CN113583020B

CN113583020B - 一种jak2抑制剂及应用

Info

Publication number: CN113583020B
Application number: CN202010366980.2A
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: 百极弘烨（广东）医药科技有限公司; 百极弘烨(南通)医药科技有限公司
Current assignee: Baiji Hongye Guangdong Pharmaceutical Technology Co ltd; Baiji Hongye Nantong Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2020-04-30
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2022-04-22
Anticipated expiration: 2040-04-30
Also published as: CN113583020A; WO2021219140A1

Abstract

本发明提供了一种JAK2抑制剂及应用，具体地，本发明涉及如式I所示的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，也涉及所述化合物的药物组合物以及其作为JAK抑制剂，以及在制备预防和/或治疗与JAK，尤其是JAK2相关疾病的药物中的医药用途。

Description

一种JAK2抑制剂及应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种JAK2抑制剂及应用。

背景技术

蛋白激酶(PK)是调控多种重要生物过程的一组酶，其构成了人最大的酶家族之一，所述生物过程尤其包括细胞激酶催化蛋白质、脂质、糖、核苷和其他细胞代谢物的磷酸化并在真核细胞生理学的所有方面起关键作用。已经表明在许多人类疾病中涉及激酶活性异常，这些疾病包括癌症、自身免疫性疾病和炎性疾病。

Janus激酶(JAK)是转导细胞因子信号从膜受体到STAT转录因子的细胞质酪氨酸激酶，其在细胞因子信号传递过程中起重要作用。JAK家族包括四个成员JAK1、JAK2、JAK3及酪氨酸激酶2(TYK2)。JAK通常与细胞因子受体成对缔合作为均二聚体或杂二聚体。细胞因子与其受体结合，引起受体分子的二聚化，与受体偶联的JAKs相互接近并通过交互的酪氨酸残基磷酸化作用而活化。JAK家族通过JAK-STAT(信号转导与转录活化因子)通路将细胞因子介导的信号传递至细胞中。

信号转导和转录激活子(Signal Transducer and Activator ofTranscription,STAT)是一组能与靶基因调控区DNA结合的胞质蛋白。作为JAKs的下游底物，STATs可以在外界信号的刺激下，发生酪氨酸磷酸化从而被激活，随后转入细胞核调节基因的转录。当细胞因子与其受体结合时，JAK家族成员自磷酸化和/或彼此转磷酸化，随后STATs磷酸化，然后迁移至细胞核内以调节转录。

许多异常的免疫应答，如过敏、哮喘、(异体)移植排斥、类风湿性关节炎、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和多发性硬化症等自身免疫性疾病，骨髓增生失调，白血病和淋巴瘤等血液***恶性肿瘤，它们的调节都与JAK/STAT信号通路有关。

研究发现，在大于90％的真性红细胞增多症患者和约50％的原发性骨髓纤维化和原发性血小板增多症患者中，确定了JAK2假激酶结构域V617F的点突变。在Ph阴性慢性髓系白血病、慢性髓系单核细胞白血病、巨核细胞性急性髓性白血病的发病和青少年髓系单核细胞白血病中也发现了该突变(10-20％)。JAK2假激酶结构域中的其他突变(包括Arg683的点突变)已在大约20％的唐氏综合征相关的急性淋巴细胞白血病和急性髓性白血病中检测到。

目前，市场上已有四种JAK抑制剂，但它们都属于泛JAK抑制剂，对JAK1、JAK2、JAK3和TYK2表现出不同程度的选择性。在JAK抑制剂中，对JAK2缺乏选择性会导致一些副作用，特别是感染风险增加。因此，本领域需要开发靶向JAK，特别是JAK2激酶的小分子抑制剂。

发明内容

本发明提供了一种新型靶向JAK的抑制剂，这种抑制剂对JAK，尤其是JAK2具有选择性抑制作用，从而具备临床意义和应用前景。

本发明的第一方面，提供一种式I所示的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，

式中，

X₁、X₂、X₃和X₄各自独立地选自下组：N、C或C-R_d；且X₁、X₂、X₃和X₄中有0、1、2、3个为N；

或者，当X₁为C-R_d时，R_d与X₂稠合形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

或者，当X₂为C-R_d时，R_d与X₁稠合形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

或者，当X₃为C-R_d时，R_d与X₄稠合形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

或者，当X₄为C-R_d时，R_d与X₃稠合形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

X选自下组：键、CR_bR_c、C(＝O)O-、O、N-R_b、S、SO、SO₂、C3-C10亚环烷基、3-10元亚杂环基、5-12元亚杂芳基、C6-C12亚芳基；

R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R_b、R_c和R_d各自独立地选自下组：H、D、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、砜基、亚砜基、酰胺基、磺酰胺基、酯基、甲酰基、甲酰胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元杂环基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基；

或者R₃和R₄与它们连接的C原子一起形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

或者R₅和R₆与它们连接的C原子一起形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

或者R_b和R_c与其连接的C原子一起形成＝O、或取代或未取代的C3-C10亚环烷基、3-10元亚杂环基；

(CH₂)n中的H原子可以任选地被一个或多个R_a取代；

n为1、2、3、4、5、6、7或8；

如无特别说明，所述的取代是指被选自下组的一个或多个基团取代：D、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、砜基、亚砜基、酰胺基、磺酰胺基、酯基、甲酰基、甲酰胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元杂环基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基；

如无特别说明，上述的烷基、烷氧基、烯基、炔基、杂环烷基、环烷基、杂芳基、芳基可进一步任选地被1个或多个R_a取代，其中，各R_a独立地选自下组：卤素、氨基、硝基、羟基、巯基、氰基、羧基、砜基、亚砜基、酰胺基、磺酰胺基、酯基、甲酰基、甲酰胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元杂环烷基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基。

