KR20040014459A - 탈수초성 질병 또는 상태의 치료방법 - Google Patents

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Abstract

화학식 I의 N-(피리디닐)-1H-인돌-1-아민은 칼륨 및 나트륨 채널 둘다에 대한 차단 특성의 독특합 조합을 제공한다. 당해 화합물은 다발성 경화증, 척수 손상, 외상성 뇌손상 및 뇌졸중과 같은 탈수초성 질병 및 상태의 치료에 유용하다. 또한, 당해 화합물은 뇌졸중 재활, 방광 자극과 기능부전의 치료 및 신경병증 통증 및 케모카인-유도된 통증의 치료에도 유용하다.

Description

탈수초성 질병 또는 상태의 치료방법{Method of treating of demyelinating diseases or conditions}
발명의 배경
다발성 경화증(MS)은 중추신경계에 영향을 미치는 퇴행성 염증성 신경 질병으로서, 뉴론 플레이크 및 탈수초화(수초 상실)로 인한 손상된 뉴론 전도와 관련된다. 유사하게, 광범위한 탈수초화는 척수 손상 및 뇌졸중에서 흔히 보고되어 있다[참조문헌: Bunge et al., 1993; Blight and DeCrescito, 1986; Pendlebury et al., 2000].
유수 섬유에서의 활동전위(action potential) 전파의 생리학에 관한 기본적 조사는 탈수초화된 섬유에서의 전도 차단이 부분적으로는 수초가 상실된 영역내의 아미노피리딘-민감성 칼륨 채널의 출현으로 인한 것임을 제시하였다[참조: Bever 1996].
활동전위는 랑비에르(Ranvier) 결절에서 전압-민감성 나트륨 채널의 개방에 의해 생성되는 나트륨 전류로부터 초래되는 도약전도 과정에 의해 정상 유수 신경섬유를 따라서 전파된다. 따라서, 전기적 자극의 개시로서, 나트륨(Na+) 이온이 뉴론으로 도입되어, 이 뉴론이 보다 양으로 하전된다. 뉴론의 양성 성질이 임계 수준에 도달하면, "탈분극화"가 일어난다. 탈분극화는 이온의 양성 코어가 뉴론으로 유입되고 엑손을 따라서 신경 말단으로 유입되도록 한다. 뉴론이 스스로 "휴지기" 상태가 되기 위해서는 과량의 양전하가 소멸되어야 한다. 이는 칼륨 채널을 통한 칼륨 이온(이후에는 "K+")의 유출을 통해 이루어진다. 수초가 파괴된 경우에는 탈분극화 동안 개방되는 전압-민감성 칼륨 채널이 축삭초에 나타난다. 나트륨 전하와 반대로 유동하는 칼륨 전류는 활동전위 진폭 및 지속시간을 감소시켜 원위 유효전류 밀도를 감소시킴으로써 전도 실패를 야기한다. 이러한 전도 결손은 근육 약화를 포함하는 불능성 증상과 관련된다. 칼륨 채널을 통한 K+의 유출을 차단함으로써 뉴론은 보다 장시간 동안 탈분극화되고 보다 쉽게 재자극된다. 따라서, 칼륨 채널 차단제가 MS, 외상성 뇌손상(이후에는 "TBI") 및 척수 손상(이후에는 "SCI")과 같은 활동전위 전달을 손상시키는 질병 및 상태의 치료에서 유용할 것으로 사료된다.
4-아미노 피리딘(이후에는 "4-AP")과 같은 칼륨 채널 차단제는 탈수초화된 섬유에서의 활동전위 지속시간 및 진폭을 증가시키고, 시험관내에서 활동전위 전파를 개선시키며[참조: Bostock et al, 1978; 1981; Targ and Kocsis, 1985; 1986; Shi and Blight, 1997], 신경전달물질 방출을 촉진시키고[참조: Bostock et al, 1981; Hish and Quandt, 1993; Sherratt et al, 1980], 근수축성을 강화시킨다[참조: Agoston et al, 1982; Savage et al, 1985]. 이러한 관찰은 4-AP와 같은 칼륨 채널 차단제가 MS 환자에서 탈수초화된 섬유내의 전도를 회복시킬 수 있음을 제시하였다. 후속적 임상 시험은 아미노피리딘 처리가 일부 MS 환자에서 증상을 개선시킬 수 있다는 제안을 추가로 뒷받침한다[참조: Jones et al 1983; Stefoski et al, 1987; Davis et al, 1990; van Diemen et al, 1992; Bever et al, 1994; Schwid et al, 1997].
또한, 4-AP는 SCI를 포함하는 신경학적 상태, SCI 환자에서 만성 통증 및 경직의 감소, 알쯔하이머 질병, 소아마비후 증후군, 중증근육무력증, 헌팅턴 질병, 노인성 기억력 장애, 기억력 또는 인지력에 영향을 미치는 외상후, 뇌졸중후 또는 독성후 증후군 및 자율신경기능장애의 치료에서 효과적인 것으로 기술된 바 있다[참조: Wurtman RJ and Buyukuysal R, 1989; Hansebout RR and Blight A, 1996; Hansebout RR and Blight A 1994]. 일반적 환자 집단에서 4-AP의 사용에 관한 안정성 염려[참조: Multiple Sclerosis, Cognos Study #51, Decisions Resources, October, 1999; pp77-8]에도 불구하고 장기간 척수 손상 환자에서의 팜프리딘-SR의 사용에 대한 임상 연구가 시작되었다[참조: Potter et al, 1998a, b]. 몇몇 연구는 1회 투여량의 4-AP가 손상된지 1년 이상 후에 투여된 경우 SCI 환자에서 일부 기능을 회복시킬 수 있음을 제시하였다[참조: Potter et al, 1998a,b; Qiao et al, 1997; Hayes et al, 1993; 1994]. 만성 투여 후의 긍정적 효과도 보고되었다. 임상적으로 중요한 기능 개선은 2년 이상 SCI를 앓은 환자에서 30mg/kg 4-AP를 3개월 동안 매일 투여한 후 환자 16명 중 16명에서 관찰되었다. 이미 완전히 손상된 것으로 분류된 몇몇 환자는 불완전한 손상 수준을 갖는 것으로 재분류되었다[참조: Segal et al, 1999]. 모든 환자는 4-AP(30mg/일 또는 약 0.5mg/kg)로 3개월 동안매일 경구 치료한 후 적어도 일부 유형의 신경 또는 폐 기능이 어느 정도 개선된 것으로 나타났다.
앞서 언급한 바와 같이, 4-AP는 칼륨 채널을 차단함으로써 활동전위를 효과적으로 연장시킨다. 불행하게도, 이와 같이 칼륨 채널 차단제가 활동전위 전달을 손상시키는 질병 및 상태과 관련된 증상을 개선시킬 수 있는 기작은 간질 유사 활성을 초래할 수도 있다. 게다가, 4-AP는 동물 및 사람에서 인정된 경련제이다. 따라서, MS, TBI 및 SCI용 치료제로서의 4-AP의 유용성은 이의 촉진-경련 경향 및 기타 바람직하지 않은 부작용으로 인해 약화된다. 불안, 혼란 및 전신의 강직성-간대 발작은 0.8mg/kg보다 높은 투여량에서 보고되었다[참조문헌: Ball et al, 1979; Bever et al, 1994]. 문헌[참조: Van Diemen et al(1993)]에는 (원활추종운동의 개선으로 정의되는) MS환자에서의 개선의 정도가 4-AP 혈청 수준(경구 투여후 현저한 개선에 필수적인 33 내지 75ng/㎖)과 상당히 관련됨이 보고되어 있다. 그러나, 동일한 투여량에서 부작용(감각이상/감각장애, 현기증/어지러움 및 심지어 보행 불안정)이 관찰되었다. 또 다른 사람 연구에서, 베버 등(Bever et al(1994))은 104ng/㎖의 혈청 수준에서의 대발작을 보고하였다. 상기 조사자 그룹은 둘다 보다 높은 투여량과 혈청수준이 보다 저투여량의 4-AP에 반응하는 MS 환자에서 더욱 개선될 수 있음을 제시하였다. 따라서, 4-AP의 경우 효능의 강도는 투여량 및 부작용 제한적이다.
보다 높은 4-AP 혈청 수준과 관련된 부작용에 관한 염려는 서방출 제형(팜프리딘-SR)의 개발을 촉구하였다[참조: Masterson JG and Myer M, 1994; 1996a;1996b]. 팜프리딘-SR은 현재 MS에 대한 2기 임상 연구 단계에 있다. 팜프리딘-SR에 대한 선행 임상 연구중에 있는 환자는 각종 기능의 개선을 나타내었다. 개인에 따라 이러한 개선은 강화된 방광, 장 및 성 기능, 증가된 운동 및 감각의 용이함, 및 감소된 근육 경직, 피로 및 만성 통증을 포함하였다.
4-AP와 관련된 바람직하지 않은 부작용을 해소시키고자 하는 또 다른 접근법은 4-AP와 전압 의존적 나트륨 채널 차단제의 동시투여와 관련된다. 나트륨(Na+) 채널 차단제는 Na+이온의 유입을 차단하며 탈분극화에 대한 뉴론의 감수성을 감소시킨다. 이는 뉴론의 흥분성을 효과적으로 감소시킨다. 게다가, 전압-의존적 나트륨 채널 차단제와 4-AP의 동시투여는 마우스에서 4-AP-유도된 경련을 방지하는 것으로 보고된 바 있다[참조: Yamaguchi and Rogawski, 1992]. 4-AP는 나트륨 채널 차단 특성을 갖지 않는다.
