TWI772986B - 紫花香茅用於調理肌膚之用途 - Google Patents
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Abstract
一種紫花香茅萃取物之用途，其是用於製備改善肌膚之用途。其中，該紫花香茅萃取物是由含水之溶劑進行萃取。
Description
本發明涉及一種紫花香茅萃取物的用途，特別是關於紫花香茅萃取物用於製備改善肌膚之用途。其中，該改善肌膚包含肌膚抗氧化能力之提升、抗醣化能力之提升、肌膚緊緻之提升、減緩肌膚泛紅與緊緻肌膚毛孔。
紫花香茅（學名：Mosla chinensis Maxim.
）又稱為石香薷、香薷、細葉香藿，唇形科石薺苧屬下的一個種。紫花香茅為一年生草本植物，主要分布於亞洲，其莖高9-4公分、花冠紫紅，可用於治療中暑發熱、胃痛嘔吐、急性腸胃炎及消化不良。
肌膚老化可以分為內源性和外源性。高達70%屬外源性衰老，而其最主要的誘因是紫外線所造成的光老化；而有30%屬於內源性衰老。而此30%中，僅10%是源自於人體自然老化，另外20%則受到體內或外來因子所產生的醣化及氧化反應，進而造成肌膚損傷及老化。
而日常生活中過度攝取醣類，是導致身體醣化的主要原因。這些多餘的醣類和體內的蛋白質結合後，會在體溫的加熱之下引起醣化反應，進而產生醣化蛋白及醣化終產物（Advanced Glycation Endproducts, AGEs）。AGEs會蓄積在身體裡面，造成氧化壓力，導致肌膚出現慢性發炎現像，肌膚中的膠原蛋白結構也產生受損、斷裂的情形，皺紋與鬆弛等老化問題也隨之產生。
因此，為了解決肌膚老化及改善肌膚狀況，並拓展紫花香茅的開發與應用，故而提出一種紫花香茅萃取物及調理肌膚之組合物，其可應用於製備肌膚抗氧化能力之提升、抗醣化能力之提升、肌膚緊緻之提升、減緩肌膚泛紅及緊緻肌膚毛孔之組合物的用途。
一些實施例中，紫花香茅萃取物可以抑制最終醣化產物（Adavanced Glycation Endproducts, AGEs）之生成。在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以提升肌膚之抗醣化能力。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物可透過提升肌膚之抗醣化能力以達到維持皮膚緊緻功效。在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以減緩或防止肌膚鬆弛。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以維持肌膚緊緻，且其中該紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以清除細胞中自由基，其中該紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。在一些實施例中，該細胞為皮膚細胞。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以降低自由基對肌膚細胞之破壞，以達到提升肌膚抗氧化能力之用途。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以抑制、減緩或降低細胞內自由基或過氧化物之形成。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物可以緊緻肌膚毛孔，且其中該紫花香茅萃取物是以一種含水之水溶劑進行萃取。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物的濃度為0.5wt%。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物的白利糖度（Degrees Brix）值為10.0以上。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物的總黃酮量為12000 ppm以上。
在一些實施例中，一種紫花香茅萃取物用於製備改善或/及調理肌膚狀態的組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，一種紫花香茅萃取物用於製備減緩肌膚泛紅之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，一種紫花香茅萃取物用於製備舒緩肌膚泛紅之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，一種紫花香茅萃取物用於製備緊緻肌膚毛孔之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物係以一含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，一種紫花香茅萃取物用於製備緊緻肌膚、減緩皮膚、或防止肌膚鬆弛之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物係以一含水之溶劑進行萃取。
以下將描述本案的部分具體實施態樣。在不背離本案精神下，本案尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將保護範圍限於說明書所具體陳述的條件。
本案使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差（SD）表示，各組之間的差異以學生t檢驗（student’s t-test）進行分析。圖式中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上的差異越顯著。
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在正負10%的範圍內，最佳為在正負5%的範圍內。
本文中之「wt%」係指重量百分比，而「vol%」係指體積百分比。
如本文中所使用，術語「萃取物」係指藉由萃取作用所製備之產物。該萃取物可以溶於溶劑中之溶液形式呈現，或萃取物可為不含或大體上不含溶劑之濃縮物或精華呈現。
如本文所用「紫花香茅原料」通常係指整株植物，其中整株植物可包含原始、經乾燥或以其他物理方式加工以利於處理之整株植物，其可進一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式經加工以影響原物料之大小及實體完整性之整株植物。
參考圖1。在一些實施例中，一種紫花香茅萃取物，其是由一種含水之溶劑對紫花香茅原料進行萃取。在一些實施例中，紫花香茅萃取物（Mosla chinensis Maxim.
