TW202136274A - Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ抑制劑 - Google Patents

Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ抑制劑 Download PDF

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Abstract

本發明提供下式之化合物：
Figure 109142894-A0101-11-0001-1
其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、A、B及Y係如本文所描述，其醫藥學上可接受之鹽；及使用此等化合物及鹽治療癌症患者之方法。

Description

KRAS　G12C抑制劑
本發明係關於新穎三環雜環化合物及其醫藥學上可接受之鹽；包括三環雜環化合物及鹽之醫藥組合物；及使用該等化合物及鹽治療諸如肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌或食道癌之癌症的方法。
MAPK/ERK信號傳導路徑將細胞外刺激轉送至細胞核，由此調節不同細胞反應，包括細胞增殖、分化及凋亡。KRas蛋白為MAPK/ERK信號傳導路徑之引發劑，且充當負責誘導細胞***之開關。在其非活性狀態中，KRas結合鳥苷二磷酸(GDP)，有效地發送負信號以抑制細胞***。回應於細胞外信號，KRas經異位活化，從而允許核苷酸由GDP轉換成鳥苷三磷酸(GTP)。在其GTP結合之活性狀態中，KRas募集且活化傳播生長因子誘導之信號所需的蛋白質，以及其他細胞信號受體。由KRas-GTP募集的蛋白質之實例為c-Raf及PI3-激酶。作為GTP酶之KRas將結合GTP轉化回GDP，由此使其自身返回至非活性狀態，且再次傳播信號以抑制細胞***。KRas功能獲得型突變呈現GTP結合程度增加且使GTP轉化成GDP之能力降低。結果為促進癌細胞生長之MAPK/ERK信號增加。密碼子12處之KRas的誤義突變為最常見突變且顯著削弱GTP酶活性。
已在大約30%之人類癌症中鑑別出致癌KRas突變，且證明該等突變會活化多個下游信號傳導路徑。儘管KRas突變普遍存在，但其為一種困難的治療目標。(Cox, A.D.Drugging the Undruggable RAS: Mission Possible? Nat. Rev. Drug Disc. 2014, 13, 828-851; Pylayeva-Gupta, y等人RAS Oncogenes: Weaving a Tumorigenic Web. Nat. Rev. Cancer 2011, 11, 761-774)。
WO2015/054572及WO2016/164675揭示能夠結合於KRas G12C之某些喹唑啉衍生物。WO2016/044772亦揭示使用此類喹唑啉衍生物之方法。WO2020/0081282揭示KRas G12C抑制劑。WO2018/206539及WO2020/178282揭示能夠結合於KRas G12C RAS蛋白之某些雜芳基化合物。
仍需要提供替代的小分子KRas抑制劑。特定言之，需要提供適用於治療癌症之較有效的可經口遞送之KRas抑制劑。更特定言之，需要提供特異性抑制KRas GTP活性之小分子抑制劑。亦需要提供在相同或降低之KRas抑制活性下呈現出更高功效的小分子KRas抑制劑。此外，需要提供呈現出更好的藥物動力學/藥效學特性之KRas抑制劑。此外，需要提供更有效的KRas抑制劑，其展現功效增加且不良作用減少或降至最低。本發明藉由提供新穎KRas抑制劑解決此等需要中之一或多者。
本發明提供一種式I化合物：
Figure 02_image005
式I 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： A為-OCH2 -、-N(R6 )CH2 、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -、-CH2 OCH2 -或-CH2 N(R6 )CH2 -； B為-CH2 -或-C(O)-； Y為-C(CN)-或-N-； R1 為-CN、-C(O)C≡CR8 或下式之基團
Figure 02_image007
； R2 為H、甲基或-CH2 CN； R3 及R5 各自獨立地為H、鹵素、-C0-3 烷基-環丙基、視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基或視情況經R10 取代1-3次之-O-C1-6 烷基； R4 為H、鹵素或視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基； R6 為H或視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基； R7 為H、鹵素、-NR11 R12 、-CH2 NR11 R12 、視情況經R10 或R13 取代1-3次之-C1-6 烷基、-C0-3 烷基環丙基或視情況經R10 或R13 取代1-3次之-O-C1-6 烷基； R8 為H、視情況經R10 取代1-3次之-C1-4 烷基或視情況經R10 取代1-3次之-C3-6 環烷基； R9 為H、鹵素、-CN、C0-3 烷基-C3-6 環烷基或視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基； R10 在每次出現時獨立地為鹵素、氧、羥基、-C1-4 烷基或-O-C1-4 烷基； R11 及R12 各自獨立地為H、-C1-4 烷基或-C1-4 雜烷基，其中R11 及R12 可組合形成環雜烷基；及 R13 在每次出現時獨立地為-N-C1-4 烷基。
本申請案主張2019年12月11日申請之美國臨時申請案第62/946,586號之優先權，其內容以全文引用之方式併入本文中。
如本文所用，術語鹵素意謂氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。如本文所用，術語烷基意謂具有一至六個碳原子之飽和直鏈或分支鏈單價烴基，例如「-C1 -6 烷基」。烷基之實例包括但不限於甲基、乙基、丙基、1-丙基、異丙基、丁基、戊基及己基。如本文中所用，術語雜烷基意謂含有二至五個碳原子及至少一個雜原子之飽和直鏈或分支鏈單價烴基，例如「-C1 -4 雜烷基」。如本文所用，術語環烷基意謂具有三至六個碳原子之飽和單價環狀分子，例如「-C3-6 環烷基」。環烷基之實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基及環己基。如本文所用，術語環雜烷基意謂具有二至五個碳原子及至少一個雜原子之飽和單價環狀分子，例如「-C3-6 環雜烷基」。環雜烷基之實例包括但不限於吡咯啶、哌啶、咪唑啶、吡唑啶、哌𠯤及嘧啶。
在指示零之情況下，例如，-C0 -3 烷基-C3-6 環烷基，取代基之烷基組分可不存在，因此，若式I之R9 為無烷基領導之環丙基，則取代基將由如針對R9 所描述之-C0-3 烷基-環丙基取代基描述(亦即，取代基將為-C0 -環丙基)。
關於R11 及R12 ，當化學允許形成雜環烷基時，兩個基團可與其所連接之氮組合。該等雜環烷基之實例包括但不限於哌啶、哌𠯤、嘧啶及嗎啉。
在一實施例中，本發明提供一種式Ia化合物
Figure 02_image009
式Ia 其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、A、B及Y係如上文所定義，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -、-N(R6 )CH2 -、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中B為-C(O)-，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-C(CN)-或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-N-，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R1 為-CN、-C(O)C≡CR8 ，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R1 為下式之基團
Figure 02_image011
， 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R2 為H或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。在又另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R2 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R3 為H、鹵素、甲基、甲氧基、乙基、異丙基或環丙基，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R3 為鹵素(較佳F或Cl)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R4 為H或鹵素，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R4 為H或F，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R5 為鹵素(較佳地為Cl)或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R6 為H或CH3 ，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R9 為H、F、Cl、-CH2 F、-CF3 或CH2 OH，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R9 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R7 為H、-CHF2 、-CH2 F、-CH2 OH、-CH2 OCH3 、-CH2 N(CH3 )2 或-CH2 -嗎啉，或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R7 為H；或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R9 為H且R7 為H、-CHF2 、-CH2 F、-CH2 OH、-CH2 OCH3 、-CH2 N(CH3 )2 或-CH2 -嗎啉，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R9 為H、F、Cl、-CH2 F、-CF3 或-CH2 OH，且R7 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R7 及R9 均為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R1 為-CN、-C(O)C≡CR8 ，且R8 為H、甲基、-CH2 F或-CH2 OH或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R1 為下式之基團
Figure 02_image013
且R7 及R9 均為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R1 為下式之基團
Figure 02_image015
且R7 為第三丁基，且R9 為-CN，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -、-N(R6 )CH2 -、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -，且B為-C(O)-，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -，且B為-C(O)-，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，且B為-C(O)-，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -、-N(R6 )CH2 -、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -，B為C(O)，且R2 為H或-CH3 ，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -，B為-C(O)-，且R2 為H或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，B為-C(O)-，且R2 為H或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -、-N(R6 )CH2 -、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -，B為-C(O)-，且R2 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -，B為-C(O)-，且R2 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，B為-C(O)-，且R2 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，且R2 為H或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，且R2 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在又另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中B為-C(O)-，且R2 為H或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中B為-C(O)-，且R2 為H，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R3 及R5 各自獨立地選自H、鹵素或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R3 或R5 為鹵素，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R3 及R5 為鹵素，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中R3 及R5 各自獨立地選自F或Cl，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-C(CN)-，且R4 為H或鹵素(較佳F或Cl)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-N-，且R4 為H或鹵素(較佳F或Cl)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-C(CN)-，且R3 及R5 各自獨立地選自甲基或鹵素，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-C(CN)-，且R3 及R5 各自為鹵素(較佳為F或Cl)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-N-，R3 及R5 各自獨立地選自甲基或鹵素，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中Y為-N-，R3 及R5 各自為鹵素(較佳為F或Cl)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -、-CH2 OCH2 -或-CH2 N(R6 )CH2 ；B為-CH2 -或-C(O)-；Y為-C(CN)-或-N-；R1 為-CN、-C(O)C≡CR8 或下式之基團
Figure 02_image017
； R2 為H或甲基；R3 及R5 各自為H、F、Cl或甲基；R4 為H或F；R6 為H或甲基；R7 為H、-CHF2 、-CH2 F、-CH2 OH、-CH2 OCH3 、-CH2 N(CH3 )2 、-CH2 -嗎啉或第三丁基；R8 為甲基、-CH2 F或-CH2 OH；且R9 為H、F、Cl、-CH2 F、-CF3 、-CH2 OH-或CN；或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I或Ia化合物，其中A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -；B為-CH2 -或-C(O)-；Y為-C(CN)-或-N-；R2 、R7 及R8 各自為H；R4 為H或鹵素；R3 及R5 各自為鹵素；或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明進一步提供一種下式II化合物：
Figure 02_image019
式II 其中R為
Figure 02_image021
； X為Cl或F； 且m為1或2。 或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦提供一種式IIa化合物：
Figure 02_image023
式IIa 其中R為
Figure 02_image025
； X為Cl或F； 且m為1或2。 或其醫藥學上可接受之鹽。
描述式II化合物之另一方式為式Ib：
Figure 02_image027
式Ib 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -； Y為C(CN)或N； R3 為Cl或F； R4 在Y係C(CN)時為H或F；及 R4 在Y係N時為F。
描述式IIa化合物之另一方式為式Ib，其中A為
Figure 02_image029
。
本發明亦提供一種選自以下式III-VI中之任一者的化合物：
Figure 02_image031
， 式III                                  式IV
Figure 02_image033
， 式V                              式VI 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供一種式III化合物，其為：
Figure 02_image035
式III， 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供一種式IV化合物，其為：
Figure 02_image037
式IV， 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供一種式V化合物，其為：
Figure 02_image039
式V， 或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供一種式VI化合物，其為：
Figure 02_image041
式VI， 或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在各種實施例中，癌症為肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌或食道癌。在較佳實施例中，癌症為非小細胞肺癌、胰臟癌或大腸直腸癌。在再更佳實施例中，癌症為非小細胞肺癌。
在另一形式中，本發明包含一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在又另一實施例中，癌症為胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
本發明亦提供一種治療患有具有KRAS G12C突變之癌症的患者的方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦提供一種調節有需要之患者之突變KRas G12C酶的方法，其係藉由投與根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。該方法較佳包含抑制人類突變KRas G12C酶。
本發明亦提供一種治療有需要之患者之癌症的方法，其中該患者患有經確定表現KRas G12C突變蛋白之癌症。該方法包含向患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。一或多種癌細胞之G12C突變狀態可藉由多種此項技術中已知之檢定測定。通常，獲得含有一或多個癌細胞之一或多種活檢體，且對其進行定序及/或聚合酶鏈反應(PCR)。循環無細胞DNA亦可用於例如晚期癌症中。用於測定突變狀態(例如一或多種癌細胞或循環無細胞DNA中之G12C突變狀態)之定序及PCR技術之非限制性實例包括直接定序、下一代定序、反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)、多重PCR及焦磷酸定序及多重分析物分析。
本發明亦提供一種用於療法中之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用於治療癌症。癌症較佳為肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌或食道癌。在較佳實施例中，癌症為非小細胞肺癌、胰臟癌或大腸直腸癌。在再更佳實施例中，癌症為非小細胞肺癌。在其他實施例中，癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之癌細胞。較佳地，癌症係選自：KRas G12C突變非小細胞肺癌、KRas G12C突變大腸直腸癌及KRas G12C突變胰臟癌。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，且一或多種細胞表現KRas G12C突變蛋白。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，且一或多種細胞表現KRas G12C突變蛋白。在另一實施例中，癌症為胰臟癌，且一或多種細胞表現KRas G12C突變蛋白。在另一實施例中，患者患有癌症，該癌症經測定在投與化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。
本發明亦提供根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造供治療癌症用之藥劑。癌症較佳為肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌或食道癌。在較佳實施例中，癌症為非小細胞肺癌、胰臟癌或大腸直腸癌。在再更佳實施例中，癌症為非小細胞肺癌。在其他實施例中，癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之癌細胞。較佳地，該癌症係選自KRas G12C突變非小細胞肺癌、KRas G12C突變大腸直腸癌及KRas G12C突變胰臟癌。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量的根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及以下中之一或多種：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CD4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、鉑劑及培美曲塞(pemetrexed)或其醫藥學上可接受之鹽，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其在治療癌症中與PD-1或PD-L1抑制劑、CD4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、鉑劑及培美曲塞或其醫藥學上可接受之鹽中之一或多者同時、分開或依序組合使用。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，以及PD-1或PD-L1抑制劑、CD4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、鉑劑及培美曲塞或其醫藥學上可接受之鹽中之一或多者，其用以同時、分開或依序用於治療癌症。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及PD-1或PD-L1抑制劑，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與PD-1或PD-L1抑制劑同時、分開或依序組合使用以用於治療癌症。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及PD-1或PD-L1抑制劑，其用以同時、分開或依序用於治療癌症。在一個實施例中，化合物為式I-VI化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為帕博利珠單抗(pembrolizumab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為納武單抗(nivolumab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為西米利單抗(cimiplimab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為森迪利單抗(sentilimab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為阿特珠單抗(atezolizumab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為阿維魯單抗(avelumab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑為德瓦魯單抗(durvalumab)。在另一實施例中，PD-1或PD-L1抑制劑成為羅大匹利單抗(lodapilimab)。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為突變胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及CDK4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與CDK4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽同時、分開或依序組合使用，以用於治療癌症，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及CDK4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，其用以同時、分開或依序用於治療癌症，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。在另一實施例中，CDK4/CDK6抑制劑為玻瑪西林(abemaciclib)。在另一實施例中，CDK4/CDK6抑制劑為帕博希布(palbociclib)。在另一實施例中，CDK4/CDK6抑制劑為利波西利(ribociclib)。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為突變胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽同時、分開或依序組合使用以用於治療癌症。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，其用以同時、分開或依序用於治療癌症。在一個實施例中，化合物為式I-VI化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，EGFR抑制劑為埃羅替尼(erlotinib)。在另一實施例中，EGFR抑制劑係阿法替尼(afatinib)。在另一實施例中，EGFR抑制劑為吉非替尼(gefitinib)。在另一實施例中，EGFR抑制劑係西妥昔單抗(cetuximab)。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為突變胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽同時、分開或依序組合使用以治療癌症，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽，其用以同時、分開或依序用於治療癌症。在一個實施例中，化合物為式I-VI化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，ERK抑制劑係LY3214996。在另一實施例中，ERK抑制劑係LTT462。在另一實施例中，ERK抑制劑係KO-947。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為突變胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量之根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及鉑劑，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與鉑劑或其醫藥學上可接受之鹽同時、分開或依序組合使用以治療癌症，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及鉑劑，其用以同時、分開或依序用於治療癌症。在一個實施例中，化合物為式I-VI化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，鉑劑為順鉑。在另一實施例中，鉑劑為卡鉑。在另一實施例中，鉑劑為奧沙利鉑(oxaliplatin)。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為突變胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
本發明亦提供一種治療癌症之方法，該方法包含向有需要之患者投與有效量的根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及培美曲塞，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其與培美曲塞同時、分開或依序組合使用以治療癌症，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。本發明亦提供一種組合，其包含根據式I-VI中任一者之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及培美曲塞，其用以同時、分開或依序用於治療癌症，其中該癌症具有一或多種表現突變KRas G12C蛋白之細胞。在一個實施例中，化合物為式I-VI化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在另一實施例中，癌症為非小細胞肺癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，亦向患者投與鉑劑。在另一實施例中，鉑劑為順鉑。在另一實施例中，鉑劑為卡鉑。在另一實施例中，鉑劑為奧沙利鉑。在另一實施例中，癌症為大腸直腸癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一實施例中，癌症為突變胰臟癌，其中該癌症具有一或多種表現KRas G12C突變蛋白之細胞。在另一個實施例中，本發明包含一種治療患有其他來源之癌症的KRas G12C突變的方法。
