UA116195C2 - Мутований штам bradyrhizobium japonicum для збільшення врожаю рослин - Google Patents

Мутований штам bradyrhizobium japonicum для збільшення врожаю рослин Download PDF

Info

Publication number
UA116195C2
UA116195C2 UAA201407868A UAA201407868A UA116195C2 UA 116195 C2 UA116195 C2 UA 116195C2 UA A201407868 A UAA201407868 A UA A201407868A UA A201407868 A UAA201407868 A UA A201407868A UA 116195 C2 UA116195 C2 UA 116195C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
seed
composition according
strain
strains
plant
Prior art date
Application number
UAA201407868A
Other languages
English (en)
Inventor
Яовей Канг
Ань ЧАН
Шон Семонес
Original Assignee
Новозаймс Біоаг А/С
Новозаймс Байолоджикалс, Інк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новозаймс Біоаг А/С, Новозаймс Байолоджикалс, Інк. filed Critical Новозаймс Біоаг А/С
Publication of UA116195C2 publication Critical patent/UA116195C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H3/00—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

Винахід належить до мутованих штамів Bradyrhizobium japonicum, які застосовують для збільшення врожаю рослин та стимуляції їх росту, а також до композицій що їх містять.

Description

Посилання на депонування біологічного матеріалу
Дана заявка містить посилання на депонування біологічного матеріалу, при цьому вказане депонування включене в даний документ за допомогою посилання. Для повної інформації див. таблицю 1.
Галузь техніки винаходу
Даний винахід відноситься до виділеної бактерії Вгадугпігобішт, яка має поліпшені характеристики, у тому числі без обмежень підвищену стійкість до зневоднення.
Рівень техніки винаходу
Для того щоб підтримувати здоровий ріст, рослини повинні витягати різні елементи із грунту, на якому вони ростуть. Ці елементи включають азот і так звані поживні мікроелементи (наприклад, мідь, залізо та цинк), однак багато грунтів мають дефіцит таких елементів, або вони містять їх тільки у формах, які не здатні легко поглинатися рослинами (у цілому прийнято вважати, що незамінні елементи не можуть легко поглинатися рослинами, якщо тільки вони не присутні в грунті в розчиненій формі). Азот є незамінним елементом для більшості рослин, оскільки він відіграє роль у синтезі амінокислот, білків, нуклеотидів, нуклеїнових кислот, хлорофілу, коферментів і в загальному зростанні та здоров'ї рослини. Для перешкоджання таким нестачам звичайно в грунти вносять джерела дефіцитних елементів для того, щоб підвищити темпи росту та врожаї, одержувані від культурних рослин. Наприклад, нітрат та/або амоній часто додають у грунт для протидії недоліку доступного азоту.
У галузі науки, пов'язаній з сільськогосподарськими культурами, добре відомо, що багато культивованих сільськогосподарських культур вимагають, щоб грунт забезпечував рослину відносно великими кількостями азоту. Істотними винятками з таких рослин, які вимагають азот із грунту, є рослини із сімейства бобових.
А саме, бобові рослини відрізняються від не бобових рослин своєю здатністю фіксувати атмосферний азот в аміак. Здатність фіксувати атмосферний азот у придатне до вживання для рослини джерело азоту усуває необхідність для рослини одержувати азот із грунту. Фіксування азоту, однак, вимагає симбіотичних відносин між бобовою рослиною і природними бактеріями в грунті Одними з найбільш широко досліджуваних партнерів цих симбіотичних відносин є бактерії, що відносяться до роду Вгадугпігорішт або ЕПігорішт. (геззпої, Р. (1999). Ідепійісайоп ої Ріапі Сепез Іпмоїмейд іп Ріапі-Місгобе Іпіегасіоп5. Засеу, с. і Кееєп, Т. (Еа.), Ріапі-Місторе
Іптегасіопв (АН єй.) (СН. 6). 5. Раці: АРБ5 Ргезв.
Зазвичай симбіоз досягається завдяки обміну комплексними двонаправленими сигналами між рослиною та мікроорганізмом та мікроорганізмом і рослиною. Як правило, рослинні фактори, такі як флавоноїди та флавоноїдо-подібні речовини, індукують колонізацію бактерій у кореневу бульбочку бобової рослини (Сгезвзпоїї, 1999). Як тільки бактерії колонізують кореневу бульбочку, ці бактерії викликають морфологічні зміни в рослині, а саме, закручування кореневих волосків і розвиток нового кореневого органа -- бульбочки (Огев5поїї, 1999). Бульбочка дає можливість утворення нового фізіологічного середовища для бульбочки, індукуючи диференціацію бактерії в азотфіксуючий ендосимбіонт або бактероїд для колонізованої рослини (Стезвпоїї, 1999).
Для того щоб допомогти симбіотичному обміну двонаправленими сигналами між рослиною та мікроорганізмом, бактеріями, такими як Вгадугпі2обіа 5р., часто покривають насіння. Для подовження життєздатності мікроорганізму на насінні необхідно, щоб даний мікроорганізм був витривалим до зневоднення та сухих умов навколишнього середовища в цілому.
Зберігається необхідність у мікроорганізмах з підвищеною стійкістю до зневоднення.
Короткий опис винаходу
В даному документі описані нові бактеріальні штами, які мають підвищену стійкість до зневоднення, особливо при порівнянні нових бактеріальних штамів з їхнім батьківським штамом, наприклад, Вгадугпі2обішт 5р., батьківський штам ОБОА 532С. Автори даного винаходу виділили та перевірили значну кількість бактеріальних штамів щодо їхніх властивостей стійкості до зневоднення.
Як розкрито у всьому документі, виділені штами є штамами роду Вгадугпігобішт 5рр.
Зокрема, виділені штами є штамами Вгадугпі2обішт |аропісит. Навіть більш конкретно, виділені штами є виділеними штамами Вгадугпі2обішт іаропісит, вибраними з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50608; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50612, або комбінацію щонайменше з 10) двох або більше з вказаних вище депонованих штамів.
Також в даному документі описані композиції, які містять носій та один або декілька бактеріальних штамів, описаних у даному документі. У варіанті здійснення композиція містить одну або декілька сигнальних молекул рослин. В одному варіанті здійснення композиція містить щонайменше один ліпохітоолігосахарид (І СО). В іншому варіанті здійснення композиція містить щонайменше один хітоолігосахарид (СО). У ще одному варіанті здійснення композиція містить щонайменше один флавоноїд. У ще одному варіанті здійснення композиція містить жасмонову кислоту або її похідне. В іншому варіанті здійснення композиція містить лінолеву кислоту або її похідне. У ще одному варіанті здійснення композиція містить ліноленову кислоту або її похідне.
У ще одному варіанті здійснення композиція містить карикін.
У даному документі додатково описаний спосіб посилення росту рослини або частини рослини, який включає приведення в контакт рослини або частини рослини з одним або декількома бактеріальними штамами, описаними в даному документі. Спосіб включає введення в грунт інокуляту одного або декількох бактеріальних штамів, описаних у даному документі. В іншому варіанті здійснення спосіб включає введення в грунт інокуляту одного або декількох бактеріальних штамів у вигляді покриття для насіння.
Також у даному документі описаний спосіб поліпшення фіксації азоту в рослині (рослинах), який включає вирощування рослини (рослин) на грунті, який містить один або декілька бактеріальних штамів, описаних у даному документі. В одному варіанті здійснення рослина (рослини) є бобовою рослиною (рослинами), не бобовою рослиною (рослинами) або їх комбінаціями. В іншому варіанті здійснення рослина є рослиною, вибраною з групи, що включає сою, квасолю, люцерну, конюшину, кукурудзу, латук, види томату, види картоплі, види огірка та їх комбінації.
У даному документі додатково описане насіння, покрите бактеріальними штамами, описаними в даному документі.
Короткий опис графічних матеріалів
Фіг. 1 являє собою графічне зображення попереднього скринінгу порівнюваних стійких до зневоднення мутантів у порівнянні зі стійкістю до зневоднення батьківського штаму ОБОА 53260.
Фіг. 2 являє собою графічне зображення другого скринінгу порівнюваних стійких до зневоднення мутантів у порівнянні зі стійкістю до зневоднення батьківського штаму ОБОА 5326.
Фіг. З являє собою графічне зображення третього скринінгу порівнюваних стійких до зневоднення мутантів у порівнянні зі стійкістю до зневоднення батьківського штаму ОБОА 53260.
Фіг. 4 являє собою графічне зображення четвертого скринінгу порівнюваних стійких до зневоднення мутантів у порівнянні зі стійкістю до зневоднення батьківського штаму ОБОА 53260.
Фіг. 5 являє собою графічне зображення стійкості до зневоднення вибраних порівнюваних стійких до зневоднення мутантів у порівнянні зі стійкістю до зневоднення батьківського штаму
ИБОА 532С у нульовий (0) і чотирнадцятий (14) дні.
Фіг. 6 являє собою графічне зображення стійкості до зневоднення вибраних порівнюваних стійких до зневоднення мутантів у порівнянні зі стійкістю до зневоднення батьківського штаму
ИБОА 532С у сьомий (7) і чотирнадцятий (14) дні.
Докладний опис винаходу
Розкриті бактеріальні штами були виділені і перевірені щодо їхньої здатності до солюбілізації фосфору. Це докладно описано у розділі "Приклади", представленому нижче.
Розкриті варіанти здійснення додатково відносяться до композицій, покриттів насіння, способів підвищення доступності фосфору для поглинання рослинами з грунту та способів підвищення поглинання фосфору в рослинах, що включають вирощування рослин на грунті, який містить джерело фосфору.
Визначення
Використані в даному документі форми однини призначені також для включення форм множини, якщо з контексту явно не випливає інше.
Використаний в даному документі вираз "біологічно чиста культура" призначений для позначення культури, фактично вільної від біологічного забруднення та такої, яка характеризується такою генетичною однорідністю, що різні субкультури, узяті з неї, будуть демонструвати практично ідентичні генотипи та фенотипи (наприклад, культури мають чистоту щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 96, щонайменше 98 956, щонайменше 99 95, аж до 100 95 чистоти).
Використані в даному документі вирази "ізолят, ізоляти, виділення та/або виділений і т.д." призначені для позначення того, що вказаний матеріал видаляють із середовища, у якому він бО звичайно перебуває.
Використаний в даному документі вираз "інокулят" призначений для позначення будь-якої форми бактеріальних клітин або спор, які здатні розмножуватися на або в грунті, коли умови температури, вологості і т.д. є сприятливими для росту бактерій.
Використаний в даному документі вираз "спори" має своє звичайне значення, яке добре відоме і зрозуміле фахівцям у даній галузі та зазвичай відноситься до мікроорганізму в захищеному стані спокою.
Використаний в даному документі вираз "джерело" конкретного елемента призначений для позначення сполуки цього елемента, яка щонайменше в розглянутих грунтових умовах не робить елемент повністю доступним для поглинання рослинами.
Використані в даному документі вирази "ефективна кількість", "ефективна концентрація" або "ефективна доза" призначені для позначення кількості, концентрації або дози одного або декількох бактеріальних ізолятів, достатніх, щоб викликати збільшення росту рослини або частини рослини або збільшення фіксації азоту. Фактична ефективна доза в абсолютному значенні залежить від факторів, включаючи без обмежень розмір (наприклад, площа, загальна посівна площа і т.д.) землі для застосування бактеріальних ізолятів, синергетичні або антагоністичні взаємодії між іншими активними або інертними інгредієнтами, які можуть збільшувати або зменшувати активність бактеріальних ізолятів, і стабільність бактеріальних ізолятів у композиціях та/або в якості засобів для обробки насіння. "Ефективна кількість", "ефективна концентрація" або "ефективна доза" бактеріальної композиції може бути визначена, наприклад, шляхом звичайного експерименту "доза-відповідь".
Використані в даному документі вирази "носій" або "прийнятний з точки зору сільського господарства носій" призначені для позначення будь-якого матеріалу, який може бути використаний для доставки активних речовин (наприклад, бактеріального штаму) до насіння, грунту, рослини або частини рослини.
Використаний в даному документі вираз "сумісний із грунтом носій" призначений для позначення будь-якого матеріалу, який можна додавати до грунту, не викликаючи/надаючи несприятливий ефект на ріст рослин, структуру грунту, осушення грунту або тому подібне.
Використаний в даному документі вираз "сумісний з насінням носій" призначений для позначення будь-якого матеріалу, який можна додавати до насіння, не викликаючи/надаючи несприятливий ефект на насіння, рослину, яка росте з насіння, проростання насіння або тому подібне.
Використаний в даному документі вираз "корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт (інгредієнти)" призначений для позначення будь-якого засобу або комбінації засобів, здатних викликати або забезпечити сприятливий та/або корисний ефект у сільському господарстві.
Використаний в даному документі вираз "щонайменше один біологічно активний інгредієнт" призначений для позначення біологічно активних інгредієнтів (наприклад, сигнальних молекул, інших мікроорганізмів і т.д.) окрім одного або декількох бактеріальних ізолятів, описаних у даному документі.
Використаний в даному документі вираз "зневоднення" призначений для позначення стану крайнього ступеня сухості, наприклад, умов без вологи та/або води. Вирази "стійкість до зневоднення" та/або "витривалість до зневоднення" призначені для охоплення здатності організму протистояти, та/або виживати, та/або переносити умови крайньої сухості.
Використані в даному документі вирази "фіксація азоту", "фіксація атмосферного азоту" або "фіксування азоту" і т.д. призначені для охоплення біологічних процесів, у яких молекулярний азот або азот з атмосфери перетворені в одну або декілька азотних (М) сполук, включаючи без обмежень аміак, солі амонію, сечовину та нітрати.
Використаний в даному документі вираз "азот-фіксуючий організм" призначений для позначення будь-якого організму (наприклад, діазотрофів), здатного перетворювати молекулярний азот або азот з атмосфери в одну або декілька азотних (М) сполук, включаючи без обмежень аміак, солі амонію, сечовину та нітрати.
Використані в даному документі вирази "солюбілізація фосфатів" або "що солюбілізує фосфати" і т.д. призначені для позначення перетворення нерозчинного фосфату (наприклад, фосфориту і т.д.) у розчинну форму фосфату.
Використаний в даному документі вираз "організм, що солюбілізує фосфати" призначений для позначення будь-якого організму, здатного перетворювати нерозчинний фосфат у розчинну форму фосфату.
Використані в даному документі вирази "рослина (рослини)" і "частина (частини) рослини" призначені для позначення всіх рослин і рослинних популяцій, таких як необхідні та небажані (610) дикі рослини або культурні рослини (включаючи культурні рослини, що зустрічаються в природі). Культурні рослини можуть являти собою рослини, які можуть бути одержані за допомогою традиційних способів селекції і оптимізації рослин або біотехнологічних способів та способів генної інженерії або комбінацією цих способів, включаючи трансгенні рослини та включаючи сорти рослин, які охороняються або не охороняються правами селекціонерів рослин. Під частинами рослин слід розуміти всі частини та органи рослин вище й нижче поверхні землі, такі як пагін, лист, квітка й корінь, прикладами, які можуть бути згадані, є листя, голки, черешки, стебла, квіти, плодові тіла, фрукти, насіння, коріння, бульбочки, бульби та кореневища. Частини рослин також включають матеріал зібраного врожаю, а також вегетативний і генеративний матеріал для розмноження (наприклад, живці, бульби, кореневища, відсадки та насіння і т.д.).
Використаний в даному документі вираз "бульбочка" призначений включати без обмежень детерміновані бульбочки, недетерміновані бульбочки або їх комбінацію. Приклади детермінованих бульбочок і недетермінованих бульбочок добре відомі в даній галузі техніки і описані в Оепізоп, К. Р., 2000, Те Атег. Маїйсгаїїві. 156 (6): 567-576. Детерміновані бульбочки зустрічаються на видах роду Сіусіпе, Гоїш5 або РіазеоїЇи5 і мають округлу і сферичну форму (Оеєпізоп, 2000). Детерміновані бульбочки ростуть тільки протягом обмеженого періоду часу - як правило, декілька тижнів (Юепізоп, 2000). На відміну від детермінованих бульбочок недетерміновані бульбочки зустрічаються на видах роду Меадісадо, Тгітоїйчт і Рібічт, мають витягнуту форму і ростуть безупинно (Оепізоп, 2000). Вираз "заселення бульбочок" є виразом, відомим у даному рівні техніки. МсОептой Т.А. 5 Стапат, Р.Н., Аррі. апа Епмігоп. Місгобіо!. 55(10): 2493-2498. Добре відомо в даному рівні техніки, що, незважаючи на рідкісні винятки, одна бульбочка буде містити тільки один бактеріальний штам. Чопп5іоп, АЛМУ/.В., еї аї., 1974, у.
Сеп. Містобіо! 87: 343-350; Оиппат, 0. Н. є Ваїдм/п, І.Ї., 1931, бої бсівєпсе 32: 235-249; доппзоп,
НМУ., еї аї., 1963, Адгопо. 9. 55: 269-271; ЮОидтап, М/.Р. 5 ВгосКмеїЇ, у., 1968, 9. Адгіси!. Нев. 19: 739-747; Місої, Н. 5 Тнопоп, Н.О, 1941, Ргос. Воу. бос. В 130, 32-59; НидНев, 0.О0., б Міпсепі,
У.М., 1942, Ргос. ої Не Гіппепап бос. ої Мем бБоцій У/аїіез 67: 142-152; і Міпсепі, 9У.М. 8. Умаїегв,
Г.М., 1953, 9. Сеп. Містобіо!. 9: 357-370.
Використаний в даному документі вираз "посилений ріст рослин" призначений для позначення підвищеної врожайності рослин (наприклад, збільшеної біомаси, збільшеної кількості плодів або їх комбінації, вимірюваної в бушелях на акр), збільшеної кількості коренів, збільшеної кореневої маси, збільшеного кореневого об'єму, збільшеної площі листя, збільшеного рослинного покриву, підвищеної потужності рослини, збільшеної ваги рослини (наприклад, загальної сухої ваги рослини або частини рослини, загальної сирої ваги рослини або частини рослини і т.д.) або їх комбінацій.
Використаний в даному документі вираз "підвищена конкурентоспроможність" та/або "підвищене утворення бульбочок" визначене для позначення бактеріального штаму (штамів), що характеризується відсотком заселення бульбочок, наприклад, щонайменше 50 95, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 7595, щонайменше 8095, щонайменше 8595, щонайменше 8595, щонайменше 90 95, щонайменше 91 9о, щонайменше 92 96, щонайменше 93 956, щонайменше 94 9565, щонайменше 9595, щонайменше 96 956, щонайменше 97 956, щонайменше 9895, щонайменше 99 95, аж до 100 95 заселення бульбочок.
Використаний в даному документі вираз "температурна витривалість" призначений для позначення діапазону температур, при яких бактеріальний штам (штами) здатний рости, наприклад, максимальні та мінімальні температури, при яких бактеріальний штам може рости.
Використаний в даному документі вираз "доступний для придбання штам (штами)" призначений для позначення доступних для придбання бактеріальних штамів, наприклад, ОБОА 532С, ОБОА 110, О5БА 123, ОБОБА 127, ОБОА 129 і т.д. Стедап, Р.В., еї а!., 1989, Аррі. апа
Епміго. Містобіо!. 55 (10): 2532-2536.
Використаний в даному документі вираз "поживний мікроелемент (мікроелементи)" призначений для позначення поживних речовин, необхідних для росту рослин, здоров'я рослин та/або розвитку рослин.
Використаний в даному документі вираз "біостимулятор (біостимулятори)" призначений для позначення будь-якої речовини, здатної підсилювати метаболічні або фізіологічні процеси в рослинах і грунтах.
Використаний в даному документі вираз "змочувальний засіб (засоби)" призначений для позначення будь-якої речовини, здатної знижувати та/або зменшувати поверхневий натяг води.
Штами
В одному варіанті здійснення виділений штам (штами), описаний у даному документі, являє (610) собою штам (штами) азотфіксуючих бактерій. В іншому варіанті здійснення штам (штами) являє собою штам (штами) виду Вгадугпігорит. У додатковому аспекті штам одержаний зі штаму
