TW202210460A - 吡啶酮類化合物及其製備方法和應用 - Google Patents

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Abstract

本發明公開一種吡啶酮類化合物及其製備方法及應用。具體地，本發明涉及式I化合物，其可用於治療與腸易激綜合症（IBS）和其他胃腸道障礙相關的疾病，以及治療RET和/或TRK功能性障礙或調節RET和/或TRK活性的癌症、炎症性腸病、神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病、克氏錐蟲感染、與骨重建調節失衡有關的疾病。

Description

吡啶酮類化合物及其製備方法和應用
本發明屬於藥物領域，具體地，涉及吡啶酮類化合物及其製備方法和應用。
轉染期間重排(RET)是神經生長因子受體酪胺酸激酶，對腎臟、腸神經系統的發育，神經、內分泌、造血、雄性生殖系統等的穩態維持具有重要作用。RET的結構分為胞外區、跨膜區和胞內激酶區。其訊號傳導由神經膠質細胞系衍生的神經營養因子（GDNF）和家族配體(GFL)的可溶性蛋白質的結合介導，其神經營養因子（GDNF）家族配體不直接與RET結合，而是先與GDNF家族受體α形成複合物GFL–GFRα，繼而催化RET同源二聚，使RET在胞內區域自磷酸化，繼而招募銜接蛋白和通路蛋白來激活包括MAPK、PI3K、JAK-STAT、PKA和PKC在內的多種訊號通路，從而參與細胞增殖、神經傳導、細胞遷移和細胞分化（Alexander Drilon, Nature Reviews Clinical Oncology, 2018, 15:151–167）。這些傳導訊息在調節細胞存活、分化、增殖，遷移和趨化性上起到重要作用。
RET在皮膚和腸的傳入疼痛感受器的生長和存活中起到重要作用。RET激酶敲除小鼠缺乏腸內神經元，並存在其他神經系統異常，這表明神經系統正常發育可能需要功能性的RET激酶蛋白產物（Taraviras，S.等人，1999,126:2785-2797)。以結腸梗阻為特徵的Hirschsprung病患者的人群研究中，出現較高比例的家族性和散發性RET缺失突變（Butler Tjaden N.,等人，Transl. Res.，2013,162:1-15)。
RET基因的染色體重排可能導致RET基因斷裂，斷裂後RET基因的3'端可以與KIF5B、TRIM33、CCDC6或NCOA4等不同的基因發生融合，形成融合基因，表達的融合蛋白表現為持續激活，驅動腫瘤的發生。據報導，RET基因融合存在於約10-20%的PTC（甲狀腺乳頭狀癌）患者中，主要為CCDC6-RET以及NCOA4-RET融合。約1%～2%的肺腺癌患者的體內存在RET融合基因，主要為KIF5B-RET、CCDC6-RET、TRIM33-RET、NCOA4-RET這四種，其中KIF5B-RET最為常見(Rosell R，and Karachaliou N，Lancet Oncol.，2016，17:1623-1625)。
編碼RET蛋白的基因位於人類10號染色體長臂，其異常(基因融合、突變等)可引起多種疾病，包括甲狀腺乳頭狀癌(PTC)、甲狀腺髓樣癌(MTC)、先天性巨結腸、肺腺癌，腸易激綜合症等。
目前已有兩個RET靶向藥上市，分別是Loxo Oncology公司的LOXO-292 (selpercatinib/LY3527723)以及Blurprint公司的BLU-667 (pralsetinib/Gavreto)。這兩個靶向藥對於RET融合或突變陽性的患者表現出理想的療效及安全性，特別是RET融合陽性的非小細胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)和RET突變陽性的髓樣甲狀腺癌(medullary thyroid cancer, MTC)。
Trk是由稱為神經營養素(NT)的一組可溶性生長因子激活的高親和性受體酪胺酸激酶。Trk受體家族具有3個成員，即Trk A、Trk B和Trk C。Trk A為神經生長因子（以下簡稱為NGF)的高親和性受體，Trk B為腦源性神經營養因子(BDNF)和神經營養素（以下簡稱為NT)-4/5的高親和性受體，Trk C為NT-3的高親和性受體。所有Trk受體在神經組織中高表達並參與神經細胞功能的分化和維持。
已有文獻報導Trk牽涉於骨關節炎、慢性腰背痛、風濕性關節炎、骨折、間質性膀胱炎和慢性胰腺炎的傷害性疼痛、神經性疼痛以及伴有兩種上述疼痛類型的癌症疼痛中。此外，Trk受體表達於癌細胞（例如膠質瘤、肝膽管型肝癌、乳頭狀甲狀腺癌、結腸癌、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、肉瘤和黑色素成神經細胞瘤、***癌和胰腺癌）、炎性細胞（例如肥大細胞和嗜酸性粒細胞）、免疫活性細胞（例如T細胞和B細胞）和角蛋白細胞，且據報導可能參與癌細胞的增殖、遷移和轉移、炎性疾病(例如潰瘍性結腸炎和克羅恩氏病）、過敏性疾病（例如哮喘、鼻炎和特應性皮炎)和其他疾病(例如銀屑病）。
因此，具有Trk抑制活性的化合物可用於治療傷害性疼痛、神經性疼痛和組合這兩類疼痛的疼痛、癌症、炎性疾病、過敏性疾病和銀屑病。
腸易激綜合症(IBS)是一種常見的功能性疾病，有10-20%的個體受其影響，並且以異常腸排便、胃氣脹、腹痛和內臟超敏感反應為特徵。目前大多數研究認為IBS病因是由於腦和胃腸道之間的障礙，腸道微生物的干擾或者炎症的增加導致的，以至於影響腸道傳輸功能，從而導致腹瀉、便秘。有些患者隨意服用藥物，更進一步導致腸道菌群失調，加重了疾病。這些研究表明，抑制RET和/或TRK可能是一種有效的策略，可能用於治療與腸易激綜合症（IBS）、炎症性腸病、其他胃腸道障礙相關疾病、神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病，以及治療RET和/或TRK功能性障礙或調節RET和/或TRK活性的癌症。
本發明目的是提供一種RET和TRK激酶抑制劑，其可用於治療與腸易激綜合症（IBS）、炎症性腸病、其他胃腸道障礙相關疾病、神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病，以及治療RET和/或TRK功能性障礙或調節RET和/或TRK活性的癌症。
本發明的第一方面，提供一種式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥；
Figure 02_image001
式中，
各R1 獨立地為H、鹵素或選自取代或未取代的羥基、胺基、C1-C6烷基、R'-O-(
Figure 02_image004
)、C3-C6環烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、R'NH-(
Figure 02_image006
)、R'R"N-(
Figure 02_image008
)；
R'、R"各自獨立地選自取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-6員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、羥基、C1-C6烷基；
或當兩個R1 連接至環上相鄰的兩個原子時，其可以稠合形成取代或未取代的C4-C8環烯基、4-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
各R2 獨立地為H、鹵素、氰基、硝基或選自取代或未取代的羥基、胺基、R8 C(O)O-(
Figure 02_image010
)、R8 C(O)-(
Figure 02_image012
)、R8 S(O)2 (
Figure 02_image014
)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基；
或當兩個R2 連接至環上相鄰的兩個原子時，其可以稠合形成取代或未取代的C4-C8環烯基、4-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
各Rb 獨立地為鹵素、氰基、硝基或選自取代或未取代的胺基、R8 C(O)O-(
Figure 02_image010
)、R8 C(O)-(
Figure 02_image012
)、R8 S(O)2 (
Figure 02_image014
)、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、-OR6 (
Figure 02_image017
)、-CONR7 R'7 (
Figure 02_image019
)，其中，所述取代是指被一個或多個Ra 取代：
各Ra 獨立地選自鹵素、氰基、羥基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、-NR7 R'7 (
Figure 02_image021
)；
R6 、R7 和R'7 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基；
R5 為氫、氰基、鹵素、硝基或選自取代或未取代的醛基、R8 C(O)-(
Figure 02_image012
)、R8 S(O)2 (
Figure 02_image014
)、胺基、羥基、C1-C6烷基、3-8員雜烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-8員雜環基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(L1 )p -OH、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、-C(O)OR8 (
Figure 02_image023
)、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
Figure 02_image025
)、-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)、-C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image029
)；
或者Rb 和R5 位於相鄰的兩個C原子時，與其連接的C原子稠合形成取代或未取代的C4-C8環烯基、4-8員環雜基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地為H或選自取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、羥基、C1-C6烷基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素、C1-C6烷基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基；
或者R'11 和R"11 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基；
R9 和R'9 各自獨立地為H、氰基或選自取代或未取代的醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
Figure 02_image031
)、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基；
如無特別說明，所述取代是指被一個或多個R取代；
各R獨立地選自鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
各L1 和L2 獨立地選自：-CRf Rg -(
Figure 02_image033
)、CO、SO2 ；其中，Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
r為1、2或3；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6；
n為0、1或2；
n'為0、1、2或3；
n"為0、1、2或3。
在另一優選例中，
Figure 02_image035
選自
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
、
Figure 02_image043
，其中，
Figure 02_image045
為單鍵或雙鍵；q為0、1或2；X1 和X2 各自獨立地選自NH、O、S或CH2 ；X3 和X4 各自獨立地選自N或CH；R1 的定義如上所述。
在另一優選例中，所述的式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，其具有式I'所示的結構：
Figure 02_image047
式中，
R1 選自H、鹵素、羥基、胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基、(C1-C6烷基)NH-、(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)N-；
各R2 獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基；
R3 和R4 各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、-OR6 (
Figure 02_image049
)、-CONR7 R'7 (
Figure 02_image050
)，其中，所述C1-C6烷基任選地被一個或多個選自下組的基團取代氰基、羥基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、-NR7 R'7 (
Figure 02_image051
)，所述C6-C10芳基或者5-10員雜芳基任選地被一個或多個選自下組的基團取代鹵素、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基；
R6 、R7 和R'7 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基；
R5 選自：氫、氰基、醛基、R8 C(O)-(
Figure 02_image012
)、胺基、羥基、鹵素、C1-C6烷基、3-8員雜烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6亞烷基-OH、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-C(O)OR8 (
Figure 02_image023
)、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
Figure 02_image025
)、 -C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)、 -C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image029
)；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素或C1-C6烷基；
R9 和R'9 各自獨立地選自氰基、醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
Figure 02_image031
)、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -(
Figure 02_image033
)，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
n為0、1或2；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6。
在另一優選例中，R1 選自：C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基；
R5 選自氰基、醛基、R8 C(O)-(
Figure 02_image012
)、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、3-8員雜烷基、-C1-C6亞烷基-OH、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、-C(O)OR8 (
Figure 02_image023
)、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
Figure 02_image025
)、 -C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)、 -C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image029
)；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素、C1-C6烷基；
R9 和R'9 各自獨立地選自氰基、醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
Figure 02_image053
)、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -(
Figure 02_image033
)，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6；
各R2 獨立地選自鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基；
R3 和R4 各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
在另一優選例中，R1 選自：C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基。
在另一優選例中，R5 選自氰基、醛基、R8 C(O)-(
Figure 02_image012
)、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、3-8員雜烷基、-C1-C6亞烷基-OH、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、-C(O)OR8 (
Figure 02_image023
)、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
Figure 02_image025
)、-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)、 -C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image029
)；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素、C1-C6烷基；
R9 和R'9 各自獨立地選自氰基、醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
Figure 02_image053
)、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -(
Figure 02_image033
)，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6。
在另一優選例中，各R2 獨立地選自鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
在另一優選例中，R3 和R4 各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
在另一優選例中，所述式I化合物具有式I"所示的結構：
Figure 02_image054
式中，
Rc為選自取代或未取代的C1-C6烷基，所述的取代是指被一個或多個選自鹵素、氰基、羥基中的基團取代；
X選自鹵素、氰基、硝基、鹵代C1-C6烷基；
R5 的定義如上所述。
在另一優選例中，R5 選自
Figure 02_image056
、
Figure 02_image058
。
在另一優選例中，R5 為-C(O)OR8 (
Figure 02_image023
)，其中，R8 選自甲基、乙基、異丙基、第三丁基。
在另一優選例中，R5 為-(L1 )p -N(R9 )(R'9 ) (
Figure 02_image025
)，其中，p為1、2、3；R9 和R'9 的定義如上所述。
在另一優選例中，R5 為-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)，其中，R10 和R'10 各自獨立地選自H、甲基、乙基、異丙基、第三丁基、C3-C6環烷基（如環丙基、環丁基、環戊基、環己基）、3-6員雜環烷烴（如四氫呋喃基、四氫吡咯基、嗎啉基），或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成5-6員雜環基。
在另一優選例中，R5 為-C(O)-NH-CH2 CH2 -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image060
)，其中，R'11 和R"11 各自獨立地選自H、甲基、乙基、異丙基、第三丁基、C3-C6環烷基（如環丙基、環丁基、環戊基、環己基）、3-6員雜環烷烴（如四氫呋喃基、四氫吡咯基、嗎啉基）。
在另一優選例中，R1 、R2 、R3 、R4 、R5 為實施例中各具體化合物相對應的具體基團。
在另一優選例中，所述化合物選自
Figure 02_image062
Figure 02_image064
Figure 02_image066
Figure 02_image068
Figure 02_image070
Figure 02_image072
Figure 02_image074
Figure 02_image076
。
在另一優選例中，所述化合物選自實施例中所示的化合物。
本發明第二方面，提供一種藥物組合物，其包含第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥；和藥用載體或稀釋劑。