如本文所使用之術語「醫藥學上可接受之鹽」係指被認為對臨床及/或獸用可接受的化合物之鹽。醫藥學上可接受之鹽之實例及用於製備其之常見方法可見於「Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use」P. Stahl, 等人, 第2修訂版, Wiley-VCH, 2011及S.M. Berge, 等人, 「Pharmaceutical Salts」,Journal of Pharmaceutical Sciences , 1977, 66(1), 1-19。
本發明之醫藥組合物可使用醫藥學上可接受之添加劑製備。如本文所使用之術語「(一或多種)醫藥學上可接受之添加劑」用於醫藥組合物，係指與組合物或調配物之其他添加劑可相容且對患者無害的一或多種載劑、稀釋劑及賦形劑。用於其製備之醫藥組合物及方法之實例可見於「Remington: The Science and Practice of Pharmacy」, Loyd, V., 等人編, 第22版, Mack Publishing Co., 2012。醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及賦形劑之非限制性實例包括以下：鹽水、水、澱粉、糖、甘露醇及二氧化矽衍生物；黏合劑，諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠及聚乙烯-吡咯啶酮；高嶺土及膨潤土；及聚乙基二醇。
如本文所用，術語「有效量」係指有效治療病症或疾病(諸如癌病變或異常細胞生長及/或細胞***之進程)之劑量的量。作為熟習此項技術者之主治醫師可易於藉由使用習知技術且藉由觀測類似情況下所獲得之結果來測定有效量。每天治療之劑量通常處於每天約1 mg或每天兩次與每天1000 mg或每天兩次之間，更佳每天100 mg或每天兩次與每天900 mg或每天兩次之間的範圍內。在測定有效量或有效劑量之化合物中所考慮之因素包括：是否將投與化合物或其鹽；共同投與其他試劑(若使用)；待治療患者之物種；患者體型、年齡及一般健康狀況；病症介入度或階段及/或嚴重程度；個別患者之反應；投與模式；所投與之製劑之生物可用性特徵；所選劑量方案；及其他伴隨藥物的使用。
治療醫師、獸醫或其他醫學人員將能夠測定出用於治療有需要之患者的化合物之有效量。較佳醫藥組合物可調配為用於經口投與之錠劑或膠囊、用於經口投與之溶液或可注射溶液。錠劑、膠囊或溶液可以對於治療需要治療癌症之患者有效之量包括本發明化合物。
如本文所使用，術語「治療(treating、to treat或treatment」包括減緩、降低或逆轉現有症狀、病症、病況之進程或嚴重程度，其可包括特異性減緩癌病變之生長或異常細胞生長及/或細胞***之進程。
如本文所用，術語「患者」係指需要治療之哺乳動物。較佳地，患者為需要治療癌症(例如患有KRas G12C突變之癌症)之人類。
某些縮寫定義如下：「ACN」係指乙腈；「AIBN」係指偶氮二異丁腈；「Boc-Gly-OH」係指N-(第三丁氧基羰基)甘胺酸；「DCM」係指二氯甲烷；「DIEA」係指N,N-二異丙基乙胺；「DMAP」係指4-二甲胺基吡啶；「DMEM」係指達爾伯克改良伊格爾培養基(Dulbecco's modified Eagle's medium)；「DMF」係指N,N-二甲基甲醯胺；「DMSO」係指二甲亞碸；「DNA」係指脫氧核糖核酸；「DPEPhosPdCl2 」係指二氯雙(二苯基膦苯基)醚鈀(II)；「DTT」係指二硫蘇糖醇；「EDTA」係指乙二胺四乙酸；「EGTA」係指乙二醇-雙(β-胺乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸；「ELISA」係指酶聯結免疫吸附分析；「ERK」係指細胞外信號調節激酶；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「EtOH」係指乙醇；「FBS」係指胎牛血清；「GDP」係指鳥苷二磷酸；「GTP」係指鳥苷三磷酸；「HPLC」係指高效液相層析；「HRP」係指辣根過氧化酶；「IPA」係指異丙醇；「IPAm」係指異丙基胺；「LC-ES/MS」係指液相層析-電噴質譜分析；「LC-MS」係指液相層析質譜分析；「MAPK」係指促***原-活化的蛋白激酶；「MeOH」係指甲醇；「NaOMe」係指甲醇鈉；「NBS」係指N-溴代丁二醯亞胺；「NCS」係指N-氯代二醯亞胺；「NMP」係指1-甲基吡咯啶-2-酮；「PCR」係指聚合酶鏈反應；「RPMI」係指洛斯維·帕克紀念研究所(Roswell Park Memorial Institute)；「SCX」係指較強陽離子交換；「TEA」係指三乙胺；「TFA」係指三氟乙酸；及「THF」係指四氫呋喃。
個別異構體、對映異構體、非對映異構體及滯轉異構體可在合成下文所列之化合物中之任何適宜點處藉由諸如選擇性結晶技術或對掌性層析法之方法分離或分解(參見例如J. Jacques, 等人, 「Enantiomers, Racemates, and Resolutions」, John Wiley and Sons公司, 1981, 及E.L. Eliel及S.H. Wilen,「Stereochemistry of Organic Compounds」, Wiley-Interscience, 1994)。本發明包括某些化合物，其為滯轉異構體且其可以不同構形或作為不同旋轉異構物存在。滯轉異構體為以由圍繞單鍵之受限旋轉產生之不同構形存在的化合物。若圍繞單一旋轉之能量障壁足夠高且相互轉化之速率足夠慢以允許個別旋轉異構體彼此分離，則滯轉異構體可分離為單獨化學物種。本發明涵蓋本文所揭示或可使用本文所揭示之化合物製成的所有異構體、對映異構體、非對映異構體及滯轉異構體。
式I-VI中任一者之化合物易於轉化成且可經分離作為醫藥學上可接受之鹽。鹽形成可發生在添加醫藥學上可接受之酸時以形成酸加成鹽。鹽亦可在去除氮或氧之保護基(亦即移除保護基)同時形成。用於鹽形成之實例、反應及條件可見於Gould, P.L., 「Salt selection for basic drugs,」International Journal of Pharmaceutics ,33 : 201-217 (1986)；Bastin, R.J., 等人「Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities,」Organic Process Research and Development ,4 : 427-435 (2000)；及Berge, S.M.,等人, 「Pharmaceutical Salts,」Journal of Pharmaceutical Sciences ,66 : 1-19, (1977)中。
本發明化合物或其鹽可藉由多種程序製備，該等程序中之一些在以下製備及實例中加以說明。各所述途徑之特定合成步驟可以不同方式組合或與不同途徑之步驟結合以製備本發明化合物或鹽。各步驟於以下製備中之產物可藉由習知方法回收，包括萃取、蒸發、沈澱、層析、過濾、研磨及結晶。
流程 1
Figure 02_image043
流程1步驟A描繪在諸如CCl4 之適合溶劑中使用NBS及AIBN將化合物(1)溴化以得到化合物(2)。步驟B展示在諸如EtOH及水之適合溶劑系統中使用氰化鉀回流對化合物(2)之親核取代以得到化合物(3)。在步驟C中展示在諸如DMF之適合溶劑中使用氫化鈉將異硫氰酸乙氧基羰酯添加至化合物(3)中且隨後環化為化合物(4)。在步驟D中描繪在回流DMSO中用NaOH水溶液使化合物(4)發生鹼性脫除保護基，且隨後在諸如THF及DMF之溶劑系統中使用二碳酸二第三丁酯與諸如DIEA及催化DMAP之適合鹼進行再保護以得到化合物(5)。步驟E展示在諸如1,4-二㗁烷之適合溶劑中，使用適合的鹼，諸如乙酸鉀，及催化劑配位體系統，諸如乙酸鈀及1,1'-雙(二異丙基膦基)二茂鐵，使化合物(5)之溴與雙(頻哪醇根基)二硼反應以得到化合物(6)。熟習此項技術者應認識到，多種催化劑配位體組合可用於提供此反應。
流程 2
Figure 02_image045
流程2描繪合成化合物(6)之替代途徑。步驟A描繪在諸如EtOH之適當溶劑中使用諸如硼氫化鈉之適當還原劑還原苯甲醛(7)以得到化合物(8)。步驟B展示在諸如DCM之適當溶劑中使用亞硫醯氯使化合物(8)氯化以得到化合物(9)。步驟C描繪在諸如DMSO之適當溶劑中使用氰化鉀對化合物(9)之親核取代以得到化合物(3)。在步驟D中展示在諸如DMF之適合溶劑中使用氫化鈉將異硫氰酸乙氧基羰酯添加至化合物(3)中，且隨後利用L-脯胺酸及CuI環化以得到化合物(4)。在步驟E中描繪在回流DMSO中用NaOH水溶液使化合物(4)發生鹼性脫除保護基，且隨後在諸如THF之溶劑中使用二碳酸二第三丁酯與諸如DIEA及催化DMAP之適合鹼進行再保護以得到化合物(5)。步驟F展示在諸如1,4-二㗁烷之適合溶劑中，使用適合的鹼，諸如乙酸鉀，及催化劑配位體系統，諸如乙酸鈀及雙(2-二苯膦基苯基)醚，使化合物(5)之溴與雙(頻哪醇根基)二硼反應以得到化合物(6)。熟習此項技術者應認識到，多種催化劑配位體組合可用於提供此反應。
流程 3
Figure 02_image047
流程3步驟A描繪在MeOH中使用硼氫化鈉還原化合物(10)醛，且隨後在諸如THF之溶劑中使用甲烷磺酸酐與諸如DIEA之適合鹼進行甲磺酸化以得到化合物(11)。用於將化合物(11)轉變為化合物(12)之條件基本上類似於流程1步驟B中發現之彼等條件。步驟C中展示在諸如DMF之適合溶劑中使用第三丁醇鉀將異硫氰酸乙氧基羰酯添加至化合物(12)中，且隨後環化為化合物(13)。用於將化合物(13)轉變為化合物(14)之條件基本上類似於流程1步驟D中發現之彼等條件。步驟E展示在諸如1,4-二㗁烷之適合溶劑中，使用適合的鹼，諸如乙酸鉀，及催化劑配位體系統，諸如DPEPhosPdCl2，使化合物(14)之溴與雙(新戊基二醇)二硼反應以得到化合物(15)。熟習此項技術者應認識到，多種催化劑配位體組合可用於提供此反應。
流程 4
Figure 02_image049
流程4步驟A描繪自化合物(16)與5-氟-2-甲氧基苯胺之反應形成硫脲，同時維持較低反應溫度，之後進行鹼性脫除保護基，得到化合物(17)。步驟B展示在添加溴後，化合物(17)於氯仿中之環化，得到化合物(18)。步驟C描繪化合物(18)之去甲基化，其可藉由添加BBr3 來實現，同時在惰性氛圍下維持冷的反應混合物，得到化合物(19)。步驟D展示在諸如1,4-二㗁烷之溶劑系統中，使用諸如TEA及催化DMAP之適合鹼用二碳酸二第三丁酯保護化合物(19)以得到化合物(20)。用諸如吡啶之鹼，接著用三氟甲烷磺酸酐在諸如DCM之溶劑中處理化合物(20)，得到如步驟E所示之化合物(21)。步驟F描繪在諸如1,4-二㗁烷之適合溶劑中，使用諸如乙酸鉀之適合鹼及諸如肆(三苯基膦)鈀(0)之催化劑，使化合物(21)之三氟甲磺酸酯與雙(頻哪醇根基)二硼反應，得到化合物(22)。熟習此項技術者應認識到，多種催化劑配位體組合可用於提供此反應。
流程 5
Figure 02_image051
流程5描繪合成化合物(22)之替代途徑。步驟A描繪自化合物(23)與2-溴-5-氟苯胺在諸如THF之溶劑中反應形成硫脲，隨後進行鹼性脫除保護基，得到化合物(24)。步驟B展示在諸如硫酸之溶劑中使用諸如三溴吡錠之適當溴化劑使化合物(24)溴化及環化以得到化合物(25)。步驟C展示在諸如DCM之溶劑系統中使用諸如DMAP之適合的鹼用二碳酸二第三丁酯保護化合物(25)以得到化合物(26)。步驟D描繪化合物(26)經由在諸如THF之溶劑中在低溫下用氫化鈉處理，接著添加正丁基鋰及硼酸三異丙酯而轉變為化合物(22)。
流程 6
Figure 02_image053
流程6步驟A描繪化合物(27)在諸如DMF之適當溶劑中用NCS氯化，得到化合物(28)。步驟B展示以下桑德邁爾反應(Sandmeyer reaction)：將化合物(28)之苯胺氮轉化為碘，其條件將被熟習此項技術者知曉，以得到化合物(29)。步驟C展示化合物(29)之酯鹼性水解成化合物(30)之酸。
流程 7
Figure 02_image055
流程7步驟A-C以基本上類似於流程6步驟A-C中發現之方法的方式進行，得到化合物(32-34)。
流程 8
Figure 02_image057
流程8步驟A以基本上類似於流程6步驟A中之方法的方式進行，得到化合物(36)。步驟B展示以下桑德邁爾反應：將化合物(36)之苯胺氮轉化為溴，其條件將被熟習此項技術者知曉，以得到化合物(37)。步驟C以基本上類似於流程6步驟C中之方法的方式進行，得到化合物(38)。
流程 9
Figure 02_image059
流程9步驟A以基本上類似於流程6步驟A中之方法的方式進行，得到化合物(40)。步驟B以基本上類似於流程8步驟B中之方法的方式進行，得到化合物(41)。
流程 10
Figure 02_image061
流程10步驟A描繪在諸如DCM之適合溶劑中，用諸如三乙醯氧基硼氫化鈉之適合還原劑，使化合物(42)與苯甲醛之間進行還原胺化，得到化合物(43)。步驟B展示在諸如DCM之溶劑中，使用丙基膦酸酐與諸如TEA之適合的鹼，使化合物(43)與受碳保護之胺基酸發生醯胺偶合，得到化合物(44)。步驟C描繪在諸如DCM之溶劑中，使用TFA對化合物(44)進行酸性脫除保護基及重排以得到化合物(45)。步驟D展示在諸如THF之溶劑中使用諸如氫化鋰鋁之還原劑對化合物(45)進行整體醯胺還原以得到化合物(46)。步驟E描繪在碳酸氫鈉水溶液中使用二碳酸二第三丁酯保護化合物(46)以得到化合物(47)。步驟F展示藉助於氫化使化合物(47)脫除保護基，得到化合物(48)。
流程 11
Figure 02_image063
流程11展示在-78℃下在諸如DCM之溶劑中，使用亞硫醯氯及咪唑環化化合物(49)，繼而用含高碘酸鈉及氯化釕(III)之ACN處理，得到化合物(50-R)。S對映異構體(50-S)使用相同條件合成。
流程 12
Figure 02_image065
在流程12步驟A中，在諸如DCM之溶劑中使用諸如N,N-二環己基碳化二亞胺之適合的偶合劑，化合物(51)與苯甲基甘胺酸乙酯之間展示出醯胺偶合，得到化合物(52)。步驟B描繪使用諸如TFA之酸在諸如DCM之溶劑中環化化合物(52)與化合物(53)。步驟C描繪在諸如THF之溶劑中用諸如氫化鋰鋁之還原劑對化合物(53)進行整體醯胺還原及脫除保護基，得到化合物(54)。步驟D展示在諸如MeOH之溶劑中使用諸如Pd(OH)2 之適合的催化劑將化合物(54)氫化成化合物(55)。步驟E描繪對化合物(55)之二碳酸二第三丁酯保護且後續用磷酸形成鹽，得到化合物(56)。
流程 13
Figure 02_image067
在流程13中，化合物(57)表示來自流程6-9之苯甲酸以及市售苯甲酸。步驟A中展示在諸如THF之溶劑中使用HATU及諸如DIEA之適當鹼，使化合物(57)與化合物(58)之間進行醯胺偶合，得到化合物(59)。替代地，在諸如THF之溶劑中使用2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三𠯤及諸如4-甲基嗎啉之適當鹼進行醯胺偶合。熟習此項技術者將認識到有多種進行醯胺偶合之條件。步驟B描繪在諸如DMF之溶劑中使用諸如氫化鈉之適當鹼使化合物(59)分子內環化為化合物(60)。
流程 14
Figure 02_image069
流程14步驟A以基本上類似於流程13步驟A中之方法的方式進行，得到化合物(63)。步驟B由以下組成：以基本上類似於流程13步驟B中之方法的方式環化化合物(63)，隨後用碘代甲烷甲基化。在此步驟之後回收化合物(64)及(65)。
流程 15
Figure 02_image071
流程15步驟A描繪化合物(66)經由用含三氟乙酸鉈(III)之TFA處理，隨後在一氧化碳氛圍下添加氧化鎂、氯化鋰及MeOH與諸如氯化鈀(II)之催化劑而環化，得到化合物(67)。步驟B展示在濃硫酸中使用硝酸鉀使化合物(67)硝化，得到化合物(68)。步驟C中展示在諸如DCM及TFA之溶劑系統中使用Pt/C氫化化合物(68)上之硝基，得到化合物(69)。步驟D展示以下桑德邁爾反應：將化合物(69)之苯胺氮轉化為氯，其條件將被熟習此項技術者知曉，以得到化合物(70)。步驟E描繪使用諸如NaOH水溶液之適合鹼在加熱下水解化合物(70)，得到化合物(71)。步驟F中展示在諸如DMF及THF之溶劑系統中，使用諸如NaH之適合鹼，用化合物(50-R)使化合物(71)烷基化，以得到化合物(72)。步驟G描繪在諸如DMF之溶劑中使用HATU及諸如DIEA之適當鹼在化合物(72)中進行分子內醯胺偶合，得到化合物(73)。
流程 16
Figure 02_image073
流程16步驟A以基本上類似於流程6步驟A中之方法的方式進行，得到化合物(75)。步驟B展示以下桑德邁爾反應：將化合物(75)之苯胺氮轉化為碘，其條件將為熟習此項技術者已知的，以得到化合物(76)。步驟C-E以基本上類似於流程15步驟E-G中之方法的方式進行，得到化合物(77-79)。
流程 17
Figure 02_image075
流程17步驟A描繪在諸如乙酸之適當溶劑中用諸如NCS之適當氯化劑在加熱下使化合物(80)氯化，得到化合物(81)。步驟B描繪在諸如THF之溶劑中，使用三苯基膦及偶氮二甲酸二異丙酯，在化合物(81)與(82)之間進行光延反應以得到化合物(83)。步驟C展示在諸如DCM之適當溶劑中使用二異丙胺及氯甲酸1-氯乙酯使化合物(83)脫苯甲基化，得到化合物(84)。步驟D描繪在諸如THF及水之溶劑系統中使用諸如氫氧化鋰之適當的鹼對化合物(84)之酯進行鹼性水解，得到化合物(85)。步驟E中描繪在諸如DCM之溶劑中使用丙基膦酸酐與諸如TEA之適合的鹼使化合物(85)發生分子內醯胺偶合，得到化合物(86)。
流程 18
Figure 02_image077
流程18展示化合物(37)與化合物(87)偶合，且後續在加熱下在諸如DMF之溶劑中使用諸如碳酸銫之適當的鹼環化，得到化合物(88)。
流程 19
Figure 02_image079
流程19步驟A展示化合物(89)經由在諸如含氘化EtOH之D2 O中的溶劑系統中用諸如KOH之適合的鹼處理而轉化為化合物(90)。步驟B描繪化合物(90)與鎂在諸如THF之溶劑中格林納反應(Grignard reaction)，得到化合物(91)。步驟C中展示在諸如THF之溶劑中用13 CO2 使化合物(91)羧化，得到化合物(92)。步驟D展示在諸如DCM之溶劑中用催化DMF使化合物(92)與乙二醯氯反應，得到化合物(93)。
流程 20
Figure 02_image081
在流程20中，化合物(94)表示流程13-18中所述之三環核心。在步驟A中，在THF中使用諸如硼烷二甲硫複合物之適合的還原劑還原化合物(94)中之醯胺，得到化合物(95)。如在流程1-5中所描述，化合物(94)及化合物(95)皆可在加熱下在諸如1,4-二㗁烷及水之溶劑系統中，使用適合的催化劑(諸如1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀)與諸如磷酸三鉀之適合的鹼，與
Figure 109142894-A0101-12-0030-1
酸酯進行鈴木交叉偶合(Suzuki cross-coupling)，得到化合物(96)。此偶合可替代地使用諸如DPEPhosPdCl2 之適合的催化劑與諸如碳酸銫之鹼在加熱下在諸如甲苯之溶劑中進行。熟習此項技術者將認識到，存在許多可用以進行此類型轉化之催化劑、鹼及溶劑組合。步驟C展示在諸如DCM之溶劑中，用諸如TFA之酸對化合物(96)進行酸性脫除保護基，得到化合物(97)。步驟D展示化合物(97)與搭配物之間的偶合以得到式I化合物。搭配物可為酸氯化物、羧酸或溴化氰。在使用酸氯化物之情況下，在諸如DCM之溶劑中使用適合的鹼，諸如TEA或DIEA。在諸如EtOAc、THF及水之兩相溶劑系統中，酸氯化物亦可與作為鹼之碳酸鉀一起使用。在搭配物為羧酸之情況下，條件包括在諸如DMF之溶劑中的諸如丙基膦酸酐之適合的偶合劑與諸如DIEA之適合的鹼。若搭配物為溴化氰，則將諸如NaOH水溶液之適合的鹼用於諸如DCM之溶劑中。
製備及實例 以下製備及實例進一步說明本發明且表示本發明化合物之典型合成，但不應理解為以任何方式限制本發明之範疇。試劑及起始物質為易於獲得的或可藉由已知程序或藉由採用各種修改而易於合成，該等修改可由一般熟習此項技術者做出。
化合物可藉由在Agilent HP1100液相層析系統上進行之液相層析-電噴質譜分析(LC-ES/MS)來表徵。在接合至HP1100 HPLC之質量選擇性偵測器四極質譜儀上進行電噴質譜分析量測(在正及/或負模式中獲得)。LC-MS條件(低pH)：管柱：PHENOMENEX® GEMINI® NX C-18 2.1 × 50 mm 3.0 µm；梯度：3分鐘內5-100% B，隨後100% B 0.75分鐘；管柱溫度：50℃+/-10℃；流動速率：1.2 mL/min；溶劑A：具有0.1% HCOOH之去離子水；溶劑B：含0.1%甲酸之ACN；波長214 nm。替代LC-MS條件(高pH)：管柱：WATERSTM XTERRA® MS C-18管柱2.1 × 50 mm，3.5 m；梯度：5% 溶劑A 0.25分鐘，3分鐘內5%至100%溶劑B及100%溶劑B 0.5分鐘或3分鐘內10%至100%溶劑B及100%溶劑B 0.75分鐘之梯度；管柱溫度：50℃+/-10℃；流動速率：1.2 mL/min；溶劑A：10 mM NH4 HCO3 pH 9；溶劑B：ACN；波長：214 nm。
製備型逆相層析法在配備有質量選擇性偵測器質譜儀及Leap自動進樣器/溶離份收集器之Agilent 1200 LC-ES/MS上進行。高pH方法在具有10×20 mm保護件的75×30 mmPHENOMENEX® GEMINI® -NX，5 µm粒徑管柱上運作。流動速率為85 mL/min。溶離劑為含10 mM碳酸氫銨(pH 10)之ACN。
製備 1 1,3-二溴-2-(溴甲基)苯
Figure 02_image083
NBS (35.0 g，195 mmol)添加至2,6-二溴甲苯(50.0 g，194 mmol)於四氯化碳(500 mL)中之溶液中。將混合物加熱至80℃且添加AIBN (3.20 g，19.1 mmol)。使混合物回流16小時。此後，將混合物冷卻至環境溫度且過濾。濾液用EtOAc稀釋且用水、飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物在高真空下乾燥，得到標題化合物(67.5 g，84%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.58 (2H, d), 7.04 (1H, t), 4.86 (2H, s)。
製備 2 (2,6-二溴苯基)甲醇
Figure 02_image085
將硼氫化鈉(7.83 g，207 mmol)以10分鐘時間間隔分三份添加至2,6-二溴苯甲醛(148.7 g，552.3 mmol)於EtOH (1.4 L)中之0℃攪拌溶液中。在最終添加後，攪拌混合物30分鐘，隨後用飽和NH4 Cl水溶液(600 mL)小心地淬滅。添加DCM (1.75 L)及水(200 mL)且分離各層。用DCM再萃取水層一次。合併之有機物經硫酸鈉乾燥，且用EtOAc (2×500 mL)沖洗經由二氧化矽墊過濾。濾液在真空中濃縮，溶解於甲苯中，且再次在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物(148.7 g，99%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 7.66 (2H, d), 7.17 (1H, t), 5.20 (1H, t), 4.74 (2H, d)。
製備 3 1,3-二溴-2-(氯甲基)苯
Figure 02_image087
歷經1小時向用DMF (0.5 mL)處理之(2,6-二溴苯基)甲醇(199.3 g，749.4 mmol)於DCM (1.5 L)中之0℃溶液中逐滴添加亞硫醯氯(160 mL，2196 mmol)。此後，使混合物升溫至環境溫度且接著加熱至50℃隔夜。移除熱量且將反應物冷卻至0℃，隨後小心地用水(500 mL)淬滅。用DCM稀釋混合物且分離各層。有機物用飽和氯化鈉水溶液、水且再次用飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之標題產物(206.98 g，95%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 7.75 (2H, d), 7.26 (1H, t), 4.95 (2H, s)。
製備 4 2-(2,6-二溴苯基)乙腈
Figure 02_image089
使1,3-二溴-2-(溴甲基)苯(57.0 g，137 mmol)及氰化鉀(28.0 g，417 mmol)於EtOH (350 mL)及水(90 mL)中之混合物回流5小時。隨後使混合物冷卻至環境溫度且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於EtOAc中且用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。用EtOAc萃取水相。合併之有機萃取物用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由矽膠急驟層析純化，用10-100% DCM/己烷溶離，得到標題化合物(34.5 g，87%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.62 (2H, d), 7.12 (1H, t), 4.14 (2H, s)。
替代製備 4 將氰化鉀(142.2 g，2183.5 mmol)添加至1,3-二溴-2-(氯甲基)苯(206.98 g，727.83 mmol)於DMSO (600 mL)中之溶液中且在環境溫度下攪拌2天。此後，將混合物傾入冰水中且攪拌2小時，此時形成白色沈澱物。過濾沈澱物且用水洗滌三次，隨後在真空烘箱中乾燥。所得固體藉由矽膠管柱層析純化，用10-70% DCM/己烷溶離，得到呈白色固體狀之標題化合物(189.23 g，94%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 7.78 (2H, d), 7.28 (1H, t), 4.22 (2H, s)。
製備 5 N-(4-溴-3-氰基-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸乙酯
Figure 02_image091
使2-(2,6-二溴苯基)乙腈(20.0 g，71.3 mmol)於DMF (200 mL)中之溶液冷卻至0℃。逐份添加氫化鈉(60質量%於石蠟油中) (2.85 g，71.3 mmol)。在添加之後，在0℃下攪拌混合物10分鐘，接著在0-5℃下逐滴添加異硫氰酸乙氧基羰酯(8.60 mL，71.4 mmol)。在添加後，在環境溫度下攪拌混合物1小時，隨後在100℃下加熱4小時。此後，在真空中蒸發溶劑。將殘餘物於EtOAc及飽和碳酸氫鈉溶液之混合物中攪拌。所得沈澱物藉由過濾收集，用水洗滌，且在60-65℃下在真空烘箱中乾燥隔夜，得到標題化合物(10.5 g，45%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 322.8/324.8 [M-H]- 。
替代製備 5 將氫化鈉(60質量%於石蠟油中) (24.85 g，621.3 mmol)懸浮於DMF (500 mL)中且冷卻至0℃。歷經1小時以逐滴方式向冷懸浮液中添加2-(2,6-二溴苯基)乙腈(169.14 g，615.19 mmol)於DMF (600 mL)中之溶液，使得溫度不升至7℃以上。30分鐘後，歷時30分鐘同時仍在0℃下添加異硫氰酸乙氧基羰酯(77.81 mL，646.0 mmol)。在0℃下攪拌混合物10分鐘，隨後自冰浴移除且再攪拌20分鐘。此後，添加L-脯胺酸(14.16 g，123.0 mmol)及碘化亞銅(11.71 g，61.49 mmol)且將混合物加熱至65℃持續4.5小時。用0.5 M經EtOAc (1.6 L)稀釋之EDTA水溶液(4 L)處理混合物且劇烈攪拌隔夜。此後，過濾所得混濁漿液且用水及EtOAc洗滌所收集之固體。在真空下抽吸乾燥固體1.5小時，隨後在真空烘箱中再乾燥2小時，得到呈白色固體狀之標題化合物(187.24 g，77%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 11.76 (1H, s), 8.01 (1H, d), 7.65 (1H, d), 7.27 (1H, t), 4.90 (2H, q), 1.31 (3H, t)。
製備 6 2-胺基-4-溴-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image093
將5 N NaOH (765 mL，3825 mmol)添加至N-(4-溴基-3-氰基-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸乙酯(155 g，476.6 mmol)於DMSO (480 mL)中之溶液中。將混合物加熱至125℃隔夜。此後，移除熱源且將反應物傾入冰水(4.2 L)中且劇烈攪拌10分鐘。形成沈澱物，將其過濾、用水洗滌且在真空烘箱中乾燥2天，得到呈黃色固體狀之標題產物(73.6 g，61%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 7.96 (2H, s), 7.70 (1H, d), 7.46 (1H, d), 7.02 (1H, t)。
製備 7 N-(4-溴-3-氰基-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image095
2-胺基-4-溴-苯并噻吩-3-甲腈(20 g，79.2 mmol)、DIEA (21 mL，120 mmol)及DMAP (800 mg，6.55 mmol)於THF (270 mL)及DMF (40 mL)中之溶液用二碳酸二第三丁酯(19.6 g，87.1 mmol)處理。在氮氣下在環境溫度下攪拌混合物18小時。反應混合物用水、碳酸氫鈉溶液及EtOAc稀釋，接著攪拌10分鐘。所得沈澱物藉由過濾收集，用冷EtOAc洗滌且在60℃下在真空烘箱中乾燥隔夜，得到呈米色固體狀之標題化合物(10.8 g，38.6%)。濾液用EtOAc進一步萃取兩次。合併之有機萃取物用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由矽膠急驟層析純化，用20-100% DCM/己烷溶離，得到額外化合物(12.5 g，45%)，總產量為23.3 g (83%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 351/353 [M-H]- 。
替代製備 7 將DIEA (77 mL，441 mmol)及DMAP (2 g，16 mmol)添加至2-胺基-4-溴-苯并噻吩-3-甲腈(74.5 g，294 mmol)於THF (2 L)中之溶液中，接著添加二碳酸二第三丁酯(73.1 g，325 mmol)。在環境溫度下攪拌混合物隔夜。此後，用水、EtOAc及飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋混合物，接著將其過濾，得到灰白色固體。此固體用水及EtOAc洗滌，隨後乾燥隔夜，得到標題產物(32 g，31%)。隨後分離濾液層，且用EtOAc萃取水層兩次。合併之有機物用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將所得殘餘物溶解於DCM (260 mL)中，音波處理，進一步用己烷(275 mL)稀釋，音波處理，濕磨，且過濾，得到額外標題產物(60.5 g，58%)且組合產量為92.5 g (89%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 351/353 [M-H]- 。
製備 8 N-[3-氰基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環(dioxaborolan)-2-基)苯并噻吩-2-基]胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image097
