TW202126302A

TW202126302A - Ｅｚｈ２抑制劑與免疫檢查點抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤藥物中的用途

Info

Publication number: TW202126302A
Application number: TW109133867A
Authority: TW
Inventors: 張嵐; 廖成
Original assignee: 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司; 大陸商蘇州盛迪亞生物醫藥有限公司
Priority date: 2019-09-30
Filing date: 2020-09-29
Publication date: 2021-07-16
Also published as: WO2021063340A1

Abstract

本公開涉及EZH2抑制劑與免疫檢查點抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤藥物中的用途。具體而言，本公開所述的EZH2抑制劑為式(I)所示化合物或其可藥用鹽，所述的免疫檢查點抑制劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段，所述酪胺酸激酶抑制劑為式(II)所示化合物或其可藥用鹽。

Description

EZH2抑制劑與免疫檢查點抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤藥物中的用途

本公開涉及EZH2抑制劑與免疫檢查點抑制劑、多靶點酪胺酸激酶抑制聯合在製備治療腫瘤的藥物中的用途。

蛋白質程序性死亡1(PD-1)是CD28、受體家族的抑制性成員，該家族還包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B細胞、T細胞和髓樣細胞上表達。根據加入單株抗體後對提升T細胞增殖的功能性影響發現了家族最初的成員，CD28和ICOS。藉由在凋亡細胞中篩選差異表達發現了PD-1。目前，已有小野公司的Nivolumab及Merck公司的Pembrolizumab成功獲批上市，用於治療不可切除或轉移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、晚期腎細胞癌、霍奇金淋巴瘤、復發性或轉移性鱗狀細胞癌等。PD-1有兩個配體，分別為PD-L1和PD-L2。PD-L1主要表達於T細胞、B細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞(dendritic cell,DC)上，在活化後細胞上的表達能夠進行上調。PD-L1藉由和PD-1及B7-1的結合抑制免疫系統，很多腫瘤細胞及腫瘤組織微環境的免疫細胞表達PD-L1。新的研究發現乳腺癌、肺癌、胃癌、腸癌、腎癌、黑素瘤、非小細胞肺癌、結腸癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌及肝癌等人類腫瘤組織中檢測到高PD-L1蛋白的表達，且PD-L1的表達水平和患者的臨床及預後緊密相關。

EZH2基因編碼的組蛋白甲基轉移酶是多梳蛋白抑制性複合體2(PRC2)的催化組分。與正常組織相比，EZH2水平在癌組織異常升高，而在癌症晚期或不良預後中，EZH2的表達水平最高。在一些癌症類型中，EZH2表達過剩與EZH2基因的擴增同時發生。大量si/shRNA實驗研究發現在腫瘤細胞系中減少EZH2表達，可抑制腫瘤細胞的增殖，遷移和侵襲或血管生成，並導致細胞凋亡。

目前已有進入臨床開發階段的EZH2抑制劑，以下簡要列舉，衛材開發的Tazemetostat(EPZ-6438)用於治療非霍奇金B細胞淋巴瘤，目前處於臨床Ⅱ期階段，Constellation公司開發的CPI-1205用於治療B細胞淋巴瘤，目前處於臨床I期階段，葛蘭素史克公司開發的GSK-2816126用於治療彌漫大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤，目前處於臨床I期階段。

WO2017084494A中提供了一種EZH2抑制劑，結構如下所示：

Lu Gan等的綜述中提到了EZH2在腫瘤免疫中的新興作用(Biomarker Research，December 2018,6：10)。

酪胺酸激酶抑制劑(TKIs)的抗腫瘤作用機制可能藉由以下途徑實現：抑制腫瘤細胞的損傷修復、使細胞***阻滯在G1期、誘導和維持細胞凋亡、抗新生血管形成等。EGFR過度表達常預示病人預後差、轉移快、對化療藥物抗拒、激素耐藥、生存期較短等。FDA已批准多種多靶點TKIs上市，如：索拉非尼(sorafenib)、凡德他尼(vandetanib)和舒尼替尼(Sunitinib)(Sutent，SU-11248)等。WO2007085188公開了一種與Sunitinib類似的化合物，如下式(II)所示，其可能更好地應用於上述腫瘤的治療。該化合物化學名為5-(2-二乙胺基-乙基)-2-(5-氟-2-氧代-1,2-二氫-吲哚-3-亞基-甲基)-3-甲基-1,5,6,7-四氫-吡咯[3,2-c]吡啶-4-酮，已知其具有抑制參與腫瘤增殖和血管生成，能夠選擇性抑制血管內皮生長因子(VEGF)受體的激酶活性，臨床上可用於腎癌、胃腸間質瘤、結直腸癌和胰腺神經內分泌瘤等多種腫瘤的治療，