在另一優選例中，所述的藥物組合物還包括一種或多種其他治療劑，所述的其他治療劑選自胺基水楊酸製劑（如柳氮磺吡啶）、糖皮質激素（如氫化可的松、***等）、PD-1抑制劑(如納武單抗、派姆單抗、JS-001、SHR-120、BGB-A317、IBI-308、GLS-010、GB-226、STW204、HX008、HLX10、BAT1306、AK105、LZM 009或上述藥物的生物類似藥等)、PD-L1抑制劑(如德瓦魯單抗、阿特珠單抗、CS1001、KN035、HLX20、SHR-1316、BGB-A333、JS003、CS1003、KL-A167、F 520、GR1405、MSB2311或上述藥物的生物類似藥等)、CD20抗體(如利妥昔單抗、奧濱尤妥珠單抗、奧法木單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗等)、CD47抗體(如Hu5F9-G4、CC-90002、TTI-621、TTI-622、OSE-172、SRF-231、ALX-148、NI-1701、SHR-1603、IBI188、IMM01)、ALK抑制劑(如色瑞替尼、艾樂替尼、布加替尼、勞拉替尼、奧卡替尼)、PI3K抑制劑(如艾代拉裡斯、Dactolisib、Taselisib、Buparlisib等)、BTK抑制劑(如依魯替尼、Tirabrutinib、Acalabrutinib等)、EGFR抑制劑(如阿法替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、達克替尼、埃克替尼、卡奈替尼等)、VEGFR抑制劑(如索拉非尼、帕唑帕尼、瑞伐替尼、卡博替尼、舒尼替尼、多納非尼等)、HDAC抑制劑(如Givinostat、Droxinostat、恩替諾特、達西司特、泰克地那林等)、CDK抑制劑(如帕博西尼、瑞博西尼、Abemaciclib、Lerociclib等)、MEK抑制劑(如司美替尼(AZD6244)、曲美替尼(GSK1120212)、PD0325901、U0126、AS-703026、PD184352(CI-1040)等)、Akt抑制劑(如MK-2206、Ipatasertib、Capivasertib、Afuresertib、Uprosertib等)、mTOR抑制劑(如Vistusertib等)、SHP2抑制劑(如RMC-4630、JAB-3068、TNO155等)、IGF-1R抑制劑(如Ceritinib、奧卡替尼、linsitinib、BMS-754807、GSK1838705A等)。
本發明第三方面，提供一種第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備治療腸易激綜合症、其他腸道相關疾病和/或癌症的藥物中的用途。
在另一優選例中，所述的藥學上可接受的鹽為包括但不限於下組的鹽：醋酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二甘醇酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十二烷酸鹽。
在另一優選例中，所述腸易激綜合症為腹瀉主導型腸易激綜合症、便秘主導型腸易激綜合症、混合型腸易激綜合症、未定型腸易激綜合症。
在另一優選例中，所述其他腸道相關疾病為功能性胃氣脹、功能性便秘、非特異性功能性腸紊亂、功能性腹痛綜合症、慢性特發性便秘、功能性胃十二指腸病。
在另一優選例中，所述腸易激綜合症包括：腹瀉主導型、便秘主導型或交替排便模式、功能性胃氣脹、功能性便秘、非特異性功能性腸紊亂、功能性腹痛綜合症、慢性特發性便秘、功能性胃十二指腸病。
在另一優選例中，所述癌症包括：膀胱癌、卵巢癌、腺癌、胃癌、胰腺癌、***癌、結腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、神經細胞瘤、直腸癌、家族性腺瘤性息肉性癌、遺傳性非息肉性結直腸癌、食管癌、唇癌、喉癌、下嚥癌、舌癌、唾液腺癌、甲狀腺髓樣癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、腎實質癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、絨毛膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病、肝細胞癌、膽囊癌、支氣管癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、多發性骨髓瘤。
在另一優選例中，所述癌症為非小細胞肺癌、膠質瘤、多發性骨髓瘤、肝膽管型肝癌、甲狀腺髓樣癌、甲狀腺乳頭狀腫瘤、神經母細胞瘤、結腸癌、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、肉瘤、黑色素瘤、纖維肉瘤、胰腺腫瘤、軟組織肉瘤、高度實性腫瘤、乳腺腫瘤或膽管癌。
本發明第四方面，提供第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備治療神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病、炎症性腸病、克氏錐蟲感染或與骨重建調節失衡有關的疾病的藥物中的用途。
本發明第五方面，提供一種GSK-3179106和/或BOS-589，或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備治療神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病、炎症性腸病、克氏錐蟲感染或與骨重建調節失衡有關的疾病的藥物中的用途；
Figure 02_image078
。
本發明第六方面，提供一種第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，或第二方面所述的藥物組合物在製備用於抑制細胞或受試者中的RET激酶和/或TRK激酶活性的藥物中的用途。
本發明第七方面，提供一種GSK-3179106和/或BOS-589，或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備用於抑制細胞或受試者中的RET激酶和/或TRK激酶活性的藥物中的用途。
本發明第八方面，提供一種治療RET和/或TRK相關疾病的方法，所述方法包括給予被鑒定或診斷為具有RET和/或TRK相關疾病的受試者治療有效量的如第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，如第二方面所述的藥物組合物，GSK-3179106或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，或BOS-589或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥。
本發明第九方面，提供一種用於抑制細胞或受試者中的RET和/或TRK激酶活性的方法，所述方法包括使所述細胞接觸或向所述受試者施用第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，第二方面所述的藥物組合物，GSK-3179106或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥、或BOS-589或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥的步驟。
在另一優選例中，所述細胞為哺乳動物細胞。
在另一優選例中，所述受試者為哺乳動物，優選為人。
本發明第十方面，提供一種第一方面所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥的製備方法，包括步驟：
Figure 02_image080
M               N                               A
1）將式M化合物與式N化合物反應，得到式A化合物；
Figure 02_image082
A                             I
2）將式A化合物與酸反應，得到式I化合物；
其中，Y選自OH、鹵素；
其他各基團如第一方面所定義。
本發明第十一方面，提供一種製備式1-2化合物的方法，包括步驟：
Figure 02_image084
化合物1-1在濃硫酸條件下，慢慢滴加濃硝酸，或者發煙硝酸進行硝化反應，得到化合物1-2，Rb 、n"如第一方面所定義。
應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再一一累述。
本發明人經過廣泛而深入的研究，意外地發現了一類SF5取代的吡啶酮類化合物具有較好的RET和TRK激酶抑制活性，同時對VEGFR2激酶具有較好的選擇性的化合物。此外，所述化合物具有較好藥效學/藥代動力學性能。在此基礎上，完成了本發明。
術語
在本發明中，除非特別指出，所用術語具有本領域技術人員周知的一般含義。
當通過從左向右書寫的常規化學式描述取代基時，該取代基也同樣包括從右向左書寫結構式時所得到的在化學上等同的取代基。舉例而言，-CH2 O-等同於-OCH2 -。
術語“烷基”本身或作為另一取代基的一部分，是指具有指定的碳原子數的直鏈或支鏈烴基(即，C1-C6是指一個至六個碳原子)。烷基的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、異丁基、第二丁基、正戊基、正己基及其類似烷基。烷基中的一個或多個位置被取代，尤其是1-4個取代基，可在任何位置上取代。
術語“C1-C6烷氧基”本身或作為另一取代基的一部分，是指具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈或環狀烷氧基(如C3-C6環烷氧基)，代表性的例子包括(但並不限於)：甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基和丁氧基等。優選為C1-C3烷氧基。
術語“雜烷基”本身或作為另一取代基的一部分，是指烷基中的碳原子被1、2、3個選自N、O、S、Si或P的雜原子取代的基團，且其中，氮和硫原子任選地被氧化，本發明中“3-8員雜烷基”是指包含1-6（即1、2、3、4、5或6）個碳原子，和1或2個選自N、O、S或P的雜原子的基團，代表性的例子包括(但並不限於)：CH3 OCH2 -、CH3 SCH2 -、CH3 CH2 OCH2 -等。
術語“環烷基”本身或作為另一取代基的一部分，是指包括飽和單環、雙環或多環的環狀烷基，例如C3-C8或C3-C12環烷基。C3-C8環烷基指包括C3、C4、C5、C6、C7、或C8環烷基。環烷基還可包括螺環、橋環、并環等結構的環烷基。本發明的代表性的環烷基包括但不限於：環丙基、環丁基、環戊基、環己基和降莰烷基。應理解，取代或未取代的環烷基，例如支化環烷基（如1-甲基環丙基和2-甲基環丙基），均包括在“環烷基”的定義中。
術語“環雜烷基”本身或作為另一取代基的一部分，是指具有指定的環頂點(或成員)數且具有一至五個選自N、O和S的雜原子分別取代環骨架中碳原子，且其中，氮和硫原子任選地被氧化，且氮原子任選被季銨化的環烷基環。環雜烷基通常為4－12員環。環雜烷基可為單環、雙環或多環系統。環雜烷基例子包括但並不限於：吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、丁內醯胺基、戊內醯胺基、咪唑烷酮基、乙內醯脲基、二氧雜環戊烷基、鄰苯二甲醯亞胺基、哌啶基、1,4-二氧六環基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉-S-氧化物、硫代嗎啉-S,S-氧化物、哌𠯤基、哌喃基、吡啶酮基、3-吡咯啉基、噻喃基、吡喃酮基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、奎寧環及其類似物。
術語“烯基”本身或作為另一取代基的一部分，表示含一個或多個雙鍵且通常長度為2至20個碳原子(或C2-C8)的直鏈或支鏈的烴基。例如，本發明中，“C2-C6烯基”含有兩個至六個碳原子。烯基包括但不限於例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基等。
術語“芳基”，單獨或作為較大部分諸如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳基氧基烷基”的部分，是指具有總計5至15個環成員的單環、二環或三環的環系統(優選6-10員芳環)，其中所述系統中的至少一個環為芳族的且其中所述系統中的每個環含有3至7個環成員。“芳基”可以是取代的或者未取代的。在本發明的某些實施方案中，“芳基”是指芳族環系統，其包括但不限於苯基、聯苯基、茚滿基、1-萘基、2-萘基和四氫萘基。稠合的芳基可在環烷基環或芳族環的合適位置上連接至另一基團。從環系統中畫出的連接線表明鍵可連接至任意合適的環原子。
術語“雜芳基”本身或作為另一取代基的一部分，指包含1-4個雜原子、5-14個環原子的雜芳族體系，其中，雜原子選自氧、氮和硫。雜芳基優選5至10員環，更優選為5員或6員，例如吡咯基、吡唑基、咪唑基、㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、呋喃基、吡啶基、吡𠯤基、嘧啶基、嗒𠯤基、三氮𠯤基、三氮唑基及四氮唑基等。“雜芳基”可以是取代的或者未取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、氘代烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烯基、炔基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、胺基、硝基、羥基、巰基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。
優選地，各“5-10員雜芳基”獨立地為含1、2或3個選自N、O或S的雜原子的5-10員雜芳基。
術語“雜環”、“雜環基”或“雜環基團”本身或作為另一取代基的一部分，指穩定的3員、4員、5員、或7員單環或二環或7員、8員、9員、10員、11員、12員、13員或14員多環雜環，包括稠環、螺環和/或橋環結構，其為飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的，且其含有碳原子和1個、2個、3個或4個獨立地選自N、O和S的雜原子。該術語還包括雜環與芳環（如苯環）稠合所形成的多環基團。“雜環”可以是取代的或者未取代的。作為環原子的氮和硫雜原子可任選地被氧化。氮原子為取代的或未取代的(即N或NR，其中R為H或如果被定義，則為另一取代基)。雜環可在得到穩定結構的任何雜原子或碳原子處連接至其側基。如果所得化合物是穩定的，則本文所述的雜環基可在碳或氮原子上被取代。雜環中的氮可任選地被季銨化。優選地，當雜環中S和O原子的總數超過1時，則這些雜原子彼此不相鄰。優選地，雜環中S和O原子的總數不大於1。當使用術語“雜環”時，其意欲包括雜芳基。雜環的實施例包括但不限於吖啶基、氮雜環丁基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并㗁唑基、苯并㗁唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并異㗁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、哢唑基、4aH -咔唑基、咔啉基、𠳭基、𠳭烯基、噌啉基、十氫喹啉基、2H ,6H -1,5,2-二噻𠯤基、二氫呋喃并[2,3-b ]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H -吲唑基、咪唑并吡啶基、假吲哚基(indolenyl)、二氫吲哚基、吲𠯤基、吲哚基、3H -吲哚基、靛紅醯基(isatinoyl)、異苯并呋喃基、異𠳭基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噻唑并吡啶基、異㗁唑基、異㗁唑并吡啶基、亞甲基二氧基苯基、嗎啉基、二氮雜萘基、八氫異喹啉基、㗁二唑基、1,2,3-㗁二唑基、1,2,4-㗁二唑基、1,2,5-㗁二唑基、1,3,4-㗁二唑基、㗁唑烷基、㗁唑基、㗁唑并吡啶基、㗁唑烷基、萘嵌間二氮雜苯基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩𠯤基、吩噻𠯤基、吩㗁噻基、吩㗁𠯤基、酞𠯤基、哌𠯤基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡𠯤基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑并吡啶基、吡唑基、嗒𠯤基、吡啶并㗁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H -吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H -喹𠯤基、喹㗁啉基、奎寧環基、四唑基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、6H -1,2,5-噻二𠯤基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑并吡啶基、噻吩并噻唑基、噻吩并㗁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三𠯤基、1,2,3-***基、1,2,4-***基、1,2,5-***基、1,3,4-***基和𠮿
Figure 02_image086
基。本發明還包括含有例如上述雜環的稠環和螺環化合物。
優選地，各“3-6員雜環基”為含1、2或3個選自N、O或S的雜原子的3-6員雜環基。術語“4-8員雜環基”、“3-6員環雜烷基”、“3-8員雜環基”、“4-8員環雜基”、“C3-C6環雜烷基”具有類似含義。
術語“C4-C8環烯基”是指含1、2或3個烯鍵的環狀4-8員環。在本發明中，上述的烷基、鹵代烷基、烷氧基、環烷基、芳基、雜芳基、環雜烷基、烯基、炔烴、雜環、雜環基等中各基團可以是取代的或未取代的。
在本發明中，術語“取代”指特定的基團上的一個或多個氫原子被特定的取代基所取代。特定的取代基為在前文中相應描述的取代基，或各實施例中所出現的取代基。除非特別說明，某個取代的基團可以在該基團的任何可取代的位點上具有一個選自特定組的取代基，所述的取代基在各個位置上可以是相同或不同的。本領域技術人員應理解，本發明所預期的取代基的組合是那些穩定的或化學上可實現的組合。典型的取代包括但不限於一個或多個以下基團：如氫、氘、鹵素(例如，單鹵素取代基或多鹵素取代基，後者如三氟甲基或包含Cl3 的烷基)、腈基、硝基、氧代(如=O)、三氟甲基、三氟甲氧基、環烷基、烯基、炔基、雜環、芳環、-ORa 、-SRa 、-S(=O)Re 、-S(=O)2 Re 、-P(=O)2 Re 、-S(=O)2 ORe ，-P(=O)2 ORe 、-NRb Rc (
Figure 02_image088
)、-NRb S(=O)2 Re (
Figure 02_image090
)、-NRb P(=O)2 Re (
Figure 02_image092
)、-S(=O)2 NRb Rc (
Figure 02_image094
)、-P(=O)2 NRb Rc (
Figure 02_image096
)、-C(=O)ORd (
Figure 02_image098
)、-C(=O)Ra (
Figure 02_image100
)、-C(=O)NRb Rc (
Figure 02_image102
)、-OC(=O)Ra (
Figure 02_image104
)、-OC(=O)NRb Rc (
Figure 02_image106
)、-NRb C(=O)ORe (
Figure 02_image108
)、-NRd C(=O)NRb Rc (
Figure 02_image110
)、-NRd S(=O)2 NRb Rc (
Figure 02_image112
)、-NRd P(=O)2 NRb Rc (
Figure 02_image114
)、-NRb C(=O)Ra (
Figure 02_image116
)、或-NRb P(=O)2 Re (
Figure 02_image118
)，其中，Ra 可以獨立表示氫、氘、烷基、環烷基、烯基、炔基、雜環或芳環，Rb 、Rc 和Rd 可以獨立表示氫、氘、烷基、環烷基、雜環或芳環，或者Rb 和Rc 與N原子一起可以形成雜環；Re 可以獨立表示氫、烷基、環烷基、烯基、炔基、雜環或芳環。上述典型的取代基，如烷基、環烷基、烯基、環烯基、炔基、雜環或芳環可以任選取代。所述取代基例如(但並不限於)：鹵素、羥基、氰基、羧基(-COOH)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基、3-12員雜環基、芳基、雜芳基、C1-C8醛基、C2-C10醯基、C2-C10酯基、胺基、C1-C6烷氧基、C1-C10磺醯基、及C1-C6脲基等。
除非另外說明，假定任何不滿價態的雜原子有足夠的氫原子補充其價態。
當取代基為非末端取代基時，其為相應基團的亞基，例如烷基對應於亞烷基、環烷基對應亞環烷基、雜環基對亞雜環基、烷氧基對應亞烷氧基等。
術語“鹵代”或“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。
術語“PMB”是指對甲氧基苄基。
術語“醛基”具有結構-CHO。
活性成分
如本文所用，術語“本發明的化合物”或“本發明的活性成分”可互換使用，指式I化合物、或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物(如氘代化合物)或前藥。該術語還包括外消旋體、光學異構體。
本發明中，所述的式I化合物具有如下結構：
Figure 02_image001
式中，
R1 、R2 、R5 、Rb 、n、r、n'和n"的定義如上所述。
優選地，所述式I化合物具有式I'所示的結構：
Figure 02_image047
式中，R1 、R2 、R3 、R4 、R5 和n的定義如上所述。
優選地，式I和式I'中，R1 選自C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基。
優選地，式I和式I'中，R5 選自氰基、醛基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、3-8員雜烷基、C1-C6烷基-OH、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-C(O)OR8 (
Figure 02_image010
)、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 ) (
Figure 02_image025
)、-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)、-C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image029
)；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R9 和R'9 各自獨立地選自：氰基、醛基、-NR12 R'12 (
Figure 02_image031
)、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -(
Figure 02_image033
)，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6。
優選地，式I和式I'中，各R2 獨立地選自：鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
優選地，所述式I化合物具有式I"所示的結構：
Figure 02_image054
