TWI325319B

TWI325319B - Method of treating of demyelinating diseases or conditions

Info

Publication number: TWI325319B
Application number: TW091102861A
Authority: TW
Inventors: Carey R Smith; P Rathbone Michel; Petty Margaret; & Jo Johnson
Original assignee: Aventis Pharma Inc
Priority date: 2001-02-15
Filing date: 2002-02-15
Publication date: 2010-06-01
Also published as: US20060025452A1; YU62903A; EA200300882A1; KR20090005254A; HRP20030652A2; PA8540101A1; WO2002064126A2; HUP0303203A3; WO2002064126A3; US7230015B2; SG134170A1; UA88773C2; SK10392003A3; MXPA03006110A; US20090270458A1; EA200600896A1; HUP0303203A2; KR100951542B1; CN100522164C; AU2009238332A1

Description

1325319 Α7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（1) 多發性硬化式症(MS)是一種影響中樞神經系統的退化性及炎性神經疾病，由於脫髓鞘作用（髓鞘損失）而伴隨有神經疲痕組織(neuronal plaques)之形成與有故障的神經傳導，類似地，過度的脫髓鞘作用常被報導於脊髓 5 損傷與中風情况(Bunge et al，^3; Blight and DeCresdt〇, 1986; Pendlebury et al，2000)。髓鞘神經的動作電位傳播之生理學上基礎研究中證明，脫髓鞘神經中的傳導阻礙，部分是由於在損失髓鞘地帶有對胺基吼啶敏感的鉀通道的出現所致（Bever 10 1996)。動作電位藉由跳躍傳導(salutat〇ry conduction)方式沿正常的髓鞘神經傳播，其係基因於位於郎威埃節（n〇de of Ranvier)對電壓敏感的鈉通道的打開產生的鈉流 (sodium current)所致，故，在電流刺激的開始時，鈉離 15子(Na+)進入神經元，使神經元變為更帶正電荷，當神經元的的正電位接近臨界值，即發生，，去極化，，，去極化使得離子的正核心流向神經元，沿著軸突並到達神經末端，神經元要回復(reset)本身時，必須消散掉過量的正電荷，此係藉由鉀離子（之後以K+代表）經由鉀道的排出達成， 20當髓鞘被中斷，在軸索膜上出現去極化期間，打開對電壓敏感的鉀通道，鉀流，與鈉流相反地，減弱動作電位的幅度與持續時間，藉減弱遠端的有效電流密度而使傳導衰退，這些傳導不足與失能徵候有關，包括肌肉弱化，藉由阻斷Κ經由鉀通道外流，神經元保持更久的去極本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公楚）

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1325319 A7 ----B7 五、發明說明（2 ) 化且更易再被刺激，故，鉀通道阻斷劑被認為有用於供治療因動作電位傳導不足所產生的疾病與病況，例如 MS、創傷性腦傷害（之後稱之為”TBI”)與脊髓傷害（之後稱之為”SCI”）。 5 卸通道阻斷劑，例如4-胺基吡啶（之後稱之為”4- AP”)，在體外的試驗中，顯現可增加脫髓鞘神經的動作電位的持續時間與幅度且改善動作電位的傳播(B〇st〇ck et al, 1978; 1981; Targ and Kocsis, 1985; 1986; Shi and

Blight，1997)，促進神經傳導物質之釋放(Bostock et al， 10 1981; Hirsh and Quandt，1993; Sherratt et al，1980)，與賦予肌肉伸縮力之力量(Ag〇st〇n et ai, 1982; Savage et al， 1985)，這些觀察暗示，鉀通道阻斷劑(例如4_Ap)能修補在MS患者之脫髓鞘神經的傳導作用，接著的臨床試驗結果更加支持這類主張，認為胺基吡啶治療可能改善某 15 些 MS 患者之徵狀(jones 扣 ai 1983; Stefoski et al，1987; Davis et al, 1990; van Diemen et al, 1992; Bever et al, 1994; Schwid et al，1997)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 4-AP也被揭露說可有效地於治療神經的病況，例如 SCI、減少SCI患者之慢性疼痛與痙攣性、阿爾滋海默 20 氏病、脊髓灰白質炎徵候簇、肌無力症、亨丁頓氏舞蹈症、與年齡相關的記憶性疾病、創傷後、中風後或毒性後影響記憶或認知的徵候簇、與自主神經機能障礙 (Wurtman RJ and Buyukuysal R, 1989; Hansebout RR and Blight A，1996; Hansebout RR and Blight A 1994)，使用 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（3)

Fampridine-SR於長期的脊髓受傷害的患者之臨床研究已開始(Potter et al，1998a,b)雖然使用4-AP於一般的患病人口有安全性考量（Multiple Sclerosis, Cognos Study #51, Decisions Resources, October, 1999; pp77-8), 許多 5 的研究顯示，於受傷後當施用一年或更長時間後，4-AP 的單獨劑量可恢復SCI患者的一些功能(Potter et al， 1998a，b; Qiao et al，1997; Hayes et al，1993; 1994)，慢性的劑量也有正向的效果被報導，臨床上，觀察到具二年或更久的SCI患者，當以30毫克/公斤4-AP，每天口服 10用藥3個月後，16個患者中有16個具明顯的功能改善，部分先前原被分類為具完全的傷害的患者，再被分類成不完全的傷害層級(Segal et al，1999)，在每天以4-AP經口服治療(30毫克/天，或約〇.5毫克/公斤）三個月後，在至少某些類型的神經的或肺功能上，所有的患者均顯示 15有某程度的改善，較低的劑量則沒有效果。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製如先前陳述的，4-AP鉀通道阻斷劑，有效地延長動作電位，不幸地，此種鉀通道阻斷劑的機制是可改善疾病與病況的不良作用電位的傳導所伴隨的徵候，但也會導致類-癲癇的活性，確實地，在動物與人類中，4_Ap是 20種被認可的抽搐劑，故，以4-AP作為MS、TBI與SCI 的治療劑之有用性要考量到其有前驅-引搐藥（pr〇_ convulsant)的傾向與其他不必要的副作用有報告指出，在使用愚於0·8毫克/公斤的劑量下，會產生坐立不安、困惑、與泛發性的強直-陣攣發作(Ball et al，1979; Bever 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（4) et al，1994)，Van Diemen et al (1993)報告指出，MS 患者中改善的大小（定義為取得平順追求的改善）明顯與血清中4-AP值相關，（經口服後需有33-75奈克/毫升之濃度以獲得明顯改善)，然而，在同樣劑量下，也能觀察到其 5副作用（感覺倒錯/感覺遲鈍 '頭暈/頭昏眼花、與甚至是步履不穩)，在另一對人類的研究中，Bever et al( 1994)報告過，在104奈克/毫升的灰清值下的大發作，兩研究群組均建議，較高的劑量與血清中濃度，對能感應較低劑 -量的4-AP之MS患者，很可能產生較大的改良，故，4-10 AP的的有效性程度是受到劑量及副作用限制的。關於較高的4-AP血清值伴隨的副作用，已引起研發持續的釋放配方（Fampridine-SR)(Masterson JG and Myers M，1994; 1996a; 1996b)，Fampridine-SR 目前正進行對MS的苐2期臨床研究中，在較早的Fampridine-SR 15之臨床研究中，患者顯示在各種功能上有改良，視個體，這些改良包括增進的膀胱、大腸、與性功能，增進的移動容易性與感覺，以及減少肌肉痙攣性、疲勞與慢性疼痛。經濟部智慧財產局員工消費合作社印裝其他用於消除不必要的4-AP之副作用之方法包括 20併同施用4-Ap及與電壓有關的鈉通道阻斷劑，鈉(Na+) 通道阻斷劑阻斷鈉離子的流入並減少神經元的感受性被去極化，這可有效地減少神經對刺激之反應性，確實地，已有報告指出，併用與電壓有關的鈉通道阻斷劑與4_ AP可預防小老鼠中4_Ap所誘發的抽搐（Yamaguchi and -6- 本紙張尺度適用中’家標準(CNS)A4規格（训χ 297公楚） R〇gaWSki，1992)，4-AP沒有鈉通道阻斷的性質。序：=Γ:法中之化合物可藉揭露於美國專利二二法合成，此專利全部及其中提到的其他已’Α開文件均併人於此為參考資料。 ❹所主張的某些化合物，在活體外與活體内可誘發與電壓相關的鈉通道的封鎖 1998’1^抓代0啊誠1996)在細胞的去極化狀況下，與電壓有關的鈉通道阻斷劑作用更為有效這些化 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 合物對正常的神經信號極少或不反應，但當痙攣發作、頭創傷或局部缺血期間，允許鈉通道的封鎖，這些病理的狀況的缝m許多這_缺料保護腦的藥劑(Madge et al, 1998)。不受理論束缚下，料道阻斷#1也為可供治療神經病變疼痛及與細胞素相關的疼痛（包括關節炎疼痛）之藥劑，Sweitzer et al(1999)已提過，小神經膠質的活化作用與細胞素釋放可能為在周圍的神經發炎或周圍的神經傷害後之痛覺過敏中扮演一個角色，鉀通道阻斷劑（例如 4-AP)曾被報導用於阻斷大老鼠、小老鼠與人類微膠細胞的活化作用（Eder，1998)，Pyo et al(i997)報導 4_AP 能減少亞硝酸鹽自活化的微膠細胞釋放，證明疼痛的行為可經由此種機制被調節，此外，曾有報導說，4_Ap可減少從鼠的巨噬細胞產生受脂質多醣類(LPS)-誘發的N〇, 對小老鼠施用LPS也被作為提供以多種不同的試劑以不同的作用機制作抗關節炎的效力之鑑定的模式系統本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（6) (Mcllay et al，2001)，許多的實驗模式（包括坐骨神經的的緊縮感或L5或L6脊髓神經）已發展用於探討神經病變性疼痛（Bennett and Xie, 1988; Seltzer et al，1990; Kim and Chung, 1992) ° 5 摘要說明目前已發現，式I的化合物具有阻斷鉀通道的性質, 此種就鉀與鈉通道兩者的絕妙組合意指這些化合物適於作為治療劑供治療脫髓鞘疾病或其病況，例如，它們有 10用於供治療MS、SCI、TBI(創傷的腦傷害）與中風，這些化合物類提供較4-AP為安全的治療劑，是由於4-AP 僅阻斷鉀通道可能導致不必要的不寧靜、惑亂、與猝發等副作用，式I的化合物也有用於供中風復健、膀胱過敏與功能不良的治療、内臟的治療、化學激素誘發的疼 15痛（包括關節疼痛）與神經病變性痛。詳細說明經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製式I的化合物（類）提供具有阻斷鉀通道與鈉通道兩者性質的絕妙組合，這類化合物有用於供治療脫髓鞘疾 20病與其病況，例如，多發性硬皮症、脊髓傷害、創傷性月包傷害與中風，此類化合物也有用於中風的復健、膀胱過敏與功能不良的治療、内臟的治療、化學激素誘發的疼痛（包括關卽疼痛）與神經病變性痛。

