TWI344986B - A process for preparing dry yeast containing s-adenosyl-l-methionine and an oral composition - Google Patents

A process for preparing dry yeast containing s-adenosyl-l-methionine and an oral composition Download PDF

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Description

1344986 控制可由酸、鹼溶液來施行。鹼以作爲氮源使用之氨、尿 素、或非氮系鹼，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀等來pH控制 較佳。酸可用無機酸，例如磷酸、硫酸、硝酸、或有機酸。 無機鹽類也可用磷酸鹽、鉀鹽、鈉鹽、硝酸鹽等來pH控 制。 以如此條件培養，目標量之SAMe於酵母菌體中蓄積之 階段由培養槽抽出培養液後’分離而作爲酵母菌體濃縮物 。分離方法只要能有效施行菌體之分離和洗淨則無特限， 適例爲向流型之酵母分離器或使用分離膜之超濾裝置。 於分離之酵母菌體濃縮物施行硫酸等礦酸添加處理，及 加熱處理之至少任一方之處理。施行礦酸添加處理，則可 增加SAMe之安定性而增高收穫量。添加之礦酸只要能經口 攝取則無特限，可爲鹽酸、硫酸、磷酸等，尤其適例爲硫 酸。礦酸之添加量須成pHl〜5之量，尤其以成pHl〜4之 量較佳》 施行加熱處理則可施行SAMe分解酵素之失活或滅菌之 加熱處理可採用所得SAMe含量成儘量高之條件，加熱處 理條件雖依處理時間而異，唯處理溫度須40°C〜85 °C，以 40°C〜80°C較佳，以40°C〜70°C更佳，以50°C〜70°C更較 佳。 加熱時間依加熱溫度而變，不能一槪決定，.以30〜600 秒較佳，以30〜60秒更較佳。加熱處理30秒以上，則可 施行SAMe分解酵素之失活或殺菌等。又可促進礦酸根之 滲透，故可節減所添加之礦酸量。若令加熱時間爲600秒 -11- 1344986 以下，則可回避因SAMe分解之含量降低。 加熱處理可於常壓、加壓之任何方法皆可實施。施行加 熱處理或添加礦酸，則可得相對高之SAMe含量之乾燥酵 母菌體。 又合倂礦酸添加處理及加熱處理，則比只施行礦酸添加 處理之場合可節減添加之礦酸量。又比只施行加熱處理之 場合，可得更高SAMe含量之乾燥菌體故更較佳。也即礦酸 添加量與加熱溫度之組合雖依加熱時間而異，唯以成pHl 〜5之礦酸添加量與40°C〜85 °C之溫度條件之組合較佳， 以成pHl〜4之礦酸添加量與40°C〜80°C之溫度條件之組 合更較佳，以成pHl〜4之礦酸添加量與4 0°C〜70°C之溫 度條件之組合更較佳，更以成pHl〜4之礦酸添加量與50 °C〜70°C之溫度條件之組合更較佳。 如此施行礦酸添加處理及加熱處理之至少任一方之處理 後，令所得酵母菌體濃縮物，例如以噴霧乾燥機之噴霧乾 燥法或使最終棚段溫度爲25t之凍結乾燥等乾燥方法來蒸 發水分作成乾燥酵母。 次令此乾燥酵母破碎成粉末狀、或於粉末狀之乾燥酵母 依必要而添加其他生理活性成分或賦形劑等添加劑後，壓 縮打錠作成錠劑狀之經口攝取用組成物，更也可被覆其表 面。又也可令粉體造粒成顆粒狀，或令所造粒之顆粒裝入 膠囊。 實施例 以下由實施例及比較例更詳細說明本發明，但本發明不 -12- 1344986 以下由實施例及比較例更詳細說明本發明，但本發明不 受這些例之限定。 實施例1 U)酵母菌體之培養
