TWI747444B - 金花茶萃取物用於製備抗藍光組合物的用途 - Google Patents
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Abstract
一種金花茶萃取物用於製備抗藍光組合物的用途，其中藍光的波長為400奈米到600奈米。
Description
本發明是關於金花茶萃取物，特別是關於金花茶萃取物用於製備抗藍光的組合物的用途。
金花茶是山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia）的常綠灌木或小喬木。寬披針形至長橢圓形的葉子互生。金黃色花單生葉腋或近頂生，花瓣肉質，具蠟質光澤，開放時呈杯狀、壺狀或碗狀，花直徑可達6厘米；花瓣9~11枚；花期10~12月。金花茶是一種優良的庭園觀賞花木。
在西元1984年金花茶被列為中國一級保護植物，金花茶的葉部也被製成享譽國際的東方茶。在本草綱目中也記載其具有清熱解毒、利尿利濕和止血的藥用功能。
在台灣專利公開號201929891中，發明人已公開一種金花茶萃取物用於提升抗醣化活性及抑制細胞脂肪堆積的用途。但是，為了提升金花茶的藥用價值，發明人繼續研究開發金花茶相關產品的其他用途。
有鑑於此，本發明提供一種金花茶萃取物的用於製備抗藍光的組合物的用途，其中藍光波長為400奈米（nm）到600奈米（nm）。
在一實施例中，金花茶萃取物用以提升皮膚抵抗藍光傷害能力。
在一實施例中，金花茶萃取物用以預防皮膚纖維細胞受到藍光傷害。
在一實施例中，金花茶萃取物用以預防皮膚纖維細胞受到因照射藍光而產生之活性氧化物質（Reactive oxygen species, ROS）。
在一實施例中，金花茶萃取物用以減少50%以上皮膚纖維細胞產生之該活性氧化物質。
在一實施例中，金花茶萃取物的有效濃度為0.25mg/mL。
在一實施例中，金花茶萃取物的總黃酮含量為10mg/g。
在一實施例中，金花茶萃取物是由該金花茶的葉萃取而得。
在一實施例中，金花茶萃取物為粉末狀。
綜上所述，根據本發明任一實施例的金花茶萃取物，其可用於製備抗藍光的組合物。換言之，前述之組合物具有下列一種或多種功能：提升皮膚抵抗藍光傷害能力、提升皮膚纖維細胞抵抗藍光傷害能力、減少皮膚纖維細胞產生活性氧化物質等。
關於本文中所使用之濃度符號「wt%」通常是指重量百分濃度，而濃度符號「vol%」通常是指體積百分濃度。關於本文中所使用之「金花茶」通常是指金花茶的葉片。
在一些實施例中，金花茶萃取物是指將金花茶（Camellia chrysantha
）的葉片進行磨碎、萃取、過濾、濃縮、殺菌並乾燥後製得的產品。舉例而言，將金花茶的葉片切碎後，以萃取溶劑進行萃取以得到初萃取液，接著將初萃取液過濾去除雜質後，以過濾後的初萃取液進行濃縮以得到濃縮液。接著將濃縮液殺菌，並將殺菌後的濃縮液以噴霧乾燥的方式乾燥為粉末。於此，乾燥後的粉末是為含有效成分的金花茶萃取物。
在一些實施例中，金花茶萃取物可為市售之金茶花萃取液或金茶花萃取粉。在一些實施例中，金花茶萃取物的萃取方式是將中國廣州金花茶（Camellia chrysantha）粉碎成約小於0.5 cm的片段，取粉碎後的金花茶於80±10℃下，將金花茶比溶劑以5~20：1~5的體積比進行萃取0.5~2小時而得到粗萃取物。其中，溶劑可以是水、醇類、含水醇類或其組合。接著，將粗萃取物冷卻至室溫，然後將粗萃取物以5000 rpm進行離心10分鐘並脫渣過濾，收集上清液。之後，以400網目（mesh）的濾網對上清液過濾而得到濾液，然後於55±10℃下對濾液進行減壓濃縮而得到濃縮產物。接著，對濃縮產物進行噴霧乾燥而得到金花茶萃取物。
在一實施例中，金花茶萃取物為粉末狀。在一實施例中，金花茶萃取物為可食用級的粉末。
在一實施例中，金花茶萃取物的用於製備抗藍光的組合物的用途，其中藍光波長為400奈米（nm）到600奈米（nm）。
在一實施例中，金花茶萃取物用以提升皮膚抵抗藍光傷害能力。在一實施例中，金花茶萃取物用以預防皮膚纖維細胞受到藍光傷害。在一實施例中，金花茶萃取物用以預防皮膚纖維細胞受到因照射藍光而產生之活性氧化物質（ROS）。
在一實施例中，金花茶萃取物用以減少50%以上皮膚纖維細胞產生之活性氧化物質。
在一實施例中，金花茶萃取物的有效濃度為0.25mg/mL。
在一實施例中，金花茶萃取物的總黃酮含量為10mg/g。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為醫藥品。換言之，此醫藥品包含有效含量的金花茶萃取物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於經腸道地、非經腸道地（parenterally）、口服的、或局部地（topically）投藥劑型。
