TWI737159B - 紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法 - Google Patents
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Abstract
一種紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,包含步驟(a)至步驟(b)。在該步驟(a)中,對紫皮石斛進行碎化處理及乾燥處理,形成乾燥物。在該步驟(b)中,將該乾燥物與碳源、氮源及凝結芽孢桿菌混合,形成待發酵混合物,並對該待發酵混合物進行醱酵處理,其中,該氮源選自於奶粉、酵母萃取物、米糠,或上述任意的組合。
Description
本發明是有關於一種萃取方法,特別是指一種紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法。
抗氧化物,例如黃烷酮類(flavanones)抗氧化劑等,對心血管和神經系統的保護效果已經在許多研究中得到證實,而被廣泛地應用於食品、保健品或保養品中。長期以來,人工合成的抗氧化物具有毒性及副作用,以至於廣泛地傾向于用天然抗氧化物來取代。因此,如何有效地獲得天然的抗氧化物,甚至是具有還原力的天然的抗氧化物,成為研究的重點。
因此,本發明的目的,即在提供一種紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法。
於是,本發明紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法包含步驟(a)至步驟(b)。在該步驟(a)中,對紫皮石斛進行碎化處理及乾燥處理,形成乾燥物。在該步驟(b)中,將該乾燥物與碳源、氮源及凝結芽孢桿菌混合,形成待發酵混合物,並對該待發酵混合物進行醱酵處理,其中,該氮源選自於奶粉、酵母萃取物、米糠,或上述任意的組合。
本發明的功效在於:透過該醱酵處理,該紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法能夠有效地獲得含有大量黃烷酮類(flavanones)的抗氧化物質的紫皮石斛抗氧化萃取物,甚至能夠獲得具有優異的還原力的紫皮石斛抗氧化萃取物。
本發明紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法包含步驟(a)至步驟(b)。在該步驟(a)中,對紫皮石斛進行碎化處理及乾燥處理,形成乾燥物。在該步驟(b)中,將該乾燥物與碳源、氮源及凝結芽孢桿菌(
Bacillus coagulans,簡稱BC)混合,形成待發酵混合物,並對該待發酵混合物進行醱酵處理,其中,該氮源選自於奶粉、酵母萃取物、米糠,或上述任意的組合。
以下將就本發明內容進行詳細說明。
>步驟(a)>
紫皮石斛(學名為
Dendrobium devonianum Paxt)是以齒瓣石斛(學名為
Dendrobium devonianum)為代表的蘭科石斛屬植物。紫皮石斛別名為紫皮蘭,附生性草本植物,產於廣西、貴州、雲南及西藏等地,海拔1,850公尺的山地密林中樹枝上。花期為每年4~5月。莖部呈直立圓柱形,節狀,具多數節,節間長2.5~4公分。葉質薄,為狹卵狀披針形,長3~5公分,寬0.7~1公分,先端長漸尖,具抱莖的鞘。花由莖上長出,為總狀花序,具有1~2朵花,花瓣與花萼呈卵形,唇瓣為白色,前部帶點紫色,狹短爪,與蕊柱基相連。在本發明的一些實施例中,該紫皮石斛來自大陸雲南省,且採用該紫皮石斛的莖部。
該碎化處理並無特別限制,只要能讓該紫皮石斛變的細小即可。該碎化處理能夠利用研磨機、切葉機或輾碎機等機械器具來進行。為避免該碎化處理破壞抗氧化物質,較佳地,該碎化處理是在低溫下進行。該碎化處理的溫度依據抗氧化物質的特性進行調整,例如但不限於20℃至30℃。該乾燥處理並無特別的限制,且能夠利用乾燥機等機械器具來進行。該乾燥機例如冷凍乾燥機或熱風乾燥機等。在本發明的一些實施例中,使用冷凍乾燥機,且該乾燥處理的溫度為-35℃至-45℃、且時間為20小時至30小時。該乾燥處理條件並不以上述為限,依據該乾燥物所需的含水率進行調整,大致上,將該乾燥物的含水率控制在6%至12%。該碎化處理與該乾燥處理並無順序或次數上的限制,依據所需的尺寸及含水率進行順序或次數上的調整。在該碎化處理或該乾燥處理後,進行尺寸篩選處理,例如利用篩網進行。在本發明的一些實施態樣中,將該乾燥物於20℃至30℃的環境下研磨成粉狀後,使用網目數範圍60至100的篩網進行過篩處理。
>步驟(b)>
在本發明的一些實施例的待發酵混合物中,該乾燥物的濃度為1毫克/毫升至8毫克/毫升。
