TWI768465B - 四氫吲唑衍生物及其製備 - Google Patents
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Abstract
本發明公開一種式(I)所示的四氫吲唑類化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物、前藥及其藥物組合物、製備方法，以及在由***素CB2受體介導的疾病的預防和治療中的用途。
Description
本發明涉及一種四氫吲唑類化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物、前藥及其藥物組合物、製備方法，以及在由***素CB2受體介導的疾病的預防和治療中的用途。
神經病理性疼痛是由於外周或中樞神經通路受到損傷而產生的，這種疼痛導致患者對於疼痛和無害刺激出現持續存在的自發性疼痛以及超敏反應。神經性疼痛的潛在病因差異很大，但通常具有相似的臨床特徵。一些導致神經性疼痛的最常見病理是糖尿病性神經病、截肢、手術以及皰疹後神經痛等。研究表明，高達7-8%的成人患有神經病性疼痛，患病率不斷在上升，且預計在老齡化人群中將進一步增加。除個人痛苦之外，由於失業和社會能力的喪失導致治療成本的增加，同時還常常伴隨出現焦慮和抑鬱等併發症。
克羅恩病的主要症狀包括腹痛、腹瀉和疲勞，體重減輕，發熱，生長發育遲緩，貧血，反復發作的肛瘺或其他腸外表現。藥物治療包括胺基水楊酸製劑、糖皮質激素、免疫抑制劑、抗菌藥物和抗TNF-α單抗等。目前尚無管理克羅恩病相關腹痛的藥物。
疼痛作為一類臨床最常見的病症，是患者尋求醫療服務的主要因素之一，目前市場上廣泛使用的止痛藥會引發有害副作用，治療效果不理想，新型止痛藥的開發刻不容緩。
***萃取物被用於鎮痛已有數個世紀的歷史。除了Delta-9-THC，***二酚(CBD)，還有多種內源性配體物質，以及化學合成的***素
(cannabinoid)，通過結合***素受體發揮鎮痛、產生欣快感等作用。而且***素是在植物和動物中均發現的一類細胞外信號傳導分子。來自這些分子的信號在動物中通過兩種G蛋白偶聯受體即***素受體1(CB1)和***素受體2(CB2)來介導。CB1最大量地表達在CNS的神經元中，但也以較低濃度存在於多種外周組織和細胞中(Matsuda，L.A.et al.(1990)Nature 346：561-564)。相反地，CB2主要但不絕對地表達在非神經組織例如造血細胞、內皮細胞、成骨細胞、破骨細胞、內分泌胰腺及癌性細胞系中(Munro，S.et al.(1993)Nature 365：61-65；和Pache，P.etal.(2006)Pharmacol.Rev.58(3)：389-462)。中樞的CB1分佈在大腦皮質和邊緣系統，負責在受到cannabinoid啟動後發揮鎮痛作用並引起行為學改變。CB1雖然可以介導強效的鎮痛作用，但會引起欣快、共濟失調、眩暈等精神類症狀，同時可能產生成癮和耐受，所以限制了其在鎮痛領域的使用。外周CB2主要分佈在免疫細胞，在疼痛和炎症信號中發揮作用。此外，CB2在外周神經纖維和傷害神經末梢也有分佈。CB2激動後通過抑制中性粒細胞、巨噬細胞等產生毒素和炎性介質來發揮鎮痛作用，也可以阻斷損傷性神經的興奮傳導。CB2在小鼠的腦幹、大腦皮層和小腦中有表達，但表達量非常低，約為脾臟的3.4%。
外周選擇性CB2激動劑理論上可以避免CB1R相關的中樞精神類副作用，並在多個臨床前模型顯示出良好的鎮痛效果。數個CB2選擇性激動劑因在臨床試驗中鎮痛藥效不足而中止在鎮痛領域的開發，包括JBT-101、LY2828360等。原因可能如下：雖然表現出一定選擇性，但對CB1仍有激動作用，所以可能導致有效劑量發生不良事件，安全劑量下藥效不足；對CB1有激動作用可能導致在動物模型下藥效顯著而轉化後藥效不足的情況。CB2激動劑會具有功能選擇性，CB1/2下游包括腺苷環化酶合成、ERK信號通路啟動、離子流改變、內化作用、β-arrestin等，不同的藥物對下游的啟動有功能偏向性。
本發明的目的是介紹一類新型的有效、安全、選擇性高、長效、藥代動力學特徵好的***素CB2激動劑。
本發明涉及一種式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥：
其中，R1選自-L1-L2-L3-L4；L1選自C1-6亞烷基、C3-7亞環烯基、C3-7亞環烷基、C3-6不飽和亞環烴基、C3-6亞雜環基、C6-10亞芳基、C5-10亞雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環或者不存在，所述的亞烷基、亞環烯基、亞環烷基、不飽和亞環烴基、亞雜環基、亞芳基、亞雜芳基、橋環、並環、螺環各自獨立任選被如下取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-C2-6炔基-C3-6環烷基、C1-6烷氧基、羥基取代的C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、苯環、-C1-6烷基-O-鹵代烷基、-C(O)O-C1-6烷基或者C3-6環烷基；L2選自C1-6亞烷基、C3-7亞環烷基、C3-6亞雜環基、C5-10亞雜芳基、-C(O)NH-、-C(O)-、-C(O)O-或者不存在，所述的亞烷基、亞環烷基、亞雜環基、亞雜芳基各自獨立任選被如下取代基取代：C1-6烷基或鹵素；L3選自C1-6亞烷基或者不存在；L4選自H、鹵素、羥基、胺基、脲基、氰基、C1-6烷基、C3-7環烷基、C1-6烷氧基、C3-6雜環基、C2-6炔基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、-NHC1-6烷基、-N(C1-6烷基)C1-6烷基、-NHC(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基、-NH-C6-10芳基、-NH-C3-7環烷基、-C(O)-C6-10芳基、-O-C6-10芳基、-O-C6-10雜芳基、-O-C1-6亞烷基-COOH、-C(O)NH2、-COOH、C4-12橋環、C4-12並環或者C5-10螺環，所述的烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、炔基、橋環、螺環、並環任選被如下取代基取代：鹵素、氰基、羥基、胺基、C1-6烷基、C1-6鹵代烷基或者C1-6烷氧基；
R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基或者C1-6烷基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、F、Cl、胺基、氰基、羥基、C1-6烷基或者C1-6鹵代烷基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、C1-6烷基，所述的烷基任選被以下取代基取代：氰基、F或者Cl，或者R8與R9一起形成C2-6烯基或者C3-6環烷基；R10選自H或者C1-6烷基；R11選自芳基或雜芳基，所述的芳基或雜芳基任選被以下取代基取代：F、Cl、C1-6烷基或者C1-6烷氧基，所述的雜芳基包含選自N、O、S雜原子及其氧化態；條件是：當R11選自芳基及取代芳基時，R1選自
、
或者
。
本發明涉及一種式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥：
其中，R1選自-L1-L2-L3-L4；L1選自C1-6亞烷基、C3-7亞環烯基、C3-7亞環烷基、C3-6不飽和亞環烴基、C3-6亞雜環基、C6-10亞芳基、C5-10亞雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環或者不存在，所述的亞烷基、亞環烯基、亞環烷基、不飽和亞環烴基、亞雜環基、亞芳基、亞雜芳基、橋環、並環、螺環各自獨立任選被如下取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C2-6炔基-C3-6環烷基、C1-6烷氧基、羥基取代的C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、苯環、C1-6烷基-O-鹵代烷基、-C(O)O-C1-6烷基或者C3-6環烷基；L2選自C1-6亞烷基、C3-7亞環烷基、C3-6亞雜環基、C5-10亞雜芳基、-C(O)NH-、
-C(O)-、-C(O)O-或者不存在，所述的亞烷基、亞環烷基、亞雜環基、亞雜芳基各自獨立任選被如下取代基取代：C1-6烷基或鹵素；L3選自C1-6亞烷基或者不存在；L4選自H、鹵素、羥基、胺基、脲基、氰基、C1-6烷基、C3-7環烷基、C1-6烷氧基、C3-6雜環基、C1-6鹵代烷基、C2-6炔基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、-NHC1-6烷基、-N(C1-6烷基)C1-6烷基、-NHC(O)C1-6烷基、-C(O)NHC1-6烷基、-NH-C6-10芳基、-NH-C3-7環烷基、-C(O)-C6-10芳基、-O-C6-10芳基、-O-C6-10雜芳基、-O-C1-6烷基-COOH、-C(O)NH2、-COOH、C4-12橋環、C4-12並環或者C5-10螺環，所述的烷基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、炔基、橋環、螺環、並環任選被如下取代基取代：鹵素、氰基、羥基、胺基、C1-6烷基、C1-6鹵代烷基或者C1-6烷氧基；R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基或者C1-6烷基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、F、Cl、胺基、氰基、羥基、C1-6烷基或者C1-6鹵代烷基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、C1-6烷基，所述的烷基任選被以下取代基取代：氰基、F或者Cl，或者R8與R9一起形成C2-6烯基或者C3-6環烷基；R10選自H或者C1-6烷基；R11選自芳基或雜芳基，所述的芳基或雜芳基任選被以下取代基取代：F、Cl、C1-6烷基或者C1-6烷氧基，所述的雜芳基包含選自N、O、S雜原子及其氧化態；條件是：當R11選自芳基及取代芳基時，R1選自
、
、
或者
。
本發明涉及一種式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥：
R1選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6雜環烷基、C3-6不飽和環烴基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環，所述的烷基、環烷基、不飽和環烴基、雜環烷基、芳基、雜芳基、橋環、並環或者螺環任選被以下取代基取代：F、Cl、羥基、氰基、C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷基、苯環、-C(O)O-C1-6烷基、-C1-6烷基-OC1-6烷基或者C3-6環烷基；R1選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6雜環烷基、C3-6不飽和環烴基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環，所述的烷基、環烷基、不飽和環烴基、雜環烷基、芳基、雜芳基、橋環、並環或者螺環任選被以下取代基取代：F、Cl、羥基、氰基、C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯環、-C(O)O-C1-6烷基或者C3-6環烷基；在某些實施方案中，
R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
或者
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、
；某些實施方案中，R1選自
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、金剛烷基、
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
；在
某些實施方案中，R1選自
