TW201906865A - 預防及治療尿失禁之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於預防及/或治療尿失禁之新穎用途及方法，其採用治療上有效量之ActRII受體拮抗劑，例如ActRII受體結合分子，例如ActRII受體抗體，諸如畢馬洛單抗(bimagrumab)抗體。

Description

預防及治療尿失禁之方法
本發明係於活化素受體II型(ActRII)拮抗劑(例如能拮抗活化素、生長分化因子(GDF)、骨形態發生蛋白(BMP)及肌肉生長抑制素(myostatin)與人類ActRII受體結合之分子，例如ActRIIA及/或ActRIIB之拮抗劑抗體，例如畢馬洛單抗)之領域。特別地，其係關於藉由對個體投與治療上有效量之ActRII受體拮抗劑治療及預防尿失禁。
活化素IIB型受體(ActRIIB)為轉形生長因子β (TGF-β)超家族之各種成員之信號傳導受體。此家族之成員包括活化素A、nodal、BMP2、BMP6、BMP7、BMP9、GDF5、GDF8 (肌肉生長抑制素)及GDF11，其等均涉及肌肉之負調節(Akpan等人，2009)。
肌肉生長抑制素(GDF8)經由活化素受體II型(主要經由ActRIIB)起作用及其提議之信號傳導係通過SMAD 2/3路徑，該路徑涉及蛋白質合成及肌細胞分化及增殖之抑制。肌肉生長抑制素抑制或基因切除增加肌肉質量及力量(Lee等人2005，Lee及McPherron 2001，Whittemore等人2003)。
畢馬洛單抗為亦稱作BYM338或MOR08159之單株抗體之INN (國際非專有名稱)，該抗體經開發以較肌肉生長抑制素或活化素(其天然配體)以更大親和力競爭性結合至活化素受體IIB型(ActRIIB)。畢馬洛單抗揭示於WO2010/125003中，該案以如同全文引用的方式併入本文中。WO2010/1253003中所揭示之畢馬洛單抗序列列於表1中。
畢馬洛單抗為全人類抗體(經修改之IgG1、234-235-Ala-Ala、λ2；Fc區之殘基之編號為Kabat之EU索引之編號，E.A.等人，Sequences of proteins of immunological interest.第五版- US Department of Health and Human Services, NIH出版號91-3242，第662、680、689頁(1991))或根據Kabat編號系統之232-233-Ala-Ala；其與ActRIIA及B之配體結合域結合(畢馬洛單抗為ActRII結合分子)，從而防止其配體之結合及隨後信號傳導，該等配體包括充當骨骼肌生長之天然抑制劑之肌肉生長抑制素及活化素。
畢馬洛單抗係與人類及小鼠ActRIIB交叉反應且對人類、食蟹猴、小鼠及大鼠骨骼肌細胞有效。ActRIIB廣泛分佈於骨骼肌、脂肪組織及各種器官(包括心臟)中(Rebbapragada等人，Myostatin signals through a transforming growth factor β-like signaling pathway to block adipogenesis. Molec and Cell Biol. 2003;23:7230-7242)。
骨盆底功能障礙影響患者之骨盆區。骨盆區包括各種解剖結構，包括藉由肌肉及韌帶保持於位置中之膀胱及尿道。當此等組織受損傷、拉伸或以其他方式削弱時，可導致尿失禁。尿失禁為定義為失去膀胱控制之臨床症候群。尿失禁經常由調節尿道之能力下降導致，因為膀胱之內部壓力大於尿道之阻力。
尿自控之消退(例如，由於弱括約肌、分娩或***切除術)經常造成不能有效控制膀胱。失去膀胱控制之嚴重度範圍自每24小時增加之排尿次數至偶爾漏尿至具有突然排尿衝動至夜尿症發作。此外，失去膀胱控制症狀為(i)於突然咳嗽、打噴嚏、笑、舉重及鍛煉後失禁或(ii)引起不能停止之排尿衝動之膀胱肌壁之非自願收縮或(iii)膀胱不能貯存與身體產生一樣多的尿及/或膀胱不能完全清空，造成少量尿洩漏(患者經歷來自尿道之尿之不斷「滴漏」)。
已知若干類型之尿失禁(UI)。例如，由於突然身體運動對膀胱施壓，可發生壓力性尿失禁(SUI)。急迫性尿失禁(例如，人不能保持其尿足夠長時間以及時入廁)為膀胱肌虛弱之結果。由於身體不適(indisposition)或疾病(如癌症、炎症、感染或膀胱結石)，膀胱可漏尿。失禁之其他形式係稱作反射性失禁、心理性失禁及神經性失禁。
存在可用於治療失禁之有限藥物療法。可用於治療婦女之壓力性尿失禁之治療述於Rovner ES、Wein AJ，Treatment options for stress urinary incontinence. Reviews in Urology 2004, 6: S29-S47中。治療標準為骨盆底物理療法及手術程序(例如，懸掛、膀胱頸懸吊)。已測試注射入尿道之生物及其他物質用於治療壓力性尿失禁症狀，僅取得較小成功(Lee PE、Kumg RC、Drutz HP. Periurethral autologous fat injection as a treatment for female stress urinary incontinence- a randomized double-blind controlled trial. J Urol 2001, 165: 153-158)。於劑量擴大研究中將自體肌肉衍生之干細胞(AMDC)注射入尿道括約肌中顯示一些陽性結果，但是僅接受最高劑量之AMDC之患者具有平均墊重之統計學上顯著減少(Peters KM、Dmochowski RR、Carr LK、Magali R、Kaufman MR、Sirls LT、Herschorn S、Birch C、Kultgen PL、Chancellor MB. Autologous muscle derived cells for treatment of stress urinary incontinence in women. J Urol 2014, 192: 469-476)。已測試使用度洛西汀(duloxetine)治療壓力性尿失禁具有變化結果(Norton PA、Zinner NR、Yalcin I、Bump RC.度洛西汀尿失禁研究組. Duloxetine versus placebo in the treatment of stress urinary incontinence. Am J Obstet Gynecol 2002, 187: 40-48；度洛西汀尿失禁研究組之Dmochowski RR、Miklos JR、Norton PA等人，Duloxetine versus placebo for the treatment of North America women with stress urinary incontinence. J Urol 2003, 170: 1259-1263)。
已於壓力性尿失禁之大鼠模型中研究睾酮對尿動力學結果及骨盆底肌之組織病理形態學之影響。發現睾酮提高洩漏點壓力並顯著增加所治療大鼠之肌纖維之尺寸，表明睾酮對壓力性尿失禁之大鼠模型均具有預防性及治療性作用(Mammadov R、Sinsir A、Tuglu I、Eyren V、Gurer E、Ozyurt C. The effect of testosterone treatment on urodynamic findings and histopathomorphology of pelvic floor muscles in female rats with experimentally induced stress urinary incontinence. Int Urol Nephrol 2011, 43: 1003-1008)。因為游離睾酮水平於所治療組中亦係更高，所以存在關於補充性甾體睾酮於患有壓力性尿失禁之婦女中之副作用的潛在關注。
已廣泛研究雄激素於UI中之作用。此等研究表明雄激素可於壓力性尿失禁中起著實質作用(Bai SW、Jung Bh、Chung BC等人，Relationship between urinary endogenous steroid metabolites and lower urinary tract function in postmenopausal women. Yonsei Med J 2003, 44: 279- 287；Jung BH、Bai SW、Chung BC. Urinary profile of endogenous steroids in postmenopausal women with stress urinary incontinence. J Reprod Med 2001, 46: 969-974；Bai SW、Jung Bh、Chung BS等人，Relationship between urinary profile of the endogenous steroids and postmenopausal women with stress urinary incontinence. Neurourol Urodynam 2003, 22: 198-204)。可顯示由鍛煉導致之肌肉質量之增加可造成局部雄激素濃度之增加(Aizawa K、Iemitsu M、Maeda S、Mesaki N、Ushida T、Akimoto T. Endurance exercise training enhances local sex steroidogenesis in skeletal muscle. Medicine and science in sports and exercise 2011, 43(11): 2072-2080)。然而，雄激素之作用係複雜且可取決於合成代謝作用、激素調節、受體表現、一氧化氮調節或此等因素之組合(Ho MH、Bhatia NN、Bhasin S. Anabolic effects of androgens on muscles of female pelvic floor and lower urinary tract. Current Opinion in Ostetrics and Gynecology 2004, 16(5): 405-409)。合成代謝類固醇可增加肌肉質量及力量，但是具有有限使用，因為已知潛在風險。
使用切除卵巢之大鼠模型類比壓力性尿失禁之初步活體內研究提供對可能使用SARM治療壓力性尿失禁之支援(Kadekawa等人，AUA Annual Meeting 2015, New Orleans, LA. PD27-11)。可證實與媒劑對照相比，使用選擇性雄激素受體調節劑(GSK2849466A)可分別使尿道基線壓力(UBP)及在打噴嚏期間之尿道反應振幅(AURS)增加64%及74%。組織學上地，經SARM治療之動物具有於對照組中觀察之尿道肌肉萎縮之逆轉。
於1984年，A. Gruneberger、N. Tommen及D. Foster報導利用β2-腎上腺素克侖特羅(clenbuterol)第一次成功治療婦女及兒童尿失禁。根據此等作者，於大多數患者中，克侖特羅治療之效果於治療之第一週已變得明顯(Gruneberger A. Treatment of motor urge-incontinence with clenbuterol, and flavoxate hydrohloride. British Journal of Obstetrics and Gynaecology 1984; 91: 275-278)。Valrlev等人已總結其在1988至1997年期間利用克侖特羅治療尿失禁之經驗(B. Zozikov、S.I. Kunchev & Chr. Varlev: Application of clenbuterol in the treatment of urinary incontinence; International Urology and Nephrology 33: 413-416, 2001)。Valrlev等人指出儘管已對超過90種藥物於治療尿失禁中之效果作出通告之事實，但是未報導100%成功(例如，有效控制膀胱之完全恢復能力(根據患者膀胱狀況感知(Patient Perception of Bladder Condition/PPBC)，例如，無突然排尿衝動或無夜尿症發作))，雖然有大量藥物。用於尿失禁(UI)之大多數當前治療調節神經系統，及包括非選擇性抗膽鹼能藥物(諸如奧昔布寧(oxybutynin)及丙胺太林(propantheline))或抗蕈毒鹼藥物(諸如托特羅定(tolterodine)、曲司氯胺(trospium)、索利那新(solifenacin)、達非那新(darifenacin)及弗斯特羅定(fesoterodine))。用於UI之腎上腺素調節劑包括三環抗抑鬱藥(例如，丙咪嗪及阿密曲替林(amitriptyline))及β3-腎上腺素受體促效劑(例如，米拉貝龍(mirabegron))。其他尿失禁劑為肌肉鬆弛劑(例如，使逼尿肌鬆弛)，諸如黃酮呱酯(flavoxate)及雙環胺。已於神經性尿失禁中使用肉毒(Botulinum)毒素(諸如肉毒毒素A (onabotulinumtoxin A))。
儘管FDA批准一些藥劑用於治療尿失禁，仍需要具有新穎作用機理之新藥劑，該等藥劑使尿道壓力正常化並穩定尿流且該等藥劑將具有對壓力性尿失禁之有益且更明顯積極效果或對以下之有益效果：例如，每24小時之失禁發作、每24小時之排尿次數、每次失禁之***體積、每24小時之夜尿症發作或患者膀胱狀況感知(PPBC)之改善。
在本發明之前，未考慮或研究活化素II型受體(ActRIIA/B)之靶向抑制作為尿失禁(如壓力性尿失禁(SUI)、急迫性尿失禁(UUI)、反射性尿失禁(RUI)或(NUI)神經性尿失禁或上述病狀)之預防或治療。如本文中所揭示，洞悉ActRIIA/B受體拮抗劑(諸如BYM338/畢馬洛單抗)之全身投與具有對尿失禁(如壓力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁)之有益效果。使用由陰部神經擠壓(PNC)及***擴張(VD)組成(其於雌性大鼠中造成較單獨PNC或VD更嚴重及更長持續損傷)之雙重損傷分娩模擬大鼠模型(Hai-Hong Jiang等人，Dual simulated childbirth injuries result in slowed recovery of pudendal nerve and urethral function; Neurourol Urodyn. 2009 ; 28(3): 229-235；Song等人，Combination Histamine and Serotonin Treatment After Simulated Childbirth Injury Improves Stress Urinary; Neurourology and Urodynamics 35:703-710 (2016))，可證明ActRIIA/B受體拮抗劑(諸如畢馬洛單抗)之有益效果。如本文中所揭示，預期ActRIIA/B受體拮抗劑畢馬洛單抗對雙重損傷分娩模擬大鼠模型之尿失禁具有有益效果，及因此為開發治療人類壓力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁之新途徑提供基礎。
本文中揭示用於治療尿失禁(特定言之人類壓力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁)之ActRII受體拮抗劑。亦提供使用此等ActRII拮抗劑治療尿失禁(特定言之人類壓力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁)之方法。
本文中揭示治療及/或預防尿失禁之方法。該等方法包括對顯示尿失禁症狀或患有尿失禁或有發展尿失禁症狀(如失禁發作、增加之排尿次數、夜尿症或患者膀胱狀況感知(PPBC)之減少)之風險之個體投與治療上有效量之ActRII受體拮抗劑(諸如例如，畢馬洛單抗)。
可使用本文中揭示之治療及/或預防尿失禁之方法治療下列症狀： i.突然需要清空你的膀胱(稱急迫) ii.不得不比平常更多地清空你的膀胱(稱增加之尿頻率) iii.不能控制何時清空你的膀胱(稱急迫性失禁)
本文中揭示用於治療及/或預防尿失禁之ActRII受體拮抗劑。尿失禁可由(例如)由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成或與之相關聯。
本文中亦揭示用於治療尿失禁病狀(如壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁)之ActRII受體拮抗劑。
於一實施例中，利用ActRII受體拮抗劑治療之尿失禁係與分娩或更年期之影響有關或由其造成。
本文中亦揭示治療由(例如)由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成或與之相關聯之尿失禁的方法。該等方法包括對顯示尿失禁症狀之個體投與有效量之ActRII受體拮抗劑。
於一些實例中，治療由虛弱或受損骨盆肌導致之如本文中所述之壓力性尿失禁(SUI)、急迫性尿失禁(UUI)、反射性尿失禁(RUI)或(NUI)神經性尿失禁，其中該肌肉為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌。
於一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑為ActRII受體結合分子，其可阻斷ActRII相互作用配體(諸如肌肉生長抑制素、GDF11及活化素A)與ActRII之接近。ActRII受體結合分子可與ActRIIA及/或ActRIIB受體結合。ActRII結合分子之實例包括(但不限於)與ActRIIA及/或ActRIIB受體結合之抗體，例如，抗ActRII受體抗體。較佳地，該抗ActRII受體抗體為BYM338，亦稱作畢馬洛單抗。
用於治療尿失禁或用於本文所述方法中之ActRII受體拮抗劑之另外實例為ActRIIA或ActRIIB受體之胞外域之可溶形式，其可結合ActRII相互作用配體(諸如肌肉生長抑制素、GDF11及活化素A)。此「受體小體」藉由競爭其配體抑制細胞結合ActRII受體之功能。
本文中揭示用於治療尿失禁或用於本文所述方法中之ActRII受體拮抗劑，其中該ActRII受體拮抗劑為與由SEQ ID NO: 181之胺基酸19-134 (SEQ ID NO: 182)組成之ActRIIB之抗原決定基結合的抗ActRII抗體。