본원에서 청구하는 방법에서 사용되는 화합물은 미국 특허 제4,970,218호에 기재된 방법을 통해 합성할 수 있다. 본원에서 언급되는 모든 특허 및 기타 문헌은 본원에서 참조로 인용된다.
본 발명의 범주내에 있는 특정 화합물은 시험관내 및 생체내에서 나트륨 채널 차단을 유도할 수 있는 것으로 공지되어 있다[참조: Tang et al, 1995; 1998; Tang and Kongsamut, 1996]. 전압 의존적 나트륨 채널 차단제는 세포의 탈분극화 상태 동안 보다 효과적으로 작용한다. 이들 화합물은 정상적 뉴론 신호전달에는 거의 효과를 미치지 않거나 전혀 효과를 미치지 않지만, 발작, 두부 외상 또는 허혈 동안에는 나트륨 채널이 차단되도록 한다. 대부분의 이러한 제제들은 상기 병리 상태의 동물 모델에서 대뇌보호적이다[참조: Madge et al, 1998].
이론으로 국한됨이 없이, 칼륨 채널 차단제는 또한 관절염 통증을 포함하여 신경병증 통증 및 사이토킨 관련 통증 치료용의 실용적 제제이다. 문헌[참조: Sweitzer et al(1999)]에는 미세아교 활성화 및 사이토킨 방출이 말초 염증 또는 말초 신경 손상 후 통각과민과 관련될 수 있는 것으로 제시되어 있다. 4-AP와 같은 칼륨 채널 차단제는 랫트, 마우스 및 사람 미세 아교의 활성화를 차단하는 것으로 보고되었다[참조: Eder, 1998]. 문헌[참조: Pyo et al (1997)]에는 4-AP가 활성화된 미세아교로부터의 아질산염 방출을 감소시킬 수 있는 것으로 보고되어 있으며 이는 통증 성향이 이러한 기작을 통해 조절될 수 있음을 나타낸다. 또한, 4-AP는 쥐 대식세포로부터의 지질다당질(LPS)-유도된 NO 생산을 감소시키는 것으로 보고되었다[참조: Lowry et al, 1998]. LPS의 마우스에의 투여는 상이한 작용 기작을 갖는 수개의 상이한 제제의 항관절염 효능을 동정하기 위한 모델 시스템으로서도 사용되어 왔다[참조: Mcllay et al, 2001]. 신경병증 통증을 조사하기 위해 좌골 신경 또는 L5 또는 L6 척추 신경의 수축과 관련된 일부 실험 모델이 개발되었다[참조: Bennett and Xie, 1998; Seltzer et al, 1990; Kim and Chung, 1992].
발명의 요약
본 발명에 이르러, 화학식 I의 화합물이 칼륨 채널 차단 특성을 지닌다는 것이 발견되었다. 칼륨 및 나트륨 채널 둘다에 대한 차단 특성의 독특한 조합은 당해 화합물이 탈수초성 질병 또는 상태 치료용 치료제로서 유용함을 의미한다. 예를 들어, 당해 화합물은 MS, SCI, TBI(외상성 뇌손상) 및 뇌졸중을 치료하는데 유용하다. 당해 화합물은 4-AP가 칼륨 채널만을 차단하여 불안, 혼란 및 발작의 부작용을 초래할 수 있기 때문에 4-AP보다 안정한 치료제를 제공한다. 화학식 I의 화합물은 뇌졸증 재활, 방광 자극 및 기능부전의 치료, 내장의 케모카인-유도된 통증(관절염 통증을 포함) 및 신경병증 통증의 치료에도 유용하다.
발명의 상세한 설명
하기 화학식 I의 화합물은 칼륨 및 나트륨 채널 둘다에 대한 차단 특성의 독특한 조합을 제공한다. 당해 화합물은 다발성 경화증, 척수 손상, 외상성 뇌손상 및 뇌졸중과 같은 탈수초성 질병 및 상태의 치료에 유용하다. 당해 화합물은 또한 뇌졸증 재활, 방광 자극 및 기능부전의 치료, 내장의 케모카인-유도된 통증(관절염 통증을 포함) 및 신경병증 통증의 치료에도 유용하다.
상기 화학식에서,
m은 0, 1 또는 2이고,
n은 0, 1 또는 2이며,
p는 0 또는 1이고,
R은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸, C1-C6알킬, C1-C6알콕시, 벤질옥시, 하이드록시, 니트로 또는 아미노이고,
R1은 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알케닐, C1-C6알카노일, 할로겐, 시아노, -C(O)C1-C6알킬, -C1-C6알킬렌CN 또는 -C1-C6알킬렌NR'R"[여기서, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬, -C1-C6알킬렌OC(O)C1-C6알킬 또는 -CH(OH)R4(여기서, R4는 수소 또는 C1-C6알킬이다)이다]이며,
R2는 수소, 또는 할로겐, 하이드록시 또는 벤질옥시로 임의로 치환된 C1-C6알킬, C1-C6알케닐, C1-C6알키닐, -CO2C1-C6알킬 또는 -R5-NR'R"(여기서, R5는 C1-C6알킬렌, C1-C6알케닐렌 또는 C1-C6알키닐렌이고, R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이거나, 또는 그룹 -NR'R"는 전체로서 1-피롤리디닐이다)이고,
R3은 수소, 니트로, 아미노, 할로겐, C1-C6알콕시, 하이드록시 또는 C1-C6알킬이다.
정의:
(1) 탈수초성 질병; 본원에서 사용되는 바와 같이, 탈수초성 질병은 수초가1차 표적인 질병으로서 정의된다. 이는 후천적 질병 및 유전적 대사 장애의 두 주요 그룹으로 분류된다.
다발성 경화증(MS)은 후천적 질병의 범주에 해당된다. MS는 통상적으로 생의 20년 내지 50년 사이에 그 징후가 나타난다. MS는 중추신경계의 백색질을 침범한다. 이의 통상적 징후(모든 경우의 90%)에 있어, 이는 경감 기간이 시간에 따라 점점 단축되면서 재발기/완화기가 교대로 나타남을 특징으로 한다. 이의 증상으로는 경직성 하반신마비, 불안정한 보행, 복시증(diplopia) 및 실금의 임의 조합이 포함된다.
유전적 대사 장애의 범주로는 다음의 식별된 8가지 백질이영양증이 포함된다: 이염색성백질이영양증, 레프섬(Refsum) 질병, 부신백질이영양증, 크래브(Krabbe) 질병, 페닐케톤뇨증, 카나반(Canavan) 질병, 펠리제우스-멜츠바허(Pelizaeus-Melzbacher) 질병 및 알렉산더(Alexander) 질병. 처음 6가지는 축적 장애이다. 효소의 결여 또는 기능장애는 독성 화학 물질의 축적을 유발한다. 한편, 펠리제우스-멜츠바허 질병 및 알렉산더 질병의 병인은 공지되어 있지 않다.
보통 유아기 또는 초기 아동기에 그 징후가 나타나는 경향이 있는 유전적 탈수초성 장애의 임상 경과는 비참하다. 이미 정상인 아동은 시각, 청각, 발성 및 보행의 빠른 발달이 상실된다. 예후는 수년 이내의 사망이다.
(2) 탈수초성 상태- 본원에서 정의하는 바와 같이, 탈수초성 상태는 불완전 수초화를 초래하는 상태이다. 이러한 탈수초성 상태로는 척수 손상, 외상성 뇌손상 및 뇌졸중이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
(3) 척수 손상(SCI)- 본원에서 사용되는 바와 같이, SCI는 운동능 또는 감정과 같은 기능의 상실을 초래하는 척수의 손상으로서 정의된다.
(4) 외상성 뇌손상(TBI)- 본원에서 사용되는 바와 같이, 외상성 뇌손상은 뇌에 손상을 초래하는 손상으로서 정의된다. 두부 손상은 다음의 두가지 방식 중 하나로서 발생할 수 있다:
-폐쇄형 두부 손상은 자동차 유리에 충돌하였을 때 또는 둔탁한 물체로 맞았을 때와 같이 운동중인 두부가 갑자기 정지하여 뇌가 두개 내부의 골 표면에 충돌하였을 때 발생한다. 폐쇄형 두부 손상은 또한 사람이 채찍질을 당할 때와 같이 뇌가 앞뒤로 빠르게 움직일 경우 두부에 대한 직접적 외상이 없이 발생할 수 있다.
- 관통형 두부 손상은 총알과 같은 빠르게 움직이는 물체가 두개를 관통할 경우 발생한다.
폐쇄형 및 관통형 두부 손상은 둘다 뇌에 대한 국소적이고 광범위하거나 확산된 손상을 야기할 수 있다. 그 결과인 불능성은 기억력 상실 및 감정 장애, 마비를 포함하는 운동 곤란 및 오감의 손상을 포함할 수 있다. 또한, 많은 환자가 이들의 손상으로 인해 사망한다.
오늘날 치료는 상해 후에 24시간 이내에 가능한 많은 손상을 포함시키는 것에 촛점을 맞추고 있다. 누군가 뇌에 손상이 발생한 경우, 결과적인 참상은 초기 외상 이상으로 확장된다. "2차 손상"의 캐스케이드가 뒤이어 일어난다. 뇌 자체의 면역 세포가 종창 및 체액 축적을 유발시키고 손상된 신경 세포가 글루타메이트로 지칭되는 신경전달물질을 방출시키기 시작하여, 이 신경전달물질이 곧 주변 뉴론에 독성인 수준까지 축적될 수 있다.
(5) 뇌졸중 재활- 본원에서 사용되는 바와 같이, 뇌졸중 재활은 뇌졸중으로 인해 상실된 기능을 회복시키는 시술로서 정의된다.