1325319 A7 B7 五、發明說明（7)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中 m為Ο, 1或2; 10 η 為〇, 1 或 2; Ρ為〇或1; 各個R分別獨立地代表氫、鹵素、三氟曱基、C〗_C6 烷基、CrC6烷氧基、苯曱氧基、羥基、硝基或胺基；各個R!分別獨立地代表氫、Cl_c6烷基、Ci_c6烯 15基、Cl-C6烷醯基 '齒素 '氰基、-c(o)cvc6烷基' -Cr C6亞烷基CN、-(VC6亞烷基NR，R"，其中的！^|與R”分別獨立地各代表氫或Ci_C6烷基、_Ci_c6亞烷基 0C(0)CrC6烷基、或_CH(OH)R4，其中的R4為氫或Ci_ c6烧基； 2〇 &為氫、選擇地經鹵素、羥基或笨甲氧基取代的

CrC6烷基、CrC6烯基、crC6炔基、-co2c〗-c6烷基、或-R5-NRR ,其中的r5為crc6亞烧基、crc6亞烯基或CrC6亞炔基且R·與R"分別獨立地各代表氫、C1_C6 烷基、或-NR，R"整個基團為卜吡咯啶基；且 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公® ) 1325319 Α7 Β7 五、發明說明（8) 尺3為氫、硝基、胺基、齒素、CrQ烷氧基、羥基或CpC6烧基。定義： 1)脫髓鞘病：本說明書中所稱的脫髓鞘病，指的是以髓鞘為主標靶的疾病類，它們分屬兩大類：後天感染的疾病與遺傳代謝性疾病。 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 夕發性硬化症(MS)被歸為後天感染的疾病，Ms通常表現在生命期中的第2〇與第50年間，MS攻擊中樞神經的白質，其典型的呈現(9〇%的情況）上，特徵為交互的復發/緩解相—隨時間進展，緩解期愈來愈短，盆徵候包括任何痙攣性下身輕癱、步履不穩、複視’、^ 尿失禁專的任何混合。遺傳代謝疾病的種類包括八種已鏗定的腦白質障礙症：異染色的腦白質失養症、雷夫山氏症（純心 disease)、腎白質失養症、克拉培氏病、苯瞬症卡那芬病、貝錢士 _錢巴克氏疾病與亞歷山大疾病 (Α1^η^，3此邮6)，前六種為貯積疾病（storage ―㈣，是由於酵素的缺乏或功能故障引起化學物質的毒性累積，另一方面，貝里户本租、只里机士-墨滋巴克氏疾病與亞歷山大疾病則尚不知其成因。遺傳的脫髓勒疾病之臨床過程，通常表現於嬰兒或孩童期，相當轉，在正常成長之前，就迅速地被剝奪視力、聽力、言語力、盥舟能 /、步態，可預知者為數年内之死亡。 10- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公笼） 1325319 A7 B7 五、發明説明（Ο 10 15 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 20 2) 脫髓顆病況-如本說明書中所定義者，其為一種有缺憾的脫趙勒所導致的結果，這類脫髓鞘病況包括，但#僅限於脊髓傷害、創傷性腦傷害與中風。 3) 脊聽傷害（SCI)—如本說明書中所定義者，傷害到脊髓而導致功能受損者，例如損及運動能力或感覺。 4) 創傷性腦傷害(TBI)—如本說明書中所定義者，其為 -種導致腦部受損之傷害，頭部的傷害可能呈現兩種方式： *封閉的頭部傷害，係發生於移動中的頭部突然被停止，例如擊中擋風玻璃，或當被鈍器擊中使腦踫撞至頭顱内面的硬骨表面，如果腦部進行快速的前後移動下（例例如當某人經歷因車從後方被撞而引起頸部扭傷之情況)，也有可能在頭部無直接的外部創傷下發生封閉的傷害。 ' 鲁當快速移動的物體（例如子彈）穿過頭殼時，就會發生穿透性腦傷害。封閉的與穿透的頭部傷害可能導致局部的與廣佈的，或擴散的腦部傷害，所導致的失能情況包括記憶損失與情緒紊亂，行動困難，包括麻痒，並損及五種感覺，此外，許多患者因其傷害而死亡。今天，治療的焦點放在儘可能於傷害發生後24小時期間内處理最大的損傷，當某人遭遇到腦的傷害時，其結果會延伸超過初期的創傷，二度傷害的”级聯 (cascade)”接鐘而來，腦本身的免疫細胞扳動膨脹與造

i 計線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1325319 A7 B7 五、發明說明（10) 成體液，且受傷的神經細胞開始洩露出所謂的麩胺酸之神經傳導物質，可很快地被蓄積至一定值而對周圍神經元具有毒性。 5) 中風復健一在本說明書中的意義為，中風復健是種 5 嘗試介入因中風造成的功能受損使其恢復之過程。 6) 中風一在本說明書_的意義為，中風是由於當血凝塊阻塞了血管或動脈，或當血管破裂時，中斷了腦部某範圍的血流所致，當發生中風時，其造成直接地區的腦細胞死亡，醫生稱此死亡細胞的地帶為梗塞，這 10 些細胞通常在中風開始後數分鐘至數小時内死亡，在中風的情況，脫髓鞘的測定值(例如磁化轉移比例 (MTR))與軸突的損傷密切相關，其也關係到動作的缺損（Pendlebury et al，2000)。 7) 烷基或亞烷基一除非另有說明，”烷基”或”亞烷基"指 15 的是在分子式中適當出現的分枝的或直鏈的烷基或亞烷基，標示其烷基中的碳數目，例如CrC6烷基代表的是具1，2, 3, 4, 5或6個碳的分枝的或直鏈的烷基或亞烷基，此情況下可能為，但非僅限於C1-2, Cl-3, Cl-4, Cl-5, C2-3, C2-4, C2-5, C2-C6, C3-C4, 20 C3-5, C3-6, C4-5, C4-6, C5-6 等等。 8) CrC6烷氧基一除非另有說明，CrC6烷氧基代表的是具1至6個碳原子的直鏈或分枝的烷氧基，例子包括曱氧基、乙氧基 '正-丙氧基、異丙氧基、正-丁氧基、異-丁氧基、第二-丁氧基、第三-丁氧基與為直 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

