JP4914890B2 - Ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法及び経口摂取用組成物 - Google Patents
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Description
本発明は、Ｓ-アデノシル−Ｌ−メチオニン（以下、ＳＡＭｅと記す）生産能を有する酵母を用いたＳＡＭｅ含有乾燥酵母の製造方法及び経口摂取用組成物に関する。さらに詳しくは、ＳＡＭｅを高濃度に含有する乾燥酵母を、収率良く簡便に製造する方法及び該方法によって得られたＳＡＭｅ含有乾燥酵母を成型した経口摂取用組成物に関する。
ＳＡＭｅは、生体内における種々のトランスメチラーゼによるメチル化反応のメチル基供与体として重要な役割を演じている水溶性の生理活性物質であり、鬱病、肝臓疾患及び関節炎等の治療薬、或いは健康食品として広く利用されている。また、酵母菌体については、５'−ヌクレオチド、遊離アミノ酸、抗酸化作用が有り肝疾患の治療薬として利用されているグルタチオン、免疫力の向上作用や整腸作用を有するβ−グルカンや食物繊維などの有用成分が多く含まれ、健康食品として広く利用されている。
従来、ＳＡＭｅの製造方法としては、前駆物質であるＬ−メチオニンを含有させた培地を用いて醗酵生産する方法（例えば、非特許文献１，２参照）により、菌体内に蓄積したＳＡＭｅを抽出した後、クロマトグラフィーによる精製を行い、硫酸やｐ−トルエンスルフォン酸との塩、又はブタンジスルフォン酸との塩とすることにより安定なＳＡＭｅ塩を得る方法が一般的であった（例えば、非特許文献３，４参照）。しかしながら、このような従来の製造方法においては、菌体内に蓄積されたＳＡＭｅの抽出精製に多大な手間と費用が掛かるため、治療薬や健康食品として重要なＳＡＭｅを安価に製造し提供することは極めて困難なことであった。
菌体からの抽出精製を要しない、醗酵法に代る方法として酵素的合成法が知られている。即ち、酵母などの微生物より単離精製したＳＡＭｅ合成酵素（メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ）を用い、アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）とＬ−メチオニンを基質としてＳＡＭｅを酵素的に合成する方法である（例えば、特許文献１、非特許文献５、１０参照）。この方法は、醗酵法と比べ、ＳＡＭｅの蓄積量が多く、菌体からのＳＡＭｅ抽出操作が必要ないなどの利点はあるものの、酵素の調製が煩雑であること、得られる酵素の活性が微弱であること、ＡＴＰ分解活性などの妨害酵素活性を除去する必要があること、さらには、基質であるＡＴＰが極めて高価であるなど様々な問題を有し、必ずしも実用的な方法とは成り得なかった。また、近年の遺伝子工学の発展により、クローン化したＳＡＭｅ合成酵素遺伝子を用いることによって該酵素の調製がより簡便になり（例えば、非特許文献６〜９参照）、酵素調製の問題は解決されつつあるものの、依然として高価なＡＴＰを基質として使用する必要があるなど、他の実用上の問題は解決されていない。
上述のように、従来の微生物を用いた醗酵法では抽出・精製に、酵素的合成法では合成に、多大な労力と費用を要するため、経口摂取が可能なＳＡＭｅ含有物を低いコストで製造することは極めて困難であった。したがって、本発明の目的は、該含有物を低いコストで製造できるようにする方法として、ＳＡＭｅを高濃度に含有する乾燥酵母を収率よく簡便に製造できる方法を確立するとともに、該製造方法で得られた乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物を提供することにある。
本発明者等は、上記の目的を達成すべく、鋭意検討した結果、ＳＡＭｅ生産能を有し且つ経口摂取が可能な酵母を用いて菌体内にＳＡＭｅを高濃度に合成蓄積させた後、培養液より遠心分離等の分離手段で酵母菌体を分離し、さらに鉱酸添加により特定のｐＨに調整する処理及び特定温度への加熱処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後、乾燥させることによって、目的とするＳＡＭｅを高濃度に含有する乾燥酵母を低いコストで、簡便に収率良く製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、以下の１〜９に示すＳＡＭｅを高濃度に含有する乾燥酵母の製造方法、及び該乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物を提供するものである。
１．Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン生産能を有する酵母を用い、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分離した酵母菌体濃縮物を、（１）鉱酸添加によりｐＨを１〜５に調整する処理、及び（２）４０℃〜８５℃に加熱する処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後に、乾燥させることを特徴とする、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