extract）係將紫花香茅原料依序進行粉碎程序S01、加熱程序S02、過濾程序S03、及濃縮程序S04後得到。
在一些實施例中，紫花香茅原料可以是整株植物。在一些實施例中，紫花香茅原料可以是新鮮或乾燥的整株紫花香茅。
在一些實施例中，粉碎程序S01是指將紫花香茅原料攪打至***為粉碎狀。舉例而言，粉碎可以採用果汁機、調理機或均質機。
在一些實施例中，加熱程序S02是指將粉碎狀的紫花香茅原料與含水之溶劑混合後加熱一段固定時間。在一些實施例中，加熱是指將紫花香茅原料與含水之溶劑的溫度提升到50℃~100℃。在一些實施例中，一段固定時間是指0.5小時到3小時。舉例而言，將紫花香茅原料與含水之溶劑的溫度提升到85℃進行提取1小時。
在一些實施例中，加熱程序S02中的重量比例（含水之溶劑：紫花香茅原料）為5：1~20：1。舉例而言，含水之溶劑：紫花香茅原料為10:1。
舉例而言，採用90公斤重的紫花香茅原料、900公斤重的水及0.63公斤重的檸檬酸混合後持續加熱到100℃，並維持100℃持續0.5小時。舉例而言，採用90公斤重的紫花香茅原料、900公斤重的水及0.7公斤重的檸檬酸混合後持續加熱到85℃，並維持85℃持續1小時。
在一些實施例中，過濾程序S03是指將經加熱程序S02後的紫花香茅原料及溶劑通過篩網以將溶劑內的固體濾除形成過濾液。舉例而言，篩網可以是400網目（mesh）的篩網。
在一些實施例中，加熱程序S02與過濾程序S03之間還包括降溫程序，其中該降溫程序是指將加熱後的紫花香茅原料及溶劑靜置以自然降溫至室溫。
在一些實施例中，濃縮程序S04是指將過濾程序S03所得到的過濾液進行減壓濃縮（廠牌/型號：BUCHI -Rotavapor R-100）以得到初萃液。在一些實施例中，濃縮程序S04所得的初萃液可即為紫花香茅萃取物。在濃縮程序S04的一些實施例中，在40℃~70℃之間進行減壓濃縮。舉例而言，紫花香茅萃取物是將紫花香茅原料依序進行粉碎程序S01、加熱程序S02、過濾程序S03及濃縮程序S04後得到。
在一些實施例，紫花香茅萃取物用於製備抗醣化組合物之用途，且紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，紫花香茅萃取物用於製備抗氧化組合物之用途，且紫花香茅萃取物是以一種含水之溶劑進行萃取。
在一些實施例中，抗氧化係指減緩或防止氧化作用。而氧化係是一種使電子自物質轉移至氧化劑的化學反應，過程中可生成自由基，進而啟動鏈反應。當鏈反應發生於細胞中，細胞易受到破壞或凋亡。在一些實施例中，紫花香茅萃取物能去除自由基，終止連鎖反應並且抑制其它氧化反應。在一些實施例中，自由基之產生係因為光照、化學物質、或生物體自然衰老之過程中所產生。在一些實施例中，前述化學物質包含醣化終產物。
如前所述，超氧化物（Superoxide Anion）與過氧化氫（Hydrogen Peroxide）等自由基會導致皮膚細胞受損。其中，紫花香茅萃取物能降低去除自由基，舉例而言，其可促進抗氧化相關基因之表現，提升其所轉錄出的蛋白質（超氧化物歧化酶），進而增加超氧化物分解為過氧化氫的量。
在一些實施例中，0.125mg/ml以上的紫花香茅萃取物可透過清除細胞內自由基，達到抗氧化之功效。
在一些實施例中，白利糖度（Degrees Brix）值為10.0以上的紫花香茅萃取物可透過清除細胞內自由基，達到抗氧化之功效。
在一些實施例中，濃度為0.5wt%以上的紫花香茅萃取物可以用於減緩肌膚泛紅。在一些實施例中，該肌膚泛紅係因肌膚發炎所造成。在一些實施例中，濃度為0.5wt%以上的紫花香茅萃取物可以用於舒緩肌膚泛紅。
