
АгЕ Ре бег біу б5ег біу бег біу Тіг А5р Ре Тиг Ге Ап І1е Ні 65 70 75 ве
Рго Ге 010 бі бій Азр Ре А1їа Тпг оТуг Тує Суз Ні Ні бег Тгр 85 90 95 б1и І1е Рго Ге Тіг Рібе б1у б1іп б1іу ТПг Гух Геи 010 Те Гу Аге 166 105 116
Ти" Маї А1а А1а Рего бег Уа1ї Рпе І1е Ре Рго Рго бег Азр б1и б1п 115 120 125
Се Гуз бег б1у Тис А1а бек Ма1ї Маї Суз Гец Ге Аб5п доп Рпе Туг 138 135 140
Рго Агв бій А1За Гуз Маї бій Тер Гуз Ма! Ар Ап А1а Ген 01п 5ег 145 158 155 166 б1у Ап бег біп 61 5ег Ма1! Трг о біц біп Азр 5ег о Сух Абр 5ег ТИг 165 176 175
Тує бег Ге бек бзег Тис о їеи ТпгоГец бег Гуз А1а Ар Туг біс г уз 18506 185 1938
Ні ух Ма! Туг АТ1а Сух біц Ма1! Тпг Ні біп 01у Гец бег бег Рго 195 280 2985
Уа! Тпг Гуз бег Рпе Ап Аге б1у бі Су 210 215
«210» 18 «211» 218 «212» Білок «213» Ното заріепь «400» 18
Ар І1е Маї Гец Тиг обіп бег Рго Ар бег о їеи А1а Ма! 5ег ем в1у 1 5 16 15 610 Аг Аїа Тиг І1е бег Суб5 АгЕ А1а бег біп 5ег Ма1 бег Тиг 5ег 26 25 30
АгЕ Туг о бег Туг І1е Ні Тер Туг біп бІ1п Гу5 Рго біу біп Рго Рго 4о 45
Гуз бец Сен І1е Гуз Туг А1а б5ег Абп Гец бі 5ег 01у Ма1ї Рго 5ег бо
Агв Ре бег с01у бег б1у 5ег сб1у Типг А5р Ре Тиг Ге Азп І1е Нів 65 79 75 8о
Рго бец 010 Рго бі Азр Рпе АТїа Те Туг Туг Суз Ні Ні 5ег Тгр 85 90 95 б1іи І1е Рго (Ге Тиг Ре біу біп б1у Тис уз Се 61 І1е Гуз АгеЕ 166 195 116
Ти" Уа! А1а А1а Рго бег Ма! Рре І1е Ріе Рго Рго 5ег Ар біц біп 115 120 125
Сей губ бек б1у Тиг Аїа б5ег Ма1ї Маї Суб Се Гец Абп Азп Рне Туг 130 135 146
Рго Агр бі А1а Гуз Маї а1п Тер Гуз Маї Азр Азп А1а ге біп бег 145 156 155 168 б1у Азп бек б1п 01й бек Маї Тиг о б1и б1й Азр 5ег Гуз Азр бег Тиг 165 170 175 м
Туг бег Ге бек бег Тиг Ге Тиг Ге бег Гуз Аз1а Азр Туг бі Гуз 186 185 199
Ніх іїу5 Маї Туг АТа Су5 біц Ма1! Тнг Ні біп аіу Гей 5ег 5ег Рго 195 2066 2805
Уаї Тиг Гуз б5ег Ре Ап АгЕ біу б1и Су 210 215 «2190» 19 «211» 218 «212» Білок «213» Ното зарієеп5 «499» 19
Азр І1е Маї Гей ТБйг о біп бег Рго Ар 5ег Гей А1Іа Уаї 5ег Ге о1у 1 5 18 15 бі Аве А1а Тйг о І1їе бег Суз Агр Діа бег біп бег Ма1! бег Тиг 5ег 28 25 38
Аг Туг бег Туг І1е ніх Тер Туг біп біп ух Рго 41у біп Рго Рго ла 45
Су Се Гец І1е Гуз Туг А1ї1а бег Азп ем б1у бек с01у Маї Рго бег 5а 55 215)
АгЕ Рпе бек 01у бег б1іу бег б1у ТПг Ар Рпе ТНК оТеи ТПг Те 5ег 65 72 75 ве 5ег Геи с1п Рго бі Ар Рпе А1їа Тпг Туг Туг Су5 Ні Ні 5ег Тгр 85 38 95 бі Те Рго Ме Тиг Ре б1іу б1п б1у Тиг Гу Ге б1и І1е Гу АгеЕ 169 185 110
Тиг Маї А1їа А1а Рго 5ег Ма! Ріе І1е Ре Рго Рко 5ег Азр б1и біп 115 120 125
Се Гуз бег біу Тиг АТа бек Ма1ї Маї Суз Ге (еп Азп д5п Ре Туг 136 135 140
Рко Аге б1и діа Гуз Маї біп Тер Гуз Ма1ї Азр Доп А1а ГСец б1п 5ег 145 158 155 166 б1у Ап 5ек б1іп бі бег Ма1ї Тиг 010 б1п д5р бег Гуз А5р 5ег Тг 165 179 175
Тук бег їец зег о 5ег Тиг бен Таг Ген 5ег уз А1а Азр Туг 01 Гу 186 185 190
Ніз Гуз Маї Туг Аї1а Суз 01 Маї Те Ніб5 б1іп біу Ге 5ег 5ег Рго 195 200 205
Уа1! Тиг цу 5ег Ре Азп Аге п1у біи Су 216 215 «210» 20 «211» 218 «212» Білок «213» Ношо 5арієпе «400» 20
Азр І1е Ма1ї Мет Тийг бій бег Рго Ар бег їец ДІіа МУаї бег Геч 61у 1 5 10 15 біо Агя А1а Тис І1е бег Суз Агро Азїа бег біп бег Ма1ї бег Тиг 5ег зе
Агя Туг 5ег Туг І1е Ні5 Тгр Туг й1п б1п ух Рго б1у біп Рго Рго «а 45 ух Се Се І1е ух Туг Ата 5ег Азп Ге бі бег йіу Ма1ї Рго 5ег за 55 во
АгЕ Рпе 5ег б1у 5ег 01у 5ег б1у Типг Ар Ре Тиг Ге Тиг І1е бег 65 78 75 80 5ег Ге б1п Рго бій Азр Ре А1Та Тиг Туг Туг Су Ні Ні бег Тер 85 98 95 бій І11е Рго Гей Тис Рпе б1у біп б1у Тийг Гуз Ге) бій Те Гу Аге 196 185 116
Тис Ма1 А1а А1а Рго бег Ма1! Рре І1е Ре Рго Рго бег Азр 51ц б1п 115 120 125
Сей Муз 5Зег 01у Тиг АТа 5ег Ма! Ма1! Суб Се Сец Азп Азп Ре Туг 130 135 149
Рго Аг біс АТїа Гуз Ма! біп Тер Гуз Маї Азр Азп А1а Ге б1п 5ег 145 158 155 160 б1у Азп бег біп бій бег Ма! Тиг бі б1п Азр бег Гуз Абр 5ег ТПг 165 179 175
Туг 5ег їец бек б5ег Тиг о Гец ТНг ОКей 5ег о Куз А1а Ар Туг бі Кув 186 185 198
Ніє Су5 Ма1 Туг АТа Су5 біи Маї Тиг Ні5з біп б1у Геи б5ег 5ег Рго 195 206 205
Уаї Ти Суз бек Рпе Азп Аг о1у 01и Суз 216 215 «210» 21 «211» 66 «212» Білок «213» Ното 5аріепо «400» 21
Мет А1а бі Рго Аг б1іп бі Рпе 01 Маї Меє 61 Азр Ні5 А1їа 01у 1 5 16 15
ТВг о Туг 1у Ге 01у А5р Абе Гуз Азр біп о01у о1у Туг ТиЬг Меє нів зо біп Азр біп б1у біу Азр ТИг Абр А1їа б1у Гей ух бІи бег Рго Геи 49 45 біа Те Рео Тиг о б1и Азр б1у б5ег бій бій Рго б1у 58 55 6о
«219» 22 «211» 60 «212» Білок «213» Ното зарієеп5 «400» 22
Мек А1їа б1ц Рго Агя б1п бі) Ре Ар Маї Меї 6010 А5зр Ні5 А1їа б1у 1 5 19 15
Те Туг а1у Геи 01у Азр Аге Суб дер біп бі б1у Туг Тиг Меї Ге 29 25 30 біп А5р б1іп 610 б1у Азр Таг Азр АтТа б1у Сей Суб 510 5ег Рго Ге 48 45 біп Тс Рго А1а бі А5р с01у бек бі 01и Ге «1у 5а 55 ва «2160» 23 «211» 49 «212» Білок «2135 Ми5 тизси1Ти5 «400» 23
Меє діа Азр Рго Аг сб1п б1и Ре д5р Те Меї 61 Ар Ні А1а 51у 1 З 10 15
Азр Туг Тг Бей Гей біп Азр б1п бі» біу Азр Меї др Ні 01у Ге 29 25 за
Су5 610 5ег Рго Рго біп Рго Рго Аїа А5р Ар біу А1а сі бій Рго 35 ло 45 о1уУ «210» 24 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарівп5 «Во» 24
Ар Ніб5 Аза б1у Тйге Туг біу Ге біу д5р Агв Гуз Ар біп с1у 1 5 18 15 «219» 25 «211» 15 «212» Білок «213» Ното з5аріепь «400» 25
Др Ні А1а б1у Те Туг б1у Ге б51у А1а А1а Гуз А5р віп 61у 1 5 19 15 «219» 26 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієепз «400» 26
Нібх А1ї1а б1у ТИг Туг б1у Се 01у А5р АгЕ Суб Азр біп о01у с1У 1 5 18 15 «216» 27 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 27
