CN109528932A - 一种益生菌石斛花的加工方法 - Google Patents

一种益生菌石斛花的加工方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109528932A
CN109528932A CN201811583032.3A CN201811583032A CN109528932A CN 109528932 A CN109528932 A CN 109528932A CN 201811583032 A CN201811583032 A CN 201811583032A CN 109528932 A CN109528932 A CN 109528932A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermentation
stone flower
flower
probiotics
dendrobium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811583032.3A
Other languages
English (en)
Inventor
赵世光
薛正莲
魏明
王洲
钱森和
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui Polytechnic University
Original Assignee
Anhui Polytechnic University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui Polytechnic University filed Critical Anhui Polytechnic University
Priority to CN201811583032.3A priority Critical patent/CN109528932A/zh
Publication of CN109528932A publication Critical patent/CN109528932A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/898—Orchidaceae (Orchid family)
    • A61K36/8984—Dendrobium
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/17—Preparation or pretreatment of starting material involving drying, e.g. sun-drying or wilting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明公开了一种益生菌石斛花产品的加工方法。该产品是以鲜石斛花为原料，以灵芝菌、乳酸菌发酵剂，以两段发酵工艺制备。制备方法涉及鲜石斛花预处理、发酵基质调配、灵芝菌好氧发酵、嗜酸乳杆菌和双歧杆菌厌氧发酵、发酵物干燥。与现有技术相比，本方法以鲜石斛为唯一原料，采用功能性益生菌发酵，制成的产品中多糖溶出率显著提升，除保留了石斛花自身的营养成分外，还含有功能性益生菌、多种酶蛋白，具有抗衰老、抗菌消炎、增强机体免疫等多种保健功能。

Description

一种益生菌石斛花的加工方法
技术领域
本发明涉及石斛花加工领域，特别涉及一种益生菌石斛花的加工方法。
背景技术
石斛是中国传统名贵中药，按形态、产地等可分为铁皮、金钗、铜皮、霍山等数十个品种。石斛花中含有的主要活性成分为石斛多糖、精油、石斛碱、氨基酸及其衍生物具有增强免疫、抗疲劳、抗氧化、降血压、降血糖、抗肿瘤等复合活性功能。
文献(赵世光,王诗然,薛正莲,et al.低能离子注入诱变选育漆酶高产菌株[J].激光生物学报,2009,18(4):534-538.)中采用利用低能N+束注入技术对漆酶产生菌灵芝菌(Ganoderma lucidum)U60菌丝体进行辐照诱变，获得一系列UIM突变株，其中包括UIM-281和UIM-135突变株，均为漆酶高产菌株，其代谢产物漆酶具有广泛的底物专一性，能氧化多种酚类、芳胺类化合物，甾体激素，生物色素及金属有机化合物，在造纸、食品加工、废水处理、土壤净化、染料脱色、生物传感器、免疫检测等方面具有广泛的应用价值。
目前，以石斛花为原料加工的产品主要是冲泡形式的花茶，多与茶叶、甘草、罗汉果等植物配合加工而成。该类型产品采用的是茶叶加工过程的通用工艺和技术，涉及到萎凋、杀青、揉捻、干燥等环节。该类型产品中不含有特定功能性的益生菌。
目前，以石斛花及其加工工艺上涉及以下两个领域：