２．Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に属する酵母を用いる、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
３．サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス・セレビジエである、上記項２のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
４．（１）鉱酸添加処理で使用する鉱酸が硫酸である、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
５．（１）鉱酸添加処理を行う場合において、ｐＨを１〜４に調整する、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
６．（２）加熱処理を行う場合において、４０℃〜８０℃に加熱する、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
７．（１）鉱酸添加処理及び（２）加熱処理の両方を行う、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
８．凍結乾燥法又は噴霧乾燥法により乾燥する、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
９．上記項１〜８の何れかの方法によって製造されたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物。
１．Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン生産能を有する酵母を用い、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分離した酵母菌体濃縮物を、（１）鉱酸添加によりｐＨを１〜５に調整する処理、及び（２）４０℃〜８５℃に加熱する処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後に、乾燥させることを特徴とする、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
２．Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に属する酵母を用いる、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
３．サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス・セレビジエである、上記項２のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
４．（１）鉱酸添加処理で使用する鉱酸が硫酸である、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
５．（１）鉱酸添加処理を行う場合において、ｐＨを１〜４に調整する、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
６．（２）加熱処理を行う場合において、４０℃〜８０℃に加熱する、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
７．（１）鉱酸添加処理及び（２）加熱処理の両方を行う、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
８．凍結乾燥法又は噴霧乾燥法により乾燥する、上記項１のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
９．上記項１〜８の何れかの方法によって製造されたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物。
本発明に使用される酵母の種類は、ＳＡＭｅ生産能を有し、かつ経口摂取可能なものであればよく、例えばサッカロマイセス属に属する酵母が好適に挙げられる。このうち、サッカロマイセス・セレビジエがより好適である。
上記酵母を培養する際には、炭素源、窒素源、各種無機塩類、各種添加剤等を使用する。使用する炭素源としては、酵母が資化し得るものであれば特に制限はなく、例えば、グルコース、蔗糖、澱粉、廃糖蜜等の炭水化物、エタノールや酢酸等のアルコールや有機酸が挙げられる。窒素源としても、酵母が資化し得るものであれば特に制限はなく、例えば、アンモニア、硝酸、尿素等の無機体窒素化合物、又は酵母エキス、麦芽エキス等の有機体窒素化合物を含むものが挙げられる。また、無機塩類としては、リン酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩、及びマグネシウム、鉄、カルシウム、亜鉛、マンガン、コバルト、銅、モリブデン等の金属塩が用いられる。さらには、ＳＡＭｅの骨格構成にあずかるメチオニン、アデニン、アデノシルリボヌクレオシドを添加し培養することもできる。