(6) 뇌졸중- 본원에서 정의되는 바와 같이, 뇌줄중은 응혈이 혈관 또는 동맥을 차단했을 경우 또는 혈관이 막혀 뇌 영역으로 향하는 혈류가 차단될 경우 발생한다. 뇌줄중이 발생하면, 이는 인접 영역 내의 뇌 세포를 치사시킨다. 의사들은 이러한 사멸 세포의 영역을 경색이라 지칭하고 있다. 이들 세포는 통상적으로 뇌졸중 시작 후 수분 내지 수시간 이내에 사멸한다. 뇌졸중에 있어, 자기화 전달 비(magnetization transfer ratio; MTR)와 같은 탈수초화의 척도는 운동 결핍과 상호관련되는 축삭 손상과 밀접하게 관련된다[참조: Pendlebury et al, 2000].
(7) 알킬 또는 알킬렌- 달리 언급하거나 명시하지 않는 한, "알킬" 또는 "알킬렌"이란 용어는 알킬내 탄소량으로 명시되는 당해 화학식에 적절한 측쇄 또는 직쇄 알킬 또는 알킬렌 그룹을 의미하며, 예를 들어, C1-C6알킬은 경우에 따라 1개 내지 6개의 탄소 측쇄 또는 직쇄 알킬 또는 알킬렌을 의미하거나, 또는 C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C2-3, C2-4, C2-5, C2-C6, C3-C4, C3-5, C3-6, C4-5, C4-6, C5-6 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의 범위일 수 있다.
(8) C1-C6알콕시- 달리 언급하거나 명시하지 않는 한, C1-C6알콕시란 용어는 탄소수 1 내지 6의 직쇄 또는 측쇄 알콕시 그룹을 의미한다. 이의 예로는 메톡시,에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소-부톡시, 2급-부톡시, t-부톡시 및 직쇄 및 측쇄 펜톡시 및 헥속시가 포함된다.
(9) 할로겐- 달리 언급하거나 명시하지 않는 한, 할로겐이란 용어는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.
(10) C1-C6알칸산- 달리 언급하거나 명시하지 않는 한, C1-C6알칸산은 카복실 그룹이 수소 또는 탄소수 1 내지 5의 알킬 그룹에 결합된 카복실산을 의미한다.
(11) C1-C6알카노일- C1-C6알카노일이란 용어는 C1-C6알칸산의 카복실 그룹으로부터 하이드록시 그룹을 제거함으로써 수득된 그룹을 의미하므로, 예를 들어, 포르밀 및 아세틸 등을 포함한다. 알카노일, 알케노일 및 알키노일이란 용어는 각각 알칸산, 알켄산 및 알킨산의 카복실 그룹으로부터 하이드록시 그룹을 제거함으로써 수득되는 그룹을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 리놀레산으로부터 유도된 리놀레일 그룹은 상기 정의한 바와 같은 알케노일이란 용어의 한 예이다.
(12) "약제학적으로 허용되는 염"은 의도한 용도를 위해 환자의 치료와 상용성인 산 부가염 또는 염기성 부가염을 의미한다.
(13) "약제학적으로 허용되는 산 부가염"은 화학식 I로 표현되는 기재 화합물 또는 이의 임의 중간체의 임의 비독성 유기 또는 무기 산 부가염이다. 적합한 염을 형성하는 예시적 무기 산으로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산 및 산 금속 염(예: 오르토인산 일수소 나트륨 및 황산수소칼륨)이 포함된다. 적합한 염을 형성하는 예시적 유기 산으로는 모노-, 디- 및 트리-카복실산이 포함된다. 이러한산의 예로는 예를 들어, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 2-페녹시벤조산, p-톨루엔설폰산 및 설폰산(예: 메탄설폰산 및 2-하이드록시에탄설폰산)이 있다. 일산 또는 이산 염이 형성될 수 있으며, 이러한 염은 수화 또는 용매화된 형태이거나 실질적으로 무수 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 이러한 화합물의 산 무가염은 물 및 각종 친수성 유기 용매 속에서 보다 가용성이며, 이의 유리 염기 형태에 비해서 일반적으로 보다 높은 융점을 나타낸다.
(14) "약제학적으로 허용되는 염기성 부가염"은 화학식 I의 화합물 또는 이의 임의 중간체의 비독성 무기 또는 유기 염기성 부가염을 의미한다. 예로는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화마그네슘 또는 수산화바륨과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물이 있다. 적절한 염의 선택 기준은 당해 분야의 숙련가에게 공지될 것이다.
(15) "입체이성체"는 공간상의 원자 배향만이 상이한 개개 분자의 모든 이성체에 대한 일반적 용어이다. 이는 거울상 이성체(에난티오머), 기하(시스/트랜스) 이성체 및 서로의 거울상이 아닌 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 화합물의 이성체(부분입체이성체)가 포함된다.
(16) "환자"는 예를 들어, 랫트, 마우스, 개, 고양이, 기니아 피그 및 영장류(예: 사람)와 같은 온혈 동물을 의미한다.
(17) "치료하다 또는 "치료"는 징후를 완화시키거나 일시적 또는 영구적으로징후의 원인을 제거하거나 명시한 장애 또는 상태의 증상의 출현을 예방 또는 둔화시킴을 의미한다.
(18) "치료학적 유효량"은 명시한 장애, 질병 또는 상태를 치료하기에 유효한 화합물의 양을 의미한다.
(19) "약제학적으로 허용되는 담체"는 비독성 용매, 분산제, 부형제, 보조제이거나 약제학적 조성물, 즉 환자에게 투여할 수 있는 투여 형태을 가능케 하기 위해 활성 성분과 혼합되는 기타 물질이다.
(20) "신경병증 통증"은 신경계의 손상으로부터 초래되는 통증을 의미한다. 신경 손상은 식별되거나 식별되지 않을 수 있다. 신경병증 통증의 예로는 포진후 신경통, 당뇨병성 신경장애 통증, 환지통 및 중추의 뇌졸중후 통증이 포함된다.
(21) "방광 자극 및 기능부전"은 간질성 방광염 및 과민성 방광과 같은 상태를 의미한다. 과민성 방광은 빈뇨, 급뇨 및 절박성 요실금을 포함하는 증상을 특징으로 하는 개별적 의학 상태이다. 과민성 방광은 국소 병리학 또는 대사-관련 병인의 부재하에 배뇨근의 과반응으로 인한 자발적 방광 수축에 기인할 수 있는 증상으로 진단한다. 간질성 방광염(IC)은 흔히 진단되지 않는 방광 벽의 만성 염증 상태이다.
화학식 I의 화합물은 급성 척수 손상 및 만성 척수 손상의 속도 및 정도를 효과적으로 개선시킬 수 있다. 당해 화합물은 생체내에서 용도 의존적 나트륨 채널 차단 및 전압 의존적 칼륨 채널 차단과 부합하는 특성을 지닌다. 당해 화합물은 4-AP보다 안정한 치료를 제공한다. 바람직한 화합물은 R이 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸 또는 C1-C6알킬이고, R1이 수소 또는 C1-C6알킬이며, R2가 수소 또는 C1-C6알킬이고, R3이 수소, C1-C6알킬 또는 할로겐이며, p가 0인 화합물이다. 추가로 바람직한 화합물은 아미노 그룹이 피리딘 그룹의 4-위치에 결합된 화합물이다.
하기 화학식 II의 화합물(본원에서 HP 184 또는 N-(3-플루오로-4-피리디닐)-N-프로필-3-메틸-1H-인돌-1-아민으로 또한 공지됨) 및 하기 화학식 III의 화합물(본원에서 "8183"으로 또한 공지됨)이 보다 특히 바람직하다.
HP 184는 랫트에서 30mg/kg HP로 복강내 투여한지 1시간 후에 마이크로몰 뇌 농도에서 매우 잘 허용된다[참조: Smith et al, 1996].
용도 의존적 나트륨 채널 차단 및 전압-의존적 칼륨 채널 차단의 독특한 조합은 또한 카르바마제핀 및 페니토인과 같은 "순수한" 나트륨 채널 차단제로부터본 발명의 화합물을 구별짓는다. 이들 제제는 MS의 "양성" 증상(강직성 발작 통증 및 감각장애)를 경감시키는데 성공적으로 사용된 바 있다. 그러나, 이들 제제는 음성 증상(마비 및 감각저하)을 악화시킨다[참조: Sakurai and Kanazawa, 1999]. 본 발명의 화합물은 이들이 칼륨 채널을 차단한다는 사실에서 볼때 신경 기능을 증강시킨다. 이는 기능 회복에 도움이 된다. 현재, 나트륨 채널 차단제는 통증성 증상의 치료에서 및/또는 신경보호제로서 유용한 것으로 사료된다. 그러나, 나트륨 채널 차단제는 재활 성과를 증가시키지 않는 것으로 예상된다.
상기한 상태 또는 장애를 앓는 환자를 치료할 경우, 화학식 I의 화합물은 경구, 설하, 협측, 피하, 근육내, 정맥내, 경피, 비내, 직장내 및 국소 투여 등을 포함하여 당해 화합물이 치료학적 유효량에서 생이용가능하도록 하는 모든 형태 또는 방식으로 투여할 수 있다. 제형 제조 분야의 숙련가라면 치료하고자 하는 상태 또는 질병, 질병의 단계, 환자의 상태 및 기타 관련 상황에 대해 선택한 화합물의 특정한 특징에 따라서 적절한 투여 형태 및 투여 방식을 결정할 수 있다[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences 18th Edition, Mack Publishing Co. (1990); 이는 본원에서 참조로 인용된다].