；R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基、C1-6烷氧基或者C1-6烷基；在某些實施方案中，R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基或者C1-6烷基；在某些實施方案中，R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、甲基、乙基、異丙基、叔丁基；在某些實施方案中，R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、F、Cl、胺基、氰基、羥基、C1-6烷基或者C1-6鹵代烷基；在某些實施方案中，R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、F、氰基、羥基或者C1-6烷基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H或者C1-6烷基；在某些實施方案中，R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、甲基、乙基、異丙基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基、C1-6烷氧基或者C1-6烷基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、C1-6烷基，所述的烷基任選被以下取代基取代：氰基、F或者Cl，或者R8與R9一起形成C2-6烯基或者C3-6環烷基；R10選自H或者C1-6烷基；R11選自芳基或雜芳基，所述的芳基或雜芳基任選被以下取代基取代：F、Cl、C1-6烷基或者C1-6烷氧基；在某些實施方案中R11選自
或者
；在某些實施方案中，R11選自
；條件是：當R11選自芳基及取代芳基時，R1選自
、
或者
。
本發明涉及一種式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥：
R1選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6雜環烷基、C3-6不飽和環烴基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環，所述的烷基、環烷基、不飽和環烴基、雜環烷基、芳基、雜芳基、橋環、並環或者螺環任選被以下取代基取代：F、Cl、羥基、氰基、C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6雜環烷基、苯環、-C(O)O-C1-6烷基、-C1-6烷基-OC1-6烷基或者C3-6環烷基；在某些實施方案中，R1選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6雜環烷基、C3-6不飽和環烴基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環，所述的烷基、環烷基、不飽和環烴基、雜環烷基、芳基、雜芳基、橋環、並環或者螺環任選被以下取代基取代：F、Cl、羥基、氰基、C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯環、-C(O)O-C1-6烷基、-C1-6烷基-OC1-6烷基或者C3-6環烷基；在某些實施方案中，R1選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6雜環烷基、C3-6不飽和環烴基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環，所述的烷基、環烷基、不飽和環烴基、雜環烷基、芳基、雜芳基、橋環、並環或者螺環任選被以下取代基取代：F、Cl、羥基、氰基、C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯環、-C(O)O-C1-6烷基或者C3-6環烷基；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
、
、
、
、
或者
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、金剛烷基、
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
、
、
；在某些實施方案中，R1選自
；在某些實施方案中，R1選自
；在某些實施方案中，R1選自
；R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基、C1-6烷氧基或者C1-6烷基；
在某些實施方案中，R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基或者C1-6烷基；在某些實施方案中，R2、R3各自獨立選自H、F、Cl、甲基、乙基、異丙基、叔丁基；在某些實施方案中，R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、F、Cl、胺基、氰基、羥基、C1-6烷基或者C1-6鹵代烷基；在某些實施方案中，R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、F、氰基、羥基或者C1-6烷基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H或者C1-6烷基；在某些實施方案中，R4、R5、R6、R7各自獨立選自H、甲基、乙基、異丙基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、氰基、羥基、C1-6烷氧基或者C1-6烷基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、C1-6烷基，所述的烷基任選被以下取代基取代：氰基、F或者Cl，或者R8與R9一起形成C2-6烯基或者C3-6環烷基；R10選自H或者C1-6烷基；R11選自芳基或雜芳基，所述的芳基或雜芳基任選被以下取代基取代：F、Cl、C1-6烷基或者C1-6烷氧基；在某些實施方案中R11選自
或者
；在某些實施方案中，R11選自
；條件是：當R11選自芳基及取代芳基時，R1選自
、
、
或者
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
、
、
、
、
或者、
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
、
、
、
、
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
、
、
、
、
、
或者
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、
苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
、
、
、
、
或者
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R11選自
或者
；條件是：當R11選自
時，R1選自
、
、
；在某些實施方案中，R11選自
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R11選自
或者
；條件是：當R11選自
時，R1選自
、
、
、
；在某些實施方案中，R11選自
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自C1-6烷基或者C3-6環烷基，所述的烷基或者環烷基任選被以下取代
基取代：F、Cl、C1-6烷基或者羥基；R2、R3各自獨立選自H、F、Cl或者C1-6烷基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H或者C1-6烷基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、C1-6烷基，所述的烷基任選被以下取代基取代：氰基、F或者Cl，或者R8與R9一起形成C2-6烯基或者C3-6環烷基；R10選自H；R11選自
或者
；條件是：當R11選自
時，R1選自
、
、
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
、
或者
；R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H；R8、R9各自獨立選自H、F、異丙基、
，或者R8與R9一起形成2-甲基丙烯基或者環丙基；R10選自H；R11選自
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
、
或者
；
R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H；R8、R9各自獨立選自H、F、異丙基，或者R8與R9一起形成2-甲基丙烯基或者環丙基；R10選自H；R11選自
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
或者
；R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H；R8、R9各自獨立選自H、F、異丙基、
，或者R8與R9一起形成2-甲基丙烯基或者環丙基；R10選自H；R11選自
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中：R1選自
、
或者
；R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H；R8、R9各自獨立選自H、F、異丙基；
R10選自H；R11選自
。
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中化合物結構如下：
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中化合物結構如下：
本發明所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，其中化合物結構如下：
較佳如下化合物：
本發明還涉及一種藥物組合物，所述的組合物包括：有效劑量的任一本發明的化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥，或進一步包括一種或多種其他治療劑以及藥學上可接受的載體或賦形劑。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物在製備用於治療由CB2受體介導的疾病的藥物中的用途。
本發明涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物在製備用於治療疼痛的藥物中的用途。
在本發明一些具體實施方案中，疼痛可以選自：骨痛、關節痛、肌肉疼痛、牙痛、偏頭痛、頭痛、炎性疼痛、神經病理性疼痛、克羅恩病相關腹痛、由於治療劑的不良作用而引起的疼痛及與選自下述的疾病相關的疼痛：骨關節炎、癌症、多發性硬化、變應性應答、腎炎綜合症、硬皮病、甲狀腺炎、糖尿病性神經病、纖維肌痛、與HIV相關的神經病、坐骨神經痛和自身免疫性疾病。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物在製備用於治療神經病理性疼痛藥物中的用途。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物在製備用於治療克羅恩病相關腹痛藥物中的用途。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、
藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物用於治療由CB2受體介導的疾病的方法。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物用於治療疼痛的方法。
在本發明一些具體實施方案中，疼痛可以選自：骨痛、關節痛、肌肉疼痛、牙痛、偏頭痛、頭痛、炎性疼痛、神經病理性疼痛、克羅恩病相關腹痛由於治療劑的不良作用而引起的疼痛及與選自下述的疾病相關的疼痛：骨關節炎、癌症、多發性硬化、變應性應答、腎炎綜合症、硬皮病、甲狀腺炎、糖尿病性神經病、纖維肌痛、與HIV相關的神經病、坐骨神經痛和自身免疫性疾病。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物治療神經病理性疼痛的方法。
本發明還涉及通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、溶劑化物、水合物、N-氧化物或前藥或者含本發明化合物的組合物治療克羅恩病相關腹痛的方法。
除非有相反的陳述，在說明書和權利要求書中使用的術語具有下述含義。
本發明所述基團和化合物中所涉及的碳、氫、氧、硫、氮或鹵素均包括它們的同位素，及本發明所述基團和化合物中所涉及的碳、氫、氧、硫、氮或鹵素任選進一步被一個或多個它們對應的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氫的同位素包括氕(H)、氘(D，又稱為重氫)、氚(T，又稱為超重氫)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
“烷基”是指直鏈和支鏈的一價飽和烴基，主鏈包括1至10個碳
