TW202321246A - Prmt5抑制劑 - Google Patents

Prmt5抑制劑 Download PDF

Info

Publication number
TW202321246A
TW202321246A TW111127014A TW111127014A TW202321246A TW 202321246 A TW202321246 A TW 202321246A TW 111127014 A TW111127014 A TW 111127014A TW 111127014 A TW111127014 A TW 111127014A TW 202321246 A TW202321246 A TW 202321246A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
mmol
reaction solution
formula
amino
solution
Prior art date
Application number
TW111127014A
Other languages
English (en)
Inventor
家勝 付
覃華
朱偉波
石穀沁
大慶 孫
Original Assignee
大陸商上海齊魯製藥研究中心有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商上海齊魯製藥研究中心有限公司 filed Critical 大陸商上海齊魯製藥研究中心有限公司
Publication of TW202321246A publication Critical patent/TW202321246A/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本發明提供一種PRMT5激酶抑制劑，含有所述化合物的藥物組合物以及利用本發明化合物治療細胞增殖性疾病，例如癌症的方法。

Description

PRMT5抑制劑
本發明要求於2021年7月20日提交中國專利局、申請號為202110816281.8發明名稱為“PRMT5抑制劑”的中國專利申請、2022年7月7日提交中國專利局、申請號為202210795578.5發明名稱為“PRMT5抑制劑”的中國專利申請的優先權，其全部內容藉由引用結合在本發明中。
本發明屬於藥物化學領域，具體關於一種喹啉取代的PRMT5抑制劑，含有所述化合物的藥物組合物以及利用本發明化合物治療細胞增殖性疾病，例如癌症的方法。
蛋白質精氨酸甲基轉移酶（protein arginine methyltransferase；PRMTs）在蛋白質的甲基化中起著重要的作用，如參與可變剪切、轉錄後調節、RNA的加工、細胞增殖、細胞分化、細胞凋亡和腫瘤形成等。目前，已經鑒定出11種該家族的成員（PRMT1～11），根據其催化精氨酸甲基化方式的不同，可以將PRMTs分為3類：I型包括PRMT1、PRMT2、PRMT3、PRMT4、PRMT6和PRMT8，催化的形式為單甲基（MMA）和不對稱雙甲基（aDMA）；II型為對稱雙甲基（sDMA），包括PRMT5及PRMT9；III型為PRMT7。
PRMT5首次在與Janus酪氨酸激酶2（Jak2）相互作用的蛋白複合體中分離出來，所以又稱為Jak結合蛋白1（JBP1）。PRMT5作為一種表觀遺傳酶，能對稱性地甲基化組蛋白或者非組蛋白受質的精氨酸殘基，影響多個靶基因及多條訊號通路途徑，因而發揮著多種生物學功能。研究表明，PRMT5還是一個癌基因，在多種腫瘤中高表達，且其表達水平與腫瘤的發生發展及預後密切相關。
CYP450酶參與的代謝途徑是化合物在體內清除過程中非常重要的代謝途徑，這一家族酶活性的抑制可帶來藥物體內清除和藥代動力學的變化，由CYP450酶介導的藥物相互作用（drug-drug interaction；DDI）是藥效和藥物安全性考量的重要因素（J Pharmacol Exp Ther. 2006 Jan[J].2006,316 (1): 336-48）。CYP3A4是CYP450家族主要代謝酶，抑制CYP3A4帶來的DDI會導致嚴重的安全性問題（The AAPS Journal volume 24,Article number: 12 (2022)）。CYP3A4是肝臟及腸壁中含量最豐富的P450同工酶，可參與代謝約50%的臨床藥物，臨床聯合用藥時，抑制或誘導CYP3A4的藥物（perpetrator drug）可以影響合併用其他藥物的藥代動力學，從而影響血漿中藥物的暴露量導致藥動學DDI。抑制性（包括可逆、機制性失活）藥物相互作用多提高藥效，但對於治療窗較窄的藥物易引起臨床不良反應，嚴重時可危及生命。而誘導引起的藥動學DDI較少引起用藥安全問題，但可降低藥物的療效。因此，預測新藥可能引起的DDI是新藥研發中評價候選藥物特性的重要內容（張慶顥等:基於體外CYP3A4抑制和誘導資料定量預測體內藥物-藥物相互作用.藥學學報Acta Pharmaceutica Sinica[J]. 2010, 45 (8): 952-959）。
藥物對P450酶的抑制通常分為可逆性抑制（包括競爭性抑制、非競爭性抑制和反競爭性抑制）和不可逆性抑制。可逆性抑制劑以非共價鍵與酶（或酶-受質複合物）形成複合物，阻礙酶與受質之間酶促反應的正常進行，在除去抑制劑後，酶活性不受影響，能與受質繼續進行正常酶促反應。在不可逆性抑制中，抑制劑對酶的抑制效應在除去抑制劑後不會即刻消失，而是呈現出時間依賴的特性。這種現象一般稱之為時間依賴性抑制（time- dependent inhibition；TDI）。
藥物對P450酶產生TDI有多種機制，其中，機理性抑制（mechanism based inhibition；MBI）是TDI最重要的機制，即抑制劑可經CYP介導轉化成親電性的反應性代謝物（reactive metabolite），這些反應性代謝物可與酶發生作用（主要以共價鍵結合形式）導致酶結構的變化而失活。MBI的產生需要先經過P450酶代謝的過程，因此抑制劑對P450酶的抑制作用需要一定時間，而體內合成新的P450酶也需要一定時間（一般需要4~7d），這樣即使把抑制劑除去，其抑制作用還會存在一段時間。與可逆性抑制相比，TDI會帶來更嚴重的用藥安全問題，因為許多需聯合用藥的藥物也需長期用藥，這勢必會造成被抑制的CYP亞型被長期抑制，即使停用產生TDI的藥物，其抑制作用仍會持續一段時間；同時，由於產生MBI的抑制劑同時也是P450酶的受質，當酶活性被抑制後，其自身代謝也會受到阻礙，造成在體內暴露量非平穩的增加；此外，反應性代謝物對P450酶的共價修飾可能會導致半抗原的產生，可能會引起自體免疫反應，造成嚴重後果（謝珊珊等.細胞色素P450酶的時間依賴性抑制研究及其在新藥研發中的作用[J].中國新藥與臨床雜誌.Chin J New Drugs Clin Rem，2013,32(6)：419-424）。
目前PRMT5抑制劑進入臨床的藥物有GSK-3326595、JNJ-64619178、PF-06939999等，仍需開發更多安全的PRMT5激酶抑制劑。
本發明提供式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，
Figure 02_image001
其中，R 1選自H或NR 1aR 1b； R 1a和R 1b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；所述的C 1-4烷基可任選被一個或多個R 1c基團所取代，所述R 1c基團為C 3-6環烷基； Y選自N或CR 2； R 2選自H、鹵素、鹵素取代的C 1-4烷基、CN或-SO 2-C 1-4烷基； L 1選自化學鍵、-CH 2-、-X-CH 2、-(CH 2) n-CH=CH-、-CH=CH-(CH 2) n-、C 3-6環烷基或5-6員雜芳基； X選自O、S、NH或CH 2； 環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基； R 3選自羥基或C 1-4烷基； m選自0、1、2或者3； n選自0或1； 環B選自
Figure 02_image003
或
Figure 02_image005
； R 4選自NR 4aR 4b或C 1-4烷基； R 4a和R 4b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；
Figure 02_image007
代表單鍵或雙鍵； 當
Figure 02_image007
為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基；R 7和R 8各自獨立地為H； 當
Figure 02_image007
為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7和與其相連的C原子一起形成苯基或C 5-6環烷基。
在本發明的一些方案中，本發明提供式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽為式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，
Figure 02_image009
其中，R 1選自H或NR 1aR 1b； R 1a和R 1b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；所述的C 1-4烷基可任選被一個或多個R 1c基團所取代，R 1c基團為C 3-6環烷基； R 2選自H、鹵素、鹵素取代的C 1-4烷基、CN或-SO 2-C 1-4烷基； R 3選自羥基或C 1-4烷基； R 4選自羥基、
Figure 02_image011
、NR 4aR 4b或C 1-4烷基，較佳地，R 4選自NR 4aR 4b或C 1-4烷基； R 4a和R 4b各自獨立地選自H或C 1-4烷基； L 1選自化學鍵、-CH 2-、-X-CH 2、-(CH 2) n-CH=CH-、-CH=CH-(CH 2) n-、C 3-6環烷基或5-6員雜芳基； X選自O、S、NH或CH 2； 環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基； m選自0、1、2或者3； n選自0或1；
Figure 02_image007
代表單鍵或雙鍵； 當
Figure 02_image007
為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基；R 7和R 8各自獨立地為H； 當
Figure 02_image007
為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7和與其相連的C原子一起形成苯基或C 5-6環烷基。
在本發明的一些方案中，式(I)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，
Figure 02_image009
其中，R 1選自H或NR 1aR 1b； R 1a和R 1b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；所述的C 1-4烷基可任選被一個或多個R 1c基團所取代，R 1c基團為C 3-6環烷基； R 2選自H或鹵素； R 3選自羥基或C 1-4烷基； R 4選自羥基、
Figure 02_image011
、NR 4aR 4b或C 1-4烷基，較佳地，R 4選自NR 4aR 4b或C 1-4烷基； R 4a和R 4b各自獨立地選自H或C 1-4烷基； L 1選自化學鍵、-CH 2-、-X-CH 2、-(CH 2) n-CH=CH-、C 3-6環烷基或5-6員雜芳基； X選自O、S、NH或CH 2； 環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基； m選自0、1、2或者3； n選自0或1；
Figure 02_image007
代表單鍵或雙鍵； 當
Figure 02_image007
為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘或鹵素；R 7和R 8各自獨立地為H； 當
Figure 02_image007
為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7和與其相連的C原子一起形成苯基或C 5-6環烷基。
在本發明的一些方案中，所述R 1選自H、氨基或
Figure 02_image013
。
在本發明的一些方案中，所述R 2選自H、F、Cl或Br。
在本發明的一些方案中，所述R 2選自鹵素取代的C 1-4烷基、CN或-SO 2-C 1-4烷基。
在本發明的一些方案中，所述R 2選自CF 3、CN或-SO 2-CH 3。
在本發明的一些方案中，所述L 1選自化學鍵、-CH 2-、-O-CH 2-、-NH-CH 2-、-CH 2-CH 2-、-CH=CH-、-CH 2-CH=CH-、
Figure 02_image015
、
Figure 02_image017
或
Figure 02_image019
。
在本發明的一些方案中，所述L 1選自-CH=CH-CH 2-。
在本發明的一些方案中，所述環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基，所述的雜環基含有1個或多個選自N或者O的雜原子。
本發明某些實施方案，環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基、5-10員單雜環、5-10員螺雜環、5-10員橋雜環或5-10員稠雜環。
本發明某些實施方案，環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基、5-6員單雜環、9-10員螺雜環、7-10員橋雜環或8-10員稠雜環。
在本發明的一些方案中，所述環A選自
Figure 02_image021
、
Figure 02_image023
、
Figure 02_image025
、
Figure 02_image027
、
Figure 02_image029
、
Figure 02_image031
或
Figure 02_image033
；
在本發明的一些方案中，所述R 3選自羥基或甲基；m選自0、1、2或者3。
在本發明的一些方案中，所述結構單元
Figure 02_image035
選自
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
、
Figure 02_image043
、
Figure 02_image045
、
Figure 02_image047
、
Figure 02_image049
、
Figure 02_image051
或
Figure 02_image053
。
本發明的一些方案中，所述結構單元
Figure 02_image035
選自
Figure 02_image055
、
Figure 02_image057
、
Figure 02_image059
、
Figure 02_image061
、
Figure 02_image063
、
Figure 02_image065
、
Figure 02_image067
、
Figure 02_image069
、
Figure 02_image071
或
Figure 02_image073
。
在本發明的一些方案中，所述R 4選自氨基、甲基或-NHCH 3。
在本發明的一些方案中，所述
Figure 02_image007
代表單鍵或雙鍵； 當
Figure 02_image007
為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘、F或甲基；R 7和R 8各自獨立地為H； 當
Figure 02_image007
為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7和與其相連的C原子一起形成苯基或環戊基。
在本發明的一些方案中，所述結構單元
Figure 02_image075
選自
Figure 02_image077
、
Figure 02_image079
、
Figure 02_image081
、
Figure 02_image083
、
Figure 02_image085
、
Figure 02_image087
或
Figure 02_image089
。
在本發明的一些方案中，所述結構單元
Figure 02_image075
選自
Figure 02_image092
或
Figure 02_image094
。
在本發明的一些方案中，所述結構單元
Figure 02_image005
為
Figure 02_image096
。
在本發明的一些方案中，所述化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述的化合物具有如下式(II)所示的結構：
Figure 02_image098
其中， R 9選自H或C 1-4烷基；較佳地，R 9選自H或甲基； R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、L 1和m如式(I')或式(I)所定義。
在本發明某些實施方案中，式(II)化合物或其藥效上可接受的鹽中，R 9選自H或C 1-4烷基；較佳地，R 9選自H或甲基；m選自1或2；R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8和L 1如式(I')或式(I)所定義。
在本發明的一些方案中，上述化合物、或其藥學上可接受的鹽，其選自：
Figure 02_image100
或
Figure 02_image102
其中R 1、R 2、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8和R 9如式（II）所定義。
在本發明的一些方案中，上述化合物、其異構體或藥學上可接受的鹽，其選自：
Figure 02_image104
Figure 02_image106
或
Figure 02_image108
； 其中R 1、R 2、R 4和R 9如式(II)所定義。
本發明還提供下述化合物、其異構體或藥學上可接受的鹽，其選自：
Figure 02_image110
Figure 02_image112
Figure 02_image114
Figure 02_image116
Figure 02_image118
Figure 02_image120
Figure 02_image122
Figure 02_image124
Figure 02_image126
Figure 02_image128
Figure 02_image130
Figure 02_image132
Figure 02_image134
Figure 02_image136
Figure 02_image138
Figure 02_image140
Figure 02_image142
Figure 02_image144
Figure 02_image146
Figure 02_image148
Figure 02_image150
Figure 02_image152
Figure 02_image154
Figure 02_image156
或
Figure 02_image158
。
本發明還涉及藥物組合物，其包含所述化合物、或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
本發明還涉及所述化合物或其藥學上可接受的鹽或其藥物組合物在製備治療癌症藥物中的應用。
本發明還涉及所述化合物或其藥學上可接受的鹽，或其藥物組合物在治療癌症中的用途。
本發明還涉及一種治療癌症的方法，其包括向有需要的對象施以有效劑量的所述化合物或其藥學上可接受的鹽，或其藥物組合物。
本發明化合物對PRMT5甲基化酶以及人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2具有較好的抑制作用，同時具有心臟安全性更高的潛在優勢，對CYP3A4酶的抑制作用小，發生藥物相互作用(DDI)的可能性更低，具有顯著時間依賴性抑制(time-dependentinhibition；TDI)的風險較低，且具有良好的藥代動力學性質。與現有技術相比，本發明化合物安全性更高。
術語解釋
除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。
術語“藥學上可接受的”指在合理的醫學判斷範圍內適合與人類和動物的組織接觸使用而無過度的毒性、刺激、過敏反應或其它的問題或併發症，與合理的收益/風險比相當的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。
術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物與相對無毒的酸或鹼製備得到的衍生物。這些鹽可以在化合物合成、分離、純化期間就被製備，或者單獨使用經過純化的化合物的游離形式與適合的酸或鹼反應。當化合物中含有相對酸性的官能團時，與鹼金屬、鹼土金屬氫氧化物或有機胺反應得到鹼加成鹽，包括基於鹼金屬與鹼土金屬的陽離子。當化合物中含有相對鹼性的官能團時，與有機酸或無機酸反應得到酸加成鹽。
本發明的化合物存在異構體，例如順反異構體、對映異構體、非對映異構體、及其外消旋混合物和其他混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。
術語“對映異構體”是指互為鏡像關係的立體異構體。
術語“非對映異構體”是指分子具有兩個或多個手性中心，並且分子間為非鏡像的關係的立體異構體。
術語“順反異構體”是指分子中雙鍵或者成環碳原子單鍵不能自由旋轉而存在的構型。
除非另有說明，用楔形實線鍵
Figure 02_image160
和楔形虛線鍵
Figure 02_image162
表示一個立體中心的絕對構型。
本發明化合物的立體異構體可以藉由手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備。例如本發明某化合物的一種對映體，可以藉由不對稱催化技術或者手性助劑衍生技術製備得到。或者藉由手性拆分技術，從混合物中得到單一立體構型的化合物。或者用手性起始原料，直接製備得到。本發明中的光學純化合物的分離通常是使用製備色譜完成的，採用手性色譜柱，達到分離手性化合物的目的。
本發明中手性碳原子用*標記。例如
Figure 02_image164
中環戊基上的碳原子為手性碳，包含
Figure 02_image166
和
Figure 02_image168
兩個結構的化合物。
本發明中藉由手性色譜柱分離得到的異構體用P1和P2表示，例如實施例6-P1和實施例6-P2代表實施例6化合物藉由手性拆分得到的兩種異構體。
本發明還包括同位素標記的化合物，包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別例如 2H、 3H、 13C、 11C、 14C、 15N、 18O、 17O、 31P、 32P、 35S、 18F和 36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本發明化合物都屬於本發明的範圍。較佳地，同位素選自下組： 2H、 3H、 11C和 18F。更佳地，放射性同位素是 2H。具體地說，氘代的化合物旨在包含在本發明的範圍內。
當一個連接基團的數量為0時，比如-(CH 2) n-CH=CH-，n=0表示該連接基團為化學鍵，即-CH=CH-。
當一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環上時，這種取代基可以與這個環上的任意原子相鍵合。例如，結構單元
Figure 02_image035
表示取代基R 3可以在環A上的任意一個位置發生取代。
術語“藥學上可接受的載體”是指本領域通常可接受的用於將生物活性藥劑遞送給動物、特別是哺乳動物的介質，根據給藥方式和劑型的性質包括佐劑、賦形劑或賦形物，例如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動調節劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、助懸劑、甜味劑、調味劑、芳香劑、抗菌劑、抗真菌劑、潤滑劑和分散劑。藥學上可接受的載體在本領域普通技術人員的眼界範圍內根據大量因素配製。其包括但不限於：配製的活性藥劑的類型和性質，要將含有該藥劑的組合物給藥的對象，組合物的預期給藥途徑，和目標治療適應症。藥學上可接受的載體包括含水介質和非水介質這兩者以及多種固體和半固體劑型。除了活性藥劑以外，這樣的載體包括許多不同的成分和添加劑，因多種原因(例如穩定活性藥劑、粘合劑等)在處方中包括的另外的成分對於本領域普通技術人員是眾所周知的。術語“ 賦形劑”通常是指配製有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質。
術語“有效預防或治療量”是指本發明化合物或其藥學上可接受的鹽指以適用於任何醫學治療和/或預防的合理效果/風險比治療障礙的足夠量的化合物。但應認識到，本發明式(I)所示化合物或其藥學上可接受的鹽和組合物的總日用量須由主診醫師在可靠的醫學判斷範圍內作出決定。對於任何具體的患者，具體的治療有效劑量水平鬚根據多種因素而定，所述因素包括所治療的障礙和該障礙的嚴重程度；所採用的具體化合物的活性；所採用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所採用的具體化合物的給藥時間、給藥途徑和***率；治療持續時間；與所採用的具體化合物組合使用或同時使用的藥物；及醫療領域公知的類似因素。例如，本領域的做法是，化合物的劑量從低於為得到所需治療效果而要求的水平開始，逐漸增加劑量，直到得到所需的效果。
術語“任選被取代”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的，例如，術語“ 可任選地被一個或多個R 1c所取代”是指可以被一個或多個R 1c取代，也可以不被R 1c取代。當任何變數(例如R 1c)在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。例如，如果一個基團被0-2個R 1c所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R 1c所取代，並且每種情況下的R b都有獨立的選項。
除非另有規定，“環”是指飽和的、部分飽和的或不飽和的單環以及多環。
除非另有規定，術語“雜環基”是指取代或未取代的飽和或不飽和的非芳香環，且包含1-3個選自N、O或S的雜原子。本發明所述的“雜環基”是指含有至少一個雜原子作為環原子、去除一個氫原子所衍生的、非芳族的環狀基團；包括飽和或部分飽和的單環雜環基和多環雜環基；所述雜環基與連接位置無關（即，可以藉由碳原子或雜原子結合）。所述多環雜環基包括稠雜環基、螺雜環基、橋雜環基。
所述的“稠雜環基”是指兩個或兩個以上的環相互間共用兩個相鄰的環原子所形成的環狀結構，且其中至少一個環為雜環；所述稠雜環基包括單雜環基與單雜環基或環烷基或芳基或雜芳基稠和而成的環狀結構，亦包括雜芳基與環烷基或單雜環基稠和而成的環狀結構。
所述的“螺雜環基”是指兩個或兩個以上的環相互間共用一個環原子所形成的環狀結構、且至少一個環為雜環。
所述的“橋雜環基”是指兩個或兩個以上的環相互間共用非相鄰的環原子所形成的環狀結構、且至少一個環為雜環。
本發明所述的雜環基較佳為5-10員單雜環基、5-10員稠雜環基、5-10員螺雜環基或5-10員橋雜環基；進一步地，雜環基較佳為5-6員單雜環基、8-10員稠雜環基、8-10員螺雜環基或7-9員橋雜環基。
“5-10員雜環基”實例包括，但不限於四氫吡咯基、呱啶基、呱嗪基、嗎啉基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、1 ,3-二氧戊環、1 ,4-二氧六環、
Figure 02_image170
、
Figure 02_image172
、
Figure 02_image174
或
Figure 02_image176
等。
本發明中，當雜環基兩端都被取代時為亞雜環基，例如結構單元
Figure 02_image035
環A選自5-10員雜環基時，其實質代表環A為5-10員亞雜環基，包括不限於
Figure 02_image023
、
Figure 02_image029
、
Figure 02_image031
或
Figure 02_image033
。
除非另有規定，術語“芳基”是指不飽和的、通常為芳族的烴基，其可為單環或稠合在一起的多個環。芳基的實例包括但不限於苯基、萘基。
除非另有規定，術語“雜芳基”意指穩定的單環或者多環的芳族烴，較佳包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子。較佳5-12員雜芳基，更佳5-6員雜芳基；雜芳基的實例包括但不限於吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、異噁唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶基、
Figure 02_image017
或
Figure 02_image019
。
本發明中，當雜芳基兩端都被取代時為亞雜芳基，例如式(I')或式(I)化合物中的L 1選自5-6員雜芳基時，其實質代表L 1為5-6員亞雜芳基，包括不限於
Figure 02_image017
或
Figure 02_image019
。
Figure 02_image001
Figure 02_image009
除非另有規定，“環烷基”是指飽和的單環或多環烴基。環烷基較佳為C 3-8環烷基，更佳為C 3-6環烷基，進一步較佳為C 5-6環烷基，環烷基的實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基或
Figure 02_image181
。
本發明中，當環烷基兩端都被取代時為亞環烷基，例如結構單元
Figure 02_image035
中，環A選自C 5-6環烷基時，其實質代表環A為C 5-6亞環烷基，包括不限於
Figure 02_image021
或
Figure 02_image025
。
除非另有規定，“環烯基”是指含有雙鍵的單環或多環烴基。環烯基較佳為C 3-6環烯基，更佳C 5-6環烯基，實例包括但不限於環丙烯、環丁烯、環戊烯、環己烯、1,3-環己二烯或1,4-環己二烯。
本發明中，當環烯基兩端都被取代時為亞環烯基，例如結構單元
Figure 02_image035
環A選自C 5-6環烯基時，其實質代表環A為C 5-6亞環烯基，包括不限於
Figure 02_image027
。
本發明中環B選自
Figure 02_image003
的情形，當
Figure 02_image007
為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7與其相連的C原子一起形成苯基或C 5-6環烷基，其所對應的
Figure 02_image003
是指
Figure 02_image185
、
Figure 02_image187
或
Figure 02_image189
。
除非另有規定，術語“烷基”用於表示直鏈或支鏈的飽和烴基。較佳為C 1-6的烷基，更佳為C 1-4的烷基，烷基的實例包括，但不限於甲基，乙基，丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基，新戊基、正己基等。
除非另有規定，術語“鹵素”表示氟、氯、溴或碘原子。
特別說明，本文中所有的取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
在本發明實施例中，標題化合物的命名是借助Chemdraw藉由化合物結構轉化過來的。若化合物名稱與化合物結構存在不一致的情況，可藉由綜合相關資訊和反應路線輔助確定；無法藉由其他來確認的，以給出的化合物結構式為准。本發明中部分化合物的製備方法引用了前述類似化合物的製備方法。本領域人員應當知曉，在使用或參照使用其引用的製備方法時，反應物的投料比、反應溶劑、反應溫度等可根據反應物的不同，進行適當的調整。
本發明的化合物可以藉由本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，較佳的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
下面藉由實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。本文已經詳細地描述了本發明，其中也公開了其具體實施例方式，對本領域的技術人員而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。
實驗儀器匯總：
本發明的化合物結構是藉由核磁共振（NMR）或/和液質聯用色譜（LC-MS），或超高效液質聯用色譜（UPLC-MS）來確定的。NMR化學位移（δ）以百萬分之一（ppm）的單位給出。NMR的測定是用Bruker Neo 400M或者Bruker Ascend 400核磁儀器，測定溶劑為氘代二甲基亞碸（DMSO- d 6 ），氘代甲醇（CD 3OD）和氘代氯仿（CDCl 3），重水（D 2O），內標為四甲基矽烷（TMS）。
液質聯用色譜LC-MS的測定用Agilent 1260-6125B single quadrupole mass spectrometer，柱子為 Welch Biomate column (C18, 2.7 μm, 4.6×50 mm) 或者waters H-Class SQD2，柱子為 Welch Ultimate column (XB-C18, 1.8 μm, 2.1×50 mm)，質譜儀離子源為電噴霧離子化。
超高效液質聯用色譜UPLC-MS的測定用Waters UPLC H-class SQD質譜儀（離子源為電噴霧離子化）。
HPLC的測定使用Waters e2695-2998或Waters ARC和Agilent 1260或 Agilent Poroshell HPH高效液相色譜。
製備HPLC使用Waters 2555-2489 (10 µm，ODS 250cm ×5cm）或GILSON Trilution LC，柱子為Welch XB-C18 柱 (5μm, 21.2×150 mm)。
手性HPLC測定使用waters acquity UPC2；柱子為 Daicel chiralpak AD-H (5 μm, 4.6×250 mm), Daicel chiralpak OD-H (5 μm, 4.6×250 mm), Daicel chiralpak IG-3 (3 μm, 4.6×150 mm), Chiral Technologies Europe AD-3 (3 μm, 3.0×150 mm) 和 Trefoil TM Technology Trefoil TM AMY1 (2.5 μm, 3.0×150 mm)。
超臨界流體色譜（SFC）使用waters SFC 80Q，柱子為Daicel Chiralcel OD/OJ/OZ (20 × 250 mm, 10 μm) 或 Daicel Chiralpak IC/IG/IH/AD/AS (20 × 250 mm, 10 μm)。
薄層層析矽膠板使用煙臺江友矽膠開發有限公司GF254矽膠板或乳山市上邦新材料有限公司GF254矽膠板，TLC採用的規格是0.15 mm~0.20 mm，製備型20×20 cm，柱層析一般使用於成化工200~300目矽膠為載體。
本發明實施例中的起始原料是已知的並且可以在市場上買到，或者可以採用或按照本領域已知的方法來合成。
在無特殊說明的情況下，本發明的所有反應均在連續的磁力攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氣氛下進行，溶劑為乾燥溶劑，反應溫度單位為攝氏度或°C。
本申請部分製備實施例獲得了化合物的三氟乙酸鹽，本領域技術人員可以理解，藉由三氟乙酸鹽製備化合物，或藉由化合物製備三氟乙酸鹽均為較常規的手段，本申請所公開的化合物三氟乙酸鹽結構或其製備可以視為等同公開了游離體化合物結構及其製備。
本發明實施例中使用的縮寫及其對應的化學名稱如下：
縮寫 化學名稱
9-BBN 9-硼雙環(3,3,1)-壬烷
THF 四氫呋喃
PdCl 2(dppf) [1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀
Boc 叔丁氧羰基
TBDPS 叔丁基二苯基矽基
TFA 三氟乙酸
Et 3Si 三乙基矽基
Brettphos Pd G2 (2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2’,4’,6’-三異丙基-1,1’-二苯基)(2’-氨基-1,1’-二苯基-2-基)氯化鈀(II)
TEAC 四乙基氯化銨
DIPEA N,N-二異丙基乙胺
中間體：Int-1
3-溴-7-碘喹啉-2-胺
Figure 02_image191
反應路線:
Figure 02_image193
操作步驟：
步驟A:向反應瓶中加入7-硝基喹啉（25 g，143 mmol）和醋酸溶液（50 mL）。置換反應系統為氮氣系統，然後冷卻到0°C。向反應系統中逐滴滴加N-溴代琥珀醯亞胺(50.6 g，284mmol)，反應系統繼續在100°C攪拌2小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(500 mL × 3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (300 mL × 3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到3-溴-7-硝基喹啉(24.5 g)。
MS (ESI) M/Z: 253.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.18 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.79 (t, J= 11.4 Hz, 1H), 8.41 (dd, J= 9.0, 2.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 9.0 Hz, 1H).