本文中揭示於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑，其中該抗ActRII抗體與包含以下或由以下組成之ActRIIB之抗原決定基結合： (a) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)； (b) SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)； (c) SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)； (d) SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)； (e) SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)； (f) SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)； (g) SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)；或 (h) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)。
於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之其他抗ActRIIB抗體包括例如， a)與包含以下之ActRIIB之抗原決定基結合之抗ActRIIB抗體： (a) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)； (b) SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)； (c) SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)； (d) SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)； (e) SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)； (f) SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)； (g) SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)；或 (h) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)；及 b)與包含以下之ActRIIB之抗原決定基結合之ActRIIB之拮抗劑抗體： (a) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)； (b) SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)； (c) SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)； (d) SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)； (e) SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)； (f) SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)； (g) SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)；或 (h) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)，其中該抗體具有約2 pM之KD 。
於一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑為與ActRIIB結合較其與ActRIIA結合具有約10倍或更大親和力之抗體。
於另一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為包括以下之抗體：包含選自由SEQ ID NO: 1-14組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、包含選自由SEQ ID NO: 15-28組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR2、包含選自由SEQ ID NO: 29-42組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR3、包含選自由SEQ ID NO: 43-56組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、包含選自由SEQ ID NO: 57-70組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR2及包含選自由SEQ ID NO: 71-84組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR3。
於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為包括以下之抗體： (a) SEQ ID NO: 1之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 15之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 29之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 43之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 57之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 71之輕鏈可變區CDR3， (b) SEQ ID NO: 2之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 16之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 30之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 58之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 72之輕鏈可變區CDR3， (c) SEQ ID NO: 3之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 17之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 31之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 45之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 73之輕鏈可變區CDR3， (d) SEQ ID NO: 4之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 18之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 32之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 46之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 60之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 74之輕鏈可變區CDR3， (e) SEQ ID NO: 5之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 19之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 33之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 61之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 75之輕鏈可變區CDR3， (f) SEQ ID NO: 6之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 20之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 34之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 62之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 76之輕鏈可變區CDR3， (g) SEQ ID NO: 7之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 21之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 35之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 49之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 77之輕鏈可變區CDR3， (h) SEQ ID NO: 8之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 22之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 36之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 50之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 64之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 78之輕鏈可變區CDR3， (i) SEQ ID NO: 9之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 23之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 37之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 51之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 65之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 79之輕鏈可變區CDR3， (j) SEQ ID NO: 10之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 24之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 38之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 52之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 66之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 80之輕鏈可變區CDR3， (k) SEQ ID NO: 11之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 25之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 39之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 53之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 67之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 81之輕鏈可變區CDR3， (l) SEQ ID NO: 12之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 26之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 40之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 54之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 82之輕鏈可變區CDR3， (m) SEQ ID NO: 13之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 27之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 41之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 69之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 83之輕鏈可變區CDR3，或 (n) SEQ ID NO: 14之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 28之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 42之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 56之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 70之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 84之輕鏈可變區CDR3。
於另一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為包含與選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之至少一種序列具有至少95%序列同一性之全長重鏈胺基酸序列之抗體。
於額外實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為包含與選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之至少一種序列具有至少95%序列同一性之全長輕鏈胺基酸序列之抗體。
於一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為包含以下之抗體： (a) SEQ ID NO: 99之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 85之可變輕鏈序列； (b) SEQ ID NO: 100之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 86之可變輕鏈序列； (c) SEQ ID NO: 101之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 87之可變輕鏈序列； (d) SEQ ID NO: 102之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 88之可變輕鏈序列； (e) SEQ ID NO: 103之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 89之可變輕鏈序列； (f) SEQ ID NO: 104之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 90之可變輕鏈序列； (g) SEQ ID NO: 105之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 91之可變輕鏈序列； (h) SEQ ID NO: 106之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 92之可變輕鏈序列； (i) SEQ ID NO: 107之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 93之可變輕鏈序列； (j) SEQ ID NO: 108之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 94之可變輕鏈序列； (k) SEQ ID NO: 109之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 95之可變輕鏈序列； (l) SEQ ID NO: 110之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 96之可變輕鏈序列； (m) SEQ ID NO: 111之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 97之可變輕鏈序列；或 (n) SEQ ID NO: 112之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 98之可變輕鏈序列。
於本發明之另一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為包含以下之抗體： (a) SEQ ID NO: 146之重鏈序列及SEQ ID NO: 141之輕鏈序列； (b) SEQ ID NO: 147之重鏈序列及SEQ ID NO: 142之輕鏈序列； (c) SEQ ID NO: 148之重鏈序列及SEQ ID NO: 143之輕鏈序列； (d) SEQ ID NO: 149之重鏈序列及SEQ ID NO: 144之輕鏈序列； (e) SEQ ID NO: 150之重鏈序列及SEQ ID NO: 145之輕鏈序列； (f) SEQ ID NO: 156之重鏈序列及SEQ ID NO: 151之輕鏈序列； (g) SEQ ID NO: 157之重鏈序列及SEQ ID NO: 152之輕鏈序列； (h) SEQ ID NO: 158之重鏈序列及SEQ ID NO: 153之輕鏈序列； (i) SEQ ID NO: 159之重鏈序列及SEQ ID NO: 154之輕鏈序列；或 (j) SEQ ID NO: 160之重鏈序列及SEQ ID NO: 155之輕鏈序列。