原子，較佳為1至8個碳原子，進一步較佳為1至6個碳原子，更佳為1至4個碳原子的直鏈與支鏈基團，最佳為1至2個碳原子，烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基等；所述的烷基可以進一步被任意取代基取代。
“亞烷基”是指直鏈和支鏈的二價飽和烴基，包括-(CH2)v-(v為1至10的整數)，亞烷基實施例包括但不限於亞甲基、亞乙基、亞丙基和亞丁基等；所述的亞烷基可以任選進一步被任意取代基取代。當亞烷基中的取代基數量大於等於2個時，取代基可以稠合在一起形成環狀結構。
“烷氧基”是指O-烷基的一價基團(-O-烷基)，其中，烷基如本文所定義，烷氧基實施例包括但不限於甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-1-丙氧基、2-丁氧基、2-甲基-2-丙氧基、1-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、2-甲基-2-丁氧基、3-甲基-2-丁氧基、3-甲基-1-丁氧基和2-甲基-1-丁氧基等。
“烯基”是指直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳雙鍵，主鏈包括2至10個碳原子，進一步較佳2至6個碳原子，更佳在主鏈上有2至4個碳原子，烯基實施例包括但不限於乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、4-癸烯基、1,3-丁二烯、1,3-戊二烯、1,4-戊二烯和1,4-己二烯等；所述的烯基可以任選進一步被任意基團取代。
“炔基”是指直鏈和支鏈的一價不飽和烴基，其具有至少1個，通常有1、2或3個碳碳三鍵，主鏈包括2至10個碳原子，進一步較佳2至6個碳原子，更佳在主鏈上有2至4個碳原子，炔基實施例包括但不限於乙炔基、1-丙
炔基、2-丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-己炔基、3-己炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基和4-癸炔基等；所述的炔基可以任選進一步被任意取代基取代。
“環烷基”是指一價飽和的碳環烴基，單環，通常有3至10個碳原子，非限制性實施例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基等。所述的環烷基可以任選進一步被任意取代基所取代。
“不飽和環烴基”是指含有不飽和鍵(比如雙鍵)的、不具有芳香性的碳環烴基，非限制性實施例包括環丙烯基、環丁烯基、1,4-環己二烯、1,3-環戊二烯等。所述的環烷基可以任選進一步被任意取代基所取代。
“雜環基”是指是指飽和或不飽和的至少含1個雜原子的環烴基，單環，雜原子為N、O、S、P及其氧化形態，非限制性實施例包括氮雜環丙基、氧雜環丙基、硫雜環丙基、氮雜環丁基、氧雜環丁基、硫雜環丁基、吖丁基(又名氮雜環丁基)、吡咯基、吡咯啉基、3-吡咯啉基、1-吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑烷基、2-吡唑啉基、咪唑基、吡唑基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、1,2,4-***基等。所述的雜環基可以任選進一步被任意取代基所取代。
“螺環”是指取代的或未取代的單環之間共用一個原子(比如碳原子，稱螺原子)的5至20元多環基團，其可以包含0至5個雙鍵，且可以含有0至5個選自N、O或S(=O)n的雜原子。較佳為6至14元，進一步較佳為6至12元，更佳為6至10元，其非限定性實例包括
和
。螺環可以被任意取代基進一步取代。
“並環”是指系統中的每個環與體系中的其他環共用毗鄰的一對原子(比如碳原子)的多環基團，其中一個或多個環可以含有0個或多個雙鍵，且
可以是取代的或未取代，並環體系中的各個環可以含0至5個選自N、S(=O)n或O的雜原子。較佳為5至20元，進一步較佳為5至14元，更較佳5至12元，再進一步較佳5至10元。非限定性實例包括
和
。並環可以進一步被任意取代基取代。
“橋環”是指任意兩個環共用兩個不直接連接的原子(比如碳原子)的多環基團，可以含有0個或多個雙鍵，且可以是取代的或未取代的，並環體系中的任意環可以含0至5個選自N、S(=O)n或O雜原子或基團(其中n為1、1、2)。環原子包含5至20個原子，較佳為5至14個原子，進一步較佳5至12個，在進一步較佳5至10個。非限定性實例包括
和金剛烷。橋環可以進一步被任意取代基取代。
“芳基”是指取代的或未取代的6至14元環狀芳香基團，包括單環芳香基和稠環芳香基。較佳6至14元芳香環，進一步較佳6至10元芳香環，其非限制性實例包括苯基、萘基、蒽基和菲基等。所述芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，非限制性實施例包含：
、
、
、
、
、
和
。芳基可以進一步被任意取代基取代。
“雜芳基”是指取代或未取代的5至14元芳香環，且含有1至5個選自N、O或S(=O)n雜原子或基團，較佳5至10元雜芳香環，進一步較佳5至6元。雜芳基的非限制性實施例包括但不限於吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、咪唑基、呱啶基、嗎啉、硫代嗎啉、1,3-二噻烷、苯並咪唑、苯並吡啶、吡咯並吡啶等。所述雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包含
、
、
、
、
、
、
和
。雜芳基可以進一步被任意取代基取代。
“藥學上可接受的鹽”指的是保持游離酸或游離鹼的生物有效性和特性，且所述的游離酸通過與無毒的無機鹼或有機鹼，或所述的游離鹼通過與無毒的無機酸或有機酸反應獲得的那些鹽。
“載體”指的是不會對生物體產生明顯刺激且不會消除所給予化合物的生物活性和特性的載體或稀釋劑。
“賦形劑”指的是加入到藥物組合物中以進一步依賴於化合物給藥的惰性物質。賦形劑的實例包括但不限於碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖和不同類型的澱粉、纖維素衍生物(包括微晶纖維素)、明膠、植物油、聚乙二醇類、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。
“前藥”是指可以在生理條件下或通過溶劑解轉化為具有生物活性的本發明化合物的化合物。本發明的前藥通過修飾在該化合物中的酚基團來製備，該修飾可以按常規的操作或在體內被除去，而得到母體化合物。當本發明的前體藥物被施予哺乳動物個體時，前體藥物被割裂而分別形成游離的羥基。前藥的例子包括，但不限於本發明化合物的酚羥基和磷酸成鈉鹽衍生物。
“有效劑量”指引起組織、系統或受試者生理或醫學反應的化合物
的量，此量是所尋求的，包括在受治療者身上施用時足以預防受治療的疾患或病症的一種或幾種症狀發生或使其減輕至某種程度的化合物的量。
“溶劑化物”指本發明化合物或其鹽，它們還包括以分子間非共價力結合的化學計量或非化學計量的溶劑。當溶劑為水時，則為水合物。
“任選”或“任選地”是指隨後所描述的事件或環境可以但不必須發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。如：“任選被F取代的烷基”指烷基可以但不必須被F取代，說明包括烷基被F取代的情形和烷基不被F取代的情形。
“任選被R取代”表示可以被R取代或不被取代，當取代時，R的個數不限定，滿足化學鍵原則即可，較佳1-5個、1-3個、1-2個、1個；當被2個及以上R取代時，R可以獨立自由選擇，可以相同，可以不相同，互相獨立。
以下結合實施例詳細說明本發明的技術方案，但本發明的保護範圍包括但是不限於此。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)和/或質譜(MS)來確定的。
NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。
NMR的測定是用(Bruker ADVANCE III 400)核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)，1HNMR資訊以下列格式來清單：化學位移(多重峰(s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰)，質子數)。
MS的測定用(Agilent 6120B(ESI))。
HPLC的測定使用安捷倫1260DAD高壓液相色譜儀(Zorba x SB-
C18 100 x 4.6mm)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。
實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。
簡寫說明：
HATU：2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽；DMF：N,N-二甲基甲醯胺；TEA：三乙胺；LHMDS：雙(三甲基矽基)胺基鋰；DCM：二氯甲烷；m-CPBA：間氯過氧苯甲酸；DIPEA：N,N-二異丙基乙胺；PE：石油醚；EA：乙酸乙酯；NIS：N-碘代琥珀醯亞胺。
中間體Int-1
2-胺基-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁-1-醇(中間體Int-1)2-amino-4,4,4-trifluoro-3,3-dimethylbutan-1-ol
第一步：3,3,3-三氟-N-甲氧-N,2,2-三甲基丙醯胺(Int-1-b)
3,3,3-trifluoro-N-methoxy-N,2,2-trimethylpropanamide
氮氣保護，室溫下，向3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酸(25g,0.16mol)，中依次加入DMF(50mL)，TEA(32mg,0.25mmol)，HATU(77mg,0.2mmol)，N-甲基-N-甲氧基胺鹽酸鹽(17.2g,0.176mol)，室溫下攪拌過夜。向反應中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)淬滅反應，300ml乙酸乙酯萃取，靜置分層，水相再用二氯甲烷(200mL×3)萃取三次，合併後的有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後得到殘留物，即粗品，粗品經柱層析(沖提劑PE：EA=10：1)得到Int-1-b(22g，收率69%)，淡黃色油狀。
LC-MS(ESI)：m/z=200.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.70(s,3H),3.21(s,3H),1.5(s,6H)。
第二步：3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙醛(Int-1-c)
3,3,3-trifluoro-2,2-dimethylpropanal
氮氣保護，室溫下，250mL單口瓶中加入THF(50mL)，0℃下加入LiAlH4(3.43g,90mmol)，緩慢滴入化合物Int-1-b(15g,75.3mmol)，室溫下攪拌2h。在0℃下，向反應中依次加入水(3.5mL)、NaOH(15%,3.5mL)、水(3.5mL)淬滅反應，攪拌30min，再加入***200mL劇烈攪拌30min，經矽藻土過濾，減壓濃縮後得到粗品Int-1-c(14g)，無色油狀化合物，無需純化，直接用於下一步反應。
LC-MS(ESI)：m/z=141.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.69(s,1H),1.30(s,6H)。
第三步：2-胺基-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁腈(Int-1-d)
2-amino-4,4,4-trifluoro-3,3-dimethylbutanenitrile
氮氣保護，室溫下，向單口瓶中依次加入Int-1-c(4.5g)，NH3/MeOH(10mL,70mmol)，NH4Cl(1.62g,30mmol)，室溫下攪拌30min，再加入KCN(1.95g,30mmol)，繼續攪拌反應過夜。將反應液減壓濃縮得到粗品。粗品溶於***10mL，0℃下緩慢加入2N HCl 1,4-二氧六環溶於攪拌析出白色固體Int-1-d(1.65g，收率34.78%)。
LC-MS(ESI)：m/z=167.1[M+H]+。
第四步：2-胺基-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸(Int-1-e)
2-amino-4,4,4-trifluoro-3,3-dimethylbutanoic acid
氮氣保護，室溫下，向單口瓶中依次加入Int-1-d(2.05g,10.14mmol)，6N HCl(20mL)，回流下攪拌36h。冷卻至室溫，向反應中加入氫氧化鈉水溶液調節pH至8，水相用二氯甲烷(20mL)洗滌回收原料0.4g，水相再調pH至7，減壓濃縮至固體，得到粗品白色固體Int-1-e(1.3g)。
