TWI432135B - The cultivation method of the fecal umbrella and the culture of the bed - Google Patents

Description

真姬離褶傘之菌床栽培方法及菌床栽培用培養物

本發明係關於一種真姬離褶傘(Lyophyllum shimeji )之菌床栽培用方法以及菌床栽培用培養物。

真姬離褶傘係於10月中旬，在枹櫟林或者枹櫟．赤松混生林之地面上生長出的菇類，被稱為「清香松蕈味之真姬菇」，與松蕈並列為日本食用菇類中的最高級菇類。近年來，金針菇、蠔菇、滑菇、鴻喜菇、舞菇等食用菇類確立了使用主要混合有鋸屑及米糠．麩皮等營養源之培養基來進行人工栽培的菌床栽培方法，在全年裏不分季節而可穩定地收穫菇類。真姬離褶傘亦為極其美味之菇類，故期望確立人工栽培之方法，但與上述金針菇等為木材腐朽菌相反，真姬離褶傘為菌根菌，故難以進行人工菌床栽培。

該真姬離褶傘之人工菌床栽培係由滋賀縣森林中心的太田氏首次研究成功，於專利文獻1中揭示有使用麥類的真姬離褶傘之菌床栽培方法，於非專利文獻1中揭示有在使用麥類之培養基中生長出真姬離褶傘子實體之實驗。

又，於專利文獻2中揭示有利用以泥炭沼作為基材、且添加有澱粉等之培養基來進行的菌根菌之菌絲培養方法，並且相同發明者們於非專利文獻2中報告有在以泥炭沼作為基材、且添加有澱粉等之培養基中生長出真姬離褶傘之子實體的實驗。

但是，於專利文獻1之發明者們的方法中，由於培養基 中所使用之麥類的價格昂貴，故培養基成本提高。又，於專利文獻2之發明者們的方法中，所生長出之子實體的產量低，尚未達到商業生產之水準。

近年來，揭示有多種以真姬離褶傘之商業栽培為目的之真姬離褶傘的栽培方法。於專利文獻3中揭示有以含有黍亞科植物為特徵的真姬離褶傘之菌床栽培用培養基、以及使用該培養基的真姬離褶傘之栽培方法。又，於專利文獻4中揭示有具有如下特徵的真姬離褶傘之菌床栽培方法：製備至少含有玉米粉及闊葉樹之鋸屑的混合培養基，使該混合培養基處於水濕潤狀態而接種真姬離褶傘之菌絲，於30℃以下之溫度下進行培養，藉此而使子實體長出。

於專利文獻5中揭示有具有如下特徵的真姬離褶傘之菌床栽培方法：在真姬離褶傘之栽培方法中，對於藉由在水濕潤狀態下接種真姬離褶傘之菌絲並進行培養而可生長出子實體的培養基，添加經粉碎之牡蠣殼並加以混合，且將培養基之pH值調整成不超過7之範圍。

於專利文獻6中揭示有具有如下特徵的真姬離褶傘之菌床栽培方法：培養基係使用在含有玉米粉及鋸屑之培養基中添加少量麥類及/或米類並加以混合而製備的混合培養基，使該混合培養基處於水濕潤狀態而接種真姬離褶傘並進行培養後，使子實體長出。

於專利文獻1中，在其實施例中，將真姬離褶傘菌株於23℃下培養70天後，將溫度降低至15℃，調查是否形成子實體原基。又，藉由以泥炭覆蓋培養基表面，而使子實體 形成率上升。又，於非專利文獻1中，在22℃之培養步驟中菌絲蔓延時，以厚度達到1 cm之方式將泥炭添加至培養基上，其後進一步培養2週，培養完畢後轉移至15℃之生長室中，使子實體長出。

於非專利文獻2中，將真姬離褶傘菌株接種於培養基上後，於23℃下培養．成熟後，於16℃之生長室內進行生長操作，在其第13~15天確認子實體原基之形成。

於專利文獻3中，作為瓶栽培方法，揭示有培養基製備、裝瓶、殺菌、接種、培養、出芽、生長、收穫等各步驟，於培養後之出芽步驟中使子實體原基形成。又，在其實施例中，係於赤玉土覆蓋之狀態下進行出芽步驟。