步驟B: 向反應瓶中加入3-溴-7-硝基喹啉 (24.5 g，97 mmol)和氯化銨 (20.0 g，374mmol) 溶於混合溶劑(乙醇/水=1.5/1，體積比，250 mL）中，在室溫中緩慢加入鋅粉(65.4 g，1000 mmol)，然後系統置換為氮氣氛圍。滴加完畢後，反應系統在80°C下攪拌2小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入水淬滅。然後加入二氯甲烷（50 mL）和甲醇（5 mL），攪拌30分鐘，過濾反應液。濾液濃縮得到油狀粗產物，用矽膠柱層析純化得到3-溴喹啉-7-胺（6.2 g）。
MS (ESI) M/Z: 223.0 [M+H] +.
步驟C：向反應瓶中加入硫酸（108 mL），然後0°C下緩慢加入3-溴喹啉-7-胺（6.2g，27.8 mmol）溶液（86 mL）。在0°C下攪拌10分鐘之後，將亞硝酸鈉（3.8 g，55.1 mmol）溶液（6 mL）緩慢滴入。隨後繼續攪拌30分鐘，在0°C下向反應系統中緩慢加入碘化鈉（12.5g，83.4 mmol）溶液。反應液在60°C下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液冷卻到室溫，向反應液中加入乙酸乙酯（50 mL）攪拌10分鐘，然後過濾，濾餅反復用二氯甲烷和甲醇的混合溶液洗滌，合併濾液，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到3-溴-7-碘喹啉（4 g，收率25.6%）。
MS (ESI) M/Z: 333.8 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.16 (dd, J= 5.3, 2.3 Hz, 1H), 8.96 (t, J= 3.6 Hz, 1H), 8.82 (dd, J= 7.8, 2.2 Hz, 1H), 8.40 (dd, J= 9.0, 2.3 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 9.0 Hz, 1H).
步驟D：在室溫下，將3-溴-7-碘喹啉（500 mg，1.5 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中。在0°C下緩慢加入間氯過苯甲酸（1.03 g，6 mmol），反應液在室溫下攪拌12小時。
LCMS監測反應，0°C下向反應液中加入水（30 mL）淬滅，然後緩慢加入氯化銨的飽和水溶液調節pH至7，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（15 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到3-溴-7-碘喹啉1-氧化物（160 mg）。
MS (ESI) M/Z: 349.8 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.96 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.73 (t, J= 13.1 Hz, 1H), 8.44 (d, J= 14.5 Hz, 1H), 7.97 (dd, J= 8.6, 1.5 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 8.6 Hz, 1H).
步驟E：在室溫下，將3-溴-7-碘喹啉1-氧化物（160 mg，0.45 mmol），溶於三氯甲烷（10 mL）中。然後在0°C下緩慢加入三氯氧磷（10 mL），反應系統抽真空換氮氣多次。反應液在70°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。加入二氯甲烷（20 mL）然後用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH值到7，混合液用乙酸乙酯（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（15 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到3-溴-2-氯-7-碘喹啉（90 mg）。
MS (ESI) M/Z: 367.8 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.96 (s, 1H), 8.44 (d, J= 18.2 Hz, 1H), 8.03 (t, J= 18.1 Hz, 1H), 7.79 (t, J= 10.1 Hz, 1H).
步驟F：在室溫下，將3-溴-2-氯-7-碘喹啉（90 mg，0.24mmol）溶於混合溶液（乙醇/氨水=1/1，體積比，8 mL）中。隨後反應液在微波100°C下攪拌20小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮，混合液用二氯甲烷（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到3-溴-7-碘喹啉-2-胺（76 mg）。
MS (ESI) M/Z: 348.8 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.39 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.48 (dt, J= 19.4, 5.0 Hz, 2H), 6.84 (brs, 2H).
實施例1
(1R,2S,3R,5S)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image195
反應路線:
Figure 02_image197
Figure 02_image199
Figure 02_image201
操作步驟：
步驟A：將6-肼基嘧啶-4-醇(2.0g，15.9 mmol)和環戊酮(1.3 g，15.5mmol)溶於乙醇(15mL)。反應系統加熱至80°C並攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓並將所得固體溶於二苯醚(20mL)。反應系統加熱至250°C並攪拌8小時。待反應液冷卻至室溫，向反應液中加入甲基叔丁基醚 (20 mL)，反應液中產生大量固體，過濾並用甲基叔丁基醚 (10 mL)洗滌固體，濾餅用減壓蒸餾懸乾得到5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酚粗產品(2.7 g)。
MS (ESI) M/Z: 176.2 [M+H] +.
步驟B：將5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酚(2.7g，15.4 mmol)溶於三氯氧磷(20mL)。反應系統加熱至100°C並攪拌3小時。LCMS監測顯示原料消失後，在減壓蒸餾下去除大部分三氯氧磷。反應液用乙酸乙酯(50mL)稀釋並緩慢滴入氫氧化鈉(1N，50mL)水溶液中，萃取有機相，有機相用飽和食鹽水(300 mL×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到4-氯-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(370mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.35 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 4H), 2.49 - 2.42 (m, 2H).
步驟C：在室溫條件下，將4-氯-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(243.0mg，1.3 mmol)溶於四氫呋喃 (4 mL)中。隨後，向其中加入叔丁醇鉀 (141.3mg，1.3mmol)。反應液在室溫下繼續攪拌2小時。減壓蒸餾除去溶劑，加入二異丙基乙氨(2 mL)並超聲5分鐘，過濾，收集濾餅，減壓濃縮得化合物4-氯-6,7-二氫-5H-環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8-化鉀（291.1mg，收率96.9%）。
步驟D：在一個單口瓶中，加入三氟甲磺酸酐(1.16 g，4.11mmol)的二氯甲烷(20 mL)溶液，冰浴下向反應液中滴加(3aS,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(500 mg，2.74 mmol，參考文獻J. Org. Chem. 2004, 69, 3993-3996方法製備，其全文內容藉由引用結合到本申請中)和吡啶(649 mg，8.22 mmol)的二氯甲烷混合液(10 mL)。反應液在此溫度下繼續攪拌半小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入冰水淬滅。反應液用二氯甲烷(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(10 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基三氟甲烷磺酸酯(685 mg)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 5.83 - 5.69 (m, 1H), 5.19 - 5.06 (m, 2H), 5.05 - 4.96 (m, 1H), 4.63 (dd, J= 5.5 Hz, 1H), 4.51 (dd, J= 5.9, 1.8 Hz, 1H), 2.94 - 2.81 (m, 1H), 2.45 - 2.31 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.53 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
步驟E：在0°C下，將4-氯-6,7-二氫-5H-環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8-化鉀(291.1mg，1.26 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中，然後將(3aR,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基三氟甲烷磺酸酯(331.8mg，1.05 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(0.5 mL)緩慢加入反應液中。反應液在室溫下繼續攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(15 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(300 mg)。
MS (ESI) M/Z: 360.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.52 (s, 1H), 5.96 (m, 1H), 5.25 - 5.06 (m, 2H), 5.06 - 4.98 (m, 1H), 4.92 (dd, J= 7.3, 5.4 Hz, 1H), 4.56 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 3.20 - 3.06 (m, 1H), 3.06 - 2.95 (m, 1H), 2.95 - 2.86 (m, 2H), 2.79 - 2.68 (m, 1H), 2.46 - 2.51 (m, 2H) 2.38 - 2.24 (m, 2H), 1.49 (s, 3H), 1.22 (s, 3H).
步驟F：在室溫下，將4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(180mg，0.50 mmol)，7-溴喹啉-2-胺(133.5mg，0.60 mmol)和四乙基氯化銨(91.1mg，0.55mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(22.4mg，0.1 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(322.5mg，2.5 mmol)。反應液在80°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(140 mg)。
MS (ESI) M/Z: 502.0 [M+H] +.
步驟G：在室溫條件下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(45mg，0.09 mmol) 溶於氨水/異丙醇(2mL/0.8 mL)中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫基-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺(21.0mg)。
MS (ESI) M/Z: 483.2 [M+H] +.
步驟H：將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫基-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.03 mmol) 和鈀炭(5mg)溶於甲醇(4 mL)，反應系統先用氮氣置換空氣，然後再用氫氣置換兩次，反應在室溫和氫氣條件下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應過濾去除鈀炭後液縮得到粗產品化合物8-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(10.0mg，收率68.7%)。
MS (ESI) M/Z: 485.2 [M+H] +.
步驟I：在室溫下，將8-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.02 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5S)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)環戊烷-1,2-二醇(2.0mg)。
MS (ESI) M/Z: 445.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.82 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.03 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 2H), 6.32 (s, 2H), 4.79 - 4.66 (m, 2H), 4.62 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.25 (dd, J= 13.7, 6.3 Hz, 1H), 3.77 - 3.68 (m, 1H), 2.85 (d, J= 5.2 Hz, 4H), 2.77 - 2.62 (m, 2H), 2.41 - 2.33 (m, 2H), 2.19 - 2.06 (m, 1H), 1.99 - 1.79 (m, 2H), 1.72 - 1.51 (m, 2H).
實施例2
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8-(5H)-基)-5-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image203
反應路線:
Figure 02_image205
操作步驟：
步驟A：在室溫下，8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(14mg，0.03 mmol)溶於甲醇(1.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1.5 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇(4.0mg)。
MS (ESI) M/Z: 443.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.98 (s, 1H), 7.82 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.56 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.44 - 7.26 (m, 2H), 6.68 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.59 - 6.53 (m, 2H), 6.46 (s, 2H), 6.38 (s, 2H), 4.86 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 4.83 - 4.73 (m, 1H), 4.29 (dd, J= 12.5, 6.2 Hz, 1H), 3.93 (q, J= 6.0 Hz, 1H), 2.96 - 2.80 (m, 4H), 2.77 - 2.64 (m, 1H), 2.43 - 2.35 (m, 2H), 2.25 - 2.11 (m, 1H), 2.05 - 1.82 (m, 1H).
實施例3
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image207
反應路線:
Figure 02_image209
操作步驟：
步驟A：在室溫條件下，將4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(400mg，1.11 mmol) 溶於氨水/異丙醇（7mL/5mL）中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺（170.0mg，收率45.0%）。
MS (ESI) M/Z: 341.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺（30mg，0.09 mmol），3-溴-7-碘喹啉-2-胺（37.1mg，0.11 mmol）和四乙基氯化銨（16.0mg，0.10mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（3 mL）中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀（3.9mg，0.02 mmol），N,N-二異丙基乙胺（56.8mg，0.44 mmol）。反應液在70°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（20 mL）淬滅，混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（15 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺（26 mg）。
MS (ESI) M/Z: 560.8 [M+H] +.
步驟C：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺（40mg，0.07 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（3 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇（1 mL）再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇（10.0mg）。
MS (ESI) M/Z: 520.8 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.24 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.44 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.76 - 6.51 (m, 2H), 4.94 - 4.89 (m, 1H), 4.49 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 4.12 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 3.03 - 2.82 (m, 5H), 2.64 - 2.46 (m, 2H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.05 (dd, J= 23.3, 10.9 Hz, 1H).
實施例4
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-(甲胺基)-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image211
反應路線:
Figure 02_image213
操作步驟：
步驟A：在室溫條件下，將4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(200 mg，0.56 mmol) 溶於甲氨/異丙醇(1mL/5mL)中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-N-甲基-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(140.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:355.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-N-甲基-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(100 mg，0.28 mmol)，7-溴喹啉-2-胺(75.2 mg，0.34 mmol)和四乙基氯化銨(51.0 mg, 0.31mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(12.6 mg，0.056 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(180.6 mg，1.4 mmol)。反應液在100°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(50 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-N-甲基-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg)。
MS (ESI) M/Z: 497.0[M+H] +.
步驟C：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-N-甲基-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(40 mg，0.07 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-(甲胺基)-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇(35.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:457.0[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.28 (s, 1H), 7.11 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 6.85 - 6.75 (m, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.66 - 6.54 (m, 1H), 5.98 (dd, J= 8.8, 4.1 Hz, 1H), 5.88 - 1.87( m, 1H), 5.82 - 5.69 (m, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 1H), 3.70 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 3.34 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.20 - 2.01 (m, 5H), 1.79 - 1.67 (m, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 1H), 1.29 - 1.21 (m, 1H).
實施例5
(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image215
反應路線:
Figure 02_image217
操作步驟：
步驟A: 向反應瓶中加入化合物8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，0.235 mmol)的四氫呋喃(3 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN(2.35 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，4.7 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到65°C，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(249.1 mg，1.175 mmol)的水溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(79 mg，0.225 mmol)和PdCl 2(dppf)(18 mg，0.024mmol)的四氫呋喃(1 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到65°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠板層析純化得到8-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(60 mg)。
MS (ESI) M/Z: 562.8[M+H] +, 564.8[M+H+2] +.
步驟B：在室溫下，將化合物8-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(60 mg，0.106 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4 M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物被溶於甲醇(2mL)，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8-9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇(5.5 mg)。
MS (ESI) M/Z: 523.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.26 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.20 (dd, J= 8.3, 1.5 Hz, 1H), 4.82 - 4.77 (m, 1H), 4.44 (dd, J= 7.9, 6.2 Hz, 1H), 3.94 - 3.86 (m, 1H), 3.01 - 2.74 (m, 6H), 2.56 - 2.46 (m, 2H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.12 - 1.96 (m, 2H), 1.88 - 1.69 (m, 2H).
實施例6
(1S,2R,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-((1R)-2-(2-氨基喹啉-7-基)環丙基)環戊烷-1,2-二醇及其異構體
Figure 02_image219
反應路線:
Figure 02_image221
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(250.0 mg，0.50 mmol)，二碳酸二叔丁酯(326.8 mg，1.5 mmol)和4-二甲氨基吡啶(12.2 mg，0.1mmol)溶於四氫呋喃(12 mL)中。隨後，向上述溶液中加入三乙胺(202.4 mg，2.0 mmol）。反應液在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。向粗產品中加入水(100 mL）淬滅，混合液用乙酸乙酯(100 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基(7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(250 mg，收率71.2%）。
MS (ESI) M/Z: 724.3 [M+Na] +.
步驟B：在-10°C下，將氫氧化鉀(1.7 g，25 mL水）水溶液緩慢加入到***(60mL）中，再加入1-甲基-1-亞硝基脲(3.0 g，29.1mmol）反應液在-10°C下繼續攪拌1小時。將反應液冷卻至-78°C，水相凍住倒出有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，得到現製備的重氮甲烷的***溶液(50mL）。
在室溫下，將二叔丁基(7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(150 mg，0.21 mmol)和醋酸鈀(43.2 mg，0.19 mmol)溶於四氫呋喃(6 mL)，將反應系統置換氮氣並冷卻到-78°C，將現製備的重氮甲烷的***溶液(50mL)緩慢加入到反應液中。反應系統緩慢回到室溫，並在在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基(7-((2R)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(102 mg)。
MS (ESI) M/Z:616.3 [M+H-Boc] +.
步驟C：在室溫條件下，將二叔丁基(7-((2R)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(150.0 mg，0.21 mmol) 溶於氨水/異丙醇(10 mL/3 mL）中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌24小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮得到粗產品8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-氨基喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(90 mg）。
MS (ESI) M/Z:497.2 [M+H] +.
步驟D：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-氨基喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(90 mg，0.19 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化。純化條件如下，製備柱welch XBC18，21.2×150mm，5μm(粒徑）；流動相：水(含有10毫摩爾/升碳酸氫銨）和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：在10分鐘內，乙腈從40vol%升到60vol%；檢測波長：214 nm。收集產品，減壓凍乾。得到(1S,2R,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-((1R)-2-(2-氨基喹啉-7-基)環丙基)環戊烷-1,2-二醇的兩個異構體(實施例6-P1：15.0 mg，實施例6-P2：13.0 mg)。
實施例6-P1：
HPLC：保留時間6.254分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 457.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.91 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.00 (dd, J= 8.3, 1.6 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.93 - 4.85 (m, 1H), 4.56 (dd, J= 8.4, 5.7 Hz, 1H), 4.08 (dd, J= 5.6, 4.2 Hz, 1H), 2.95 - 2.70 (m, 4H), 2.52 - 2.27 (m, 3H), 2.02 - 1.83 (m, 2H), 1.80 - 1.65 (m, 1H), 1.51 - 1.29 (m, 1H), 1.18 - 1.02 (m, 2H).
實施例6-P2：
HPLC：保留時間6.533分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
實施例7
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(((2-氨基喹啉-7-基)氧基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image223
反應路線:
Figure 02_image225
操作步驟：
步驟A: 在一個單口瓶中，加入(3aR,6aR)-2,2-二甲基-3a,6a-二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮 (830 mg，5.39 mmol)，二苯甲酮(196 mg，1.08 mmol)和甲醇(350 mL)。然後用氮氣連續鼓泡1小時，所得反應液在高壓汞燈的照射下攪拌1小時(暗室操作)。
TLC監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,6R,6aR)-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮(630 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.92 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 4.63 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.18 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.64 - 3.52 (m, 1H), 3.46 - 3.38 (m, 1H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.41 - 2.34 (m, 1H), 1.31 (s, 3H), 1.26 (s, 3H).
步驟B: 在一個單口瓶中，加入(3aR,6R,6aR)-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮(450 mg，2.42 mmol)，叔丁基二苯基氯矽烷(666 mg，2.42 mmol)和無水二氯甲烷(20 mL)。反應瓶置於冰浴中降溫至零°C，然後分批加入咪唑(329 mg，4.84 mmol)。所得反應液被升到室溫，繼續攪拌3小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入冰水淬滅。反應液用二氯甲烷(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (20 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮(550 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.63 - 7.55 (m, 4H), 7.52 - 7.42 (m, 6H), 4.73 - 4.60 (m, 1H), 4.21 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.78 (dd, J= 10.1, 2.9 Hz, 1H), 3.59 (dd, J= 10.1, 3.6 Hz, 1H), 2.80 - 2.61 (m, 1H), 2.54 - 2.52 (m, 1H), 2.49 - 2.45 (m, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 0.95 (s, 9H).