培養温度及び培養液のｐＨは使用する酵母の種類よって異なるが、培養温度としては２０〜３５℃の範囲を、培養液のｐＨとしてはｐＨ４〜７の範囲を挙げることができる。
菌体内のＳＡＭｅ含量を高めるには、好気的に培養することが好ましい。従って、培養槽は、通気可能で必要に応じ攪拌できるものが好ましく、例えば、機械的攪拌培養槽、エアーリフト式培養槽及び気泡塔型培養槽等を利用することができる。
培養槽への炭素源、窒素源、各種無機塩類、各種添加剤等の培養成分の供給は、一括又は個別に連続的若しくは間欠的に行う。例えば、蔗糖、エタノール等の基質は他の培地成分との混合物として培養槽に供給してもよく、また他の培地成分とは別に独立して培養槽に供給してもよい。培養液のｐＨ制御は、酸、アルカリ溶液によって行われる。アルカリとしては窒素源として使用されるアンモニア、尿素、又は非窒素系塩基、例えば、苛性ソーダ、苛性カリ等を用いてｐＨ制御するのが望ましい。酸としては無機酸、例えば、リン酸、硫酸、硝酸、又は有機酸が用いられる。無機塩類であるリン酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩、硝酸塩等を用いてｐＨ制御することもできる。
菌体内のＳＡＭｅ含量を高めるには、好気的に培養することが好ましい。従って、培養槽は、通気可能で必要に応じ攪拌できるものが好ましく、例えば、機械的攪拌培養槽、エアーリフト式培養槽及び気泡塔型培養槽等を利用することができる。
培養槽への炭素源、窒素源、各種無機塩類、各種添加剤等の培養成分の供給は、一括又は個別に連続的若しくは間欠的に行う。例えば、蔗糖、エタノール等の基質は他の培地成分との混合物として培養槽に供給してもよく、また他の培地成分とは別に独立して培養槽に供給してもよい。培養液のｐＨ制御は、酸、アルカリ溶液によって行われる。アルカリとしては窒素源として使用されるアンモニア、尿素、又は非窒素系塩基、例えば、苛性ソーダ、苛性カリ等を用いてｐＨ制御するのが望ましい。酸としては無機酸、例えば、リン酸、硫酸、硝酸、又は有機酸が用いられる。無機塩類であるリン酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩、硝酸塩等を用いてｐＨ制御することもできる。
このような条件で培養し、目標量のＳＡＭｅが酵母菌体中に蓄積された段階で培養液を培養槽から抜き出した後、分離し酵母菌体濃縮物となす。分離方法としては、菌体の分離と洗浄が効率的に行える方法であれば特に制限はないが、向流型のイーストセパレーターや分離膜を用いた限外濾過装置が好適な例として挙げられる。
さらに、分離した酵母菌体濃縮物に、硫酸等の鉱酸添加処理、及び加熱処理の少なくともいずれか一方の処理を行う。鉱酸添加処理を行うことにより、ＳＡＭｅの安定性が増し歩留まりを高めることが可能となる。添加する鉱酸としては、経口摂取が可能なものであれば特に制限はないが、塩酸、硫酸、リン酸等、特にその好適な例として硫酸が挙げられる。鉱酸の添加量は、ｐＨ１〜５となる量が必要であり、特に、ｐＨ１〜４となる量が好ましい。
また、加熱処理を行うことによりＳＡＭｅ分解酵素の失活や滅菌を行うことができる。加熱処理は得られるＳＡＭｅ含量ができる限り高くなる条件を採用すれば良く、加熱処理条件は、処理時間にもよるが、処理温度として、４０℃〜８５℃であることが必要であり、４０℃〜８０℃が好ましく、４０℃〜７０℃であることがより好ましく、５０℃〜７０℃であることが更に好ましい。
加熱時間は、加熱温度によっても変わるので一概には決められないが、３０〜６００秒が好ましく、３０〜６０秒がより好ましい。３０秒以上加熱処理することにより、ＳＡＭｅ分解酵素の失活や殺菌等を行うことができる。また、鉱酸根の浸透が促進されるので、添加する鉱酸量を節減することができる。一方、加熱時間を６００秒以下とすることによりＳＡＭｅの分解による含量の低下を回避することができる。
なお、加熱処理は、常圧、加圧何れの方法でも実施できる。加熱処理を行うこと、或いは鉱酸添加を行うことで、相対的により高いＳＡＭｅ含量の乾燥酵母菌体を得ることができる。
加熱時間は、加熱温度によっても変わるので一概には決められないが、３０〜６００秒が好ましく、３０〜６０秒がより好ましい。３０秒以上加熱処理することにより、ＳＡＭｅ分解酵素の失活や殺菌等を行うことができる。また、鉱酸根の浸透が促進されるので、添加する鉱酸量を節減することができる。一方、加熱時間を６００秒以下とすることによりＳＡＭｅの分解による含量の低下を回避することができる。
なお、加熱処理は、常圧、加圧何れの方法でも実施できる。加熱処理を行うこと、或いは鉱酸添加を行うことで、相対的により高いＳＡＭｅ含量の乾燥酵母菌体を得ることができる。
また、鉱酸添加処理及び加熱処理を併せて行うことにより、鉱酸添加処理のみを行った場合に比べ添加する鉱酸量を節減でき、また、加熱処理のみを行った場合に比べてさらに高いＳＡＭｅ含量の乾燥菌体が得られるのでより好ましい。即ち、鉱酸添加量と加熱温度の組み合わせとしては、加熱時間によっても異なるが、ｐＨ１〜５となる鉱酸添加量と４０℃〜８５℃の温度条件の組み合わせが好ましく、ｐＨ１〜４となる鉱酸添加量と４０℃〜８０℃の温度条件の組み合わせがより好ましく、ｐＨ１〜４となる鉱酸添加量と４０℃〜７０℃の温度条件の組み合わせが更に好ましく、ｐＨ１〜４となる鉱酸添加量と５０℃〜７０℃の温度条件の組み合わせが更により好ましい。