화학식 I의 화합물은 단독으로 또는 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된 약제학적 조성물 형태로 투여할 수 있으며, 약제학적 조성물의 비율 및 성질은 선택한 화합물의 가용화도 및 화학적 특성, 선택한 투여 경로, 표준 약제학적 관행 및 기타 관련 기준에 의해 결정한다.
본 발명의 화합물은 예를 들어, 정제, 트로키제, 캡슐제, 엘릭서제, 좌제,액제, 시럽제, 웨이퍼 및 추잉검 등의 형태로 경구 투여할 수 있으며, 결합제(예: 미정질 셀룰로즈, 트라가칸트 고무 또는 젤라틴), 부형제(예: 전분 또는 락토즈), 붕해제(예: 알긴산, 프리모겔 및 옥수수 전분 등), 윤활제(예: 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로텍스), 활주제(예: 콜로이드성 이산화규소)와 같은 보조제 중 하나 이상을 함유할 수 있으며, 감미제(예: 슈크로즈 또는 사카린) 또는 풍미제(예: 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 풍미)가 첨가될 수 있다. 투여 단위 형태가 캡슐인 경우, 상기 유형의 물질 이외에도, 액상 담체(예: 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방산)를 함유할 수 있다. 다른 투여 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 개질시키는 기타 다양한 물질, 예를 들어, 피복물을 함유할 수 있다. 따라서, 정제 또는 환제는 당, 쉘락 또는 기타 장용 피복제로 피복시킬 수 있다. 시럽제는 본 화합물 이외에 감미제로서의 슈크로제 및 특정 보존제, 염료 및 착색제 및 풍미를 함유할 수 있다.
본 발명의 화학식 I의 화합물은 국소 투여될 수도 있으며, 이렇게 투여될 경우에 담체로는 적합하게는 용액, 연고 또는 겔 기재가 포함될 수 있다. 상기 기재로는 예를 들어, 하나 이상의 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍, 광유, 희석제(예: 물 및 알콜) 및 유화제 및 안정화제가 포함될 수 있다.
또한, 액제 또는 현탁제로는 멸균 희석제(예: 주사용수, 식염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매), 항균제(예: 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤), 항산화제(예: 아스코르브산 또는 중아황산나트륨), 킬레이트제(예: 에틸렌 디아민테트라아세트산), 완충제(예: 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트) 및 삼투압 조절제(예: 염화나트륨 또는 덱스트로즈)와 같은 보조제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 비경구 제제는 앰풀, 1회용 주사기 또는 다회 투여량 바이알 내에 충전시킬 수 있다.
본 발명의 고친지성 에스테르, 아미드 및 카바메이트는 데포우(depot) 제제로서 제형화되고 투여할 경우, 예를 들어, 적절하게 선택한 약제학적으로 허용되는 오일속에서 주사될 경우 수일 동안또는 약 1주 내지 4주 동안 포유동물내에서 서방출될 수 있다. 바람직한 오일은 참기름, 면실유, 옥수수유, 코코넛유, 대두유 및 올리브유 등과 같은 식물 기원의 것이거나 지방산과 다작용성 알콜의 합성 에스테르, 예를 들어, 글리세롤 또는 프로필렌글리콜이다.
본 발명의 데포우 조성물은 본 발명의 고친지성 에스테르, 아미드 또는 카바메이트를 멸균 조건하에 약제학적으로 허용되는 오일 속에 용해시켜 제조한다. 상기 오일은 목적하는 시간에 걸쳐 활성 성분의 방출이 수득되도록 선택한다. 적절한 오일은 당해 분야의 숙련가가 과도한 실험 없이 선행 기술을 참고하여 쉽게 결정할 수 있다.
화학식 I의 화합물이 치료학적으로 작용하는 능력을 나타내는 투여량 범위는 치료될 특정 질병 또는 상태 및 이의 중증도, 환자, 제형, 환자가 앓고 있는 기타 기본적 질병 상태 및 환자에게 동시에 투여될 기타 의약에 따라 다양할 수 있다. 일반적으로, 화학식 I의 화합물은 약 0.001mg/환자 체중 kg/일 내지 약 100mg/환자 체중 kg/일의 투여량에서 치료 활성을 나타낼 수 있다.
하기 실시예는 단지 설명을 목적으로 하며 본 발명의 범주를 어떠한 방식으로도 제한하지 않는다.
실시예 1
전압-의존적 나트륨 채널 차단에 부합하는 생체내 증거
방법: 본 실험 과정은 문헌[참조: Bachaβet al (1992)]의 방법에 기초한다. 체중이 35 내지 40g인 수컷 CD-1 마우스를 클로랄 수화물(400mg/kg)로 마취시킨다. 수술 현미경하에, 좌측 안와로부터 2mm 아래의 피부를 수직으로 3mm 절개한다. 측두근을 편향시키고 소개두술(small craniotomy)를 수행하여 경뇌막을 노출시킨다. 경뇌막을 절개하고 편향시키고, 우측 중경동맥의 원위부를 노출시킨다. 상기 동맥을 미세 겸자가 장착된 이극 전기응고기(bipolar electrocoagulation)를 사용하여 주 분기점의 상류쪽에서 폐색시킨다. 24시간 후 경색 용적을 2% 트리페닐테트라졸륨 클로라이드 용액을 사용하여 측정한다. 본 실험 패러다임에서, HP 184는 절식시키지 않은 마우스(그룹당 10마리)에게 폐색 1시간 전에 투여한다. 경색 용적 감소는 1% 아세트산, 비히클로 처리된 마우스에 대한 비교에 기초한다. 결과는 하기 표 1에 제시한다.
마우스 pMCAO 뇌졸중 모델에서 HP 184의 신경보호 활성
투여량(mg/kg, 경구투여) 시간(분) 경색 용적 감소%평균 표준오차
1 -60 21±3
10 -60 32±11*
10 -60 40±2.5*
*=p<0.05;**=p<0.01
마우스 영구 중경동맥 폐색 모델(pMCAO)에서 관찰된 신경보호는 상기 투여량 및 시간에서 생체내 전압-의존적 나트륨 채널 차단과 부합한다.
실시예 2
랫트에서 광혈전성(photothrombotic) 대뇌 병소 후 부종에 미치는 HP 184의 효과
원리/목적:
혈전색전성 뇌졸중은 서방 국가에서 세번째 사망 원인이다. 이는 뇌순환내에서 생성되거나, 심장 또는 대혈관에서 형성되어 뇌순환으로 운반되는 응혈 또는 붕괴 혈전에 의해 운반된다. 이어서 혈류가 차단되고, 조직의 부종, 괴사 및 아폽토시스(apoptosis)와 함께 허혈성 병소가 발생한다. 부종은 뇌를 압박하여 허혈 및 또한 세포 용해와 기계적 손상을 촉진한다. 통합적 Na+/K+채널 차단제인 HP 184에 의한 처리를 이러한 대뇌 부종에 미치는 이의 효과에 대해서 연구한다.
방법:
수컷 슈프라그 다울리(Sprague Dawley) 랫트(체중 180 내지 200g)를 클로랄 수화물(400mg/kg 복강내)로 마취시키고 정위장치내에 놓는다. 피부를 개방시켜 두개골을 드러내고 냉광(Bioblock 150W)을 인자정(lambda) 전방의 좌측 두개골과 접촉되게 놓는다. 벵갈 로즈 염료(10mg/kg, 식염수중 정맥내)를 정맥내 투여하고, 즉시 두개골에 빛을 조사하기 시작하여 5분 동안 지속한다. 이어서 두개골 위의 피부를 봉합하고 동물을 케이지로 복귀시킨다. 광혈전성 병소 24시간 후 동물에게 물중 1% 트윈으로 보충한 HP 184를 5㎖/kg의 용적으로 0, 10 또는 20mg/체중 kg에서 정맥내 경로를 통해 투여한다. 1시간 후, 동물을 단두하여 치사시키고 뇌를 꺼낸다(프로토콜에 대한 부록 참조). 6mm 직경 코르크 보러(cork borer)를 사용하여 주 샘플을 병소 부위에서 취하고 이 병소의 반대편에서도 취한다. 함수량을 조직의 습식 중량/조직의 건식 중량으로 측정하고, 부종을 각 랫트에 대한 반대쪽 반구로부터의 샘플과 비교하여 병소화된 샘플에 대한 과량 수분% 으로서 표현한다.
결과-하기 표 2에 제시함.
병소 후 24시간째에 처리 n 병소 후 25시간째의 부종(과량 수분% )
비히클 26 4.10±0.12
10mg/kg(정맥내)에서 HP 184 12 3.61±0.23ns
20mg/kg(정맥내)에서 HP 184 13 3.20±0.27**
통계분석: ANOVA와 터키-크레머(Tukey-Kramer) **=p<0.001
HP 184는 광혈전성 병소 후 25시간째에 20mg/kg로 정맥내 투여 후에 우측 대뇌 피질에서의 부종의 유의적(22%) 감소를 입증한다.
실시예 3
랫트에서 일시적 국소 대뇌 허혈 후 병소 크기 및 신경 기능에 미치는 HP 184의 효과
원리/목적: 본 연구에서는 HP 184를 랫트의 일시적 국소 대뇌 허혈의 모델에서 허혈 개시 후 1시간째에 투여한다. 측정하는 파라메터는 병소 크기 및 신경 기능이다.
방법:
체중이 약 220 내지 240g인 수컷 슈프라그 다울리 랫트[lffa Credo, France]를 산화질소-산소 혼합물(70:30)중의 할로탄(1.4%)으로 마취시킨다. 두 총경동맥(CCA)을 분리시킨다. 측두엽 개두술을 통해 노출시킨 좌측 중경동맥(MCA)를 마이크로클립으로 폐색시키고 동시에 CCA를 1시간 동안 폐색시킨다. 체온 및 뇌온을 둘다 정상 체온에서 유지시킨다. 수술 후 동물을 24 내지 26℃로 가온된 실내 홈 케이지로 복귀시킨다.
