TWI572715B - 纖維化症預防或治療劑 - Google Patents
纖維化症預防或治療劑 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI572715B TWI572715B TW100137418A TW100137418A TWI572715B TW I572715 B TWI572715 B TW I572715B TW 100137418 A TW100137418 A TW 100137418A TW 100137418 A TW100137418 A TW 100137418A TW I572715 B TWI572715 B TW I572715B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- sirna
- seq
- rna
- sequence represented
- strand
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本發明係關於一種纖維化症治療劑。具體而言,係關於一種以編碼Transforming Growth Factor(TGF,轉型生長因子)-β1之基因為目標之small interfering RNA(siRNA,小分子干擾RNA)及使用其之醫藥。
所謂肺纖維化症,係指因過剩之膠原蛋白與其他細胞外基質之堆積而使肺組織纖維化之症狀。於肺纖維化症中,特發性肺纖維化症係中間存活時間平均為3年且5年存活率為20~40%之預後不良之慢性難治性疾病。作為肺纖維化症之治療,一直使用類固醇劑或免疫抑制劑,但目前無可改善預後之有效之治療法,因此期待新的治療藥之開發。
近年來,已明確很多疾病因基因而發病,針對肺纖維化症亦報告有與較多之基因相關(專利文獻1-4、非專利文獻1-6)。作為與肺纖維化症相關之主要因子,報告有TGF-β1(專利文獻1-2、非專利文獻2-6)、Smad3(非專利文獻1)、MCP-1(專利文獻3)等。
另一方面,核酸尤其是siRNA會引起存在於細胞中之與特定序列相同或大致相同之基因之mRNA(messenger RNA,信使RNA)的分解而阻礙目標基因之表現(RNA干擾)。因此,藉由RNA干擾之目標基因之表現阻礙功能於減輕或治療由特定基因或基因群之異常表現所引起的疾病症狀之方面較為有用。針對肺纖維化症相關基因,亦報告有嘗試使用siRNA來抑制該基因之表現(專利文獻1-4、非專利文獻1-6)。
然而,迄今為止所報告之技術僅顯示出siRNA序列對實驗動物(小白鼠或大白鼠)之疾病相關基因之抑制效果,而對人類基因未充分顯示出特異之效果。又,關於siRNA之抑制效果,顯示200 nM(非專利文獻1)、20-500 nM(非專利文獻5)之效果,但針對可以低濃度有效地抑制肺纖維化症相關基因之表現之核酸分子未作揭示。
針對以TGF-β1基因為目標之siRNA,迄今為止報告有數十種siRNA(專利文獻1、5-7),TGF-β1之基因之全長為2346鹼基(GenBank Accession No. NM_000660.3),自該基因之全長中選出約20 mer左右之序列之組合存在無數種,因此自其中設計可更有效地抑制該基因之表現之dsRNA或siRNA分子之情況並不容易。
[專利文獻1]國際公開第2007/109097號手冊
[專利文獻2]國際公開第2003/035083號手冊
[專利文獻3]日本專利特開2007-119396號公報
[專利文獻4]日本專利特表2009-516517號公報
[專利文獻5]國際公開第2009/061417號手冊
[專利文獻6]國際公開第2008/109548號手冊
[專利文獻7]國際公開第2007/79224號手冊
[非專利文獻1] Wang Z,Gao Z,Shi Y,Sun Y,Lin Z,Jiang H,Hou T,Wang Q,Yuan X,Zhu X,Wu H,Jin Y,J Plast Reconstr Aesthet Surg,1193-1199,60,2007
[非專利文獻2] Hwang M,Kim HJ,Noh HJ,Chang YC,Chae YM,Kim KH,Jeon JP,Lee TS,Oh HK,Lee YS,Park KK,Exp Mol Pathol,48-54,81,2006
[非專利文獻3] Takabatake Y,Isaka Y,Mizui M,Kawachi H,Shimizu F,Ito T,Hori M,Imai E,Gene Ther,965-973,12,2005
[非專利文獻4] Xu W,Wang LW,Shi JZ,Gong ZJ,Hepatobiliary Pancreat Dis Int,300-308,8,2009
[非專利文獻5] Liu XJ,Ruan CM,Gong XF,Li XZ,Wang HL,Wang MW,Yin JQ,Biotechnol Lett,1609-1615,27,2005
[非專利文獻6]福元重太郎、末次彩子、原田知佳、河口知允、濱田直樹、前山隆茂、桑野和善、中西洋一,日本呼吸器學會雜誌,185,46,2008
本發明係關於提供一種對於治療纖維化症有效之siRNA及使用其之醫藥。
為解決上述課題,本發明者等人進行了潛心研究,結果發現:以人類TGF-β1基因為目標之特定之siRNA於人類細胞中可有效地抑制TGF-β1之表現,進而於肺纖維化症模型小白鼠之肺中,可於不誘導干擾素反應之情況下改善肺纖維化症之症狀。
即,本發明係關於以下1)~19)者。
1)一種siRNA,其係將選自由序列編號1之鹼基編號1285~1318號之鹼基、1398~1418號之鹼基、1434~1463號之鹼基、1548~1579號之鹼基、1608~1628號之鹼基、1700~1726號之鹼基、1778~1798號之鹼基、1806~1826號之鹼基及1887~1907號之鹼基所組成之群中的連續之17~23鹼基設為目標序列,且全長為30核苷酸以下。
2)如上述1)之siRNA,其中siRNA選自以下之(a)~(s)中:
(a)由序列編號2所表示之正義序列與序列編號3所表示之反義序列形成之siRNA、
(b)由序列編號4所表示之正義序列與序列編號5所表示之反義序列形成之siRNA、
(c)由序列編號6所表示之正義序列與序列編號7所表示之反義序列形成之siRNA、
(d)由序列編號8所表示之正義序列與序列編號9所表示之反義序列形成之siRNA、
(e)由序列編號10所表示之正義序列與序列編號11所表示之反義序列形成之siRNA、
(f)由序列編號12所表示之正義序列與序列編號13所表示之反義序列形成之siRNA、
(g)由序列編號14所表示之正義序列與序列編號15所表示之反義序列形成之siRNA、
(h)由序列編號16所表示之正義序列與序列編號17所表示之反義序列形成之siRNA、
(i)由序列編號18所表示之正義序列與序列編號19所表示之反義序列形成之siRNA、
(j)由序列編號20所表示之正義序列與序列編號21所表示之反義序列形成之siRNA、
(k)由序列編號22所表示之正義序列與序列編號23所表示之反義序列形成之siRNA、
(l)由序列編號24所表示之正義序列與序列編號25所表示之反義序列形成之siRNA、
(m)由序列編號26所表示之正義序列與序列編號27所表示之反義序列形成之siRNA、
(n)由序列編號28所表示之正義序列與序列編號29所表示之反義序列形成之siRNA、
(o)由序列編號30所表示之正義序列與序列編號31所表示之反義序列形成之siRNA、
(p)由序列編號32所表示之正義序列與序列編號33所表示之反義序列形成之siRNA、
(q)由序列編號34所表示之正義序列與序列編號35所表示之反義序列形成之siRNA、
(r)由序列編號36所表示之正義序列與序列編號37所表示之反義序列形成之siRNA、
(s)由序列編號54所表示之正義序列與序列編號55所表示之反義序列形成之siRNA。
3)如上述2)之siRNA,其中使上述siRNA之正義鏈之自3'末端之末端側起之懸突核苷酸除外的連續之1~10核苷酸轉換為DNA。
4)如上述2)之siRNA,其中使上述siRNA之反義鏈之自5'末端之末端側起連續之1~10核苷酸轉換為DNA。
5)如上述2)之siRNA,其中使上述siRNA之正義鏈之自3'末端之末端側起之懸突核苷酸除外的連續之1~10核苷酸轉換為DNA,且使反義鏈之自5'末端之末端側起連續之1~10核苷酸轉換為DNA。
6)如上述2)之siRNA,其中使反義鏈之5'末端單磷酸化或單硫代磷酸化。
7)一種醫藥組合物,其係含有如上述1)至6)中任一項之siRNA者。
8)一種TGF-β1基因表現抑制劑,其係含有如上述1)至6)中任一項之siRNA作為有效成分者。
9)一種纖維化症預防或治療劑,其係含有如上述1)至6)中任一項之siRNA作為有效成分者。
10)一種肺纖維化症或肺癌之預防或治療劑,其係含有如上述1)至6)中任一項之siRNA作為有效成分者。
11)一種如上述1)至6)中任一項之siRNA之用途,其係用以製造TGF-β1基因表現抑制劑。
12)一種如上述1)至6)中任一項之siRNA之用途,其係用以製造纖維化症預防或治療劑。
13)一種如上述1)至6)中任一項之siRNA之用途,其係用以製造肺纖維化症或肺癌之預防或治療劑。
14)如上述1)至6)中任一項之siRNA,其係用以抑制TGF-β1基因表現者。
15)如上述1)至6)中任一項之siRNA,其係用以預防或治療纖維化症者。
16)如上述1)至6)中任一項之siRNA,其係用以預防或治療肺纖維化症或肺癌者。
17)一種TGF-β1基因表現抑制方法,其特徵在於對人類或動物投予如上述1)至6)中任一項之siRNA。
18)一種纖維化症預防或治療方法,其特徵在於對人類或動物投予如上述1)至6)中任一項之siRNA。
19)一種肺纖維化症或肺癌之預防或治療方法,其特徵在於對人類或動物投予如上述1)至6)中任一項之siRNA。
本發明之siRNA可以低濃度有效地抑制或阻礙TGF-β1之表現,因此作為用以預防或治療纖維化症之醫藥較為有用。
本發明之siRNA之目標序列係選自由序列編號1之鹼基編號1285~1318號之鹼基、1398~1418號之鹼基、1434~1463號之鹼基、1548~1579號之鹼基、1608~1628號之鹼基、1700~1726號之鹼基、1778~1798號之鹼基、1806~1826號之鹼基及1887~1907號之鹼基所組成之群中的連續之17~23鹼基,此處,作為選自各群中的連續之17~23鹼基,較佳為19~23鹼基,更佳為21鹼基。