在一些實施例中，經腸道或口服的投藥劑型可為，但不限於，錠劑（tablet）、片劑（troche）、***錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）或類似之物。在一些實施例中，非經腸道地或局部地投藥劑型可為，但不限於，注射品（injection）、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）或類似之物。在一些實施例中，注射品的投藥方式可為皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）或病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，前述之醫藥品可包含被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑可為下列載劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。在一些實施例中，作為醫藥上可接受的載劑的溶劑可為水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝液（phosphate buffered saline，PBS）、或含有醇的水性溶液（aqueous solution containing alcohol）。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為食用組合物。換言之，食用組合物包含特定含量的金花茶萃取物。在一些實施例中，前述之食用組合物可為食品產品或食品添加物（food additive）。在一些實施例中，食品產品可為但不限於：飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）、健康食品（health foods）以及膳食補充品（dietary supplements）。
在一些實施例中，前述之任一組合物可為化妝品或保養品。換言之，化妝品或保養品包含特定含量的金花茶萃取物。
在一些實施例中，前述之化妝品或保養品可為下列任一種型態：化妝水、凝膠、凍膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉餅、蜜粉、卸妝油、卸妝乳、洗面乳、沐浴乳、洗髮精、護髮乳、防曬乳、護手霜、指甲油、香水、精華液及面膜。在一些實施例中，前述之化妝品或保養品可視需要更包含外用品可接受成分。在一些實施例中，外用品可接受成分可例如為乳化劑、滲透促進劑、軟化劑、溶劑、賦型劑、抗氧化劑、或其組合。
示範例一：總黃酮含量測試
取得到200μg/mL芸香素（Rutin）甲醇溶液為初始溶液（即含2000ppm的芸香素）。然後，依據下表一配置0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、及100μg/mL之沒芸香素的標準溶液，並分別取200μL之各濃度的標準溶液至玻璃試管中。加入200μL之5%檸檬酸鈉水溶液至各玻璃試管內與標準溶液混合均勻並靜置6分鐘後，再加入200μL之10%硝酸鋁水溶液混合均勻並靜置6分鐘，再加入2 mL之4%氫氧化鈉水溶液混合均勻後，再加入1.4 mL的水混合均勻以得到標準反應溶液。取200μL之標準反應溶液至96孔板中，並測量其在500nm下之吸光值，以獲得標準曲線。
表一
| 標準溶液（μg/mL） | 0 | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 |
| 初始溶液（μL） | 0 | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 |
| 水（μL） | 1000 | 800 | 600 | 400 | 200 | 0 |
將金花茶萃取物粉末（購自長沙哈根生物科技有限公司，參考其成分表中包括92%的金花茶葉萃取物及8%的麥芽糊精）以1:50（重量比）進行稀釋後作為樣本。將樣本取200μL到玻璃試管中。加入200μL之5%檸檬酸鈉水溶液至各玻璃試管內與標準溶液混合均勻並靜置6分鐘後，再加入200μL之10%硝酸鋁水溶液混合均勻並靜置6分鐘，再加入2 mL之4%氫氧化鈉水溶液混合均勻後，再加入1.4 mL的水混合均勻以得到標準反應溶液。取200μL之標準反應溶液至96孔板中，並測量其在500nm下之吸光值。
接著，利用標準曲線與內插法將待測反應溶液的吸光值換算成總黃酮含量。於此，可得到金花茶萃取物的總黃酮含量為10mg/g。
示範例二：抵抗藍光傷害測試
本次測試採用人類皮膚纖維細胞CCD-966sk（保存編號BCRC 60153）。本次測試採用培養基為透過額外添加使其含有0.1M非必需胺基酸、1.5g/L碳酸氫鈉、0.1M丙酮酸，以及10%胎牛血清 （購自Gibco）之Earle’s平衡鹽類型的MEM（Minimum essential medium）培養液。
本次的樣本是將金花茶萃取物粉末（購自長沙哈根生物科技有限公司）以培養基配置得0.25mg/mL的金花茶萃取溶液作為樣本一及0.125mg/mL的金花茶萃取溶液作為樣本二。
將螢光染料DCFH-DA（購自Sigma/SI-D6883-50MG）以二甲基亞碸（Dimethyl sulfoxide, DMSO）配置成濃度為5mg/ml的活性氧化物質染劑，其可以針對活性氧化物質進行染色。
本次測試所稱之室溫為25±5℃。
首先，在六孔培養盤中各孔添加2mL培養基，並且每孔殖入1×105
個人類皮膚纖維細胞。接下來，再37℃下培養24小時後，移除培養基。以下各組進行二重複試驗並取其四捨五入後的平均值。