N-(4-溴基-3-氰基-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸第三丁酯(10.90 g，30.7 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(23.50 g，92.54 mmol)及乙酸鉀(9.05 g，92.2 mmol)於1,4-二㗁烷(150 mL)中之溶液在50℃下用氮氣充氣30分鐘。向燒瓶中裝1,1'-雙(二異丙基膦基)二茂鐵(2.25 g，5.38 mmol)及乙酸鈀(0.700 g，3.12 mmol)，隨後在100℃下在氮氣下加熱。2小時後，將混合物冷卻至環境溫度，用EtOAc稀釋，經由矽藻土過濾且用EtOAc洗滌。濾液用矽膠(150 g)處理，濃縮至乾燥，接著裝入濾筒中。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用0-50% DCM/己烷溶離，得到標題化合物(9.15 g，67%)。ES/MS m/z: 399.2 (M-H)。
替代製備 8 加熱1,4-二㗁烷(500 mL)至回流，同時用氮氣充氣1小時。隨後將溫度降低至80℃，同時繼續用氮氣充氣。在此溫度下，N-(4-溴基-3-氰基-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸第三丁酯(32 g，90.59 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(60 g，236 mmol)、乙酸鉀(26.67 g，271.8 mmol)，且最後添加乙酸鈀(2.03 g，9.04 mmol)及雙(2-二苯基膦基苯基)醚(8.54 g，15.9 mmol)。在100℃下加熱混合物三小時。此後，移除熱源且用EtOAc稀釋混合物，經由矽藻土過濾且在真空中濃縮。將所得殘餘物溶解於DCM中，用200 g二氧化矽處理且在真空中濃縮。將此二氧化矽置於前置管柱中，且物質經由矽膠層析純化，用10-95% DCM及預混合95% DCM/EtOAc溶液溶離。基於相對純度分離所得溶離份。各集合在真空中單獨地濃縮，在庚烷中音波處理，濕磨，過濾且用庚烷沖洗。所得固體乾燥隔夜，接著合併，得到標題化合物(23.86 g，65%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 11.32 (1H, s), 8.02 (1H, d), 7.59 (1H, d), 7.34 (1H, t), 1.53 (9H, s), 1.37 (12H, s)。
製備 9 6-溴-2,3-二氟苯甲醇
Figure 02_image099
將6-溴2,3-二氟苯甲醛(20.0 g，88.7 mmol)溶解於MeOH (250 mL)中且逐份添加硼氫化鈉(6.70 g，177 mmol)。在放熱反應冷卻至環境溫度(約1小時)之後，將反應混合物傾入飽和氯化銨溶液中且用DCM萃取三次。合併之有機萃取物用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。在高真空下乾燥殘餘物隔夜，得到呈白色固體狀之標題化合物(19.5 g，97%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.37 (1H, m), 7.07 (1H, m), 4.88 (2H, m), 2.13 (1H, m)。
製備 10 甲烷磺酸(6-溴-2,3-二氟苯基)甲酯
Figure 02_image101
將6-溴-2,3-二氟苯甲醇(19.5 g，85.7 mmol)溶解於THF (200 mL)中且添加DIEA (18.0 mL，103 mmol)。將混合物冷卻至0℃且接著用甲烷磺酸酐(17.1 g，94.2 mmol)處理。在環境溫度下攪拌18小時之後，用EtOAc:甲基第三丁基醚(1:1)稀釋混合物且用冷水洗滌。分離各層且水溶液用EtOAc:甲基第三丁基醚(1:1)萃取兩次。合併之有機物用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂及碳酸鉀乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物(26.0 g，99+%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.44 (1H, m), 7.18 (1H, m), 5.43 (2H, d), 3.12 (3H, s)。
製備 11 2-(6-溴-2,3-二氟-苯基)乙腈
Figure 02_image103
使甲烷磺酸(6-溴-2,3-二氟苯基)甲酯(26.0 g，82.0 mmol)及氰化鉀(6.06 g，90.3 mmol)於EtOH (200 mL)及水(40.0 mL)中之混合物回流30分鐘且隨後冷卻至環境溫度。在真空中移除溶劑且將殘餘物懸浮於DCM中。用水、飽和碳酸氫鈉溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌混合物。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗產物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用10-100% DCM/己烷溶離，得到標題化合物(17.9 g，94%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.44 (1H, m), 7.15 (1H, m), 3.91 (2H, d)。
製備 12 N-(4-溴-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸乙酯
Figure 02_image105
將2-(6-溴-2,3-二氟-苯基)乙腈(17.9 g，77.2 mmol)於DMF (200 mL)中之溶液在冰浴中冷卻且隨後用第三丁醇鉀(9.30 g，81.2 mmol)逐份處理。在添加之後，攪拌混合物10分鐘(反應物變成深紅色)且逐滴添加異硫氰酸乙氧基羰酯(9.80 mL，81.4 mmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物1小時，且隨後在100℃下加熱30分鐘。隨後在冰浴中冷卻混合物10分鐘且在攪拌下緩慢添加水(500 mL)。所得沈澱物藉由過濾收集，用水及己烷沖洗且風乾。在60℃下在真空烘箱中進一步乾燥固體隔夜，得到標題化合物(24.5 g，84%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 340.8/342.8 [M-H]- 。
製備 13 2-胺基-4-溴-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image107
使N-(4-溴-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸乙酯(24.5 g，71.4 mmol)、DMSO (100 mL)及5 N NaOH (80.0 mL，400 mmol)之混合物回流4小時。將混合物冷卻至環境溫度且在劇烈攪拌的同時用冷水處理。所得沈澱物藉由過濾收集，用水洗滌，且在65℃下在真空烘箱中乾燥隔夜，得到標題化合物(15.5 g，80%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 268.8/270.8 [M-H]- 。
製備 14 N-(4-溴-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image109
標題化合物以基本上類似於製備方法7的方式由2-胺基-4-溴-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈製備。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 314.8/316.8 [M-t-Bu+H]+ 。
製備 15 N-[3-氰基-4-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧硼𠮿-2-基)-7-氟-苯并噻吩-2-基]胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image111
在氮氣下將N-(4-溴-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸第三丁酯(16.0 g，41.4 mmol)及雙(新戊基二醇)二硼(37.0 g，157 mmol)溶解於1,4-二㗁烷(300 mL)中。添加乙酸鉀(12.2 g，124 mmol)，且混合物在50℃用氮氣充氣1小時。添加DPEPhosPdCl2 (3.0 g，4.2 mmol)，且在95℃下加熱燒瓶1小時。隨後將混合物冷卻至環境溫度，在真空中濃縮至約100 mL，用庚烷(200 mL)稀釋，攪拌10分鐘，且隨後經由矽藻土過濾，用庚烷沖洗且庚烷:甲基第三丁基醚(1:1)。濃縮濾液，溶解於最少DCM中，且經由矽膠墊過濾，用EtOAc:庚烷(1:1)沖洗。用飽和氯化銨溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌濾液。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用5-50% (20%丙酮/DCM)/己烷溶離，得到標題化合物(13.0 g，78%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 11.6 (1H, s), 7.61 (1H, m), 7.20 (1H, m), 3.78 (4H, s), 1.54 (9H, s), 1.03 (6H, s)。
製備 16 (5-氟-2-甲氧基-苯基)硫脲
Figure 02_image113
合併異硫氰酸苯甲醯酯(110 g，671 mmol)及THF (875 mL)且在氮氣下冷卻至5℃。逐滴添加5-氟-2-甲氧基苯胺(83.2 mL，705 mmol)，同時維持內部反應溫度低於10℃。使混合物升溫至環境溫度且攪拌30分鐘。添加5 N NaOH (161 mL，805 mmol)及水(200 mL)且在回流下加熱混合物3.5小時。此後，添加水(500 mL)及乙酸異丙酯(800 mL)且將混合物冷卻至環境溫度。添加濃HCl水溶液以將pH調整至約9-10。分離各層。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。將EtOAc (360 mL)及己烷(840 mL)添加至殘餘物中且使混合物回流五分鐘。此後，使混合物冷卻至-20℃且使其靜置隔夜。濾出所得固體且用冷己烷洗滌所收集之固體，得到呈無色固體狀之標題化合物(118 g，88%)。ES/MS m/z: 201 (M+H)。
製備 17 7-氟-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-2-胺溴化氫
Figure 02_image115
在氮氣下將(5-氟-2-甲氧基-苯基)硫脲(118 g，571 mmol)及CHCl3 (2 L)之溶液冷卻至5℃。逐滴添加溴(30.1 mL，582 mmol)，同時維持內部反應溫度低於7℃。在0℃下攪拌混合物30分鐘，隨後在回流下加熱2.25小時。此後，使混合物冷卻至-20℃且使其靜置隔夜。濾出所得固體且用冷己烷洗滌，得到呈黃色固體狀之標題化合物(141 g，89%)。ES/MS m/z: 199 (M+H)。
製備 18 2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-醇溴化氫
Figure 02_image117
在0℃下在氮氣下，經由插管將BBr3 (150 mL，1589 mmol)添加至DCM (1.5 L)中。歷經15分鐘逐份添加7-氟-4-甲氧基-1,3-苯并噻唑-2-胺溴化氫(141 g，506 mmol)且使反應混合物緩慢升溫至環境溫度且攪拌隔夜。將混合物冷卻至0℃且小心地用MeOH淬滅，同時保持內部溫度低於10℃。在淬滅時，氣體輸出物鼓泡至冷5 N NaOH中。過濾所得固體且用冷DCM洗滌，得到呈無色固體狀之標題化合物(117 g，87%)。ES/MS m/z: 185 (M+H)。
製備 19 (7-氟-4-羥基-1,3-苯并噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image119
使含2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-醇溴化氫(117 g，441 mmol)之1,4-二㗁烷(1.5 L)冷卻至10℃。添加TEA (129 mL，926 mmol)，同時維持內部反應溫度低於15℃。添加DMAP (2.7 g，22 mmol)及二碳酸二第三丁酯(228 g，1014 mmol)且使反應混合物緩慢升溫至環境溫度且攪拌兩天。用水、EtOAc及飽和氯化鈉水溶液稀釋混合物，且分離各層。在真空中濃縮有機層。添加MeOH (900 mL)及NaOMe (5 M於MeOH中，132 mL)且在環境溫度下攪拌混合物隔夜。添加額外NaOMe (5 M於MeOH中，10 mL)且在環境溫度下攪拌混合物三小時，隨後在真空中濃縮。添加水及EtOAc且分離各個層。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮直至形成固體為止。添加己烷且過濾所得固體且用己烷洗滌，得到呈淡棕色固體狀之標題化合物(97.2 g，78%)。ES/MS m/z: 283 (M-H)。
製備 20 三氟甲烷磺酸2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-酯
Figure 02_image121
在氮氣下將(7-氟-4-羥基-1,3-苯并噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯(116 g，407 mmol)、DCM (1.4 L)及吡啶(66 mL, 814 mmol)合併且冷卻至5℃。逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(83 mL，488 mmol)同時維持內部反應溫度低於10℃。用水稀釋混合物且分離各層。用10%檸檬酸水溶液洗滌有機層。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由正相層析純化，，用25-28% B/A梯度(A：己烷，B：25% DCM/EtOAc)溶離，得到呈黃色固體狀之標題化合物(123 g，73%)。ES/MS m/z: 415 (M-H)。
製備 21 N-[(2-溴-5-氟-苯基)硫代胺甲醯基]苯甲醯胺
Figure 02_image123
用頂置式機械攪拌器攪拌2-溴-5-氟苯胺(250 g，1289.4 mmol)於THF (400 mL)中之溶液。使用加料漏斗歷經30分鐘添加含異硫氰酸苯甲醯酯(130 g，780.6 mmol)之THF (800 mL)。在添加期間使用水浴保持內部溫度低於30℃。在1.5小時之後，將反應混合物同等地倒入三個含有水(3 L)之4公升燒瓶中。所得固體經由燒結玻璃漏斗真空過濾。用去離子水(8 L)沖洗固體且在真空下風乾，得到呈淺棕色固體狀之標題化合物(456 g，99+%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 353/355 [M-H]- 。
製備 22 (2-溴-5-氟-苯基)硫脲
Figure 02_image125
向N-[(2-溴-5-氟-苯基)硫代胺甲醯基]苯甲醯胺(1600 g，4.53 mol)、THF (6 L)及MeOH (1.6 L)之懸浮液中添加5 N NaOH水溶液(1 L)。在環境溫度下攪拌18小時之後，經由矽藻土墊過濾反應混合物以移除黑色顆粒。用THF/MeOH，隨後100% MeOH沖洗該墊。在真空中移除溶劑，得到淺棕色固體。將冰水(4 L)添加至固體中，且使用頂置式攪拌器，分100 mL部分添加5 N HCl (約300 mL)，以將pH調整至7。添加額外冰水，且攪拌混合物約1小時。添加水(4 L)且在真空下經由較大燒結玻璃漏斗過濾懸浮液。用去離子水沖洗固體，且在移除大部分水之後，用己烷(8 L)沖洗固體且風乾。將固體置於50℃下之真空烘箱中24小時，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(1035 g，92%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 249/251 [M-H]- 。
製備 23 4-溴-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺
Figure 02_image127
用冰/氯化鈉浴冷卻硫酸(350 mL)，用頂置式機械攪拌器攪拌。歷經5分鐘時段逐份添加(2-溴-5-氟-苯基)硫脲(130.5 g，523.9 mmol)。在十分鐘之後，內部溫度達至約1℃。在氮氣下，歷經約15分鐘時段分8份添加三溴吡錠(185 g，549.53 mmol)，同時維持內部溫度低於5℃。使所產生之蒸氣鼓泡通過在冰水中冷卻之NaOH阱。在約0℃下攪拌75分鐘之後，使反應物升溫至環境溫度。隨後將反應物加熱至50℃之初始內部溫度，隨後逐漸加熱至59℃。在1.5小時之後，將反應物冷卻至環境溫度。將反應混合物傾入含有冰之較大燒瓶中。小心地用18.9 N NaOH (620 mL)將pH調整至約7。經由燒結玻璃漏斗過濾固體且用去離子水沖洗直至濾液pH匹配去離子水之pH為止。將固體風乾，隨後置放於在約50℃下之真空烘箱中24小時，得到呈淺棕色固體狀之標題化合物(129.3 g，99+%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 247/249 [M+H]+ 。
製備 24 N-(4-溴-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-基)胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image129
經由加料漏斗以控制氣體逸出之速率向4-溴-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺(370.6 g，1500 mmol)及DMAP (36.6 g，300 mmol)於DCM (1500 mL)中之攪拌懸浮液中逐份添加二碳酸二第三丁酯(388 g，1724 mmol)溶解於DCM (150 ml)中之溶液。在環境溫度下攪拌反應混合物1小時，且隨後再添加一份二碳酸二第三丁酯(5.0 g，23 mmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物30分鐘且接著添加10%檸檬酸水溶液(800 mL)且分離各層。水層用DCM萃取兩次且合併之有機萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌一次。在真空中濃縮有機層且向殘餘物中添加DCM (200 mL)及己烷(1800 mL)。將獲取之漿液過濾、風乾且保留收集之固體。在真空中濃縮濾液且向殘餘物中添加MeOH (500 mL)及甲醇鈉(20 mL，5 N於MeOH中，100 mmol)。在45℃下在真空中濃縮混合物。向殘餘物中添加MeOH (500 mL)及5 N NaOH (100 mL，500 mmol)。在45℃下在真空中濃縮混合物。向殘餘物中添加水及DCM且分離各層。水層用DCM萃取一次。有機物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。向殘餘物中添加100 mL DCM及900 mL己烷，將所得固體製成漿液，過濾，風乾，且與最初獲得之固體合併，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(489.55 g，94%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 290.8/292.8 [M-t-Bu+H]+ 。
製備 25 [2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]
Figure 109142894-A0101-12-0030-1
酸
Figure 02_image131
將三氟甲烷磺酸2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-酯(20.0 g，48.1 mmol)、乙酸鉀(14.2 g，144 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(97.7 g，385 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(0) (5.55 g，4.8 mmol)及1,4-二㗁烷(240 mL)合併且用氮氣鼓泡十分鐘。在80℃下加熱混合物隔夜，隨後冷卻至環境溫度且用水及EtOAc稀釋。分離各層。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。添加丙酮(500 mL)、水(500 mL)及乙酸銨(112 g，1443 mmol)。此後添加NaIO4 (309 g，1443 mmol)，同時維持內部反應溫度在18-23℃之間。在環境溫度下劇烈攪拌混合物隔夜。此後，添加EtOAc。將混合物攪拌30分鐘，經由矽藻土過濾，且分離各層。在真空中濃縮有機層。水層用飽和氯化鈉水溶液稀釋且用EtOAc萃取兩次。此等有機萃取物與先前濃縮之有機層合併。合併之萃取物用水、飽和氯化鈉水溶液、水及飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機層經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。用少量DCM將殘餘物在己烷中製成漿液。過濾所得固體且用己烷洗滌，得到呈淺棕色固體狀之標題化合物(13.4 g，89%)。ES/MS m/z: 313 (M+H)。
替代製備 25 在-17℃之內部溫度下，歷經15分鐘向氫化鈉(60%於石蠟油中) (34.6 g，865 mmol)於THF (2000 mL)中之懸浮液中添加N-(4-溴-7-氟-1,3-苯并噻吩-2-基)胺基甲酸第三丁酯(250.18 g，720.6 mmol)溶解於THF (500 mL)中之溶液，在該添加過程中維持內部溫度-10℃至-15℃。在添加後，在-10℃至-15℃下攪拌混合物15分鐘，此時氣體逸出停止。將反應混合物冷卻至-65℃之內部溫度，且隨後經由加料漏斗以使內部溫度維持在-60℃至-65℃的速率歷經30分鐘逐滴添加正丁基鋰(350 mL，2.5 M於己烷中，875 mmol)。在添加之後，在此溫度下攪拌反應混合物20分鐘，且隨後歷經15分鐘逐滴添加硼酸三異丙酯(416 ml，1800 mmol)，保持內部溫度低於-60℃。使反應混合物歷經5小時45分鐘緩慢升溫至內部溫度0℃，且接著小心地添加飽和氯化銨水溶液(400 mL)以控制氣體逸出。向混合物中添加水(400 mL)及EtOAc (400 mL)且分離各層。向水層中添加足夠1 N HCl水溶液以使pH達至3-4，且隨後用EtOAc萃取水層兩次。合併之有機萃取物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。向殘餘物中添加正庚烷(500 mL)且在55℃下在真空中濃縮混合物。向殘餘物中再添加一份正庚烷(500 mL)且在55℃下在真空中濃縮混合物。向固體殘餘物中添加200 mL DCM及1800 mL己烷且將混合物製成漿液。過濾固體，用己烷洗滌且風乾，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(217.2 g，94%)。ES/MS m/z: 313 (M+H)。
製備 26 4-胺基-3,5-二氯-2-氟-苯甲酸甲酯
Figure 02_image133
使4-胺基-2-氟-苯甲酸甲酯(27.0 g，160 mmol)及NCS (46.3 g，336 mmol)溶解於DMF (300 mL)中且在80℃下加熱。在40分鐘之後，將反應混合物傾倒於冰水上且用EtOAc萃取兩次。合併之有機萃取物用5 N NaOH洗滌一次，用0.2 N LiCl水溶液洗滌兩次，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到標題化合物(37.0 g，97%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 238/240 [M+H]+ 。 表1：以基本上類似於製備26之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 NMR
27
Figure 02_image135
 4-胺基-5-氯-2,3-二氟-苯甲酸 1 H NMR (DMSO-d6) d 12.96 (s, 1H), 7.54 (dd, J= 2.1, 6.9 Hz, 1H), 6.56 (bs, 2H)
28
Figure 02_image137
 4-胺基-5-氯-2-氟-3-甲基-苯甲酸甲酯 1 H NMR (CDCl3 ) d 7.80 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.56 (bs, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.14 (d, 3H)
製備 29 3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲酸
Figure 02_image139
合併碘化亞銅(10.0 g，51.5 mmol)、ACN (128 mL)及亞硝酸第三丁酯(13.6 mL，103 mmol)且在50℃下加熱混合物30分鐘，且接著向混合物中添加4-胺基-3,5-二氯-2-氟-苯甲酸甲酯(6.11 g，25.7 mmol)。注意到氣體逸出。在1小時40分鐘之後，在50℃下在真空中移除溶劑。添加水、EtOAc及1 N HCl水溶液。用EtOAc萃取水層兩次。合併之有機萃取物用亞硫酸氫鈉水溶液洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗混合物藉由矽膠急驟層析純化，用3-5% EtOAc/己烷溶離。將最清澈的溶離份合併並在真空中濃縮，得到甲酯中間物(5.85 g，65%)。
向3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲酸甲酯(5.85 g，16.8 mmol)中添加MeOH (170 mL)及1 N NaOH水溶液(17 mL)。在環境溫度下歷經40分鐘之攪拌過程中，物質完全溶解。在真空中移除MeOH。向殘餘物中添加EtOAc及1 N HCl水溶液。水層用EtOAc萃取兩次且合併之有機萃取物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到標題化合物(5.56 g，99%)：1 H NMR (CDCl3) d 8.063-8.08 (d, 1H, J= 6.34 Hz)。
製備 30 5-氯-2-氟-4-碘-3-甲基-苯甲酸甲酯
Figure 02_image141
將含4-胺基-5-氯-2-氟-3-甲基-苯甲酸甲酯(14.8 g，68.0 mmol)之ACN (100 mL)添加至碘化亞銅(15.7 g，82.4 mmol)、ACN (100 mL)及亞硝酸第三丁酯(12.3 mL，103 mmol)之攪拌混合物中。在N2 下在40℃下加熱混合物18小時。將混合物在真空中濃縮至初始體積之一半，用EtOAc稀釋，且經由矽藻土過濾兩次。所收集之濾液在真空中濃縮。粗混合物藉由矽膠急驟層析純化，用EtOAc/己烷溶離。將最清澈的溶離份合併且在真空中濃縮，得到標題化合物(22.46 g，52.8%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.91 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.53 (d, J= 3.1 Hz, 3H)。
製備 31 4-胺基-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸甲酯
Figure 02_image143
在環境溫度向4-胺基-2,5-二氟苯甲酸甲酯(25 g，127 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液中添加NCS (19.9 g，146 mmol)且隨後在45℃加熱混合物18小時。將反應混合物傾入水(1.5 L)及二***(1.2 L)之混合物中，且分離各層。用二***(1 L)萃取水層。合併之有機萃取物用冷的1 N NaOH水溶液、水及飽和氯化鈉水溶液洗。有機層經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用10-30% (75% EtOAc於DCM中)/己烷溶離，得到標題化合物(24.5 g，87%)。ES/MS m/z: 222.2 (M+H)。
製備 32 4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸甲酯
Figure 02_image145
將含4-胺基-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸甲酯(24.5 g，111 mmol)之ACN (100 mL)添加至溴化銅(6.2 g，28 mmol)及亞硝酸第三丁酯(20 mL，168 mmol)於ACN (100 mL)中之冷混合物中。歷經18小時使綠色混合物升溫至環境溫度。隨後用ACN稀釋反應混合物，經由矽藻土墊過濾，且用DCM沖洗。濃縮濾液且用DCM稀釋，再經由矽藻土過濾且用DCM沖洗。用水、飽和氯化銨溶液(2×)、飽和氯化鈉水溶液(2×)洗濾液，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用0-50% (10% EtOAc於DCM中)/己烷溶離，得到標題化合物(23.5 g，70%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.68 (1H, m), 3.99 (3H, s)。 表2：以基本上類似於製備32之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 NMR
33
Figure 02_image147
 4-溴-5-氯-2,3-二氟-苯甲酸 1 H NMR (DMSO-d6) d 7.89 (dd, J= 2.2, 6.2 Hz, 1H)
製備 34 4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸
Figure 02_image149
向4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸甲酯(10.8 g，37.8 mmol)於THF (100 mL)中之溶液中添加MeOH (50 mL)。在冰浴中冷卻均質溶液且逐滴添加2 N NaOH (60 mL，120 mmol)。添加後，在環境溫度下攪拌混合物30分鐘。在真空中移除有機溶劑。使水溶液冷卻且用5 N HCl (24 mL)將pH調整至約2.0。水溶液用EtOAc (3×)萃取。合併之有機萃取物用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。在60℃下在真空烘箱中乾燥所得殘餘物隔夜，得到標題化合物(10.3 g，99%)。1 H NMR (DMSO-d6) d 7.81 (dd, J= 6.0, 8.6 Hz, 1H)。 表3：以基本上類似於製備34之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 NMR
