TWI824127B - 胚芽乳酸桿菌ｔｗｋ１０用於製備降體脂醫藥組合物之用途 - Google Patents
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Abstract
本案提供一種胚芽乳酸桿菌TWK10用於製備降體脂之益生菌組合物之用途，該胚芽乳酸桿菌TWK10寄存於台灣食品工業發展研究所，寄存編號為BCRC910734，中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，寄存編號為CGMCC 13008；前述益生菌組合物，包括藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑，劑型係選自溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、***錠、片劑、口嚼膠、濃漿、和膠囊所構成之群組，並可進一步製成流體乳品、濃縮牛奶、優酪乳、酸乳、冷凍優格、乳桿菌發酵飲料、奶粉、冰淇淋、乳酪、乾酪、豆漿、發酵豆漿、蔬果汁、果汁、運動飲料、甜點、果凍、糖果、嬰兒食品、健康食品、動物飼料、中草藥組合物、膳食補充品。
Description
本案為益生菌之應用領域，特別在於描述胚芽乳酸桿菌可用於降體脂。
益生菌因來源天然，對人體無危害，服用門檻低，且具有各式身體保健、調節功效，故極受健康食品的市場歡迎。其中，胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)為常見益生菌，係一種革蘭氏陽性細菌，可見於發酵食物、或動物唾液中，其具有乳酸菌中最大之基因體，且變異繁多，故常因變異程度與適應條件不同，同種菌株間會表現出不同特徵與功效。
先前報導指出胚芽乳酸桿菌具有多種醫療用途，包括保護呼吸道之病毒感染、以及混合於化療藥物後可增加癌細胞對藥物之敏感性，另有多種食品添加物之用途，例如可用於防止生長於玉米之有毒真菌。
發炎指具有血管系統的活體組織對致炎因子及局部損傷所發生的防禦性為主的反應，又可分為急性發炎和慢性發炎，急性發炎是生物體面對有害刺激的初步反應，更多的血漿和白血球(特別是粒細胞)從血液移往受損組織，進行一連串的連鎖性的反應，當中牽涉局部的血管系統、免疫系統及受損組織內的各個細胞，慢性發炎引致發炎部位的細胞類
型改變，令組織的毀滅與修復同步進行，此外，人類脂肪具有分泌發炎激素的能力，故體脂肪過高也是造成身體慢性發炎的因素。在一些特殊情形下，發炎甚至會引起人體自身免疫系統的過敏，進而攻擊自身的組織及細胞，如：類風濕性關節炎和紅斑狼瘡症等免疫系統過敏病症，長期慢性發炎可引起一系列疾病，會使得器官與組織逐漸失去功能，不但容易造成疲倦、老化、荷爾蒙失調，還會導致各種嚴重疾病，包括肝炎、肺炎、腎臟炎、自體免疫疾病、關節炎、糖尿病、阿茲海默症、心血管疾病、甚至癌症。
運動後造成肌肉纖維或是結締組織上的傷害，會造成肌肉發炎，伴隨而致的痠、疼痛、各種不適，及長期積累引發的慢性發炎，不僅會降低人們的運動意願與生活品質，甚至會引發運動傷害、姿勢改變，特別對於運動員而言，如何能有效降低運動後的發炎狀況，更是提升練習及比賽效率、降低運動傷害的關鍵因素。
雖然市面上健康食品琳瑯滿目，但在台灣，卻僅有五項經過台灣衛福部認證具有抗發炎功效(表1)，目的均在於調整過敏體質、抗過敏，然而，過敏的機制為過敏原的誘發，導致免疫球蛋白過度刺激肥大細胞的致敏化作用，與運動後發炎，其主要是肌腱或是韌帶受到傷害，所對應的急性或慢性發炎不盡相同，目前，針對益生菌改善運動後發炎的應用上，仍待相關研究。
表1-衛生福利部食品藥物管理署審核通過之抗發炎健康食品一覽表
先前相關文獻公開，胚芽乳酸桿菌可用於改善抗發炎相關疾病，然而，卻未有可改善運動後發炎的益生菌之相關發表。
因此，如何能提供一改善運動後發炎之益生菌新用途，是本案所欲解決的問題。
本案提供一種胚芽乳酸桿菌TWK10用於製備降體脂之益生菌組合物之用途，該胚芽乳酸桿菌TWK10寄存於台灣食品工業發展研究所，寄存編號為BCRC910734，以及寄存於中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，寄存編號為CGMCC 13008。