步驟C: 在一個三口瓶中加入(3aR,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮(640 mg，1.5 mmol)的四氫呋喃(15 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後逐滴滴加四氫鋁鋰(3.0 mmol)的四氫呋喃溶液( 2.5M，1.2 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌1小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入十水合硫酸鈉淬滅直至沒有氣泡冒出。然後加入四氫呋喃攪拌30分鐘，過濾反應液。濾液被濃縮得到油狀粗產物，用矽膠柱層析純化得到(3aS,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(490 mg)。
步驟D: 在一個單口瓶中，加入三氟甲磺酸酐(486 mg，1.73 mmol)的二氯甲烷(15 mL)溶液, 冰浴下向反應液中滴加(3aS,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(490 mg，1.15 mmol)和吡啶(272 mg，3.45 mmol)的二氯甲烷的混合液(5 mL)。反應液在此溫度下繼續攪拌半小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入冰水淬滅。反應液用二氯甲烷(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(10 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基三氟甲基磺酸酯(640 mg)。
步驟E: 冰浴下，向4-氯-6,7-二氫-5H-環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8-鉀鹽(266 mg，1.15 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液逐滴滴加(3aR,4S,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基三氟甲基磺酸酯(640 mg，1.15 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液。滴加完畢後，反應液在室溫下攪拌過夜。
TLC檢測顯示新點生成，反應液被倒入冰水中。反應液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (10 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-氯-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(492 mg)。
MS (ESI) M/Z: 602.2 [M+H] +.
步驟F: 在一個三口瓶中加入8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-氯-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(492 mg，0.82 mmol)的四氫呋喃(10 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍，逐滴滴加四丁基氟化銨(2.0 mmol )的四氫呋喃溶液(1.0M，2.0 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(15 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)甲醇(220 mg)。
MS (ESI) M/Z: 364.0 [M+H] +.
步驟G: 在室溫下，將((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)甲醇(170 mg，0.47 mmol)和2-氯喹啉-7-醇(126 mg，0.71 mmol)溶於甲苯(2 mL)中。將2-(三丁基亞正膦基)乙腈(453 mg，1.88 mmol)溶於甲苯(0.5 mL)中。隨後，在室溫下向反應系統中緩慢加入2-(三丁基亞正膦基)乙腈的甲苯溶液。反應液在油浴下攪拌4小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(15 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((2-氯喹啉-7-基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(190 mg)。
MS (ESI) M/Z: 525.0 [M+H] +.
步驟H: 在室溫條件下，將4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((2-氯喹啉-7-基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(190mg，0.36 mmol) 溶於氨水/異丙醇(5mL/1.5mL)中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌24小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((2-氨基喹啉-7-基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺(190 mg)。
MS (ESI) M/Z: 487.0[M+H] +.
步驟I: 在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((2-氨基喹啉-7-基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺(58 mg，0.12 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8-9。混合液用二氯甲烷(5 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(((2-氨基喹啉-7-基)氧基)甲基)環戊烷-1,2-二醇(12.8 mg)。
MS (ESI) M/Z: 447.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.78 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.81 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.58 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 2H), 6.31 (s, 2H), 4.96 - 4.84 (m, 1H), 4.80 (dd, J= 9.9, 5.5 Hz, 2H), 4.35 (dt, J= 8.8, 6.2 Hz, 1H), 4.19 - 4.05 (m, 2H), 3.94 (dd, J= 8.8, 4.4 Hz, 1H), 2.98 - 2.80 (m, 4H), 2.44 - 2.34 (m, 3H), 2.19 (dt, J= 12.6, 8.4 Hz, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 1H).
實施例8
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(((2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)氧基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image227
製備方法參考實施例7，最後得到目標產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(((2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)氧基)甲基)環戊烷-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 501.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.72 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.02 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.77 (dd, J= 8.7, 2.4 Hz, 1H), 6.61 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 2H), 4.90 (dd, J= 19.6, 8.8 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 10.2, 5.6 Hz, 2H), 4.35 (dt, J= 8.8, 6.2 Hz, 1H), 4.13 (p, J= 9.8 Hz, 2H), 3.94 (dd, J= 8.6, 4.6 Hz, 1H), 3.28 - 3.22 (m, 2H), 2.97 - 2.81 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 3H), 2.18 (dt, J= 13.0, 8.6 Hz, 1H), 1.79 (dd, J= 21.0, 11.0 Hz, 1H), 1.18 - 1.02 (m, 1H), 0.50 - 0.43 (m, 2H), 0.29 - 0.21 (m, 2H).
實施例9
(1S,2R,3R,5R)-3-((1R)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊基-1,2-二醇及其異構體
Figure 02_image229
反應路線:
Figure 02_image231
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將4-氯-8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(137.2mg，0.38 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(140.0mg，0.40 mmol)和四乙基氯化銨(69.2mg，0.42mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(6 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(17.1mg，0.07 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(245.1mg，1.9 mmol)。反應液在70°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(100 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(100 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(150 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物3-溴-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(125 mg)。
MS (ESI) M/Z:580.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將3-溴-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(145.0mg，0.25mmol)，二碳酸二叔丁酯(191.3mg，0.88mmol)和4-二甲氨基吡啶(6.1mg，0.05mmol)溶於四氫呋喃(7 mL)中。隨後，向上述溶液中加入三乙胺(126.5mg，1.25mmol)。反應液在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。向粗產品中加入水(50 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物二叔丁基(3-溴-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(190 mg)。
MS (ESI) M/Z: 802.2 [M+Na] +.
步驟C：在-10°C下，將氫氧化鉀(1.7g)的水溶液(25mL)緩慢加入到***(60mL)中，再加入1-甲基-1-亞硝基脲(3.0g，29.1mmol)反應液在-10°C下繼續攪拌1小時。將反應液冷卻至-78°C，水相凍住倒出有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，得到現製備的重氮甲烷的***溶液(50mL)。
在室溫下，將二叔丁基(3-溴-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(160mg，0.21 mmol)和醋酸鈀(41.4mg，0.18 mmol)溶於四氫呋喃(4mL)，將反應系統置換氮氣並冷卻到-78°C，將現製備的重氮甲烷的***溶液(50mL)緩慢加入到反應液中。反應系統緩慢回到室溫，並在在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物二叔丁基(3-溴-7-((2R)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(85 mg)。
MS (ESI) M/Z: 816.3 [M+Na] +.
步驟D：在室溫條件下，將二叔丁基(3-溴-7-((2R)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(75.0mg，0.09 mmol) 溶於混合溶液(氨水/異丙醇=7/3，體積比，10 mL)中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌24小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮得到粗產品化合物8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(45mg)。
MS (ESI) M/Z: 575.2 [M+H] +.
步驟E：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(45mg，0.08 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化。純化條件如下，製備柱welch XBC18，21.2×150mm，5μm(粒徑)；流動相：水(含有10毫摩爾/升碳酸氫銨)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：在10分鐘內，乙腈從40vol%升到60vol%；檢測波長：214 nm。收集產品，減壓凍乾。得到(8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺的兩個異構體(實施例9-P1：7.1 mg，實施例9-P2：5.5mg)。
實施例9-P1
HPLC：保留時間7.144分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 535.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.22 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.51 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.05 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 4.82 - 4.74 (m, 1H), 4.58 (dd, J= 8.3, 5.7 Hz, 1H), 4.17 - 3.95 (m, 1H), 2.88 (t, J= 6.4 Hz, 4H), 2.53 - 2.27 (m, 3H), 2.02 - 1.84 (m, 2H), 1.79 - 1.65 (m, 1H), 1.52 - 1.37 (m, 1H), 1.20 - 0.99 (m, 2H).
實施例9-P2
HPLC：保留時間7.376分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 535.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.24 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.53 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.08 (dd, J= 8.3, 1.6 Hz, 1H), 4.83 - 4.79 (m, 1H), 4.51 (dd, J= 8.2, 6.0 Hz, 1H), 4.07 - 3.96 (m, 1H), 3.03 - 2.83 (m, 4H), 2.59 - 2.46 (m, 2H), 2.33 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 2.02 - 1.83 (m, 1H), 1.79 - 1.67 (m, 1H), 1.40 - 1.29 (m, 1H), 1.13 - 1.06 (m, 1H), 1.06 - 0.95 (m, 1H).
實施例10
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-((E)-2-(3-溴-2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image233
反應路線:
Figure 02_image235
操作步驟：
步驟A：在室溫條件下，將3-溴-2-氯-7-碘喹啉(150 mg，0.43 mmol) 和環丙基甲胺(2 mL)溶於乙醇(2 mL)中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到3-溴-N-(環丙基甲基)-7-碘喹啉-2-胺(70.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:402.8 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(20.0 mg，0.059 mmol)，3-溴-N-(環丙基甲基)-7-碘喹啉-2-胺(24.7 mg，0.062 mmol)和四乙基氯化銨(10.7 mg，0.065 mmol)溶於N，N-二甲基甲醯胺(1.5 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(2.6 mg，0.012 mmol)，N，N-二異丙基乙胺(38.1 mg，0.29 mmol)。反應液在70°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(3-溴-2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(25.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:308.2 [2M+2H] 2+.
步驟C：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(3-溴-2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(25 mg，0.04 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-((E)-2-(3-溴-2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇(6.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:575.0[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.60 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.39 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.69 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 5.5 Hz, 2H), 6.46 (s, 2H), 4.87 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 4.84 - 4.74 (m, 1H), 4.29 (dd, J= 12.4, 6.2 Hz, 1H), 3.94 (dd, J= 6.1 Hz, 1H), 3.37 - 3.35 (m, 2H), 2.95 - 2.79 (m, 4H), 2.72 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 2.44 - 2.36 (m, 2H), 2.24 - 2.11 (m, 1H), 1.91 (dd, J= 23.1, 10.7 Hz, 1H), 1.30 - 1.14 (m, 1H), 0.48 - 0.39 (m, 2H), 0.35 - 0.22 (m, 2H).
實施例11
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(((2-氨基喹啉-7-基)氨基)甲基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image237
反應路線:
Figure 02_image239
操作步驟：
步驟A：在室溫條件下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-氯-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶(405.0 mg，0.67 mmol) 溶於氨水/異丙醇(8 mL/3 mL)中，反應系統封管加熱至120°C並攪拌40小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(200.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:583.5[M+H] +.
步驟B：在室溫下，將8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(((叔丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(170.0 mg，0.29 mmol)溶於四氫呋喃(5 mL)中。將四丁基氟化銨(1.0M，0.58 mL)緩慢滴加到反應系統中，反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)甲醇(73 mg)。
MS (ESI) M/Z:345.3 [M+H] +.
步驟C：在0°C條件下，將((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)甲醇(88mg，0.26 mmol)溶於吡啶(4 mL)中，在氮氣保護下，將三甲基氯矽烷(86.1mg，0.79 mmol)緩慢滴加到反應系統中，反應液在0°C下攪拌3小時。再將苯甲醯氯(43.8mg，0.31 mmol)緩慢滴加到反應系統中，緩慢回到室溫，反應液在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入氨水(4 mL)淬滅，反應液繼續在室溫下攪拌1小時後，混合液用二氯甲烷(50 mL×2)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到N-(8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(70 mg)。
MS (ESI) M/Z:449.3 [M+H] +.
步驟D：在室溫條件下，將N-(8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(50 mg，0.11 mmol) 溶於二氯甲烷(3 mL)中，在氮氣保護下，將戴斯-馬丁氧化劑(56.8 mg，0.13 mmol)緩慢滴加到反應系統中，反應液室溫下攪拌2小時。
在TLC監測顯示原料消失後，將反應過濾去除大部分固體後濾液濃縮得到粗產品N-(8-((3aS,4R,6S,6aR)-6-甲醯基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(70.0 mg)直接用於下一步。
步驟E：在室溫下，將N-(8-((3aS,4R,6S,6aR)-6-甲醯基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(49.9 mg，0.11 mmol)，2-氯喹啉-7-胺(29.9 mg，0.17 mmol)，乙酸(33.6 mg，0.56 mmol)和乙酸鉀(32.9 mg，0.34 mmol)溶於甲醇(3 mL)中。反應液在氮氣保護和室溫下攪拌2小時。將氰基硼氫化鈉(21.1 mg，0.33 mmol)緩慢加入反應液中，反應液繼續在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入乙酸乙酯(25 mL)，再用飽和碳酸氫鈉(20 mL×2)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到N-(8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((2-氯喹啉-7-基)氨基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(45 mg)。
MS (ESI) M/Z:609.4 [M+H] +.
步驟F：在室溫條件下，將N-(8-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((2-氯喹啉-7-基)氨基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)苯甲醯胺(33.3 mg，0.067 mmol) 溶於氨水/乙醇(20 mL/4 mL)中，反應系統在悶罐中密封加熱至200°C並攪拌40小時。
LCMS監測顯示60%原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物並未純化，直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z:486.2 [M+H] +.
步驟G：在室溫下，將N 7-(((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)甲基)喹啉-2,7-二胺(35 mg，0.07 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-6,7-二氫環戊二烯并[4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)-5-(((2-氨基喹啉-7-基)氨基)甲基)環戊烷-1,2-二醇(1.0mg)。
MS (ESI) M/Z: 446.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.98 (s, 1H), 7.78 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 9.0, 2.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 4.93 - 4.86 (m, 1H), 4.60 - 4.46 (m, 1H), 4.05 (dd, J= 5.9, 4.3 Hz, 1H),3.43 - 3.35 (m, 1H), 3.28 - 3.21 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 4H), 2.55 - 2.45 (m, 2H), 2.44 - 2.36 (m, 1H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 1.96 - 1.81 (m, 1H).
實施例12
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇三氟乙酸鹽
Figure 02_image241
反應路線:
Figure 02_image243
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-D]嘧啶 (775 mg，5.0 mmol) 溶於四氫呋喃 (40 mL)中。在室溫下向反應系統中分批加入叔丁醇鉀 (559 mg，5.0 mmol)。反應液在室溫下攪拌2小時。
原料消失後，反應液為白色渾濁液體。將反應液濃縮，旋乾，加入N,N-二異丙基乙胺 (20 mL)，超聲10分鐘。將反應液過濾，濾餅即為4-氯-5,6-二氫吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-化鉀(濕重1.1 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.38 (s, 1H), 3.48 (t, J= 8.6 Hz, 2H), 2.66 (t, J= 8.4 Hz, 2H).
步驟B：在室溫下，將4-氯-5,6-二氫吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-化鉀(562 mg，2.9 mmol) 和溶於N,N-二甲基甲醯胺 (12 mL)中。將(3aR,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基三氟甲烷磺酸酯(910 mg，2.9 mmol) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (6 mL) 中。隨後，在冰浴下向反應系統中緩慢加入上述溶液。反應液在25°C油浴下攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水 (30 mL) 淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯 (30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水 (50 mL) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(520 mg)。
MS (ESI) M/Z: 322.0 [M+H] +.
步驟C：在室溫下，將4-氯-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(150 mg，0.5 mmol) ，7-溴喹啉-2-胺 (125 mg，0.6 mmol) 和四乙基氯化銨 (85.1 mg，0.5 mmol) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (6 mL) 中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀 (21 mg，0.1 mmol) ，N,N-二異丙基乙胺(0.4 mL，2.42 mmol)。反應液在100 °C油浴下攪拌12小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入水 (20 mL) 淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯 (20 mL×3次) 萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(115 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.14 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.35 - 7.30 (m, 1H), 6.70 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 15.8 Hz, 1H), 6.54 - 6.40 (m, 3H), 4.80 (dd, J= 7.4, 5.6 Hz, 1H), 4.51 - 4.46 (m, 2H), 3.86 - 3.68 (m, 2H), 3.05 (t, J= 9.2 Hz, 2H), 2.78 (dd, J= 16.2, 7.8 Hz, 1H), 2.08 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 1.48 (s, 3H), 1.25 (s, 3H).
步驟D在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺 (237 mg，0.5 mmol)，氨基甲酸叔丁酯 (240 mg，2.1 mmol) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 (5 mL) 中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入三(二亞苄基丙酮)二鈀 (47 mg，0.05 mmol)，2-二環己基磷-2’,4’,6’-三異丙基聯苯 (25 mg，0.05 mmol)，碳酸銫 (333 mg，1.0 mmol)。反應液在100°C微波下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水 (30 mL) 淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯 (15 mL×3次) 萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水 (50 mL )洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(60 mg)。
MS (ESI) M/Z: 445.2 [M+H] +.
步驟E：在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(60 mg，0.1 mmol) 溶於甲醇(2 mL) 中。隨後，向上述溶液中加入4 mol/L的鹽酸-甲醇溶液 (1mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8-9。混合液用二氯甲烷 (5 mL×3次) 萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水 (10 mL) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇三氟乙酸鹽(12.6 mg)。
MS (ESI) M/Z: 405.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.30 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.85 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.17 (brs, 2H), 6.98 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 6.64 - 6.55 (m, 2H), 5.10 - 4.75 (m, 2H), 4.45 - 4.35 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.86 - 3.70 (m, 3H), 2.93 - 2.82 (m, 2H), 2.71 - 2.65 (m, 1H), 2.03 - 1.96 (m, 1H), 1.63 - 1.54 (m, 1H).
實施例13
(1R,2S,3R,5S)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)環戊烷-1,2-二醇及其異構體
Figure 02_image245
反應路線:
Figure 02_image247
操作步驟：
參考化合物1-6的方法製備化合物13-2。
步驟A：冰浴下，向4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-醯胺鉀 (416 mg，2.16 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液逐滴滴加(3aR,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基三氟甲烷磺酸酯(685 mg，2.16 mmol, 製備方法參考化合物1-6)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液。滴加完畢後，反應液在室溫下攪拌過夜。
TLC檢測顯示新點生成，反應液倒入冰水中。反應液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (10 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-((3aS ,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(390 mg)。
MS (ESI) M/Z: 320.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.64 (s, 1H), 7.30 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.03 - 5.89 (m, 1H), 5.23 - 5.12 (m, 2H), 5.06 - 4.97 (m, 2H), 4.62 (t, J= 6.7 Hz, 1H), 2.83 (dd, J= 12.6, 6.4 Hz, 1H), 2.53 - 2.30 (m, 2H), 1.59 (s, 3H), 1.32 (s, 3H).
步驟B：在室溫下，將4-氯-7-((3aS ,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(330 mg，1.03 mmol)，7-溴喹啉-2-胺(250 mg，1.13 mmol)和四乙基氯化銨(188 mg，1.13 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(46 mg，0.206 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(665 mg，5.16 mmol)。反應液在100°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(10 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-2-((3aR,4R,6aS)-6-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(130 mg)。
MS (ESI) M/Z: 462.2 [M+H] +.
步驟C：在一個10 mL的封管中，加入7-((E)-2-((3aR,4R,6aS)-6-(4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(130 mg，0.28 mmol)，濃氨水(4 mL)和異丙醇(2 mL)。反應液被密封，然後加熱到110°C並且在此溫度下攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失，減壓濃縮得到粗產物。粗產物用矽膠板層析純化得到7-((E)-2-((3aR,4R,6aS)-6-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(120 mg)。
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.14 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.73 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.58 - 7.48 (m, 2H), 7.32 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 6.76 - 6.54 (m, 3H), 5.13 - 5.01 (m, 2H), 4.75 (t, J= 6.9 Hz, 1H), 3.09 - 2.94 (m, 1H), 2.56 - 2.35 (m, 2H), 1.57 (s, 3H), 1.31 (s, 3H).
步驟D: 在高壓釜中，加入化合物7-((E)-2-((3aR,4R,6aS)-6-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(35 mg，0.079 mmol)，10wt%鈀碳(10 mg)和乙醇(20 mL)。反應系統被置換為氫氣氛圍，壓力為15個大氣壓下加熱到35°C，反應24小時後監測反應，發現有20%（摩爾分數）的產物和80%（摩爾分數）的原料。於是繼續在此壓力溫度下攪拌兩天。
LCMS監測顯示原料已經全部消耗完。反應液被過濾，濾餅用乙醇洗3次。合併後的濾液減壓濃縮得到粗產物。粗產物用矽膠板層析純化得到7-(2-((3aR,4S,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙基)喹啉-2-胺(9 mg)。
MS (ESI) M/Z: 447.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.08 (s, 1H), 7.31 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.20 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.65 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.34 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.96 (d, J= 2.9 Hz, 1H), 4.51 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 2.99 - 2.91 (m, 4H), 2.72 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 2.40 - 2.32 (m, 1H), 2.06 - 2.00 (m, 2H), 1.94 - 1.87 (m, 1H), 1.84 - 1.76 (m, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.33 (s, 3H).
步驟E: 在室溫下，將化合物7-(2-((3aR,4S,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙基)喹啉-2-胺(9 mg，0.02 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物被溶於1mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8-9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化。純化條件如下，製備柱welch XBC18，21.2×150mm，5μm(粒徑)；流動相：水(含有10毫摩爾/升碳酸氫銨)和乙腈；流速：20mL/分鐘；梯度：在10分鐘內，乙腈從40vol%升到60vol%；檢測波長：214 nm。收集產品，減壓凍乾。得到 (1R,2S, 5S)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)環戊烷-1,2-二醇的兩個異構體(實施例13-P1，1.3 mg，收率15.8%；實施例13-P2，1 mg）。
實施例13-P1:
HPLC:保留時間5.327分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 407.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.06 (s, 1H), 7.22 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.60 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.31 (dd, J= 7.8, 6.2 Hz, 1H), 3.90 - 3.83 (m, 1H), 2.84 - 2.77 (m, 2H), 2.74 - 2.51 (m, 4H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.06 - 1.93 (m, 2H), 1.78 - 1.67 (m, 1H), 1.66 - 1.56 (m, 1H).
實施例13-P2: HPLC:保留時間5.691分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 407.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.06 (s, 1H), 7.22 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.86 (dd, J= 7.6, 1.5 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.60 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.90 - 4.88(m, 1H), 4.32 (dd, J= 7.8, 6.2 Hz, 1H), 3.91 - 3.83 (m, 1H), 2.94 - 2.87 (m, 2H), 2.75 - 2.58 (m, 2H), 2.54 (dd, J= 8.4, 6.7 Hz, 2H), 2.43 - 2.34 (m, 1H), 2.06 - 1.92 (m, 2H), 1.77 - 1.68 (m, 1H), 1.65 - 1.57 (m, 1H).
實施例14
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image249
反應路線:
Figure 02_image251
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將4-氯-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(630 mg，1.96 mmol)，氨基甲酸叔丁酯(1.15 g，9.82 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(180 mg，0.2 mmol)，2-二環己基磷-2’,4’,6’-三異丙基聯苯(93.6 mg，0.2 mmol)，碳酸銫(1.3 g，3.93 mmol)。反應液在100°C微波下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(15 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯烷[2,3-d]嘧啶-4-胺(260 mg)。
MS (ESI) M/Z: 303.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.00 (s, 2H), 5.87 (ddd, J = 17.4, 10.4, 7.2 Hz, 1H), 5.15 - 4.96 (m, 2H), 4.70 (dd, J = 7.4, 5.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.24 (m, 2H), 3.59 - 3.44 (m, 2H), 2.73 - 2.67 (m, 2H), 2.55 - 2.52 (m, 1H), 1.98 - 1.84 (m, 2H), 1.43 (s, 3H), 1.21 (s, 3H).