該凝結芽孢桿菌例如以寄存編號BCRC10606被寄存於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center,BCRC)。
在該待發酵混合物中,該氮源的濃度為20毫克/毫升至100毫克/毫升。在本發明的一些實施例的待發酵混合物中,該氮源的濃度為30毫克/毫升至84.1毫克/毫升。為獲得具有更優異的還原力及更多的黃烷酮類的抗氧化物質,較佳地,該氮源包含酵母萃取物。
該碳源並無特別的限制,依據凝結芽孢桿菌進行選擇。該碳源例如葡萄糖。在本發明的一些實施例中,該碳源為葡萄糖。在該待發酵混合物中,該碳源的濃度為20毫克/毫升至200毫克/毫升。在本發明的一些實施例的待發酵混合物中,該碳源的濃度為50毫克/毫升至174.1毫克/毫升。
在本發明的一些實施例中,該醱酵處理的醱酵溫度為32℃至45℃且醱酵時間為48小時。該醱酵處理是在搖晃狀態下進行。該搖晃狀態是利用一台搖晃設備來產生圓周式搖晃。在本發明的一些實施例中,該搖晃狀態的操作轉速為100rpm。該搖晃設備例如往復式精密恆溫振盪設備。
本發明將就以下實施例來作進一步說明,但應瞭解的是,該等實施例僅為例示說明之用,而不應被解釋為本發明實施之限制。
實施例1
步驟(a):提供大陸雲南省種植的紫皮石斛,且採用該紫皮石斛的莖部,並利用一台切葉機對該等莖部進行碎化處理,形成平均尺寸為0.2公分至0.5公分的碎化物,然後,置於-40℃的環境中進行24小時的乾燥處理,獲得含水率為8%的乾燥物。將該乾燥物於25℃至30℃的環境下研磨成粉狀後,利用網目數為80的篩網進行過篩處理,獲得過篩粉體。
步驟(b):提供容置有第一混合液的第一錐形瓶、容置有第二混合液的第二錐形瓶,及第三混合液。以鋁箔紙封住該第一錐形瓶及該第二錐形瓶的瓶口,並將該第一錐形瓶及該第二錐形瓶置於高壓滅菌釜中,以121℃進行20分鐘的滅菌處理,接著,將該第二混合液加入至該第一混合液中,然後,加入1毫升的第三混合液,形成待發酵混合物,其中,在該待發酵混合物中,該乾燥物的濃度為3毫克/毫升,葡萄糖(做為碳源)的濃度為100毫克/毫升,而酵母萃取物(作為氮源)的濃度為30毫克/毫升。將該待發酵混合物設置於一台往復式精密恆溫振盪設備(廠商:Hipoint;型號:SB-9D)的一處理槽內,並於搖晃狀態下進行醱酵處理,形成含有抗氧化物的混合物。該往復式精密恆溫振盪設備的操作轉速設定為100rpm。該醱酵處理的醱酵溫度為37℃且醱酵時間為48小時。該第一混合液的配置是將3克的酵母萃取物(作為氮源)及0.3克的步驟(a)的乾燥物置於該第一錐形瓶中並加入去離子水至總體積為60毫升。該第二混合液的配置是將10克的葡萄糖(做為碳源)置於該第二錐形瓶中並加入去離子水至總體積為40毫升。該第三混合液的配置是利用以下步驟來獲得:以三角玻棒均勻地將0.2毫升的包含凝結芽孢桿菌的菌液塗抹在容置有固態培養基的第一培養皿的固態培養基上,以讓該菌液被該固態培養基吸收為止,接著,將該第一培養皿倒置並設置於37℃的培養箱中培養48小時,形成含有菌的第一培養物,其中,該固態培養基包含葡萄糖(glucose)、胰化蛋白(tryptone)、酵母萃取物(yeast extract)、MnSO
4、KH
2PO
4,及MnCl
2、洋菜粉。利用接種環從該第一培養物中取適量菌,並置於容置有上述固態培養基的第二培養皿中,其中,該固態培養基的表面被劃分為四個區域,接著,利用該接種環於該四個區域中劃直線,而分離出單菌落,然後,將該第二培養皿倒置並設置於37℃的培養箱中培養48小時,形成含有菌的第二培養物。利用接種環從該第二培養物中取適量菌,並置於容置有液態培養基中,然後,設置於37℃的培養箱中培養48小時,獲得該第三混合液,其中,該液態培養基的配置是利用以下步驟來獲得:將胰化蛋白、酵母萃取物、MnSO
4、KH
2PO
4,及MnCl
2置於含有磁石的錐形瓶中,接著,加入去離子水至總體積為450毫升,然後,以該磁石進行攪拌至均勻,最後,以鋁箔紙封住該錐形瓶的瓶口,而獲得第一溶液。將葡萄糖置於含有磁石的錐形瓶中,接著,加入去離子水並攪拌至透明清澈,然後,再加入去離子水至總體積為50毫升,最後,以鋁箔紙封住該錐形瓶的瓶口,而獲得第二溶液。將該第一溶液與該第二溶液置於高壓滅菌釜中,並以121℃進行20分鐘的滅菌處理,然後,冷卻至45℃,接著,將該第二溶液倒入至該第一溶液中,並混合均勻。
步驟(c):將該含有抗氧化物的混合物進行過濾處理,而獲得濾液,即為紫皮石斛抗氧化萃取物。
實施例2至39
實施例2至39與該實施例1的方法類似,不同在於:改變各步驟中的條件,參閱表1至表8。
比較例1