このようにして鉱酸添加処理及び加熱処理の少なくともいずれか一方の処理を行った後に得られた酵母菌体濃縮物を、例えば、スプレードライヤによる噴霧乾燥法や最終棚段温度を２５℃とした凍結乾燥等の乾燥方法により水分を蒸発させて乾燥酵母となす。
次いで、この乾燥酵母を破砕して粉末状にしたり、粉末状の乾燥酵母に必要に応じて他の生理活性成分や賦形剤等の添加剤を加えた後に圧縮打錠し錠剤状の経口摂取用組成物となし、更にその表面を被覆したりすることもできる。また、粉体を顆粒状に造粒することや、造粒した顆粒を詰めてカプセル化することもできる。
以下、本発明を実施例及び比較例によってさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。
実施例１
（ａ）酵母菌体の培養
前述した公知の培養法〔Shiozaki S.,et all,J.Biotechnology,4,345-354(1986)(非特許文献８)〕に従って、丸菱バイオエンジニアリング社製の３０Ｌジャー培養槽を用いて酵母菌体の培養を行った。培地成分は、炭素源としてスクロース １０質量％、酵母エキス １質量％、窒素源として尿素 １．８質量％、Ｌ−メチオニン １質量％、Ｌ−グリシルグリシン ０．２質量％、ＫＨ2ＰＯ4 ０．４質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０１質量％、ビオチン ２μｇ／ｍＬ、混合ミネラル ０．２質量％（混合ミネラル組成は以下のとおり、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２．０質量％、ＭｎＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１質量％、ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００１質量％、ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．００１質量％、Ｈ3ＢＯ3 ０．００１質量％、Ｎａ2ＭｏＯ4 ０．００１質量％、ＫＩ ０．００１質量％）含有培地にサッカロマイセス属に属する酵母サッカロマイセス・セレビジエＩＦＯ２３４６を接種し、培養温度２７〜２９℃、１５０ｒｐｍの攪拌速度にて好気的に通気しながら６日間培養した。また、培養途中に不足となったエタノール、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏを逐次添加することによりＳＡＭｅ含有量を高めた。その結果、菌体濃度３．５質量％，ＳＡＭｅ含量２０５ｍｇ／ｇ−乾燥酵母の酵母菌体培養液１８Ｌを得た。
（ｂ）酵母菌体の集菌
上記の酵母菌体培養液１８Ｌを連続ロータリー型遠心分離器（日立ＨＩＭＡＣ ＣＥＮＴＲＩＦＵＧＥ ＣＲ１０Ｂ２）で処理し、乾物換算で１８質量％に相当する菌濃度の液状の酵母菌体濃縮物３．４９ｋｇを得た。
（ｃ）酵母菌体濃縮物への鉱酸添加
上記の酵母菌体濃縮物３．４９ｋｇに９５質量％硫酸を２２４ｇ添加することにより、ｐＨ１の酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを得た。
（ｄ）乾燥酵母の製造
上記のｐＨ１の酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを微粒子化装置としてロータリーアトマイザ（回転円盤）を有するスプレードライヤ（ＮＩＰＲＯ社製）を用いて、乾燥室の入口温度１９５〜２０５℃、出口温度８０〜９０℃、通液速度３８ｇ／分の条件にて噴霧乾燥し、粉末乾燥酵母５７０ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１７４ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。
なお、粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は、ＳＡＭｅ含有乾燥酵母より過塩素酸を用いた公知の方法（例えば、Shiozaki S.,et all,Agric.Biol.Chem.,48,2293-2300(1984)）でＳＡＭｅを抽出し、液体クロマトグラフィーによって定量した。なお、液体クロマトグラフィーには以下の分析条件を用いた。
カラム：ナカライ（nacalai tesque） COSMOSIL 4.6φ×100mm
溶離液：０．２Ｍ ＫＨ2ＰＯ4水溶液/メタノール＝９５／５（体積比）
流速：０．７ｍＬ/ｍｉｎ、検出器：ＵＶ（２６０ｎｍ）、ＳＡＭｅ保持時間：約１５０秒
（ａ）酵母菌体の培養