在另一优选例中，n为1、2、3、4或5。

在另一优选例中，X₁为N。

在另一优选例中，X₂为N。

在另一优选例中，X₃为N。

在另一优选例中，X₄为N。

在另一优选例中，所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，其中，

部分为选自下组的基团：

其中，

Y₁和Y₂各自独立地选自下组：CR_bR_c、N-R_b、O、S；

R_A、R_B、R_C和R_D各自独立地选自下组：H、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、巯基、氰基、羧基、砜基、亚砜基、酰胺基、磺酰胺基、酯基、甲酰基、甲酰胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元杂环烷基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基；

p为1、2、3、4；

m为1或2；

R_a、R_b和R_c的定义如上所述。

在另一优选例中，所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，其中，X选自下组：键、CR_bR_c、O、S；其中，R_b和R_c的定义如上所述。

在另一优选例中，所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，其具有式II所示的结构：

式中，

R₁和R₂各自独立地选自下组：H、D、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、砜基、亚砜基、酰胺基、磺酰胺基、酯基、甲酰基、甲酰胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元杂环基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基；

或者R₁和R₂与它们连接的C原子一起稠合形成取代或未取代的5-6元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；

(CH₂)n中的H原子可以任选地被一个或多个R_a取代；

R_a、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、X和n的定义如上所述；

在另一优选例中，所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，其具有式A所示的结构：

其中，

(CH₂)n中的H原子可以任选地被一个或多个R_a取代；

R₁、R₂、R_a、R₃、R₄、R₅、R₆、X和n的定义如上所述。

在另一优选例中，X₁、X₂、X₃、X₄、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、X和n为实施例中各具体化合物相对应的具体基团。

在另一优选例中，所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物选自下组：

在另一优选例中，所述化合物为实施例中所示的化合物。

本发明第二方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物含有第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体，或其药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在另一优选例中，所述药物组合物还包括选自下组的药物：

PD-1抑制剂(如纳武单抗、派姆单抗、pidilizumab、cemiplimab、JS-001、SHR-120、BGB-A317、IBI-308、GLS-010、GB-226、STW204、HX008、HLX10、BAT1306、AK105、LZM 009或上述药物的生物类似药等)、PD-L1抑制剂(如度伐单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗(avelumab)、CS1001、KN035、HLX20、SHR-1316、BGB-A333、JS003、CS1003、KL-A167、F 520、GR1405、MSB2311或上述药物的生物类似药等)、CD20抗体(如利妥昔单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、veltuzumab,托西莫单抗、131I-托西莫单抗、替伊莫单抗、90Y-替伊莫单抗、90In-替伊莫单抗、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)等)、CD47抗体(如Hu5F9-G4、CC-90002、TTI-621、TTI-622、OSE-172、SRF-231、ALX-148、NI-1701、SHR-1603、IBI188、IMM01)、ALK抑制剂(如色瑞替尼、艾乐替尼、布加替尼、劳拉替尼、奥卡替尼)、PI3K抑制剂(如艾代拉里斯、Duvelisib、Dactolisib、Taselisib、Bimiralisib、Omipalisib、Buparlisib等)、BTK抑制剂(如依鲁替尼、Tirabrutinib、阿卡替尼、赞布替尼、Vecabrutinib等)、EGFR抑制剂(如阿法替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、达克替尼、埃克替尼、卡奈替尼、沙普替尼、Naquotinib、吡咯替尼、罗乐替尼、奥希替尼等)、VEGFR抑制剂(如索拉非尼、帕唑帕尼、瑞戈非尼、司曲替尼、Ningetinib、卡博替尼、舒尼替尼、多纳非尼等)、HDAC抑制剂(如Givinostat、Tucidinostat、伏立诺他、Fimepinostat、Droxinostat、恩替诺特、达西司特、Quisinostat、泰克地那林等)、CDK抑制剂(如帕博西尼、瑞博西尼、Abemaciclib、Milciclib、Trilaciclib、Lerociclib等)、MEK抑制剂(如司美替尼(AZD6244)、曲美替尼(GSK1120212)、PD0325901、U0126、Pimasertib(AS-703026)、PD184352(CI-1040)等)、mTOR抑制剂(如Vistusertib等)、SHP2抑制剂(如RMC-4630、JAB-3068、TNO155等)，或其组合。

在另一优选例中，提供一种药物组合物的制备方法，包括步骤：将药学上可接受的载体与本发明所述第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物进行混合，从而形成药物组合物。

在另一优选例中，本发明化合物可以制备成散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等。

本发明第三方面，提供第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体，或其药学上可接受的盐、前药或溶剂化物的用途，用于制备用于预防或治疗JAK2介导的疾病的药物；和/或用于制备JAK2抑制剂。

在另一优选例中，所述JAK2介导的疾病为骨髓增生异常综合征(MDS)、嗜酸粒细胞增多症、肿瘤、炎性疾病或细菌、病毒或真菌引起的感染。

在另一优选例中，所述肿瘤选自下组：骨髓增殖癌(MPN)、黑色素瘤、肺癌、肾癌、卵巢癌、***癌、乳腺癌、结肠癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、直肠癌、***癌、胃癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子***、***癌、外阴癌、何杰金氏病、非何杰金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、小儿实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经***(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊轴瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤。

在另一优选例中，炎性疾病选自下组：类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、自身免疫性溶血性贫血、关节炎、重症肌无力、***性红斑狼疮、恶性贫血、多肌炎。

在另一优选例中，所述病毒选自下组：肝炎病毒(甲型、乙型和丙型)、孢疹病毒、流感病毒、腺病毒、冠状病毒、麻疹病毒、登革热病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒。

在另一优选例中，所述细菌选自下组：衣原体、立克次氏体、分枝杆菌、葡萄球菌、肺炎球菌、霍乱、破伤风。

在另一优选例中，所述真菌选自下组：假丝酵母、曲霉、皮炎芽酵母。

本发明第四方面，提供一种JAK2抑制剂，含有第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体，或其药学上可接受的盐、前药或溶剂化物或第二方面所述的药物组合物。

本发明第五方面，提供一种预防或治疗JAK2介导的疾病的方法，所述方法包括给予被鉴定或诊断为具有JAK2相关疾病的受试者治疗有效量的第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或第二方面所述的药物组合物。