該比較例1與該實施例1的方法類似,不同在於:步驟(b)。在該比較例1的步驟(b)中,提供容置有第一混合液的第一錐形瓶、容置有第二混合液的第二錐形瓶,及第三混合液。以鋁箔紙封住該第一錐形瓶及該第二錐形瓶的瓶口,並將該第一錐形瓶及該第二錐形瓶置於高壓滅菌釜中,以121℃進行20分鐘的滅菌處理,接著,將該第二混合液加入至該第一混合液中,然後,加入1毫升的第三混合液,形成待發酵混合物,其中,在該待發酵混合物中,該乾燥物的濃度為3毫克/毫升,葡萄糖(做為碳源)的濃度為100毫克/毫升,而酵母萃取物(作為氮源)的濃度為30毫克/毫升。將該待發酵混合物設置於一台往復式精密恆溫振盪設備(廠商:Hipoint;型號:SB-9D)的一處理槽內,並於搖晃狀態下進行醱酵處理,形成含有抗氧化物的混合物。該往復式精密恆溫振盪設備的操作轉速設定為100rpm。該醱酵處理的醱酵溫度為37℃且醱酵時間為48小時。該第一混合液的配置是將3克的酵母萃取物(作為氮源)及0.3克的步驟(a)的乾燥物置於該第一錐形瓶中並加入去離子水至總體積為60毫升。該第二混合液的配置是將10克的葡萄糖(做為碳源)置於該第二錐形瓶中並加入去離子水至總體積為40毫升。該第三混合液的配置是利用以下步驟來獲得:以三角玻棒均勻地將0.2毫升的包含副乾酪乳酸桿菌(
lactobacillus paracasei ssp. paracasei,簡稱LPSP)的菌液塗抹在容置有MRS固態培養基的第一培養皿的MRS固態培養基上,以讓該菌液被該MRS固態培養基吸收為止,接著,將該第一培養皿倒置並設置於37℃的培養箱中培養48小時,形成含有菌的第一培養物。利用接種環從該第一培養物中取適量菌,並置於容置有MRS固態培養基的第二培養皿中,其中,該MRS固態培養基的表面被劃分為四個區域,接著,利用該接種環於該四個區域中劃直線,而分離出單菌落,然後,將該第二培養皿倒置並設置於37℃的培養箱中培養48小時,形成含有菌的第二培養物。利用接種環從該第二培養物中取適量菌,並置於容置有MRS液態培養基中,然後,設置於37℃的培養箱中培養48小時,獲得該第三混合液,其中,該MRS液態培養基的配置是將4克的MRS培養基置於含有磁石的錐形瓶中,接著,加入去離子水至總體積為500毫升,然後,以該磁石進行攪拌至均勻,最後,以鋁箔紙封住該錐形瓶的瓶口。將該錐形瓶置於高壓滅菌釜中,並以121℃進行20分鐘的滅菌處理,然後,冷卻至45℃。
比較例2至8
該比較例2至8與該比較例1的方法類似,不同在於:改變各步驟中的條件,參閱表9。
評價項目
[總多酚類含量量測]
為能夠清楚描述量測過程,以下以實施例1的濾液進行說明,而其餘實施例及比較例皆依照該過程進行量測。將實施例1的濾液與乙醇溶液(包含乙醇及水,且該乙醇的濃度為95wt%)以振盪搖晃方式混合均勻,接著,利用一台轉速設定在3500rpm的離心機進行5分鐘的離心處理。接著,吸取1毫升的上清液並與1mL的乙醇溶液(包含乙醇及去離子水,且該乙醇的濃度為95wt%)、5毫升的去離子水、0.5毫升的50%(v/v)的Folin-Ciocalteu試劑(廠商:Merck)混合,然後,靜置於35℃的恆溫水槽中5分鐘,再加入1毫升碳酸鈉溶液(包含碳酸鈉及去離子水,且該碳酸鈉的濃度為5wt%),接著,靜置於35℃的恆溫水槽中60分鐘,形成待測物,最後,利用一台雙光束紫外光可見光光譜儀(廠牌:Hitach;型號:U-2009)測定該待測物於波長為725nm的吸光值。提供不同濃度的沒食子酸溶液[包含沒食子酸(gallic acid)、乙醇、Folin-Ciocalteu試劑、碳酸鈉,及去離子水]與725nm的吸光值的關係座標圖,並獲得標準曲線公式。將該待測物的吸光值帶入該標準曲線公式,而求得該實施例1的濾液中總多酚類含量,且單位為mg
沒食子酸/g。
[黃烷酮類含量量測]
為能夠清楚描述量測過程,以下以實施例1的濾液進行說明,而其餘實施例及比較例皆依照該過程進行量測。將實施例1的濾液與乙醇溶液(包含乙醇及水,且該乙醇的濃度為95wt%)以振盪搖晃方式混合均勻,形成混合液。將該混合液利用一台轉速設定在3500rpm的離心機進行5分鐘的離心處理。接著,吸取1毫升的上清液並與2mL的2,4-二硝基苯肼(2,4-Dinitrophenylhydrazine,簡稱DNP)溶液及2毫升的甲醇混合,然後,靜置於50℃的恆溫水槽中50分鐘,接著,冷卻並加入5毫升的氫氧化鉀溶液(包含氫氧化鉀及甲醇),然後,靜置2分鐘,接著,取出1毫升並加入5毫升的甲醇,然後,利用轉速設定在3500rpm的該離心機進行10分鐘的離心處理,接著,取出1毫升的上清液並加入4毫升的甲醇,形成待測物,然後,以利用一台雙光束紫外光可見光光譜儀(廠牌:Hitach;型號:U-2009)測定該待測物於波長為494nm的吸光值。提供不同濃度的橙皮素溶液[包含橙皮素(hesperetin)、DNP溶液、甲醇、氫氧化鉀,及去離子水]與494nm的吸光值的關係座標圖,並獲得標準曲線公式。將該待測物的吸光值帶入該標準曲線公式,而求得該實施例1的濾液中黃烷酮類含量,且單位為mg
橙皮素/g。
[還原力量測]
提供pH為6.6的0.2M的磷酸緩衝液,是由0.2M的K
