TW202204387A - 新穎免疫刺激ｉｌ－２類似物 - Google Patents

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金眞英
朴褚龍
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Abstract

本發明係有關介白素-2α受體中的改變及對於介白素-2β受體具有增加的結合親和力的介白素-2類似物。

Description

新穎免疫刺激IL-2類似物
本發明係有關新穎的介白素(interleukin)-2類似物。
介白素-2為一種具有約15kDa之分子量的重要免疫刺激劑，其係由總共133個胺基酸殘基所組成，且活化免疫系統之各種細胞，包括T細胞和B細胞。介白素-2作為免疫刺激劑的高效力可用於治療各種免疫相關疾病，包括癌症和後天免疫缺乏症候群(AIDS)(韓國專利公開案第10-2017-0070091號)。目前，介白素-2(商標名：Proleukin)為一種FDA核准之用於治療轉移性腎細胞癌(metastatic renal cell carcinoma)和轉移性黑色素瘤(metastatic melanoma)的藥物。然而，由於與高劑量的介白素-2治療相關的嚴重毒性，適用的患者受到限制。事實上，此治療僅適用於少數合格的患者。與介白素-2相關的毒性包括嚴重發燒、噁心、嘔吐、血管滲漏、嚴重低血壓、肺水腫及血管滲漏症候群，這會引起肝損傷。
介白素-2受體具有三種受體次單元。該次單元係由α鏈(IL-2Rα,CD25)、β鏈(IL-2Rβ和CD122)和γ鏈(IL-2Rγ和CD132)所組成。藉由結合不同組合的受體次單元，介白素-2可表現各種功能。單一介白素-2 α受體係稱為低親和力介白素-2受體，且其不涉及傳訊。介白素-2 β和介白素-2 γ受體的複合物 以中等親和力結合至介白素-2。介白素-2 α、β和γ受體的複合物以高親和力結合至介白素-2。介白素-2 β和γ受體的複合物為經由多種傳訊途徑中的激酶活化之有效訊號轉換所必需的。特別而言，介白素-2 β和γ結合受體於CD8+細胞和自然殺傷(NK)細胞中很重要。此外，高親和力介白素-2 α、β和γ受體的複合物通常係見於CD4+T調節細胞(Treg)，且最近亦見於活化的T細胞。由於介白素-2 β受體係分佈於CD8+細胞或自然殺傷細胞(NK細胞)且參與體內的免疫反應，業已進行研究以藉由增加β受體之免疫活化活性而開發治療劑。
同時，儘管介白素-2具有作為多種免疫相關疾病的治療劑之潛力，仍沒有多少藥物可以降低其劑量同時降低毒性和副作用，因此，對於新的和改良的藥物之研究需求增加。
本發明之一個目的係提供一種介白素-2類似物。
本發明之另一目的係提供一種編碼該介白素-2類似物之分離核酸；包括該核酸之重組表達載體；以及包括該載體之轉形體。
本發明之又一目的係提供一種製備該介白素-2類似物的方法。
本發明之再一目的係提供一種增加對於介白素-2 β受體的結合親和力之方法，包括修飾天然介白素-2中的一個或多個胺基酸。
本發明之一態樣係提供一種新穎的介白素-2類似物(或IL-2類似物)。該介白素-2類似物為一種相較於天然介白素-2或者阿地介白素(aldesleukin， 亦即一種介白素-2類似物)，對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力之介白素-2類似物。於一具體實施態樣中，該介白素-2類似物可包括天然介白素-2中之一個或多個胺基酸經修飾的序列。
於另一具體實施態樣中，該介白素-2類似物之特徵在於該介白素-2類似物包括序列，其中，對應於天然介白素-2的位置1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、126和133之一個或多個胺基酸經修飾。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，相較於天然介白素-2或阿地介白素，對於介白素-2 α受體具有改變的結合親和力，且對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，對應於位置113的胺基酸係添加一個或多個胺基酸。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於其為天然介白素-2，其中，於位置1的胺基酸經移除且於位置125的胺基酸經不同的胺基酸取代。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，進一步具有1至10個胺基酸取代。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，位置18、19、20、22、38、42、43、45、61、68、69、74、80、81、84、85、86、88、89、91、92、94和96之一個或多個胺基酸進一步經不同胺基酸取代。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，位置18、19、22、38、42、43、45、61、68、74、80、81、84、85、86、88、91、92、94和96之一個或多個胺基酸進一步經不同胺基酸取代。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於其為以下類似物之任一者：
(a)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和32之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(b)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和35之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(c)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和38之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(d)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(e)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和43之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(f)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和48之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(g)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和49之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(h)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和76之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(i)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(j)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和87之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(k)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(l)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和80之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(m)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(n)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、19、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(o)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、12、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(p)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和61之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(q)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(r)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和88之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(s)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和89之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(t)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和91之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(u)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和94之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(v)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和126之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(w)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(x)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(y)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(z)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、61、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aa)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ab)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ac)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ad)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、20、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ae)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(af)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ag)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ah)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、88和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ai)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aj)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、85和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ak)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(al)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(am)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(an)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ao)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ap)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、45、80、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aq)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ar)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(as)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(at)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、69、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(au)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(av)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aw)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ax)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ay)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(az)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、69、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ba)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、84、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bb)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bc)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、19、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bd)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(be)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bf)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bg)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bh)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bi)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bj)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bk)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bl)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、43、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bm)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、91、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；以及