LC-MS(ESI)：m/z=186.2[M+H]+。
第五步：2-胺基-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁-1-醇(Int-1)
2-amino-4,4,4-trifluoro-3,3-dimethylbutan-1-ol
氮氣保護，室溫下，50mL單口瓶中加入THF(20mL)，0℃下加入LiAlH4(270mg,8.43mmol)，緩慢滴入化合物Int-1-e(1.3g,7mmol)，回流下攪拌3h反應完全。在0℃下，向反應中依次加入水(0.27mL)、NaOH(15%,0.27mL)、水(0.27mL)淬滅反應，攪拌30min，再加入THF(50mL)劇烈攪拌30min，NaSO4乾燥，經矽藻土過濾，減壓濃縮後得到Int-1(0.82g,68.23%)，淡黃色油狀化合物，無需純化，直接用於下一步反應。
LC-MS(ESI)：m/z=172.2[M+H]+。
實施例1
3-((4R)-3-((s)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基胺基甲醯)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物1)
3-((4R)-3-(((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
第一步：(2S,5R)-2-異丙基-5-甲基環己酮
(2S,5R)-2-isopropyl-5-methylcyclohexanone(1b)
室溫下，向已知化合物1a(5.0g,32.0mmol)中加入二氯甲烷(100mL)，水浴冷卻下，分批次加入戴斯馬丁氧化劑(13.6g,32mmol)，室溫攪拌2小時。向反應中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)淬滅反應，再室溫攪拌30分鐘。墊矽藻土過濾，母液靜置分層，水相用二氯甲烷(100mL)反萃，合併後的有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物用矽膠柱層析(沖提劑PE：EA=20：1-5：1)分離純化得到1b(3.4g,69%)。
LC-MS(ESI)：m/z=155.2[M+H]+。
第二步：(4R)-7-異丙基-4-甲基-3a,4,5,6-四氫苯並呋喃-2,3-二酮(1c)
(4R)-7-isopropyl-4-methyl-3a,4,5,6-tetrahydrobenzofuran-2,3-dione
室溫下，向化合物1b(1.0g,6.48mmol)中依次加入MeOH(10mL)、草酸二甲酯(0.92g,7.78mmol)，30%甲醇鈉溶液(5ml,89.2mmol)。反應在50℃下攪拌18小時。用1M鹽酸將反應液pH調至5-6，加入水稀釋(100mL)，
用乙酸乙酯(100mL)萃取，靜置分層，有機層用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物用矽膠柱層析(沖提劑PE：EA=10：1-5：1)分離純化得到1c(0.84g,62%)。
LC-MS(ESI)：m/z=209.2[M+H]+。
第三步：2-((6R)-3-異丙基-6-甲基-2-氧代環己基)-2-氧乙酸(1d)
2-((6R)-3-isopropyl-6-methyl-2-oxocyclohexyl)-2-oxoacetic acid
室溫下，向化合物1c(1.0g,4.8mmol)中依次加入四氫呋喃(5mL)，水(5mL)，NaOH(2.0g,50mmol)，攪拌2小時，用1M HCl調pH至5-6，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和食鹽水(50mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物得到1d(0.8g,70%)。
LC-MS(ESI)：m/z=227.2[M+H]+。
第四步：(4R)-7-異丙基-4-甲基-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲酸(1e)
(4R)-7-isopropyl-4-methyl-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxylic acid
室溫下，向化合物1d(0.8g,4.0mmol)中依次加入MeOH(50mL)，2-肼基吡嗪(0.5g,5.0mmol)，再用6M鹽酸調pH至1-2。50℃攪拌2小時，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和食鹽水(100mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物用矽膠柱層析(沖提劑PE：EA=5：1-純EA)分離純化得到1e(0.2g,16.7%)。
LC-MS(ESI)：m/z=301.2[M+H]+。
第五步：(4R)-N-((S)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)-7-異丙基-4-甲基-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺(1f)
(4R)-N-((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)-7-isopropyl-4-methyl-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide
室溫下，向化合物1e(0.2g,0.66mmol)中依次加入DMF(2mL)，HATU(0.28g,0.73mmol)，(S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醇(0.085g,0.72mmol)，三乙胺(0.2g,1.98mmol)。室溫攪拌2小時，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相
用飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物用矽膠柱層析(沖提劑PE：EA=5：1-2：1)分離純化得到1f(0.2g,75.5%)。
LC-MS(ESI)：m/z=400.3[M+H]+。
第六步：3-((4R)-3-(((S)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)胺甲醯)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物1)
3-((4R)-3-(((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
室溫下，向化合物1f(0.05g,0.125mmol)中依次加入DCM(1mL)，m-CPBA(0.065g,0.376mmol)，室溫攪拌18小時，用亞硫酸鈉水溶液淬滅反應，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物矽膠柱層析(PE：EA=5：1-1：1)分離純化得到化合物1(0.01g,19.2%)。
LC-MS(ESI)：m/z=416.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.99-8.98(m,1H),8.43-8.42(d,1H),8.22-8.21(m,1H),3.97-3.94(m,1H),3.86-3.82(m,1H),3.69-3.66(m,2H),3.28-3.25(m,1H),2.14-2.06(m,1H),1.86-1.76(m,3H),1.69-1.66(m,1H),1.29-1.27(d,3H),1.02(s,9H),0.94-0.92(d,3H),0.70-0.68(d,3H)。
實施例2
(4R)-1-(2,4-二氟苯基)-N-((S)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺(化合物2)。
(4R)-1-(2,4-difluorophenyl)-N-((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide.
第一步：(4R)-1-(2,4-二氟苯基)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-
吲唑-3-甲酸(2a)。
(4R)-1-(2,4-difluorophenyl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxylic acid.
室溫下，向化合物1d(0.3g,1.3mmol)中依次加入甲醇(6mL)、2,4-二氟苯肼(0.22g,1.6mmol)，用鹽酸(6M)調節pH值3-4，加熱至50℃攪拌反應2小時。將反應液倒入(30mL)水中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，柱層析(沖提劑PE/EA=10/1-5/1)分離純化，得化合物2a(0.2g，收率46%)。
LC-MS(ESI)：m/z=335.2[M+H]+。
第二步：(4R)-1-(2,4-二氟苯基)-N-((S)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺(化合物2)。
(4R)-1-(2,4-difluorophenyl)-N-((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide.
室溫下，向化合物2a(0.1g,0.3mmol)中依次加入DMF(5mL)、S-叔亮胺醇(39mg,0.33mmol)、HATU(125mg,0.33mmol)、DIPEA(120mg,0.9mmol)。攪拌反應1小時。將反應液倒入(50mL)水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，矽膠柱層析(沖提劑PE/EA=5/1-1/1)分離純化，得化合物2(25mg，收率19%)。
LC-MS(ESI)：m/z=434.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.45-7.39(m,1H),7.03-6.97(m,2H),3.99-3.89(m,2H),3.62-3.57(m,1H),3.41-3.99(m,1H),2.88-2.83(m,1H),1.80-1.68(m,4H),1.64-1.56(m,1H),1.31-1.29(d,3H),1.02(s,9H),0.81-0.79(d,3H),0.58-0.56(d,3H)。
實施例3
3-((4R)-3-((1-羥基-2-甲基丙醇-2-基)胺甲醯)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物3)。
3-((4R)-3-((1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)carbamoyl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide.
第一步：3-((4R)-3-羧基-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪-1-氧化物(3a)。
3-((4R)-3-carboxy-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide.
室溫下，向化合物1d(0.4g,1.8mmol)中依次加入甲醇(8mL)、吡嗪-2-肼氧化物(0.27g,2.1mmol)，用鹽酸(6M)調節pH值3-4，加熱至50℃攪拌反應2小時。將反應液倒入(30mL)水中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，柱層析(沖提劑DCM/MeOH=80/1-30/1)分離純化，得化合物3a(0.12g，收率21%)。
LC-MS(ESI)：m/z=317.2[M+H]+。
第二步：3-((4R)-3-((1-羥基-2-甲基丙醇-2-基)胺甲醯)-7-異丙基-4-甲基-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物3)。
3-((4R)-3-((1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)carbamoyl)-7-isopropyl-4-methyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide.