於專利文獻4中，在其實施例中，將真姬離褶傘菌株於23℃下培養60天後，以鹿沼土覆蓋培養基上表面，進一步培養7天後，轉移至15℃之生長室中，以促進子實體長出。

於專利文獻5中，在其實施例中，將真姬離褶傘菌株於23℃下栽培70天後，轉移至15℃之生長室中，在出現小的子實體時除去蓋子，於生長至子實體之傘打開之階段進行收穫。

於專利文獻6中，在其實施例中，將真姬離褶傘菌株於23℃下培養55天後，以鹿沼土覆蓋培養基上表面，進一步培養10天後，轉移至15℃之生長室中，以促進子實體長出。

[專利文獻1]日本專利特開平07－115844號公報 [專利文獻2]日本專利特開平06－153695號公報[專利文獻3]日本專利特開2000－106752號公報[專利文獻4]日本專利特開2002－247917號公報[專利文獻5]日本專利特開2005－27585號公報[專利文獻6]日本專利特開2007－54044號公報

[非專利文獻1]日本菌學會報，第39卷，第13~20頁，1998年[非專利文獻2]日本菌學會報，第35卷，第192~195頁，1994年

本發明者們基於上述專利文獻3中所揭示之技術，開始進行真姬離褶傘之商業栽培，尤其是大型真姬離褶傘之商業栽培，但為了商業栽培之成功而期望進一步之技術開發。

即，本發明之目的在於，鑒於上述現狀，而提供一種在商業栽培中可穩定生產真姬離褶傘的菌床栽培用方法。

於真姬離褶傘之栽培中，主流為在菌絲培養後進行覆土，使子實體長出。然而，由覆土來誘發子實體，除覆土作業之外，必須進行除去覆土之作業，故較為繁雜。現狀為，於進行覆土、或不進行覆土之情形時，均於控制為低於培養溫度之溫度的環境下誘發子實體原基長出。本發明者們致力於開發不進行覆土的真姬離褶傘之菌床栽培，若 生產規模為1批次之培養基製備量超過4噸，則子實體產量之不穩定性會變得明顯。為了消除該不穩定性，本發明者們對會影響真姬離褶傘菌床栽培之各種因素逐一進行栽培研究，並就該等因素對大規模栽培之影響進行了積極研究。結果發現，藉由在培養條件下進行一定的光照射，可誘導子實體原基，並且發現，藉由在培養條件下完成該子實體原基誘導，不僅真姬離褶傘栽培穩定，而且獲得總栽培時間縮短、真姬離褶傘子實體產量增收之效果，從而完成本發明。

即，若概述本發明，則本發明之第一發明係關於一種真姬離褶傘之菌床栽培方法，其特徵在於：在培養中進行子實體原基形成。作為本發明之第一發明的態樣，可列舉以對培養中之菌床栽培用培養基進行光照射而進行子實體原基形成作為特徵的真姬離褶傘之菌床栽培方法。又，其較佳態樣可列舉以在培養步驟中完成子實體原基形成作為特徵的真姬離褶傘之菌床栽培方法；作為該等態樣，可列舉光照射時期為培養步驟中之培養後期的真姬離褶傘之菌床栽培方法。作為真姬離褶傘之培養步驟中的光照射條件，若為可於培養中誘發子實體原基長出之條件即可，並無特別限定，累計光照度為20勒克司(lux)小時以上，較好的是200勒克司小時以上。為了使子實體之柄部分不產生空洞，真姬離褶傘之培養必須充分進行，在本發明中較好的是使培養充分進行，在其培養後期之20~30天之間進行光照射。

本發明之第二發明係關於一種在培養中進行子實體原基形成的培養中之真姬離褶傘菌床栽培用培養物。該培養物經維持在清潔之狀態，並且可直接移送至遙遠地方之菇類栽培設施的方面亦較有用。

根據本發明，提供一種真姬離褶傘之菌床栽培方法，其在大規模商業栽培中可穩定生產真姬離褶傘，且經濟性優異。

以下，對本發明加以具體說明。

於本說明書中，所謂真姬離褶傘，係指在分類學上被分類為Lyophyllum shimeji者。

關於本發明中所使用的真姬離褶傘之菌株，可選擇可進行人工栽培者，並無特別限定，可例示公知之真姬離褶傘菌株，例如：Lyophyllum shimeji La 01－27(FERM BP－10960)、Lyophyllum shimeji La 01－20(FERM BP－10959)、Lyophyllum shimeji La 01－37(FERM P－17456)、Lyophyllum shimeji La 01－45(FERM P－17457)、Lyophyllum shimeji La 01－46(FERM P－17458)。