1325319 A7 B7 五、發明說明（1 1 ) 鏈及分枝鏈之戊氧基與己氧基。 9) 齒素一除非另有說明，鹵素可以代表氟、氯、溴或埃0 10) CrC6烷酸—除非另有說明，Crc6烷羧酸代表的是其 5 羧基係接於氫或具1至5個碳原子的烷基者。 11) CrC6烷醯基—crC6烷醯基是代表自Ci_c6烷酸的羧基移除羥基所得之基，故其包括，例如甲醯基、乙醯基等，而烷醯基、烯醯基與炔醯基是代表分別自烷酸、烯酸與炔酸的羧基移除羥基後所得之基，故，例 10 如，亞油基即為衍生自亞油酸之例子，是種如上定義之烯醯基。 12) “藥學可接受的鹽類”意指其酸加成鹽或鹽基態加成鹽為相容於供治療患者的用途者。 13) “藥學可接受的酸加成鹽，，意指任何以式I代表的基 15 本化合物或其中間物之無毒的有機或無機的酸加成經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製鹽，可形成適當的鹽類之無機酸類，舉例來說包括氮氣酸、氫溴酸、硫酸與碟酸與酸金屬鹽類，例如正填酸一氫鈉與硫酸氫鉀，形成適當的鹽類之有機酸類包括單_、雙-與三-羧酸類，這類酸的例子為乙酸、乙醇 20 酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、棒檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯曱酸、羥基笨甲酸、苯基乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸、對甲苯續酸與磺酸類，例如甲磺酸與2-羥基乙磺酸，可形成單_ -13- A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1325319 五、發明說明（ι〇或雙鹽類，且這類鹽類可呈水合物、溶劑化物或實質無水的型式存在，通常，這類化合物的酸加成鹽類較易溶解於水與各種親水的有機溶劑且相較於其游離鹽基態物，通常證明具較高的熔點。 5 14)“藥學可接受的鹼性加成鹽類”意指具式(I)的化合物或任何其中間物之無毒的有機或無機的鹼性加成鹽類，例子為驗金屬或驗土金屬的氫氧化物，例如納、鉀、鈣、鎂或鋇等的氫氧化物；氨，與脂肪族的、脂肪環形的、或芳族的有機胺類，例如甲基胺、三甲基 10 胺與甲基吡啶等形成之鹽類，從事本行者知道對適當的鹽類之選擇標準。 15) “立體異構物”一詞是指個別分子的異構物，其僅在空間中的原子方位有差異者，其包括鏡像異構物（對映體）、幾何異構物（順式/反式）異構物、與具有多於 15 一個不對稱中心且彼此非為鏡像物的化合物異構物 (非對映立體異構物類）。 16) “患者”是指溫血動物，例如大老鼠、小老鼠、狗、貓、天竺鼠、與靈長類，例如人類。 17) “治療”或”治療的”意指用於缓解徵狀、暫時或永久 20 地消除徵狀的成因、或預防或減緩所稱疾病或病況的徵狀外觀。 18) “具療效量的”意指所使用的化合物之量能有效地治療所稱的不舒服、疾病或病況。 19) “藥學可接受的載劑”意指無毒性的溶劑、分散劑、 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

1325319 A7 B7 五、發明說明（13) 賦型劑、佐藥或其他的可混在活性成分中以形成藥學組合物（即可供施用給患者之劑量型式）之材料，這類載劑中之一個例子為被使用於非經消化道施用的藥學可接受的油。 5 20) “神經病變性疼痛”意指疼痛是由於神經系統受到傷害所引起，此神經傷害可以是明確的或不明確的，神經病變性疼痛的例子包括泡疹病毒後的神經痛'糖尿病神經病變的疼痛、幻視肢疼痛與中風後的中樞神經痛。 10 21)“膀胱過敏與營養失調’’意指像是間質性膀胱炎與膀胱過度活化的狀況，過度活化的膀胱是種特殊的醫學狀況，顯現的徵狀包括頻尿、尿急、與尿失禁，強烈突然催促排尿後發生的意外遺尿，作成過度活化的膀胱之診斷是在無局部病理的或與代謝相關的病因學 15 下，由於迫肌的過度活性而引起不由自主的膀胱收縮的現象，間質性的膀胱炎(1C)是一種慢性的膀胱壁發炎現象，其常難以被診斷出來。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製式I的化合物可有效改善急性脊聽傷害與長時站立 (long-standing)的脊髓傷害恢復的比例與程度，在活體内， 20 它們具有性質一致於與用途有關的（use-dependent)納通道封鎖及與電壓有關的（voltage-dependent)狎通道封鎖，它們提供較4-AP為更安全的治療。

較佳的化合物為，其中的R為氫、鹵素、三氟甲基、或C丨-C6烷基；R丨為氫或C丨-C6烷基；R2為氫或CV -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1325319 A7 A7 B7 五、發明說明（I4) c6烷基；R3為氫、CrC6烷基或鹵素；且p為0，另外更佳的化合物為，其中的胺基係被接在吡啶基的4-位置者。又更佳的者為式II的化合物[在此也稱之為HP184 5 或N-(3-氟-4-吡啶基)-N-丙基-3-曱基-1H-吲哚-1-胺]與式 III的化合物[在此說明書中也稱之為”8183”]。

III HP184在微莫耳腦中濃度下具有極好的藥物耐受性，對大老鼠經腹膜内（ip)施用30毫克/公斤的HP184經一 20 小時測定結果(Smith et al，1996)。此種與用途有關的（use-dependent)鈉通道封鎖及與電壓有關的（voltage-dependent)釺通道封鎖之絕妙組合，使本發明的化合物與”純粹的”鈉通道封鎖劑（例如卡本井品（carbamazepine)與雙苯丙脲(phenytoin))有所不同， -16- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