為達前述發明之目的，該胚芽乳酸桿菌TWK10降體脂係降低全身體脂肪。
為達前述發明之目的，該益生菌組合物所包括之益生菌為活菌、不活化菌或是前述兩者之組合；該胚芽乳酸桿菌TWK10服用劑量大於或等於3x1010CFU(colony forming unit)/天。
本案更提供一種用於製備降體脂的醫藥或食品组合物的用途，係包含寄存編號為BCRC910734(CGMCC 13008)之胚芽乳酸桿菌
TWK10。
本案進一步提供一種用於製備改善體脂過高所引發之疾病的益生菌组合物的用途，係包含寄存編號為BCRC910734(CGMCC 13008)之胚芽乳酸桿菌TWK10。
前述之益生菌組合物，均可包括藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑，劑型係選自溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、***錠、片劑、口嚼膠、濃漿、和膠囊所構成之群組。
前述之益生菌組合物，可進一步製成流體乳品、濃縮牛奶、優酪乳、酸乳、冷凍優格、乳桿菌發酵飲料、奶粉、冰淇淋、乳酪、乾酪、豆漿、發酵豆漿、蔬果汁、果汁、運動飲料、甜點、果凍、糖果、嬰兒食品、健康食品、動物飼料、中草藥組合物、膳食補充品。
前述之益生菌組合物，包括下列益生菌群組其中之一或任意之組合：乳桿菌屬物種、乳球菌屬物種、片球菌屬物種、明串珠菌屬物種、腸球菌屬物種、鏈球菌屬物種、雙叉桿菌屬物種、酵母菌。
本案的實施例證明，TWK10不論是活菌或是非活化菌型態，均具有降體脂的功效，且活菌組隨著劑量提升，體脂肪下降越顯著，具有可應用於體脂過高所導致的疾病或症狀，並具改善慢性發炎的潛力。
本案所提供之益生菌之新用途，所具有之優勢，如下所述：
(1)標的明確且新穎
首度提供TWK10可改善運動後發炎的症狀，不同於其他益生菌針對抑制發炎引發之疾病，並提供嚴謹人體臨床數據佐證；此
外，更同時提供降體脂之效果，對於運動員而言，可結合抗運動後發炎與降體脂，全方面的輔助增進身體機能。
(2)應用範圍廣泛
因發炎、體脂均為常見疾病或症狀的成因或評估因子，故本案益生菌用途將有助於發炎或體脂過高所引發之疾病、症狀的改善。
(3)協同功效
TWK10可降體脂，而因脂肪會釋放發炎激素，長期服用，可在原有的改善運動後發炎效果之下，因體脂持續降低，進而取得協同性的改善慢性發炎之效。
圖1 服用Lactobacillus plantarum TWK10之益生菌組合物，在運動後，中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)的變化。
圖2 服用含Lactobacillus plantarum TWK10之益生菌組合物，在運動後，血小板/淋巴细胞(platelet to lymphocyte ratio,PLR)比值的變化。
圖3 服用含Lactobacillus plantarum TWK10之益生菌組合物，在運動後，體脂肪的變化。
本案將就下列實施例作進一步說明，然該等實施例僅為表現與敘述本案之發明涵義與其精神，故所敘實施例等為例示說明之用，而不應作為限縮或被解釋為實施本案之限制或僅限於該些所述實施例或方
式。
本案說明書及申請專利範圍中所述之所有技術性及科學用語，除非另有所定義，皆依據以下敘述定義之。其中單數用語「一」、「一個」、「該」，除非另有說明，皆可指涉多於一個對象；除非另有說明，實施本案採用之通常技術可包括臨床檢體採集與分析、高效液相層析法、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術、藥理學技術；此外，用語「包含」、「包括」皆為開放式連接詞；除非另有說明，本案所用之材料皆市售易於取得。