依前述公知之培養法 〔Shiozaki S.，et 311丄；^〇16(：1111〇1〇£7,4,345-354(1 986)(非專利文獻8)〕，用 九菱生技公司製之3 0L筒狀培養槽施行酵母菌體之培養。 培養基成分於含有作爲碳源之蔗糖10質量％、酵母汁1質 量％，作爲氮源之尿素1.8質量％、L-甲硫胺酸1質量％、 L-甘胺醯甘胺酸0.2質量％、ΚΗ2Ρ〇4 0.4質量％、硫酸鎂4 • 7水合物0_01質量％、生物素2/z g/mL、混合礦物質0.2 質量％ (混合礦物質組成如下：氯化鈣-2水合物2.0質量％ 、硫酸錳-5水合物0.05質量％、硫酸鐵-7水合物0.05度 量％、硫酸鋅-7水合物0.1質量％、硫酸銅-5水合物0.001 質量％、氯化鈷-6水合物0.001質量％、硼酸0.001質量％ 、鉬酸鈉0.001質量％ '碘化鉀0.001質量％)之培養基接種 屬於酵母屬之酵母釀酒酵母IF02346，以培養溫度27〜29 °C，150rpm之攪拌速度嗜氣通氣下培養6日。又於培養途 中逐次添加成爲不足之乙醇，硫酸鎂-7水合物來提高 SAMe含有量。結果得菌體濃度3.5質量％，SAMe含量 205mg/g乾燥酵母之酵母菌體培養液18L。 (b )酵母菌體之集菌 上述之酵母菌體培養液18L以連續回轉型離心器（曰立 HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)處理，得乾物換算相當於18 1344986 質量％之菌濃度之液狀酵母菌體濃縮物3.49ks。 (C)於酵母菌體濃縮物之礦酸添加 於上述酵母菌體濃縮物3.49kg添加95質量％硫酸224g ，得pH 1之酵母菌體濃縮物3.71kg。 (d)乾燥酵母之製造 上述之PH1之酵母菌體濃縮物3.71kg用具有作爲微粒子 化裝置之回轉噴霧（回轉圓盤）之噴霧乾燥機（NIPRO公司製 )，以乾燥室之入口溫度195〜205 t：、出口溫度80〜90 °C 、通液速度38g/分之條件噴霧乾燥’得粉末乾燥酵母570g 。所得粉末乾燥酵母中之SAMe含量爲174mg/g-乾燥酵母。 粉末乾燥酵母中之SAMe含量爲由SAMe含有乾燥酵母 用過氯酸依公知之方法（例如 Shiozaki S.，et all，Agric.Biol.Chem·,48,2293-2300(1 984))萃取 SAMe，以液 體層析來定量。液體層析用如下分析條件： 柱：半井（n a c a 1 a i t e s q u e) C 0 S Μ 0 SIL 4 · 6 Φ X 1 0 0 m m 溶離液：0.2M KH2P〇4水溶液/甲醇-95/5(體積比） 流速：0.7mL/min,檢出器：UV(260nm)，SAMe保持時間：約 150秒 實施例2〜4 除於酵母菌體濃縮物添加硫酸而使pH2、3或4以外， 與實施例1同樣處理，調査硫酸添加後之pH與噴霧乾燥 後之SAMe含量之關係。結果如表1。 比較例1 除於酵母菌體濃縮物不添加硫酸以外，與實施例1同樣 -14- 1344986 母中之SAMe含量爲136mg/g·乾燥酵母。結果如表1。 表1.於只添加礦酸處理時之酵母菌體濃縮物添加礦酸後之 pH與由噴霧乾燥所得粉末乾燥酵母之SAMe含量之關係（ 無加熱處理） [表1] 例 95%硫酸添加量 ω 硫酸添加後之pH 粉末乾燥酵母中之SAMe含量 (mg/g-乾燥酵母） 實施例1 224 1 174 實施例2 118 2 171 實施例3 57.5 3 153 實施例4 23.6 4 144 比較例1 0 5.2 136 實施例5 與實施例1同樣施行（a)〜（c)之操作，添加硫酸得pHl之 酵母菌體濃縮物3.71kg。