Ні5 А1а б1у Тийг Тує б1у Гей с1у Азр А1а А1а Ар біп а1у б1у 1 5 18 15 «210» 28 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієепо «4900» 28
А1а с1у Тиг Туг 01у Гец б1у Азр Аге ух Ар б1п б1у б1у Туг 1 5 18 15 «218» 29 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5арієпь «400» 29
А1і1а с1у Те Туєс б1іу Семи б1у Ар АгЕ А1а А1а біп с1у 21у Туг 1 5 16 15
«210» 36 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріелпе5 «480» 30 біу тиг Туг 61у Ге б1у Ар Агро Гуз Ар біп б01у 51у Туг Тиг 1 5 16 15 «210» 31 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5аріепе «40ах» 31 б1іу Тік Туг біу їен біу Ар Агд Гуз А1а А1а с1у б1у Туг Тіг 1 5 18 15 «219» 32 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5аріепз «4005 32
Тиг о Туг б1у Геу б1у Ад5р Агро Гуз Ар біп 01у 01у Туг Тиг Меє 1 5 19 15 «210» 33 «211» 15 «212» Білок «2137у Ното заріепз «460» 33
Те Туг с01у Ге б1у Азр Аге Суб Азр А1а Аіа б1у Туг Тег Мет 1 5 16 15 «210» 34 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепе «460» 34
Туг 61у Кец б1іу ДА5зр Агв Гуз Азр біп біу 6б1у Тук ТНг Меї нів 1 5 19 15
«218» 35 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 35
Туг б01у Се б1у Ар Аге Гу др біп А1а А1їа Туг Тнг Меє Ні 1 5 16 15 «218» 36 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепь «400» 36 б1у Ге б1у А5р Агв Гуз Ар біп б1у б01у Туг Тиг Ме Ні біп 1 5 16 15 «219» 37 «211» 15 «212» Білок «2135 Ното 5арієеп5 «400» 37 б1у Се 01у Азр Агв ух Азр б1п 01у А1а А1іа Тиг Мет Ні б1п 1 5 18 15 «210» 38 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепз «4005 38
Гец о1у Азр Аг Гуз Азр о біп б1у б1у Туг Тиг Меє Ні біп Азр 1 5 16 15 «218» 39 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієпе «4900» 39
Сем б1іу А5р Аг Куб Азр біп б01у б1у А1а А1а Меї Ніз біп д5р 1 5 19 15 «210» 49 «211» 15
«212» Білок «213» Ното зарієеп5 «40а» 40 с1і1у Ар Аг Гуз Азр о біп біу б1у Туг Тпг Мебє Ні б1іп Ар б1п 1 5 16 15 «210» 41 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5аріепе «4920» 481 біу А5р Аге ух Ар с1п б1у а1у Туг Аа Аїа Ні5 01п Ар б1п 1 5 16 15 «210» 42 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієеп5 «400» 42
Ар Агро їуз Ар біп б1у б1у Туг Тиг Мет Ні б1п Азр біп б1ч 1 5 19 15 «216» 43 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5аріеп5 «489» 43
Ар АгЕ Гуз Азр біп біу б1у Туг Тіг Аїа АІ1а біп Ар біп бі 1 5 16 15 «210» 44 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепо «400» 44
Агя Гуз дер бій біу а1у Туг Тийг Мет Ні біп Азр біп 610 01у 1 5 16 15 «210» 45 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепо
«400» 45
Аге Гуз дер біп біу біу Туг Тиг мес Аі1а Аза Азр б1п сіщи б1у 1 5 19 15 «210» 46 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієп5о «400» 46
Суб дор біп біу 01у Туг Тиг Меє Ніз б1п Азр б1п б1и б01у А5р 1 5 19 15 «219» 47 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієпз «400» 47
Гуз Азр біп б1у с1у Туг Ті Меє Ні5 діа А1а біп бі б1у А5р 1 5 18 15 «2108» 48 «211» 15 «212» Білок «213» Ното з5арієп5 «400» 48
Азр б1п б1у б1у Туг Тис Меє Ніх біп Ар б1п біц біу Азр Тк 1 5 19 15 «210» 49 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепз «4060» 49
А5р б1іп б1у б1у Туг тТпг Меє Ні5 б1іп А1а А1а бі 01у Ар Тиг 1 5 16 15 «210» 50 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5арієп»5 «400» 56 біп б1у б1у Туг Те Меб Ні5 б1іп Аєр біп 01 б1у А5р Те Ар 1 5 19 15 «210» 51 «211» 15 «212» Білок «213» Ното заріепз «480» 51 біп б1у біу Туг Тіг Меї Ні б1п Аб5р Аїа А1Та б1у д5р Тиг А5р 1 5 16 15 «210» 52 «211» 15 «212» Білок «213» Ното 5заріеп5 «4600» 52 с1у б1у Туг Те Мебє Ні біп Ар біп б1ц 01у Азр Тіг Азр А1а 1 5 18 15 «210» 53 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієепе «400» 53 біу б1у Туг Тиг Меї Ні б1іп дор біп А1а АТа д5р Тиг др А1а 1 5 19 15 «210» 54 «211» 15 «212» Білок «213» Ното зарієп5 «400» 54 сіу Тує Те Меї Ні біп Ар б1п біш біу Дзр Тпг Абр Аїа біу 1 5 10 15 «218» 55 «211» 5 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний пелтид
«400» 55 б1і1у б1у біу 01у 5ег 1 5 «210» 56 «211» 22 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223у Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид «226» «221» МО КЕ5 «222» (1)..(8) «223» Будь-яка амінокислота або не присутній «220» «221» МО ВКЕ5 «222» (153)..(22) «223» Будь-яка амінокислота або не присутній «460» 56
Хаа Хаа Хаз Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Азр б1п сіу 01у Туг Тиг Хаа Хаа 1 5 18 15
Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа «210» 57 «211» 8 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид «229» «221» МОО КЕ5 «222» (5)..(5) «223» Нібз ог Гей «400» 57 біу Туєг Тиг Меї Хаа біп Азр біп 1 5 «218» 58
«2115 6 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Опис штучної послідовності: Синтетичний пептид «220» «2215 МОЮ КЕ5 «222» (3)3..(3) «223» б1у ог 01 «400» 58
А5р 01й Хаа б1у Туг ТЕг
Claims (1)
1 5 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Виділене анти-тау антитіло, що містить: легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність БЕО ІО МО: 2, і важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 5.
2. Антитіло за п. 1, яке відрізняється тим, що антитіло є гуманізованим ІдДС24 антитілом, що містить мутацію 5241Р, яка стабілізує шарнірну область.