前述した公知の培養法〔Shiozaki S.,et all,J.Biotechnology,4,345-354(1986)(非特許文献８)〕に従って、丸菱バイオエンジニアリング社製の３０Ｌジャー培養槽を用いて酵母菌体の培養を行った。培地成分は、炭素源としてスクロース １０質量％、酵母エキス １質量％、窒素源として尿素 １．８質量％、Ｌ−メチオニン １質量％、Ｌ−グリシルグリシン ０．２質量％、ＫＨ2ＰＯ4 ０．４質量％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０１質量％、ビオチン ２μｇ／ｍＬ、混合ミネラル ０．２質量％（混合ミネラル組成は以下のとおり、ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ２．０質量％、ＭｎＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０５質量％、ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１質量％、ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００１質量％、ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ ０．００１質量％、Ｈ3ＢＯ3 ０．００１質量％、Ｎａ2ＭｏＯ4 ０．００１質量％、ＫＩ ０．００１質量％）含有培地にサッカロマイセス属に属する酵母サッカロマイセス・セレビジエＩＦＯ２３４６を接種し、培養温度２７〜２９℃、１５０ｒｐｍの攪拌速度にて好気的に通気しながら６日間培養した。また、培養途中に不足となったエタノール、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏを逐次添加することによりＳＡＭｅ含有量を高めた。その結果、菌体濃度３．５質量％，ＳＡＭｅ含量２０５ｍｇ／ｇ−乾燥酵母の酵母菌体培養液１８Ｌを得た。
（ｂ）酵母菌体の集菌
上記の酵母菌体培養液１８Ｌを連続ロータリー型遠心分離器（日立ＨＩＭＡＣ ＣＥＮＴＲＩＦＵＧＥ ＣＲ１０Ｂ２）で処理し、乾物換算で１８質量％に相当する菌濃度の液状の酵母菌体濃縮物３．４９ｋｇを得た。
（ｃ）酵母菌体濃縮物への鉱酸添加
上記の酵母菌体濃縮物３．４９ｋｇに９５質量％硫酸を２２４ｇ添加することにより、ｐＨ１の酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを得た。
（ｄ）乾燥酵母の製造
上記のｐＨ１の酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを微粒子化装置としてロータリーアトマイザ（回転円盤）を有するスプレードライヤ（ＮＩＰＲＯ社製）を用いて、乾燥室の入口温度１９５〜２０５℃、出口温度８０〜９０℃、通液速度３８ｇ／分の条件にて噴霧乾燥し、粉末乾燥酵母５７０ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１７４ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。
なお、粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は、ＳＡＭｅ含有乾燥酵母より過塩素酸を用いた公知の方法（例えば、Shiozaki S.,et all,Agric.Biol.Chem.,48,2293-2300(1984)）でＳＡＭｅを抽出し、液体クロマトグラフィーによって定量した。なお、液体クロマトグラフィーには以下の分析条件を用いた。
カラム：ナカライ（nacalai tesque） COSMOSIL 4.6φ×100mm
溶離液：０．２Ｍ ＫＨ2ＰＯ4水溶液/メタノール＝９５／５（体積比）
流速：０．７ｍＬ/ｍｉｎ、検出器：ＵＶ（２６０ｎｍ）、ＳＡＭｅ保持時間：約１５０秒
実施例２〜４
酵母菌体濃縮物に硫酸を添加することによってｐＨ２、３又は４とした以外は実施例１と同様に処理して、硫酸添加後のｐＨと噴霧乾燥後のＳＡＭｅ含量との関係を調べた。結果を表１に示す。
酵母菌体濃縮物に硫酸を添加することによってｐＨ２、３又は４とした以外は実施例１と同様に処理して、硫酸添加後のｐＨと噴霧乾燥後のＳＡＭｅ含量との関係を調べた。結果を表１に示す。
比較例１
酵母菌体濃縮物への硫酸添加を行わない以外は実施例１と同様に処理して、噴霧乾燥した粉末乾燥酵母５８１ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１３６ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。結果を表１に示す。
酵母菌体濃縮物への硫酸添加を行わない以外は実施例１と同様に処理して、噴霧乾燥した粉末乾燥酵母５８１ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１３６ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。結果を表１に示す。
表１．鉱酸添加処理のみ行った場合の、酵母菌体濃縮物への鉱酸添加後のｐＨと噴霧乾燥によって得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量との関係（加熱処理無し）
実施例５