Вгадуті2обішт, включаючи без обмежень штам, вибраний з групи, що включає Вгадугпігобійт
Бреїє, Вгадугпігорішт сапагепбзе, Вгадутігобішт еїКапії, Вгадугпігобішт іпйотоїепзе,
Вгадутіг2обішт |аропісит, Вгадуті2оБріит |ісатає, Вгадуті2орішт Іаопіпдепзе, Вгадугпігобійт распугпігі і Вгадугпігобічт усаптіпдепзе. У ще одному варіанті здійснення штам (штами) являє собою штам (штами) Вгадуті2орит |аропісит.
У ще одному варіанті здійснення виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду
Вгадутпігобішт, який характеризується поліпшеною/підвищеною виживаністю бактерій у практично позбавленому вологи середовищі, при порівнянні виживаності виділеного штаму (штамів) Вгадуті2обіит із виживаністю батьківського штаму (штамів), наприклад, батьківського штаму Вгадутпіг2орішт |аропісит ОБОА 532С, протягом періоду часу, наприклад, щонайменше 1 дня, щонайменше 2 днів, щонайменше З днів, щонайменше 4 днів, щонайменше 5 днів, щонайменше б днів, щонайменше 1 тижня, щонайменше 2 тижнів, щонайменше З тижнів, щонайменше 4 тижнів, щонайменше 1 місяця, щонайменше 2 місяців, щонайменше З місяців, щонайменше 4 місяців, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 1 року або більше.
У ще одному варіанті здійснення виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду
Вгадутпіг2орішт, який характеризується поліпшеною/підвищеною виживаністю в практично позбавленому вологи середовищі, де підвищена виживаність у практично позбавленому вологи середовищі включає підвищену виживаність бактерій у середовищі, яке щонайменше на 70 95 позбавлене вологи, наприклад, щонайменше на 75 95, щонайменше на 80 95, щонайменше на 8595, щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 91 95, щонайменше на 929565, щонайменше на 93 956, щонайменше на 94 95, щонайменше на 95 95, щонайменше на 96 95, щонайменше на 97 95, щонайменше на 98 95, щонайменше на 99 95 позбавлене вологи, аж до на 100 95 позбавленого вологи середовища, при порівнянні виживаності виділеного штаму (штамів) Вгадуті2обіит із виживаністю батьківського штаму (штамів), наприклад, батьківського штаму Вгадугпіг2оріит |Іаропісит ОБОА 5320.
В іншому варіанті здійснення виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду
Вгадутпіг2оріит, який характеризується наступними поліпшеними/переважаючими характеристиками в порівнянні з доступними для придбання штамами, наприклад, комерційним штамом Вгадутігобішт іаропісит ОБОА 532С, де поліпшені/переважаючі характеристики включають без обмежень а. підвищену конкурентоспроможність щодо колонізації рослини сої та р. підвищену ефективність сприяння росту рослини сої.
У ще одному варіанті здійснення виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду
Вгадутпіг2орішт, який характеризується підвищеною/переважаючою конкурентоспроможністю щодо колонізації рослини. У ще одному варіанті здійснення виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду Вгадуті2обішт, який характеризується підвищеною/переважаючою ефективністю сприяння росту рослини. У ще одному варіанті здійснення виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду Вгадугпігорішт, який характеризується підвищеною/переважаючою конкурентоспроможністю щодо колонізації рослини і підвищеною/переважаючою ефективністю сприяння росту рослини.
У ще одному аспекті даного винаходу виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду Вгадутпігобішт, який характеризується поліпшеною/переважаючою температурною витривалістю.
У ще одному аспекті даного винаходу виділений штам (штами) являє собою штам (штами) виду Вгадугпі2оБбішт, який характеризується природною стійкістю до гліфосату.
У ще одному варіанті здійснення штами являють собою штами Вгадугпігорит |аропісит, вибрані з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50608; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611;, і штам, який має номер доступу в депозитарії МАК. В-50612.
У конкретному варіанті здійснення штам (штами) може являти собою один або декілька з вищезгаданих депонованих штамів (наприклад, включаючи щонайменше два зі вказаних вище штамів, щонайменше три зі вказаних вище штамів, щонайменше чотири зі вказаних вище штамів, аж до включення всіх зі вказаних вище штамів).
В одному з варіантів здійснення штам являє собою штам, який має номер доступу в 10) депозитарії МАК. В-50608. В одному з варіантів здійснення штам являє собою штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50609. В одному з варіантів здійснення штам являє собою штам, який має номер доступу в депозитарії МКК В-50610. В одному з варіантів здійснення штам являє собою штам, який має номер доступу в депозитарії МКК В-50611. В одному з варіантів здійснення штам являє собою штам, який має номер доступу в депозитарії МАК В- 50612. в іншому варіанті здійснення бактеріальна культура (культури) має властивості/характеристики, ідентичні таким щонайменше одного з депонованих штамів або комбінації щонайменше із двох із вказаних вище депонованих штамів, включаючи більш ніж два, як наприклад, щонайменше три із вказаних вище штамів, щонайменше чотири із вказаних вище штамів, аж до включення всіх із вказаних вище штамів. Властивості/характеристики бактеріальної культури включають без обмежень бактеріальні штами, які характеризуються підвищеною та/або переважаючою стійкістю до зневоднення. У ще одному варіанті здійснення штам (штами) являє собою штам (штами) виду Вгадугпігорішт, який характеризується підвищеною та/або переважаючою стійкістю до зневоднення при порівнянні стійкості до зневоднення зі стійкістю до зневоднення та/або витривалістю до зневоднення батьківського штаму (штамів) бактерій, наприклад, батьківського штаму Вгадугпі2обішт іаропісит ОБОА 5326.
В іншому аспекті виділений бактеріальний штам (штами) за даним винаходом включає штам (штами), близькоспоріднений з кожним із вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК. Див. 5іасКебгапай Е. єї а!., "Нероп ої Ше ай пос соттінееє ог Ше ге- емаІцайоп ої (Ше 5зресіез дейпйоп іп расіегіоіоду, " пуд Бузі Емо! Місгобіої. 52(3):1043-7 (2002) стосовно застосування ідентичності послідовності 165 рДНК для визначення споріднення в бактерій. В одному варіанті здійснення щонайменше один штам щонайменше на 95 95 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рРДНК, щонайменше на 96 95 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 97 95 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 9895 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рРДНК, щонайменше на 98,5 95 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, щонайменше на 99 95 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165 рДНК, або щонайменше на 99,5 95 ідентичний будь-якому зі вказаних вище штамів, виходячи з ідентичності послідовності 165
РДНК.
Описана в даному документі бактерія Вгадугпі2обрішт і, зокрема, штами, які мають номери доступу в депозитарії МКК. В-50608, МАНІ 8-50609, МАВ 8В-50610, МАНІ. В-50611 і МАК В- 50612, можуть бути вирощені згідно зі способами, відомими в даному рівні техніки.
Одержаний матеріал може бути використаний безпосередньо в композиції, у якості засобу для обробки насіння, або спори можуть бути зібрані, сконцентровані центрифугуванням, може бути складена суміш, а потім висушена за допомогою повітряного сушіння, ліофілізації або способів сушіння в псевдозрідженому шарі (Ргіезеп Т., Ні с., Ридзієу Т., НоПомау а., апа
Дттептап 0. 2005, Ехрегітепіаї! де(ептіпайоп ої міарійшу о55 ої Репісійшт бБііаіає сопідіа дигіпа сопмесіїме аїкагуіпд Аррі Місгоріо! Віоїесппо! 68: 397-404) з одержанням порошку, що змочується.
Вищезгадані депоновані штами були депоновані 1 жовтня 2012 року, як вказано більш докладно нижче в розділі "Матеріали та методи", відповідно до умов Будапештського договору про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів для цілей патентної процедури в
Американській колекції типових культур (АТСС), Р.О. Вох 1549, Мапаззав, МА 20108, ОА.
Композиції
В іншому аспекті даний винахід відноситься до композиції, яка містить носій та інокулят одного або декількох депонованих штамів (або у формі спор, або штамів у вегетативному стані), описаних у даному документі. У деяких варіантах здійснення композиція може бути у формі рідини, суспензії, твердої речовини або порошку (порошку, що змочується, або сухого порошку).
В іншому варіанті здійснення композиція може бути у формі покриття для насіння. Композиції в рідкій, суспензійній або порошковій (наприклад, порошок, що змочується) формі можуть бути придатними для покриття насіння. При використанні для покриття насіння композиція може бути нанесена на насіння та висушена. У варіантах здійснення, у яких композиція являє собою порошок (наприклад, порошок, що змочується), може знадобитися рідина, така як вода, для додавання до порошку перед нанесенням на насіння. Приклад ще одних носіїв включає зволожені висівки, висушені, просіяні та нанесені на насіння перед покриттям адгезивом, наприклад, гуміарабіком. (610) Носії
Носії, описані в даному документі, дозволять зберегти депонований бактеріальний штам (штами) ефективним (наприклад, здатним фіксувати азот) і життєздатним після складання суміші. Необмежуючі приклади носіїв, описаних у даному документі, включають рідини, суспензії або тверді речовини (включаючи порошки, що змочуються, або сухі порошки). В одному з варіантів здійснення носій являє собою сумісний із грунтом носій, описаний у даному документі.
В одному варіанті здійснення носій являє собою рідкий носій. Не обмежуючі приклади рідин, придатних у якості носіїв для композицій, описаних у даному документі, включають воду, водний розчин або неводний розчин. В одному варіанті здійснення носій являє собою воду. В іншому варіанті здійснення носій являє собою водний розчин, такий як водний розчин цукру. В іншому варіанті здійснення носій являє собою неводний розчин. Якщо використовують рідкий носій, рідкий (наприклад, водний) носій може додатково включати поживне середовище для культивування депонованих бактеріальних штамів. Необмежуючі приклади придатних поживних середовищ для депонованих бактеріальних штамів включають арабінозу-глюконат (Ас), манітол із дріжджовим екстрактом (УЕМ), середовище (316 або будь-які середовища, відомі фахівцям у даній галузі техніки як сумісні з ростовими поживними речовинами депонованих бактеріальних штамів та/або як такі, що забезпечують ними.
В іншому варіанті здійснення носій являє собою суспензію. В одному з варіантів здійснення суспензія може містити склеювальний засіб, рідину або їх комбінацію. Передбачається, що склеювальним засобом може бути будь-який засіб, здатний приклеювати інокулят (наприклад, один або декілька депонованих штамів) до субстрату, що представляє інтерес (наприклад, насіння). Необмежуючі приклади склеювальних засобів включають альгінат, мінеральне масло, сироп, гуміарабік, мед, метилцелюлозу, молоко, клей для шпалер та їх комбінації. Необмежуючі приклади придатних рідин для суспензії включають воду або водний розчин цукру.
В іншому варіанті здійснення носій являє собою тверду речовину. У конкретному варіанті здійснення тверда речовина являє собою порошок. В одному варіанті здійснення порошок є порошком, що змочується. В іншому варіанті здійснення порошок є сухим порошком. В іншому варіанті здійснення тверда речовина являє собою гранулу. Необмежуючі приклади твердих речовин, придатних у якості носіїв для композицій, розкритих у даному документі, включають торф, пшеницю, пшеничну солому, мелену пшеничну солому, висівки (наприклад, зволожені висівки, незволожені висівки), вермикуліт, целюлозу, крохмаль, грунт (пастеризований або непастеризований), гіпс, тальк, глини (наприклад, каолін, бентоніт, монтморилоніт) і силікагелі.
Необов'язкові корисні з точки зору сільського господарства інгредієнти
Композиції, розкриті в даному документі, можуть містити один або декілька необов'язкових інгредієнтів. Необмежуючі приклади необов'язкових інгредієнтів включають один або декілька біологічно активних інгредієнтів, поживних мікроелементів, біостимуляторів, консервантів, полімерів, змочувальних засобів, поверхнево-активних речовин або їх комбінації.
Біологічно активний інгредієнт (інгредієнти)
Композиції, описані в даному документі, можуть необов'язково включати один або декілька біологічно активних інгредієнтів, описаних у даному документі. Необмежуючі приклади біологічно активних інгредієнтів включають сигнальні молекули (наприклад, ліпохітоолігосахариди (І СО), хітоолігосахариди (СО), хітинові сполуки, флавоноїди, жасмонову кислоту або її похідні, лінолеву кислоту або її похідні, ліноленову кислоту або її похідні, керикіни і т.д.) ї корисні мікроорганізми (наприклад, Кпі2обішт 5рр., Вгадугпігобішт 5рр., Зіпогпі2обійт 5рр., А2огпі2обіит 5рр. і т.д.).
Сигнальна молекула (молекули)
В одному з варіантів здійснення композиції, описані в даному документі, включають одну або декілька сигнальних молекул. В одному варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою один або декілька І СО. В іншому варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою одну або декілька хітинових сполук. У ще одному варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою один або декілька СО. У ще одному варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою один або декілька флавоноїдів або їх похідні. У ще одному варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою один або декілька нефлавоноїдних індукторів поа-гена (наприклад, жасмонова кислота, лінолева кислота, ліноленова кислота та їх похідні). У ще одному варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою один або декілька карикінів або їх похідні. У ще одному варіанті здійснення одна або декілька сигнальних молекул являють собою один або декілька І СО, одну або декілька хітинових сполук, один або декілька СО, один або декілька флавоноїдів та їх похідні, один або декілька нефлавоноїдних індукторів под-гена та їх похідні, один або декілька карикінів та їх похідні або будь-яку (610) комбінацію таких сигнальних молекул.
СО
Ліпохітоолігосахаридні сполуки (СО), також відомі у даному рівні техніки як симбіотичні
Мод-сигнали або Моа-фактори, складаються з олігосахаридної основи з р-1,4-зв'язаних залишків
М-ацетил-О-глюкозаміну ("ЗІСМАс") з жирнокислотним ланцюгом, конденсованим з невідновлюючого кінця. І СО відрізняються за кількістю залишків (3І1СМАс основи, довжиною та ступенем насиченості ланцюга жирної кислоти, та за замісниками в залишках відновлювальних та невідновлювальних цукрів. Приклад СО представлений нижче у вигляді формули Ї,
Ссно.оК, СНоОКк;, (о) в)
Ов» Ов, о--
Ов.
МН-СО-в, Мн-в, п у якій
С являє собою гексозамін, який може бути заміщений, наприклад, ацетильною групою на атомі азоту, сульфатною групою, ацетильною групою та/або ефірною групою на атомі кисню,
Ви, В», В», В5, Нв і К7, які можуть бути однаковими або різними, являють собою Н, СНзСО-,
СНуСО-, де х являє собою ціле число від 0 до 17, а у являє собою ціле число від 1 до 35, або будь-яку іншу ацильну групу, таку як, наприклад, карбаміл,
Ва являє собою моно-, ди- або триненасичений аліфатичний ланцюг, який містить щонайменше 12 атомів вуглецю, а п являє собою ціле число від 1 до 4.
СО можуть бути одержані (виділені та/або очищені) з бактерій, таких як КПі2обіа, наприклад, НАпі2обійт 5рр., Вгадуті2оБбіит з5рр., зіпогпі2оріит 5рр. і А2огпі2орічт 5рр. Структура
І СО є характерною для кожного такого виду бактерій, і кожний штам може продукувати безліч
І СО з різними структурами. Наприклад, конкретні І СО з 5. теїШоїї також були описані в патенті
США Мо 5549718, причому вони мають формулу ЇЇ, р сНьоН нс снеон 2 но но но огр'но о он !
МН МН Мн (є) (в)
Нас є) СН
Н й й п у
К не
Ше сна у якій Е являє собою Н або СНзСО-, а п дорівнює 2 або 3.
Ще більш конкретно, СО включають МоакМмМ, МоакмМ-1, МоавмМ-3. При ацетилюванні (А-СНзіСО-) вони стають АсМодеМ-1 і АсМмодКкмМ-3, відповідно (патент США Мо 5545718).
ГСО з Вгадутігобішт |аропісит описані в патентах США МеМе 5175149 і 5321011. У широкому сенсі вони являють собою пентасахаридні фітогормони, які містять метилфукозу.
Описані деякі із цих І СО, одержаних з В. даропісит: ВіМмоа-м (Стви); ВімМоа-м (Ас, Ствл), ВімМоа-у (Сівл) та ВіМод-М (Ас, Стіво), де "М" указує на наявність п'яти М-ацетилглюкозамінів; "Ас" - ацетилювання; число після "С" позначає кількість атомів вуглецю в жирнокислотному бічному ланцюгу та число після ":" позначає кількість подвійних зв'язків.
ЇСО, використовувані в композиціях за даним винаходом, можуть бути одержані (тобто виділені та/або очищені) з бактеріальних штамів, які продукують СО, таких як штами
А?отіг2горішт, Вгадугпі2обіит (у тому числі В. |Іаропісит), Мезопіг2гобішт, Апі2обрішт (у тому числі
В. Іедитіпозагит), біпогпігобішт (у тому числі 5. теїоїї) і бактеріальних штамів, генетично сконструйованих для одержання І СО.
Також охопленими даним винаходом є композиції з використанням І СО, одержаних (тобто виділених та/або очищених) з мікоризних грибів, таких як гриби групи Сіотегосусоїа, наприклад,
СіотиФєх іпігагадіси5. Структури типових І СО, одержаних із цих грибів, описані в МО 2010/049751 і УМО 2010/049751 (І СО, описані в цих документах, також згадуються як " Мус-фактори").
Додатково охопленим композиціями за даним винаходом є застосування синтетичних сполук І СО, таких як ті, що описані в УМО 2005/063784, і рекомбінантних СО, одержаних за допомогою генної інженерії. Основна природна структура СО може містити модифікації або заміни, виявлені в природних / СО, такі як ті, що описані в 5раїпкК, Стії. Кем. Ріапі 5сі. 54:257-288 (2000) і С'Нає?е, єї аї., СіІусоБбіоіоду 12:79К-105К (2002). Олігосахаридні молекули-попередники (СО, які, як описано нижче, також придатні в якості сигнальних молекул рослин у даному винаході) для будівництва СО також можуть бути синтезовані генетично сконструйованими організмами, наприклад, як в Затаїп, еї аїЇ., Сагр. Ке5. 302:35-42 (1997); Затаїй, еї аї., у.
Віотесппої. 72:33-47 (1999).
Ї СО можуть бути використані в різних формах чистоти і можуть застосовуватися окремо або у вигляді культури Г/СО-продукуючих бактерій або грибів. Способи забезпечення практично чистих СО включають просте видалення мікробних клітин із суміші І СО і мікроорганізму або подальше виділення та очищення молекул СО шляхом фазового поділу І СО і розчинника з подальшою ВЕРХ-хроматографією, як описано, наприклад, у патенті США Мо 5549718.
Очищення можна поліпшити шляхом повторної ВЕРХ, а очищені молекули СО можуть бути ліофілізовані для тривалого зберігання. (Ф;6)
Хітоолігосахариди (СО) відомі в даному рівні техніки як ВД-1-4-зв'язані М-ацетилглюкозамінові структури, ідентифіковані як хітинові олігомери, а також як М-ацетилхітоолігосахариди. СО мають унікальні та різні фрагменти бічних ланцюгів, які роблять їх відмінними від молекул хітину
КСвНізМО»5)п, САЗ Мо 1398-61-4| і молекул хітозану (С5Ні:МОг)п, САЗ Мо 9012-76-4|. Типовою літературою, в якій описана структура та одержання СО, є наступна: Мап адег Нові, єї аї., Сиггепі
Оріпіоп іп бігисіига! Віоіоду, 11:608-616 (2001); Робіпа, єї аї., Теманедгтоп 58:521-530 (2002);
Напеї, сеї аї., Ріапіа 232:787-806 (2010); Воцаде, єї аї. Спарієг 27, "Пе Моїесціаг Іттипоіоду ої
Сотріех Сагропуагаїев" іп Адмапсез іп Ехрегітепіа! Меадісіпе апа Віоіоду, Зргіпдег Зсіепсе; УМап, еї а!., Ріапі СеїЇ 21:1053-69 (2009); РСТ/Е100/00803 (9/21/2000); та Оетопі-Сацівї, єї аї., Ріапі
Ріпузіої. 120(1):83-92 (1999). СО можуть бути синтетичними або рекомбінантними. Способи одержання рекомбінантних СО відомі в даному рівні техніки. Див., наприклад, батаїй, єї аї. (див. вище); Сойца?, еї аіІ., Мей. Епао. 7(4):311-7 (2005) та затагїйп, еї аї., У. Віотесппої. 72:33-47 (1999).
Хітинові сполуки