35
Figure 02_image151
 5-氯-2-氟-4-碘-3-甲基-苯甲酸 1 H NMR (DMSO-d6) d 13.62 (s, 1H), 7.84 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 2.45 (d, 3H)。
製備 36 4-溴-3-氯-5-氟-2-羥基-苯甲酸甲酯
Figure 02_image153
向4-溴-5-氟-2-羥基-苯甲酸甲酯(9 g，34.3 mmol)於乙酸(70 mL)中之溶液中添加NCS (14 g，104.8 mmol)且將混合物加熱至55℃。18小時後，再添加NCS (5.5 g，37.7 mmol)且在55℃下攪拌混合物24小時。隨後使反應物冷卻至環境溫度且在真空中移除過量乙酸。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用100% DCM溶離，得到呈固體狀之標題化合物(7.1 g，73%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 281/283 [M-H]- 。
製備 37 (3aR)-1,1-二側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H-氧雜噻唑并[3,4-a]吡𠯤-5-甲酸第三丁酯
Figure 02_image155
在0℃下，向咪唑(24.9 g，362 mmol)於DCM (181 mL)中之懸浮液中逐滴添加亞硫醯氯(8.0 mL，110 mmol)。在0℃下攪拌混合物5分鐘且在環境溫度下攪拌1小時。將混合物冷卻至-78℃且歷經45分鐘逐滴添加(3R)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(8.00 g，36.2 mmol)於DCM (181 mL)中之溶液。使混合物升溫至環境溫度且攪拌2.5天。反應物用飽和氯化銨水溶液淬滅且用水及DCM稀釋。分離各層，且再次用DCM萃取水層。合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到琥珀色糖漿。在0℃下，向糊漿於乙腈(282 mL)中之溶液中添加過碘酸鈉(10.2 g，47.6 mmol)於水(92 mL)中之溶液。添加氯化釕(III) (76 mg，0.37 mmol)。在0℃下攪拌所得懸浮液5分鐘且在環境溫度下攪拌5小時。反應物用飽和氯化銨水溶液淬滅且用水及EtOAc稀釋。分離各層，且再次用EtOAc萃取水層。合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，且經由濾紙過濾且接著經由短矽膠塞過濾。在真空中濃縮濾液。向殘餘物中添加DCM，且在真空中濃縮混合物且置於真空下隔夜，得到呈淺棕色固體狀之標題化合物(9.39 g，93%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 4.63 (1H, dd), 4.23 (1H, t), 4.23 (1H, br s), 4.07 (1H, br s), 3.64 (1H, m), 3.45 (1H, d), 3.13 (1H, m), 2.96 (2H, td), 1.47 (9H, s)。 表4：以基本上類似於製備37之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 1 H NMR (CDCl3 )
38
Figure 02_image157
 (3aS)-1,1-二側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H-氧雜噻唑并[3,4-a]吡𠯤-5-甲酸第三丁酯 4.63 (1H, dd), 4.23 (1H, t), 4.23 (1H, br s), 4.07 (1H, br s), 3.64 (1H, m), 3.45 (1H, d), 3.13 (1H, m), 2.96 (2H, td), 1.47 (9H, s)
製備 39 5-溴-4-甲基-3H-異苯并呋喃-1-酮
Figure 02_image159
向(3-溴基-2-甲基苯基)甲醇(15.0 g，73.1 mmol)於TFA (75 mL)中之懸浮液中添加三氟乙酸鉈(III) (41.8 g 73.1 mmol)。額外的TFA (25 mL)用於將三氟乙酸鉈(III)沖洗至反應容器中。在氮氣下在環境溫度下攪拌混合物隔夜並在真空中濃縮，且在真空下乾燥，得到淺棕色固體。將固體置於氮氣下且與氧化鎂(6.01 g，149 mmol)、氯化鋰(6.32 g，149 mmol)及MeOH (300 mL)合併。添加氯化鈀(II)(1.32 g，7.38 mmol)。用一氧化碳吹掃混合物五次且置放在一氧化碳氛圍(氣囊壓力)下。在環境溫度下攪拌混合物2小時且添加氯化鈀(II)(262 mg，1.46 mmol)及氧化鎂(1.18 g，29.2 mmol)。用一氧化碳吹掃混合物三次且置放在一氧化碳氛圍(氣囊壓力)下。在環境溫度下攪拌混合物30分鐘且添加氯化鈀(II)(262 mg，1.46 mmol)及氧化鎂(1.18 g，29.2 mmol)。用一氧化碳吹掃混合物四次且置放在一氧化碳氛圍(氣囊壓力)下。在環境溫度下攪拌混合物1.5小時且添加氯化鈀(II) (327 mg，1.83 mmol)及氧化鎂(1.77 g，43.9 mmol)。用一氧化碳吹掃混合物且置放在一氧化碳氛圍(氣囊壓力)下。在環境溫度下攪拌混合物1.5小時，經由矽藻土過濾，且用EtOAc經由矽藻土洗滌。在真空中濃縮濾液，得到殘餘物。粗產物藉由矽膠急驟層析純化，用0-30% EtOAc/己烷溶離。在真空中濃縮含產物之溶離份，得到呈白色固體狀之標題化合物(14.48 g，70%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 227.0/229.0 [M+H]+ 。
製備 40 5-溴-4-甲基-6-硝基-3H-異苯并呋喃-1-酮
Figure 02_image161
使5-溴-4-甲基-3H-異苯并呋喃-1-酮(14.4 g，50.7 mmol，80%純度)於濃硫酸(160 mL)中之溶液冷卻至-5℃且添加硝酸鉀(9.62 g，95.2 mmol)。在氮氣下攪拌混合物2.5小時且在攪拌下添加冰(750 g)。用EtOAc萃取混合物三次。合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用10-70% EtOAc/己烷溶離。在真空中濃縮含產物之溶離份，得到呈灰白色至黃色/橙色固體狀之標題化合物(11.98 g，87%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 289.0/291.0 [M+H]+ 。
製備 41 6-胺基-5-溴-4-甲基-3H-異苯并呋喃-1-酮
Figure 02_image163
向壓力燒瓶中添加5-溴-4-甲基-6-硝基-3H-異苯并呋喃-1-酮(11.98 g，44.04 mmol)、DCM (1000 mL)、TFA (300 mL，4 mol)及鉑(5%/碳，硫化，3.00 g，0.769 mmol)。用氫氣吹掃混合物且加壓至45 PSI，持續1.25小時。經由矽藻土過濾反應混合物且用DCM洗滌。在真空中濃縮濾液，得到殘餘物。將殘餘物在真空下乾燥且藉由矽膠急驟層析純化，用10-60% EtOAc/DCM溶離。在真空中濃縮含產物之溶離份，得到呈無色固體狀之標題化合物(9.86 g，96%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 242.0/244.0 [M+H]+ 。
製備 42 5-胺基-4,6-二氯-3H-異苯并呋喃-1-酮
Figure 02_image165
在環境溫度下，向5-胺基-3H-異苯并呋喃-1-酮(10.44 g，68.60 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液中添加NCS (20.56 g，150.9 mmol)。在50℃下攪拌混合物2.5小時且在環境溫度下隔夜。將混合物傾入水(1 L)中，且用過濾玻璃料濾出沈澱物，用水且隨後用二***洗滌兩次，且藉由經由玻璃料抽吸空氣來乾燥。沈澱物溶解於EtOAc中，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈淡黃橙色固體狀之標題化合物(14.27 g，93%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 218.2/220.0 [M+H]+ 。
製備 43 4,6-二氯-5-碘-3H-異苯并呋喃-1-酮
Figure 02_image167
在-15℃下，向5-胺基-4,6-二氯-3H-異苯并呋喃-1-酮(8.00 g，35.6 mmol)於乙腈(237 mL)中之懸浮液中逐滴添加濃硫酸(6.5 mL，120 mmol)。緩慢添加亞硝酸鈉(4.96 g，71.2 mmol)於水(36 mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物30分鐘。逐滴添加碘化鉀(23.6 g，142 mmol)於水(36 mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物15分鐘且在環境溫度下攪拌30分鐘。用飽和亞硫酸鈉水溶液稀釋混合物，且在真空下部分濃縮以移除大部分乙腈。用EtOAc稀釋混合物且分離各層。用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用0-25% EtOAc/己烷溶離。不純的含產物之溶離份在真空中濃縮且進一步藉由矽膠急驟層析純化，用100% DCM溶離。合併來自兩個層析純化物之純的含產物之溶離份，在真空中濃縮且置於真空下隔夜，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物(6.62 g，51%)。1 H NMR (CDCl3 ) d 7.89 (1H, s), 5.25 (2H, s)。
製備 44 5-溴-6-氯-4-甲基-3H-異苯并呋喃-1-酮
Figure 02_image169
歷經5分鐘在冷水浴中向氯化銅(5.85 g，43.5 mmol)於乙腈(150 mL)中之懸浮液中添加亞硝酸第三丁酯(12.9 mL，108 mmol)。攪拌混合物10分鐘且移除冷水浴。在氮氣下再攪拌混合物25分鐘。逐滴添加6-胺基-5-溴-4-甲基-3H-異苯并呋喃-1-酮(8.73 g，36.1 mmol)於乙腈(550 mL)中之溶液且在氮氣下攪拌混合物1.5小時。混合物在真空中部分濃縮以使體積減小至約275 mL。混合物用飽和氯化鈉水溶液(300 mL)及1 M HCl (500 mL)稀釋且用EtOAc萃取兩次。合併之有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用5-30% EtOAc/DCM溶離。在真空中濃縮含產物之溶離份，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物(9.03 g，96%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 278.0/280.0 [M+H]+ 。
製備 45 4-溴-5-氯-2-(羥基甲基)-3-甲基-苯甲酸鈉
Figure 02_image171
向具有攪拌棒之螺旋頂小瓶中添加5-溴-6-氯-4-甲基-3H-異苯并呋喃-1-酮(2.459 g，8.557 mmol)及1 M NaOH (9.4 mL，9.4 mmol)。將小瓶加蓋且在100℃下加熱2小時。將反應混合物冷卻至環境溫度且轉移至1 L燒瓶中。添加甲苯(100 mL)且將混合物在真空中濃縮且置於真空3天，得到呈棕色固體狀之標題化合物(2.81 g，99%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 276.8/278.8 [M-H]- 。 表5：以基本上類似於製備45之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
46
Figure 02_image173
 3,5-二氯-2-(羥基甲基)-4-碘-苯甲酸鈉 344.8/346.8
製備 47 (3S)-4-[苯甲基-(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)胺基]-3-(第三丁氧基羰基胺基)-4-側氧基-丁酸苯甲酯
Figure 02_image175
將Boc-L-天冬胺酸4-苯甲酯(114 g，352.6 mmol)添加至反應容器中。添加DCM (950 mL)及N,N'-二環己基碳化二亞胺(74.5 g，361 mmol)，且將混合物冷卻至10-20℃。逐滴添加苯甲基甘胺酸乙酯(68.2 g，353 mmol)，保持溫度低於20℃。在10-20℃下攪拌混合物17小時，隨後過濾且在真空中濃縮。添加MTBE (230 mL)且攪拌混合物0.5小時。過濾混合物且在真空中濃縮，得到呈油狀之標題化合物(174.4 g，99%)。
製備 48 2-[(2S)-4-苯甲基-3,6-二側氧基-哌𠯤-2-基]乙酸苯甲酯
Figure 02_image177
將(3S)-4-[苯甲基-(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)胺基]-3-(第三丁氧基羰基胺基)-4-側氧基-丁酸苯甲酯(174.4 g，349.8 mmol)連同DCM (500 mL)及TFA (230 mL)一起添加至反應容器中。在15-20℃下攪拌混合物16小時，隨後在真空中濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於異丙醇(500 mL)中且加熱至80℃持續1小時。在真空中濃縮混合物，隨後用水(230 mL)稀釋。混合物用15% NaOH/水中和至pH 8-9 (使用109 g 15% NaOH水溶液)。過濾混合物且用水(2×100 mL)沖洗。在50-55℃下在真空下乾燥固體2天，得到呈固體狀之標題化合物(95.9 g，78%)。1 H NMR (CDCl3 ) δ 7.44 - 7.29 (m, 8H), 7.32 - 7.23 (m, 2H), 6.91 (br s, 1H), 5.18 (d,J = 12.1 Hz, 1H), 5.14 (d,J = 12.2 Hz, 1H), 4.64 (d,J = 14.5 Hz, 1H), 4.54 (d,J = 14.5 Hz, 1H), 4.44 (br d,J = 7.9 Hz, 1H), 3.88 (d,J = 17.7 Hz, 1H), 3.82 (d,J = 17.7 Hz, 1H), 3.15 (dd,J = 17.5, 3.4 Hz, 1H), 2.93 (dd,J = 17.5, 8.3 Hz, 1H)。
製備 49 2-[(2S)-4-苯甲基哌𠯤-2-基]乙醇
Figure 02_image179
將氫化鋰鋁(13 g，342.5 mmol)連同THF (200 mL)一起添加至反應容器中。使混合物冷卻至-5-0℃。將2-[(2S)-4-苯甲基-3,6-二側氧基-哌𠯤-2-基]乙酸苯甲酯(50 g，141.9 mmol)連同THF (400 mL)一起添加至第二容器中。將2-[(2S)-4-苯甲基-3,6-二側氧基-哌𠯤-2-基]乙酸苯甲酯之溶液緩慢添加至氫化鋰鋁溶液中，保持溫度在-5℃與0℃之間。將反應混合物加熱至60-65℃且攪拌2小時。將混合物冷卻至20-30℃且攪拌16小時。添加水(13 g)，接著添加4% NaOH/水(52 g)。攪拌混合物1小時，過濾且在真空中濃縮。添加乙酸異丙酯(200 mL)及2 M HCl (150 g)。分離各層，且將水層再次用乙酸異丙酯(100 mL)洗滌。用NaOH將水層調整至pH 11-12，且添加DCM (150 mL)。分離各層且用水(100 mL)洗滌有機層。分離各層且在真空中濃縮有機層，得到呈固體狀之標題化合物(20.1 g，64%)。1 H NMR (CDCl3 ) δ 7.44 - 7.20 (m, 5H), 3.81 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.08 - 2.93 (m, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 1H), 2.76 (d,J = 11.5 Hz, 2H), 2.02 (td,J = 11.1, 3.3 Hz, 1H), 1.85 (t,J = 10.4 Hz, 1H), 1.67 - 1.52 (m, 2H)。
製備 50 2-[(2S)-哌𠯤-2-基]乙醇
Figure 02_image181
將2-[(2S)-4-苯甲基哌𠯤-2-基]乙醇(20 g，91 mmol)添加至H2 沖洗反應容器中。添加MeOH (200 mL)且添加Pd(OH)2 (2 g)用H2 吹掃混合物，隨後加壓至45 psi H2 。將混合物加熱至50℃且攪拌44小時。過濾混合物且在真空中濃縮，得到呈油狀之標題化合物(12.7 g，99+%)。1 H NMR (CDCl3 ) δ 3.84 - 3.65 (m, 2H), 3.44 (s, 1H), 2.99 - 2.83 (m, 4H), 2.78 (td,J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 2.68 (td,J = 11.4, 2.8 Hz, 1H), 2.54 - 2.42 (m, 1H), 1.65 - 1.43 (m, 2H)。
製備 51 (3S)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯；磷酸
Figure 02_image183
2-[(2S)-哌𠯤-2-基]乙醇(9.2 g，70.4 mmol)連同MeOH (83 mL)及水(9 mL)一起添加至反應容器中。在15℃下攪拌混合物0.5小時。向第二容器中添加二碳酸二第三丁酯(15.4 g，70.6 mmol)以及MeOH (92 mL)。歷經0.5小時將二碳酸二第三丁酯溶液添加至2-[(2S)-哌𠯤-2-基]乙醇溶液中，保持溫度低於15℃。在15℃下攪拌混合物2小時。將磷酸(85%強度，8.11 g，70.4 mmol)及EtOH併入至單獨的容器中，且歷經30分鐘將磷酸溶液添加至反應混合物。在15℃下攪拌混合物20分鐘，隨後歷經3小時冷卻至-5℃。在-5℃下攪拌混合物1小時，過濾且用EtOH洗滌，隨後在50℃下乾燥4小時，得到呈固體狀之標題化合物(5.82 g，25%)。1 H NMR (D2 O) δ 4.11 - 4.03 (m, 1H), 4.00 (br s, 1H), 3.75 - 3.62 (m, 2H), 3.43 - 3.30 (m, 2H), 3.30 - 3.18 (m, 1H), 3.17 - 2.95 (m, 2H), 1.86 - 1.78 (m, 2H), 1.38 (s, 9H)。
製備 52 (3S)-3-(苯甲基胺基)四氫呋喃-2-酮
Figure 02_image185
在氮氣下在35℃下攪拌L-高絲胺酸內酯鹽酸鹽(100 g，726.93 mmol，4 Å粉末分子篩(178 g)及苯甲醛(57 mL，561.3 mmol)於DCM (2500 mL)中之懸浮液隔夜。此後，移除熱源且將混合物冷卻至20℃。三乙醯氧基硼氫化鈉(208 g，981.41 mmol)添加至混合物中，接著在20分鐘之後使其升溫至環境溫度且攪拌2小時。此後，將混合物冷卻至-10℃且小心地用飽和碳酸氫鈉水溶液(400 mL)淬滅。用飽和碳酸氫鈉水溶液及固體碳酸氫鈉將pH調整至8。經由矽藻土墊過濾混合物且用DCM沖洗。分離各層且用DCM (1 L)再萃取水溶液一次。合併之有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈澄清油狀之標題化合物(87 g，66.5%，81質量%)。ES/MS m/z: 192.2 (M+H)。對於進一步檢定工作，標題化合物之樣本(1 g)藉由矽膠急驟層析純化，用10-50% EtOAc/DCM溶離，得到422 mg經純化之標題化合物。使用Chiralpak® IC，4.6×150 mm，10% IPA (0.2% IPAm)/CO2 ，5 mL/min，225 nm檢定此物質，展示＞98 e.e.%。
製備 53 N-[2-[苯甲基-[(3S)-2-側氧基四氫呋喃-3-基]胺基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯
Figure 02_image187
將(3S)-3-(苯甲基胺基)四氫呋喃-2-酮(86 g，364.27 mmol，81質量%)、boc-Gly-OH (97 g，553.71 mmol)及TEA (103 mL，739 mmol)於DCM (700 mL)中之混合物冷卻至約5℃。歷經一小時向混合物中逐滴添加丙基膦酸酐(50質量%於EtOAc中) (430 mL，737 mmol)同時保持內部溫度約為10℃。在添加後，使混合物升溫至環境溫度。七小時後，將混合物冷卻至10℃且添加boc-Gly-OH (3.1 g，18 mmol)、TEA (5 mL，35.9 mmol)及丙基膦酸酐(50質量%於EtOAc中) (22 mL，37.7 mmol)。使混合物升溫至環境溫度，且攪拌隔夜。此後，將混合物冷卻至8℃且添加boc-Gly-OH (9.6 g，55 mmol)、TEA (10 mL，71.7 mmol)及丙基膦酸酐(50質量%於EtOAc中) (42 mL，71.9 mmol)。使混合物升溫至環境溫度且攪拌約7小時。此後，將混合物傾倒於冰上且用飽和碳酸氫鈉水溶液(1 L)小心地淬滅。用固體碳酸氫鈉將pH調整至8，且分離各層。用DCM再萃取水溶液兩次。合併之有機物用飽和氯化鈉水溶液(500 mL)洗滌。經由矽藻土襯墊及硫酸鈉過濾有機層。有機物在真空中濃縮至1 L體積且用飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次。有機物經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到標題化合物，其未經進一步純化即可使用(194 g，53.5%，35質量%)。ES/MS m/z: 249.0 (M-t-Bu+H) 表6：以基本上類似於製備53之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
54
Figure 02_image189
 N-[(1S)-2-[苯甲基-[(3S)-2-側氧基四氫呋喃-3-基]胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯 263.0
55
Figure 02_image191
 N-[(1R)-2-[苯甲基-[(3S)-2-側氧基四氫呋喃-3-基]胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯 263.0
製備 56 (6S)-1-苯甲基-6-(2-羥基乙基)哌𠯤-2,5-二酮
Figure 02_image193
將TFA (100 mL，1310 mmol)添加至N-[2-[苯甲基-[(3S)-2-側氧基四氫呋喃-3-基]胺基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(194 g，194.9 mmol，35 mass%)於DCM (500 mL)中之混合物中。在環境溫度下攪拌混合物隔夜。此後，添加額外TFA (50 mL，653 mmol)且在環境溫度下攪拌混合物。在兩小時之後，添加額外TFA (50 mL，653 mmol)且在環境溫度下攪拌混合物隔夜。此後，在真空中濃縮混合物。所得殘餘物用水(600 mL)稀釋且用二***洗滌兩次。用1 N NaOH水溶液將pH調整至7且用5 N NaOH水溶液進一步調整至pH 12。添加MeOH (約10 mL)且在環境溫度下攪拌混合物。以五分鐘時間間隔將額外5 N NaOH水溶液添加至混合物中以將pH重新調整至12。總體而言，在pH 12下攪拌混合物35分鐘。此後，用10% HCl水溶液將pH調整至8且用DCM (5×1 L)萃取。隨後用10% HCl水溶液將pH值水溶液調整至5且再次用DCM (1 L)萃取。合併之有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈淡棕色固體狀之標題化合物(17 g，33.4%)。用交替的25% IPA/氯仿及DCM進行額外水溶液萃取，直至根據LC/MS自水溶液移除標題產物為止。向合併之有機物添加IPA (150 mL)。有機物用飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次，經硫酸鈉及硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到額外標題化合物(17.2 g，35.5%)，總產量為34.2 g (68.9%)。ES/MS m/z: 249.0 (M+H) 表7：以基本上類似於製備56之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
57
Figure 02_image195
 (3S,6S)-1-苯甲基-6-(2-羥基乙基)-3-甲基-哌𠯤-2,5-二酮 263.0
58
Figure 02_image197
 (3R,6S)-1-苯甲基-6-(2-羥基乙基)-3-甲基-哌𠯤-2,5-二酮 263.0
製備 59 2-[(2S)-1-苯甲基哌𠯤-2-基]乙醇
Figure 02_image199
以逐滴方式向2 M氫化鋰鋁於THF (131 mL，262 mmol)中之45℃溶液中添加(6S)-1-苯甲基-6-(2-羥基乙基)哌𠯤-2,5-二酮(34 g，131.5 mmol)於THF (200 mL)中之溶液。添加後，將混合物加熱至60℃。約3.5小時後，添加額外的含2 M氫化鋰鋁之THF (33 mL，66 mmol)且在60℃下攪拌混合物。一小時後，添加額外的含2 M氫化鋰鋁之THF (131 mL，262 mmol)且在60℃下攪拌混合物隔夜。此後，添加含2 M氫化鋰鋁之THF (6 mL，12 mmol)且在60℃下攪拌混合物。在四小時之後，添加含2 M氫化鋰鋁之THF (6 mL，12 mmol)且在60℃下攪拌混合物兩小時。移除熱源且將混合物冷卻至10℃。逐滴添加水(16 mL)，接著逐滴添加3.75 M NaOH水溶液(16 mL)，接著添加THF (300 mL)。添加水(48 mL)且在環境溫度下攪拌所得混合物隔夜。此後，經由矽藻土墊過濾混合物且用EtOAc沖洗。在真空中濃縮濾液，得到標題化合物(28.8 g，67.6%，68質量%)。ES/MS m/z: 221.0 (M+H) 表8：以基本上類似於製備59之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
60
Figure 02_image201
 2-[(2S,5S)-1-苯甲基-5-甲基-哌𠯤-2-基]乙醇 235.0
61
Figure 02_image203
 2-[(2S,5R)-1-苯甲基-5-甲基-哌𠯤-2-基]乙醇 235.0
製備 62 (3S)-4-苯甲基-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image205
在環境溫度下將含碳酸氫鈉(80 g，952 mmol)之水(500 mL)中添加至含2-[(2S)-1-苯甲基哌𠯤-2-基]乙醇(28 g，86.43 mmol)之1,4-二㗁烷(500 mL)中。添加二碳酸二第三丁酯(26.6 g，122 mmol)且在環境溫度下攪拌混合物20分鐘。此後，添加冰(400 mL)、水(200 mL)及EtOAc (1 L)且分離各層。再次用EtOAc (1 L)萃取水溶液。合併之有機物用水(250 mL)及飽和氯化鈉水溶液(250 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得油狀物藉由矽膠急驟層析純化，用10-70% EtOAc/己烷溶離，得到標題化合物(20.79 g，74%)。ES/MS m/z: 321.2 (M+H) 使用Chiralpak® IC，4.6×150 mm，15% IPA (0.2% IPAm)/CO2 ，5 mL/min，225 nm檢定此物質，展示＞96 e.e.%。 表9：以基本上類似於製備62之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
63
Figure 02_image207
 (2S,5S)-4-苯甲基-5-(2-羥基乙基)-2-甲基-哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 335.0
64
Figure 02_image209
 (2R,5S)-4-苯甲基-5-(2-羥基乙基)-2-甲基-哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 335.0
製備 65 (3S)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image211
碳20% Pd(OH)2 /碳(24.39 g，176.4 mmol)添加至用氮氣吹掃之容器中。將EtOH (620 mL)添加至容器中，接著添加(3S)-4-苯甲基-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(61.93 g，193.3 mmol)及EtOH (620 mL)。密封容器，用氮氣吹掃，用氫氣吹掃且在氫氣下加壓(60 psi)。在環境溫度下將容器置於帕爾震盪器(Parr shaker)上15小時。此後，反應混合物經過濾且在真空中濃縮，得到標題化合物(42.74 g，98%)。ES/MS m/z 231.0: (M+H)。 表10：以基本上類似於製備65之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
66
Figure 02_image213
 (2S,5S)-5-(2-羥基乙基)-2-甲基-哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 245.0
67
Figure 02_image215
 (2R,5S)-5-(2-羥基乙基)-2-甲基-哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 245.0
製備 68 (3S)-4-(3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image217
將3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲酸(0.80 g，2.4 mmol)添加至含DIEA (2 mL，11.5 mmol)之THF (22 mL)中，接著添加HATU (0.84 g，2.2 mmol)且攪拌1小時。接著添加(3S)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.50 g，2.2 mmol)且使反應混合物回流隔夜。此後，添加5 N NaOH且攪拌反應物1小時。添加EtOAc及水。用EtOAc萃取水層兩次。合併之有機萃取物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗混合物藉由矽膠急驟層析純化，用EtOAc:己烷(30:70)溶離，得到標題化合物(0.858 g，72%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 491/493 [M-t-Bu+H]+ 。 表11：以基本上類似於製備68之方式合成的化合物.