WO2018068691公開了一種抗PD-1抗體和VEGFR抑制劑聯合在製備治療癌症的藥物中的用途。

WO2019097369A公開了一種向患者施用EZH2抑制劑和鉑基抗腫瘤劑聯用治療癌症的方法，進一步還可以施用其他抗癌劑，該其他抗癌劑可選自抗PD-1抗體，抗PD-L1抗體和抗CTLA-4的抗體等。

WO2018223030A實施例1公開針對上皮樣肉瘤和腎髓樣癌患者的組織檢測發現EZH2抑制後PD-L1會發生上調，數據表明這些腫瘤被引發由於腫瘤中存在T細胞介導的免疫應答，但是免疫應答可能受到腫瘤中PD-L1表達增加的抑制，這表明這種腫瘤可藉由EZH2抑制和PD-1/PD-L1抑制的組合來治療。實施例2中針對軟組織肉瘤的患者給與他澤司他(tazemetostat)和阿特珠單抗(atezolizumab)的組合治療，但未公開具體藥效信息。

WO2017210395A要求保護一種在有需要的受試者中治療癌症的方法，包括向該受試者施用治療有效量的EZH2抑制劑和治療有效量的免疫檢查點抑制劑，該的免疫檢查點抑制劑可選抗PD-L1抗體，實施例公開了他澤司他(tazemetostat)和阿特珠單抗(atezolizumab)聯用針對局部晚期或轉移性尿路上皮癌患者、彌漫性大B細胞淋巴瘤患者及非霍奇金淋巴瘤的治療方案，但是未給出具體的藥效信息。

本公開中提供一種EZH2抑制劑與免疫檢查點抑制劑、多靶點酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤的藥物中的用途。

某些實施方案中，本公開中該的EZH2抑制劑可選自CPI-0209、CPI-1205、GSK126、瓦勒司他(valemetostat)、他澤司他(tazemetostat)、PF-06821497、DS-3201 GSK-2816126、3-去氮腺嘌呤A(3-deazaneplanocin A)、HKMT-I-005、KM-301中的至少一種。

某些實施方案中，本公開中所述EZH2抑制劑為式(I)所示化合物或其可藥用鹽，

本公開中式(I)所示化合物可藥用鹽可以是鹽酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、戊酸鹽、谷胺酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、對甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、羥乙基磺酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、雙羥萘酸鹽、水楊酸鹽、香草酸鹽、扁桃酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳糖酸鹽或月桂基磺酸鹽等。

某些實施方案中，本公開中所述的免疫檢查點抑制劑可以為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段。

某些實施方案中，本公開中所述的抗PD-1抗體或者其抗原結合片段可選信迪利單抗(sintilimab)、西米普利單抗(cemiplimab)、JS-001、納武單抗(nivolumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹博利珠單抗(pembrolizumab)、AK-103、多西林單抗(dostarlimab)、PD1-PIK、GLS-010、杰諾單抗(genolimzumab)、BI-754091、司帕利珠單抗(spartalizumab)、MGA-012、PF-06801591、XmAb-20717、CS-1003、Sym-021、AGEN-2034、MEDI-5752、MGD-013、AK-105、AK-104、BCD-100、PF-06753512、HLX-10、AMP-224、LZM-009中的至少一種。

在某些實施方式中，本公開中所述的PD-1抗體的輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的 LCDR1、LCDR2和LCDR3，該PD-1抗體的重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。

其中，前面所述的各CDR序列如下表1所示：

較佳的，該PD-1抗體為人源化抗體或其片段。

在可選實施方案中，本公開中述抗PD-1抗體或其抗原結合片段選自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)2片段組成的組的抗體片段。

免疫球蛋白可以來源於任何通常已知的同種型，包括但不限於IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亞類也是本領域技術人員眾所周知的，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同種型”是指由重鏈恆定區基因編碼的Ab種類或亞類(例如，IgM或IgG1)。在一些可選實施方案中，本公開中所述抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型的重鏈恆定區，較佳包含IgG1或IgG4同種型的重鏈恆定區。