1、石斛花干品
目前该领域的多项技术要点为：单一采用鲜石斛花为原料，经清洗、盐渍、晾干后，进行烘干、或压制，制成干品石斛花。
2、石斛花茶
特点在于石斛花与茶叶进行复配，加工出石斛花茶。技术上采用茶叶加工的一系列工艺，涉及鲜花萎凋、杀青、揉捻、窨制、渥堆、烘焙等技术。所得产品为石斛花茶，不含益生菌成分。
中国专利申请号：201610874580.6公开了一种金花石斛茶及其制备方法，制备方法为：将铁皮石斛花经萎凋、揉捻处理后，进行堆渥发酵；将经过处理的铁皮石斛花进行翻炒；然后向经处理过的铁皮石斛花中倒入沸水，然后隔绝空气，进行发酵；然后加入金花，经混合后进行炭焙；将处理过的混合物陈化放置100天～180天，即得所制金花石斛茶。本发明将铁皮石斛花与金花结合制茶，充分利用了铁皮石斛的营养价值，与金花结合，更是提高了金花石斛茶的口感与品相，使得制得的金花石斛茶具有良好的经济价值和市场竞争力。
中国专利申请号：201710732032.4公开了一种金钗石斛花茶的加工工艺，其是将金钗石斛花用清水洗净，然后进行萎凋，将萎凋处理后的金钗石斛花先进行一次杀青，接着进行一次揉捻，接着进行二次杀青，二次杀青之后进行二次揉捻，再进行将金钗石斛花与刺梨片、绿茶干茶混合发酵处理，将发酵处理后物料烘干并提香，即得。本发明通过将金钗石斛花、刺梨片以及绿茶干茶进行综合调配，不仅能够丰富茶中的有益物质种类及含量，而且还能改善单一茶的口感。
中国专利申请号：201610476124.6，公开了一种铁皮石斛花红茶紧压茶及其制备方法。所述铁皮石斛花红茶紧压茶由质量比为30～50％铁皮石斛鲜花和50～70％红茶茶青，经过采摘和重萎凋、揉捻、揉切、发酵、干燥、提香、紧压做形制备得到。本发明制成的石斛花红茶紧压茶口感醇厚鲜爽、甜香花香浓郁、有益保健、外形优美、携带方便、易于冲泡，规避了成品茶严重焦火味，而自然花香和甜香不高不持久，易带苦涩和青涩等不足，同时最大程度保留了茶叶和石斛花所含的多糖和多酚两种最具保健功能的物质成分。
通过上述专利中公开的石斛花制备方法获得的产品虽具备一定的保健功效，但其明显存在以下缺点：
1、石斛花产品功能单一。
现有技术中石斛花干品是简单的清洗、烘干技术加工而成，是石斛花在物理形态上的二次加工，仅具备石斛花自身的营养功能价值，且因无细胞破壁，冲饮时有效成分的溶出效果不佳。
2、石斛花茶原料组成复杂，无法体现石斛花的主体功能。
现有石斛花茶产品其定义是花和茶的复合配伍产品，其主体是茶而不是石斛花，该类型产品与本技术产品的定位不同。
3、石斛花或石斛花茶中不含益生菌，保健功能单一。
现有技术中涉及到了石斛花的渥堆发酵，但这种发酵方式是自然发酵加上空气氧化的共同作用结果，其中的自然发酵利用的是环境微生物，且在后期烘干工艺中，微生物被热灭菌，产品中不再含有微生物及其代谢产物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：目前石斛花产品是采用烘干、复配等方法对鲜石斛花进行二次物理形态再加工，为保持石斛花成品的形态完整，无法对其进行破壁，花中的营养物质无法有效释放，且成品石斛花保健功能单一，仅含有石斛花自身的天然营养成分。针对目前石斛花产品及制备过程中存在的诸多问题及缺点，本发明提供一种益生菌石斛花的加工方法，以克服上述问题。
为解决上述技术问题，本发明提供以下的技术方案：
一种益生菌石斛花的加工方法，包含如下具体步骤：
(1)鲜石斛花预处理：人工采收鲜石斛花，分拣除杂后，清水漂洗表面浮尘等杂质，在40℃～50℃条件下，经4-6小时烘干，脱除表面水分后，4℃-10℃冷藏备用；
(2)发酵基质调配：取预处理后的鲜石斛花，用喷雾器喷洒清水至花表面，达到湿润而手握成团不滴水程度，在110℃～115℃下湿热灭菌5min-10min，装入500-1000mL可抽滤发酵瓶，冷却至室温，待接入发酵剂；
(3)发酵剂制备：将灵芝菌UIM-135接入马铃薯葡萄糖液体培养基，在28℃～30℃，150～180r/min的条件下振荡培养3～4天，收集菌丝球作为发酵剂A；以含3％-5％牛奶、4～8％低聚果糖的MS培养基在30℃～35℃下对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行液体静置培养，取15～20小时培养的菌液作为发酵剂B；
(4)石斛花发酵：石斛花发酵工艺采用两段发酵法，前段发酵采用发酵剂A进行好氧发酵，后段发酵采用发酵剂B进行厌氧发酵；
(5)益生菌石斛花干燥：取后段发酵5-15天后的石斛花发酵物，摊铺于托盘上，厚度0.5-1.0cm，-25℃预冻5h后，在-40℃条件下冷冻干燥18h，所得成品分装于真空密封袋，即得到所述益生菌石斛花产品。