本发明第六方面，提供一种用于抑制细胞或受试者中的JAK2激酶活性的方法，所述方法包括使所述细胞接触或向所述受试者施用第一方面所述的化合物或第二方面所述的药物组合物的步骤。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现了一系列结构新颖的大环类化合物。该类化合物能够选择性抑制JAK2激酶，以JAK1/JAK2之比为代表的选择性或以JAK3/JAK2之比为代表的选择性平均提高十几倍乃至数十倍，从而能够成为研究JAK2抑制剂的小分子先导化合物，进而为免疫性炎症和抗肿瘤药物的开发提供了全新的物质基础。在此基础上完成了本发明。

术语

在本发明中，除非特别指出，所用术语具有本领域技术人员公知的一般含义。

当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-CH₂O-等同于-OCH₂-。

如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。

如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。

如本文所用，术语“烷基”包括直链或支链的烷基。例如C₁-C₆烷基表示具有1-6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。

如本文所用，术语“烯基”包括直链或支链的烯基。例如C₂-C₆烯基指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，包括但不限于乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。

如本文所用，术语“炔基”包括直链或支链的炔基。例如C₂-C₆炔基是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、或类似基团。

如本文所用，术语“环烷基”是指包含特定数目的C原子的环状烷基，如“C3-C10环烷基”指具有3-10个(优选3、4、5、6、7或8个)碳原子的环烷基。其可以是单环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或类似基团。也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。本发明中，环烷基意在包含取代环烷基。

如本文所用，术语“C1-C6烷氧基”是指具有1-6个碳原子的直链或支链的烷氧基；其具有式C1-C6烷基-O-或-C1-C5烷基-O-C1-C5烷基(如，-CH₂-O-CH₂CH₃、-CH₂-O-(CH₂)₂CH₃、-CH₂CH₂-O-CH₂CH₃)结构，例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。

如本文所用，“杂环基”是指具有选自N、S和O的杂原子的饱和或部分饱和的环状基团，“3-10元杂环基”是指具有3-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组N、S和O的杂原子的饱和或部分饱和的环状基团。其可以是单环，也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。3-10元杂环基优选3-8元杂环基，更优选地为6-8元杂环基。具体的实例可以为氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢-2H-吡喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢呋喃基、吗啉基和吡咯烷基等。

如本文所用，“芳基”是指环上不含杂原子的芳香族环基，“C6-C12芳基”是指在环上不含杂原子的具有6至12个碳原子的芳香族环基，所述芳基可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。如苯基(即六元芳环)、萘基等，其中六元芳基还意在包含六元芳基并5-6元环烷基和六元芳基并5-6元杂环烷基。C6-C12芳基优选C6-C10芳基。芳基可以是任选取代的或未取代的。

如本文所用，“杂芳基”指具有1-3个原子为选自下组N、S和O的杂原子的环状芳香基，“5-12元杂芳基”指具有5-12个原子的且其中1-3个原子为选自下组N、S和O的杂原子的环状芳香基团。其可以是单环，也可以是稠环形式。具体的实例可以为吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、(1,2,3)-***基以及(1,2,4)-***基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异恶唑基、噻唑基、恶唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。杂芳基可以是任选取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、烷硫基、烷基氨基、卤素、氨基、硝基、羟基、巯基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷硫基、氧代基、酰胺基、磺酰胺基、甲酰基、甲酰胺基、羧基和羧酸酯基等。

取代基为非末端取代基或者相关基团脱掉一个H原子时，其为相应基团的亚基，通常为二价基团，例如烷基脱掉一个H原子后为亚烷基(例如：亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基(如

)、亚丁基(如

)、亚戊基(如

)、亚己基(如

)、亚庚基(如

)等)、环烷基对应亚环烷基(如：

等)、杂环基对应亚杂环基(如如：

)、环烷基对应亚杂环基(如：

等)、烷氧基对应亚烷氧基(-CH₂O-、-CH₂CH₂-O-CH₂-、-CH₂OCH₂CH₂CH₂-)等。

如本文所用，“卤素”或“卤原子”指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤素或卤原子选自F、Cl和Br。

在本发明中，术语“酰胺基”是指带有结构-CONRR'的基团，其中，R和R'可以独立的代表氢、烷基、环烷基、芳基、杂环基，如上文所定义。R和R'在二烷基胺片段中可以相同或不同。

在本发明中，术语“磺酰胺基”是指带有结构-SO₂NRR'的基团，其中R和R'可以独立的代表氢、烷基、环烷基、芳基、杂环基，如上文所定义。R和R'在二烷基胺片段中可以相同或不同。

在本发明中，术语“甲酰基”是指包含-CHO的基团。

在本发明中，术语“甲酰胺基”是指包含

的基团，甲酰胺基还意在包含取代的甲酰胺基，具有式

其中，R各自独立地代表氢、烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基，如上文所定义。各R可以相同或不同。

在本发明中，“氨基”是指具有-N-RR'结构，R和R'各自独立地代表氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基，如上文所定义，R和R'可以相同或不同。

在本发明中，“亚砜基”是指具有-S(O)-R，R独立地代表氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基，如上文所定义。

在本发明中，“砜基”是指具有-S(O)₂-R，R独立地代表氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基，如上文所定义。

在本发明中，“酯基”是指具有-C(O)-O-R或R-C(O)-O-结构，其中，R独立地代表氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基，如上文所定义。

在本发明中，术语“取代”指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。

本发明所述的基团除非特别说明是“取代的或未取代的”，否则本发明的基团均可被选自下组的取代基所取代：氘、卤素、氰基、硝基、羟基、氨基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、3-10元杂环烷基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基。

在本发明中，术语“多个”独立指2、3、4、5个。

如本文所用，术语“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1H-吲唑与2H-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。

如本文所用，术语“溶剂合物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。

本文所用的术语“取代”是指特定基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所替代。特定的取代基可以是前文中相应描述的取代基，也可以是各实施例中出现的具体取代基或者本领域的常规取代基。因此，在本发明中，通式中的取代基也可以各自独立地为实施例中具体化合物中的相应基团；即，本发明既包括上述通式中各取代基的组合，也包括通式中所示部分取代基与实施例中出现的其它具体取代基的组合。制备具有这样的取代基组合的化合物并检测所得化合物是活性是本领域技术人员基于本领域的惯常技术手段不难做到的。