於又一實施例中，上述抗ActRII抗體包含(i)與選自由SEQ ID NO:146-150及156-160組成之群之至少一種序列具有至少95%序列同一性之全長重鏈胺基酸序列，(ii)與選自由SEQ ID NO:141-145及151-155組成之群之至少一種序列具有至少95%序列同一性之全長輕鏈胺基酸序列或(iii) (a) SEQ ID NO: 99之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 85之可變輕鏈序列；(b) SEQ ID NO: 100之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 86之可變輕鏈序列；(c) SEQ ID NO: 101之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 87之可變輕鏈序列；(d) SEQ ID NO: 102之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 88之可變輕鏈序列；(e) SEQ ID NO: 103之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 89之可變輕鏈序列；(f) SEQ ID NO: 104之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 90之可變輕鏈序列；(g) SEQ ID NO: 105之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 91之可變輕鏈序列；(h) SEQ ID NO: 106之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 92之可變輕鏈序列；(i) SEQ ID NO: 107之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 93之可變輕鏈序列；(j) SEQ ID NO: 108之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 94之可變輕鏈序列；(k) SEQ ID NO: 109之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 95之可變輕鏈序列；(l) SEQ ID NO: 110之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 96之可變輕鏈序列；(m) SEQ ID NO: 111之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 97之可變輕鏈序列；或(n) SEQ ID NO: 112之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 98之可變輕鏈序列。
亦揭示於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑，其為交叉阻斷或藉由本文中上述至少一種抗體交叉阻斷之抗ActRII受體抗體。
於另一實施例中，於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之ActRII受體拮抗劑可為抗ActRII受體抗體，其具有通過Fc區之突變改變之效應功能。
於治療尿失禁或於本文中所述方法中使用之抗體之實例為藉由pBW522或pBW524 (2009年8月18日分別以寄存編號DSM22873及DSM22874寄存於DSMZ, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, Germany)編碼之抗ActRII抗體。
此外，揭示畢馬洛單抗用於治療及/或預防尿失禁或其特定形式(如壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁)之用途，其中該尿失禁係由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成。骨盆肌可為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌及肌肉無力或受損係由分娩或更年期之影響造成。
本文中闡述之工作實例描述藉由於雙重損傷分娩模擬大鼠模型(Hai-Hong Jiang等人，Dual simulated childbirth injuries result in slowed recovery of pudendal nerve and urethral function; Neurourol Urodyn. 2009; 28(3): 229-235)中使用畢馬洛單抗，可測試並證明ActRII受體拮抗劑對壓力性尿失禁之預期有益效果。本文中闡述之工作實例對基於ActRII受體拮抗劑開發治療人類壓力性尿失禁或急迫性尿失禁之新途徑提供基礎。
定義 為了本發明可更容易理解，首先定義某些術語。遍及實施方式闡述額外定義。
術語「包括」意指「包含」，例如，「包括」X之組合物可僅由X組成或可包含一些額外的東西，例如X+Y。
與數值x有關之術語「約」意指(例如)x±10%。
下列例示可能的臨床前治療方案以評價用ActRII結合分子，更佳地ActRII之拮抗劑抗體(例如畢馬洛單抗)治療之可能效果。
該治療係藉由使用由陰部神經擠壓(PNC)及***擴張(VD)組成之雙重損傷分娩模擬大鼠模型(其於雌性大鼠中造成較單獨PNC或VD更嚴重及更長持續損傷) (例如，Hai-Hong Jiang等人，Dual simulated childbirth injuries result in slowed recovery of pudendal nerve and urethral function; Neurourol Urodyn. 2009; 28(3): 229-235；Song等人，Combination Histamine and Serotonin Treatment After Simulated Childbirth Injury Improves Stress Urinary; Neurourology and Urodynamics 35:703-710 (2016)) (用於尿失禁之常用實驗模型)描述ActRII受體抗體用於治療尿失禁之洞察及預期效果來例示。熟習者知道針對其他物種(特定言之人類)如何建立適宜實驗或給藥方案。
術語「ActRIIA」及「ActRIIB」係指活化素受體。活化素通過包含至少兩種I型(I及IB)及兩種II型(IIA及IIB、aka ACVR2A及ACVR2B)受體之受體絲胺酸激酶之異二聚體複合物信號傳導。此等受體為由具有半胱胺酸富集區之配體結合胞外域、跨膜域及具有預測之絲胺酸/蘇胺酸特異性之細胞質域組成之全跨膜蛋白質。I型受體對於信號傳導而言所必需，而需要II型受體用於結合配體且用於I型受體之表現/募集。I及II型受體於導致I型受體藉由II型受體磷酸化之配體結合後形成穩定複合體。活化素受體II B (ActRIIB)為肌肉生長抑制素之受體。活化素受體II A (Act RIIA)亦為肌肉生長素之受體。術語ActRIIB或Act IIB受體係指如SEQ ID NO: 181 (AAC64515.1, GI:3769443)中所定義之人類ActRIIB。研究級多株及單株抗ActRIIB抗體係此項技術中已知，諸如彼等由R&D Systems® , MN, USA製備者。當然，抗體可經培養以對抗來自其他物種之ActRIIB及用於治療彼等物種之病理狀況。
｢ActRII結合分子｣意指能單獨或與其他分子締合地與人類ActRII受體ActRII A及/或ActRIIB結合之任何分子。結合反應可藉由標準方法(定性檢定)顯示，該等方法包括(例如)用於測定與肌肉生長抑制素結合之ActRII受體之抑制之結合檢定、競爭檢定或生物檢定或參考陰性對照測試之任何種類之結合檢定，其中使用非相關特異性，但是理想地相同同型之抗體(例如，抗CD25抗體)。ActRII受體結合分子之非限制性實例包括小分子(諸如適體)或經設計及/或經受結合該受體之其他核酸分子、配體誘餌及如由B細胞或融合瘤產生之針對ActRII受體之抗體、及嵌合抗體、CDR-接枝抗體或人類抗體或其任何片段(例如，F(ab’)2及Fab片段)以及單鏈或單域抗體。較佳地，ActRII受體結合分子對抗(例如，降低、抑制、減少、延緩)天然配體與ActRII受體之結合。於所揭示方法、方案、套組、製程及用途之一些實施例中，採用ActRIIB受體結合分子。
「信號傳導活性」係指一般由導致信號自細胞之一部分傳輸至細胞之另一部分之蛋白質間相互作用(諸如生長因子與受體之結合)開始的生物化學因果關係。一般而言，該傳輸涉及引起信號傳導之系列反應中之一或多種蛋白質上之一或多個酪胺酸、絲胺酸或蘇胺酸殘基的特定磷酸化。倒數第二製程通常包括導致基因表現改變之核事件。
如本文中所指稱，術語「抗體」包括全抗體及其任何抗原結合片段(即，「抗原結合部分」)或單鏈。天然產生之「抗體」為包括藉由二硫鍵互相連接之至少兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈之醣蛋白。各重鏈包括重鏈可變區(本文中縮寫為VH )及重鏈恆定區。重鏈恆定區包括三個域：CH1、CH2及CH3。各輕鏈包括輕鏈可變區(本文中縮寫為VL )及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包括一個域：CL 。VH 及VL 區可進一步細分成高變區(稱作互補決定區(CDR))，其內部散佈更保守區(稱作框架區(FR))。各VH 及VL 係由按下列順序自胺基末端至羧基末端排列之三個CDR及四個FR組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈可變區含有與抗原相互作用之結合域。抗體之恆定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統之各種細胞(例如，效應細胞)及經典補體系統之第一組分(Clq))之結合。
如本文中所用，術語抗體之「抗原結合部分」(或簡單地「抗原部分」)係指抗體之保留與抗原(例如，ActRIIB之部分)特異性結合之能力之全長或一或多個片段。已顯示抗體之抗原結合功能可藉由全長抗體之片段進行。涵蓋於術語抗體之「抗原結合部分」內之結合片段之實例包括Fab片段；由VL 、VH 、CL 及CH1域組成之單價片段；F(ab)2 片段(包括兩個Fab片段之二價片段)，其各者與藉由鉸鏈區之二硫橋連接之相同抗原結合；由VH 及CH1域組成之Fd片段；由抗體之單臂之VL 及VH 域組成之Fv片段；dAb片段(Ward等人，1989 Nature 341:544-546)，其由VH 域組成；及單離互補決定區(CDR)。
此外，雖然Fv片段之兩個域VL 及VH 係藉由單獨的基因編碼，但是其可使用重組方法藉由使其成為單一蛋白質鏈之合成連接子而接合，在單一蛋白質鏈中，VL 及VH 區成對以形成單價分子(稱作單鏈Fv (scFv)；參見，例如，Bird等人，1988 Science 242:423-426；及Huston等人，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883)。此等單鏈抗體亦意欲涵蓋於術語抗體之「抗原結合區」內。此等抗體片段係使用為熟習此項技術者已知之習知技術獲得，及該等片段係以與完整抗體相同的方式針對功效加以篩選。
術語「交叉阻斷(cross-block/cross-blocked/cross-blocking)」在本文中可互換使用以意指於標準競爭結合檢定中，抗體或其他結合劑干預其他抗體或結合劑與ActRIIB (特定言之配體結合域)結合之能力。
如本文中所用，術語「單株抗體」係指單分子組合物之抗體分子之製劑。單株抗體組合物顯示對特定抗原決定基之單結合特異性及親和力。
如本文中所用，術語「人類抗體」意欲包括具有框架區及CDR區均衍生自人類起源之序列之可變區之抗體。此外，若抗體含有恆定區，則該恆定區亦衍生自此等人類序列(例如，人類生殖系序列或人類生殖系序列之突變版本)或含有衍生自人類框架序列分析之共通框架序列之抗體，例如，如Knappik等人(2000. J Mol Biol 296, 57-86)中所述。本發明之人類抗體可包含不由人類序列編碼之胺基酸殘基(例如，藉由活體外隨機或定點誘變或藉由活體內體細胞突變引入之突變)。然而，如本文中所用，術語「人類抗體」無意包括其中衍生自另一哺乳動物物種(諸如小鼠)之生殖系之CDR序列已接枝至人類框架序列之抗體。
人類單株抗體係藉由融合瘤產生，該融合瘤包含自具有包括人類重鏈轉基因及輕鏈轉基因之基因組之轉基因非人類動物(例如，轉基因小鼠)獲得之B細胞與永生化細胞之融合。
如本文中所用，術語「重組人類抗體」包括藉由重組方法製備、表現、創造或單離之所有人類抗體，諸如自對於人類免疫球蛋白基因而言為轉基因或轉染色體的動物(例如，小鼠)或自其製備之融合瘤而單離之抗體、自經轉形以表現人類抗體之宿主細胞(例如，自轉染瘤)單離之抗體、自重組組合人類抗體庫單離之抗體及藉由涉及將所有或部分人類免疫球蛋白基因、序列剪接至其他DNA序列之任何其他方法所製備、表現、創造或單離之抗體。此等重組人類抗體具有框架區及CDR區衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區。然而，於某些實施例中，此等重組人類抗體可經受活體外誘變(或，當使用針對人類Ig序列為轉基因之動物時，活體內體細胞誘變)及因此重組抗體之VH 及VL 區之胺基酸序列為當衍生自人類生殖系VH 及VL 序列及與之相關時，可不天然存在於活體內之人類抗體生殖系庫內之序列。
如本文中所用，「同型」係指藉由重鏈恆定區基因提供之抗體類別(例如，IgM、IgE、IgG(諸如IgG1或IgG2))。
如本文中所用，「與ActRIIB多肽結合」之抗體意欲係指以約100 nM或更少、約10 nM或更少或約1 nM或更少之KD 與人類ActRIIB多肽結合之抗體。「與ActRIIB以外之抗原交叉反應」之抗體意欲係指以約10 x 10-9 M或更少、約5 x 10-9 M或更少或約2 x 10-9 M或更少之KD 與該抗原結合之抗體。「不與特定抗原交叉反應」之抗體意欲係指以約1.5 x 10-8 M或更大之KD 或約5至10 x 10-8 M或約1 x 10-7 M或更大之KD 與抗原結合之抗體。於某些實施例中，不與抗原交叉反應之此等抗體於標準結合檢定中展示對此等蛋白質基本上不可偵測之結合。KD 可使用生物感測器系統(諸如Biacore® 系統)或溶液平衡滴定測定。
如本文中所用，術語「拮抗劑抗體」意欲係指在肌肉生長抑制素或其他ActRIIB配體(諸如活化素或GDF-11)之存在下，抑制ActRIIB誘導之信號傳導活性之抗體及/或在肌肉生長抑制素或其他ActRIIA配體(諸如活化素或GDF-11)之存在下，抑制ActRIIA誘導之信號傳導活性之抗體。偵測此之檢定之實例包括抑制肌肉生長抑制素誘導之信號傳導(例如藉由Smad依賴性報導基因檢定)、抑制肌肉生長抑制素誘導之Smad磷酸化(P-Smad ELISA)及抑制肌肉生長抑制素誘導之骨骼肌細胞分化之抑制(例如藉由肌酸激酶檢定)。
於一些實施例中，與ActRIIB多肽結合之抗體以約10 nM或更少、約1 nM或更少或約100 pM或更少之IC50 抑制肌肉生長抑制素誘導之信號傳導，如於Smad依賴性報導基因檢定中所量測。
如本文中所用，術語「KD 」意欲係指解離常數，其獲自Kd 與Ka 之比率(即Kd /Ka )且表現為莫耳濃度(M)。抗體之KD 值可使用此項技術中建立良好之方法測定。測定抗體之KD 之方法係藉由使用表面電漿共振(諸如Biacore® 之生物感測器系統或溶液平衡滴定(SET)) (參見Friguet B等人(1985) J. Immunol Methods; 77(2): 305-319及Hanel C等人(2005) Anal Biochem; 339(1): 182-184)。
如本文中所用，術語「ADCC」或「抗體依賴性細胞毒性」活性係指人類B細胞消耗活性。ADCC活性可藉由此項技術中已知之人類B細胞消耗檢定量測。
如本文中所用，術語「最佳化」意指核苷酸序列已經改變以使用於產生細胞或生物體(一般而言真核細胞(例如，畢赤酵母菌屬(Pichia )細胞、木黴屬(Trichoderma )細胞、 中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary/CHO)或人類細胞))中首選之密碼子編碼胺基酸序列。最佳化核苷酸序列經改造以完全或盡可能多地保留藉由起始核苷酸序列(其亦稱作「親本」序列)原始編碼之胺基酸序列。本文中之最佳化序列已經改造以具有於CHO哺乳動物細胞中首選之密碼子，然而，本文中亦設想於此等序列其他真核細胞中之最佳化表現。藉由最佳化核苷酸序列編碼之胺基酸序列亦稱作最佳化。
如本文中所用，術語本發明之化合物之「治療上有效量」係指將引起個體之生物或醫學反應(例如，改善症狀、減輕病狀、減慢或延緩疾病進展或預防疾病等)之本發明之化合物之量。於一非限制性實施例中，術語「治療上有效量」係指當對個體投與時，有效地至少部分減輕、抑制、預防及/或改善與尿失禁相關聯之病狀之本發明之化合物的量。尿失禁症狀/病狀為(i)於突然咳嗽、打噴嚏、笑、舉重及鍛煉後失禁或(ii)引起不能停止之排尿衝動之膀胱肌壁之非自願收縮或(iii)膀胱不能貯存與身體產生一樣多的尿及/或膀胱不能完全清空，造成少量尿洩漏(患者經歷來自尿道之尿之不斷「滴漏」)。
如本文中所用，術語尿失禁係指失去膀胱控制之所有程度或敏感度範圍，如每24小時之失禁發作、每24小時之排尿次數、每次失禁之***體積、每24小時之夜尿症發作或患者膀胱狀況感知之改善。嚴重度範圍自當咳嗽或打噴嚏時的偶爾漏尿至具有突然排尿衝動。當膀胱之內部壓力大於尿道之阻力時，其發生。據報導尿失禁一般由由於膀胱下垂、骨盆肌(包括肛提肌及球海綿體肌)擴張及尿道括約肌無力所致之調節尿道之能力之下降導致。存在若干類型之尿失禁：當身體運動突然對膀胱施壓時，發生壓力性尿失禁(SUI)；當由於膀胱肌之敏感度人們不能保持其尿足夠長時間以及時如廁時及當由於極端刺激(諸如醫學病狀(包括膀胱癌、膀胱炎症、膀胱出口梗阻、膀胱結石或膀胱感染))導致膀胱漏尿時，發生急迫性尿失禁(UUI)；由於癡呆所致之心理性失禁；及由於管理尿道之神經損傷，發生神經性尿失禁(NUI)。壓力性失禁為青年及中年婦女之膀胱控制問題之最常見類型。當膀胱在身體活動期間漏尿時，發生壓力性尿失禁。當咳嗽、做運動或舉起重物時，其可發生。易感因素為懷孕或更年期。男人可於良性***增生或***癌手術治療後發展壓力性失禁。每次失禁***之尿量可自幾滴至100 mL或更多變化。於一些情況下，其係與分娩之影響有關。其亦可在更年期前後開始。反射性尿失禁涉及用於逼尿肌收縮及括約肌鬆弛之神經控制機制之功能障礙。由於中風、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、腦瘤、脊髓損傷或多發性硬化症，RUI可發生。RUI患者經歷週期性排尿而無需要***之意識。