З. Виділене моноклональне анти-тау антитіло, що містить легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 18, і важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 13. ПОСЛІДОВНІСТЬ ВАРІАБЕЛЬНИХ ДІЛЯНОК Послідовності С2М-щеплених У ділянок Легкий ланцюг сок1 сов2 совЗ МиМі. РІМПТО5РАБІАУБІСОВБАТІЄСВАБОБУБТОВІВХІНЯУООКРОСОРРКІІКУАВМОЕВСУРАВЕБО5О5ОТОЕТЬМІНРЬЕЕЕРААТУХСННОМКІРІТ ЕСАСТК ОВК (5ЕО ІЮ МО:11) Ук ФІМЦТО5РОБІАУБІСЕВАТІБСВАБОБУВТОВУЗХІННТООКРООРРКВТІКХАВНЬЕВОУРБВЕБОБО5ОТОЕТЬМІНРЬЕЕЕОЕАТУХУСННЗМЕІРІЬТЕСОСТКІКІК (6) (5ЕО 10 МО:1) чк2 РІУМПТОВРОБІАУБІСЕВАТІЗСВАБОБУВТОВУБХІНЯТООКРООРРКОТІКУАВМІЕБОУРБВЕБОБС5СТОЕТЬМІНРЬЕРЕОКАТУХУСНИНОИБІРІТЕСОСТКІБІК (7) (850 І МО:2; Ук РІУГТО5РОЗГАУЗБОЕКАТІ5ЗСКАЗОБУЗТ5ВУЗТУІНИУООКРООРРКЬТІКУАЗМІЕ5СУРЗКЕЗСЗО5СТОЕТІТІЗЗБОРЕОБАТУУСННЯМЕТРІТЕСОСТКЕТК (11) (5ЕО ІВ МмО:3) чкі рІУМТО5РОБІАУЗІСЕВАТІЗСВАБОЗУБТОВУЗТУІНИХООКРООВРКІСІКУАЗМІЕ5ОУРЗВЕ5О5О5СТОЕТІТІ5ЗЗІЬОРЕОЕАТУХСННЗЯБІРІТЕСОСТКІРІК (12) (5Е0О 10 МО:4) Важкий ланцюг сові сов2 сов3 МиУНн о БУКУБЕБОССОУОРОСОМКІВСУУЗСЕТЕБМУЯУМИУКОВРЕКССЕМИУАОТВІКЗОМУАТНУЄВОУКСВЕТІВВОрЗКВ5УУЦСОММНМІВАКООСІ СТВО УМСОСТТТУЗЗАБТКОРЗУВ (560 І МО:12) чні ЕМКУУЕ5ООСІИОРОЗІМКЬЗСУУЗОЕТЕВМУНУМИУКОАРОКОТЕМУАОІВСКООМУАТНУВЕЗУКОВЕТІЗВООЗКОБУХЬОМММІКАКОІСІ УСТ МИВЕОТИООСТТУТУЗАБТКОРЕУК (4) Т5ЕО ІО МО:5) чна ЕЧКУХЕБСССТМУОРОСЗІКТЬОСУУЗСЕТЕОМУЙУМИУВОАРОКСТЕЙУАОТВБК5РМУАТНУВЕЗУКОВЕТІВВОО5КО5УУСОММОІВАБОТСІУУСТМИЕрУМИСОСТТУТУББАБТЕКСРОМЕ (7) І5БО І МО:6) чУнЗ ЕУОУУЕБСОСІУОРОСЗЬКІОСУУВСЕТЕВМНУЙУМИУКОАРОКСІЕИУАОТВІ,КЗОМУАТНУЄЕВУКОВЕТІЗВООБКМИЗУХСЬОММЗІКАЕОТАІУУСТМИЕпУМООСТТУТУББАБТКСРОМЕ (10) і5БО 10 КО:7) чна ЕМОГУБОСОСТЬУОРОСЗІКЬОСУУБСЕТЕЗМУЯУМИУВОАРСКОПЕИМАОТВЬКЗОМУАТНУВЕЗУКОВЕТІЗВООЗКМОБУТОММИОЗІВАЕРТАІУТСТМНВОУИСОСТТУТУБЗАЗТКОРЗУЕ (17) (БО І МкО:8) Ключ: Ми: означає мишину послідовність УН: означає гуманізовану варіабельну ділянку важкого ланцюга УМ: означає гуманізовану варіабельну ділянку легкого ланцюга срЕ: визначальна комплементарність ділянка ААА: зміни у каркасній ділянці, запропоновані Апсігоре
ФІГ.1
Повна амінокислотна послідовність варіантів важкого ланцюга та легкого ланцюга СМ Щеплені варіанти важкої послідовності Теоретичне рі/Муу для «УНІ: 6.80 / 4882290 ЕУКУУЕВбОСІПУОРОСУМКІЯСМУЗСЕТЕОМУМУМИУВОАРОКССЕМУАОТВІКВОМУАТНУВЕБУКСВЕТІВВО реКеБУТСОМММОВАКОЗСІХУУСТИНЕОУМСОСТТУТУЗБАБТКСРОУЕРЬАРСЯВОТБЕБТААТОСЬМУКОУЕРЕ РУТУВИМОСАТОСУНТЕРАУБОВВСІ У5055УУТУРБОЗБІСТКТУТСМУОНКРЕМТКУОКАУЕЗКУСРРСРРСР АРЕЕЦОСРЗУЕЦЕРРКРКОТІМІЗВТРЕУТСУУУВУВОБОРЕМОЕМИУУОСУЕУНМАКТЕРЕЕЕОКМОТУКУУВУ ПТУБНООИСЬМСКЕУКСКУЗМКСІ,РЗБІЕКТІЗКАКСОРЕЕРОУУТІ РРЗОБЕМТКМОУБІТСІМКОКУРЗОІАУЕ МЕЗМСОРЕММУКТТРРУПБОЄРОЗЕЕБУВЕТУРКЗВИОЕСКУРКВСЗУМНЕАТНМНУІТОКаВЗІЗЦСК (5ЕО Ір МО:13) Повна амінокислотна послідовність варізитів важкого ланцюга та легкого ланцюга СІМ ІЦеплені варіанти важкої послідовності Теоретичне РІИМІх для «УНІ: 6.80/48791,87 ЕУКУУЕБЗОССЬУОРССВІКІЗСУУБСЕТЕЗМУМУМИУВОАРСКСПЕМУАОТВІКООМУАТНУКЕЗУКСЕЕТІБВО ЕКаВУХТОММЗБВАЕОТСІТСТМИЕрУМСОСТТУТУЗЗАЗТКСРОУЕРЦАРСЯВЯТОЕВСТААЦОСІИКОТЕРЕ РУТУВИМ5САСТОСУНТЕРАУТОЗ5СІУ8155УУТУРОЗБІСТКТУТСМУРНКРІМНТКУЮКВУЕБКУСРРСРРСР АРЕРІССРОУЕБЕРРКРКОТІМІЗЕТРЕУТСУУУРУВОЕОРЕУОКМИУУрСУЄВУНКМАКТКРЕЕЕОЕМОТУВУУ ВУ ІТУБНООТММСКЕУКСКУВМКОГРОЗЗІЕКТІЗКАКСОРВЕРОУУТІРРООКБЕМТКМОУВЬТСЬУКОРУРОРІАУЕ МЕБМСОРЕКМУКТТРРУПРОРОЗЕЕЦУЗВІТУРКОВМИОЕОМУКЗСУУМНЕАСНКНУТОКЗОЬВЬСК (8ЕО ІЗ МО:14)
ФІГ. 28 Повна амінокислотна послідовність варіантів важкого ланцюга та легкого ланцюга СМ Щеплепі варіанти важкої послідовності Теоретичне рІ/Мух для УНІ: 0.51 /48832.88 ЕУОУУЕВОССІМОРОСВІКІЗСУУЗСЕТЕЗМУНУМИУКОАРОКСЬЕМУВОІВЬКООМУАТНУКЕЗУКСВЕТІЗВО О5КМБ5УУТОММУІВАЕОТАІУУСТМШЕОХИСОСТТУТУЗБАБТКОРЗУЕРГСАРСЯВОТЗЕЗТААСССІУКОХЕРЕ РУТУЗИМЗСАГТЗСУНТЕРАУГОБЗСІУ5Ц55УУТУРЗЄВІСТКТУТСМУЗНКРІМТКУРКВУЕЗКУСРРСРЕСР АРЕЕІСОСРЗУЕКБЕРРКРКОТІМІЗВТРЕУТСУМУУрУВОВЕОРЕМОЕМИТУРСУВУНМАКТКРЕЕЕОЕМВТХЕУУВУ ГТУПНОРИТМОКЕУКСКУЗМКСЬРОБЗІЕКТІЗКАКСОРВЕРОУУТІРРБОБЕМТКМОУЗІТСІУКСЕУРВОІЇАУЕ МЕЗМСОРЕММУКТТРРУТОБОСЗЕКТУЗВІТУОКОВИОЕСМУКЗСЗУМНЕВІНМНУТОКВІ ВІСК (550 10 МО:15) Повна амінокислотна послідовність варіантів важкего ланцюга та легкого ланцюга СМ еплені варіанти важкої послідовності Теоретичне рі/Муу для «У НА: 6.51 /48860,93 ЕУОПУЕВОССТЬУОРОСЗІКІВСУУВСЕТЕВМУКУМИУВОАРСКОТЕНУВОЇВІКВОМУАТНУКБЕВУКСВЕТІЗВО ЗКУ ТОММЗІВАКЕОТАЇУУСТИНЕОУЙСОСТТУТУЗ5АЯТКОРОУЕРІАРСЯВОТВЕБТААТОСІЬУКОУЕРЕ РУТУБИМУЗСАГТЗСУНТЕРАУТОЗІСЬЇІЗІ5ЗУУТУРОЗВІСТКТУТСМУРНКРОЬМТКУРКНУЕЗКУСРРОРРСР АРЕКІССРОУКЦСЕРРЕРКОТІМІБЗВТРЕУТСУМУРУВОКОРЕМОЕМИТУОСУЕУНМАКТКРЕБЕОРКОТуВУУБУ ТУПНООТІМСКЕУКСКУЗМКСЬРУЗБІЕКТІСКАКСОРВЕРОМУУТІ РРЕОБЕМТКМОУВЬТСЬУКОСЕГУРЕСІАХЕ МЕЯМООРЕММУКТТРРУПОВОСЕЕЕБУЗВСТУрКВВМОЕСМУК5СЗУМНЕАЬНМНУТОКОІБІ БСК (БЕО І МО:16)
ФІГ. 20
Повна амінокислотна послідовність варіантів важкого ланцюга та легкого ланцюга СМ Сгайей Гісп Сваіп Магіапі: Теоретичне рі/Мух для 11: 6.08 / 24100,81 0ІУБТО5РОЗІАУЗІСЕВАТІЗСВАЗОЗУЯТОВУБУІ НИТООКРООРРКІЦІКУАБМПЕЗСУРОВЕЗОО5СТОЕ ТІЬМІНРЬЕКЕЕОБАТУУСННЯМЕІРІТЕСОСТКОЕІКЕТУААРУЗУВКІЕРРЗОКОГКЗСТАЗУУСТЬММЕУРВЕАКУ ОМКУОМАБОССМеОКЕУТЕОрЗКОВЗТУБЬЗЕТІТІЗКАСХЕКНКУТАСЕУТНОСІ55РУТКОЕМАСЕС (5ЕО І МО:17)
ФІГ.ОЕ Повна амінокислотна послідовність варіантів важкого ланцюга та легкого ланцюга С»М Щеплені варіанти, легкої послідовності Теоретичне рІ/Міу; для «У12: 6.33 / 24068.81 РІУБТОЗРОЗІАУЗИСЕВАТІССВАБОСУЗТОВУЗХІНИХООКРООРРКЦІІКУАБМІЕБСУРОВЕБОСЯСяСТОК ТІЬМІНЕСЕРЕОСКАТУУСННОМЕІТРТЕСОСТКІКІКЕТУААРОУКІЕРРООВОКООТАЗУУСІММЕХЕВЕАКУ ОЯКУПМАТОоВСМБОЕВУТЕОорОКОотУОБТТІЗКАОХЕКНКУХАСЕУТНОСІЗОРУТКВЕМНВОКС (5ЕО ІЮ МО:18)
ФІГ. 2Е Повна амінокислотна послідовність варіантів важкого ланцюга та легкого ланцюга СМ Щаеплені варіанти легкої послідовності Теоретичне рі/Мух для яУ13: 6.57 / 23994.72 ПІУГТОЗРОЗБАХУВІСЕВАТІЗСВАБОВУЄТОВУЗУІНИХООКРООРРКІІКУАБМЦЕСУРЕВЕБСВОБОСТОК ТЬТІЗСІОРЕОЕАТУУСННЯЧЕІРІТЕСОСТКОЕІКВТУААРОУРІЕРРООЕОТКОСТАБУУСЬСММЕТРАКАКУ ОМКУМАГОЗСМЗОЕЗУТЕООЗКОСТУБІЯЗТІТЬЗКАПУЕКНКУХАСЕУТНОСЬВВРУТКБЕМВСЕС (БЕО ІС МО:19)