在另一些可選實施方案中，該抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含κ或λ的輕鏈恆定區的輕鏈恆定區。

進一步地，較佳人源化抗體輕鏈可變區序列為如SEQ ID NO：10所示的序列或其變體，該變體較佳在輕鏈可變區有0-10的胺基酸變化，更佳為A43S的胺基酸變化；該人源化抗體重鏈可變區序列為如SEQ ID NO：9所示的序列或其變體，該變體較佳在重鏈可變區有0-10的胺基酸變化，更佳為G44R的胺基酸變化。

前述的人源化抗體重、輕鏈的序列如下所示：

重鏈可變區

SEQID NO：9

輕鏈可變區

SEQID NO：10

較佳的，該人源化抗體輕鏈序列為如SEQ ID NO：8所示的序列或其變體；該變體較佳在輕鏈可變區有0-10的胺基酸變化，更佳為A43S的胺基酸變化；該人源化抗體重鏈序列為如SEQ ID NO：7所示的序列或其變體，該變體較佳在重鏈可變區有0-10的胺基酸變化，更佳為G44R的胺基酸變化。

在某些實施方式中，該人源化抗體的輕鏈序列為如SEQ ID NO：8所示的序列，重鏈序列為如SEQ ID NO：7所示的序列。

該人源化抗體重、輕鏈的序列如下所示：

重鏈

SEQID NO：7

輕鏈

SEQID NO：8

在某些實施方式中，該多靶點酪胺酸激酶抑制可選自舒尼替尼(Sunitinib)、帕唑帕尼(Pazopanib)、樂伐替尼(Lenvatinib)、瑞戈菲尼(Regorafenib)、卡博替尼(Cabozantinib)、多韋替尼(Dovitinib)、索拉菲尼(Sorafenib)、凡得他尼(Vandetanib)、克唑替尼(Crizotinib)、安羅替尼(Anlotinib)、普納替尼(Ponatinib)、伊瑪替尼(Imatinib)、ENMD-2076、阿法替尼(Afatinib)、達沙替尼(Dasatinib)、尼達尼布(nintedanib)中的至少一種。

在某些實施方案中，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑為式(II)所示化合物或其可藥用鹽，

本公開中，式(II)所示化合物可藥用鹽可以是鹽酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、戊酸鹽、谷胺酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、對甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、羥乙基磺酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、雙羥萘酸鹽、水楊酸鹽、香草酸鹽、扁桃酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳糖酸鹽或月桂基磺酸鹽等，可選的實施方案中式(II)所示化合物可藥用鹽為蘋果酸鹽。

在某些實施方案中，該EZH2的給藥劑量選自1-1600mg，例如：10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、 150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、210mg、220mg、230mg、240mg、250mg、260mg、270mg、280mg、290mg、300mg、310mg、320mg、330mg、340mg、350mg、360mg、370mg、380mg、390mg、400mg、410mg、420mg、430mg、440mg、450mg、460mg、470mg、480mg、490mg、500mg、510mg、520mg、530mg、540mg、550mg、560mg、570mg、580mg、590mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1000mg、1025mg、1050mg、1075mg、1100mg、1125mg、1150mg、1175mg、1200mg、1225mg、1250mg、1275mg、1300mg、1325mg、1350mg、1375mg、1400mg、1425mg、1450mg、1475mg、1500mg、1525mg、1550mg、1575mg、1600mg，給藥頻次為每天2次，每天1次，每2天1次，每3天一次，每4天一次，每5天一次，每6天一次，每週一次，每2週一次，每3週一次或每4週一次，較佳每天2次或每天1次。

在某些實施方案中，該EZH2的給藥劑量選自1-800mg，給藥頻次為每天2次，每天1次，每2天1次，每3天一次，每4天一次，每5天一次，每6天一次，每週一次，每2週一次，每3週一次或每4週一次，較佳每天2次或每天1次。

在某些實施方案中，該EZH2的給藥劑量選自50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg，給藥頻次為每天2次，每天1次，每2天1次，每3天一次，每4天一次，每5天一次，每6天一次，每週一次，每2週一次，每3週一次或每4週一次，較佳每天2次或每天1次。

在某些實施方案中，該EZH2的給藥劑量選自50mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg，給藥頻次為每天2次或每天1次。

在某些實施方案中，該EZH2的給藥劑量選自150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg，給藥頻次為每天2次，每天1次，每2天1次，每3天一次，每4天一次，每5天一次，每6天一次，每週一次，每2週一次，每3週一次或每4週一次。