基于本发明的教导以及本领域的公知常识，本领域技术人员会理解，本发明化合物中的各基团可以作进一步的取代，从而得到能够具备与本发明具体公开的化合物活性相同或相似的衍生物。本发明化合物中的各基团可以被本领域常规的各种取代基取代，只要这种取代不违反化学合成规则或者化合价规则。

活性成分

如本文所用，术语“本发明的化合物”或“本发明的活性成分”可互换使用，指式(I)或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物。该术语还包括外消旋体、光学异构体，

在式I中，X₁、X₂、X₃、X₄、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、n具有如上所述的定义。

优选地，本发明化合物具有式II所示的结构：

其中，R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、X和n的定义如上所述。

优选地，本发明化合物具有式A所示的结构：

其中，

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、X和n的定义如上所述。

本发明中的化合物可能形成的盐也是属于本发明的范围。除非另有说明，本发明中的化合物被理解为包括其盐类。在此使用的术语“盐”，指用无机或有机酸和碱形成酸式或碱式的盐。此外，当本发明中的化合物含一个碱性片段时，它包括但不限于吡啶或咪唑，含一个酸性片段时，包括但不限于羧酸，可能形成的两性离子(“内盐”)包含在术语“盐”的范围内。药学上可接受的(即无毒，生理可接受的)盐是首选，虽然其他盐类也有用，例如可以用在制备过程中的分离或纯化步骤。本发明的化合物可能形成盐，例如，化合物I与一定量如等当量的酸或碱反应，在介质中盐析出来，或在水溶液中冷冻干燥得来。

本发明中的化合物含有的碱性片段，包括但不限于胺或吡啶或咪唑环，可能会和有机或无机酸形成盐。可以成盐的典型的酸包括醋酸盐(如用醋酸或三卤代醋酸，如三氟乙酸)、己二酸盐、藻朊酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二甘醇酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、羟基乙磺酸盐(如，2-羟基乙磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐(如，2-萘磺酸盐)、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐(如3-苯丙酸盐)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐，水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(如与硫酸形成的)、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐如对甲苯磺酸盐、十二烷酸盐等等

本发明的某些化合物可能含有的酸性片段，包括但不限于羧酸，可能会和各种有机或无机碱形成盐。典型的碱形成的盐包括铵盐、碱金属盐如钠、锂、钾盐，碱土金属盐如钙、镁盐，和有机碱形成的盐(如有机胺)，如苄星、二环已基胺、海巴胺(与N,N-二(去氢枞基)乙二胺形成的盐)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁基胺，以及和氨基酸如精氨酸、赖氨酸等等形成的盐。碱性含氮基团可以与卤化物季铵盐，如小分子烷基卤化物(如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物及碘化物)，二烷基硫酸盐(如，硫酸二甲酯、二乙酯，二丁酯和二戊酯)，长链卤化物(如癸基、十二烷基、十四烷基和十四烷基的氯化物、溴化物及碘化物)，芳烷基卤化物(如苄基和苯基溴化物)等等。

本发明中化合物的前药及溶剂合物也在涵盖的范围之内。此处术语“前药”是指一种化合物，在治疗相关疾病时，经过代谢或化学过程的化学转化而产生本发明中的化合物、盐、或溶剂合物。本发明的化合物包括溶剂合物，如水合物。

本发明中的化合物、盐或溶剂合物，可能存在的互变异构形式(例如酰胺和亚胺醚)。所有这些互变异构体都是本发明的一部分。

所有化合物的立体异构体(例如，那些由于对各种取代可能存在的不对称碳原子)，包括其对映体形式和非对映形式，都属于本发明的设想范围。本发明中的化合物独立的立体异构体可能不与其他异构体同时存在(例如，作为一个纯的或者实质上是纯的光学异构体具有特殊的活性)，或者也可能是混合物，如消旋体，或与所有其他立体异构体或其中的一部分形成的混合物。本发明的手性中心有S或R两种构型，由理论与应用化学国际联合会(IUPAC)1974年建议定义。外消旋形式可通过物理方法解决，例如分步结晶，或通过衍生为非对映异构体分离结晶，或通过手性柱色谱法分离。单个的光学异构体可通过合适的方法由外消旋体得到，包括但不限于传统的方法，例如与光学活性酸成盐后再结晶。

本发明中的化合物，依次通过制备、分离纯化获得的该化合物其重量含量等于或大于90％，例如，等于或大于95％，等于或大于99％(“非常纯”的化合物)，在正文描述列出。此处这种“非常纯”本发明的化合物也作为本发明的一部分。

本发明的化合物所有的构型异构体都在涵盖的范围之内，无论是混合物、纯的或非常纯的形式。在本发明化合物的定义包含顺式(Z)和返式(E)两种烯烃异构体，以及碳环和杂环的顺式和反式异构体。

在整个说明书中，基团和取代基可以被选择以提供稳定的片段和化合物。

特定官能团和化学术语定义都详细介绍如下。对本发明来说，化学元素与Periodic Table of the Elements,CAS version,Handbook of Chemistry and Physics,75^thEd.中定义的一致。特定官能团的定义也在其中描述。此外，有机化学的基本原则以及特定官能团和反应性在“Organic Chemistry”,Thomas Sorrell,University ScienceBooks,Sausalito:1999,也有说明，其全部内容纳入参考文献之列。

本发明的某些化合物可能存在于特定的几何或立体异构体形式。本发明涵盖所有的化合物，包括其顺式和反式异构体、R和S对映异构体、非对映体、(D)型异构体、(L)型异构体、外消旋混合物和其它混合物。另外不对称碳原子可表示取代基，如烷基。所有异构体以及它们的混合物，都包涵在本发明中。

按照本发明，同分异构体的混合物含有异构体的比率可以是多样的。例如，在只有两个异构体的混合物可以有以下组合：50:50，60:40，70:30，80:20，90:10，95:5，96:4，97:3，98:2，99:1，或100:0，异构体的所有比率都在本发明范围之内。本专业内一般技术人员容易理解的类似的比率，及为更复杂的异构体的混合物的比率也在本发明范围之内。