令此酵母菌體就未加熱而注入凍 結乾燥器（日本真空技術公司製）之凍結乾燥用不鏽鋼盤， 於-50°C凍結後，以最終棚段溫度25°C之條件凍結乾燥36 小時。所得凍結乾燥酵母更予以粉碎而得粉末乾燥酵母 612g。所得粉末乾燥酵母中之SAMe含量爲170mg/g-乾燥酵 母。結果如表2。 實施例6〜8 除於酵母菌體濃縮物添加硫酸而使PH2、3或4以外， 與實施例5同樣處理，調査硫酸添加後之pH與凍結乾燥 後之SAMe含量之關係。結果如表2» 比較例2 -15- 1344986 除於酵母菌體濃縮物不添加硫酸以外，與實施例5同樣 處理，得凍結乾燥之粉末乾燥酵母609g。所得粉末乾燥肖 母中之SAMe含量爲136mg/g-乾燥酵母。結果如表2。 表2.於只添加礦酸處理時之酵母菌體濃縮物添加礦酸後 之pH與由凍結乾燥所得粉末乾燥酵母之SAMe含量之關 係（無加熱處理） [表2] 例 95%硫酸添加量 (g) 硫酸添加後之pH 粉末乾燥酵母中之SAMe含量 (mg/g-乾燥酵母） 實施例5 224 1 170 實施例6 118 2 168 實施例7 57.5 3 154 實施例8 23.6 4 143 比較例2 0 5.2 136 實施例9〜：Π 除於酵母菌體濃縮物添加之硫酸改爲鹽酸、硝酸或磷酸（ 添加後之酵母菌體濃縮物之pH :1)以外，與實施例5同樣處 理，調査礦酸添加量與凍結乾燥後之SAMe含量之關係。結 果如表3。 表3.於只添加礦酸處理時之酵母菌體濃縮物添加礦酸後 之pH與由凍結乾燥所得粉末乾燥酵母之SAMe含量之關 係（無加熱處理） -16- 1344986 [表3] 例 添加之礦酸 礦酸添加量 (g) 礦酸添加後之 pH 粉末乾燥酵母中之SAMe含量 (mg/g-乾燥酵母） 實施例9 35%鹽酸 295 1 160 實施例10 61%硝酸 307 1 155 實施例11 85%磷酸 927 1 156 比較例2 無 0 5.2 136 實施例12〜23及比較例3〜5 與實施例1同樣施行U)〜（b)之操作，此酵母菌體濃縮 物用玻璃製燒杯、電磁式攪拌機及加熱水浴槽，使加熱溫 度爲40°C、50°C、60°C、70°C或9CTC，以加熱處理時間爲 60秒、300秒或600秒之條件加熱處理後，於水槽冷却至 25 °C。令此注入凍結乾燥器（日本真空技術公司製）之凍結 乾燥用不鏽鋼盤，於-50°C凍結後，以最終棚段溫度25°C 之條件凍結乾燥36小時。所得粉末乾燥酵母中之SAMe含 量如表4。 表4.於只加熱處理之酵母菌體濃縮物之加熱溫度與凍結乾 燥所得粉末乾燥酵母之SAMe含量之關係（無添加硫酸） 1344986 [表4] 例 未添加硫酸(加熱前之酵母菌體濃縮物之PH5.2) 加熱溫度 ΓΟ 加熱時間 (秒） 粉末乾燥酵母中之SAMe含量 (mg/g-乾燥酵母） 比較例2 未加熱 136 實施例12 40 60 155 實施例13 40 300 156 實施例14 40 600 155 實施例15 50 80 156 實施例16 50 300 159 實施例17 50 600 158 實施例18 60 60 163 實施例19 1 60 300 168 實施例20 — 60 600 164 實施例21 70 · 60 158 實施例22H 70 300 161 實施初23 70 600 155 比較例3 90 60 127 比較例4 90 300 109 比較例5 90 600 73 實施例24〜32 與實施例1同樣施行（a)〜（c)之操作，添加硫酸來調整爲 pHl、2或3之酵母菌體濃縮物用玻璃製燒杯、電磁式攪拌 機及加熱水浴槽、使加熱溫度爲6(TC，以加熱處理時間爲 60秒、300秒或600秒之條件加熱處理後，於水槽冷却至 25 °C。