Хітини та хітозани, які є основними компонентами клітинних стінок грибів і екзоскелетів комах і ракоподібних, також складаються із залишків сісСМАс. Хітинові сполуки включають хітин (ІШРАС: М-І5-(З-ацетиламіно-4,5-дигідрокси-6-(гідроксиметил)оксан-2-іл|метоксиметилі-2-|((5- ацетиламіно-4,6-дигідрокси-2-(гідроксиметил)оксан-3-іл|Іметоксиметилі-4-гідрокси-6- (гідроксиметил)оксан-З-іл|(станамід) та хітозан (ІШРАС: 5-аміно-6-(5-аміно-6-(5-аміно-4,6- дигідрокси-2(гідроксиметил)оксан-3-іл|окси-4-гідрокси-2-(гідроксиметил)оксан-3-іл|окси- 2(гідроксиметил)оксан-3,4-діол).
Ці сполуки можуть бути одержані комерційно, наприклад, від бідта-АПагісн, або одержані з комах, панцирів ракоподібних або клітинних стінок грибів. Способи одержання хітину та хітозану відомі в даному рівні техніки та були описані, наприклад, у патенті США Мо 4536207 (одержання (610) з панцирів ракоподібних), Роспапамапісі, еї аї., Ген. Аррі. Містобіої!. 35:17-21 (2002) (одержання із клітинних стінок грибів) і в патенті США Мо 5965545 (одержання з панцирів крабів і гідроліз комерційного хітозану). Можна одержувати деацетильовані хітини та хітозани, ступінь деацетилювання яких варіює від менше 35 95 до більше 90 95, і при цьому охоплюється широкий спектр молекулярних мас, наприклад, олігомери хітозану з низькою молекулярною масою менше 15 кДа та олігомери хітину від 0,5 до 2 кДа; хітозан зі "ступенем чистоти для практичного застосування" з молекулярною масою приблизно 15 кДа та хітозан з високою молекулярною масою до 70 кДа. Також доступні для придбання хітинові та хітозанові композиції, складені для обробки насіння. Комерційні продукти включають, наприклад, ЕГЕХАФ (Ріапі Оеїепзе Воовіегв,
Іпс.) ії ВЕМОМО "м (Адгіпоизе, Іпо.).
Флавоноїди
Флавоноїди являють собою фенольні сполуки, що мають загальну структуру з двох ароматичних кілець, з'єднаних тривуглецевим містком. Флавоноїди продукуються рослинами і мають багато функцій, наприклад, у якості корисних сигнальних молекул і в якості засобів захисту від комах, тварин, грибів і бактерій. Класи флавоноїдів включають халкони, антоціанідини, кумарини, флавони, флаваноли, флавоноли, флаванони та ізофлавони. Див.
Уаїп, еї аї., У. Ріапі Віоспет. є Віотесппої. 11:1-10 (2002); ЗНаму, єї а!., Епмігоптепіа! Містобіо!. 11:1867-80 (2006).
Типові флавоноїди, які можуть бути придатними в композиціях за даним винаходом, включають лютеолін, апігенін, тангеритин, кверцетин, кемпферол, мірицетин, фізетин, ізорамнетин, пахіподол, рамназин, гесперетин, нарингенін, формононетин, еріодиктіол, гомоеріодиктіол, таксифолін, дигідрокверцетин, дигідрокемпферол, геністеїн, даідзеїн, гліцитеїн, катехін, галокатехін, катехіну З-галат, галокатехіну З-галат, епікатехін, епігалокатехін, епікатехіну 3-галат, епігалокатехіну 3-галат, ціанідинг, дельфінідин, мальвідин, пеларгонідин, пеонідин, петунідин або їхні похідні. Флавоноїдні сполуки є доступними для придбання, наприклад, від Майапа Іпіегпайопа! Согр., Кезеагсп Тгіапдіє Рагк, Північна Кароліна; МР
Віотедісаїє, Ірвін, Каліфорнія; С І арогафюгієех, Вобурн, Массачусетс. Флавоноїдні сполуки можуть бути виділені з рослин або насіння, наприклад, як описано в патентах США МоМо 5702752; 5990291 та 6146668. Флавоноїдні сполуки також можуть продукуватися генетично сконструйованими організмами, такими як дріжджі, як описано в Каї5іюоп, еї а!., Ріапї Рпузіоїоду 137:1375-88 (2005).
Нефлавоноїдний індуктор (індуктори) Мод-гена
Жасмонова кислота (А, 1 8-Па,28(2)1|-3-оксо-2-(пентеніл)уциклопентаноцтова кислота) та її похідні, лінолева кислота ((27, 2)-9,12-октадекадієнова кислота) та її похідні і ліноленова кислота (2, 2,4)-9,12,15-октадекатриєнова кислота) та її похідні також можуть бути використані в композиціях за даним винаходом. Жасмонова кислота та її метиловий естер, метилжасмонат (МедА), відомі під загальною назвою жасмонати, є сполуками на основі октадеканоїду, які зустрічаються в природі в рослинах. Жасмонова кислота продукується корінням проростків пшениці та грибковими мікроорганізмами, такими як Воїгуодіріодіа Шеорготає і Сірьгейа
ІцііКигої, дріжджами (Засспаготусез сегемізіає) і патогенними і непатогенними штамами
Ебспегіспіа соїї. Лінолева кислота та ліноленова кислота продукуються в процесі біосинтезу жасмонової кислоти. Як повідомлялося, жасмонати, лінолева кислота та лінолева кислота (та їх похідні) є індукторами експресії под-генів або продукування СО ризобактеріями. Див., наприклад, Маброссй, ГРалії, дхазтопаїев іпдисе Ше ехргезвіоп ої под депев5 іп Вгадутппігорбійт )аропісит, Мау 17, 2001; і Маброса, Ралії, "Сіпоївїс апа Імпоїепіс асіа іпдисе їйе ехргеззіоп ої пой депез іп Вгадугппі2гобішт |аропісит, " ОБОА 3, Мау 17, 2001.
Придатні похідні лінолевої кислоти, ліноленової кислоти та жасмонової кислоти, які можуть бути придатними в композиціях за даним винаходом, включають естери, аміди, глікозиди та солі. Типові естери є сполуками, у яких карбоксильна група лінолевої кислоти, ліноленової кислоти або жасмонової кислоти була замінена групою -СОК, де ЕК являє собою групу -ОВ', у якій В' позначає алкільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена алкільна група С.:-Св, наприклад, метильна, етильна або пропільна група; алкенільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена С2-Свалкенільна група; алкінільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена Сго-Свалкінільна група; арильну групу, наприклад, з 6-10 атомами вуглецю; або гетероарильну групу, наприклад, з 4-9 атомами вуглецю, де гетероатоми в гетероарильній групі можуть являти собою, наприклад, М, О, Р або 5. Типові аміди являють собою сполуки, у яких карбоксильна група лінолевої кислоти, ліноленової кислоти або жасмонової кислоти була замінена групою -СОК, де К являє собою групу МКУ, у якій КЗ? і ЕЗ незалежно являють собою водень; алкільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена С1-Свалкільна група, наприклад, метильна, етильна або пропільна група; алкенільну групу, таку як нерозгалужена або (610) розгалужена Со-Свалкенільна група; алкінільну групу, таку як нерозгалужена або розгалужена
С2-Свалкінільна група; арильну групу, наприклад, з 6-10 атомами вуглецю; або гетероарильну групу, наприклад, з 4-9 атомами вуглецю, де гетероатоми в гетероарильній групі можуть являти собою, наприклад, М, О, Р або 5. Естери можуть бути одержані відомими способами, такими як каталізоване кислотою нуклеофільне приєднання, де карбонова кислота реагує зі спиртом у присутності каталітичної кількості мінеральної кислоти. Аміди також можуть бути одержані відомими способами, такими як взаємодія карбонової кислоти з відповідним аміном у присутності засобу, що зшиває, такого як дициклогексилкарбодімід (ОСС), у нейтральних умовах. Придатні солі лінолевої кислоти, ліноленової кислоти та жасмонової кислоти включають, наприклад, солі приєднання основи. Основи, які можуть бути використані в якості реагентів для одержання метаболічно прийнятних основних солей цих сполук, включають солі, одержані з катіонами, такими як катіони лужних металів (наприклад, калію та натрію) і катіонами лужноземельних металів (наприклад, кальцію та магнію). Ці солі можуть бути легко одержані шляхом змішування розчину лінолевої кислоти, ліноленової кислоти або жасмонової кислоти з розчином основи. Сіль можна осадити з розчину та зібрати шляхом фільтрації або можна витягти за допомогою інших засобів, наприклад, шляхом випарювання розчинника.
Карикін (карикіни)
Карикіни являють собою вінілогічні 4 Н-пірони, наприклад, 2Н-фурої2,3-с|Іпіран-2-они, у тому числі їх похідні та аналоги. Приклади цих сполук представлені наступною структурою: ,; в б
Кз 7 Кк, де 7 являє собою О, 5 або МК5; кожний з ЕК, Н», Вз і К. незалежно являє собою Н, алкіл, алкеніл, алкініл, феніл, бензил, гідроксі, гідроксіалкіл, алкоксі, фенілоксі, бензилоксі, СМ, СОКв,
СооОК-, галоген, МЕКєН; або МО»; та кожний з К5, Нв і К7 незалежно являє собою Н, алкіл або алкеніл, або її біологічно прийнятною сіллю. Приклади біологічно прийнятних солей цих сполук можуть включати солі приєднання кислоти, утворені біологічно прийнятними кислотами, приклади яких включають гідрохлорид, гідробромід, сульфат або бісульфат, фосфат або гідрофосфат, ацетат, бензоат, сукцинат, фумарат, малеат, лактат, цитрат, тартрат, глюконат; метансульфонат, бензолсульфонат та п-толуолсульфокислоту. Додаткові біологічно прийнятні солі металів можуть включати солі лужних металів з основами, приклади яких включають солі натрію і калію. Приклади сполук, які охоплені структурою та які можуть бути придатними для застосування в даному винаході, включають наступні: З-метил-2Н-фуро|2,3-с|піран-2-он (де
В8І-СНз, В2, ВАз, ВА-Н), 2Н-фуро!/2,3-с|Іпіран-2-он (де Ві, В», Аз, ВА-Н), 7-метил-2Н-фуро|2,3- с|Іпіран-2-он (де Ві, В2, ВА-Н, Вз-СНз), 5-метил-2Н-фуро|2,3-с|Іпіран-2-он (де В:, В», Вз-Н,
ВА-СН»з), 3,7-диметил-2Н-фурої|2,3-с|Іпіран-2-он (де Ві, Нз-СНз, Аг, ВА-Н), З3,5-диметил-2Н- фурої2,3-с|піран-2-он (де Ві, ВА-СН»з, В», Вз-Н), 3,5,7-триметил-2Н-фурої|2,3-с|піран-2-он (де Ні,
Аз, Ва-СНз, В2-Н), 5-метоксиметил-З-метил-2Н-фуро|2,3-с|Іпіран-2-он (де НВІ-СНз, В», Вз-Н, вВАСНгОСН»), 4-бром-3,7-диметил-2Н-фурої|2,3-с|Іпіран-2-он (де Ві, Нз-СНз, В2-ВІ, ВА-Н), 3- метилфурої2,3-с|Іпіридин-2(ЗН)-он (де 2-МН, ВІ-СНз, В», Аз, ВА-Н), 3,б-диметилфурої|2,3- сІпіридин-2(6Н)-он (де 2-М--СНз, ВІ-СНз, В», Аз, ВА-Н). Див. патент США Мо 7576213. Ці молекули також відомі як карикіни. Див. Наїйога "ЗтоКе Зідпаіє" в Спет. Епо. Мем/5 (Аргії 12, 2010) на сторінках 37-38 (повідомляється, що карикіни або бутеноліди, які містяться в диму, діють як стимулятори росту і спонукують проростання насіння після лісової пожежі і можуть підвищувати життєздатність насіння, наприклад, насіння кукурудзи, різновидів томату, латуку та різновидів цибулі, які були збережені). Ці молекули є предметом патенту США Мо 7576213.
Корисний мікроорганізм (мікроорганізми)
В одному з варіантів здійснення композиції, описані в даному документі, можуть містити один або декілька корисних мікроорганізмів. Один або декілька корисних мікроорганізмів можуть мати одну або декілька корисних властивостей (наприклад, продукування однієї або декількох сигнальних молекул, описаних у даному документі, посилення поглинання поживних речовин і води, посилення росту, поліпшення проростання насіння, поліпшення появи проростків, виведення зі стану спокою насіння або рослини і т.д.).
В одному варіанті здійснення корисний мікроорганізм (мікроорганізми) включає одну або декілька бактерій, які продукують одну або декілька сигнальних молекул, описаних у даному документі. У ще одному варіанті здійснення ці бактерії являють собою бактерії з родів Впігобійт 5рр. (наприклад, Н. сеїПміозйуїйсит, В. дає|єопепзе, Н. ей, А. даІедає, В. даїПсит, НВ. діагаїпії, В.
Наіпапепз5е, В. пиашенпзвзе, В. іпаідоїтегає, В. Іеєдитіпозагит, В. Іоез55епзе, В. Іюріпі, А. Ішзйапит,
В. теїйоїї, В. топодоіепзе, В. тіішопепвзе, В. зийІає, В. горісі, В. ипаїсоїа та/або В. уапдііпдепве),
А?огпігорішт врр. (наприклад, А. сацііподапе та/або А. доебрегеїіпегає), Біпогпігобішт врр. (наприклад, 5. абгі, 5. аднаєгепв, 5. атегісапит, 5. арогів, 5. їгедії, 5. іпдіаепзе, 5. Ковіїєпве, 5.
Киттегом/іає, 5. тедісає, 5. теїПоїї, 5. техісапив, 5. тогеїІепзе, 5. занеїї, 5. їетапдає та/або 5. хіпіапдепзе), Мезотпі2обішт з5рр., (М. аїрігіає, М. атогрпає, М. спасоепзе, М. сісетгі, М. пиакКиії,
М. Іоїї, М. теайетапешцт, М. рішапит, М. зерієпігопаї!є, М. Тетрегайшт та/або М. Пап5Ппапепзе) та їх комбінації. У конкретному варіанті здійснення корисний мікроорганізм вибраний з групи, що включає ЕК. Іедитіпозагит, К. теїШоїї, 5. теїШоїї та їх комбінації. В іншому варіанті здійснення корисний мікроорганізм являє собою К. Іедитіпозагит. В іншому варіанті здійснення корисний мікроорганізм являє собою К теїйоїї. В іншому варіанті здійснення корисний мікроорганізм являє собою 5. теїЙоїї.
В іншому варіанті здійснення один або декілька корисних мікроорганізмів включають один або декілька мікроорганізмів, що солюбілізують фосфати. Мікроорганізми, що солюбілізують фосфати, включають штами грибів та бактерій. В одному з варіантів здійснення мікроорганізм, що солюбілізує фосфати, включає види з роду, вибраного з групи, що включає Асіпеїобасієг 5рр. (наприклад, Асіпеїюбасівг саІсоасеїсивз і т.д.), АПпгобасієг 5рр, Ап Пгобоїгув 5рр. (наприклад,
АпПпгороїгуз оїЇїдозрога і т.д.), А5регдіив5 5рр. (наприклад, Азрегайиз підег і т.д.), А2о5ріпшт 5рр. (наприклад, Аг2о5рійнПит Наіоргаєїегапз і т.д.), Васійив 5рр. (наприклад, Васіїи5 атупоїїдиетасівепв,
Васйив5 акорнаєиз, Васіїїи5 сіксшапз, ВасіПи5 ІПспепігогтів, Васійив5 5!,ибБнЇ5 і т.д.), Витїкпоїдетіа 5рр. (наприклад, ВиКпоЇдегіа серасіа, ВигКНоЇдепа мівіпатіепвів і т.д.), Сапаїда 5рр. (наприклад,
Сапаїда Киїзвії і т.д.), Сптузеотопавз 5рр. (наприклад, Спгузеотопаз Ішеоїа і т.д.), Епіегобасієг 5рр. (наприклад, Епієгорасієг аєгодепев, Епіегобрасієї азригіає, Епіегорасієг зрр., Епіегобасієг
ЗО ауюгавє і т.д.), Еирепісіїййшт 5рр. (наприклад, ЕирепісШит рагмит і т.д.), Ехіднобасієгійт 5рр.,
Кіебзієїа 5рр., Кісумега 5рр. (наприклад, Кіпумега сгуостезсепзв і т.д.), Місторасієтішт 5рр., Мисог 5рр. (наприклад, Мисог гатозвіввітив і т.д.), Раесіотусез 5рр. (наприклад, Раесіотусез Періаїа,
Раеспотусеб5 тагдцапай і т.д.), Раепірбасійй5 5рр. (наприклад, РаєпібрасіїШ5 тасегапв,
Раепівбасійи5 тисііадіповиз і т.д.), Репісіїйшт 5рр. (наприклад, Репісіїйшт бБііаіаеє (раніше відомий як Репісійшт біїаї), Репісіййшт аїрідит, Репісійит ашйгапіодгізеит, Репісйит спгузодепит,
РепісШит сітеопідгит, РепісшШіит сігпіпит, Репісійит аіднацшт, РепісШит педшиепіа5, РепісШит
Тибсцт, Репісіййшт даевігмоги5, Репісіййшт діабиит, Репісіййшт дгізеоїшмит, Репісійшт ітріїсайшт, Репісіййшт |апіпіпейит, РепісіШит Шасіпит, Репісійшт тіпіоїшіеит, Репісійит топіапепбе, Репісіййшт підгісап5, Репісіййшт охаїсит, РепісйШіишт ріпеїгит, РепісйШт ріпорпіїшт, РепісйШіиит ригригодепит, РепісшШіт гадісап5, РепісШіит гадісит, Репісійит гаівітісКії, Репісійит гидшовит, Репісіит в5ітріїсіввітит, Репісіййшт воїйит, РепісшШит магабіїє,
РепісшШіит меїшіпит, РепісшШіит мігадісайт, РепісшШіит діайсит, Репісійит Тив5в5ірогив5, апа
РепісШіит ехрапзит і т.д.) Рвепдотопаз 5рр. (наприклад, Рб5епдотопа5 сотидаїє,
Резепдотопавз Пиогезсеп5, Реецдотопаб5 Ішеа, Рзепдотопаз роає, Реепдотопавз риїаа,
Рзепдотопазв 5ішці2егі, Реендотопаз ігіміаїв і т.д.), Зеїтайа 5рр. (наприклад, беїтайа тагсезсепв і т.д.), Зіепоїгорпотопах з5рр. (наприклад, 5іепоторпотопав тапПорніїа і т.д.), Зіеріотусез зврр., зігеріозрогапдійт врр., ЗмжматіпаїШапіа 5рр. (наприклад, булатіпаїнапіа заїйоІегапе і т.д.),
Тпіорбасійи5 5рр. (наприклад, ГПіобасіїйиє Тетоохідап5 і т.д.), ТогшШозрога 5рр. (наприклад,
Тогміозрога діороза і т.д.), Мібгіо 5рр. (наприклад, Мібгіо ргоїео|уїісив і т.д.), Хапіпобасієг 5рр. (наприклад, Хапіпобасієг адіїв і т.д.), Хапіпотопах 5рр. (наприклад, Хапіпотопах5 сатрезвіків і т.д.) і їхніх комбінацій.
У конкретному варіанті здійснення один або декілька мікроорганізмів, що солюбілізують фосфати, являють собою штам гриба Репісіййшт. В іншому варіанті здійснення один або декілька видів Репісйит являють собою Р. БрііІаіає, Р. даєвзінмогив або їх комбінацію.
В іншому варіанті здійснення корисний мікроорганізм являє собою одну або декілька мікориз. Зокрема, одна або декілька мікориз являють собою ендомікоризи (також називані везикулярно-арбускулярними мікоризами, МАМ, арбускулярними мікоризами або АМ), ектомікоризи або їх комбінацію.
В одному варіанті здійснення одна або декілька мікориз являють собою ендомікоризи з (610) відділу Сіотеготусоїа і родів Спіотивє та (Сзідазрога. У ще одному варіанті здійснення ендомікориза являє собою штам Спіотив аддгедайт, Спіотив Бгазійапит, Сіотив сіагит,
Спіотив аезепісоїа, Сіотив ейшпісайшт, Суіотив Тазсісшайшт, Сутіотив іпігагадісе5, С'іотив топозрогит або Сіотив то55еае, Сідазрога тагдагіа або їх комбінацію.
В іншому варіанті здійснення одна або декілька мікориз являють собою ектомікоризи з відділу Вазідіотусоїа, Азсотусоїа і 7удотусоїа. У ще одному варіанті здійснення ектомікориза являє собою штам І ассагіа рісоїог, І ассагіа Іассаїа, Різоїйпиз (іпсіогіи5, Кпігородоп атуіородоп,
АПпіг2городоп Шмідіеєра, Апігородоп Ішеоіи5, АПігородоп міПовиїй, Зсіегодепта сера, Зсієгодетта сігіпит або їх комбінацію.
У ще одному варіанті здійснення одна або декілька мікориз являють собою ерикоїдні мікоризи, арбутоїдні мікоризи або монотропоїдні мікоризи. Арбускулярні мікоризи та ектомікоризи утворюють ерикоїдну мікоризу з багатьма рослинами, що належать до порядку
ЕгісаІев, у той час як деякі ЕгісаІ(е5 утворюють арбутоїдну і монотропоїдну мікоризу. Усі орхідні є мікогетеротрофними на певному етапі свого життєвого циклу і утворюють орхідні мікоризи з рядом базидіальних грибів. В одному варіанті здійснення мікориза може бути ерикоїдною мікоризою, переважно з відділу Авсотусоїа, наприклад, Нутепозсурпои5 егісае або
Оідіодепдтоп зр. В іншому варіанті здійснення мікориза може бути також арбутоїдною мікоризою, переважно з відділу Вазідіотусоїа. У ще одному варіанті здійснення мікориза може бути монотропоїдною мікоризою, переважно з відділу Вавзідіотусоїа. У ще одному варіанті здійснення мікориза може бути орхідною мікоризою, переважно з роду Впігосіопіа.
Поживний мікроелемент (мікроелементи)
У ще одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть містити один або декілька корисних поживних мікроелементів. Необмежуючі приклади поживних мікроелементів для застосування в композиціях, описаних у даному документі, включають вітаміни (наприклад, вітамін А, вітаміни групи В (тобто, вітамін Ви, вітамін В», вітамін В», вітамін
В, вітамін Вб, вітамін В7, вітамін Ве, вітамін В», вітамін В-і»2, холін), вітамін С, вітамін 0, вітамін Е, вітамін К, каротиноїди (с-каротин, В-каротин, криптоксантин, лютеїн, лікопен, зеаксантин і т.д.), макромінерали (наприклад, фосфор, кальцій, магній, калій, натрій, залізо і т.д.), мікроелементи (наприклад, бор, кобальт, хлорид, хром, мідь, фторид, йод, залізо, марганець, молібден, селен, цинк і т.д.), органічні кислоти (наприклад, оцтова кислота, лимонна кислота, молочна кислота, яблучна кислота, таурин і т.д.) і їх комбінації. У конкретному варіанті здійснення композиції можуть містити фосфор, бор, хлор, мідь, залізо, марганець, молібден, цинк або їх комбінації.
У деяких варіантах здійснення, у яких композиції, описані в даному документі, можуть містити фосфор, передбачається, що може бути надане будь-яке придатне джерело фосфору.
В одному варіанті здійснення фосфор може бути одержаний із джерела. В іншому варіанті здійснення придатні джерела фосфору включають джерела фосфору, здатні солюбілізуватися за допомогою одного або декількох мікроорганізмів (наприклад, Репісійшт бБііаїає і т.д.).
В одному варіанті здійснення фосфор може бути одержаний з фосфоритного джерела. В іншому варіанті здійснення фосфор може бути одержаний з добрив, що містять один або декілька джерел фосфору. Доступні для придбання промислові фосфатні добрива поділяються на багато типів. Деякими з розповсюджених є такі, що містять фосфорит, моноамонійфосфат, діамонійфосфат, монокальційфосфат, суперфосфат, потрійний суперфосфат та/або поліфосфат амонію. Усі ці добрива одержують шляхом хімічної обробки нерозчинних природних фосфоритів на великомасштабних підприємствах з виробництва добрив, і продукт є дорогим.
За допомогою даного винаходу можна зменшити кількість цих добрив, які вносять у грунт, при збереженні такої саме кількості поглинання фосфору із грунту.
У ще одному варіанті здійснення фосфор може бути одержаний з органічних джерел фосфору. У додатковому конкретному варіанті здійснення джерело фосфору може включати органічне добриво. Органічне добриво відноситься до покращувача грунту, одержаного з природних джерел, що гарантує щонайменше мінімальний процентний вміст азоту, фосфату і поташу. Необмежуючі приклади органічних добрив включають рослинні та тваринні побічні продукти, кам'яний пил, морські водорості, інокуляти та покращувачі. Вони зазвичай доступні в садових центрах і через садівничі компанії- постачальники. Зокрема, органічним джерелом фосфору є кісткове борошно, м'ясне борошно, гній, компост, осад стічних вод або гуано або їх комбінації.