室溫下，向化合物3a(120mg,0.38mmol)中依次加入DMF(5mL)、2-胺基-2-甲基-1-丙醇(37mg,0.42mmol)、HATU(160mg,0.42mmol)、DIPEA(147mg,1.14mmol)。攪拌反應1小時。將反應液倒入(50mL)水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，矽膠柱層析分離純化(沖提劑PE/EA=5/1-1/1)，得化合物3(30mg，收率20%)。
LC-MS(ESI)：m/z=388.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.78(s,1H),8.28-8.27(m,1H),8.02-8.01(m,1H),6.98(s,1H),3.75-3.70(m,2H),3.64-3.60(m,1H),3.37-3.31(m,2H),1.80-1.73(m,4H),1.42-1.41(m,6H),1.31-1.29(m,3H),0.92-0.90(m,3H),0.65-0.63(m,3H)。
實施例4：
(4R)-N-(1-(羥甲基)環戊基)-7-異丙基-4-甲基-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺-氧化物(化合物4)
(4R)-N-(1-(hydroxymethyl)cyclopentyl)-7-isopropyl-4-methyl-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide-oxide
第一步：(4R)-N-(1-(羥甲基)環戊基)-7-異丙基-4-甲基-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺-氧化物(化合物4)
(4R)-N-(1-(hydroxymethyl)cyclopentyl)-7-isopropyl-4-methyl-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide-oxide
室溫下，向化合物3a(0.1g,0.316mmol)中依次加入DCM(2mL)，HATU(0.14g,0.35mmol)，(1-胺基環戊基)甲醇(0.045g,0.38mmol)，三乙胺(0.1g,0.95mmol)。室溫攪拌2小時，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和食鹽水(20mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物用矽膠柱層析(沖提劑PE/EA=5/1-1/1)分離純化得到化合物4(0.06g,50%)。
LC-MS(ESI)：m/z=414.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.79-8.72(m,1H),8.26-8.24(m,1H),8.01-7.98(m,1H),7.07-7.06(m,1H),3.80-3.72(m,2H),3.66-3.59(m,1H),3.39-3.29(m,1H),2.06-1.96(m,3H),1.92-1.64(m,9H),1.31-1.22(m,3H),0.92-0.83(m,3H),0.82-0.60(m,3H)。
實施例5
(S)-3-(7,7-二氟-3-((1-羥基-3,3-二甲基丁-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物5)
(S)-3-(7,7-difluoro-3-((1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
第一步：2-乙氧基環己烷-2-烯-1-酮(5b)
2-ethoxycyclohex-2-en-1-one
將化合物5a(10g,89.3mmol)溶解在甲苯(100mL)中，室溫下向其中依次加入乙醇(50mL)，對甲苯磺酸(23.1g,133.0mmol)。升溫回流24小時。將反應液旋乾加矽膠拌樣，柱層析(沖提劑：石油醚/乙酸乙酯=10：1~5：1)分離得到化合物5b(6.5g,52%)。
LC-MS(ESI)：m/z=141.2[M+H]+。
第二步：2-(3-乙氧基-2-氧代環己-3-烯-1-基)-2-氧代乙酸乙酯(5c)
ethyl 2-(3-ethoxy-2-oxocyclohex-3-en-1-yl)-2-oxoacetate
將化合物5b(3.0g,21.4mmol)溶解在四氫呋喃(30mL)中，降溫至零下78攝氏度，向其中加入LHMDS(1M，23.5mL)，半個小時後再向其中加入草酸二乙酯(3.4g,23.5mmol)，升溫至室溫反應過夜。使用稀鹽酸淬滅反應，乙酸乙酯(100mL×2)萃取水相，無水硫酸鈉乾燥，加入矽膠拌樣柱層析(沖提劑：石油醚/乙酸乙酯=10：1~5：1)分離，得到化合物5c(1.9g,37.0%)。
LC-MS(ESI)：m/z=241.2[M+H]+。
第三步：(7-氧代-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯(5d)
ethyl 7-oxo-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxylate
將化合物5c(2.1g,8.8mmol)溶解在硫酸乙醇溶液中(1：100(v/v),
21mL)中，室溫下向其中加入吡嗪-2-肼(1.45g,13.2mmol)，升溫回流反應半個小時。將反應液旋乾，加入矽膠拌樣柱層析(沖提劑：石油醚/乙酸乙酯=5：1~3：1)分離，得到化合物5d(1.85g,73.4%)。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 9.16(d,1H),8.64(d,1H),8.55(dd,1H),4.45(q,2H),2.95(t,2H),2.37-2.20(m,2H),2.16-2.03(m,2H),1.43(t,3H)。
第四步：1-(吡嗪-2-基)-1,4,5,6-四氫螺[吲唑-7,2'-[1,3]二硫戊環]-3-羧酸乙酯(5e)
ethyl 1-(pyrazin-2-yl)-1,4,5,6-tetrahydrospiro[indazole-7,2'-[1,3]dithiolane]-3-carboxylate
將化合物5d(0.9g,3.15mmol)溶解在無水二氯甲烷(10mL)中，室溫下依次向其中加入三氟化硼***溶液(2M，10mL)，乙二硫醇(1.45g,13.2mmol)，室溫反應過夜。飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，乙酸乙酯(70mL×2)萃取水相，無水硫酸鈉乾燥，加入矽膠拌樣，柱層析(沖提劑：石油醚/乙酸乙酯=5：1~3：1)分離，得到化合物5e(0.9g,78.7%)。
LC-MS(ESI)：m/z=363.3[M+H]+。
第五步：7,7-二氟-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸乙酯(5f)
ethyl 7,7-difluoro-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxylate
將NIS(0.9g,2.49mmol)溶解在無水二氯甲烷(10mL)中，降溫至零下78攝氏度，向其中加入氫氟酸吡啶鹽溶液，反應十分鐘後，再向其中滴加化合物5e(0.9g,2.49mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，在此溫度下反應二十分鐘。將反應液旋乾，加矽膠拌樣，柱層析(沖提劑：石油醚/乙酸乙酯=2：1~1：1)分離，得到化合物5f(0.48g,47%)。
LC-MS(ESI)：m/z=309.1[M+H]+。
第六步：7,7-二氟-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-羧酸(5g)
7,7-difluoro-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxylic acid
將化合物5f(0.15g,0.54mmol)溶解在四氫呋喃(10mL)和甲醇(10mL)混合溶劑中，室溫下向其中加入氫氧化鈉溶液(2M,10mL)。室溫下反應兩個小時。調節反應液pH=6，二氯化甲烷(30mL×2)萃取水相，旋乾得到化合物5g，無需純化，備用。
LC-MS(ESI)：m/z=281.2[M+H]+。
第七步：(S)-7,7-二氟-N-(1-羥基-3,3-二甲基丁-2-基)-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺(5h)
(S)-7,7-difluoro-N-(1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide
將化合物5g(5.0g,32.5mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，室溫下向其中加入HATU(2M,10mL)，TEA(2M,10mL)，(S)-叔亮胺醇(3.97g,39mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(100mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥，柱層析(沖提劑：石油醚/乙酸乙酯=2：1~1：1)分離得到化合物5h(0.1g,52%)。
LC-MS(ESI)：m/z=380.2[M+H]+。
第八步：(S)-3-(7,7-二氟-3-((1-羥基-3,3-二甲基丁-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物5)
(S)-3-(7,7-difluoro-3-((1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將原料5h(100mg,0.35mmol)溶解於5ml的甲酸溶液中，然後加入30%的雙氧水溶液(0.5ml)，升溫至64℃攪拌反應3小時以後，加入50ml的水，用50ml的乙酸乙酯萃取三次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，旋乾以後將得到的棕色油狀物溶解於3ml的甲醇與3ml的四氫呋喃的混合溶劑中，然後緩慢滴加氫氧化鈉的水溶液2ml(2M)，常溫攪拌反應15分鐘以後，TLC檢測，反應完全，加入50ml的水，用50ml的乙酸乙酯萃取三次，合併有機相無水硫酸鈉乾燥旋乾，高效液相製備分離後得到終產物白色粉末32mg(化合物5)，收率26%。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：13.8min。LC-MS(ESI)：m/z=396.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.70(dd,1H),8.40(dd,1H),8.08(dd,1H),7.04(d,1H),4.06-3.87(m,2H),3.69(dd,1H),3.00(dd,2H),2.38-2.14(m,2H),2.10-1.99(m,3H),1.04(s,9H)。
實施例6
(S)-3-(3'-((1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)胺甲醯基)-5',6'-二氫螺[環丙基-1,7'-吲唑]-1'(4'H)-基)吡嗪1-氧化物(化合物6)
(S)-3-(3'-((1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-5',6'-dihydrospiro[cyclopropane-1,7'-indazol]-1'(4'H)-yl)pyrazine 1-oxide
第一步：2-(2-氯乙基)環己酮(6b)
2-(2-chloroethyl)cyclohexanone
室溫下，向化合物6a(3.3g,23.24mmol)中加入乙腈(3.3mL)，0℃下加入濃鹽酸(16.5ml)，升溫至100℃反應3小時，反應液降至室溫後用乙酸乙酯萃取，有機相濃縮乾，得化合物6b(3.68g，收率99%)。
第二步：螺[2.5]辛-4-酮(6c)。
spiro[2.5]octan-4-one.