序列編號1所表示之鹼基序列為TGF-β1之mRNA之鹼基序列,該序列資訊於GenBank中註冊為GenBank Accession No. NM_000660.3。
本發明之siRNA係作為與TGF-β1之mRNA之上述目標序列互補之序列的反義鏈及作為與該反義鏈互補之序列的正義鏈雜交而成者,其具有切割該TGF-β1之mRNA之活性(RNA干擾作用),且具有阻止該mRNA之轉譯之能力,即阻礙該TGF-β1基因之表現之能力。
關於本發明之siRNA之核苷酸長,正義鏈、反義鏈可為相同之核苷酸長,亦可為不同之核苷酸長,其全長為30核苷酸以下,較佳為25核苷酸以下,更佳為23核苷酸以下或21核苷酸。
又,正義鏈及反義鏈之兩端可為平滑末端,亦可各自之鏈之3'側為懸突(突出末端)。此處,所謂「平滑末端」,係指於雙鏈RNA之末端部分,正義鏈之末端區域及與其配對之反義鏈之末端區域不形成單鏈部分而相配對之結構。又,「懸突」亦稱為懸端(dangling end),係指於雙鏈RNA之末端部分之正義鏈之末端區域或與其配對的反義鏈之末端區域不存在相配對之鹼基,因此無法形成雙鏈而存在單鏈部分(突出末端)之結構。
突出末端部分之鹼基數為1~10核苷酸,較佳為1~4核苷酸,更佳為1~2核苷酸。再者,突出末端之長度於兩條鏈之間無關係,可為相互不同之長度。突出末端部分之核苷酸可為RNA,亦可為DNA,較佳為與作為目標之TGF-β1之mRNA互補之鹼基,但只要保持上述RNA干擾能力,則亦可為不與其互補之鹼基。
本發明之siRNA除為由2條不同鏈構成之1條雙鏈RNA以外,亦可為藉由1條鏈成為莖環結構而形成之雙鏈RNA。即,本發明之siRNA中亦包括於正義鏈之5'末端與反義鏈之3'末端形成有包含2~4核苷酸的環之RNA、於正義鏈之3'末端與反義鏈之5'末端形成有包含2~4核苷酸的環之RNA。進而,亦包括於正義鏈之5'末端與反義鏈之3'末端及正義鏈之3'末端與反義鏈之5'末端之兩端形成有包含2~4核苷酸的環之RNA。
本發明之siRNA與目標序列較理想為同一序列,但於可誘導上述RNA干擾之範圍內,亦可為實質上同一之序列,即相同之序列。具體而言,只要本發明之siRNA之反義鏈序列與目標序列雜交,則可存在1個或數個(例如,2、3、4個)失配。即,於本發明之siRNA中包含:相對於目標序列取代、加成或缺失1個或數個鹼基且可誘導RNA干擾者;或與目標序列具有85%以上、較佳為90%以上、更佳為95%以上、進而較佳為98%以上之序列同一性且可誘導RNA干擾者。
再者,此時之雜交條件係於將本發明之siRNA投予至生物體內而用作醫藥之情形時,為生物體內之條件,於將本發明之siRNA作為試劑用於生物體外(in vitro)之情形時,為中度嚴格之條件或高度嚴格之條件,作為此種條件,例如可列舉如下雜交條件:400 mM之NaCl、40 mM之PIPES(1,4-Piperazinediethanesulfonic acid,1,4-哌嗪二乙磺酸)、pH值為6.4、1 mM之EDTA(ethylene diamine tetra acetic acid,乙二胺四乙酸)、於50℃~70℃下、12~160小時。該等條件為業者所周知,記載於Sambrook et al.(Molecular Cloning: A Laboratory Manual second edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York,USA,1989)中。
又,序列同一性只要藉由李普曼-皮爾森法(Lipman-Pearson法;Science,227,1435,(1985))等計算即可,例如,可藉由利用遺傳資訊處理軟件Genetyx-Win(Ver. 5.1.1;軟件開發)之同源性解析(Search homology)程式,將Unit size to compare(ktup)設為2進行解析而算出。
又,於本發明之siRNA中,只要可誘導上述RNA干擾,則包含將正義鏈或反義鏈中任一者之核苷酸全部轉換為DNA者(混合型)、或將正義鏈及/或反義鏈之一部分核苷酸轉換為DNA者(嵌合型)。
此處,所謂RNA核苷酸向DNA之轉換,係指將AMP轉換為dAMP,將GMP轉換為dGMP,將CMP轉換為dCMP,將UMP轉換為dTMP。
作為混合型,較佳為將正義鏈之核苷酸轉換為DNA者。作為嵌合型,可列舉將下游側(正義鏈之3'末端側、反義鏈之5'末端側)之一部分核苷酸轉換為DNA者。具體而言,可列舉:將正義鏈之3'末端側及反義鏈之5'末端側之核苷酸一起轉換為DNA者、將正義鏈之3'末端側或反義鏈之5'末端側之某些核苷酸轉換為DNA者。又,轉換之核苷酸長較佳為設為不超過相當於RNA分子之1/2之核苷酸之任意長,例如可列舉自末端起1~13核苷酸,較佳為可列舉1~10核苷酸。就RNA干擾效果、RNA分子之穩定性、安全性等方面而言,作為較佳之嵌合型siRNA,例如可列舉:將核苷酸長分別為19~23且自正義鏈之3'末端側起去除懸突核苷酸之1~10、較佳為1~8、更佳為1~6之核苷酸及自反義鏈之5'末端側起1~10、較佳為1~8、更佳為1~6之核苷酸以任意數連續地轉換為DNA者(參照下述[表2])。又,於此情形時,更佳為正義鏈(去除懸突核苷酸)與反義鏈之DNA轉換數相同。
又,只要本發明之siRNA可誘導上述RNA干擾,則該核苷酸(核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸)可為對糖、鹼基及/或磷酸鹽進行化學修飾而成之核苷酸類似物。作為對鹼基進行修飾而成之核苷酸類似物,例如可列舉:5位修飾尿苷或胞苷(例如,5-丙炔基尿苷、5-丙炔基胞苷、5-甲基胞苷、5-甲基尿苷、5-(2-胺基)丙基尿苷、5-鹵基胞苷、5-鹵基尿苷、5-甲氧基尿苷等);8位修飾腺苷或鳥苷(例如,8-溴鳥苷等);去氮核苷酸(例如7-去氮-腺苷等);O-及N-烷基化核苷酸(例如,N-6-甲基腺苷等)等。
又,作為對糖進行修飾而成之核苷酸類似物,例如可列舉:核糖核苷酸之2'-OH經H、OR、R、鹵素原子、SH、SR、NH2、NHR、NR2或CN(此處,R表示碳數1-6之烷基、烯基或炔基)等取代之2'位糖取代體,使5'末端之-OH單磷酸化或單硫代磷酸化之5'末端磷酸化體、5'末端單硫代磷酸化體。
作為對磷酸鹽進行修飾而成之核苷酸類似物,以硫代磷酸酯基取代使鄰接之核糖核苷酸相結合之磷酸酯基而成者。
又,本發明之siRNA係除上述核苷酸類似物以外亦可於自正義鏈之5'末端側或3'末端側起第1~6號核苷酸(5'末端、3'末端或末端以外之內部之鹼基、糖)中之至少1個上直接或經由連結子結合特定之取代基或功能性分子,較佳為於自正義鏈之5'末端側起第1~6號、較佳為第1~4號核苷酸中之至少1個上結合該取代基或功能性分子。
此處,作為取代基,作為一例,可列舉:胺基;巰基;硝基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之烷基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之胺基烷基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之硫代烷基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之烷氧基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之胺基烷氧基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之硫代烷氧基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之單或二烷基胺基;碳數1~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之烷硫基;碳數2~40(較佳為2~20,更佳為4~12)之聚環氧乙烷基;碳數3~39(較佳為3~21,更佳為3~12)之聚環氧丙烷基等。藉由結合該等取代基,可顯著地增強RNA干擾效果。
作為功能性分子,可例示:糖、蛋白質、肽、胺基酸、DNA、RNA(包含tRNA(Transfer RNA,轉移RNA))、適體、修飾核苷酸、低分子有機、無機材料、膽固醇、樹枝狀聚合物、脂質、高分子材料等。藉由加成功能性分子,可兼具優異之RNA干擾效果與基於該功能性分子之有用效果。
作為上述糖,例如可列舉:葡萄糖、半乳糖、葡糖胺、半乳胺糖等單糖,任意組合該等之寡糖或多糖等。
作為上述蛋白質,可使用存在於生物體內之蛋白質、具有藥理作用之蛋白質、具有分子識別作用之蛋白質等,作為該蛋白質之一例,可列舉:輸入蛋白b蛋白質、抗生物素蛋白、抗體等。
作為上述DNA,具體而言,可例示鹼基長為5~50之DNA,較佳為可例示鹼基長為5~25之DNA。
作為上述肽,例如可列舉:八角精胺酸肽R8、核定位化訊息肽序列(HIV-1 Tat或SV40T抗原等)、核外轉移性訊息肽(HIV-1 Rev或MAPKK等)、細胞膜融合肽等。作為上述修飾核苷酸,例如可列舉:對硫代磷酸酯型、硼烷磷酸酯型DNA/RNA等磷酸骨架進行修飾而成者;2'-OMe修飾RNA、2'-F修飾RNA等2'修飾核苷酸;使LNA(Locked Nucleic Acid,鎖核酸)或ENA(2'-0,4'-C-Ethylene-bridged nucleic acids,2'-0,4'-C-乙烯橋接核酸)等核苷酸之糖分子交聯而成之修飾核苷酸;PNA(peptide nucleic acid,肽核酸)、嗎啉基核苷酸等基本骨架不同之修飾核苷酸等(參照國際公開第2008/140126號手冊、國際公開第2009/123185號手冊)。
作為上述低分子有機、無機材料,例如可列舉:Cy3、Cy5等螢光物質;生物素;量子點;金微粒子等。作為上述樹枝狀聚合物,例如可列舉:聚醯胺胺樹枝狀聚合物等。作為上述脂質,除例如亞麻油酸、DOPE(1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine,1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷醯乙醇胺)等以外,亦可列舉國際公開第2009/123185號手冊中所記載之具有2個疎水基之雙鏈脂質。作為上述高分子材料,例如可列舉:聚乙二醇、聚乙烯亞胺等。