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
69
Figure 02_image219
 (3S)-4-(4-溴-5-氯-2,3-二氟-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 427.0/429.0
70
Figure 02_image221
 (3S)-4-(4-溴-5-氯-2-氟-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 408.8/410.8
71
Figure 02_image223
 (3S)-4-(4-溴-3-氯-2-氟-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 408.9/411.0
72
Figure 02_image225
 (3R)-4-(5-氯-2-氟-4-碘-5-甲基-苯甲醯基)-3- (羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 457.0/459.2
73
Figure 02_image227
 (3R)-4-(5-氯-2,3-二氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 461.0/463.0
74
Figure 02_image229
 (3R)-4-(3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 476.8/478.8
75   
Figure 02_image231
 (3R)-4-(4-溴-5-氯-2-氟-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 394.8/396.8
76
Figure 02_image233
 (3R)-4-(4-溴-3-氯-2-氟-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 394.8/396.8
77
Figure 02_image235
 (3R)-4-(3-氯-2,5-二氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 461.0/463.0
78
Figure 02_image237
 (3S)-4-(3-氯-2,5-二氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 461.2/463.0
79
Figure 02_image239
 (3S)-4-(3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 477.0/478.9
80
Figure 02_image241
 (3R)-4-(3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 490.9/492.8
81
Figure 02_image243
 (3S)-4-(5-氯-2,3-二氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 461.0/463.0
82
Figure 02_image245
 (3S)-4-(4-溴-5-氯-2-氟-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 394.8/396.8
83
Figure 02_image247
 (3R)-4-(4-溴-5-氯-2-氟-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 408.8/410.8
84
Figure 02_image249
 (3S)-4-(2-胺基-4-溴-5-氯-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 406.0/408.0
製備 85 (3S)-4-(4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image251
將4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸(10.2 g，37.6 mmol)及4-甲基嗎啉(7.50 mL，68.0 mmol)於THF (200 mL)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃且用2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三𠯤(9.10 g，50.8 mmol)處理。在冰浴中攪拌混合物30分鐘，且接著經由滴液漏斗逐滴添加(3S)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.93 M於THF中，40.0 mL，37.2 mmol)。在0℃下1小時之後，添加5 N NaOH (35.0 mL，180 mmol)且在環境溫度下攪拌混合物30分鐘。混合物用EtOAc稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液處理，且攪拌15分鐘。分離有機相，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用0-90% (20%丙酮/DCM)/己烷溶離，得到標題化合物(16.0 g，88%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 427/429 [M-t-Bu+H]+ 。 表12：以基本上類似於製備85之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
86
Figure 02_image253
 (3R)-4-(4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲醯基)-3-(羥基甲基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯 412.8/414.8
製備 87 (3S)-4-(2-胺基-4-溴-5-氯-苯甲醯基)-3-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙基]哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image255
向0℃的(3S)-4-(2-胺基-4-溴-5-氯-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(1 g，2.16 mmol)及TEA (1 mL，7.14 mmol)於DCM (25 mL)中之溶液中添加DMAP (45 mg，0.36 mmol)及對甲苯磺醯氯(469 mg，2.39 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物15分鐘，隨後升溫至環境溫度。3小時後再添加對甲苯磺醯氯(122 mg，0.62 mmol)。在1小時之後，反應物用DCM稀釋且用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機物用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由矽膠急驟層析純化，得到標題化合物(473 mg，35%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 616.0/618.0 [M+H]+
製備 88 4-溴-2-[[(2R)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]甲氧基甲基]-5-氯-3-甲基-苯甲酸鹽酸鹽
Figure 02_image257
向250 mL燒瓶中之4-溴-5-氯-2-(羥基甲基)-3-甲基-苯甲酸鈉(2.05 g，6.39 mmol)中添加甲苯(50 mL)且在真空中濃縮混合物。將殘餘物溶解於DMF (21 mL)及THF (11 mL)中且冷卻至0℃。添加氫化鈉(60質量%於石蠟油中) (511 mg，12.8 mmol)。在添加之後，在0℃下攪拌混合物10分鐘。向第二燒瓶中之(3aR)-1,1-二側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H-氧雜噻唑并[3,4-a]吡𠯤-5-甲酸第三丁酯(1.96 g，7.04 mmol)中添加甲苯(20 mL)且在真空中濃縮混合物。將殘餘物溶解於THF (11 mL)中且在0℃下逐滴添加至第一燒瓶之內含物中。使混合物升溫至環境溫度且攪拌1.5小時。緩慢添加5 M HCl (7 mL)且在環境溫度下攪拌混合物5分鐘，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。藉由緩慢添加5 M HCl使pH降至pH 2且在混合物用EtOAc稀釋。分離各層，且用EtOAc萃取水層三次。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於THF (40 mL)中且添加5 M HCl (6 mL)。在環境溫度下攪拌混合物20分鐘。用飽和氯化鈉水溶液及EtOAc稀釋混合物，且分離各層。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，且置於真空下2小時，得到呈淺棕色固體狀之標題化合物(4.27 g，73%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 477.2/479.2 [M+H]+ 。 表13：以基本上類似於製備88之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
89
Figure 02_image259
 2-[[(2R)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]甲氧基甲基]-3,5-二氯-4-碘-苯甲酸鹽酸鹽 545.2/547.2
90
Figure 02_image261
 2-[[(2S)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]甲氧基甲基]-3,5-二氯-4-碘-苯甲酸鹽酸鹽 545.0/547.2
製備 91 (3S)-4-苯甲基-3-[2-(3-溴-2-氯-4-氟-6-甲氧基羰基-苯氧基)乙基]哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image263
將4-溴-3-氯-5-氟-2-羥基-苯甲酸甲酯(3.0 g，11.0 mmol)、三苯基膦(4.19 g，16.0 mmol)及(3S)-4-苯甲基-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(12 mL，1.039 M於THF中)於THF (約50 mL)中之溶液冷卻至0℃持續10分鐘。逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(3.1 mL，16 mmol)且使混合物升溫至環境溫度。在消耗醇起始物質之後，添加冰，且用EtOAc稀釋反應物。混合物用飽和氯化鈉水溶液洗滌兩次且有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮成琥珀色油狀物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-10% EtOAc/己烷溶離，得到標題化合物(6.2 g，99+%)。藉由矽膠管柱層析，用25-50% (1:1 EtOAc:DCM)/己烷溶離獲得檢定樣品約95%純度，得到呈無色油狀之標題化合物。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 585/587 [M+H]+ 。
製備 92 (3S)-3-[2-(3-溴-2-氯-4-氟-6-甲氧基羰基-苯氧基)乙基]哌𠯤-1-甲酸第三丁酯
Figure 02_image265
向(3S)-4-苯甲基-3-[2-(3-溴-2-氯-4-氟-6-甲氧基羰基-苯氧基)乙基]哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(7.0 g，11.35 mmol)於DCM (75 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙胺(5.94 mL，34.1 mmol)。溶液在冰浴中冷卻且逐滴添加氯甲酸1-氯乙酯(3.7 mL，34 mmol)。在添加之後，移除冰浴，且在環境溫度下攪拌反應物18小時。在環境溫度下逐滴添加額外的氯甲酸1-氯乙酯(2 mL，17 mmol)及N,N-二異丙胺(3 mL，17 mmol)，且在7小時之後，添加更多的氯甲酸1-氯乙酯(0.60 mL，5.67 mmol)及N,N-二異丙胺(1 mL，5.67 mmol)以消耗剩餘的起始物質。在真空中濃縮反應混合物。向殘餘物中添加甲苯且濃縮混合物(重複2次)。所得半固體用MeOH (100 mL)稀釋且在環境溫度下攪拌直至產物形成完成。在真空中移除溶劑，得到琥珀色殘餘物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-10% MeOH/DCM溶離，得到呈固體狀之標題化合物(5.11 g，91%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 495/497 [M+H]+ 。
製備 93 4-溴-2-[2-[(2S)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]乙氧基]-3-氯-5-氟-苯甲酸
Figure 02_image267
用冰浴冷卻(3S)-3-[2-(3-溴-2-氯-4-氟-6-甲氧基羰基-苯氧基)乙基]哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(5 g，10.08 mmol)於THF (100 mL)及MeOH (12 mL)中之溶液。添加氫氧化鋰(6.5 mL，6.25 M)水溶液及去離子水(10 mL)。移除冰浴且在環境溫度下攪拌混合物。在3小時之後，向反應混合物中添加冰且用10%檸檬酸(12 mL)在5-6之間調整pH。添加飽和氯化鈉水溶液(100 mL)且用EtOAc (400 mL)稀釋混合物且分離各層。水層再次用EtOAc (300 mL)萃取且合併之有機物經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，得到呈固體狀之標題化合物(4.83 g，98%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 481/483 [M+H]+ 。
製備 94 (13aS)-8,10-二氯-9-碘-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image269
將含(3S)-4-(3,5-二氯-2-氟-4-碘-苯甲醯基)-3-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(4.438 g，8.110 mmol)之DMF (100 mL)冷卻至0℃，且接著向溶液中添加固體氫化鈉(60質量%於石蠟油中) (0.81 g，20 mmol)。在0℃下1小時之後，用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應混合物。添加水及EtOAc。用EtOAc萃取水層兩次。合併之有機萃取物用0.2 M氯化鋰水溶液洗滌兩次，經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗混合物藉由矽膠急驟層析純化，用30-50% EtOAc/己烷溶離，得到標題化合物(3.394 g，79%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 471/473 [M-t-Bu+H]+ 。 表14：以基本上類似於製備94之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
95
Figure 02_image271
 (13aS)-9-溴-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 407.0/409.0
96
Figure 02_image273
 (13aS)-9-溴-8-氯-10-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 406.9/409.0
97
Figure 02_image275
 (13aS)-9-溴-8-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 388.8/390.8
98
Figure 02_image277
 (13aS)-9-溴-10-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 389.0/391.0
99
Figure 02_image279
 (4aR)-8-溴-7-氯-9-氟-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 393.0/395.0
100
Figure 02_image281
 (4aR)-7-氯-8-碘-7-甲基-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 9437.0
101
Figure 02_image283
 (4aR)-9-氯-7-氟-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 441.0/443.0
102
Figure 02_image285
 (4aR)-7,9-二氯-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 456.8/458.8
103
Figure 02_image287
 (4aR)-8-溴-9-氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 374.8/376.8
104
Figure 02_image289
 (4aR)-8-溴-7-氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 374.8/376.8
105
Figure 02_image291
 (4aR)-7-氯-9-氟-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 441.0/443.0
106
Figure 02_image293
 (4aS)-7-氯-9-氟-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 441.0/443.0
107
Figure 02_image295
 (4aS)-7,9-二氯-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 456.9/458.9
108
Figure 02_image297
 (13aR)-8,10-二氯-9-碘-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 470.8/472.8
109
Figure 02_image299
 (4aS)-9-氯-7-氟-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 441.0/443.0
110
Figure 02_image301
 (4aS)-8-溴-9-氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 374.8/376.8
111
Figure 02_image303
 (13aR)-9-溴-8-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 388.8/390.8
112
Figure 02_image305
 (3S,13aS)-9-溴-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 421.0/423.0
製備 113 (13aS)-9-溴-8-氯-11-甲基-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-2-甲酸第三丁酯及(13aS)-9-溴-8-氯-6-側氧基-3,4,11,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image307
將含(3S)-4-(2-胺基-4-溴-5-氯-苯甲醯基)-3-[2-(對甲苯磺醯基氧基)乙基]哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(473 mg，0.767 mmol)之DMF (15 mL)冷卻至0℃，且接著向溶液中添加固體氫化鈉(60質量%於石蠟油中) (49 mg，1.225 mmol)。在0℃下攪拌反應混合物2小時，隨後升溫至環境溫度且再攪拌2小時。此後，將反應混合物冷卻至-78℃且添加碘代甲烷(50 µL，0.803 mmol)。在30分鐘之後，使反應混合物升溫至0℃且攪拌18小時並升溫至環境溫度。將混合物重新冷卻至0℃且添加額外的碘代甲烷(50 µL，0.803 mmol)。在1小時之後，未觀測到額外甲基化，使反應混合物升溫至環境溫度且添加三乙胺(100 µL，0.717 mmol)。再在1小時之後，反應混合物用水淬滅，用飽和NH4 Cl水溶液及EtOAc稀釋。分離各層且用EtOAc萃取水層超過兩次。合併之有機物用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥且在真空中濃縮。所得固體用ACN濕磨且不經任何進一步純化即在真空下乾燥，得到標題化合物之混合物(3:2 NH:NMe，345 mg，99+%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 444.0/446.0 [M+H]+ 及458.0/460.0 [M+H]+ 。
製備 114 (13aR)-9-溴-8-氯-10-甲基-6-側氧基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image309
在0℃下將4-溴-2-[[(2R)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]甲氧基甲基]-5-氯-3-甲基-苯甲酸鹽酸鹽(500 mg，0.749 mmol)及DIEA (0.39 mL，2.2 mmol)於DMF (3.7 mL)中之溶液逐滴添加至HATU (581 mg，1.50 mmol)於DMF (3.7 mL)中之溶液中。在0℃下攪拌混合物1小時且在環境溫度下攪拌30分鐘。在0℃下在單獨的燒瓶中，將4-溴-2-[[(2R)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]甲氧基甲基]-5-氯-3-甲基-苯甲酸鹽酸鹽(2.62 g，3.92 mmol，77%純度)及DIEA (2.1 mL，12 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液逐滴添加至HATU (3.04 g，7.84 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中。在0℃下攪拌混合物1小時且在環境溫度下攪拌30分鐘。合併兩種反應混合物，用EtOAc稀釋且用0.5 M HCl、水、飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌。經硫酸鈉乾燥有機層，過濾，且在真空中濃縮。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用0-65% EtOAc/己烷溶離。在真空中濃縮純的溶離份。向殘餘物中添加DCM並在真空中濃縮混合物且置放於真空中3小時，得到呈白色固體狀之標題化合物(1.95 g，86%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 459/461 [M+H]+ 。 表15：以基本上類似於製備144之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
115
Figure 02_image311
 (13aR)-8,10-二氯-9-碘-6-側氧基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 527.2/529.0
116
Figure 02_image313
 (13aS)-8,10-二氯-9-碘-6-側氧基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 471.0/473.0
製備 117 (13aS)-9-溴-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image315
向用冰浴冷卻的4-溴-2-[2-[(2S)-4-第三丁氧基羰基哌𠯤-2-基]乙氧基]-3-氯-5-氟-苯甲酸(4.8 g，10 mmol)於DCM (50 mL)中之溶液中添加TEA (2.8 mL，20 mmol)。逐滴添加丙基膦酸酐(11 mL，18.8 mmol，50質量%於EtOAc中)。在添加之後，攪拌混合物10分鐘。添加DCM (250 mL)及飽和氯化銨溶液(100 mL)。移除水層且用DCM (100 mL)萃取，且合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液(100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。用活性炭(3.5 g)處理濾液且攪拌10分鐘。經由矽藻土墊過濾混合物並在真空中濃縮成油狀物。添加氯仿並在真空中濃縮(重複2次)，得到呈固體狀之標題化合物(4.64 g，99%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 407/409 [M-t-Bu+H]+ 。
製備 118 (3R,13aS)-9-溴-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image317
將4-溴-3-氯-2,5-二氟-苯甲酸甲酯(1.00 g，3.50 mmol)及(2R,5S)-5-(2-羥基乙基)-2-甲基-哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(1.07 g，4.38 mmol)於DMF (17.5 mL)中之溶液用冰浴冷卻。添加碳酸銫(2.31 g，7.01 mmol)。使反應物緩慢升溫至環境溫度隔夜。18小時後，將反應物加熱至80℃持續24小時。冷卻至室溫後，添加半飽和氯化鈉水溶液(50 mL)且用EtOAc (100 mL)稀釋混合物且分離各層。水層再用EtOAc (50 mL)萃取兩次且合併之有機物用水(2×50 mL)、飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，且接著經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用0-100% MTBE/己烷溶離，得到呈固體狀之標題化合物(690 mg，41%)。ES/MS m/z (79 Br/81 Br) 476.0/478.0 [M+H]+ 。
製備 119 (13aS)-8,10-二氯-9-碘-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image319
將含1 M硼烷二甲硫複合物之THF (2 mL，2 mmol)添加至(13aS)-8,10-二氯-9-碘-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯(1.0 g，1.9 mmol)於THF (20 mL)中之攪拌混合物中且加熱至回流持續18小時。此後，將額外的含1 M硼烷二甲硫複合物之THF (2 mL，2 mmol)添加至混合物中且在回流下再攪拌5小時。將混合物冷卻至環境溫度，小心地用MeOH淬滅且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用30-70% EtOAc/己烷溶離，得到標題化合物(900 mg，90%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 512.8/514.8 [M+H]+- 。 表16：以基本上類似於製備119之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
120
Figure 02_image321
 (13aS)-9-溴-8-氯-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 430.9/433.0
121
Figure 02_image323
 (4aR)-7,9-二氯-8-碘-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 498.8/500.8
122
Figure 02_image325
 (4aR)-7-氯-9-氟-8-碘-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 483.2/485.2
123
Figure 02_image327
 (4aR)-9-氯-7-氟-8-碘-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 483.0/485.0
124
Figure 02_image329
 (4aR)-8-溴-7-氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 417.0/419.0
125
Figure 02_image331
 (4aS)-7-氯-9-氟-8-碘-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 483.2/485.2
126
Figure 02_image333
 (4aS)-7,9-二氯-8-碘-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 499.0/501.0
127
Figure 02_image335
 (13aR)-8,10-二氯-9-碘-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 512.9/514.8
128
Figure 02_image337
 (4aS)-9-氯-7-氟-8-碘-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 483.0/485.0
129
Figure 02_image339
 (4aS)-8-溴-9-氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 416.8/419.0
130
Figure 02_image341
 (13aR)-9-溴-8-氯-10-甲基-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 445.2/447.2
131
Figure 02_image343
 (13aR)-8,10-二氯-9-碘-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 513.2/515.2
製備 132 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image345
向具有攪拌棒之螺旋頂可密封管中添加(13aS)-8,10-二氯-9-碘-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯(750 mg，1.423 mmol)、[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]
Figure 109142894-A0101-12-0030-1
酸(650 mg，2.083 mmol)、磷酸三鉀(450 mg，2.12 mmol)及1,1'-雙(二-第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(100 mg，0.15 mmol)。添加事先混合並脫氣的1,4-二㗁烷(15 mL)及水(5 mL)且用氮氣吹掃混合物20分鐘。管經封蓋且在80℃下加熱1小時。隨後將反應混合物之內含物在水、飽和氯化鈉水溶液及EtOAc上方傾倒。分離各層，且用EtOAc萃取水層一次。合併之有機萃取物經無水硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。粗物質藉由矽膠急驟層析純化，用30-70% EtOAc/己烷溶離，得到標題化合物(724 mg，76%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 667/669 [M+H]+ 。45:55之滯轉異構體(LC)比率。 表17：以基本上類似於製備132之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
133
Figure 02_image347
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-7-氟-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 537.2/539.2
134
Figure 02_image349
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-7-氟-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 623.2/625.2
135
Figure 02_image351
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-7-氟-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 623.2/625.2
136
Figure 02_image353
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-10-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 551.1/553.1
137
Figure 02_image355
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7-氯-9-氟-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 537.2/539.2
138
Figure 02_image357
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7-氯-9-氟-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 623.4/625.4
139
Figure 02_image359
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-7-甲基-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 533.2/534.2
140
Figure 02_image361
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 551.0/553.0
141
Figure 02_image363
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-10-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 533.0/535.0
142
Figure 02_image365
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7-氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 519.0/521.0
143
Figure 02_image367
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-10-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 539.0/541.0
144
Figure 02_image369
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-7,9-二氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 645.4/647.4
145
Figure 02_image371
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-7-氯-9-氟-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 587.2/589.2
146
Figure 02_image373
 (13aR)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 533.0/535.0
147
Figure 02_image375
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 533.0/535.0
148
Figure 02_image377
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 519.0/521.0
149
Figure 02_image379
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7,9-二氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 553.0/555.0
150
Figure 02_image381
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7,9-二氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 553.0/555.0
151
Figure 02_image383
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 605.0/607.0
152
Figure 02_image385
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-9-氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 605.0/607.0
153
Figure 02_image387
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7,9-二氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 639.0/641.0
154
Figure 02_image389
 (4aS)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-7,9-二氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 639.0/641.0
155