用語「益生菌(probiotics)」，係指涉當適當給予時可提供生理健康之益處予服用者之微生物，該微生物具有無毒性、腸道附著力、及增益效果；菌落形成單位(CFU，colony forming unit)指單位體積中的細菌、黴菌、酵母等微生物的群落總數用語；用語「組合物」，係指涉一產物，該產物係來自混合或組合多於一種活性成分；「載劑(carrier)」、「賦形劑(vehicle)」，係指涉不具毒性之化合物或藥劑，其具有協助細胞或組織吸收藥物之功能，可為芳香劑(aromatics)、緩衝劑、黏著劑(binders)、著色劑(colorants)、崩解劑(disintegrants)、稀釋劑、乳化劑(emulsifiers)、增量劑(extenders)、氣味改善劑(flavor-improving agents)、膠凝劑(gellants)、滑動劑(glidants)、防腐劑、皮膚滲入促進劑(skin-penetration enhancers)、助溶劑(solubilizers)、安定劑(stabilizers)、懸浮劑(suspending agents)、甜味劑(sweeteners)、張力劑(tonicity agents)、黏度增強劑(viscosity-increasing agents)或上述之任意組合；用語「稀釋劑」，係指涉給予組合物前用以稀釋之溶劑，可用於穩定化合物。本案用於溶解鹽類之緩衝溶液並調控酸鹼
值，包括但不限於磷酸鹽緩衝液(phosphate buffered saline，PBS)；用語「有效量(effective amount)」，係指涉化合物或藥物之一足夠量，可於服用者服食後減輕一或多項疾病症狀或生理狀況。舉例而言，治療之「有效量」係包含一本案提供化合物之可於臨床上顯著降低特定生理指標之劑量；用語「最大攝氧量(maximal oxygen uptake，縮寫為VO2max)」，指一個人在海平面上，從事最激烈的運動時，組織細胞所能消耗或利用的氧之最高值；用語「固定強度與時間的耐力運動能力測試」，係指以60% VO2max以上的強度於跑步機或(或腳踏車)進行運動測試至少30分鐘。
以下實施僅為例示，本案所使用之益生菌組合物，其中該益生菌可為活菌或不活化菌，該不活化經由熱致死或其他物理或化學方式處理。
本案所使用之胚芽乳酸桿菌菌株係Lactobacillus plantarum TWK10(以下簡稱TWK10)，係為蔡宗佑博士於台灣發酵後的甘藍菜中分離而得，寄存於中國普通微生物菌種保藏管理中心，其寄存編號為CGMCC13008，寄存日期為2016年9月13日，及台灣財團法人食品工業發展研究所，其寄存編號為BCRC910734，寄存日期為2016年6月30日。
實施例一、胚芽乳酸桿菌TWK10之抗發炎功效
(一)實驗設計與流程
實驗採雙盲交叉設計(double-blind cross-over trial)，受試者介於20-40歲間，需經兩週的洗滌期，接續六週益生菌的服用，並於服用起始與結束當天施予固定強度之耐力運動測試，依最大攝氧量(VO2max,mL/kg/min)分作5組，每組16人，並驗血測定生理因子變化；各組益生菌
組合物一天服用三次，一次一顆膠囊，每組投予劑量及菌株列舉如下：
(1)安慰劑組：不含TWK10之安慰劑膠囊(內含麥芽糊精、乳糖、微結晶狀α-纖維素)，每日食用3顆，三餐飯後配溫開水服用。
(2)低劑量組-TWK10活菌建議1倍劑量組(TWK10-L)：1顆TWK10膠囊含有1x1010CFU，每日食用3顆，3x1010CFU/天，三餐飯後配溫開水服用。
(3)中劑量組-TWK10活菌建議3倍劑量組(TWK10-M)：1顆TWK10膠囊含有3x1010CFU，每日食用3顆，9x1010CFU/天，三餐飯後配溫開水服用。
(4)高劑量組-TWK10活菌建議10倍劑量組(TWK10-H)：1顆TWK10膠囊含有1x1011CFU，每日食用3顆，3x1011CFU/天，三餐飯後配溫開水服用。
(5)TWK10熱致死菌組(TWK10-HK)：1顆TWK10熱致死菌膠囊含有1x1011CFU，每日食用3顆，三餐飯後配溫開水服用，3x1011CFU/天。
(二)結果
分析六週後，每人在固定強度與時間(120分鐘)之耐力運動測試後，各組的中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)和血小板/淋巴细胞(platelet to lymphocyte ratio,PLR)比值的變化，兩者代表體內淋巴系統的狀態，均為檢測體內發炎的指標，其一比值下降即表示發炎改善，甚至報導指出，可作為癌症轉移或其他疾病的觀測因子，結果如圖1、圖2，縱軸表示相對於試驗起始所測得的NLR或是
PLR的變化量。