室溫下，向化合物6b(3.65g,23mmol)中加入乙醇(16mL)、氫氧化鉀(1.8g,32mmol)，室溫反應5小時。將反應液倒入(50mL)水中，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，有機相濃縮，殘留物用矽膠柱色譜分離純化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)=0：1~1：8)，得化合物6c(1g，收率35%)。
第三步：2-氧代-2-(4-氧代螺[2.5]辛-5-基)乙酸甲酯(6d)
methyl 2-oxo-2-(4-oxospiro[2.5]octan-5-yl)acetate
將化合物6c(500mg,4mmol)加入四氫呋喃(10mL)中，-78℃下加入雙三甲基矽基胺基鋰(5ml,5mmol)，-78℃攪拌30min，加入2-氯-2-氧代乙酸甲酯(740mg,6.1mmol)，繼續反應1h，緩慢升至室溫，反應液用氯化銨水溶液淬滅，倒入水(20mL)中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有機相濃縮，殘留物用矽膠柱色譜分離純化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)=0：1~1：6)，得化合物6d(700mg，收率83%)。
LC-MS(ESI)：m/z=211.1[M+H]+。
第四步：1'-(吡嗪-2-基)-1',4',5',6'-四氫螺[環丙烷-1,7'-吲唑]-3'-羧酸甲酯(6e)
methyl 1'-(pyrazin-2-yl)-1',4',5',6'-tetrahydrospiro[cyclopropane-1,7'-indazole]-3'-carboxylate
室溫下，向化合物6d(400mg,1.9mmol)中依次加入甲醇(6mL)、2,4-二氟苯肼(252mg,2.3mmol)，用鹽酸(6M)調節pH值4-5，加熱至50℃攪拌反應2小時。將反應液倒入(30mL)水中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，殘留物用矽膠柱色譜分離純化(石油醚：乙酸乙酯(v/v)=0：1~1：3)，得化合物6e(300mg，收率56%)。
LC-MS(ESI)：m/z=285.1[M+H]+。
第五步：1'-(吡嗪-2-基)-1',4',5',6'-四氫螺[環丙烷-1,7'-吲唑]-3'-羧酸(6f)
1'-(pyrazin-2-yl)-1',4',5',6'-tetrahydrospiro[cyclopropane-1,7'-indazole]-3'-carboxylic acid
室溫下，向化合物6e(180mg,0.63mmol)加入甲醇(3ml)和水(1ml)，再加入氫氧化鈉(120mg,3mmol)，攪拌反應1小時。將反應液用稀鹽酸調製pH值4-5，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，得化合物6f(165mg，收率97%)。
LC-MS(ESI)：m/z=271.1[M+H]+。
第六步：3-(3'-羧基-5',6'-二氫螺[環丙烷-1,7'-吲唑]-1'(4'H)-基)吡嗪1-氧化物(6g)
3-(3'-carboxy-5',6'-dihydrospiro[cyclopropane-1,7'-indazol]-1'(4'H)-yl)pyrazine 1-oxide
室溫下，向化合物6f(165mg,0.61mmol)中依次加入甲酸(5mL)、30%雙氧水(0.5ml)，加熱至50℃攪拌反應2小時。將反應液倒入(20mL)水中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，得化合物6g(140mg，收率80%)。
LC-MS(ESI)：m/z=287.1[M+H]+。
第七步：(S)-3-(3’-((1-羥基-3,3-二甲基丁-2-基)胺基甲醯基)-5’,6'-二氫螺[環丙烷-1,7'-吲唑]-1'(4'H)-基)吡嗪1-氧化物(化合物6)
(S)-3-(3'-((1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-5',6'-dihydrospiro[cyclopropane-1,7'-indazol]-1'(4'H)-yl)pyrazine 1-oxide
室溫下，向化合物6g(140mg,0.49mmol)中依次加入DMF(5mL)、S-叔亮胺醇(60mg,0.0.51mmol)、HATU(223mg,0.0.58mmol)、DIPEA(160mg,1.2mmol)。攪拌反應1小時。將反應液倒入(50mL)水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，製備HPLC分離純化，得化合物6(35mg，收率19%)。
製備HPLC分離方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈；流動相B：水(含0.1%乙酸銨)；b.梯度沖提，流動相A含量從5%-50%；c.流量12mL/min；d沖提時間20min。化合物6滯留時間：13.5min。
LC-MS(ESI)：m/z=386.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.49(s,1H),8.27(d,1H),8.13-8.07(m,1H),7.03(d,1H),4.03-3.94(m,2H),3.7-3.65(m,1H),2.98(t,2H),2.41(s,1H),1.95-1.88(m,2H),1.64-1.61(m,2H),1.41-1.38(m,2H),1.03(s,9H),0.71-0.68(m,2H)。
實施例7
3-((R)-3-((S)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)胺甲醯-4-甲基-7-(丙-2-亞基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物7)
3-((R)-3-(((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4-methyl-7-(propan-2-ylidene)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide.
第一步：2-((6R)-6-甲基-2-氧代-3-(丙烷-2-亞基)環己基)-2-氧乙酸甲酯(7b)
methyl 2-((6R)-6-methyl-2-oxo-3-(propan-2-ylidene)cyclohexyl)-2-oxoacetate
氮氣保護下，向化合物7a(0.5g,3.3mmol)中加入四氫呋喃(10mL)，冷卻至-70至-80℃，將雙三甲基矽基胺基鋰(4.3mL,4.3mmol)於-70至-80℃間滴加至反應液中，保溫反應半小時，將草醯氯單甲酯(0.5g,4.3mmol)於-70至-80℃間滴加至反應液中，保溫反應半小時。將反應液倒入(50mL)水中，用鹽酸(6M)調節pH值5-6，乙酸乙酯(30mL×2)萃取，有機相濃縮，柱層析(沖提劑PE/EA=10/1-3/1)分離純化，得化合物7b(0.3g，收率38%)。
LC-MS(ESI)：m/z=239.1[M+H]+。
第二步：(R)-3-(3-(甲氧基羰基)-4-甲基-7-(丙烷-2-亞基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(7c)
(R)-3-(3-(methoxycarbonyl)-4-methyl-7-(propan-2-ylidene)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
室溫下，向化合物7b(0.3g,1.3mmol)中依次加入甲醇(5mL)、吡嗪-2-肼氧化物(0.2g,1.6mmol)，用鹽酸(6M)調節pH值3-4，加熱至50℃攪拌反應2小時。將反應液倒入(30mL)水中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，柱層析(沖提劑PE/EA=5/1-1/1)分離純化，得化合物7c(0.2g，收率50%)。
LC-MS(ESI)：m/z=329.1[M+H]+。
第三步：(R)-3-(3-羧基-4-甲基-7-(丙烷-2-亞基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(7d)
(R)-3-(3-carboxy-4-methyl-7-(propan-2-ylidene)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
室溫下，向化合物7c(0.2g,0.6mmol)中依次加入MeOH(2mL)、水(2mL)、氫氧化鈉(73.1mg,1.8mmol)，攪拌反應1小時。將反應液倒入(10mL)水中，用鹽酸(6M)調節pH值3-4，乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有機相濃縮，得化合物7d(150mg，收率80%)。
LC-MS(ESI)：m/z=315.1[M+H]+。
第四步：3-((R)-3-((S)-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)胺甲醯-4-甲基-7-(丙-2-亞基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物7)
3-((R)-3-(((S)-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4-methyl-7-(propan-2-ylidene)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
室溫下，向化合物7d(150mg,0.48mmol)中依次加入DMF(5mL)、S-叔亮胺醇(62mg,0.53mmol)、HATU(200mg,0.53mmol)、DIPEA(185mg,1.44mmol)。攪拌反應1小時。將反應液倒入(50mL)水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有機相濃縮，矽膠柱層析(沖提劑PE/EA=5/1-1/1)分離純化，得化合物7(50mg，收率25%)。
LC-MS(ESI)：m/z=414.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.60(s,1H),8.31-8.30(d,1H),8.04-8.02(m,1H),7.10-7.08(d,1H),4.03-3.95(m,2H),3.69-3.65(m,1H),3.45-3.41(m,1H),2.54-2.51(m,2H),2.05-2.00(m,1H),1.81(s,3H),1.72-1.65(m,1H),1.35(s,3H),
1.30-1.28(d,3H),1.03(s,9H)。
實施例8
3-(7,7-二氟-3-((1-(羥甲基)環戊基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物8)
3-(7,7-difluoro-3-((1-(hydroxymethyl)cyclopentyl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
第一步：7,7-二氟-N-(1-(羥甲基)環戊基)-1-(吡嗪-2-基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-3-甲醯胺(8b)
7,7-difluoro-N-(1-(hydroxymethyl)cyclopentyl)-1-(pyrazin-2-yl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazole-3-carboxamide
參照化合物5的第七步，由化合物5g反應得到化合物8b。
第二步：(S)-3-(7,7-二氟-3-((1-羥基-3,3-二甲基丁-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物8)
(S)-3-(7,7-difluoro-3-((1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
參照化合物5的第八步，由化合物8b反應得到化合物8(30mg,32%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%-75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.8min。
LC-MS(ESI)：m/z=394.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.75(t,1H),8.43(d,1H),8.11(dd,1H),7.10(s,1H),3.79(s,2H),3.27(s,1H),2.99(t,2H),2.37-2.22(m,2H),2.12-1.96(m,4H),1.96-1.66(m,6H)。
實施例9
3-(7,7-二氟-3-((4,4,4-三氟-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)胺甲醯)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪-1-氧化物
3-(7,7-difluoro-3-((4,4,4-trifluoro-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine-1-oxide
第一步：3-(7,7-二氟-3-((4,4,4-三氟-1-羥基-3,3-二甲基丁烷-2-基)胺甲醯)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)氧代吡嗪-1-氧化物