式中，
Rc為選自取代或未取代的C1-C6烷基，所述的取代是指被一個或多個鹵素、氰基、羥基取代；
X選自鹵素、氰基、硝基、鹵代C1-C6烷基；
R5 的定義如上所述。
優選地，式I、I'、I"中，R5 選自
Figure 02_image056
、
Figure 02_image058
。
優選地，式I、I'、I"中，R5 為-C(O)OR8 (
Figure 02_image023
)，其中，R8 選自甲基、乙基、異丙基、第三丁基。
優選地，式I、I'、I"中，R5 為-(L1 )p -N(R9 )(R'9 ) (
Figure 02_image025
)，其中，p為1、2、3；R9 和R'9 的定義如上所述。
優選地，式I、I'、I"中，R5 為-C(O)-N(R10 )(R'10 ) (
Figure 02_image027
)，其中，R10 和R'10 各自獨立地選自H、甲基、乙基、異丙基、第三丁基、C3-C6環烷基（如環丙基、環丁基、環戊基、環己基）、3-6員雜環烷烴（如四氫呋喃基、四氫吡咯基、嗎啉基），或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成5-6員雜環基。
優選地，式I、I'、I"中，R5 為-C(O)-NH-CH2 CH2 -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image127
)，其中，R'11 和R"11 各自獨立地選自H、甲基、乙基、異丙基、第三丁基、C3-C6環烷基（如環丙基、環丁基、環戊基、環己基）、3-6員雜環烷烴（如四氫呋喃基、四氫吡咯基、嗎啉基）。
代表性地，本發明提供了一種式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥；
Figure 02_image001
式中，
各R1 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、鹵素、羥基、胺基、C1-C6烷基、R'-O-、C3-C6環烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、R'NH-或R'R"N-；
R'、R"各自獨立選自取代或未取代的下組基團：C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-6員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，所述取代是指被選自下組的一個或多個基團取代：鹵素、羥基、C1-C6烷基；
或當兩個R1 連接至環上相鄰的兩個原子時，其可以稠合形成取代或未取代的下組基團：C4-C8環烯基、4-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
各R2 獨立地選自取代或未取代的下組基團：H、鹵素、羥基、胺基、氰基、硝基、R8 C(O)O-、R8 C(O)-、R8 S(O)2 、C1-C6烷基、C3-C6環烷基；
或當兩個R2 連接至環上相鄰的兩個原子時，其可以稠合形成取代或未取代的下組基團：C4-C8環烯基、4-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
各Rb 獨立地選自取代或未取代的下組基團：鹵素、胺基、氰基、硝基、R8 C(O)O-、R8 C(O)-、R8 S(O)2 、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、-OR6 、-CONR7 R'7 ，其中，所述取代是指被一個或多個Ra 取代：
各Ra 獨立地選自：鹵素、氰基、羥基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基或-NR7 R'7 ；
R6 、R7 和R'7 各自獨立選自：H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基；
R5 選自取代或未取代的下組基團：-H、-CN、-CHO、硝基、R8 C(O)-、R8 S(O)2 、-NH2 、-OH、鹵素、C1-C6烷基、3-8員雜烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-8員雜環基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-C(O)OR8 、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )、-C(O)-N(R10 )(R'10 )、-C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )；
或者Rb 和R5 位於相鄰的兩個C原子時，與其連接的C原子稠合形成取代或未取代的下組基團：C4-C8環烯基、4-8員環雜基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立選自取代或未取代的下組基團：H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，所述取代是指被選自下組的一個或多個基團取代：鹵素、羥基、C1-C6烷基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基；
或者R'11 和R"11 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基；
R9 和R'9 各自獨立選自取代或未取代的下組基團：H、-CN、-CHO、-NR12 R'12 、-OH、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基；
如無特別說明，所述取代是指被一個或多個R取代；
各R獨立地選自：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
各L1 和L2 獨立地選自：-CRf Rg -、CO、SO2 ；其中，Rf 和Rg 各自獨立地選自下組：H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
r為1、2或3；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6；
n為0、1或2；
n'為0、1、2或3；
n"為0、1、2或3。
在另一優選例中，
Figure 02_image035
部分選自：
Figure 02_image037
、
Figure 02_image039
、
Figure 02_image041
、
Figure 02_image043
，其中，
Figure 02_image045
為單鍵或雙鍵；q為0、1、2；X1 和X2 各自獨立地選自：NH、O、S或CH2 ；X3 和X4 各自獨立地選自：N或CH；R1 的定義如上所述。
在另一優選例中，所述的式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，其具有式I'所示的結構：
Figure 02_image047
式中，
R1 選自：H、鹵素、羥基、胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基、(C1-C6烷基)NH-或(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)N-；
各R2 獨立地選自：H、鹵素、羥基、胺基、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基；
R3 和R4 各自獨立地選自：H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、-OR6 、-CONR7 R'7 ，其中，所述C1-C6烷基任選地被選自下組的一個或多個基團取代：氰基、羥基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基和-NR7 R'7 ，所述C6-C10芳基或者5-10員雜芳基任選地被選自下組的一個或多個基團取代：鹵素、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基；
R6 、R7 和R'7 各自獨立地選自：H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基；
R5 選自：-H、-CN、-CHO、-NH2 、-OH、鹵素、C1-C6烷基、3-8員雜烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷基-OH、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-C(O)OR8 、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )、-C(O)-N(R10 )(R'10 )、-C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自：H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R9 和R'9 各自獨立地選自：-CN、-CHO、-NR12 R'12 、-OH、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自：H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
n為0、1或2；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6。
在另一優選例中，R1 選自：C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基。
在另一優選例中，R5 選自：-CN、-CHO、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、3-8員雜烷基、C1-C6烷基-OH、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-C(O)OR8 、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )、-C(O)-N(R10 )(R'10 )、-C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )；
R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自：H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基；
或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
R9 和R'9 各自獨立地選自：-CN、-CHO、-NR12 R'12 、-OH、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基；
或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基；
L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自：H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基；
m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6。
在另一優選例中，“-(L1 )p -”和“-(L2 )m -”為-CH2 CH2 -。
在另一優選例中，m為1、2、3或4。
在另一優選例中，p為1、2、3或4。
在另一優選例中，各R2 獨立地選自：鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
在另一優選例中，R3 和R4 各自獨立地選自：H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
在另一優選例中，所述式I化合物具有式I"所示的結構：
Figure 02_image054
式中，
Rc為選自取代或未取代的C1-C6烷基，所述的取代是指被一個或多個鹵素、氰基、羥基取代；
X選自：鹵素、氰基、硝基、鹵代C1-C6烷基；
R5 的定義如上所述。
在另一優選例中，R5 選自：
Figure 02_image056
、
Figure 02_image058
。
在另一優選例中，R5 為-C(O)OR8 ，其中，R8 選自：甲基、乙基、異丙基、第三丁基。
在另一優選例中，R5 為-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )，其中，p為1、2、3；R9 和R'9 的定義如上所述。
在另一優選例中，R5 為-C(O)-N(R10 )(R'10 )，其中，R10 和R'10 各自獨立地選自：H、甲基、乙基、異丙基、第三丁基、C3-C6環烷基（如環丙基、環丁基、環戊基、環己基）、3-6員雜環烷烴（如四氫呋喃基、四氫吡咯基、嗎啉基），或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成5-6員雜環基。
在另一優選例中，R5 為-C(O)-NH-CH2 CH2 -N(R'11 )(R"11 )，其中，R'11 和R"11 各自獨立地選自：H、甲基、乙基、異丙基、第三丁基、C3-C6環烷基（如環丙基、環丁基、環戊基、環己基）、3-6員雜環烷烴（如四氫呋喃基、四氫吡咯基、嗎啉基）。
在另一優選例中，R1 、R2 、R3 、R4 、R5 為實施例中各具體化合物相對應的具體基團。
本發明中的化合物可能形成的鹽也是屬於本發明的範圍。除非另有說明，本發明中的化合物被理解為包括其鹽類。在此使用的術語“鹽”，指用無機或有機酸和鹼形成酸式或鹼式的鹽。此外，當本發明中的化合物含一個鹼性片段時，它包括但不限於吡啶或咪唑，含一個酸性片段時，包括但不限於羧酸，可能形成的兩性離子(“內鹽”)包含在術語“鹽”的範圍內。藥學上可接受的(即無毒，生理可接受的)鹽是首選，雖然其他鹽類也有用，例如可以用在製備過程中的分離或純化步驟。本發明的化合物可能形成鹽，例如，化合物I與一定量如等當量的酸或鹼反應，在介質中鹽析出來，或在水溶液中冷凍乾燥得來。
本發明中的化合物含有的鹼性片段，包括但不限於胺或吡啶或咪唑環，可能會和有機或無機酸形成鹽。可以成鹽的典型的酸包括醋酸鹽(如用醋酸或三鹵代醋酸，如三氟乙酸)、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二甘醇酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、羥基乙磺酸鹽(如，2-羥基乙磺酸鹽)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽(如，2-萘磺酸鹽)、菸酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯丙酸鹽(如3-苯丙酸鹽)、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽，水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽(如與硫酸形成的)、磺酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽如對甲苯磺酸鹽、十二烷酸鹽等等。
本發明的某些化合物可能含有的酸性片段，包括但不限於羧酸，可能會和各種有機或無機鹼形成鹽。典型的鹼形成的鹽包括銨鹽、鹼金屬鹽如鈉、鋰、鉀鹽，鹼土金屬鹽如鈣、鎂鹽和有機鹼形成的鹽(如有機胺)，如苄星、二環己基胺、海巴胺(與N,N -二(去氫松香基)乙二胺形成的鹽)、N -甲基-D-葡糖胺、N -甲基-D-葡糖醯胺、第三丁基胺，以及和胺基酸如精胺酸、離胺酸等等形成的鹽。鹼性含氮基團可以與鹵化物季銨鹽，如小分子烷基鹵化物(如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物及碘化物)，二烷基硫酸鹽(如，硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯)，長鏈鹵化物(如癸基、十二烷基、十四烷基和十四烷基的氯化物、溴化物及碘化物)，芳烷基鹵化物(如苄基和苯基溴化物)等等。
如本文所用，術語“藥學上可接受的鹽”指本發明化合物與酸或鹼所形成的適合用作藥物的鹽。藥學上可接受的鹽包括無機鹽和有機鹽。一類優選的鹽是本發明化合物與酸形成的鹽。適合形成鹽的酸包括但並不限於：鹽酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有機酸；以及脯胺酸、***酸、天冬胺酸、麩胺酸等胺基酸。
另一類優選的鹽是本發明化合物與鹼形成的鹽，例如鹼金屬鹽(例如鈉鹽或鉀鹽)、鹼土金屬鹽(例如鎂鹽或鈣鹽)、銨鹽(如低級的烷醇銨鹽以及其它藥學上可接受的胺鹽)，例如甲胺鹽、乙胺鹽、丙胺鹽、二甲基胺鹽、三甲基胺鹽、二乙基胺鹽、三乙基胺鹽、第三丁基胺鹽、乙二胺鹽、羥乙胺鹽、二羥乙胺鹽、三羥乙胺鹽，以及分別由嗎啉、哌𠯤、離胺酸形成的胺鹽。
術語“溶劑合物”指本發明化合物與溶劑分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本發明化合物與水進行配位形成的配合物。
本發明中化合物的前藥及溶劑合物也在涵蓋的範圍之內。此處術語“前藥”是指一種化合物，在治療相關疾病時，經過代謝或化學過程的化學轉化而產生本發明中的化合物、鹽、或溶劑合物。本發明的化合物包括溶劑合物，如水合物。
本發明中的化合物、鹽或溶劑合物，可能存在的互變異構形式(例如醯胺和亞胺醚)。所有這些互變異構體都是本發明的一部分。
所有化合物的立體異構體(例如，那些由於對各種取代可能存在的不對稱碳原子)，包括其對映體形式和非對映形式，都屬於本發明的設想範圍。本發明中的化合物獨立的立體異構體可能不與其他異構體同時存在(例如，作為一個純的或者實質上是純的光學異構體具有特殊的活性)，或者也可能是混合物，如消旋體，或與所有其他立體異構體或其中的一部分形成的混合物。本發明的手性中心有S或R兩種構型，由理論與應用化學國際聯合會(IUPAC)1974年建議定義。外消旋形式可通過物理方法解決，例如分步結晶，或通過衍生為非對映異構體分離結晶，或通過手性柱色譜法分離。單個的光學異構體可通過合適的方法由外消旋體得到，包括但不限於傳統的方法，例如與光學活性酸成鹽後再結晶。
本發明中的化合物，依次通過製備、分離純化獲得的該化合物其重量含量等於或大於90%，例如，等於或大於95%，等於或大於99%(“非常純”的化合物)，在正文描述列出。此處這種“非常純”本發明的化合物也作為本發明的一部分。
本發明的化合物所有的構型異構體都在涵蓋的範圍之內，無論是混合物、純的或非常純的形式。在本發明化合物的定義包含順式(Z )和反式(E )兩種烯烴異構體，以及碳環和雜環的順式和反式異構體。
在整個說明書中，基團和取代基可以被選擇以提供穩定的片段和化合物。
特定官能團和化學術語定義都詳細介紹如下。對本發明來說，化學元素與元素週期表，CAS version，Handbook of Chemistry and Physics ，75th Ed.中定義的一致。特定官能團的定義也在其中描述。此外，有機化學的基本原則以及特定官能團和反應性在“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito: 1999，也有說明，其全部內容納入參考文獻之列。
本發明的某些化合物可能存在於特定的幾何或立體異構體形式。本發明涵蓋所有的化合物，包括其順式和反式異構體、R和S對映異構體、非對映體、(D)型異構體、(L)型異構體、外消旋混合物和其它混合物。另外不對稱碳原子可表示取代基，如烷基。所有異構體以及它們的混合物，都包含在本發明中。
按照本發明，同分異構體的混合物含有異構體的比率可以是多樣的。例如，在只有兩個異構體的混合物可以有以下組合：50:50，60:40，70:30，80:20，90:10，95:5，96:4，97:3，98:2，99:1，或100:0，異構體的所有比率都在本發明範圍之內。本專業內一般技術人員容易理解的類似的比率，及為更複雜的異構體的混合物的比率也在本發明範圍之內。
本發明還包括同位素標記的化合物，等同於原始化合物在此公開。不過實際上對一個或更多的原子被與其原子量或質量序數不同的原子取代通常會出現。可以列為本發明的化合物同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯同位素，分別如2 H、3 H、13 C、11 C、14 C、15 N、18 O、17 O、31 P、32 P、35 S、18 F和36 Cl。本發明中的化合物，或對映體，非對映體，異構體，或藥學上可接受的鹽或溶劑化物，其中含有上述化合物的同位素或其他同位素原子都在本發明的範圍之內。本發明中某些同位素標記化合物，例如3 H和14 C的放射性同位素也在其中，在藥物和底物的組織分佈實驗中是有用的。氚，即3 H和碳-14，即14 C，它們的製備和檢測比較容易。是同位素中的首選。此外，較重同位素取代如氘，即2 H，由於其很好的代謝穩定性在某些療法中有優勢，例如在體內增加半衰期或減少用量，因此，在某些情況下可以優先考慮。同位素標記的化合物可以用一般的方法，通過用易得的同位素標記試劑替換為非同位素的試劑，用批露在示例中的方案可以製備。
如果要設計一個本發明的化合物特定的對映體的合成，它可以不對稱合成製備，或用手性輔劑衍生化，將所產生的非對映混合物分離，再除去手性輔劑而得到純的對映體。另外，如果分子中含有一個鹼性官能團，如胺基酸，或酸性官能團，如羧基，可以用合適的光學活性的酸或鹼的與之形成非對映異構體鹽，再通過分離結晶或色譜等常規手段分離，然後就得到了純的對映體。
如本文所述，本發明中的化合物可與任何數量取代基或官能團取而擴大其包含範圍。通常，術語“取代”不論在術語“可選”前面或後面出現，在本發明配方中包括取代基的通式，是指用指定結構取代基，代替氫自由基。當特定結構中的多個在位置被多個特定的取代基取代時，取代基每一個位置可以是相同或不同。本文中所使用的術語“取代”包括所有允許有機化合物取代。從廣義上講，允許的取代基包括非環狀的、環狀的、支鏈的非支鏈的、碳環的和雜環的，芳環的和非芳環的有機化合物。在本發明中，如雜原子氮可以有氫取代基或任何允許的上文所述的有機化合物來補充其價態。此外，本發明是無意以任何方式限制允許取代有機化合物。本發明認為取代基和可變基團的組合在以穩定化合物形式在疾病的治療上是很好的。此處術語“穩定”是指具有穩定的化合物，在足夠長的時間內檢測足以維持化合物結構的完整性，最好是在足夠長的時間內都在效，本文在此用於上述目的。
本申請所涉及的化合物及其藥學可接受的鹽的代謝產物，以及可以在體內轉變為本申請所涉及的化合物及其藥學可接受的鹽的結構的前藥，也包含在本申請的申請專利範圍中。
藥物組合物和施用方法
本發明所述的藥物組合物用於預防和/或治療以下疾病：腸易激綜合症和/或癌症。