优选地，所述鲜石斛花为处于花苞期的鲜石斛花，花瓣尚未展开，包裹于花苞内，于开花前1～4h采摘，并于采摘后0.5～2h内预处理。
优选地，所述鲜石斛花取自铁皮石斛、金钗石斛、细叶石斛、重唇石斛、喉红石斛、长苏石斛、球花石斛、翅梗石斛、紫皮石斛、铜皮石斛、束花石斛、鼓槌石斛、黄喉石斛、串珠石斛中的一种或多种。
优选地，所述前段发酵具体步骤为在已装入预处理后石斛花的可抽滤发酵瓶中按10％～15％接种量接入UIM-135菌丝球，轻搅拌匀后，置于28℃～30℃恒温发酵，每日经发酵瓶抽滤口强制通入无菌空气1～3次，以维持好氧条件；持续发酵5-15天后，石斛花间肉眼可见UIM-135菌丝生成后，前段发酵结束。
优选地，所述后段发酵的具体步骤为在前段发酵周期终点时，继续以5％～10％接种量，喷洒接入发酵剂B，摇匀，经发酵瓶抽滤口抽出空气后，密闭条件下30℃～40℃厌氧发酵5～15天；前5天每天搅拌2～3次，每次搅拌1～5分钟，之后不再搅拌，静置发酵至终点。
优选地，所述发酵剂B中菌体的总浓度为5×104～5CFU/mL，嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的活菌数之比为1～10：1。
一种上述加工方法制备的益生菌石斛花，包含活体益生菌数为8.5×104～6CFU/g，总多糖含量为90～131mg/mL，总氨基酸含量为1125～1455μg/mL，总酚含量为170～185mg/L，pH值3.74～3.87。
优选地，益生菌石斛花中还包含四种功能酶，分别为超氧化物歧化酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。
优选地，所述超氧化物歧化酶酶活为6500～8500U/L；蛋白酶的酶活为1840.8～2490.4U/L；淀粉酶酶活为325～334.6U/L；脂肪酶酶活为100～450U/L。
本发明获得的有益效果：
1、石斛花产品中含功能性益生菌及其代谢产物，产品中除保留了石斛花自身的营养成分外，还包含益生菌、石斛多糖、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等多营养成分，具有清除自由基、抗衰老、抗菌消炎、增强机体免疫，减肥瘦体等多种保健功能。
2、益生菌分解石斛花微观结构，促进多糖成分的溶出，益生菌生长、增殖作用实现了石斛花组织结构的分解，促进了石斛花多糖的释放，多糖释放率提高了52.2％。
3、采用冻干方式干燥，最大程度保留了石斛花的挥发性精油成分及益生菌，益生菌活体菌数可达到8.5×106CFU/g。
4、益生菌石斛花产品抗氧化活性显著提升，酶蛋白活力显著提高。
附图说明
图1：益生菌石斛花制备工艺流程。
图2：发酵剂B制备过程中菌体生长曲线。
图3：发酵剂对石斛花内部结构的分解效果。
图4：益生菌石斛花发酵过程羟基自由基清除率动态变化。
图5：益生菌石斛花发酵过程DPPH自由基清除率动态变化。
图6：益生菌石斛花发酵过程ABTS自由基清除率动态变化。
图7：益生菌石斛花发酵过程总酚含量动态变化。
图8：发酵过程中超氧化物歧化酶酶活变化。
图9：发酵过程中蛋白酶酶活变化。
图10：发酵过程中淀粉酶酶活变化。
图11：发酵过程中脂肪酶酶活变化。
图12：发酵过程中总多糖含量变化。
图13：发酵过程中总氨基酸含量变化。
图14：发酵过程中PH变化。
具体实施方式
下面通过对实施例的描述，对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
实施例1：按如下方法制备益生菌石斛花：
(1)鲜石斛花预处理：石斛品种选用铁皮石斛，人工采收处于花苞期的鲜石斛花(花瓣尚未展开，包裹于花苞内)，于开花前1h采摘，并于采摘后0.5h内预处理，分拣除杂后，清水漂洗表面浮尘等杂质，在40℃条件下，经4小时烘干，脱除表面水分后，4℃冷藏备用；
(2)发酵基质调配：取预处理后的鲜石斛花，用喷雾器喷洒清水至花表面，达到湿润而手握成团不滴水程度，在110℃下湿热灭菌5min，装入500mL可抽滤发酵瓶，冷却至室温，待接入发酵剂；
(3)发酵剂制备：将灵芝菌UIM-135接入马铃薯葡萄糖液体培养基，在28℃，150r/min的条件下振荡培养3天，收集菌丝球作为发酵剂A；以含3wt％牛奶、4wt％低聚果糖的MS培养基在30℃下对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行液体静置培养，取15小时培养的菌液作为发酵剂B，发酵剂B中菌体的总浓度为5×104CFU/mL，其中嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的活菌数之比为1：1；
(4)石斛花发酵：石斛花发酵工艺采用两段发酵法，前段发酵为UIM-135好氧发酵，后段为嗜酸乳杆菌和双歧杆菌厌氧发酵；