2HPO
4溶液及0.2M的KH
2PO
4所配製而成。該0.2M的K
2HPO
4溶液是由0.7克的K
2HPO
4與20.023毫升的去離子水所形成。該0.2M的KH
2PO
4溶液是由0.5克的KH
2PO
4與18.37毫升的去離子水所形成。為能夠清楚描述量測過程,以下以實施例1的濾液進行說明,而其餘實施例及比較例皆依照該過程進行量測。將實施例1的濾液與甲醇混合均勻,形成2毫升的混合液。將該混合液與2mL的0.2M的磷酸緩衝液及1%(v/v)的赤血鹽溶液以振盪搖晃方式混合均勻,然後,靜置於50℃的恆溫水槽中20分鐘,接著,加入2毫升的10%(v/v)的三氯醋酸溶液,然後,利用一台轉速設定在3000rpm的離心機進行10分鐘的離心處理,接著,取出2毫升的上層液,並與2毫升的去離子水及0.4毫升的0.1%(v/v)的氯化鐵溶液混合均勻,待10分鐘後,形成待測物。然後,利用一台雙光束紫外光可見光光譜儀(廠牌:Hitach;型號:U-2009)測定該待測物於波長為700nm的吸光值。提供不同濃度的2,6-二丁基羥基甲苯(簡稱BHT)溶液(包含BHT、甲醇、0.2M的磷酸緩衝液、赤血鹽、三氯醋酸、氯化鐵,及去離子水)與700nm的吸光值的關係座標圖,並獲得標準曲線公式。將該待測物的吸光值帶入該標準曲線公式,而求得該實施例1的濾液的還原力,且單位為mg
2,6- 二丁基羥基甲苯/g。
鐵離子還原抗氧化能力(Ferric ion reducing antioxidant power,簡稱FRAP)量測:提供FRAP試劑,且該FRAP試劑是由50毫升且pH為3.6的第一溶液、5毫升的第二溶液及5毫升的第三溶液混合所配製而成,其中,該第一溶液是將0.31克的醋酸鈉及1.6毫升的醋酸(醋酸濃度為99.9)混合並加入去離子水至總體積為100毫升,該第二溶液是由20毫升且濃度為10mmol/L的2,4,6-三(2-吡啶基)三嗪溶液{包含2,4,6-三(2-吡啶基)-s-三嗪[2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-triazine,簡稱TPTZ]}與20毫升且濃度為40mmol/L的鹽酸水溶液配製而成,而該第三溶液是濃度為20mmol/L的氯化鐵溶液(包含氯化鐵六水合物與水)。提供不同濃度的數個硫酸鐵溶液[包含硫酸鐵(FeSO
4)與去離子水],並將0.1毫升的該等硫酸鐵溶液、0.3毫升去離子水及3毫升的FRAP試劑以振盪搖晃方式混合均勻,形成數個混合液,且將該等混合液置於37℃的水槽中反應30分鐘,然後,利用一台雙光束紫外光可見光光譜儀(廠牌:Hitach;型號:U-2009)測定該等混合液於波長為593nm的吸光值,接著,將該等硫酸鐵溶液的濃度與吸光值繪製出一關係座標圖,並獲得一標準曲線公式。為能夠清楚描述量測過程,以下以實施例1的濾液進行說明,而其餘實施例及比較例皆依照該過程進行量測。將實施例1的濾液與甲醇混合均勻,形成2毫升的混合液。將0.1毫升的混合液、0.3毫升去離子水及3毫升的FRAP試劑以振盪搖晃方式混合均勻,接著,置於37℃的水槽中反應30分鐘,形成待測物。然後,利用一台雙光束紫外光可見光光譜儀(廠牌:Hitach;型號:U-2009)測定該待測物於波長為593nm的吸光值。將該待測物的吸光值帶入該標準曲線公式,而求得該實施例1的濾液的鐵離子還原抗氧化能力,且單位為mg
硫酸鐵/g。
表1
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 3 | 3 | 3 | 3 | 6 | 6 |
菌種 | BC | BC | BC | BC | ||||
氮源 | 種類 | 酵母萃取物 | 奶粉 | 米糠 | 酵母萃取物 | |||
濃度 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 60 | ||
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 100 | 100 | 100 | 50 | 150 | 50 | |
醱酵溫度(℃) | 37 | 37 | 37 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量 (mg 沒食子酸/g) | 118.3 | 9.84 | 18.87 | -- | -- | -- | |
黃烷酮含量 (mg 橙皮素/g) | 2626.98 | 309.51 | 221.70 | 2439.7 | 1227.2 | 1093.7 | ||
鐵離子還原抗氧化能力 (mg 硫酸鐵/g) | 204.13 | 36.85 | 110.16 | 243.5 | 119.8 | 293.7 | ||