1325319 A7 B7 五、發明說明（I5) 這些試劑已被成功地用於緩解正向的MS症狀(疼痛的僵直發作與不悅異常感），然而，它們也惡化負向症狀 (麻痺與感覺過度)(Sakurai and Kanazawa, 1999)，本發明的化合物提昇神經的功能是由於其阻斷鉀通道的事實， 5 此點幫助功能的恢復，目前，鈉通道阻斷物被認為有用於供治療疼痛症狀及/或作為神經保護劑，然而，它們不被預期會提昇復健的有效力。於治療受上述疾病或病況折騰的患者時，式(I)的化合物可將生物可利用的具療效的量，以任何型式或模式 10 施用，包括口服、舌下、兩頰、皮下、肌肉内、靜脈内、皮膚、鼻子、直腸、局部等等方式施用，從事本技藝的熟手配製藥劑時，可就適當的劑型與模式，視化合物的特性或受治療的疾病、病程、病人狀況及相關狀況而決定，例如，可參考 Remington’s Pharmaceutical 15 Sciences, 18th Edition，MackPublishing Co. (1990)，其被併入於此作為參考。式I的化合物可被單獨或配合藥學可接受的載劑作成藥學組成物施用，其中的比例與本質視所選用化合物經濟部智慧財產局員工消費合作社印製之溶解度與化學性質、施藥方式、標準的藥學實作及其 20 他相關的標準而定。本發明的化合物可經由口服用藥，例如，被作成錠劑、片劑、膠囊劑、触劑、懸濁劑、溶液類、濃漿劑、爲片、吸嚼劑等且可含有一或多種下述佐藥：點結劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或動物膠；賦型劑，例如澱粉 -17- 本纸張尺度適用中關家規格⑵Gx297公楚） ~ B7 五、發明說明（ 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 =，例如藻酸、普美―㈣、玉米歲㈣，潤滑劑類，例如硬脂酸鎂或⑽咖；助滑劑 ί如氧化石夕；與甜味劑類，例如可加人嚴糖或掩 ^或風味劑，例如薄荷、甲基水揚酸當劑量單位型式為膠囊劑睥L兑可1人…? 了上述類型的材料外，的載劑，例如聚乙二醇或脂肪油，其他 :，早，’可能含有其他各種用於修飾劑量單位的 ^性^之材料，例如塗料，故錠劑或丸劑可能被塗褒二、蟲膠、或其他腸溶的塗裝劑，濃漿液除了存在的料it可能包含作為甜味劑的絲與某種防腐劑、染枓與者色物及風味成分。本發明的式⑴化合物也可能被局部施用，供局部施用^載财適當地包含-種錢、㈣或凝膠基質，例如，可包含一種或多種的凡士林、綿羊油聚乙二醇類、蜂蝶、鑛物油、稀釋劑類，例如水與醇類，以及乳化劑與安定劑。溶液類與懸濁劑類也可能包括—種或多種的下述佐劑：已滅菌稀釋劑，例如供注射用的水、趣溶液、固定化油質類1乙二_、甘油醇或其他的合成的浴劑類；抗菌劑，例如苯甲基醇或對絲苯甲酸甲醋；螯合劑類，例如乙二胺四醋酸；緩衝劑類，例如乙酸鹽類、檸檬酸鹽類或磷酸鹽類與供調整溶液張力的試劑，例如氣化納或葡萄糖，非經消化道施用的製劑可被密封於魏瓶中、可棄置的注射筒或多重的劑量藥水瓶。質 -18· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS；)A4規格（21〇χ297公釐） 1325319 A7 B7 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 五、發明說明（17) 本發明的高度親脂的酯類、醯胺類與胺基曱酸酯類，當被配製成儲存型製劑施用時，在哺乳動物中可在數天或自約一至四星期的期間被持續釋放，例如，當被注射於經適當選擇的藥學可接受的油中時，較佳的油類為植物油，例如芝麻油 '棉軒油、玉米油、椰子油、大豆油、橄欖油等，或其為合成的脂肪酸類與多官能的醇類 (例如甘油或丙二醇)之醋類。本發明的貯存式組成物的製法為，將本發明的高度親脂性的酯類、醯胺類或胺基甲酸酯類，在無菌條件下，溶解於藥學可接受的油中，選用的油為其可於經過所要的期間釋放活性成分者，適當的油可容易地經參考較早的文獻而決定，或是藉由從事本行業的熟手的專業知識與經驗而取用。式ί化合物可呈現其具治療作用能力之劑量範圍，視被治療的特殊疾病或病況及其嚴重度、患者、配方、其他患者遭受的潛在疾病、及可能同時施用給患者的其他藥劑而有很大不同，通常，式I的化合物將可在介於約0.001毫克/公斤體重/夭至約1〇〇毫克/體重/天的施用劑量範圍下達到治療活性。下述實例係用來作為說明之用，不代表本發明的範圍僅限於這些例子。實例與電壓有關的鈉通道封鎖一致的活體内驗證 19-

1325319 五、發明說明（18) 10 15 鼠，結果示於表1 方法.κ驗的步驗是根據Bachau彡等人（1992)的方法，使用氯醛水合物(400毫克/公斤）將重量為35_4〇克的雄性CD-1小老鼠麻痺，在操作顯微鏡下，在右眼眶後2毫米處作出3毫米的垂直皮膚切口，移開顳的肌肉並進行小型頭顱切開術以曝露出硬腦膜，將硬腦膜切開並轉向並露出右邊中央的頸動脈的遠端部位，利用附有細鉗子之雙極的eleetiOagulat^在主分歧處的上游處予以閉合，使用2%的三苯基四嗤鏽氯溶液在24小時後測定梗塞的體積，在此實驗範例中，Hp 184是以口服方式在閉合前-小時施用給未被禁食的小老鼠（每组十隹）梗塞體積縮減是相比於僅以1%乙酸(載劑）處理的:老表L HP m對經pMCA0中風處理模式處理的老鼠經保護活性劑量(毫克/公斤，口服）時間(分鐘;) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^0 \0_ :p<0.05; **=ρ<0.01 -60 -60 -60 梗塞體積縮減％ ±g±標準誤差 21土 32± 11 在老鼠的永久性中間的顯動脈閉合模式(pMcA〇) -20- 私纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公楚） 1325319 A7 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（19) 中觀察得到的神經保護作用，在此劑量與時間下是與體内與電壓相關的鈉通道封鎖一致的。實例2 5 HP 184對大老鼠經光照血栓性腦損傷後的水腫之影響理念/目標：血栓性中風是西方世界第三大死亡原因，它係由於在腦据環中被產生的或形成於心臟或大A管中並被帶入至腦循環中之血塊或崩解的金栓所引起，其後血流被中 10 斷而發生局部缺企之傷害，帶有水腫、組織之壞死與凋亡，水腫是有害的，由於它會壓迫腦部、增加局部缺血症、且也使細胞溶解及造成機械傷害，以HP 184(—種共有的Na+/K+通道阻斷劑)處理進行研究其對此種腦水腫之影響。 15 方法:使用氣醛水合物(400毫克/公斤，腹膜内注入)將雄性Sprague Dawley大鼠（180-200g bw)麻痺，並置入實體的裝置内，打開皮膚露出頭顱，安置冷光(Bioblock 150W)使接觸於人字縫尖前方顱骨的右侧，以靜脈内施用方式施用孟加拉玫瑰染料（10毫克/公斤於點滴用的鹽 20 液中）並立即開始顱骨的照明並連續五分鐘，然後在顱骨上將皮膚縫合，並將動物送回籠中，動物在經過光照造成血栓性損傷後24小時，使接受作成1%溶於水中的聚山梨醇酯（tween)中的HP 184,經靜脈内注射施用〇、 10或20毫克/公斤，體積為5毫升/公斤的量，一小時後 -21- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