ФІГ.2О Повна амінокислотна послідовність варіантів важкого ланцюга та легкого ланцюга СМ Щеплені варіанти легкої послідовності Теоретичне рІ/Му; для еУ14: 6.57 / 24012.76 РІУМТОЗРОЗІАУВІСЕВАТІБСВАВОБУБІВВУБУІННУООКРООРРКЮІІКУАВМОЕБОУРаВЕБОВОСЯСТОЕ ТІТІЕВІОРЕОРАТУХСНИОИЕТРІТЕСОСТКЬКІКАТУААРЗУКТЕРРООКОЇКОСТАВУУСЬСММЕУРВЕАКУ ОМКУСМАСОБСМЗОВЗУТКОреКОовТуУВІЗТТІБКАПУЕКНКУТАСЕУТНОССОБРУТКВЕМНОСЕС (8ЕО І МО:20)
ФІГ. НН
Дані транзієнтної експресії для гуманізованих варіантів Цикл 1 (мкг/мл) Цикл 2 (мкг/мл) 1 я 10 тт НС Но тт новизни пон нти нини ее
ФІГ. З
Аналіз активності Кей тастае о ' Ся рев | вв | о»
ФІГ. 4
Кінетика зв'язування антитіла до людського тау Константа Константа Гуманізований - ДИ варі асоціації Ка дисоціації Ка | дфінність Ко (М) аріант (1/Мсек) (1/сек)
7.21Е--05 1.А3Е-03 1.99Е-09 УНІ/Л/К2 3.02Е-05 6.21Е-О4 2.06Е-09 МНІД/КА 2.87Е-405 5,99Е-04 2.09Е-09 УН2Л/КЗ 2.73Е405 6.08Е-04 2.23Е-09 УН?ЛКА 2.80ЕО5 5.93Е-О4 2.13Е-09 УНЗЛ/КЗ 2.16Е-4-05 5.15Е-О4 1.88Е-09 УНнЗ/ЛикА 2.65Е405 5.07Е-04 1.92Е-09
ФІТ. 5 Зв'язування гуманізованого антитіла Тау сендвіч-ІФА 03152013 -- ХИМера з -кк- МНІЛуУКІ еЗ є - МН1ЛУК2 е ДЕ, - МНОЛуК2 2 ра --- МНАлМКЗ в ря -е- Контроль Ід 1 зала са й -в т - з
0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 (осіконцентрація тау (нг/мл)
ФІГ. 6
, : - : Зв'язування гуманізованих антитіл з людським тау у головному мозку миші та лодини 00 й в се и о ЗИ ИН ши клен НН Миша дикого типу 4-місячна миша РЗО15 /9-місячна миша РЗ30О15 З в и ту ЕНЕВО С ВВ в кН пе нн с пе А не ПО ен Ем ВЕК сен и В м Бе давня я я кох і с а а о ни і с її г п 00 Шини ННЯ ши с. Людина з ПНА (штам мНІВ.5) Тканина Ме 2 кори людини з ХА Зв'язування химери (позитивний контроль) в мишиній та людській тканинах
ФІГ. 7А ПИ ТИВИ еВ НВО 0 ние о еВ КВ. 0 Вари оо кет о хом сне Оея ше 5 и:
і. Й 0: ан п с Б и ФюЩфДЦДоЦ( Фі с г с с п. її. - Ен в нн ШІ З Кв Пе я о Миша дикоготипу /4-місячна миша РЗО15 9-місячна миша РЗО15 ЗК Те екон у и КО, - я і. кова о он но ее г клон вн п Тканина Мо 2 кори людини з ХА ; а Зв'язування неслецифічного людського ІдО4 (негативний контроль) в м їм мишиній та людській тканинах
ФІГ. ТВ а ЕН с у її А. і ВІ ШК: ЗНИЩ НЕ кон нн о о ос НИ: З НН й жк о НН ее ШИ ІННИ БОШ г: с а ВЕНИ. п . ди ЕЕ. З о ШИ и НН ше а НН с Си В м Я як и НО а НИ о а я ви не і НЄ фс М юн ко. що ОА НН по Ки 5 Мишща дикого типу й-місячна миша РЗО15 9-місячна миша РЗО15 Ба и ни я с Ен В ЕК я о ен ні ен ОО о. о б. про ШК а ен В ик Кн У ще «5, дек нс й о на той п сн 0 ож а я во зи от с АД ж ЕКО Б. З вай я у пи о. сх с Ак де шн иа Кок У ше карта р кн шо Ша мишки 33 Людина з ПНП Тканина Мо 2 кори людини з ХА чл рі Зв'язування МНІ/УК2 в мишиній та людській тканинах
ФІГ. 7С и а и ОН в ни У п п кни що ходжу Ж о ш- В М МНВК я одновиу ВЙ адя - «ШИ Ям в ня СК В й ли нн ши кох о НЕ с вве й; й я кот ЕВ р ек Зоре о Ви чне . ЕХ п Ме аку СВО ВВ от я ВАВ НО ОК шк і 5. Як ше шах з. й п а а А ЛИЙ ; НИ С Миша дикого типу 4-місячна миша РЗО15 9-місячна миша РЗО15 Доном од о еще ве ОККО Кене ходою ККЗ КО о ОН ОК я сов р и р-н. 1. ша и ї її: не о Кн шо п нн. Зв о п Б с о с М о оон о пи о ж о о ие В В ще о я с 5 Б 6 а Не І и а пи я ШУ Ше у . ''і В МИ МКС МИНА ТРК ЕК КК МК Мис Людина з ПНП Тканина Мо 2 кори людини з ХА - м й Зв'язування МНІ1/УКЗ в мишиній та людській тканинах
ФІГ. 70 бо во пою МОН повен ВН ян и а Б ж А В НН бо я : с ШЕ шо чи. ши що Є у вв с АК. сов у КН п нн и кн нн ва НИ КИ шиті: ВОК ВО: о З С КІ БАХ Еш її й і. а ДК Ж побу мо МКК ЕТ М СО АННИ БУМ Миша дикого типу 4-місячна миша РЗО15 9-місячна миша 23015 Ше В и КЕ В й: 5 ша п с о се дк А и Шо х ІН А о с
М. с її. СЕ: | Б Ох шо о о х В ай ОН Я Ме Ки ЕН и ЗВАНИМ и УК о. сви НО, Бе ан з Її г о НН, ММА ЗА іх ПУ ШЕ Ке иИ НЕ ши о я с Людина з ПНП Тканина Ме 2 кори людини з ХА 7 и -ч Зв'язування МН2/УК2 в мишиній та людській тканинах
ФІГ. 7Е У в о 0 Пе с Не НИ в вза й и С ШУ МО Ваші ах що зей Ех с Що шт п: и ї а р НА го м ши г «ле нн: Бк ві Ну к 3 БО во з ки ДЕ од он Я ванни і ст о МИНЕ ОНИ - Миша дикого типу 4-місячна миша Р3015 /9-місячна миша РЗО15 дк зне писк норок у рамами ен нн и Я оф с и не и ИН о: ен п В ННЯ я. по Б пло ДН З єни вищ ей кн кв ше ЕР З се и ЖЕ І ос З ШО а я сша НА Кс
З. в ЗВ ЗО, т о во. о МЕ ННЯ ПОСАДИ ОВ х ші ший я пн ша аа і пн о ев а Людина з ПНП Тканина Мо 2 кори людини з ХА - м Зв'язування МН2/УКЗ в мишиній та людській тканинах
ФІТ. 7Е п и о А, ОВ с нн, ВЕ НН. В ЕЕ 5 Ам і о. - с у В М. ще ЕЕ в МНН В В НН «рт ВИХ с их тА оон ОН о ве шодо ще ШЕ КК В КІ Йой Є. ВЕН Й іт Му 0. КЗ ОК Я Я та КК Га НА НЕ, «и ут Миша дикого типу 4-місячна миша РЗО15 9-місячна миша РЗО15 їй й с о. ше Й и 5 ЖЕ деяншЕ о и с в а» с й я ШИ п вн нн ФОН о М пе НЯ он ДН сьо З я о ве деле
6. і її с ну Ве Кн в А в НОЯ оКЖ сих І ЛЕК ВЕ ох с Людина з ПНП Тканина Ме 2 кори людини з ХА Х -к ГИ Зв'язування МНЗ/УК2 в мишиній та людській тканинах
ФІГ. 70 В о о ВН НН ак ВИНИ - З Пов так ї КАН й Миша дикого типу 4-місячна миша РЗО15 /9-місячна миша РЗО15 нн и пн с М й - Б - З 0. в о о в и ик я в є п п . Ме ОХ п в и Кф о Пс вих ККУ о Ок сш З я Я ам Бе п Людина з ПНП Тканина Ме 2 кори людини з ХА , м їм Зв'язування МНЗ/УКЗ в мишиній та людській тканинах
ФІГ. ЛК
Картування епітопа у Н/8.5 1 10 20 30 40 50 60 Людськийтау МАЕРКОЕКЕУМЕ ПНАСТУСЬСОВКрОССТТМНОВ ОЇВ СРТОАСІКЕОРЬОТРТЕОСБЕЕРСО (5КО Ід НО:71) резусіяванський макак пеки ОНАСТУСІСОЕКО ДЕС ТМПОЮОЕСОТОАСЬКЕБРІОТРІДЕРСВЕВНЄ (580 10 МНО:22) Миша КАЇДРАОЕ ЮТЕРА - - - -- -- - - - - ОБУ ТЕ ЦОРО є с ріМрів|ськ є 5 РІРОРІРІА до біде Рс (880 10 НО:23) Ж СТІ ІІНТІЙИТТИ ТТ ІТТ ТІ ІТІТІІІІтЕсІ2 ПаНЯМ 0о0оялопллллллпплаллд пллдплдллядллдтлІді Тац 1-32 й аркан вн ніна кінні нанні нн нінінінйкін ташов35 Дпроясстнлстсняснтт сотні НЕ аку - й Їнттл ПІ. 1т птн лі та
ФІГ. 8
НОВ. ї СаМ-8Е12 "роосут (ЗЕ ІО МО:9) НУг 5 |С2М-8Е12