(주사가능한 멸균수중)1% 트윈속에 용해시킨 HP 184를 허혈 개시후 1시간째에 10 내지 20mg/kg(정맥내)로 투여하고, 동일한 프로토콜에 따라서 대조 랫트에게 비히클을 투여한다. 허혈 후 24시간째에, 9 포인트 등급화 스케일을 사용하여 신경 기능을 맹목적으로 측정한다.
신경 기능용으로 사용된 등급 스케일
항목 정상 스코어 결핍
발딛기 반응다리 매달기 좌측 앞발좌측시력 111 000
파악 반사좌측 앞발좌측 11 00
두위 반사기울어진 머리 좌측우측 11 00
비정상적 자세흉부 비틀림좌측 앞다리 굽힘 부재11 존재00
총 신경 스코어 9
이후에 랫트를 치사시키고 뇌를 꺼낸다. 신선한 절편을 브레인 매트릭스(brain matrix)를 사용하여 절단하고, 37℃에서 5분 동안 트리페닐 테트라졸륨 클로라이드 2%로 염색한다. 이어서 상기 절편을 10% 포르말린 속에서 4℃로 5분 동안 저장한다. 경색 영역을 영상 분석기(Leica Q500)로 측정한다.
결과:허혈은 피질 및 선조 둘다에서 뇌 병소의 발생을 유도하였다(MCA 폐색 1시간 후 10 및 20mg/kg(정맥내 일시 주사)에서 뇌 손상에 미치는 HP 184의 효과를 도시한 도 1 참조). 10mg/kg(정맥내)에서의 HP 184는 뇌 병소를 41%(p<0.05)까지 유의적으로 감소시켰다. 이러한 감소는 피질에서 유의적이다(-45%, p<0.05).
실시예 4
나트륨 채널 차단의 측정
방법
PC12 세포(공급원: ATCC, Rockville, MD)를 10% 태아 소 혈청(GIBCO BRL Grand Island, NY)가 보충된 둘베코 개질된 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 성장시킨다. 나트륨 채널 전류를 앞서 상술한 표준 팻치 클램프 전기생리학 프로토콜을 사용하여 측정한다[참조: Rampe et al., 1998].
결과 및 논의
칼륨 채널 전류는 +40mV로의 200msec 클램프 펄스에 의해 -80mV의 유지 전위로부터 유도된다. 상기 프로토콜은 전류가 지속으로 외부로 지시되도록 한다. HP 184(10μM)의 적용은 상기 전류의 진폭을 감소시키고 전류 붕괴 속도를 증가시켰다. 전류를 펄스의 종결시에 측정한 경우, HP 184는 전류 진폭을 75±4%(n=4)까지 감소시켰다. 당해 결과는 HP 184가 활성화 상태를 차단시킴으로써 전압-의존적 K+채널의 길항제로서 작용한다는 견해와 부합한다.
실시예 5
증가된 근기능의 생체내 증거
목적: 무기 염료 루테늄 레드(RuR)는 마우스 감각 뉴론[참조: Duchen, 1992], 시냅토솜 및 신경근 제제[참조: Hamilton and Lundy, 1995; Tapi and Velasco, 1997]를 포함하는 각종 세포 유형에서 전압-의존적 Ca2+전류를 차단하는 것으로 보고되었다. 또한, RuR은 뇌 시냅토솜[참조: Meza-Ruiz and Tapia, 1978; Tapia and Meza-Ruiz, 1977] 및 신경근연접[참조: Alnaes and Rahamimoff, 1975;Person and Kuhn, 1979] 내에서 신경전달물질의 방출을 억제한다. 생체내에서, Rur의 복강내(ip) 투여는 마우스에서 이완성 마비를 유발하고[참조: Tapia et al, 1976], 이러한 효과는 전압-의존적 K+채널 차단제인 4-아미노피리딘(4-AP)에 의해 길항된다[참조: Tapia, 1982]. 타피아 및 벨라스코(1997)는 생체내 및 시험관내 둘다에서의 Rur의 효과를 검토하여 RuR이 신경 말단 막에 위치하는 Ca+2부위와 상호작용함을 제시하였다. 결합 연구는 RuR이 N형 Ca+2채널을 선택적으로 차단하고, 상기 채널은 신경전달물질 방출에 필수적인 Ca+2유입을 조절함을 나타낸다. 상기 저자들은 또한 RuR의 복강내 투여가 N형 Ca+2채널에 결합하는 항체로 인해 Ca+2도입 및 ACh 방출이 차단됨을 특징으로 하는 자가면역 질병인 이튼-램버트 중증근무력 증후군의 실험 모델일 수 있음을 제시하고 있다. 이러한 가능성과 부합하여, 4-AP는 환자에서 근육 약화를 개선시키고 신경근 전달을 회복시키는 것으로 보고되었다[참조: Lundh et al, 1997a; 1997b; 1979; McEvoy et al, 1989; Aisen et al, 1995].
RuR-유도된 이완성 마비를 길항시키는 4-아미노피리딘(4-AP) 및 구아니딘 둘다의 능력은 신경전달물질 방출을 촉진시키는 능력으로 인한 것일 수 있다[참조: Lundh, 1978; Lundh and Thesleff, 1977; Tapia and Stiges, 1982]. 어떠한 경우에서도, 타피아와 동료들[참조: Tapia and Stiges, 1982]은 RuR이 시냅스톰내에서 4-AP에 의해 유도된 방출을 억제한다고 보고하였다.
시험관내에서, HP 184는 4-AP와는 상이한 기작으로 신경전달물질 방출을 증가시킨다. 고농도에서, 4-AP는 전기적으로 자극된 방출 및 자발적 방출 둘다를 증가시키지만, 이러한 효과는 칼슘 의존적이다. 대조적으로, HP 184는 칼슘-독립적 자발적 신경전달물질 방출만을 증가시킨다[참조: Smith et al, 1993]. 또한, 자발적 방출은 생체내에서 기능적 역활을 갖는 것으로 가정되었다[참조: Smith et al, 1996].
다음 실험의 목적은 HP 184 및 4-AP가 RuR와 동시주사된 후 RuR의 마비 효과를 길항시킬 수 있는지의 여부를 측정하는 것이다.
방법 및 결과: 4 내지 5마리의 마우스(CD-1: 공급원: Charles River; 25 내지 35g)의 그룹에게 루테늄 레드와 비히클(1% 빙초산), 루테늄 레드와 4-AP 또는 루테늄 레드와 HP 184를 개별적으로 그러나 동시에 복강내 주사한다. "8183"으로 공지된 화합물도 상기 패러다임으로 시험한다. 주사한 후 15분째에 시작하여 마우스를 "깃대(flagpole)" 장치 가까이에 놓고 자체 체중을 지탱하는(즉, 깃대 위에서 떨어지지 않고 버티는) 능력을 기록한다. 결과를 자체 체중을 지탱할 수 있는 마우스의 수 대 시험한 전체 마우스의 수로서 기록한다. 이들 결과는 하기 표 3에 제시한다. 모든 실험은 2PM와 4:30PM 사이에 수행한다.
약물, 투여량 약물, 투여량 15분 30분 45분
RuR, 30mg/kg(복강내) 비히클 69마리 중 29마리(42%) 69마리 중 19마리(27.5%) 64마리 중 18마리(30.4%)
0.3mg/kg 4-AP 25마리 중 22마리(88%) 25마리 중 13마리(52%) 25마리 중 12마리(48%)
0.6mg/kg 4-AP 14마리 중 12마리(85.7%) 14마리 중 8마리(57.1%) 14마리 중 8마리(57.1%)
30mg/kg HP 184 15마리 중 15마리(100%) 15마리 중 15마리(100%) 15마리 중 15마리(100%)
10mg/kg HP 184 15마리 중 14마리(93.3%) 15마리 중 12마리(80%) 15마리 중 11마리(73.3%)
30mg/kg 8183 14마리 중 13마리(92.8%) 14마리 중 13마리(92.8%) 14마리 중 14마리(100%)
100mg/kg DPH 20마리 중 11마리(55%) 20마리 중 10마리(50%) 20마리 중 10마리(50%)
30mg/kg DPH 15마리 중 4마리(26.7%) 15마리 중 3마리(20%) 15마리 중 4마리(26.7%)
10mg/kg RIL 15마리 중 9마리(60%) 15마리 중 4마리(26.7%) 15마리 중 4마리(26.7%)
결론:
4-AP(복강내) 및 HP 184(복강내)는 둘다 RuR의 복강내 투여에 의해 유도된 이완성 마비를 길항시킬 수 있다. 이는 HP 184가 K+채널 차단을 통해 생체내 신경 전달을 증가시킬 수 있음을 의미한다. 또한, 시험관내 뇌 절편 실험이 증가된 뇌 신경전달물질 방출을 뒷받침하기 때문에, 4-AP의 경우와 마찬가지로, HP 184도 신경 전달을 증가시키는 것이 가능하다[참조: Smith et al, 1993; 1996].
본 실험 패러다임에서 검사한 나트륨 채널 차단제 디페닐히단토인(DPH) 및 릴루졸(RIL)의 투여량은 이미 국소 허혈 모델에서 신경보호성인 것으로 나타났다[참조: Rataud et al, 1994; O'Neill et al, 1997]. 상기 모델에서 이들의 효과가없다는 것은 RuR-유도된 이완성 마비를 길항시키는 HP 184의 능력이 생체내 나트륨 채널 차단에 의한 것이 아닐 수 있다는 해석에 확신을 더해준다. 이는 임상적으로도 제시된다. MS의 음성 증상(운동 상실)은 흔히 나트륨 채널 차단제에 의해 악화된다[참조: Sakurai and Kanazawa, 1999].