在某些實施方案中，該EZH2的給藥劑量選自150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg，給藥頻次為每天2次或每天1次。

在一些實施方案中，該免疫檢查點抑制劑的給藥劑量可以在以下範圍內：0.1-10.0mg/kg、0.1-5mg/kg、1-5mg/kg、2-5mg/kg，例如，劑量可以是0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、 8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg，給藥頻次為每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、1個月一次、每3-6個月或更長一次的給藥頻次施用。

在一些實施方案中，該免疫檢查點抑制劑的劑量範圍選自1-1000mg、80-800mg、80-700mg、80-600mg、80-500mg、80-400mg、80-300mg、100-300mg或200-300mg。例如，劑量可以是1.0mg、1.2mg、1.4mg、1.6mg、1.8mg、2.0mg、2.2mg、2.4mg、2.6mg、2.8mg、3.0mg、3.2mg、3.4mg、3.6mg、3.8mg、4.0mg、4.2mg、4.4mg、4.6mg、4.8mg、5.0mg、5.2mg、5.4mg、5.6mg、5.8mg、6.0mg、6.2mg、6.4mg、6.6mg、6.8mg、7.0mg、7.2mg、7.4mg、7.6mg、7.8mg、8.0mg、8.2mg、8.4mg、8.6mg、8.8mg、9.0mg、9.2mg、9.4mg、9.6mg、9.8mg、10.0mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、130mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195mg、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、230mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、265mg、270mg、275mg、280mg、285mg、290mg、295mg、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、330mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395mg、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、430mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495mg、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、 525mg、530mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595mg、600mg，給藥頻次為每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、1個月一次、每3-6個月或更長一次的給藥頻次施用。

可選的實施方案中，免疫檢查點抑制劑的劑量為80mg、100mg、160mg、200mg、240mg、300mg、320mg、400mg、500mg、600mg、700mg或800mg，給藥頻次為每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、1個月一次、每3-6個月或更長一次的給藥頻次施用。

可選的實施方案中，免疫檢查點抑制劑的量為200mg，給藥頻次為每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、1個月一次、每3-6個月或更長一次的給藥頻次施用。

可選的實施方案中，該免疫檢查點抑制劑的給藥頻次為每2週一次或每3週一次。

可選的實施方案中，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑的劑量選自0.1-1000mg，給藥頻次可以是每天1次、一日二次、每天3次，較佳每天1次。

可選的實施方案中，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑的劑量選自0.1-100mg，具體可選0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、 39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg、69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg，給藥頻次可以是每天1次、一日二次、每天3次，較佳每天1次。

可選的實施方案中，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑按體重給藥，該劑量選自0.1-10.0mg/kg。

在上述按照體重給藥的方案中，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑的劑量可以為0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.8mg/kg、0.9mg/kg、1.0mg/kg、1.2mg/kg、1.4mg/kg、1.6mg/kg、1.8mg/kg、2.0mg/kg、2.2mg/kg、2.4mg/kg、2.6mg/kg、2.8mg/kg、3.0mg/kg、3.2mg/kg、3.4mg/kg、3.6mg/kg、3.8mg/kg、4.0mg/kg、4.2mg/kg、4.4mg/kg、4.6mg/kg、4.8mg/kg、5.0mg/kg、5.2mg/kg、5.4mg/kg、5.6mg/kg、5.8mg/kg、6.0mg/kg、6.2mg/kg、6.4mg/kg、6.6mg/kg、6.8mg/kg、7.0mg/kg、7.2mg/kg、7.4mg/kg、7.6mg/kg、7.8mg/kg、8.0mg/kg、8.2mg/kg、8.4mg/kg、8.6mg/kg、8.8mg/kg、9.0mg/kg、9.2mg/kg、9.4mg/kg、9.6mg/kg、9.8mg/kg、10.0mg/kg，給藥頻次可以是每天1次、一日二次、每天3次，較佳每天1次。

在可選的實施方案中，多靶點酪胺酸激酶抑制劑的劑量選自1-25mg，具體可選15mg、20mg、25mg，給藥頻次可以是每天1次、一日二次、每天3次，較佳每天1次。