壓力性尿失禁可與急迫性尿失禁(UUI)共存。急迫性尿失禁為稱作過度活躍或過度敏感膀胱之複合體之部分，其包括具有或不具有急迫性尿失禁之頻繁性及/或急迫性症狀。患有失禁之75%之患者為老年女性。壓力性尿失禁(SUI) (在增加腹壓之活動(例如，咳嗽、打噴嚏、身體鍛煉)期間尿之非自願洩漏)影響至多35%之成年婦女(Luber KM. The definition, prevalence, and risk factors for stress urinary incontinence. Rev Urol (suppl.) 2004; 6: S3)。
如本文中所用，術語任何疾病或病症之「治療(treat/treating/treatment)」於一實施例中係指改善疾病或病症(即，減慢或阻止或減少疾病或其臨床症狀中之至少一者之發展)。於另一實施例中，「治療(treat/treating/treatment)」係指減輕或改善至少一種物理參數(包括彼等無法被患者識別之參數)。於又一實施例中，「治療(treat/treating/treatment)」係指身體上(例如，穩定可識別症狀)、生理學上(例如，穩定物理參數)或二者調節疾病或病症。於又一實施例中，「治療(treat/treating/treatment)」係指防止或延緩疾病或病症之發作或發展或進展。
如本文中所用，若個體自治療將在生物學上、醫學上或生活品質上受益，則此個體係「需要」此治療。
期望關於ActRII受體之抗體(例如，畢馬洛單抗)可減少通過此等受體之信號傳導，及導致尿失禁之預防及/或治療。壓力性尿失禁(SUI)係於全球流行中增加，對受感染個體之生活品質具有巨大不利結果。由婦女之出生創傷、更年期及老齡化導致之骨盆底肌之虛弱可導致尿道缺少支持導致壓力性失禁及神經支配變化及回饋機制可導致急迫性失禁。存在有限有效醫藥干預以治療壓力性失禁。
因此，於一態樣中，本發明提供ActRII結合分子(例如，畢馬洛單抗或包括該抗體之抗原結合部分之功能蛋白)，其用於治療尿失禁。較佳地ActRII抗體結合人類ActRIIB及ActRIIA蛋白。人類ActRIIB之多肽序列係詳述於SEQ ID NO: 181 (AAC64515.1, GI:3769443)中。人類ActRIIA蛋白具有基因庫(Genbank)登記號AAH67417.1 (NP_001607.1, GI:4501897)。於一實施例中，用於治療尿失禁之抗體或功能蛋白係來自具有起源(諸如人類或駱駝)之哺乳動物。因此用於治療尿失禁之抗體可為嵌合人類或人類化抗體。於一特定實施例中，用於治療尿失禁之抗ActRII抗體特徵為具有抗原結合區之人類單株抗體，該抗原結合區對人類靶蛋白ActRIIB具特異性且與ActRIIB及ActRIIA或其片段結合。
於一實施例中，用於治療尿失禁之抗體為不具有促效活性或具有低促效活性之ActRII拮抗劑。於另一實施例中，抗體或其功能片段結合靶蛋白ActRII並減少肌肉生長抑制素與ActRII之結合至基礎水平。於此實施例之另一態樣中，於本發明方法中採用之或用於治療尿失禁之抗體或其功能片段完全防止肌肉生長抑制素與ActRIIB結合。於另一實施例中，於本發明方法中採用之或用於治療尿失禁之抗體或其功能片段抑制Smad活化。於另一實施例中，於本發明方法中採用之或用於治療尿失禁之抗體或其功能片段抑制活化素受體IIB型介導之肌肉生長抑制素誘導之經由Smad依賴性路徑之骨骼分化的抑制。
結合可藉由可用於量測抗體拮抗或促效之活性之一或多種檢定測定。較佳地，檢定量測包括以下之抗體對ActRIIB之作用中之至少一者：抑制肌肉生長抑制素與ActRIIB結合(藉由ELISA)、抑制肌肉生長抑制素誘導之信號傳導(例如藉由Smad依賴性報導基因檢定)、抑制肌肉生長抑制素誘導之Smad磷酸化(P-Smad ELISA)及抑制肌肉生長抑制素誘導之骨骼肌細胞分化之抑制(例如，藉由肌酸激酶檢定)。
於一實施例中，於用於治療尿失禁或於治療有需要之患者之尿失禁中使用之本發明方法中可採用包含與ActRIIB之肌肉生長抑制素結合區(即，配體結合域)特異性結合之抗體之組合物。此配體結合域由SEQ ID NO: 181之胺基酸19-134組成且本文中指定為SEQ ID NO: 182。該配體結合域包含若干下述抗原決定基。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體以約100 nM或更少、約10 nM或更少、約1 nM或更少之KD 與ActRIIB結合。較佳地，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體以100 pM或更少(即，約100 pM、約50 pM、約10 pM、約2 pM、約1 pM或更少)之親和力與ActRIIB結合。於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體以約1與約10 pM之間之親和力與ActRIIB結合。
於另一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體與ActRIIA交叉反應並以相等親和力或較其與ActRIIA結合高約1、2、3、4或5倍的親和力(更佳地約10倍，仍更佳地約20、30、40或50倍，仍更佳地約100倍)與ActRIIB結合。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體以100 pM或更多(即，約250 pM、約500 pM、約1 nM、約5 nM或更多)之親和力與ActRIIA結合。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為IgG2 同型。
於另一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為IgG1 同型。於另一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為IgG1同型且具有通過Fc區之突變改變之效應功能。該改變之效應功能可為降低之ADCC及CDC活性。於一實施例中，該改變之效應功能為沉默ADCC及CDC活性。
於另一相關實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為不具有抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性或CDC活性之全人類或人類化IgG1抗體且與由SEQ ID NO:181之胺基酸19-134組成之ActRIIB之區域結合。
於另一相關實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為具有降低之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性或CDC活性之全人類或人類化IgG1抗體且與由SEQ ID NO:181之胺基酸19-134組成之ActRIIB之區域結合。
本發明亦關於使用包含人類或人類化抗ActRII抗體之組合物於預防及/或治療尿失禁之用途。
於某些實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體係衍生自特定重鏈及輕鏈序列及/或包括特定結構特徵，諸如包含特定胺基酸序列之CDR區。本發明提供單離ActRIIB抗體、製備此等抗體之方法、免疫偶聯物及包含此等抗體之多價或多特異性分子及含有該等抗體、免疫偶聯物或雙特異性分子之醫藥組合物。
於另一相關實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為畢馬洛單抗。畢馬洛單抗為亦稱作BYM338或MOR08159之單株人類抗體之INN (國際非專有名稱)，該抗體經開發以較肌肉生長抑制素或活化素(其天然配體)以更大親和力競爭性結合至活化素受體IIB型(ActRIIB)。畢馬洛單抗係揭示於WO2010/125003中。於WO2010/1253003中所揭示之畢馬洛單抗序列列於表1中。
於另一相關實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為抗體MOR08213。MOR08213為經開發以較肌肉生長抑制素或活化素(其天然配體)以更大親和力競爭性結合至活化素受體IIB型(ActRII)之單株抗體。MOR08213揭示於WO2010/125003中。於WO2010/1253003中所揭示之MOR08213序列列於表2中。
此外，本文中所述發明治療方法及用途可與骨盆底肌例行訓練組合。 表1
包含畢馬洛單抗之VL及VH編碼區之名為pBW524之質粒已在2009年8月18日以寄存編號DSM22874寄存於DSMZ, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, Germany 表2：
包含MOR08213之VL及VH編碼區之名為pBW522之質粒已在2009年8月18日以寄存編號DSM22873寄存於DSMZ, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, Germany
於替代實施例中，本發明係關於下列態樣： 1.一種用於治療及/或預防尿失禁之ActRII受體拮抗劑，該尿失禁包括與由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症相關聯或由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成之尿失禁。該骨盆肌可為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌及肌肉無力或受損係由分娩或更年期之影響造成。 2.如態樣1使用之ActRII受體拮抗劑，其中該ActRII拮抗劑係以約3至10 mg/kg之劑量對有需要之患者投與。 3.如態樣2使用之ActRII受體拮抗劑，其中該肌肉生長抑制素拮抗劑係以約3或約10 mg/kg體重之劑量投與。 或者，該ActRII受體拮抗劑係以約3、4、5、6、7、8、9或約10 mg/kg體重之劑量投與。 4.如態樣1至3使用之ActRII受體拮抗劑，其中該ActRII受體拮抗劑係經靜脈內或皮下投與。 5.如態樣1至4中任一項使用之ActRII受體拮抗劑，其中該ActRII受體拮抗劑係每四週投與。 或者，該ActRII受體拮抗劑可按每週一次基準經皮下投與。 或者，該ActRII受體拮抗劑可每8週投與。 6.如態樣1至5中任一項使用之ActRII受體拮抗劑，其中該ActRII受體拮抗劑係投與至少3個月。 7.如態樣1至6中任一項使用之ActRII受體拮抗劑，其中該ActRII受體拮抗劑係投與至多12個月。較佳地，該ActRII受體拮抗劑係投與至少或至多3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月。 8.一種治療及/或預防尿失禁之方法，該方法包括對患有尿失禁或有發展尿失禁之風險之個體投與有效量之ActRII受體拮抗劑。 9.一種治療尿失禁之方法，該方法包括對顯示症狀/患有尿失禁之個體投與有效量之ActRII受體拮抗劑。 10.如態樣8或9之方法，其包括以約3至10 mg/kg之劑量對有需要之患者投與該ActRII受體拮抗劑。 11.如態樣8或9之方法，其包括以約3或約10 mg/kg體重之劑量對有需要之患者投與該ActRII受體拮抗劑。 12.如態樣8或9之方法，其包括靜脈內或皮下投與該ActRII受體拮抗劑。 13.如態樣8至10中任一項之方法，其包括每四週投與該ActRII受體拮抗劑。 或者，該ActRII受體拮抗劑可如態樣13之方法按照每週一次基準經皮下投與。 14.如態樣8至13中任一項之方法，其包括投與該ActRII受體拮抗劑至少3個月。 15.如態樣14之方法，其包括投與該ActRII受體拮抗劑至多12個月。 16.如態樣1至7中任一項使用之ActRII受體拮抗劑或如態樣8至15中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分。 17.如態樣1至7中任一項使用之ActRII受體拮抗劑或如態樣8至15中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗ActRII受體抗體為畢馬洛單抗或其抗原結合部分。 18.如態樣1至7中任一項使用之ActRII受體拮抗劑或如態樣8至15中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體包含與選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之至少一個序列具有至少95%序列同一性之全長重鏈胺基酸序列，且其中該抗體包含與選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之至少一個序列具有至少95%序列同一性之全長輕鏈胺基酸序列。 19.如態樣1至7中任一項使用之ActRII受體拮抗劑或如態樣8至15中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體係藉由pBW522 (DSM22873)或pBW524 (DSM22874)編碼。 20.如態樣1至7中任一項使用之畢馬洛單抗或其抗原結合部分或如態樣8至15中任一項之治療方法，其中畢馬洛單抗係以約3至10 mg/kg體重之劑量每四週經靜脈內投與。 如態樣20使用之畢馬洛單抗或其抗原結合部分，其中畢馬洛單抗係以約3至10 mg/kg體重之劑量按照每週一次基準經皮下投與。 21.一種包含150 mg/ml之畢馬洛單抗或其抗原結合部分之組合物，其用於治療及/或預防尿失禁。 22.一種包含150 mg/ml之畢馬洛單抗或其抗原結合部分之單一劑型，其用於治療及/或預防尿失禁。於其他實施例中，該單一劑型(即，小瓶)包含100至200 mg/ml之畢馬洛單抗，較佳地100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200 mg/ml之畢馬洛單抗。 23.一種包含來自用溶液稀釋之一或多個小瓶之適宜量之畢馬洛單抗的輸液袋，其用於治療及/或預防尿失禁。較佳地該溶液為葡萄糖溶液。
於一些其他實施例中，於本發明方法中使用之或用於治療及/或預防尿失禁之ActRII受體拮抗劑或抗ActRII抗體(諸如畢馬洛單抗)係以約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 mg/kg體重之劑量投與。
本文中揭示用於製造用於治療及/或預防尿失禁之藥劑之ActRII受體拮抗劑。
於另一相關實施例中，用於製造用於治療及/或預防尿失禁之藥劑之ActRII受體拮抗劑為畢馬洛單抗或MOR08213。
於其他實施例中，本文中所揭示之所有態樣可以一者與其他中之任一者組合使用。
本發明之各種態樣進一步詳細描述於下列分段中。評價抗體對各種物種之ActRII之結合能力之標準檢定係此項技術中已知，包括(例如)ELISA、西方墨點法(western blots)及RIA。抗體之結合親和力亦可藉由此項技術中已知之標準檢定(諸如藉由Biacore分析或溶液平衡滴定)評估。基於表面電漿共振之技術(諸如Biacore)可測定允許計算結合親和力之結合動力學。
因此，如根據此項技術中已知且本文中所述之方法所測定之「抑制」此等ActRII功能性質(例如，生物化學、免疫化學、細胞、生理或其他生物活性等)中之一或多者之抗體應理解為係指特定活性相對於抗體不存在下(例如，或當無關特異性之對照抗體存在時)所見之特定活性統計上顯著降低。抑制ActRII活性之抗體影響量測參數之至少10%、至少50%、80%或90%之如此統計上顯著降低，及於某些實施例中，本發明之抗體可抑制大於95%、98%或99%之ActRIIB功能活性。
抗體或其他結合劑能干預另一種抗體或結合分子與ActRII之結合及因此無論是否可說其為根據本發明之交叉阻斷之能力或程度可使用標準競爭結合檢定測定。一個適宜檢定涉及使用Biacore技術(例如，藉由使用BIAcore儀器(Biacore, Uppsala, Sweden))，其可使用表面電漿共振技術量測相互作用程度。用於量測交叉阻斷之另一種檢定使用基於ELISA之方法。另一種檢定使用FACS分析，其中測試各種抗體與ActRIIB表現細胞之結合之競爭。
根據本發明，交叉阻斷抗體或根據本發明之其他結合劑於所述BIAcore交叉阻斷檢定中與ActRIIB結合使得記錄之抗體或結合劑之組合(混合物)之結合係在最大理論結合之80%與0.1%之間(例如，80%至4%)，具體而言在最大理論結合之75%與0.1%之間(例如，75%至4%)及更具體而言在70%與0.1%之間(例如，70%至4%)及更具體而言在組合中之兩種抗體或結合劑之最大理論結合(如上所定義)之65%與0.1%之間(例如，65%至4%)。
於ELISA檢定中，當相較於陽性對照井(即，相同抗ActRIIB抗體及ActRIIB，但是無「測試」交叉阻斷抗體)時，若測試抗體能造成與ActRIIB結合之抗ActRIIB抗體減少60%與100%之間，具體而言70%與100%之間及更具體而言80%與100%之間，則該抗體定義為本發明之交叉阻斷抗ActRIIB抗體。如本文中所引用之交叉阻斷抗體之實例為畢馬洛單抗及MOR08213 (揭示於WO2010/125003中)。
重組抗體 包含於本發明中使用之組合物中之抗體(例如，ActRII之拮抗劑抗體(諸如畢馬洛單抗))包括如本文中所述之單離及結構表徵之人類重組抗體。包含於本發明組合物中之抗體之VH 胺基酸序列示於SEQ ID NO: 99-112中。包含於本發明組合物中之抗體之VL 胺基酸序列分別示於SEQ ID NO: 85-98中。包含於本發明組合物中之抗體之較佳全長重鏈胺基酸序列之實例示於SEQ ID NO: 146-150及156-160中。包含於本發明組合物中之抗體之較佳全長輕鏈胺基酸序列之實例分別示於SEQ ID NO: 141-145及151-155中。包含於本發明組合物中之其他抗體包含藉由胺基酸缺失、***或取代而突變但是具有與上述序列中描述之CDR區至少60、70、80、90、95、97或99%同一性之CDR區之胺基酸。於一些實施例中，其包含突變胺基酸序列，其中當與上述序列中描述之CDR區比較時，不多於1、2、3、4或5個胺基酸已藉由CDR區之胺基酸缺失、***或取代而突變。