실시예 6
척수 압궤 질병 모델
원리 및 목적: 문헌[참조: Gruner & Yee(1999)]에는 랫트에서 척수가 손상된지 25년 후에 4-AP가 mMEP의 그 다음 등급의 척수 손상을 증가시킨다는 것이 제시되어 있다. 동일한 과정을 사용하여 기능적 행동을 측정한다. 이러한 행동은 최소 mMEP와 상호관련되는 것으로 제시되었다. 상기 실험들은 (1) 중간정도 중증도의 척수 압궤-유도된 운동 장애가 발생할 경우 HP 184가 이를 감쇠시킬 수 있는지의 여부를 측정하고 이의 효능과 메틸프레드니솔론 석시네이트(MPSS)를 비교하고, (2) HP 184가 약한 강도로 만성(25년) 척수 손상을 앓는 랫트에서 운동 기능을 개선시킬 수 있는지의 여부를 측정하고 이의 효과를 4-아미노피리딘(4-AP)와 비교하는 것을 목적으로 한다.
급성 치료- 복강내 주사
암컷 랫트의 척수를 척추후궁절제술(모의 그룹, n=2)에 노출시키거나 1.4mm의 직경으로 압궤시킨다(5개의 그룹, 각각 n=12). 정상 척수 직경은 약 2.5mm이다. 이러한 압박은 실외 보행 스케일(Open Field Walking Scale)에서 1.5 내지2.5의 초기 실외 보행 스코어를 특징으로 하는 중간 정도의 손상을 의미한다. 실외 보행 스케일(OFT)의 정의는 다음과 같다:
0.0 자발적 운동이 없음
0.7 가벼운 운동
1.0 엉덩이 및/또는 무릎(발목은 아님)의 운동
1.3 엉덩이 무릎(발목은 아님)에서 활발한 운동
1.7 발목에서 의심스러운 운동
2.0 사지의 모든 세 주요 관절에서 운동
2.3 지탱하고자 시도함
2.7 기립 자세에서만 지탱함
3.0 활발한 지탱, 비협동된 보행
3.3 간헐적으로 협동된 보행
3.7 발목 또는 발의 조절 상실, 무릎 관절이나 발의 내측면으로 보행
4.0 보행시에 앞다리와 뒷다리의 협동
4.3 개선된 뒷다리 자세 지탱, 복부가 지면에 닿지 않음
4.7 1개 또는 2개의 발끝이 끌림, 빠른 속도로 가볍게 비틀거리면서 방향전환
5.0 정상적 보행 및 지탱 기반, 빠른 방향전환시에 균형 상실이 없음, 발끝을 끌지 않음
약물 치료
압궤(1일)한지 15분 이내에, HP 184 디자인된 그룹의 랫트에게 1% 빙초산 비히클 중의 20, 10, 5 또는 0mg/kg으로 복강내 주사한다. 이와 같은 투여를 2일째 및 3일째에 반복한다. 한편, MPSS를 1일째에 압궤한지 15분 후, 2시간 후, 4시간 후 및 6시간 후에 30mg/kg로 복강내 투여한다. 상기 MPSS 투여 스케줄은 문헌에 최적인 것으로 기술된 바 있으며 사람에서 수행된 투여를 반영한다. MPSS는 현재 사람 척수 손상용으로 승인된 유일한 약물 치료요법이다. 도 2는 시간에 따른 각종 처리 그룹의 행동 스코어(OFT)를 도시한 것이다. 수술 전 표준 스코어는 5이다. 20 및 5mg/kg 투여 그룹 둘다에 있어 개선 속도 및 개선 범위는 비히클 처리된 랫트와 유의적으로 상이하다. 각각의 포인트는 8마리 내지 12마리 랫트의 평균+표준오차를 의미한다.
급성 치료-경구 투여
다시, 암컷 랫트의 척수를 척추후궁절제술에 노출시키거나 1.4mm의 직경으로 압궤시킨다. HP 184 그룹에서, 압궤하기 5분 내지 10분 전에 랫트에게 경구 투여한 다음, 2일째 및 3일째에 1일 1회 투여한다. MPSS를 상기한 바와 같이 투여한다. 행동 스코어(OFT)를 도 3에 제시한다. 수술전 표준 스코어는 5이다.
비히클 처리된 그룹과 비교하여, 10mg/kg를 포함하는 모든 투여량 그룹에서 개선 속도 및 개선 범위는 개선된다. 각각의 포인트는 12마리 랫트의 평균+표준오차이다.
만성 압궤 실험
암컷 랫트의 척수를 척추후궁절제술에 노출시키거나 1.6mm의 직경으로 압궤시킨다. 이는 경도 손상을 의미하며, 25일 동안 처리하지 않은 후에 OFT 스코어가 4.0가 되도록 디자인한 것이다. 이는 4-AP가 뒷발 미세종판 전위 기록에서 개선을 유도했음을 제시한 문헌[참조: Gruner and Yee(1999)]에 기재되어 있는 것과 동일한 정도의 운동 장애를 재현하고자 하는 시도로서 선택한 것이다. 이러한 과정 및 미처리된 손상의 기간도 탈수초화를 초래하는 것으로 나타났다. 행동 스코어(OFT)는 도 4에 제시한다. 도 4는 본원에서 앞서 기술한 실외 보행 스케일에 대한 정의를 사용하여 그룹의 평균 및 표준 오차를 도시한 것이다.
본 실험에서, OFT 스코어는 다소 높으며(4.3 내지 4.5) 단지 약간의 개선의 여지을 나타낸다. 각각의 랫트를 자체 대조군으로서 사용하여, 26일째, 27일째 및 28일째에 HP 184를 1일 1회 경구 투여한 후에 일관된 개선이 관찰된다. 일관된 개선은 0.6mg/kg 4-AP를 1일 1회 복강내 투여한 후에도 관찰된다. 만-위트니 U-검정(Mann-Whitney U-test)을 사용하여 측정한 통계학적 차이는 각각의 랫트(각각의 랫트는 자체의 대조군이다)의 변화를 기초로 한다. 1일째, 2일째 및 3일째의 모든 행동 시험은 위관영양한지 3시간 후에 수행한다. 3일째(약물을 투여하기 시작한 첫날이 0일째이다)에는 약물을 투여하지 않는다. 통계학적 분석은 다음과 같다:
20mg/kg - 비히클 대조군과 비교하여 3시간째 내지 3일째(p=0.002)에 유의적 개선
10mg/kg - 비히클 대조군과 비교하여 30분째 및 3시간 내지 12시간째(p=0.014)에 유의적 개선
3mg/kg - 비히클 대조군과 비교하여 30분째 및 6시간 내지 1일째(p=0.0027)에 유의적 개선
4-AP - 비히클 대조군과 비교하여 90분 내지 3시간째 및 12시간 내지 2일째(p=0.0027)에 유의적 개선
하기 표 4는 투여 전부터 3일 동안 연속적으로 투여한 후 3시간째까지의 각 그룹의 스코어 변화를 설명한다.
비히클압궤 4-AP압궤 20 HP압궤 10 HP압궤 3 HP압궤 척추후궁절제술압궤시키지 않음
투여하기 전 4.52±0.04 4.43±0.03 4.54±0.02 4.36±0.01 4.32±0.05 4.87±0.01
마지막 투여후 3시간째 4.53±0.03 4.53±0.02 4.60±0.02 4.44±0.03 4.47±0.04 4.87±0.01
도 5는 각 랫트에 대해 정규화된 스코어의 변화를 도시한 것이다. 그래프는 4-AP를 0.6mg/kg(복강내), 20 또는 10 또는 3mg/kg(경구)로 3일 연속 투여한 후 관찰된 변화를 도시한 것이다. 척추후궁절제술은 모의 그룹을 의미한다. 각 그룹(n=12)의 평균±표준오차는 도 5에 제시한다.
만성 척수 손상에서 효능
중간 정도의 척수 손상 후 35일째에, 3mg/kg HP 184(경구)의 경구 투여는 1회 투여 후에 운동 회복을 개선시켰으며, 4일 이상 매일 투여하는 것은 앞서 기술한 실외 보행 시험에 대한 정의에 기초한 개선을 유지시켰다. 0.6mg/kg(복강내)의 4-AP도 유사하게 효과적이다. 표로 나타낸 만성 척수 손상 연구 둘다로부터의 결과(약물을 경미한 척수 압궤 후 25일째에 약물을 처음 투여하고 중간 정도의 척수 압궤 후 35일째에 투여한다)는 표 5에 제시한다.