此處,作為具有功能性分子之基,可為功能性分子之殘基本身,又,亦可為二官能性連結子之一側之官能基結合於功能性分子之殘基上之基。即,於前者之情形時,功能性分子直接結合於上述正義鏈RNA之特定部位,於後者之情形時,功能性分子經由二官能性連結子結合於上述正義鏈RNA之特定部位。此處,作為二官能性連結子,只要為包含2個官能基之連結子則無特別限制,例如可使用:N-琥珀醯亞胺3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯、N-4-馬來醯亞胺丁酸、S-(2-吡啶基二硫)半胱胺、碘乙醯氧琥珀醯亞胺、N-(4-馬來醯亞胺丁醯氧基)琥珀醯亞胺、N-[5-(3'-馬來醯亞胺丙基胺)-1-羧基戊基]亞胺基二乙酸、N-(5-胺基戊基)-亞胺基二乙酸等。
對於上述正義鏈RNA中之取代基或功能性分子或連結該等之連結子之結合部位,並無特別限定,較佳為將該等取代為構成正義鏈RNA之特定核苷酸之磷酸部分之羥基的氫原子而結合。
作為本發明之siRNA,具體而言,例如可例示:由以下(a)~(s)所示之正義序列與反義序列形成之雙鏈RNA分子。
又,作為嵌合型,可較佳地列舉:使自正義鏈之3'末端側起1~8之核苷酸及自反義鏈之5'末端側起1~6之核苷酸以任意數連續地轉換為DNA者,例如若使用上述(1)之情形進行例示,則如下所示。
表中,大寫字母表示RNA,小寫字母表示DNA,下劃線表示懸突處。
本發明之siRNA之製造方法無特別限定,可藉由公知之製造方法,例如,可於生物體外進行化學合成,或可藉由使用啟動子及RNA聚合酶之轉錄系而合成。
化學合成可將包含作為siRNA構成要素之核酸分子之亞醯胺樹脂設為原料,藉由核酸合成裝置進行合成。
利用轉錄系之合成可藉由微調髮夾型RNA之試管內轉錄法而合成雙鏈RNA。
如此所獲得之本發明之siRNA如下述實施例所示,於源自人類肺胞上皮之細胞中,可以mRNA水準有效地抑制TGF-β1之表現,進而於肺纖維化症模型小白鼠之肺中,在不誘導干擾素反應之情況下發揮肺纖維化症之症狀改善效果。
因此,本發明之siRNA及可使該siRNA於投予對象內表現之表現載體作為用以投予至人類或動物之醫藥(醫藥組合物)較為有用。具體而言,作為用以抑制TGF-β1基因表現之醫藥、用以預防、治療由TGF-β1之過剩表現引起之疾病例如纖維化症之醫藥、即纖維化症之預防或治療劑較為有用。
此處,作為引起肺之纖維化之疾病,涉及到間質性肺炎、囊胞性纖維化症、慢性阻塞性肺疾病(COPD,Chronic obstructive pulmonary disease)、急性呼吸促迫症候群(ARDS,Acute respiratory distress syndrome)、炎症性肺疾病、肺感染症、放射性肺炎、藥物性間質性肺炎、伴隨著膠原病之間質性肺炎等多方面,尤佳為作為無法特定原因之間質性肺炎的特發性間質性肺炎(IIPs,Idiopathic interstitial pneumonias)中之特發性肺纖維化症(IPF,idiopathic pulmonary fibrosis)。特發性間質性肺炎(IIPs)作為臨床病理學上之疾病,包括特發性肺纖維化症(IPF)、非特異間質性肺炎(NSIP,non-specific interstitial pneumonia)、特發性器質化肺炎(COP(cryptogenic organizing pneumonia,隱源性機化性肺炎)/BOOP(bronchiolitis obliterans with organizing pneumonia,閉塞性細支氣管機化性肺炎))、急性間質性肺炎(AIP,acute interstitial pneumonitis)、剝離性間質性肺炎(DIP,desquamative interstitial pneumonia)、伴隨著呼吸細支氣管炎之間質性肺疾病(RB-ILD,respiratory bronchiolitis-interstitial lung diseas)、淋巴細胞間質性肺炎(LIP,Lymphocytic interstitial pneumonia)等。
又,關於TGF-β1報告有,促進癌、尤其是肺腺癌之浸潤或轉移(Mol Cell Biochem(2011) 355: 309. 314,Cancer Genomics Proteomics 2010,7,217),TGF-β1可藉由於癌治療後之正常組織之損傷部位過剩表現並以TGF-β1路徑為目標而抑制該正常組織之損傷(The Oncologist 2010;15: 350. 359)等,因此本發明之siRNA及可使該siRNA於投予對象內表現之表現載體作為癌、尤其是肺癌之預防或治療劑亦較為有用。
於使用本發明之siRNA作為醫藥之情形時,可直接使用,亦可與高度分支環狀糊精或環鏈澱粉形成複合體。此處,所謂高度分支環狀糊精,係使分支酶作用於支鏈澱粉上所生產者,係指具有內分支環狀結構部分與外分支結構部分之聚合度為50~5000之葡聚糖。此處,所謂內分支環狀結構部分,係指由α-1,4-葡糖苷結合與α-1,6-葡糖苷結合所形成之環狀結構部分,並且所謂外分支結構部分,係指結合於該內分支環狀結構部分之非環狀結構部分。作為高度分支環狀糊精之較佳之形態,可例示:上述葡聚糖之內分支環狀結構部分之聚合度為10~100者、上述葡聚糖之外分支結構部分之聚合度為40以上者、上述外分支結構部分之各單元鏈之聚合度平均為10至20者。又,高度分支環狀糊精已有市售,於本發明中亦可使用市售品。
環鏈澱粉係藉由α-1,4結合使葡萄糖結合而成之環狀α-1,4-葡聚糖,於螺旋結構之內側包含立體且具有深度之空腔部分。作為本發明所使用之環鏈澱粉中之葡萄糖之聚合度,並無特別限制,例如可例示10~500,較佳為可例示10~100,更佳為可例示22~50。環鏈澱粉可利用澱粉麥芽糖酶等酶,由葡萄糖製備。又,環鏈澱粉已有市售,於本發明中亦可使用市售品(參照國際公開第2009/61003號手冊)。
本發明之siRNA可使用1種以上之藥學上所容許之載體或賦形劑並利用常規方法而製劑化為醫藥組合物。該醫藥組合物可為經肺投予、經鼻投予、經口投予、直腸投予、注射等任一種投予形態之組合物,投予可為全身性或局部性中之任一者。根據其投予路徑,其劑形可為液劑、懸浮劑、乳劑、錠劑、丸藥、顆粒、膠囊劑、散劑、緩釋性製劑、栓劑、氣霧劑、噴霧等適於使用之任一者。
例如,於經鼻投予中,可將有效成分溶解於適當之溶劑(生理鹽水、醇等)中,藉由注入或滴鼻將該溶液投送至鼻內。或者,於經肺投予或經鼻投予中,可使用適宜之噴霧劑,例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適當之氣體,以使氣霧劑噴霧自加壓袋或噴霧器噴出之方式順利地投送有效成分。於加壓氣霧劑之情形時,投藥單位可藉由以投送計量分之方式設置閥來決定。進而亦可進行粉末吸入劑之方式之投予。
於注射之情形時,有效成分可於利用例如彈丸注射或連續注入之非經口投予(即靜脈內或肌肉內投予)用途中作為溶劑加以調配,較佳為可作為Hanks' solution或Ringer's solution、生理鹽水等生理學上具有相溶性之緩衝液加以調配。該溶劑可含有懸浮劑或穩定劑及/或分散劑等可調配之藥物。或者,有效成分可於使用前形成為粉末形態以使其與例如經殺菌之不含發熱性物質之水等適宜之賦形劑重組。注射用製劑可添加保存劑,並作為例如安瓿或複數次投予容器中之單位投予劑形而提供。
於經口投予之情形時,本發明之治療劑例如可為錠劑、顆粒、散劑、乳劑、膠囊、糖漿、水性或油性懸濁液或酏劑之形態。於為錠劑或丸藥形態之情形時,使胃腸管內之分散及吸收延遲,藉此帶來長時間持續之作用,因此可對組合物進行包衣。
作為藥學上所容許之載體或賦形劑,並無限定,可列舉:液體(例如水、油、生理鹽水、右旋糖水溶液、乙醇等)、固體(例如***膠、明膠、澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、滑石、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、角蛋白、膠體狀矽石、乾燥脫脂乳、甘油等)。又,本發明之治療劑亦可含有通常之醫藥組合物所調配之助劑、防腐劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑、著色劑、濕潤劑、乳化劑及pH值緩衝劑等中之適當者。
於本發明之醫藥組合物中可含有0.001~50質量%、較佳為0.01~10質量%、更佳為0.1~1質量%之本發明之siRNA。
關於本發明之醫藥組合物之投予量,只要應用有效量,則無特別限制,例如每1 kg體重較佳為0.0001~100 mg,更佳為0.002~1 mg。
於本發明之醫藥組合物中,亦可使用可於投予對象內表現該siRNA之表現載體來代替本發明之siRNA。
此情形時之表現載體例如可藉由將可編碼本發明之siRNA之DNA***適宜之基因治療用載體,例如腺病毒載體、腺病毒伴隨病毒(AAV,adeno-associated virus)載體或慢病毒載體等中而重組。
以下,利用實施例更詳細地說明本發明,但本發明之技術範圍並不限定於該等實施例。
設計下述表3所表示之以TGF-β1基因為目標之siRNA分子,藉由化學合成法合成各siRNA寡核苷酸,利用HPLC(high performance liquid chromatography,高效液相層析)純化法進行純化而使用。
使用源自人類肺胞上皮之A549細胞(DS Pharma Biomedical股份有限公司)。
將1×105個細胞播種於含有10%之胎牛血清之D-MEM培養基(Dulbecco's modified Eagle's Medium,含有100 unit/mL之青黴素,100 μg/mL之鏈黴素,12孔板)中。於37℃、5% CO2之條件下培養一夜後,將成為40%融合之A549細胞之培養基更換為無血清培養基。
使用上述表3所示之寡核苷酸作為siRNA,於細胞成為40%融合之時刻,使用Lipofectamine2000(Invitrogen公司)進行向上述細胞中之導入。
具體而言,於各孔中將2.0 μL之Lipofectamine2000添加於98 μL之OPTI-MEM(Invitrogen)中,於室溫下培養5分鐘(A溶液)。
將0.2 μM之siRNA溶液0.625 μL添加於99.375 μL之OPTI-MEM中(B溶液)中。將A及B溶液混和,於室溫下培養20分鐘。培養後,於12-孔板各孔中添加AB混和液。以siRNA最終濃度成為0.1 nM之方式進行添加。