Figure 02_image391
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基]-9-氯-7-氟-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 605.0/607.0
156
Figure 02_image393
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-8-氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 639.2/641.2
157
Figure 02_image395
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 653.0/655.2
158
Figure 02_image397
 (13aR)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 653.0/655.0
159
Figure 02_image399
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-7,9-二氯-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 603.0/605.0
160
Figure 02_image401
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-11-甲基-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-2-甲酸第三丁酯 646.2/648.2
161
Figure 02_image403
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-6-側氧基-3,4,11,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-2-甲酸第三丁酯 632.2/634.2
162
Figure 02_image405
 (13aR)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-10-甲基-6-側氧基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 645.2/647.2
163
Figure 02_image407
 (13aR)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8-氯-10-甲基-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 633.4/635.4
164
Figure 02_image409
 (13aR)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-6-側氧基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 665.2/667.2
165
Figure 02_image411
 (13aR)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 653.4/655.2
166
Figure 02_image413
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 665.2/667.2
在一些情況下，使用K2 CO3 代替K3 PO4 。
製備 167 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯
Figure 02_image415
向密封燒瓶中添加甲苯(300 mL)、(13aS)-9-溴-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯(6.20 g，11.0 mmol)及N-[3-氰基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯并噻吩-2-基]胺基甲酸第三丁酯(6.20 g，15.5 mmol)。混合物用氮氣充氣30分鐘，且接著添加DPEPhosPdCl2 (1.20 g，1.68 mmol)，接著添加碳酸銫(9.00 g，27.6 mmol)。密封燒瓶且在105℃下攪拌6小時。將混合物冷卻至環境溫度且經由矽藻土過濾，用EtOAc洗滌，且在真空中濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，用0-30%丙酮/己烷溶離。在非所需之非對映異構體之後溶離所需非對映異構體，得到標題化合物(大部分，3.50 g，49%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 657.0/659.0 [M+H]+ 。 表18：以基本上類似於製備167之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
168
Figure 02_image417
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基]-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 675.2/677.2
169
Figure 02_image419
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基]-7-氯-9-氟-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 605.2/607.2
170
Figure 02_image421
 (13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基]-8-氯-10-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 675.2/677.2
171
Figure 02_image423
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-3-甲基-苯并噻吩-4-基]-9-氯-7-甲基-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 601.2/603.3
172
Figure 02_image425
 (4aR)-8-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-甲基-苯并噻吩-4-基]-9-氯-7-甲基-11-側氧基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-甲酸第三丁酯 583.2/585.2
173
Figure 02_image427
 (3R,13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基]-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 689.2/691.2
174
Figure 02_image429
 (3S,13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基]-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯 633.4/635.4
製備 175 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮
Figure 02_image431
將(13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基]-8,10-二氯-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯(724 mg，1.084 mmol)溶解於DCM (4 mL)及(2 mL，26.45 mmol)中，且在環境溫度下攪拌。在6小時之後，在真空中濃縮混合物。粗物質裝載於SCX管柱上，用MeOH洗滌且用含7 N NH3 之MeOH溶離。在真空中濃縮濾液，得到標題化合物(500 mg，98%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 467/469 [M+H]+ 。 表19：以基本上類似於製備175之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
176
Figure 02_image433
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 475.0/477.0
177
Figure 02_image435
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7-氯-9-氟-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 437.2/439.2
178
Figure 02_image437
 4-[(4aS)-7-氯-9-氟-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 423.2/425.2
179
Figure 02_image439
 4-[(4aR)-9-氯-7-甲基-11-側氧基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 457.2/459.2
180
Figure 02_image441
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 433.2/435.2
181
Figure 02_image443
 (4aR)-8-(2-胺基-3-甲基-苯并噻吩-4-基)-9-氯-7-甲基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 439.1/441.2
182
Figure 02_image445
 4-[(4aS)-7,9-二氯-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 445.0/447.0
183
Figure 02_image447
 4-[(4aR)-7-氯-9-氟-11-側氧基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 443.2/445.2
184
Figure 02_image449
 4-[(13aS)-8,10-二氯-1,2,3,4,6,12,13,13a-八氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 453.0/455.0
185
Figure 02_image451
 4-[(13aR)-8,10-二氯-1,2,3,4,6,12,13,13a-八氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 453.0/455.0
186
Figure 02_image453
 4-[(4aR)-7,9-二氯-11-側氧基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 458.9/460.9
製備 187 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image455
在0℃下向(13aS)-9-[2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-氰基-苯并噻吩-4-基]-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲酸第三丁酯(2.64 g，4.02 mmol)於DCM (10.0 mL)中之懸浮液中逐滴添加TFA (10 mL)。在環境溫度下攪拌混合物1小時。在真空中濃縮混合物，溶解於EtOAc中，且再次在真空中濃縮。再次重複此程序一次。所得殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，首先用0-80% (10% MeOH/DCM)/DCM溶離，且其次用0-100% [10% (7 N NH3 /MeOH)/DCM]/DCM溶離，得到標題化合物(1.58 g，86%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 457.0/459.0 [M+H]+ 。 表20：以基本上類似於製備187之方式合成的化合物
製備 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
188
Figure 02_image457
 4-[(4aR)-9-氯-7-氟-11-側氧基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 461.0/463.0
189
Figure 02_image459
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-7-氟-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 437.0/439.0
190
Figure 02_image461
 4-[(4aR)-9-氯-7-氟-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 423.0/425.0
191
Figure 02_image463
 4-[(4aS)-9-氯-7-氟-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 423.0/425.0
192
Figure 02_image465
 4-[(13aS)-8-氯-10-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 475.0/477.0
193
Figure 02_image467
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-10-氟-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 451.0/453.0
194
Figure 02_image469
 4-[(13aS)-8-氯-10-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 457.0/459.0
195
Figure 02_image471
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-10-氯-8-氟-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 451.0/453.0
196
Figure 02_image473
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-10-氯-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 433.0/435.0
197
Figure 02_image475
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7-氯-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 419.0/421.0
198
Figure 02_image477
 4-[(13aS)-10-氯-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 439.0/441.0
199
Figure 02_image479
 (13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 433.0/435.0
200
Figure 02_image481
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 432.9/435.0
201
Figure 02_image483
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 418.9/420.9
202
Figure 02_image485
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 452.8/454.8
203
Figure 02_image487
 (4aS)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 452.8/454.8
204
Figure 02_image489
 4-[(4aS)-9-氯-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 405.0/407.0
205
Figure 02_image491
 4-[(4aR)-9-氯-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 405.0/407.0   
206
Figure 02_image493
 4-[(4aS)-7,9-二氯-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 438.9/441.0
207
Figure 02_image495
 4-[(4aR)-7,9-二氯-2,3,4,4a,5,11-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 438.8/440.9
208
Figure 02_image497
 4-[(4aR)-9-氯-7-氟-11-側氧基-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 461.0/463.0
209
Figure 02_image499
 4-[(13aS)-8-氯-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 439.0/441.0
210
Figure 02_image501
 4-[(3R,13aS)-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 489.0/491.0
211
Figure 02_image503
 4-[(3S,13aS)-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 489.2/491.2
212
Figure 02_image505
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-11-甲基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-6-酮 446.0/448.0
213
Figure 02_image507
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-1,2,3,4,11,12,13,13a-八氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-6-酮 432.0/434.0
214
Figure 02_image509
 (13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-10-甲基-2,3,4,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 447.2/449.2
215
Figure 02_image511
 4-[(13aR)-8-氯-10-甲基-1,2,3,4,6,11,13,13a-八氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 433.2/435.2
216
Figure 02_image513
 (13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2,3,4,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 467.2/469.2
217
Figure 02_image515
 4-[(13aR)-8,10-二氯-1,2,3,4,6,11,13,13a-八氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-7-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺 453.2/455.2
218
Figure 02_image517
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2,3,4,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 467.2/469.2
製備 219 4-[(13aS)-10-氯-2-(2-氰基乙醯基)-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image519
將氰基乙酸(138 mg，1.61 mmol)、1-羥基苯并***(222 mg，1.61 mmol)、DIEA (0.5 mL，3 mmol)及1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(306 mg，1.60 mmol)添加至4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈(500 mg，1.05 mmol)於DCM (10 mL)中之懸浮液中。在環境溫度下攪拌反應混合物18小時，之後用DCM稀釋且用飽和氯化銨水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機相經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中且添加幾滴MeOH隨後幾滴己烷以沈澱出產物。過濾沈澱物，得到呈白色固體狀之標題化合物(410 mg，72%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 542.4/544.4 [M+H]+ 。
製備 220 1-溴-1,2,2-三氘-乙烯
Figure 02_image521
在33℃下將1,2-二溴乙烷-d4 (25.0 g，130.28 mmol)逐滴添加至氫氧化鉀(15.19 g，243.63 mmol)於95%乙烷-OD (95 mL)及D2 O (5 mL)中之溶液中。混合物首先在60℃下攪拌1.5小時，接著在63℃下攪拌1.5小時，得到呈無色油狀之標題化合物，其在加熱過程期間自反應連續蒸餾且收集於在乾冰-丙酮浴(7.3 g，50%)中冷卻之接收燒瓶中。
製備 221 2,3,3-三氘丙-2-烯酸-13 C
Figure 02_image523
將鎂屑(1.67 g，69.71 mmol)、碘晶體及無水THF (20 mL)置於燒瓶中。同時，製備1-溴-1,2,2-三氘-乙烯(7.3 g，66.39 mmol)於無水THF (30 mL)中之溶液。將含有鎂之混合物加熱至50℃且添加一部分溴乙烯溶液(2 mL)。在50℃加熱混合物直至引發格林納反應且混合物開始回流(65℃)。在55至65℃歷經1.5小時逐滴添加剩餘溴乙烯於THF中之溶液。在65℃加熱所得混合物1.5小時以確保反應完成。將此新製備之(1,2,2-三氘乙烯基)溴化鎂於THF中之溶液冷卻至室溫且立即使用。
在-65℃使二氧化碳-13 C氣體鼓泡通過無水THF (50 mL) 5分鐘。逐滴添加以上新製備之(1,2,2-三氘乙烯基)溴化鎂於THF 中之溶液(66.39 mmol)，此時反應溫度上升至-20℃。使混合物升溫至-10℃且攪拌10分鐘。將二氧化碳-13 C氣體鼓泡通過混合物再2分鐘。使混合物升溫至環境溫度且攪拌10分鐘。添加對苯二酚(10 mg)，接著逐滴添加6 M硫酸(6.5 mL)以淬滅反應物，同時維持溫度低於20℃。混合物用二***(400 mL)稀釋且添加硫酸鈉(100 g)。混合物在環境溫度攪拌5分鐘，過濾且在真空中在0至5℃濃縮，得到呈黃色油狀之粗產物(7.5 g)。粗產物藉由短程真空蒸餾純化，得到呈無色油狀之標題化合物(1.2 g，24%)。
製備 222 2,3,3-三氘丙-2-烯酸氯化物-13 C
Figure 02_image525
在0℃下，將乙二醯氯(0.24 mL，2.85 mmol)添加至2,3,3-三氘丙-2-烯酸-13 C (0.181 g，2.38 mmol)及DMF (1滴)於無水DCM (10 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物1小時。標題化合物直接用於下一步驟中作為溶液。
製備 223 Kras探針 N-(2-{2-[2-({6-氯-8-氟-7-(3-羥基萘-1-基)-4-[4-(丙-2-烯醯基)哌𠯤-1-基]喹唑啉-2-基}胺基)乙氧基]乙氧基}乙基)-5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊醯胺
Figure 02_image527
步驟 A ：將4-(7-溴-2,6-二氯-8-氟喹唑啉-4-基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.51 g，1.1 mmol)及IPA (5 mL)併入微波容器中。添加DIPEA (0.55 mL，3.3 mmol)及5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]-N-[2-[2-(2-胺基乙氧基)乙氧基]乙基]戊醯胺 (0.48 g，1.32 mmol)，且在微波反應器中將混合物加熱至120℃持續六小時。此後，混合物用飽和氯化銨水溶液及25% IPA/CHCl3 稀釋，且分離各層。有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由正相層析純化，用50-100% B/A梯度(A：己烷，B：10% MeOH/DCM)溶離，得到呈黃色固體狀之4-{7-溴-6-氯-8-氟-2-[(2-{2-[2-({5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊醯基}胺基)乙氧基]乙氧基}乙基)胺基]喹唑啉-4-基}哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.68 g，78%)。ES/MS m/z: 819 (M+H)。
步驟 B ：合併4-{7-溴-6-氯-8-氟-2-[(2-{2-[2-({5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊醯基}胺基)乙氧基]乙氧基}乙基)胺基]喹唑啉-4-基}哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.30 g，0.37 mmol)、1,4-二㗁烷(4 mL)及水(0.75 mL)。添加碳酸鉀(0.24 g，1.11 mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)萘-2-醇(0.20 g，0.74 mmol)及肆(三苯基膦)鈀(0) (0.085 g，0.074 mmol)且在85℃在氮氣下攪拌混合物12小時。此後，將混合物冷卻至環境溫度且過濾以移除固體。用飽和氯化銨水溶液及EtOAc稀釋濾液且分離各層。有機層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由正相層析純化，用90-100% B/A梯度(A：己烷，B：10% MeOH/DCM)溶離，得到呈黃色固體狀之4-{6-氯-8-氟-7-(3-羥基萘-1-基)-2-[(2-{2-[2-({5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊醯基}胺基)乙氧基]乙氧基}乙基)胺基]喹唑啉-4-基}哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.31 g，96%)。ES/MS m/z: 881 (M+H)。
步驟 C ：將4-{6-氯-8-氟-7-(3-羥基萘-1-基)-2-[(2-{2-[2-({5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊醯基}胺基)乙氧基]乙氧基}乙基)胺基]喹唑啉-4-基}哌𠯤-1-甲酸第三丁酯(0.31 g，0.35 mmol)於MeOH (4 mL)中之溶液冷卻至0℃。添加HCl (3 M於MeOH中，6 mL，17.5 mmol)且在0℃下攪拌混合物30分鐘，隨後升溫至環境溫度。在約18小時之後，在真空中濃縮反應混合物。用DCM稀釋殘餘物且再次在真空中濃縮。所得殘餘物用己烷稀釋且在環境溫度下攪拌兩小時。所得固體經過濾且在真空下乾燥，得到N-{2-[2-(2-{[6-氯-8-氟-7-(3-羥基萘-1-基)-4-(哌𠯤-1-基)喹唑啉-2-基]胺基}乙氧基)乙氧基]乙基}-5-[(3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基]戊醯胺鹽酸鹽。此鹽酸鹽(0.19 g，0.23 mmol)藉由與含DIEA (0.16 mL，0.92 mmol)之DCM (2.5 mL)合併而中和。將混合物冷卻至-78℃且添加丙烯醯氯(0.5 M於DCM中，0.4 mL，0.21 mmol)。在30分鐘之後，使混合物升溫至環境溫度。一小時後，用MeOH (1 mL)稀釋混合物且在真空中濃縮。所得殘餘物藉由逆相層析純化，用35-60% B/A梯度(A：10 mM NH4 HCO3 水溶液，具有5% MeOH；B：ACN)溶離，得到呈白色固體狀之標題化合物(0.027 g，14%)。ES/MS m/z: 835 (M+H)。
實例 1 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮
Figure 02_image529
將(13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮(500 mg，1.070 mmol)溶解於DCM (5 mL)及TEA (0.75 mL，5.4 mmol)中。將混合物冷卻至-78℃，接著添加丙烯醯氯(0.085 mL，1.0 mmol)，且在-78℃下攪拌混合物。在5分鐘之後，在-78℃下添加幾滴異丙醇，且隨後在真空中濃縮混合物且使其經受逆相層析，得到兩種滯轉異構體之混合物。滯轉異構體之混合物使用Chiralpak® IC，4.6×150 mm，40% EtOH/CO2 ，5 mL/min，225 nm分離。出柱第二化合物經鑑別為活性滯轉異構體(165 mg，55%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 521/523 [M+H]+ (＞98 e.e.%)。較低活性滯轉異構體首先出柱(133 mg，44%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 521/523 [M+H]+ (＞98 e.e.%)。 表21：以基本上類似於實例1之方式合成的化合物
實例 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
2
Figure 02_image531
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7-氯-9-氟-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 491.2/493.2
3
Figure 02_image533
 1-[(4aS)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7-氯-9-氟-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 477.2/479.2
4
Figure 02_image535
 4-[(4aR)-9-氯-7-甲基-11-側氧基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 511.0/513.0
5
Figure 02_image537
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-7-甲基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 487.0/489.0
6
Figure 02_image539
 (4aR)-8-(2-胺基-3-甲基-苯并噻吩-4-基)-7-氯-9-甲基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 493.0/495.0
7
Figure 02_image541
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-10-氯-8-氟-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 505.2/507.2
8
Figure 02_image543
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-10-氯-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 487.0/489.0
9
Figure 02_image545
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7-氯-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 473.0/475.0
10
Figure 02_image547
 4-[(13aS)-10-氯-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 493.0/495.0
11
Figure 02_image549
 4-[(4aS)-7,9-二氯-3-丙-2-烯醯基-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 499.2/501.2
12
Figure 02_image551
 4-[(4aR)-7-氯-9-氟-11-側氧基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 497.2/499.2
13
Figure 02_image553
 (13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 487.0/489.0
14
Figure 02_image555
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 487.0/489.0
15
Figure 02_image557
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 473.0/475.0
16
Figure 02_image559
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 507.0/509.0
17
Figure 02_image561
 (4aS)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 506.9/508.8
18
Figure 02_image563
 1-[(4aS)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 459.0/461.0
19
Figure 02_image565
 1-[(4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 459.0/461.0
20
Figure 02_image567
 1-[(4aS)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 493.0/495.0
21
Figure 02_image569
 1-[(4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 493.0/495.0
22
Figure 02_image571
 4-[(13aS)-8-氯-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 493.0/495.0
23
Figure 02_image573
 1-[(13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-基]丙-2-烯-1-酮 507.0/509.0
24
Figure 02_image575
 1-[(13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-3,4,6,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-基]丙-2-烯-1-酮 507.0/509.0
25
Figure 02_image577
 4-[(4aR)-7,9-二氯-11-側氧基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 513.0/515.0
26
Figure 02_image579
 4-[(3R,13aS)-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 543.0/545.0
27
Figure 02_image581
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-11-甲基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-6-酮 500.0/502.0
28
Figure 02_image583
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-2-丙-2-烯醯基-3,4,11,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并二吖㖕-6-酮 486.0/488.0
29
Figure 02_image585
 (13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-10-甲基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 501.0/503.0
30
Figure 02_image587
 1-[(13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-10-甲基-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-基]丙-2-烯-1-酮 487.0/489.0
31
Figure 02_image589
 (13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 521.2/523.2
32
Figure 02_image591
 1-[(13aR)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-3,4,6,11,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-2-基]丙-2-烯-1-酮 507.0/509.0
33