(bn)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、74、80、81、82、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，包括選自由下列胺基酸取代所組成群組之任一胺基酸取代：
(a)於位置12的胺基酸經纈胺酸(valine)或***酸(phenylalanine)取代之取代；
(b)於位置18的胺基酸經精胺酸(arginine)取代之取代；
(c)於位置19的胺基酸經酪胺酸(tyrosine)、纈胺酸、***酸或精胺酸取代之取代；
(d)於位置20的胺基酸經纈胺酸或***酸取代之取代；
(e)於位置22的胺基酸經麩胺酸(glutamic acid)取代之取代；
(f)於位置32的胺基酸經半胱胺酸(cysteine)取代之取代；
(g)於位置35的胺基酸經半胱胺酸或麩胺酸取代之取代；
(h)於位置38的胺基酸經丙胺酸(alanine)或天門冬胺酸(aspartic acid)取代之取代；
(i)於位置42的胺基酸經離胺酸(lysine)、丙胺酸或色胺酸(tryptophan)取代之取代；
(j)於位置43的胺基酸經半胱胺酸、麩胺酸或麩醯胺酸(glutamine)取代之取代；
(k)於位置45的胺基酸經丙胺酸取代之取代；
(l)於位置48的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(m)於位置49的胺基酸半胱胺酸經取代之取代；
(n)於位置61的胺基酸經麩醯胺酸、精胺酸或天門冬胺酸取代之取代；
(o)於位置68的胺基酸經天門冬胺酸或麩醯胺酸取代之取代；
(p)於位置69的胺基酸經甘胺酸(glycine)取代之取代；
(q)於位置74的胺基酸經組胺酸(histidine)或丙胺酸取代之取代；
(r)於位置76的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(s)於位置80的胺基酸經***酸、酪胺酸、纈胺酸、天門冬胺酸或色胺酸取代之取代；
(t)於位置81的胺基酸經天門冬胺酸、麩胺酸或天門冬醯胺酸(asparagine)取代之取代；
(u)於位置82的胺基酸經甘胺酸或纈胺酸取代之取代；
(v)於位置84的胺基酸經麩胺酸、纈胺酸或***酸取代之取代；
(w)於位置85的胺基酸經纈胺酸、丙胺酸、甘胺酸、色胺酸、酪胺酸、蘇胺酸(threonine)、異白胺酸(isoleucine)、麩胺酸或***酸取代之取代；
(x)於位置86的胺基酸經纈胺酸、丙胺酸、甘胺酸或白胺酸(leucine)取代之取代；
(y)於位置87的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(z)於位置88的胺基酸經麩醯胺酸、纈胺酸或***酸取代之取代；
(aa)於位置89的胺基酸經***酸取代之取代；
(ab)於位置91的胺基酸經蘇胺酸、***酸或麩胺酸取代之取代；
(ac)於位置92的胺基酸經***酸、白胺酸、酪胺酸或色胺酸取代之取代；
(ad)於位置95的胺基酸經天門冬胺酸取代之取代；
(ae)於位置96的胺基酸經***酸、纈胺酸或異白胺酸取代之取代；以及
(af)於位置126的胺基酸經蘇胺酸取代之取代。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，其為選自由SEQ ID NOS：3至106所組成之群組。
實施本發明之另一態樣係提供一種編碼該介白素-2類似物之分離核酸；包括該核酸之重組表達載體；以及包括該載體之轉形體。
實施本發明之又一態樣係提供一種製備該介白素-2類似物之方法。
實施本發明之再一態樣係提供一種增加對於介白素-2 β受體的結合親和力之方法，包括修飾天然介白素-2中的一個或多個胺基酸，其中，該修飾可為選自由對應於位置1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、126和133的胺基酸所組成群組的一個或多個胺基酸的修飾。
實施本發明之另一態樣係提供一種介白素-2類似物，包括選自由SEQ IDS：3至106的胺基酸序列所組成群組之任一序列。
實施本發明之又一態樣係提供一種介白素-2類似物，包括由下列通式1所表示之胺基酸序列：
[通式1]
Figure 110111922-A0202-12-0015-2
S-N-I-N-X91-X92-V-X94-E-X96-K-G-S-E-T-T-F-M-C-E-Y-A-D-E-T-A-T-I-V-E-F-L-N-R-W-I-T-F-S-Q-S-I-I-S-T-L-T(通式1，SEQ ID NO：212),
其中，於上述通式1中，
X1為缺失；
X18為白胺酸(L)或精胺酸(R)；
X19為白胺酸(L)或酪胺酸(Y)；
X22為麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
X38為丙胺酸(A)、天門冬胺酸(D)或精胺酸(R)；
X42為丙胺酸(A)、***酸(F)、離胺酸(K)或色胺酸(W)；
X43為麩胺酸(E)、離胺酸(K)或麩醯胺酸(Q)；
X45為丙胺酸(A)或酪胺酸(Y)；
X61為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)、麩醯胺酸(Q)或精胺酸(R)；
X68為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X74為組胺酸(H)或麩醯胺酸(Q)；
X80為***酸(F)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)或酪胺酸(Y)；
X81為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)或精胺酸(R)；
X84為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X85為丙胺酸(A)、麩胺酸(E)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、色胺 酸(W)或酪胺酸(Y)；
X86為丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、異白胺酸(I)或纈胺酸(V)；
X91為蘇胺酸(T)或纈胺酸(V)；
X92為***酸(F)、異白胺酸(I)或酪胺酸(Y)；
X94為***酸(F)或白胺酸(L)；以及
X96為***酸(F)或白胺酸(L)。
於一具體實施態樣中，該介白素-2類似物的特徵在於，其包括選自由SEQ ID NOS：10、13、14、15、16、17、20、21、22、32、35、36、42、53、54、56、58、59、60、62、71、72、74、75、76、77、78、85、87、89、91、92、93、94、95、98、99、100、101、103、104、105和106之胺基酸序列所組成群組的任一序列。
於另一具體實施態樣中，該介白素-2類似物的特徵在於，其包括上述通式1，
X43為離胺酸(K)；
X45為酪胺酸(Y)；
X61為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
X68為麩胺酸(E)；
X74為麩醯胺酸(Q)；
X80為***酸(F)或白胺酸(L)；
X85為白胺酸(L)、纈胺酸(V)或酪胺酸(Y)；
X86為異白胺酸(I)或纈胺酸(V)；以及
X92為***酸(F)或異白胺酸(I)。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，其包括選自由SEQ ID NOS：10、13、14、16、17、20、21、22、32、35、36、42、53、54、87、89、91、92、93、94、98、99、100、101、103、104和105之胺基酸序列所組成群組的任一序列。
根據任一前述具體實施態樣之該介白素-2類似物的特徵在於，其進一步包括於其C-端之一個或多個胺基酸。
實施本發明之又一態樣係提供一種介白素-2類似物，包括由下列通式2所表示之胺基酸序列：
[通式2]
Figure 110111922-A0202-12-0018-4
Figure 110111922-A0202-12-0018-55
(通式2，SEQ ID NO：213)，
其中，於上述通式2中，
X1為缺失，
X18為白胺酸(L)或精胺酸(R)；
X22為麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
X38為丙胺酸(A)或精胺酸(R)；
X42為***酸(F)或離胺酸(K)；
X61為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X68為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X81為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X85為白胺酸(L)或纈胺酸(V)；以及
X86為異白胺酸(I)或纈胺酸(V)。
於一具體實施態樣中，該介白素-2類似物的特徵在於其包括選自由SEQ ID NOS：22、42、53、87、105和106之胺基酸序列所組成群組之任一序列。
於另一具體實施態樣中，該介白素-2類似物的特徵在於其進一步包括於其C-端之一個或多個胺基酸。
根據本發明之介白素-2類似物係為於體內對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力之類似物，且可用於各種目的。
圖1係示出證實介白素-2類似物對於介白素-2 α受體之結合親和力的結果，其中，(A)代表介白素-2 #86，(B)代表介白素-2 #104，以及(C)代表介白素-2 #105。
圖2係示出證實介白素-2類似物對於介白素-2 β受體之結合親和力的結果，其中，(A)代表介白素-2 #86，(B)代表介白素-2 #104，以及(C)代表介白素-2 #105。
實施本發明之細節將描述於下文中。同時，本發明所揭示之各個說明及實施態樣適用於其它說明及實施態樣。換言之，本發明所揭示各種不同元件之所有組合均落入本發明所揭示的範圍中。此外，本發明之範圍不應受限於以下具體說明。
於本發明之說明書全文中，使用常規的胺基酸單字母和三字母代碼。此外，本文所提及之胺基酸係根據IUPAC-IUB的命名規則縮寫如下：
Figure 110111922-A0202-12-0020-5
本發明之另一態樣係提供一種介白素-2類似物。本發明之介白素-2類似物的特徵在於其對於介白素-2受體之結合親和力經改變，且特別是其對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力。具體而言，本發明之該介白素-2類似物可為對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力者，以及更具體為相較於天然介白素-2或已知的阿地介白素，對於介白素-2 α受體具有改變的(增加或減少)結合親和力者。
如本文中所用，術語「介白素-2(IL-2)」係指一種於體內免疫系統中傳遞訊號之細胞激素。該介白素-2通常以一種重要的免疫刺激劑為名，其具有約15kDa之尺寸。
如本文中所用，術語「介白素-2類似物」係指天然介白素-2的序列中之一個或多個胺基酸經修飾。尤其於本發明中，相較於天然介白素-2，該介白素-2類似物可為對於介白素-2 β受體具有減少或增加的結合親和力者，其中，於天然介白素-2中的胺基酸經修飾。本發明之介白素類似物可為非自然發生者。
該天然介白素-2可為人類介白素-2，且其序列可自已知資料庫等得到。具體而言，該天然介白素-2可具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列，但不以此為限。
於本發明中，「天然介白素-2可具有SEQ ID NO：1之胺基酸序列」意指不僅與SEQ ID NO：1相同的序列，而且與SEQ ID NO：1具有80%或更高、85%或更高、90%或更高、91%或更高、92%或更高、93%或更高、94%或更高、95%或更高、96%或更高、97%或更高、98%或更高以及99%或更高之同源性的序列屬於本發明之天然介白素-2的範圍；以及基於SEQ ID NO：1進行比對，當與SEQ ID NO：1具有80%或更高、85%或更高、90%或更高、91%或更高、92%或更高、93%或更高、94%或更高、95%或更高、96%或更高、97%或更高、98%或更高以及99%或更高之同源性的序列時，SEQ ID NO：1的胺基酸序列之胺基酸修飾的對應位置經改變。
於本發明中，「天然序列中的一個或多個胺基酸經改變」可為於天然序列中的至少一個胺基酸發生選自由取代、添加、缺失、修飾及其組合所組成群組之修飾。
具體而言，本發明之介白素-2類似物可包括天然介白素-2中對應於位置1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、 126和133之一個或多個胺基酸經修飾的序列。具體地，本發明之介白素-2類似物可為天然介白素-2，其中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125之胺基酸經不同胺基酸取代；以及進一步包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個胺基酸取代。雖然不以此為限，於位置125之胺基酸(即，半胱胺酸)可經絲胺酸取代，且發生進一步取代之胺基酸可為對應於位置12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、126和133的胺基酸。
此外，除上述修飾位置以外，包括胺基酸殘基之取代、添加、缺失、修飾等的介白素-2類似物，至可達到所屬技術領域中已知的肽穩定性和半衰期增加方面的程度，亦包括於本發明之範圍中。
如本文中所用，術語「阿地介白素」或「介白素-2類似物(阿地介白素)」為商購之介白素-2類似物，可為阿地介白素(商標名稱：Proleukin®)，且尤其可為具有SEQ ID NO：2之胺基酸序列者。於本發明中，這些術語可與「介白素-2類似物1」互換使用。相較於該介白素-2類似物1，根據本發明之介白素-2類似物對於介白素-2 α受體可具有改變的結合親和力及/或對於介白素-2 β受體增加的結合親和力。
儘管未知介白素-2 α受體參與介白素-2的傳訊系統，惟其增加介白素-2對於其它介白素-2受體(β或γ)之結合親和力10至100倍，且介白素-2 α受體表達於CD4+調節T細胞等。
由於介白素-2 β受體係主要分佈於CD8+ T細胞或自然殺手細胞(NK細胞)且對於活化免疫反應和巨噬細胞具有重要的作用，所預期的是藉由活化介白素-2 β受體，以促進腫瘤細胞死亡和活化身體之免疫反應。
因此，對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力的本發明之介白素-2類似物可具有治療效果，其中，增加腫瘤的壓抑和死亡，同時降低副作用。
於本發明中，該介白素-2類似物可包括天然介白素-2之序列，其中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125之胺基酸經不同胺基酸取代，且進一步包括1至10個胺基酸修飾。舉例而言，該介白素-2類似物可包括天然介白素-2之序列，其中，於位置125的胺基酸經絲胺酸取代，且於位置12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96和126的一個或多個胺基酸經不同胺基酸取代及/或添加一個或多個胺基酸於位置133的胺基酸，但該序列不以此為限，以及包括但不限於相較於天然介白素-2及/或阿地介白素，對於介白素-2 α受體具有改變的結合親和力且對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力之任何介白素-2類似物。
於一具體實施態樣中，該介白素-2類似物可為於對應於位置133之胺基酸添加一個或多個胺基酸者，但不以此為限。對於本發明之目的，所添加之胺基酸不受其類型或長度所限，只要相較於天然介白素-2及/或阿地介白素，該介白素-2類似物對於介白素-2 α受體具有改變的結合親和力，以及對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力。
於另一具體實施態樣中，該介白素-2類似物可為天然介白素-2，其中，於位置1之胺基酸經移除；於位置125之胺基酸經不同的胺基酸取代；以及於位置18、19、20、22、38、42、43、45、61、68、69、74、80、81、84、85、 86、88、89、91、92、94和96之胺基酸的1、2、3、4、5、6、7、8、9個或更多個胺基酸經不同的胺基酸取代，但該介白素-2類似物不以此為限。
於又一具體實施態樣中，該介白素-2類似物可為天然介白素-2，其中，於位置1之胺基酸經移除；於位置125之胺基酸經不同的胺基酸取代；以及於位置18、19、22、38、42、43、45、61、68、74、80、81、84、85、86、88、91、92、94和96之胺基酸的1、2、3、4、5、6、7、8、9個或更多個胺基酸經不同的胺基酸取代，但該介白素-2類似物不以此為限。
於再一具體實施態樣中，該介白素-2類似物可為選自由下列類似物所組成群組之任一者：