在一些實施例中，白利糖度（Degrees Brix）值為10.0以上的紫花香茅萃取物可以用於舒緩肌膚泛紅及/或減緩肌膚泛紅。
玻尿酸（hyaluronic acid, HA）存在於人體的結締組織及真皮層中，是一種透明的膠狀物質，負責結合及保留肌膚中的水分子。而皮膚中的玻尿酸佔超過50%的人體玻尿酸，且其為細胞外間質的主要成分，可維持皮膚本身的彈性。隨著年齡的增長，人體內的玻尿酸會逐漸流失，30歲時皮膚中的玻尿酸含量會剩下不到六成的含量。而此造成皮膚產生空隙，進而逐漸失去彈力而老化。
在一些實施例中，濃度為0.5wt%以上的紫花香茅萃取物可以用於改善肌膚鬆弛。
在一些實施例中，濃度為0.5wt%以上的紫花香茅萃取物可以用於提升肌膚緊緻程度。
在一些實施例中，濃度為0.5wt%以上的紫花香茅萃取物可以用於緊緻肌膚毛孔。
在一些實施例中，前述之組合物可為醫藥品。換言之，此醫藥品包含有有效含量的紫花香茅萃取物。換言之，此醫藥品包含有有效含量的紫花香茅萃取物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於經腸道或口服的投藥劑型。這些投藥劑型包括，但不限於：錠劑（tablet）、片劑（troche）、***錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）以及類似之物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地（parenterally）或局部地（topically）投藥的劑型，這些投藥劑型包括，但不限於：注射品（injection）、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）以及類似之物。在一些實施例中，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑（parenteral routes）來投藥：皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）以及病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，醫藥品可進一步包含有被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。例如，醫藥上可接受的載劑可包含下列的試劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝生理鹽水（phosphate buffered saline, PBS）、含有醇的水性溶液（aqueous solution containing alcohol）。
在一些實施例中，前述之組合物可為可食用組合物。在一些實施例中，此可食用組合物可以製成食品產品或可為食品添加物（food additive），意即藉由習知方法於食材製備時添加而製得食品產品，或是於食品產品的製作過程中添加。於此，食品產品可以是與可食性材料配製成供人類或動物攝食的產品。
在一些實施例中，食品產品可為但不限於：飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）、健康食品（health foods）以及膳食補充品（dietary supplements）。
在一些實施例中，前述組合物可為保養品組合物。在一些實施例中，此保養品組合物可為但不限於化妝水、凝膠、精華液、乳液、乳霜、洗臉或沐浴產品、防曬產品、美白產品、香膏、軟膏、面膜。
範例一：本發明之製備