У ще одному варіанті здійснення фосфор може бути одержаний з комбінації джерел фосфору, включаючи без обмежень фосфорит, добрива, що містять один або декілька джерел фосфору (наприклад, моноамонійфосфат, діамонійфосфат, монокальційфосфат, суперфосфат, потрійний суперфосфат, поліфосфат амонію і т.д), одне або декілька органічних джерел фосфору та їх комбінації. (610) Біостимулятор (біостимулятори)
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть містити один або декілька корисних біостимуляторів. Біостимулятори можуть підсилювати метаболічні або фізіологічні процеси, такі як дихання, фотосинтез, поглинання нуклеїнових кислот, поглинання іонів, доставка поживних речовин або їх комбінація. Необмежуючі приклади біостимуляторів включають екстракти морських водоростей (наприклад, азсорпуйшт подозит), гумінові кислоти (наприклад, гумат калію), фульвові кислоти, міоінозитол, гліцин та їх комбінації. В іншому варіанті здійснення композиції містять екстракти морських водоростей, гумінові кислоти, фульвові кислоти, міоінозитол, гліцин та їх комбінації.
Полімер (полімери)
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть додатково містити один або декілька полімерів. Необмежуючі способи застосування полімерів у сільському господарстві включають агрохімічну доставку, видалення важких металів, затримку води та/або доставку води та їх комбінації. Рошсі, еї аі., Ат. у). Аді. 4 Віої. Зсі., 3(1):299-314 (2008). В одному варіанті здійснення один або декілька полімерів являють собою природний полімер (наприклад, агар, крохмаль, альгінат, пектин, целюлозу і т.д.), синтетичний полімер, полімер, що біорозкладається (наприклад, полікапролактон, полілактид, полівініловий спирт і т.д.) або їх комбінацію.
Стосовно необмежуючого переліку полімерів, придатних для описаних у даному документі композицій, див. Роишсі, еї аїЇ., Ат. ). Аді. 5 Вісі. 5сі., 3(1):299-314 (2008). В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, містять целюлозу, похідні целюлози, метилцелюлозу, похідні метилцелюлози, крохмаль, агар, альгінат, пектин, полівінілпіролідон та їх комбінації.
Змочувальний засіб (засоби)
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть додатково містити один або декілька змочувальних засобів. Змочувальні засоби звичайно використовують на грунтах, зокрема гідрофобних грунтах, щоб поліпшити просочування та/або проникнення води в грунт. Змочувальний засіб може являти собою допоміжну речовину, масло, поверхнево- активну речовину, буфер, підкислювач або їх комбінацію. В одному варіанті здійснення змочувальний засіб являє собою поверхнево-активну речовину. В одному варіанті здійснення змочувальний засіб являє собою одну або декілька неїонних поверхнево-активних речовин, одну або декілька аніонних поверхнево-активних речовин або їх комбінацію. У ще одному варіанті здійснення змочувальний засіб являє собою одну або декілька неіонних поверхнево- активних речовин.
Поверхнево-активні речовини, придатні для композицій, описаних у даному документі, наведені в розділі "Поверхнево-активні речовини".
Поверхнево-активна речовина (речовини)
Поверхнево-активні речовини, придатні для композицій, описаних у даному документі, можуть бути неїонними поверхнево-активними речовинами (наприклад, напівполярними, та/або аніонними, та/або катіонними, та/або цвітеріонними). Передбачається, що поверхнево-активна речовина (речовини) буде викликати як можна меншу шкоду для активності одного або декількох депонованих штамів та/або одного або декількох корисних мікроорганізмів, наскільки це можливо. Поверхнево-активні речовини можуть зволожувати та емульгувати грунт (грунти) та/або землю (землі). Передбачається, що поверхнево-активні речовини, використані в описаній композиції, мають низьку токсичність для мікроорганізмів, що містяться в складі. Додатково передбачається, що поверхнево-активні речовини, використані в описаній композиції, мають низьку фітотоксичність (тобто ступінь токсичності речовини або комбінації речовин для рослини). Можна використовувати одну поверхнево-активну речовину або суміш декількох поверхнево-активних речовин.
Аніонні поверхнево-активні речовини
Також в композиціях можуть бути використані аніонні поверхнево-активні речовини або суміші аніонних і неїонних поверхнево-активних речовин. Аніонні поверхнево-активні речовини являють собою поверхнево-активні речовини, які мають гідрофільний фрагмент в аніонному або негативно зарядженому стані у водному розчині. Композиції, описані в даному документі, можуть містити одну або декілька аніонних поверхнево-активних речовин. Аніонна поверхнево- активна речовина (речовини) може являти собою або водорозчинну аніонну поверхнево- активну речовину, водонерозчинну аніонну поверхнево-активну речовину або комбінацію водорозчинних аніонних поверхнево-активних речовин і водонерозчинних аніонних поверхнево- активних речовин. Необмежуючі приклади аніонних поверхнево-активних речовин включають сульфонові кислоти, естери сірчаної кислоти, карбонові кислоти та їхні солі. Необмежуючі (610) приклади водорозчинних аніонних поверхнево-активних речовин включають алкілсульфати,
алкілетерсульфати, алкіламідоетерсульфати, алкіларилполіетерсульфати, алкіларилсульфати, алкіларилсульфонати, моногліцеридсульфати, алкілсоульфонати, алкіламідсульфонати, алкіларилсульфонати, бензолсульфонати, толуолсульфонати, ксилолсульфонати, кумолсульфонати, алкілбензолсульфонати, алкілдифенілоксидсульфонати, альфа- олефінсульфонати, алкілнафталінсульфонати, сульфонати парафінів, сульфонати лігніну, алкілсульфосукцинати, етоксильовані сульфосукцинати, алкілетерсульфосукцинати, алкіламідсульфосукцинати, алкілсоульфосукцинамат, алкілсульфоацетати, алкілфосфати, естер фосфорної кислоти, алкілетерфосфати, ацилсаркозинати, ацилізотіонати, М-ацилтаурати, М- ацил-М-алкілтаурати, алкілкарбоксилати або їх комбінації.
Неїонні поверхнево-активні речовини
Неїонні поверхнево-активні речовини являють собою поверхнево-активні речовини, які не мають електричного заряду при розчиненні або диспергуванні у водному середовищі.
Щонайменше в одному варіанті здійснення композиції описаної в даному документі, використовують одну або декілька неіїонних поверхнево-активних речовин, оскільки вони забезпечують необхідну змочувальну та емульгувальну дію і не інгібують значно стабільність і активність спор. Неіонна поверхнево-активна речовина (речовини) може являти собою або водорозчинну неіїонну поверхнево-активну речовину, водонерозчинну неіонну поверхнево- активну речовину або комбінацію водорозчинних неіонних поверхнево-активних речовин і водонерозчинних неіонних поверхнево-активних речовин.
Водонерозчинні неіонні поверхнево-активні речовини
Необмежуючі приклади водонерозчинних неіонних поверхнево-активних речовин включають алкільні та арильні: етери гліцеролу, гліколеві етери, етаноламіди, сульфаніламіди, спирти, аміди, етоксилати спирту, естери гліцеролу, гліколеві естери, етоксилати естерів гліцерину та гліколевих естерів, алкілполіглікозиди на основі цукрів, поліоксіетильовані жирні кислоти, конденсати алканоламіну, алканоламіди, третинні ацетиленові гліколі, поліоксіетильовані меркаптани, естери карбонових кислот, поліоксіетильовані поліоксипропіленгліколі, сорбітанові естери жирних кислот або їх комбінації. Також включені ЕО/ПО-блок-співполімери (ЕО являє собою етиленоксид, ПО являє собою пропіленоксид), полімери та співполімери ЕО, поліаміни та полівінілпіролідони.
Водорозчинні неїонні поверхнево-активні речовини
Необмежуючі приклади водорозчинних неіонних поверхнево-активних речовин включають сорбітанові етоксилати спиртів жирних кислот і сорбітанові етоксилати естерів жирних кислот.
Комбінація неіонних поверхнево-активних речовин
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, містять щонайменше одну або декілька неїонних поверхнево-активних речовин. В одному варіанті здійснення композиції містять щонайменше одну водонерозчинну неіонну поверхнево-активну речовину і щонайменше одну водорозчинну неіонну поверхнево-активну речовину. У ще одному варіанті здійснення композиції містять комбінацію неіїонних поверхнево-активних речовин, що мають вуглеводневі ланцюги практично однакової довжини.
Інші поверхнево-активні речовини
В іншому варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть також містити кремнійорганічні поверхнево-активні речовини, піногасники на кремнієвій основі, використовувані в якості поверхнево-активних речовин у піногасниках на кремнієвій основі, та на основі мінерального масла. У ще одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть також містити солі лужних металів жирних кислот (наприклад, водорозчинні солі лужних металів жирних кислот та/або водонерозчинні солі лужних металів жирних кислот).
Гербіцид (гербіциди)
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть додатково містити один або декілька гербіцидів. У конкретному варіанті здійснення гербіцид може являти собою досходовий гербіцид, післясходовий гербіцид або їх комбінацію.
Придатні гербіциди включають хімічні гербіциди, природні гербіциди (наприклад, біогербіциди, органічні гербіциди і т.д.) або їх комбінації. Необмежуючі приклади придатних гербіцидів включають бентазон, адифлуорфен, хлоримурон, лактофен, кломазон, флуазифоп, глуфосинат, гліфосат, сетоксидим, імазетапір, імазамокс, фомесафен, флуміклорак, імазахін, клетодим, пендиметалін; 3,4-диметил-2,6-динітро-М-пентан-З-іл-анілін; М-(1-етилпропіл)-2,6- динітро-3,4-ксилідин; пронамід; пропізамід; З3,5-дихлор-М-(1,1-диметилпропініл)бензамід; 3,5- дихлор-М-(1,1-диметил-2-пропініл)бензамід; / М-(1,1-диметилпропініл)-3,5-дихлорбензамід; -5- етил М-етилтіоциклогексанкарбамат; трифлуралін; 2,6-динітро-М, М-дипропіл-4- (трифторметил)уанілін; гліфосат; М-(фосфонометил)гліцин та їх похідні. В одному варіанті 10) здійснення один або декілька гербіцидів для застосування згідно з даним розкриттям включають пронамід (який має комерційну назву Кептпф); пропізамід; З,5-дихлор-М-(1,1- диметилпропініл)бензамід; 3,5-дихлор-М-(1,1-диметил-2-пропініл)бензамід; М-(1,1- диметилпропініл)-3,5-дихлорбензамід; циклоат, 5-етил М-етилтіоциклогексанкарбамат (який має комерційну назву НКо-Мееке); трифлуралін; 2,6-динітро-М, М-дипропіл-4-«трифторметил)анілін; гліфосат; М-(фосфонометил)гліцин та їх похідні. Комерційні продукти, які містять кожну з цих сполук, легко доступні. Концентрація гербіциду в композиції, як правило, відповідає відзначеній нормі споживання для певного гербіциду.
Фунгіцид (фунгіциди)
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть додатково містити один або декілька фунгіцидів. Фунгіциди, придатні в композиціях, описаних у даному документі, будуть відповідним чином проявляти активність проти широкого спектра патогенних мікроорганізмів, включаючи без обмежень РНуїорійпога, ЕПігосіопіа, ЕРизагішт, РуцйічЧт,
Рпоторзхів або Зеїегоїїпіа і Рпакорзога та їх комбінації.
Необмежуючі приклади комерційних фунгіцидів, які можуть бути придатними для композицій, розкритих у даному документі, включають РЕОТЕСЕ, ВІМАЇ. або АП'ЕСІАМСЕ РІ. або І 5 (Сивіаїзоп, Плано, Техас), ШМАКОЕМ КТА (Адгіапсе, Сент-Пол, Міннесота), АРЕОМ ХІ,
АРКОМ МАХХ КТА або КЕС, МАХІМ 4Е5 або Хі (Зупдепіа, Уілмінгтон, Делавер), САРТАМ (Агмезіа, Гвельф, Онтаріо) і РКОТКЕАТ (Міїгадіп Агдепііпа, Буенос-Айрес, Аргентина). Активні інгредієнти в цих та інших комерційних фунгіцидах включають без обмежень флудіоксоніл, мефеноксам, азоксистробін і металаксил. Комерційні фунгіциди краще за все використовувати відповідно до інструкцій виготовлювача в рекомендованих концентраціях.
Інсектицид (інсектициди)
В одному варіанті здійснення композиції, описані в даному документі, можуть додатково містити один або декілька інсектицидів. Інсектициди, придатні в композиціях, описаних у даному документі, будуть відповідним чином проявляти активність проти широкого спектра комах, включаючи без обмежень дротяників, совок, личинок, злакового кореневого хробака, личинок мухи паросткової, блішок, клопів-наземників, тлю, листоїдів, щитників та їх комбінації.
Необмежуючі приклади комерційних інсектицидів, які можуть бути придатними для композицій, описаних у даному документі, включають СКИОЇЗЕК (Зупдепіа, Уілмінгтон, Делавер),
САШСНО їі РОМСНО (Сизіагїзоп, Плано, Техас). Активні інгредієнти в цих та інших комерційних інсектицидах включають тіаметоксам, клотіанідин та імідаклоприд. Комерційні інсектициди краще за все використовувати відповідно до інструкцій виготовлювача в рекомендованих концентраціях.
Способи
В іншому аспекті розкриті способи застосування депонованих штамів і композицій, описаних у даному документі.
В одному варіанті здійснення описаний спосіб посилення росту рослин. Спосіб включає приведення в контакт рослини або частини рослини з інокулятом одного або декількох бактеріальних штамів, вибраних з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50608; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МАК. В-50612; або суміші із двох або більше із цих штамів.
У конкретному варіанті здійснення інокулят може містити один або декілька вищезгаданих депонованих штамів (наприклад, включаючи щонайменше два із вказаних вище штамів, щонайменше три із вказаних вище штамів, щонайменше чотири із вказаних вище штамів, аж до включення всіх вказаних вище штамів).
В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МАККІ. В-50608. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК! В-50609. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК! В-50610. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК В-50611. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. В- 50612.
У ще одному варіанті здійснення етап приведення в контакт рослини або частини рослини з інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає приведення в контакт рослини або частини рослини з однією або декількома композиціями, описаними в (610) даному документі. Інокулят (інокуляти) або композиції можуть бути виготовлені для контакту з рослиною або частиною рослини згідно зі способами, відомими фахівцям у даній галузі.
Необмежуючі приклади включають уведення в борозну, покриття насіння і т.д. У конкретному варіанті здійснення етап приведення в контакт включає введення в борозну інокуляту або композицій, описаних у даному документі. У конкретному варіанті здійснення етап приведення в контакт включає введення "на насіння" (покриття насіння) інокуляту або композицій, описаних у даному документі.
У деяких варіантах здійснення етап приведення в контакт рослини або частини рослини з інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає введення інокуляту в грунт у кількості 1х10! - 1х108, більш переважно 1х105 - 1х1012 колонієутворюючих одиниць на гектар. У деяких інших варіантах здійснення етап приведення в контакт рослини або частини рослини з інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає введення депонованих бактеріальних штамів у вигляді насіння, покритого 1х10"! - 1х108, більш переважно 1х102 - 1х106 колонієутворюючих одиниць на насінину.
В іншому аспекті спосіб включає вирощування рослин на грунті, що містить один або декілька бактеріальних штамів. Спосіб включає а) обробку грунту інокулятом одного або декількох бактеріальних штамів, вибраних з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50608; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МАК. В-50612; або суміші із двох або більше із цих штамів; і б) вирощування рослини на обробленому грунті.
У конкретному варіанті здійснення інокулят може містити один або декілька вищезгаданих депонованих штамів (наприклад, включаючи щонайменше два із вказаних вище штамів, щонайменше три із вказаних вище штамів, щонайменше чотири із вказаних вище штамів, аж до включення всіх вказаних вище штамів).
В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МАККІ. В-50608. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК! В-50609. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК! В-50610. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МКК В-50611. В одному з варіантів здійснення інокулят містить штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В- 50612.
Етап обробки грунту інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає обробку грунту однією або декількома композиціями, описаними в даному документі.
Інокулят (інокуляти) або композиції можуть бути введені в грунт згідно зі способами, відомими фахівцям у даній галузі. Необмежуючі приклади включають обробку внесенням у борозну, покриття насіння і т.д. У конкретному варіанті здійснення етап обробки включає обробку внесенням у борозну інокуляту або композицій, описаних у даному документі. У конкретному варіанті здійснення етап обробки включає обробку насіння (покриття насіння) інокулятом або композиціями, описаними в даному документі.
У конкретному варіанті здійснення етап обробки грунту інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає обробку грунту однією або декількома композиціями, описаними в даному документі. У деяких варіантах здійснення етап обробки грунту інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає обробку грунту інокулятом у кількості 1х10! - 1х108, більш переважно 1 х105 - 1х1012 колонієутворюючих одиниць на гектар. У деяких інших варіантах здійснення етап приведення в контакт рослини або частини рослини з інокулятом одного або декількох депонованих бактеріальних штамів включає введення депонованих бактеріальних штамів у вигляді насіння, покритого 1х10" - 1х108, більш переважно 1х102 - 1х105 колонієутворюючих одиниць на насінину.
В іншому варіанті здійснення спосіб додатково включає етап посадки рослини або частини рослини. Етап посадки може відбуватися до, після або під час етапу обробки. В одному варіанті здійснення етап посадки відбувається до етапу обробки. В іншому варіанті здійснення етап посадки відбувається під час етапу обробки (наприклад, етап посадки відбувається одночасно з етапом обробки, етап посадки відбувається практично одночасно з етапом обробки і т.д.). У ще одному варіанті здійснення етап посадки відбувається після етапу обробки.
В іншому варіанті здійснення спосіб додатково включає етап дії на грунт за допомогою 10) одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів, описаних в даному документі. В одному варіанті здійснення етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів відбувається до, під час, після або одночасно з етапом обробки. В одному варіанті здійснення етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів, описаних в даному документі, відбувається до етапу обробки. В іншому варіанті здійснення етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів, описаних в даному документі, відбувається під час етапу обробки. У ще одному варіанті здійснення етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів, описаних в даному документі, відбувається після стадії обробки. У ще одному варіанті здійснення етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів, описаних в даному документі, відбувається одночасно з етапом обробки (наприклад, обробки грунту однієї або декількома композиціями, описаними в даному документі, і т.д.).
У ще одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб обробки насіння, який включає застосування до насіння інокуляту одного або декількох бактеріальних штамів, вибраних з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МКК! В-50608; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МАК. В-50612; або суміші із двох або більше даних штамів.
