TWI477279B - The use of lactic acid bacteria belonging to the genus Enterococcus for the manufacture of a composition having a bed sores - Google Patents
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Description
本發明係關於一種具有褥瘡改善作用之組合物。更詳細而言,本發明係關於一種含有乳酸菌作為有效成分之具有褥瘡改善作用之組合物、以及作為其醫藥、試劑及飲食品之用途。
褥瘡係由於持續之壓迫而使流向皮膚、皮下脂肪組織、肌肉之血流中斷,從而導致該等組織死絕之狀態。於褥瘡之預防或治療中,為確保局部之血流,而實施以體壓分散為目的之包括看護、預防、營養管理、皮膚保養在內之局部療法。於褥瘡之局部療法中,必需正確判斷褥瘡之狀態,選擇適合該狀態之處理、外用藥及創傷包覆材料,而應用於患者。於先前之褥瘡之局部療法中,由於必需高度專業之知識,因此要求開發一種更簡便之新的治療法。
且說,近年來,正進行以下嘗試,即關於乳酸菌等腸內細菌,對疾病之預防效果及疾病症狀之改善效果等進行驗證,欲將其用作可簡便地攝取且安全性較高之醫藥或飲食品。
例如,關於自人腸管單離之乳酸菌即糞腸球菌EC-12株(以下,有時簡稱為「EC-12」),本案申請人報告有抑制絨毛萎縮之效果及腸管上皮細胞增殖抑制效果(專利文獻1、非專利文獻1)、腸內菌群之改善效果、通便促進效果及通便改善作用之機制(專利文獻2、非專利文獻2~4)、對李斯特菌感染之生物體防禦效果(非專利文獻5)、耐藥菌之排除效果(專利文獻3)、自然免疫及獲得性免疫之活化效果(非專利文獻6)、對接觸性皮炎之炎症抑制效果(專利文獻4)、I型過敏反應(哮喘、花粉病、異位性皮炎)之減輕效果(專利文獻5、非專利文獻7)、類風濕性關節炎之改善效果(專利文獻6)、漢生病(麻風病)之預防效果(專利文獻7)、抗腫瘤效果(非專利文獻8)及燒傷之治癒促進效果(非專利文獻9)等。
亦包括上述報告在內,迄今為止關於乳酸菌等腸內細菌已報告有對各種疾病之症狀改善效果,但仍未報告有應用於褥瘡改善之例。
專利文獻1:日本專利特開2008-255080號公報
專利文獻2:日本專利特開2004-51530號公報
專利文獻3:日本專利特開2006-89421號公報
專利文獻4:日本專利特開2006-28050號公報
專利文獻5:日本專利特開2007-91694號公報
專利文獻6:日本專利特開2007-254333號公報
專利文獻7:日本專利特開2007-290992號公報
非專利文獻1:吉田容子等人,第62次日本營養‧食品學會大會 講演要旨集p247(2008)
非專利文獻2:Microb. Ecol. Health Dis.,17(2),107-113(2005)
非專利文獻3:Microb. Ecol. Health Dis.,16(4),188-194(2004)
非專利文獻4:Biosci. Biotechnol. Biochem.,71,60589-1-4(2007)
非專利文獻5:J. New Rem. & Clin.,53(3),78-88(2004)
非專利文獻6:Animal Sci. J.,78,92-97(2007)
非專利文獻7:Skin Research,Suppl. 10,38-44(2008)
非專利文獻8:大塚昌孝等人,第15次日本生物治療學會抄錄集p110(2002)
非專利文獻9:山田薰等人,第147次日本獸醫學會學術集會講演要旨集p295(2009)
本發明係鑒於上述狀況而成者,其目的在於提供一種具有褥瘡改善作用,可簡便地投予或攝取,且具有較高之安全性之組合物。