結果顯示，高、中、低劑量和熱致死菌組TWK10可降低NLR，其中低劑量和熱致死組較控制組下降約30-40倍；而PLR的部分，高劑量及熱致死組TWK10組可較控制組下降1.2-1.8倍；總體而言，服用TWK10死菌可改善運動後發炎，而每日服用3x1010CFU以上TWK10活菌也具有改善運動後發炎功效，若每日服用更高劑量，即超過9x1010CFU的活菌，例如1x1011或3x1011CFU，可達到更佳的效果。。
實施例二、胚芽乳酸桿菌TWK10之降體脂功效
因脂肪細胞會分泌發炎激素，導致全身性發炎，故體脂高與慢性發炎也有密切的關係，接續，將探討TWK10除了可改善運動後發炎之症狀外，是否也具有降體脂的功效。
(一)實驗設計與流程同實施例一。
實驗採雙盲交叉設計，受試者介於20-40歲間，經兩週的洗滌期及一週休息後，投予益生菌組合物六週，並於服用起始與結束當天施予固定強度之耐力運動測試，依最大攝氧量分作5組，每組16人，並測定全身體脂肪變化；各組益生菌組合物一天服用三次，一次一顆膠囊，每組投予劑量及菌株與實施例一相同。
(二)結果
服用益生菌組合物六週後，分析每人在固定強度與時間之耐力運動測試後，以Inbody檢測體脂肪的變化，結果如圖3，縱軸表示服用結束相對於服用起始，所測得的體脂肪的變化百分比率。
結果顯示，活菌及熱致死菌組均可降低體脂肪，其中低劑
量和熱致死組較控制組下降約0.5%，活菌組隨著劑量提升，體脂肪下降越顯著，高劑量組可令體脂肪下降達1.5%，表示TWK10不論是活菌或是非活化菌型態，均具有降體脂的功效。
綜上所述，TWK10具有降低運動後發炎及降體脂功效，此外，因TWK10可令NLR或(及)PLR下降，而NLR及PLR還可作為許多癌症、疾病的轉移、感染診斷指標與成因，且體脂過高是全身性的慢性發炎、慢性病、心血管疾病等的成因之一，故任何利用本案結果以改善因NLR、PLR、或體脂過高所導致之相關疾病或症狀的實施，均應視為涵括於本案請求範圍內。
因降體脂與改善發炎具有協同效果，長期服用本案益生菌組合物，不僅可降體脂，且可同步降低全身性慢性發炎，達到雙重且加成的身體改善功效。
本案所使用之益生菌組合物，其劑型包含但不限於溶液(solution)、乳劑(emulsion)、懸浮液(suspension)、粉末(powder)、錠劑(tablet)、丸劑(pill)、***錠(lozenge)、片劑(troche)、口嚼膠(chewing gum)、膠囊(capsule)以及其他類似或適用本案之劑形。
本案所使用之益生菌組合物，可選擇性地包括本案所屬技術領域之通常知識所教示之其他菌種，乳桿菌屬(Lactobacillus sp.)、乳球菌屬(Lactococcus sp.)、片球菌屬(Pediococcus sp.)、明串珠菌屬(Leuconostoc sp.)、腸球菌屬(Enterococcus sp.)、鏈球菌屬(Streptococcus sp.)、雙叉桿菌屬(Bifidobacterium sp.)、酵母菌(yeasts,Saccharomyces sp.)。
本案所使用之益生菌組合物可為食品組合物，進一步製成膠囊，錠劑，飲料，粉末或乳製品；本案所使用之前述組合物，可進一步添加一可食性材料，以製備為一種食品產品或保健產品。其中該可食性材料包含，但不限於：水(water)、流體乳品(fluid milk products)、牛奶(milk)、濃縮牛奶(concentrated milk)；發酵乳品(fermented milk)，諸如優酪乳(yogurt)、酸乳(sour milk)、冷凍優格(frozen yogurt)、乳桿菌發酵飲料(lactic acid bacteria-fermented beverages)；奶粉(milk powder)；冰淇淋(ice cream)；乳酪(cream cheeses)；乾酪(dry cheeses)；豆奶(soybean milk)；發酵豆奶(fermented soybean milk)；蔬果汁(vegetable-fruit juices)；果汁(juices)；運動飲料(sports drinks)；甜點(confectionery)；果凍(jellys)；糖果(candies)；嬰兒食品(infant formulas)；健康食品(health foods)；動物飼料(animal feeds)；中草藥材(Chinese herbals)；膳食補充品(dietary supplements)等。