前段发酵：在已装入预处理后石斛花的可抽滤发酵瓶中按10wt％接种量接入UIM-135菌丝球，轻搅拌匀后，置于28℃℃恒温发酵，每日经发酵瓶抽滤口强制通入无菌空气1次，以维持好氧条件；持续发酵5天后，石斛花间肉眼可见UIM-135菌丝生成后，前段发酵结束；
后段发酵：在前段发酵周期终点时，继续以5wt％接种量，喷洒接入发酵剂B，摇匀，经发酵瓶抽滤口抽出空气后，密闭条件下30℃厌氧发酵5天；前5天每天搅拌2次，每次搅拌1分钟，之后不再搅拌，静置发酵至终点。
(5)益生菌石斛花干燥：取发酵5天后的石斛花发酵物，摊铺于托盘上，厚度0.5cm，-25℃预冻5h后，在-40℃条件下冷冻干燥18h，所得成品分装于真空密封袋，即得到所述益生菌石斛花产品。
经菌落培养计数后测得益生菌石斛花中活体益生菌数(嗜酸乳杆菌和双歧杆菌之和)为8.5×104CFU/g。
实施例2：按如下方法制备益生菌石斛花：
(1)鲜石斛花预处理：石斛品种选用铁皮石斛、金钗石斛、细叶石斛，石斛花数量比例为1:3:1，人工采收处于花苞期的鲜石斛花(花瓣尚未展开，包裹于花苞内)，于开花前4h采摘，并于采摘后2h内预处理，分拣除杂后，清水漂洗表面浮尘等杂质，在50℃条件下，经6小时烘干，脱除表面水分后，10℃冷藏备用；
(2)发酵基质调配：取预处理后的鲜石斛花，用喷雾器喷洒清水至花表面，达到湿润而手握成团不滴水程度，在115℃下湿热灭菌10min，装入1000mL可抽滤发酵瓶，冷却至室温，待接入发酵剂；
(3)发酵剂制备：将灵芝菌UIM-135接入马铃薯葡萄糖液体培养基，在30℃，180r/min的条件下振荡培养4天，收集菌丝球作为发酵剂A；以含5wt％牛奶、8wt％低聚果糖的MS培养基在35℃下对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行液体静置培养，取20小时培养的菌液作为发酵剂B，发酵剂B中菌体的总浓度为5×105CFU/mL，其中嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的活菌数之比为10：1；
(4)石斛花发酵：石斛花发酵工艺采用两段发酵法，前段发酵为UIM-135好氧发酵，后段为嗜酸乳杆菌和双歧杆菌厌氧发酵；
前段发酵：在已装入预处理后石斛花的可抽滤发酵瓶中按15wt％接种量接入UIM-135菌丝球，轻搅拌匀后，置于30℃恒温发酵，每日经发酵瓶抽滤口强制通入无菌空气3次，以维持好氧条件；持续发酵15天后，石斛花间肉眼可见UIM-135菌丝生成后，前段发酵结束；
后段发酵：在前段发酵周期终点时，继续以10wt％接种量，喷洒接入发酵剂B，摇匀，经发酵瓶抽滤口抽出空气后，密闭条件下40℃厌氧发酵15天；前5天每天搅拌3次，每次搅拌5分钟，之后不再搅拌，静置发酵至终点。
(5)益生菌石斛花干燥：取发酵15天后的石斛花发酵物，摊铺于托盘上，厚度1.0cm，-25℃预冻5h后，在-40℃条件下冷冻干燥18h，所得成品分装于真空密封袋，即得到所述益生菌石斛花产品。
经菌落培养计数后测得益生菌石斛花中活体益生菌数(嗜酸乳杆菌和双歧杆菌之和)为8.5×106CFU/g。
实施例3：按如下方法制备益生菌石斛花：
(1)鲜石斛花预处理：石斛品种选用重唇石斛、喉红石斛、长苏石斛，人工采收处于花苞期的鲜石斛花(花瓣尚未展开，包裹于花苞内)，于开花前2h采摘，并于采摘后1h内预处理，分拣除杂后，清水漂洗表面浮尘等杂质，在45℃条件下，经5小时烘干，脱除表面水分后，7℃冷藏备用；
(2)发酵基质调配：取预处理后的鲜石斛花，用喷雾器喷洒清水至花表面，达到湿润而手握成团不滴水程度，在115℃下湿热灭菌8min，装入750mL可抽滤发酵瓶，冷却至室温，待接入发酵剂；
(3)发酵剂制备：将灵芝菌UIM-135接入马铃薯葡萄糖液体培养基，在29℃，160r/min的条件下振荡培养3天，收集菌丝球作为发酵剂A；以含4％牛奶、6％低聚果糖的MS培养基在33℃下对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行液体静置培养，取17小时培养的菌液作为发酵剂B，发酵剂B中菌体的总浓度为1×105CFU/mL，其中嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的活菌数之比为5：1；
(4)石斛花发酵：石斛花发酵工艺采用两段发酵法，前段发酵为UIM-135好氧发酵，后段为嗜酸乳杆菌和双歧杆菌厌氧发酵；
前段发酵：在已装入预处理后石斛花的可抽滤发酵瓶中按13wt％接种量接入UIM-135菌丝球，轻搅拌匀后，置于28℃恒温发酵，每日经发酵瓶抽滤口强制通入无菌空气2次，以维持好氧条件；持续发酵10天后，石斛花间肉眼可见UIM-135菌丝生成后，前段发酵结束；