本發明者等人為解決上述課題,對褥瘡之小鼠模型中之乳酸菌之效果進行了研究。具體而言,使該小鼠模型攝取作為乳酸菌之一例之糞腸球菌(EC-12株),評價其褥瘡改善作用。其結果,於該小鼠模型中,自褥瘡形成後早期開始便確認到褥瘡面積之減少,又,於褥瘡形成後之初期,確認到各種炎症性細胞激素或生長因子之高度表現,因此判定可促進創傷治癒。進而可判定,於褥瘡形成後之後期,炎症性細胞激素或生長因子之表現減少,與對照相比可更快地恢復正常狀態。如此般,糞腸球菌(EC-12株)自褥瘡形成後之早期階段開始便表現出其改善作用。進而,根據陰性對照群與同日投予糞腸球菌(EC-12株)之群之比較,亦可判定,該效果於自褥瘡形成前開始預防性地投予糞腸球菌(EC-12株)之情形時尤為顯著。
根據以上,本發明者等人發現,糞腸球菌(EC-12株)作為用於褥瘡之預防或早期階段之治癒的醫藥或飲食品而極其有用,從而完成本發明。
更詳細而言,本發明係提供如下發明者。
(1) 一種用於褥瘡之改善之組合物,其係含有乳酸菌作為有效成分而成。
(2) 如(1)之組合物,其中乳酸菌係屬於腸球菌屬者。
(3) 如(1)之組合物,其中乳酸菌為糞腸球菌。
(4) 如(1)至(3)中任一項之組合物,其係醫藥組合物。
(5) 如(4)之組合物,其係經口投予者。
(6) 如(4)或(5)之組合物,其係於褥瘡形成前預防性地投予。
(7) 如(1)至(3)中任一項之組合物,其係飲食品。
(8) 如(7)之組合物,其係經口攝取者。
(9) 如(7)或(8)之組合物,其係於褥瘡形成前攝取。
(10)如(4)至(9)中任一項之組合物,其附加有主旨用於改善褥瘡之標示。
藉由將本發明之組合物以醫藥品之形式進行投予或以飲食品之形式進行攝取,可實現生物體中之褥瘡之改善。尤其是,藉由在褥瘡形成前預防性地投予本發明之組合物,可獲得顯著之效果。本發明之組合物於褥瘡之預防或褥瘡之早期階段之治癒中有用。又,本發明之組合物之有效成分為乳酸菌,安全性較高。因此,用作醫藥之情形時可經口投予,與先前之褥瘡之局部療法不同,其簡便並且對褥瘡患者之負擔亦較小。又,本發明之組合物作為健康食品等飲食品,健康者可於日常中容易地攝取,而實現褥瘡之預防。
本發明提供一種含有乳酸菌作為有效成分而成之用於褥瘡之改善之組合物。
於本發明中,所謂「褥瘡」,係指由於持續之壓迫而使流向皮膚、皮下脂肪組織、肌肉之血流中斷,從而導致該等組織死絕之狀態。於本發明中,所謂「褥瘡之改善作用」,係指包括藉由乳酸菌之投予或攝取,而使褥瘡難以產生、所產生之褥瘡成為輕度、抑制褥瘡之惡化、加快褥瘡之治癒。又,係指於所形成之褥瘡到治癒為止之過程中,不僅包括改善整體之情形,亦包括改善特定階段之情形。如本實施例所示般,褥瘡之改善作用例如可藉由褥瘡面積之測定、或炎症性細胞激素或生長因子之表現之測定而評價。
作為本發明之組合物之有效成分即「乳酸菌」,可例示屬於腸球菌屬、雙叉桿菌屬、乳酸桿菌屬、鏈球菌屬及乳球菌屬者,但只要具有褥瘡改善作用,則並無特別限制。
作為屬於腸球菌屬之乳酸菌,例如可列舉:糞腸球菌、屎腸球菌,作為屬於雙叉桿菌屬之細菌,例如可列舉:龍根雙叉桿菌、短型雙叉桿菌、雙岐雙叉桿菌,作為屬於乳酸桿菌屬之細菌,可列舉:嗜酸乳酸桿菌、乾酪乳酸桿菌、唾液乳酸桿菌,作為屬於鏈球菌屬之細菌,例如可列舉嗜熱鏈球菌等,作為屬於乳球菌屬之細菌,例如可列舉:乳脂乳球菌、乳酸乳球菌等。本發明之組合物中所使用之乳酸菌較佳為屬於腸球菌屬者,尤佳為糞腸球菌。
再者,本實施例中所使用之糞腸球菌EC-12株(EC-12)於2005年2月25日(原寄存日)寄存於獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物寄存中心(〒305-5466,日本茨城縣築波市東1丁目1番地1中央第6)(受託編號為FERM BP-10284)。作為糞腸球菌,除EC-12株以外亦可利用ATCC19433、ATCC14508、ATCC23655、IFO16803、IFO16804等菌株。
該等乳酸菌可於本發明之組合物中僅使用1種,亦可調配2種以上之菌種而用於本發明之組合物中。又,於本發明之組合物中,乳酸菌可以活菌之形式及死菌體之形式而使用。就耐熱性優異、品質穩定、無味無臭之方面而言,死菌體作為本發明之組合物之有效成分而較佳。作為本發明之組合物中之死菌體,可使用經加熱殺菌之菌體。經加熱殺菌之菌體可藉由以下方式而製備,即例如利用過濾、離心分離等方法,自依照常法培養乳酸菌而得之培養物回收菌體,水洗後使其懸浮於水等中,並於120℃以下(較佳為80~120℃)加熱處理30分鐘以內(3秒~30分鐘)後,視需要進行濃縮、乾燥。再者,糞腸球菌EC-12株之經加熱殺菌之菌體之微細粉末係作為商品名「EC-12(EF Power)」(Combi股份有限公司製造)而市售。
本發明之組合物可為具有褥瘡改善作用之醫藥組合物、飲食品(包括動物用飼料)、或動物模型實驗等中所使用之試劑之形態。
於本實施例中,若使褥瘡之小鼠模型攝取糞腸球菌(EC-12株),則自褥瘡形成後早期開始便確認到褥瘡面積之明顯減少。又,該效果尤其是於自褥瘡形成前開始預防性地投予糞腸球菌(EC-12株)之情形時較大。因此,本發明之組合物尤其是可較佳地用作預防性地投予之醫藥組合物或預防性地(日常地)攝取之飲食品,藉此可進行褥瘡之預防或早期階段之治癒。
又,若使本實施例中之小鼠模型攝取糞腸球菌(EC-12株),則可確認,於褥瘡形成後之初期,與對照相比,炎症性細胞激素或生長因子進行高度表現,而促進創傷治癒;進而可確認,於褥瘡形成後之後期,與對照相比,炎症性細胞激素或生長因子之表現減少,相比對照可更快地恢復正常狀態。因此,本發明之組合物亦可用作用以促進褥瘡形成後之初期之炎症性細胞激素或生長因子(例如IL-1α基因、TNF-α基因、TGF-β基因、FGF-7基因、FGF-10基因)之表現抑制的組合物、及用以促進褥瘡形成後之後期之炎症性細胞激素或生長因子(例如IL-1α基因、IL-8基因、TNF-α基因、TGF-β基因、FGF-10基因)之表現抑制的組合物。
本發明之組合物可利用公知之製藥學方法進行製劑化。例如可以膠囊劑、錠劑、丸劑、液劑、散劑、顆粒劑、細粒劑、膜衣劑(film coating agent)、圓粒劑、***劑、舌下劑、咀嚼劑、口腔劑、膏劑(paste agent)、糖漿劑、懸浮劑、酏劑、乳劑、塗佈劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、經皮吸收型製劑、洗劑、吸引劑、霧劑、注射劑、栓劑等之形式經口或非經口地使用。本發明係將腸內細菌即乳酸菌作為有效成分之組合物,可藉由經口而簡便地投予或攝取。即,本發明之組合物之較佳之投予或攝取方法為利用經口之投予或攝取。
於該等製劑化中,可與藥理學上或作為飲食品所容許之載體、具體而言為滅菌水或生理鹽水、植物油、溶劑、主料、乳化劑、懸浮劑、界面活性劑、穩定劑、香味劑、芳香劑、賦形劑、媒劑、防腐劑、結合劑、稀釋劑、等張劑、鎮痛劑、增量劑、崩解劑、緩衝劑、塗佈劑、潤滑劑、著色劑、甜味劑、黏稠劑、矯味矯臭劑、溶解助劑或其他添加劑等進行適當組合。
於將本發明之組合物用作醫藥組合物之情形時,亦可與用於褥瘡之預防或治療之公知之醫藥組合物併用。
於將本發明之組合物用作飲食品之情形時,該飲食品例如可為健康食品、功能性食品、特定保健用食品、營養輔助食品、病者用食品或動物用飼料。本發明之飲食品除了可以如上所述之組合物之形式攝取以外,亦可以各種飲食品之形式攝取。作為飲食品之具體例,可列舉:果蔬汁、清涼飲料水、茶飲料、飲料劑、果凍狀飲料、功能性飲料等各種飲料;啤酒等酒精飲料;飯類、面類、麵包類及麵團類等含有碳水化合物之食品;魚肉火腿、香腸、水產練製品等練製品;咖喱、澆汁菜、中式湯等蒸煮製品;湯類;牛奶、乳飲料、冰淇淋、乳酪、酸乳酪等乳製品;豆醬、酸乳酪、乳酸菌、醱酵飲料、醃漬品等醱酵物;豆製品;餅乾、曲奇等西式點心類;饅頭或羊羹等日式點心類;糖果類、口香糖類、軟糖、果凍、布丁等冷凍甜點或冰凍甜點等各種點心類;速食湯、速食醬湯等速食食品、微波爐應對食品等。進而,亦可列舉製備成粉末、顆粒、錠劑、膠囊劑、液狀、膏狀或果凍狀之健康飲食品。
本發明之組合物可以包括人在內之動物作為對象而使用,作為人以外之動物,並無特別限制,可以各種家畜、家禽、寵物、實驗用動物等作為對象。具體而言,可列舉:豬、牛、馬、羊、山羊、雞、野鴨、駝鳥、鴨、狗、貓、兔、倉鼠、小鼠、大鼠、猴等,但並不受該等之限制。
本發明中之飲食品之製造可利用該技術領域中公知之製造技術而實施。於該飲食品中,可添加對褥瘡之改善有效之1種或2種以上之成分(例如營養素等)。又,亦可藉由與發揮褥瘡之改善以外之功能的其他成分或其他功能性食品組合而製成多功能性之飲食品。
於投予或攝取本發明之組合物之情形時,其投予量或攝取量可根據對象之年齡、體重、褥瘡之症狀、健康狀態、組合物之種類(醫藥品、飲食品等)等而適當選擇。例如,乳酸菌每次之投予量或攝取量通常為0.01 mg/kg體重~100 mg/kg體重,較佳為1 mg/kg體重~10 mg/kg體重。如此般,本發明亦提供一種對象之褥瘡之改善方法,其特徵在於對對象投予乳酸菌或使對象攝取乳酸菌。
本發明之組合物之製品(醫藥品、飲食品、試劑)或其說明書可為附加主旨為有用於改善褥瘡之標示者。此處所謂「於製品或說明書中附加標示」,係指於製品之本體、容器、包裝等中附加標示,或於揭示製品資訊之說明書、隨附文件、宣傳物、其他印刷物等中附加標示。於主旨為用於改善褥瘡之標示中,可包括藉由投予或攝取乳酸菌而使褥瘡得到改善之機理相關之資訊。作為機理,例如可列舉有關如下之資訊,即與褥瘡關連之炎症性細胞激素或生長因子(例如IL-α基因、IL-8基因、TNF-α基因、TGF-β基因、FGF-7基因、FGF-10基因)之作用或表現。
以下,基於實施例及比較例對本發明進行更加具體之說明,但本發明並非限定於以下實施例者。
[實施例1] 小鼠模型中之EC-12之褥瘡改善效果之研究
使用BALB/c系10週大雄性小鼠作為供試動物。將「生理鹽水投予群(對照群)」、「預防性EC-12投予群」、「同日EC-12投予群」設定為試驗群,各群使用15隻(計45隻)小鼠。
將小鼠馴化後,於麻醉下使用市售之理髮推子對背部正中進行剃毛後,利用除毛霜進行除毛。以蒸餾水仔細擦拭除毛部。於剃毛之次日,提起背部正中皮膚,以兩個磁鐵板(magnet plate)(直徑12 mm×厚度5 mm,1180 G)夾持並保持12小時後,將磁體卸除12小時(9點安裝,21點卸除)。連續3日重複該循環,製作褥瘡。再者,僅於製作褥瘡時進行個別飼養。製作褥瘡時,皮下投予丁基原啡因(2 mg/kg)作為鎮痛劑。關於褥瘡製作方法,依據Stadker et al.(J. Invest. Surg. 2004. 17:221-227)而進行。
於「預防性EC-12投予群」及「同日EC-12投予群」中,將EC-12懸浮於生理鹽水中,且EC-12成為10 mg/kg(體重)之方式每日對小鼠強制進行經口投予。對「生理鹽水投予群」,係經口投予滅菌生理鹽水。對「預防性EC-12投予群」投予EC-12、及對「生理鹽水投予群」投予生理鹽水係自褥瘡開始之7日前開始,每日1次早上9點進行直至進行剖檢為止。對「同日EC-12投予群」投予EC-12係自褥瘡製作日開始,每日1次早上9點進行,直至進行剖檢為止。
對於創傷部之狀態,每日觀察並拍攝成照片,藉由照片之圖像分析而測定創傷部面積。製作褥瘡後,於第3日、第6日、第11日對各群中各5隻進行剖檢。腹腔投予戊巴比妥(Schering-Plough),深麻醉後,藉由放血進行屠殺。將創傷面積縮小率作為將「預防性EC-12投予群」之最大褥瘡面積設為100時之值而算出。
其結果,關於創傷面積縮小率,自褥瘡形成後第4日開始,與「同日EC-12投予群」及「生理鹽水投予群」相比,「預防性EC-12投予群」表現出更低之值(圖1)。
關於創傷部樣品,本發明者等人進而確認到細胞激素及生長因子之mRNA表現。
於公知之細胞激素中,IL-8為藉由IL-1或TNF等炎症性細胞激素之刺激,而由以白血球為代表、及纖維母細胞或I皮細胞等各種細胞所產生之白血球趨化因子(Leukocyte Chemotactic Factor)。又,IL-1α於各種免疫活性細胞(immunocompetent cell)中具有多種生理活性,但作為其最重要之作用,已知有可誘導輔助T細胞之IL-2產生,且經由IL-2促進T細胞之分化、增殖。又,TNF-α經由IL-1或PGE2、膠原酶等之產生而引起發熱或各種炎症反應,因此可認為其係炎症反應中之媒介物之一。
又,已知公知之生長因子中,TGF-β於組織受到傷害時,促進巨噬細胞向傷害部位之趨化。由於巨噬細胞自身亦分泌TGF-β,因此藉由該分泌可增加纖維母細胞,而協同地促進創傷治癒過程。又,FGF-7為不僅對纖維母細胞,而且對各種細胞表現出增殖、分化等活性之多功能性訊號分子,別名稱作KGF(Keratinocyte Growth Factor,角質細胞增殖因子)。又,FGF-10屬於纖維母細胞增殖因子家族中之FGF-7之亞家族。
於本實施例中,關於作為細胞激素之上述IL-1α、IL-8及TNF-α、及作為生長因子之上述TGF-β、FGF-7及FGF-10,對其表現進行了研究。
具體而言,自創傷部樣品萃取RNA後,藉由反轉錄合成cDNA,以該cDNA為模板,使用表1中記載之引子進行即時PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈反應)(Rotor-Gene 6200(凱傑(Qiagen)公司))。
再者,於RNA之萃取中使用QuickGene 810系統及QuickGene RNA tissue套組SII(Fuji Film公司),於反轉錄中使用PrimeScript RT reagent套組(Perfect Real Time;Takara Bio)。作業係依據操作說明書而實施。測定值係以GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,甘油醛-3-磷酸脫氫酶)進行修正。
其結果,關於「預防性EC-12投予群」之皮膚褥瘡組織中之mRNA表現量,於褥瘡製作後第3日,於IL-8以外之炎症性細胞激素及所有生長因子中,相比「同日EC-12投予群」及「生理鹽水投予群」而提高(表2、表3)。另一方面,於褥瘡製作後第6日,於「預防性EC-12投予群」中,所有炎症性細胞激素及FGF-7以外之生長因子之表現相比「同日EC-12投予群」及「生理鹽水投予群」而降低(表2、表3)。
自褥瘡之產生至治癒為止之過程通常分為(1)出血凝固期、(2)炎症期、(3)增殖期、(4)成熟期之4個階段,相比「同日EC-12投予群」及「生理鹽水投予群」,於「預防性EC-12投予群」中,於褥瘡產生第4日確認到褥瘡面積之明顯減少。又,於褥瘡產生第3日可見到炎症性細胞激素及生長因子之高度表現,其後,於褥瘡產生第6日,該等之表現戲劇地降低。根據該等事實,揭示了尤其是藉由自褥瘡形成前開始投予EC-12,可對褥瘡產生初期之褥瘡之治癒產生效果。又,根據該等事實,暗示了EC-12亦可用於褥瘡之預防。
如以上所說明般,藉由將本發明之組合物以醫藥品之形式進行投予或以飲食品之形式進行攝取,可實現生物體中之褥瘡之改善。作為本發明之組合物之有效成分的乳酸菌為腸內細菌,可藉由經口進行投予或攝取。本發明之組合物由於安全性較高、可簡便地投予或攝取,因此可期待作為具有褥瘡之改善作用之新的醫藥或健康食品等之用途。
<110> 日商康貝股份有限公司
<120> 具有褥瘡改善作用之組合物
<130> P09-020
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<213> 人工
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<223> 一種人工合成之引子序列
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圖1係表示「預防性EC-12投予群」、「同日EC-12投予群」、「生理鹽水投予群」之自褥瘡形成後第3日至第11日之褥瘡面積縮小率的圖。將「預防性EC-12投予群」之最大褥瘡面積設為100,算出創傷面積縮小率。
(無元件符號說明)
Claims (4)
- 一種屬於腸球菌屬之乳酸菌的用途,其係用於製造用於褥瘡之改善之醫藥組合物者。
- 如請求項1之用途,其中乳酸菌為糞腸球菌。
- 如請求項1之用途,其中醫藥組合物係經口投予者。
- 如請求項1至3中任一項之用途,其中醫藥組合物係於褥瘡形成前預防性地投予者。
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