1325319 A7 B7 五、發明說明（2〇) 將動物斷頭犧牲並取出其腦部（參見手冊附件)，使用6 毫米直徑的軟木穿孔器取出損傷位置的，以及病灶對側的核心樣品，水分含量的定量法為濕態組織重量/乾燥組織重，而水腫程度則係相比於每隻大老鼠病灶對側半球 5 取得的樣品，位於損傷區的樣品之％過量水表示。結果一示於表2 表2.老鼠pMCAO中風模式下，HP 184的神經保護活性治療於損傷後24小時 η 在傷害發生後25小時之水腫 (%過量水）載劑 26 4.10± 0.12 靜脈内注射HP 184, 10毫克/公斤 12 3.61± 0.23 ns 靜脈内注射HP 184, 20毫克/公斤 13 3.20± 0.27** 10 統計方式：ANOVA 加上 Tukey-Kramer ** = p < 0.001 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 HP 184經證明對右腦皮質的水腫有明顯縮減(22%)，係在點滴施用20毫克/公斤的量後一小時及受到光照血栓傷害25小時後之結果。 15 實例3 大鼠經短暫的局部灶的腦缺i後，HP 184對損傷大小與神經的功能的影響 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（21 在此研究中，HP 184係於局部缺血開始後一小時在老鼠之短暫的局部灶腦缺血模式下進行，被測定的參數為損傷的大小與神經的功能。友逢1以混在一氧化氮-氧氣（70:30)中的三氟氯溴乙烷 5 (1.4%),將重量約為22〇_24〇克的雄性Sprague Dawley大鼠[Iffa Credo, France]予以麻醉，單離出兩共同的頸動脈 (CCAs)，利用微夾子將經由顳的頭顱切開術曝露的左中央腦動脈(MCA)予以閉合，同時將cCAs閉合一小時，體溫與腦溫均保持在正常溫度下，經手術後的動物將其 10送回室溫被維持在24-26°C的原來籠子中。在局部缺血開始後一小時，將溶解於1% tween(溶解於可注射的已滅菌水中）之HP 184經靜脈内施用^ 與20毫克/公斤，對照組依相同程序接受载劑注射缺灰後24小時，利用九項分級尺標盲目地進行神經功心' 15 的評定。 /工& 用於評定神經功能的分級尺標經濟部智慧財產局員工消費合作社印製項目 _正常評分 20 安置反應肢懸垂左前肢 1 左方 1 視覺 1 抓握反射左前肢 1 -23- 有缺損時 0 0 0 本纸張尺度適用中固國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 0 1325319 A7 B7 五、發明說明（22 ) 左方正位反射 1 0 頭部傾斜左邊 1 0 右方 1 0 不正常的姿勢無有胸部扭轉 1 0 左前肢屈曲 1 0 整體神經評定分數 9 10 其後，將大鼠犧牲，取出腦，將新鮮腦質切片並以 2%的三苯基四唑鑌氯化物在37°C下染色5分鐘，然後儲存於4°C的10%福馬林液中經24小時，利用影像分析器（LeicaQ500)測定梗塞的面積。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製結果:結果：在皮質與紋狀體的缺血均會引起腦損傷的 15 發展（見圖1，是在經MCA閉合後，以10與20毫克/公斤的大瓶點滴注射HP 184 —小時的效果，以10毫克/ 公斤的HP 184靜脈内點滴處理，明顯減少腦損傷達 41%(<0.05),在皮質部位的縮減也為明顯（-45%, ρ<0·05)。 20 實例4 鉀通道封鎖的評量方法將PC12細胞(ATCC, Rockille，MD)培養於含有10%胎 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（23 ) 兒牛血清（GIBCO BRL Grand Island，NY)之杜貝克氏 (Dulbecco's)的經修飾之伊格氏(Eagle's)培養基内，針通道電流的測定是使用前面已詳述的電生理記錄書之標準的貼片炎子進行(Rampeetal.，1998)。 5 結果輿討論鉀通道電流是藉200 msec之夾子脈衝波，由-80 mV的維持電位至+40mV被引出，此種方式導致持續的指向外的電流，HP184的應用（10 μΜ)減少此電流的幅度與提高電流衰退的速率，當在脈衝的末端量取電流時，HP 184減少的 10 電流幅度達75+4%(n=4),此結果與HP 184是藉阻斷一種活化的位置而作為與電壓相關的K+通道的拮抗劑之想法一致0 實例5 15 加強肌肉功能的髏内镫據經濟部智慧財產局員工消費合作社印製目標：無機染料釕紅(RuR)已被報導於多種細胞類型會阻斷受電壓影響的Ca+2電流，包括小鼠感覺神經元(Duchen, 1992)、突觸體類與神經肌肉準備物(Hamilton and Lundy, 1995; Tapi and Velasco, 1997)，此外，RuR 阻斷腦突觸體中 20 (Meza-Ruiz and Tapia, 1978; Tapia and Meza-Ruiz，1977))與神經肌肉接合處（Alnaes and Rahamimoff，1975; Person and Kuhn，1979)的神經傳導介質的釋放，在體内，腹膜内施用 RuR會引發小鼠的鬆他性癱疾(Tapia et al，1976)而此種影響受到4-胺基吡啶(4-AP), —種與電壓有關的K+通道阻斷 -25- 本紙張尺度適用中圉國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（24 ) 劑’之對抗(Tapia, 1982)，Tapia 與 Velasco( 1997)回顧 RuR 在體内與體外兩者的影響，並暗示RUR係在神經末端膜所在之Ca+2位置交互作用，結合研究指出，RUR選擇地阻斷 N-類型Ca+2通道，而這些通道調節供神經傳導介質釋放所 5必需的Ca+2流入，這些作者也暗示，腹膜内施用rur可能作為伊蘭二氏肌無力徵候簇（一種由於抗體結合至N-類型 Ca+2通道而以Ca+2入口的封鎖與ACh釋放為特徵之自體免疫性疾病）的實驗模式，與此種可能性一致的為，4_Ap經報導用於改善患者肌肉的無力與儲回神經肌肉的傳導 10 (Lundh et al, 1977a; 1977b; 1979; McEvoy et al, 1989; Aisen et al，1995)。 4-胺基吡啶(4-AP)與胍兩者對抗受rur誘發的鬆弛性癱瘓的能力可能是由於它們的促進神經傳導質釋放的能力 (Lundh, 1978; Lundh and Thesleff, 1977; Tapia and Stiges, 15 1982)，在任何種情況，Tapia與其同事（Tapia and Stiges， 1982)已報導，RuR阻斷在突觸體中受4-AP誘發的釋放。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在體外，HP 184藉與施藥4-AP不同的機制促進神經傳導質之釋放，在高濃度下，4-AP增進受電流刺激的與自動的釋放，但這些效果為與鈣相關者，相對地，HP 184僅 20 增進與鈣無關的自發的神經傳導質釋放(Smith et al, 1993), 已有假說δ忍為，自發的釋放在體内具有·一種功能的角色 (Smith et al，1996)。下面實驗的目的為測定是否在共同注射HP 184與4-AP後，其能對抗RuR的麻痺效果。 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（2丨Ox297公釐） 1325319 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（25) 方法與結果：4-5隻小鼠(CD-I; Charles River; 25-35克）為一組，被分開，但同時經腹膜内注射RuR與載劑（1%冰醋酸）、RuR與4-AP、或RuR與HP 184,已知為"8183"的化合物也在此範例中被試驗，開始注射後15分鐘，將小鼠放 5 置接近一”旗杆”裝置，記錄其支撐本身體重的能力（即，保持於旗杆上不掉下)，結果是以相較於全部受試小鼠總隻數能支撐其本身體重的小鼠隻數表示，這些結果被示於表3, 所有的實驗都是在下午2點與4點半間進行。 10 表3 藥物，劑量藥物，劑量 15分鐘 30分鐘 45分鐘 RuR> 30毫克/公斤，腹膜内注入載劑 69隻中29隻 (42 %) 69隻中19隻 (27.5 %) 64隻中18隻 (30.4 %) 0.3毫克;公斤 4*AP 25隻中22隻 (88 %) 25隻中13隻 (52 %) 25隻中12隻 (48%) 0.6毫克/公斤 4*AP 14隻中12隻 (85.7 %) 14隻中8隻 (57.1 %) 14隻中8隻 (57.1%) 30毫t公斤HP 184 15隻中15隻 (100 %) 15隻中15隻 (100 %) 15隻中15隻 (100%) 10毫克/公斤HP 184 15隻中14隻 (93.3 %) 15隻中12隻 (80 %) 15隻中11隻 (73.3%) 30毫以公斤8183 14隻中13隻 (92.8 %) 14隻中13隻 (92.8 %) 14隻中14隻 (100 %) 100毫克/公斤DPH 20隻中11隻 (55 %) 20隻中10隻 (50 %) 20隻中10隻 (50 %) 30毫^公斤 DPH 15隻中4隻 (26.7 %) 15隻中3隻 (20 %) 15隻中4隻 (26.7%) 10毫克/公斤 RIL 15隻中9隻 (60 %) 15隻中4隻 (26.7 %) 15隻中4隻 (26.7%) -27- .計· .線· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（26) 結論： 4-AP(iP)與HP(iP)兩者都可對抗經腹膜内施用祕誘發的鬆弛性癱瘓，此暗示HP 184能提昇體内的神經的傳 5導很可能是經由K+通道封鎖，也有可能，就如4_Ap，Hp 184是提昇神經的傳導，是由於體外腦薄片實驗支持增加的腦傳導質釋放(Smith etal，1993; 1996)。在此實驗的範例中也被檢測的鈉通道阻斷劑[二苯基海達同（diphenylhydaintoin，DPH)與里魯唑(riluzole，RIL)]之劑 10量為之前被證明在局部缺金模式中具神經保護之量(Rataud etal，1994; O’Neill etal，1997)，在此模式下它們不具效果, 支持了 HP 184對抗RuR-誘發的鬆弛性癱瘓的能力彳艮可能不是由於體内鈉通道封鎖之解釋，這在臨床上也相當符合， MS(損失移動力）的負向症候常會受鈉通道阻斷劑而變得更 15 差（Sakurai and Kanazawa, 1999) ° 實例6 f鑕游屢斿症禊4’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製理念與目標：Gruner & Yee (1999)證明，脊髓受傷25天 20後，在大鼠分級的脊髓損傷後，4-AP提算mMEP’s，使用同樣步驟，測定其功能行為，這些行為經1證明與最1低的mMEP相關，這些實驗的目標為兩重的： 1)測定在緊急提供藥劑下，HP 184是否能減緩中等度脊髓擠壓-引起的運動損傷I與類固醇 -28- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（2丨0 X 297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（27) (methylprednisolone)琥轴酸鹽(MPSS)比較其有效1生，與 2)測定是否HP 184能改善長久站立(25天）下，脊髓輕度損傷下的大鼠之運動功能，並與4_胺基吡啶(4_ap) 5 比較其效果。 ΛΜΜμ —經腹膜内祐.q 將雌性大鼠的脊髓進行椎板切除術(sham，n=12)或擠壓成至1.4毫米的直徑(5組，各為n=12)，正常的脊髓 10直徑為約2.5毫米，此種壓迫代表一種中等度的傷害，特徵為其在開放領域行走級別(〇pen Field wdking Scale) 中的初期開放領域行走評分為15_2·5，而開放領域行走級別（OFT)的定義如下： 00 無自發的移動 15 0.7 略可移動 1.0以臀部及/或膝部（非足踝)移動 L3臂、膝部可移動，非足踝部 1/7有問題的足躁移動經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2.〇在全部三主要關節有肢的移動 2〇 2.3嘗試支撐 2·7 僅在安放的姿勢下可支撐 30可支撐、未經協調的步態 3·3協調的步態的間歇發作 3.7缺乏腳踩或步伐的控制、以膝關節或足部的中間 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準_，χ_;7 1325319 A7