3-(7,7-difluoro-3-((4,4,4-trifluoro-1-hydroxy-3,3-dimethylbutan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine-1-oxide
氮氣保護，室溫下，向化合物10a(0.05g,0.17mmol)，中依次加入DMF(3mL)，DIPEA(32mg,0.25mmol)，HATU(77mg,0.2mmol)，2-胺基-4,4,4-三氟-3,3-二甲丁烷-1-醇(Int-1)(43mg,0.25mmol)，室溫下攪拌3h。向反應中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)淬滅反應，乙酸乙酯(20mL×2)萃取水相，靜置分層，水相再用二氯甲烷(20mL)萃取，合併後的有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後殘留物得到粗品，粗品經高效液相製備分離得到化合物9(30mg，收率39.64%)，白色固體。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度
沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.5min。LC-MS(ESI)：m/z=450.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.14(s,1H),8.53(s,1H),8.41(d,J=8.0Hz,1H),8.13(d,J=8.0Hz,1H),4.81(s,1H),4.34-4.29(m,2H),4.08-3.70(m,1H),3.63-3.51(m,1H),3.31-3.17(m,1H),2.90-2.73(m,2H),2.34-2.27(m,2H),1.24-1.17(s,6H)。
實施例10：
(S)-3-(7,7-二氟-3-((2-羥基-1-苯乙基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物10)
(S)-3-(7,7-difluoro-3-((2-hydroxy-1-phenylethyl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
第一步：3-(3-羧基-7,7-二氟-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(10a)
3-(3-carboxy-7,7-difluoro-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將中間體5g(2g,7.14mmol)溶解於甲酸(20ml)中，然後加入30%的雙氧水溶液(2ml)，升溫至64℃攪拌反應3小時以後，加入50ml水，並且冷卻至室溫，減壓抽濾得到化合物10a(800mg,38%)。
LC-MS(ESI)：m/z=297.3[M+H]+。
第二步：(S)-3-(7,7-二氟-3-((2-羥基-1-苯乙基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物10)
(S)-3-(7,7-difluoro-3-((2-hydroxy-1-phenylethyl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(200mg,0.68mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，
室溫下向其中加入HATU(334mg，0.88mL)，DIPEA(2.0mL)，(S)-2-胺基-2-苯基乙烷-1-醇(102mg,0.75mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，旋乾經高效液相製備分離純化。得到化合物10(0.11g,38%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：13.2min。
LC-MS(ESI)：m/z=416.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.76(dd,1H),8.38(dd,1H),8.06(dd,1H),7.60(d,1H),7.39(d,3H),7.35-7.28(m,1H),5.25(t,1H),4.01(d,2H),2.97(tt,2H),2.27(t,2H),2.16-1.84(m,3H)。
實施例11：
3-(7,7-二氟-3-((2-苯丙-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物11)
3-(7,7-difluoro-3-((2-phenylpropan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(200mg,0.68mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，室溫下向其中加入HATU(334mg，0.88mL)，DIPEA(2.0mL)，2-苯基丙-2-胺(101mg,0.75mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，旋乾經高效液相製備分離純化。得到化合物11(0.03g,11%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：13.8min。
LC-MS(ESI)：m/z=414.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.72(dd,1H),8.40(dd,1H),8.07(dd,1H),7.49-7.41(m,2H),7.35(dd,2H),7.25-7.17(m,1H),2.93(tt,2H),2.25(t,2H),2.04-1.95(m,2H),1.82(s,6H),1.66(s,1H)。
實施例12：
3-(7,7-二氟-3-((2-甲基-1-嗎啉代丙烷-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物12)
3-(7,7-difluoro-3-((2-methyl-1-morpholinopropan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(200mg,0.68mmol)溶解在二氯甲烷(10mL)中，室溫下向其中加入HATU(334mg，0.88mmol)，DIPEA(2.0mL)，2-甲基-1-嗎啉代丙烷-2-胺(215mg,1.36mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，無水硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化。得到化合物12(20mg,5%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰
時間：13.7min。
LC-MS(ESI)：m/z=437.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.65(s,1H),8.38(d,1H),8.06(dd,1H),7.32(s,1H),3.71(s,4H),2.98(s,2H),2.61(d,4H),2.27(t,2H),2.05(t,2H),1.46(s,6H)。
實施例13：
3-(7,7-二氟-3-((1-甲氧基-2-甲基-1-氧丙烷-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物13)
3-(7,7-difluoro-3-((1-methoxy-2-methyl-1-oxopropan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，2-胺基-2-甲基丙酸甲酯(40mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，經高效液相製備分離純化，得到化合物13(20mg,14%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.9min。
LC-MS(ESI)：m/z=396.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.73(s,1H),8.40(d,1H),8.08(dd,1H),7.36(s,1H),3.78(s,3H),2.97(t,2H),2.39-2.13(m,2H),2.11-1.90(m,2H),
1.67(s,6H)。
實施例14：
3-(3-((2-氰基丙烷-2-基)胺基甲醯基)-7,7-二氟-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物14)
3-(3-((2-cyanopropan-2-yl)carbamoyl)-7,7-difluoro-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，2-胺基-2-甲基丙腈(29mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物14(10mg,7%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.6min。
LC-MS(ESI)：m/z=363.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.68(dd,1H),8.48-8.35(m,1H),8.09(dd,1H),6.92(s,1H),3.01(t,2H),2.42-2.17(m,2H),2.15-1.96(m,2H),1.58(s,6H)。
實施例15：
3-(3-((2-氰基丙烷-2-基)胺基甲醯基)-7,7-二氟-4,5,6,7-四氫-1H-吲
唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物15)
3-(3-((2-cyanopropan-2-yl)carbamoyl)-7,7-difluoro-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，(四氫-2H-吡喃-4-基)甲胺(39mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物15(10mg,7%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.5min。
LC-MS(ESI)：m/z=394.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.69(s,1H),8.40(d,1H),8.07(dd,1H),6.98(s,1H),4.00(dd,2H),3.46-3.29(m,2H),2.99(t,2H),2.39-2.17(m,2H),2.13-1.95(m,2H),1.68(d,8H),1.39(t,2H)。
實施例16：
3-(7,7-二氟-3-((四氫-2H-吡喃-4-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物16)
3-(7,7-difluoro-3-((tetrahydro-2H-pyran-4-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，四氫-2H-吡喃-4-胺(34mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物16(20mg,15%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.3min。
LC-MS(ESI)：m/z=380.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.72(dd,1H),8.40(dd,1H),8.08(dd,1H),6.80(d,1H),4.02(dd,2H),3.53(t,2H),3.00(tq,2H),2.36-2.21(m,2H),1.98(t,1H),1.63(t,6H)。
實施例17：
3-(7,7-二氟-3-((2-(羥甲基)氧雜環丁-2-基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物17)
3-(7,7-difluoro-3-((2-(hydroxymethyl)oxetan-2-yl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，(2-胺基氧雜環丁-2-基)甲醇(35mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物17(34mg,22%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：12.4min。
LC-MS(ESI)：m/z=382.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.73(d,1H),8.41(d,1H),8.09(t,1H),7.44(s,1H),4.88-4.81(m,2H),4.69(d,2H),4.17(s,2H),3.01-2.89(m,2H),2.35-2.16(m,2H),2.13-1.94(m,2H)。
實施例18：
3-(7,7-二氟-3-((1-苯基環丙基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物18)