:. (Сигнал | (Сигнал Реріаррата. (ПОСЛІДОВНІСТЬ ідентафі МІТКА | зв'язу- | зв'язу- вання) | вання) РЕР 2875800 | ОНАСТУСІ ОНКО БЕ О МО:24 РЕР 2875801 | ОНАСТУСІСААКрОС | 5ЕОІРМО25 | ПМАА | 52 | 90 РЕР 2875802 | НАСТУСІСРРКРОСО 5Ес0ІрМмОо26 | м | 63 1 65. РЕР 2875803 | НАСТУСІЗрААСОСО 500 МмОо27 | НМАА | 51 | 65 РЕР 2875804 | АСТУСІСОТКОСОбУ 5ЕО ІЮ МО:28 РЕР 2875805 | АСТУСІ СОРААОССУ 5010 МО29 | ПИМАА РЕР 2875806 | СТУС зроАКроосут 5ЕСИО МО:3О 2638 РЕР 2875807 | СТУСІСОККААССУТ 5ЕСІЮ МО:31 | ШМАА РЕР 2875808 | ТусісСОвКроОвсуУТМ 5ЕОІЮМмОоЗ2 | М | 2640 | 2588 РЕ о875ВОв | ТУСІСОВКОААСУТМ | 5ЕООМОЗ3 | ОМАА | 2814 | 2755 РЕР 2875810 1 Усі ЗреКразсуУтМнН 8ЗЕСИО МО:34 2671
РЕР. 2875811 | МОГ ООВККОСААУТМН ЗЕОІО МО:35 | ПМАА | 1780 1876 РЕР 2875812 | СІсрякроссутмна ЕС Ю МО:36
РЕР.2875813 | І СрККрОВААТМНО ЗЕОІ0ОМмОоЗ37 | ПМАА | 80 | е5 і РЕР 2875814 | гоОвКрОСуТМНОЮ 5ЕО ТО МО:38 2835 2749 РЕР 2875815 | Ц(ЗОВКрРОСОСААМНОЮ 5ЕОІОМОЗ9 | ШМААЇ 89 | 99 росоУТМНОгО РЕР 2875817 | СОККООВОУААНОГО ЗЕОІЮ МОМІ І ШМАА | 2635 РЕР 2875818 | ОВКОООСУТМНОСОЕ 5ЕО1ІО МО:42 2692 РЕР 2875819 | ОБКрОССУТААЛОСОЄ ЗЕОО МО: 43 2585 россутМноаєс РЕР 2875821 | ВКрРОССУТМААРОЄС БЕОІОМОМ5 | ШМАА | 2713 2791
РЕР.2875822 | КОООСУТМНОГРОЕСО БЕ ИО мОа6 2680
РЕР. 2875824 | РОВОХІМНОРОЕСОТ 5ЕО1О МО:48 2677 26548 РЕР, 2875825 | БОССУТМНОААЕСОТ 5ЕСІО МОУ | ПМАА | 3707 | 2585. РЕР 2875826 ! ОбСУТМНОрОєСОТО ЗЕ О МО:50
РЕР.2875827 | ОБСУТМНОЮААСОТО БЕОІЮ МО51 | ОМАА РЕР 2875828 | ОСУТМНОСОЕСОТОА зЕоіМмоБа | НМ о | 109 | мо РЕР 2875829 | СЗУТМНОВСОААБТОА ЗЕО ТО МО:53 РЕР 2875830 | СУТМНОРОЕСОТОАС 5ЕО ІЮ МО:54
ФІГ. 9
Зв'язування гуманізованого анти-тау антитіла з тау макака-резуса -В- Людський тау, С»М-8Е12 -й- Людський тау, НІ8.5 -ійре Дюдоський тау, НІв8.7 З -щ- Тау макака-резуса, С2М-8Е12 «фен Тау макака-резуса, НІ8.5 - «фа» Тау макака-резуса, НІВ. 7 о ю с 2 с о Кока 0 1 2 З 4 ов (Тау, нг/мл)
ФІГ. 10
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462018436P | 2014-06-27 | 2014-06-27 | |
| US201462080903P | 2014-11-17 | 2014-11-17 | |
| US201562170036P | 2015-06-02 | 2015-06-02 | |
| PCT/US2015/038002 WO2015200806A2 (en) | 2014-06-27 | 2015-06-26 | Humanized anti-tau antibodies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA122771C2 true UA122771C2 (uk) | 2021-01-06 |
Family
ID=54938957
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAA201700707A UA122771C2 (uk) | 2014-06-27 | 2015-06-26 | Гуманізоване анти-taу антитіло |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9957317B2 (uk) |
| EP (1) | EP3182987B1 (uk) |
| JP (3) | JP6626892B2 (uk) |
| KR (1) | KR102431596B1 (uk) |
| CN (1) | CN106659759B (uk) |
| AU (2) | AU2015279643B2 (uk) |
| BR (1) | BR112016030686A2 (uk) |
| CA (2) | CA2953809C (uk) |
| CL (1) | CL2016003346A1 (uk) |
| CR (1) | CR20170026A (uk) |
| DO (1) | DOP2016000335A (uk) |
| EC (1) | ECSP17005649A (uk) |
| ES (1) | ES2959528T3 (uk) |
| IL (3) | IL249734B (uk) |
| MA (1) | MA40229A (uk) |
| MX (2) | MX2017000205A (uk) |
| MY (1) | MY184540A (uk) |
| NZ (1) | NZ727919A (uk) |
| PE (1) | PE20170665A1 (uk) |
| PH (2) | PH12016502608A1 (uk) |
| RU (1) | RU2743152C2 (uk) |
| SG (2) | SG11201610862VA (uk) |
| TW (3) | TW202136296A (uk) |
| UA (1) | UA122771C2 (uk) |
| UY (1) | UY36194A (uk) |
| WO (1) | WO2015200806A2 (uk) |
| ZA (1) | ZA201608875B (uk) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2877397A1 (en) | 2012-07-03 | 2014-01-09 | Washington University | Antibodies to tau |
| CU24446B1 (es) | 2013-03-13 | 2019-10-04 | Prothena Biosciences Ltd | Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a tau |
| TW202136296A (zh) | 2014-06-27 | 2021-10-01 | 美商Ｃ２Ｎ醫療診斷有限責任公司 | 人類化抗-tau抗體 |
| MX2017015464A (es) | 2015-06-05 | 2018-03-28 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-tau y metodos de uso. |
| US20200030445A1 (en) * | 2015-06-12 | 2020-01-30 | C2N Diagnostics, Llc | Stable formulations of humanized anti-tau antibody |
| EP4124362A1 (en) | 2016-04-18 | 2023-02-01 | Faron Pharmaceuticals OY | Methods of monitoring a modulation of m2 macrophages into m1 macrophages |
| EP3452508A1 (en) | 2016-05-02 | 2019-03-13 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
| JP7170316B2 (ja) * | 2016-05-02 | 2022-11-14 | プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド | タウ免疫療法 |
| CU24538B1 (es) | 2016-05-02 | 2021-08-06 | Prothena Biosciences Ltd | Anticuerpos monoclonales que compiten por unirse a tau humano con el anticuerpo 16g7 |
| US10570196B2 (en) * | 2016-07-20 | 2020-02-25 | Anahit Ghochikyan | Humanized anti-tau antibodies and compositions for and methods of making and using in treatment, diagnosis and monitoring of tauopathies |
| IL300982B1 (en) * | 2016-09-10 | 2024-04-01 | Yeda Res & Dev | Reduction of the level of regulatory T cells or their activity for the treatment of diseases and damages in the central nervous system |
| KR20190054094A (ko) | 2016-09-27 | 2019-05-21 | 세로 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 키메라 포식작용 수용체 분자 |
| KR20230146126A (ko) | 2016-12-07 | 2023-10-18 | 제넨테크, 인크. | 항-타우 항체 및 이의 이용 방법 |
| JP2020511937A (ja) | 2016-12-07 | 2020-04-23 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗ｔａｕ抗体及び使用方法 |
| CA3053379A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | Denali Therapeutics Inc. | Anti-tau antibodies and methods of use thereof |
| JP2018139530A (ja) | 2017-02-27 | 2018-09-13 | 帝人ファーマ株式会社 | 認知症治療又は予防のためのヒト化抗体及びその製造方法、並びにそれを用いた認知症治療剤又は予防剤 |
| EP3601337A1 (en) | 2017-03-28 | 2020-02-05 | Genentech, Inc. | Methods of treating neurodegenerative diseases |
| SG11201910066QA (en) | 2017-05-02 | 2019-11-28 | Prothena Biosciences Ltd | Antibodies recognizing tau |
| EP3688032A1 (en) | 2017-09-26 | 2020-08-05 | Cero Therapeutics, Inc. | Chimeric engulfment receptor molecules and methods of use |
| MX2020003581A (es) | 2017-10-02 | 2020-07-22 | Merck Sharp & Dohme | Compuestos monobactamicos cromanos para el tratamiento de infecciones bacterianas. |
| MX2020003857A (es) | 2017-10-16 | 2021-01-08 | Eisai R&D Man Co Ltd | Anticuerpos anti-tau y uso de los mismos. |