步驟B：在室溫下，將7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯烷[2,3-d]嘧啶-4-胺(57 mg，0.19 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(79 mg，0.23 mmol)和四乙基氯化銨(34.6 mg，0.21 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(4.3 mg，0.02 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.01 mL，0.06mmol)。反應液在65°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(10 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)乙烯基)-3-溴喹啉-2-胺(20 mg)。 MS (ESI) M/Z: 523.2 [M+H] +, 525.2 [M+2+H] +.
步驟C：在室溫下，將化合物7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)乙烯基)-3-溴喹啉-2-胺(20 mg，0.04 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8-9。混合液用二氯甲烷(5 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇(5.2mg)。
MS (ESI) M/Z: 483.0 [M+H] +, 485.2 [M+2+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.59 (d, J= 8.98Hz, 1H), 7.40 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 6.61 (s, 2H), 6.61 - 6.44 (m, 2H), 5.94 (s, 2H), 4.82 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.68 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 16.0, 8.0 Hz, 1H), 3.97 (dd, J= 11.8, 5.98Hz, 1H), 3.72 (q, J= 5.6 Hz, 1H), 3.52 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 2.75 - 2.71 (m, 2H), 2.61 - 2.59 (m, 1H), 1.97 - 1.91 (m, 1H), 1.56 - 1.48 (m, 1H).
實施例15
(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image253
反應路線:
Figure 02_image255
操作步驟：
步驟A: 在一個三口瓶中，加入7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺（50 mg，0.164 mmol）和四氫呋喃（1 mL）。置換反應系統為氮氣系統，然後向反應系統中逐滴滴加9-BBN (1.64 mmol)的四氫呋喃溶液（0.5 M，3.2 mL），滴加完畢後將反應液加熱到60°C，反應1小時。反應也被冷卻到室溫，向反應液中滴加磷酸鉀（174 mg，0.82 mmol）的水（2 mL）溶液。反應混合物繼續在室溫下攪拌30分鐘，然後向反應系統中加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺（60 mg，0.17 mmol）和[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀（10 mg，0.014 mmol）。再次置換反應系統為氮氣系統，然後加熱到60°C，攪拌過夜。TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮，所得混合物被用矽膠板層析純化得到7-(2-((3aR,4S,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧基-4-基)乙基)-3-溴喹啉-2-胺(55 mg，收率 63.9%)。
MS (ESI) M/Z: 525.8 [M+H] +.
步驟B: 在室溫下，將7-(2-((3aR,4S,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧基-4-基)乙基)-3-溴喹啉-2-胺(55 mg， 0.104 mmol) 溶於甲醇(0.5 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（1 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮，然後用甲醇稀釋同時加入7 M的氨甲醇溶液調節pH值約等於8-9。混合液被加壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇（18 mg，收率36.0%）。
MS (ESI) M/Z: 484.8 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.57 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.10 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.56 (s, 2H), 5.92 (s, 2H), 4.77 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.40 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.20 - 4.07 (m, 1H), 3.93 - 3.82 (m, 1H), 3.60 - 3.41 (m, 3H), 2.79 - 2.68 (m, 4H), 1.97 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.63 (m, 1H), 1.63 - 1.45 (m, 1H), 1.31 - 1.11 (m, 1H).
實施例16
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((1R)-2-(2-氨基喹啉-7-基)環丙基)環戊烷-1,2-二醇及其異構體
Figure 02_image257
反應路線:
Figure 02_image259
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(300 mg，0.65mmol)，二碳酸二叔丁酯(0.6 mL，2.6 mmol)和4-二甲氨基吡啶(16 mg，0.13 mmol)溶於四氫呋喃(10 mL)中。隨後，向上述溶液中加入三乙胺(0.36 mL，2.6 mmol)。反應液在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。向粗產品中加入水(50 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基(7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯(190 mg)。
MS (ESI) M/Z: 664.2 [M+H] +.
步驟B：在-10°C下，將氫氧化鉀(1.92 g，30 mL水)水溶液緩慢加入到***(70mL)中，再加入1-甲基-1-亞硝基脲(3.5g，33.9 mmol)反應液在-10°C下繼續攪拌1小時。將反應液冷卻至-78°C，水相凍住倒出有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，得到現製備的重氮甲烷的***溶液(50mL)。
在室溫下，將二叔丁基(7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-基)氨基甲酸酯 (150 mg，0.23 mmol)和醋酸鈀(50.8 mg，0.23 mmol)溶於四氫呋喃(4 mL)，將反應系統置換氮氣並冷卻到-78°C，將現製備的重氮甲烷的***溶液(70 mL)緩慢加入到反應液中。反應系統緩慢回到室溫，並在在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基7-((2R)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-氨基甲酸酯(85 mg)。
步驟C：在室溫下，將二叔丁基(7-((2R)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-氨基甲酸酯（160 mg，0.24 mmol），氨基甲酸叔丁酯（139 mg，1.18 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（2 mL）中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入三(二亞苄基丙酮)二鈀（21.5 mg，0.024 mmol），2-二環己基磷-2’,4’,6’-三異丙基聯苯（11.2 mg，0.024 mmol），碳酸銫（153 mg，0.47 mmol）。反應液在100 °C微波下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（30 mL）淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（15 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基(7-((2R)-2-((3aR,4R,6R，6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-氨基甲酸酯（62 mg）。
MS (ESI) M/Z: 659.2 [M+H] +.
步驟D：在室溫下，將化合物二叔丁基(7-((2R)-2-((3aR,4R,6R，6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)環丙基)喹啉-2-氨基甲酸酯（62 mg，0.094 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（3 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8-9。混合液用二氯甲烷（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化。純化條件如下，製備柱welch XBC18，21.2×150mm，5μm（粒徑）；流動相：水（含有10毫摩爾/升碳酸氫銨）和乙腈；流速: 20毫升/分鐘；梯度：在10分鐘內，乙腈從40vol%升到60vol%；檢測波長：214 nm。收集產品得到 (1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((1R)-2-(2-氨基喹啉-7-基)環丙基)環戊烷-1,2-二醇的兩個異構體（實施例16-P1：9.6 mg，實施例16-P2：3.2 mg）。
實施例16-P1
HPLC：保留時間5.495分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm，4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 419.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.81 - 7.74 (m, 2H), 7.46 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.86 (dd, J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.32 (s, 2H), 5.90 (s, 2H), 4.83 (s, 1H), 4.47 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 4.13 (dd, J= 18.0, 8.0 Hz, 1H), 3.96 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 3.70 (dd, J= 10.0, 4.9 Hz, 1H), 3.57 - 3.39 (m, 2H), 2.70 (dd, J= 17.7, 6.3 Hz, 2H), 1.96 - 1.80 (m, 2H), 1.58 - 1.45 (m, 1H), 1.36 - 1.22 (m, 1H), 1.19 - 1.08 (m, 1H), 1.02 - 0.91 (m, 2H).
實施例16-P2
HPLC:保留時間3.380分鐘。條件如下，柱子ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm，2.1×150mm；柱溫30°C；流動相水（0.05vol% TFA）和乙腈（0.05vol% TFA）；流速0.3毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈（0.05vol% TFA）0.5分鐘，9分鐘內乙腈（0.05vol% TFA）升到95vol%，保持95vol%梯度3分鐘。
MS (ESI) M/Z: 419.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.79 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 7.47 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.86 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.64 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.30 (s, 2H), 5.92 (s, 2H), 4.80 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.15 (dd, J= 18.0, 8.0 Hz, 1H), 3.93 (dd, J= 13.2, 5.6 Hz, 1H), 3.66 (dd, J= 9.8, 4.8 Hz, 1H), 3.56 - 3.41 (m, 2H), 2.76 - 2.70 (m, 2H), 1.94 - 1.82 (m, 2H), 1.59 - 1.45 (m, 1H), 1.40 - 1.28 (m, 1H), 1.17 - 1.07 (m, 1H), 0.97 - 0.84 (m, 2H).
實施例17
(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((E)-2-(3-溴-2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image261
反應路線:
Figure 02_image263
操作步驟：
步驟A：在室溫下，7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(50.0 mg，0.17 mmol)，3-溴-N-(環丙基甲基)-7-碘喹啉-2-胺(69.6 mg，0.17 mmol)和四乙基氯化銨(30.4 mg，0.18mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(7.5 mg，0.03 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(107.7 mg，0.83 mmol)。反應液在70°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)-3-溴-N-(環丙基甲基)喹啉-2-胺(30.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:577.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)-3-溴-N-(環丙基甲基)喹啉-2-胺(30 mg，0.05 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5R)-3-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-5-((E)-2-(3-溴-2-((環丙基甲基)氨基)喹啉-7-基)乙烯基)環戊烷-1,2-二醇(6.0 mg)。
MS (ESI) M/Z:537.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.35 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 6.68 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 6.57 - 6.44 (m, 2H), 5.94 (s, 2H), 4.81 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.68 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.23 (dd, J= 16.3, 8.1 Hz, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 1H), 3.78 - 3.68 (m, 1H), 3.52 (t, J= 9.0 Hz, 2H), 3.37 - 3.33 (m, 2H), 3.30 - 3.29 (m, 1H), 2.76 - 2.69 (m, 2H), 2.01 - 1.86 (m, 1H), 1.53 (dd, J= 22.9, 9.9 Hz, 1H), 1.24 - 1.21 (m, 1H), 0.48 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.25 (m, 2H).
實施例18
(1S,2R,3R,5R)-3-((1R)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇及其異構體
Figure 02_image265
反應路線:
Figure 02_image267
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)-3-溴喹啉-2-胺(160.0 mg，0.31mmol)，二碳酸二叔丁酯(434.9 mg，1.99mmol)和4-二甲氨基吡啶(7.6 mg，0.06mmol)溶於四氫呋喃(8 mL)中。隨後，向上述溶液中加入三乙胺(250.9 mg，2.5 mmol)。反應液在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。向粗產品中加入水(50 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基(7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-(二叔丁氧羰基)氨基)-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)亞氨基二碳酸酯(160 mg)。
MS (ESI) M/Z: 923.5 [M+H] +.
步驟B：在-10°C下，將氫氧化鉀(1.7 g，25mL水)水溶液緩慢加入到***(60mL)中，再加入1-甲基-1-亞硝基脲(3.0 g，29.1mmol)反應液在-10°C下繼續攪拌1小時。將反應液冷卻至-78°C，水相凍住倒出有機相，有機相先用飽和食鹽水(100 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，得到現製備的重氮甲烷的***溶液(50mL)。
在室溫下，將二叔丁基(7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-(二叔丁氧羰基)氨基)-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)亞氨基二碳酸酯(150mg，0.16 mmol)和醋酸鈀(32.8 mg，0.15 mmol)溶於四氫呋喃(4 mL)，將反應系統置換氮氣並冷卻到-78°C，將現製備的重氮甲烷的***溶液(50 mL)緩慢加入到反應液中。反應系統緩慢回到室溫，並在在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到二叔丁基(7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-(二叔丁氧羰基)氨基)-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)亞氨基二碳酸酯(90 mg)。
MS (ESI) M/Z:937.6 [M+H] +.
步驟C：在室溫下，將二叔丁基(7-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((1R)-2-(2-(二叔丁氧羰基)氨基)-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)亞氨基二碳酸酯(70 mg，0.07 mmol)溶於二氯甲烷(2 mL)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化。純化條件如下，製備柱welch XBC18，21.2×150mm，5μm(粒徑)；流動相：水(含有10毫摩爾/升碳酸氫銨)和乙腈；流速: 20毫升/分鐘；梯度：在10分鐘內，乙腈從40vol%升到60vol%；檢測波長：214 nm。收集產品得到 (1S,2R,3R,5R)-3-((1R)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)環丙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇的兩個異構體(實施例18-P1：10.2 mg，實施例18-P2：4.9 mg)。
實施例18-P1：
HPLC:保留時間6.532分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 497.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.22 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.50 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.02 (dd, J= 8.4, 1.7 Hz, 1H), 4.45 - 4.15 (m, 1H), 4.12 (dd, J= 8.5, 5.9 Hz, 1H), 3.91 (dd, J= 5.8, 4.0 Hz, 1H), 3.77 - 3.60 (m, 1H), 3.59 - 3.49 (m, 1H), 2.80 (t, J= 8.9 Hz, 2H), 2.28 - 2.02 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.73 - 1.56 (m, 1H), 1.56 - 1.41 (m, 1H), 1.24 - 1.15 (m, 1H), 1.12 - 1.00 (m, 2H).
實施例18-P2:
HPLC:保留時間6.676分鐘。條件如下，柱子XBridge BEH C18 2.5μm 4.6mm×150mm；柱溫30°C；流動相水（10 mM NH 4HCO 3）和乙腈；流速1毫升/分鐘；梯度：5vol%乙腈0.5分鐘，9分鐘內乙腈升到95vol%，保持95vol%梯度2分鐘。
MS (ESI) M/Z: 497.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.24 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.53 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.07 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 4.48 - 4.18 (m, 1H), 4.16 - 4.01 (m, 1H), 3.89 (dd, J= 5.8, 4.0 Hz, 1H), 3.83 - 3.66 (m, 1H), 3.67 - 3.57 (m, 1H), 2.99 - 2.65 (m, 2H), 2.17 - 2.09 (m, 1H), 2.09 - 2.00 (m, 1H), 1.70 - 1.60 (m, 1H), 1.57 - 1.47 (m, 1H), 1.26 - 1.16 (m, 1H), 1.11 - 1.03 (m, 1H), 1.03 - 0.94 (m, 1H).
實施例19
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image269
反應路線:
Figure 02_image271
操作步驟：
步驟A: 在一個三口瓶中，加入碘化亞銅(5.92 g，31.08 mmol)和無水四氫呋喃(100 mL)。置換反應系統為氮氣系統，然後冷卻到0°C。向反應系統中逐滴滴加甲基鋰(59.7 mmol)的四氫呋喃溶液(1.6M，37.3mL)，滴加完畢後繼續在此溫度下攪拌10分鐘，然後反應系統被降溫到-78°C。向反應系統中滴加(3aR,6aR)-2,2-二甲基-3a,6a-二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮 (4 g，25.9 mmol)的四氫呋喃溶液。滴加完畢後，反應系統繼續在-78°C攪拌1小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(100 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (50 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,6S,6aR)-2,2,6-三甲基二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(5H)-酮(3.27 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.47 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.35 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 2.66 (dd, J= 18.3, 8.3 Hz, 1H), 2.38 (dd, J= 11.1, 4.1 Hz, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.31 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 0.99 (d, J= 7.5 Hz, 3H).
步驟B: 在一個三口瓶中，加入(3aR,6S,6aR)-2,2,6-三甲基二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(5H)-酮(500 mg，2.94 mmol)和三乙基氯矽烷(1 mL，5.88 mmol)的四氫呋喃(8 mL)溶液， 然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至-78°C，然後逐滴滴加雙(三甲基矽基)氨基鋰的四氫呋喃溶液(1M，4.41 mL，4.41 mmol)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌20分鐘。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (30 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到三乙基(3aR,6S,6aR)-2,2,6-三甲基-6,6a-二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)氧基)矽烷 (660 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.77 (dd, J= 6.1, 1.5 Hz, 1H), 4.67 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 4.16 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 2.53 - 2.52 (m, 1H), 1.32 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.03 - 0.90 (m, 12H), 0.67 (q, 6H).
步驟C: 在一個單口瓶中，加入三乙基(3aR,6S,6aR)-2,2,6-三甲基-6,6a-二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)氧基)矽烷(660 mg，2.32 mmol)，醋酸鈀(155 mg，0.696 mmol)和二甲基亞碸(10 mL)，然後系統置換為氧氣氛圍。反應液被加熱到65°C，並在此溫度下反應過夜。
TLC監測顯示原料消失後，將反應液倒入冰水中。反應液用乙酸乙酯(30 mL ×3次)萃取，合併有機相，有機相依次用水(30 mL×3次)和飽和食鹽水 (30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,6aR)-2,2,6-三甲基-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(6aH)-酮(268 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 5.98 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 5.07 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.46 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.28 (s, 3H).
步驟D: 在一個三口瓶中，加入氯化鋰(20 mg，0.476 mmol)，碘化亞銅(45 mg，0.238 mmol)和四氫呋喃(4 mL)，然後系統置換為氮氣氛圍。反應液被冷卻到0°C並在此溫度下攪拌10分鐘，然後向反應液中逐滴滴加三甲基氯矽烷(308.5 mg，2.85 mmol)和(3aR,6aR)-2,2,6-三甲基-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(6aH)-酮(400 mg，2.38 mmol)的四氫呋喃(2 mL)溶液。滴加完畢後，反應液繼續在0°C下攪拌20分鐘。然後逐滴滴加乙烯基溴化鎂(3.8 mmol)的四氫呋喃溶液(1M，3.8 mL)。所得反應液在0°C下繼續攪拌30分鐘。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (30 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(3aR,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(5H)-酮(300 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 5.85 (dd, J= 17.6, 10.9 Hz, 1H), 5.05 (dd, J= 14.3, 12.5 Hz, 2H), 4.52 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.24 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 2.53 - 2.48 (m, 1H), 2.30 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.21 (s, 3H).
步驟E: 在一個三口瓶中加入(3aR,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(5H)-酮 (700 mg，3.57 mmol)的四氫呋喃(10 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後逐滴滴加四氫鋁鋰(7.14 mmol)的四氫呋喃溶液(1M，7.14 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌1小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入十水合硫酸鈉淬滅直至沒有氣泡冒出。然後加入四氫呋喃攪拌30分鐘，過濾反應液。濾液被濃縮得到油狀粗產物，用矽膠柱層析純化得到(3aS,4S,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(400 mg)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 5.70 (dd, J= 17.6, 11.0 Hz, 1H), 5.08 - 4.95 (m, 2H), 4.46 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 4.33 (dd, J= 5.4, 0.8 Hz, 1H), 4.09 - 3.94 (m, 1H), 2.02 - 1.90 (m, 1H), 1.59 - 1.52 (m, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.12 (s, 3H).
步驟F：在室溫下，將4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(275 mg，1.77 mmol)和(3aS,4S,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(440 mg，2.22 mmol)溶於甲苯(5 mL)中，反應系統被置換為氮氣氛圍。然後將2-(三丁基亞正膦基)乙腈(853 mg，3.54 mmol)的甲苯(2 mL)溶液緩慢加入反應系統中。反應液加熱到110°C，並在此溫度下攪拌5小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(15 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(160 mg)。
MS (ESI) M/Z: 336.0 [M+H] +.
步驟G: 在室溫下，向高壓反應釜中加入4-氯-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(130 mg，0.39 mmol)的乙醇(3 mL)溶液。隨後，在室溫下向反應系統中緩慢加入氨水(30 mL)。反應液在135°C油浴下攪拌2天。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(45 mg)。
MS (ESI) M/Z: 317.3 [M+H] +.
步驟H：在室溫下，將7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(80 mg，0.25 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(88 mg，0.25 mmol)和四乙基氯化銨(45.6 mg，0.28 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(11.2mg，0.05mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.09 mL，0.5 mmol)。反應液在70°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(10 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4-三甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)-3-溴喹啉-2-胺(28 mg)。
MS (ESI) M/Z: 537.4[M+H] +.
步驟I：在室溫下，將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4-三甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)-3-溴喹啉-2-胺(28 mg，0.05 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8-9。混合液用二氯甲烷(5 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化。純化條件如下，製備柱welch XBC18，21.2×150mm，5μm(粒徑)；流動相：水(含有10毫摩爾/升碳酸氫銨)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：在10分鐘內，乙腈從40vol%升到60vol%；檢測波長：214 nm。收集產品得到(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇(4.7 mg)。
MS (ESI) M/Z: 497.0[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.59 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 6.60 (s, 2H), 6.53 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 5.93 (s, 2H), 4.85 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.63 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.34 (t, J= 8.4 Hz, 1H), 4.13 (dd, J= 12.6, 5.8 Hz, 1H), 3.70 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.52 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 3.29 - 2.69 (m, 2H), 1.81 (dd, J= 13.2, 9.4 Hz, 1H), 1.70 (dd, J= 13.2, 9.4 Hz, 1H), 1.17 (s, 3H).
實施例20
(1S,2R,3S,5R)-3-((E)-3-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)烯丙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image273
反應路線
Figure 02_image275
操作步驟：
步驟A：在一個三口瓶中，加入溴化亞銅二甲硫醚的絡合物(411 mg，2 mmol)和四氫呋喃(80 mL)。置換反應系統為氮氣系統，然後冷卻到-78°C。向反應系統中逐滴滴加乙烯基溴化鎂(25 mmol)的四氫呋喃溶液(1M，25 mL)，滴加完畢後繼續在此溫度下攪拌20分鐘，然後向反應系統中滴加(3aR,6aR)-2,2-二甲基-3a,6a-二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-酮 (3.08 g，20 mmol)，三甲基氯矽烷 (4.34 mL，40 mmol)和六甲基膦醯三胺 (9.2 g，51.4 mmol)的四氫呋喃溶液。滴加完畢後，反應系統繼續在-78°C攪拌3小時，然後升到0°C繼續攪拌1小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(500 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (300 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到(6S)-6-烯丙基-2,2-二甲基二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(5H)-酮(800 mg)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 5.78 - 5.74 (m, 1H), 5.17 - 5.09 (m, 2H), 4.97 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.37 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.28 - 3.02(m, 1H), 2.82 - 2.48 (m, 1H), 2.46 - 2.32 (m, 2H), 2.25 - 2.00 (m, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
步驟B：在一個三口瓶中加入(6S)-6-烯丙基-2,2-二甲基二氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4(5H)-酮(1 g，5.1 mmol)的四氫呋喃(30 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後逐滴滴加四氫鋁鋰(10 mmol)的四氫呋喃溶液( 1M，10 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌1小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入十水合硫酸鈉淬滅。然後加入四氫呋喃攪拌30分鐘，過濾反應液。濾液被濃縮得到油狀粗產物，用矽膠柱層析純化得到(4S,6S)-6-烯丙基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(300 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 5.81 - 5.68 (m, 1H), 5.06 - 4.96 (m, 2H), 4.37 - 4.30 (m, 2H), 4.19 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 3.93 (dd, J= 10.8, 4.6 Hz, 1H), 2.04 - 1.93 (m, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 1H), 1.51 - 1.42 (m, 1H), 1.37 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).
步驟C: 在室溫下，將4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(104 mg，0.67 mmol)和 (4S,6S)-6-烯丙基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(200 g，1.01 mmol)溶於甲苯(2 mL)中。將2-(三丁基亞正膦基)乙腈(482 mg，2.0 mmol)溶於甲苯(0.5 mL)中。隨後，在室溫下向反應系統中緩慢加入2-(三丁基亞正膦基)乙腈溶液。反應液在110°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((3aS,4R,6S,6aR)-6-烯丙基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(164 mg)。
MS (ESI) M/Z: 336.0 [M+H] +.
步驟D: 在室溫下，向高壓反應釜中加入7-((3aS,4R,6S,6aR)-6-烯丙基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(244 mg，0.73 mmol)的乙醇(3 mL)溶液。隨後，在室溫下向反應系統中緩慢加入氨水(25 mL)。反應液在135°C油浴下攪拌2天。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((3aS,4R,6S,6aR)-6-烯丙基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(90 mg)。
MS (ESI) M/Z: 317.2 [M+H] +.