У конкретному варіанті здійснення спосіб обробки насіння може включати один або декілька вищезгаданих депонованих штамів (наприклад, включаючи щонайменше два із вказаних вище штамів, щонайменше три із вказаних вище штамів, щонайменше чотири із вказаних вище штамів, аж до включення всіх вказаних вище штамів).
В одному з варіантів здійснення спосіб обробки насіння включає застосування до насінини штаму, який має номер доступу в депозитарії МКК! В-50608. В одному з варіантів здійснення спосіб обробки насіння включає застосування до насінини штаму, який має номер доступу в
З0 депозитарії МЕКІ В-50609. В одному з варіантів здійснення спосіб обробки насіння включає застосування до насінини штаму, який має номер доступу в депозитарії МКК 8В-50610. В одному з варіантів здійснення спосіб обробки насіння включає застосування до насінини штаму, який має номер доступу в депозитарії МККІ. В-50611. В одному з варіантів здійснення спосіб обробки насіння включає застосування до насінини штаму, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50612.
У ще одному варіанті здійснення спосіб додатково включає етап застосування до насіння одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів для насінини. В іншому варіанті здійснення спосіб включає застосування до насіння будь-якої з композицій, описаних у даному документі для насіння.
У ще одному варіанті здійснення спосіб включає зберігання насіння з інокулятом щонайменше одного або декількох виділених бактеріальних штамів у практично позбавленому вологи середовищі протягом певного періоду часу, наприклад, щонайменше 1 дня, щонайменше 2 днів, щонайменше З днів, щонайменше 4 днів, щонайменше 5 днів, щонайменше б днів, щонайменше 1 тижня, щонайменше 2 тижнів, щонайменше З тижнів, щонайменше 4 тижнів, щонайменше 1 місяця, щонайменше 2 місяців, щонайменше З місяців, щонайменше 4 місяців, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 1 року або більше. В одному аспекті даного способу насіння являють собою насіння бобових рослин. В іншому аспекті насіння бобових рослин являють собою насіння сої.
Способи, описані в даному документі, є потенційно придатними для поліпшення умов росту, що приводить до збільшення поглинання фосфору та/або збільшення врожаю для будь-якого виду рослин. В одному конкретному варіанті здійснення рослина вибрана з групи, що включає небобові, бобові, Вгаззіса 5рр., зернові, фрукти, овочі, горіхи, квіти та трави. Зокрема, зернові являють собою пшеницю, кукурудзу, рис, овес, жито, ячмінь. Зокрема, бобові являють собою сочевицю, нут, боби, сою, горох і люцерну.
В іншому конкретному варіанті здійснення рослини вибрані з групи, що включає люцерну, рис, пшеницю, ячмінь, жито, овес, бавовник, соняшник, арахіс, кукурудзу, картоплю, солодку картоплю, квасолю, горох, нут, сочевицю, цикорій, салат, ендивій, капусту, брюссельську капусту, буряк, пастернак, ріпу, цвітну капусту, броколі, ріпу, редис, шпинат, цибулю, часник, баклажан, перець, селеру, моркву, кабачок, гарбуз, цуккіні, огірок, яблуко, грушу, диню, (610) цитрусові, полуницю, виноград, малину, ананас, сою, тютюн, томат, сорго і цукровий очерет.
Покриття насіння
В іншому аспекті насіння покривають одним або декількома бактеріальними штамами, вибраними з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МКВІ В-50608; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МАК. В-50612; або суміші із двох або більш даних штамів.
У конкретному варіанті здійснення насінину (насіння) покривають одним або декількома з вищезгаданих депонованих штамів (наприклад, включаючи щонайменше два із вказаних вище штамів, щонайменше три із вказаних вище штамів, щонайменше чотири із вказаних вище штамів, аж до включення всіх вказаних вище штамів).
В одному з варіантів здійснення насінину (насіння) покривають штамом, який має номер доступу в депозитарії МКК 8-50608. В одному з варіантів здійснення насінину (насіння) покривають штамом, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50609. В одному з варіантів здійснення насінину (насіння) покривають штамом, який має номер доступу в депозитарії МКК.
В-50610. В одному з варіантів здійснення насінину (насіння) покривають штамом, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50611. В одному з варіантів здійснення насінину (насіння) покривають штамом, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50612.
В одному варіанті здійснення насіння може бути оброблено будь-якою композицією (композиціями), описаною в даному документі, різними способами, але переважно шляхом розпилення або краплинного зрошення. Обробка за допомогою розпилення та краплинного зрошення може бути проведена за допомогою складання композицій, описаних у даному документі, і розпилення або краплинного зрошення композицією (композиціями) насінини (насіння) за допомогою системи безперервної обробки (яка відкалібрована для застосування засобу для обробки із заздалегідь визначеною швидкістю пропорційно безперервному потоку насіння), такої як установка для обробки барабанного типу. Також можуть бути використані системи періодичної дії, у яких заздалегідь визначений розмір порції насіння та композиції (композицій), описаної в даному документі, доставляють у міксер. Системи і механізми для виконання цих процесів доступні для придбання від численних постачальників, наприклад,
Вауєг Сторбсіепсе (Сивіаї5оп).
В іншому варіанті здійснення обробка передбачає покриття насіння. Один з таких способів включає покриття внутрішньої стінки круглого контейнера композицією (композиціями), описаною в даному документі, додавання насіння, потім обертання контейнера, щоб привести до контакту насіння зі стінкою і композицією (композиціями), спосіб, відомий у даному рівні техніки як "контейнерне покриття". Насіння може бути покрите за допомогою комбінацій способів покриття. Замочування, як правило, передбачає використання рідких форм описаних композицій. Наприклад, насіння можна замочувати протягом від близько 1 хвилини до близько 24 годин (наприклад, протягом щонайменше 1 хв., 5 хв., 10 хв., 20 хв., 40 хв., 80 хв., З год., 6 год., 12 год., 24 год.).
У деяких варіантах здійснення насінина (насіння), покрита однією або декількома композиціями, описаними в даному документі, буде містити 1х10! - 1х108, більш переважно 1х102 - 1х1065 колонієутворюючих одиниць одного або декількох депонованих бактеріальних штамів на насінину.
Приклади
Наступні приклади наведені з ілюстративними цілями і не призначені для обмеження обсягу даного винаходу, як заявлено в даному документі. Будь-які зміни в проїілюстрованих прикладах, які приходять на розум фахівцеві в даній галузі, передбачаються як такі, що попадають в обсяг даного винаходу.
Матеріали та методи
Депонування біологічного матеріалу
Наступний біологічний матеріал був депонований відповідно до умов Будапештського договору в дослідницькому відділі мікробної геноміки та біотехнології (МКК) Національного центру сільськогосподарських досліджень (Майопа! Сепіег Тог Адгісийкига! (і2ацоп Кезеагсп) 1815 М. ОпімегеПйу 5ігеєї, Реогіа, І 61604, ОА, і йому було надано наступний інвентарний номер.
Таблиця 1
Депонування біологічного матеріалу
Ідентифікація
Вгадчутіг2обіа |Їаропісит МАВ. в-50612 30 листопада 2011 року
Вгадчутіг2обіа |Їаропісит МАВ. В-50611 30 листопада 2011 року
Вгадчутіг2обіа |Їаропісит МАВ. в-50610 30 листопада 2011 року
Вгадчутіг2обіа |Їаропісит МАВ. в-50609 30 листопада 2011 року
Вгадчутіг2обіа |Їаропісит МАН. в-50608 30 листопада 2011 року
Штами були депоновані за умов, які гарантують, що на час розгляду даної заявки на патент доступ до культури буде вільним для особи, яку керівник патентного відомства визнає як таку, яка має на це право відповідно до 5 1.14 С.Р.МК. 37 і 5 122 0.5.0. 35. Даний депозит являє собою чисту культуру депонованого штаму. Депозит доступний відповідно до вимог закордонних патентних законів у країнах, де подані аналоги даної заявки або її продукт. Однак слід розуміти, що доступність депозиту не є ліцензією на застосування даного винаходу у відступ від патентних прав, надаваних діями уряду.
Середовище
Таблиця 2
Компоненти середовища 516
Компоненти С16 (г/л дистильованої деіонізованої води (ОЮМ))
Калію фосфат двоосновний, КагНРО4 0,550
Магнію сульфату гептагідрат, МазО:7НгО 0,200
Кальцію хлориду дигідрат, СасСі»: 220 0,130
Дріжджовий екстракт Охоїд (ГРОО21) 0,750
Амонію хлорид, МНАСІ 0,200
І -глутамату натрію моногідрат 0,250 1,500
Декстроза безводна 4,500
Заліза (ІІІ) хлориду гексагідрат, РесСіз"бН2О, вихідний розчин (80 г/л ООМ/), що 0 200 зберігається при 4 "С до 6 місяців " 0,400 6,800
Таблиця З
Зберігання вихідного розчину мікроелементів при 4 "С до 6 місяців
Компонент (г/л ОБУМ)
Нікелю (Ії) хлориду гексагідрат, МіСІ»-вНгО 069. («З
Міді сульфату пентагідрат, СиЗО5Н2О
Борна кислота, Нз3ВОз
Марганцю сульфату моногідрат, МаЗО2НгО
Цинку сульфату гептагідрат, 71502-7НгО
Натрію молібдат, МагМоО22НгО
Кобальту (Ії) гексагідрат, СоСі»бНО 066. "Мікроелементи додають із усіма іншими компонентами перед стерилізацією.
Таблиця 4
Вихідний розчин вітамінів -- стерилізований фільтрацією з наступним зберіганням при 4 "С до 6 місяців
Компонент (г/л ОБУМ)
Тіаміну гідрохлорид "«Вітаміни додають після того, як середовище було простерилізовано і охолоджено, як правило, у момент інокуляції.
Таблиця 5
Компоненти середовища манітолу із дріжджовим екстрактом (МЕМ)
Компоненти агару та манітолу із дріжджовим екстрактом (МЕМА) (г/л ОБУМ)
Дріжджовий екстракт Охоїй (СРОО21)
Натрію хлорид, масі
Вихідний розчин - калію фосфат двоосновний, КаНРО» (50 г/1000 мл)
Вихідний розчин - магнію сульфату гептагідрат, Ма5О7НгО (20 г/1000 мл) дної 68
Приклад І. Визначення 99,99 95 смертності ОБОА 5320
Наступний експеримент (експерименти), який складається з трьох (3) досліджень, виконували з метою визначення 99,99595 смертності батьківського штаму Вгадугпі2обріа
Ііаропіснит ОБОА 5326.
Батьківський штам ОБОА 532С вирощували у двох одноразових культуральних пробірках (УМУК, 18х150 мм, 547729-583) по 10 мл з 16 (таблиці 2-4) і МЕМ (таблиця 5) протягом двох днів та збирали, щоб одержати найвищу концентрацію клітин. Цього досягали поєднанням вмісту обох культуральних пробірок в одну пробірку та концентруванням клітин до 2 мл.
Приблизно п'ятдесят насінин сої (сорт бііпе ЕК 1108-4) поверхнево стерилізували в стерильній одноразовій центрифугальній пробірці на 50 мл (марки Різпег, 206-443-18), яка містила 5 95 розчин побутового відбілювача, протягом 30 секунд і промивали стерильною деїіонізованою (01) водою. Етап стерилізації повторювали п'ять разів. Насіння одразу поміщали в стерильну чашку
Петрі та висушували в ламінарній шафі. Після того, як насіння повністю висушували та переносили в хімічну склянку на 250 мл, до насіння додавали 1,5 мл концентрованої культури батьківського штаму ОБОА 532С. Насіння обертали в склянці для рівномірного покриття насіння і давали висохнути у витяжній шафі. Склянку, яка містила насіння, обертали синім стерилізованим папером і залишали у витяжній шафі до завершення експерименту. Вибирали наступні моменти часу: нульовий момент часу, кожні два дні протягом одного тижня та щотижня, поки не відбулася повна загибель клітин. Результати наведені в таблиці 6.
Таблиця 6
КУО на насінину та відсоток смертності в дослідженні 1
КУО на насінину нн 3,06 х 108 11160001 3,72 х 107 87,86 4,20 х 105 98,63 3,07 х 105 99,00 6,43 х 105 99,79 2,87 х 105 99,91 2,64 х 107 99,99
Як показано в таблиці 6, початкова кількість КУО на насінину для батьківського штаму ОББА
532С становила 3,06х108, а на 37 день кількість КУО становила 2,64х108. Відсоток смертності для моментів часу від 0 до 37 дня розраховували як 99,99 95.
Процедуру повторювали за винятком того, що 516 була використана в якості вихідного поживного середовища. Результати представлено в таблиці 7.
Таблиця 7
КУО на насінину та відсоток смертності в дослідженні 2
КУО на насінину нн 2,01 х 109 11160001 3,13 х 108 ва 161 3,26 х 107 98,38 9,14 х 105 99,55 3,50 х 105 99,83 1,40 х 106 99,93 3,38 х 105 99,98 6,23 х 101 100,00
Як показано в таблиці 7, коли 016 використовували в якості вихідного поживного середовища, знадобилось від 29 до 37 днів для того, щоб смертність сягала 99,99 9.
Третє дослідження зневоднення завершували, щоб визначити, чи впливає середовище 516 і МЕМ на швидкість зневоднення батьківського штаму ОБОА 532С. Результати представлені в таблицях 8 і 9, відповідно.
Таблиця 8
КУО на насінину та відсоток смертності для батьківського штаму ОБОА 532С, вирощеного на середовищі 516
КУО на насінину нн 2,95 х 109 11160001 8,69 х 107 97,06 2,93 х 107 99,01 1.68 х 107 99,43 2,11 х 105 99,93 7,50 х 101 100,00
Таблиця 9
КУО на насінину та відсоток смертності для батьківського штаму ОБОА 532С, вирощеного на середовищі ЗЕМ
КУО на насінину нн 2,90 х 108 11116000 3,46 х 105 98,81 1,81 х 106 99,38 1,31 х 106 99,55 7,33 х 105 99,75 7.00 х 107 99,98
Як показано в таблицях 8 і 9, не було ніякої різниці у швидкості зневоднення для батьківського штаму ОБОА 532С при вирощуванні на 516 або МЕМ. В третьому дослідженні 99,99 95 смертності спостерігали приблизно на 28 день, що аналогічно спостережуваному в дослідженнях один (1) і два (2), наведених вище.
Приклад ІІ. Визначення смертності ОБЮОА 532С з використанням етилметансульфонату (ЕМ5)
Наступний експеримент (експерименти) проводили для визначення норми внесення мутагену, етилметансульфонату (ЕМ5), яка дала б 99,9-99,99 відсотків смертності батьківського штаму ШБОА 532С. Це визначення дози стане частиною протоколу мутагенезу, використовуваного для створення стійких до зневоднення передбачуваних мутантів, хоча спосіб мутагенезу можна змінювати для підвищення ефективності.
Підготовка інокуляту
Батьківський штам ОБОБА 532С вирощували в шести одноразових культуральних пробірках на 10 мл з УЕМ протягом двох днів та інокулювали 5 мл культури в чотири колби на 250 мл, які містили 50 мл середовища МЕМ. Колби інкубували протягом двох днів при 30 С зі струшуванням. Культуру з колб згодом центрифугували в одноразових стерильних пробірках на 50 мл при 8000 об./хв. протягом десяти хвилин у центрифузі ЗогмаїЇ! КС 6 Ріи5Ф і поєднували в одну пробірку. Осад ресуспендували в 4 мл свіжого середовища МЕМ і розділяли в чотири мікроцентрифужні пробірки на 1,5 мл. Кожна з пробірок представляла різні дози, використані для процесу мутагенезу.
Процес мутагенезу
Як тільки культуру розділяли на аліквоти в окремі пробірки та додавали мутаген ЕМ5 (5бідта, СЗНВОЗ35, ЕМУ 124.16, 2ЯМО880-1С) в кожну пробірку, пробірки енергійно перемішували та поміщали в порожню колбу на 250 мл. Колбу, яка містила реакційні пробірки, інкубували протягом 30 хвилин при 30 С у шейкері. Відразу ж після інкубаційного періоду пробірки промивали п'ять разів 0,16М розчином тіосульфату натрію (5715, Різпег Спетісаї, Маг52О3"5НгО,
ЕМ 248.18, 255445-3)) для інактивації мутагену. Після промивання клітини в реакційних пробірках зрізали голкою для шприца 21 калібру (голка ВО 1ті 2101 І аїех Егее Зугіпде Ргесізіопсйдеф, 0,8 мм х 25 мм, 309624) і завершували розведення та висівали на планшети з МЕМА.
Підрахунок клітин був доступний через п'ять днів інкубації при 30 "С, і розраховували відсоток загибелі для дози ЕМ5. Щоб розрахувати відсоток смертності для кожної дози, використовували наступне рівняння: (кількість клітин при 0 мкл ЕМ5 (контроль) - (кількість клітин при мкл ЕМ5 (обробка)) «з кількість клітин при 0 мкл ЕМ5 (контроль)) х 100 95). У всіх інших експериментах, які здійснювали після цього експерименту, використовували це рівняння для розрахунків відсотків смертності. Результати представлені в таблиці 10.
Таблиця 10
Вихідні дози ЕМ5 для визначення верхньої межі мутагенезу для батьківського штаму ОБОА 5326
Як показано в таблиці 10, початкові використані дози ЕМ5 становили 0 мкл, 1 мкл, 10 мкл і 100 мкл. Не було ніяких відмінностей між 0 мкл, 1 мкл і 10 мкл ЕМ5, але 100 мкл ЕМ5 привело до 100 95 загибелі.
Експерименти повторювали і уточнювали для визначення прийнятної смертності. Див. таблиці 11-17.
Таблиця 11
Уточнення доз ЕМ5 для визначення 99,9 95 смертності для батьківського штаму ОБОА 5320 о бмклЕМ (контролю | 249х109КУ0МЛ/// |: СС/С:(К/3/З: З
На підставі вихідних даних кількість використаного ЕМ5 звузили до 0 мкл, 15 мкл, 25 мкл і 50 мкл ЕМ5. Як показано в таблиці 11, відсоток смертності складав від 10,17 95 до 30,92 95 для застосувань ЕМЗ5 у кількості 15 мкл і 25 мкл та 100 95 для 50 мкл.
Таблиця 12
Додаткове уточнення доз ЕМ5 для батьківського штаму ОБОА 5320
Підрахунок клітин (приблизне . .
Доза значення КУО/МЛ) Відсоток смертності 0 мкл ЕМ5 (контроль) 4,10 х 109 КУС/мл нь 25 мкл ЕМ5 1,27 х 109 КУО/МЛ 73,09 Фо 35 мкл ЕМ5 5,37 х 108 КУбО/МЛ 88,58 Фо 50 мкл ЕМЗ 2,93 х 102 КУО/мл 100 Фо
З таблиці 11 було встановлено, що 25 мкл ЕМ5 залишалося ще занадто низькою дозою для смертності. Величини застосувань для таблиці 12 становили 0 мкл, 25 мкл, 35 мкл і 50 мкл ЕМ5.
Застосування 25 мкл ЕМ5 давало більш високий рівень смертності, ніж результати в таблиці 11, через зменшене промивання; отже, смертність була вище, ніж очікувалося. Однак смертність була ще на надто низькому рівні 88,58 95 загибелі навіть при використанні 35 мкл ЕМ5. Див. таблицю 12.
Таблиця 13
Додаткове уточнення доз ЕМ5 для батьківського штаму ОБОА 5320
Підрахунок клітин (приблизне . .
Доза значення КУО/МЛ) Відсоток смертності 0 мкл ЕМ5 (контроль) 3,93 х 109 КУО/мл нин 40 мкл ЕМ5 6,97 х 108 КУО/мл 82,26 Фо 45 мкл ЕМ5 8,57 х 107 КУО/мл 97,82 Фо 50 мкл ЕМЗ 2,65 х 105 КУО/мл 99,99 Фо
Кількість використаного ЕМО збільшували до 40 мкл, 45 мкл і 50 мкл ЕМ5. Дози ЕМ5 давали в результаті відсоток смертності в діапазоні 82,26 95 - 99,99 95. Див. таблицю 13.
Таблиця 14
Повтор доз, використаних у таблиці 13
Підрахунок клітин (приблизне . .
Доза значення КУО/МЛ) Відсоток смертності 0 мкл ЕМ5 (контроль) 7.07 х 107 КУО/мл ци шин 40 мкл ЕМ5 1,35 х 109 КУО/мл 99,81 Фо 45 мкл ЕМ5 5,27 х 108 КУО/мл 99,93 Фо 50 мкл ЕМЗ 2,19 х 106 КУО/мл 100 Фо
Результати, представлені в Таблиці 13, знову повторили в таблиці 14, використовуючи ті ж самі дози ЕМФ5, і цього разу відсоток смертності склав 99,81 95 для 40 мкл ЕМ5, 99,93 95 для 45 мкл ЕМ5 і 100 95 для 50 мкл ЕМ5. Необхідну смертність 99,9 95 спостерігали при використанні 45 мкл ЕМ5, так що дану дозу повторили. Див. таблицю 15.
Таблиця 15
Повтор доз, використаних у таблиці 14
Підрахунок клітин (приблизне . .
Доза значення КУО/МЛ) Відсоток смертності 0 мкл ЕМ5 (контроль) 1,51 х 108 КУО/мл ніш 45 мкл ЕМ5 3,33 х 107 КУО/мл 99,98 Фо 50 мкл ЕМЗ 4,33 х 10! КУО/мл 100 Фо
Дозу 45 мкл ЕМ5 продублювали, щоб визначити, чи можна повторити результати з таблиці
14. Смертність для 45 мкл ЕМ5 склала 99,98 95. Див. таблицю 15.
Приклад І. Мутагенез
Наступний експеримент (експерименти) виконували для створення передбачуваних стійких до зневоднення мутантних штамів з батьківського штаму ОБОА 532С з використанням класичного, наприклад, хімічного мутагенезу.
Підготовка інокуляту
Суспензію клітин батьківського штаму ОБОА 532С одержували узяттям петлі клітин зі свіжої чашки ОБОА 532С за допомогою стерильної пластикової петлі на 10 мкл (марки Різпег, 2522-363- 600) і перемішуванням клітин в 1 мл стерилізованої деіонізованої (ОЇ) води в одноразовій мікроцентрифужній пробірці на 1,5 мл. Клітинну суспензію інокулювали у дві колби на 250 мл, які містили 50 мл середовища УЕМ до досягнення кінцевої оптичної щільності (00) ОЮвоонм 0,01.
Колби інкубували при 30 "С протягом трьох днів, і культури із двох колб поєднували. Культуру центрифугували протягом двадцяти хвилин при 8000 об./хв. у центрифузі Зогма!! С 6 Рів.