此外，可變重鏈親本核苷酸序列示於SEQ ID NO: 127-140中。可變輕鏈親本核苷酸序列示於SEQ ID NO: 113-126中。經最佳化以用於於哺乳動物細胞中表現之全長輕鏈核苷酸序列示於SEQ ID NO: 161-165及171-175中。經最佳化以用於於哺乳動物細胞中表現之全長重鏈核苷酸序列示於SEQ ID NO: 166-170及176-180中。包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之其他抗體包含胺基酸或藉由核酸編碼，該等核酸經突變但是具有與上述序列至少60或更多(即，80、90、95、97、99或更多)%同一性。於一些實施例中，其包含突變胺基酸序列，其中當與上述序列中描述之可變區比較時，不多於1、2、3、4或5個胺基酸藉由可變區之胺基酸缺失、***或取代而突變。
因為此等抗體各者結合相同抗原決定基且為來自相同親本抗體之後代，所以VH 、VL 、全長輕鏈及全長重鏈序列(核苷酸序列及胺基酸序列)可「經混合及匹配」以創建本發明之其他抗ActRIIB結合分子。此等「經混合及匹配」抗體之ActRIIB結合可使用上述及熟知方法中之結合檢定(諸如例如，ELISA)測試。當此等鏈經混合及匹配時，來自特定VH /VL 對之VH 序列應用結構上相似VH 序列置換。同樣地，來自特定全長重鏈/全長輕鏈對之全長重鏈序列應用結構上相似全長重鏈序列置換。同樣地，來自特定VH /VL 對之VL 序列應用結構上相似VL 序列置換。同樣地，來自特定全長重鏈/全長輕鏈對之全長輕鏈序列應用結構上相似全長輕鏈序列置換。因此，於一態樣中，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，其包含具有以下之重組抗ActRII抗體或其抗原結合區：包含選自由SEQ ID NO: 99-112組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區；及包含選自由SEQ ID NO: 85-98組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區。
於另一態樣中，本發明提供可於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，其包含： (i)具有以下之單離重組抗ActRII抗體：包含選自由SEQ ID NO: 99-112組成之群之胺基酸序列之全長重鏈可變區；及包含選自由SEQ ID NO: 85-98組成之群之胺基酸序列之全長輕鏈可變區，或 (ii)包含其抗原結合部分之功能蛋白。
於另一態樣中，本發明提供可於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，其包含： (i)單離重組抗ActRII抗體，其具有藉由最佳化用於於哺乳動物細胞中表現之選自由SEQ ID NO:127-140組成之群之核苷酸序列編碼之全長重鏈，及藉由最佳化用於於哺乳動物細胞中表現之選自由SEQ ID NO:113-126組成之群之核苷酸序列編碼之全長輕鏈，或 (ii)包含其抗原結合部分之功能蛋白。
包含於本發明組合物中之抗體之VH CDR1之胺基酸序列的實例示於SEQ ID NO: 1-14中。抗體之VH CDR2之胺基酸序列示於SEQ ID NO: 15-28中。抗體之VH CDR3之胺基酸序列示於SEQ ID NO: 29-42中。抗體之VL CDR1之胺基酸序列示於SEQ ID NO: 43-56中。抗體之VL CDR2之胺基酸序列示於SEQ ID NO: 57-70中。抗體之VL CDR3之胺基酸序列示於SEQ ID NO: 71-84中。 該等CDR區係使用Kabat系統(Kabat, E. A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S. Department of Health and Human Services，NIH出版物編號91-3242)描述。測定CDR區之替代方法使用由Chothia設計之方法(Chothia等人，1989, Nature, 342:877-883)。Chothia定義係基於結構環區之位置。然而，由於藉由Chothia使用之編號系統之變化(參見例如，http://www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/GeneralInfo.html及http://www.bioinf.org.uk/abs/)，此系統現在不常用。定義CDR之其他系統存在且亦於此等兩個網頁中提及。
若此等抗體各可與ActRIIB結合且抗原結合特異性主要由CDR1、2及3區提供，則VH CDR1、2及3序列及VL CDR1、2及3序列可「經混合及匹配」(即來自不同抗體之CDRs可經混合及匹配，含有VH CDR1、2及3及VL CDR1、2及3之各抗體可產生本發明之其他抗ActRII結合分子)。此等「經混合及匹配」之抗體之ActRIIB結合可使用以上及實例中所述之結合檢定(例如ELISA)測試。當VH CDR序列經混合及匹配時，來自特定VH 序列之CDR1、CDR2及/或CDR3序列應用結構上相似CDR序列置換。同樣地，當VL CDR序列經混合及匹配時，來自特定VL 序列之CDR1、CDR2及/或CDR3序列應用結構上相似CDR序列置換。一般熟習技工當容易明瞭新穎VH 及VL 序列可藉由用來自單株抗體之本文中所示CDR序列之結構上相似序列置換一或多個VH 及/或VL CDR區序列來創建。
可於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之抗ActRII抗體或其抗原結合部分具有：包含選自由SEQ ID NO: 1-14組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1；包含選自由SEQ ID NO: 15-28組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR2；包含選自由SEQ ID NO: 29-42組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR3；包含選自由SEQ ID NO: 43-56組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1；包含選自由SEQ ID NO: 57-70組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR2；及包含選自由SEQ ID NO: 71-84組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR3。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 1之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 15之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 29之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 43之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 57之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 71之輕鏈可變區CDR3。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 2之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 16之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 30之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 58之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 72之輕鏈可變區CDR3。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 3之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 17之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 31之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 45之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 73之輕鏈可變區CDR3。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 4之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 18之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 32之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 46之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 60之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 74之輕鏈可變區CDR3。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 5之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 19之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 33之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 61之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 75之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 6之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 20之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 34之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 62之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 76之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁之本發明方法之組合物中或用於治療尿失禁之抗體包含：SEQ ID NO: 7之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 21之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 35之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 49之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 77之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁之本發明方法之組合物中或用於治療尿失禁之抗體包含：SEQ ID NO: 8之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 22之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 36之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 50之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 64之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 78之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁之本發明方法之組合物中或用於治療尿失禁之抗體包含：SEQ ID NO: 9之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 23之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 37之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 51之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 65之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 79之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁之本發明方法之組合物中或用於治療尿失禁之抗體包含：SEQ ID NO: 10之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 24之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 38之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 52之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 66之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 80之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁之本發明方法之組合物中或用於治療尿失禁之抗體包含：SEQ ID NO: 11之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 25之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 39之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 53之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 67之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 81之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁之本發明方法之組合物中或用於治療尿失禁之抗體包含：SEQ ID NO: 12之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 26之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 40之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 54之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 82之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 13之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 27之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 41之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 69之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 83之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：SEQ ID NO: 14之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 28之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 42之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 56之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 70之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 84之輕鏈可變區CDR3。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：(a) SEQ ID NO: 85之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 99之可變輕鏈序列；(b) SEQ ID NO: 86之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 100之可變輕鏈序列；(c) SEQ ID NO: 87之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 101之可變輕鏈序列；(d) SEQ ID NO: 88之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 102之可變輕鏈序列；(e) SEQ ID NO: 89之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 103之可變輕鏈序列；(f) SEQ ID NO: 90之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 104之可變輕鏈序列；(g) SEQ ID NO: 91之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 105之可變輕鏈序列；(h) SEQ ID NO: 92之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 106之可變輕鏈序列；(i) SEQ ID NO: 93之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 107之可變輕鏈序列；(j) SEQ ID NO: 94之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 108之可變輕鏈序列；(k) SEQ ID NO: 95之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 109之可變輕鏈序列；(l) SEQ ID NO: 96之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 110之可變輕鏈序列；(m) SEQ ID NO: 97之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 111之可變輕鏈序列；或(n) SEQ ID NO: 98之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 112之可變輕鏈序列。