通式(I)所述化合物可以與已知的治療或改進相似病狀的其他藥物聯用。聯合給藥時，原來藥物的給藥方式和劑量可以保持不變，而同時或隨後服用式I的化合物。當式I化合物與其它一種或幾種藥物同時服用時，可以優選使用同時含有一種或幾種已知藥物和式I化合物的藥用組合物。藥物聯用也包括在重疊的時間段服用式I化合物與其它一種或幾種已知藥物。當式I化合物與其它一種或幾種藥物進行藥物聯用時，式I化合物或已知藥物的劑量可能比它們單獨用藥的劑量低。
可以與通式(I)所述化合物進行藥物聯用的藥物或活性成分包括但不局限為：胺基水楊酸製劑（如柳氮磺吡啶）、糖皮質激素（如氫化可的松、***等）、PD-1抑制劑(如納武單抗、派姆單抗、JS-001、SHR-120、BGB-A317、IBI-308、GLS-010、GB-226、STW204、HX008、HLX10、BAT1306、AK105、LZM 009或上述藥物的生物類似藥等)、PD-L1抑制劑(如德瓦魯單抗、阿特珠單抗、CS1001、KN035、HLX20、SHR-1316、BGB-A333、JS003、CS1003、KL-A167、F 520、GR1405、MSB2311或上述藥物的生物類似藥等)、CD20抗體(如利妥昔單抗、奧濱尤妥珠單抗、奧法木單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗等)、CD47抗體(如Hu5F9-G4、CC-90002、TTI-621、TTI-622、OSE-172、SRF-231、ALX-148、NI-1701、SHR-1603、IBI188、IMM01)、ALK抑制劑(如色瑞替尼、艾樂替尼、布加替尼、勞拉替尼、奧卡替尼)、PI3K抑制劑(如艾代拉裡斯、Dactolisib、Taselisib、Buparlisib等)、BTK抑制劑(如依魯替尼、Tirabrutinib、Acalabrutinib等)、EGFR抑制劑(如阿法替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、達克替尼、埃克替尼、卡奈替尼等)、VEGFR抑制劑(如索拉非尼、帕唑帕尼、瑞伐替尼、卡博替尼、舒尼替尼、多納非尼等)、HDAC抑制劑(如Givinostat、Droxinostat、恩替諾特、達西司特、泰克地那林等)、CDK抑制劑(如帕博西尼、瑞博西尼、Abemaciclib、Lerociclib等)、MEK抑制劑(如司美替尼(AZD6244)、曲美替尼(GSK1120212)、PD0325901、U0126、AS-703026、PD184352(CI-1040)等)、Akt抑制劑(如MK-2206、Ipatasertib、Capivasertib、Afuresertib、Uprosertib等)、mTOR抑制劑(如Vistusertib等)、SHP2抑制劑(如RMC-4630、JAB-3068、TNO155等)、IGF-1R抑制劑(如Ceritinib、奧卡替尼、linsitinib、BMS-754807、GSK1838705A等)或它們的任意組合。
本發明藥物組合物的劑型包括(但並不限於)：注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用擦劑、控釋型、緩釋型或奈米製劑。
本發明的藥物組合物包含安全有效量範圍內的本發明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至於產生嚴重的副作用。通常，藥物組合物含有1-2000 mg本發明化合物/劑，更佳地，含有10-1000 mg本發明化合物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個膠囊或藥片。
“藥學上可以接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質，它們適合於人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性。“相容性”在此指的是組合物中各組份能和本發明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)、明膠、滑石、固體潤滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑(如吐溫®)、潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉)、著色劑、調味劑、穩定劑、抗氧化劑、防腐劑、無熱原水等。
本發明化合物或藥物組合物的施用方式沒有特別限制，代表性的施用方式包括(但並不限於)：口服、瘤內、直腸、腸胃外(靜脈內、肌肉內或皮下)、和局部給藥。
用於口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a) 填料或增容劑，例如，澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和矽酸；(b) 黏合劑，例如，羥甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***膠；(c) 保濕劑，例如，甘油；(d) 崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯澱粉或木薯澱粉、海藻酸、某些複合矽酸鹽、和碳酸鈉；(e) 緩溶劑，例如石蠟；(f) 吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g) 潤濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h) 吸附劑，例如，高嶺土；和(i) 潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩衝劑。
固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可採用包衣和殼材製備，如腸衣和其它本領域周知的材料。它們可包含不透明劑，並且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內的某一部分中釋放。可採用的包埋組分的實例是聚合物質和蠟類物質。必要時，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。
用於口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領域中常規採用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質的混合物等。
除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。
除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質的混合物等。
用於腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散液、懸浮液或乳液和用於重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。
用於局部給藥的本發明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。活性成分在無菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩衝劑，或必要時可能需要的推進劑一起混合。
本發明治療方法可以單獨施用，或者與其它治療手段或者治療藥物聯用。
使用藥物組合物時，是將安全有效量的本發明化合物適用於需要治療的哺乳動物(如人)，其中施用時劑量為藥學上認為的有效給藥劑量，對於60 kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1～2000 mg，優選50～1000 mg。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫師技能範圍之內的。
本發明還提供了一種藥物組合物的製備方法，包括步驟：將藥學上可接受的載體與本發明所述通式(I)化合物或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物進行混合，從而形成藥物組合物。
本發明還提供了一種治療方法，它包括步驟：給需要治療的對象施用本發明中所述通式(I)化合物，或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物，或施用本發明所述的藥物組合物，用於選擇性地抑制RET。
製備方法
以下方案和實例中描述了製備式I的化合物的方法。原料和中間體從商業來源購買，由已知步驟製備，或以其他方式說明。在某些情況下，可以改變執行反應方案的步驟的順序，以促進反應或避免不需要的副反應產物。
下面更具體地描述本發明式I結構化合物的製備方法，但這些具體方法不對本發明構成任何限制。本發明化合物還可以任選將在本說明書中描述的或本領域已知的各種合成方法組合起來而方便的製得，這樣的組合可由本發明所屬領域的技術人員容易的進行。
通常，在製備流程中，各反應通常惰性氣體保護下，適當溶劑中，在0到90℃下進行，反應時間通常為2-24小時。
優選地，本發明式I化合物的製備方法包括如下步驟：
(s1) 化合物1-1在濃硫酸條件下，慢慢滴加濃硝酸，或者發煙硝酸進行硝化反應，得到化合物1-2；
(s2) 化合物1-2經官能團轉換及還原步驟得到化合物I1；
(s3) 化合物2-1在惰性溶劑中，鹼性條件下反應生成化合物2-2；
(s4) 化合物2-2經偶聯等反應生成化合物I2；
(s5) 在惰性溶劑中，催化劑存在下，式I1和式I2化合物發生反應，得到式3-1化合物；
(s6) 在惰性溶劑中，酸性條件下，式3-1化合物發生反應，得到式I化合物；
Figure 02_image140
式中，Y選自OH、鹵素；
R1 、R2 、R5 、Rb 、r、n、n'和n"的定義如上所述。
優選地，步驟(s3)、(s5)、(s6)中，所述的惰性溶劑為吡啶、DMF、DMSO、三乙胺、DCM、1,2-二氯乙烷、四氫呋喃、1,6-二氧六烷。
優選地，步驟(s5)中，所述的催化劑為丙基磷酸酐(T3 P)。
優選地，步驟(s6)中，所述的酸為TFA。
優選地，本發明化合物可通過如下步驟獲得：
Figure 02_image142
式中，R1 、R5 的定義如上所述；
優選地，R1 為-O-R'(
Figure 02_image004
)；
優選地，R5 選自-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
Figure 02_image027
)、-C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
Figure 02_image029
)。
(i)在濃硫酸條件下，慢慢滴加濃硝酸，或者發煙硝酸進行硝化反應，得到化合物2；
(ii)酸在氯化亞碸或者草醯氯和催化劑（例如，DMF）作用轉化為醯氯，在鹼性（例如，Et3 N，DIEA）條件下，醯氯和胺快速反應生成化合物3；
(iii)在酸性（例如：HCl）條件下，鐵還原硝基，得到化合物4；
(iv)在鹼性條件下（如碳酸鉀），化合物5與碘代烷基反應生成化合物6；
(v)在鹼性條件下（如氫氧化鉀），化合物6與對甲氧基苯基甲醇反應生成化合物7；
(vi)在鹼性條件下（如碳酸銫），化合物7與2-（2-氟-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基）苯基）乙酸甲酯偶聯生成化合物8；
(vii)在鹼性條件下（如氫氧化鋰），化合物8脫甲基生成化合物9；
(viii)在鹼性（例如，吡啶）以及酸酐條件下，化合物4與化合物9進行縮合成醯胺，生成化合物10；
(ix)化合物10在酸性（例如：TFA）條件下，脫去苄氧基，最終得到化合物11；
以上反應步驟中，反應溶劑、反應溫度、反應時間、催化劑等可以根據具體的反應物進行選擇。
以上反應步驟中，反應原料和試劑可以通過商購或文獻報導路線合成。
本發明具有以下主要優點：
(1)本發明化合物對RET激酶具有優良的抑制能力，以及對RET激酶具有優良選擇性，對VEGFR2等其他激酶的抑制活性低；
(2)本發明化合物對TRK激酶具有優良的抑制能力，以及對突變型TRK激酶具有更強的抑制能力；
(3)本發明中部分化合物具有更好的細胞抑制活性作用，且在IBS模型（醋酸誘導的腸超敏模型）中表現出更好的藥效作用。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。
除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示範之用。
本發明的化合物結構是通過核磁共振(NMR)和液質聯用色譜(LC-MS)來確定的。
NMR是使用Bruker AVANCE-400和Bruker AVANCE-500核磁儀檢測的，測定溶劑包含氘代二甲亞碸(DMSO-d 6 )、氘代丙酮(CD3 COCD3 )、氘代氯仿(CDCl3 )及氘代甲醇(CD3 OD)等，內標採用四甲基矽烷(TMS)，化學位移以百萬分之一(ppm)的單位計量。
液質聯用色譜(LC-MS) 是使用Agilent 1260質譜儀檢測的。HPLC的測定使用Agilent 1100高壓色譜儀(Microsorb 5 micron C18 100 × 3.0 mm)，製備薄層色譜採用的是0.4 mm-0.5 mm。柱層析一般使用青島矽膠200-300目矽膠作為載體。
本發明實施例中的起始原料都是已知並有市售的，或者可以採用或按照本領域已報導的文獻資料合成的。
除特殊說明外，本發明所有反應均在乾燥的惰性氣體(如氮氣或氬氣)保護下通過連續磁力攪拌進行，反應溫度均為攝氏度。
下列簡寫詞的使用貫穿本發明
THF：四氫呋喃
DCM：二氯甲烷
Fe：鐵粉
H2 SO4 ：硫酸
HNO3 ：硝酸
SOCl2 ：氯化亞碸
HCl：鹽酸
H2 O：水
TEA：三乙胺
DIEA：N ,N -二異丙基乙胺
DMF：N ,N -二甲基甲醯胺
Cs2 CO3 ：碳酸銫
LiOH：氫氧化鋰
EA：乙酸乙酯
Pd(dppf)Cl2 ：[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀
T3 P：丙基磷酸酐
中間體1  3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯甲酸的合成
Figure 02_image144
將3-(五氟硫代)苯甲酸（1.0 g, 4.03 mmol）加入到單口瓶中，然後慢慢加入濃硫酸（12 mL），該混合液攪拌並降溫至0℃，再緩慢加入濃硝酸（2 mL），攪拌10分鐘，然後升溫至80℃反應12 h，反應完全後，冷卻，反應液慢慢倒入冰水中，EA萃取，有機相再用飽和碳酸氫鈉中和，乾燥，過濾，濃縮，得到3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸0.9 g。
中間體2  3- 胺基-N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺的合成
Figure 02_image146
步驟1 合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸（0.5 g, 1.71 mmol）溶解在SOCl2 （10 mL)中，再加入幾滴DMF，然後回流反應2小時，反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM（15 mL）中，將混合物冷卻至0℃，然後加入三乙胺（0.52 g, 5.12 mmol），接著加入N ,N -二甲基乙二胺（0.23 g, 2.56 mmol），在0℃下繼續反應半小時，反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺0.55 g，MS m/z（ESI）：363.3[M+H]+ 。
步驟2 合成3- 胺基-N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（0.5 g, 1.38 mmol）加入到甲醇（10 mL）中,再加入鐵粉（1.5 g），然後再慢慢加入鹽酸（1 mL, 12 mol/L），混合物在72℃下攪拌反應2小時，監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到3-胺基-N -(2-(二甲基胺基)乙基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺0.38 g，MS m/z（ESI）：333.9[M+H]+ 。
中間體3 2-(4-(4- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙酸的合成
Figure 02_image148
步驟1 合成5- 溴-4- 乙氧基-2 （（4- 甲氧基苄基）氧基）吡啶
室溫下，向5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶（2.5 g, 10.6 mmol）在甲苯（30 mL）的混合液中加入（4-甲氧基苯基）甲醇（1.75 g, 12.7 mmol）、KOH(1.2 g, 21.2 mmol)和18-冠醚-6（0.28 g, 1.06 mmol），混合物在120℃下反應3小時，反應完全後，旋乾反應液，加入水（15 mL），然後再用EA（30 mL*2）萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析，得到5-溴-4-乙氧基-2（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶3.0 g。MS m/z（ESI）：339.1[M+H]+ 。
步驟2 合成2- （4- （4- 乙氧基-6- （（4- 甲氧基苄基）氧基）吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙酸甲酯
在氮氣保護下，將5-溴-4-乙氧基-2（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶（1.9 g, 5.62 mmol）、2-（2-氟-4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基）苯基）乙酸甲酯（1.82 g, 6.18 mmol），PdCl2 (dppf)(0.45 g, 0.56 mmol)和碳酸銫（3.65 g, 11.2 mmol）加入到單口瓶中，再加入1,4-二氧六環（30 mL）和水（10 mL），混合物在95℃下反應3小時。反應完全後，用EA（40 mL*2）萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙酸甲酯1.8 g。MS m/z（ESI）：426.3[M+H]+ 。
步驟3 合成2- （4- （4- 乙氧基-6- （（4- 甲氧基苄基）氧基）吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙酸
將2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙酸甲酯（2.4 g, 5.63 mmol）溶解在THF（15 mL）中，然後再將溶解了氫氧化鋰（0.3 g, 12.4 mmol）水溶液加入其中，混合物在60℃下攪拌反應4小時。反應完全後，旋乾大部分有機相，然後再用稀鹽酸調pH=7，析出白色固體，抽濾，濾餅再用水洗，烘乾，得到2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙酸2.1 g，MS m/z（ESI）：412.2[M+H]+ 。
實施例1N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基-2- 氟苯基）乙醯胺基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺的合成
Figure 02_image150
步驟1 合成N - （2- （二甲基胺基）乙基）-3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- （（4- 甲氧基苄基）氧基）吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-5- （五氟硫代）苯甲醯胺
將2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙酸（0.6 g, 1.45 mmol）加入到吡啶（5 mL）中，然後再加入3-胺基-N -（2-（二甲基胺基）乙基）-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（0.48 g, 1.75 mmol）和T3 P(0.55 g, 1.75 mmol)，混合物在室溫下反應12小時。反應完全後直接旋乾反應液，然後柱層析得到N -（2-（二甲基胺基）乙基）-3-（2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-5-（五氟硫代）苯甲醯胺0.82 g，MS m/z（ESI）：727.5[M+H]+ 。
步驟2 合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基-2- 氟苯基）乙醯胺基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -（2-（二甲基胺基）乙基）-3-（2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（0.82 g, 1.13 mmol）溶解在DCM（10 mL）中，然後加入TFA（2 mL），混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM（20 mL*2）萃取，有機相旋乾，柱層析得到N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-（2-（4-（4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基-2-氟苯基）乙醯胺基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（化合物 1 ） 0.48 g。MS m/z（ESI）：607.3[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.38 (s, 1H), 10.85 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.40 – 7.30 (m, 2H), 7.28 – 7.17 (m, 2H), 5.80 (s, 1H), 4.02 (dt,J = 6.8, 2.1 Hz, 4H), 3.78 (s, 2H), 2.43 (t,J = 6.5 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H), 1.27 (t,J = 6.9 Hz, 3H).