作為本發明之真姬離褶傘之栽培方法，可應用瓶栽培、袋栽培、箱栽培等人工的菌床栽培方法，其特徵在於：在其培養中進行子實體原基形成及/或完成子實體原基形成。即，本發明者們首次確立了並不改變真姬離褶傘之生長溫度及子實體原基形成溫度的栽培方法。以下，作為一 例，對藉由瓶栽培的本發明之菇類之菌床栽培方法進行說明，該方法包括：培養基製備、裝瓶、殺菌、接種、培養(包括原基形成)、出芽(包括培養中之出芽)、視需要挑選芽、生長、收穫等各步驟。接著，對該等進行具體說明，但本發明並不限定於該等。

所謂培養基製備，係指稱量用於菌床栽培之各種基材，加以攪拌，加水，進行水分調整，以達到適合真姬離褶傘之菌床栽培的水濕潤狀態的步驟。對本發明中所使用的真姬離褶傘之菌床栽培用培養基並無限定，若為可用於栽培者即可，較好的是玉米類與源自針葉樹之鋸屑、例如源自杉樹之鋸屑(杉木屑)的組合。

以加熱壓片玉米與源自杉樹之鋸屑(杉木屑)之情形為例，對玉米類與源自針葉樹之鋸屑的混合比率進行說明。玉米類與源自針葉樹之鋸屑的混合比率若為可進行真姬離褶傘之栽培的比率即可，就實現高產量之觀點而言，加熱壓片玉米含量之下限以其乾燥重量比計，為菌床栽培用培養基中之40%以上，較好的是50%以上，更好的是60%以上。若未滿40%，則所獲得之真姬離褶傘的產量會顯著下降，故欠佳。又，加熱壓片玉米之吸水性低，因此若其於菌床栽培用培養基中之含量過高，則菌床栽培用培養基之水分保持力會下降，水分會滯留在培養瓶下部，結果會導致菌絲蔓延不良的情況。即，加熱壓片玉米含量之上限以其乾燥重量比計，為菌床栽培用培養基中之80%以下，較好的是75%以下，更好的是70%以下。

又，對菌床栽培用培養基之水分含量，亦以加熱壓片玉米與杉木屑之情形進行說明。根據業者之常識，菌床栽培用培養基之水分含量較好的是調整為水分不會滯留在培養瓶下部之程度，並無特別限定，例如為68重量%以下，較好的是66重量%以下。其中，於水分含量超過64重量%之情形時，會有培養基中之空隙減少，而產生菌絲蔓延不良之情況，結果導致所獲得之子實體的產量及品質下降，因此更好的是調整為64重量%以下。再者，水分含量過低，亦會因培養基之乾燥等的影響，而產生菌絲蔓延不良或子實體之畸形、生長不良，因此較好的是將水分含量調整為50重量%以上，更好的是55重量%以上。關於該等水分含量，可視經水分調整之培養基性狀而進行適當設定。

所謂裝瓶，係指將菌床栽培用培養基填裝入瓶中的步驟。具體而言，通常係指如下步驟：將所製備之菌床栽培用培養基填裝入容量為400~2300 mL之耐熱性廣口培養瓶中，例如於容量為1100 mL之瓶時，填裝入700~1000 g，較好的是750~850 g，並且開1個至複數個口徑為1~3 cm左右之孔並塞上塞子，藉由在菌座中心部開1個口徑為1.5 cm之孔，再在其周圍開4個口徑為1 cm之孔，可適合進行真姬離褶傘之培養。

所謂殺菌，若為殺滅培養基中之全部微生物的步驟即可，通常，利用蒸氣之常壓殺菌係於98~100℃下進行4~12小時，高壓殺菌係於101~125℃、較好的是118℃下進行30~90分鐘。