| AU2019237252A1 (en) * | 2018-03-23 | 2020-10-22 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Stable aqueous anti-tau antibody formulations |
| WO2019191332A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Cero Therapeutics, Inc. | Chimeric engulfment receptors and uses thereof for neurodegenerative diseases |
| US11987631B2 (en) | 2018-08-01 | 2024-05-21 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Anti-BTN3A antibodies and their use in treating cancer or infectious disorders |
| WO2020180819A1 (en) | 2019-03-03 | 2020-09-10 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
| WO2021010712A1 (ko) * | 2019-07-15 | 2021-01-21 | 주식회사 아델 | 항-타우 항체 및 이의 용도 |
| AU2020325770B2 (en) | 2019-08-06 | 2022-08-25 | Aprinoia Therapeutics Limited | Antibodies that bind to pathological tau species and uses thereof |
| MX2022016322A (es) | 2020-06-25 | 2023-01-24 | Merck Sharp & Dohme Llc | Anticuerpos de alta afinidad dirigidos a tau fosforilada en la serina 413. |
| TW202328177A (zh) | 2021-08-27 | 2023-07-16 | 美商建南德克公司 | 治療ｔａｕ病理學之方法 |
| WO2023041805A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for improving the efficacy of hdac inhibitor therapy and predicting the response to treatment with hdac inhibitor |
| WO2023092004A1 (en) | 2021-11-17 | 2023-05-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders |
| WO2023178049A1 (en) | 2022-03-14 | 2023-09-21 | Genentech, Inc. | Predicting neurodegenerative diseases based on speech analyses |
| WO2023250326A1 (en) | 2022-06-21 | 2023-12-28 | Genentech, Inc. | Detecting longitudinal progression of alzheimer's disease (ad) based on speech analyses |
| CN115724970B (zh) * | 2022-07-27 | 2023-10-20 | 生工生物工程（上海）股份有限公司 | 一种特异性结合e-cad多肽的结合蛋白及其应用 |
| CN116375857A (zh) * | 2023-03-30 | 2023-07-04 | 天津鸿宇泰生物科技有限公司 | 一种用于检测Tau蛋白的单链抗体及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (83)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK546988A (da) | 1987-10-02 | 1989-04-03 | Du Pont | Immunobestemmelse og reagenssaet til anvendesle herved |
| WO1993003369A1 (en) | 1991-08-01 | 1993-02-18 | Voorheis Paul H | Diagnostic method for alzheimer's disease |
| US5733734A (en) | 1991-08-14 | 1998-03-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of screening for Alzheimer's disease or disease associated with the accumulation of paired helical filaments |
| WO1993008302A1 (en) | 1991-10-25 | 1993-04-29 | Itt Automotive Europe Gmbh | Monoclonal antibodies directed against the microtubule-associated protein tau |
| US5266331A (en) | 1991-11-27 | 1993-11-30 | Euroceltique, S.A. | Controlled release oxycodone compositions |
| DE69233767D1 (de) | 1991-12-06 | 2009-09-17 | Max Planck Gesellschaft | Verwendung von Protein-Kinasen zur Diagnose und Behandlung der Alzheimer-Krankheit |
| US7408027B1 (en) | 1991-12-06 | 2008-08-05 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenchaften | Tools for the diagnosis and treatment of Alzheimer's disease |
| JPH06239899A (ja) | 1993-02-12 | 1994-08-30 | Teijin Ltd | ヒトタウ蛋白に対する抗体、並びに該抗体を利用する体液中のヒトタウ蛋白の測定方法 |
| US6121003A (en) | 1994-07-29 | 2000-09-19 | Innogentics N.V. | Monoclonal antibodies specific for an epitope of phosphorylated tau, and their use |
| WO1997034145A1 (fr) | 1996-03-13 | 1997-09-18 | Mitsubishi Chemical Corporation | Anticorps a proteine tau antiphosphorylee et procede de detection de la maladie d'alzheimer l'utilisant |
| WO1998022120A1 (en) | 1996-11-19 | 1998-05-28 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease |
| US6797478B1 (en) | 1998-03-05 | 2004-09-28 | University Of Cincinnati | Method of detecting axonal damage, from associated disease states using tau monoclonal antibodies |
| JP4624559B2 (ja) | 1998-09-08 | 2011-02-02 | イノジェネティックス・ナムローゼ・フェンノートシャップ | 初期ｃｎｓダメージのマーカーとしてのタウ |
| US6972125B2 (en) * | 1999-02-12 | 2005-12-06 | Genetics Institute, Llc | Humanized immunoglobulin reactive with B7-2 and methods of treatment therewith |
| US6589746B1 (en) | 1999-10-21 | 2003-07-08 | University Of Cincinnati | Method of detecting axonally-derived protein tau in patients with traumatic CNS injury |
| JP4582874B2 (ja) | 2000-07-13 | 2010-11-17 | 富士通株式会社 | 偏波モード分散補償方法および偏波モード分散補償装置 |
| AT500379B8 (de) * | 2001-02-02 | 2009-08-15 | Axon Neuroscience | Tau-proteine |
| AR035119A1 (es) | 2001-08-16 | 2004-04-14 | Lilly Co Eli | Anticuerpos humanos antagonistas anti-htnfsf13b |
| EP1464702A4 (en) | 2001-12-28 | 2005-09-21 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | METHOD FOR PROTEIN STABILIZATION |
| PT1507556T (pt) | 2002-05-02 | 2016-09-28 | Wyeth Holdings Llc | Conjugados de derivado da caliqueamicina - transportador |
| GB0210121D0 (en) | 2002-05-02 | 2002-06-12 | Celltech R&D Ltd | Biological products |
| AU2003246664B2 (en) | 2002-07-12 | 2007-06-14 | Axon Neuroscience Se | Transgenic animal expressing Alzheimer's tau protein |
| ES2352668T3 (es) | 2002-08-14 | 2011-02-22 | Mitsubishi Chemical Medience Corporation | Anticuerpo específico para una proteína tau del sistema nervioso central. |
| FI20030652A0 (fi) | 2003-04-30 | 2003-04-30 | Susann Eriksson | Parannettu immunomääritys |
| AU2004266159A1 (en) | 2003-08-22 | 2005-03-03 | Biogen Idec Ma Inc. | Improved antibodies having altered effector function and methods for making the same |
| ATE440949T1 (de) * | 2004-01-30 | 2009-09-15 | Maxygen Holdings Ltd | Gesteuertes überlesen von stopcodons |
| US7238788B2 (en) | 2004-02-18 | 2007-07-03 | University Of Iowa Foundation | Antibodies to phosphorylated tau, methods of making and methods of use |
| WO2006088281A1 (en) | 2005-02-19 | 2006-08-24 | Peoplebio, Inc. | Method for differentially detecting multimeric form from monomeric form of multimer-forming polypeptides |
| WO2007019273A2 (en) | 2005-08-04 | 2007-02-15 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Phosphorylation of tau by abl |