添加siRNA及Lipofectamine混和液6小時後,將培養基更換為含有0.1%之BSA(牛血清白蛋白)及細胞激素(1 ng/mL之IL-1β及1 ng/mL之TNF-α)之D-MEM培養基,培養12小時。培養後自上清液中取樣。
細胞中全RNA提取係使用自動核酸提取裝置QuickGene-810(Fuji Film股份有限公司)與作為QuickGene-810之專用套組之QuickGene RNA cultured cell kitS(Fuji Film股份有限公司)。以1.0 mL之PBS(Phosphate Buffer Solution,磷酸緩衝液)清洗細胞,添加細胞溶解液0.5 mL,提取細胞中所含之全RNA。利用蹺蹺板型振盪機將添加有0.5 mL溶解液(LRC,已添加巰基乙醇)之12孔板攪拌5分鐘。藉由吸打使溶液往復5-6次而充分混合,並將溶液移至微量離心管中。添加420 μL乙醇,利用旋渦混合器攪拌15秒鐘後,利用QuickGene-810進行處理。於利用QuickGene-810之處理過程中,添加DNase(RQ1 RNase-free DNase,Promega)。所提取之全RNA樣品於進行下一處理之前係利用-80℃之冰箱保管。
根據260 nm下之吸光度之測定值計算自培養細胞提取之全RNA樣品中之RNA濃度(μg/mL)(對照:TE buffer)。根據該值,將各樣品中RNA量相當於0.1 μg之溶液量添加於96孔板中。於其中添加蒸餾水,使總量為12 μL,進而添加QuantiTect Reverse Transcription Kit(QIAGEN)中所含之gDNA Wipeout Buffer 2 μL,進行旋渦混和後,於42℃下培養2分鐘,其後冷卻至4℃。於其中添加QuantiTect Reverse Transcription Kit(QIAGEN)中所含之Quantiscript Reverse Transcriptase 1 μL、Quantiscript RT Buffer 4 μL、及RT Primer Mix 1 μL並進行混和,於42℃下培養15分鐘。繼而,於95℃下加熱3分鐘後,冷卻至4℃,以使Quantiscript Reverse Transcriptase失活。
以TE buffer將該製備液(cDNA製備原液)稀釋為5倍,製成以目標基因(TGF-β1)為靶標之PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈鎖反應)用cDNA溶液。
又,以TE buffer將cDNA製備原液稀釋50倍,選定GAPDH(Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase,磷酸甘油醛脫氫酶)作為內部標準基因而製成PCR用cDNA溶液。再者,以TE buffer將對照樣品(未投予siRNA)之cDNA製備原液稀釋1、10、100及1000倍,而製成以TGF-β1為靶標之PCR校準曲線用樣品。同樣地以TE buffer將對照樣品cDNA製備原液稀釋10、100、1000及10000倍,而製成以GAPDH為靶標之PCR校準曲線用樣品。
以源自TGF-β1之cDNA產物2.5μL為範本,使用12.5μL之QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix(QIAGEN)與源自人類之TGF-β1基因或源自人類之GAPDH基因之2.5μL之QuantiTect Primer Assay(QIAGEN),利用殺菌蒸餾水製備最終容量成為25μL之PCR反應溶液。所製備之溶液係利用Applied Biosystems 7500(Life Technologies Japan),於95℃下加熱5分鐘後,使1)95℃、10秒、2)60℃、35秒之循環反覆40次,其後自95℃緩冷至60℃,進行熱解離測定。根據源自PCR擴增過程之Ct(Threshold Cycle,閥值循環)值,對各目標基因相對於GAPDH基因之Ct值之擴增比例進行修正,對目標基因之mRNA抑制效果進行評價。將結果示於圖1及表4。
可知siRNA編號為d、p、r、f、c、g、q、j、n、i、h、e、a、k、l、o者即便於0.1nM之濃度下針對TGF-β1之表現亦具有40%以上之抑制效率。尤其是,siRNA編號為l及o之siRNA即便於0.1nM下亦表現80%以上之抑制效率。進而,該序列即便於0.01nM下亦表現顯著的抑制效果。
根據siRNA編號(1),設計下述表5所示之以TGF-β1基因為目標之嵌合型siRNA分子,藉由化學合成法合成各嵌合型siRNA寡核苷酸,利用HPLC純化法進行純化而使用。
表中,大寫字母表示RNA,小寫字母表示DNA,下劃線表示懸突處。
使用表5所示之寡核苷酸(濃度:10nM或0.1nM),利用與實施例2相同之方法,對TGF-β1之表現抑制效果進行評價。將結果示於圖2及表6。
根據siRNA編號(1),設計下述表7所示之以TGF-β1基因為目標之磷酸或硫代磷酸結合嵌合型siRNA分子,藉由化學合成法合成各嵌合型siRNA寡核苷酸,利用HPLC純化法進行純化而使用。
表中,大寫字母表示RNA,小寫字母表示DNA,下劃線表示懸突處。又,P-表示5'末端磷酸化,PS-表示5'末端硫代磷酸化。
使用表7所示之寡核苷酸,利用與實施例2相同之方法,對TGF-β1之表現抑制效果進行評價。將結果示於圖3及表8。
根據siRNA編號(1),設計下述表9所示之以TGF-β1基因為目標之懸突部分具有DNA之siRNA分子,藉由化學合成法合成siRNA寡核苷酸,利用HPLC純化法進行純化而使用。
表中,大寫字母表示RNA,小寫字母表示DNA,下劃線表示懸突處。
使用表9所示之寡核苷酸,利用與實施例2相同之方法對TGF-β1之表現抑制效果進行評價。將結果示於表10。
根據作為小白鼠與人類之共同序列的siRNA編號(q)(序列編號34及35),設計嵌合型siRNA(q-C8:正義鏈(5'→3'):CCAAGGGCUACCAtgccaact(序列編號52)、反義鏈(5'→3'):ttggcaUGGUAGCCCUUGGGC(序列編號53),以與實施例3相同之方式合成嵌合型siRNA寡核苷酸,利用HPLC純化法進行純化。將其用作試驗樣品,藉由博萊黴素肺纖維化症模型小白鼠進行效力之評價。
對於小白鼠(C57BL/6NCrSlc(SLC),雌性,13週歲)將戊巴比妥(大日本住友製藥股份有限公司製造)投予至小白鼠腹腔內後,於麻醉下之小白鼠背部皮下埋入ALZETTM osmotic pump(model 2001,DURECT Corporation)而製成模型小白鼠。再者,預先於ALZETTM osmotic pump中注入約10 mg/mL之博萊黴素生理鹽水溶液200 μL,博萊黴素係使用日本化藥股份有限公司製造者。
試驗樣品係埋入ALZETTM osmotic pump後,於第3、7、14天利用蒸餾水(大塚製藥股份有限公司)溶解,以每次100 μg/body使用MicroSprayerTM(model IA-1C,PENN CENTURY,Inc.)投予至氣管內。投予容量係博萊黴素投予開始後第3、7天以75 μL/body進行,第14天以50 μL/body進行。
再者,設定如下群作為比較對照:於ALZETTM osmotic pump中僅注入生理鹽水200 μL,並投予蒸餾水作為試驗樣品之群;及於ALZETTM osmotic pump中注入約10 mg/mL之博萊黴素生理鹽水溶液200 μL,並投予蒸餾水作為試驗樣品之群。
埋入ALZETTM osmotic pump後第21天,將戊巴比妥投予至小白鼠腹腔內,將麻醉下之小白鼠之頸部皮膚及肌肉剝離而使氣管露出。自頸靜脈進行全採血使其致死後,使用留置針將生理鹽水(大塚製藥股份有限公司)2 mL分3次注入氣管內,回收BALF(bronchoalveolar lavage fluid,支氣管肺泡灌洗液)約2 mL。繼而,進行開胸,於左心耳上施加切口,自右心室灌注生理鹽水約1 mL,將肺摘出。為進行組織學評價,將所摘出之肺之左葉浸漬於10%之中性緩衝福爾馬林固定液(和光純藥工業股份有限公司)中。
對所收取之BALF進行離心分離(2000 rpm、4℃、10分鐘),利用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酵素結合免疫吸附分析)法對上清液之TGF-β1蛋白量進行測定。將結果示於圖4。圖中,SAL表示生理鹽水(saline),DW表示蒸餾水(distilled water),BLM表示博萊黴素(bleomycin)。
以10%之中性緩衝福爾馬林固定液固定之肺組織係於包埋石蠟、製作組織切片後,進行H.E.(Hematoxilin-Eosin,蘇木精-伊紅)染色及馬森三色染色。將組織圖示於圖5。
根據圖4,於試驗樣品投予組(BLM/TGF-β1)中,BALF中之TGF-β1量顯著地降低。此效果於比較對照之蒸餾水投予組(BLM/DW)中未觀察到。又,根據圖5之組織圖,可知於試驗樣品投予組中,炎症及纖維化之程度降低。
<110> 日商大塚製藥股份有限公司、國立大學法人三重大學
<120> 纖維化症預防或治療劑
<130> OP0063
<140> 100137418
<141> 2011-10-14
<150> 2010-231946
<151> 2010-10-14
<160> 70
<170> PatentIn第3.1版
<210> 1
<211> 2346
<212> RNA
<213> 人類
<400> 1
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 2
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 3
<210> 4
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 4
<210> 5
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 5
<210> 6
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 6
<210> 7
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 7
<210> 8
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 8
<210> 9