(a)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和32之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(b)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和35之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(c)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和38之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(d)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(e)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和43之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(f)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和48之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(g)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和49之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(h)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和76之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(i)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(j)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和87之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(k)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(l)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和80之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(m)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(n)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、19、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(o)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、12、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(p)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和61之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(q)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(r)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和88之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(s)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和89之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(t)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和91之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(u)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和94之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(v)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和126之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(w)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(x)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(y)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(z)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、61、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aa)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ab)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ac)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ad)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、20、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ae)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(af)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ag)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ah)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、88和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ai)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aj)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、85和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ak)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(al)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(am)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(an)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ao)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ap)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、45、80、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aq)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ar)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(as)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(at)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、69、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(au)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(av)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(aw)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ax)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ay)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(az)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、69、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(ba)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、84、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bb)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bc)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、19、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bd)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(be)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bf)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bg)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bh)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bi)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bj)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bk)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bl)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、43、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
(bm)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、91、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；以及
(bn)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、74、80、81、82、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2。
特別而言，該介白素-2類似物中所包括之胺基酸取代可為選自由下列胺基酸取代所組成群組之任一者或多者：
(a)於位置12的胺基酸經纈胺酸或***酸取代之取代；
(b)於位置18的胺基酸經精胺酸取代之取代；
(c)於位置19的胺基酸經酪胺酸、纈胺酸、***酸或精胺酸取代之取代；
(d)於位置20的胺基酸經纈胺酸或***酸取代之取代；
(e)於位置22的胺基酸經麩胺酸取代之取代；
(f)於位置32的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(g)於位置35的胺基酸經半胱胺酸或麩胺酸取代之取代；
(h)於位置38的胺基酸經丙胺酸或天門冬胺酸取代之取代；
(i)於位置42的胺基酸經離胺酸、丙胺酸或色胺酸取代之取代；
(j)於位置43的胺基酸經半胱胺酸、麩胺酸或麩醯胺酸取代之取代；
(k)於位置45的胺基酸經丙胺酸取代之取代；
(l)於位置48的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(m)於位置49的胺基酸半胱胺酸經取代之取代；
(n)於位置61的胺基酸經麩醯胺酸、精胺酸或天門冬胺酸取代之取代；
(o)於位置68的胺基酸經天門冬胺酸或麩醯胺酸取代之取代；
(p)於位置69的胺基酸經甘胺酸取代之取代；
(q)於位置74的胺基酸經組胺酸或丙胺酸取代之取代；
(r)於位置76的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(s)於位置80的胺基酸經***酸、酪胺酸、纈胺酸、天門冬胺酸或色胺酸取代之取代；
(t)於位置81的胺基酸經天門冬胺酸、麩胺酸或天門冬醯胺酸取代之取代；
(u)於位置82的胺基酸經甘胺酸或纈胺酸取代之取代；
(v)於位置84的胺基酸經麩胺酸、纈胺酸或***酸取代之取代；
(w)於位置85的胺基酸經纈胺酸、丙胺酸、甘胺酸、色胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、麩胺酸或***酸取代之取代；
(x)於位置86的胺基酸經纈胺酸、丙胺酸、甘胺酸或白胺酸取代之取代；
(y)於位置87的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
(z)於位置88的胺基酸經麩醯胺酸、纈胺酸或***酸取代之取代；
(aa)於位置89的胺基酸經***酸取代之取代；
(ab)於位置91的胺基酸經蘇胺酸、***酸或麩胺酸取代之取代；
(ac)於位置92的胺基酸經***酸、白胺酸、酪胺酸或色胺酸取代之取代；
(ad)於位置95的胺基酸經天門冬胺酸取代之取代；
(ae)於位置96的胺基酸經***酸、纈胺酸或異白胺酸取代之取代；以及
(af)於位置126的胺基酸經蘇胺酸取代之取代。
於本文中所用，術語「對應」係指於肽中所列位置的胺基酸殘基或與肽中所列位置之殘基類似、相同或同源之胺基酸殘基。確定於對應位置之胺基酸可為特定所指特定序列之序列中的特定胺基酸。
於一具體實施態樣中，於該胺基酸序列中之每一胺基酸殘基可藉由將任何胺基酸序列與SEQ ID NO：1進行比對而編號，並基於相同的，所指胺基酸殘基的數字位置對應於SEQ ID NO：1之胺基酸殘基。
所述比對，例如，可使用尼德曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48：443-453)、EMBOSS套裝軟體的Needle程式(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人，2000)、(Trends Genet.16：276-277)等等，可取得之程式不以此為限，且可適當使用本發明所屬技術領域中已知的序列比對程式、成對序列比較算法等等。
於本發明中，即使表達為肽中胺基酸的特定位置，該表達亦可指參考序列中的對應位置。
於另一具體實施態樣中，該介白素-2類似物可包括、由或主要由選自由SEQ ID NOS：3至106所組成群組之胺基酸序列所組成，但該介白素-2類似物不以此為限。
此外，即使該介白素-2類似物於本發明中表達為「一種由特定SEQ ID NO所組成之介白素-2類似物」，此不排除藉由於對應的SEQ ID NO之胺基酸序列的上游或下游添加無意義之序列所可能發生的突變，或者可能自然發生之突變或其沉默突變(silent mutation)，以及即使存在序列之添加或突變，該介白素-2類似物顯然屬於本發明之範圍。
本發明之介白素-2類似物可包括與SEQ ID NOS：3至106之胺基酸序列具有40%或更高、45%或更高、50%或更高、55%或更高、60%或更高、65%或更高、70%或更高、75%或更高、80%或更高、81%或更高、82%或更高、83%或更高、84%或更高、85%或更高、86%或更高、87%或更高、88%或更高、89%或更高、90%或更高、91%或更高、92%或更高、93%或更高、94%或更高、95%或更高、96%或更高、97%或更高、98%或更高或99%或更高同源性之胺基酸序列，但介白素-2類似物不以此為限。
於本發明中，術語「同源性」及「一致性」係指兩個給定胺基酸序列或核苷酸序列之間的相關程度，可以百分比表達。
保守多核苷酸和多肽之序列同源性或一致性可以結合標準比對算法和所使用之程序建立的預設空位罰分進行測定。實質上，同源的或一致的序列可一般以中度或高度嚴格條件下與全部或部分序列進行雜交。顯然地，雜交還包括多核苷酸與多核苷酸的雜交，該多核苷酸包括一般密碼子或考慮密碼子簡併性之密碼子。
術語同源性或一致性可經常地互換使用。