實施例2  3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶基-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-N ,N - 二甲基-5- （五氟硫代）苯甲醯胺的合成
Figure 02_image152
步驟1 合成N ,N - 二甲基-3- 硝基-5- （五氟硫代）苯甲醯胺
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸（0.3 g, 1.02 mmol）溶解在SOCl2 （10 mL)中，再加入幾滴DMF，然後回流反應2小時。反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM（10 mL）中，將混合物冷卻至0℃，然後加入三乙胺（0.32 g, 3.07 mmol），接著加入二甲胺（0.07 g, 1.56 mmol），在0℃下繼續反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到N ,N -二甲基-3-硝基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺0.26 g。MS m/z（ESI）：321.5[M+H]+ 。
步驟2 合成3- 胺基-N ,N - 二甲基-5- （五氟硫代）苯甲醯胺
將N ,N -二甲基-3-硝基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（0.26 g, 0.8 mmol）加入到甲醇（10 mL）中，再加入鐵粉（0.8 g），然後再慢慢加入鹽酸（1 mL, 12 mol/L），混合物在72℃下攪拌反應2小時。監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到3-胺基-N ,N -二甲基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺0.17 g。MS m/z（ESI）：291.1[M+H]+ 。
步驟3 合成3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- （（4- 甲氧基苄基）氧基）吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-N ,N - 二甲基-5- （五氟硫代）苯甲醯胺
將2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙酸（0.2 g, 0.49 mmol）加入到吡啶（5 mL）中，然後再加入3-胺基-N ,N -二甲基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（0.17 g, 0.58 mmol）和T3 P(0.19 g, 0.58 mmol)，混合物在室溫下反應12小時。反應完全後直接旋乾反應液，然後柱層析得到3-（2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-N ,N -二甲基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺0.22 g。MS m/z（ESI）：684.3[M+H]+ 。
步驟4 合成3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶基-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-N ,N - 二甲基-5- （五氟硫代）苯甲醯胺 將3-（2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-N ,N -二甲基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（0.22 g, 0.32 mmol）溶解在DCM（6 mL）中，然後加入TFA（1 mL），混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM（10 mL*2）萃取，有機相旋乾，柱層析得到3-（2-（4-（4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶基-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-N ,N -二甲基-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（化合物 2 ） 0.11 g。MS m/z（ESI）：564.5[M+H]+ 。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.39 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 8.29 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.59 (dd,J = 1.9, 1.3 Hz, 1H), 7.40 – 7.32 (m, 2H), 7.28 – 7.20 (m, 2H), 5.81 (s, 1H), 4.04 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.78 (s, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.90 (s, 3H), 1.28 (t,J = 7.0 Hz, 3H).
實施例3N - （2- （二乙胺基）乙基）-3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-5- （五氟硫代）苯甲醯胺的合成
Figure 02_image154
步驟1 合成N - （2- （二乙胺基）乙基）-3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺 將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸（0.3 g, 1.02 mmol）溶解在SOCl2 （10 mL)中，再加入幾滴DMF，然後回流反應2小時。反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM（10 mL）中，將混合物冷卻至0℃，然後加入三乙胺（0.32 g, 3.07 mmol），接著加入N,N -二乙基乙二胺（0.18 g, 1.56 mmol），在0℃下繼續反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析，得到N -（2-（二乙胺基）乙基）-3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺0.32 g。MS m/z（ESI）：392.1[M+H]+ 。
步驟2 合成3- 胺基-N - （2- （二乙胺基）乙基）-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -（2-（二乙胺基）乙基）-3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（0.32g, 0.82 mmol）加入到甲醇（10 mL）中,再加入鐵粉（0.8 g），然後再慢慢加入鹽酸（1 mL, 12 mol/L），混合物在72℃下攪拌反應2小時。監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到3-胺基-N -（2-（二乙胺基）乙基）-5-（(五氟硫代)苯甲醯胺0.25 g,MS m/z（ESI）：362.2[M+H]+ 。
步驟3 合成N - （2- （二乙胺基）乙基）-3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- （（4- 甲氧基苄基）氧基）吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-5- （五氟硫代）苯甲醯胺
將2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙酸（0.25 g, 0.61 mmol）加入到吡啶（5 mL）中，然後再加入3-胺基-N -（2-（二乙胺基）乙基）-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（0.26 g, 0.73 mmol）和T3 P(0.28 g, 0.72 mmol)，混合物在室溫下反應12小時。反應完全後直接旋乾反應液，然後柱層析，得到N -（2-（二乙胺基）乙基）-3-（2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-5-（五氟硫代）苯甲醯胺0.19 g,MS m/z（ESI）：755.6[M+H]+ 。
步驟4 合成N - （2- （二乙胺基）乙基）-3- （2- （4- （4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基）-2- 氟苯基）乙醯胺基）-5- （五氟硫代）苯甲醯胺 將N -（2-（二乙胺基）乙基）-3-（2-（4-（4-乙氧基-6-（（4-甲氧基苄基）氧基）吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（0.19 g, 0.25 mmol）溶解在DCM（5 mL）中，然後加入TFA（1 mL），混合物室溫下攪拌反應2小時，反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM（10 mL*2）萃取，有機相旋乾，柱層析，得到N -（2-（二乙胺基）乙基）-3-（2-（4-（4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基）-2-氟苯基）乙醯胺基）-5-（五氟硫代）苯甲醯胺（化合物 3 ） 0.081 g。MS m/z（ESI）：635.1[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.58 (s, 1H), 10.75 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.40 – 7.32 (m, 2H), 7.28 – 7.11 (m, 2H), 5.83 (s, 1H), 4.02 (dt,J = 5.8, 2.1 Hz, 2H), 3.78 (s, 4H), 2.43 (t,J = 6.5 Hz, 4H), 2.19(s,2H),1.17-1.35 (t, 9H).
實施例4N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺基)-N - 甲基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺的合成
Figure 02_image156
步驟1 合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-N - 甲基-3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在SOCl2 (5 mL)中，再加入幾滴DMF，然後回流反應2小時，反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM(5 mL)中，將混合物滴加到三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)和N1 ,N1 ,N2 -三甲基乙烷-1,2-二胺(226 mg, 2.22 mmol)的DCM(5 mL)溶液中，在0℃下繼續反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到N -(2-(二甲基胺基)乙基)-N -甲基-3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺460 mg。MS m/z(ESI)：378[M+H]+ 。
步驟2 合成3- 胺基-N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-N - 甲基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -(2-(二甲基胺基)乙基)-N -甲基-3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺(460 mg, 1.22 mmol)、FeCl3 (20 mg, 0.12 mmo)、活性炭(100 mg)加入到乙醇(10 mL)中，然後向反應體系中緩慢加入水合肼(244 mg, 4.88 mmol)，混合物在80℃下攪拌反應過夜。監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到3-胺基-N -(2-(二甲基胺基)乙基)-N -甲基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺400 mg。MS m/z(ESI)：348[M+H]+ 。
步驟3 合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(4-(4- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺基)-N - 甲基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(474 mg, 1.15 mmol)溶解到DMF中，然後再加入HATU(482 mg, 1.27 mmol)、DMAP(14 Mg, 0.115 mmol)、DIEA(446 mg, 3.46 mmol)、3-胺基-N -(2-(二甲基胺基)乙基)-N -甲基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺(400 mg, 1.15 mmol)，混合物在室溫下反應過夜。反應完全後，加入水淬滅反應，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺基)-N -甲基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺380 mg。MS m/z(ESI)：741[M+H]+ 。
步驟4 合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺基)-N - 甲基-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺基)-N -甲基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺(380 mg, 0.514 mmol)溶解在DCM(10 mL)中，然後加入TFA(2 mL)，混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM(20 mL*2)萃取，有機相旋乾，柱層析得到N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺基)-N -甲基-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（化合物 4 ） 180 mg。MS m/z(ESI)：621[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.39 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.41 – 7.32 (m, 2H), 7.29 – 7.21 (m, 2H), 5.81 (s, 1H), 4.05 (q,J = 6.9 Hz, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.58 (s, 1H), 3.24 (s, 1H), 2.94 (d,J = 22.5 Hz, 3H), 2.59 (s, 1H), 2.37 (s, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.29 (t,J = 6.9 Hz, 3H).
實施例5 2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 五氟硫代)-5-( 吡咯烷-1- 羰基) 苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image158
步驟1 合成(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基)( 吡咯烷-1- 基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在二氯亞碸(15 mL)中，向體系中滴入兩滴DMF，加熱至80℃回流2h。反應完全後將體系旋乾，用1 mL DCM將溶解醯氯產物。吡咯烷(243 mg, 3.41 mmol)和三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)溶於二氯甲烷中，冰浴下向上述體系緩慢滴加醯氯產物，完畢後將冰浴撤去，該反應液在室溫反30 min。加水洗滌，二氯甲烷萃取，合併有機相，乾燥有機相，旋乾，粗產品用EA/PE=1:3進行矽膠柱層析得到產物(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮480 mg. MS m/z(ESI)：347.3 [M+H]+ 。
步驟2 合成(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基)( 吡咯烷-1- 基) 甲酮
氮氣保護下，向雙口瓶加入(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮(480 mg, 1.39 mmol)、無水三氯化鐵(22.5 mg, 0.14 mmol)、活性炭(96 mg, 6.0 mmol)，加入乾燥的乙醇(20 mL)，80℃下回流，然後緩慢滴加水合肼(278 mg, 5.54 mmol)，繼續反應2 h。監測反應完全後，將體系過濾，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純品產物(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮376 mg. MS m/z(ESI)：333.3 [M+H]+ 。
步驟3 合成2-(4-(4- 乙氧基-6-(((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 五氟硫代)-5-( 吡咯烷-1- 羰基) 苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(370 mg, 0.90 mmol)溶於乾燥的DMF(10 mL)中，加入HATU (376 mg, 0.99 mmol)、(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮 (300 mg, 0.90 mmol)、DMAP(11 mg, 0.09 mmol)，最後加入DIPEA(465 mg, 3.60 mmol)，室溫攪拌2h。監測反應完全後，將體系倒入冰水中，EA萃取，合併有機相，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純產物2-(4-(4-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(吡咯烷-1-羰基)苯基)乙醯胺370 mg. MS m/z(ESI)：710.7 [M+H]+ 。
步驟4 合成2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 五氟硫代)-5-( 吡咯烷-1- 羰基) 苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(吡咯烷-1-羰基)苯基)乙醯胺(370 mg, 0.52 mmol)溶於DCM中，加入TFA(2 ml)，室溫反應30 min，TLC監測反應進程，反應完全後，將體系旋乾，加水，二氯甲烷萃取合併有機相，乾燥旋乾。粗產品用EA/PE=2:1進行矽膠柱層析，得到純產物2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(吡咯烷-1-基)羰基)苯基)乙醯胺（化合物5 ） 153.6 mg. MS m/z(ESI)：590.6 [M+H]+ 。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.36 (s, 1H), 10.75 (s, 1H), 8.28 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.66(s, 1H), 7.37(d,J = 8.2 Hz, 1H), 7.33(d,J = 4.3 Hz, 1H), 7.25 (d,J = 11.4 Hz, 1H), 7.22 (dd,J = 7.9, 1.7 Hz, 1H), 5.80 (s, 1H), 4.03 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.78 (s, 1H), 3.46 (t,J =6.6 Hz, 2H), 3.36 (t,J =6.3 Hz, 2H), 1.84 (dt,J = 18.4, 6.5 Hz, 3H), 1.35-1.14 (m, 4H).
實施例6 2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 五氟硫代)-5-( 哌啶-1- 基) 羰基) 苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image160
步驟1 ：合成(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基)( 哌啶-1- 基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在二氯亞碸(15 mL)中，然後往體系中滴入兩滴DMF，加熱至80℃，回流反應2h。反應完全後將體系中的液體旋乾，用1 mL DCM將醯氯產物溶解。哌啶(290 mg, 3.41 mmol)和三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)溶於二氯甲烷中，冰浴下將醯氯產物緩慢滴加進上述體系，完畢後將冰浴撤去，在室溫反應30 min。加水洗滌，二氯甲烷萃取，合併有機相，乾燥，減壓濃縮，粗產品用EA/PE=1:3進行矽膠柱層析得到產物(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)(哌啶-1-基)甲酮350 mg. MS m/z(ESI)：361.3 [M+H]+ 。
步驟2 ：合成(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基)( 哌啶-1- 基) 甲酮
氮氣保護下向雙口瓶中加入(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)(哌啶-1-基)甲酮 (485 mg, 1.35 mmol)、氯化亞鐵(21.83 mg, 0.13 mmol)、活性炭(97 mg, 6.06 mmol)，加入乾燥的乙醇(20 mL)，80℃下回流，然後緩慢滴加水合肼 (270.3 mg, 5.40 mmol)，繼續反應2 h。監測反應完全後，將體系過濾，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純品產物(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(哌啶-1-基)甲酮404 mg. MS m/z(ESI)：347.3 [M+H]+ 。
步驟3 ：合成2-(4-(4- 乙氧基-6-(((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 五氟硫代)-5-( 哌啶-1- 羰基) 苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(300 mg, 0.73 mmol)溶於乾燥的DMF(10 mL)中，加入HATU (305 mg, 0.8 mmol)、(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(241 mg, 0.73 mmol)、DMAP(9 mg, 0.07 mmol)，最後加入DIPEA(377 mg, 2.92 mmol)，室溫攪拌2h。監測反應完全後，將體系倒入冰水中，EA萃取，合併有機相，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純產物2-(4-(4-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(哌啶-1-羰基)苯基)乙醯胺340 mg. MS m/z(ESI)：724.7 [M+H]+ 。
步驟4 ：合成2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 五氟硫代)-5-( 哌啶-1- 基) 羰基) 苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(哌啶-1-羰基)苯基)乙醯胺(113 mg, 0.16 mmol)溶於DCM中，加入TFA(2 ml)，室溫反應30 min。TLC監測反應進程，反應完全後，將體系旋乾，加水，二氯甲烷萃取合併有機相，乾燥有機相，旋乾。粗產品用EA/PE=2:1進行矽膠柱層析，得到純產物2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(哌啶-1-基) 羰基)苯基)乙醯胺（化合物6 ） 53.3 mg. MS m/z(ESI)：604.6 [M+H]+ 。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.36 (s, 1H), 10.76 (s, 1H), 8.27 (t,J = 1.9 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.37(d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.33 (d,J = 3.7 Hz, 1H), 7.25 (d,J = 11.4Hz, 1H), 7.30-7.20 (m, 1H), 5.80 (s, 1H), 4.03 (q,J = 6.9 Hz, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.24 (s, 2H), 1.60-1.46 (m, 4H), 1.29-1.22 (m, 6H).
實施例7N -(3-(3-( 二甲基胺基) 氮雜環丁烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image162
步驟1 合成 (3-( 二甲基胺基) 氮雜環丁烷-1- 基)(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在SOCl2 (5 mL)中，再加入幾滴DMF，然後回流反應2小時，反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM(5 mL)中，將混合物滴加到三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)和N ,N -二甲基氮雜環丁烷-3-胺(222 mg, 2.22 mmol)的DCM(5 mL)溶液中，在0℃下繼續反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮 460 mg。MS m/z(ESI)：376[M+H]+ 。
步驟2 合成(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基)(3-( 二甲基胺基) 氮雜環丁烷-1- 基) 甲酮
將(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮(460 mg, 1.23 mmol)、FeCl3 (20 mg, 0.12 mmol)、活性炭(100 mg)加入到乙醇(10 mL)中，然後再慢慢加入水合肼(244 mg, 4.88 mmol)，混合物在80℃下攪拌反應過夜。監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)甲酮330 mg。MS m/z(ESI)：346[M+H]+ 。
步驟3 合成N -(3-(3-( 二甲基胺基) 氮雜環丁烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(393 mg, 0.957 mmol)溶解到DMF 中，加入HATU(400 mg, 1.05 mmol)、DMAP(12 mg, 0.095 mmol)、DIEA(370 mg, 2.87 mmol)、(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-基)甲酮(330 mg, 0.957 mmol)，混合物在室溫下反應過夜。反應完全後，加入水淬滅反應，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到N -(3-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺300 mg。MS m/z(ESI)：739[M+H]+ 。
步驟4 合成N -(3-(3-( 二甲基胺基) 氮雜環丁烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將N -(3-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺(300 mg, 0.407 mmol)溶解在DCM(10 mL)中，然後加入TFA(2 mL)，混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM(20 mL*2)萃取，有機相旋乾，柱層析得到N -(3-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺（化合物 7 ） 85 mg。MS m/z(ESI)：619[M+H]+ 。1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.40 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.40 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 8.05 (t,J = 1.5 Hz, 1H), 7.71 (t,J = 1.6 Hz, 1H), 7.40 – 7.32 (m, 2H), 7.28 – 7.20 (m, 2H), 5.81 (s, 1H), 4.30 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 4.05 (dq,J = 14.0, 7.5, 7.0 Hz, 4H), 3.85 (dd,J = 10.5, 5.1 Hz, 1H), 3.79 (s, 2H), 3.14 – 3.07 (m, 1H), 2.08 (s, 6H), 1.28 (t,J = 6.9 Hz, 3H).