처리 25일째(경미함)투여전 28일(경미함)마지막 투여후 3시간째 델타 가능한 개선%(최고 스코어=5)
대조군 4.52±0.37 4.52±0.26 0.01 2%
4-AP(0.6mpk, 복강내) 4.43±0.30 4.52±0.23 0.10 17.5%
HP 184(3mpk, 경구) 4.32±0.16 4.52±0.35 0.15 22.0%
처리 35일째(중간정도)투여전 39일(중간정도)마지막 투여후 3시간째 델타 가능한 개선%
대조군 4.00±0.74 3.99±0.57 -0.01 -2%
4-AP(0.6mpk, 복강내) 3.95±0.84 4.17±0.47 0.22 22.1%
HP 184(3mpk, 경구) 3.89±0.54 4.17±0.58 0.274 24.8%
상기 제시한 바와 같이, 중간정도의 압궤 손상된지 35일 후부터 41일 후까지 경구 위관영양에 의해 3mg/kg/일 HP 184를 투여하면 유의적 개선이 산출된다. 상기 연구에서, HP 184를 투여한 랫트의 손상된 척수내의 손상 부위에 보다 많은 수초가 있음이 주지된다. 상기 데이터는 HP 184가 재수초화를 증가시키거나 진행중인 탈수초화 과정을 감소시킨다는 주장과 부합하는 증거를 제공한다. 추가의 연구를 이중맹 위약 및 양성적으로 조절된 디자인으로 수행하여 중간 정도의 만성(손상 후 35일) 압궤 패러다임에 있어 HP 184의 보다 적은 유효량을 측정한다. 앞서 관찰된 3mg/kg(경구)에서 HP 184의 효과는 4AP(0.6mg/kg, 복강내)를 양성 대조군으로서 사용하여 확인한다. 또한, 수초 염색에 있어 모든 치료의 효과를 조직학적으로 검사한다.
(1) 행동 평가
찰스 리버로부터 입수한 체중이 250 내지 300mg인 150마리의 성숙한 암컷 위스타 랫트를 1주 이상 맥매스터 유니버시티 헬쓰 사이언스 센터(McMaster University Health Sciences Centre(HSC) Central Animal Facilities(CAF))에서 사육한다. 이 시간 동안 이들 랫트를 하기에서 기술하는 행동 시험에 노출시켜 랫트들이 서로 친밀한지를 확인한다. 랫트를 수술에 앞서 2주 동안 손에 길들인다.
CAF에서 적절하게 수술복을 착용하고 이소플루란(3 내지 5%):O2(1ℓ/분을 사용하여 랫트를 마취시킨다. 통증 완화를 위해 수술 전에 템제시크(Temgesic)(0.03mg/체중 kg , 피하)를 투여한다. 척수를 3.5mm 폭의 변형된 커버슬립 겸자(블라이트(Blight 1991, Rathbone laboratory)에 의해 수정된 과정)를 사용하여 압궤(압박)시킨다. 그루너 스케일(1996)에서의 중간 수준(중간 정도) 결과와 동등한 손상 수준이 생성되도록 겸자를 15초 동안 1.4mm로 근접시킨다. 달리, 압박 손상은 블라이트(Blight)(1991)에 의해 기술된 과정에 따라서 수행한다.
동물을 관찰하여 요로 감염 또는 뇨 정체의 존재에 대한 통증 성향을 측정한다. 통증은 티네놀(0.8mg/체중 10gm, 경구)로 치료한다.
요로 감염을 예방하기 위해, 셉트라(트리메토프린-설파메톡사졸)를 수술하기 1일 전 및 수술한지 5일 후에 경구(물 300㎖ 중 4.5㎖) 투여하고, 수동 방광 압출(manual bladder expression)로 처리한다. 탁뇨 또는 혈뇨로 나타나는 감염, 즉 모든 요로 감염의 경우, 베이트릴(엔로플록사신, 7mg/체중 kg)을 1일 2회피하(SQ) 주사한다.
운동 성향 및 척수분절반사의 변화를 수술 5주까지 평가한다. 동물을 실외 보행 시험, 뒷발 놓기 및 발 배향으로 시험한다. 동물을 수술 후 2일째, 7일째, 14일째, 21일째, 28일째 및 35일째에 평가한다. 수술 후 35일째까지 추가의 자발적 회복은 거의 일어나지 않는다. 따라서, 처리는 35일째에 시작한다.
HP 184를 빙초산(물 10㎖당 산 0.1㎖)으로 산성화시킨, 멸균된(오토클레이브된) 탈이온화 역삼투수 속에 용해시킨다. 4-AP(제조원: Sigma, 분자량:94.12; 참조: Jankowska E. et al., 1982; Gruner et al, 1999]를 생리식염수(0.6mg/체중 kg) 속에 용해시키고 복강내 주사에 의해 투여한다. 한 랫트 그룹(비히클 대조군-1)에게 경구 위관영양 비히클을 투여한다. 행동 시험을 위관영양하기 직전 및 위관영양한 후 3시간째에 수행한다. 이어서, 랫트를 35일째에 치사시킨다. 나머지 모든 랫트에게 수술 후 35일째부터 42일째까지 경구 위관영양에 의한 HP 184(그룹에 따라 0.3, 1 또는 3mg/체중 kg) 또는 4-AP(0.6mg/kg, 복강내) 또는 비히클(히비클 대조군-2)을 1일 1회 투여한다. 이 시기에 행동 시험을 위관영양하기 직전 및 위관영양한 후 3시간째 및 24시간째에 수행한다. 이어서, 랫트를 마지막 행동 시험 후 43일째에 관류시킨다.
행동 시험을 수술 후 35일째부터 43일째까지 Hi-8을 사용하여 비디오 기록한다.
통계학적 분석을 GB-Stat ppc 6.5.2를 사용한 맥킨토시 컴퓨터 상에서 수행한다. 행동 스코어를 크루스카-왈리스(Kruska-Wallis) 비모수적 분산분석(ANOVA)로 분석한다. 만-위트니 U 검정을 사용하여 사후 비교를 수행한다.
실외 운동능의 전반적 회복을 각 그룹에 대한 평균 OFT 스코어에 의해 평가하고, 이는 도 6a 및 도 6b에 제시한다. 이들 결과는 HP 184 또는 4-AP로 처리된 동물의 행동이 비히클을 투여한 대조 동물과 유의적으로 상이함을 제시한다. 반복된 측정에 대한 ANOVA는 35일 내지 42일째에 치료 효과(p<0.01)를 제시한다.
당해 결과는, 4-AP 및 HP 184 둘다가 유리한 효과를 나타내며 중간 정도의 만성 척추 압박 후에 행동 시험을 개선시킨다는 것을 나타낸다. 모든 3가지 농도의 HP 184가 유리한 효과를 갖는다 해도, 3mg/kg의 H 184가 운동 기능의 가장 우수한 회복을 산출함으로써 상기 투여량에서 이미 관찰된 HP 184의 효과를 확인시킨다. 이러한 결과는 또한 최저(0.3mg/kg) 농도의 HP 184가 상기 패러다임에서 HP 184의 최저 유효량이 아닐 수 있음을 나타낸다.
척수의 조직학적 연구
HP 184에 의한 처리가 척수 손상된지 장기간 후 투여할 경우 중간 정도의 만성 척수 압궤 손상을 앓는 랫트에서 수초의 양에 영향을 미치는지를 시험하기 위한 연구.
평가에서 상기한 랫트로부터의 척수를 본 연구를 위해 사용한다.
수술 후 21일째에, 실험 대상을 나트륨 펜토바비탈(50 내지 60mg/체중 kg, 복강내)로 깊게 마취시키고, 먼저 0.1% 헤파린을 함유하는 0.05M 포스페이트 완충된 식염수(PBS) 100㎖에 이어서 4% 파라포름알데히드(PFA) 300 내지 500㎖으로 심장을 경유하게 관류시킨다. 척수의 분절 T9 내지 L1을 취한 다음, 30% 슈크로즈용액 속에서 냉동-보호시키고 10.24% 폴리비닐 알콜 및 4.26% 폴리에틸렌 글리콜 속에서 -70℃로 동결시킨다.
병소 부위와 이 병소 부위에서 10mm 떨어진 입쪽 부위와 꼬리쪽 부위를 포함하는 각각의 척수의 분절을 Tissue Tek 배지에 매봉시킨다. 일련의 절편을 냉동상태에서 20㎛ 간격으로 세로로 절단한다. 세번째 절편마다 수초에 대해서 룩솔 패스트 블루(luxol fast blue)로 염색시킨다. 평가는 코드화한 슬라이드 상에서, 처리에 관해 알지 못하는 관찰자가 수행한다. 절편을 탈수초화의 정도(룩솔 패스트 블루로 염색되지 않은 영역)에 대해 광학현미경하에 검사한다.
상기 척수의 최대 탈수초화된 영역을 측정하기 위해, 모든 절편을 제이스(Zeiss) 현미경을 사용하여 사진으로 디지털화시킨다. 탈수초화의 정도를 처리 그룹에 관해 알지 못하는 조사자가 컴퓨터화 Bioquant BQ-TCW98 영상 분석 프로그램을 사용하여 병소 중심에서 측정한다.
통계학적 분석을 GB-Stat ppc6.5.2를 사용하여 매킨토시 컴퓨터 상에서 수행한다. 조직학적 결과를 크루스카-왈리스 비모수적 분산분석(ANOVA)를 사용하여 분석한다. 만-위트니 U 검정을 사용하여 사후 비교를 수행한다.
6개의 실험 그룹(그룹에 따라서 0.3, 1 또는 3mg/체중 kg, 또는 4-AP 0.6mg/kg 또는 비히클 대조군 1 및 2)의 탈수초화의 정도를 도 7에 제시한다. 막대는 압궤된 중심에서 탈수초화된 영역의 화소의 수를 의미한다(**P<0.001, *P<0.05, 크루스카-왈리스 비모수적 분산분석(ANOVA)). 정량적 결과는 HP 184 또는 4-AP 처리된 동물로부터의 척수가 식염수 대조군의 수초화된 영역에 비해 유의적으로 큰 수초화된 영역을 갖는다는 것을 제시한다. 즉, 비히클 주사한 동물로부터의 척수는 HP 184 또는 4-AP 처리된 동물의 탈수초화된 영역에 비해 유의적으로 큰 탈수초화 영역을 갖는다.