本发明还包括同位素标记的化合物，等同于原始化合物在此公开。不过实际上对一个或更多的原子被与其原子量或质量序数不同的原子取代通常会出现。可以列为本发明的化合物同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯同位素，分别如²H、³H、¹³C、¹¹C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。本发明中的化合物，或对映体、非对映体、异构体，或药学上可接受的盐或溶剂化物，其中含有上述化合物的同位素或其他同位素原子都在本发明的范围之内。本发明中某些同位素标记化合物，例如³H和¹⁴C的放射性同位素也在其中，在药物和底物的组织分布实验中是有用的。氚，即³H和碳-14，即¹⁴C，它们的制备和检测比较容易。是同位素中的首选。此外，较重同位素取代如氘，即²H，由于其很好的代谢稳定性在某些疗法中有优势，例如在体内增加半衰期或减少用量，因此，在某些情况下可以优先考虑。同位素标记的化合物可以用一般的方法，通过用易得的同位素标记试剂替换为非同位素的试剂，用批露在示例中的方案可以制备。

如果要设计一个本发明的化合物特定的对映体的合成，它可以不对称合成制备，或用手性辅剂衍生化，将所产生的非对映混合物分离，再除去手性辅剂而得到纯的对映体。另外，如果分子中含有一个碱性官能团，如氨基酸，或酸性官能团，如羧基，可以用合适的光学活性的酸或碱的与之形成非对映异构体盐，再通过分离结晶或色谱等常规手段分离，然后就得到了纯的对映体。

本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的代谢产物，以及可以在体内转变为本申请所涉及的化合物及其药学可接受的盐的结构的前药，也包含在本申请的权利要求中。

制备方法

本发明的化合物可以按照常规路线或方法制备得到，也可以按照本文中描述的方法或路线获得。

下面更具体地描述本发明化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。

通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度(如0℃～150℃，优选10℃～100℃)下进行。反应时间通常为0.1小时-60小时，较佳地为0.5-48小时。

优选地，本发明提供一种式I的合成方法，合成路线如下：

A-I可以通过购买或文献报道的常规方法获得；

式中，X₁、X₂、X₃、X₄、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、X和n的定义如上所述；

(i)在惰性溶剂(如DMF)中，A-I与卤化物在碱(如NaH、LiAlH₄等)的作用下进行取代反应，得到A-II；

(ii)在惰性溶剂(如甲醇、乙醇等)，还原剂(如钯/碳、SnCl₂等)存在下，A-II发生还原反应，得到A-III；

(iii)在惰性溶剂中，在碱(如碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯等)和钯催化剂(如三(二亚苄基丙酮)二钯、双三苯基磷二氯化钯等)的作用下，A-III与

发生偶联反应，得到A-IV；

(iv)在惰性溶剂(如四氢呋喃和/或水)中，碱性(如氢氧化锂)条件下，A-IV水解，得到A-V；

(v)在惰性溶剂(如二氧六环)中，在酸性(如HCl)条件下，A-V脱去Boc保护基，得到氨基酸A-VI；

(vi)在常见的缩合条件下(如：惰性溶剂(如二氯甲烷)中，碱性(如N，N-二异丙基乙胺)条件下)，A-VI发生缩合反应，得到目标产物A-VII(即式I化合物)。

上述合成步骤中，所用起始原料和试剂均可商业购买或通过文献报道的方法合成。

药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有优异的JAK激酶尤其是JAK2激酶的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗(稳定、减轻或治愈)JAK激酶相关疾病(例如，骨髓增生异常综合征(MDS)、嗜酸粒细胞增多症、肿瘤、炎性疾病或细菌、病毒或真菌引起的感染等)。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物(例如抗-HBV剂)联合给药。

联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)其他药学上可接受的化合物。该其他药学上可接受的化合物中的一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)可与本发明的化合物同时、分开或顺序地用于预防和/或治疗JAK，尤其是JAK2相关疾病。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的主要优点在于：

1.本发明的化合物结构新颖且具有优异的JAK激酶，尤其是JAK2激酶抑制剂作用；

2.本发明的化合物对于JAK2的选择抑制性更好。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。

通用材料及测试方法：

本发明的化合物的合成方法示于下面的方案、方法和实施例。起始原料是市售的或可以根据本领域或本文所描述的已知方法制备。本发明的化合物可通过以下所示的具体实施例来说明。然而，这些具体实施例不应被解释为是本发明的唯一种类。这些实施例进一步详细说明本发明化合物的制备。本领域的技术人员将容易理解，条件和过程的已知变化可用于制备这些化合物。所有的温度均为摄氏度，除非另有说明。

薄层色谱(PTLC)的制备是在20×20cm的板(500微米厚的硅胶)上进行。硅胶层析法用Biotage快速色谱***。

1H NMR用Bruker AscendTM400光谱仪，400MHz，298°K，并且将残余质子在氘化试剂中的化学位移(ppm)给出参考：

CHCl3δ＝7.26ppm，CH3OH或CH3ODδ＝3.30ppm，DMSO-d6δ＝2.50ppm

LCMS色谱采用安捷伦科技1200系列或6120四极谱仪。对于LC流动相为乙腈(A)和水(B)和0.01％甲酸，洗脱剂梯度：6.0分钟5-95％A，5.0分钟60-95％A，5.0分钟80-100％A和10分钟85-100％A，用SBC1850毫米×4.6毫米×2.7微米的毛细管柱。