任意兩個核苷酸或肽序列是否具有同源性、相似性或一致性可藉由以下方法進行確定，例如，使用已知的電腦算法(例如，「FASTA」程序)使用Pearson et al.(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444中的預設參數)。或者，可使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48：443-453)的EMBOSS套裝軟體(EMBOSS：The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice等人，2000,Trends Genet.16：276-277)中之Needleman程式(版本5.0.0或更新)(包括GCG軟體套裝(Devereux,J.等人，Nucleic Acids Research 12：387 (1984)),BLASTP,BLASTN,FASTA(Atschul,S.F.等人，J Molec Biol 215：403(1990)；Guide to Huge Computers,Martin J.Bishop，編輯，Academic Press,San Diego,1994，以及CARILLO等人(1988)SIAM J Applied Math 48：1073)進行確定。例如，可以使用國家生物技術訊息中心(National Center for Biotechnology Information)的BLAST或ClustalW確定同源性、相似性或一致性。
核苷酸或肽序列之同源性、相似性或一致性可藉由使用GAP電腦程式(例如，Needleman等人，(1970),J Mol Biol 48：443)比較序列訊息進行確定，如Smith和Waterman,Adv.Appl.Math(1981)2：482中所揭露。簡而言之，該GAP電腦程式定義同源性、相似性或一致性為以相似比對符號(即，核苷酸或胺基酸)的數目除以兩個序列中較短者的符號總數。該GAP程式中的預設參數可包括：(1)如Schwartz和Dayhoff,eds.,Atlas Of Protein Sequence And Structure,National Biomedical Research Foundation,pp.353-358(1979)中所揭示，Gribskov等人，(1986)Nucl.Acids Res.14：6745的一元比較矩陣(對於一致性包含1的值，對於非一致性包含0的值)和加權比較矩陣(或EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)替代矩陣)；(2)每個空位罰分為3.0，每個空位中的每個符號之罰分為0.10(或空位開放罰分10，空位延伸罰分0.5)；及(3)末端空位沒有罰分。因此，如本文中所用，術語「同源性」或「一致性」表示序列之間的相關性。
上述可應用於本發明之其它實施方式或其它態樣，但不以此為限。
可被用作新穎介白素-2替代物的本發明之介白素-2類似物可藉由減弱或增加該介白素-2類似物對於介白素-2 α受體及/或β受體之結合親和力，改變其體外活性。特別地，由於本發明之介白素-2類似物不僅對於β受體具有 增加的結合親和力，且對α受體亦發生改變(即，增加或減少)，故因其對於兩種受體之活性而可用作一種有效的治療劑。
於本發明中，用於製備介白素-2類似物的修飾包括使用L型或D型胺基酸及/或非天然胺基酸的所有修飾；及/或天然序列的修飾，例如，側鏈官能基、分子內共價鍵(例如，側鏈之間的環形成)、甲基化、醯化、泛素化、磷酸化、胺基己酸化、生物素化(biotinylation)等的修飾。
此外，該修飾包括將一個或多個胺基酸添加至天然介白素-2的胺基和/或羧基末端的所有修飾。
作為將經取代或添加的胺基酸，不僅可以使用人類蛋白質中通常觀察到的20種胺基酸，且可以使用非典型胺基酸或非天然存在的胺基酸。非典型胺基酸的商業來源包括Sigma-Aldrich、ChemPep Inc.和Genzyme Pharmaceuticals。包括這些胺基酸和典型肽序列之肽可以從商業供應商合成和購買，例如，American Peptide公司、Bachem(美國)或Anygen(韓國)。
胺基酸衍生物可由相同方法獲得，作為所述一個例子，可使用4-咪唑乙酸等。
再者，根據本發明之介白素-2類似物可為介白素-2之N-端及/或C-端等經有機基團化學修飾或保護，或可添加胺基酸於肽端之修飾形式，以保護其免受體內的蛋白酶侵害，同時增加其穩定性。
特別而言，於化學合成肽之情況中，其N-和C-端係帶電荷，故可將肽的N-端經乙醯化及/或肽的C-端經醯胺化，但該肽不特別以此為限。
此外，由於根據本發明之介白素-2類似物可為肽形式，其可包括所有以肽本身之形式、其鹽(例如，該肽的藥學上可接受之鹽)或其溶劑合物。此外，該肽可為任何藥學上可接受之形式。
該鹽之種類不特別以此為限。然而，期望該鹽對於個體(例如，哺乳動物)為安全且有效之形式，但該鹽類型不以此為限。
術語「藥學上可接受」係指於醫學判斷範圍內可有效用作所欲之目的而不會引起過度毒性、刺激性、過敏反應等的材料。
如本文所用，術語「藥學上可接受之鹽」係包括衍生自藥學上可接受之無機酸、有機酸或鹼之鹽。適合之酸的實例係包括鹽酸、溴酸、硫酸，硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、甲苯對磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸等等。衍生自合適的鹼之鹽可包括鹼金屬(例如，鈉、鉀等等)、鹼土金屬(例如，鎂等)、銨等。
此外，如本文中所用。術語「溶劑合物」係指於根據本發明之肽或其鹽與溶劑分子之間所形成的複合物。
於本發明中，任何介白素-2類似物對於天然介白素-2受體之結合親和力可使用各種已知技術進行測量，其為用於測量對於受體之親和力的方法。舉例而言，可使用表面電漿共振(surface plasmon resonance,SPR)，但測量方法不以此為限。
更具體地，相較於天然介白素-2或阿地介白素，本發明之介白素-2類似物對於介白素-2 α受體可具有減少或增加的結合親和力。
具體而言，相較於天然介白素-2或阿地介白素對於介白素-2 α受體之結合親和力，本發明之介白素-2類似物對於介白素-2 α受體可具有約0.001倍或更大、約0.005倍或更大、約0.01倍或更大、約0.05倍或更大、約0.1倍或更大、約0.3倍或更大、約0.5倍或更大、約0.7倍或更大、約0.9倍或更大、約1.1倍或更大、約1.3倍或更大、約1.5倍或更大或者約1.7倍或更大之結合親和力，但該結合親和力之數值不限於此，以及，只要結合親和力相較於天然介白素-2或阿地介白素有改變，該數值即屬於本發明之範圍。
或者，基於阿地介白素對於介白素-2 α受體之結合親和力(設定為100%)，本發明之介白素-2類似物對於介白素-2 α受體可不具有結合親和力，或者對於介白素-2 α受體具有約1%或更大、約5%或更大、約7%或更大、約10%或更大、約15%或更大、約20%或更大、約30%或更大、約50%或更大、約70%或更大、約90%或更大、約100%或更大、約150%或更大或約200%或更大之結合親和力，但結合親和力之數值不限於此，以及，只要結合親和力相較於天然介白素-2或阿地介白素有改變，該數值即屬於本發明之範圍。
此外，相較於天然介白素-2或阿地介白素對於介白素-2 β受體之結合親和力，本發明之介白素-2類似物可特別是對於介白素-2 β受體具有0.1倍或更大、約0.3倍或更大、約0.5倍或更大、約0.7倍或更大、約1.0倍或更大、約10倍或更大、約20倍或更大、約30倍或更大、約40倍或更大、約50倍或更大、約60倍或更大、約70倍或更大、約80倍或更大、約90倍或更大或約100倍或更大之結合親和力，但結合親和力之數值不限於此，以及，只要結合親和力相較於天然介白素-2或阿地介白素有改變或增加，該數值即屬於本發明之範圍。
或者，基於阿地介白素對於介白素-2 β受體之結合親和力(設定為100%)，本發明之介白素-2類似物對於介白素-2 β受體可不具有結合親和力，或者對於介白素-2 β受體具有約5%或更大、約8%或更大、約10%或更大、約20%或更大、約30%或更大、約50%或更大、約100%或更大、約200%或更大、約500%或更大、約700%或更大、約1,000%或更大、約1,500%或更大、約3,000%或更大、約5,000%或更大、約7,000%或更大、約10,000%或更大、約12,000%或更大、約15,000%或更大、約20,000%或更大或約25,000%或更大之結合親和力，但結合親和力之數值不限於此，以及，只要結合親和力相較於天然介白素-2或阿地介白素有增加，該數值即屬於本發明之範圍。
如本文中所用，術語「約」係指包括所有±0.5、±0.4、±0.3、±0.2、±0.1等之範圍，且包括所有等於或相似其後續值之所有值，但該範圍不以此為限。
本發明之介白素-2類似物之特徵在於，相較於天然介白素-2或阿地介白素，其對於介白素-2 α受體具有改變的結合親和力以及對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力。
於本發明之特定具體實施態樣中，為製備本發明之介白素-2類似物，製備一種介白素-2類似物，其中基於天然介白素-2(SEQ ID NO：1)引入修飾。本發明中所製備的介白素-2類似物可為包括SEQ ID NOS：3至106中的任一胺基酸序列者，或可為編碼SEQ ID NOS：108至211中的任一核酸序列者。
實施本發明之另一態樣係提供一種編碼該介白素-2類似物之核酸(多核酸)、包括該核酸之重組表達載體，以及包括該核酸或重組表達載體之轉形體。
編碼本發明之介白素-2類似物的核酸可為經修飾者，從而可將該修飾(胺基酸的缺失、取代及/或添加)引入SEQ ID NO：1的天然介白素-2中的胺基酸之特定位置，且更具體地，本發明之介白素-2類似物可包括編碼SEQ ID NOS：3至106中的任一胺基酸序列的核酸序列。舉例而言，本發明之核酸可為具有或包括SEQ ID NOS：108至211中之任一核酸序列。
考慮到密碼子簡併性或於欲表達本發明之核酸的生物中較佳的密碼子，本發明的核苷酸序列可以在不改變本發明的介白素-2類似物的胺基酸序列之範圍內於編碼區域內進行各種修飾。具體而言，本發明之核酸可為與SEQ ID NOS：108至211之序列的任一者具有或包括70%或更高、75%或更高、80%或更高、85%或更高、90%或更高、95%或更高、96%或更高、97%或更高、98%或更高以及少於100%之同源性或一致性的核酸序列；可由或主要由與SEQ ID NOS：108至211之序列的任一者具有70%或更高、75%或更高、80%或更高、85%或更高、90%或更高、95%或更高、96%或更高、97%或更高、98%或更高以及少於100%之同源性或一致性之核酸序列所組成，但該核酸不以此為限。
此外，本發明之核酸可包括，不限於，可以從已知基因序列製備的探針(例如，可以在嚴格條件下與本發明的全部或部分之核酸序列互補的序列雜交的序列)。「嚴格條件」係指使多核苷酸之間能特異性雜交的條件。該等條件係於文獻(參閱Sambrook等人，Molecular Cloning,A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory press,Cold Spring Harbor,紐約，1989；F.M.Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,Inc.,紐約，9.50-9.51,11.7-11.8)中詳細說明。
雜交需要兩個核酸具有互補序列，儘管根據雜交之嚴格性，可能有鹼基之間的錯配。術語「互補的」係用於描述可以彼此雜交的核苷酸鹼基之間的關係。例如，對於DNA，腺嘌呤與胸腺嘧啶互補，胞嘧啶與鳥嘌呤互補。因此，本發明的核酸可包括與整個序列以及與實質上相似的核酸序列互補之分離核酸片段。
用於雜交多核苷酸的合適嚴格性取決於多核苷酸的長度和互補程度，並且變量是所屬領域中已知的(例如，Sambrook等人，如上述)。
同源性和一致性係如上所述。
根據本發明之重組載體可被構建為用於典型選殖的載體或用於表達的載體，且可以被構建為用於將真核或原核細胞作為宿主細胞的載體。
如本文中所用，術語「載體」為能夠在合適的宿主細胞中表達靶蛋白的重組載體，是指包括可操作地連接以使核酸***物表達的必需控制元件的核酸構建體。於本發明中，可以製備包含編碼介白素-2類似物的核酸之重組載體，且可以藉由以重組載體轉形或轉染宿主細胞得到本發明的介白素-2類似物。
如本文所用，術語「轉形」是指一種現象，其中將DNA引入宿主細胞以允許DNA作為染色體的因子或藉由完成染色體整合而被複製，且將外部DNA引入細胞中以人工引起遺傳改變。
適於本發明的宿主沒有特別限制，只要其能夠表達本發明的核酸即可。可用於本發明之宿主的具體實例包括埃希氏菌屬的細菌(例如，大腸桿菌)；芽孢桿菌屬的細菌(例如，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis))；假單胞菌屬的細菌(例如，戀臭假單胞菌(Pseudomonas putida))；酵母(例如，嗜甲醇酵母菌(Pichia pastoris)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和粟酒裂殖酵母 (Schizosaccharomyces pombe))；昆蟲細胞(例如Spodoptera frugiperda(SF9))；和動物細胞(例如，CHO、COS、BSC等)。
實施本發明之另一態樣係提供一種製備具有一種或多種修飾之介白素-2類似物的方法。
具體而言，該方法可包括將修飾引入選自由對應於天然介白素-2中的位置1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、126和133之胺基酸所組成群組之一個或多個胺基酸。
更具體地，該方法可為：
(a)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1的胺基酸經移除且於位置125和32之胺基酸經不同胺基酸取代；
(b)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和35之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(c)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和38之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(d)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(e)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和43之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(f)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和48之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(g)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和49之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(h)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和76之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(i)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(j)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和87之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(k)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(l)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38和80之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(m)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38和84之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(n)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、19、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(o)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、12、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(p)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和61之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(q)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和84之