於一個實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體包含：(a) SEQ ID NO: 146之重鏈序列及SEQ ID NO: 141之輕鏈序列；(b) SEQ ID NO: 147之重鏈序列及SEQ ID NO: 142之輕鏈序列；(c) SEQ ID NO: 148之重鏈序列及SEQ ID NO: 143之輕鏈序列；(d) SEQ ID NO: 149之重鏈序列及SEQ ID NO: 144之輕鏈序列；(e) SEQ ID NO: 150之重鏈序列及SEQ ID NO: 145之輕鏈序列；(f) SEQ ID NO: 156之重鏈序列及SEQ ID NO: 151之輕鏈序列；(g) SEQ ID NO: 157之重鏈序列及SEQ ID NO: 152之輕鏈序列；(h) SEQ ID NO: 158之重鏈序列及SEQ ID NO: 153之輕鏈序列；(i) SEQ ID NO: 159之重鏈序列及SEQ ID NO: 154之輕鏈序列；或(j) SEQ ID NO: 160之重鏈序列及SEQ ID NO: 155之輕鏈序列。
如本文中所用，人類抗體包含重鏈或輕鏈可變區或全長重鏈或輕鏈，若該抗體之可變區或全長鏈獲自使用人類生殖系免疫球蛋白基因之系統，則該等可變區或全長鏈為特定生殖系序列之「產物」或「衍生自」特定生殖系序列。此等系統包括利用所關注抗原使攜帶人類免疫球蛋白基因之轉基因小鼠免疫或利用所關注抗原篩選在噬菌體上顯示之人類免疫球蛋白基因庫。為人類生殖系免疫球蛋白序列之「產物」或「衍生自」人類生殖系免疫球蛋白序列之人類抗體因而可藉由比較人類抗體之胺基酸序列與人類生殖系免疫球蛋白之胺基酸序列並選擇序列最接近(即，最大%同一性)人類抗體之序列之人類生殖系免疫球蛋白序列來識別。為特定人類生殖系免疫球蛋白序列之「產物」或「衍生自」特定人類生殖系免疫球蛋白序列之人類抗體可含有如與生殖系序列相比之胺基酸差異，其等由於(例如)自然發生之體細胞突變或有意引入定點突變所致。然而，選定人類抗體胺基酸序列通常與藉由人類生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列至少90%相同及含有當與其他物種之生殖系免疫球蛋白胺基酸序列(例如，鼠生殖系序列)相比時，識別人類抗體為人類之胺基酸殘基。於某些情況下，人類抗體胺基酸序列可與藉由生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列至少80%、90%或至少95%或甚至至少96%、97%、98%或99%相同。通常，衍生自特定人類生殖系序列之人類抗體將顯示與藉由人類生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列存在不多於10個胺基酸差異。於某些情況下，人類抗體可顯示與藉由生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列存在不多於5個，或甚至不多於4、3、2或1個胺基酸差異。
於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體為藉由pBW522或pBW524 (2009年8月18日分別以寄存編號DSM22873及DSM22874寄存於DSMZ, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, Germany)編碼之抗體。
同源抗體 於又一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體具有與本文中所述抗體之胺基酸及核苷酸序列同源之全長重鏈及輕鏈胺基酸序列、全長重鏈及輕鏈核苷酸序列、可變區重鏈及輕鏈核苷酸序列或可變區重鏈及輕鏈胺基酸序列，且其中該等抗體保留本發明抗ActRIIB抗體之所需功能性質。
例如，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，該組合物包含包括重鏈可變區及輕鏈可變區之單離重組抗ActRIIB抗體(或包含其抗原結合部分之功能蛋白)，其中：該重鏈可變區包含與選自由SEQ ID NO: 99-112組成之群之胺基酸序列至少80%或至少90% (較佳地至少95、97或99%)相同之胺基酸序列；該輕鏈可變區包含與選自由SEQ ID NO: 85-98組成之群之胺基酸序列至少80%或至少90% (較佳地至少95、97或99%)相同之胺基酸序列；或者該等組合物包含包括重鏈可變區及輕鏈可變區之重組抗ActRIIB抗體(或包含其抗原結合部分之功能蛋白)，其中：該重鏈可變區包括與選自由SEQ ID NO: 99-112組成之群之胺基酸序列相比，不多於5個胺基酸或不多於4個胺基酸或不多於3個胺基酸或不多於2個胺基酸或不多於1個胺基酸變化；該輕鏈可變區包括與選自由SEQ ID NO: 85-98組成之群之胺基酸序列相比，不多於5個胺基酸或不多於4個胺基酸或不多於3個胺基酸或不多於2個胺基酸或不多於1個胺基酸變化，且該抗體展示下列功能性質中之至少一者：(i)其於活體外或於活體內抑制肌肉生長抑制素結合；(ii)減少肌肉分化通過Smad依賴性路徑之抑制及/或(iii)不誘導血液變化，特定言之無紅細胞絕對計數(RBC)之變化。於此上下文中，術語「變化」係指***、缺失及/或取代。
於另一實例中，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，該組合物包含包括全長重鏈及全長輕鏈之單離重組抗ActRII抗體(或包含其抗原結合部分之功能蛋白)，其中：該全長重鏈包含與選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之胺基酸序列至少80%或至少90% (較佳地至少95、97或99%)相同之胺基酸序列；該全長輕鏈包含與選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之胺基酸序列至少80%或至少90% (較佳地至少95、97或99%)相同之胺基酸序列；或者該等組合物包含包括重鏈可變區及輕鏈可變區之重組抗ActRII抗體(或包含其抗原結合部分之功能蛋白)，其中：該重鏈可變區包括與選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之胺基酸序列相比，不多於5個胺基酸或不多於4個胺基酸或不多於3個胺基酸或不多於2個胺基酸或不多於1個胺基酸變化；該輕鏈可變區包括與選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之胺基酸序列相比，不多於5個胺基酸或不多於4個胺基酸或不多於3個胺基酸或不多於2個胺基酸或不多於1個胺基酸變化，且該抗體展示下列功能性質中之至少一者：(i)其於活體外或於活體內抑制肌肉生長抑制素結合；(ii)減少肌肉分化通過Smad依賴性路徑之抑制及/或(iii)不誘導血液變化，特定言之無RBC之變化。較佳地此抗體與ActRIIB及/或ActRIIA之配體結合域結合。於此上下文中，術語「變化」係指***、缺失及/或取代。
於另一實例中，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，該組合物包含包括全長重鏈及全長輕鏈之單離重組抗ActRII抗體(或包含其抗原結合部分之功能蛋白)，其中：該全長重鏈係藉由與選自由SEQ ID NO: 166-170及176-180組成之群之核苷酸序列至少80%或至少90% (較佳地至少95、97或99%)相同之核苷酸序列編碼；該全長輕鏈係藉由與選自由SEQ ID NO: 161-165及171-175組成之群之核苷酸序列至少80%或至少90% (較佳地至少95、97或99%)相同之核苷酸序列編碼；或者該等組合物包含包括重鏈可變區及輕鏈可變區之重組抗ActRII抗體(或包含其抗原結合部分之功能蛋白)，其中：該重鏈可變區包括與選自由SEQ ID NO: 166-170及176-180組成之群之胺基酸序列相比，不多於5個胺基酸或不多於4個胺基酸或不多於3個胺基酸或不多於2個胺基酸或不多於1個胺基酸變化；該輕鏈可變區包括與選自由SEQ ID NO: 161-165及171-175組成之群之胺基酸序列相比，不多於5個胺基酸或不多於4個胺基酸或不多於3個胺基酸或不多於2個胺基酸或不多於1個胺基酸變化，且該抗體展示下列功能性質中之至少一者：(i)其於活體外或於活體內抑制肌肉生長抑制素結合；(ii)減少肌肉分化通過Smad依賴性路徑之抑制及/或(iii)不誘導血液變化，特定言之無RBC之變化。較佳地此抗體與ActRIIB之配體結合域結合。於此上下文中，術語「變化」係指***、缺失及/或取代。
於各種實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體可展示上述功能性質中之一或多者、兩者或更多者或三者。該抗體可為(例如)人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。較佳地，該抗體為全人類IgG1抗體。於其他實施例中，VH 及/或VL 胺基酸序列可與上述序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。於其他實施例中，VH 及/或VL 胺基酸序列可係相同，只是存在不多於1、2、3、4或5個胺基酸位置之胺基酸取代。具有分別與SEQ ID NO 99-112及SEQ ID NO: 85-98之VH 及VL 區具有高(即，80%或更大)同一性之VH 及VL 區之抗體可分別藉由核酸分子SEQ ID NO: 127-140及113-126之誘變(例如，定點誘變或PCR介導之誘變)，接著使用本文中所述功能檢定測試經編碼改變之抗體之保留功能(即，上述功能)來獲得。
於其他實施例中，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之抗體之全長重鏈及/或全長輕鏈胺基酸序列可與上述序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同或可係相同，只是存在不多於1、2、3、4或5個胺基酸位置之胺基酸變化。具有分別與SEQ ID NO: 146-150及156-160中之任一者之全長重鏈及SEQ ID NO: 141-145及151-155中之任一者之全長輕鏈具有高(即，至少80%或更大)同一性之全長重鏈及全長輕鏈之抗體可分別藉由核酸分子SEQ ID NO: 166-170及176-180及SEQ ID NO: 161-165及171-175之誘變(例如，定點誘變或PCR介導之誘變)，接著使用本文中所述功能檢定測試經編碼改變之抗體之保留功能(即，上述功能)來獲得。
於其他實施例中，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之抗體之全長重鏈及/或全長輕鏈核苷酸序列可與上述序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同。
於其他實施例中，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之抗體之重鏈及/或輕鏈可變區胺基酸序列可與上述序列至少80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同或可係相同，只是存在不多於1、2、3、4或5個胺基酸位置之胺基酸變化。
如本文中所用，兩個序列之間之%同一性為由該等序列共用之相同位置之數目的函數(即，%同一性=相同位置之# /位置之總# x 100)，考慮用於兩個序列之最佳比對需引入之空隙數目及各空隙之長度。序列之比較及兩個序列之間之同一性百分比之測定可使用如下所述之數學演算法實現。
兩個胺基酸序列之間之同一性百分比可使用E. Meyers及W. Miller演算法(Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988)測定，該演算法已使用PAM120重量殘餘表、12之空隙長度罰分及4之空隙罰分併入ALIGN程式(版本2.0)中。此外，兩個胺基酸序列之間之同一性百分比可使用Needleman及Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970)演算法測定，該演算法已使用Blossom 62矩陣或PAM250矩陣及16、14、12、10、8、6或4之空隙權重及1、2、3、4、5或6之長度權重以GCG軟體套裝(可在http://www.gcg.com上獲得)併入GAP程式中。
具有保守修改之抗體 於某些實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體具有包含CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區及包含CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區，其中此等CDR序列中之一或多者具有基於本文中所述抗體之特定胺基酸序列或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化或其保守修改之其變異序列，且其中該等抗體保留本發明之抗ActRIIB抗體之所需功能性質。因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，該等組合物包含由包含CDR1、CDR2及CDR3序列之重鏈可變區及包含CDR1、CDR2及CDR3序列之輕鏈可變區組成之單離重組抗ActRIIB抗體或包含其抗原結合部分之功能蛋白，其中：該重鏈可變區CDR1胺基酸序列係選自由SEQ ID NO: 1-14或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列組成之群；該重鏈可變區CDR2胺基酸序列係選自由SEQ ID NO: 15-28或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列組成之群；該重鏈可變區CDR3胺基酸序列係選自由SEQ ID NO: 29-42或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列組成之群；該輕鏈可變區CDR1胺基酸序列係選自由SEQ ID NO: 43-56或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列組成之群；該輕鏈可變區CDR2胺基酸序列係選自由SEQ ID NO: 57-70或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列組成之群；該輕鏈可變區CDR3胺基酸序列係選自由SEQ ID NO: 71-84或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列組成之群。較佳地，該抗體展示下列功能性質中之至少一者：(i)其於活體外或於活體內抑制肌肉生長抑制素結合；(ii)減少肌肉分化通過Smad依賴性路徑之抑制及/或(iii)不誘導血液變化，特定言之，無RBC之變化。
於各種實施例中，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之抗體可展示以上所列功能性質中之一者或兩者。此等抗體可為(例如)人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
於其他實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體經最佳化用於於哺乳動物細胞中表現，其具有全長重鏈序列及全長輕鏈序列，其中此等序列中之一或多者具有基於本文中所述抗體之特定胺基酸序列或其保守修改，且其中該等抗體保留本發明之抗ActRIIB抗體之所需功能性質。因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物，該等組合物包含經最佳化用於於哺乳動物中表現之由全長重鏈及全長輕鏈組成之單離單株抗ActRIIB抗體，其中：該全長重鏈具有選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之胺基酸序列或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列；及該全長輕鏈具有選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之胺基酸序列或包含1、2、3、4或5個胺基酸變化及其保守修改之其變異序列；且該抗體展示下列功能性質中之至少一者：(i)其於活體外或於活體內抑制肌肉生長抑制素結合；(ii)減少肌肉分化通過Smad依賴性路徑之抑制及/或(iii)不誘導血液變化，特定言之無RBC之變化。
於各種實施例中，抗體可展示以上所列功能性質中之一者或兩者。此等抗體可為(例如)人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
如本文中所用，術語「保守序列修改」意欲係指不顯著影響或改變含有胺基酸序列之抗體之結合特性之胺基酸修改。此等保守修改包括胺基酸取代、添加及缺失。修改可藉由此項技術中已知的標準技術(諸如定點誘變及PCR介導之誘變)引入本發明之抗體中。
保守胺基酸取代為其中胺基酸殘基經具有相似側鏈之胺基酸殘基置換的取代。具有相似側鏈之胺基酸殘基之家族已於此項技術中定義。此等家族包括具有以下之胺基酸：鹼性側鏈(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、無電荷極性側鏈(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、***酸、甲硫胺酸)、β-支化側鏈(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如，酪胺酸、***酸、色胺酸、組胺酸)。因此，於本發明之抗體之CDR區內之一或多個胺基酸殘基可經來自相同側鏈家族之其他胺基酸殘基置換，及可使用本文中所述功能檢定測試經改變之抗體之保留功能。