质谱(MS)通过电喷雾离子质谱法(ESI)进行测定。

HPLC质谱分析条件：

LC1：柱：SB-C18 50mm×4.6mm×2.7μm

温度：50℃

洗脱液：5:95至95:5体积/体积乙腈/水+0.01％甲酸，6分钟。

流量：1.51.5mL/min，注射5μL

检测：PDA，200-600nm

MS：质量范围150-750amu；正离子电喷雾电离

LC2：柱：SB-C18 50mm×4.6mm×2.7μm

温度：50℃

洗脱液：5:95至95:5体积/体积乙腈/水+0.05％TFA梯度，超过3.00分钟。

流量：1.51.5mL/min，注射5μL

检测：PDA，200-600nm

MS：质量范围150-750amu；正离子电喷雾电离

LC3柱：SB-C18 50mm×4.6mm×2.7μm

温度：50℃

洗脱液：10:90至98:2体积/体积乙腈/水+0.05％TFA梯度，超过3.75分钟。

流速：1.0mL/min，注射10μL

检测：PDA，200-600nm

MS：质量范围150-750amu；正离子电喷雾电离

缩略语表：

AcOH＝乙酸

Alk为烷基

AR为芳基

Boc＝叔丁氧羰基

bs＝宽峰

CH₂Cl₂＝二氯甲烷

d＝双峰

dd＝双二重峰

DBU＝1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯

DCM＝二氯甲烷

DEAD＝偶氮二甲酸二乙酯

DMF＝N，N-二甲基甲酰胺

DMSO＝二甲基亚砜

EA＝乙酸乙酯

ESI＝电喷雾电离

Et＝乙基

EtOAc＝乙酸乙酯

EtOH＝乙醇

h＝小时

HOAc＝乙酸

LiOH＝氢氧化锂

m＝多重

Me＝甲基

MeCN＝乙腈

MeOH＝甲醇

MgSO4＝硫酸镁

min＝分钟

MS＝质谱

NaCl＝氯化钠

NaOH＝氢氧化钠

Na2SO4＝硫酸钠

NMR＝核磁共振光谱

PE＝石油醚

PG＝保护基

Ph＝苯基

rt＝室温

s＝单峰

t＝三重峰

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

TS＝对甲苯磺酰基(甲苯磺酰基)

实施例1 化合物A1的合成

第一步：5-(2-吗啉-5-硝基苄氧)戊酸甲酯(A1-2)

氮气保护，2-吗啉-5-硝基苯甲醇(A1-1，500mg，2.1mmol)加入到无水N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中，冰浴冷至0℃，加入氢化钠(60％，168mg，4.2mmol)，冰浴继续搅拌30min，后慢慢加入5-溴戊酸甲酯(614mg，3.15mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6ml)溶液，自然升至室温继续搅拌16h。TLC确认反应基本完全后，冰浴下加饱和氯化铵溶液淬灭，EA萃取，去离子水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩EA溶液，残余物经柱层析纯化得到5-(2-吗啉-5-硝基苄氧)戊酸甲酯(A1-2，505mg，收率68％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.6Hz,1H),8.15(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),7.08(d,J＝8.9Hz,1H),4.54(s,2H),3.93–3.85(m,4H),3.69(s,3H),3.57(t,J＝6.0Hz,2H),3.13–3.02(m,4H),2.37(t,J＝7.1Hz,2H),1.31(s,2H),1.28(s,2H)。

第二步：5-(2-吗啉-5-氨基苄氧)戊酸甲酯(A1-3)

5-(2-吗啉-5-硝基苄氧)戊酸甲酯(A1-2，505mg，1.43mmol)加入到甲醇(5ml)中，再加入钯/碳(25mg,10％ on carbon(wetted with ca.55％ Water)，室温搅拌6h，TLC确认反应完毕后，抽滤，浓缩滤液，残余物经柱层析纯化得到黄色油状物5-(2-吗啉-5-氨基苄氧)戊酸甲酯(A1-3,285mg,收率61.7％)。MS(ESI)m/z:理论值(calcd)323.20(M+H),实测值(found)323.42。

第三步：(4-(2-氯嘧啶-4-)苯基)氨基甲酸叔丁酯(A1-4)

氮气保护，2,4-二氯嘧啶(1.50g,10.1mmol)和4-(N-Boc-氨基)苯硼酸(2.37g,10mmol)加入到混合溶剂N,N-二甲基甲酰胺：1,4-二氧六环：水＝12ml：7.5ml：3ml中，再加入碳酸钠(2.12g,20mmol)，然后加入双三苯基磷二氯化钯(73mg,0.1mmol)，加热至80℃搅拌16h。TLC确认反应完全后，浓缩1,4-二氧六环，EA萃取，去离子水洗涤有机相三次，无水硫酸钠干燥，浓缩EA，残余物经柱层析纯化，得到白色固体A1-4(2.50g,收率82％)。MS(ESI)m/z:理论值306.10(M+H),实测值306.32；¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.73(d,J＝5.2Hz,1H),8.24–8.16(m,4H),7.73(d,J＝5.2Hz,1H),3.99(s,3H)。

第四步：5-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸甲酯(A1-5)

氮气保护，5-(2-吗啉-5-氨基苄氧)戊酸甲酯(A1-3，142.5mg，0.44mmol)、(4-(2-氯嘧啶-4-)苯基)氨基甲酸叔丁酯(A1-4，162mg，0.53mmol)和碳酸钾(122mg，0.88mmol)加入1,4-二氧六环(10ml)中，搅拌5min，一次性加入三(二亚苄基丙酮)二钯(40.5mg，0.04mmol)和2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(42mg，0.09mmol)，升温至100℃，搅拌16h。TLC确认反应完全后，浓缩1,4-二氧六环，加入EA和去离子水，萃取分液，有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩EA，残余物经柱层析纯化，得到A1-5(175mg，收率67％)。

第五步：5-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸(A1-6)

5-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸甲酯(A1-5，175mg，0.30mmol)加入四氢呋喃(3ml)和水(1ml)中，再加入氢氧化锂一水合物(62mg，1.50mmol),室温搅拌16h。TLC确认反应完全后，滴加1mol/L HCl调节pH＝5～6，浓缩四氢呋喃，加入EA和去离子水，萃取分层，无水硫酸钠干燥，浓缩EA，残余物经柱层析纯化，得到5-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸(A1-6，110mg，收率64.4％)。

第六步：5-((5-((4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸(A1-7)