| ES2321996B1 (es) | 2006-01-26 | 2010-03-05 | Consejo Superior Investig. Cientificas | Uso de compuestos que se unen al dominio de union a microtubulos de tau en la elaboracion de composiciones farmaceuticas, dichas composiciones farmaceuticas y su aplicacion en el tratamiento de tauopatias. |
| US8012936B2 (en) | 2006-03-29 | 2011-09-06 | New York University | Tau fragments for immunotherapy |
| ES2673822T3 (es) * | 2006-07-18 | 2018-06-25 | Sanofi | Anticuerpo antagonista contra EphA2 para el tratamiento de cáncer |
| US20080220449A1 (en) | 2007-02-08 | 2008-09-11 | Oligomerix, Inc. | Biomarkers and assays for Alzheimer's disease |
| PT2276485E (pt) | 2008-04-24 | 2014-10-20 | Bristol Myers Squibb Co | Utilização de epotilona d no tratamento de doenças tauassociadas que compreendem a doença de alzheimer |
| CN101307108B (zh) | 2008-06-25 | 2012-04-04 | 南京川博生物技术有限公司 | 抗磷酸化Tau蛋白抗体及其在AD症异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途 |
| KR101814408B1 (ko) * | 2008-09-26 | 2018-01-04 | 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. | 인간 항-ｐｄ-１, ｐｄ-ｌ１, 및 ｐｄ-ｌ2 항체 및 그의 용도 |
| US9605054B2 (en) | 2009-02-23 | 2017-03-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Composition and method for treating a tauopathy |
| US20110305706A1 (en) | 2009-02-23 | 2011-12-15 | Scott Thomas Brady | Compositions and Methods for Treating a Disease Mediated by Soluble Oligomeric Amyloid Beta |
| UA107571C2 (xx) | 2009-04-03 | 2015-01-26 | Фармацевтична композиція | |
| WO2010129674A2 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | New York University | Immunotherapy targeting of the shared abnormal conformational state of amyloidogenic peptides/proteins |
| US8609097B2 (en) * | 2009-06-10 | 2013-12-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Use of an anti-Tau pS422 antibody for the treatment of brain diseases |
| JP5917394B2 (ja) | 2009-06-10 | 2016-05-11 | ニューヨーク・ユニバーシティ | 病理学的タウタンパク質の免疫学的標的化方法 |
| WO2010146792A1 (ja) | 2009-06-17 | 2010-12-23 | 株式会社フジクラ | マルチクラッド光ファイバ、光ファイバモジュール、ファイバレーザ及びファイバアンプ |
| KR20130127547A (ko) | 2009-07-30 | 2013-11-22 | 화이자 백신스 엘엘씨 | 항원성 타우 펩타이드 및 이의 용도 |
| WO2011026031A1 (en) | 2009-08-28 | 2011-03-03 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Antibodies that bind tau oligomers |
| WO2011045166A1 (en) | 2009-09-24 | 2011-04-21 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Fkbp52-tau interaction as a novel therapeutical target for treating the neurological disorders involving tau dysfunction |
| WO2011109112A2 (en) | 2010-03-05 | 2011-09-09 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Method of detecting tau protein and tau fragments in serum |
| CN102939305B (zh) * | 2010-04-08 | 2016-08-17 | Jn生物科学有限责任公司 | 对cd122的抗体 |
| AU2013205313B2 (en) | 2010-10-07 | 2016-05-19 | Ac Immune S.A. | Phosphospecific antibodies recognising tau |
| PL2625198T3 (pl) | 2010-10-07 | 2015-12-31 | Ac Immune Sa | Przeciwciała rozpoznające fosfo-tau |
| CA2813493C (en) * | 2010-10-11 | 2019-07-09 | University Of Zurich | Human anti-tau antibodies |
| US8703137B2 (en) | 2011-01-31 | 2014-04-22 | Intellect Neurosciences Inc. | Treatment of tauopathies |
| WO2012149365A2 (en) | 2011-04-27 | 2012-11-01 | Northwestern University | Antibodies selective for pathological tau dimers and prefibrillar pathological tau oligomers and their uses in treatment, diagnosis and monitoring of tauopathies |
| US20120321594A1 (en) | 2011-05-06 | 2012-12-20 | New York University | Methods of controlling axon or dendrite development of neuronal cells |
| EP2709728B1 (en) | 2011-05-20 | 2019-01-23 | Oligomerix, Inc. | Tau protease methods of use |
| GB201111361D0 (en) | 2011-07-04 | 2011-08-17 | Nordic Bioscience As | Biochemical markers for neurodegenerative conditions |
| GB201112056D0 (en) | 2011-07-14 | 2011-08-31 | Univ Leuven Kath | Antibodies |
| WO2013012811A2 (en) | 2011-07-19 | 2013-01-24 | New York University | Immunotherapeutic modulation of amyloidogenic disease using non-fibrillogenic, non-amyloidogenic polymerized proteins and peptides |
| CN109265543B (zh) | 2011-09-19 | 2022-04-26 | 阿克松神经***科学公司 | 阿尔茨海默病中的tau蛋白介导病变的基于蛋白质的疗法和诊断 |
| BR122021017560B1 (pt) | 2011-10-07 | 2023-03-07 | Katholieke Universiteit Leuven | Anticorpo, polinucleotídeo, composição farmacêutica, usos de um anticorpo, método in vitro, método de detecção post-mortem de multimêros do fosfo-tau, método de detecção in vitro da formação de um complexo imunológico, kits de teste, linhagem celular isolada e método de detecção in vitro de multimêros de fosfo-tau |
| CA2853100A1 (en) | 2011-10-24 | 2013-05-02 | Intellect Neurosciences, Inc. | Compositions and methods for treatment of proteinopathies |
| SG11201401319XA (en) * | 2011-10-27 | 2014-06-27 | Nkt Therapeutics Inc | Humanized antibodies to inkt |
| EA027975B1 (ru) | 2011-12-20 | 2017-09-29 | Янссен Байотек, Инк. | Анти-псф-тау-антитела и их применение |
| US20130251731A1 (en) * | 2012-03-22 | 2013-09-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Tau Acetylation in the Pathogenesis of Alzheimers Disease and Other Related Tauopathies |
| CN104520322B (zh) | 2012-04-05 | 2019-11-15 | Ac免疫有限公司 | 人源化tau抗体 |
| WO2013177104A2 (en) | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Felder Mitchell S | Treatment for tauopathies |
| TWI700296B (zh) | 2012-05-31 | 2020-08-01 | 公立大學法人大阪市立大學 | 失智症治療劑或預防劑 |
| CA2877397A1 (en) * | 2012-07-03 | 2014-01-09 | Washington University | Antibodies to tau |
| MY176838A (en) * | 2012-08-16 | 2020-08-24 | Ipierian Inc | Methods of treating a tauopathy |
| US20140056901A1 (en) | 2012-08-21 | 2014-02-27 | The Institute For Molecular Medicine | Anti-tau antibodies and compositions for and methods of making and using in treatment, diagnosis and monitoring of tauopathies |