與包含於所揭示組合物中之抗 ActRII 抗體結合至相同抗原決定基之抗體 於另一實施例中，本發明提供組合物於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中之用途，該等組合物包含與本文中所述各種特異性抗ActRII抗體結合至相同抗原決定基之抗體。能阻斷肌肉生長抑制素與ActRIIA及ActRIIB結合之實例中所述之所有抗體以高親和力結合至ActRIIA及ActRIIB中之抗原決定基中之一者，該抗原決定基包含SEQ ID NO:181之胺基酸19-134。
因此，額外抗體可基於其於標準ActRIIB結合檢定中與本發明之其他抗體交叉競爭(例如，以統計上顯著方式競爭性抑制結合)之能力識別。受試抗體抑制包含於本發明組合物中之抗體與人類ActRIIB結合之能力證實該受試抗體可與該抗體競爭以與人類ActRIIB結合；根據非限制性理論，此抗體可與其所競爭之抗體結合至人類ActRIIB上之相同或相關(例如，結構上相似或空間上最接近)抗原決定基。於某個實施例中，與包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中採用之組合物中之抗體結合至人類ActRIIB及ActRIIA上之相同抗原決定基的抗體為人類重組抗體。此等人類重組抗體可如實例中所述製備及單離。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 85中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 99中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體及/或與具有於SEQ ID NO: 85中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 99中詳述之可變輕鏈序列之抗體競爭結合之抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 86中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 100中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 87中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 101中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 88中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 102中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 89中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 103中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 90中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 104中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 91中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 105中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 92中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 106中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 93中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 107中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 94中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 108中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 95中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 109中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 96中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 110中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 97中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 111中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與藉由具有於SEQ ID NO: 98中詳述之可變重鏈序列及於SEQ ID NO: 112中詳述之可變輕鏈序列之抗體識別之抗原決定基結合的抗體。
已更清楚定義下列更詳細抗原決定基定位(epitope mapping)實驗、本發明組合物之較佳抗體之結合區。
因此，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)或由SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)組成之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)或由SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)組成之抗原決定基結合之抗體。
本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與由此等序列組成之抗原決定基或包含此等抗原決定基區之組合之抗原決定基結合的抗體。
因此，本發明亦提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物，該組合物包含與包含SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)或由SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)組成之抗原決定基結合之抗體。
經改造及經修改之抗體 包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗體另外可使用具有本文中所示VH 及/或VL 序列中之一或多者之抗體作為改造經修改抗體之起始物質加以製備，該經修改抗體可具有自起始抗體改變之性質。抗體可藉由修改一或兩個可變區(即，VH 及/或VL )內(例如，一或多個CDR區內及/或一或多個框架區內)之一或多個殘基改造。此外或或者，抗體可藉由修改恆定區內之殘基改造(例如)以改變抗體之效應功能。
可進行之一種類型之可變區改造為CDR接枝。抗體主要通過位於六個重鏈及輕鏈互補決定區(CDR)之胺基酸殘基與靶抗原相互作用。因為此原因，CDR內之胺基酸序列係在個別抗體之間較CDR外之胺基酸序列更不同。因為CDR序列對大多數抗體-抗原相互作用負責，所以可藉由構築表現載體以表現模擬特異性天然產生抗體之性質之重組抗體，表現載體包含來自特異性天然產生抗體之CDR序列，該CDR序列被接枝在來自具有不同性質之不同抗體之框架序列上(參見，例如，Riechmann, L.等人，1998 Nature 332:323-327；Jones, P.等人，1986 Nature 321:522-525；Queen, C.等人，1989 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:10029-10033；Winter之美國專利案第5,225,539號及Queen等人之美國專利案第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,762號及第6,180,370號)。
因此，本發明之另一實施例關於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中之組合物之用途，該等組合物包含包括以下之單株抗ActRII抗體或包含其抗原結合部分之功能蛋白：包含分別具有選自由SEQ ID NO: 1-14組成之群之胺基酸序列之CDR1序列、具有選自由SEQ ID NO: 15-28組成之群之胺基酸序列之CDR2序列、具有選自由SEQ ID NO: 29-42組成之群之胺基酸序列之CDR3序列之重鏈可變區；及具有分別具有選自由SEQ ID NO: 43-56組成之群之胺基酸序列之CDR1序列、具有選自由SEQ ID NO: 57-70組成之群之胺基酸序列之CDR2序列及由選自由SEQ ID NO: 71-84組成之群之胺基酸序列組成之CDR3序列之輕鏈可變區。因此，此等抗體含有單株抗體之VH 及VL CDR序列，還可含有與此等抗體不同之框架序列。
此等框架序列可獲自包含生殖系基因序列之公共DNA資料庫或公開參考。例如，人類重鏈及輕鏈可變區基因之生殖系DNA序列可見於「VBase」人類生殖系序列資料庫(可在網際網路上在www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase上獲得)以及Kabat, E. A.等人[見上]；Tomlinson, I. M.等人，1992 J. fol. Biol. 227:776-798及Cox, J. P. L.等人，1994 Eur. J Immunol. 24:827-836。
用於本發明之抗體之框架序列之實例為與本發明之選定抗體所使用之框架序列(例如，本發明之單株抗體所使用之共通序列及/或框架序列)在結構上相似之框架序列。VH CDR1、2及3序列及VL CDR1、2及3序列可接枝在具有與衍生框架序列之生殖系免疫球蛋白基因中發現之序列相同之序列的框架區上，或該等CDR序列可接枝在與生殖系序列相比含有一或多個突變之框架區上。例如，已發現於某些情況下，為維持或增強抗體之抗原結合能力，使框架區內之殘基突變係有益的(參見例如，Queen等人之美國專利案第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,762號及第6,180,370號)。
另一種類型之可變區修改為使VH 及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3區內之胺基酸殘基突變從而提高所關注抗體之一或多種結合性質(例如，親和力)，稱作「親和力成熟」。可進行定點誘變或PCR介導之誘變以引入突變及可於如本文中所述及於實例中所提供之活體外或活體內檢定中評估對抗體結合或所關注之其他功能性質之影響。可引入保守修改(如上所述)。該等突變可為胺基酸取代、添加或缺失。此外，通常改變CDR區內之不多於一個、兩個、三個、四個或五個殘基。
因此，於另一實施例中，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中之由以下組成之單離人類抗ActRII單株抗體或包含其抗原結合部分之功能蛋白的用途：具有由選自具有SEQ ID NO: 1-14之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 1-14相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列組成之VH CDR1區、具有選自由SEQ ID NO: 15-28組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 15-28相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列之VH CDR2區、具有選自由SEQ ID NO: 29-42組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 29-42相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列之VH CDR3區之重鏈可變區；具有選自由SEQ ID NO: 43-56組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 43-56相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列之VL CDR1區、具有選自由SEQ ID NO: 52-70組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 52-70相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列之VL CDR2區及具有選自由SEQ ID NO: 71-84組成之群之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 71-84相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸取代、缺失或添加之胺基酸序列之VL CDR3區。
駱駝科抗體 獲自包括世界新成員(諸如美洲駝物種) (小羊駝(Lama paccos )、原駝(Lama glama )及瘦駝(Lama vicugna ))之駱駝及單峰駱駝家族(雙峰駝(Camelus bactrianus )及單峰駝(Camelus dromaderius ))之成員之抗體蛋白已就尺寸、結構複雜性及對人類個體之抗原性進行表徵。於自然界中發現之來自哺乳動物之此家族之某些IgG抗體缺少輕鏈，且因此在結構上不同於來自其他動物之抗體之具有兩條重鏈及兩條輕鏈之典型四鏈四級結構(參見WO94/04678)。
駱駝科抗體中經識別為VHH 之小單一可變域之區域可藉由基因改造以產生對靶具有高親和力之小蛋白獲得，產生稱作「駱駝科奈米抗體」之低分子量抗體衍生蛋白(參見US5,759,808；Stijlemans, B.等人，2004 J Biol Chem 279: 1256-1261；Dumoulin, M.等人，2003 Nature 424: 783-788；Pleschberger, M.等人，2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448；Cortez-Retamozo, V.等人，2002 Int J Cancer 89: 456-62及Lauwereys, M.等人，1998 EMBO J 17: 3512-3520)。駱駝科抗體及抗體片段之改造庫可購自例如Ablynx、Ghent、Belgium。與非人類起源之其他抗體一樣，駱駝科抗體之胺基酸序列可經重組改變以獲得與人類序列更接近相似之序列，即，奈米抗體可經「人類化」。因此，可進一步降低駱駝科抗體對人類之天然低抗原性。
駱駝科奈米抗體具有人類IgG分子之分子量之約十分之一之分子量且該蛋白具有僅幾奈米之物理直徑。小尺寸之一個結果為駱駝科奈米抗體能夠與對較大抗體蛋白功能上隱形之抗原位點結合，即，駱駝科奈米抗體適用作偵測使用經典免疫學技術時隱藏之抗原之試劑且適用作可能的治療劑。因此，小尺寸之又一結果為駱駝科奈米抗體可由於與靶蛋白之凹槽或窄裂縫中之特異性位點結合而具有抑制作用，及因此所發揮作用較經典抗體之功能可更接近類似於經典低分子量藥物之功能。
低分子量及緊密尺寸進一步導致駱駝科奈米抗體具極端熱穩定性、對極端pH及蛋白水解消化具穩定性且具弱抗原性。另一結果為駱駝科奈米抗體容易自循環系統移入組織中及甚至穿過血腦障壁且可治療影響神經組織之病症。奈米抗體可進一步促進藥物跨血腦障壁轉運(參見，US2004/0161738)。此等特徵與對人類之低抗原性之組合指示極大治療潛力。此外，此等分子可於原核細胞(諸如大腸桿菌(E. coli ))中充分表現，且表現為與噬菌體之融合蛋白並具功能性。
因此，於一實施例中，本發明係關於包含對用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中之對ActRIIB具有高親和力之駱駝科抗體或奈米抗體之組合物的用途。於本文中某些實施例中，駱駝科抗體或奈米抗體係於駱駝科動物中自然產生，即，藉由駱駝科在利用ActRIIB或其肽片段使用本文中所述針對其他抗體之技術進行免疫後產生。或者，改造抗ActRIIB駱駝科奈米抗體，即，如本文中實例中所述，藉由使用淘選程序以ActRIIB作為靶(例如)自顯示經適宜誘變之駱駝科奈米抗體蛋白之噬菌體庫選擇產生。經改造奈米抗體可進一步藉由基因改造定製以使在接受者個體中具有45分鐘至2週之半衰期。於特定實施例中，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之駱駝科抗體或奈米抗體係藉由將本發明人類抗體之重鏈或輕鏈之CDR序列接枝至奈米抗體或單域抗體框架序列獲得，如WO94/04678中實例所述。
非抗體支架 已知非免疫球蛋白框架或支架包括(但不限於)阿德內丁(Adnectins) (纖維連接蛋白) (Compound Therapeutics, Inc., Waltham, MA)、錨蛋白(ankyrin) (Molecular Partners AG, Zurich, Switzerland)、域抗體(Domantis, Ltd (Cambridge, MA)及Ablynx nv (Zwijnaarde, Belgium))、脂質運載蛋白(lipocalin) (Anticalin) (Pieris Proteolab AG, Freising, Germany)、小分子免疫藥物(Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA)、maxybodies (Avidia, Inc. (Mountain View, CA))、蛋白A (Affibody AG, Sweden)及affilin (γ-晶狀體蛋白或泛素) (Scil Proteins GmbH, Halle, Germany)、蛋白質抗原決定基擬似物(Polyphor Ltd, Allschwil, Switzerland)。