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 9
<210> 10
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 10
<210> 11
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 11
<210> 12
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 12
<210> 13
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 13
<210> 14
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 14
<210> 15
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 15
<210> 16
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 16
<210> 17
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 17
<210> 18
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 18
<210> 19
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 19
<210> 20
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 20
<210> 21
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 21
<210> 22
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 22
<210> 23
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 23
<210> 24
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 24
<210> 25
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 25
<210> 26
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 26
<210> 27
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 27
<210> 28
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 28
<210> 29
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 29
<210> 30
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 30
<210> 31
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 31
<210> 32
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 32
<210> 33
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 33
<210> 34
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 34
<210> 35
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 35
<210> 36
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 36
<210> 37
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 37
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(13)
<223> RNA
<400> 38
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (7)..(21)
<223> RNA
<400> 39
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(14)
<223> RNA
<400> 40
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (6)..(21)
<223> RNA
<400> 41
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(15)
<223> RNA
<400> 42
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (5)..(21)
<223> RNA
<400> 43
<210> 44
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(16)
<223> RNA
<400> 44
<210> 45
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (4)..(21)
<223> RNA
<400> 45
<210> 46
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(17)
<223> RNA
<400> 46
<210> 47
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (3)..(21)
<223> RNA
<400> 47
<210> 48
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(18)
<223> RNA
<400> 48
<210> 49
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (2)..(21)
<223> RNA
<400> 49
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(19)
<223> RNA
<400> 50
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(20)
<223> RNA
<400> 51
<210> 52
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(13)
<223> RNA
<400> 52
<210> 53
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (7)..(21)
<223> RNA
<400> 53
<210> 54
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<400> 54
<210> 55
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<400> 55
<210> 56
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之反義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(19)
<223> RNA
<400> 56
<210> 57
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(18)
<223> RNA
<400> 57
<210> 58
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 58
<210> 59
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 59
<210> 60
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 60
<210> 61
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 61
<210> 62
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 62
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 63
<210> 64
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 64
<210> 65
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 65
<210> 66
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221>雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 66
<210> 67
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 67
<210> 68
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 68
<210> 69
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 69
<210> 70
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工