還原力 (mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | 60.95 | 14.70 | 20.53 | -- | -- | -- |
表2
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | ||||||
7 | 8 | 9 | 10 | 11 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 3 | 6 | 3 | 3 | 6 |
菌種 | BC | ||||||
氮源 | 種類 | 酵母萃取物 | |||||
濃度 | 60 | 30 | 30 | 60 | 60 | ||
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 150 | 50 | 150 | 50 | 150 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 42 | 42 | 42 | 42 | ||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | -- | -- | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | 3055.4 | 762.3 | 2703.3 | 2046.4 | 1301.0 | ||
鐵離子還原抗氧化能力(mg 硫酸鐵/g) | 597.8 | 117.6 | 302.3 | 536.7 | 275.2 | ||
還原力(mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | -- | -- |
表3
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||
12 | 13 | 14 | 15 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 6 | 5 | 4 | 3 |
菌種 | BC | |||||
酵母萃取物 (氮源) | 濃度 | 60 | 60 | 60 | 60 | |
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 120 | 130 | 140 | 150 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | -- | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | 1377.6 | 1640.8 | 1765.5 | 3028.0 | ||
鐵離子還原抗氧化能力 (mg 硫酸鐵/g) | -- | -- | -- | -- | ||
還原力(mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | -- |
表4
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||||
16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 1 | 1 | 3 | 3 | 2 | 2 |
菌種 | BC | |||||||
酵母萃取物 (氮源) | 濃度 | 60 | 60 | 60 | 60 | 60 | 60 | |
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 150 | 170 | 150 | 170 | 145.9 | 174.1 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 32 | 32 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量 (mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | -- | -- | -- | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | 2614.6 | 2911.0 | 2354.0 | 2427.4 | 2995.5 | 3021.9 | ||
鐵離子還原抗氧化能力(mg 硫酸鐵/g) | -- | -- | -- | -- | -- | -- | ||
還原力 (mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | -- | -- | -- |
表5