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(r)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和88之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(s)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和89之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(t)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和91之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(u)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和94之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(v)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和126之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(w)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80和84之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(x)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(y)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(z)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、61、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aa)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ab)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ac)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ad)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、20、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ae)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(af)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ag)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ah)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81、88和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ai)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aj)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81、85和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ak)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(al)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(am)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、45、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(an)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ao)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ap)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、45、80、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aq)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ar)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(as)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(at)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、69、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(au)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(av)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aw)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ax)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、45、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ay)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(az)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、69、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ba)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、84、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bb)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、85、86、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bc)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、19、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bd)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(be)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bf)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bg)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、35、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bh)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、45、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bi)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bj)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bk)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、35、38、42、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bl)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、43、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bm)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86、91、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代；或者
(bn)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、35、38、42、74、80、81、82、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代，
但該方法不限於此。
該介白素-2類似物及修飾與上述相同。
於製備本發明之介白素-2類似物的方法之另一具體實施態樣中，製備該介白素-2類似物的方法可包括(a)培養包含編碼介白素-2類似物且表達介白素-2類似物之核酸的轉形體；(b)分離和純化所表達之介白素-2類似物，但該方法不限於任何特定方法，並且可以使用所屬技術領域中已知的任何方法，只要可用該介白素-2類似物製備即可。
於本發明中，編碼該介白素-2類似物之核酸可包括或(基本上)由SEQ ID NOS：108至211中的任一核苷酸序列所組成。
用於培養本發明之轉形體之培養基必須滿足以適當方法培養宿主細胞的要求。所屬技術領域中具有通常知識者可以根據所產生的轉形體類型適當地選擇可以包含在用於宿主細胞生長的培養基中的碳源，作為所屬技術領域中具有通常知識者的決定，且可採用適當的培養條件來控制時間和培養量。
可用之糖源可包括糖和碳水化合物(例如，葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麥芽糖、澱粉和纖維素)；油脂(例如，大豆油、葵花籽油、蓖麻油、椰子油等)；脂肪酸(例如，棕櫚酸、硬脂酸和亞油酸)；醇類(例如，甘油和乙醇)；和有機酸(例如，乙酸)。這些材料可以單獨使用或作為混合物使用。
可用之氮源包括蛋白腖(peptone)、酵母萃取物、肉汁、麥芽萃取物、玉米浸液、豆粕(soybean meal)和尿素或無機化合物(例如，硫酸銨、氯化銨、磷酸銨、碳酸銨和硝酸銨)。氮源亦可單獨使用或作為混合物使用。
可用之磷源可包括磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀或對應之含鈉鹽。此外，培養基可包含生長所需之金屬鹽(例如，硫酸鎂和硫酸鐵)。
最後，除了這些材料，可使用基本生長材料(例如，胺基酸及維生素)。此外，亦可使用培養基之適當前驅物。上述原料可於培養期間以適當方法採用批次或連續模式添加至培養物中。可以適當方法使用鹼性化合物(例如，氫氧化鈉、氫氧化鉀及氨)或酸性化合物(例如，磷酸或硫酸)調整培養物之pH值。此外，可以使用消泡劑(例如，脂肪酸聚二醇酯)以防止起泡。為維持有氧狀態，可以於培養物中注入氧氣或含氧之氣體(例如，空氣)。
根據本發明之轉形體的培養通常於20℃至45℃的溫度實施，且具體為25℃至40℃。此外，培養係持續至獲得所欲之介白素-2類似物的最大量時，且出於此目的，培養通常持續10小時至160小時。
如上所述，若適當培養條件係根據宿主細胞建立時，根據本發明之轉形體將產生介白素-2類似物，且根據載體組成及宿主細胞特性，所產生之介白素-2類似物可分泌至宿主細胞的細胞質或分泌周質空間或細胞外。
表現在宿主細胞內部或外部之蛋白質可採用常用方法進行純化。純化方法實例可包括鹽析法(例如，硫酸銨沉澱法、磷酸鈉沉澱法等等)、溶劑沉澱法(例如，使用丙酮或乙醇之蛋白質分段沉澱法等等)、透析法、凝膠過濾法、離子交換法、層析法(例如，逆向管柱層析法)、超濾法等等，且此等方法可以單獨使用或組合使用。
於本發明之特定具體實施態樣中，製備介白素-2類似物之方法可包括：
(a)表達該介白素-2類似物；以及
(b)分離該表達之介白素-2類似物。
於本發明之特定具體實施態樣中，可進一步包括下列步驟，以自轉形體中以包涵體之形式分離或純化該表達之介白素-2類似物：
(b-1)從上述步驟(a)的培養基中收集並破裂轉形體；
(b-2)回收並再折疊表達於已破裂的細胞裂解物中的介白素-2類似物；以及
(b-3)藉由尺寸排除層析法純化該再折疊之介白素-2類似物。
實施本發明之另一態樣係提供一種藉由肽合成方法製備介白素-2類似物的方法。由於本發明之介白素-2類似物之序列已經提供，肽之合成方法可使用已知的肽合成方法進行。
該介白素-2類似物及修飾與上述相同。
實施本發明之又另一態樣係提供一種增加對於介白素-2 β受體之結合親和力的方法，其包括修飾於天然介白素-2中的一個或多個胺基酸。
根據本發明之增加對於介白素-2 β受體之結合親和力的方法可為相較於天然介白素-2或阿地介白素，不僅增加對於介白素-2 β受體之結合親和力，且改變對於介白素-2 α受體之結合親和力。
具體而言，該方法可包括引入修飾至對應於天然介白素-2的位置1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、126和133之一個或多個胺基酸序列的步驟。
更具體地，該方法可為：
(a)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1的胺基酸經移除且於位置125和32之胺基酸經不同胺基酸取代；
(b)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和35之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(c)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和38之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(d)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(e)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和43之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(f)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和48之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(g)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和49之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(h)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和76之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(i)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(j)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125和87之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(k)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(l)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38和80之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(m)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38和84之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(n)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、19、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(o)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、12、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(p)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