本案所使用之前述組合物可為膳食補充品，可以下列方式給予服用者：與合適的可飲用液體混合，例如水，酸乳酪，牛奶或果汁；或可與固體或液體食品進行混合。膳食補充品之形式可為錠劑，丸劑，膠囊，藥錠糖(lozenge)，顆粒，粉劑，懸浮劑，小藥囊，軟錠劑，糖果，棒，糖漿及相應的投予形式，通常為單位劑量的形式，並以製備膳食補充品的常規方法製造。
於本案實施例中，有效劑量依據組合治療而變動。組合治療可進一步包括週期性治療，依據共同給予之組合物、疾病、生理異常、生理狀況等因子而變動。
以上所述之實施例僅係為說明本案之技術思想及特點，其目的使熟習此項技藝人士能夠瞭解本案之內容並據以實施，當不能以之限定本案之專利範圍，即凡依本案所揭示之精神所作之均等變化或修飾，仍應涵蓋在本案之專利範圍內。
Claims (8)
- 一種胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)用於製備降低人類體脂之醫藥組合物之用途，該胚芽乳酸桿菌係寄存編號為BCRC910734之胚芽乳酸桿菌TWK10；該胚芽乳酸桿菌為經熱致死處理之不活化菌。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，該體脂係全身體脂肪。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，該胚芽乳酸桿菌TWK10服用劑量大於或等於3x1010CFU(colony forming unit)/天。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，該醫藥組合物包括藥學上可接受之載劑、賦形劑、稀釋劑。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，該醫藥組合物之劑型係選自溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、***錠、片劑、口嚼膠、濃漿、和膠囊所構成之群組。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，該醫藥組合物進一步製成流體乳品、濃縮牛奶、優酪乳、酸乳、冷凍優格、乳桿菌發酵飲料、奶粉、冰淇淋、乳酪、乾酪、豆漿、發酵豆漿、蔬果汁、果汁、運動飲料、甜點、果凍、糖果、嬰兒食品、健康食品、動物飼料、中草藥組合物、膳食補充品。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，該醫藥組合物包括下列益生菌群組其中之一或任意之組合：乳桿菌屬物種、鏈球菌屬物種、雙叉桿菌屬物種、酵母菌。
- 一種胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)用於製備改善人類體脂過高所引發之疾病或症狀的醫藥组合物的用途，該胚芽乳酸桿菌係寄存 編號為BCRC910734之胚芽乳酸桿菌TWK10；該胚芽乳酸桿菌為不活化菌，該不活化菌係經熱致死處理。
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Non-Patent Citations (1)
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|---|
| 期刊 Wu et. al., "Effect of Lactobacillus plantarum Strain K21 on High-Fat Diet-Fed Obese Mice" Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, Volume 2015, Article ID 391767, 9 pages, https://doi.org/10.1155/2015/391767 * |
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