表面走路 4·0 前肢與後肢步態的一致 4-3 改善的後肢姿態支撐、下腹未低至地面 4·7 —或兩隻腳趾拖著、以全速變換下略為不穩定 5 50 正常的步態與基本支撐、在快速轉換中不喪失平衡、沒拖著腳趾走。 _藥物虑:理經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在擠壓的15分鐘内（第一天)，標示為HP 184的大 10 鼠群組，經腹膜内注射接受20、10、5或0毫克/公斤溶解在1%冰醋酸載劑之HP 184，此種施用法於第2與第 3天再重覆一次，另一方面，MPSS組係經腹膜内注射3〇毫克/公斤，在第一天，擠壓後的15分鐘、2小時、4小時 '與6小時進行，此MPSS的用藥時刻表文獻中已有 15描述為最適當者且為供人類施用的較微量者，MPSS為目前唯一被認可供人類脊髓損傷之藥物療法者，圖2顯示的為各種治療群組經一段時間後的行為的分數(OFT)，正常的手術前分數為5,在20與5毫克/公斤劑量群組中，改善的速率與程度明顯與僅以載劑處理之大鼠不同， 20各分數代表8-12隻大鼠的平均值加上 sem ° 急性治療一經口服施用再一次地，將雖性大鼠的脊髓進行椎板切除術(sham, n=12)或擠壓成至1.4毫米的直徑，在HP 184群組中， -30- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製丄 W5319 五、發明說明（29 ) 在擠壓脊髓前5-10分鐘給予大鼠口服藥物，然後在第2 與第3天，每日一次，MPSS的給藥法與前面的相同，行為分數(OFT)被顯示於圖3，正常的手術前分數為5。相比較於以載劑處理的群組，對所有被給藥處理者， 5包括10毫克/公斤組，改善速率與程度均有進步，各分數代表12隻大鼠的平均值加上serft。慢性的擠壓實驗將雌性大鼠的脊髓進行椎板切除術(模擬組，n=12)或〇擠壓成至丨.6毫米的直徑，這代表輕微的傷害，且在25 天未經治療下，其OFT分數被評定為4〇,選這種傷害是為了重建如Gnmer與Yee(1999)所描述的同程度的運動損傷，他們證明4-AP在後肢微運動終板電位記錄中誘發改善，此種未經治療的傷害之程序與長度也被證明 5會導致髓鞘病變，行為的分數(〇FT)被顯示於圖4,圖4 顯示者為依前面所述的開放領域行走級別標準評定的各群組之平均值與標準誤差。於此貫驗中，OFT分數略為高些(4 3 4 5)，僅留下少里改善空間，使用每隻大鼠為其本身對照，在經口服用〇藥HP 184之第26、27與28天中之一天，可觀察到一致的改善，在經腹膜内注射〇.6毫克/公斤4_Ap之後的某一天，也可觀察到一致的改善，統計上的差異是基於每一個別的大鼠的改變(每隻大鼠的對照組即為其本身）使用Mann-Whitney u_試驗進行，所有在第i天、第2 -31- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297 ^^7----

1325319 A7 B7 五、發明說明（3〇) 天與第3天的行為試驗是在灌食後第3小時進行，第3 天不給藥（開始給藥的第1天為第〇天），這些統計分析如下： 20毫克/公斤一相比較於載劑對照組，在3小時至第 5 3天有明顯改善(p=.002) 10毫克/公斤一相比較於載劑對照組，在30分鐘與 3小時至12小時有明顯改善(p=.014) 3毫克/公斤一相比較於載劑對照組，在30分鐘至第 1天的6小時有明顯改善(p=.0027) 10 4-AP—相比較於載劑對照組，在90分鐘至3小時與 12小時至第2天有明顯改善(p=.0027) 表4說明對各群組自用藥前至第三次連續每天用藥後三小時間之評分改變。 15 表4 載劑擠壓 4-AP 擠壓 20HP 擠壓 10HP 擠壓 3 HP 擠壓 Laminec 未擠壓用藥前 4.52+ 0.04 4.43± 0.03 4.54± 0.02 4.36± 0.01 4.32± 0.05 4.87± 0.01 最後一次甩藥後3 小時 4.53+ 0.03 4.53± 0.02 4.60± 0.02 4.44± 0.03 4.47+ 0.04 4.87± 0.01 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製圖5顯示評分的變化值，對每隻老鼠已作標準化， 20 圖形顯示為經過三天連續用藥後所觀察到的變化(從用 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1325319 A7 B7 X- 5 ο

5 IX 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製發明說明（31) 藥前至第二天連續每曰用藥後3小時)，係經腹膜内注射〇·6毫克/公斤的4-AP' 口服2〇或1〇或3毫克/公斤的HP作比較，經椎板切除術者歸之為模擬組，對各群組(n=12)的平均值±平均誤差被顯示於圖5。長期站立脊髓損傷中的有效性經過中等度的脊髓損傷的35天後，口服施用3毫克 /公斤HP 184，在單劑施用後即改善運動恢復度，且繼續四天每日用藥，就前面述及的開放領域行走試驗標準下，可得到連續與持久的改善，4-AP在0.6毫克/公斤經腹膜内注射下也有類似效果，從慢性脊髓損傷研究（在溫和的脊髓擠壓後25天與在中等度脊髓擠壓後35天作第一次施藥）兩者予以表列於表5。表5 處理方式第25天(溫和的）用藥前第28天(溫和的）最後一次用藥後3小時變動值可能的改善％ (最高分數=5) 對照組 4.52± .037 4.53± .026 .01 ----- 2% 4-AP(0.6mpk, ip) 4.43± .030 4.53± .023 .10 ---- 17.5%* HP 184(3ηιρ1ςρο) 4.32+ .016 4.47± .035 .15 ---, 22.0%* 處理方式第35天(中等度）用藥前第39天(中等度）最後一次用藥後3小時變動值可能的改善％對照組 4.00+ .074 3.99± .057 -.01 -2% 4-AP(0.6mpk, ip) 3.95± .084 4.17± .047 .22 22.1%* HP 184(3mpk,p〇) 3.89± .054 4.17± .058 .274 24.8%* -33- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1325319 A7 五、發明說明（32 ) 如上所示，在中等度擠壓傷害後35至41天，口服給予HP 184，在3毫克/公斤/天的劑量下產生明顯的改善效果，值得注意的是在此研究中，接受HP 184的大鼠其在 5受傷的脊髓中之受傷部位有較多的髓鞘質，此數據提供的證據可斷言HP 184可以增進髓鞘化作用或是降低前進中的脫髓鞘病變》進行另研九，在雙0有女慰劑與正向控制的設計中測定HP 184在中等度慢性的（受傷後35天)擠壓範°例°中之 10最低有效劑量，先前被觀察到在3毫克/公斤的口服Hp m的效果，制4-AP(0.6毫克/公斤，ip)作為正向對照組可被確認，此外，也作髓鞘質染色經組織學檢視所有處理的效果。 (1)订為的評鑑 15 自Charies River取得150隻，重量在250-300克間的雌性Wistar成年大老鼠，將其養在McMaster