和61之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(q)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和84之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(r)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和88之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(s)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和89之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(t)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和91之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(u)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和94之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(v)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42和126之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(w)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80和84之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(x)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(y)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(z)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、61、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aa)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ab)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ac)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ad)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、20、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ae)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(af)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ag)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ah)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、81、88和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ai)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aj)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81、85和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ak)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(al)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(am)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、45、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(an)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ao)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ap)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、45、80、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aq)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ar)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(as)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(at)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、69、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(au)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(av)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(aw)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ax)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、45、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ay)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(az)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、69、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(ba)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、84、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bb)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、80、81、85、86、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bc)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、19、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bd)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(be)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bf)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、18、22、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bg)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、35、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bh)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、45、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bi)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bj)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bk)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、35、38、42、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bl)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、43、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代；
(bm)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、38、42、80、81、85、86、91、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代；或者
(bn)一種方法，其中，於天然介白素-2中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125、35、38、42、74、80、81、82、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代，但該方法不以此為限。
該介白素-2類似物及修飾與上述相同。
實施本發明之又另一態樣係提供一種介白素-2類似物，具有選自由SEQ ID NOS：3至106之胺基酸序列所組成群組的任一序列。
該介白素-2類似物、修飾及由SEQ ID NO表示之介白素-2類似物的定義係與上述相同。
具體而言，該介白素-2類似物可包括、主要由或由選自由SEQ ID NOS：3至106所組成群組之任一核苷酸序列所組成，但該介白素-2類似物不以此為限。
實施本發明之又另一態樣係提供一種介白素-2類似物，具有由下列通式1表示之胺基酸序列：
[通式1]
Figure 110111922-A0202-12-0060-6
Figure 110111922-A0202-12-0060-8
(通式1，SEQ ID NO：212)，
其中，於上述通式1中，
X1係為缺失；
X18為白胺酸(L)或精胺酸(R)；
X19為白胺酸(L)或酪胺酸(Y)；
X22為麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
X38為丙胺酸(A)、天門冬胺酸(D)或精胺酸(R)；
X42為丙胺酸(A)、***酸(F)、離胺酸(K)或色胺酸(W)；
X43為麩胺酸(E)、離胺酸(K)或麩醯胺酸(Q)；
X45為丙胺酸(A)或酪胺酸(Y)；
X61為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)、麩醯胺酸(Q)或精胺酸(R)；
X68為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X74為組胺酸(H)或麩醯胺酸(Q)；
X80為***酸(F)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)或酪胺酸(Y)；
X81為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)或精胺酸(R)；
X84為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X85為丙胺酸(A)、麩胺酸(E)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、色胺 酸(W)或酪胺酸(Y)；
X86為丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、異白胺酸(I)或纈胺酸(V)；
X91為蘇胺酸(T)或纈胺酸(V)；
X92為***酸(F)、異白胺酸(I)或酪胺酸(Y)；
X94為***酸(F)或白胺酸(L)；以及
X96為***酸(F)或白胺酸(L)。
此外，於上述通式1中，可添加一個或多個胺基酸至蘇胺酸(T)，對應於X133，但該序列不以此為限。
具體而言，該介白素-2類似物可包括、主要由或由選自由SEQ ID NOS：10、13、14、15、16、17、20、21、22、32、35、36、42、53、54、56、58、59、60、62、71、72、74、75、76、77、78、85、87、89、91、92、93、94、95、98、99、100、101、103、104、105和106之胺基酸序列所組成之群組之任一序列所組成，但該介白素-2類似物不限於此。
相較於阿地介白素或天然介白素-2，該等介白素-2類似物對於β受體可具有增加的結合親和力，但該介白素-2類似物之結合親和力不以此為限。
於另一具體實施態樣中，本發明之介白素-2類似物可為：
於上述通式1中，
X43為離胺酸(K)；
X45為酪胺酸(Y)；
X61為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
X68為麩胺酸(E)；
X74為麩醯胺酸(Q)；
X80為***酸(F)或白胺酸(L)；
X85為白胺酸(L)、纈胺酸(V)或酪胺酸(Y)；
X86為異白胺酸(I)或纈胺酸(V)；以及
X92為***酸(F)或異白胺酸(I)，但該介白素-2類似物不以此為限。
具體而言，該介白素-2類似物之特徵在於其包括選自由SEQ ID NOS：10、13、14、16、17、20、21、22、32、35、36、42、53、54、87、89、91、92、93、94、98、99、100、101、103、104和105之胺基酸序列所組成群組的任一序列。
於本發明之介白素-2類似物中，可進一步添加一個或多個胺基酸於其C端，但該介白素-2類似物不以此為限。
實施本發明之另一態樣係提供一種介白素-2類似物，具有以下列通式2表達之胺基酸序列：
[通式2]
Figure 110111922-A0202-12-0062-12
Figure 110111922-A0202-12-0063-9
Figure 110111922-A0202-12-0063-10
(通式2,SEQ ID NO：213)，
其中，於上述通式2中，
X1為缺失，
X18為白胺酸(L)或精胺酸(R)；
X22為麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
X38為丙胺酸(A)或精胺酸(R)；
X42為***酸(F)或離胺酸(K)；
X61為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X68為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X81為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
X85為白胺酸(L)或纈胺酸(V)；以及
X86為異白胺酸(I)或纈胺酸(V)。
具體而言，該介白素-2類似物可具有選自由SEQ ID NO：22、42、53、87、105和106之胺基酸序列所組成群組之任一序列，但該介白素-2類似物之序列不以此為限。
此外，於上述通式2中，可添加一個或多個胺基酸至蘇胺酸(T)，對應於X133，或者，於該介白素-2類似物中，可進一步添加一個或多個胺基酸至其C-端，但本發明不以此為限。
同時，除非本說明書中的內容另外要求，否則例如「包括」、「包含」、「含有」等之表述意指此等包括特定整數或整數之群組，但應理解，此等表述不排除其它整數或一組整數。
於下文中，將藉由實施例進一步詳細描述本發明。此等實施例僅用於進一步詳細描述本發明，且本發明之範圍不受此等實施例的限制。
實施例1：天然介白素-2和介白素-2類似物的表達載體之製備
為製備編碼133個胺基酸之天然介白素-2的表達載體，將基於所報導之介白素-2序列(NM_000586.3；SEQ ID NO：1)所合成之介白素-2選殖(clone)至pET-22b載體(Novagen)中。此外，製備一種新穎的介白素-2類似物，其中，以介白素-2作為模板修飾介白素-2之胺基酸。用於擴增介白素-2類似物的PCR條件為16個循環的過程，其由95℃30秒、55℃60秒和65℃6.5分鐘所組成。為確認所需位置的胺基酸是否已經正確取代，對在上述條件獲得的突變產物進行序列分析。結果，證實基於每種介白素-2類似物的所需突變位置處的天然類型發現下表1中所示的修飾。所得的表達載體係稱為pET22b-介白素-2類似物1至105。
下列表1顯示每種胺基酸和類似名稱的修飾序列。為製備這些介白素-2類似物，合成正向(F)和反向(R)引子，接著進行PCR以擴增每個類似物基因。