所謂接種，係指將種菌移植至殺菌後經放置冷卻之培養基上的步驟，通常作為種菌，係可將真姬離褶傘菌絲於PGY液體培養基、1/2 PGY液體培養基等以葡萄糖、蛋白腖及酵母萃取物作為主成分之培養基中，於25℃下培養10~15天，將獲得者用作液體種菌。該液體種菌，例如於1100 mL之廣口培養瓶的每1瓶中無菌移植約10~50 mL。又，亦可使用公知之固體種菌，例如，將至此所說明之步驟中所獲得之已接種液體種菌之菌床栽培用培養基，於25℃下培養60~150天，將佈滿菌絲者亦可用作固體種菌。該固體種菌，例如於1100 mL之廣口培養瓶的每1瓶中無菌移植15 g左右。

所謂培養，係指使菌絲生長、成熟之步驟。通常，使接種完畢之菌床栽培用培養基保持為溫度20~25℃、濕度50~80%，使菌絲蔓延，進而使其成熟。再者，亦可省略成熟步驟。培養步驟可根據培養基之容量而進行適當設定，於1100 mL瓶栽培的情況下通常進行80~120天，較好的是100天左右。

於本發明中，在該培養後期之20~30天進行累計光照度為20勒克司小時以上、較好的是200勒克司小時以上之光照射，於培養條件下進行子實體原基形成。即，於本發明之真姬離褶傘之栽培方法中，子實體原基之形成並非由覆土或栽培溫度之降低所誘導。又，於本步驟中，亦可使所形成之子實體原基成長為幼子實體。

於本發明中，所謂出芽，係指使芽(幼子實體)自子實體 原基形成及/或促進幼子實體成長之步驟。除去在培養中使原基及/或幼子實體形成之瓶的塞子，通常於10~20℃、較好的是15℃左右，以80%以上之濕度、1000勒克司以下之光照度進行5~15天。又，亦可於上述培養步驟之前或出芽步驟之前在菌床面上形成複數個孔。藉由形成該孔，培養基之通氣性變得良好，又，藉由對來自孔之子實體實施栽培，可栽培性狀良好之真姬離褶傘子實體。出芽步驟中容易因加濕而產生露水，因此為了防止濡濕，可用有孔聚乙烯片材或瓦楞板等覆蓋菌床面，亦可將培養瓶反轉而進行培養。

所謂生長，係指自幼子實體形成成熟子實體之步驟，通常，除了將光照度設為2000勒克司以下之外，在與出芽步驟大致相同之條件下進行5~15天。在生育步驟中，不易受到由露水引起之濡濕的影響，因此較好的是不實施有孔聚乙烯片材或瓦楞板等之覆蓋。又，為了獲得獨立之商品價值高的子實體，亦可於該步驟之初期(直至第5天為止)追加芽之挑選步驟，該芽之挑選步驟係於菌座上所長出之芽中，將欲使其成長為子實體之數個芽留下，而將其他芽摘除。

可藉由以上步驟而獲得成熟子實體，進行收穫而完成栽培之全部步驟。以上，藉由瓶栽培方法來對本發明進行了說明，本發明可應用於菇類之菌床栽培，並不限定於上述瓶栽培。

藉由本發明，先前需要10~20天的除去瓶塞後之出芽時 間縮短為5~15天，真姬離褶傘之菌床栽培總天數縮短。又，並不除去瓶塞，而於清潔之環境下誘發子實體原基形成。於本發明中極其顯著之效果係總栽培天數縮短，且表現出產量之顯著提高。

[實施例]