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紫花香茅萃取物的製備
粉碎程序中將紫花香茅整株植物作為紫花香茅原料並進行粉碎。於此，採用osterizer品牌的10 speed blender進行粉碎。接著，加熱程序中以水為溶劑，將粉碎後的紫花香茅原料與水以1:15的重量比例混合後在85
℃下萃取30分鐘。於此，萃取可以是將紫花香茅原料浸泡在水中。後續，降溫程序將粉碎後的紫花香茅原料與水降溫到室溫（25℃）。此後，過濾程序將降溫後的紫花香茅原料及水通過400網目的篩網以形成過濾液。接著，於60℃下對過濾液進行減壓濃縮而得本發明之紫花香茅萃取物。
範例二：定量實驗
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紫花香茅萃取物總黃酮定量實驗
將範例一中所得到之紫花香茅萃取物以水，依其體積做10倍稀釋後，取200μL到試管中。於此試管內加入1000μL的水混合均勻後再加入200μL 5 wt%亞硝酸鈉（購自Sigma，商品編號31443）水溶液，混合均勻後靜置反應6分鐘。
接著，加入200μL 10 wt%硝酸鋁（購自Alfa Aesar，商品編號12360）水溶液，混合均勻後靜置反應6分鐘，再加入2 mL 4 wt%氫氧化鈉水溶液（氫氧化鈉購自Macron，產品編號7708-10），使其混合均勻。最後再加入1.4 mL的水於試管中並混合均勻得到反應液，取試管中200μL反應液至96孔反應盤中，以分光光度計（Jasco，型號V-730）於500 nm的波長下偵測吸光值。
接著配製標準品以製作檢量線。本案以芸香素（rutin，購自ChromaDex，商品編號ASB-00018440）當量作為總黃酮相對含量的表示。先配製200μg/mL之芸香素甲醇溶液，作為芸香素標準液。取該芸香素標準液0μL、200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL及1200μL分別加入至不同試管中，再於該些試管中加入水，使其各試管內之總體積為1200μL。於此試管內加入200μL 5 wt%亞硝酸鈉水溶液，混合均勻後靜置反應6分鐘。接著加入200μL 10 wt%硝酸鋁水溶液，混合均勻後靜置反應6分鐘，再加入2 mL 4 wt%氫氧化鈉水溶液，使其混合均勻。最後再加入1.4 mL的水於此試管中並混合均勻得到反應液，取試管中200μL反應液至96孔反應盤中，以分光光度計於500 nm的波長下偵測吸光值。將六種不同濃度的芸香素溶液依相同方式所測得之吸光值，繪製成檢量線。
接著，利用檢量線將稀釋後的紫花香茅萃取物的吸光值換算成總黃酮含量。於此，可推算出稀釋前的紫花香茅萃取物（即範例一中所得到之紫花香茅萃取物）的總黃酮含量為12000 ppm。
已知黃酮並非為本案所述改善肌膚狀態或抗氧化的活性成分，但由於已知黃酮可具有其他例如預防心血管疾病等之用途，而由本案萃取方式所得之紫花香茅萃取物具有高總黃酮含量，故本案之紫花香茅萃取物可具有多種複合用途。此外，在一些實施例中，此總黃酮含量亦可作為濃縮終點的判斷基準。
範例三
：試管實驗
-
抗醣化試驗
當蛋白質經醣化反應後將生成多種醣化終產物（Advanced glycation end products，AGEs），其為不可還原之物質，並改變及影響蛋白質的正常功能，導致膠原蛋白硬化、產生斑點、造成肌膚鬆弛、肌膚機能降低。因此，若能抑止膠原蛋白醣化則可防止膠原蛋白鏈斷裂，並降低膠原蛋白的流失速度、延緩肌膚老化與鬆弛。而為確認紫花香茅萃取物是否具有抑止膠原蛋白醣化的功效，進行膠原蛋白醣化量測試如下。
樣品配製：