Супернатант відкидали, а осад ресуспендували в 30 мл 0 води. ОО брали з концентрованої культури та інокулювали в десять колб на 250 мл, які містили 50 мл середовища МЕМ при 000,05. Ці колби інкубували при 30 "С зі струшуванням протягом двох днів до того, як культуру використовували для мутагенезу.
Процес мутагенезу
Культури з десяти колб об'єднували в центрифужній пляшці на 1 л. Оптичну щільність об'єднаних культур записували та центрифугували культури протягом 20 хвилин при 8000 об./хв. у центрифузі бБогмаї!ї ЕС б Ріи5Ф. Більшу частину супернатанту зливали, залишаючи приблизно 30 мл супернатанту в центрифужній пляшці. Супернатант змішували з осадом і переносили в стерильну одноразову центрифужну пробірку на 50 мл. ОО концентрованої культури одержували і записували. Поміщали 1 мл концентрованої культури в шість одноразових мікроцентрифужних пробірок на 1,5 мл. Мікроцентрифужні пробірки центрифугували та зливали супернатант. Цю процедуру повторювали ще три рази або до тих пір, поки розмір осаду не досягався мітки 0,1 мл на мікроцентрифужній пробірці. Клітини ретельно перемішували з 1 мл свіжого середовища УЕМ з використанням стерильної голки від шприца на 1 мл 21 калібру перед додаванням мутагену етилметансульфонату (ЕМ5). Дози мутагену, додані в кожну пробірку, містили високу і низьку дози із середніми дозуваннями між високими і низькими дозами, як вказано в експерименті ІІ.
Відразу ж після додавання ЕМ5 реакційні пробірки поміщали в порожню колбу на 250 мл та інкубували при 30 "С протягом 30 хвилин. Після інкубації реакційні пробірки центрифугували протягом однієї хвилини при 13200 об./хв. за допомогою центрифуги Еррепаогії 54150.
Супернатант із реакційних пробірок зливали. Мутаген у реакційних пробірках інактивувалишляхом промивання п'ять раз 1 мл 0,16М тіосульфату натрію (515) і енергійного перемішування при інтенсивному перемішуванні пробірок. Для кожного циклу промивання реакційні пробірки центрифугували після інтенсивного перемішування та зливали супернатант.
Після п'ятого разу вміст реакційних пробірок об'єднували в одну одноразову пробірку на 15 мл для застосування в способі збагачення.
Приклад ІМ. Збагачення та зневоднення
Наступний експеримент (експерименти) виконували, щоб збагатити та зневодити мутовані клітини батьківського штаму ОБОА 532С для усунення клітин дикого типу, що залишилися, та збільшення популяції передбачуваного мутанта і полегшення виділення мутанта (мутантів), який має характеристики стійкості до зневоднення.
Батьківський штам ОБОА 532С піддавали процесу мутагенезу, вказаному в прикладі ПІ.
Мутовану популяцію батьківського штаму ОБОА 532С збагачували шляхом інокуляції 0,5 мл реакційної суміші у дві колби з 50 мл УЕМ та інкубації клітин протягом двох днів при 30 С зі струшуванням. Через два дні ці культури зневоднювали шляхом нанесення клітин на насіння сої та мембранні фільтри і піддавали впливу умов, що зневоднюють. Культуру з етапу збагачення доводили до ОЮвоонм 0,5, перш ніж її використовували для покриття насіння сої та мембранних фільтрів.
Покриття насіння сої
Сорок стерилізованих насінин сої покривали 0,5 мл культури. Насіння поміщали в стерильну хімічну склянку на 100 мл, щоб висушити в ламінарній шафі, та накривали папером для стерилізації. Зразки по три насінини брали для одержання первісного значення КУО насіння.
Для кожного зразка три насінини поміщали в одноразову пробірку на 15 мл, яка містила 5 мл стерильної 0І води, і залишали для набрякання в пробірці протягом приблизно двох годин до того, як суспензію послідовно розбавляли і висівали на чашки з УЕМА. Насіння, що залишилося, (610) залишене в накритій склянці, поміщали у витяжну шафу на чотири дні до збагачення насіння.
Для збагачення насіння двадцять насінин поміщали в колбу на 250 мл, яка містила 50 мл свіжої МЕМ. Також одержували кінцеве значення КУО, коли насіння було збагачено, для визначення відсотка смертності клітинної популяції. Аналогічний відбір зразків виконували для другого моменту часу, як для початкового моменту часу. Після того, як культуру, що містить насіння, інкубували протягом двох днів, культуру збирали шляхом видалення будь-яких залишків насіння, дозволяючи залишкам осісти перед видаленням супернатанту. Супернатант культури центрифугували та промивали осад стерильною ОСІ водою перед тим, як культуру використовували для покриття нових партій насіння сої. Цей процес повторювали до тих пір, поки розрахований відсоток смертності клітинної культури не став складати менше 80 95. Після того, як 80 95 були досягнуті, клітинна популяція була готова до виділення передбачуваних мутантів для підтверджувального експерименту.
Покриття мембранних фільтрів
Для контролю варіабельності насіння сої та питань забруднення використовували мембранні фільтри як альтернативне середовище для клітинного покриття. Для мембранних фільтрів використовували 1 мл культури для покриття мембранних фільтрів як Юигароге (Мійїроге, 0,22 мкм, РМОБ, ЖОМУМРО2500), так і Ієороге (МіШроге, 0,4 мкм, полікарбонат,
ЖНТТРО2500). Для кожного типу фільтра п'ятнадцять фільтрів покривали з використанням Еазу
Ргеззиге Зугіпде Еійег Ноїдег, 25 мм (МУУК, Ж28144-109) і фільтри поміщали в стерильну чашку
Петрі, яка містила дві частини стерильного якісного паперу УУпайтап, 125 мм (УУпайтап, 1001125). Після того, як фільтри висушували в ламінарній шафі, одержували три початкових значення КУО для кожного типу фільтра, поміщаючи один фільтр в одноразову пробірку на 15 мл, яка містила 5 мл стерильної 0 води, і перемішуючи вихровим способом. Після двох годин замочування в пробірці на 15 мл суспензію з фільтра розбавляли і висівали на чашки з ХЕМА.
Після того, як фільтри висушували у витяжній шафі протягом трьох днів, вісім фільтрів додавали в колбу на 250 мл з 50 мл свіжої УЕМ та інкубували при 30 "С протягом трьох днів.
Кінцеве значення КУО одержували в той час, коли збагачували фільтри, щоб розрахувати відсоток смертності. Для кінцевого значення КУО використовували такий саме спосіб, як і для початкового значення КУО. Процес нанесення покриття і сушіння повторювали до тих пір, поки відсоток смертності не став складати менше 80 95. Після того, як 80 95 були досягнуті, окремі ізоляти колонії вибирали для додаткового підтвердження.
Приклад М. Підтвердження одержання передбачуваних мутантів
Наступний експеримент (експерименти) повинні були підтвердити одержання передбачуваних стійких до зневоднення мутантів шляхом порівняння їх життєздатності на насінні після нанесення на насіння з такою вихідного батьківського штаму, штаму Вгадугпі2обійт |аропісит ОБРА 5326.
Коли спостерігалася 80 95 смертність на насінні або фільтрах, відбирали окремі колонії випадковим чином у кінцевий момент часу і передбачувані мутанти з набору мутагенезу аналізували на характеристики витривалості до зневоднення. Двадцять окремих колоній, відібраних з кожного набору, одержаного в результаті мутагенезу, індивідуально вирощували в колбі на 250 мл, яка містила 50 мл середовища УЕМ. Кожний передбачуваний мутантний штам інкубували при 30 "С зі струшуванням протягом трьох днів і ОО для кожного штаму доводили до 0,5. Кожний штам використовували для покриття тридцяти нестерильних насінин сої 0,5 мл культури в склянці на 100 мл, накритій папером для стерилізації. Були вибрані моменти часу
Т-0, 1-3 і Т-7 днів для першого циклу. Відбір зразків по три насінини проводили в кожний момент часу, причому кожний зразок складався із трьох насінин, поміщених в 5 мл стерильної рі води в одноразовій пробірці на 15 мл. Насінню дозволяли набрякнути протягом двох годин перед тим, як кожний зразок розбавляли і висівали на чашки з ХЕМА. Після порівняння кількості клітин, виділених у кожний момент часу, з батьківським штамом ОЗОА 532С будь-який штам, який мав кращі характеристики, ніж батьківський штам, піддавали другому циклу підтвердження.
Див. Фіг. 1. Для другого циклу штами, які мали кращу витривалість до зневоднення в порівнянні з диким типом, знову випробували щодо зневоднення. Див. Фіг. 2. Були вибрані моменти часу
Т-0, Т-7 і Т-14 днів. Витривалість до зневоднення набору передбачуваних мутантів із другого циклу додатково підтверджували ще два рази. Див. Фіг. 3-6.
Двадцять передбачуваних мутантів батьківського штаму ОБОА 532С виділяли і відбирали на стійкість до зневоднення. Див. Фіг. 1-3. ІЗ двадцяти перевірених передбачуваних штамів у п'ятьох передбачуваних мутантних штамів підтверджували їхні характеристики витривалості до зневоднення в порівнянні з витривалістю до зневоднення батьківського штаму, штаму
Вгадуті2оБбішт |аропісшт ОБОА 532. Див. Фіг. 4-6.
Приклад МІ. Перевірка в теплиці підтверджених мутантних штамів (610) Наступний експеримент (експерименти) виконували для перевірки передбачуваних мутантних штамів у теплиці, щоб перевірити властивості мутантних штамів відносно властивостей батьківського штаму ОБОА 5320.
Мутантні штами, які мали найкращу витривалість до зневоднення в порівнянні з батьківським штамом ОБОБА 532С, випробовували в теплиці щодо властивостей відносно таких батьківського штаму ОБОА 5320. Мутантні і батьківський штами вирощували в 50 мл МЕМ протягом двох днів перед покриттям насіння. Кожний штам висівали в три різні моменти часу:
Т-0, Т-7 ії Т-14 днів після покриття насіння. Усі моменти часу були встановлені в один і той саме час, але насіння висівали у вказані моменти часу. Для встановлення моментів часу тридцять насінин сої покривали 0,5 мл культури при ОЮОвоонм - 0,5 у хімічній склянці на 100 мл і такі для момент часу Т-0 днів залишали у витяжній шафі на 30 хвилин перед посадкою. Таким для двох інших моментів часу дозволяли висохнути повністю і покривали папером для стерилізації. Насіння з останніх двох моментів часу висівали в більш пізній строк. У кожний момент часу висівали по дві насінини в горщик з десятьма горщиками на штам. Насіння, що залишилося, використовували для одержання значення КУО для порівняння з таким для Т-0.
Через дев'ять тижнів росту в теплиці соєві боби збирали з кожної рослини для кожного моменту часу і суху вагу аналізували щодо статистичної значущості.
При порівнянні ваги стручків сої мутантних штамів з такою для батьківських штамів у кожний з моментів часу різниця не була статистично значущою при 95 95 довірчому інтервалі. Це означає, що не було ніякої різниці у властивостях між мутантними штамами і батьківським штамом, яка могла б вплинути на утворення бобів сої при використанні мутантних штамів для покриття насіння сої.
Параграфи короткого опису
Даний винахід визначений у формулі винаходу та супровідному описі. Додаткові аспекти даного винаходу представлені в даному документі за допомогою пронумерованих параграфів. 1. Біологічно чиста культура штаму Вгадугпі2обічт іаропісит, вибраного з групи, що включає штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50612; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50609; штам, який має номер доступу в депозитарії МАНІ В-50608, або комбінації щонайменше із двох або більше даних штамів. 2. Штами за параграфом 1, де вказані штами мають переважаючу стійкість до зневоднення.
З. Штами за параграфом 2, де вказану стійкість до зневоднення порівняно із вказаною стійкістю до зневоднення батьківського штаму вказаних виділених штамів, наприклад, батьківського штаму Вгадугпігобішт |іаропісит ОЗБА 532С. 4. Штами за параграфом 2, де вказана переважаюча стійкість до зневоднення включає підвищену виживаність бактерій у практично позбавленому вологи середовищі при порівнянні вказаної виживаності вказаного виділеного штаму (штамів) Вгадугпігобішт із вказаною виживаністю батьківського штаму вказаних ізолятів, наприклад, батьківського штаму
Вгадугпігобішт |аропісит ОБОА 532С, протягом періоду часу, наприклад, щонайменше 1 дня, щонайменше 2 днів, щонайменше З днів, щонайменше 4 днів, щонайменше 5 днів, щонайменше б днів, щонайменше 1 тижня, щонайменше 2 тижнів, щонайменше З тижнів, щонайменше 4 тижнів, щонайменше 1 місяця, щонайменше 2 місяців, щонайменше З місяців, щонайменше 4 місяців, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 1 року або більше. 5. Штами за будь-яким з параграфів 2-4, де вказана підвищена виживаність у вказаному практично позбавленому вологи середовищі включає підвищену виживаність бактерій у середовищі, яке щонайменше на 70 95 позбавлено вологи, наприклад, щонайменше на 75 95, щонайменше на 80 95, щонайменше на 85 95, щонайменше на 85 95, щонайменше на 90 95, щонайменше на 91 95, щонайменше на 92 95, щонайменше на 93 95, щонайменше на 94 95, щонайменше на 95 95, щонайменше на 96 956, щонайменше на 97 96, щонайменше на 98 95, щонайменше на 9995, аж до на 10095 позбавленого вологи середовища, при порівнянні вказаної виживаності вказаного виділеного штаму (штамів) Вгадугпігорішт із вказаною виживаністю батьківського штаму вказаних ізолятів, наприклад, батьківського штаму
Вгадугтпі2орбішт іаропісит ОБОА 5320. 6. Композиція, яка містить один або декілька вказаних виділених бактеріальних штамів згідно з параграфами 1-5 і придатний з точки зору сільського господарства носій. 7. Композиція за параграфом 6, де композиція включає щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт. (610) 8. Композиція за параграфом 7, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає одну або декілька сигнальних молекул рослин. 9. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою ліпохітоолігосахарид (І СО). 10. Композиція за параграфом 9, де І СО є синтетичним. 11. Композиція за параграфом 9, де І СО є рекомбінантним. 12. Композиція за параграфом 9, де СО є природним. 13. Композиція за параграфом 9, де СО одержаний з видів КПі2обіа, вибраних з Кпі2обішт 5рр., Зіпогпі2оБбішт 5рр. і А2огпі2обішт 5рр. 14. Композиція за параграфом 9, де СО одержаний з Вгаадугпігоріит іаропісит. 15. Композиція за параграфом 9, де І СО одержаний з арбускулярного мікоризного гриба. 16. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою хітинову сполуку. 17. Композиція за параграфом 16, де хітинова сполука являє собою хітоолігомер (СО). 18. Композиція за параграфом 17, де СО є синтетичним. 19. Композиція за параграфом 18, де СО є рекомбінантним. 20. Композиція за параграфом 18, де СО є природним. 21. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою флавоноїд. 22. Композиція за параграфом 21, де флавоноїд вибраний з групи, що включає лютеолін, апігенін, тангеритин, кверцетин, кемпферол, мірицетин, фізетин, ізорамнетин, пахіподол, рамназин, гесперетин, нарингенін, формононетин, еріодиктіол, гомоеріодиктіол, таксифолін, дигідрокверцетин, дигідрокемпферол, геністеїн, даідзеїн, гліцитеїн, катехін, галокатехін, катехіну
З-галат, галокатехіну 3-галат, епікатехін, епігалокатехін, епікатехіну З-галат, епігалокатехіну 3- галат, ціанідинг, дельфінідин, мальвідин, пеларгонідин, пеонідин, петунідин або їх похідні. 23. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою жасмонову кислоту або її похідне. 24. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою лінолеву кислоту або її похідне. 25. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою ліноленову кислоту або її похідне. 26. Композиція за параграфом 8, де сигнальна молекула рослин являє собою карикін. 27. Композиція за будь-яким з параграфів 8-26, де композиція включає щонайменше дві різні сигнальні молекули рослин. 28. Композиція за параграфом 27, де корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт являє собою гербіцид, інсектицид або фунгіцид. 29. Композиція за параграфом 27, де корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт являє собою щонайменше один мікроорганізм, що солюбілізує фосфат. 30. Композиція за параграфом 29, де щонайменше один мікроорганізм, що солюбілізує фосфат, являє собою штам гриба РепісійПит. 31. Композиція за параграфом 30, де щонайменше один мікроорганізм, що солюбілізує фосфат, являє собою штам Р. брііаіає. 32. Композиція за параграфом 31, де штам Р. Бііаіїае вибираний з групи, що включає МЕКІ. 50162, МАНІ 50169, АТОС 20851, АТОС 22348 і АТСС 18309. 33. Композиція за параграфом 30, де щонайменше один мікроорганізм, що солюбілізує фосфат, являє собою штам Р. даезігімогив5. 34. Композиція за параграфом 33, де штам Р. даевзігімоги5 являє собою МЕКІ. 50170. 35. Спосіб обробки насіння, який включає застосування до вказаного насіння інокуляту одного або декількох з виділених бактеріальних штамів за параграфом 1. 36. Спосіб за параграфом 35, де композицію за будь-яким з параграфів 6-34 застосовують до насінини. 37. Спосіб за будь-яким з параграфів 35-36, де спосіб додатково включає етап зберігання вказаного обробленого насіння у практично позбавленому вологи середовищі протягом періоду часу, наприклад, щонайменше 1 дня, щонайменше 2 днів, щонайменше З днів, щонайменше 4 днів, щонайменше 5 днів, щонайменше 6 днів, щонайменше 1 тижня, щонайменше 2 тижнів, щонайменше 3 тижнів, щонайменше 4 тижнів, щонайменше 1 місяця, щонайменше 2 місяців, щонайменше З місяців, щонайменше 4 місяців, щонайменше 5 місяців, щонайменше 6 місяців, щонайменше 1 року або більше. 38. Спосіб за параграфом 37, де вказане насіння є насінням бобової рослини. 39. Спосіб за параграфом 38, де вказане насіння бобової рослини є насінням сої. 40. Спосіб посилення росту рослини, що включає застосування до рослин, насіння рослин (610) або грунту, що оточує рослини або насіння рослин, композиції за будь-яким з параграфів 6-34.
41. Спосіб за параграфом 40, де вказане насіння є насінням бобової рослини. 42. Спосіб за параграфом 41, де вказане насіння бобової рослини є насінням сої. 43. Спосіб посилення росту рослини або частини рослини, який включає приведення в контакт рослини або частини рослини з інокулятом одного або декількох штамів за параграфом 1. 44. Спосіб за параграфом 43, де спосіб додатково включає етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів. 45. Спосіб за параграфом 43, де етап обробки включає введення інокуляту одного або декількох штамів за параграфом 1 у вигляді композиції. 46. Спосіб за параграфом 43, де композиція являє собою композицію за будь-яким з параграфів 6-34. 47. Спосіб за параграфом 43, де частина рослини являє собою насінину рослини. 48. Спосіб за параграфом 47, де вказане насіння є насінням бобової рослини. 49. Спосіб за параграфом 48, де вказане насіння бобової рослини є насінням сої. 50. Спосіб посилення росту рослини або частини рослини, який включає а. обробку грунту інокулятом одного або декількох штамів за параграфом 1 та р. вирощування рослини або частини рослини на обробленому грунті. 51. Спосіб за параграфом 50, де спосіб додатково включає етап посадки рослини або частини рослини до, під час або після етапу обробки. 52. Спосіб за параграфом 50, де спосіб додатково включає етап дії на грунт за допомогою одного або декількох корисних з точки зору сільського господарства інгредієнтів. 53. Спосіб за параграфом 50, де етап обробки включає введення одного або декількох штамів за параграфом 1 у вигляді композиції. 54. Спосіб за параграфом 50, де композиція являє собою композицію за будь-яким з параграфів 6-34. 55. Насінина, покрита композицією за будь-яким з параграфів 6-34.
Даний винахід, описаний і заявлений в даному документі, не повинен обмежуватися в обсязі конкретними варіантами здійснення, розкритими в даному документі, тому що ці варіанти здійснення призначені служити в якості ілюстрацій різних аспектів даного винаходу. Мається на увазі, що будь-які еквівалентні варіанти здійснення знаходяться у межах обсягу даного винаходу. Фактично, різні модифікації даного винаходу на додаток до показаних і описаних у даному документі стануть очевидними фахівцям у даній галузі з попереднього опису. Мається на увазі, що такі модифікації також входять в обсяг доданої формули винаходу. У випадку конфлікту дане розкриття, включаючи визначення, буде переважним.
В даному документі наведені різні посилання, розкриття яких включені за допомогою посилання у всій своїй повноті.