Figure 02_image593
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8,10-二氯-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,11,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][2,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 521.0/523.0
在一些情況下，使用DIEA代替TEA。
實例 34 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image595
向4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈(1.58 g，3.46 mmol)於EtOAc (35 mL)、THF (15 mL)及水(40 mL)中之懸浮液中饋入碳酸鉀(1.90 g，13.7 mmol)。將混合物快速攪拌且冷卻至0℃。經由滴液漏斗逐滴添加含丙烯醯氯之DCM (13.0 mL，3.25 mmol，0.25 M)。在冰浴中攪拌10分鐘之後，用EtOAc稀釋混合物且傾入分液漏斗中。分離各層，且用EtOAc再次萃取水層。合併之有機萃取物用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且在真空中濃縮。殘餘物藉由矽膠急驟管柱層析純化，首先用0-100% (10% MeOH/DCM)/DCM溶離，且其次用0-100% [10% (7 N NH3/ MeOH)/DCM]/DCM溶離，得到呈蓬鬆固體狀之所需產物。使固體在醚中超音波處理30分鐘，過濾且在高真空中乾燥，得到標題化合物(1.60 g，91%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 511.0/513.0 [M+H]+ 。 表22：以基本上類似於實例34之方式合成的化合物
實例 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
35
Figure 02_image597
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 529.0/531.0
36
Figure 02_image599
 4-[(4aR)-7-氯-9-氟-11-側氧基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 515.0/517.0
37
Figure 02_image601
 (4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-7-氟-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮 491.0/493.0
38
Figure 02_image603
 1-[(4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-7-氟-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 477.0/479.0
39
Figure 02_image605
 1-[(4aS)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-9-氯-7-氟-1,2,4,4a,5,11-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-3-基]丙-2-烯-1-酮 477.0/479.0
40
Figure 02_image607
 4-[(13aS)-8-氯-10-氟-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 529.0/531.0
41
Figure 02_image609
 (13aS)-9-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-8-氯-10-氟-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-6-酮 505.0/507.0
42
Figure 02_image611
 4-[(13aS)-8-氯-10-氟-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-苯并噻吩-3-甲腈 511.0/513.0
43
Figure 02_image613
 4-[(4aR)-9-氯-7-氟-11-側氧基-3-丙-2-烯醯基-2,4,4a,5-四氫-1H-吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-8-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 515.0/517.0
44
Figure 02_image615
 4-[(3S,13aS)-10-氯-8-氟-3-甲基-6-側氧基-2-丙-2-烯醯基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 542.4/544.4
45
Figure 02_image617
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2-(2,3,3-三氘丙-2-烯醯基)-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈-13 C 533.1/535.1
實例 46
Figure 02_image619
向在0℃下冰浴中冷卻的(4aR)-8-(2-胺基-7-氟-1,3-苯并噻唑-4-基)-7,9-二氯-1,2,3,4,4a,5-六氫吡𠯤并[2,1-c][1,4]苯并㗁氮呯-11-酮(46 mg，0.10 mmol)、2-氟丙-2-烯酸(11 mg，0.12 mmol)、DIEA (53 µL，0.30 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加含50重量%丙基膦酸酐溶液之EtOAc (91 µL，0.15 mmol)。45分鐘後，在真空中濃縮反應混合物。粗混合物藉由逆相層析純化，用20-80% B/A梯度(A：10 mM NH4 HCO3 水溶液，具有5% MeOH；B：ACN)溶離，得到呈白色固體狀之標題化合物(25 mg，47%)。ES/MS m/z: 525 (M+H) 表23：以基本上類似於實例46之方式合成的化合物
實例 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M + H)
47
Figure 02_image621
 4-[(13aS)-10-氯-2-[(E)-4,4-二氟丁-2-烯醯基]-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 579.5/581.4
48
Figure 02_image623
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2-[2-(三氟甲基)丙-2-烯醯基]-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 597.5/599.5
49
Figure 02_image625
 4-[(13aS)-10-氯-2-[(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 586.6/588.6
50
Figure 02_image627
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-[(E)-4-氟丁-2-烯醯基]-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 561.5/563.5
51
Figure 02_image629
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-[(E)-4-羥基丁-2-烯醯基]-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 559.4/561.4
52
Figure 02_image631
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-[2-(羥基甲基)丙-2-烯醯基]-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 559.4/561.4
53
Figure 02_image633
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-(2-氟丙-2-烯醯基)-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 547.0/549.0
54
Figure 02_image635
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-[(E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 573.6/575.6
55
Figure 02_image637
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-[(E)-4-(N-嗎啉基)丁-2-烯醯基]-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 628.6/630.6
56
Figure 02_image639
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-(4-羥基丁-2-炔醯基)-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 557.5/559.4
57
Figure 02_image641
 4-[(13aS)-2-丁-2-炔醯基-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 541.4/543.4
實例 58 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-(4-氟丁-2-炔醯基)-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image643
經由注射器將三氟化二乙基胺基硫(0.03 mL，0.2 mmol)逐滴添加至含有4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-(4-羥基丁-2-炔醯基)-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈(120 mg，0.215 mmol)於DCE (2 mL)中之0℃溶液的密封瓶中。攪拌反應混合物30分鐘，且隨後用水及25% IPA/氯仿溶液稀釋。分離有機物，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物經由矽膠急驟層析純化，用0-100% (10% 7 M NH3 /DCM)/DCM溶離，且經由逆相層析進一步純化，得到呈白色固體狀之標題化合物(7 mg，6%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 559.4/561.4 [M+H]+ 。 表24：以基本上類似於實例57之方式合成的化合物
實例 結構 化合物名稱 ES/MS m/z (M+H)
59
Figure 02_image645
 4-[(13aS)-10-氯-8-氟-2-[2-(氟甲基)丙-2-烯醯基]-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈 561.4/563.5
實例 60 (13aS)-9-(2-胺基-3-氰基-7-氟-苯并噻吩-4-基)-10-氯-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-2-甲腈
Figure 02_image647
將溴化氰(3 M於DCM中，0.15 mL，0.45 mmol)添加至含有含4-[(13aS)-10-氯-8-氟-6-側氧基-2,3,4,12,13,13a-六氫-1H-吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈(100 mg，0.211 mmol)及1 N NaOH (1 mL)之DCM (1 mL)的燒瓶中。在環境溫度下攪拌混合物18小時，接著用水及25% IPA/氯仿溶液稀釋。分離有機物，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。所得殘餘物經由逆相層析，得到呈白色固體狀之標題化合物(29 mg，27%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 517.0/519.0 [M+H]+ 。
實例 61 4-[(13aS)-10-氯-2-[(E)-2-氰基-4,4-二甲基-戊-2-烯醯基]-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈
Figure 02_image649
20 mL微波小瓶裝有4-[(13aS)-10-氯-2-(2-氰基乙醯基)-8-氟-6-側氧基-1,3,4,12,13,13a-六氫吡𠯤并[2,1-d][1,5]苯并㗁唑㖕-9-基]-2-胺基-7-氟-苯并噻吩-3-甲腈(0.410 g，0.756 mmol)、EtOH (8 mL)、哌啶(0.15 mL，1.5 mmol)及三甲基乙醛(0.7 mL，6 mmol)，且用隔片蓋密封。在微波反應器中在120℃下加熱反應混合物60分鐘，在120℃下再加熱90分鐘，且在100℃下再加熱1小時，之後在真空中濃縮。所得殘餘物經由矽膠急驟層析純化，用0-50%丙酮:DCM溶離，得到呈淡黃色固體狀之標題產物(117 mg，25%)。ES/MS m/z (35 Cl/37 Cl) 610.6/612.6 [M+H]+ 。
生物檢定 以下檢定證明例示性化合物為KRas G12C抑制劑且抑制活體外及/或活體內某些腫瘤生長。
KRas G12C 探針佔有率 TR-FRET 檢定 此檢定之目的係量測抑制劑與探針競爭結合至且共價修飾密碼子12處之KRas G12C的能力。信號藉由時差式螢光轉移產生，該螢光轉移在結合於KRas G12C銪標記之抗組胺酸標籤抗體LanthaScreen (Eu Anti-His抗體)之抗體上之銪與經由抗生蛋白鏈菌素及生物素化抑制劑(「KRas探針」，參見製備223)結合於KRas G12C之螢光Tracer 647 (Alexa Fluor™)之間。
抑制劑以劑量反應形式由含10 mM儲備液之100% DMSO測試。使用Labycyte Echo® 555來稀釋且將含有10點、2.8倍連續稀釋液之每孔100 nL轉移至檢定盤。製備檢定盤之兩個複本以量測抑制劑與KRas G12C一起培育5及60分鐘之後的效能。將His標記之KRas G12C (20 nM)添加至檢定緩衝液(20 mM Tris-HCl，pH 7.5，0.01% TX-100及1 mM DTT)中之盤中。培育5分鐘或60分鐘後，添加1 µM KRas探針且使其共價修飾游離KRas G12C歷時1小時。此在含有Eu Anti-His抗體及抗生蛋白鏈菌素塗佈之Tracer 647 (均來自Life Technologies)之緩衝液中稀釋4倍，得到KRas G12C (5 nM)、Anti-His抗體(2 nM)、KRas探針(300 nM)及經抗生蛋白鏈菌素塗佈之Tracer 647 (500 nM)。30分鐘後，螢光信號在Envision™盤讀取器上讀取(在340 nM下激發，在665 nM下追蹤劑發射(em)，及在615 nM下抗體發射)。最大對照孔缺乏抑制劑且最小對照孔缺乏抑制劑與KRas G12C。信號比率(在615處em/在665處em)使用以下等式轉化成抑制%：抑制%=100-[(測試化合物信號-中值最小信號)/(中值最大信號-中值最小信號)×100]。IC50 藉由使用Genedata Screener®將各抑制劑濃度下之抑制%擬合至四個參數非線性對數等式來測定：y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))，其中y=抑制%，A=最小漸近線，B=最大漸近線，C=相對IC50 ，或在兩個漸近線之擬合範圍內產生50%抑制的抑制劑濃度，且D=希爾斜率(Hill Slope)。
大體上如上文所述本發明範疇內之化合物在此檢定中經評估。此檢定中所評估的例示性本發明化合物藉由與探針競爭結合至且共價修飾密碼子12處之KRas G12C而呈現出KRas G12C抑制劑活性。舉例而言，在此檢定中評估的實例1之化合物在5分鐘及60分鐘，n=4時呈現小於0.015 µM之IC50 。
H358 細胞磷酸 -ERK AlphaLISA® 此檢定之目的為量測測試化合物抑制p-ERK1/2 (在人類肺癌細胞H358 (ATCC CRL-5807)中KRas之下游效應子)磷酸化的能力。簡言之，AlphaLISA® SureFire® Ultra™ p-ERK 1/2 (Thr202/Tyr204)檢定為一種夾心免疫檢定，其使用α技術(Perkin Elmer目錄號ALSU-PERK-A50K)，用以定量偵測細胞溶解物中之磷酸-ERK 1/2 (於ERK1中之Thr202/Tyr204，或於ERK2中之Thr185/Tyr187上磷酸化)。
H358細胞在含有10%FBS (GIBCO目錄號：10082-147)的100 µL培養基(RPMI 1640，GIBCO目錄號22400-071)中，以每孔40K細胞塗於96孔盤(Costar #3596)中，且在37℃，5%CO2 下在潮濕塔盤中培育隔夜。次日早晨，將10 µL經連續稀釋(3倍)之測試化合物(50 µM最高濃度)及10 µL對照組(最大信號孔：5% DMSO及最小信號孔：2 µM N-(3-{3-環丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-6,8-二甲基-2,4,7-三側氧基-3,4,6,7-四氫吡啶并[4,3-D]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙醯胺(曲美替尼(trametinib)，作為陽性對照)添加至細胞盤中，且在37℃/5% CO2 下在潮濕塔盤處培育2小時。在環境溫度下製備含有蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合液之溶解緩衝液。藉由在水槽中倒置及震盪細胞盤移除培養基，且隨後吸墨至紙巾上。將溶解緩衝液添加至細胞盤(50 µL/孔)中且該盤在環境溫度下在震盪器上培育10分鐘。對於p-ERK偵測，將受體珠粒與緩衝液稀釋於懸浮液混合物中。使用STARlet液體處理器，將5 µL受體珠粒及2 µL細胞溶解物作為單一介入微量稀釋物(single-step in-tip dilution)轉移至384孔檢定盤中。用箔密封檢定盤且在環境溫度下培育2小時。將供體珠粒與緩衝液稀釋於懸浮液混合物中。使用STARlet，將5 µL供體珠粒添加至檢定盤中，隨後將檢定盤用箔密封及包裹。在環境溫度下在黑暗中培育該盤2小時。隨後使用發光程序在EnVision™盤讀取器(Perkin Elmer)上讀取檢定盤。
使用以下等式將信號轉化為抑制%：抑制%=100-[測試化合物信號-中值最小信號)/(中值最大信號-中值最小信號)×100]。最大信號為無抑制劑之對照孔。最小信號為含有足以完全抑制活性之參考抑制劑的對照孔。IC50 藉由使用Genedata Screener®將各抑制劑濃度下之抑制%擬合至四個參數非線性對數等式來測定：y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))，其中y=抑制%，A=最小漸近線，B=最大漸近線，C=相對IC50 ，或在兩個漸近線之擬合範圍內產生50%抑制的抑制劑濃度，且D=希爾斜率。
大體上如上文所述本發明範疇內之化合物在此檢定中經評估。實例之化合物呈現抑制p-ERK1/2磷酸化之能力。舉例而言，實例1之化合物在此0.00178 µM n=3之檢定中呈現相對IC50 。此資料表明，在此細胞檢定中，實例之化合物呈現出KRas G12C抑制活性。
H358 細胞活性 RAS GTP 酶 ELISA 此檢定之目的為量測測試化合物抑制人類肺癌細胞H358 (ATCC CRL-5807)中之組成型RAS GTP酶活性之能力。RAS GTP酶ELISA套組(Active Motif目錄號52097)含有預塗有麩胱甘肽之96孔盤以捕獲套組供應之GST-Raf-RBD蛋白。細胞提取物中活化RAS (GTP結合)特異性結合於Raf-RBD。用識別人類KRas之一級抗體偵測結合之RAS。與HRP結合之二級抗體識別一級抗體且產生溶液提供化學發光讀數。
將H358細胞以80,000個細胞/孔塗於90 µL無血清培養基(RPMI 1640，GIBCO)中且在37℃/5% CO2 下培育隔夜。次日早晨，將10 µL經連續稀釋(3倍)之測試化合物(500 µM最高濃度)及10 µL對照物(最大信號孔：5% DMSO及最小信號孔：500 µM 1-[4-[6-氯-8-氟-7-(3-羥基-1-萘基)喹唑啉-4-基]哌𠯤-1-基]丙-2-烯-1-酮，WO2015054572作為抑制劑)添加至細胞盤，且在37℃/5% CO2 下培育2小時。製備含有蛋白酶抑制劑混合液及GST-Raf-RBD之完整溶解/結合緩衝液，且將其儲存在冰上。在細胞盤培育完成一小時之前，在溶解/結合緩衝液中稀釋50 µL GST-Raf-RBD，且向ELISA檢定盤中添加緩衝液且在4℃下在平緩搖盪下培育1小時。在2小時之後，用100 µL冰冷PBS洗滌細胞且用100 µL溶解/結合緩衝液溶解。在環境溫度下震盪細胞盤10分鐘。隨後在環境溫度下以1500 rpm使細胞盤離心10分鐘。在此時間期間，在環境溫度下製備1×洗滌緩衝液，且隨後用於洗滌(3×100 µL)經GST-Raf-RBD塗佈之檢定盤。洗滌之後，將50 µL細胞溶解物添加至經GST-Raf-RBD塗佈之檢定盤中且在環境溫度下在輕微震盪下培育1小時。在此培育期期間，製備1×抗體結合緩衝液且使其達至環境溫度。檢定盤用1×洗滌緩衝液洗滌3×100 µL，且隨後添加50 µL一級抗體(在1×抗體結合緩衝液中以1:500稀釋)。該盤在環境溫度下培育1小時。用1×洗滌緩衝液洗滌檢定盤3×100 µL，且隨後添加50 µL二級抗體(在1×抗體結合緩衝液中以1:5000稀釋)且在環境溫度下培育1小時。檢定盤用1×洗滌緩衝液洗滌4×100 µL且隨後在環境溫度下添加50 µL化學發光工作溶液。隨後使用發光程序在EnVision™盤讀取器(Perkin Elmer)上讀取檢定盤。
使用以下等式將信號轉化為抑制%：抑制%=100-[測試化合物信號-中值最小信號)/(中值最大信號-中值最小信號)×100]。最大信號為無抑制劑之對照孔。最小信號為含有足以完全抑制活性之參考抑制劑的對照孔。IC50 藉由使用Genedata Screener®將各抑制劑濃度下之抑制%擬合至四個參數非線性對數等式來測定：y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))，其中y=抑制%，A=最小漸近線，B=最大漸近線，C=相對IC50 ，或在兩個漸近線之擬合範圍內產生50%抑制的抑制劑濃度，且D=希爾斜率。
大體上如上文所述本發明範疇內之化合物在此檢定中經評估。實例之化合物呈現抑制組成型RAS GTP酶活性之能力。舉例而言，實例1之化合物在此檢定中呈現0.00672 µM，n=4之相對IC50 。此資料展示實例之化合物在此人類肺癌細胞培養物中呈現KRas-GTP抑制活性。
3D H358 細胞增殖檢定 此檢定之目的為在3D增殖檢定中使用人類肺癌細胞H358 (ATCC CRL-5807)評估測試化合物抑制率。用CellTiterGlo® 3D試劑(Promega G9683)偵測信號反射細胞增殖。使細胞在補充有10%熱滅活FBS及0.1 mg/ml青黴素/鏈黴素之RPMI 1640 (GIBCO®)中生長。在生長階段中培養H358細胞，且每孔五千個細胞經80 µl/孔之培養基塗於黑色孔透明圓形底部96孔超低附著表面板(Corning®目錄號4520)中。將細胞在37℃下於潮濕箱中培育隔夜。將20 µL/孔經連續稀釋之測試化合物添加至該盤，接著培育96小時。使該等盤達至環境溫度且添加相等體積之環境溫度CellTiterGlo® 3D試劑。在環境溫度下以750 RPM使該等盤振盪10分鐘。在環境溫度下培育1小時以使信號穩定之後，在EnVision™盤讀取器上量測發光信號。使用以下等式將信號轉化為抑制%：抑制%=100-[測試化合物信號-中值最小信號)/(中值最大信號-中值最小信號)×100]。最大信號為無抑制劑之對照孔。最小信號為含有足以完全抑制細胞增殖之參考抑制劑(曲美替尼)的對照孔。IC50 藉由使用Genedata Screener®將各抑制劑濃度下之抑制%擬合至四個參數非線性對數等式來測定：y=(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))，其中y=抑制%，A=最小漸近線，B=最大漸近線，C=相對IC50 ，或在兩個漸近線之擬合範圍內產生50%抑制的抑制劑濃度，且D=希爾斜率。
大體上如上文所述本發明範疇內之化合物在此檢定中經評估。舉例而言，實例1之化合物在此檢定中呈現0.0083 µM之相對IC50 。此資料展示實例1之化合物抑制H358人類肺癌細胞之增殖。
CellTiterGlo® 細胞增殖檢定 此檢定之目的為評估用測試化合物處理後KRas G12C突變腫瘤株之生長。收集一組含有KRas G12C或其他KRas突變之腫瘤細胞株(表25)。所有細胞株係來自ATCC或所指示之其他來源。
通常，在補充有10% FBS (GIBCO，Invitrogen)之RPMI1640或達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco's modified Eagle's medium) (DMEM，GIBCO)中培養細胞。對於維持在上述生長培養基中之2D培養細胞(4×103 個/孔)，在處理前一天將其塗於96孔組織培養盤Corning®目錄號3603)。細胞用化合物處理96小時，且接著使用根據製造商之說明的CellTiterGlo® Luminescent Cell Viability Assay® (對於2D，Promega #G7572)及EnVision™盤讀取器分析生存率。使用非線性回歸及S形劑量-反應曲線，利用GraphPad Prism 4®軟體來計算半最大抑制濃度(IC50 )。表 25 ：在一組KRas G12C突變腫瘤細胞株中實例1、34-36之活體外抗增殖活性
細胞株 實例1 實例34 實例35 實例36
在10 µM 下之抑制% IC50 (µM) 在10 µM 下之抑制% IC50 (µM) 在10 µM 下之抑制% IC50 (µM) 在10 µM 下之抑制% IC50 (µM)
H358 ( 肺) 94.5 0.004 95.6 0.002 96.4 0.002 89.1 0.008
SW1463 ( 結腸) 95.3 0.006 90.1 0.004 94.3 0.005 82.7 0.014
MiaPaca-2 ( 胰臟) 77.2 0.018 82.9 0.01 85.8 0.011 79.6 0.081
H23 ( 肺) 98.2 0.045 96.8 0.026 98 0.024 96.7 0.1
LU99 ( 肺) 89.9 0.303 91.9 0.201 96.6 0.173 99.1 0.349
SW837 ( 直腸) 60.8 0.25 59.6 0.2 64.2 0.33 58.7 0.57
HCC44 ( 肺) 46.4 ＞10 41 ＞10 64.3 2.23 80.6 2.839
LXFA-983L ( 肺) 78.6 3.609 68.8 ＞10 83.1 ＞10 88 ＞10
H2122 ( 肺) 80.4 1.17 78.1 0.66 79.7 0.9 92.8 1.36
SW756 ( 子宮頸) 51.9 1.63 56.9 1.08 56.7 1.55 58.1 2.52
Calu-1 ( 肺) 45.4 ＞10 50.6 1.14 56 0.48 77.4 2.925
H1792 ( 肺) 63.6 3.011 56.7 4.354 81.7 1.41 97.4 2.032
UM-UC-3 ( 膀胱) 54.3 0.73 56.1 0.51 80.4 1.09 91.6 1.86
KYSE-410 ( 食道) 64.6 5.84 63.2 ＞10 68.3 7.974 43.1 ＞10
H1373 ( 肺) 68.8 1.813 67.7 6.739 86.3 3.544 82.6 5.494
SW1573 ( 肺) 35 ＞10 60.8 7.823 44.7 ＞10 54.3 9.35
H2030 ( 肺) 32.9 ＞10 41.1 ＞10 40.3 ＞10 55.8 ＞10
A549 ( 肺) 19.1 ＞10 18.8 ＞10 31.6 ＞10 62.1 9.5
資料表明實例1、34-36之化合物抑制表26中所列之許多KRas G12C突變腫瘤細胞株之生長。
如表25中所概述，實例1、34-36之化合物在2D培養物條件中在大部分具有KRas G12C突變之腫瘤細胞中呈現出抗增殖活性。實例1、34-36之化合物在具有KRas G12S突變之A549細胞中呈現出極少的活性，表明實例1、34-36選擇性抑制具有KRas G12C突變之腫瘤細胞。
對 H358 異種移植模型及胰臟癌 MiaPaca-2 異種移植模型中 KRas G12C 藥效學 (PD) 標記物之抑制 此等檢定之目的為評估經口投與之測試化合物之活體內標靶抑制。將人類肺癌H358細胞或胰臟癌MiaPaca-2細胞植入裸鼠異種移植腫瘤模型中。藉由皮下注射將H358或MiaPaca-2細胞(在1:1 Matrigel®混合中10×106 個，0.2 mL總體積)植入雌性裸鼠之後腿中(Harlan Laboratories)。各組中總共3-4隻小鼠用於靶接合及PD研究。當腫瘤尺寸達至大約300 mg時，用經口投與(管飼)測試化合物或媒劑(20% Captisol®，25 mM磷酸酯，pH 2.0，在0.2 mL中)起始處理。
對於活體內標靶抑制及PD分析，在乾冰上藉由研缽及研杵研磨腫瘤，且將腫瘤片段添加至溶解基質D管(MP Biomedical®，目錄號6913-500)中的800 µL含有1% Triton™ X-100、25 mM Tris pH7.5、150 mM氯化鈉、1 mM EDTA及1 mM具有Halt蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合液(Thermo Scientific，目錄號1861281)之EGTA的溶解緩衝液中，該等管每管具有一個額外的較大珠粒(MP Biomedical® 1/4"陶瓷球面珠粒，目錄號6540-412)。腫瘤片段在Thermo Bio101®快速製備型(FP120)中於設定為4均質化15分鐘，同時冷卻總共2次。溶解物在4℃下以14,000 rpm旋轉10分鐘以澄清。使用BioRad Dc®蛋白檢定對溶解物上清液進行蛋白質估計，且溶解物在來自Ras GTPase Chemi ELISA Kit® (Active Motif，目錄編號52097)之完全溶解/結合緩衝液中稀釋。活性KRas ELISA如下進行：將經麩胱甘肽塗佈之ELISA孔與經稀釋之RAF1-GST一起在完全溶解/結合緩衝液中在4℃下在輕微攪拌下培育1小時。用洗滌緩衝液洗滌孔3次且將100 µg溶解物添加至各孔中，且在環境溫度下在輕度攪拌下培育1小時。將各孔額外洗滌3次，隨後將在抗體結合緩衝液中稀釋之一級抗體添加至各孔中。培育該等盤1小時。將各孔再洗滌3次，隨後向各孔添加稀釋於抗體結合緩衝液中之HRP-結合二級抗體。在環境溫度下培育培養盤1小時。洗滌ELISA孔4次，添加化學發光試劑且接著讀取發光。對於pERK Meso Scale Discovery ELISA，使用25 µg含有0.1% SDS之蛋白質；藉由Meso Scale Discovery提供pERK之Meso Scale Discovery全細胞溶解物套組。
在肺癌 H388 異種移植模型中劑量依賴性活體內標靶抑制及藥效學作用 ： 此檢定之目的為評估肺癌模型中劑量依賴性活體內標靶抑制及藥效學作用。在肺癌H358小鼠異種移植模型中以12.5至100 mg/kg劑量範圍給藥測試化合物。在單次給藥後8小時收集腫瘤樣品。如上文所描述製備腫瘤溶解物且量測對pERK及活性KRas之抑制。結果提供於表26中；在8小時之12.5至100 mg/kg之單次劑量處理之後，實例34之化合物呈現對pERK及活性KRas之劑量依賴性抑制。實例35之化合物在12.5至100 mg/kg之單次劑量處理之後亦呈現出對pERK及活性KRas之良好抑制。在此等劑量下觀測到82.2%-90.6% pERK抑制及73.4%-94%活性KRas抑制。表 26 ：H358異種移植小鼠模型中pERK、pMEK及活性Kras之劑量依賴性抑制
化合物 劑量(mg/kg) 時間 活性RAS 抑制% pERK 抑制%
媒劑 0 8 0 0
實例35 12.5 8 81 82.2
25 8 73.4 85.3
50 8 94 90.6
100 8 91.9 88.9
實例34 12.5 8 14.2 26.9
25 8 35.1 53.2
50 8 31.5 54
100 8 69.3 74.8
在肺癌 H388 異種移植小鼠模型中之時間依賴性活體內標靶抑制及藥效學效應 此檢定之目的為評估肺癌模型中之時間依賴性活體內標靶抑制及藥效學作用。實例35及36之化合物亦在時程實驗中以30 mg/kg給藥。在單次給藥後，在進行後2、4、8、12及24小時收集腫瘤樣品。製備腫瘤溶解物且如上文所描述量測對pERK及活性KRas之抑制。結果提供於表27中。在30 mg/kg之單次劑量處理之後，實例35之化合物呈現對pERK及活性KRas之時間依賴性抑制。在30 mg/kg下，在8小時時觀測到82.6% pERK抑制，且在24小時時pERK抑制減少至65.2%。對於活性KRas，在8小時時實現80.2%抑制，且活性KRas抑制在24小時時降低至54.9%。在30 mg/kg之單次劑量處理之後，實例36之化合物呈現對pERK及活性KRas之時間依賴性抑制。在30 mg/kg下，在8小時時觀測到82.6% pERK抑制，且在24小時時pERK抑制減少至48.8%。對於活性KRas，在8小時實現88.5%抑制，且活性KRas抑制在24小時降低至43.2%。表 27 .在H358模型中pERK及活性KRas之時間依賴性抑制
化合物 劑量(mg/kg) 時間(h) 活性RAS 抑制% pERK 抑制%
媒劑 0 4或8 0 0
實例35 30 2 7.6 67.9
30 4 65.7 73.2
30 8 80.2 82.6
30 12 39.3 71.1
30 24 54.9 65.2
實例36 30 2 72.6 79.7
30 4 72.4 84.2
30 8 88.5 86.9
30 24 43.2 48.8
胰臟癌 MiaPaca -2 異種移植小鼠模型中之活體內標靶抑制及藥效學作用 此檢定之目的為評估胰臟癌模型中之劑量及時間依賴性活體內標靶抑制及藥效學作用。在時程實驗中，以5、10或30 mg/kg給藥實例35之化合物。在單次給藥後，在進行後2、4、8、12及24小時收集腫瘤樣品。製備腫瘤溶解物且如上文所描述量測對pERK及活性KRas之抑制。結果提供於表28中。在5、10或30 mg/kg之單次劑量處理之後，實例35之化合物呈現對pERK及活性KRas之劑量及時間依賴性抑制劑。在5 mg/kg下，在4小時時觀察到活性Ras之63.8%抑制及pERK的50.9%抑制。在10 mg/kg下，在4小時時觀察到活性Ras 85.5%抑制及pERK的58.5%抑制。在30 mg/kg下，在4小時時觀測到活性Ras之90.9%抑制及pERK的58.7%抑制，且在24小時時維持活性Ras之60.7%抑制。表 28 .在MiaPaca-2模型中pERK及活性KRas之劑量及時間依賴性抑制
劑量(mg/kg) 處理時間( 小時) 活性RAS 抑制% pERK 抑制%
   4 0 0
5 2 24.3 51
5 4 63.8 50.9
5 8 57 59
5 12 34.3 47.4
5 24 4.3 -30.2
10 2 67.8 68.5
10 4 85.5 58.5
10 8 78.9 57.6
10 12 44.7 49
10 24 22.8 -14.9
30 2 76 59.5
30 4 90.9 58.7
30 8 89 54.3
30 12 68.9 58.4
30 24 60.7 15.6
肺癌 H358 異種移植小鼠模型中之抗腫瘤生長活性： 此檢定之目的為測定測試化合物(實例34、35及36)在肺癌H358小鼠異種移植模型中之抗腫瘤活性。H358肺腫瘤細胞(10×106 )藉由皮下注射植入雌性裸鼠之後腿中(Taconic Biosciences)。各組中總共4隻小鼠用於功效研究。當腫瘤尺寸達至大約300 mg時，用經口投與(管飼)測試化合物或媒劑(20% Captisol®，25 mM磷酸酯，pH 2.0，在0.2 mL體積中)每日一次或兩次持續28天起始處理。監測隨時間推移之腫瘤生長及體重，以評估療效及毒性體徵。所概述之結果提供於表29中。在100 mg/kg下，基於每天一次給藥時程，觀測到化合物實例34之-6.28%至-30.96%腫瘤生長消退。在30 mg/kg每天兩次給藥時程，觀測到化合物實例35之-67.68%至-72.14%腫瘤消退。在30 mg/kg每天兩次給藥時程，化合物實例36實現-68.96%腫瘤消退。在對此等化合物之整個研究中未觀測到動物體重顯著下降。表 29 ：肺癌H358異種移植小鼠模型中抗腫瘤生長活性
處理 劑量 (mg/kg) 給藥時程 消退 % ( 第 12 天 ) 消退 % ( 第 26 天 )
實例35 30 PO, BID -72.14 -67.68
實例36 30 PO, BID -68.96 NA
實例34 100 PO, QD -30.96 -6.28
其他肺癌模型及大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌及食道癌模型中之抗腫瘤生長活性 除H358異種移植模型之外，在肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌及食道癌之其他異種移植或患者源異種移植(PDX)模型中，以不同劑量測試實例35之化合物。對於H1373、HCC44、MiaPaca-2、SW1463、KYSE-410及UM-UC-3之異種移植模型，通常藉由皮下注射將1:1基質膠混合物中之5-10×106 個細胞(0.2 mL總體積)植入裸鼠後腿中。一般而言，各組總共4隻小鼠用於功效研究。當腫瘤尺寸達至大約200-300 mg時，用經口投與(管飼) 0.2 mL體積的測試化合物或媒劑(20% captisol、25 mM磷酸酯、pH 2.0)起始處理。監測隨時間推移之腫瘤生長及體重，以評估療效及毒性體徵。對於EL3187 PDX模型，將含有腫瘤片段之冷凍小瓶在37℃下在水浴中解凍。將腫瘤片段轉移至50 mL法爾康管(Falcon tube)中且將冰冷DMEM培養基緩慢添加至管中直至總體積35 mL。接著，在4℃下在130× g下將腫瘤片段離心2分鐘且抽吸上清液。重複此洗滌步驟兩次且將腫瘤片段再懸浮於10 mL DMEM中以便植入無胸腺Foxn1nu裸鼠(Envigo RMS公司, Mount Comfort, Indiana)。一旦腫瘤體積達至800至1000 mm3 ，處死動物且使用無菌技術收集腫瘤。將新鮮腫瘤切成10至15 mm3 片段且置放於冷Gibco休眠培養基中。用10 g套管針將腫瘤片段皮下植入動物中。當腫瘤尺寸達至200至300 mm3 時，將動物隨機分組用於化合物處理。
實例35之化合物的抗腫瘤生長或消退活性概述於表30中。在表31中所列舉之模型中，EL3187為患者源異種移植(PDX)模型，且所有其他均為腫瘤異種移植模型。如表31中所示，實例35之化合物在所有模型中展現劑量依賴性抗腫瘤活性，表明實例35之化合物對具有KRasG12C突變之癌症，包括肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌及食道癌具有活性。表 30 ：實例35之化合物在肺癌、大腸直腸癌、胰臟癌、膀胱癌及食道癌異種移植或PDX模型中之抗腫瘤生長活性.