1. 使用前術範例一中所製得之紫花香茅萃取物，以濃度200 mM的磷酸鹽緩衝生理鹽水（Phosphate-Buffered Saline，PBS，係以NaH2
PO3
（Honeywell，#04269）、Na2
HPO4
（Sigma，#V900061）與水配製而成，其pH值為7.4）作為溶劑，配製出濃度為10mg/mL的紫花香茅萃取物溶液。
2. 使用前述濃度200 mM的磷酸鹽緩衝生理鹽水以及膠原蛋白粉末（膠原蛋白購自Rousselot，型號#P2000HD），配製濃度為60 mg/mL的膠原蛋白溶液。另加入疊氮化鈉於膠原蛋白溶液中，使膠原蛋白溶液中含有0.06wt％的疊氮化鈉。（疊氮化鈉購自Sigma，#S2002）
3. 使用前述濃度200 mM的磷酸鹽緩衝生理鹽水與果糖（果糖購自Sigma，#F0127），配製濃度為1.5M的果糖溶液。
膠原蛋白醣化測試：
1. 將前述的紫花香茅萃取物溶液0.2 mL，與0.2 mL前述膠原蛋白溶液以及0.2 mL前述果糖溶液進行混合，配製出樣品溶液。
2. 將0.2 mL的去離子水與0.2 mL前述膠原蛋白溶液以及0.2 mL前述果糖溶液進行混合，配製出空白溶液作為控制組。
3. 將樣品溶液以及空白溶液於進行膠原蛋白醣化反應前，使用分光螢光計（spectrofluorometer，廠商/型號：BioTek FLx 800）測量其螢光強度（激發波長360 nm，放射波長460 nm）。
4. 將樣品溶液以及空白溶液置於50℃反應24小時，使各溶液進行膠原蛋白醣化反應。
5. 將反應後的樣品溶液以及空白溶液，同樣以分光螢光計測量其螢光強度（激發波長360 nm，放射波長460 nm）。
6. 依下列公式計算蛋白質醣化終產物相對生成率：
[(樣品螢光強度反應後
- 樣品螢光強度反應前
)/(控制組螢光強度反應後
- 控制組螢光強度反應前
)]×100%
樣品相對於控制組的蛋白質醣化終產物相對生成率顯示於圖2。
如圖2所示，在經本發明之紫花香茅萃取物處理後，醣化終產物之生成率降低，顯示本發明之紫花香茅萃取物具有抑止膠原蛋白的醣化終產物產生的效果。其中，樣品溶液中的蛋白質醣化終產物相對生成率僅為控制組的33%。顯示本發明之紫花香茅萃取物確實可抑止膠原蛋白的醣化反應，減少醣化終產物的生成，進而降低體內膠原蛋白的流失，達到減緩肌膚老化及肌膚機能喪失的功效。
範例四：細胞實驗
-
抑制
ROS
生成
於此，以螢光探針DCFH-DA配合流式細胞儀，測定人類皮膚纖維母細胞CCD-966sk經本發明之紫花香茅萃取物處理後，其活性氧物質含量的變化。
材料與儀器
1. 細胞株：人類皮膚纖維母細胞CCD-966sk，取自生物資源保存及研究中心(BCRC)；Cat. 60153 ，以下簡稱CCD-966sk細胞。
2. 細胞培養基：含有10 vol% FBS（購自Gibco）之基礎培養基。其中，基礎培養基是由Eagle’s最低限度基本培養基（Eagle’s minimum essential medium（MEM），購自Gibco，產品編號15188-319）額外添加成分使其含有1 mM 丙酮酸鈉（sodium pyruvate，購自Gibco）、1.5 g/L 碳酸氫鈉（sodium bicarbonate，購自Sigma，Cat.S5761-500G）及0.1 mM非必需胺基酸（non-essential amino acid solution，購自Gibco）所配製而成。
3. 磷酸緩衝鹽溶液（PBS溶液）：購自Gibco，產品編號10437-028。