Claims (69)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Мутований штам Вгааугпігобіит /(аропісит для збільшення врожаю рослин, вибраний з групи, що включає: штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50612; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50611; штам, який має номер доступу в депозитарії МЕКІ. В-50610; штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. В-50609, та штам, який має номер доступу в депозитарії МКК. 8В-50608.
2. Композиція, яка містить один або більше мутованих штамів Вгааугтігобійит /аропісит зап. 1 і придатний з точки зору сільського господарства носій.
З. Композиція за п. 2, де композиція включає щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт.
4. Композиція за п. З, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає одну або більше сигнальних молекул рослин.
5. Композиція за п. 4, де вказані одна або більше сигнальних молекул рослин включають ліпохітоолігосахарид (І СО).
6. Композиція за п. 5, де І СО є синтетичним.
7. Композиція за п. 5, де І СО є рекомбінантним.
8. Композиція за п. 5, де І! СО є природним.
9. Композиція за п. 5, де СО одержаний зі штаму Нрігобіит, біпогпігоріит, Аготіобіит, Мезотігоріит або Вгадутігоріит. 10)
10. Композиція за п. 5, де І СО одержаний зі штаму Вгадутігобіит /аропісит.
11. Композиція за п. 5, де Ї СО одержаний зі штаму б/погпігобіит теШоїї.
12. Композиція за п. 5, де СО одержаний зі штаму Нрігобіит Іедитіпозагит.
13. Композиція за п. 5, де Ї СО одержаний з мікоризного гриба.
14. Композиція за п. 5, де СО одержаний зі штаму Сіотегосусоїга.
15. Композиція за п. 5. де Ї СО одержаний зі штаму Сіотиз і/пігагадісив.
16. Композиція за п. 5, де | СО представлений формулою сн.ОВ, сн,ов» о (в) Ов, У, ов, ; (в) о Ов, Мн-СОо-к 1 Мн-в, п у якій б являє собою гексозамін, який може бути заміщений, наприклад, ацетильною групою за атомом азоту, сульфатною групою, ацетильною групою та/або ефірною групою за атомом кисню, Ви, В», В», В5, Нв, і К7, які можуть бути однаковими або різними, являють собою Н, СНзСО--, СХнНуСОо--, де х являє собою ціле число від 0 до 17, а у являє собою ціле число від 1 до 35, або будь-яку іншу ацильну групу, таку як, наприклад, карбаміл; Ва являє собою моно-, ди- або триненасичений аліфатичний ланцюг, який містить щонайменше 12 атомів вуглецю, та п являє собою ціле число від 1 до 4.
17. Композиція за п. 5, де Ї СО представлений формулою рай сн.он не сн.,он 2 но но о но о но | он МН МН МН о в) не (в) сн, Н Н п іш КО Шк сн, у якій А являє собою Н або СНЗСО-, та Зо п дорівнює 2 або 3.
18. Композиція за будь-яким з пп. 4-17, де вказані одна або більше сигнальних молекул рослин включають хітинову сполуку.
19. Композиція за п. 18, де хітинова сполука являє собою хітин.
20. Композиція за п. 18, де хітинова сполука являє собою хітозан.
21. Композиція за будь-яким з пп. 4-20, де вказані одна або більше сигнальних молекул рослин включають хітоолігомер (СО).
22. Композиція за п. 21, де СО є синтетичним.
23. Композиція за п. 21, де СО є рекомбінантним.
24. Композиція за п. 21, де СО є природним.
25. Композиція за п. 21, де СО являє собою хітоолігосахарид.
26. Композиція за будь-яким з пп. 4-25, де вказані одна або більше сигнальних молекул рослин включають флавоноїд.
27. Композиція за будь-яким з пп. 3-26, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає жасмонову кислоту або її похідне.
28. Композиція за будь-яким з пп. 3-27, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає лінолеву кислоту або її похідне.
29. Композиція за будь-яким з пп. 3-28, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає ліноленову кислоту або її похідне.
30. Композиція за будь-яким з пп. 3-29, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає один або більше карикінів.
31. Композиція за будь-яким з пп. 3-30, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає один або більше гербіцидів.
32. Композиція за будь-яким з пп. 3-31, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає один або більше фунгіцидів.
33. Композиція за будь-яким з пп. 3-32, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає один або більше інсектицидів.
34. Композиція за будь-яким з пп. 3-33, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає один або більше корисних мікроорганізмів.
35. Композиція за п. 34, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів НРігобійт, біпогпігобійт, Агогпігобійт, МезогРігобійт та/або Вгааутігоріийт.
36. Композиція за будь-яким з пп. 34-35, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів Вгайугпігобіит /аропісит.
37. Композиція за будь-яким з пп. 34-36, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів білогпігобійт те/Поїї.
38. Композиція за будь-яким з пп. 34-37, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів Нлі2обіит Іедитіпозагит.
39. Композиція за будь-яким з пп. 34-38, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів Мезотігоріцт сісегі.
40. Композиція за будь-яким з пп. 34-39, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше мікоризних грибів.
41. Композиція за будь-яким з пп. 34-40, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів С/отеготусоїа.
42. Композиція за будь-яким з пп. 34-41, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів Релісшит.
43. Композиція за будь-яким з пп. 34-42, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів Р. б/а/ає.
44. Композиція за будь-яким з пп. 34-43, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів Р. даезіпуогив.
45. Композиція за будь-яким з пп. 34-44, де вказані один або більше корисних мікроорганізмів включають один або більше штамів бігеріотусез.
46. Композиція за будь-яким з пп. 2-45, де вказаний придатний з точки зору сільського господарства носій знаходиться у формі рідини.
47. Композиція за будь-яким з пп. 2-45, де вказаний придатний з точки зору сільського господарства носій знаходиться у формі суспензії.
48. Композиція за будь-яким з пп. 2-45, де вказаний придатний з точки зору сільського господарства носій знаходиться у формі твердої речовини.
49. Композиція за будь-яким з пп. 2-45, де вказаний придатний з точки зору сільського (610) господарства носій знаходиться у формі порошку.
50. Композиція за будь-яким з пп. 2-49, де вказаний придатний з точки зору сільського господарства носій знаходиться у формі покриття для насіння.
51. Композиція за будь-яким з пп. 2-50, де вказана композиція не містить аніонної поверхнево- активної речовини.
52. Покрита насінина, яка містить насінину рослини та покриття для насіння, яке містить один або більше мутованих штамів Вгааутігобріит /аропісит за п. 1.
53. Насінина за п. 52, де композиція включає щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт.
54. Насінина за п. 53, де вказаний щонайменше один корисний з точки зору сільського господарства інгредієнт включає одну або більше сигнальних молекул рослин.
55. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною бобової рослини.
56. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною небобової рослини.
57. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною пшениці.
58. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною ячменю.
59. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною вівса.
60. Насінина за будь-яким з пп. 52-54. де вказана насінина є насіниною жита.
61. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною картоплі.
62. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною цукрового буряка.
63. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною льону.
64. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною соняшника.
65. Насінина за будь-яким з пп. 52-54. де вказана насінина є насіниною сої.
66. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною капусти.
67. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною томата.
68. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною моркви.
69. Насінина за будь-яким з пп. 52-54, де вказана насінина є насіниною яблуні. Зневоднення передбачуваних мутантів ще хек ННІ ВІ : що 5 ; ін ди. Я її 5.» сссощее У : іщОБООБОЇ рен КО Півня зоосроме В : 18 ! о Ве сесосссос МАРНІ. 8-50 : . Б | у рен - зооодроюю ХХ ; і З | шк ек і : я мес МНЕ В-НННМО ве с 0 і 2 з 4 5 5 7 В песен Час (дні) сегрнся. УК
ФІГ. 1
! Зневоднення передоачуваних мутантів Е І г і госодесся 1, і : : сов МВВ ВНИХ Е : А, Е ОО» Е їн я ОМя сессікессє У З Па дювю? ОЦ Он : т ! в ОО екю СЕ Н ЕЯ і УК І їж і ОК й : : Ше мех МАВ ВОІВ Е Е ше : шо 41 З
Е в. : Мо, скнкхдрнк ТВ З Ке | ОО» Й З ! ! І ще» до 14 Е І : ОВ : Е : о птеесдсося ЗВ, ВАННОЇ Е : Б поососсое МНН В-5ОБОВ ОЇ й 1 2 3 З 5 Е 7 Я пнів аю Е шк спюетівов а Е Час (дні) :
ФІГ. 2 Е Зневоднення передоачуваних мутантів і Н : В - МОБ нн сессесес НИВІ ВОВК І : я 198 Е з 7 бро» й Ши : тра : м: ДН схо і : щі : "Ве м Ше : Її ш Я с еконо і Ж : ово сфе МАВ. В-5ООО СЕ вок 7 Б ще стос: ВЕНЬ ВБИВ (Е Е ця стек ВВР ВОВК Е | з з ко ня сени МА 31 : Е : зай : ! Час (дні) і
ФІГ.
! Зневоднення передбачуваних мутантів ! на Б МЕНІ В-50512 І а КК зесееене МЕРІ В-50О612 в | Шо пиши Е ш ! М севме нев В-5овІ ШК ! ве і ії в ! Мн сення МКК ВННННК ОЗ ож оКооєчов З Шо схе НЕБІ В-БОВОВЇ от | ення : і і ж і КК тин жк ЮА 2, Н ії к ! С аа вва ре ! З у і і Зк Ом Н і у І й | о о стежу А Е о 2 4 6 8 10 12 13 16 і Час (дні)
ФІГ. 4 : Зневоднення передбачуваних мутантів їз о щ о МЕР зов Ше ш о «вві вва іш ше о випа ва Ед ШЕ о пи РО уддкілк 10005 о о ше ст о щ я п У ПО енне роде с й (й ! : Час (дні) нииинннннниижтжтлжлжчжчжлжлжлжлчлчлї?єииииниинНни о попаЛЛжЛжЛЛннннниииижЛжЛнЛнтнФЖтНнНнНЛЖОВО
UAA201407868A 2011-12-16 2012-12-17 Мутований штам bradyrhizobium japonicum для збільшення врожаю рослин UA116195C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161576470P 2011-12-16 2011-12-16
PCT/US2012/070036 WO2013090884A1 (en) 2011-12-16 2012-12-17 Bradyrhizobium strains