| CA2885924C (en) | 2012-08-21 | 2022-12-13 | Institute For Molecular Medicine, Inc. | Compositions and methods related to diseases associated with deposits of amyloid, tau, and alpha-synuclein |
| AU2013328881B2 (en) | 2012-10-12 | 2018-03-15 | Arizona Board Of Regents, On Behalf Of Arizona State University | Antibody based reagents that specifically recognize toxic oligomeric forms of tau |
| US9910048B2 (en) | 2012-12-03 | 2018-03-06 | Washington University | Method for detection of aggregates in biological samples |
| US8921150B2 (en) | 2012-12-06 | 2014-12-30 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. | Process to achieve contact protrusion for single damascene via |
| US9200068B2 (en) | 2012-12-18 | 2015-12-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods related to tauopathy |
| WO2014096321A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antibodies specific to tau phosphorylated at serine 422 and uses for the treatment and diagnosis of tauopathies |
| LT2935326T (lt) | 2012-12-21 | 2020-12-10 | Biogen Ma Inc. | Žmogaus antikūnai prieš tau baltymą |
| US8980270B2 (en) | 2013-01-18 | 2015-03-17 | Ipierian, Inc. | Methods of treating a tauopathy |
| CU24446B1 (es) | 2013-03-13 | 2019-10-04 | Prothena Biosciences Ltd | Un anticuerpo monoclonal humanizado que se une a tau |
| WO2014159244A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-10-02 | Merck Patent Gmbh | O-GlcNAc TAU ANTIBODY AND USE THEREOF |
| US9688747B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-06-27 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods and compositions for the generation and use of conformation-specific antibodies |
| KR102233349B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-03-31 | 에이씨 이뮨 에스.에이. | 항-타우(tau) 항체 및 사용 방법 |
| TW202136296A (zh) | 2014-06-27 | 2021-10-01 | 美商Ｃ２Ｎ醫療診斷有限責任公司 | 人類化抗-tau抗體 |
-
2015
- 2015-06-25 TW TW109146224A patent/TW202136296A/zh unknown
- 2015-06-25 TW TW108111964A patent/TWI734975B/zh not_active IP Right Cessation
- 2015-06-25 TW TW104120634A patent/TWI664190B/zh not_active IP Right Cessation
- 2015-06-26 MA MA040229A patent/MA40229A/fr unknown
- 2015-06-26 BR BR112016030686A patent/BR112016030686A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-06-26 PE PE2016002780A patent/PE20170665A1/es unknown
- 2015-06-26 SG SG11201610862VA patent/SG11201610862VA/en unknown
- 2015-06-26 CA CA2953809A patent/CA2953809C/en active Active
- 2015-06-26 UA UAA201700707A patent/UA122771C2/uk unknown
- 2015-06-26 CR CR20170026A patent/CR20170026A/es unknown
- 2015-06-26 CN CN201580046263.9A patent/CN106659759B/zh active Active
- 2015-06-26 RU RU2017102514A patent/RU2743152C2/ru active
- 2015-06-26 UY UY0001036194A patent/UY36194A/es not_active Application Discontinuation
- 2015-06-26 WO PCT/US2015/038002 patent/WO2015200806A2/en active Application Filing
- 2015-06-26 NZ NZ727919A patent/NZ727919A/en not_active IP Right Cessation
- 2015-06-26 SG SG10201914067XA patent/SG10201914067XA/en unknown
- 2015-06-26 CA CA3094638A patent/CA3094638A1/en not_active Abandoned
- 2015-06-26 ES ES15810923T patent/ES2959528T3/es active Active
- 2015-06-26 MY MYPI2016704772A patent/MY184540A/en unknown
- 2015-06-26 KR KR1020167036625A patent/KR102431596B1/ko active IP Right Grant
- 2015-06-26 AU AU2015279643A patent/AU2015279643B2/en active Active
- 2015-06-26 MX MX2017000205A patent/MX2017000205A/es unknown
- 2015-06-26 JP JP2017520755A patent/JP6626892B2/ja active Active
- 2015-06-26 EP EP15810923.1A patent/EP3182987B1/en active Active
-
2016
- 2016-09-06 US US15/257,086 patent/US9957317B2/en active Active
- 2016-12-22 ZA ZA2016/08875A patent/ZA201608875B/en unknown
- 2016-12-22 IL IL249734A patent/IL249734B/en active IP Right Grant
- 2016-12-23 PH PH12016502608A patent/PH12016502608A1/en unknown
- 2016-12-26 DO DO2016000335A patent/DOP2016000335A/es unknown
- 2016-12-27 CL CL2016003346A patent/CL2016003346A1/es unknown
-
2017
- 2017-01-04 MX MX2021008888A patent/MX2021008888A/es unknown
- 2017-01-27 EC ECIEPI20175649A patent/ECSP17005649A/es unknown
-
2018
- 2018-03-23 US US15/934,413 patent/US20180371066A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-12-02 JP JP2019217837A patent/JP2020054356A/ja active Pending
-
2020
- 2020-03-27 IL IL273656A patent/IL273656B/en unknown
-
2021
- 2021-01-04 PH PH12021550023A patent/PH12021550023A1/en unknown
- 2021-07-08 AU AU2021204800A patent/AU2021204800A1/en active Pending
- 2021-12-02 IL IL288649A patent/IL288649A/en unknown
- 2021-12-02 JP JP2021195942A patent/JP2022050392A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA122771C2 (uk) | Гуманізоване анти-taу антитіло | |
| JP2017521097A5 (uk) | ||
| US20230303674A1 (en) | Methods for reducing migraine frequency in a subject in need thereof | |
| KR20080104343A (ko) | 나탈리주마브로 염증 및 자가면역 질환을 치료하는 방법 | |
| KR20170096187A (ko) | Pvns를 치료하기 위한 항-csf1r 항체 | |
| TWI807338B (zh) | 結合ＴＧＦ-α及表皮調節素（ＥＰＩＲＥＧＵＬＩＮ）之抗體於治療疼痛之用途 | |
| JP2023533682A (ja) | 補体関連病態の処置用抗ｃ５抗体の皮下（ｓｃ）投与 | |
| US20230043034A1 (en) | Anti-c5 antibody for the treatment of neuromyelitis optica spectrum disorder | |
| WO2020128528A1 (en) | P38 mapk inhibitors for the treatment of sarcopenia | |
| WO2023215443A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of neuromyelitis optica spectrum disorder | |
| US20230101618A1 (en) | Predictive outcome profiling for use of an anti-semaphorin-4d binding molecule to treat neurodegenerative disorders | |
| US20230053258A1 (en) | Anti-ide antibodies and uses of same | |
| WO2024069236A1 (en) | Methods for treating inactive or chronic thyroid eye disease | |
| WO2021263056A9 (en) | Dosage and administration of anti-c5 antibodies for treatment of amyotrophic lateral sclerosis | |
| WO2024105062A1 (en) | Methods for treating or preventing transthyretin-mediated amyloidosis | |
| NZ765680A (en) | Humanized anti-tau antibodies |