4. DCFH-DA溶液：將二氯二氫螢光素二乙酸酯（2,7-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate，DCFH-DA；產品編號SI-D6883，購自Sigma）溶於二甲基亞碸（dimethyl sulfoxide，DMSO，購自Sigma，產品編號SI-D6883-50MG）以配製成5 mg/ml 的DCFH-DA溶液。
5. 流式細胞儀（Flow cytometry），BD Accuri C6 Plus
6. 雙氧水（H2
O2
）：購自Sigma-Aldrich，產品型號95299-1L。
7. 胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）：10X Trypsin-EDTA（購自Gibco）以1X PBS溶液稀釋10倍。
8. 紫花香茅萃取物：此實驗中所使用的紫花香茅萃取物，係以範例一之方式製備而成。
實驗步驟
實驗將會分為實驗組、空白控制組（未添加本發明之紫花香茅萃取物、亦無經過雙氧水處理的組別）、以及對照組（未添加本發明之紫花香茅萃取物，但經過雙氧水處理的組別）三組進行，各組分別進行三重複試驗：
1. 將CCD-966sk細胞以每孔1×105
個的方式，接種於每孔含2ml培養基之6孔培養盤中。
2. 將培養盤置於5％CO2
、37℃下，培養24小時。
3. 移除培養基。
4. 加入2 mL實驗培養基至培養盤的各孔中，並於37℃下培養1小時。
實驗組的實驗培養基為添加有5 μL的實施例1得到的本發明之紫花香茅萃取物之2 mL細胞培養基（即本發明之紫花香茅萃取物佔細胞培養基的體積百分比為0.25%）。
控制組的實驗培養基為單純的2 mL細胞培養基（即不含本發明之紫花香茅萃取物）。
對照組的實驗培養基為單純的2 mL細胞培養基（即不含本發明之紫花香茅萃取物）。
5. 添加濃度為5 μg/mL的DCFH-DA溶液2 μL於每孔中的細胞培養基，使DCFH-DA處理細胞15分鐘。
6. 於DCFH-DA處理後，於實驗組的實驗培養基以及對照組的實驗培養基分別加入H2
O2
，並於37℃下反應1小時。具體來說，35% wt的雙氧水先稀釋成100 mM（將10 μL的雙氧水加入990 μL的二次蒸餾水），再取20 μL的100 mM的雙氧水加入 2 mL的細胞培養盤中。
7. 反應後，每孔以1 mL的1X PBS溶液潤洗2次。
8. 將200 μL胰蛋白酶加至每孔中並在暗處反應5分鐘。反應後，添加6 mL細胞培養基終止反應。
9. 將各孔中之細胞與細胞培養基收集至個別對應的1.5 mL離心管內，並將含有細胞與培養基之離心管以400 xg離心10分鐘。
10. 離心後，移除上清液，並以1X PBS溶液回溶細胞沉澱物。
11. 再以400 xg離心10分鐘。
12. 離心後，移除上清液，於暗處以1 mL的1X PBS溶液再次懸浮細胞，以得到待測細胞液。
13. 使用流式細胞儀偵測各孔的待測細胞液中DCFH-DA的螢光信號。進行螢光偵測之激發波長為450-490 nm，放射波長為510-550 nm。由於DCFH-DA進入細胞後會先被水解為DCFH（二氯二氫螢光素），再被活性氧物質氧化為可發出綠色螢光的DCF（二氯螢光素），經DCFH-DA處理之細胞的螢光強度可反映細胞內活性氧物質含量，並藉此得知細胞內活性氧物質高度表現的細胞數佔原細胞數的比例。因實驗係進行二重複，故將各組的二重複實驗之量測結果平均以取得平均值，然後以控制組的平均值為1之相對ROS的生成量，將對照組與實驗組的平均值換算為相對ROS的生成量，如圖3所示。
實驗結果