3-(7,7-difluoro-3-((1-phenylcyclopropyl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，1-苯基環丙烷-1-胺(45mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20
mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物18(33mg,24%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：13.1min。
LC-MS(ESI)：m/z=412.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.79(d,1H),8.37(d,1H),8.05(dd,1H),7.67(s,1H),7.37-7.24(m,4H),7.24-7.15(m,1H),2.98(t,2H),2.27(t,2H),2.07-1.99(m,2H),1.38(t,2H)。
實施例19：
3-(7,7-二氟-3-((1-苯基環丙基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物19)
3-(7,7-difluoro-3-((1-phenylcyclopropyl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，(S)-3-胺基丙烷-1,2-二醇(31mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物19(42mg,36%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep
C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：13.3min。
LC-MS(ESI)：m/z=370.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.72(s,1H),8.40(d,1H),8.13-8.04(m,1H),7.37(s,1H),3.97-3.84(m,1H),3.75-3.53(m,2H),2.98(s,2H),2.36-2.19(m,2H),2.12-1.95(m,2H),1.26(s,2H)。
實施例20：
3-(7,7-二氟-3-((1-苯基環丙基)胺基甲醯基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲唑-1-基)吡嗪1-氧化物(化合物20)
3-(7,7-difluoro-3-((1-phenylcyclopropyl)carbamoyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-indazol-1-yl)pyrazine 1-oxide
將化合物10a(100mg,0.34mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)中，室溫下向其中加入HATU(194mg，0.51mmol)，DIPEA(0.2mL)，(R)-2-胺基-4-甲基戊-1-醇(40mg,0.34mmol)。室溫下反應兩個小時。稀鹽酸調節至中性，二氯甲烷(20mL×2)萃取水相，硫酸鈉乾燥有機相，減壓除去溶劑，高效液相製備分離純化，得到化合物20(24mg,18%)。
製備方法：1.儀器：waters 2767製備液相；色譜柱：SunFire@ Prep C18(19mm×250mm)。2.樣品用DMF溶解，用0.45μm濾頭過濾，製成樣品液。3.製備色譜條件：a.流動相A,B組成：流動相A：乙腈，流動相B：水；b.梯度沖提，流動相A含量從20%至75%；c.流量12ml/min；d.沖提時間20min。出峰時間：13.5min。
LC-MS(ESI)：m/z=396.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ 8.74(s,1H),8.39(d,1H),8.08(dd,1H),6.99(d,1H),4.24(t,1H),3.79(dd,1H),3.66(dd,1H),2.99(d,2H),2.34-2.20(m,2H),2.14-1.90(m,4H),1.71(d,1H),1.51(t,2H),0.97(dd,6H)。
1、CB2激動劑活性
實驗物件：化合物1-20。
高表達人CB2的CHO細胞懸於HBSS buffer(含20mM HEPES，pH=7.4)中，以每孔7.5×103個細胞(細胞密度為1.5×106個/mL)接種於已加入樣品(HBSS，陽性對照WIN 55212-2或不同濃度實施例化合物)的384孔白板中。向上述384孔板中加入終濃度為3μM腺苷酸環化酶活化劑NKH 477。於37℃孵育10分鐘後，裂解細胞，加入D2-labeled cAMP與anti-cAMP antibody labeled with europium cryptate。室溫孵育1小時後，用酶標儀(Envison,Perkin Elmer)進行HTRF檢測(λex=337nm，λem=620與665nm)。計算信號比值Ratio(Signal 665/Signal 620*104)，結果表示為相對於100nM WIN 55212-2的百分比值，採用DoseResp函數擬合EC50值。結果見表1。
APD-371為專利文獻WO2011025541化合物699。
結論：本發明化合物，特別是1、4、5、6、7、8、19、20對於CB2受體顯示了較高的激動活性，部分化合物特別是化合物5、化合物8對CB2/CB1受體顯示了較高的選擇性。
2、大鼠藥代動力學測試
實驗目的：通過單劑量靜脈和灌胃給予受試物於SD大鼠，測定大鼠血漿中受試物的濃度，評價受試物在大鼠體內藥代特徵和生物利用度。
實驗物件：APD-371及化合物5。
試驗動物：雄性SD大鼠，220g左右，6~8周齡，6隻/化合物。購於成都達碩實驗動物有限公司。
試驗方法：試驗當天，6隻SD大鼠按體重隨機分組。給藥前1天禁食不禁水12~14h，給藥後4h給食。按照表2給藥。
取樣
於給藥前及給藥後異氟烷麻醉經眼眶取血0.1ml，置於EDTAK2離心管中。5000rpm，4℃離心10min，收集血漿。
G1組採集血漿時間點：0,2,5,15,30min,1,2,4,6,8,24h。
G2組採集血漿時間點：0,5,15,30min,1,2,4,6,8,24h。
分析檢測前，所有樣品存於-80℃。
樣品前處理
取30μL血漿樣品、標曲和質控樣品，加入200μL的含內標乙腈溶液，渦旋混勻之後，4℃，12000rpm離心10min。取170μL上清於96孔板中，LC-MS/MS分析，進樣量為5μL。
主要藥代動力學參數用WinNonlin 8.0軟體非房室模型分析。實驗結果如表3所示。
APD-371為專利文獻WO2011025541化合物699。
結論：本發明化合物，特別是化合物5，具有較高的生物利用度，良好的藥代動力學特徵，半衰期長。
3、穩定性測試
實驗方法：
溶液穩定性：(進樣量20ul)
人工胃液：取稀鹽酸16.4ml，加水約800ml與胃蛋白酶10g，搖均後，加水稀釋成1000ml，即得。
人工腸液：磷酸二氫鉀緩衝溶液：稱取磷酸二氫鉀1.3961g，加水溶解，稀釋成100ml，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至6.8。
另取胰蛋白酶2.0307g，加水適量溶解，與磷酸二氫鉀緩衝溶液混合，加水至200ml，搖勻，即可。
取本品APD-371適量，加入人工胃液稀釋製成每ml約含0.6mg的供試品溶液，於常溫下放置，分別於0、2、4、8、12、24、36、48h取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，進樣分析考察人工胃液下供試品溶液穩定性。以相對0h峰面積計算樣品穩定性，並關注是否具有新增雜質。
取本品化合物5適量，加入人工腸液稀釋製成每ml約含0.6mg的供試品溶液，於常溫下放置，分別於0、2、4、8、12、24、36、48h取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，進樣分析考察人工腸液下供試品溶液穩定性。以相對0h峰面積計算樣品穩定性，並關注是否具有新增雜質。
化學穩定性：(進樣量2ul)
分別取APD-371和化合物5適量，分別平鋪與無色透明扁形稱量瓶中，密封。密封後的供試品分別放置與光照、40℃+75%RH條件下，分別與7天、33天取樣考察。
分別取各條件下樣品適量，加入乙腈製成約0.2mg/ml的供試品溶液，進樣分析，以峰面積百分比考察樣品穩定性，並關注是否有新增雜質。
實驗條件見表4，實驗結果見表5。
4、大鼠組織分佈實驗
4.1.試驗動物：雄性SD大鼠，200g左右，6~8周齡，12隻/化合物。購於成都達碩實驗動物有限公司。
4.2 實驗方案：
試驗方法：試驗當天，24隻SD大鼠按體重隨機分組。給藥前1天禁食不禁水12~14h，給藥後4h給食。按照表6給藥。
於給藥前及給藥後異氟烷麻醉經眼眶取血0.20mL，置於EDTAK2離心管中，5000rpm，4℃離心10min，收集血漿。採血時間點：10min,0.5,1,4h。分析檢測前，所有血漿樣品存於-80℃。
給藥後組織(心、肝、脾、肺、腎、腦、結腸、直腸)樣本採集時間點：10min,0.5,1,4h。動物放血乾淨安樂死後取組織，生理鹽水清洗乾淨後用50%甲醇按m/v=1：3比例勻漿後-80°冰箱保存待分析。
4.3 實驗結果如表7：
結論：運用本發明技術所合成的化合物5的組織分佈結果顯示，腦中暴露量低於APD-371。
5、SD大鼠單次經口灌胃給藥最大耐受劑量(MTD)試驗
試驗設計：
共50隻大鼠，雌雄各半，分5組，每組5隻/性別，溶媒對照組(20%SBE-β-CD)，APD-371低劑量組300mg/kg，APD-371高劑量組1000mg/kg，化合物5低劑量組300mg/kg，化合物5高劑量組1000mg/kg，經口灌胃，給藥體積10mL/kg。
結果及結論：
APD-371 MTD為300mg/kg；化合物5 MTD為1000mg/kg。
Claims (12)
- 一種式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物：
或者
；條件是：當R11選自
時，R1選自
、
、
或者
。
- 根據請求項1所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，其中：R1選自C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6雜環基、C3-6不飽和環烴基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C4-12橋環、C4-12並環、C5-10螺環，所述的烷基、環烷基、不飽和環烴基、雜環基、芳基、雜芳基、橋環、並環或者螺環任選被以下取代基取代：F、Cl、羥基、氰基、C1-6烷基、羥基取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-6雜環基、苯環、-C(O)O-C1-6烷基或者C3-6環烷基。
- 根據請求項2所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，其中：R1選自、
、
、
、吲哚基、吡咯基、吡啶基、呱啶基、苯基、環己基、環戊基、吡嗪、金剛烷基、呱嗪、嗎啉基、
、
、
、
、
或者
；或者R1選自
、
、
、
、
、
。
- 根據請求項1所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，其中：R1選自C1-6烷基或者C3-6環烷基，所述的烷基或者環烷基任選被以下取代基取代：F、Cl、C1-6烷基或者羥基；R2、R3各自獨立選自H、F、Cl或者C1-6烷基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H或者C1-6烷基；R8、R9各自獨立選自H、F、Cl、C1-6烷基，所述的烷基任選被以下取代基取代：氰基、F或者Cl，或者R8與R9一起形成C2-6烯基或者C3-6環烷基；R10選自H。
- 根據請求項4所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，其中：R1選自、
、
或者
；R2、R3各自獨立選自H、F或者甲基；R4、R5、R6、R7各自獨立選自H；R8、R9各自獨立選自H、F、異丙基，或者R8與R9一起形成2-甲基丙烯基或 者環丙基；R10選自H；R11選自
。
- 根據請求項1所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，其中化合物結構如下：
- 根據請求項6所述的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，其中化合物結構如下：
- 一種藥物組合物，所述的組合物包括：有效劑量的根據請求項1至7中任一項所述通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物，或進一步包括一種或多種其他治療劑以及藥學上可接受的載體或賦形劑。
- 一種如請求項1至7中任一項所述通式(I)所示的四氫吲唑化合物及其立體異構體、藥學上可接受的鹽、水合物或N-氧化物或者請求項8所述的組合物在製備用於治療由CB2受體介導的疾病的藥物中的用途。
- 根據請求項9所述的用途，其中所述的由CB2受體介導的疾病為疼痛。
- 根據請求項10所述的用途，其中疼痛選自：骨痛、關節痛、肌肉疼痛、牙痛、偏頭痛、頭痛、炎性疼痛、神經病理性疼痛、克羅恩病相關腹痛、由於治療劑的不良作用而引起的疼痛及與選自下述的疾病相關的疼痛：骨關節炎、癌症、多發性硬化、變應性應答、腎炎綜合症、硬皮病、甲狀腺炎、糖尿病性神經病、纖維肌痛、與HIV相關的神經病、坐骨神經痛和自身免疫性疾病。
- 根據請求項11所述的用途，其中疼痛選自神經病理性疼痛、克羅恩病相關腹痛。
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