実施例１と同様にして（ａ）から（ｃ）までの操作を行い、硫酸を添加することによってｐＨ１とした酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを得た。この酵母菌体を未加熱のまま凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用ステンレストレーに流し込み−５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた凍結乾燥酵母をさらに粉砕することによって粉末乾燥酵母６１２ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１７０ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。結果を表２に示す。
実施例１と同様にして（ａ）から（ｃ）までの操作を行い、硫酸を添加することによってｐＨ１とした酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを得た。この酵母菌体を未加熱のまま凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用ステンレストレーに流し込み−５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた凍結乾燥酵母をさらに粉砕することによって粉末乾燥酵母６１２ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１７０ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。結果を表２に示す。
実施例６〜８
酵母菌体濃縮物に硫酸を添加することによってｐＨ２、３又は４とした以外は実施例５と同様に処理して、硫酸添加後のｐＨと凍結乾燥後のＳＡＭｅ含量との関係を調べた。結果を表２に示す。
酵母菌体濃縮物に硫酸を添加することによってｐＨ２、３又は４とした以外は実施例５と同様に処理して、硫酸添加後のｐＨと凍結乾燥後のＳＡＭｅ含量との関係を調べた。結果を表２に示す。
比較例２
酵母菌体濃縮物への硫酸添加を行わない以外は実施例５と同様に処理して、凍結乾燥し粉砕した粉末乾燥酵母６０９ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１３６ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。結果を表２に示す。
酵母菌体濃縮物への硫酸添加を行わない以外は実施例５と同様に処理して、凍結乾燥し粉砕した粉末乾燥酵母６０９ｇを得た。得られた粉末乾燥酵母中のＳＡＭｅ含量は１３６ｍｇ／ｇ−乾燥酵母であった。結果を表２に示す。
表２．鉱酸添加処理のみ行った場合の、酵母菌体濃縮物への鉱酸添加後のｐＨと凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量との関係（加熱処理無し）
実施例９〜１１
酵母菌体濃縮物に添加した硫酸を、塩酸、硝酸又は燐酸に変えた（添加後の酵母菌体濃縮物のｐＨ：１）以外は実施例５と同様に処理して、鉱酸添加量と凍結乾燥後のＳＡＭｅ含量との関係を調べた。結果を表３に示す。
酵母菌体濃縮物に添加した硫酸を、塩酸、硝酸又は燐酸に変えた（添加後の酵母菌体濃縮物のｐＨ：１）以外は実施例５と同様に処理して、鉱酸添加量と凍結乾燥後のＳＡＭｅ含量との関係を調べた。結果を表３に示す。
表３．鉱酸添加処理のみ行った場合の、酵母菌体濃縮物への鉱酸添加後のｐＨと凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量との関係（加熱処理無し）
実施例１２〜２３及び比較例３〜５
実施例１と同様にして（ａ）から（ｂ）までの操作を行い、この酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機及び加熱水浴槽を用いて加熱温度を４０℃、５０℃、６０℃、７０℃又は９０℃とし，加熱処理時間を６０秒、３００秒又は６００秒とした条件で加熱処理した後、水槽にて２５℃まで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量を表４に示す。
実施例１と同様にして（ａ）から（ｂ）までの操作を行い、この酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機及び加熱水浴槽を用いて加熱温度を４０℃、５０℃、６０℃、７０℃又は９０℃とし，加熱処理時間を６０秒、３００秒又は６００秒とした条件で加熱処理した後、水槽にて２５℃まで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量を表４に示す。
表４．加熱処理のみ行った酵母菌体濃縮物での、加熱温度と凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量との関係（硫酸添加無し）
実施例２４〜３２