后段发酵：在前段发酵周期终点时，继续以7wt％接种量，喷洒接入发酵剂B，摇匀，经发酵瓶抽滤口抽出空气后，密闭条件下35℃厌氧发酵10天；前3天每天搅拌3次，每次搅拌3分钟，之后不再搅拌，静置发酵至终点。
(5)益生菌石斛花干燥：取发酵10天后的石斛花发酵物，摊铺于托盘上，厚度0.7cm，-25℃预冻5h后，在-40℃条件下冷冻干燥18h，所得成品分装于真空密封袋，即得到所述益生菌石斛花产品。
经菌落培养计数后测得益生菌石斛花中活体益生菌数(嗜酸乳杆菌和双歧杆菌之和)为8×105CFU/g。
实施例4：按如下方法制备益生菌石斛花：
(1)鲜石斛花预处理：石斛品种选用球花石斛、翅梗石斛、紫皮石斛、铜皮石斛，不同石斛品种的花朵数比例为任意值，人工采收处于花苞期的鲜石斛花(花瓣尚未展开，包裹于花苞内)，于开花前3h采摘，并于采摘后1.5h内预处理，分拣除杂后，清水漂洗表面浮尘等杂质，在45℃条件下，经4小时烘干，脱除表面水分后，6℃冷藏备用；
(2)发酵基质调配：取预处理后的鲜石斛花，用喷雾器喷洒清水至花表面，达到湿润而手握成团不滴水程度，在115℃下湿热灭菌5min，装入1000mL可抽滤发酵瓶，冷却至室温，待接入发酵剂；
(3)发酵剂制备：将灵芝菌UIM-135接入马铃薯葡萄糖液体培养基，在28℃，150r/min的条件下振荡培养4天，收集菌丝球作为发酵剂A；以含5％牛奶、7％低聚果糖的MS培养基在31℃下对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行液体静置培养，取16小时培养的菌液作为发酵剂B，发酵剂B中菌体的总浓度为5×105CFU/mL，其中嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的活菌数之比为8：1；
(4)石斛花发酵：石斛花发酵工艺采用两段发酵法，前段发酵为UIM-135好氧发酵，后段为嗜酸乳杆菌和双歧杆菌厌氧发酵；
前段发酵：在已装入预处理后石斛花的可抽滤发酵瓶中按11wt％接种量接入UIM-135菌丝球，轻搅拌匀后，置于30℃恒温发酵，每日经发酵瓶抽滤口强制通入无菌空气3次，以维持好氧条件；持续发酵14天后，石斛花间肉眼可见UIM-135菌丝生成后，前段发酵结束；
后段发酵：在前段发酵周期终点时，继续以6wt％接种量，喷洒接入发酵剂B，摇匀，经发酵瓶抽滤口抽出空气后，密闭条件下34℃厌氧发酵11天；前4天每天搅拌2次，每次搅拌4分钟，之后不再搅拌，静置发酵至终点。
(5)益生菌石斛花干燥：取发酵14天后的石斛花发酵物，摊铺于托盘上，厚度0.9cm，-25℃预冻5h后，在-40℃条件下冷冻干燥24h，所得成品分装于真空密封袋，即得到所述益生菌石斛花产品。
经菌落培养计数后测得益生菌石斛花中活体益生菌数(嗜酸乳杆菌和双歧杆菌之和)为9×106CFU/g。
实施例5：本实施例与实施例3的不同之处在于石斛品种选用束花石斛、鼓槌石斛、黄喉石斛、串珠石斛，不同石斛品种的花朵数比例为1:5:2:3。
经菌落培养计数后测得益生菌石斛花中活体益生菌数(嗜酸乳杆菌和双歧杆菌之和)为7.5×106CFU/g。
为测定本发明制备的益生菌石斛花的各项理化指标，进行如下功能性评估实验：
以下实验均采用实施例3中制备的益生菌石斛花作为检测样品。
1、发酵剂B制备过程中菌体生长曲线。
在含牛奶和低聚果糖的培养基中中接种嗜酸乳杆菌和双歧杆菌菌种后，30摄氏度静置培养，并每两小时测定一次菌液浓度，采用分光光度计测定440nm波长下菌液的OD值，并根据时间制作时程曲线，即为菌体生长曲线(图2)，根据菌体生长特性以确定后续发酵生产过程中无氧发酵的终止时间点。
2、发酵剂对石斛花内部结构的分解效果。
将发酵前后的石斛花纵切面表皮组织采用石蜡包埋切片后进行电镜扫描，并拍照对比(图3A和图3B)。图3A为发酵前的石斛花片纵切面表皮组织，质地紧致，孔洞比较少，图3B为发酵后的石斛花片纵切面表皮组织，质地明显疏松，而且组织之间的孔洞有一定程度的增加，这表明乳酸菌的生长对石斛花组织的内部结构造成分解，有利于多糖等营养物质的渗出、释放。
3、测定发酵过程中羟基自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除率。
根据文献：高石花,叶高杰,覃江克,等.油茶多糖和多酚的体外抗氧化活性研究[J].食品工业,2013(11):163-166.中提供的方法测定发酵过程中益生菌石斛花对羟基自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除率。结果如图4、图5、图6。
4、测定发酵过程中益生菌发酵石斛花中的总酚含量。