University Health Sciences Centre (HSC) Central Animal

Fadlities(CAF)至少一星期，在那期間使它們參與下述的性能試驗，以確保其熟悉度，手術前每天予以處理經 20 二星期。使用異氟甲氧氟烧(is〇flurane，3_5%)將大氣麻醉：〇2 (1升/分鐘)流動於CAF的附有外科設備房中，為缓解疼痛，手術前經皮下施用天格辛(Temgesic)(〇〇3毫克/公斤體重）’利用3.5毫米寬改造的蓋玻片夾將脊聽擠壓 -34- 本纸張尺度適用中國固豕標準(CNS)A4規格（210x297公爱） ' --

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1325319 A7 B7 五、發明說明（33 ) (Blight 1991，程序由Rathbone實驗室修改過)，將夾子閉合至1_4毫来經15秒，這樣產生的傷害等級相當於 Gruner標準（1996)的中等度等級，此種壓迫傷害也可藉由Blight(1991)所揭露的方法進行。 5 就尿道感染或閉尿的出現，觀察動物以測定疼痛行為，疼痛以口服普拿疼（Tynenol)予以處理（0.8毫克/10克體重）。為防止泌尿系統感染，在手術前一天與手術後第5天給予口服撒普拉（Septra, Trimethoprin-Sulfamethoxazole)抗 10 生素，且以手動壓迫膀胱治療，所謂感染的情況，是指任何尿道感染而顯現混濁的或帶血的尿液之情況，並以一天兩次經皮下注射（SQ)施用拜耳利（Baytril，enrofl〇xacin)(7 毫克/公斤b.w.)予以治療。運動的行為與分節的反射被鑑定直至受傷後5星期， 15利用開放領域行走試驗、後肢配置與足部方位加以檢測，動物在手術後第2, 7, 14, 21，28與35天被評比，手術後35 天時，幾乎再無自動的復元出現，故治療開始於第35天。 HP 184被溶解在已滅菌（高溫釜加熱過的）去離子的逆滲透水中，加入冰醋酸予以酸化(每10毫升加入〇丨毫升） 20 4-AP(Sigma，分子量 94.12; Jankowska E. et al 1982·

Gruner et al.，1999)被溶解在生理食鹽水中（〇6毫克/公斤 b.w.)，以腹膜内注入方式施用，一組大鼠（载劑對照组經口被灌食載劑，在被灌食前及灌食後3小時立刻進行行為試驗，然後，在第35天，老鼠被犧牲，所有其他的大鼠在 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

1325319 A7 五、發明說明（34 ) 手術後的35至42天每天施用一次，經口服灌食Hp 184(分成0.3、1、或3毫克/公斤bw三組)或4-ΑΡ(0·ό毫克/公斤，i.P·)或載劑（載劑對照組-2)，在這些天的行為測試是在灌食如一刻與灌食後3小時與24小時下進行，然後 5在第43天，最後的行為測試後，將大鼠們灌流。在手術後第35至43天之行為的試驗使用Hi_8拍攝錄下。數據分析係使用GB-Stat ppc 6.5.2.於堯金签電腦上進行，行為的分數藉Kruskal-Wallis無參數變異量分析法 10 (ANOVA)予以分析，事後比較(post h〇c comparis〇ns)則是使用Mann-Whitney U測試法做出。開放領域運動的能力的概要復元度是就各組平均的 OFT分數加以評鏗，結果示於圖如與6b,這些結果顯示，相較於僅接受載劑者，經HP 184或4-AP處理的動物的演 15出成果明顯不同，反覆測定下，ANOVA顯示在第35-42天具治療效果(p<0.01)。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製結果顯示，4-AP與HP 184兩者均具有益效果，在中等度慢性脊髓壓迫後可改善行為的測試值，雖然所有三種濃度的HP 184均有效，但以3毫克/公斤的Hp 184產生最好 20的運動功能的復原，故確認了之前在此種劑量下被觀察到的HP 184的效果，這些結果也顯示此範例中，最低(〇 3毫克/公斤）濃度的HP 184可能不是最低的有效劑量。 -36- 本紙張尺度適財國國家標準(CNS)A4規格（2丨〇 x297公楚） 1325319 A7 B7 五、發明說明（35 ) 脊髓的组鐵學研究一種研究用於測試當在脊髓損傷後很久以Hp 184處理疋否對具中專度長期脊髓擠壓損傷的大鼠是否會影響其髓鞘質之量。 5 此研究使用上述評鑑中的來自大鼠的脊髓進行。於手術後的第21天，以戊巴比妥（5〇_6〇毫克/體重， i.p·)做深度麻醉並經心臟灌流—首先使用1〇〇毫升，含 0.1%肝素的0.05M磷酸緩衝的鹽液(pBS)，接著使用3〇〇_ 500毫升的4%多聚甲醛(pfa)，取出T9至L1節的脊髓， 1〇冷凍-保護於30%蔗糖溶液並於-70°C下的10.24。/。聚乙烯醇與4.26%聚乙二醇中冷凍。每節神經包含損傷位置加1〇毫米連至損傷位置的頭側與尾侧被埋在組織塊包埋培養基(Tissue Tek medium)内，在冷凍切片機上，沿縱向每隔2〇微米間隔作出一系列的 15切片，每二個切片以luxo1 fast blue對趙鞘質染色，將載玻片編碼，由不知處理方式的觀察者進行評估，各切片在光學顯微鏡下檢視脫髓鞘病變（未受lux〇1 fast blue染色）的程度。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製為測定脊髓的最大脫髓鞘面積，將整個的使用

Zeiss 20顯微鏡之切片圖像予以數位化，脫髓鞘病變的程度是由不知處理方式的檢視者，藉使用電腦化的Bi〇quant BQ-TCW98影像分析程式在損傷中心測定而得。數據分析係使用GB-Stat ppc 6.5.2.於麥金塔電腦上進行，組織的的分析結果是藉Kruskal-Wallis無參數變異量 -37- 本紙張尺度適0^1 ^:標準(CNS)A4規格⑵。X297公楚) 1325319 A7 B7 五、發明說明（36) 分析法(ANOVA)予以分析，事後比較(p〇st hoc c〇mparis〇ns) 則是使用Mann-Whitney U測試法做出。六組實驗群組(〇·3、1、或3毫克/公斤bw三者或4_Ap 0.6毫克/公斤或載劑對照組丨與2)的脫髓鞘程度被顯示於 5圖7，帶狀區代表壓扁中心的脫髓鞘範圍的像素之數目， (*叩<〇.〇〇1，*p<〇.〇5, Kruskai_Wallis 無參數變異量分析法 (ANOVA))，定量的結果顯示，得自經111>184或4·Αρ治療的動物對照於施用鹽水的對照組動物，具有明顯較高的具髓鞘質地帶，即，得自接受載劑注射的動物之脊髓，對照 10於經HP 184或4-AP處理的動物，具有明顯較大的脫髓鞠地帶。組織學的分析中顯示，HP 184(所有三種濃度)與4_Ap 兩者均有益於髓鞘質之影響，其與行為的試驗結果有—致性，在各組中，以經3毫克/公斤的HP 184處理之組群顯 15不最小的脫髓鞘病變，故，4-AP或HP 184似乎於脊髓損害後，一長階段後能提昇髓鞘質之再生，難以確信的，此數據早純地代表減少的損失髓鞘質之速率，由於在兩組對照經濟部智慧財產局員工消費合作社印製組中脫髓顆的程度無差，對照組i與對照組2分別是於實驗開始時與結束時進行評估。、貝 20 實例7 對大鼠的膀脱敏經靜脈内注射的致果此實驗證明在Fraseretal(2001)所整理的KC1模式下經靜脈内'主射HP 184的效果，Fraseral等人合併的硫酸鹽處 -38-