實施例8 2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 嗎啉-4- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image164
步驟1 合成嗎啉代(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在二氯亞碸(15 mL)中，向體系中滴入兩滴DMF，加熱至80℃回流2h。反應完全後將體系旋乾，用1 mL DCM溶解醯氯產物。嗎啉(298 mg, 3.41 mmol)和三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)溶於二氯甲烷中，冰浴下向上述體系緩慢滴加醯氯產物，完畢後將冰浴撤去，在室溫反30 min。加水洗滌，二氯甲烷萃取，合併有機相，乾燥旋乾，粗產品用EA/PE=1:3進行矽膠柱層析得到產物嗎啉代(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮354 mg. MS m/z(ESI)：363.3 [M+H]+ 。
步驟2 合成嗎啉代(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基) 甲酮
氮氣保護下向雙口瓶中加入嗎啉代(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮(354 mg, 0.98 mmol)、無水三氯化鐵(15.9 mg, 0.10 mmol)、活性炭(70.8 mg, 4.42 mmol)、乾燥的乙醇(20 mL)，80℃下回流，然後緩慢滴加水合肼 (196 mg, 3.91 mmol)，繼續反應2 h。監測反應完全後，將體系過濾，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純品產物嗎啉代(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮307 mg. MS m/z(ESI)：349.3 [M+H]+ 。
步驟3 合成2-(4-(4- 乙氧基-6-(((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 嗎啉-4- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(362 mg, 0.88 mmol)溶於乾燥的DMF(10 mL)中，加入HATU (368 mg, 0.97 mmol)、嗎啉代(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮 (307 mg, 0.88 mmol)、DMAP(10.8 mg, 0.09 mmol)，最後加入DIPEA(455 mg, 3.52 mmol)，室溫攪拌2h。監測反應完全後，將體系倒入冰水中，EA萃取，合併有機相，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純產物2-(4-(4-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(嗎啉-4-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)乙醯胺600 mg. MS m/z(ESI)：726.7 [M+H]+ 。
步驟4 合成2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基)-N -(3-( 嗎啉-4- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(嗎啉-4-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)乙醯胺(600 mg, 0.83 mmol)溶於DCM中，加入TFA(2 mL)，室溫反應30 min。TLC監測反應進程，反應完全後，將體系旋乾，加水，二氯甲烷萃取合併有機相，乾燥旋乾。粗產品用EA/PE=2:1進行矽膠柱層析，得到純產物2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)-N -(3-(五氟硫代)-5-(吡咯烷-1-基)羰基)苯基)乙醯胺（化合物8 ） 225 mg. MS m/z(ESI)：606.6 [M+H]+ 。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.37 (s, 1H), 10.77 (s, 1H), 8.29 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.37(d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.33 (d,J = 3.6 Hz, 1H), 7.25 (d,J = 11.5 Hz, 1H), 7.20 (m, 1H), 5.80 (s, 1H), 4.03 (q,J = 6.9 Hz, 2H), 3.78 (s, 1H), 3.62-3.56 (m, 4H), 1.37-1.18 (m, 3H).
實施例9N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image166
步驟1 合成(3-( 二甲胺基) 吡咯烷-1- 基)(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在SOCl2 (5 mL)中，加入幾滴DMF，然後回流反應2小時，反應完全後旋乾反應液。將醯基氯溶於DCM(5 mL)中，將混合物滴加到三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)和N ,N -二甲基吡咯烷丁-3-胺(253 mg, 2.22 mmol)的DCM(5 mL)溶液中，在0℃下反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到((3-(二甲胺基)吡咯烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮 480 mg。MS m/z(ESI)：390[M+H]+ 。
步驟2 合成(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基)(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 基) 甲酮
將(3-(二甲胺基)吡咯烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮(480 mg, 1.23 mmol)、FeCl3 (20 mg, 0.12 mmol)、活性炭(100 mg)加入到乙醇(10 mL)中，向體系中緩慢加入水合肼(247 mg, 4.93 mmol)，混合物在80℃下攪拌反應過夜。監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)甲酮375 mg。MS m/z(ESI)：360[M+H]+ 。
步驟3 合成N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(429 mg,  1.045 mmol)溶解到DMF 中，然後加入HATU(437 mg, 1.15 mmol)、DMAP(13 mg, 0.104 mmol)、DIEA(404 mg, 3.13 mmol)、(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)甲酮(375 mg, 1.045 mmol)，混合物在室溫下反應過夜，反應完全後。加入水淬滅反應，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺320 mg。MS m/z(ESI)：753[M+H]+ 。
步驟4 合成N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺(320 mg, 0.426 mmol)溶解在DCM(10 mL)中，然後加入TFA(2 mL)，混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM(20 mL*2)萃取，有機相旋乾，柱層析得到N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺（化合物 9 ） 200 mg。MS m/z(ESI)：633[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.40 (s, 1H), 10.89 (s, 1H), 8.31 (q,J = 3.0, 1.9 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 14.1 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.36 (d,J = 10.5 Hz, 2H), 7.29 – 7.21 (m, 2H), 5.82 (s, 1H), 4.05 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.90 (dd,J = 12.6, 7.1 Hz, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.53 (q,J = 17.8, 14.1 Hz, 4H), 2.68 (d,J = 60.3 Hz, 6H), 2.27 (s, 1H), 2.08 (s, 1H), 1.29 (t,J = 6.9 Hz, 3H).
實施例10N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(2- 氟-4-(4- 異丁氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基) 苯基) 乙醯胺基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺的合成
Figure 02_image168
步驟1 合成2- 氯-4- 異丁氧基吡啶
將異丁醇(4.68 g, 63.29 mmol)溶解在THF(50 mL)中，冰浴下加入NaH(60%) (3.16 g, 79.11 mmol)攪拌30分鐘。然後加入2-氯-4-硝基吡啶(5 g, 31.65 mmol)，反應攪拌過夜。反應完全後，旋乾反應液，乙酸乙酯萃取，乾燥，旋乾，柱層析得到2-氯-4-異丁氧基吡啶3.6 g。MS m/z(ESI)：186[M+H]+ 。
步驟2 合成5- 溴-2- 氯-4- 異丁氧基吡啶
將2-氯-4-異丁氧基吡啶(3.6 g, 19.46 mmol)溶解在濃硫酸(20 mL)中，然後向體系中緩慢分批加入NBS(5.2 g, 29.19 mmol)，加完後反應液升溫至80℃反應4小時。反應完全後，冷卻，將反應液倒入冰水中，經EA(50 mL*3)萃取，有機相乾燥旋乾，柱層析得到5-溴-2-氯-4-異丁氧基吡啶1.1 g產物。MS m/z(ESI)：264[M+H]+ 。
步驟3 合成5- 溴-4- 異丁氧基-2-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶
室溫下，向5-溴-2-氯-4-乙氧基吡啶(1.1 g, 4.18 mmol)在甲苯(20 mL)的混合液中加入(4-甲氧基苯基)甲醇(693 mg, 5.02 mmol)、KOH(469 mg, 8.37 mmol)和18-冠醚-6(110 mg, 0.42 mmol)，混合物在120℃下反應3小時。反應完全後，減壓濃縮反應液，加入水(15 mL)，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到5-溴-4-異丁氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶950 mg。MS m/z(ESI)：366[M+H]+ 。
步驟4 合成2-(2- 氟-4-(4- 異丁氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基) 苯基) 乙酸甲酯
在氮氣保護下將5-溴-4-異丁氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶(950 mg, 2.6 mmol)、2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1, 3, 2-二氧硼雜環戊烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(842 mg, 2.86 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (212 mg, 0.26 mmol)和碳酸銫(1.7 g, 5.2 mmol)加入到單口瓶中，再加入1, 4-二氧六環(15 mL)和水(5 mL)，混合物在95℃下反應3小時。反應完全後，用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，減壓濃縮旋乾，柱層析得到2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)苯基)乙酸甲酯980 mg。MS m/z(ESI)：454[M+H]+ 。
步驟5 合成2-(2- 氟-4-(4- 異丁氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基) 苯基) 乙酸
將2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)苯基)乙酸甲酯(980 mg, 2.16 mmol)溶解在THF(15 mL)中，然後再將氫氧化鋰(182 mg, 4.33 mmol)水溶液加入反應體系中，混合物在60℃下攪拌反應4小時。反應完全後，減壓濃縮去除大部分有機相，加入稀鹽酸將體系pH調至7，析出白色固體，抽濾，水洗濾餅，烘乾，得到2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)苯基)乙酸670 mg。MS m/z(ESI)：440[M+H]+ 。
步驟6 合成N -(2-( 二甲胺基) 乙基)-3-(2-(2- 氟-4-(4- 異丁氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基) 苯基) 乙醯胺基)-5 -( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)苯基)乙酸(670 mg, 1.53 mmol)溶解到DMF 中，然後再加入HATU(638 mg, 1.68 mmol)、DMAP(19 mg, 0.153 mmol)、DIEA(636 mg, 4.58 mmol)、3-胺基-N -(2-(二甲基胺基)乙基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺(508 mg, 1.53 mmol)，混合物在室溫下反應過夜，反應完全後，加入水淬滅反應，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到N -(2-(二甲胺基)乙基)-3-(2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)苯基)乙醯胺基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺380 mg。MS m/z(ESI)：755[M+H]+ 。
步驟7 合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(2- 氟-4-(4- 異丁氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基) 苯基) 乙醯胺基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -(2-(二甲胺基)乙基)-3-(2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)苯基)乙醯胺基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺(380 mg, 0.504 mmol)溶解在DCM(10 mL)中，然後加入TFA(2 mL)，混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM(20 mL*2)萃取，減壓濃縮去除有機相，柱層析得到N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(2-氟-4-(4-異丁氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)乙醯胺基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（化合物 10 ） 190 mg。MS m/z(ESI)：635[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.39 (s, 1H), 10.86 (s, 1H), 8.79 (t,J = 5.7 Hz, 1H), 8.45 (t,J = 2.0 Hz, 1H), 8.26 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 8.03 (t,J = 1.7 Hz, 1H), 7.42 – 7.34 (m, 2H), 7.28 – 7.21 (m, 2H), 5.81 (s, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.77 (d,J = 6.3 Hz, 2H), 3.40 (q,J = 6.4 Hz, 4H), 2.24 (s, 6H), 1.97 (dt,J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 0.92 (d,J = 6.7 Hz, 6H).
實施例11N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(4-(5- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺的合成
Figure 02_image170
步驟1 合成化合物 5- 溴-2- 氯-3- 乙氧基吡啶
將5-溴-2-氯吡啶-3-醇(1 g, 4.83 mmol)、碘乙烷(980 mg, 6.28 mmol)、碘化鉀(80 mg, 0.483 mmol)和碳酸鉀(1.33 g, 9.67 mmol)溶解在DMF(20 mL)中，混合液50℃反應過夜。反應完全後，將反應液倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，乾燥有機相，旋乾，柱層析得到5-溴-2-氯-3-乙氧基吡啶1.1 g。MS m/z(ESI)：236[M+H]+ 。
步驟2 合成5- 溴-3- 乙氧基-2-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶
將5-溴-2-氯-3-乙氧基吡啶(1.21 g, 5.12 mmol)、(4-甲氧基苯基)甲醇(848 mg, 6.14 mmol)、18-冠醚-6 (135 mg, 0.51 mmol)、氫氧化鉀(574 mg, 5.23 mmol)溶解在甲苯(15 mL)中，加熱至120℃反應5 h。反應完全後往體系中加水淬滅，EA萃取，合併有機相，乾燥有機相，旋乾，粗產品用EA/PE=1:3進行矽膠柱層析得到產物5-溴-3-乙氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶1.26 g。MS m/z(ESI)：339.2 [M+H]+ 。
步驟3 合成2-(4-(5- 乙氧基-6-(((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙酸甲酯
將5-溴-3-乙氧基-2-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶(1.26 g, 3.73 mmol)、2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(1.21 g, 4.10 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (270 mg, 0.37 mmol)、Cs2 CO3 (2.43 g, 7.45 mmol)溶解在1,4-二氧六環/H2 O(40 mL, 3:1)的混合溶液中，加熱至85℃回流反應過夜。反應完全後加水淬滅，EA萃取，合併有機相，乾燥旋乾，粗產品用EA/PE=1:2進行矽膠柱層析得到產物2-(4-(5-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸甲酯1.34 g。MS m/z(ESI)：426.5 [M+H]+ 。
步驟4 合成2-(4-(5- 乙氧基-6-(((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙酸
將2-(4-(5-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸甲酯 (1.34 g, 3.15 mmol)、氫氧化鋰(260 mg, 6.30 mmol)溶解在MeOH/H2 O(20 mL, 3:1 )中，室溫反應2 h。監測反應完全後，將體系旋乾，加水洗滌，稀鹽酸調節pH至弱酸性，EA萃取。合併有機相，旋乾。粗產品用EA/PE=1:1進行矽膠柱層析，得到純品產物2-(4-(5-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸1.25 g。MS m/z(ESI)：412.4 [M+H]+ 。
步驟5 ：合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(4-(5- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將2-(4-(5-乙氧基-6-(((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(300 mg, 0.73 mmol)溶於乾燥的DMF(10 mL)中，加入HATU (305 mg, 0.8 mmol)、3-胺基-N -(2-(二甲基胺基)乙基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺 (243 mg, 0.73 mmol)、DMAP(9.0 mg, 0.07 mmol)，最後加入DIPEA (377 mg, 2.92 mmol)，室溫攪拌2h。監測反應完全後，將體系倒入冰水中，EA萃取，合併有機相，旋乾。粗產品用DCM/MeOH= 10:1進行矽膠柱層析，得到純產物N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(4-(5-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺237 mg。MS m/z(ESI)：727.7 [M+H]+ 。
步驟6 ：合成N -(2-( 二甲基胺基) 乙基)-3-(2-(4-(5- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺基)-5-( 五氟硫代) 苯甲醯胺
將N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(4-(5-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺 (191 mg, 0.26 mmol)溶於DCM中，加入TFA(2 mL)，室溫反應30 min。TLC監測反應進程，反應完全後，將體系旋乾，加水，二氯甲烷萃取合併有機相，乾燥旋乾。粗產品用DCM/MeOH=10:1進行矽膠柱層析，得到純產物N -(2-(二甲基胺基)乙基)-3-(2-(4-(5-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺基)-5-(五氟硫代)苯甲醯胺（化合物11 ） 22 mg。MS m/z(ESI)：607.6 [M+H]+ 。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.84 (s, 1H), 10.83 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.47 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 5.4 Hz, 1H), 7.36 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 4.03 (q,J = 7.0 Hz, 2H), 3.78 (s, 2H), 2.63 (m, 2H), 2.31 (s, 4H), 1.48-1.15 (m, 4H).