根据文献：李达，马聪玉，吕青林，等.不同产地脱脂乳木果仁总酚含量测定及其生物活性[J].中国药科大学学报,2018(5).提供的总酚测定方法，测定发酵过程中益生菌发酵石斛花中的总酚含量，结果如图7所示。
5、四种功能酶活测定结果与分析
5.1超氧化物歧化酶(SOD酶)酶活比较
由图8可以看出，在发酵前8天，实验组发酵石斛花中SOD酶酶活迅速上升，达到最大值8600U/L，短时间酶活降低后，又开始持续上升，30天发酵后实验组SOD酶酶活高于空白组11.6％。
5.2蛋白酶酶活比较
由图9可以看出，在整个发酵过程中，实验组的整体酶活都是高于空白对照组，实验组分别在第8天和第24天出现两个峰值分别是1840.8U/mL和2490.4U/mL，30天发酵后实验组比空白对照组增加了62.68％。
5.3淀粉酶酶活比较
由图10可以看出，在总体发酵过程中实验组和空白组的淀粉酶酶活没有出现太大的差别，实验组酶活在24天达到最高为334.6U/L，30天发酵后实验组和空白对照组的酶活几乎一致，说明发酵石斛花不因微生物的介入而降低石斛花自身内含淀粉酶活力的减少。
5.4脂肪酶酶活比较
由图11可以看出，在30天发酵过程中，实验组脂肪酶酶活在前20天都是大幅度高于空白对照组，实验组的脂肪酶酶活在第4天达到最高值450U/L，而空白对照组的脂肪酶酶活一直处于比较低的水平最高为55U/L。说明发酵石斛花具有显著的消除脂肪的能力，可达到一定的减肥作用。
6、发酵石斛花中总糖、总氨基酸的测定结果与分析
6.1总多糖含量的比较
由图12可以看出，实验组和空白对照组总糖含量变化趋势保持了一致性，都是总体呈现上升的趋势，这是因为石斛鲜花内含有大量的石斛多糖，随着发酵时间的变化会不断有石斛多糖随着汁液进入到整个发酵体系内。同时可见，发酵前期第8天之前，实验组中多糖含量明显高于对照组，是因为微生物的生长作用分解了石斛花的组织结构，达到了释放内含多糖的效果。后期实验组多糖含量低于同期对照组，是因为微生物的代谢消耗了部分多糖碳源。但是从图9可以看出，实验组的总糖含量是一直小于空白对照组的，是因为部分石斛多糖被微生物所利用作为其自身生长所需要的碳源，30天发酵完成后实验组和空白对照组总糖含量达到最大值为131mg/mL。
6.2总氨基酸含量的比较
由图13可以看出，实验组氨基酸含量变化幅度比较大，在发酵的第8天达到最大值为1455μg/mL，之后开始下降，在第24天又有一个小幅度的上升，这是因为前8天菌种快速生长，产生大量的蛋白酶，分解了蛋白质产生了氨基酸供菌种生长。空白对照组的氨基酸含量变化比较稳定，从发酵第4天开始一直保持小幅上升的趋势，在发酵第20天达到最大值为1125μg/mL，之后小幅度下降，30天发酵后实验组氨基酸含量比对照组高17.22％。
7、发酵过程pH值的变化
由图14可知，整个发酵过程中pH值呈现先下降后轻微上升的变化趋势，发酵的第16天达到最低值pH为3.74。前期pH下降缘于好氧发酵消耗蛋白质产生氨基酸，中期轻微上升缘于氨基酸小分子合成菌体蛋白，后期因乳酸菌介入代谢出乳酸等有机酸造成pH保持偏酸性。
综上所述，石斛花产品中含功能性益生菌及其代谢产物，产品中除保留了石斛花自身的营养成分外，还包含益生菌、石斛多糖、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等多营养成分，具有清除自由基、抗衰老、抗菌消炎、增强机体免疫等多种保健功能。益生菌分解石斛花微观结构，促进多糖成分的溶出，益生菌生长、增殖作用实现了石斛花组织结构的分解，促进了石斛花多糖的释放，多糖释放率提高了52.2％。采用冻干方式干燥，最大程度保留了石斛花的挥发性精油成分及益生菌，益生菌活体菌数可达到8.5×106CFU/g。益生菌石斛花产品抗氧化活性显著提升，酶蛋白活力显著提高。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。

Claims (9)

1.一种益生菌石斛花的加工方法，其特征在于，包含如下具体步骤：
(1)鲜石斛花预处理：人工采收鲜石斛花，分拣除杂后，清水漂洗表面浮尘等杂质，在40℃～50℃条件下，经4-6小时烘干，脱除表面水分后，4℃-10℃冷藏备用；
(2)发酵基质调配：取预处理后的鲜石斛花，用喷雾器喷洒清水至花表面，达到湿润而手握成团不滴水程度，在110℃～115℃下湿热灭菌5min-10min，装入500-1000mL可抽滤发酵瓶，冷却至室温，待接入发酵剂；
(3)发酵剂制备：将灵芝菌UIM-135接入马铃薯葡萄糖液体培养基，在28℃～30℃，150～180r/min的条件下振荡培养3～4天，收集菌丝球作为发酵剂A；以含3％-5％牛奶、4～8％低聚果糖的MS培养基在30℃～35℃下对嗜酸乳杆菌和双歧杆菌进行液体静置培养，取15～20小时培养的菌液作为发酵剂B；