조직학적 분석은 HP 184(모든 3가지 농도에서) 및 4-AP가 둘다 수초화에 있어 유리한 효과를 가지며, 이는 행동 시험 결과와 부합함을 나타낸다. 상기 그룹중에서, HP 184 3mg/kg로 처리한 동물은 최소의 탈수초화를 나타낸다. 따라서, 4-AP 또는 HP 184는 척수 손상된지 장기간 후의 단계에서 재수초화를 증가시킬 수 있는 것으로 간주된다. 실험 시작 및 종결시에 평가한 두 대조 그룹인 대조 그룹 1 및 대조 그룹 2에서 탈수초화의 정도의 차이가 없었기 때문에 데이터가 단순히 수초의 상실 속도가 감소되었음을 의미할 수 없다.
실시예 7
랫트에서 방광 자극에 미치는 정맥내 HP-184의 효과
본 실험은 프레이저 등(Fraser et al., 2001)에 의해 개략화된 KCI 모델에서 정맥내 HP 184의 효과를 제시한다. 프레이저 등은 우산 세포 장벽 기능을 파괴시키는 것으로 사료되는 프로타민 설페이트 처리와 KCI(500mM)의 생리학적 뇨 농도를 결합시켰다. 정맥내 HP-184의 효과를 급성 방광 자극을 앓는 우레탄 마취된 랫트에서 누적 투여량-반응 연구로 단독의 비히클(n=4/그룹)과 비교한다. 연속적 주입 동안 방광의 충전 및 배출을 측정하는 연속적 개방 방광내압측정을 사용하여 방광 자극에 미치는 약물의 효과를 측정한다. 방광이 자극된 경우, 방광은 C-섬유 구심성 신경의 감작화로 인해 동일한 충전 속도 동안에 보다 빈번하게 수축한다. 도 8은, 방광 수축 빈도가 단독의 비히클의 효과와 비교하여 투여하기 전 자극 값으로부터 투여량-의존적으로 감소됨을 도시한 것이다. 반복된 측정에 대한 분산분석은 단독의 비히클이 효과가 없는 반면에 HP-184가 자극된 방광에서 방광 수축 빈도를 투여량-의존적 방식으로 현저하게 감소시킴을 나타낸다(P=0.0019).
실시예 8
마우스에서 NO 생산에 미치는 HP 184의 효과
LPS(3mg/kg, 복강내) 30분 전에 마우스에게 30mg/kg HP 184를 주사한다. 마우스를 LPS를 주사한지 5시간 후 치사시키고 혈장을 수집한다. 니트레이트 수준을 그리스(Griess) 검정으로 측정한다. 그룹은 각각 9마리 내지 10마리의 마우스로 구성된다. 도 9에 그래프로 제시한 바와 같이, HP 184는 NO 생산을 억제한다. 일원 ANOVA 후, LPS 처리만이 비히클 처리와 유의적으로 상이함(p<0.1)이 밝혀졌다.
실시예 9
신경병증 통증 모델에서 HP 184
성숙한 수컷 슈프라그-다울리 랫트의 L6 신경을 편측 수축시켜 만성 신경 손상을 생성시킨다. 수술로부터 회복된 후(수술 후 3 내지 7일) 동물을 감염된 발에 적용된 기계적 자극에 대한 발 회피(paw withdrawal) 역치에 대해서 시험한다. 이는 각 뒷발의 발바닥 표면에 눈금을 매긴 폰 프레이 모노필라멘트(von Freymonofilament)를 적용시켜 측정한다. 결찰된 발에서 회피 역치가 50% 감소된 동물만을 본 연구에서 사용하고, 다음 6개 그룹 중 하나로 무작위적으로 분류한다: HP 184의 3가지 투여량(0.3, 3 및 20mg/kg, 경구) 중 하나를 투여한 3개의 그룹, MDL로 지칭되는 또 다른 그룹의 1회 투여량(10mg/kg, 복강내)을 투여한 제4 그룹, 가바펜틴(90mg/kg, 피하)를 투여한 제5 그룹 및 비히클만을 투여한 제6 그룹. 행동 시험을 가바펜틴을 투여한지 45분 후 및 HP 184, MDL 및 비히클을 투여한지 3시간 후에 수행한다. 결찰된 발 및 비결찰된 발 회피 역치 간의 차이 스코어를 각각의 동물에 대해서 계산하고, 이 차이를 그룹을 주 인자로 하여 ANOVA에 적용시킨다. 결과는 도 10에 제시한다. 그래프는 처음 약물 투여 전과 후에 좌측(결찰됨) 발 회피 역치에서 우측(정상) 발 회피 역치를 뺀 평균(+/- SEM) 차이를 도시한 것이다(연구의 급성기). 통계학적 분석은 HP 184 20mg/kg에 의한 L5 결찰 통각과민의 투여량 의존적 감쇠 및 가바펜틴 90mg/kg에 의한 통각과민의 명백한 반전을 드러낸다. 반복 측정 ANOVA 간에/내에서 분석한다. 분석에 이어서 그룹 X 시간 상호관계 항에 대해 사후 비교(LSD)를 실시하여 약물 전 대 약물 후의 회피 역치값을 검사한다.
그룹: F(5.43)=8.18, p<0.001
시간: F(1.43)=47.34, p<0.001
그룹 X 시간: F(5.43)=9.25, p<0.001
비히클 처리된 동물에서, 기계적 회피 역치에 있어 두 발 사이에 큰 차이가 있다.
참조문헌

Claims (33)

  1. 탈수초성 질병의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염을 투여함을 포함하여, 탈수초성 질병을 치료하는 방법.
    화학식 I
    상기 화학식에서,
    m은 0, 1 또는 2이고,
    n은 0, 1 또는 2이며,
    p는 0 또는 1이고,
    R은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸, C1-C6알킬, C1-C6알콕시, 벤질옥시, 하이드록시, 니트로 또는 아미노이고,
    R1은 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬, C1-C6알케닐, C1-C6알카노일, 할로겐, 시아노, -C(O)C1-C6알킬, -C1-C6알킬렌CN 또는 -C1-C6알킬렌NR'R"[여기서, R' 및 R"은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬, -C1-C6알킬렌OC(O)C1-C6알킬 또는 -CH(OH)R4(여기서, R4는 수소 또는 C1-C6알킬이다)이다]이며,
    R2는 수소, 또는 할로겐, 하이드록시 또는 벤질옥시로 임의로 치환된 C1-C6알킬, C1-C6알케닐, C1-C6알키닐, -CO2C1-C6알킬 또는 -R5-NR'R"(여기서, R5는 C1-C6알킬렌, C1-C6알케닐렌 또는 C1-C6알키닐렌이고, R' 및 R"는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-C6알킬이거나, 또는 그룹 -NR'R"는 전체로서 1-피롤리디닐이다)이고,
    R3은 수소, 니트로, 아미노, 할로겐, C1-C6알콕시, 하이드록시 또는 C1-C6알킬이다.
  2. 제1항에 있어서, R이 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸 또는 C1-C6알킬이고, R1이 수소 또는 C1-C6알킬이며, R2가 수소 또는 C1-C6알킬이고, R3이 수소, C1-C6알킬 또는 할로겐이며, p가 0인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 탈수초성 질병이 다발성 경화증인 방법.
  4. 제2항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 탈수초성 질병이 다발성 경화증인 방법.
  6. 탈수초성 상태의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하여, 탈수초성 상태를 치료하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, R이 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸 또는 C1-C6알킬이고, R1이 수소 또는 C1-C6알킬이며, R2가 수소 또는 C1-C6알킬이며, R3이 수소, C1-C6알킬 또는 할로겐이며, p가 0인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 탈수초성 상태가 척수 손상인 방법.
  9. 제6항에 있어서, 탈수초성 상태가 외상성 뇌손상인 방법.
  10. 제6항에 있어서, 탈수초성 상태가 뇌졸중인 방법.
  11. 제7항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 탈수초성 상태가 척수 손상인 방법.
  13. 제11항에 있어서, 탈수초성 상태가 외상성 뇌손상인 방법.
  14. 제11항에 있어서, 탈수초성 상태가 뇌졸중인 방법.
  15. 뇌졸중의 재활이 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하는, 뇌졸중의 재활 방법.
  16. 제14항에 있어서, R이 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸 또는 C1-C6알킬이고, R1이 수소 또는 C1-C6알킬이며, R2가 수소 또는 C1-C6알킬이며, R3이 수소, C1-C6알킬 또는 할로겐이며, p가 0인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  18. 칼륨 채널의 차단이 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하여, 당해 환자에서 칼륨 채널을 차단하는 방법.
  19. 제18항에 있어서, R이 수소, 할로겐, 트리플루오로메틸 또는 C1-C6알킬이고, R1이 수소 또는 C1-C6알킬이며, R2가 수소 또는 C1-C6알킬이며, R3이 수소, C1-C6알킬 또는 할로겐이며, p가 0인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  21. 제2항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  22. 제7항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 탈수초성 상태가 척수 손상인 방법.
  24. 제22항에 있어서, 탈수초성 상태가 외상성 뇌손상인 방법.
  25. 제22항에 있어서, 탈수초성 상태가 뇌졸중인 방법.
  26. 신경병증 통증의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하는, 신경병증 통증의 치료 방법.
  27. 제26항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  28. 방광 자극의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하는, 방광 자극의 치료 방법.
  29. 제28항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  30. 과민성 방광의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하는, 과민성 방광의 치료 방법.
  31. 제30항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
  32. 케모카인-유도된 통증의 치료가 필요한 환자에게 치료학적 유효량의 제1항에 따르는 화합물을 투여함을 포함하는, 케모카인-유도된 통증의 치료 방법.
  33. 제32항에 있어서, 화합물이 하기 화학식의 화합물인 방법.
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