令此注入凍結乾燥器（曰本真空技術公司製）之凍結 乾燥用不鏽鋼盤，於-50°C凍結後，以最終棚段溫度25°C 之條件凍結乾燥36小時。所得粉末乾燥酵母中之SAMe含 量如表5。 表5.於兼行礦酸添加及加熱處理之酵母菌體濃縮物之由加 熱溫度和凍結乾燥所得粉末乾燥酵母與SAMe含量之關係（ 加熱前之酵母菌體濃縮物之pHl、2、3) -18- 1344986 [表5] 例 加熱前酵母菌體 濃縮物之pH 加熱溫度 (°C) 加熱時間 秒） 粉末乾燥酵母中之SAMe含量 (mg/g·乾燥酵母） 實施例5 1 未加熱 —— 170 實施例24 1 60 60 172 實施例25 1 60 300 171 實施例26 1 60 600 166 .實施例6 2 未加熱 ---- 168 實施例27 2 60 60 175 實施例28 2 60 300 177 '實施例29 2 60 600 170 實施例7 3 未加熱 — 154 實施例30 3 60 60 176 實施例31 3 60 300 179 實施例32 3 60 600 173 實施例33〜41及比較例6〜8
與實施例1同樣施行（a)〜（c)之操作，添加硫酸得PH3 之酵母菌體濃縮物3.71kg。令此酵母菌體用玻璃製燒杯、 電磁式攪拌機及加熱水浴槽，使加熱溫度爲4(TC、5(TC、 60°C、70°C或90°C，以加熱處理時間爲60秒、300秒或 600秒之條件加熱處理後，於水槽冷却至25 °C。令此注入 凍結乾燥器（日本真空技術公司製）之凍結乾燥用不鏽鋼盤 ，於-50°C凍結後，以最終棚段溫度25°C之條件凍結乾燥 36小時。所得粉末乾燥酵母中之SAMe含量如表6。 表6.於兼行礦酸添加及加熱處理之酵母菌體濃縮物之 由加熱溫度和凍結乾燥所得粉末乾燥酵母與SAMe含量之 關係（加熱前之酵母菌體濃縮物之PH3) -19-

Claims (1)

1344986 _____ 告本 修正本 .· 第096 1 1 6427號「含有S-腺苷-L-甲硫胺酸之乾燥酵母之 . 製造方法及經口攝取用組成物」專利案 ^ (2011年4月7日修正） 4十、申請專利範圍： 1·—種含有S-腺苷-L_甲硫胺酸之乾燥酵母之製造方法，其係 於使用具有S-腺苷-L-甲硫胺酸產能之酵母來製造含有 S-φ 腺苷_L-甲硫胺酸之乾燥酵母之方法，其特徴爲令由酵母之 菌體培養液分離之酵母菌體濃縮物施行：（1)添加礦酸來調 整pH爲1〜4之處理，及（2)在4(TC〜7CTC下〜30' 600秒 之加熱處理後，予以乾燥。 2. 如申請專利範圍第丨項之含有S_腺苷-L-甲硫胺酸之乾燥 酵母之製造方法，其中作爲具有S-腺苷-L-甲硫胺酸產能之 酵母使用屬於酵母屬（Saccharomyces)之酵母。 3. 如申請專利範圍第2項之含有s-腺苷-L-甲硫胺酸之乾燥 Φ 酵母之製造方法，其中屬於酵母屬之酵母爲釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae )。 4. 如申請專利範圍第〗項之含有S-腺苷-L-甲硫胺酸之乾燥 酵母之製造方法，其中在（1)礦酸添加處理使用之礦酸爲硫 酸。 5.如申請專利範圍第1項之含有S-腺苷-L-甲硫胺酸之乾燥 酵母之製造方法，其中以凍結乾燥法或噴霧乾燥法來乾燥。
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