於下列表1中，類似物1代表阿地介白素，且引子編號1至203分別對應於SEQ ID NOS：214至417。
[表1]介白素-2類似物之類型、修飾的位置以及其改變之序列
Figure 110111922-A0202-12-0065-45
Figure 110111922-A0202-12-0066-13
Figure 110111922-A0202-12-0067-14
Figure 110111922-A0202-12-0068-15
Figure 110111922-A0202-12-0069-16
Figure 110111922-A0202-12-0070-17
Figure 110111922-A0202-12-0071-18
Figure 110111922-A0202-12-0072-19
Figure 110111922-A0202-12-0073-20
Figure 110111922-A0202-12-0074-22
於上表1中，desA1表示丙胺酸之缺失，為介白素-2中的第一個胺基酸。
下列表2示出介白素-2類似物之全長蛋白質序列。表2中以粗體表示之字母係代表修飾的位置。
[表2]介白素-2類似物之序列
Figure 110111922-A0202-12-0075-44
Figure 110111922-A0202-12-0076-24
Figure 110111922-A0202-12-0077-25
Figure 110111922-A0202-12-0078-26
Figure 110111922-A0202-12-0079-27
Figure 110111922-A0202-12-0080-28
Figure 110111922-A0202-12-0081-29
Figure 110111922-A0202-12-0082-30
Figure 110111922-A0202-12-0083-31
Figure 110111922-A0202-12-0084-32
Figure 110111922-A0202-12-0085-33
Figure 110111922-A0202-12-0086-34
Figure 110111922-A0202-12-0087-35
Figure 110111922-A0202-12-0088-36
Figure 110111922-A0202-12-0089-37
Figure 110111922-A0202-12-0090-38
Figure 110111922-A0202-12-0091-39
Figure 110111922-A0202-12-0092-40
Figure 110111922-A0202-12-0093-41
Figure 110111922-A0202-12-0094-42
實施例2：介白素-2類似物之表達
使用實施例1中所製備之表達載體表達於T7啟動子之控制下的重組介白素-2類似物
以每種重組介白素-2類似物表達載體轉形大腸桿菌(E.coli)菌株、大腸桿菌BL21DE3(E.coli BF-dcm ompT hsdS(rB-mB-)gal λ(DE3)；Novagen)之表達。至於轉形方法，使用Novagen所推薦的方法。收集其中轉形每種重組表達載體的每個單一菌落，將其接種到含有安比西林(ampicillin)(50μg/mL)的2X Luria Broth培養基中，並在37℃培養15小時。將以1：1(v/v)的比例混合每種重組菌株培養液和含有30%之甘油的2X LB培養基，接著將每個1mL的混合物分配到冷凍管中，並保存於-150℃。將其用作生產重組蛋白的細胞原液。
為每個重組介白素-2類似物之表達，將每種細胞原液之一小瓶溶解，接種至500mL的2X LB中，並在37℃振盪培養14至16小時。當600nm處的吸光度值達到4.0或更高時，終止培養，並將其用作種菌培養溶液。將種菌培養溶液接種到1.6L的發酵培養基中，並使用5L發酵罐(Bioflo-320,NBS，美國)開始初始發酵。使用37℃的溫度、2.0L/min的空氣體積(1vvm)、650rpm的攪拌速度和30%的氨水將培養條件維持於6.70的pH值。至於發酵過程，當培養基中的營養物質受到限制時，可藉由添加其它培養基(進料溶液)進行饋料批式(fed-batch)培養。藉由吸光度觀察菌株的生長，並且以70或更高的吸光度值引入最終濃度為500μM的IPTG。於引入IPTG後進一步進行培養直到約23至25小時，且於培養終止後，使用離心機回收重組菌株，並在-80℃保存直到使用。
實施例3：介白素-2類似物之萃取及再折疊
為了自實施例2中所得表達大腸桿菌的介白素-2類似物以可溶形式轉化介白素-2類似物，將細胞破壞並再折疊。將對應於100mL之培養物的細胞沉澱懸浮於1至200mL的裂解緩衝液(20mMTris-HCl(pH9.0)、1mM的EDTA(pH9.0)、0.2MNaCl，0.5%Triton X-100)，以及使用微細流體均質機於15,000psi破裂重組 大腸桿菌細胞。在13,900g離心30分鐘後，丟棄上清液，並用400mL第一洗滌緩衝液(50mMTris-HCl(pH8.0)、5mMEDTA(pH9.0))洗滌沉澱物。以上述相同的條件離心後，丟棄上清液，並用400mL之第二洗滌緩衝液(50mMTris-HCl(pH8.0)、5mMEDTA(pH9.0)、2%Triton)洗滌沉澱物。以上述相同的條件離心後，丟棄上清液，並用400mL的第三洗滌緩衝液(50mMTris-HCl(pH8.0)、5mMEDTA(pH9.0)、1%脫氧膽酸鈉)洗滌沉澱物。以上述相同的條件離心後，丟棄上清液，並用400mL的第四洗滌緩衝液(50mMTrIS-HCl(pH8.0)、5mMEDTA(pH9.0)、1MNaCl)洗滌沉澱物。以上述相同的條件對所得物進行離心並洗滌，由此獲得大腸桿菌包涵體(inclusion body)。將洗滌後的包涵體沉澱重新懸浮於400mL的可溶性/還原性緩衝液(6M胍、100mMTris(pH8.0)、2mMEDTA(pH9.0)、50mMDTT)中並在50℃攪拌30分鐘。向可溶性/還原性的介白素-2類似物中加入100mL蒸餾水以將6M胍稀釋至4.8M胍，接著將所得物在13,900g離心30分鐘，並丟棄沉澱物而僅得到其中的溶液。向稀釋溶液中另外添加185.7mL的蒸餾水，並將4.8M胍稀釋至3.5M胍，並使用100%乙酸將pH調節至5.0。將pH經調節的溶液在室溫攪拌1小時。將具有沉澱雜質的溶液於13,900g離心30分鐘，丟棄上清液，並用最終洗滌緩衝液(3.5M胍、20mM乙酸鈉(pH5.0)、5mMDTT)洗滌沉澱。將所得物以上述相同的條件離心以獲得沉澱物。將洗滌的介白素-2類似物溶解在400mL的再折疊緩衝溶液(6mM胍、100mMTris(pH8.0)、0.1mMCuCl2)中。藉由在4℃攪拌混合溶液15至24小時以進行再折疊過程。
實施例4：尺寸排除管柱層析法
將實施例3中所得之介白素-2類似物再折疊溶液濃縮至少於1mL，用於尺寸排除管柱以進行純化。在引入再折疊溶液之前，用緩衝溶液(2M胍、100 mMTris(pH8.0))平衡管柱，並在引入再折疊溶液之後，藉由向其中流動緩衝溶液進行溶析。由於溶析的樣品中含有胍，將其替換為穩定的溶液(10mM乙酸鈉(pH4.5)、5%海藻糖)，並藉由RP-HPLC和肽圖分析測量純度。當樣品所測得之純度達到80%或更高時，將其用於實驗中。
實施例5：評估介白素-2類似物對於受體之結合親和力
為測量實施例4中所得介白素-2類似物對於各個介白素-2α受體和β受體之結合親和力，使用表面電漿共振測量(BIACORE T200，GEHealthcare)。測量所製備之介白素-2類似物對於α受體和β受體之結合親和力，並將每一製備之類似物與介白素-2類似物01(阿地介白素)之結合親和力進行比較。
首先，藉由胺偶聯將抗人類免疫球蛋白抗體(Abcam，#ab97221)以最多約5,000RU(共振單位)固定至CM5芯片(GEHealthcare)，接著藉由使介白素-2 α受體(SYMANSIS，#4102H)或介白素-2 β受體(SYMANSIS，#4122H)將免疫球蛋白抗體固定至與人類免疫球蛋白Fc區所結合之每個區域，使用抗原-抗體結合反應結合至每個免疫球蛋白抗體。接著，以各種濃度稀釋上述製備的重組介白素-2類似物，並流至CM5晶片，最後將介白素-2受體固定於其上，以測量每種介白素-2受體的結合親和力。結合親和力的測量包括結合速率常數(association rate constant,ka)和解離速率常數(dissociation rate constant,kd)的測量，其中，藉由使每種介白素-2類似物以10L/min的流速流動3分鐘以測量結合速率，而藉由僅使實驗緩衝溶液於相同時段內以相同流速流動以測量每種介白素-2受體的解離速率。測量完成後，根據Biaevaluation程序中的1：1結合擬合模型，評估對於受體的結合親和力。
相對結合親和力(KD)(%)=類似物01(阿地介白素)之結合親和力(KD)/類似物之結合親和力(KD)×100
於下列表3中，「無法定義」係指無法為對應的受體定義相應的物理量，因為於表面電漿共振測量中未觀察到與受體的結合。
[表3]相較於類似物01(阿地介白素)，介白素-2類似物對於介白素-2α或β受體的相對結合親和力
Figure 110111922-A0202-12-0099-43
Figure 110111922-A0202-12-0100-46
Figure 110111922-A0202-12-0101-47
Figure 110111922-A0202-12-0102-48
如測試結果(圖1和2及表3)中所明確表示，證明本發明之介白素-2類似物不具有結合親和力，對於介白素-2 α受體之結合親和力增加/降低等等，故相較於天然介白素-2或阿地介白素，對於介白素-2 α受體之結合親和力發生變化。相較於此，對於介白素-2 β受體，本發明相較於天然介白素-2或阿地介 白素顯示出高達100倍之更高結合親和力。從以上結果可證明，介白素-2類似物的胺基酸序列對於其與介白素-2 α或β受體的結合具有影響。這些結果表明，藉由取代特定位置的胺基酸，可改變對於介白素-2受體之結合親和力。
這些實驗結果表明，根據本發明的介白素-2類似物對於介白素-2α受體和介白素-2 β受體的結合親和力改變，且因此可用於基於其之各種藥物的開發。
根據前述內容，本發明所屬領域中具有通常知識者將能理解，於不修改本發明的技術概念或必要特徵之情況下，本發明可以其它特定形式實施。就這一點而言，本文所揭露的例示性實施例僅出於說明目的，並且不應被解釋為限制本發明的範圍。相對地，本發明旨在不僅涵蓋例示性實施例，且涵蓋可以包括於所附之申請專利範圍限定的本發明之精神和範圍內的各種替代、修飾、等同形式和其它實施例。

Claims (21)

  1. 一種介白素-2類似物，相較於阿地介白素，該介白素-2類似物對於介白素-2 β受體具有增加的結合親和力，其中，該介白素-2類似物包括序列，其中，對應於天然介白素-2中的位置1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、126和133的一個或多個胺基酸經修飾。
  2. 如請求項1所述之介白素-2類似物，其中，相較於阿地介白素，該介白素-2類似物對於介白素-2 α受體具有改變的結合親和力。
  3. 如請求項1所述之介白素-2類似物，其中，添加一個或多個胺基酸至對應於位置133之胺基酸。
  4. 如請求項1所述之介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為天然介白素-2，其中，於位置1之胺基酸經移除且於位置125之胺基酸經不同的胺基酸取代。
  5. 如請求項4所述之介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物進一步包括1至10個胺基酸取代。
  6. 如請求項5所述之介白素-2類似物，其中，於位置18、19、20、22、38、42、43、45、61、68、69、74、80、81、84、85、86、88、89、91、92、94和96的一個或多個胺基酸進一步經不同的胺基酸取代。
  7. 如請求項6所述之介白素-2類似物，其中，於位置18、19、22、38、42、43、45、61、68、74、80、81、84、85、86、88、91、92、94和96的一個或多個胺基酸進一步經不同的胺基酸取代。
  8. 如請求項1所述之介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為下列類似物之任一者：
    (a)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和32之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (b)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和35之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (c)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和38之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (d)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (e)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和43之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (f)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和48之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (g)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和49之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (h)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和76之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (i)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (j)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125和87之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (k)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (l)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和80之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (m)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (n)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、19、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (o)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、12、38和42之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (p)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和61之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (q)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (r)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和88之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (s)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和89之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (t)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和91之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (u)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和94之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (v)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42和126之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (w)