1325319 A7 B7 五、發明說明（37) 理法，經由破壞泌尿道傘狀細胞栅攔功能，與KC1的生理的尿濃度(500 mM)，使用帶有急性膀胱敏感症，經胺基甲酸乙酯麻醉的大鼠，經靜脈内注射HP 184的效果相比於僅用載劑者(n=4/組）進行累積的劑量_反應研究，連續的開 5放膀胱容積壓力檢查，其為在連續的灌注期間測定注入及排空膀胱容積壓力的檢查，用於測定藥物對膀胱過敏的影響，當膀耽為過敏時，在同樣的充填速率下，由於c_傳入的神經纖維(C-fiber afferent nerves)的敏感化而收縮變得更為頻繁，圖8说明經比較預施用下的過敏值相較於僅單獨 10使用載劑下的影響，有與劑量相關的減少膀胱收縮頻率，經反復測量後的變異數分析顯示，當單獨使用載劑時沒有效果，HP-184明顯隨劑量增加而使膀胱的收縮頻率減少 (P=0_0019)。 15 實例8 HP 184對小鼠產生一氧化氮(NO)的影響經濟部智慧財產局員工消費合作社印製注入LPS(3毫克/公斤，ip)之前30分鐘，小鼠被注射入 3〇毫克/公斤的HP 184(ip)，經注射入LPS後5小時，將小队犧牲，收集血蒙，以Griess分析測定其;£肖酸鹽值，每9_ 20 10隻小鼠組成一群，如圖9所示，HP抑制1^〇的產生，經單向ANOVA分析，發現僅LPS處理組與載劑處理組有明顯不同（pc.Ol)。實例9 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1325319 A7 五、發明說明 HP 184在神經病變性疼痛模式經單側壓縮L6神經而得慢性神經損傷的成年雄性 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 機械刺激對被傷。的爪的爪縮回閥值，賴法是藉應用校準過的飄Frey單絲去撫弄各後爪的腳底表面，^在被綁住爪中具5G%減少縮回閥值的動物始被應用於此研究，且隨意地分成6組：三組接受三種Ηρ 184的劑量3^ 與20毫克/公斤，經口服)，帛4組接受單一劑量的另種 MDL的化合物（10毫克/公斤，ip)，第5組接受抗顧藥 gabapentin(9〇毫克7公斤，第6組僅接受載劑，行為的測試係於施用gabapentin(90毫克/公斤，se)之後45分鐘，且於施用HP 184、MDL與載劑之後3小時進行，針對各隻動物，測定其被綁的爪與未被綁的爪間的縮回閥值的差異分數，將這些差異值進行ANOVA分析，以群組當作主要因素，結果被示於圖1〇,圖中顯示為第一次施用藥物前後的平均(+/-標準誤差）的左(被綁的）減去右(正常的）爪縮回閥值（急性狀況的研究)，統計分析結果透露，施用HP 184 20毫克/公斤使得L5結紮機械的感覺過敏有劑量-減弱效應（dose-response attenuation)而施用 gabapentin 90 毫克/公斤有感覺過敏的清楚之倒轉，分析是介於/其中反覆的測定 ANVOA，接著對群組X時間交互作用期間進行事後的比較(L SD)用於檢視事前相對事後之藥物縮回閥值。群組：F(5,43)=8.18, ρ<〇.〇〇ι 時間：F(l，43)=47.34，p<〇.〇〇i -40- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（2丨〇 X 297公釐） 1325319 A7 B7 五、發明說明（39) 群組 X 時間：F(5,43)=9.25, p<0.001 以載劑處理之動物，兩爪在機械的縮回閥值中有較大的差異。 5 參考資料

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Masterson JG and Myers M; US Patent No. 5,580,580 entitled 15 "治療神經的疾病的配方與其用途，'。

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Wurtman RJ and Buyukysal R; WO 89/09600 entitled "治療神經的疾病的方法與組成物··。 20 -51- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（2丨〇χ297公釐）

Claims

1325319

4.根據申請專利範圍第3項的醫藥組成物，其中的脫髓鞘病為多發性硬皮症。 5 5. 根據申請專利範圍第丨項的醫藥組成物，其中的脫髓勒病之病況為脊髓損傷。 6. 根據申請專利範圍第丨項的醫藥組成物，其中的脫髓鞘病之病況為創傷性腦損傷。 10 7.根據申請專利範圍第i 髓鞘病之病況為中風。 8·根據申請專利範圍第i 合物具有下之化學式項的醫藥組成物，其中的脫項的醫藥組成物，其中的化

9. 根據申請專利範圍f 8項㈣藥組成物，其中的脫 -53 - 1325319 六、申請專利範圍髓鞘病之病況為脊髓損傷。 10·根據申請專利範圍第8項的醫藥組成物，其中的脫髓鞘病之病況為創傷性腦損傷。 11.根據申請專利範圍第8項的醫藥組成物，其中的脫髓鞘病之病況為t風。 12’種中風復健的醫藥組成物，其包括有效治療量的根據申請專利範圍第1項的化合物以作為活性成分0 10 13.根據申請專利範圍第12項的醫藥組成物，其中的化合物具有下列化學式

14 15 包二的患者之鉀通道的醫藥組成物，其物作的根據申請專利範圍第1項的化合項的醫藥組成物，其中的化 -54 - 1325319 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

16.根據申請專利範圍第1項的醫藥組成物，其中的化合物具有下列化學式

n、h 5 17. 根據申請專利範圍第16項的醫藥組成物，其中的脫髓勒病之病況為脊髓損傷。 18. 根據申請專利範圍第16項的醫藥組成物，其中的脫趟稍病之病況為創傷性腦損傷。 19. 根據申請專利範圍第16項的醫藥組成物，其中的脫趙稍病之病況為中風。 -55 - 10 1325319 A8 B8 C8 D8

申請專利範圍 20. —種治療膀胱過敏的醫藥組成物，此方法包括有效治療量的根據申請專利範圍第1項的化合物作為活性成分。 5 21. 根據申請專利範圍第20項的醫藥組成物，其中的化合物具有下列化學式：

10 22. —種治療過度活化的膀胱的醫藥組成物，其包括有效治療量的根據申請專利範圍第1項的化合物作為活性成分。 23. 根據申請專利範圍第22項的醫藥組成物，其中的化合物具有下列化學式：

1325319 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 24. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受之鹽於製備供增進患有多發性硬化症病人的行走能 5 力之藥物的用途。

25. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受 10 之鹽於製備供增進患有多發性硬化症病人的行走能力之藥物的用途。

15 26. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受之鹽於製備供增進患有多發性硬化症病人的運動功 -57 - 1325319 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍能之藥物的用途。

N

5 27. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受之鹽於製備供增進患有多發性硬化症病人的運動功能之藥物的用途。

10 28. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受之鹽於製備供緩和因多發性硬化症所致步履不穩的症狀之藥物的用途。 -58 - 1325319 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍

29. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受之鹽於製備供緩和因多發性硬化症所致步履不穩的 5 症狀之藥物的用途。

訂

F 30. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受 10 之鹽於製備供緩和患有多發性硬化症病人的症狀之藥物的用途。

-59 - 1325319 4 A8 B8 C8 D8

申請專利範圍

31. —種治療有效量之具下式之化合物或其藥學可接受之鹽於製備供緩和患有多發性硬化症病人的症狀之藥物的用途。

N \ N- Ή F -60 -