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||
22 | 23 | 24 | 25 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 0.59 | 3.41 | 2 | 1.82 |
菌種 | BC | |||||
酵母萃取物 (氮源) | 濃度 | 60 | 60 | 60 | 60 | |
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 160 | 160 | 160 | 160 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | 390.8 | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | 2709.4 | 2014.5 | 3572.3 | 3565.0 | ||
鐵離子還原抗氧化能力 (mg 硫酸鐵/g) | -- | -- | -- | 367.3 | ||
還原力 (mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | 320.0 |
表6
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||
26 | 27 | 28 | 29 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 6 | 5 | 4 | 3 |
菌種 | BC | |||||
酵母萃取物 (氮源) | 濃度 | 30 | 40 | 50 | 60 | |
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 150 | 150 | 150 | 150 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | -- | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | -- | -- | -- | -- | ||
鐵離子還原抗氧化能力 (mg 硫酸鐵/g) | 150.4 | 253.3 | 375.2 | 581.4 | ||
還原力(mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | -- |
表7
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||||
30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 1 | 1 | 3 | 3 | 2 | 2 |
菌種 | BC | |||||||
酵母萃取物 (氮源) | 濃度 | 60 | 80 | 60 | 80 | 55.9 | 84.1 | |
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 150 | 150 | 150 | 150 | 150 | 150 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 32 | 32 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | -- | -- | -- | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | -- | -- | -- | -- | -- | -- | ||
鐵離子還原抗氧化能力(mg 硫酸鐵/g) | 523.1 | 548.8 | 224.3 | 287.7 | 349.7 | 319.7 | ||
還原力(mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | -- | -- | -- |
表8
「--」:未量測 濃度:mg/mL | 實施例 | |||||
36 | 37 | 38 | 39 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 0.59 | 3.41 | 2 | 1.82 |
菌種 | BC | |||||
酵母萃取物 (氮源) | 濃度 | 70 | 70 | 70 | 70 | |
葡萄糖 (碳源) | 濃度 | 150 | 150 | 150 | 150 | |
醱酵溫度(℃) | 32 | 32 | 32 | 32 | ||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | -- | -- | -- | 440.8 | |