步驟E: 在室溫下，將7-((3aS,4R,6S,6aR)-6-烯丙基-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(70 mg，0.22 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(77 mg，0.22 mmol)和四乙基氯化銨(40 mg，0.24 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(5 mg，0.02 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.08 mL，0.484 mmol)。反應液在65°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(10 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-3-((3aR,4S,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)丙-1-烯-1-基)-3-溴喹啉-2-胺(54 mg)。
MS (ESI) M/Z: 537.0 [M+H] +.
步驟F：在室溫下，將7-((E)-3-((3aR,4S,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)丙-1-烯-1-基)-3-溴喹啉-2-胺(62 mg，0.12 mmol)溶於甲醇(0.5 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8-9。混合液用二氯甲烷(5 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3S,5R)-3-((E)-3-( 2-氨基-3-溴喹啉-7-基)烯丙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇(14.5 mg)。
MS (ESI) M/Z: 497.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.58 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.41 - 7.35 (m, 2H), 6.63 - 6.56 (m, 3H), 6.47 - 6.42 (m, 1H), 5.91 (s, 2H), 4.81 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.47 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.16 (dd, J= 17.8, 7.8 Hz, 1H), 3.91 (dd, J= 13.6, 5.8 Hz, 1H), 3.59 (dd, J= 9.9, 4.8 Hz, 1H), 3.54 - 3.41 (m, 2H), 2.73 - 2.69 (m, 1H), 2.44 - 2.38 (m, 2H), 2.25 - 2.15 (m, 1H), 1.97 - 1.83 (m, 2H), 1.28 - 1.19 (m, 1H).
實施例21
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image277
反應路線:
Figure 02_image279
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將4-氯-7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(210 mg，0.65 mmol)，1,1’-二(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II) (95.1 mg，0.13 mmol)和碳酸鉀(179.6 mg，1.3mmol)溶於二氧六環/水(5 mL/0.5mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜硼環己烷(246.9 mg，1.96 mmol)，反應系統封管加熱至110°C並攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(160.0 mg)。
MS (ESI) M/Z: 302[M+H] +.
步驟B：在室溫下，將7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-4-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(40 mg，0.13 mmol)和3-溴-7-碘喹啉-2-胺(42.1 mg，0.12 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(5.8 mg，0.026 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(83.8 mg，0.65 mmol)。反應液在70°C油浴下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(50 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到3-溴-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-2,2-二甲基-6-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(23 mg)。
MS (ESI) M/Z: 522[M+H] +.
步驟C：在室溫下，將3-溴-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-2,2-二甲基-6-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙烯基)喹啉-2-胺(36.0 mg，0.07 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-)4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇(11.7 mg)。
MS (ESI) M/Z:482.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.25 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.42 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 6.62 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 6.49 (dd, J= 15.8, 7.8 Hz, 1H), 4.56 - 4.31 (m, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 1H), 3.91 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 3.77 (t, J= 8.7 Hz, 2H), 3.04 (t, J= 8.6 Hz, 2H), 2.88 - 2.71 (m, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.19 - 2.07 (m, 1H), 1.71 (dt, J= 12.9, 10.3 Hz, 1H).
實施例22
(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image281
反應路線:
Figure 02_image283
操作步驟：
步驟A：在一個三口瓶中加入7-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(45 mg，0.14 mmol)的四氫呋喃(0.5 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN(1.4 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，2.8 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到60°C，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(297 mg，1.4 mmol)的水溶液(0.5 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(98 mg，0.28 mmol)和PdCl 2(dppf)(10 mg，0.014 mmol)的四氫呋喃(1.2 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到60°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠板層析純化得到7-(2-((3aR,4S,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4-三甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙基)-3-溴喹啉-2-胺(45 mg)。
MS (ESI) M/Z: 539.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將7-(2-((3aR,4S,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2,4-三甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)乙基)-3-溴喹啉-2-胺(45 mg，0.083 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物被溶於3mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8-9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化得到(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6H-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7(6H)-基)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇(8.4 mg)。
MS (ESI) M/Z: 499.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.57 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.10 (dd, J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.55 (s, 2H), 5.91 (s, 2H), 4.81 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.37 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.25 (dd, J= 7.8 Hz, 1H), 4.08 (dd, J= 7.5 Hz, 1H), 3.58 - 3.53 (m, 1H), 3.53 - 3.42 (m, 2H), 2.73 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.60 (m, 2H), 1.69 - 1.56 (m, 2H), 1.55 - 1.48 (m, 2H), 1.04 (s, 3H).
實施例23
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-氯喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image285
製備方法參考實施例21，最後得到目標產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-氯喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 438.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.14 (d, J= 2.2 Hz, 2H), 7.60 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.38 (m, 2H), 6.70 (s, 2H), 6.50 - 6.45 (m, 2H), 4.82 - 4.71 (m, 2H), 4.35 (dd, J= 17.2, 8.0 Hz, 1H), 4.02 (dd, J= 12.4, 5.8 Hz, 1H), 3.74 (q, J= 5.6 Hz, 1H), 3.65 (dd, J= 13.8, 8.8 Hz, 2H), 2.96 (t, J= 8.5 Hz, 2H), 2.67 - 2.60 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.98 (dt, J= 12.8, 8.0 Hz, 1H), 1.62 - 1.51 (m, 1H).
實施例24
(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image287
反應路線:
Figure 02_image289
操作步驟：
步驟A: 在室溫下，將4-氯-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚(450 mg，2.2 mmol)和 (3aS,4S,6S,6aR)-2,2-二甲基-6-烯丙基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(806 mg，4.4 mmol)的甲苯(5 mL)混合物加入到20 mL的封管中。反應混合物被置換氮氣系統，隨後，在室溫下向反應系統中緩慢滴加2-(三丁基亞正膦基)乙腈(2.12 g，8.8 mmol)的甲苯(3 mL)溶劑。反應液在100°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液被水淬滅。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-9-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚(360 mg)。
MS (ESI) M/Z: 370.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.87 (s, 1H), 8.38 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (dd, J= 11.5, 4.1 Hz, 1H), 7.52 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.02 (td, J= 10.3, 5.2 Hz, 1H), 5.42 (d, J= 4.9 Hz, 1H), 5.30 (dd, J= 7.3, 5.1 Hz, 1H), 5.15 (dd, J= 31.7, 13.8 Hz, 2H), 4.76 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 2.90 - 2.81 (m, 1H), 2.74 (d, J= 12.1 Hz, 1H), 2.29 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 1.53 (s, 3H), 1.22 (s, 3H).
步驟B: 在室溫下，向20 mL的封管反應器中加入 4-氯-9-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚(360 mg，0.98 mmol)的異丙醇(3 mL)溶液。隨後，在室溫下向反應系統中緩慢加入氨水(6 mL)。密封封管，反應液在120°C油浴下攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到9-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(300 mg)。
MS (ESI) M/Z: 351.2 [M+H] +.
步驟C：在一個三口瓶中加入9-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(50 mg，0.14 mmol)的四氫呋喃(0.5 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN(1.4 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，2.8 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到60°C，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(148 mg，0.7 mmol)的水溶液(0.5 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(50 mg，0.14 mmol)和PdCl 2(dppf)(10 mg，0.014 mmol)的四氫呋喃(1.2 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到60°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠板層析純化得到9-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧醇-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺 (70 mg，純度60%)。
MS (ESI) M/Z: 573.0 [M+H] +，575.0 [M+H+2] +.
步驟D：在室溫下，將9-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧醇-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺 (70 mg，0.12 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物溶於3mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8-9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)環戊烷-1,2-二醇 (9.6 mg)。
MS (ESI) M/Z: 533.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.36 - 8.31 (m, 2H), 8.28 (s, 1H), 7.60 (t, J= 8.1 Hz, 2H), 7.40 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.25 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.21 - 7.11 (m, 3H), 6.57 (s, 2H), 5.11 - 5.00 (m, 1H), 4.73 (dd, J= 10.9, 4.5 Hz, 2H), 4.63 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.99 - 3.87 (m, 1H), 2.85 - 2.71 (m, 2H), 2.14 - 1.95 (m, 4H), 1.86 - 1.73 (m, 1H).
實施例25
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image291
反應路線:
Figure 02_image293
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將9-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(50 mg，0.14 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(60.0 mg，0.17 mmol)和四乙基氯化銨(26.0 mg，0.16 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(6.4 mg，0.03 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.124 mL，0.75mmol)。反應液在70 °C下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(35 mg)。
MS (ESI) M/Z:571.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(35 mg，0.06 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)環戊烷-1,2-二醇(15.0mg)。
MS (ESI) M/Z:531.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.39 - 8.29 (m, 3H), 7.67 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.51 - 7.39 (m, 3H), 7.27 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.21 (s, 2H), 6.74 - 6.59 (m, 4H), 5.24 - 5.07 (m, 1H), 4.93 - 4.86 (m, 2H), 4.78 - 4.64 (m, 1H), 4.25 - 4.07 (m, 1H), 2.90 - 2.76 (m, 1H), 2.37 - 2.28(m, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H).
實施例26
(1R,2S,3R,5S)-3-(4-氨基-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)-5-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image295
反應路線:
Figure 02_image297
操作步驟：
步驟A：在室溫下，將9-((3aS,4R,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(100 mg，0.28 mmol)，7-碘喹啉-2-胺(91.8 mg，0.34 mmol)和四乙基氯化銨(51.8 mg，0.31mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(12.8 mg，0.057 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.25mL，1.512 mmol)。反應液在70 °C下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(130 mg)。
MS (ESI) M/Z:493.2 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將鈀碳(236.0 mg，2.2 mmol)溶於乙醇(5 mL)中。反應系統抽真空換氫氣多次。在氫氣氛圍下加入9-((3aS,4R,6R,6aR)-6-((E)-2-(2-氨基喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(110 mg，0.22 mmol)。反應液在室溫下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，過濾濃縮，混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到化合物9-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(90 mg)。
MS (ESI) M/Z:495.2 [M+H] +.
步驟C：在室溫下，將9-((3aS,4R,6S,6aR)-6-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜-4-基)-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-4-胺(70 mg，0.14 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。往殘餘物裡加入甲醇(1 mL)再向反應液中加入氨水溶液調節pH值約等於8-9。混合液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R,2S,3R,5S)-3-(4-氨基-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)-5-(2-(2-氨基喹啉-7-基)乙基)環戊烷-1,2-二醇(48.5 mg)。
MS (ESI) M/Z:555.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.33 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.82 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.28 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 7.25 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.18 (s, 2H), 7.06 (dd, J= 8.1, 1.5 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.33 (s, 2H), 5.13 - 5.01 (m, 1H), 4.81 - 4.69 (m, 2H), 4.67 - 4.57 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (m, 1H), 2.87 - 2.64 (m, 2H), 2.19 - 1.91 (m, 4H), 1.89 - 1.72 (m, 1H).
實施例27
（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-6,7-二氫-8H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-8-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image299
反應路線:
Figure 02_image301
操作步驟：
步驟A: 室溫下，在一個單口瓶中，加入乙腈(50 mL)，4-氨基-6-氯嘧啶-5-醇(437 mg，3 mmol)和碳酸銫(1955 mg，6 mmol)，1，2-二溴乙烷(1127mg，6 mmol)，然後加熱到65℃攪拌16小時。
反應液過濾，濾液減壓濃縮。所得粗品用矽膠柱層析純化得到4-氯-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪(235 mg)。
MS (ESI) M/Z: 172.0 [M+H] +.
步驟B: 在封管中，將4-氯-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪(205 mg，1.2 mmol)和（3aS，4S，6R，6aR）-2,2,6-三甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-醇(442 mg，2.4 mmol)溶於甲苯 (3 mL)。將氰基亞甲基三正丁基膦(869 mg，3.6 mmol) 溶於甲苯 (1 mL)中，在氮氣氛圍下滴加上述液體，反應液在110°C下攪拌18小時。
反應液減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化得到4-氯-8-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪(295 mg)。
MS (ESI) M/Z: 338.2 [M+H] +.
步驟C: 在室溫下，將4-氯-8-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪(295 mg，0.872 mmol），氨基甲酸叔丁酯（202.5 mg，1.74 mmol）溶於無水甲苯（2 mL）中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入Brettphos Pd G2（73.6 mg，0.087 mmol），碳酸銫（566.8 mg，1.74 mmol）。反應液在110°C下攪拌18小時。
反應液減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化得到8-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(105 mg)。
MS (ESI) M/Z: 319.2 [M+H] +.
步驟D: 在三口瓶中，在氮氣保護下加入無水四氫呋喃(5mL)，8-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(115 mg，0.35 mmol)，然後滴加9-BBN(299 mg，2.45 mmol)。反應液加熱到55℃，攪拌1小時。反應液再冷卻室溫，加入磷酸鉀(520 mg，2.45 mmol，溶於1.5mL水中)，攪拌20分鐘。加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(147 mg，0.42 mmol，溶於2mL無水四氫呋喃中)，PdCl 2(dppf) (55 mg，0.07 mmol)。反應加熱到55°C，攪拌16小時。反應冷卻至室溫，過濾，濾液濃縮乾燥。所得粗品用矽膠柱層析純化得到8-（（3aS，4R，6S，6aR）-6-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(105 mg)。
MS (ESI) M/Z: 541.1 [M+H] +.
步驟E: 室溫下，在一個單口瓶中，加入甲醇(2 mL)，8-（（3aS，4R，6S，6aR）-6-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(81 mg，0.15 mmol)，滴加4N鹽酸甲醇溶液 (2 mL)，然後攪拌2小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。所得粗品用反相色譜純化得到（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-6,7-二氫-8H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-8-基）環戊烷-1,2-二醇 (32 mg)。
MS (ESI) M/Z: 501.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.12 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.54 – 7.42 (m, 2H), 7.17 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.45 – 4.33 (m, 1H), 4.28 – 4.18 (m, 2H), 3.92 (t, J= 7.3 Hz, 1H), 3.81 – 3.70 (m, 1H), 3.58 – 3.42 (m, 2H), 2.92 - 2.82 (m, 2H), 2.15 - 1.93 (m, 3H), 1.77 - 1.70 (m, 1H), 1.40 - 1.36 (m, 1H).
實施例28
（1S，2R，3R，5R）-3-（（E）-2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙烯基）-5-（4-氨基-6,7-二氫-8H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-8-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image303
反應路線:
Figure 02_image305
操作步驟：
步驟A: 在單口瓶中，加入無水DMF(2mL)，8-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(63 mg，0.2 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(84 mg，0.24 mmol)， 醋酸鈀(10 mg，0.04 mmol)，TEAC(66 mg，0.4 mmol)，DIPEA(51 mg，0.394mmol)。系統轉換成氮氣，加熱到70℃，攪拌4小時。反應冷卻至室溫，過濾，濾液濃縮乾燥。所得粗品用矽膠柱層析純化得到8-（（3aS，4R，6R，6aR）-6-（（E）-2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙烯基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(25 mg)。
MS (ESI) M/Z: 539.1[M+H] +.
步驟B: 室溫下，在一個單口瓶中，加入甲醇(2 mL)，8-（（3aS，4R，6R，6aR）-6-（（E）-2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙烯基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）-7,8-二氫-6H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-4-胺(25 mg，0.05 mmol)，滴加4N鹽酸甲醇溶液 (2 mL)，然後攪拌2小時。 LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮。粗產物被溶於3 mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8~9。所得溶液用反相色譜純化得到（1S，2R，3R，5R）-3-（（E）-2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙烯基）-5-（4-氨基-6,7-二氫-8H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-8-基）環戊烷-1,2-二醇(6.5 mg)。
MS (ESI) M/Z: 499.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.25 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.42 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 15.9 Hz, 1H), 6.49 (dd, J= 1 5.8, 7.7 Hz, 1H), 4.92 - 4.84 (m, 1H), 4.20 - 4.19 (m, 2H), 4.15 (dd, J= 16.4, 9.8 Hz, 1H), 3.91 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 3.63 – 3.52 (m, 2H), 2.79 - 2.75 (m, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.74 - 1.58 (m, 1H).
實施例29
(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫-8H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-8-基)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image307
製備方法參考實施例27，最後得到目標產物(1S,2R,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫-8H-嘧啶[5,4-b][1,4]噁嗪-8-基)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 515.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.26 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.55 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.17 (dd, J= 8.3, 1.6 Hz, 1H), 4.99 - 4.88 (m, 1H), 4.26 - 4.22 (m, 1H), 4.22 - 4.13 (m, 2H), 3.75 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 3.56 – 3.43 (m, 2H), 2.85 – 2.72 (m, 2H), 1.86 – 1.66 (m, 3H), 1.66 – 1.56 (m, 1H), 1.18 (s, 3H).
實施例30
（1S，2R，3R，5R）-3-（（E）-2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙烯基）-5-（4-氨基-6,7-二氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8（5H）-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image309
反應路線:
Figure 02_image311
操作步驟：
步驟A: 在室溫下，將8-（（3aS，4R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（53 mg，0.156 mmol），7-溴-3-氯喹啉-2-胺（40 mg，0.156 mmol，參考中間體Int-1的合成方法製備）和四乙基氯化銨（52.2 mg，0.315 mmol）溶於N，N-二甲基甲醯胺（1 mL）中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀（7 mg，0.03 mmol），N，N-二異丙基乙胺（40 mg，0.312 mmol）。反應液在100°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（10 mL）淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（15 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-（（3aS，4R，6R，6aR）-6-（（E）-2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙烯基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（63 mg）。
MS (ESI) M/Z: 517.2 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將8-（（3aS，4R，6R，6aR）-6-（（E）-2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙烯基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（63 mg，0.122 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（1 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，純化得到最終產物（1S，2R，3R，5R）-3-（（E）-2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙烯基）-5-（4-氨基-6,7-二氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8（5H）-基）環戊烷-1,2-二醇（33.9 mg）。
MS (ESI) M/Z: 477.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.61 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 6.69 (s, 2H), 6.59 (s, 2H), 6.45 (s, 2H), 4.92 – 4.83 (m, 2H), 4.81 – 4.75 (m, 1H), 4.29 (dd, J= 12.4, 6.4 Hz, 1H), 3.93 (dd, J= 11.8, 5.8 Hz, 1H), 2.95 – 2.78 (m, 4H), 2.75 - 2.70 (m, 1H), 2.42 - 2.39 (m, 2H), 2.23 – 2.15 (m, 1H), 1.93 – 1.88 (m, 1H).
實施例31
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-氟喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image313
反應路線:
Figure 02_image315
操作步驟：
步驟A: 在室溫下，將7-溴-3-氟喹啉(900 mg，4 mmol)溶於二氯甲烷(25 mL)中。在0°C下緩慢加入間氯過苯甲酸(2.75 g，16 mmol)，反應液在室溫下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，0°C下向反應液中加入水(50 mL)淬滅，然後緩慢加入氯化銨的飽和水溶液調節pH至7，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-溴-3-氟喹啉1-氧化物(850 mg)。
MS (ESI) M/Z: 242.2 [M+H] +.
步驟B: 在室溫下，將7-溴-3-氟喹啉1-氧化物(850 mg，3.54 mmol)，溶於三氯甲烷(15 mL)中。然後在0°C下緩慢加入三氯氧磷(15 mL)，反應系統抽真空換氮氣多次。反應液在70℃油浴下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。加入二氯甲烷(30 mL)，然後用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至7，混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-溴-2-氯-3-氟喹啉(700 mg)。
MS (ESI) M/Z: 259.9 [M+H] +.
步驟C: 在室溫下，將7-溴-2-氯-3-氟喹啉(745 mg，2.86 mmol)溶於乙醇(10 mL)和氨水(20 mL)中。隨後反應液置於燜罐中，在100°C下攪拌20小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮，混合液用二氯甲烷(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-溴-3-氯喹啉-2-胺(530 mg)。 MS (ESI) M/Z: 241.0 [M+H] +.
步驟D: 在室溫下，將8-((3aS，4R，6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺 (125 mg，0.36 mmol)，7-溴-2-氯-3-氟喹啉(86 mg，0.36 mmol)和四乙基氯化銨(65 mg，0.39 mmol)溶於N，N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(16 mg，0.07 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL，0.786 mmol)。反應液在100°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到8-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((E)-2-(2-氨基-3-氟喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺(87 mg)。
MS (ESI) M/Z: 501.2 [M+H] +.
步驟E：在室溫下，將8-((3aS，4R，6R，6aR)-6-((E)-2-(2-氨基-3-氟喹啉-7-基)乙烯基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺(87 mg，0.174 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物被溶於2mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8~9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1S，2R，3R，5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-氟喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)環戊烷-1,2-二醇 (23.7 mg)。
MS (ESI) M/Z: 461.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.98(s, 1H), 7.77 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 8.9 Hz, 1H) 7.44 – 7.40 (m, 2H), 6.74 (s, 2H), 6.59 - 6.53 (m, 2H), 6.46 (s, 2H), 4.86 (dd, J= 5.8, 2.9 Hz, 2H), 4.83 – 4.75 (m, 1H), 4.29 (dd, J= 12.5, 6.2 Hz, 1H), 3.93 (dd, J= 6.0 Hz, 1H), 2.96 - 2.80 (m, 4H), 2.78 - 2.65 (m, 1H), 2.45 – 2.35 (m, 2H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 1.97 - 1.85 (m, 1H).
實施例32
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-氟喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image317
製備方法參考實施例31，最後得到目標產物(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-氟喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 423.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.85 (s, 1H), 7.65 (d, J= 11.3 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8.4 Hz, 1H) ,7.49 (s, 1H), 7.41 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.63 - 6.57(m, 1H), 6.48 - 6.38 (m, 1H), 4.33 - 4.25 (m, 1H), 4.15 – 4.11 (m, 1H), 3.90 – 3.86 (m, 1H), 3.72 – 3.61(m, 2H), 2.89 - 2.81(m, 2H), 2.81 - 2.74 (m, 1H), 2.16 – 2.08 (m, 1H), 1.70 - 1.58 (m, 1H).
實施例33
（1S，2R，3R，5R）-3-（（E）-2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙烯基）-5-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image319
反應路線:
Figure 02_image321
操作步驟：
步驟A: 在室溫下，將7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（60 mg，0.2 mmol），7-溴-3-氯喹啉-2-胺（51 mg，0.2 mmol）和四乙基氯化銨（36.3 mg，0.22 mmol）溶於N，N-二甲基甲醯胺（1.5 mL）中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀（9 mg，0.04 mmol），N，N-二異丙基乙胺（51.6 mg，0.4 mmol）。反應液在100°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（10 mL）淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（15 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（（E）-2-（（3aR，4R，6R，6aS）-6-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙烯基）-3-氯喹啉-2-胺（40 mg）。
MS (ESI) M/Z: 479.0 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將7-（（E）-2-（（3aR，4R，6R，6aS）-6-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙烯基）-3-氯喹啉-2-胺（40 mg，0.084 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（1 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1S，2R，3R，5R）-3-（（E）-2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙烯基）-5-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊烷-1,2-二醇（10.8 mg）。
MS (ESI) M/Z: 220.6 [1/2M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.14 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.60 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.40 (s, 2H), 6.69 (s, 2H), 6.58 – 6.42 (m, 2H), 5.94 (s, 2H), 4.83 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.69 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.26 – 4.15 (m, 1H), 4.05 - 3.95 (m, 1H), 3.78- 3.68 (m, 1H), 3.52 (t, J= 8.6 Hz, 2H), 2.79 – 2.68 (m, 2H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 1.98 – 1.90 (m, 1H), 1.57 – 14.9 (m, 1H).