5-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸(A1-6，110mg，0.19mmol)加入1,4-二氧六环(2ml)中，滴加4mol/L HCl的二氧六环(Dioxane)溶液(2ml)，室温搅拌16h。LCMS确认反应完全后，浓缩1,4-二氧六环，加入饱和碳酸氢钠水溶液调pH至中性，EA萃取，干燥，浓缩EA，残余物经反相柱纯化，冻干后，得到5-((5-((4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸(A1-7，30mg，收率33％)。

第七步：4⁴-吗啉-6-氧杂-3,12-二氮杂-2(4,2)-嘧啶杂-1(1,4),4(1,3)-二苯杂环十二蕃-11-酮(A1)

2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(47.8mg，0.13mmol)和N，N-二异丙基乙胺(16.3mg，0.13mmol)加入二氯甲烷(2ml)中，搅拌5min。室温下，缓慢滴加5-((5-((4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苄氧)戊酸(A1-7，30mg，0.06mmol)的DCM(8ml)和DMF(1ml)混合溶液，滴毕室温搅拌5h。LCMS确认反应完全后，加入去离子水淬灭反应，萃取分液，有机层用无水硫酸钠干燥，浓缩DCM，残余物经反相柱纯化，冻干后，得到白色固体4⁴-吗啉-6-氧杂-3,12-二氮杂-2(4,2)-嘧啶杂-1(1,4),4(1,3)-二苯杂环十二蕃-11-酮(A1，8.3mg，收率28.7％)。MS(ESI)m/z:理论值460.23(M+H),实测值460.41；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.55(d,J＝6.7Hz,2H),8.52(d,J＝5.0Hz,1H),8.48(s,1H),7.88(d,J＝8.3Hz,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),7.22(d,J＝5.1Hz,1H),7.10–7.06(m,1H),7.03(s,1H),4.47(s,2H),3.75–3.68(m,4H),3.30–3.29(m,2H),2.85–2.80(m,4H),2.28–2.22(m,2H),1.33–1.28(m,4H)。

实施例2 化合物A2的合成

第一步 2-吗啉-5-硝基苯甲基磷酸二乙酯(A2-1)

4-(2-溴甲基-4-硝基苯基)吗啉(800mg,2.66mmol)和亚磷酸三乙酯(0.55mL,3.20mmol)加入到封管中，140℃搅拌3h，LCMS显示反应完全后，反应混合物直接过硅胶柱纯化，得到2-吗啉-5-硝基苯甲基磷酸二乙酯(A2-1，950mg，收率99％)。MS(ESI)m/z:理论值359.13(M+H),实测值359.49。

第二步 6-氧代己酸乙酯(A2-2)

6-羟基己酸乙酯(640mg,4.00mmol)溶于EA(30mL)中，加入2-碘酰基苯甲酸(1.68g,6.00mmol),80℃搅拌3h，TLC显示原料全部转化为产物A2-2,过滤掉固体，浓缩滤液，得到无色油状物6-氧代己酸乙酯(A2-2,630mg,收率99％)。

第三步 7-(2-吗啉-5-硝基)苯基-6-庚烯酸乙酯(A2-3)

氮气保护,A2-1(238mg,0.66mmol)溶于无水THF(30mL)中，冰浴冷至0℃,缓慢加入NaH(40mg,0.99mmol,60％)，冰浴下继续搅拌30min，后慢慢加入A2-2(125mg,0.80mmol)的THF(3ml)溶液，撤冰浴，自然升至室温继续搅拌3h。TLC确认反应完全后，置于冰浴下加饱和氯化铵溶液淬灭，减压浓缩除去THF，EA萃取，去离子水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩EA溶液，残余物经柱层析纯化，得到A2-3(128mg,收率53.5％)。MS(ESI)m/z:理论值363.18(M+H),实测值363.07。

第四步 7-(2-吗啉-5-氨基)苯基-庚酸乙酯(A2-4)

A2-3(128mg,0.35mmol)加入到无水乙醇(30ml)中，加入雷尼镍(20mg),在1atm的氢气压力下催化氢化，室温搅拌5h。LCMS确认反应完毕后，滤掉催化剂，浓缩滤液，得到无色油状物A2-4(118mg,收率99％)。MS(ESI)m/z:理论值335.23(M+H),实测值335.30；

第五步 7-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸乙酯(A2-5)

氮气保护，7-(2-吗啉-5-氨基)苯基-庚酸乙酯(A2-4，118mg，0.35mmol)、(4-(2-氯嘧啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(A1-4，128.4mg，0.42mmol)和碳酸钾(97mg，0.70mmol)加入1,4-二氧六环(20ml)中，搅拌5min，一次性加入三(二亚苄基丙酮)二钯(64mg，0.07mmol)和2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(67mg，0.14mmol)，升温至100℃，搅拌16h。TLC确认反应完全后，浓缩1,4-二氧六环，加入EA和去离子水，萃取分液，有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩EA，残余物经柱层析纯化，得到7-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸乙酯(A2-5，132mg，收率63％)。MS(ESI)m/z:理论值604.34(M+H),实测值604.48。

第六步 7-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸(A2-6)

(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸乙酯(A2-5，132mg，0.22mmol)加入THF(3ml)和水(1ml)，再加入氢氧化锂一水合物(92mg，2.20mmol),70℃搅拌5h。TLC确认反应完全后，滴加1mol/L HCl调节pH＝5～6，反应液过反相柱纯化，冻干后，得到7-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸(A2-6，120mg，收率94.5％)。MS(ESI)m/z:理论值576.31(M+H),实测值576.51。

第七步 7-((5-((4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸(A2-7)

7-(5-((4-(4-(叔丁氧羰基氨基)苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸(A2-6，120mg，0.21mmol)加入EA(3ml)中，滴加3mol/L HCl的EA溶液(3ml)，室温搅拌5h。LCMS确认反应完全后，浓缩反应液，粗产品过反相柱纯化，冻干后，得到7-((5-((4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸(A2-7，83mg，收率84％)。MS(ESI)m/z:理论值476.26(M+H),实测值476.50。

第八步 4⁴-吗啉-3,12-二氮杂-2(4,2)-嘧啶杂-1(1,4),4(1,3)-二苯杂环十二蕃-11-酮(A2)