如圖3所示，由比較控制組、對照組的結果可知，在經過雙氧水處理後，相對ROS的生成量（高螢光表現）會大幅增加（約5.37倍，且達統計上之顯著，p值小於0.001）；其顯示雙氧水處理確實會導致細胞內產生活性氧化物質，進而對皮膚纖維母細胞產生後續傷害。另一方面，根據比較對照組以及實驗組的結果可知，當細胞經過本發明之紫花香茅萃取物處理後，相對ROS的生成量明顯減少約96%（達統計上之顯著，p值小於0.001），甚至低於控制組；其顯示本發明之紫花香茅萃取物可有效減少活性氧化物質在細胞內的產生或累積。換言之，本發明之紫花香茅萃取物可作為一種活性氧化物質清除劑。亦即，本發明之紫花香茅萃取物可透過降低細胞內活性氧化物質含量，減少細胞受到活性氧化物質等所導致的氧化傷害。
範例五：人體試驗
-
以外用方式使用紫花香茅萃取物
於此，令受試者使用含本發明之紫花香茅萃取物之精華液，探討以外用之方式使用本發明之紫花香茅萃取之肌膚改善效果。
使用樣品：含紫花香茅萃取物精華液以及安慰劑精華液（其中的紫花香茅萃取物替換成等重的水，其餘成分均相同）。
含有紫花香茅萃取物的精華液成分：三仙膠 0.2wt%、馨鮮酮 0.6wt%、1,3-丁二醇 5wt%、三乙醇胺 0.1wt%、己二醇 0.6wt%、紫花香茅萃取物0.5wt%、增稠劑 U21 0.1wt%，其餘為水。其中，此紫花香茅萃取物係由範例一之製備方式而得。
受試者人數： 8位25-60歲以上肌膚鬆弛或肌膚泛紅之受試者。
實驗方式
受試者將全臉清潔後，依據不同檢測項目，使用對應的儀器及測量方式，紀錄左右半臉於使用精華液前之數值、或拍攝使用前的照片。而後，令受試者每日早晚於清洗完臉部後，分別將含紫花香茅萃取物精華液以及安慰劑精華液施用於受試者的右半臉及左半臉上，再以指腹稍加按摩左半臉與右半臉。每日早晚使用上述之兩種精華液兩週後，以對應的儀器及測量方式，進行測量或拍攝照片，再與自身原左半臉、或右半臉之數值進行對照（使用前與使用後欲進行檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素會對皮膚所造成的影響）。
檢測項目
將分別進行1.肌膚泛紅、2.肌膚鬆弛程度、3.肌膚毛孔狀態檢測。
1. 肌膚泛紅
使用德國Courage+Khazaka electronic公司之肌膚紅色素指數檢測探頭Mexameter® MX18 (C+K Multi Probe Adapter System, Germany)對同一受試者在使用精華液前與後的面部肌膚進行檢測。該儀器乃透過測定特定波長的光照在人體皮膚上後的反射量來確定皮膚中血紅素的含量。測量數值越高，說明皮膚中紅色素含量越高。
2. 肌膚鬆弛程度
使用購自德國Courage+Khazaka electronic公司之肌膚彈力檢測探頭Cutometer® MPA580 (C+K Multi Probe Adapter System, Germany) 對同一受試者在使用精華液前與後的面部肌膚進行檢測。測試原理是基於吸力和拉伸原理，在被測試的皮膚表面產生一個負壓將皮膚吸進一個測試探頭內，透過光學測試系統檢測皮膚被吸進探頭內的深度，並以軟體分析計算皮膚鬆弛程度。
3. 肌膚毛孔狀態
使用美國Canfield所販售之VISIA高階數位膚質檢測儀進行檢測，透過高解析度之相機鏡頭對同一受試者在使用精華液前與後的面部肌膚進行檢測。藉由標準白光照射，造成毛孔凹陷處產生陰影，毛孔會比周圍的膚色更黑，故可以此偵測毛孔，然後利用軟體根據毛孔數目、面積分析得到一數值，而數值越高則顯示其毛孔數量、面積較多。