<220>
<223> 一種人工合成之siRNA之正義股
<220>
<221> 雜交特徵
<222> (1)..(21)
<223> RNA
<400> 70
圖1係表示利用siRNA之TGF-β1mRNA之表現抑制率之圖表。
圖2係表示利用嵌合型siRNA之TGF-β1mRNA之表現抑制率之圖表。
圖3係表示利用磷酸或硫代磷酸結合嵌合型siRNA之TGF-β1mRNA之表現抑制率之圖表。
圖4係表示肺纖維化症模型中之TGF-β1之表現抑制率之圖表。
圖5係肺組織切片(H.E.染色及馬森三色染色(Masson trichrome stain))之光學顯微鏡照片(倍率:5倍)。
Claims (13)
- 一種siRNA,其係選自由以下(a)~(i)所組成之群,且其全長為30核苷酸以下:(a)包含序列編號2所表示之正義序列與序列編號3所表示之反義序列之siRNA、(b)包含序列編號10所表示之正義序列與序列編號11所表示之反義序列之siRNA、(c)包含序列編號16所表示之正義序列與序列編號17所表示之反義序列之siRNA、(d)包含序列編號18所表示之正義序列與序列編號19所表示之反義序列之siRNA、(e)包含序列編號20所表示之正義序列與序列編號21所表示之反義序列之siRNA、(f)包含序列編號22所表示之正義序列與序列編號23所表示之反義序列之siRNA、(g)包含序列編號24所表示之正義序列與序列編號25所表示之反義序列之siRNA、(h)包含序列編號28所表示之正義序列與序列編號29所表示之反義序列之siRNA、(i)包含序列編號30所表示之正義序列與序列編號31所表示之反義序列之siRNA。
- 如請求項1之siRNA,其中使上述siRNA之正義鏈之自3'末端之末端側起之懸突核苷酸除外的連續之1~10核苷酸轉換為DNA。
- 如請求項2之siRNA,其係於懸突部分附加有DNA者。
- 如請求項1之siRNA,其中使上述siRNA之反義鏈之5'末端之末端側起連續的1~10核苷酸轉換為DNA。
- 如請求項1之siRNA,其中使上述siRNA之正義鏈之自3'末端之末端側起懸突核苷酸除外的連續之1~10核苷酸轉換為DNA,且使反義鏈之自5'末端之末端側起連續之1~10核苷酸轉換為DNA。
- 如請求項1之siRNA,其中使反義鏈之5'末端單磷酸化或單硫代磷酸化。
- 一種siRNA,其係於如請求項1之選自由(a)~(i)所組成之群的siRNA中取代、加成或缺失1個鹼基,且可誘導RNA干擾者。
- 一種siRNA,其係對如請求項1之選自由(a)~(i)所組成之群的siRNA中所包含之核苷酸之糖、鹼基及/或磷酸鹽進行化學修飾而成之核苷酸類似物,且可誘導RNA干擾者。
- 如請求項1至8中任一項之siRNA,其係用以抑制TGF-β1基因表現者。
- 如請求項1至8中任一項之siRNA,其係用以抑制纖維化症之進展或治療纖維化症者。
- 如請求項1至8中任一項之siRNA,其係用以抑制肺纖維化症或肺癌之進展、或治療肺纖維化症或肺癌者。
- 一種siRNA,其係將選自由序列編號1之鹼基編號1548~1579號之鹼基及1700~1726號之鹼基所組成之群中 的連續之21鹼基設為目標序列,且全長為30核苷酸以下。
- 一種醫藥組合物,其係含有如請求項1至12中任一項之siRNA者。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010231946 | 2010-10-14 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW201216988A TW201216988A (en) | 2012-05-01 |
TWI572715B true TWI572715B (zh) | 2017-03-01 |
Family
ID=45938402
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW100137418A TWI572715B (zh) | 2010-10-14 | 2011-10-14 | 纖維化症預防或治療劑 |
TW105110662A TWI679023B (zh) | 2010-10-14 | 2011-10-14 | 纖維化症預防或治療劑 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW105110662A TWI679023B (zh) | 2010-10-14 | 2011-10-14 | 纖維化症預防或治療劑 |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US8772262B2 (zh) |
EP (2) | EP2628798B1 (zh) |
JP (4) | JP6022940B2 (zh) |
KR (2) | KR101853799B1 (zh) |
CN (2) | CN103119166B (zh) |
AR (1) | AR083445A1 (zh) |
AU (1) | AU2011314653B2 (zh) |
BR (1) | BR112013006541A2 (zh) |
CA (1) | CA2813163C (zh) |
CO (1) | CO6660456A2 (zh) |
CY (1) | CY1121945T1 (zh) |
DK (1) | DK2628798T3 (zh) |
ES (1) | ES2720135T3 (zh) |
HK (1) | HK1184189A1 (zh) |
HR (1) | HRP20190722T1 (zh) |
HU (1) | HUE043891T2 (zh) |
IL (2) | IL224791A (zh) |
LT (1) | LT2628798T (zh) |
MX (1) | MX348555B (zh) |
MY (1) | MY165964A (zh) |
NZ (2) | NZ609440A (zh) |
PL (1) | PL2628798T3 (zh) |
PT (1) | PT2628798T (zh) |
RU (1) | RU2583290C2 (zh) |
SG (3) | SG10201907649QA (zh) |
SI (1) | SI2628798T1 (zh) |
TR (1) | TR201905060T4 (zh) |
TW (2) | TWI572715B (zh) |
WO (1) | WO2012050181A1 (zh) |
ZA (1) | ZA201301279B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI679023B (zh) * | 2010-10-14 | 2019-12-11 | 國立大學法人三重大學 | 纖維化症預防或治療劑 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015093495A1 (ja) * | 2013-12-16 | 2015-06-25 | 株式会社ボナック | TGF-β1遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子 |
JP6726105B2 (ja) | 2014-12-15 | 2020-07-22 | 株式会社ボナック | TGF−β1発現抑制のための一本鎖核酸分子 |
WO2017043490A1 (ja) * | 2015-09-07 | 2017-03-16 | 協和発酵バイオ株式会社 | 自然免疫誘導効果が増強した二重鎖リボ核酸 |
RU2714257C2 (ru) * | 2015-10-30 | 2020-02-13 | Бонак Корпорейшн | КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ В СТАБИЛЬНОМ СОСТОЯНИИ ОДНОЦЕПОЧЕЧНУЮ МОЛЕКУЛУ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, КОТОРАЯ ПОДАВЛЯЕТ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА TGF-β1 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007109097A2 (en) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi MODULATION OF TGF-BETA AND THERAPEUTIC USES THEREOF |
WO2009061417A1 (en) * | 2007-11-06 | 2009-05-14 | Sirnaomics, Inc. | Multi-targeted rnai therapeutics for scarless wound healing of skin |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US7829693B2 (en) | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
WO2003035869A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens |
US7423142B2 (en) | 2001-01-09 | 2008-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
US8546143B2 (en) | 2001-01-09 | 2013-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
DE10163098B4 (de) | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
US7745418B2 (en) | 2001-10-12 | 2010-06-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting viral replication |