2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(132.3mg，0.35mmol)和N，N-二异丙基乙胺(225mg，1.74mmol)加入二氯甲烷(20ml)中，搅拌5min。室温下缓慢滴加7-((5-((4-(4-氨基苯基)嘧啶-2-)氨基)-2-吗啉苯基)庚酸(A2-7，83mg，0.17mmol)的DCM(8ml)和DMF(1ml)混合溶液，滴毕室温搅拌24h。LCMS确认反应完全后，加入去离子水淬灭反应，萃取分液，有机层无水硫酸钠干燥，浓缩DCM，残余物经反相柱纯化，冻干后得到淡黄色固体A2(20mg，收率25.2％)。MS(ESI)m/z:理论值458.26(M+H),实测值458.58；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),9.52(s,1H),8.51(d,J＝5.0Hz,1H),8.37(s,1H),7.93(d,J＝8.0Hz,2H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),7.22(d,J＝5.0Hz,1H),7.04-6.94(m,2H),3.73-3.70(m,4H),2.81-2.73(m,4H),2.80-2.51(m,2H),2.38-2.35(m,2H),1.37-1.33(m,4H),1.27-1.25(m,4H).

参照实施例1和2的实验步骤，以不同起始原料，得到实施例3-5，如下表1所示，

表1

实施例6：生物测试方法

JAK激酶的测活方法是利用均相时间分辨荧光技术。该方法的反应是在384浅孔板中，反应总体积是10μL。激酶蛋白、化合物、ATP和底物的混合液在50mM Hepes(pH7.0)，NaN₃0.02％，BSA 0.01％，0.1mM Orthocanadate，5mM MgCl₂，1mM DTT的反应缓冲液中进行，反应1小时后，向体系中加入能够识别底物磷酸化的抗体和染料XL-615以及含有EDTA的检测缓冲液(Cisbio)。激酶的反应信号通过PE公司的多孔板检测仪进行检测。参数设置是激发光320nm，发射光615nm和665nm。通过665nm和615nm的信号比值间接反映JAK的活力。反应中设置不加酶的背景孔和不含化合物的全酶活性孔。

化合物抑制蛋白IC₅₀的值通过公式：Y＝100/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))获得。在JAK1反应体系中，ATP的浓度为2μM，JAK1蛋白浓度是0.2ng/μL。

在JAK2反应体系中，ATP的浓度为2μM，JAK2蛋白浓度是0.01ng/μL。

在JAK3反应体系中，ATP的浓度为2μM，JAK3蛋白浓度是0.04ng/μL。

在TYK2反应体系中，ATP的浓度为2μM，TYK2蛋白浓度是0.2ng/μL。

测试数据分为以下几种：A:IC₅₀<10nM；B:IC₅₀11-100nM；C:IC₅₀101-1000nM；D:IC₅₀1001-10000nM；E:IC₅₀>10000nM。

测试结果如表2所示。

表2 JAK抑制活性表

JAK1/JAK2比值、JAK3/JAK2比值和TYK2/JAK2比值是以C1/C2计算，其中，C1为本发明一个化合物针对JAK1、JAK3、TYK2的IC50值；C2为同一化合物针对JAK2的IC50值；

JAK1/JAK2比值、JAK1/JAK3比值、TYK2/JAK2比值中，+表示1-5；++表示6-20；+++表示21-50；++++表示＞50。

讨论:

上述实验结果提示：

(1)本发明的式I化合物表现出非常优异的JAK抑制活性，尤其是针对JAK2。本发明化合物针对JAK2的IC50值可以低至10nM级或更低，这样对于体重约70kg的对象(如病人，尤其是风湿性关节炎或银屑病患者)而言，日服用剂量通常为10mg-30mg就可极其有效抑制JAK2。

(2)本发明的式I化合物表现出非常优异的JAK选择性，即JAK1/JAK2的IC50之比和/或JAK3/JAK2的IC50之比和/或TYK2/JAK2的IC50之比优于或者与现有化合物相当。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.式I所示的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐，

式中，

部分为

其中，R_A、R_B、R_C和R_D各自独立地选自下组：H、氘、卤素、氨基、硝基、羟基、巯基、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；

X选自下组：键、CR_bR_c、O、N-R_b、S；

R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R_b、和R_c各自独立地选自下组：H、D、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、羧基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、3-10元杂环基、C3-C10环烷基、5-12元杂芳基、C6-C12芳基；

(CH₂)n中的H原子可以任选地被一个或多个R_a取代；

n为1、2、3、4、5、6、7或8；

上述的烷基、烷氧基、烯基、炔基、杂环基、环烷基、杂芳基、芳基可进一步任选地被1个或多个R_a取代，其中，各R_a独立地选自下组：卤素、氨基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。

2.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐，其特征在于

R_A、R_B、R_C和R_D各自独立地选自下组：H、氘、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基。

3.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，X选自下组：CR_bR_c、O；其中，R_b和R_c的定义如权利要求1所述。

4.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，其具有式II所示的结构：

式中，

R₁和R₂各自独立地选自下组：H、D、卤素、C1-C6烷基；

(CH₂)n中的H原子可以任选地被一个或多个R_a取代；

R_a、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、X和n的定义如权利要求1所述。

5.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，其具有式A所示的结构：

其中，

(CH₂)n中的H原子可以任选地被一个或多个R_a取代；

R₁和R₂的定义如权利要求4所述；

R_a、R₃、R₄、R₅、R₆、X和n的定义如权利要求1所述。

6.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自下组：

7.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求1-6中任一项所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

8.权利要求1-6中任一项所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备用于预防或治疗JAK2介导的疾病的药物；和/或用于制备JAK2抑制剂。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述JAK2介导的疾病为骨髓增生异常综合征、嗜酸粒细胞增多症、肿瘤、炎性疾病或细菌、病毒或真菌引起的感染。

10.一种JAK2抑制剂，其特征在于，含有权利要求1-6中任一项所述的化合物或其立体异构体或光学异构体、或其药学上可接受的盐或权利要求7所述的药物组合物。