黃烷酮含量(mg 橙皮素/g) | -- | -- | -- | 3009.5 | ||
鐵離子還原抗氧化能力 (mg 硫酸鐵/g) | 401.4 | 422.3 | 798.3 | 793.3 | ||
還原力(mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | -- | -- | -- | 358.1 |
表9
「—」:未添加 濃度:mg/mL | 比較例 | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |||
步驟(b) | 醱酵處理 | 乾燥物濃度 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 |
菌種 | LPSP | — | — | — | BC | LPSP | ||||
氮源 | 種類 | 酵母萃取物 | 奶粉 | 米糠 | 酵母萃取物 | 奶粉 | 米糠 | — | — | |
濃度 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 30 | 0 | 0 | ||
葡萄糖(碳源) | 濃度 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | |
醱酵溫度(℃) | 37 | 37 | 37 | |||||||
評價項目 | 總多酚類含量(mg 沒食子酸/g) | 106.3 | 30.2 | 16.9 | 113.7 | 33.5 | 16.7 | 6.7 | 4.6 | |
黃烷酮含量 (mg 橙皮素/g) | 179.1 | 176.2 | 214.4 | 184.9 | 163.2 | 185.7 | 172.2 | 185.5 | ||
鐵離子還原抗氧化能力(mg 硫酸鐵/g) | 164.5 | 51.7 | 96.9 | 160.2 | 47.9 | 100.2 | 19.2 | 16.2 | ||
還原力 (mg 2,6- 二丁基羥基甲苯/g) | 75.6 | 19.2 | 21.9 | 65.9 | 18.8 | 21.44 | 8.2 | 5.2 |
綜上所述,透過該醱酵處理,該紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法能夠有效地獲得含有大量黃烷酮類(flavanones)的抗氧化物質的紫皮石斛抗氧化萃取物,甚至能夠獲得具有優異的還原力的紫皮石斛抗氧化萃取物,故確實能達成本發明的目的。
惟以上所述者,僅為本發明的實施例而已,當不能以此限定本發明實施的範圍,凡是依本發明申請專利範圍及專利說明書內容所作的簡單的等效變化與修飾,皆仍屬本發明專利涵蓋的範圍內。
無。
Claims (7)
- 一種紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,包含:步驟(a),對紫皮石斛進行碎化處理及乾燥處理,形成乾燥物;及步驟(b),將該乾燥物與碳源、氮源及凝結芽孢桿菌混合,形成待發酵混合物,並對該待發酵混合物進行醱酵處理,其中,該氮源選自於酵母萃取物、米糠,或上述任意的組合。
- 如請求項1所述的紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,其中,在該步驟(b)中,該醱酵處理的醱酵溫度為32℃至45℃。
- 如請求項1所述的紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,其中,在該步驟(b)的待發酵混合物中,該氮源的濃度為20毫克/毫升至100毫克/毫升。
- 如請求項3所述的紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,其中,在該步驟(b)中,該氮源包含酵母萃取物。
- 如請求項1所述的紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,其中,在該步驟(b)的待發酵混合物中,該碳源的濃度為20毫克/毫升至200毫克/毫升。
- 如請求項5所述的紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,其中,在該步驟(b)中,該碳源為葡萄糖。
- 如請求項1所述的紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法,其中,在該步驟(b)的待發酵混合物中,該乾燥物的濃度為1毫克/毫升至8毫克/毫升。
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