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA116195C2 true UA116195C2 (uk) 2018-02-26

Family

ID=47429058

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201407868A UA116195C2 (uk) 2011-12-16 2012-12-17 Мутований штам bradyrhizobium japonicum для збільшення врожаю рослин

Country Status (13)

Country Link
US (2) US8921089B2 (uk)
EP (1) EP2791366B1 (uk)
CN (1) CN104093829B (uk)
AR (1) AR089596A1 (uk)
AU (1) AU2012351899B2 (uk)
BR (1) BR112014014526B1 (uk)
CA (1) CA2859425C (uk)
ES (1) ES2632152T3 (uk)
MX (2) MX2014006808A (uk)
RU (1) RU2646138C1 (uk)
UA (1) UA116195C2 (uk)
WO (1) WO2013090884A1 (uk)
ZA (1) ZA201404078B (uk)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103898009A (zh) * 2014-03-07 2014-07-02 中国科学院东北地理与农业生态研究所 一株根瘤菌及其应用
EP3346842A1 (en) 2015-09-11 2018-07-18 Novozymes BioAG A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
KR20180119560A (ko) 2015-12-28 2018-11-02 노보자임스 바이오아게 에이/에스 안정한 접종제 조성물 및 그의 생성 방법
JP2019503714A (ja) 2015-12-28 2019-02-14 ノボザイムス バイオアーゲー アクティーゼルスカブ 安定した接種組成物およびその製造方法
EP3462881A1 (en) 2016-05-31 2019-04-10 Novozymes BioAG A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
CA3025912A1 (en) 2016-05-31 2017-12-07 Novozymes Bioag A/S Stable liquid inoculant compositions and coated plant propagation materials comprising same
WO2018118740A1 (en) 2016-12-20 2018-06-28 Novozymes Bioag A/S Stable inoculant compositions and methods for producing same
CN110637082B (zh) 2017-01-04 2024-04-05 诺维信生物农业公司 芽孢杆菌属分离株及其用途
UY37564A (es) 2017-01-05 2018-07-31 Novozymes Bioag As Aislados de lysinibacillus y usos de los mismos
WO2018183491A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 Novozymes Bioag A/S Recovery of dried bacteria
CN107164261B (zh) * 2017-05-09 2019-06-11 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一株促进毛叶苕子增长的根瘤菌及其应用
PL3631019T3 (pl) 2017-05-26 2024-03-11 Novozymes Bioag A/S Stabilne kompozycje inokulacyjne zawierające oleje/woski parafinowe
WO2018218008A1 (en) 2017-05-26 2018-11-29 Novozymes Bioag A/S Stable liquid inoculant compositions comprising dodecane
CA3065297A1 (en) 2017-05-26 2018-11-29 Novozymes Bioag A/S Stable inoculant compositions comprising methylated plant oils
WO2019136198A1 (en) * 2018-01-08 2019-07-11 Novozymes Bioag A/S Aqueous compositions comprising solubilzed lipo-chitooligosaccharides
CA3089128A1 (en) * 2018-01-21 2019-07-25 Grace Breeding Nitrogen Fixation Technologies Ltd. Compositions containing combinations of nitrogen-fixing bacteria and additional agents and their use in fixing nitrogen in plant species
CN110117545B (zh) * 2018-02-07 2021-12-21 南京农业大学 一种具有Cr(VI)耐性及还原能力的外生菌根真菌及其应用
AU2019266155A1 (en) 2018-05-07 2020-11-05 Novozymes Bioag A/S Microbacterium isolates and uses thereof
CN109370956B (zh) * 2018-12-07 2019-12-24 康生元(肇庆)生物科技有限公司 慢生型大豆根瘤菌菌株、组合物和用途
CN109880759B (zh) * 2019-03-06 2022-05-06 黑龙江省科学院微生物研究所 一种适合制成冻干粉剂的大豆根瘤菌及其应用
WO2020263734A1 (en) 2019-06-24 2020-12-30 Novozymes Bioag A/S Erwinia isolates and uses thereof
CN114302953B (zh) * 2019-06-24 2024-06-11 奥本大学 一种芽孢杆菌属菌株及其用于促进植物生长的方法
CA3049530A1 (en) * 2019-07-12 2021-01-12 Agroworld Natural Solutions Inc. Bacterial-based modulation of plant growth
WO2021086695A1 (en) 2019-10-29 2021-05-06 Novozymes Bioag A/S Microbacterium isolates and uses thereof
WO2021101937A1 (en) 2019-11-20 2021-05-27 Novozymes Bioag A/S Pseudomonas isolates and uses thereof
CN115151632A (zh) 2019-11-22 2022-10-04 诺维信生物农业公司 类芽孢杆菌属分离株及其用途
RU2734836C1 (ru) * 2020-01-09 2020-10-23 Федеральное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии" ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ ГУАРА Bradyrhizobium retamae - СТИМУЛЯТОР АЗОТФИКСИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ ГУАРА
CN111235064B (zh) * 2020-03-09 2021-11-02 闽江学院 一种农用复合微生物菌剂及其应用
US11758854B2 (en) 2021-11-04 2023-09-19 Terra Microbes, LLC Methods of propagation of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and uses thereof
CN116179431B (zh) * 2023-01-05 2024-06-14 四川农业大学 一种花生根瘤菌株系hm13及其应用

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4465017A (en) * 1983-03-09 1984-08-14 Simmons John J Seed coating machine
US4536207A (en) 1983-07-26 1985-08-20 Igi Biotechnology, Inc. Nematocidally active chitin-protein complex
US4940840A (en) 1984-03-26 1990-07-10 Dna Plant Technology Corporation Novel chitinase-producing bacteria and plants
US4978381A (en) 1984-10-05 1990-12-18 Washington State University Research Foundation Method for treating cereal crop seed with chitosan to enhance yield, root growth, and stem strength
US5104437A (en) 1984-10-05 1992-04-14 Washington State University Research Foundation Method for treating cereal crop seed with chitosan to enhance yield root growth, and stem strength
US4886541A (en) 1984-10-05 1989-12-12 Washington State University Research Foundation Method for treating cereal crop seed with chitosan to enhance yield, root growth and stem strength
US4964894A (en) 1986-03-31 1990-10-23 Freepons Donald E Plant growth regulators derived from chitin
US4812159A (en) 1986-03-31 1989-03-14 Freepons Donald E Plant growth regulators derived from chitin
US5023180A (en) * 1986-06-17 1991-06-11 Lubrizol Genetics, Inc. Bradyrhizobium japonicum nodulation regulatory protein and gene
DE284236T1 (de) 1987-03-17 1989-06-01 Her Majesty In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture Canada, Ottawa, Ontario Verfahren und zusammensetzungen zur vergroesserung der fuer die aufnahme durch pflanzen vom boden verfuegbaren mengen von phosphor und/oder mikronaehrstoffen.
US5057141A (en) 1987-08-11 1991-10-15 Igene Biotechnology Inc. Compositions for biological control of plant pathogenic nematodes
FR2646425B1 (fr) 1989-04-26 1991-08-30 Neosystem Sa Peptides synthetiques du conjugue de l'ubiquitine et de l'histone h2a
US5549718A (en) 1990-04-06 1996-08-27 Centre National De La Recherche Scientifique (C.N.R.S.) Substance with lipo-oligosaccharide structure capable of acting as plant-specific symbiotic signals, processes for producing them and their applications
JP3172207B2 (ja) 1990-09-21 2001-06-04 株式会社中埜酢店 植物有害生物防除剤
US5321011A (en) 1991-10-04 1994-06-14 The University Of Tennessee Research Corporation Pentasaccharide phytohormones and methods for their use
US5175149A (en) 1991-10-04 1992-12-29 The University Of Tennessee Research Corporation Pentasaccharide phytohormones and methods for their use
FI93687C (fi) 1992-07-29 1995-05-26 Novasso Oy Menetelmä siementen päällystämiseksi
US5830459A (en) 1992-09-30 1998-11-03 Texas A&M University System Effective plant biocontrol
JP2957365B2 (ja) 1992-10-12 1999-10-04 備北粉化工業株式会社 植物用カルシウム付与剤
JP2897801B2 (ja) 1993-03-18 1999-05-31 シオノギクオリカプス株式会社 直径に比べて小さい厚みをもつ円板状固形製剤の搬送装置
JP3283110B2 (ja) 1993-07-27 2002-05-20 旭光学工業株式会社 切花活性剤
US5484464A (en) 1993-12-29 1996-01-16 Philom Bios, Inc.. Methods and compositions for increasing the benefits of rhizobium inoculation to legume crop productivity
CA2180826A1 (en) 1994-01-13 1995-07-20 Richard J. Ii Stoner Organic disease control system
FR2722779B1 (fr) 1994-07-21 1996-08-14 Grande Paroisse Sa Composition de garant proteique et son application, notamment a la fertilisation des cereales
US6060429A (en) 1994-07-25 2000-05-09 State of Israel--Ministry of Agriculture Composition and method for controlling plant diseases caused by fungi
US5705634A (en) 1995-03-02 1998-01-06 Perimmune Holdings, Inc. High yield preparation of dimeric to decameric chitin oligomers
JP2615444B2 (ja) 1995-03-15 1997-05-28 工業技術院長 キトオリゴ糖の部分ｎ−アシル化体又はその塩
NL1001620C2 (en) 1995-06-22 1996-12-24 Instituut Voor Agrobiologisch Improvement in activity of plant growth regulators
IL119188A (en) 1995-09-14 2000-08-31 Bioestimulantes Organicos Lda Formulation and method to increase resistance of plants to pathogenic agents and environmental stress
US5702752A (en) 1996-03-13 1997-12-30 Archer Daniels Midland Company Production of isoflavone enriched fractions from soy protein extracts
US5821361A (en) 1996-06-11 1998-10-13 Protein Technologies International, Inc. Recovery of isoflavones from soy molasses
US5965545A (en) 1996-10-15 1999-10-12 State Of Israel, Ministry Of Agriculture, Agricultural Research Organization, The Volcani Center Compositions and method for controlling fungal disease in plants
TW453855B (en) 1996-11-07 2001-09-11 Sankyo Co Plant growth regulator
RU2158510C2 (ru) 1997-05-15 2000-11-10 Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Композиция для повышения устойчивости растений к болезням (варианты)
US6167652B1 (en) 1997-01-23 2001-01-02 Dcv, Inc. Method for treating cotyledonous plants
US5726123A (en) 1997-02-12 1998-03-10 Dcv Chitin Technologies, L.P. Method for treating cotyledonous plants
US6146668A (en) 1997-04-28 2000-11-14 Novogen, Inc. Preparation of isoflavones from legumes
US6407040B1 (en) 1998-02-20 2002-06-18 Vanson, Inc. Composition and method for reducing transpiration in plants
US6352727B1 (en) 1998-03-12 2002-03-05 Oji Paper Co., Ltd. Bactericides
CA2243669A1 (en) * 1998-07-21 2000-01-21 Bios Agriculture Inc. Composition for accelerating plant seed germination, plant growth and methods using same
JP3108763B2 (ja) 1998-11-17 2000-11-13 工業技術院長 キトオリゴ糖誘導体
NZ512381A (en) 1998-11-24 2004-07-30 Safescience Inc Chitosan metal complexes and method controlling microbial growth on plants using same
US6524998B1 (en) 1999-03-01 2003-02-25 Auburn University Biological compositions and methods for enhancing plant growth and health and producing disease-suppressive plants
FI19992070A (fi) 1999-09-28 2001-03-28 Jari Natunen Uudet fukosyloidut oligosakkaridit ja menetelmä niiden valmistamiseksi
CA2285727A1 (en) 1999-10-08 2001-04-08 Mcgill University Method of increasing photosynthesis in plants comprising an exposure thereof to lipo-chitooligosaccharides and compositions therefor
US6258749B1 (en) 2000-02-22 2001-07-10 The Dow Chemical Company Methods for treating plants and enhancing plant growth using polyacylglycosides and/or polyalkylglycosides and formulations for same
JP2001316204A (ja) 2000-04-28 2001-11-13 Kao Corp 植物活力剤
AR025644A1 (es) * 2000-09-12 2002-12-04 Sintesis Quimica S A I C Una composicion inoculante en base acuosa para semillas, y un metodo para conservar la composicion.
US7250068B1 (en) 2000-10-06 2007-07-31 Mcgill University Method of increasing photosynthesis in plants comprising an exposure thereof to lipochitooligosaccharides and compositions therefor
CA2386661C (en) 2001-07-06 2011-05-17 Mcgill University Methods and compositions for production of lipo-chito oligosaccharides by rhizobacteria
US6933380B2 (en) 2001-10-19 2005-08-23 Yung-Zip Chemical Ind. Co., Ltd. Excipients containing low residual solvent and method for producing the same
US6649566B2 (en) 2001-12-13 2003-11-18 Morse Enterprises Limited, Inc. Stabilized concentrated formulations for enhancing plant defensive responses
AU2004231284B2 (en) 2003-04-22 2009-08-06 Novozymes Biologicals Holding A/S Use of Lipo-chitooligosaccharides to initiate early flowering and fruit development in plants and related methods and compositions
WO2005061515A1 (en) 2003-12-22 2005-07-07 Botanical Gardens And Parks Authority Vinylogous 4h-pyrones and their use in promoting plant growth
ES2545376T3 (es) * 2003-12-23 2015-09-10 Novozymes Bioag A/S Métodos y composiciones que proporcionan efectos beneficiosos agronómicamente en leguminosas y no leguminosas
FR2864538B1 (fr) 2003-12-30 2006-03-03 Bayer Cropscience Sa Composes synthetiques utiles comme facteurs de nodulation des plantes legumineuses et procedes de preparation de tels composes
US20080248953A1 (en) 2005-11-17 2008-10-09 Mcgill University Use of Bacteriocins For Promoting Plant Growth and Disease Resistance
PL2115066T3 (pl) 2006-11-28 2019-01-31 Université De Namur Kompozycja zawierająca oligogalaktouronany i sacharydy polikationowe
WO2008085958A1 (en) 2007-01-09 2008-07-17 Merck Patent Gmbh Lipo-chitooligosaccharide combination compositions for enhanced plant growth and yield
AR073718A1 (es) 2008-10-01 2010-11-24 Novozymes Biolog Ltd Metodos y composiciones para aumentar las cantidades de fosforo disponibles para la absorcion de la planta del suelo
WO2010049751A1 (en) 2008-10-29 2010-05-06 Institut National De La Recherche Agronomique Lipochitooligosaccharides stimulating arbuscular mycorrhizal symbiosis
RU2426778C2 (ru) * 2009-03-27 2011-08-20 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-технический центр биологических технологий в сельском хозяйстве" (ООО "НТЦ БИО") Штамм клубеньковых бактерий bradyrhizobium japonicum 206 вкпм в-9505, вирулентный к районированным сортам сои
CN102181391B (zh) * 2011-03-23 2012-05-23 西南林业大学 一种提高豆科树种抗干、热能力的t49ma菌株及其根瘤化种苗的培养方法
BR112013024609B1 (pt) * 2011-03-31 2018-11-27 Novozymes Biologicals, Inc. composição, e, método para intensificar o crescimento da planta
EP3058826A1 (en) * 2011-09-08 2016-08-24 Novozymes BioAG A/S Seed treatment methods and compositions

Also Published As

Publication number Publication date
AU2012351899B2 (en) 2015-04-23
MX347852B (es) 2017-05-16
CA2859425C (en) 2020-05-12
RU2646138C1 (ru) 2018-03-01
ZA201404078B (en) 2015-06-24
EP2791366A1 (en) 2014-10-22
RU2014129013A (ru) 2016-02-10
BR112014014526B1 (pt) 2022-01-25
CN104093829A (zh) 2014-10-08
US20150072861A1 (en) 2015-03-12
EP2791366B1 (en) 2017-04-26
BR112014014526A8 (pt) 2017-08-22
CA2859425A1 (en) 2013-06-20
US9700057B2 (en) 2017-07-11
ES2632152T3 (es) 2017-09-11
AU2012351899A1 (en) 2014-06-12
BR112014014526A2 (pt) 2021-06-01
US20130157848A1 (en) 2013-06-20
WO2013090884A1 (en) 2013-06-20
AR089596A1 (es) 2014-09-03
CN104093829B (zh) 2017-08-15
MX2014006808A (es) 2014-10-24
US8921089B2 (en) 2014-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA116195C2 (uk) Мутований штам bradyrhizobium japonicum для збільшення врожаю рослин
US10450237B2 (en) Microbial strains, compositions, and methods for increasing available phosphate for plants
CA2960340C (en) Microbial compositions and methods
RU2636167C2 (ru) Композиции и способы усиления роста растений
AU2016201191B2 (en) Combinations of lipo-chitooligosaccharides and methods for use in enhancing plant growth
MX2015003735A (es) Composiciones y metodos para mejorar el crecimiento de plantas.
RU2588483C2 (ru) Штамм bradyrhizobium для улучшения роста растений (варианты), композиция, содержащая указанный штамм, и семя, покрытое композицией
AU2015205819B2 (en) Bradyrhizobium strains
NZ622561B2 (en) Chitooligosaccharides and methods for use in enhancing plant growth