實施例12 (S )-N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image172
步驟1 合成(S )-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 基)(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在SOCl2 (5 mL)中，加入幾滴DMF，回流反應2小時。反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM(5 mL)中，將混合物滴加到三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)和(S )-N ,N -二甲基吡咯烷基-3-胺(253 mg, 2.22 mmol)的DCM(5 mL)溶液中，在0℃下繼續反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到(S )-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮 470 mg。MS m/z(ESI)：390[M+H]+ 。
步驟2 合成(S )-(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基)(3-( 二甲胺基) 吡咯烷-1- 基) 甲酮
將(S )-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮(470 mg, 1.23 mmol)、FeCl3 (20 mg, 0.12 mmol)、活性炭(100 mg)加入到乙醇(10 mL)中，向體系中緩慢加入水合肼(242 mg, 4.83 mmol)，混合物在80℃下攪拌反應過夜。監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到(S )-(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲胺基)吡咯烷-1-基)甲酮360 mg。MS m/z(ESI)：360[M+H]+ 。
步驟3 合成(S )-N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(412 mg,  1.003 mmol)溶解到DMF中，然後再加入HATU(419 mg, 1.103 mmol)、DMAP(12 mg, 0.100 mmol)、DIEA(388 mg, 3.008 mmol)、(S )-(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲胺基)吡咯烷-1-基)甲酮(360 mg, 1.003 mmol)，混合物在室溫下反應過夜。反應完全後，加入水淬滅反應，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到(S )-N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺310 mg。MS m/z(ESI)：753[M+H]+ 。
步驟4 合成(S )-N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1, 6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將(S )-N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺(310 mg, 0.412 mmol)溶解在DCM(10 mL)中，然後加入TFA(2 mL)，混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM(20 mL*2)萃取，有機相旋乾，柱層析得到(S )-N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1, 6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺（化合物 12 ） 170 mg。MS m/z(ESI)：633[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.40 (s, 1H), 10.91 (s, 1H), 8.36 – 8.30 (m, 1H), 8.02 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 7.29 – 7.21 (m, 2H), 5.82 (s, 1H), 4.05 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.81 (s, 2H), 3.56 – 3.46 (m, 4H), 2.63 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.20 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 2.00 (s, 1H), 1.29 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
實施例13 (R )-N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1, 6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺的合成
Figure 02_image174
步驟1 合成(R )-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 基)(3- 硝基-5-( 五氟硫代) 苯基) 甲酮
將3-硝基-5-(五氟硫代)苯甲酸(500 mg, 1.71 mmol)溶解在SOCl2 (5 mL)中，再加入幾滴DMF，回流反應2小時。反應完全後旋乾反應液，將醯基氯溶於DCM(5 mL)中，將混合物滴加到三乙胺(517 mg, 5.12 mmol)和(R )-N ,N -二甲基吡咯烷基-3-胺(253 mg, 2.22 mmol)的DCM(5 mL)溶液中，在0℃下繼續反應半小時。反應完全後，加入水淬滅反應，分液，有機相濃縮，柱層析得到(R )-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮 560 mg。MS m/z(ESI)：390[M+H]+ 。
步驟2 合成(R )-(3- 胺基-5-( 五氟硫代) 苯基)(3-( 二甲胺基) 吡咯烷-1- 基) 甲酮
將(R )-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-基)(3-硝基-5-(五氟硫代)苯基)甲酮(560 mg, 1.23 mmol)、FeCl3(23 mg, 0.14 mmol)、活性炭(100 mg)加入到乙醇(10 mL)中，然後再慢慢加入水合肼(288 mg, 5.76 mmol)，混合物在80℃下攪拌反應過夜，監測反應完全後，冷卻，抽濾，反應液旋乾，柱層析得到(R )-(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲胺基)吡咯烷-1-基)甲酮420 mg。MS m/z(ESI)：360[M+H]+ 。
步驟3 合成(R )-N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6-((4- 甲氧基苄基) 氧基) 吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙酸(481 mg, 1.17 mmol)溶解到DMF 中，然後再加入HATU(489 mg, 1.29 mmol)、DMAP(14 mg, 0.117 mmol)、DIEA(453 mg, 3.51 mmol)、(R )-(3-胺基-5-(五氟硫代)苯基)(3-(二甲胺基)吡咯烷-1-基)甲酮(420 mg, 1.17 mmol)，混合物在室溫下反應過夜。反應完全後，加入水淬滅反應，然後再用EA(20 mL*2)萃取，有機相乾燥，旋乾，柱層析得到(R )-N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺350 mg。MS m/z(ESI)：753[M+H]+ 。
步驟4 合成(R )-N -(3-(3-( 二甲基胺基) 吡咯烷-1- 羰基)-5-( 五氟硫代) 苯基)-2-(4-(4- 乙氧基-6- 氧代-1,6- 二氫吡啶-3- 基)-2- 氟苯基) 乙醯胺
將(R )-N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-((4-甲氧基苄基)氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺(350 mg, 0.465 mmol)溶解在DCM(10 mL)中，然後加入TFA(2 mL)，混合物室溫下攪拌反應2小時。反應完全後，濃縮反應液，再用碳酸鈉水溶液調至中性，DCM(20 mL*2)萃取，有機相旋乾，柱層析得到(R )-N -(3-(3-(二甲基胺基)吡咯烷-1-羰基)-5-(五氟硫代)苯基)-2-(4-(4-乙氧基-6-氧代-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-氟苯基)乙醯胺（化合物 13 ） 200 mg。MS m/z(ESI)：633[M+H]+ 。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.40 (s, 1H), 10.87 (s, 1H), 8.29 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.41 – 7.33 (m, 2H), 7.30 – 7.21 (m, 2H), 5.82 (s, 1H), 4.05 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.95 – 3.86 (m, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.73 – 3.47 (m, 4H), 2.75 (d, J = 50.1 Hz, 6H), 2.29 (s, 1H), 2.10 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 1.29 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
生物活性測試例1 ：
(a) 體外篩選實驗-HTRF 方法檢測化合物對RET 的抑制活性
方法如下： 1. 1x激酶緩衝液的配製：5x酶緩衝液與蒸餾水以1：4混勻，終濃度是5 mM氯化鎂; 1 mM二硫蘇糖醇。 2. 用100%二甲基亞碸將測試化合物(5 mM儲液)稀釋5倍至1 mM，在384孔稀釋板中以1:3進行等比稀釋10個濃度。 3. 使用Echo 550移液系統將0.2 μL梯度稀釋的化合物加到384孔板中，每個濃度2個複孔，二甲基亞碸終濃度為0.5%(v/v)。測試化合物的梯度濃度為5000、1666.7、555.5、185.18、61.72、20.57、6.858、2.286、0.764、0.254 nM。 4. 用1x激酶緩衝液配製2x RET(0.1 ng/μL)。 5. 在384孔板加入5 μL的2x RET，1000 g離心30 s，室溫孵育10 min。 6. 用1x激酶緩衝液配製2x酪胺酸激酶-生物素標記的底物(2 μM)和腺嘌呤核苷三磷酸(20 μM)混合液。 7. 加入5 μL酪胺酸激酶-生物素標記的底物和腺嘌呤核苷三磷酸混合液以啟動反應。1000 g離心30 s，封板，室溫孵育30 min。 8. 用均相時間分辨螢光技術檢測緩衝液配製2x Sa-XL 665(註：一種試劑)(125 μM)和酪胺酸激酶-抗體-穴狀化合物混合液。 9. 每孔加入10 μL Sa-XL 665和酪胺酸激酶-抗體-穴狀化合物混合液，1000 g離心30 s，室溫孵育1 h。 10. Envision 2104酶標儀615 nm和665 nm讀板，計算比率 (665/615 nm)。 11. 抑制率計算如下：
Figure 02_image176
式中， R0是溶媒空白組的酶標儀板平均比率 R1是測試化合物酶標儀板比率 R2是100%抑制RET酶活性的酶標儀板平均比率 通過將化合物濃度的抑制率值和對數擬合到非線性回歸(劑量反應-可變斜率)中，用GraphPad 6.0軟體計算IC50 。
（b ）體外篩選實驗-HTRF 方法 檢測化合物抑制VEGFR2 活性測試
實驗步驟： 1. 1x激酶緩衝液配製：5x酶緩衝液與蒸餾水以1：4混勻，終濃度是5 mM 氯化鎂; 1 mM二硫蘇糖醇;1 mM氯化錳。 2. 用100%二甲基亞碸將測試化合物(5 mM儲液)稀釋5倍至1 mM，在384孔稀釋板中以1:3進行等比稀釋10個濃度。 3. 使用Echo 550移液系統將0.2 μL梯度稀釋的化合物加到384孔細胞培養板(Corning，3570)中，每個濃度2個複孔，二甲基亞碸終濃度為0.5%(v/v)。測試化合物的梯度濃度為5000、1666.7、555.5、185.18、61.72、20.57、6.858、2.286、0.764、0.254 nM。 4. 用1x激酶緩衝液配製2x VEGFR2(0.02 ng/μL)。 5. 在384孔板加入5 μL的2x VEGFR2，1000 g離心30 s，室溫孵育10 min。 6. 用1x激酶緩衝液配製2x酪胺酸激酶-生物素標記的底物(2 μM)和ATP(8 μM)混合液。 7. 加入5 μL酪胺酸激酶-生物素標記的底物和腺嘌呤核苷三磷酸混合液以啟動反應。1000 g離心30 s，封板，室溫孵育40 min。 8. 用均相時間分辨螢光技術檢測緩衝液配製2x Sa-XL 665(125 μM)和酪胺酸激酶-抗體-穴狀化合物混合液。 9. 每孔加入10μL Sa-XL 665和酪胺酸激酶-抗體-穴狀化合物混合液，1000 g離心30 s，室溫孵育1 h。 10. Envision 2104酶標儀615 nm和665 nm讀板，計算比率(665/615nm)。 11. 抑制率計算如下:
Figure 02_image176
式中， R0是溶媒空白組的酶標儀板平均比率 R1是測試化合物酶標儀板比率 R2是100%抑制RET酶活性的酶標儀板平均比率 通過將化合物濃度的抑制率值和對數擬合到非線性回歸(劑量反應-可變斜率)中，用GraphPad 6.0計算IC50 。
（c ）體外篩選實驗-CellTiter-Glo 發光法檢測化合物抑制Ba/F3-KIF5B-RET 細胞活力測試
實驗步驟： 1. 利用Neon®轉染系統方法將包含人源KIF5B-RET cDNA的哺乳動物細胞表達載體導入Ba/F3細胞，經嘌呤黴素篩選過後存活的選殖株進行細胞生長抑制功能實驗和蛋白免疫印跡法驗證RET穩定高表達的細胞系。 2. 細胞培養於RPMI 1640培養液、10%胎牛血清、1%青黴素-鏈黴素、2 μg/mL嘌呤黴素的培養基中，置於37℃、5%二氧化碳細胞培養箱中培養。 3. 用100%二甲基亞碸將測試化合物(5 mM儲液)稀釋2.5倍至2 mM，在384孔稀釋板中以1:3進行等比稀釋10個濃度。 4. 使用Echo 550移液系統將0.2μL梯度稀釋的化合物加到384孔細胞培養板(Corning，3570)中，每個濃度2個複孔，二甲基亞碸終濃度為0.5%(v/v)。測試化合物的梯度濃度為5000、1666.7、555.5、185.18、61.72、20.57、6.858、2.286、0.764、0.254 nM。 5. 每孔加入40 μL含800個Ba/F3-KIF5B-RET細胞懸液，於5%二氧化碳細胞培養箱培養72 h。 6. 按每孔20 μL Cell Titer-Glo試劑加入細胞培養板，震盪混勻2 min以裂解細胞，然後室溫孵育30 min，用Envision 2104酶標儀讀取螢光訊號值。 7. 數據由XLfit 5.0按4參數公式： Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50 -X)*HillSlope))擬合計算IC50 值。
（d ）體外篩選實驗-CellTiter-Glo 發光法檢測化合物抑制TT （人甲狀腺髓樣癌細胞）細胞活力
實驗步驟： 1. 細胞培養於384孔細胞培養板(Corning, 3570)中，含F12K培養基、20%胎牛血清、1%青黴素-鏈黴素的培養基中，置於37℃、5% CO2 細胞培養箱中培養過夜。 2. 用100% DMSO將測試化合物（5 mM儲液）稀釋2.5倍至2 mM，在384孔稀釋板中以1:3進行等比稀釋10個濃度。 3. 使用Echo 550將0.2 μL梯度稀釋的化合物加到384孔細胞，每個濃度2個複孔，DMSO終濃度為0.5%（v/v）。測試化合物的梯度濃度為1000，333.33，111.11，37.04，12.35，4.12，1.37，0.46，0.15，0.05 nM。於5%二氧化碳細胞培養箱培養72 h。 4. 按每孔30 μL Cell Titer-Glo Reagent加入細胞培養板，震盪混勻2 min以裂解細胞，然後室溫避光孵育30 min，用Envision 2104讀取luminescence訊號值。 5. 數據由XLfit 5.0按4參數公式：Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50 -X)*HillSlope))擬合計算IC50 值。
測試結果如表1所示 【表1】
化合物 RET激酶活性(nM) Ba/F3-KIF5B-RET 細胞活性(nM) TT細胞活性(nM) VEGFR2激酶活性(nM)
BOS 589 0.23 556.3 25.04 92.97
化合物1 0.26 89.28 2.45 14.65
化合物2 2.12 660.9 - -
化合物3 0.67 592.8 - -
化合物4 0.935 - - -
化合物5 2.729 - - -
化合物6 6.355 - - -
化合物7 1.295 - - -
化合物8 2.193 - - -
化合物9 1.563 - - -
化合物10 0.467 - - -
化合物11 0.529 - - -
化合物12 1.575 - - -
化合物13 1.269 - - -
‘-’表示未提供。
(e) 體外篩選實驗-HTRF 方法檢測化合物對TRK 的抑制活性
方法如下： 1. 1x激酶緩衝液的配製：5x酶緩衝液與蒸餾水以1：4混勻，終濃度是5 mM氯化鎂; 1 mM二硫蘇糖醇。 2. 用100%二甲基亞碸將測試化合物(5 mM儲液)稀釋5倍至1 mM，在384孔稀釋板中以1:3進行等比稀釋10個濃度。 3. 使用Echo 550移液系統將0.2 μL梯度稀釋的化合物加到384孔板中，每個濃度2個複孔，二甲基亞碸終濃度為0.5%(v/v)。測試化合物的梯度濃度為5000、1666.7、555.5、185.18、61.72、20.57、6.858、2.286、0.764、0.254 nM。 4. 用1x激酶緩衝液配製2x TRK A/TRK B/TRK C/TRK A G595R/TRK A G667C。 5. 在384孔板加入5 μL的2x TRK A/TRK B/TRK C/TRK A G595R/TRK A G667C，1000 g離心30 s，室溫孵育10 min。 6. 用1x激酶緩衝液配製2x蘇胺酸蛋白磷酸酶-生物素標記的底物和腺嘌呤核苷三磷酸混合液。 7. 加入5 μL酪胺酸激酶-生物素標記的底物和腺嘌呤核苷三磷酸混合液以啟動反應。1000 g離心30 s，封板，室溫孵育40 min。 8. 用均相時間分辨螢光技術檢測緩衝液配製4x Sa-XL 665(註：一種試劑)和酪胺酸激酶-抗體-穴狀化合物混合液。 9. 每孔加入5 μL Sa-XL 665和5 μL蘇胺酸蛋白磷酸酶-抗體-穴狀化合物混合液，1000 g離心30 s，室溫孵育1 h。 10. Envision 2104酶標儀615 nm和665 nm讀板，計算比率 (665/615 nm)。 11. 抑制率計算如下：
Figure 02_image176
式中， R0是溶媒空白組的酶標儀板平均比率 R1是測試化合物酶標儀板比率 R2是100%抑制RET酶活性的酶標儀板平均比率 通過將化合物濃度的抑制率值和對數擬合到非線性回歸(劑量反應-可變斜率)中，用GraphPad 6.0軟體計算IC50 。 數據由XLfit 5.0按4參數公式：Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50 -X)*HillSlope))擬合計算IC50 值.