実施例１と同様にして（ａ）から（ｃ）までの操作を行い、硫酸添加によりｐＨ１、２又は３に調整した酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機、加熱水浴槽を用いて加熱温度６０℃，加熱処理時間６０秒，３００秒又は６００秒の条件で加熱処理した後、水槽にて２５℃まで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量は表５に示す。
実施例１と同様にして（ａ）から（ｃ）までの操作を行い、硫酸添加によりｐＨ１、２又は３に調整した酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機、加熱水浴槽を用いて加熱温度６０℃，加熱処理時間６０秒，３００秒又は６００秒の条件で加熱処理した後、水槽にて２５℃まで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量は表５に示す。
表５．鉱酸添加と加熱処理の両方を行った酵母菌体濃縮物での、加熱温度と凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量との関係（加熱前の酵母菌体濃縮物のｐＨ１、２、３）
実施例３３〜４１及び比較例６〜８
実施例１と同様にして（ａ）から（ｃ）までの操作を行い、硫酸添加によりｐＨ３に調整した酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを得た。この酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機、加熱水浴槽を用いて加熱温度４０℃、５０℃、７０℃又は９０℃，加熱処理時間６０秒、３００秒又は６００秒の条件で加熱処理した後、水槽にて２５℃まで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量は下表６の通りであった。
実施例１と同様にして（ａ）から（ｃ）までの操作を行い、硫酸添加によりｐＨ３に調整した酵母菌体濃縮物３．７１ｋｇを得た。この酵母菌体濃縮物をガラス製ビーカー、マグネット式攪拌機、加熱水浴槽を用いて加熱温度４０℃、５０℃、７０℃又は９０℃，加熱処理時間６０秒、３００秒又は６００秒の条件で加熱処理した後、水槽にて２５℃まで冷却した。これを凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用のステンレストレーに流し込み零下５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥した。得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量は下表６の通りであった。
表６．鉱酸添加と加熱処理の両方を行った酵母菌体濃縮物での、加熱温度と凍結乾燥によって得られた粉末乾燥酵母のＳＡＭｅ含量との関係（加熱前の酵母菌体濃縮物のｐＨ３）
本発明によれば、ＳＡＭｅを高濃度に含有する乾燥酵母を、低いコストで収率良く簡便に製造することができる。該ＳＡＭｅを含有する乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物は、鬱病、肝臓疾患及び関節炎等の治療薬、或いは健康食品として広く利用することができる。
Claims (7)
- Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン生産能を有する酵母を用い、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する乾燥酵母を製造する方法において、酵母の菌体培養液より分離した酵母菌体濃縮物を、（１）鉱酸添加によりｐＨを１〜４に調整する処理、及び（２）４０℃〜７０℃に加熱する処理を行った後に、乾燥させることを特徴とする、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン生産能を有する酵母として、サッカロマイセス属に属する酵母を用いる、請求項１に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- サッカロマイセス属に属する酵母がサッカロマイセス・セレビジエである、請求項２に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- （１）鉱酸添加処理で使用する鉱酸が硫酸である、請求項１〜３のいずれかに記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- （２）加熱処理を３０〜６００秒間行う、請求項１〜４のいずれかに記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- 凍結乾燥法又は噴霧乾燥法により乾燥する、請求項１〜５のいずれかに記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母の製造方法。
- 請求項１〜６のいずれかに記載した方法によって製造されたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有乾燥酵母を成型してなる経口摂取用組成物。
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