(4)石斛花发酵：石斛花发酵工艺采用两段发酵法，前段发酵采用发酵剂A进行好氧发酵，后段发酵采用发酵剂B进行厌氧发酵；
(5)益生菌石斛花干燥：取后段发酵5-15天后的石斛花发酵物，摊铺于托盘上，厚度0.5-1.0cm，-25℃预冻5h后，在-40℃条件下冷冻干燥18h，所得成品分装于真空密封袋，即得到所述益生菌石斛花产品。
2.根据权利要求1中所述的一种益生菌石斛花的加工方法，其特征在于：所述鲜石斛花为处于花苞期的鲜石斛花，花瓣尚未展开，包裹于花苞内，于开花前1～4h采摘，并于采摘后0.5～2h内预处理。
3.根据权利要求1中所述的一种益生菌石斛花的加工方法，其特征在于：所述鲜石斛花取自铁皮石斛、金钗石斛、细叶石斛、重唇石斛、喉红石斛、长苏石斛、球花石斛、翅梗石斛、紫皮石斛、铜皮石斛、束花石斛、鼓槌石斛、黄喉石斛、串珠石斛中的一种或多种。
4.根据权利要求1中所述的一种益生菌石斛花的加工方法，其特征在于：所述前段发酵具体步骤为在已装入预处理后石斛花的可抽滤发酵瓶中按10％～15％接种量接入UIM-135菌丝球，轻搅拌匀后，置于28℃～30℃恒温发酵，每日经发酵瓶抽滤口强制通入无菌空气1～3次，以维持好氧条件；持续发酵5-15天后，石斛花间肉眼可见UIM-135菌丝生成后，前段发酵结束。
5.根据权利要求1中所述的一种益生菌石斛花的加工方法，其特征在于：所述后段发酵的具体步骤为在前段发酵周期终点时，继续以5％～10％接种量，喷洒接入发酵剂B，摇匀，经发酵瓶抽滤口抽出空气后，密闭条件下30℃～40℃厌氧发酵5～15天；前5天每天搅拌2～3次，每次搅拌1～5分钟，之后不再搅拌，静置发酵至终点。
6.根据权利要求1中所述的一种益生菌石斛花的加工方法，其特征在于：所述发酵剂B中菌体的总浓度为5×104～5CFU/mL，嗜酸乳杆菌和双歧杆菌的活菌数之比为1～10：1。
7.一种如权利要求1-6任一项中所述加工方法制备的益生菌石斛花，其特征在于：包含活体益生菌数为8.5×104～6CFU/g，总多糖含量为90～131mg/mL，总氨基酸含量为1125～1455μg/mL，总酚含量为170～185mg/L，pH值3.74～3.87。
8.根据权利要求7中所述的益生菌石斛花，其特征在于：还包含四种功能酶，分别为超氧化物歧化酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶。
9.根据权利要求8中所述的益生菌石斛花，其特征在于：所述超氧化物歧化酶酶活为6500～8500U/L；蛋白酶的酶活为1840.8～2490.4U/L；淀粉酶酶活为325～334.6U/L；脂肪酶酶活为100～450U/L。
CN201811583032.3A 2018-12-24 2018-12-24 一种益生菌石斛花的加工方法 Pending CN109528932A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811583032.3A CN109528932A (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种益生菌石斛花的加工方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811583032.3A CN109528932A (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种益生菌石斛花的加工方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109528932A true CN109528932A (zh) 2019-03-29

Family

ID=65856943

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811583032.3A Pending CN109528932A (zh) 2018-12-24 2018-12-24 一种益生菌石斛花的加工方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109528932A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111357841A (zh) * 2020-03-26 2020-07-03 湖南营养树生物科技有限公司 一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌白茶的制备方法