可選的實施方案中，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑為(II)所示化合物蘋果酸鹽。

本公開中所述腫瘤是選自上腺皮質癌、肛門癌、肛門直腸癌、肛管癌、闌尾癌、小腦星形細胞瘤、腦星形細胞瘤、基底細胞癌、皮膚癌(非黑色素瘤)、膽道癌、肝外膽管癌、肝內膽管癌、膀胱癌、骨關節癌、骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、腦癌、腦腫瘤、腦幹膠質瘤、室管膜瘤、成神經管細胞瘤、視覺通路和下丘腦神經膠質瘤、乳腺癌、支氣管腺瘤、神經系統癌、神經系統淋巴瘤、中樞神經系統癌、中樞神經系統淋巴瘤、宮頸癌、慢性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞白血病白血病、慢性骨髓增生性疾病、結腸癌、結直腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、淋巴腫瘤、蕈樣真菌病、Sezary綜合症、子宮內膜癌、食管癌、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、眼癌、眼內黑色素瘤、視網膜母細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞腫瘤、卵巢生殖細胞瘤、頭頸癌、肝細胞癌、霍奇金淋巴瘤、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、喉癌、急性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、毛細胞白血病、唇和口腔腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、Waldenstroem巨球蛋白血症、黑色素瘤、間皮瘤、轉移性鱗癌、舌癌、多發性內分泌腫瘤綜合症、骨髓增生異常綜合症、多發性骨髓瘤、鼻咽癌、神經母細胞瘤、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢低惡性潛能腫瘤、胰腺癌、胰島細胞胰腺癌、鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、松果體瘤、垂體瘤、漿細胞腫瘤、胸膜肺母細胞瘤、***癌、直腸癌、腎盂和輸尿管移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、尤文家族肉瘤、卡波西肉瘤、滑膜肉瘤、子宮癌、子宮肉瘤、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、幕上原始神經外胚層腫瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤、尿道癌、子宮內膜異位症、***癌、外陰癌或威爾姆氏腫瘤，較佳結直腸癌或結腸癌。

可以將本公開的免疫檢查點抑制劑構成在組成物中，例如，含有抗體和藥學上可接受的載體的藥物組合物。本文中使用的“藥學上可接受的載體”包括生理學上相容的任意的和所有的溶劑、分散介質、包衣劑、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。在一個實施方案中，用於含有抗體的組成物的載體適合靜脈、肌肉、皮下、胃腸外、腹腔、脊柱或表皮施用(例如，藉由注射或輸注)，本公開的藥物組合物可以包括一種或多種藥學上可接受的鹽、抗氧化劑、水性和非水性載體，和/或佐劑，諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。

在本公開中較佳的實施方案中，該PD-1抗體或其抗原結合片段以注射的方式給藥，例如皮下或靜脈注射或腹腔，注射前需將PD-1抗體或其抗原結合片段配製成可注射的形式。本公開特別佳的實施方案中抗PD-1抗體的可注射形式是注射液或凍乾粉針，其包含PD-1抗體或其抗原結合片段、緩衝劑、穩定劑，任選地還含有表面活性劑。緩衝劑可選自醋酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、以及磷酸鹽中的一種或幾種。穩定劑可選自糖或胺基酸，較佳二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖。表面活性劑選自聚氧乙烯氫化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，較佳該聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯為聚山梨酯20、40、60或80，最佳聚山梨酯20。最為佳的PD-1抗體或其抗原結合片段的可注射形式包含PD-1抗體或其抗原結合片段、醋酸鹽緩衝劑、海藻糖和聚山梨酯20。

本公開提供一種治療腫瘤的方法，包括給與患者治療有效量的上述EZH2抑制劑、免疫檢查點抑制劑和多靶點酪胺酸激酶抑制劑。

本公開另一方面提供一種用於治療腫瘤的EZH2抑制劑，該EZH2抑制劑與該免疫檢查點抑制劑、多靶點酪胺酸激酶抑制劑聯合使用。

本公開另一方面提供一種用於治療腫瘤的免疫檢查點抑制劑，該免疫檢查點抑制劑與EZH2抑制劑、多靶點酪胺酸激酶抑制劑聯合使用。

本公開另一方面提供一種多靶點酪胺酸激酶抑制劑，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑與EZH2抑制劑、免疫檢查點抑制劑聯合使用。

可選的實施方案中，本公開提供的治療腫瘤的方法，該患者為人類。

本公開中所述的酪胺酸激酶抑制劑是指能阻斷酪胺酸激酶的藥物，該多靶點酪胺酸激酶抑制劑是指能同時對於至少兩個受體酪胺酸激酶產生抑制的藥物，受體酪胺酸激酶包括但不限於PDGF-R、VEGFR、flt3、EGFR、HER2、FGFR等。