CN1604783A (zh) | 2001-10-26 | 2005-04-06 | 里伯药品公司 | 通过rna干扰治疗纤维化疾病的药物 |
US20050119202A1 (en) | 2001-10-26 | 2005-06-02 | Roland Kreutzer | Medicament to treat a fibrotic disease |
US20040121348A1 (en) | 2001-10-26 | 2004-06-24 | Ribopharma Ag | Compositions and methods for treating pancreatic cancer |
DE10230997A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels |
ATE536408T1 (de) * | 2003-04-02 | 2011-12-15 | Dharmacon Inc | Modifizierte polynukleotide zur verwendung bei rna-interferenz |
US7668257B2 (en) * | 2003-10-01 | 2010-02-23 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Transmissions with reduced code rate in 8VSB digital television |
KR101147147B1 (ko) | 2004-04-01 | 2012-05-25 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Rna 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드 |
JP2007119396A (ja) | 2005-10-28 | 2007-05-17 | Hosokawa Funtai Gijutsu Kenkyusho:Kk | 核酸化合物封入ナノ粒子を含む経肺投与用医薬製剤 |
US20070269815A1 (en) | 2005-11-21 | 2007-11-22 | Rivory Laurent P | Multitargeting interfering RNAs having two active strands and methods for their design and use |
CA2674210A1 (en) | 2005-12-30 | 2007-07-12 | Intradigm Corporation | Sirna compositions promoting scar-free wound healing of skin and methods for wound treatment |
JP2010519905A (ja) | 2007-03-02 | 2010-06-10 | エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド | Akt遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用 |
US20080299659A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-12-04 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting apob gene expression and uses thereof |
JP2010519913A (ja) | 2007-03-02 | 2010-06-10 | エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド | Wnt遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用 |
US20080286866A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-11-20 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting vegf gene expression and uses thereof |
WO2008109548A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting tgfb gene expression and uses thereof |
US20080287383A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-11-20 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting erbb gene expression and uses thereof |
EP2121925A2 (en) | 2007-03-02 | 2009-11-25 | MDRNA, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting ras gene expression and uses thereof |
JP2010519907A (ja) | 2007-03-02 | 2010-06-10 | エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド | Vegfファミリー遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用 |
WO2008109449A1 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting bcl2 gene expression and uses thereof |
WO2008109381A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting hif1a gene expression and uses thereof |
JP2010519911A (ja) | 2007-03-02 | 2010-06-10 | エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド | Myc遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用 |
EP2121923A1 (en) | 2007-03-02 | 2009-11-25 | MDRNA, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting erbb family gene expression and uses thereof |
US20100105134A1 (en) | 2007-03-02 | 2010-04-29 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting gene expression and uses thereof |
DK2494993T3 (en) * | 2007-05-04 | 2018-11-12 | Marina Biotech Inc | Amino acid lipids and uses thereof |
JP5296328B2 (ja) | 2007-05-09 | 2013-09-25 | 独立行政法人理化学研究所 | 1本鎖環状rnaおよびその製造方法 |
UA97559C2 (uk) | 2007-11-08 | 2012-02-27 | Оцука Фармасьютікал Ко., Лтд. | Комплекс нуклеїнової кислоти і композиція для доставки нуклеїнової кислоти |
WO2009082817A1 (en) * | 2007-12-27 | 2009-07-09 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Silencing of polo-like kinase expression using interfering rna |
US8188060B2 (en) * | 2008-02-11 | 2012-05-29 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotides with enhanced functionality in gene regulation |
BRPI0910446A8 (pt) | 2008-03-31 | 2016-07-26 | Nat Inst Of Advanced Ind Scien | rna modificado por lipídeo de filamento duplo tendo alto efeito de interferência de rna |
CN110042099A (zh) | 2010-03-24 | 2019-07-23 | 菲奥医药公司 | 皮肤与纤维化症候中的rna干扰 |
WO2011119871A1 (en) * | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Rxi Phrmaceuticals Corporation | Rna interference in ocular indications |
AR083445A1 (es) | 2010-10-14 | 2013-02-27 | Univ Mie | siARN CONTRA LA FIBROSIS |
-
2011
- 2011-10-13 AR ARP110103808A patent/AR083445A1/es unknown
- 2011-10-14 TR TR2019/05060T patent/TR201905060T4/tr unknown