以下，藉由實施例來對本發明進行更具體說明，本發明並非僅限定於以下實施例之範圍。

實施例1

於100 mL之PGY液體培養基(組成：葡萄糖為2.0%(w/v)、蛋白腖為0.2%(w/v)、酵母萃取物為0.2%(w/v)、KH₂ PO₄ 為0.05%(w/v)、MgSO4．7H₂ O為0.05%(w/v))上，接種Lyophyllum shimeji La 01－27株(FERM BP－10960)之菌絲，於25℃下進行7天振盪培養(100 rpm)後，將2 mL移植至200 mL之相同培養基上，繼續進行7天振盪培養(100 rpm)後，進而將全部培養物接種至加入有160 L之相同培養基的容量為200 L之缸式醱酵槽(小松川製作所製造)中，進行6天攪拌培養(攪拌速度：100 rpm，通氣量：25 L/min)，來製備液體種菌。另一方面，將壓片玉米(飯阪精麥公司製造)與針葉樹鋸屑之杉木屑(Tomoe Bussan有限公司)以2：1(壓片玉米：針葉樹鋸屑)之乾物重量比進行混合，以培養基之水分最終達到62重量%之方式添加水，充分攪拌．混合，將所獲得者分別填裝入每1批次約為5000個聚丙烯製廣口培養瓶(1100 mL)(包括瓶及蓋子之重量合計為800 g)中。於填裝物表面之中央開1個口徑為2.0 cm之孔，且於 以填裝物表面之中央為中心的直徑為4 cm之圓周上均等地開4個口徑為1 cm之孔，該等5個孔的深度均為10 cm左右，之後在培養瓶上蓋上蓋子，於118℃下進行30分鐘高壓蒸氣殺菌，放置冷卻至20℃，將所獲得者製備成菌床栽培用培養基(固態培養基)。於該固態培養基上接種約25 mL之上述液體種菌，在暗處於溫度為20℃、濕度為70~75%之條件下將菌絲培養約75~85天，使菌絲在整個培養基上蔓延後，除了每1天點亮8小時房間的照明以外，以相同條件進一步繼續培養25~35天，共計進行約110天之培養，使子實體原基形成。利用光照度計(Konica Minolta製造之T－10M)來測定照射至培養物之光照度，結果為在0.1~600勒克司之範圍內，累計光照度為20~12,0000勒克司小時之光照射至各培養物上，於任一光照度下均表現出良好之子實體原基誘導。繼而，除去蓋子，將瓶反轉後，轉移至溫度為15℃、且以Humid Eye 100(鷺宮製作所股份有限公司製造)之顯示值成為115~120%之方式控制加濕的出芽室中，於100勒克司以下之照明下進行7天出芽。其後將瓶正轉，使用刮勺，自培養基表面所長出之複數個芽中，將成長為子實體之4~5個形狀良好之芽以外的不要的芽除去後，進而放置10~11天，轉移至溫度為15℃、且以Humid Eye 100(鷺宮製作所股份有限公司製造)之顯示值成為105~120%之方式控制加濕的生長室中，於50~100勒克司以下之照明下使其生長9~11天，藉此獲得成熟子實體，並進行收穫。總栽培天數為126~128天。以上述方法製造之 10批次的結果如下所示。

如表1所示，與下述比較例1相比，每1個培養瓶之平均產量在顯著性水平為5%之檢定中顯著增加(P＝0.006)。

比較例1

除了在培養步驟之整個期間不點亮照明即進行培養以外，以與實施例1相同之方式進行栽培。在培養步驟中子實體原基未形成，而是在下一步驟中使子實體原基形成，因此出芽步驟成為10天，結果總栽培天數成為129~131天。以上述方法製造之10批次的結果如下所示。

如表2所示，與實施例1相比，每1個培養瓶之平均產量值較少。

[產業上之可利用性]

根據本發明，提供一種可穩定生產真姬離褶傘之菌床栽培方法、以及在培養中進行子實體原基形成的培養中之真姬離褶傘菌床栽培用培養物。該培養物經維持在清潔之狀態，從而可於清潔之環境下進行子實體原基形成，並且可於清潔條件下將子實體原基形成後之培養物直接移送至遙遠地方之菇類栽培設施的方面亦較有用。根據本發明，可進行總栽培天數縮短、且真姬離褶傘生產穩定的高效率之大規模商業栽培。

Claims (4)

1. 一種真姬離褶傘之菌床栽培方法，其特徵在於對培養中之菌床栽培用培養基進行光照射，在培養中進行子實體原基形成。
2. 如請求項1之真姬離褶傘之菌床栽培方法，其中光照射時期為培養步驟中，出芽步驟之前的20~30天。
3. 如請求項1或2之真姬離褶傘之菌床栽培方法，其中以累計光照度計，光照射為20勒克司(lux)小時以上。
4. 一種培養中之真姬離褶傘菌床栽培用培養物，其係對培養中之菌床栽培用培養基進行光照射，於培養中進行子實體原基形成。