實施例34
（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image323
反應路線:
Figure 02_image325
操作步驟：
步驟A: 在一個三口瓶中，加入2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）乙酸甲酯（2 g，9.1 mmol）的四氫呋喃（100 mL）溶液。置換反應系統為氮氣系統，然後冷卻到-78°C。向反應系統中逐滴滴加雙三甲基矽基胺基鋰 (18.2 mmol)的四氫呋喃溶液( 1M，18.2 mL)，滴加完畢後繼續在此溫度下攪拌1小時，然後向反應系統中滴加碘甲烷 (2.58 g，18.2mmol)，滴加完畢後，反應系統升到0°C繼續攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(200 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (200 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）丙酸甲酯(1.54 g)。
MS (ESI) M/Z: 234.9 [M+H] +.
步驟B: 在一個三口瓶中，加入2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）丙酸甲酯（1 g，4.27mmol）的四氫呋喃（30 mL）溶液。置換反應系統為氮氣系統，然後冷卻到零下78℃。向反應系統中逐滴滴加二異丁基氫化鋁 (12.8 mmol)的四氫呋喃溶液(1.5M，8.5 mL)，滴加完畢後，反應系統緩慢升到室溫繼續攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水 (50 mL) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化得到2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）丙烷-1-醇(450 mg)。
MS (ESI) M/Z: 207.2 [M+H] +.
步驟C: 在三口瓶中，將2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）丙烷-1-醇(540 mg，2.62 mmol)和4-二甲氨基吡啶(32 mg， 0.262 mmol)溶於二氯甲烷(420 mL)中。在0°C下加入甲磺醯氯(750 mg，6.55 mmol)和三乙胺(1.19 g，11.8 mmol)，反應液在0°C到室溫下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用二氯甲烷(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）甲基磺酸丙酯(700 mg)。
MS (ESI) M/Z:285.0 [M+H] +.
步驟D: 在室溫下，將2-（4,6-二氯嘧啶-5-基）甲基磺酸丙酯(700 mg，2.46 mmol)和（4-甲氧基苯基）甲醯胺(1.04g，7.4mmol)溶於二氯甲烷(30 mL)中，然後加入三乙胺(749 mg，7.4mmol)，置換反應系統為氮氣系統，反應液在55°C下攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-（4-甲氧基苄基）-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (710 mg)。
MS (ESI) M/Z:290.1 [M+H] +.
步驟E: 在室溫下，將4-氯-7-（4-甲氧基苄基）-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (710 mg，2.46 mmol)溶於三氟乙酸 (3 mL)和三氟甲磺酸(0.3 mL)中，反應液在70°C下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH=8-9，然後用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL) 洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (280 mg)。
MS (ESI) M/Z:170.0 [M+H] +.
步驟F: 在封管中，將4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (460 mg，2.72 mmol)和(3aS,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(763.5 mg，4.08 mmol，參考文獻J. Org. Chem. 2004, 69, 3993-3996方法製備，其全文內容藉由引用結合到本申請中)溶於甲苯 (2 mL)。將氰基亞甲基三正丁基膦(1.31g，5.44 mmol) 溶於甲苯 (2 mL)中，在氮氣氛圍下滴加上述液體，反應液在110°C下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (300 mg)。
MS (ESI) M/Z:336.2[M+H] +.
步驟G: 在室溫下，將4-氯-7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (300 mg，0.895 mmol)溶於乙醇 (20 mL)和氨水(100mL)混合液中，反應液在160°C高壓反應釜中攪拌60小時。
LCMS監測顯示大部分是產物後，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺 (120 mg)。
MS (ESI) M/Z:317.0[M+H] +.
步驟H:在一個三口瓶中加入化合物7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺 (38 mg，0.11 mmol)的四氫呋喃(4 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN (1.1 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，2.2 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到55°C，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(233 mg，1.1 mmol)的水溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(38.5 mg，0.11 mmol)和PdCl2(dppf)(8 mg，0.01mmol)的四氫呋喃(1 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到55°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠板層析純化得到7-（2-（（3aR，4S，6R，6aS）-6-（4-氨基-5-甲基-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7（6H）-基）-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙基）-3-溴喹啉-2-胺(30 mg)。
MS (ESI) M/Z:539.0 [M+H] +.
步驟I: 在室溫下，將7-（2-（（3aR，4S，6R，6aS）-6-（4-氨基-5-甲基-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7（6H）-基）-2,2-二甲基四氫-3aH-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙基）-3-溴喹啉-2-胺 (30 mg，0.055 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(1 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物被溶於5mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8~9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊烷-1,2-二醇 (15 mg)。
MS (ESI) M/Z: 499.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.79 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.13 – 7.06 (m, 1H), 6.56 (s, 2H), 5.89 (d, J= 22.1 Hz, 2H), 4.86 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.62 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.40 (dd, J= 6.6, 4.8 Hz, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 1H), 3.56 – 3.49 (m, 1H), 3.23 – 3.13 (m, 1H), 3.08 – 2.98 (m, 1H), 2.78 – 2.62 (m, 2H), 1.95 – 1.80 (m, 2H), 1.78 – 1.68 (m, 1H), 1.62 – 1.50 (m, 1H), 1.21 – 1.16(m, 1H), 1.15 – 1.08 (m, 3H).
實施例35
（1S，2R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊-3-烯-1,2-二醇
Figure 02_image327
反應路線:
Figure 02_image329
操作步驟：
步驟A: 在一個三口瓶中加入化合物4-氯-7-（（3aS，4R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶(75 mg，0.23 mmol)的四氫呋喃(1 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN (2.35 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，4.7 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到55℃，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(498 mg，2.35 mmol)的水溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(80.5 mg，0.23 mmol)和PdCl2(dppf)(14.6 mg，0.02mmol)的四氫呋喃(2 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到55°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠板層析純化得到3-溴-7-（2-（（3aS，6aR）-4-（4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-6-基）乙基）喹啉-2-胺(120 mg)。
MS (ESI) M/Z:542.0 [M+H] +.
步驟B: 在室溫下，將3-溴-7-（2-（（3aS，6aR）-4-（4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-6-基）乙基）喹啉-2-胺（120 mg，0.22 mmol）溶於乙醇（5 mL）和氨水（30mL）中。反應液在140 °C高壓反應釜中攪拌2天。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（30 mL）淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（15 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（（3aS，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（30 mg）。
MS (ESI) M/Z:523.3 [M+H] +.
步驟C：在室溫下，將7-（（3aS，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（30 mg，0.057 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（1 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1S，2R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊-3-烯-1,2-二醇（3.3 mg）。
MS (ESI) M/Z: 483.0[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.57(d, J= 8.2Hz, 1H), 7.31(s, 1H), 7.11(dd, J= 8.2, 1.6Hz, 1H), 6.56(s, 2H), 5.93(s, 2H), 5.28(d, J= 1.4Hz, 1H), 4.82(s, 1H), 4.74(dd, J= 6.2, 4.8Hz, 2H), 4.29(t, J= 5.8Hz, 1H), 3.88(dd, J= 10.6, 5.8Hz, 1H), 3.22(dd, J= 16.8, 9.0Hz, 1H), 2.98(dd, J= 18.8, 9.2Hz, 1H), 2.93 – 2.80(m, 2H), 2.57(t, J= 9.0Hz, 2H), 2.48 – 2.38(m, 2H).
實施例36
(1S,2R,3S)-3-(2-(2-氨基-3-氯喹啉-7-基)乙基)-5-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-醇
Figure 02_image331
製備方法參考實施例34，最後得到目標產物(1S,2R,3S)-3-(2-(2-氨基-3-氯喹啉-7-基)乙基)-5-(4-甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-醇。
MS (ESI) M/Z: 440.4[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.27 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.54 – 7.47 (m, 2H), 7.18(dd, J= 8.2, 1.5 Hz, 1H), 5.38(s, 2H), 4.12 – 4.04 (m, 1H), 3.91 – 3.83(m, 2H), 3.78 – 3.70(m, 1H), 3.51 (dd, J= 9.6Hz, 1H), 3.00(t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.85(t, J= 7.7 Hz, 2H), 2.31 – 2.22(m, 4H), 2.11 – 1.94(m, 4H), 1.75 – 1.70(m, 1H), 1.46 – 1.35(m, 1H).
實施例37
(1S,2R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊-3-烯-1,2-二醇
Figure 02_image333
製備方法參考實施例35，最後得到目標產物(1S,2R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊-3-烯-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 481.0[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.27 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.62 – 7.54 (m, 2H), 7.50(d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.11 – 6.97 (m, 2H), 5.99(s, 1H), 5.09(d, J= 6.0 Hz, 1H), 4.24 – 4.18 (m, 1H), 3.71 – 3.67(m, 1H), 3.56 – 3.52(m, 2H), 2.89 – 2.85(m, 2H).
實施例38
(1S，2R)-3-(2-(2-氨基-3-氯喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊-3-烯-1,2-二醇
Figure 02_image335
反應路線:
Figure 02_image337
操作步驟：
步驟A: 在一個三口瓶中加入化合物4-氯-7-（（3aS，4R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶(110 mg，0.34 mmol)的四氫呋喃(1 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN (3.44 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，6.89 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到55°C，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(729 mg，3.44 mmol)的水溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入7-溴-3-氯喹啉-2-胺(88 mg，0.34 mmol)和PdCl 2(dppf)(21.9 mg，0.03mmol)的四氫呋喃(2 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到55°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠板層析純化得到3-氯-7-（2-（（3aS，6aR）-4-（4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-6-基）乙基）喹啉-2-胺 (100 mg)。
MS (ESI) M/Z:498.0[M+H] +.
步驟B: 在室溫下，將3-氯-7-（2-（（3aS，6aR）-4-（4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-6-基）乙基）喹啉-2-胺（60 mg，0.12 mmol）溶於乙醇（5 mL）和氨水（30mL）中。反應液在140°C高壓反應釜中攪拌2天。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（30 mL）淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（15 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（2-（（3aS，6aR）-4-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-6-基）乙基）-3-氯喹啉-2-胺（20 mg）。
MS (ESI) M/Z:479.0 [M+H] +.
步驟C：在室溫下，將7-（2-（（3aS，6aR）-4-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-6-基）乙基）-3-氯喹啉-2-胺（20 mg，0.042 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（1 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1S，2R）-3-（2-（2-氨基-3-氯喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊-3-烯-1,2-二醇（2.7 mg）。
MS (ESI) M/Z:439.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.07 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.57 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.42 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.04 – 3.96 (m, 1H), 3.26 – 3.20 (m, 2H), 3.02 – 2.95 (m, 2H), 2.69 – 2.53 (m, 4H).
實施例39
（1R，2S，3R，5R）-3-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-5-（（E）-2-（2-氨基喹唑啉-7-基）乙烯基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image339
反應路線:
Figure 02_image341
操作步驟：
步驟A: 在室溫下，將7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺（100 mg，0.33 mmol），7-溴喹唑啉-2-胺（81.2mg，0.33 mmol）和四乙基氯化銨（60.15 mg，0.363 mmol）溶於N，N-二甲基甲醯胺（1.5 mL）中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀（15 mg，0.066 mmol），N，N-二異丙基乙胺（85 mg，0.66 mmol）。反應液在100 °C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水（10 mL）淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（15 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（（E）-2-（（3aR，4R，6R，6aS）-6-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙烯基）喹唑啉-2-胺（130 mg）。
MS (ESI) M/Z: 446.2 [M+H] +.
步驟B：在室溫下，將7-（（E）-2-（（3aR，4R，6R，6aS）-6-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙烯基）喹唑啉-2-胺（130mg，0.29 mmol）溶於甲醇（2 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（2 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（5 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1R，2S，3R，5R）-3-（4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-5-（（E）-2-（2-氨基喹唑啉-7-基）乙烯基）環戊烷-1,2-二醇（7.7 mg）。
MS (ESI) M/Z: 406.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.00 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.76 (s, 2H), 6.56 (s, 2H), 5.94 (s, 2H), 4.83 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.69 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.22 (dd, J= 16.0, 8.8 Hz, 1H), 3.97 (dd, J= 11.2, 5.6 Hz, 1H), 3.73 (dd, J= 11.6, 5.8 Hz, 1H), 3.52 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 2.78 – 2.68 (m, 2H), 2.65 – 2.61 (m, 1H), 1.98 - 1.95 (m, 1H), 1.58 - 1.50 (m, 1H).
實施例40
（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-氟喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚-9-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image343
反應路線:
Figure 02_image345
操作步驟：
步驟A: 在封管中，將4-氯-9H-嘧啶并[4,5-b]吲哚 (660 mg，3.24 mmol)和(3aS,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(890 mg，4.88 mmol，參考文獻J. Org. Chem. 2004, 69, 3993-3996方法製備，其全文內容藉由引用結合到本申請中)溶於乾燥甲苯 (5 mL)。將氰基亞甲基三正丁基膦(1.56 g，6.48 mmol) 溶於甲苯 (3 mL)中，在氮氣氛圍下滴加上述液體，反應液在110°C下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-9-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚 (379 mg)。
MS (ESI) M/Z:370.0[M+H] +.
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.87 (s, 1H), 8.38 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.73 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.51 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.07-5.98 (m, 1H), 5.45 – 5.38 (m, 1H), 5.30 (dd, J= 7.2, 5.8 Hz, 1H), 5.19 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 5.11 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 4.76 (t, J= 7.0 Hz, 1H), 2.88 - 2.76(m, 1H), 2.71 (dd, J= 24.4, 12.0 Hz, 1H), 2.34 – 2.25 (m, 1H), 1.53 (s, 3H), 1.22 (s, 3H).
步驟B: 在封管中，將4-氯-9-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚( 379 mg，1.02 mmol)溶於乙醇 ( 4mL)和氨水(10 mL)混合液中，反應液在120°C封管中攪拌18小時。
LCMS監測顯示大部分是產物後，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（（3aS，4R，6R，6aR）-9-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚-4-胺( 179 mg)。
MS (ESI) M/Z:351.2 [M+H] +.
步驟C: 在一個三口瓶中加入化合物7-（（3aS，4R，6R，6aR）-9-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚-4-胺 (60 mg，0.17 mmol)的四氫呋喃(1 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。室溫下，向反應液中緩慢滴加9-BBN (1.19 mmol)的四氫呋喃溶液(0.5 M，2.39 mL)，滴加完畢後，反應液被加熱到55°C，在此溫度下攪拌1小時。反應系統被移出油浴冷卻到室溫，然後向反應混合液中加入磷酸鉀(252 mg，1.19 mmol)的水溶液(2 mL)。反應液在室溫下攪拌30分鐘後，加入7-溴-3-氟喹啉-2-胺(41mg，0.17 mmol，參考實施例31的7-溴-3-氯喹啉-2-胺的合成方法製備)和PdCl 2(dppf)(14.6 mg，0.02mmol)的四氫呋喃(2 mL)溶液。最後所得的反應混合液被加熱到55°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，反應液被減壓濃縮得到粗產品純化得到9-（（3aS，4R，6S，6aR）-6-（2-（2-氨基-3-氟喹啉-7-基）乙基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚-4-胺(60 mg)。
MS (ESI) M/Z: 513.4 [M+H] +.
步驟D: 在室溫下，將9-（（3aS，4R，6S，6aR）-6-（2-（2-氨基-3-氟喹啉-7-基）乙基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚-4-胺（60 mg，0.12 mmol）溶於甲醇（2 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（2 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-氟喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-9H-嘧啶[4,5-b]吲哚-9-基）環戊烷-1,2-二醇（28 mg）。
MS (ESI) M/Z: 473.2 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.29 (s, 1H), 8.13 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.69 – 7.56 (m, 3H), 7.49 – 7.41 (m, 2H), 7.32 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.13 (dd, J= 18.0, 8.2 Hz, 1H), 4.97 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 4.12 (t, J= 5.8 Hz, 1H), 2.95 – 2.80 (m, 2H), 2.32 – 2.07 (m, 4H), 1.97 – 1.90 (m, 1H).
實施例41
（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5,5-二甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image347
反應路線:
Figure 02_image349
操作步驟：
步驟A: 在一個三瓶中加入（3aR，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮 (550 mg，1.72mmol)的N，N-二甲基甲醯胺(10mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後分批加入叔丁醇鉀粉末(579 mg，5.16mmol )。加入完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌1小時。然後在氮氣氛圍下滴加碘甲烷(732 mg，5.16mmol)，反應系統在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入水（10 mL）淬滅。然後用乙酸乙酯萃取，（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（15 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-（2,4-二甲氧基苄基）-5,5-二甲基-5,7-二氫-6H-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-酮（560 mg）。
MS (ESI) M/Z: 348.2 [M+H] +.
步驟B: 在一個三口瓶中加入4-氯-7-（2,4-二甲氧基苄基）-5,5-二甲基-5,7-二氫-6H-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-酮 (460 mg，1.33 mmol)的四氫呋喃(10 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後逐滴滴加四氫鋁鋰(2.66mmol)的四氫呋喃溶液( 1M，2.66 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌1小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入十水合硫酸鈉淬滅直至沒有氣泡冒出。然後加入四氫呋喃攪拌30分鐘，過濾反應液。濾液被濃縮得到油狀粗產物，用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-（2,4-二甲氧基苄基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-醇（370 mg）。
MS (ESI) M/Z: 350.2 [M+H] +.
步驟C: 在一個三口瓶中加入4-氯-7-（2,4-二甲氧基苄基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-醇 (370 mg，1.06mmol)的二氯甲烷(20 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後三氟乙酸(2.3 mL) 和三乙基矽烷(2.3 mL)。加入完畢後，反應系統室溫下攪拌1小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液調節pH=9-10。然後用二氯甲烷萃取（20 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-（2,4-二甲氧基苄基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶（330 mg）。
MS (ESI) M/Z: 334.2[M+H] +.
步驟D: 在單口瓶中，將4-氯-7-（2,4-二甲氧基苄基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (330 mg，1.01 mmol)溶於三氟乙酸 (15 mL)中，反應液在70°C下攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH=8-9，然後用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (180 mg)。
MS (ESI) M/Z:184.2[M+H] +.
步驟E: 在封管中，將4-氯-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (80 mg，0.44 mmol)和(3aS,4S,6R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊二烯并[d][1,3]二氧雜環-4-醇(123.4 mg，0.66 mmol，參考文獻J. Org. Chem. 2004, 69, 3993-3996方法製備，其全文內容藉由引用結合到本申請中)溶於乾燥甲苯 (1 mL)。將氰基亞甲基三正丁基膦(318 mg，1.32mmol) 溶於甲苯 (0.5 mL)中，在氮氣氛圍下滴加上述液體，反應液在110°C下攪拌18小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到4-氯-7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶 (140 mg)。
MS (ESI) M/Z:350.2[M+H] +.
步驟F: 在室溫下，將4-氯-7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶(140 mg，0.4 mmol)溶於乙醇 (50 mL)和氨水(150 mL)混合液中，反應液在160°C高壓反應釜中攪拌60小時。
LCMS監測顯示大部分是產物後，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺）(120 mg)。
MS (ESI) M/Z:331.2[M+H +].
步驟G: 取一個乾燥的三口瓶，將系統置換為氮氣氛圍，加入7-（（3aS，4R，6R，6aR）-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基）-5,5-二甲基-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺） (60mg，0.182 mmol)的四氫呋喃(2 mL)溶液，在冰浴下滴加9-BBN (1.274 mmol )的四氫呋喃溶液( 0.5M，2.55 mL)，反應系統在55°C油浴下加熱1小時，然後將反應液冷卻至室溫。將磷酸鉀(370 mg，1.274 mmol)溶於四氫呋喃(1 mL)中。向反應系統中滴加上述溶液，加入完畢後，反應系統室溫下攪拌20分鐘。然後加入3-溴-7-碘喹啉-2-胺(63.25 mg，0.182 mmol)和1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀(13.3 mg，0.0182mmol)，反應液在55°C油浴中攪拌過夜。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-（2-（（3aR，4S，6R，6aS）-6-（4-氨基-5,5-二甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙基）-3-溴喹啉-2-胺 (30 mg)。
MS (ESI) M/Z:553.2[M+H] +.
步驟H: 在室溫下，將7-（2-（（3aR，4S，6R，6aS）-6-（4-氨基-5,5-二甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基）乙基）-3-溴喹啉-2-胺（30 mg，0.054 mmol）溶於甲醇（1 mL）中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液（1 mL）。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入1 M的氫氧化鈉溶液調節pH值約等於8~9。混合液用乙酸乙酯（10 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘留物經製備型高效液相色譜純化得到最終產物（1S，2R，3S，5R）-3-（2-（2-氨基-3-溴喹啉-7-基）乙基）-5-（4-氨基-5,5-二甲基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基）環戊烷-1,2-二醇（4.2mg）。
MS (ESI) M/Z: 513.3 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.26 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.18 (dd, J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.29– 4.22 (m, 1H), 4.00 (dd, J= 8.2, 6.2 Hz, 1H), 3.71 (dd, J= 6.0, 4.2 Hz, 1H), 3.54 – 3.33 (m, 2H), 2.85 – 2.75 (m, 2H), 2.12– 2.05 (m, 1H), 2.02 – 1.89 (m, 2H), 1.73 – 1.70 (m, 1H), 1.37 (s, 6H), 1.34 – 1.25 (m, 1H).
實施例42
(1S,2R,3S)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8(5H)-yl)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image351
製備方法參考實施例5，最後得到目標產物(1S,2R,3S)-3-(2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-6,7-二氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-8(5H)-yl)-3-甲基環戊烷-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 537.6 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.26 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.56 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.19 (dd, J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 4.99– 4.92 (m, 1H), 4.63 – 4.56 (m, 1H), 3.90 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 2.97 – 2.89 (m, 4H), 2.89 – 2.71 (m, 2H), 2.54 – 2.48 (m, 2H), 2.08 – 1.83 (m, 4H), 1.22 (s, 3H).
實施例43
(1R,2S,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-(三氟甲基)喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image353
反應路線:
Figure 02_image355
操作步驟：
步驟A: 在室溫下，將7-溴-3-(三氟甲基)喹啉(950 mg，3.44 mmol)溶於二氯甲烷(25 mL)中。在0°C下緩慢加入間氯過苯甲酸(2.37 g，13.7 mmol)，反應液在室溫下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，0°C下向反應液中加入水(50 mL)淬滅，然後緩慢加入氯化銨的飽和水溶液調節pH至7，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-溴-3-(三氟甲基)喹啉1-氧化物(650 mg)。
MS (ESI) M/Z: 292.0 [M+H] +.
步驟B: 在室溫下，將7-溴-3-(三氟甲基)喹啉1-氧化物(650 mg，2.24 mmol)，溶於三氯甲烷(15 mL)中。然後在0°C下緩慢加入三氯氧磷(15 mL)，反應系統抽真空換氮氣多次。反應液在70 °C油浴下攪拌3小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮。加入二氯甲烷(30 mL)，然後用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至7，混合液用乙酸乙酯(30 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(30 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-溴-2-氯-3-(三氟甲基)喹啉(560 mg)。
MS (ESI) M/Z: 310.0 [M+H] +.
步驟C: 在室溫下，將7-溴-2-氯-3-(三氟甲基)喹啉(560 mg，1.8 mmol)溶於乙醇(10 mL)和氨水(20 mL)中。隨後反應液置於燜罐中在100°C下攪拌20小時。
LCMS監測顯示原料消失後，減壓濃縮，混合液用二氯甲烷(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-溴-3-(三氟甲基)喹啉-2-胺(400 mg)。
MS (ESI) M/Z: 291.4 [M+H] +.