請參閱圖4。該圖為使用含本發明之紫花香茅萃取物精華液及安慰劑精華液前與使用前述兩者精華液兩週後之肌膚紅色素含量比較。其中，使用含本發明之紫花香茅萃取物精華液之改善人數比例佔達受試人數之87.5%。其中，當受試者於使用精華液前之平均肌膚紅色素含量為100%時，使用含本發明之紫花香茅萃取精華液2週後之平均肌膚紅色素含量為92.0%，達統計上之顯著（「**」符號代表與使用前相比p值小於0.01），且與使用安慰劑精華液相比，較安慰劑組低7.3%（「#」符號代表與安慰劑精華液相比p值小於0.05）。由此可見，本發明之紫花香茅萃取物具有舒緩肌膚泛紅及降低肌膚紅色素之功能。
請參閱圖5。該圖為使用含本發明之紫花香茅萃取物精華液及安慰劑精華液前與使用前述兩者精華液兩週後之肌膚鬆弛程度比較。其中，使用含本發明之紫花香茅萃取物精華液之改善人數比例佔達受試人數之62.5%。其中，當受試者於使用精華液前之平均肌膚鬆弛程度為100%時，使用含本發明之紫花香茅萃取精華液2週後之平均肌膚鬆弛程度為93.8%，且與使用安慰劑精華液相比，較安慰劑組低4.9%。由此可見，本發明之紫花香茅萃取物具有改善肌膚鬆弛、提升肌膚緊緻度之功能。
請參閱圖6。該圖為使用含本發明之紫花香茅萃取物精華液及安慰劑精華液前與使用前述兩者精華液兩週後之肌膚毛孔狀態比較。其中，使用含本發明之紫花香茅萃取物精華液之改善人數比例佔達受試人數之75%。其中，當受試者於使用精華液前之平均肌膚毛孔量為100%時，使用含本發明之紫花香茅萃取精華液2週後之平均肌膚毛孔量為89.9%，且與使用安慰劑精華液相比，較安慰劑組低11%。由此可見，本發明之紫花香茅萃取物具有縮小及緊緻肌膚毛孔之功能。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
無。
圖1是一實施例的紫花香茅萃取物製備方法流程圖。
圖2是範例三中實驗組與控制組之最終醣化蛋白相對生成量比例圖。
圖3是範例四中實驗組、對照組及控制組受雙氧水刺激後自由基生成量比較圖。
圖4是範例五中使用含本發明之紫花香茅萃取物之精華液與使用安慰劑精華液於第2週之肌膚泛紅比較圖。
圖5是範例五中使用含本發明之紫花香茅萃取物之精華液與使用安慰劑精華液於第2週之肌膚鬆弛程度比較圖。
圖6是範例八中使用含本發明之紫花香茅萃取物之精華液與使用安慰劑精華液於第2週之肌膚毛孔量比較圖。
Claims (8)
- 一種紫花香茅萃取物用於製備一調理肌膚狀態之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物係以一含水之溶劑對一紫花香茅進行萃取所得，且其中該調理肌膚狀態係提升肌膚抗醣化能力、舒緩肌膚泛紅、緊緻肌膚毛孔、或提升肌膚緊緻度。
- 一種紫花香茅萃取物用於製備一提升肌膚抗醣化能力之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物係以一含水之溶劑對一紫花香茅進行萃取所得，且該組合物係透過抑制或減緩細胞內之醣化終產物之含量以達到該提升肌膚抗醣化能力。
- 一種紫花香茅萃取物用於製備一舒緩肌膚泛紅之組合物之用途，其中該紫花香茅萃取物係以一含水之溶劑對一紫花香茅進行萃取所得，且該肌膚泛紅係因肌膚發炎所產生。
- 如請求項1至3中任一項所述之用途，其中該紫花香茅萃取物之總黃酮量大於12000ppm。
- 如請求項1至3中任一項所述之用途，其中該紫花香茅萃取物的brix值為10.0以上。
- 如請求項1至3中任一項所述之用途，其中該紫花香茅萃取物佔該組合物之重量百分比為0.1%~5%。
- 如請求項1至3中任一項所述之用途，其中該含水之萃取溶劑與該紫花香茅之液固比為5：1~20：1。
- 如請求項1至3中任一項所述之用途，其中該組合物為一醫藥組合物、一保健食品組合物、一食品組合物、或一保養品組合物。
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