測試結果如表2所示: 【表2】
化合物 TRK A (nM) TRK B (nM) TRK C (nM) TRK A G595R (nM) TRK A G667C (nM)
LOXO-195 0.31 0.39 1.61 0.77 14.28
BOS 589 10.73 9.99 16.47 51.31 0.42
GSK-3179106 620.0 61.53 78.50 2099 0.686
化合物1 1.37 0.77 2.10 2.79 0.26
化合物2 - - - - -
化合物3 - - - - -
化合物4 24.38 15.40 12.96 111.3 0.926
化合物5 167.2 57.26 66.50 874.5 1.073
化合物6 332.6 180.9 181.8 ＞2000 2.623
化合物7 20.14 9.476 6.282 84.58 0.979
化合物8 152.9 57.08 64.63 991.1 1.155
化合物9 28.18 17.66 13.80 122.0 0.654
化合物10 1.375 0.761 0.452 2.511 0.466
化合物11 1.761 0.858 0.637 5.765 0.538
化合物12 24.23 18.19 10.23 109.4 1.839
化合物13 26.88 5.854 8.018 83.20 1.104
‘-’表示未提供。
從上述數據可以看出，本發明所列舉的化合物對Trk A, Trk B, Trk C,及其部分突變株具有良好的抑制活性。
（f ）體內藥效評估- 化合物在遙測腸易激綜合症(IBS) 模型中的效果
實驗動物：正常SD大鼠，280-350 g；
受測化合物：化合物1（10 mg/kg）、BOS-589（10 mg/kg）；
實驗步驟： 1. 50 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉動物，腹外斜肌埋置DSI遙測植入子，記錄EMG訊號； 2. 定義給藥當天為實驗第1天（D1），D1-D3，每天灌胃給藥2次；D3.5，上午給藥及直腸給予醋酸刺激1小時後進行直腸擴張實驗，氣囊壓力設置為60 mmHg，記錄EMG訊號，檢測持續10分鐘。
數據分析：原始數據由DSI系統Ponemah軟體採集，用NeuroScore軟體和Spike2分析。計算所記錄EMG訊號的，每個壓力值統計10分鐘。實驗數據由平均值（Mean）表示，採用t-檢驗進行統計分析，p ＜ 0.05表示有統計學意義，p ＜ 0.01表示有顯著性差異，p ＜ 0.001表示有極顯著性差異。
實驗結果：
組別 Burst number (0 mm Hg) Burst number (60 mm Hg)
陰性對照組 33 60
BOS-589 （10 mg/kg） 19 (p＜0.05) 41 (p＜0.05)
化合物1 （10 mg/kg） 12 (p＜0.01) 32 (p＜0.01)
本實驗結果表明，在給藥後進行直腸擴張實驗，化合物1（10 mg/kg）組腹外斜肌EMG訊號burst number均顯著減少。說明化合物1對醋酸誘導的大鼠內臟敏感模型有一定療效，且同劑量下化合物1的治療效果比BOS-589更顯著。
BOS 589的結構如下：
Figure 02_image178
。
LOXO-195的結構如下：
Figure 02_image180
。
GSK-3179106的結構如下：
Figure 02_image181
。
綜上，本發明的化合物具有較好的RET激酶抑制活性和TRK激酶抑制活性；發明人通過研究也意外的發現BOS 589、GSK-3179106同樣具備一定的TRK激酶抑制活性。
與化合物BOS 589相比，本發明的化合物的Ba/F3-KIF5B-RET細胞活性提高6倍，TT細胞活性提升12倍；與LOXO-195相比，本發明的化合物對於突變型TRK激酶（如TRK A G595R/TRK A G667C）有更強的抑制活性；本發明的化合物在IBS模型（醋酸誘導的腸超敏模型）中的治療效果顯著優於相同劑量的BOS-589（部分化合物的實驗結果未示出）。本發明請求保護的化合物的上述意料不到的技術效果，發明人推測可能原因是化合物中的五氟化硫官能團使其具有獨特的物理化學性質與三維空間結構，能更好的結合RET/TRK蛋白的相應口袋，使得本發明化合物的具有更好的RET/TRK激酶抑制活性。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。
Figure 110127160-A0101-11-0001-1

Claims (18)

  1. 一種式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥；
    Figure 03_image001
    式中， 各R1 獨立地為H、鹵素或選自取代或未取代的羥基、胺基、C1-C6烷基、R'-O-(
    Figure 03_image004
    )、C3-C6環烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、R'NH-(
    Figure 03_image006
    )、R'R"N-(
    Figure 03_image008
    )； R'、R"各自獨立地選自取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-6員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、羥基、C1-C6烷基； 或當兩個R1 連接至環上相鄰的兩個原子時，其可以稠合形成取代或未取代的C4-C8環烯基、4-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基； 各R2 獨立地為H、鹵素、氰基、硝基或選自取代或未取代的羥基、胺基、R8 C(O)O-(
    Figure 03_image010
    )、R8 C(O)-(
    Figure 03_image012
    )、R8 S(O)2 (
    Figure 03_image014
    )、C1-C6烷基、C3-C6環烷基； 或當兩個R2 連接至環上相鄰的兩個原子時，其可以稠合形成取代或未取代的C4-C8環烯基、4-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基； 各Rb 獨立地為鹵素、氰基、硝基或選自取代或未取代的胺基、R8 C(O)O-(
    Figure 03_image010
    )、R8 C(O)-(
    Figure 03_image012
    )、R8 S(O)2 (
    Figure 03_image014
    )、C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、-OR6 (
    Figure 03_image017
    )、-CONR7 R'7 (
    Figure 03_image019
    )，其中，所述取代是指被一個或多個Ra 取代： 各Ra 獨立地選自鹵素、氰基、羥基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、-NR7 R'7 (
    Figure 03_image021
    )； R6 、R7 和R'7 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基； R5 為-H、氰基、鹵素、硝基或選自取代或未取代的醛基、R8 C(O)-(
    Figure 03_image012
    )、R8 S(O)2 (
    Figure 03_image014
    )、胺基、羥基、C1-C6烷基、3-8員雜烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-8員雜環基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(L1 )p -OH、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、-C(O)OR8 (
    Figure 03_image023
    )、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
    Figure 03_image025
    )、 -C(O)-N(R10 )(R'10 )(
    Figure 03_image027
    )、 -C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
    Figure 03_image029
    )； 或者Rb 和R5 位於相鄰的兩個C原子時，與其連接的C原子稠合形成取代或未取代的C4-C8環烯基、4-8員環雜基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基； R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地為H或選自取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、羥基、C1-C6烷基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素、C1-C6烷基； 或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基； 或者R'11 和R"11 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基； R9 和R'9 各自獨立地為H、氰基或選自取代或未取代的醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
    Figure 03_image031
    )、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基； 或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基； 如無特別說明，所述取代是指被一個或多個R取代； 各R獨立地選自鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基； 各L1 和L2 獨立地選自：-CRf Rg -(
    Figure 03_image033
    )、CO、SO2 ；其中，Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基； r為1、2或3； m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6； n為0、1或2； n'為0、1、2或3； n"為0、1、2或3。
  2. 如請求項1所述的式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，其特徵在於，其具有式I'所示的結構：
    Figure 03_image047
    式中， R1 選自H、鹵素、羥基、胺基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基、(C1-C6烷基)NH-、(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)N-； 各R2 獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基； R3 和R4 各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基、-OR6 (
    Figure 03_image049
    )、-CONR7 R'7 (
    Figure 03_image050
    )，其中，所述C1-C6烷基任選地被一個或多個選自下組的基團取代氰基、羥基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、-NR7 R'7 (
    Figure 03_image051
    )，所述C6-C10芳基或者5-10員雜芳基任選地被一個或多個選自下組的基團取代鹵素、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基； R6 、R7 和R'7 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C3-C6環烷基、鹵代C3-C6環烷基、3-8員環雜烷基； R5 選自：氫、氰基、醛基、R8 C(O)-(
    Figure 03_image012
    )、胺基、羥基、鹵素、C1-C6烷基、3-8員雜烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6亞烷基-OH、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-C(O)OR8 (
    Figure 03_image023
    )、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
    Figure 03_image025
    )、-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
    Figure 03_image027
    )、 -C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
    Figure 03_image029
    )； R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、3-6員環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基； 或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、-CHO、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素或C1-C6烷基； R9 和R'9 各自獨立地選自氰基、醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
    Figure 03_image031
    )、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基； 或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基； L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -(
    Figure 03_image033
    )，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基； n為0、1或2； m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6。
  3. 如請求項2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，其特徵在於，R1 選自：C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環烷氧基、鹵代C3-C6環烷氧基； R5 選自氰基、醛基、R8 C(O)-(
    Figure 03_image012
    )、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、3-8員雜烷基、-C1-C6亞烷基-OH、C2-C6烯基、C2-C6炔基、-(L1 )p -(C1-C6烷氧基)、-C(O)OR8 (
    Figure 03_image023
    )、-(L1 )p -N(R9 )(R'9 )(
    Figure 03_image025
    )、-C(O)-N(R10 )(R'10 )(
    Figure 03_image027
    )、 -C(O)-N(R11 )-(L2 )m -N(R'11 )(R"11 )(
    Figure 03_image029
    )； R8 、R10 、R'10 、R11 、R'11 和R"11 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基、C6-C10芳基、5-10員雜芳基； 或者R10 和R'10 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、N(R'13 )(R"13 )；R'13 和R"13 各自獨立選自H、鹵素、C1-C6烷基； R9 和R'9 各自獨立地選自氰基、醛基、C1-C6烷基、-NR12 R'12 (
    Figure 03_image053
    )、羥基、3-8員雜烷基、3-8員雜環基、5-10雜芳基，其中，R12 和R'12 各自獨立地選自：C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6環烷基、C3-C6環雜烷基； 或者R9 和R'9 與其連接的N原子一起形成取代或未取代的3-8員雜環基，其中，所述取代是指被一個或多個選自下組的基團取代：鹵素、氰基、醛基、羥基、胺基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基； L1 和L2 各自獨立地為-CRf Rg -(
    Figure 03_image033
    )，其中，所述Rf 和Rg 各自獨立地選自H、C1-C6烷基、鹵素、氰基、羥基、胺基； m和p各自獨立地為1、2、3、4、5或6； 各R2 獨立地選自鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基； R3 和R4 各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基。
  4. 如請求項1或2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，其特徵在於，所述化合物選自
    Figure 03_image062
    Figure 03_image064
    Figure 03_image066
    Figure 03_image068
    Figure 03_image070
    Figure 03_image072
    Figure 03_image074
    Figure 03_image076
    。
  5. 一種藥物組合物，其特徵在於，其包含如請求項1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥；和藥用載體或稀釋劑。
  6. 如請求項5所述的藥物組合物，其特徵在於，還包括一種或多種選自下組的治療劑：胺基水楊酸製劑（如柳氮磺吡啶）、糖皮質激素（如氫化可的松、***等）、PD-1抑制劑(如納武單抗、派姆單抗、JS-001、SHR-120、BGB-A317、IBI-308、GLS-010、GB-226、STW204、HX008、HLX10、BAT1306、AK105、LZM 009或上述藥物的生物類似藥等)、PD-L1抑制劑(如德瓦魯單抗、阿特珠單抗、CS1001、KN035、HLX20、SHR-1316、BGB-A333、JS003、CS1003、KL-A167、F 520、GR1405、MSB2311或上述藥物的生物類似藥等)、CD20抗體(如利妥昔單抗、奧濱尤妥珠單抗、奧法木單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗等)、CD47抗體(如Hu5F9-G4、CC-90002、TTI-621、TTI-622、OSE-172、SRF-231、ALX-148、NI-1701、SHR-1603、IBI188、IMM01)、ALK抑制劑(如色瑞替尼、艾樂替尼、布加替尼、勞拉替尼、奧卡替尼)、PI3K抑制劑(如艾代拉裡斯、Dactolisib、Taselisib、Buparlisib等)、BTK抑制劑(如依魯替尼、Tirabrutinib、Acalabrutinib等)、EGFR抑制劑(如阿法替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、達克替尼、埃克替尼、卡奈替尼等)、VEGFR抑制劑(如索拉非尼、帕唑帕尼、瑞伐替尼、卡博替尼、舒尼替尼、多納非尼等)、HDAC抑制劑(如Givinostat、Droxinostat、恩替諾特、達西司特、泰克地那林等)、CDK抑制劑(如帕博西尼、瑞博西尼、Abemaciclib、Lerociclib等)、MEK抑制劑(如司美替尼(AZD6244)、曲美替尼(GSK1120212)、PD0325901、U0126、AS-703026、PD184352(CI-1040)等)、Akt抑制劑(如MK-2206、Ipatasertib、Capivasertib、Afuresertib、Uprosertib等)、mTOR抑制劑(如Vistusertib等)、SHP2抑制劑(如RMC-4630、JAB-3068、TNO155等)、IGF-1R抑制劑(如Ceritinib、奧卡替尼、linsitinib、BMS-754807、GSK1838705A等)。
  7. 一種請求項1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，或請求項5所述的藥物組合物在製備治療腸易激綜合症、其他腸道相關疾病和/或癌症的藥物中的用途。
  8. 如請求項7所述用途，其特徵在於，所述腸易激綜合症為腹瀉主導型腸易激綜合症、便秘主導型腸易激綜合症、混合型腸易激綜合症、未定型腸易激綜合症；所述其他腸道相關疾病為功能性胃氣脹、功能性便秘、非特異性功能性腸紊亂、功能性腹痛綜合症、慢性特發性便秘、功能性胃十二指腸病。
  9. 如請求項7所述用途，其特徵在於，所述癌症為膀胱癌、卵巢癌、腺癌、胃癌、胰腺癌、***癌、結腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、神經細胞瘤、直腸癌、家族性腺瘤性息肉性癌、遺傳性非息肉性結直腸癌、食管癌、唇癌、喉癌、下嚥癌、舌癌、唾液腺癌、甲狀腺髓樣癌、乳頭狀甲狀腺癌、腎癌、腎實質癌、子宮頸癌、子宮體癌、子宮內膜癌、絨毛膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病、肝細胞癌、膽囊癌、支氣管癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌或多發性骨髓瘤。
  10. 如請求項7所述用途，其特徵在於，所述癌症為非小細胞肺癌、膠質瘤、多發性骨髓瘤、肝膽管型肝癌、甲狀腺髓樣癌、甲狀腺乳頭狀腫瘤、神經母細胞瘤、結腸癌、頭頸部鱗狀細胞癌、胰腺癌、肉瘤、黑色素瘤、纖維肉瘤、胰腺腫瘤、軟組織肉瘤、高度實性腫瘤、乳腺腫瘤或膽管癌。
  11. 一種請求項1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備治療神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病、炎症性腸病、克氏錐蟲感染或與骨重建調節失衡有關的疾病的藥物中的用途。
  12. 一種GSK-3179106和/或BOS-589，或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備治療神經退化性疾病、慢性疼痛、急性疼痛、炎性疾病、炎症性腸病、克氏錐蟲感染或與骨重建調節失衡有關的疾病的藥物中的用途；
    Figure 03_image078
    。
  13. 一種如請求項1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，或請求項5所述的藥物組合物在製備用於抑制細胞或受試者中的RET激酶和/或TRK激酶活性的藥物中的用途。
  14. 一種GSK-3179106和/或BOS-589，或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥在製備用於抑制細胞或受試者中的RET激酶和/或TRK激酶活性的藥物中的用途。
  15. 一種治療RET和/或TRK相關疾病的方法，其特徵在於，所述方法包括步驟：給予被鑒定或診斷為具有RET和/或TRK相關疾病的受試者治療有效量的如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，如請求項5所述的藥物組合物，GSK-3179106或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥，或BOS-589或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥。
  16. 一種用於抑制細胞或受試者中的RET和/或TRK激酶活性的方法，其特徵在於，所述方法包括使所述細胞接觸或向所述受試者施用請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥、如請求項5所述的藥物組合物、GSK-3179106或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥、或BOS-589或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥的步驟。
  17. 一種請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、同位素化合物或前藥的製備方法，其特徵在於，包括步驟：
    Figure 03_image080
    M               N                               A 1）將式M化合物與式N化合物反應，得到式A化合物；
    Figure 03_image082
    A                             I 2）將式A化合物與酸反應，得到式I化合物； 其中，Y選自OH、鹵素； 其他各基團如請求項1所定義。
  18. 一種製備式1-2化合物的方法，其特徵在於，包括步驟：
    Figure 03_image084
    化合物1-1在濃硫酸條件下，慢慢滴加濃硝酸，或者發煙硝酸進行硝化反應，得到化合物1-2，Rb 、n"如請求項1所定義。
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