本公開中所述的“聯合”是一種給藥方式，是指在一定時間期限內給予至少一種劑量的免疫檢查點抑制劑、EZH2抑制劑和多靶點酪胺酸激酶抑制劑，其中三種藥物都顯示藥理學作用。該時間期限可以是一個給藥週期內，例如4週內，3週內，2週內，1週內，或24小時以內。可以同時或不分先後順序給予免疫檢查點抑制劑、EZH2抑制劑和多靶點酪胺酸激酶抑制劑。這種期限包括這樣的治療，其中藉由相同給藥途徑或不同給藥途徑給予免疫檢查點抑制劑、EZH2抑制劑和多靶點酪胺酸激酶抑制劑。

本公開中所述“人源化抗體(humanized antibody)”，也稱為CDR移植抗體(CDR-grafted antibody)，是指將小鼠的CDR序列移植到人的抗體可變區框架，即不同類型的人種系抗體構架序列中產生的抗體。可以克服嵌合抗體由於攜帶大量小鼠蛋白成分，從而誘導的強烈的抗體可變抗體反應。此類構架序列可以從包括種系抗體基因序列的公共DNA數據庫或公開的參考文獻獲得。如人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在“VBase”人種系序列數據庫(在因特網www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可獲得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunologioal Interest，第5版中找到。在本公開中一個較佳的實施方案中，該PD-1人源化抗體的CDR序列選自SEQ ID NO：1，2，3，4，5，6。

本公開中所述“抗原結合片段”，指具有抗原結合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，以及與人PD-1結合的Fv片段sFv片段；包含本公開中所述抗體的選自SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6中的一個或多個CDR區。Fv片段含有抗體重鏈可變區和輕鏈可變區，但沒有恆定區，並具有全部抗原結合位點的最小抗體片段。一般地，Fv抗體還包含在VH和VL結構域之間的多肽接頭，且能夠形成抗原結合所需的結構。也可以用不同的連接物將兩個抗體可變區連接成一條多肽鏈，稱為單鏈抗體(single chain antibody)或單鏈Fv(sFv)。本公開中的術語“與PD-1 結合”，指能與人PD-1相互作用。本公開中的術語“抗原結合位點”指抗原上不連續的，由本公開中抗體或抗原結合片段識別的三維空間位點。

圖1為各組小鼠體重變化曲線圖；

圖2為CT-26小鼠同種移植模型腫瘤體積變化曲線圖。

以下結合實施例用於進一步描述本公開，但這些實施例並非限制本公開的範圍。

實施例1、驗證受試藥在結直腸癌細胞系CT-26雌性huPD-1小鼠同種移植模型中的藥效

1、實驗材料

1)實驗動物

小鼠，huPD-1 BALB/c，江蘇集萃藥康生物科技有限公司，6-8週齡，18-20g，48隻加40%冗餘共68隻。

2)實驗細胞

CT-26，來自於中科院，結直腸癌細胞，F3代次；所需細胞量8.2X10E7。

3)實驗藥物

EZH2抑制劑：式(I)所示化合物；多靶點酪胺酸激酶抑制劑：式(II)所示化合物蘋果酸鹽；抗PD-1抗體：WO2017054646A公開的PD-1抗體，重、輕鏈的序列分別如SEQID NO：7、SEQID NO：8所示。

2、實驗方法及步驟

1)CT-26細胞復蘇，體外培養，獲得1X10E8細胞；68隻6-8週齡雌性huPD-1經1週適應性飼養，稱重，後每隻小鼠於雙側肩胛處皮下接種5*10E5個細胞，每隻接種體積為0.1mL。每週1次測量腫瘤體積及體重，選擇兩側腫瘤體積均在60-120mm³之間的小鼠，依據其右側腫瘤體積和體重隨機分為6組，每組8隻。分組後隨即開始給藥。給藥開始日期視為第0天，給藥及分組信息見表2。給藥開始後，小鼠每週3次測量體重及腫瘤體積。

2)實驗藥物配置見表3。

3)實驗觀察及數據收集及統計分析

接種後，每工作日觀察動物發病及死亡情況。日常觀察包括，腫瘤生長及藥物對實驗動物造成的影響，如活動變化、攝食飲水變化、消瘦情況、毛髮、眼的外觀變化、死亡及其他臨床症狀。接種後至分組前，每週一次測量實驗動物體重。分組後每週3次測量實驗動物體重或根據客戶要求變更測量小鼠體重頻率。接種後至分組前，當腫瘤可見時，每週一次測量實驗動物腫瘤體積，接種分組後，實驗中的動物腫瘤體積每週測量一次。

腫瘤體積測量採用雙向測量法，首先利用遊標卡尺測量腫瘤長短徑，再使用公式TV=0.5×a×b²計算腫瘤體積。其中a是腫瘤的長徑，b是腫瘤的短徑。

實驗終點時，將採用以下分析方法進行數據分析：%△T/C=(mean(T)-mean(T0))/(mean(C)-mean(C0))* 100%；T-給藥組腫瘤體積，T0-給藥組初始腫瘤體積，C-對照組腫瘤體積，C0-對照組初始腫瘤體積。Mean%△Inhibition(TGI%)=((mean(C)-mean(C0))-(mean(T)-mean(T0)))/(mean(C)-mean(C0))* 100%；T-給藥組腫瘤體積，T0-給藥組初始腫瘤體積，C-對照組腫瘤體積，C0-對照組初始腫瘤體積。

3、實驗結果

1)小鼠體重

各組體重在不同時間點的平均體重如表4所示。

各組體重變化百分比見表5。

各組小鼠體重變化曲線如圖1所示。

2)腫瘤體積數據

在本實驗中，1、2、3、4組無瘤內給藥，因此左側和右側腫瘤視為同樣處理方式，數據合併進行分析。第4組34，35#小鼠左側腫瘤體積用Prism異常值分析為異常值，在統計中予以排除，各個處理組腫瘤各時間點的體積如表6所示。

3)腫瘤生長抑制情況

各組腫瘤生長抑制情況見表7。

4)腫瘤各單藥組與對應聯合用藥組兩兩比較結果見表8。

5)腫瘤生長曲線

各組左右側腫瘤生長曲線如圖2所示。第4組34，35#小鼠左側腫瘤體積用Prism異常值分析為異常值，在製圖中予以排除。

討論：

EZH2抑制劑(第2組)在p.o.給藥後第14天平均腫瘤體積為1871.8±263.53mm³，與對照組(第1組，第14天腫瘤體積為2020.2±177.82mm³)相比無顯著差異(TGI%=8%，p=0.6439)。

抗PD-1抗體與多靶點酪胺酸激酶抑制劑聯合給藥組(第3組)在給藥後第14天平均腫瘤體積為918.4±206.16mm³，與對照組相比有顯著性差異(第1組，第14天腫瘤體積為2020.2±177.82mm³，TGI%=57%，p=0.0003)。

EZH2抑制劑、抗PD-1抗體與多靶點酪胺酸激酶抑制劑聯合用藥組(第4組)在給藥後第14天平均腫瘤體積為425.5±110.32mm³，與對照組相比有顯著性差異(第1組，第14天腫瘤體積為2020.2±177.82mm³，TGI%=82%，p<0.0001)。與EZH2抑制劑單獨用藥組(第2組，p<0.0001)和抗PD-1抗體&多靶點酪胺酸激酶抑制劑給藥組(第3組)相比，三藥聯合用藥抑瘤作用更顯著(p<0.0001和p=0.0486)。

<110> 江蘇恆瑞醫藥股份有限公司(JIANGSU HENRUI MEDICINE CO.,LTD.) 蘇州盛迪亞生物醫藥有限公司(SUZHOU SUNCADIA BIOPHARMACEUTICALS CO.,LTD.)

<120> EZH2抑制劑與免疫檢查點抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤藥物中的用途

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 1

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 2

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 3

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 鼠源(Mus musculus)

<400> 6

<210> 7

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

<210> 8

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

<210> 9

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Claims

一種EZH2抑制劑與免疫檢查點抑制劑、多靶點酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤的藥物中的用途。
如請求項1所述的用途，其中該EZH2抑制劑為式(I)所示化合物或其可藥用鹽，
如請求項1所述的用途，其中該免疫檢查點抑制劑為抗PD-1抗體或者其抗原結合片段。
如請求項3所述的用途，其中該抗PD-1抗體的輕鏈可變區包含分別如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，該PD-1抗體的重鏈可變區包含分別如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
如請求項3所述的用途，其中該抗PD-1抗體或其抗原結合片段選自人源化抗體或其片段。
如請求項4或5所述的用途，其中該抗PD-1抗體或其抗原結合片段包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型的重鏈恆定區，較佳包含IgG1或IgG4同種型的重鏈恆定區。
如請求項5所述的用途，其中該人源化抗體的輕鏈可變區序列為如SEQ ID NO：10所示的序列或其變體，該人源化抗體的重鏈可變區序列為如SEQ ID NO：9所示的序列或其變體。
如請求項5所述的用途，其中該人源化抗體的輕鏈序列為如SEQ ID NO：8所示的序列或其變體；該人源化抗體的重鏈序列為如SEQ ID NO：7所示的序列或其變體。
如請求項5所述的用途，其中該人源化抗體輕鏈序列為如SEQ ID NO：8所示的序列，重鏈序列為如SEQ ID NO：7所示的序列。
如請求項1所述的用途，其中該多靶點酪胺酸激酶抑制劑為式(II)所示化合物或其可藥用鹽，
如請求項10所述的用途，其中該多靶點酪胺酸激酶抑制劑為(II)所示化合物蘋果酸鹽。
如請求項2至11中任一項所述的用途，其中該EZH2抑制劑為式(I)所示化合物。
如請求項1至12中任一項所述的用途，其中該腫瘤選自上腺皮質癌、肛門癌、肛門直腸癌、肛管癌、闌尾癌、小腦星形細胞瘤、腦星形細胞瘤、基底細胞癌、皮膚癌(非黑色素瘤)、膽道癌、肝外膽管癌、肝內膽管癌、膀胱癌、骨關節癌、骨肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、腦癌、腦腫瘤、腦幹膠質瘤、室管膜瘤、成神經管細胞瘤、視覺通路和下丘腦神經膠質瘤、乳腺癌、支氣管腺瘤、神經系統癌、神經系統淋巴瘤、中樞神經系統癌、中樞神經系統淋巴瘤、宮頸癌、慢性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞白血病白血病、慢性骨髓增生性疾病、結腸癌、結直腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、淋巴腫瘤、蕈樣真菌病、Sezary綜合症、子宮內膜癌、食管癌、顱外生殖細胞腫瘤、性腺外生殖細胞腫瘤、眼癌、眼內黑色素瘤、視網膜母細胞瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸道類癌、胃腸道間質瘤(GIST)、生殖細胞腫瘤、卵巢生殖細胞瘤、頭頸癌、肝細胞癌、霍奇金淋巴瘤、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、喉癌、急性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、毛細胞白血病、唇和口腔腔癌、肝癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、Waldenstroem巨球蛋白血症、黑色素瘤、間皮瘤、轉移性鱗癌、舌癌、多發性內分泌腫瘤綜合症、骨髓增生異常綜合症、多發性骨髓瘤、鼻咽癌、神經母細胞瘤、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢低惡性潛能腫瘤、胰腺癌、胰島細胞胰腺癌、鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、松果體瘤、垂體瘤、漿細胞腫瘤、胸膜肺母細胞瘤、***癌、直腸癌、腎盂和輸尿管移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、尤文家族肉瘤、卡波西肉瘤、滑膜肉瘤、子宮癌、子宮肉瘤、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、幕上原始神經外胚層腫瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤、尿道癌、子宮內膜異位症、***癌、外陰癌或威爾姆氏腫瘤，較佳結直腸癌、結腸癌。
如請求項1至13中任一項所述的用途，其中該EZH2抑制劑的劑量選自1-1600mg，給藥頻次為每天2次、每天1次、每2天1次、每3天一次、每4天一次、每5天一次、每6天一次、每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次，較佳每天2次或每天1次。
如請求項14所述的用途，其中該免疫檢查點抑制劑的劑量選自0.1-10.0mg/kg或1-1000mg，給藥頻次為每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、1個月一次、每3-6個月一次，較佳每2週一次或每3週一次。
如請求項15所述的用途，其中該多靶點酪胺酸激酶抑制劑的劑量為0.1-1000mg或0.1-10mg/kg，給藥頻次為每天1次、每天2次或每天3次，較佳每天1次。
如請求項16所述的用途，其中該多靶點酪胺酸激酶抑制劑的劑量為給藥劑量選自15mg、20mg、25mg，給藥頻次為每天1次、每天2次或每天3次，較佳每天1次。