- 2011-10-14 CA CA2813163A patent/CA2813163C/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-14 EP EP11832611.5A patent/EP2628798B1/en active Active
- 2011-10-14 CN CN201180044862.9A patent/CN103119166B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-14 BR BR112013006541A patent/BR112013006541A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-10-14 PT PT11832611T patent/PT2628798T/pt unknown
- 2011-10-14 DK DK11832611.5T patent/DK2628798T3/da active
- 2011-10-14 SI SI201131728T patent/SI2628798T1/sl unknown
- 2011-10-14 PL PL11832611T patent/PL2628798T3/pl unknown
- 2011-10-14 RU RU2013121802/10A patent/RU2583290C2/ru active
- 2011-10-14 KR KR1020137007962A patent/KR101853799B1/ko active IP Right Grant
- 2011-10-14 NZ NZ609440A patent/NZ609440A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-10-14 SG SG10201907649QA patent/SG10201907649QA/en unknown
- 2011-10-14 ES ES11832611T patent/ES2720135T3/es active Active
- 2011-10-14 MY MYPI2013000567A patent/MY165964A/en unknown
- 2011-10-14 JP JP2012538721A patent/JP6022940B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-14 SG SG2013024757A patent/SG189245A1/en unknown
- 2011-10-14 SG SG10201508365RA patent/SG10201508365RA/en unknown
- 2011-10-14 LT LTEP11832611.5T patent/LT2628798T/lt unknown
- 2011-10-14 NZ NZ630501A patent/NZ630501A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-10-14 WO PCT/JP2011/073628 patent/WO2012050181A1/ja active Application Filing
- 2011-10-14 CN CN201610411134.1A patent/CN106086022B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-14 US US13/824,080 patent/US8772262B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-14 EP EP19158202.2A patent/EP3517614A1/en not_active Withdrawn
- 2011-10-14 HU HUE11832611A patent/HUE043891T2/hu unknown
- 2011-10-14 MX MX2013003698A patent/MX348555B/es active IP Right Grant
- 2011-10-14 TW TW100137418A patent/TWI572715B/zh not_active IP Right Cessation
- 2011-10-14 AU AU2011314653A patent/AU2011314653B2/en not_active Ceased
- 2011-10-14 TW TW105110662A patent/TWI679023B/zh not_active IP Right Cessation
- 2011-10-14 KR KR1020187011751A patent/KR102167225B1/ko active IP Right Grant
-
2013
- 2013-02-18 IL IL224791A patent/IL224791A/en active IP Right Grant
- 2013-02-19 ZA ZA2013/01279A patent/ZA201301279B/en unknown
- 2013-04-11 CO CO13094380A patent/CO6660456A2/es unknown
- 2013-10-15 HK HK13111550.4A patent/HK1184189A1/zh not_active IP Right Cessation
-
2014
- 2014-05-08 US US14/272,898 patent/US9273314B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-01-19 US US15/000,204 patent/US9637743B2/en active Active
- 2016-06-02 IL IL245995A patent/IL245995B/en active IP Right Grant
- 2016-07-19 JP JP2016141580A patent/JP2017000155A/ja active Pending
-
2017
- 2017-03-22 US US15/465,961 patent/US10125366B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2017-12-27 JP JP2017250450A patent/JP2018088923A/ja active Pending
-
2018
- 2018-09-24 US US16/139,461 patent/US20190010500A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-04-17 HR HRP20190722TT patent/HRP20190722T1/hr unknown
- 2019-06-20 CY CY20191100643T patent/CY1121945T1/el unknown
- 2019-08-01 US US16/528,920 patent/US20200291406A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-01-28 JP JP2020011342A patent/JP2020078314A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007109097A2 (en) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi MODULATION OF TGF-BETA AND THERAPEUTIC USES THEREOF |
WO2009061417A1 (en) * | 2007-11-06 | 2009-05-14 | Sirnaomics, Inc. | Multi-targeted rnai therapeutics for scarless wound healing of skin |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI679023B (zh) * | 2010-10-14 | 2019-12-11 | 國立大學法人三重大學 | 纖維化症預防或治療劑 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6865169B2 (ja) | P21遺伝子調節のためのrna干渉剤 | |
JP2020078314A (ja) | 線維症予防又は治療剤 | |
BR112014014730B1 (pt) | estrutura de droga polímero terapêutica, métodos para preparar uma estrutura de oligo rna de dupla hélice, nanoparticula e composição farmacêutica | |
BR112016000160B1 (pt) | estrutura de oligonucleotídeo tipo nanopartícula melhorada tendo alta eficiência e método para a preparação da mesma | |
JP2013143917A (ja) | 線維症予防又は治療剤 | |
JP6311148B2 (ja) | 線維症予防又は治療剤 | |
AU2015261583C1 (en) | Preventative or therapeutic agent for fibrosis | |
JP2024026903A (ja) | siRNA及び医薬組成物並びに予防及び/又は治療剤 | |
BR112016000163B1 (pt) | Estrutura de oligo rna de dupla hélice, nanopartículas, composição farmacêutica e formulação liofilizada |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees |