JP5229977B2 - 血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤 - Google Patents
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Description
(1)ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤。
(2)ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌が、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)もしくはラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)である(1)記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤。
(3)ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用飲食品。
(4)ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌が、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)もしくはラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)である(3)記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用飲食品。
(5)ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌の培養物及び/又は菌体を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用飼料。
(6)ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌が、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)もしくはラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)である(5)記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用飼料。
件下での生育が良好である、ヒト腸管へ高い定着性を示す、ヒト腸管細胞親和性を示す、
胆汁酸耐性がある、腸管内に定着する、食品に適用した際に生残性が高く、香味、物性も
優れている菌株の選定を進めてきた。次に、ヒト腸管へ高い定着性を示す乳酸菌の中で、
血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制するという条件を設定して選定を
進め、ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌、その中でもラクトバチラス・ガセリ
(Lactobacillusgasseri)もしくはラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillushel
veticus)に属する乳酸菌が、血中アディポネクチン濃度増加促進、及び/又は減少抑制
効果を有することを見出した。上記の条件に合致する菌株として、ラクトバチラス・ガセ
リに属する乳酸菌のうち、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillusgasseri)SBT2055株
、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillusgasseri)JCM1131株、およびラクトバチラス
・ガセリ(Lactobacillusgasseri)ATCC19992株を選択することができた。なお、SBT205
5株は、受託番号FERM BP-10953として、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託されている。また、JCM1131株は独立行政法人理化学研究所の公開菌株、ATCC19992株はAmericanTypeCultureCollectionの公開菌株である。
さらに、本発明は、ラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌、その中でもラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)及びラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)の発酵物、あるいはその菌体自体を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制の機能を賦与した飼料である。家畜用飼料として、前記飲食品と同様に、菌体や培養物又は発酵物は、どのような飼料に配合しても良く、飲食品の製造工程中に原料に添加しても良い。
本発明で用いる乳酸菌菌体は、古来、発酵乳やチーズの製造に用いられており、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤、あるいは血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用飲食品、飼料は安全性に問題はないという特徴がある。
以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
還元脱脂乳培地(13重量%脱脂粉乳、0.5重量%酵母エキス含有)を95℃で30分間殺菌した後、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055を接種し、37℃で16時間培養し、得られた培養物を凍結乾燥してラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055の培養物粉末を得た。これは、そのまま本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤として使用し得る。
還元脱脂乳培地(13重量%脱脂粉乳、0.5重量%酵母エキス含有)を95℃で30分間殺菌した後、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)JCM1131を接種し、37℃で16時間培養し、得られた培養物を凍結乾燥してラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)JCM1131の培養物粉末を得た。これは、そのまま本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤として使用し得る。
(ラクトバチラス・ガセリ培養物の投与と血中アディポネクチンの測定)
4週令Fischer系雄ラット50匹に、コントロール食を自由に摂取させて1週間飼育した後、10匹ずつ各群に分け、1群は引き続きコントロール食を、別の群にはラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)JCM1131、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)ATCC19992、ラクトバチラス・カゼイ(Lactobacillus casei)ATCC11578を配合した試験食を自由に摂取させてさらに4週間飼育した後、血中アディポネクチン濃度を測定した。なお、5群に体重、摂食量、糞重量の差は認められなかった。
血中アディポネクチン濃度を測定して得られた結果を表1に示す。これによると血中アディポネクチン濃度は、コントロール食摂取群と比較してラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)JCM1131、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)ATCC19992、ラクトバチラス・カゼイ(Lactobacillus casei)ATCC11578食摂取群は有意に高値を維持していた。すなわち、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)JCM1131、ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)ATCC19992、ラクトバチラス・カゼイ(Lactobacillus casei)ATCC11578の培養物粉末を添加した食品は、血中アディポネクチン濃度を一定に維持することが確認された。
ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055の液体培養物を4℃、7,000rpmで15分間遠心分離して滅菌水による洗浄を行い、これを3回繰り返して洗浄菌体を得た。これを凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。この菌体粉末1部に脱脂粉乳4部を混合し、この混合粉末を打錠機により1gずつ定法により打錠して、本発明のラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055の菌体200mgを含む錠剤を調製した。
ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055をMRS液体培地(Difco社)にて培養した。対数増殖期にある各培養液を、0.3%の酵母エキスを添加した10%還元脱脂乳(115℃、20分滅菌)に1%接種し、マザーカルチャーを作成した。これに10%の還元脱脂乳を添加して、100℃にて10分間加熱したヨーグルトミックスに2.5%添加して調製した。37℃で発酵を行い、乳酸酸度0.85に到達した時点で冷却し、発酵を終了させ、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤用発酵乳を得た。
ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055をMRS液体培地(Difco社)5Lに接種後、37℃、18時間静置培養を行った。培養終了後、7,000rpmで15分間遠心分離を行い、培養液の1/50量の濃縮菌体を得た。次いで、この濃縮菌体を、脱脂粉乳10重量%、グルタミン酸ソーダ1重量%を含む分散媒と同量混合し、pH7に調整後、凍結乾燥を行った。得られた凍結乾燥物を60メッシュのフルイで整粒化し、凍結乾燥菌末を製造した。第13改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、この凍結乾燥菌末1gにラクトース(日局)400g、バレイショデンプン(日局)600gを加えて均一に混合し、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用散剤を得た。
実施例1で得られたラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055の培養物粉末30gに、ビタミンCとクエン酸の等量混合物40g、グラニュー糖100g、コーンスターチと乳糖の等量混合物60gを加えて混合した。混合物をスティック状袋に詰め、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用スティック状健康食品を製造した。
脂肪率を調整した原料乳を75℃で15秒間のプレート加熱殺菌を行った後、30℃まで冷却し、0.01%塩化カルシウムを添加した。次に、これらの原料乳に市販の乳酸菌スターター(クリスチャン・ハンセン社製) 0.7%及びラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)SBT2055 1%を添加し、レンネット0.003 %を添加して乳を凝固させた後、カッテングしてpHが 6.2〜6.1 となるまで撹拌し、ホエーを排出し、カード粒を得た。さらに、このカード粒を型詰めして圧搾し、さらに加塩して、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用ナチュラルチーズを製造した。
表2に示した配合により原料を混合し、造粒した後、カプセルに充填して、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用カプセル剤を製造した。
──────────────────────────
SBT2055(実施例1) 20.0 (重量%)
ラクトース 24.5
可溶性デンプン 55.0
ステアリン酸マグネシウム 0.5
──────────────────────────
表3に示した配合により原料を混合し、容器に充填した後、加熱殺菌して、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用飲料を製造した。
──────────────────────────
SBT2055(実施例2) 2.5 (重量%)
砂糖 7.5
クエン酸 0.6
リンゴ果汁 10.0
水 79.4
──────────────────────────
チーズ中の脂肪率が12〜30%となるように調整した原料乳を使用して、数種類の低脂肪硬質ナチュラルチーズを製造した。すなわち、脂肪率を調整した原料乳を75℃で15秒間のプレート加熱殺菌を行った後、30℃まで冷却し、0.01%塩化カルシウムを添加した。次に、これらの原料乳に乳酸菌スターター(クリスチャン・ハンセン社製) 0.7%及びラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)SBT2171 1%を添加し、レンネット0.003 %を添加して乳を凝固させた後、カッテングしてpHが6.2〜6.1となるまで撹拌し、ホエーを排出し、カード粒を得た。さらに、このカード粒を型詰めして圧搾し、さらに加塩して、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用ゴーダチーズタイプ低脂肪硬質ナチュラルチーズを製造した。
ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)SBT2171を用いて発酵乳の製造を行った。ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus) SBT2171を、脱脂乳100gを用いて37℃、12時間培養したものを、新しい同培地3kgに接種し、37℃、12時間培養した。培養終了した乳全量をスターターとして用い、脱脂乳100kgを32℃、20時間発酵させ本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制用発酵乳を得た。ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)SBT2171の生菌数は8.2×108cells/gであった。
実施例11で得られた発酵乳43kgにグラニュー糖4kg、水3kg、ペクチン0.15kgを加えた後に均質化して、ドリンクヨーグルト50kgを得た。このドリンクヨーグルトはマイルドな好ましい風味を有し、pH3.6で、ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)SBT2171の生菌数は4.6×108cells/gであった。
(血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制作用の確認)
ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)の菌体を使用して、血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制作用を確認した。動物実験は4週令Fischer系雄ラット1群8匹とし、ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)を配合した飼料を投与した群(菌体食群)、菌体を配合しない飼料を投与した群(対照食群)として行った。動物実験は、飼育後4週目までは対照飼料を与え、その後8週目まで対照飼料、あるいはラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)を配合した菌体飼料を与えた。4週目、8週目に採血を行い、マウス/ラットアディポネクチンELISAキット(大塚製薬社)を用いて血中アディポネクチン濃度を測定した。
結果を表4に示す。これによると対照食群の血中アディポネクチン濃度は時間の経過によって減少しているのに対し、菌体食群では増加することが明らかとなった。つまり、ラクトバチラス・ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)を摂取することにより、血中アディポネクチン濃度の増加が促進、あるいは減少が抑制されることが分った。
(アディポネクチン増加促進及び/又は減少抑制作用の確認)
実施例10で得られたチーズを使用して、アディポネクチン増加促進及び/又は減少抑制作用を確認した。動物実験は4 週齢のFischer系ラットを1群8匹とし、チーズを配合した飼料を投与した群(チーズ食群)、チーズを配合しない対照飼料を投与した群(対照食群)として行った。対照飼料は、タンパク質源としてミルクカゼイン、脂質源としてバターオイルを用い、チーズの成分分析の結果(表5)をもとに、一般成分、主要ミネラル、ビタミンE(α―トコフェロール)の含有量がチーズを配合した飼料と同じになるように配合した。チーズを配合した飼料では、タンパク質、脂質とも、チーズ成分のみでまかなった。
動物実験は、飼育後4週目までは対照飼料を与え、その後2群に分けて8週目まで対照飼料、チーズ飼料を与えた。4週目、8週目に採血を行い、マウス/ラットアディポネクチンELISAキット(大塚製薬社)を用いて血中アディポネクチン濃度を測定した。
──────────────────────────
SBT2171菌体 2.5 (重量%)
脱脂粉乳 13.5
大豆粕 12.0
大豆油 4.0
コーン油 2.0
パーム油 27.0
トウモロコシでんぷん 14.0
小麦粉 9.0
ふすま 2.0
ビタミン混合物 9.0
ミネラル混合物 2.0
セルロース 3.0
──────────────────────────
Claims (4)
- ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillusgasseri)又はラクトバチラス・カゼイ(Lacto
bacilluscasei)ATCC11578から選択されるラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌の
培養物及び/又は菌体を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減
少抑制剤。 - ラクトバチラス属乳酸菌が、FERM BP-10953、JCM1131及びATCC19992から選択されるラクトバチラス・ガセリ及びラクトバチラス・カゼイATCC11578から選択される1又は2以上の乳酸菌である、請求項1に記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び/又は減少抑制剤。
- ラクトバチラス・ガセリ(Lactobacillusgasseri)又はラクトバチラス・カゼイ(Lacto
bacilluscasei)ATCC11578から選択されるラクトバチラス(Lactobacillus)属乳酸菌の
培養物及び/又は菌体を有効成分とするメタボリックシンドロームの予防又は治療剤。 - ラクトバチラス属乳酸菌が、FERM BP-10953、JCM1131及びATCC19992から選択されるラクトバチラス・ガセリ及びラクトバチラス・カゼイATCC11578から選択される1又は2以上の乳酸菌である、請求項3に記載のメタボリックシンドロームの予防又は治療剤。
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