步驟D: 在室溫下，將8-((3aS,4R,6aR)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧醇-4-基)-5,6,7,8-四氫環戊烷[4,5]吡咯[2,3-d]嘧啶-4-胺 (80 mg，0.26 mmol)，7-溴-3-(三氟甲基)喹啉-2-胺(75 mg，0.26 mmol)和四乙基氯化銨(65 mg，0.39mmol)溶於N，N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(6.7 mg，0.03 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(0.09 mL，0.54 mmol)。反應液在100 °C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(20 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(20 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到7-((E)-2-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基)乙烯基)-3-(三氟甲基)喹啉-2-胺(80 mg)。
MS (ESI) M/Z: 512.6 [M+H] +.
步驟E：在室溫下，將7-((E)-2-((3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基)乙烯基)-3-(三氟甲基)喹啉-2-胺(80 mg，0.156 mmol)溶於甲醇(1 mL)中。隨後，向上述溶液中加入4M的鹽酸-甲醇溶液(3 mL)。反應液在室溫下攪拌2小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產物。粗產物被溶於2mL甲醇，然後加入7 M氨甲醇溶液調節pH值約等於8~9。所得溶液經製備型高效液相色譜純化得到最終產物(1R，2S，3R，5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-(三氟甲基)喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇 (4 mg)。
MS (ESI) M/Z: 472.6 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.35 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.72 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 2H), 6.67 – 6.63 (m, 1H), 6.57 – 6.51 (m, 1H), 4.38 - 4.24 (m, 1H), 4.16 – 4.12 (m, 1H), 3.92 – 3.88 (m, 1H), 3.76 - 3.61 (m, 2H), 2.93 - 2.73 (m, 3H), 2.21 - 2.07 (m, 1H), 1.75 - 1.59 (m, 1H).
實施例44
(1R,2S,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-(三氟甲基)喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image357
製備方法參考實施例43，最後得到目標產物(1R,2S,3S,5R)-3-(2-(2-氨基-3-(三氟甲基)喹啉-7-基)乙基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇。
MS (ESI) M/Z: 474.6 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.36 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.72 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H) ,7.24 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.25 - 4.19 (m, 1H), 4.10 - 3.99(m, 1H), 3.79 - 3.55 (m, 3H), 2.96 – 2.75(m, 4H), 2.15 - 2.02(m, 1H), 2.02 - 1.87 (m, 2H), 1.83 – 1.65 (m, 1H), 1.42 - 1.26 (m, 1H).
實施例45
2-氨基-7-((E)-2-((1R,2R,3S,4R)-4-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7 -基)-2,3-二羥基環戊基)乙烯基)喹啉-3-甲腈
Figure 02_image359
反應路線:
Figure 02_image361
操作步驟：
步驟A：將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)- 2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯[d][1,3]二氧戊環-4-基）乙烯基）-3-溴喹啉-2-胺（參照實施例14步驟B產物的合成方法製備，100.0 mg，0.19 mmol），氰化亞銅（70 mg，0.77 mmol），三(二亞苄基丙酮)二鈀（20 mg，0.022 mmol）和1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵（43mg，0.077 mmol）加入1，4-二氧六環（6mL）中，氮氣置換3次，反應液升溫至100°C，攪拌過夜。
TLC監測顯示原料消失後，冷卻，直接減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化得到2-氨基-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS) -6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7–基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯[d][1,3]二氧戊環-4-基)乙烯基)喹啉-3-甲腈（50 mg）。 MS (ESI) M/Z: 470.2 [M+H] +.
步驟B：將2-氨基-7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS) -6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7–基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯[d][1,3]二氧戊環-4-基)乙烯基)喹啉-3-甲腈（50 mg，0.106 mmol）溶於三氟乙酸（2 mL）和水（1 mL）中，室溫攪拌2小時。
LCMS監測原料反應完，反應液加入乙腈稀釋，直接製備提純得到2-氨基-7-((E)-2-((1R,2R,3S,4R)-4-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7 -基)-2,3-二羥基環戊基)乙烯基)喹啉-3-甲腈（4.06 mg）。
MS (ESI) M/Z: 430.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.77 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.68 – 7.58 (m, 2H), 6.69 (d, J= 3.4 Hz, 2H), 4.57 – 4.48 (m, 1H), 4.20 – 4.16 (m, 1H), 3.99 – 3.86 (m, 3H), 3.02 – 2.98 (m, 2H), 2.85 – 2.79 (m, 1H), 2.24 – 2.09 (m, 1H).
實施例46
(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-(甲基磺醯基)喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇
Figure 02_image363
反應路線:
Figure 02_image365
操作步驟：
步驟A：將7-((E)-2-((3aR,4R,6R,6aS)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)- 2,2-二甲基四氫-4H-環戊二烯[d][1,3]二氧戊環-4-基）乙烯基）-3-溴喹啉-2-胺（參照實施例14步驟B產物的合成方法製備，150.0mg，0.29mmol），甲烷亞磺酸鈉（138mg，1.35mmol），脯氨酸（34mg，0.3mmol），碘化亞銅（36mg，0.19mmol）和碳酸銫（66mg，0.2mmol）加入二甲亞碸（5mL）中，氮氣保護下，升溫至100°C，攪拌2.5小時。
TLC監測顯示原料大部分消失，冷卻至室溫，向反應系統中加水（20mL）。混合液用乙酸乙酯（30mL×2）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（30mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得粗品直接用於下一步。
MS (ESI) M/Z: 523.1 [M+H] +.
步驟B：將上步粗品溶於甲醇（5mL），向其中加入4M 鹽酸水溶液（2mL），反應液室溫攪拌2小時。
TLC監測原料反應完，向反應系統中入飽和碳酸氫鈉水溶液（20mL）淬滅，混合液用二氯甲烷（30mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10mL ）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。粗品製備提純得到(1S,2R,3R,5R)-3-((E)-2-(2-氨基-3-(甲基磺醯基)喹啉-7-基)乙烯基)-5-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)環戊烷-1,2-二醇（14.71mg）。
MS (ESI) M/Z: 483.1 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 9.00 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.00 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.78 - 7.69 (m, 2H), 6.84 – 6.68 (m, 2H), 4.59 – 4.53 (m, 1H), 4.24 – 4.20 (m, 1H), 4.02 – 3.84 (m, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.07 – 2.97 (m, 2H), 2.88 – 2.84 (m, 1H), 2.20 – 2.16 (m, 1H), 1.80 – 1.76 (m, 1H).
實施例47
(1S,4R,6R,7R)-4-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氧雜二環[2.2.1]環戊烷-7-醇
Figure 02_image367
反應路線:
Figure 02_image369
操作步驟：
步驟A:在室溫下，將(3aR，6aR)-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮 (924 mg，6.0 mmol)和二苯甲酮(218 mg，1.2 mmol)溶於甲醇(400 mL)中。反應系統用氮氣置換保護，然後將反應瓶置於暗室，在汞燈的照射下攪拌2小時。
TLC監測顯示原料消失後，將反應液減壓濃縮得到粗產品。所得粗產品用矽膠柱層析純化得到(3aR,6aR)-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(686 mg)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 4.92 (t, J= 4.6 Hz, 1H), 4.63 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.18 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.64 – 3.52 (m, 1H), 3.46 – 3.38 (m, 1H), 2.63 – 2.52 (m, 2H), 2.41 – 2.34 (m, 1H), 1.31 (s, 3H), 1.26 (s, 3H).
步驟B: 在室溫下，將(3aR,6aR)-6-(羥甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(5.58 g，30 mmol)和咪唑(4.08 g，60 mmol)溶於二氯甲烷(60 mL)中。然後將反應液冷卻到0°C，向反應液中滴加叔丁基二苯基氯矽烷(12.37 g，450 mmol)的二氯甲烷溶液。反應液在室溫下攪拌16小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(300 mL)淬滅，混合液用二氯甲烷(60 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化，得到(3aR，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(10.96 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.63 – 7.55 (m, 4H), 7.52 – 7.42 (m, 6H), 4.73 – 4.60 (m, 1H), 4.21 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.78 (dd, J= 10.1, 2.9 Hz, 1H), 3.59 (dd, J= 10.1, 3.6 Hz, 1H), 2.80 – 2.61 (m, 1H), 2.54 – 2.52 (m, 1H), 2.49 – 2.45 (m, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 0.95 (s, 9H).
步驟C: 在一個三口瓶中，加入(3aR,6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(10.6 g，25 mmol)和三乙基氯矽烷(7.54 g，50 mmol)的四氫呋喃(50 mL)溶液， 然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至-78°C，然後逐滴滴加雙(三甲基矽基)氨基鋰(50 mmol)的四氫呋喃溶液(1M，50 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌40分鐘。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(100 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(50 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化，得到叔丁基(((3aR，6aR)-2,2-二甲基-6-(三乙基矽基)氧基)-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-基)甲氧基)二苯基矽烷(6.25 g)。
步驟D: 在一個單口瓶中，加入叔丁基(((3aR，6aR)-2,2-二甲基-6-(三乙基矽基)氧基)-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-基)甲氧基)二苯基矽烷(6.25 g，11.6 mmol)，醋酸鈀(779 mg，3.48 mmol)和二甲基亞碸(100 mL)，然後系統置換為氧氣氛圍。反應液被加熱到60°C，並在此溫度下反應過夜。
TLC監測顯示原料消失後，將反應液倒入冰水中。反應液用乙酸乙酯(60 mL ×3次)萃取，合併有機相，有機相依次用水(60 mL×3次)和飽和食鹽水 (60 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化，得到(3aR，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(3.45 g，收率 70.5%)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.71 – 7.60 (m, 4H), 7.48 – 7.33 (m, 6H), 6.33 (t, J= 1.9 Hz, 1H), 4.98 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.69 (dd, J= 18.9, 1.9 Hz, 1H), 4.54 – 4.41 (m, 2H), 1.34 (d, J= 8.0 Hz, 6H), 1.12 – 1.05 (m, 9H).
步驟E: 在一個三口瓶中，加入氯化鋰(127 mg，3 mmol)，碘化亞銅(286 mg，1.5 mmol)和四氫呋喃(100 mL)，然後系統置換為氮氣氛圍。反應液被冷卻到0°C並在此溫度下攪拌10分鐘，然後向反應液中逐滴滴加三甲基氯矽烷(1.956 g，18 mmol)和(3aR，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-3a，6a-二氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(6.34 g，15mmol)的四氫呋喃(40 mL)溶液。滴加完畢後，反應液繼續在0°C下攪拌20分鐘。然後逐滴滴加乙烯基溴化鎂(24 mmol)的四氫呋喃溶液(1M，24 mL)。所得反應液在0°C下繼續攪拌30分鐘。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應液用乙酸乙酯(50 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(30 mL×3次) 洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得混合物用矽膠柱層析純化，得到(3aR，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(4.15 g)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.76 – 7.64 (m, 4H), 7.47 – 7.33 (m, 6H), 6.21 – 5.86 (m, 1H), 5.29 – 5.19 (m, 1H), 5.17 – 5.04 (m, 1H), 4.94 – 4.70 (m, 1H), 4.34 – 4.18 (m, 1H), 3.96 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 3.72 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 2.46 – 2.27 (m, 2H), 1.42 – 1.31 (m, 6H), 1.13 – 1.03 (m, 9H).
步驟F: 在一個三口瓶中加入(3aR，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-酮(4.15 g，9.2 mmol)的四氫呋喃(50 mL)溶液，然後系統置換為氮氣氛圍。反應瓶置於冰浴中降溫至0°C，然後逐滴滴加四氫鋁鋰(18.4 mmol )的四氫呋喃溶液(1M，18.4 mL)。滴加完畢後，反應系統繼續在0°C下攪拌2小時。
TLC監測顯示原料消失後，向反應液中緩慢加入十水合硫酸鈉淬滅直至沒有氣泡冒出。然後加入四氫呋喃攪拌30分鐘，過濾反應液。濾液被濃縮得到油狀粗產物，用矽膠柱層析純化，得到(3aS，4S，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-醇(2.95 g)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.76 – 7.60 (m, 4H), 7.46 – 7.30 (m, 6H), 5.94 (dd, J= 17.8, 11.1 Hz, 1H), 5.18 (dd, J= 39.0, 14.5 Hz, 2H), 4.60 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 4.46 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 4.08 – 4.00 (m, 1H), 3.82 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 3.57 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 1.98 (dd, J= 12.2, 6.4 Hz, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.43 – 1.38 (m, 1H), 1.36 (s, 3H), 1.03 (s, 9H).
步驟G：在室溫下，將4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(467 mg，3 mmol)和(3aS，4S，6aR)-6-(叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二噁英-4-醇(905 mg，2 mmol)溶於甲苯(20 mL)中，反應系統被置換為氮氣氛圍。然後將2-(三丁基亞正膦基)乙腈(1.45 g，6 mmol)的甲苯(2 mL)溶液緩慢加入反應系統中。反應液加熱到110°C，並在此溫度下攪拌16小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠柱層析純化，得到7-(3aS，4R，6R，6aR)-6-((叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基)-4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶(300 mg)。
MS (ESI) M/Z:590.1 [M+H] +.
步驟H：在室溫下，將7-(3aS，4R，6R，6aR)-6-((叔丁基二苯基矽氧基)甲基)-2,2-二甲基-6-乙烯基四氫-4H-環戊烷[d][1,3]二氧基-4-基)-4-氯-6,7-二氫-5H-吡咯[2,3-d]嘧啶(590 mg，1 mmol)溶於甲醇(3 mL)中。向反應混合物加入4N HCl甲醇溶液(2.5 mL)。反應液在室溫下攪拌16小時。
LCMS監測顯示原料消失後，反應液減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠柱層析純化，得到(1S，2R，3R，5R)-5-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-(羥甲基)-3-乙烯基環戊烷-1,2-二醇 (220 mg)。
MS (ESI) M/Z:312.1 [M+H] +.
步驟I：在室溫下，將(1S，2R，3R，5R)-5-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-(羥甲基)-3-乙烯基環戊烷-1,2-二醇 (218 mg，0.7 mmol)溶於甲苯(2 mL)中，反應系統被置換為氮氣氛圍。然後將2-(三丁基亞正膦基)乙腈(338 mg，1.4 mmol)的甲苯(1 mL)溶液緩慢加入反應系統中。反應液加熱到110°C，並在此溫度下攪拌16小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(30 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(15 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(50 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。粗產品用矽膠柱層析純化，得到(1S，4R，6R，7R)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-乙烯基-2-氧雜環[2.2.1]庚烷-7-醇 (65 mg)。
MS (ESI) M/Z:294.0 [M+H] +.
步驟J：在室溫下，將(1S，4R，6R，7R)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-乙烯基-2-氧雜環[2.2.1]庚烷-7-醇(65 mg，0.22 mmol)，3-溴-7-碘喹啉-2-胺(92 mg，0.264 mmol)和四乙基氯化銨(40 mg，0.24 mmol)溶於N，N-二甲基甲醯胺(2 mL)中。反應系統抽真空換氮氣多次。在氮氣氛圍下加入醋酸鈀(10 mg，0.04 mmol)，N，N-二異丙基乙胺(142 mg，1.1 mmol)。反應液在70°C油浴下攪拌12小時。
LCMS監測顯示原料消失後，向反應液中加入水(10 mL)淬滅，減壓濃縮。混合液用乙酸乙酯(10 mL×3次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(15 mL)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化，得到(1S，4R，6R，7R)-4-(E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氧雜環[2.2.1]庚烷-7-醇(45 mg)。
MS (ESI) M/Z:514.1[M+H] +.
步驟K: 在室溫下，將1S，4R，6R，7R)-4-(E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯基)-6-(4-氯-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氧雜環[2.2.1]庚烷-7-醇(45 mg，0.29 mmol)的乙醇(1 mL)溶液加入封管中。隨後，在室溫下向反應系統中緩慢加入氨水(3 mL)。反應液在135°C油浴下攪拌4天。
LCMS監測顯示原料消失後，將反應液減壓蒸餾濃縮。所得殘留物純化得到最終產物(1S,4R,6R,7R)-4-((E)-2-(2-氨基-3-溴喹啉-7-基)乙烯)-6-(4-氨基-5,6-二氫-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-7-基)-2-氧雜二環[2.2.1]環戊烷-7-醇 (2.5 mg)。
MS (ESI) M/Z:495.0 [M+H] +.
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.26 (s, 1H), 7.88 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.51(s, 1H), 7.46 (dd, J= 8.5, 1.6 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 16.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 16.2 Hz, 1H), 4.92 - 4.90 (m, 1H), 4.68 (d, J= 6.3 Hz, 1H)，4.15 (dd, J= 9.9, 3.9 Hz, 1H), 3.84-3.69 (m, 2H), 2.92 - 2.88 (m, 2H), 2.12 - 1.98 (m, 2H), 1.37 - 1.25 (m, 2H).
生物學測試評價
測試例 1：評價本發明化合物對PRMT5甲基化酶的活性抑制作用
本實驗採用TR-FRET（時間分辨螢光共振能量轉移）方法測定本發明化合物對PRMT5蛋白甲基化H4組蛋白的短肽受質的抑制活性，並得出本發明化合物對PRMT5甲基化活性抑制的半數抑制濃度（IC 50）。
實驗材料
PRMT5/MEP50蛋白預混液購自BPS Bioscience公司，組蛋白H4肽購自GL Biochem公司，受質SAM（S-(5’-腺苷基)-L-蛋氨酸氯化物）購自NEB（諾揚生物）公司，TR-FRET reagent購自Perkinelmer 公司，緩衝液成分（Bicine（N,N-雙（2-羥乙基）甘氨酸），NaCl，DTT（二硫蘇糖醇），Porcine skin gelatin（明膠），Tween-20（吐溫-20））購自Sigma公司。
實驗方法
1)採用緩衝液成分以1：3的體積比連續稀釋化合物，得到10個不同濃度點的化合物溶液，滴定曲線確定每種化合物溶液的效價。
2)向白色Greiner 384孔板的每個孔中分配100nL化合物溶液，然後分別加入5 μL PRMT5/MEP50蛋白預混液和組蛋白H4肽以1：1的體積比混合得到的混合液，室溫培養30分鐘。
3)分別加入SAM來引發每個反應，將板密封並置於25℃的恒溫箱中，與化合物進行預培養90分鐘。
4) 預培養結束後，每個孔中分別加入10 μLTR-FRET reagent檢測液，繼續培養60分鐘後，在Envision酶標儀（PerkinElmer）上檢測TR-FRET 訊號（激發光320 nm或340 nm，發射光波長665 nm）。 5)使用GraphPad Prism 6軟體進行資料分析，計算化合物的IC 50。
本發明化合物對PRMT5甲基化酶抑制作用結果見表1，活性資料分為A、B、C、D四個區間，IC 50≤10 nM的化合物用A標識，10 nM＜IC 50≤100 nM的化合物用B標識，100 nM＜IC 50≤500 nM 的化合物用C 標識， 500 nM＜IC 50＜1000 nM用D標識。
表1 本發明化合物對PRMT5甲基化酶活性的抑制結果
實施例編號 PRMT5 IC 50(nM) 實施例編號 PRMT5 IC 50(nM) 實施例編號 PRMT5 IC 50(nM)
實施例1 A 實施例16-P1 A 實施例32 A
實施例2 A 實施例16-P2 A 實施例33 A
實施例3 A 實施例17 D 實施例34 A
實施例4 A 實施例18-P1 A 實施例35 A
實施例5 A 實施例18-P2 A 實施例36 A
實施例6-P1 A 實施例19 A 實施例37 A
實施例6-P2 A 實施例20 A 實施例38 A
實施例7 A 實施例21 A 實施例39 A
實施例8 A 實施例22 A 實施例40 A
實施例9-P1 A 實施例23 A 實施例41 A
實施例9-P2 A 實施例24 A 實施例42 A
實施例10 C 實施例25 A 實施例43 A
實施例11 B 實施例26 A 實施例44 A
實施例12 A 實施例27 A 實施例45 A
實施例13-P1 A 實施例28 A 實施例46 D
實施例13-P2 B 實施例29 A 實施例47 A
實施例14 A 實施例30 A      
實施例15 A 實施例31 A      
結論：從表1中可以看出，本發明化合物對PRMT5甲基化酶具有較好的抑制作用。
測試例 2：評價本發明化合物對人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2的增殖抑制作用
本實驗藉由採用化學發光法測定細胞內ATP（腺嘌呤核苷三磷酸）含量來檢測本發明化合物對人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2的增殖抑制作用，並得出本發明化合物對人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2的抑制增殖的半數抑制濃度IC 50。
1.實驗材料
DMEM培養基、胎牛血清（FBS）、100×青鏈黴素混合溶液（Pen/Strep）、GlutaMAX-I Supplement購自GIBCO公司。Cell Titer-Glo發光法細胞活力檢測試劑購自Promega公司。人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2購自ATCC。
2.實驗方法
1)採用加有青鏈黴素混合溶液的含FBS的DMEM培養基培養人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2，於37℃，5 vol %CO 2條件下培養至對數期，用細胞計數儀計數，按照每孔800個細胞的密度將細胞接種於96孔培養板，每孔150 μL。置於培養箱（37℃，5vol%CO 2）中培養過夜。
2)第0天：使用D300e (TECAN) 超微量加樣儀向培養板細胞中加入750 nL梯度稀釋的待測化合物(9個濃度，1:3比例稀釋)，DMSO（二甲基亞碸）終濃度為0.5w/v%，將培養板置於細胞培養箱中培養6天（37℃，5vol%CO 2）。空白對照加入每孔750 nL的DMSO。
3)第6天：每孔加入100 μL Cell Titer-Glo試劑，500 rpm振盪2分鐘，室溫避光靜置培養10分鐘穩定發光訊號。
4)Envision酶標儀（PerkinElmer）檢測發光訊號。
5)使用GraphPad Prism 6 軟體進行資料分析，計算化合物的IC 50。
本發明化合物對人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2的抑制增殖作用結果見表2，活性資料分為A、B、C、D四個區間，IC 50≤10 nM的化合物用A標識，10 nM＜IC 50≤100 nM的化合物用B標識，100 nM＜IC 50≤500 nM 的化合物用C 標識，500 nM＜IC 50＜1000 nM 用D標識。