TWI737159B (zh) * 2020-02-07 2021-08-21 蕾迪詩生物科技股份有限公司 紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法
CN113966832A (zh) * 2020-07-22 2022-01-25 安琪纽特股份有限公司 一种石斛发酵物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105146509A (zh) * 2015-07-28 2015-12-16 昆明宝成生物科技有限公司 一种新型益生菌石斛酵素及其生产工艺
CN105707628A (zh) * 2016-03-11 2016-06-29 三株福尔制药有限公司 一种益生菌发酵铁皮石斛原球茎的组合物及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105146509A (zh) * 2015-07-28 2015-12-16 昆明宝成生物科技有限公司 一种新型益生菌石斛酵素及其生产工艺
CN105707628A (zh) * 2016-03-11 2016-06-29 三株福尔制药有限公司 一种益生菌发酵铁皮石斛原球茎的组合物及其制备方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI737159B (zh) * 2020-02-07 2021-08-21 蕾迪詩生物科技股份有限公司 紫皮石斛抗氧化萃取物的製備方法
CN111357841A (zh) * 2020-03-26 2020-07-03 湖南营养树生物科技有限公司 一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌白茶的制备方法
CN113966832A (zh) * 2020-07-22 2022-01-25 安琪纽特股份有限公司 一种石斛发酵物及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104818229B (zh) 一种馒头发酵剂及其制备方法和应用
KR101082246B1 (ko) 함초가 함유된 함초누룩 및 그 제조방법
CN109528932A (zh) 一种益生菌石斛花的加工方法
CN106434264A (zh) 一种利用混合菌剂强化传统食醋固态发酵的方法及其应用
CN114651888B (zh) 小叶苦丁乳杆菌发酵茶及其制备方法
CN112931652A (zh) 一种具有降血糖功效的陈皮金花条形红茶的制作工艺
CN1568790A (zh) 黄豆酱混合菌种发酵剂的生产方法
CN117070427B (zh) 一株布氏乳杆菌及其青贮饲料发酵剂
CN111955649B (zh) 一种基于茯苓菌发酵脱除豆粕和大豆膳食纤维豆腥味的方法和产品
KR102235334B1 (ko) 전복, 굴껍질을 이용한 칼슘분말의 제조방법, 이에 의해 제조된 칼슘분말 및 이를 포함하는 식품, 화장료, 의약품
CN110604299B (zh) 一种刺梨菇类口服液及其制备方法
KR102068647B1 (ko) 버섯소금의 제조방법.
CN109303129A (zh) 一种青钱柳红茶及其制备方法
CN103829040A (zh) 一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用
KR100868931B1 (ko) 뽕나무 가공사료를 이용한 사슴 사육방법
KR101462257B1 (ko) 풍미와 안정성이 향상된 막걸리의 제조방법
KR101954349B1 (ko) 발효 커피 생두의 제조방법
KR20090129277A (ko) 김밥용 녹차 김 및 그 제조방법
KR101814941B1 (ko) 맨드라미꽃 물추출물의 유산균 발효액을 함유하는 항산화 기능성 식품 조성물 및 그 제조방법
KR20160079388A (ko) 개량식 한식메주의 제조방법 및 이를 이용한 된장과 간장의 제조방법
CN106544224A (zh) 一种功能性石榴冰酒的制备方法
KR102007569B1 (ko) 기호도 및 기능성이 향상된 섬애쑥 발효물 및 이의 제조방법
CN112574850A (zh) 一种药曲老陈醋及其酿造方法
CN111802488A (zh) 一种调味茯茶
KR20200124593A (ko) 노니 청의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190329

RJ01 Rejection of invention patent application after publication