異種移植/PDX模型 (腫瘤類型) 實例35腫瘤生長抑制(%)或消退(-%)
1 mg/kg 3 mg/kg 5 mg/kg 10 mg/kg 30 mg/kg
QD x28 BID x28 QD x28 BID x28 QD x28 BID x28 QD x28 BID x28 QD x28 BID x28
H1373 (肺) 97.9 -26.3 -21.3 -49 -49.7
HCC44 (肺) 28.3 57.5 32.7 61.8 77 84.1
EL3187 (肺) 52 89.2 -39.8 -91 -96 -96
MiaPaca-2 (胰臟) 81.7 -36.1 -27 -45.2 -42 -43.6
SW1463 (CRC) 52.5 48.8 78.3 79.5 89.8 98.8
SW837 (CRC) 18.2 83.6 95.2 62.1 83.5 -23.8
KYSE-410 (食道) 25.3 51.5 66.7 61.8
UM-UC-3 (膀胱) 34.3 45.3 33.6 75 83.1 85
實例 35 之化合物與其他靶向療法之活體外組合功效 除單一療法之外，評定實例35之化合物與其他靶向療法，諸如CDK4及CDK6抑制劑玻瑪西林、EGFR小分子抑制劑埃羅替尼或阿法替尼、EGFR單株抗體西妥昔單抗及ERK抑制劑LY3214996之組合功效。此研究之十一個細胞株獲自ATCC且在ATCC推薦條件下生長。所有細胞株均具有KRAS G12C突變，且其為六個肺癌細胞株(H358、H1373、H1792、H2030、H2122、SW1573及HCC44)、兩個大腸直腸癌細胞株(SW837及SW1463)、一個胰臟癌細胞株(MiaPaca-2)及一個食道癌細胞株(KYSE410)。增殖檢定係以4天生長檢定形式使用細胞TiterGlo®作為讀數進行。簡言之，將細胞塗於96孔細胞培養盤中且使其在37℃下黏附隔夜。第二天，細胞經化合物處理，單一處理或組合處理。首先，將測試化合物在DMSO中連續稀釋，隨後用1% DMSO以5×濃度稀釋於培養基中，且最後添加於培養基中之細胞中以稀釋至1×。將細胞在37℃下再培育4天。在培育期結束時，將細胞TiterGlo®試劑混合且添加至孔中。10分鐘後，藉由Perkin Elmer Envision儀器讀取發光。產生由單一處理及組合處理之4參數數理邏輯模型產生之絕對IC50 值，隨後為各組合處理及細胞株之組合指數。當添加在一起時，基於各化合物之總濃度調整組合IC50 值。(實例：對於化合物1與化合物2之1:1濃度比，組合IC50 增加2倍)。組合指數(CI)量測組合療法之效能不同於預期-若-加成效能之程度且係基於加成性之洛伊(Loewe)定義。
Figure 02_image651
其中 ●
Figure 02_image653
及
Figure 02_image655
為當組合給出時產生效應y之療法A及B之濃度 ●
Figure 02_image657
及
Figure 02_image659
為當單獨給出時產生效應y之A及B之濃度
在一些情況下，若估算IC50 值用於CI計算，則所計算之CI稱為增強指數(Potentiation Index)。組合或增強指數之生物學解釋如下：若組合或增強指數＜0.5，則為協同的；若組合或增強指數在0.5與2之間，則為累加的；且若組合或增強指數＞2，則為拮抗性的。
如表31中所示，實例35之化合物與玻瑪西林之組合對抑制具有KRasG12C突變之腫瘤細胞具有累加或協同功效。在十一個所測試細胞株中，在五個細胞株中觀測到累加效應，其中組合指數(CI)在0.5與1.2之間，且在六個細胞株中觀測到協同效應，其中CI＜0.5，表明實例35之化合物與玻瑪西林之組合可對具有KRas G12C突變之癌症患者提供益處。表 31 ：實例35之化合物與CDK4/CDK6抑制劑玻瑪西林之活體外組合
細胞株名稱 化合物 化合物 IC50 (µM) 實例35 IC50 (µM) 組合式 IC50 (µM) 組合或增強指數
SW1463 玻瑪西林 0.16253 0.001089422 0.001861309 0.859990152
SW837 玻瑪西林 3.2175 0.413147553 0.276563347 0.377680849
H358 玻瑪西林 0.47697 0.003199233 0.006847357 1.077334012
HCC44 玻瑪西林 3.64845 1.764025208 2.86634865 1.205263179
NCI-H1373 玻瑪西林 4.27817 0.403993227 0.11698021 0.158451664
NCI-H1792 玻瑪西林 0.40097 0.118134759 0.041106255 0.225239313
NCI-H2030 玻瑪西林 1.81728 0.819557983 0.357361105 0.316343687
NCI-H2122 玻瑪西林 0.32737 0.031200861 0.02784263 0.488708133
SW1573 玻瑪西林 0.35607 10.7632 0.614058717 0.890789114
KYSE-410 玻瑪西林 1.94423 4.89618484 0.773507455 0.277914318
MIAPACA2 玻瑪西林 0.28033 0.00748134 0.01060427 0.727628496
如表32中所示，實例35之化合物與EGFR小分子抑制劑埃羅替尼或阿法替尼之組合在抑制具有KRasG12C突變之腫瘤細胞方面具有累加或協同效應。對於埃羅替尼組合，在所測試的十一個細胞株中，在五個細胞株中觀測到累加效應，其中組合或增強指數在0.5與1.15之間，且在六個細胞株中觀測到協同效應，其中組合或增強指數＜0.5。對於阿法替尼組合，在所測試之九個細胞株中，在四個細胞株中觀測到累加效應，其中CI在0.5與1.1之間，且在五個細胞株中觀測到協同效應，其中CI＜0.5。此等資料表明，實例35與EGFR小分子抑制劑之組合可對具有KRas G12C突變之癌症患者有益。表 32 ：實例35之化合物與EGFR小分子抑制劑埃羅替尼或阿法替尼之活體外組合
細胞株名稱 化合物 化合物IC50 (µM) 實例35 IC50 (µM) 組合式IC50 (µM) 組合或增強指數
SW1463 埃羅替尼 0.40193 0.001089 0.002231 1.026498376
SW837 埃羅替尼 ＞10 0.413148 0.140876 0.170491111
H358 埃羅替尼 2.19247 0.003199 0.007357 1.151488525
HCC44 埃羅替尼 ＞10 1.764025 1.567802 0.444381951
NCI-H1373 埃羅替尼 ＞10 0.403993 0.411429 0.509203323
NCI-H1792 埃羅替尼 ＞10 0.118135 0.090106 0.381370715
NCI-H2030 埃羅替尼 ＞10 0.819558 0.424816 0.259174125
NCI-H2122 埃羅替尼 12.1511 0.031201 0.030705 0.493309984
SW1573 埃羅替尼 ＞10 10.7632 11.32891 0.526279729
KYSE-410 埃羅替尼 ＞10 4.896185 1.153993 0.11784619
MIAPACA2 埃羅替尼 ＞10 0.007481 0.015373 1.027399401
細胞株名稱 化合物 化合物IC50 (µM) 實例35 IC50 (µM) 組合式IC50 (µM) 組合或增強指數
SW1463 阿法替尼 0.05612 0.003248 0.003838 0.625028705
SW837 阿法替尼 1.28333 0.321329 0.06905 0.134347371
H358 阿法替尼 0.30551 0.002231 0.004945 1.11655131
NCI-H1373 阿法替尼 2.21668 0.255708 0.090101 0.196502052
NCI-H1792 阿法替尼 3.39177 0.903764 0.2928 0.205152445
NCI-H2122 阿法替尼 1.45096 0.03372 0.019501 0.295874375
SW1573 阿法替尼 1.58254 12.736 2.456936 0.872720042
KYSE-410 阿法替尼 0.65031 4.058337 0.041564 0.03707842
MIAPACA2 阿法替尼 1.94391 0.005951 0.011389 0.959906159
如表33中所示，實例35之化合物與EGFR抗體西妥昔單抗之組合對抑制具有KRas G12C突變之腫瘤細胞具有累加或協同功效。在十一個測試細胞株中，五個細胞株具有累加效應，其中增強指數(CI)在0.5與1.06之間，且六個細胞株具有協同效應，其中增強指數＜0.5，表明實例35與西妥昔單抗之組合可對具有KRasG12C突變之癌症患者提供益處。表 33 ：實例35與EGFR抗體西妥昔單抗之活體外組合
細胞株名稱 化合物 化合物IC50 (µM) 實例35 IC50 (µM) 組合式 IC50 (µM) 增強指數
SW1463 西妥昔單抗 ＞20 0.001089422 ＜0.00152 ＜0.4663
SW837 西妥昔單抗 ＞20 0.413147553 0.059912256 0.048338062
H358 西妥昔單抗 ＞20 0.003199233 0.004884468 0.508920734
HCC44 西妥昔單抗 ＞20 1.764025208 5.643865533 1.066474845
NCI-H1373 西妥昔單抗 ＞20 0.403993227 0.433760358 0.357894084
NCI-H1792 西妥昔單抗 ＞20 0.118134759 0.054252171 0.153079899
NCI-H2030 西妥昔單抗 ＞20 0.819557983 2.161595154 0.879171131
NCI-H2122 西妥昔單抗 ＞20 0.031200861 0.021630045 0.23108385
SW1573 西妥昔單抗 ＞20 10.7632 23.86318501 0.739036253
KYSE-410 西妥昔單抗 ＞20 4.89618484 1.117690734 0.076092629
MIAPACA2 西妥昔單抗 ＞20 0.00748134 0.018187633 0.810355342
如表34中所示，實例35之化合物與ERK抑制劑LY3219446之組合對抑制具有KRas G12C突變之腫瘤細胞具有累加或協同功效。在所測試之十個細胞株中，在5個細胞株中觀測到累加效應，其中CI在0.5與1.2之間，且在5個細胞株中觀測到協同效應，其中組合或增強指數＜0.5，表明實例35與ERK抑制劑之組合可對具有KRas G12C突變之癌症患者提供益處。表 34 ：實例35之化合物與ERK抑制劑LY3214996之活體外組合
細胞株名稱 化合物 化合物IC50 (µM) 實例35 IC50 (µM) 組合式IC50 (µM) 組合或增強指數
SW1463 LY3214996 0.42099 0.001089 0.001225 0.563579
SW837 LY3214996 3.4288 0.413148 0.149674 0.202965
H358 LY3214996 1.67124 0.001854 0.004485 1.210955
HCC44 LY3214996 3.26824 1.764025 1.988401 0.867799
NCI-H1373 LY3214996 9.2603 0.403993 0.304663 0.393514
NCI-H1792 LY3214996 3.51533 0.862901 1.310947 0.946077
NCI-H2122 LY3214996 1.60091 0.108719 0.068988 0.338821
SW1573 LY3214996 ＞10 10.7632 8.05786 0.374325
KYSE-410 LY3214996 4.59338 4.896185 2.178332 0.459569
MIAPACA2 LY3214996 0.8405 0.00628 0.014545 1.166658
實例 35 之化合物與化學療法之活體外組合功效 實例35之化合物亦與化學療法在三種肺癌細胞株H1792、H358及H2122中活體外組合，該化學療法包括培美曲塞、卡鉑或順鉑。如表35中所示，對於培美曲塞組合，基於CI觀測到累加或協同效應。在卡鉑與順鉑組合之情況下觀測到類似組合作用。表 35 ：實例35之化合物與化學療法之活體外組合(組合指數)。
細胞株 NCI-H1792 NCI-H358 NCI-H2122
ABS_IC50_實例35 (µM) 0.8399 0.001 0.209
        
ABS_IC50_培美曲塞(µM) 20 20 0.003739
ABS_IC50_組合式(µM) 1.305 0.001 0.000084
組合指數 0.809 0.5 0.011
           
ABS_IC50_卡鉑(µM) 20 20 20
ABS_IC50_組合式(µM) 2.6 0.001 0.0363
組合指數 1.616 0.5 0.087
        
ABS_IC50_順鉑(µM) 0.312 0.773 1.163
ABS_IC50_組合式(µM) 0.134 0.001 0.15
組合指數 0.296 0.5 0.422
實例 35 與其他靶向療法之活體內組合功效 在PDX動物模型中評估實例35之化合物與CDK4/CDK6抑制劑玻瑪西林、EGFR小分子抑制劑埃羅替尼或阿法替尼、抗EGFR單株抗體西妥昔單抗或ERK抑制劑LY3214996之組合。利用總共六個活體內異種移植或PDX模型-四個肺模型(H358, H1373, LU99及EL3187 PDX)、一個大腸直腸模型(SW1463)及一個胰臟模型(MiaPaca-2)。表36為所有此等活體內組合研究結果之彙總。
在所有六個模型中研究實例35之化合物與CDK4/6抑制劑玻瑪西林之組合。在所有六個模型中，組合優於單獨的實例35之化合物或玻瑪西林。在四個肺癌模型及一個胰臟癌模型中，觀測到組合之協同效應及顯著腫瘤生長消退。在大腸直腸SW1463模型中，觀測到比單獨的實例35之化合物或玻瑪西林更好的抗腫瘤活性。
實例35之化合物與EGFR小分子抑制劑埃羅替尼之組合在所有六個模型中進行。在所有六個模型中，組合優於單獨的實例35之化合物或埃羅替尼。在三個肺癌模型及一個胰臟癌模型中，觀測到組合之協同效應及顯著腫瘤生長消退。在大腸直腸癌SW1463模型及肺癌LU99模型中，組合優於單獨的實例35之化合物或埃羅替尼。在肺癌H358異種移植模型中，觀測到相對於單獨的任一化合物，實例3之化合物與EGFR小分子抑制劑阿法替尼之組合的累加效應及較佳抗腫瘤活性。
在H358肺癌異種移植模型及SW1463大腸直腸癌異種移植模型中進行實例35與EGFR抗體西妥昔單抗之活體內組合研究。在兩種模型中，對於該組合，觀測到腫瘤生長消退及較佳組合功效。該組合優於單獨的化合物實例35或西妥昔單抗。
在所有六個模型中研究實例35之化合物與ERK抑制劑(ERKi) LY3214996之組合。在所有六種模型中，對於該組合觀測到協同效應或累加效應，且組合優於單獨的實例35之化合物或ERK抑制劑。在三個肺癌模型(H358、H1373及EL3187)中，觀測到一種胰臟癌模型及一種大腸直腸癌模型，觀測到顯著腫瘤生長消退。表 36 .實例35之化合物與其他靶向療法之組合在腫瘤異種移植或PDX模型中之活體內抗腫瘤活性
處理 劑量 (mg/kg) 劑量 在異種移植或 PDX 模型中之 腫瘤生長抑制 (%) 及消退 (-%)
H358 ( 肺 ) H1373 ( 肺 ) EL3187 ( 肺 PDX) Mia Paca-2 ( 胰臟 ) SW1463 (CRC) LU99 ( 肺 )
實例35 3 QDx28 - - - 85.2 - - - -
10 QDx28 74.9 46.6 98.5 -27 44 68.7
30 QDx28 - - - - - - - 76.2
ERKi 100 QDx28 71.1 - 85.2 85.4 46.5 - 92.7 28.6
玻瑪西林 50 QDx28 77 - 77.6 41.3 45.1 53 - (-21.5)*
埃羅替尼 25 QDx28 76.9 - 50.6 29.5 (-77.7)* 40.9 (-23.1)*
西妥昔單抗 20 QDx28 - 87 - - - 97.9 94.7 -
阿法替尼 25 QDx28 - 77.4 - - - - - -
實例35+ERKi 10+100 - -22.1 - -70.2 -83.3 -65.4 -24.8 -3.7
實例35+玻瑪西林 10+50 - -61.8 - -54.4 -96 -59.8 81 - -37.4
實例35+埃羅替尼 10+25 - -64 - -48.9 -89.9 -62.2 88 - 98.9
實例35+西妥昔單抗 30+20 - -34.6 - - - -20.2 -42.8 -
實例35+阿法替尼 10+25 - 91.3 - - - - - -
*指示平均腫瘤體積大於媒劑對照組
與免疫療法、抗 PD-1 或抗 PD-L1 抗體之組合功效 使用小鼠同基因型模型評估KRas G12C抑制及免疫療法組合之效應。在此模型中，藉由CRISPR基因嵌入於CT-26細胞株(小鼠大腸直腸腫瘤細胞株)中，將KRas G12D突變轉化成KRas G12C突變。藉由基因及功能性表徵證實KRas G12C基因嵌入。經工程改造之細胞株稱為CT-26-H4/KRas G12C。將此等細胞植入至Balb/c小鼠，且化合物處理在腫瘤細胞植入後6天開始。在此研究中，實例35之化合物與抗PD-L1抗體(RMP1 (BioXcell目錄號BE0146))或抗PD-1抗體(Holmgaard RB等人,J. Immunotherapy Cancer 2018; 6(47): 1-15)組合，其中劑量時程列於表37中。如表37中所示，實例35之化合物展現顯著單一藥劑活性，其中腫瘤生長抑制率平均為89.4%，且以30 mg/kg在3週劑量結束時沒有完全反應。抗小鼠PD-L1抗體178G7展示36.1%腫瘤生長抑制且沒有完全反應，並且抗PD-1抗體RMP1展示在劑量(第21天)或第59天結束時70.7%腫瘤生長抑制及10% (10分之1)完全反應。然而，實例35之化合物與抗PD-L1或抗PD-1抗體之組合實現顯著較佳的抗腫瘤活性。在3週劑量結束時，實例35之化合物與抗PD-L1或抗PD-1抗體之組合分別展示約-33.9%與-19.4%腫瘤消退，及30%與40%完全反應。3週之後，停止化合物處理且除抗PD-1組中之1隻動物之外，單藥療法組中之所有腫瘤開始再生長。然而，兩個組合組中之許多腫瘤未展示再生跡象。在最後一次給藥(第59天)之後38天，組合組具有40%及60%完全反應，指示組合組中之許多腫瘤被消滅。此等結果表明，用實例35之化合物與抗PD-L1或抗PD-1抗體之組合治療可能對具有KRas G12C突變之癌症患者有益。表 37 ：實例35之化合物與免疫療法(抗PD-1或抗PD-L1抗體)之組合在CT-26-H4/KRasG12C同基因型模型中之活體內抗腫瘤活性
處理 劑量 給藥頻率 TGI (T/C) (%) 消退% 完全消退( 第21 天) 完全消退( 第59 天)
媒劑 PO, QDx21 - - 0/10 0/10
實例35 30 mg/kg PO, QDx21 89.4 (11.6) - 0/10 0/10
PD-L1抗體(178G7) 500 µg/小鼠 IP, Q7Dx3 36.1 (63.9) -    0/10    0/10
PD-1抗體(RMP1-14) 250 µg/小鼠 IP, BIWx3 -70.7 (29.3)    -    1/10    1/10
實例35+ PD-L1抗體 (178G7) 30 mg/kg PO, QDx21    -    -33.9    3/10    4/10
500 µg/小鼠 IP, Q7Dx3
實例35+ PD-1抗體 (RMP1-14) 30 mg/kg PO, QDx21    -    -19.4    4/10    6/10
250 µg/小鼠 IP, BIWx3
Figure 109142894-A0101-11-0002-3

Claims (25)

  1. 一種下式化合物，
    Figure 03_image661
    其中： A為-OCH2 -、-N(R6 )CH2 、-OCH2 CH2 -、-N(R6 )CH2 CH2 -、-CH2 OCH2 -或-CH2 N(R6 )CH2 -； B為-CH2 -或-C(O)-； Y為-C(CN)-或-N-； R1 為-CN、-C(O)C≡CR8 或下式之基團
    Figure 03_image663
    ； R2 為H、甲基或-CH2 CN； R3 及R5 各自獨立地為H、鹵素、-C0-3 烷基-環丙基、視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基，或視情況經R10 取代1-3次之-O-C1-6 烷基； R4 為H、鹵素，或視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基； R6 為H，或視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基； R7 為H、鹵素、-NR11 R12 、-CH2 NR11 R12 、視情況經R10 或R13 取代1-3次之-C1-6 烷基、-C0-3 烷基環丙基，或視情況經R10 或R13 取代1-3次之-O-C1-6 烷基； R8 為H、視情況經R10 取代1-3次之-C1-4 烷基，或視情況經R10 取代1-3次之-C3-6 環烷基； R9 為H、鹵素、-CN、C0-3 烷基-C3-6 環烷基，或視情況經R10 取代1-3次之-C1-6 烷基； R10 在每次出現時獨立地為鹵素、氧、羥基、-C1-4 烷基或-O-C1-4 烷基； R11 及R12 各自獨立地為H、-C1-4 烷基或-C1-4 雜烷基，其中R11 及R12 可組合形成環雜烷基；及 R13 在每次出現時獨立地為-N-C1-4 烷基， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中A為-OCH2 CH2 -，或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中B為-C(O)-，或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 如請求項1或2之化合物，其中Y為-C(CN)-，或其醫藥學上可接受之鹽。
  5. 如請求項1或2之化合物，其中Y為-N-，或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如請求項1或2之化合物，其中R1 為下式之基團
    Figure 03_image665
    ， 且其中R7 為H、F、Cl、甲基、乙氧基、乙基、異丙基或環丙基，或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如請求項1或2之化合物，其中R1 為下式之基團
    Figure 03_image667
    ， 且其中R9 為H、F、Cl、-CHF2 、-CF3 或-CH2 OH，或其醫藥學上可接受之鹽。
  8. 如請求項1或2之化合物，其中R1 為-CN、-C(O)C≡CR8 ，或其醫藥學上可接受之鹽。
  9. 如請求項1或2之化合物，其中R2 為H或甲基，或其醫藥學上可接受之鹽。
  10. 如請求項1或2之化合物，其中R3 為H、F、Cl、甲基、甲氧基、乙基、異丙基或環丙基，或其醫藥學上可接受之鹽。
  11. 如請求項1或2之化合物，其中R4 為H、F或Cl，或其醫藥學上可接受之鹽。
  12. 如請求項1或2之化合物，其中R5 為H、-CHF2 、-CH2 F、-CH2 OH或-CH2 OCH3 ，或其醫藥學上可接受之鹽。
  13. 如請求項1之化合物，其具有下式：
    Figure 03_image669
    其中： A為-OCH2 -或-OCH2 CH2 -； Y為C(CN)或N； R3 為Cl或F； 當Y係C(CN)時，R4 為H或F；及 當Y係N時，R4 為F， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  14. 如請求項13之化合物，其中A為
    Figure 03_image671
    。
  15. 如請求項1之化合物，其係選自：
    Figure 03_image673
    ， 或其醫藥學上可接受之鹽。
  16. 如請求項15之化合物，其為：
    Figure 03_image675
    。
  17. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  18. 一種如請求項17之醫藥組合物之用途，其用於製造供治療癌症患者之藥劑，其中該癌症係選自肺癌、胰臟癌、子宮頸癌、食道癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌及大腸直腸癌。
  19. 一種如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療癌症患者之藥劑，其中該癌症係選自肺癌、胰臟癌、子宮頸癌、食道癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌及大腸直腸癌。
  20. 如請求項19之用途，其中該癌症為非小細胞肺癌，且其中一或多種細胞表現KRas G12C突變蛋白。
  21. 如請求項19之用途，其中該癌症為大腸直腸癌，且其中一或多種細胞表現KRas G12C突變蛋白。
  22. 如請求項19之用途，其中該癌症為胰臟癌，且其中一或多種細胞表現KRas G12C突變蛋白。
  23. 如請求項19之用途，其中該患者患有癌症，該癌症經測定在投與該化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前具有一或多種表現該KRas G12C突變蛋白之細胞。
  24. 一種如請求項1至16中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其用於製造供治療具有KRAS G12C突變之癌症的患者之藥劑。
  25. 如請求項19至24中任一項之用途，其中亦向該患者投與有效量的以下中之一或多者：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CD4/CDK6抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、EGFR抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、ERK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽、鉑劑，及培美曲塞(pemetrexed)或其醫藥學上可接受之鹽。
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