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80和84之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (x)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (y)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (z)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、61、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (aa)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ab)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ac)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ad)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、20、38、42、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ae)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (af)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ag)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ah)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、81、88和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ai)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (aj)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、85和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ak)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (al)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (am)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、74、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (an)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ao)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、84和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ap)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、45、80、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (aq)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ar)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (as)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (at)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、69、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (au)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (av)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (aw)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ax)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、74、80、81和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ay)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (az)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、69、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (ba)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、84、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bb)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、80、81、85、86、92、94和96之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bc)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、19、22、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bd)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、38、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (be)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bf)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、18、22、68、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bg)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bh)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、45、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bi)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、91和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bj)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bk)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、74、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bl)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、43、61、80、81、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；
    (bm)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、38、42、80、81、85、86、91、92和95之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2；以及
    (bn)一種介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物係為位置1之胺基酸經移除且位置125、35、38、42、74、80、81、82、85、86和92之胺基酸經不同的胺基酸取代之天然介白素-2。
  9. 如請求項8所述之介白素-2，其中，該胺基酸取代係為選自由下列胺基酸取代所組成群組之任一者：
    (a)於位置12的胺基酸經纈胺酸或***酸取代之取代；
    (b)於位置18的胺基酸經精胺酸取代之取代；
    (c)於位置19的胺基酸經酪胺酸、纈胺酸、***酸或精胺酸取代之取代；
    (d)於位置20的胺基酸經纈胺酸或***酸取代之取代；
    (e)於位置22的胺基酸經麩胺酸取代之取代；
    (f)於位置32的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
    (g)於位置35的胺基酸經半胱胺酸或麩胺酸取代之取代；
    (h)於位置38的胺基酸經丙胺酸或天門冬胺酸取代之取代；
    (i)於位置42的胺基酸經離胺酸、丙胺酸或色胺酸取代之取代；
    (j)於位置43的胺基酸經半胱胺酸、麩胺酸或麩醯胺酸取代之取代；
    (k)於位置45的胺基酸經丙胺酸取代之取代；
    (l)於位置48的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
    (m)於位置49的胺基酸半胱胺酸經取代之取代；
    (n)於位置61的胺基酸經麩醯胺酸、精胺酸或天門冬胺酸取代之取代；
    (o)於位置68的胺基酸經天門冬胺酸或麩醯胺酸取代之取代；
    (p)於位置69的胺基酸經甘胺酸取代之取代；
    (q)於位置74的胺基酸經組胺酸或丙胺酸取代之取代；
    (r)於位置76的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
    (s)於位置80的胺基酸經***酸、酪胺酸、纈胺酸、天門冬胺酸或色胺酸取代之取代；
    (t)於位置81的胺基酸經天門冬胺酸、麩胺酸或天門冬醯胺酸取代之取代；
    (u)於位置82的胺基酸經甘胺酸或纈胺酸取代之取代；
    (v)於位置84的胺基酸經麩胺酸、纈胺酸或***酸取代之取代；
    (w)於位置85的胺基酸經纈胺酸、丙胺酸、甘胺酸、色胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、麩胺酸或***酸取代之取代；
    (x)於位置86的胺基酸經纈胺酸、丙胺酸、甘胺酸或白胺酸取代之取代；
    (y)於位置87的胺基酸經半胱胺酸取代之取代；
    (z)於位置88的胺基酸經麩醯胺酸、纈胺酸或***酸取代之取代；
    (aa)於位置89的胺基酸經***酸取代之取代；
    (ab)於位置91的胺基酸經蘇胺酸、***酸或麩胺酸取代之取代；
    (ac)於位置92的胺基酸經***酸、白胺酸、酪胺酸或色胺酸取代之取代；
    (ad)於位置95的胺基酸經天門冬胺酸取代之取代；
    (ae)於位置96的胺基酸經***酸、纈胺酸或異白胺酸取代之取代；以及
    (af)於位置126的胺基酸經蘇胺酸取代之取代。
  10. 一種分離核酸，編碼如請求項1至9中任一項所述之介白素-2類似物。
  11. 一種重組表達載體，包括如請求項10所述之分離核酸。
  12. 一種轉形體，包括如請求項11所述之重組表達載體，且排除人類。
  13. 一種介白素-2類似物，包括選自由SEQ ID NOS：3至106之胺基酸序列所組成群組之任一序列。
  14. 一種介白素-2類似物，包括由下列通式1所示之胺基酸序列：
    [通式1]
    Figure 110111922-A0202-13-0012-49
    Figure 110111922-A0202-13-0012-50
    (通式1，SEQ ID NO：212)，
    其中，於上述通式1中，
    X1為缺失；
    X18為白胺酸(L)或精胺酸(R)；
    X19為白胺酸(L)或酪胺酸(Y)；
    X22為麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
    X38為丙胺酸(A)、天門冬胺酸(D)或精胺酸(R)；
    X42為丙胺酸(A)、***酸(F)、離胺酸(K)或色胺酸(W)；
    X43為麩胺酸(E)、離胺酸(K)或麩醯胺酸(Q)；
    X45為丙胺酸(A)或酪胺酸(Y)；
    X61為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)、麩醯胺酸(Q)或精胺酸(R)；
    X68為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
    X74為組胺酸(H)或麩醯胺酸(Q)；
    X80為***酸(F)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)或酪胺酸(Y)；
    X81為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)或精胺酸(R)；
    X84為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
    X85為丙胺酸(A)、麩胺酸(E)、甘胺酸(G)、白胺酸(L)、纈胺酸(V)、色胺酸(W)或酪胺酸(Y)；
    X86為丙胺酸(A)、甘胺酸(G)、異白胺酸(I)或纈胺酸(V)；
    X91為蘇胺酸(T)或纈胺酸(V)；
    X92為***酸(F)、異白胺酸(I)或酪胺酸(Y)；
    X94為***酸(F)或白胺酸(L)；以及
    X96為***酸(F)或白胺酸(L)。
  15. 如請求項14所述之介白素-2類似物，其中，該介白素類似物-2包括選自由SEQ ID NOS：10、13、14、15、16、17、20、21、22、32、35、36、42、53、54、56、58、59、60、62、71、72、74、75、76、77、78、85、87、89、91、92、93、94、95、98、99、100、101、103、104、105和106之胺基酸序列所組成群組之任一序列。
  16. 如請求項14所述之介白素-2類似物，其中，於上述通式1中，
    X43為離胺酸(K)；
    X45為酪胺酸(Y)；
    X61為天門冬胺酸(D)、麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
    X68為麩胺酸(E)；
    X74為麩醯胺酸(Q)；
    X80為***酸(F)或白胺酸(L)；
    X85為白胺酸(L)、纈胺酸(V)或酪胺酸(Y)；
    X86為異白胺酸(I)或纈胺酸(V)；以及
    X92為***酸(F)或異白胺酸(I)。
  17. 如請求項16所述之介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物包括選自由SEQ ID NOS：10、13、14、16、17、20、21、22、32、35、36、42、53、54、87、89、91、92、93、94、98、99、100、101、103、104和105之胺基酸序列所組成群組的任一序列。
  18. 如請求項14所述之介白素-2類似物，其中，該介白素類似物-2進一步包括位於其C-端之一個或多個胺基酸。
  19. 一種介白素-2類似物，包括以下列通式2表示之胺基酸序列：
    [通式2]
    Figure 110111922-A0202-13-0014-51
    Figure 110111922-A0202-13-0014-52
    (通式2，SEQ ID NO：213)，
    其中，於上述通式2中，
    X1為缺失；
    X18為白胺酸(L)或精胺酸(R)；
    X22為麩胺酸(E)或麩醯胺酸(Q)；
    X38為丙胺酸(A)或精胺酸(R)；
    X42為***酸(F)或離胺酸(K)；
    X61為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
    X68為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
    X81為天門冬胺酸(D)或麩胺酸(E)；
    X85為白胺酸(L)或纈胺酸(V)；以及
    X86為異白胺酸(I)或纈胺酸(V)。
  20. 如請求項19所述之介白素-2類似物，其中，該介白素-2類似物包括選自由SEQ ID NOS：22、42、53、87、105和106之胺基酸序列所組成群組之任一序列。
  21. 如請求項19所述之介白素-2類似物，其中，該介白素類似物-2進一步包括位於其C-端之一個或多個胺基酸。
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