表2 對人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2的抑制結果
實施例編號 Miapaca-2 IC 50(nM) 實施例編號 Miapaca-2 IC 50(nM) 實施例編號 Miapaca-2 IC 50(nM)
實施例1 B 實施例15 A 實施例30 B
實施例2 A 實施例16-P1 A 實施例31 C
實施例3 B 實施例16-P2 B 實施例32 B
實施例4 B 實施例17 D 實施例33 A
實施例5 A 實施例18-P1 B 實施例34 B
實施例6-P1 C 實施例18-P2 C 實施例35 A
實施例6-P2 B 實施例19 B 實施例36 A
實施例7 A 實施例20 D 實施例37 C
實施例8 B 實施例21 B 實施例38 A
實施例9-P1 D 實施例22 A 實施例39 D
實施例9-P2 C 實施例23 B 實施例40 C
實施例10 D 實施例24 B 實施例41 C
實施例11 D 實施例25 C 實施例42 B
實施例12 A 實施例26 A 實施例43 C
實施例13-P1 B 實施例27 B 實施例44 B
實施例13-P2 C 實施例28 C 實施例45 D
實施例14 A 實施例29 B 實施例46 C
結論：從表2中可以看出，本發明化合物對人胰腺癌細胞株MIA PaCa-2具有較好的抑制作用。
測試例3：本發明化合物對穩定表達在中國倉鼠卵巢細胞的hERG鉀離子通道的影響
人心室快速啟動延遲整流鉀電流（I Kr）主要由心臟hERG鉀離子通道介導。對I Kr的抑制是非心臟病類藥物引起心室肌動作電位時程延長的最常見機理。動作電位時程的延長將導致臨床心電圖上出現QT間期延長，這與危險的室性心律失常、扭轉性心動過速相關。
本試驗採用手動膜片鉗的方法評估本發明化合物對穩定表達在體外CHO細胞系的hERG（人類ether-à-go-go 相關基因）鉀通道（I Kr）電流的濃度-反應關係，進而確定本發明化合物是否具有對hERG鉀離子通道的抑制作用。
1.實驗材料
細胞外液（ECS）：NaCl，145 mM；KCl，4 mM；CaCl 2，2 mM；MgCl 2，1 mM；HEPES（4-羥乙基呱嗪乙磺酸），10 mM；葡萄糖，10 mM，用純水溶解，再調節pH至7.3-7.4。中國倉鼠卵巢細胞（CHO-hERG）來源於Sophion生物科學公司。
2.實驗方法
1)將本發明部分化合物、溶媒對照、陽性對照(JNJ-64619178)的母液製劑用ECS混合液稀釋成濃度為0.3µM、1µM、3µM、10µM和30 µM的工作溶液；ECS混合液是ECS和DMSO的混合溶液，其中ECS比例為0.1%（v/v）；空白對照為DMSO。每個濃度重複測定兩個細胞。
2)將處於指數生長期的CHO-hERG細胞收集並重懸在ECS中備用。
3)全細胞膜片鉗技術下記錄hERG電流，記錄溫度為室溫。膜片鉗放大器輸出訊號藉由數模轉換以及2.9 KHz低通濾波。資料記錄用Patchmaster Pro 軟體採集。
4)將hERG電流值轉錄到Excel表格中，計算化合物對hERG的IC 50。
本發明化合物和JNJ-64619178對hERG鉀離子通道的抑制效應見表3。
表3. 本發明化合物和JNJ-64619178對hERG電流抑制率
化合物 hERG電流抑制率(%) IC 50(µM)
0.3µM 1µM 3 µM 10µM 30 µM
JNJ-64619178 2.51 11.02 22.87 55.89 73.18 9.17
實施例15 0.98 4.1 10.98 40.57 68.62 14.81
實施例22 1.06 6.34 18.94 46.08 74.98 11.34
備註：JNJ-64619178為WO2017032840A1的compound 80，參考專利方法製備。
Figure 02_image371
結果：從表3可以看出，本發明實施例22和實施例15化合物對hERG的半數抑制濃度（IC 50）值分別為11.34 µM和14.81 µM，優於對照化合物JNJ-64619178的半數抑制濃度（IC 50）值9.17 µM，表明具有心臟安全性更高的潛在優勢。
測試例4：本發明化合物對體外人肝微粒體CYP450酶的抑制作用考察評價DDI風險
本實驗中建立化合物對人肝微粒體CYP450亞酶CYP3A4的抑制模型，測試化合物設置7個濃度，測定本發明化合物對CYP酶的半數抑制濃度（IC 50），以表示本發明化合物對CYP酶的抑制作用情況，進而評價化合物的DDI風險。
1. 試驗方案
1.1 試驗藥品：
本發明部分化合物。
1.2 試驗材料：
人肝微粒購買自Corning，濃度為0.127mg/mL；磷酸鉀緩衝液，100 mM；氯化鎂，33 mM；NADPH（還原型煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸），10 mM；終止液，乙腈（含內標100 ng/mL甲苯磺丁脲）。
1.3 陽性對照、待測化合物和受質：
陽性對照、待測化合物和受質如表4所示。
表4 陽性對照、待測化合物和受質
CYP450酶 分類 名稱 終濃度 (µM) 溶劑
CYP3A4 陽性對照 酮康唑 3 MeOH (甲醇)
受質 美達唑侖 2 MeOH (甲醇)
睾酮 40 MeOH (甲醇)
測試化合物 實施例15 0.05, 0.15, 0.5, 1.5, 5, 15, 50 MeOH (甲醇)
實施例22 0.05, 0.15, 0.5, 1.5, 5, 15, 50 MeOH (甲醇)
1.4 反應系統：
肝微粒體蛋白濃度，0.127 mg/mL；磷酸鉀緩衝液，100 mM；陽性對照、受質、測試化合物和受質見1.3部分；NADPH，10 mM；氯化鎂，33 mM。
1.5 反應過程：
反應系統中加入受質、陽性對照、待測化合物於37°C預培養10 min，然後加入NADPH（還原型煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）輔因數啟動反應，於37°C共培養，其中3A4（美達唑侖）培養3 min，3A4（睾酮）培養10 min，在培養終點時加入400 µM含內標的冷終止液混合終止反應，並於4000 rpm離心20 min，分離上清液，稀釋後進行LC-MS/MS分析。
藉由比較測試物對酶的半數抑制濃度（　C 　　），評價本發明化合物是否具有　DDI （drug-drug interaction，DDI，即藥物相互作用）的風險。
測試例5：本發明化合物對體外人肝微粒體CYP450酶的抑制作用考察評價TDI的風險
化合物對CYP酶活性的影響與作用時間相關，一些化合物對酶活性的抑制作用隨時間延長而降低，而有的化合物對酶活性則呈現時間依賴性的不可逆抑制，這對化合物之間的相互作用、化合物的體內代謝及安全性造成影響。本實驗中建立化合物對人肝微粒體CYP450亞酶CYP3A4的抑制模型，測試化合物設置7個濃度，測定本發明化合物對CYP酶的時間依賴半數抑制濃度（IC 50），以評價本發明化合物是否具有TDI（time-dependent inhibition，即時間依賴性抑制）的風險。
1. 試驗方案
1.1 試驗藥品：
本發明部分化合物。
1.2 試驗材料：
人肝微粒購買自Corning，濃度為20 mg/mL；磷酸鉀緩衝液，100 mM；氯化鎂，300 mM；NADP（煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸），65 mM；G6P（6-磷酸葡萄糖），330 mM；G6PDH（6-磷酸葡萄糖脫氫酶），250 U/mL；終止液，乙腈（含內標100 ng/mL甲苯磺丁脲）。
1.3 陽性對照、待測化合物和受質：
陽性對照、待測化合物和受質如表5所示。
表5 陽性對照、待測化合物和受質
CYP450酶 分類 名稱 濃度 (µM) 溶劑
CYP3A4 陽性對照 維拉帕米 2.3 MeOH (甲醇)
受質 睾酮 40 MeOH (甲醇)
測試化合物 JNJ-64619178 0.05, 0.165, 0.5, 1.65, 5, 16.5, 50 MeOH (甲醇)
測試化合物 實施例22 0.05, 0.165, 0.5, 1.65, 5, 16.5, 50 MeOH (甲醇)
測試化合物 實施例15 0.05, 0.165, 0.5, 1.65, 5, 16.5, 50 MeOH (甲醇)
1.4 反應系統：
肝微粒體蛋白濃度，0.1 mg/mL；磷酸鉀緩衝液，100 mM；陽性對照、受質、測試化合物和受質見1.3部分；NADP，1 mM；G6P，5.53 mM；G6PDH，1.2 U/mL；氯化鎂，3.3 mM。
1.5 反應過程：
反應系統中加入陽性對照、待測化合物於37°C 預培養10 min，然後加入NADPH（還原型煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸）輔因數啟動反應，於37℃共培養30 min，後加入受質混合繼續37℃共培養10 min，在培養終點時加入250 µM含內標的冷終止液混合終止反應，並於4000 rpm離心20 min，分離上清液，稀釋後進行LC-MS/MS分析。
藉由比較測試物對酶時間依賴的半數抑制濃度（　C 　　），評價本發明化合物是否具有TDI （time-dependent inhibition，即時間依賴性抑制）的風險。
2. 實驗結果
表6. 本發明化合物和JNJ-64619178對CYP3A4酶的抑制活性
CYP/Substrate 酶/受質 化合物 TDI IC 50(μM)
CYP3A4_睾酮 JNJ-64619178 3.54
實施例15 9.17
實施例22 6.19
結果：從表6可以看出，本發明實施例22和實施例15化合物對CYP3A4酶的IC 50明顯高於JNJ-64619178，表明本發明化合物具有顯著時間依賴性抑制（time-dependent inhibition，TDI）的風險更低。
測試例6：本發明化合物在比格犬體內藥代動力學測定
以比格犬為受試動物，研究本發明化合物經靜脈推注、口服或腹腔注射給藥後，在特定時間點收集血漿樣品，LC-MS/MS檢測血漿中化合物濃度，計算PK參數，體現本發明化合物的在犬體內血漿的藥代動力學行為。
1. 試驗方案
1.1 試驗藥品：
本發明部分化合物。
1.2 試驗動物
比格犬，雄性，供應商為Marshall。
1.3 給藥
實施例15化合物給藥資訊：IV（靜脈推注）、PO（口服）實驗組都為3隻犬，IV給藥劑量為1 mg/kg，給藥體積為0.2 mL/kg；PO 給藥劑量為3 mg/kg，給藥體積為1 mL/kg。給藥溶媒為5vol%DMSO/10vol%Solutol（增溶劑）/85vol%Saline（生理鹽水）。
實施例22化合物給藥資訊：比格犬：IV、PO實驗組都為3隻犬，IV給藥劑量為1 mg/kg，給藥體積為0.2 mL/kg；PO 給藥劑量為3 mg/kg，給藥體積為1 mL/kg。給藥溶媒為5vol%DMSO/10vol%Solutol/85vol%Saline。
1.4 實驗器材
離心機購自Eppendorf 公司，移液器購自Eppendorf 公司。
1.5 樣品採集
犬給藥後，在0.0833（IV）、0.25、0.5、1、2、4、8和24小時，靜脈采血各0.5 mL，置於EDTA-K2試管中，於4 °C、2000 g離心10 min分離血漿，於-80 °C保存。
1.6 樣品處理
犬血漿樣品處理：
1）55 μL血漿樣品加入200 μL乙腈沉澱，渦旋混合後離心15分鐘。
2）取處理後上清液用水稀釋後藉由LC/MS/MS分析待測化合物的濃度。
2. 實驗結果
藥代動力學參數用WinNonlin 6.1計算得到，犬靜脈注射、口服和腹腔注射藥物的藥代動力學參數見表7。其中，C max表示最大血藥濃度，CL表示清除率，Vss表示穩態分佈容積，T 1/2表示末端消除半衰期，MRT Inf表示平均駐留時間，AUC表示藥時曲線下面積，F表示生物利用度。
表7 比格犬靜脈注射、口服或腹腔注射本發明部分化合物的藥代動力學參數
化合物 給藥 途徑 劑量 C max CL Vss T 1/2 MRT Inf AUC F
(mg/kg) (ng/mL) (L/hr/kg) (L/kg) (hr) (hr) (hr*ng/mL) (%)
實施例15 IV 1 / 0.877 7.58 7.71 8.58 1041 /
PO 3 414 / / 6.16 8.04 3424 106
實施例22 IV 1 / 1.05 3.93 3.71 3.49 956 /
PO 3 329 / / 5.48 6.83 2396 88.6
註：“/”表示未測定
結果：從表7可以看出，本發明化合物在比格犬體內具有良好的藥代動力學性質。
測試例7：本發明化合物在H520異種型移植瘤模型上的體內藥效學研究
1.實驗動物：BALB/c裸小鼠，雌性，6-8周齡，體重18-22克，由北京維通利華實驗動物有限公司提供。
2.實驗方法
模型建立：將5×10 6個人肺鱗癌細胞NCI-H520 (ATCC，貨號HTB-182™)接種於BALB/c裸小鼠右側皮下建立異種移植腫瘤模型。接種後第17天，當平均腫瘤體積達到134 mm 3時，挑選腫瘤體積適宜的荷瘤小鼠，根據腫瘤體積進行隨機區組化分組，然後開始治療。第一次和最後一次給藥後採集PK血漿以評估藥效和暴露量之間的關係。
動物實驗分組和給藥方案如下表8所示；其中，N表示小鼠數量，PO表示口服給藥，QD表示一天一次，4W表示4周。
表8 動物實驗分組和給藥方案
組別 N（隻） 化合物 劑量(mg/kg) 給藥體積參數(µL/g) 給藥途徑 給藥週期
1 6 溶媒 -- 10 PO QD　4W
2 6 實施例22 3 10 PO QD　4W
3 6 實施例22 10 10 PO QD　4W
4 6 實施例22 30 10 PO QD　4W
5 6 實施例15 3 10 PO QD　4W
6 6 實施例15 10 10 PO QD　4W
7 6 實施例15 30 10 PO QD　4W
溶媒：5 vol%DMSO+10 vol% Solutol+85 vol%Saline。
每週兩次用遊標卡尺測量腫瘤直徑。腫瘤體積的計算公式為：V = 0.5a×b 2，a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。
化合物的抑瘤療效用腫瘤生長抑制率TGI(%)或相對腫瘤增殖率T/C(%)的評價。
腫瘤生長抑制率TGI(%)=[(1-（某一天給藥組的平均瘤體積－該給藥組分組給藥時的平均瘤體積）)/( 某一天溶媒對照組的平均瘤體積－該溶媒對照組分組給藥時的平均瘤體積)]×100%。
無
無。
Figure 111127014-A0101-11-0001-2
無。

Claims (23)

  1. 一種式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，
    Figure 03_image001
    其中，R 1選自H或NR 1aR 1b； R 1a和R 1b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；所述C 1-4烷基可任選被一個或多個R 1c基團所取代，所述R 1c基團為C 3-6環烷基； Y選自N或CR 2； R 2選自H、鹵素、鹵素取代的C 1-4烷基、CN或-SO 2-C 1-4烷基； L 1選自化學鍵、-CH 2-、-X-CH 2、-(CH 2) n-CH=CH-、-CH=CH-(CH 2) n-、C 3-6環烷基或5-6員雜芳基； X選自O、S、NH或CH 2； 環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基； R 3選自羥基或C 1-4烷基； m選自0、1、2或者3； n選自0或1； 環B選自
    Figure 03_image003
    或
    Figure 03_image005
    ； R 4選自NR 4aR 4b或C 1-4烷基； R 4a和R 4b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；
    Figure 03_image007
    代表單鍵或雙鍵； 當
    Figure 03_image007
    為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘、鹵素或C 1-4烷基；R 7和R 8各自獨立地為H； 當
    Figure 03_image007
    為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7和與其相連的C原子一起形成苯基或C 5-6環烷基。
  2. 如請求項1所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物為式(I)所示的化合物，
    Figure 03_image009
    其中R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、L 1和m如式(I')所定義。
  3. 如請求項1或2所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物為式(I)所示的化合物，
    Figure 03_image009
    其中，R 1選自H或NR 1aR 1b； R 1a和R 1b各自獨立地選自H或C 1-4烷基；所述C 1-4烷基可任選被一個或多個R 1c基團所取代，所述R 1c基團為C 3-6環烷基； R 2選自H或鹵素； R 3選自羥基或C 1-4烷基； R 4選自NR 4aR 4b或C 1-4烷基； R 4a和R 4b各自獨立地選自H或C 1-4烷基； L 1選自化學鍵、-CH 2-、-X-CH 2、-(CH 2) n-CH=CH-、C 3-6環烷基或5-6員雜芳基； X選自O、S、NH或CH 2； 環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基； m選自0、1、2或者3； n選自0或1；
    Figure 03_image007
    代表單鍵或雙鍵； 當
    Figure 03_image007
    為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘或鹵素；R 7和R 8各自獨立地為H； 當
    Figure 03_image007
    為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7與其相連的C原子一起形成苯基或C 5-6員環烷基。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 1選自H、氨基或
    Figure 03_image013
    。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 2選自H、F、Cl、Br、CF 3、CN或-SO 2CH 3。
  6. 如請求項1至5中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中L 1選自化學鍵、-CH 2-、-O-CH 2、-NH-CH 2、-CH 2-CH 2、-CH=CH-、-CH 2-CH=CH-、-CH=CH-CH 2-、
    Figure 03_image015
    、
    Figure 03_image017
    或
    Figure 03_image019
    。
  7. 如請求項1至6中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中環A選自C 5-6環烷基、C 5-6環烯基或5-10員雜環基，所述雜環基含有1個或多個選自N或者O的雜原子。
  8. 如請求項7所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中環A選自
    Figure 03_image021
    、
    Figure 03_image023
    、
    Figure 03_image025
    、
    Figure 03_image027
    、
    Figure 03_image029
    、
    Figure 03_image031
    或
    Figure 03_image033
    。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 3選自羥基或甲基；m選自0、1、2或者3。
  10. 如請求項8或9所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
    Figure 03_image035
    選自
    Figure 03_image037
    、
    Figure 03_image039
    、
    Figure 03_image041
    、
    Figure 03_image043
    、
    Figure 03_image045
    、
    Figure 03_image047
    、
    Figure 03_image049
    、
    Figure 03_image051
    或
    Figure 03_image053
    。
  11. 如請求項10所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
    Figure 03_image035
    選自
    Figure 03_image055
    、
    Figure 03_image057
    、
    Figure 03_image059
    、
    Figure 03_image061
    、
    Figure 03_image063
    、
    Figure 03_image065
    、
    Figure 03_image067
    Figure 03_image069
    、
    Figure 03_image071
    或
    Figure 03_image073
    。
  12. 如請求項1至11中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R 4選自氨基、甲基或-NHCH 3。
  13. 如請求項1至12中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中
    Figure 03_image007
    代表單鍵或雙鍵；當
    Figure 03_image007
    為單鍵時，R 5和R 6各自獨立地選自H、氘、F或甲基；R 7和R 8各自獨立地為H；當
    Figure 03_image007
    為雙鍵時，R 5和R 8不存在，R 6和R 7和與其相連的C原子一起形成苯基或環戊基。
  14. 如請求項1至13中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
    Figure 03_image075
    選自
    Figure 03_image077
    、
    Figure 03_image079
    、
    Figure 03_image081
    、
    Figure 03_image083
    、
    Figure 03_image085
    、
    Figure 03_image087
    、
    Figure 03_image089
    、
    Figure 03_image092
    或
    Figure 03_image094
    。
  15. 如請求項1至14中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
    Figure 03_image005
    為
    Figure 03_image096
    。
  16. 如請求項1至15中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物具有下式(II)所示的結構：
    Figure 03_image098
    其中， R 9選自H或C 1-4烷基；較佳地，R 9選自H或甲基；m選自1或2； R 1、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8和L 1如式(I')或式(I)所定義。
  17. 如請求項16所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物選自：
    Figure 03_image100
    或
    Figure 03_image102
    其中R 1、R 2、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8和R 9如式(II)所定義。
  18. 如請求項16所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物選自：
    Figure 03_image104
    Figure 03_image106
    或
    Figure 03_image108
    ； 其中R 1、R 2、R 4和R 9如式(II)所定義。
  19. 一種化合物或其藥學上可接受的鹽，其選自：
    Figure 03_image110
    Figure 03_image112
    Figure 03_image114
    Figure 03_image116
    Figure 03_image118
    Figure 03_image120
    Figure 03_image122
    Figure 03_image124
    Figure 03_image126
    Figure 03_image128
    Figure 03_image130
    Figure 03_image132
    Figure 03_image134
    Figure 03_image136
    Figure 03_image138
    Figure 03_image140
    Figure 03_image142
    Figure 03_image144
    Figure 03_image146
    Figure 03_image148
    Figure 03_image150
    Figure 03_image152
    Figure 03_image154
    Figure 03_image156
    或
    Figure 03_image158
    。
  20. 一種藥物組合物，其包含如請求項1至19中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽；以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
  21. 一種如請求項1至19中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或如請求項20所述之藥物組合物在製備治療癌症藥物中的應用。
  22. 一種如請求項1至19中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或如請求項20所述之藥物組合物在治療癌症中的用途。
  23. 一種治療癌症的方法，其包括向有需要的對象施以有效劑量的如請求項1至19中任一項所述之式(I')所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，或如請求項20所述之藥物組合物。
TW111127014A 2021-07-20 2022-07-19 Prmt5抑制劑 TW202321246A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110816281 2021-07-20
CN202110816281.8 2021-07-20
CN202210795578.5 2022-07-07
CN202210795578 2022-07-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202321246A true TW202321246A (zh) 2023-06-01

Family

ID=84979983

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111127014A TW202321246A (zh) 2021-07-20 2022-07-19 Prmt5抑制劑

Country Status (3)

Country Link
CN (1) CN117157297A (zh)
TW (1) TW202321246A (zh)
WO (1) WO2023001133A1 (zh)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202321249A (zh) * 2015-08-26 2023-06-01 比利時商健生藥品公司 使用作為ｐｒｍｔ５抑制劑之新穎經６－６雙環芳香環取代之核苷類似物
US10570140B2 (en) * 2017-08-09 2020-02-25 Prelude Therapeutics Incorporated Selective inhibitors of protein arginine methyltransferase 5 (PRMT5)
MA53287A (fr) * 2018-08-07 2022-05-11 Merck Sharp & Dohme Inhibiteurs de prmt5
MX2021011524A (es) * 2019-03-25 2021-12-15 California Inst Of Techn Inhibidores de proteina arginina n-metiltransferasa 5 (prmt5) y usos de los mismos.
CA3134613A1 (en) * 2019-04-02 2020-10-08 Aligos Therapeutics, Inc. Compounds targeting prmt5
CR20220175A (es) * 2019-10-22 2022-06-21 Lupin Ltd Combinación farmacéutica de inhibidores de PRMT5
WO2021081211A1 (en) * 2019-10-25 2021-04-29 Accent Therapeutics, Inc. Mettl3 modulators

Also Published As

Publication number Publication date
CN117157297A (zh) 2023-12-01
WO2023001133A1 (zh) 2023-01-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6082397B2 (ja) マクロ環状ｌｒｒｋ２キナーゼ阻害剤
TWI672304B (zh) 作爲酪胺酸激酶抑制劑之經取代的乙炔基雜雙環化合物
CN115448923A (zh) 嘧啶并环化合物及其制备方法和应用
US11787803B2 (en) Tetrahydro-imidazo quinoline compositions as CBP/P300 inhibitors
JP2016537369A (ja) カゼインキナーゼ１ｄ／ｅ阻害剤としての置換された４，５，６，７−テトラヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン誘導体
TW201018696A (en) Fused bicyclic and tricyclic pyrimidine compounds as tyrosine kinase inhibitors
KR20220128345A (ko) 라파마이신 유사체 및 이의 용도
JP7248256B2 (ja) Ｊａｋキナーゼ阻害剤及びその調製方法、並びにその医薬分野での使用
JP2023522725A (ja) ３－アザビシクロアルキル誘導体およびこれを含む薬剤学的組成物
JP2023522863A (ja) Ｅｇｆｒ阻害剤としての三環式化合物
AU2021285715A1 (en) Dual kinase-bromodomain inhibitors
WO2020238776A1 (zh) 取代的稠合双环类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN115466273A (zh) 取代的炔基杂环化合物
CN111320633A (zh) 吡咯/咪唑并六元杂芳环类化合物及其制备方法和医药用途
IL214541A (en) Tricyclic pyrazolopyrimidine history, preparations containing them and their uses
EP4055013B1 (en) Wdr5 inhibitors and modulators
TW202321246A (zh) Prmt5抑制劑
CN115867552A (zh) 咪唑并嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN114075220A (zh) 取代的杂芳基化合物及其组合物和用途
CN114075194A (zh) 取代的杂芳基化合物及其组合物和用途
EP3954680A1 (en) Piperazine amide derivative, preparation method therefor, and use thereof in medicine
CN116655638B (zh) 氘代prmt5抑制剂
CN113583020B (zh) 一种jak2抑制剂及应用
CN113135942B (zh) 稠合嘧啶类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
TW202410891A (zh) 泛素特異性蛋白酶1抑制劑