空白組：每孔添加0.625μL培養基並且在37℃下培養1小時，之後每孔添加2μL的活性氧化物質染劑使其進行染色15分鐘，15分鐘後再在室溫下置於暗處培養15分鐘。
對照組：每孔添加0.625μL培養基並且在37℃下培養1小時，之後每孔添加2μL的活性氧化物質染劑使其進行染色15分鐘，15分鐘後再在室溫下置於藍光箱中以藍光（500nm為主）照射15分鐘。
實驗組一：每孔添加0.625μL上述樣本一並且在37℃下培養1小時，之後每孔添加2μL的活性氧化物質染劑使其進行染色15分鐘，15分鐘後再在室溫下置於藍光箱以藍光照射15分鐘。
實驗組二：每孔添加0.625μL上述樣本二並且在37℃下培養1小時，之後每孔添加2μL的活性氧化物質染劑使其進行染色15分鐘，15分鐘後再在室溫下置於藍光箱以藍光照射15分鐘。
然後，將上述各組以1倍濃度的PBS緩衝液（購自Gibco）進行清洗二次，然後分別加入200ml胰蛋白酶後在無光狀態下反應5分鐘。將反應後的各組移至15ml的試管中以400×g離心10分鐘，去除試管內的上清液之後，再以1倍濃度的PBS緩衝液清洗試管內的細胞一次，接著再次將各組試管以400×g離心10分鐘，各組除去上清液後加入1ml的1倍濃度的PBS緩衝液使試管內細胞沉澱，最後將各組通過流式細胞儀（ BD Accuri C6 Plus Flow Cytometer 660517）檢測在450~490nm之激發波長以及510~550nm之放射波長下的螢光訊號來量化細胞內活性氧物質含量，並藉此得知細胞內活性氧物質高度表現的細胞數佔原細胞數的比例，以作為其相對活性氧化物質（ROS）產生量。
實驗結果如下表二，表二內的數值係由流式細胞儀內之演算法計算而得之相對活性氧化物質產生量，以%表示。
表二
| 相對活性氧化物質（ROS）產生量 | |
| 空白組 | 3% |
| 對照組 | 42% |
| 實驗組一 | 18% |
| 實驗組二 | 27% |
其中，利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖1所示（圖式中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上的差異越顯著）。
參考圖1。在空白組的人類皮膚纖維細胞並未經過藍光照射，也就是指其在正常的生理代謝情況下，其相對活性氧化物質的產生量為3%。而對照組的人類皮膚纖維細胞在經由藍光照射15分鐘後，其相對活性氧化物質的產生量高達42%。可知，藍光會明顯促進人類皮膚纖維細胞產生活性氧化物質，以致對於人類皮膚能產生很大的傷害。
續參考圖1。實驗組二的人類皮膚纖維細胞在經由濃度0.125mg/mL金茶花萃取物處理過後，其相對活性氧化物質的產生量為27%。相較於對照組的相對活性氧化物質的產生量，實驗組二的活性氧化物質產生量減少了15%。此實驗結果顯示在濃度0.125mg/mL的金茶花萃取物能明顯預防活性氧化物質產生。
而實驗組一的人類皮膚纖維細胞在經由濃度0.25mg/mL金茶花萃取物處理過後，其相對活性氧化物質的產生量為18%。相較於對照組的相對活性氧化物質的產生量，實驗組的活性氧化物質產生量減少了高達24%。此實驗結果顯示濃度0.25mg/mL金茶花萃取物能顯著達到預防活性氧化物質產生。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
無
圖1是金花茶萃取物抗藍光實驗結果之長條圖。
Claims (8)
- 一種金花茶萃取物的用途，其是用於製備抗藍光的組合物，其中該藍光波長為400奈米(nm)到600奈米(nm)，其中該金花茶萃取物用以預防皮膚纖維細胞受到藍光傷害。
- 如請求項1所述的用途，其中該金花茶萃取物用以提升皮膚抵抗藍光傷害能力。
- 如請求項1所述的用途，其中該金花茶萃取物用以預防皮膚纖維細胞受到因照射藍光而產生之活性氧化物質(Reactive oxygen species,ROS)。
- 如請求項3所述的用途，其中該金花茶萃取物用以減少24%以上皮膚纖維細胞產生之該活性氧化物質。
- 如請求項1至4其中任一項所述的用途，其中該金花茶萃取物的有效濃度為0.25mg/mL。
- 如請求項1至4其中任一項所述的用途，其中該金花茶萃取物的總黃酮含量為10mg/g。
- 如請求項1所述的用途，其中該金花茶萃取物是由該金花茶的葉萃取而得。
- 如請求項1所述的用途，其中該金花茶萃取物為粉末狀。
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| 許凡萍，金花茶化学成分的抗氧化活性研究，農產品加工，2019年第12 期 * |
| 許凡萍，金花茶化学成分的抗氧化活性研究，農產品加工，2019年第12 期。 |
| 防曬保養是老生常談，但藍光引致皮膚老化、皺紋等問題更不能忽視，2019年4月12日https://www.mings-fashion.com/%E6%8A%97%E8%97%8D%E5%85%89-%E8%97%8D%E5%85%89-%E6%8A%97%E8%A1%B0%E8%80%81-250743/。 |
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