(i) 纖維連接蛋白支架 纖維連接蛋白支架係較佳基於纖維連接蛋白III型域(例如，纖維連接蛋白III型之第十模組(10 Fn3域))。纖維連接蛋白III型域具有分佈在兩個β摺疊(β sheet)之間之7或8條β股，該等β摺疊自身彼此緊挨摺疊以形成蛋白質之核心，且另外含有將β股彼此連接及暴露於溶劑之環(類似於CDR)。在β摺疊夾心之各邊緣存在至少三個此等環，其中該邊緣為垂直於β股方向之蛋白質之邊界(US 6,818,418)。
此等基於纖維連接蛋白之支架不為免疫球蛋白，然而總摺疊係與包含駱駝及美洲駝IgG之全抗原識別單元之最小功能抗體片段(重鏈可變區)之總摺疊密切相關。因為此結構，非免疫球蛋白抗體模擬在本質上及親和力上與抗體之抗原結合性質相似之抗原結合性質。此等支架可用於與活體內抗體之親和力成熟過程類似之活體外環隨機化及改組策略中。此等基於纖維連接蛋白之分子可用作支架，其中該分子之環區可使用標準純系化技術用本發明之CDR置換。
(ii) 錨蛋白 - 分子搭配物 該技術係基於使用具有錨蛋白衍生重複模組之蛋白質作為支架以承載可用於與不同靶結合之可變區。錨蛋白重複模組為由兩個反向平行的α-螺旋及一個β-翻轉組成之具有33個胺基酸的多肽。可變區之結合主要由使用核糖體顯示最佳化。
(iii) Maxybodies/Avimers - Avidia Avimers係衍生自含天然A-域之蛋白質(諸如LRP-1)。此等域天生用於蛋白質-蛋白質相互作用及人類中有超過250種蛋白質在結構上基於A-域。Avimers由經由胺基酸連接子連接之許多不同「A-域」單體(2-10個)組成。可與靶抗原結合之Avimers可使用(例如) US2004/0175756、US2005/0053973、US2005/0048512及US2006/0008844中所述之方法創造。
(vi) 蛋白 A- Affibody Affibody®親和配體為由基於蛋白A之一個IgG-結合域之支架之三螺旋束組成之小型簡單蛋白質。蛋白A為來自細菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )之表面蛋白。此支架域由58個胺基酸組成，其中13個經隨機化以產生具有大量配體變異體之Affibody®庫(參見例如，US 5,831,012)。Affibody®分子模擬抗體，與抗體之分子量(其為150 kDa)相比，Affibody®分子具有6 kDa之分子量。儘管Affibody®分子的尺寸較小，但是Affibody®分子之結合位點係與抗體之結合位點類似。
(v) Anticalin- Pieris Anticalin®為藉由公司Pieris ProteoLab AG開發之產品。其係衍生自脂質運載蛋白(通常涉及化學敏感或不可溶化合物之物理運輸或儲存之一群分佈廣泛之小型且穩健的蛋白質)。若干天然脂質運載蛋白出現於人類組織或體液中。
該蛋白質結構類似於免疫球蛋白，其中高變環位於剛性框架頂部。然而，與抗體或其重組片段相比，脂質運載蛋白由具有160至180個胺基酸殘基之單一多肽鏈(其僅略大於單一免疫球蛋白域)組成。
組成結合袋之四個環之組顯示明顯結構可塑性且容許各側鏈。因此結合位點可於專有過程中重塑以便於以高親和力及特異性識別不同形狀之指定靶分子。
脂質運載蛋白家族之一種蛋白質(歐洲粉蝶( Pieris brassicae )之後膽色素結合蛋白(BBP))已用於藉由誘變四個環之組開發Anticalin。描述「Anticalin」之專利申請案之一個實例為WO1999/16873。
(vi)affilin - Scil 蛋白 AFFILIN™分子為小型非免疫球蛋白蛋白質，其經設計以對蛋白質及小分子具有特異性親和力。新穎AFFILIN™分子可極快速選自兩個庫，該等庫各者係基於不同人類衍生支架蛋白。
AFFILIN™分子不顯示與免疫球蛋白蛋白質之任何結構同源性。Scil蛋白採用兩種AFFILIN™支架，其中之一者為γ晶狀體(人類結構眼晶狀體蛋白)及另一者為「泛素」超家族蛋白。兩種人類支架係極小，顯示高溫穩定性及幾乎抵抗pH變化及變性劑。此高穩定性係主要由於蛋白質之擴展β摺疊。γ晶狀體衍生之蛋白質之實例述於WO2001/004144中及「泛素樣」蛋白之實例述於WO2004/106368中。
(vii) 蛋白質抗原決定基擬似物 (PEM) PEM為模擬蛋白質之β-髮夾二級結構(蛋白質-蛋白質相互作用中涉及之主要二級結構)之中等尺寸環狀肽樣分子(MW 1-2kDa)。
將抗原結合域接枝至替代框架或支架 可採用廣泛各種抗體/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包含與ActRIIB特異性結合之至少一個結合區。此等框架或支架包含人類免疫球蛋白之5個主要個體基因型或其片段(諸如彼等本文中其他地方所揭示者)且包含其他動物物種(較佳地具有人類化態樣)之免疫球蛋白。就此等而言單重鏈抗體(諸如彼等駱駝科中識別者)係特別受關注。新穎框架、支架及片段繼續被發現且由熟習此項技術者開發。
於一態樣中，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物可使用非免疫球蛋白支架包含基於非免疫球蛋白之抗體，在該非免疫球蛋白支架上可接枝所揭示抗體之CDR。可採用已知或未來非免疫球蛋白框架及支架，只要其包含對SEQ ID NO: 181之靶蛋白具特異性之結合區(較佳地，如SEQ ID NO: 182中所示之其配體結合域)。此等化合物在本文中稱作「包含靶特異性結合區之多肽」。非免疫球蛋白框架之實例進一步述於下節中(駱駝科抗體及非抗體支架)。
框架或 Fc 改造 包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之經改造抗體包括彼等已對VH 及/或VL 內之框架殘基作出修改(例如)以提高抗體之性質者。通常，製備此等框架修改以降低抗體之免疫原性。例如，一個方法為使一或多個框架殘基「回復突變」成對應生殖系序列。更具體而言，經歷體細胞突變之抗體可含有不同於衍生該抗體之生殖系序列之框架殘基。此等殘基可藉由比較抗體框架序列與衍生該抗體之生殖系序列加以識別。為使框架區序列返回其生殖系組態，體細胞突變可藉由(例如)定點誘變或PCR介導之誘變「回復突變」成生殖系序列。此等「回復突變」抗體亦可包含於本發明之組合物中。
另一種類型之框架修改涉及使框架區內或甚至一或多個CDR區內之一或多個殘基突變以移除T-細胞抗原決定基，從而降低抗體之潛在免疫原性。此方法亦稱作「去免疫化」及進一步詳述於US2003/0153043中。
除了或替代於框架或CDR區內作出之修改，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之抗體可經改造以包含Fc區內之修改，通常以改變抗體之一或多種功能性質，諸如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合及/或抗原依賴性細胞毒性。此外，包含於本發明組合物中之抗體可經化學修改(例如，可將一或多個化學基團與抗體連接)或經修改以改變其糖基化，以再次改變抗體之一或多種功能性質。此等實施例各者於以下進一步詳述。Fc區中之殘基之編號為Kabat之EU索引之編號。
於一實施例中，修改CH1之鉸鏈區使得該鉸鏈區中之半胱胺酸殘基之數目改變，例如，增加或減少。此方法進一步述於US5,677,425中。改變CH1之鉸鏈區中之半胱胺酸殘基之數目以(例如)促進輕鏈及重鏈之組裝或增加或減少抗體之穩定性。
於另一實施例中，使抗體之Fc鉸鏈區突變以減少抗體之生物半衰期。更具體而言，將一或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段之CH2-CH3域界面區使得抗體相對於原生Fc鉸鏈域SpA結合具有受損葡萄球菌蛋白A (SpA)結合。此方法進一步詳述於US 6,165,745中。
於另一實施例中，修改於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之抗體以增加其生物半衰期。各種方法係可能。例如，可引入下列突變中之一或多者：T252L、T254S、T256F，如US6,277,375中所述。或者，為增加生物半衰期，該抗體可在CH1或CL區內加以改變以包含取自IgG之Fc區之CH2域之兩個環之補救(salvage)受體的抗原決定基，如US5,869,046及US6,121,022中所述。
又於其他實施例中，Fc區係藉由用不同胺基酸殘基置換至少一個胺基酸殘基以改變抗體之效應功能而改變。例如，可用不同胺基酸殘基置換一或多個胺基酸使得抗體具有對效應配體之改變之親和力但是保留親本抗體之抗原結合能力。親和力被改變之效應配體可為(例如) Fc受體或補體之C1組分。此方法進一步詳述於US5,624,821及US5,648,260(均藉由Winter等人)中。特定言之，可使殘基234及235突變。特定言之，此等突變可為突變為丙胺酸。因此，於一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗體具有Fc區胺基酸234及235中之一者或兩者處之突變。於另一實施例中，可將胺基酸234及235中之一者或兩者取代成丙胺酸。胺基酸234及235二者至丙胺酸之取代導致降低之ADCC活性。
於另一實施例中，可用不同胺基酸殘基置換選自所述抗體之胺基酸殘基之一或多個胺基酸使得抗體具有改變之C1q結合及/或降低或廢除之補體依賴性細胞毒性(CDC)。此方法進一步詳述於US6,194,551中。
於另一實施例中，改變所述抗體之一或多個胺基酸殘基，從而改變抗體固定補體之能力。此方法進一步述於WO94/29351中。
於又一實施例中，藉由修改一或多個胺基酸修改所述抗體之Fc區以增加抗體介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)之能力及/或增加抗體對Fcγ受體之親和力。此方法進一步述於WO00/42072中。此外，已定位人類IgG1上之針對FcγRl、FcγRII、FcγRIII及FcRn之結合位點及已描述具有改良結合之變異體(參見Shields, R.L.等人，2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604)。
於又另一實施例中，修改包含於本發明組合物中之抗體之糖基化。例如，可製備無糖基化抗體(即，抗體缺少糖基化)。可改變糖基化以(例如)增加抗體對抗原之親和力。此等碳水化合物修改可藉由(例如)改變抗體序列內之糖基化之一或多個位點實現。例如，可作出一或多個胺基酸取代，該等取代導致一或多個可變區框架糖基化位點之消除從而消除該位點之糖基化。此無糖基化可增加抗體對抗原之親和力。此方法進一步詳述於Co等人之美國專利案第5,714,350號及第6,350,861號中。
本發明涵蓋之於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之抗體之另一種修改為該等抗體之至少抗原結合區與血清蛋白(諸如人類血清白蛋白或其片段)之偶聯或蛋白質融合以增加所得分子之半衰期(參見，例如，EP0322094)。
另一種可能性為包含於本發明組合物中之抗體之至少抗原結合區與能結合血清蛋白(諸如人類血清白蛋白)之蛋白質之融合以增加所得分子之半衰期(參見，例如，EP0486525)。
改造經改變 之 抗體之方法 如上所述，具有本文中所示CDR序列、VH 及VL 序列或全長重鏈及輕鏈序列之抗ActRIIB抗體可用於藉由修改CDR序列全長重鏈及/或輕鏈序列、VH 及/或VL 序列或其上附接之恆定區創造新穎抗ActRIIB抗體。因此，於本發明之另一態樣中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗ActRIIB抗體之結構特徵係用於創造結構上相關抗ActRIIB抗體，該等抗ActRIIB抗體不但保留本發明方法中使用之該等抗體之至少一種功能性質(諸如與人類ActRIIB結合)而且抑制ActRIIB之一或多種功能性質(例如，抑制Smad活化)。
例如，本發明之包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗體之一或多個CDR區或其突變可與已知框架區及/或其他CDR重組地組合以創造包含於本發明組合物中之額外經重組改造之抗ActRIIB抗體，如上所述。其他類型之修改包括先前節中所述之修改。改造方法之起始物質為本文中所提供VH 及/或VL 序列中之一或多者或一或多個其CDR區。為創造經改造抗體，不必實際上製備(即，表現為蛋白質)具有本文中所提供VH 及/或VL 序列中之一或多者或一或多個其CDR區之抗體。相反，該(等)序列中含有之資訊係用作起始物質以創造衍生自該(等)原始序列之「第二代」序列及然後製備「第二代」序列並表現為蛋白質。
經改變之抗體序列亦可藉由篩選具有選自由SEQ ID NO: 29-42及SEQ ID NO: 71-84組成之群之固定CDR3序列或如US2005/0255552中所述之最小基本結合決定物及CDR1及CDR2序列之多樣性之抗體庫製備。該篩選可根據適用於自抗體庫篩選抗體之任何篩選技術(諸如噬菌體顯示技術)進行。
可使用標準分子生物學技術製備並表現經改變之抗體序列。藉由經改變之抗體序列編碼之抗體為保留本文中所述抗ActRIIB抗體之功能性質中之一者、一些或全部的抗體，該等功能性質包括(但不限於)與人類ActRIIB之特異性結合及Smad活化之抑制。
經改變之抗體可展示上述功能性質中之一或多者、兩者或更多者或三者或更多者。
該改變之抗體之功能性質可使用可於此項技術中獲得及/或本文中所述之標準檢定(諸如彼等於實例中闡述者) (例如，ELISA)評估。
可在所有或部分抗ActRIIB抗體編碼序列中隨機或選擇性地引入突變及可針對結合活性及/或如本文中所述之其他功能性質篩選所得經修改之抗ActRIIB抗體。已於此項技術中描述突變方法。例如，WO02/092780描述使用飽和誘變、合成連接總成或其組合創造及篩選抗體突變之方法。或者，WO03/074679描述使用計算篩選方法使抗體之理化性質最佳化之方法。
編碼包含於本發明組合物中之抗體之核酸分子 經最佳化以於哺乳動物細胞中之表現之全長輕鏈核苷酸序列之實例示於SEQ ID NO: 161-165及171-175中。經最佳化以於哺乳動物細胞中之表現之全長重鏈核苷酸序列之實例示於SEQ ID NO: 166-170及176-180中。
核酸可存在於全細胞中，存在於細胞裂解物中，或可為呈部分純化或實質上純淨形式之核酸。當核酸藉由標準技術(包括鹼/SDS處理、CsCl結合、管柱層析法、瓊脂糖凝膠電泳)及此項技術中熟知之其他技術自其它細胞組分或其他污染物(例如，其他細胞核酸或蛋白質)純化時，該核酸係經「單離」或「呈現實質上純淨」。參見，F. Ausubel等人，1987年編輯Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York。核酸可使用標準分子生物學技術獲得。對於藉由融合瘤(例如，自如下進一步所述之攜帶人類免疫球蛋白基因之轉基因小鼠製備之融合瘤)表現之抗體，編碼藉由融合瘤製備之抗體之輕鏈及重鏈之cDNA可藉由標準PCR擴增或cDNA選殖化技術獲得。對於獲自免疫球蛋白基因庫之抗體(例如，使用噬菌體顯示技術)，編碼該等抗體之核酸可自為該庫成員之各種噬菌體純系回收。
一旦獲得編碼VH 及VL 區段之DNA片段，此等DNA片段即可進一步藉由標準重組DNA技術操作(例如)以將可變區基因轉變成全長抗體鏈基因，轉變成Fab片段基因或轉變成scFv基因。於此等操作中，編碼VL 或VH 之DNA片段可操作地連接至另一DNA分子或連接至編碼另一種蛋白質之片段(諸如抗體恆定區或可撓性連接子)。如此上下文中所用，術語「可操作地連接」意欲意指兩個DNA片段以功能方式接合(例如)使得藉由該等兩個DNA片段編碼之胺基酸序列保持於同框(in-frame)或使得蛋白質係在所需啟動子之控制下表現。
編碼VH 區之單離DNA可藉由可操作地連接編碼VH 之DNA與編碼重鏈恆定區(CH1、CH2及CH3)之另一DNA分子而轉變成全長重鏈基因。人類重鏈恆定區基因之序列係此項技術中已知(參見例如，Kabat, E. A.等人[見上])及涵蓋此等區之DNA片段可藉由標準PCR擴增獲得。重鏈恆定區可為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恆定區。重鏈恆定區可在IgG1同型中選擇。對於Fab片段重鏈基因，編碼VH 之DNA可以可操作地連接至僅編碼重鏈CH1恆定區之另一DNA分子。
編碼VL 區之單離DNA可藉由可操作地連接編碼VL 之DNA與編碼輕鏈恆定區CL之另一DNA分子而轉變成全長輕鏈基因(以及轉變成Fab輕鏈基因)。人類輕鏈恆定區基因之序列係此項技術中已知(參見例如，Kabat, E. A.等人[見上])及涵蓋此等區之DNA片段可藉由標準PCR擴增獲得。輕鏈恆定區可為κ或λ恆定區。
為創造scFv基因，編碼VH 及VL 之DNA片段係可操作地連接至編碼可撓性連接子(例如，編碼胺基酸序列(Gly4 -Ser)3 )之另一片段，使得VH 及VL 序列可表現為具有藉由可撓性連接子接合之VH 及VL 區之連續單鏈蛋白(參見例如，Bird等人，1988 Science 242:423-426；Huston等人，1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；McCafferty等人，1990 Nature 348:552-554)。
單株抗體之產生 單株抗體(mAb)可藉由各種技術(包括習知單株抗體方法學，例如，Kohler及Milstein之標準體細胞雜交技術(1975 Nature 256: 495))產生。可採用用於產生單株抗體之許多技術，例如，B淋巴細胞之病毒或致癌轉形。
用於製備融合瘤之動物系統為鼠系統。小鼠中之融合瘤產生為良好建立之程序。用於融合之經免疫脾細胞之單離之免疫方案及技術係此項技術中已知。融合搭配物(例如，鼠骨髓瘤細胞)及融合程序亦係已知。
包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之嵌合或人類化抗體可基於如上所述製備之鼠單株抗體之序列製備。編碼重鏈及輕鏈免疫球蛋白之DNA可自所關注之鼠融合瘤獲得且使用標準分子生物學技術改造為含有非鼠(例如，人類)免疫球蛋白序列。例如，為創造嵌合抗體，可使用此項技術中已知方法將鼠可變區與人類恆定區連接(參見例如，US4,816,567)。為創造人類化抗體，可使用此項技術中已知方法將鼠CDR區***人類框架中(參見例如，美國專利案第5225539號、第5530101號、第5585089號、第5693762號及第6180370號)。
於某一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗體為人類單株抗體。針對ActRIIB之此等人類單株抗體可使用攜帶部分人類免疫系統而非鼠系統之轉基因或轉染色體小鼠產生。此等轉基因及轉染色體小鼠包括在本文中各自稱作HuMAb小鼠及KM小鼠且在本文中統稱作「人類Ig小鼠」之小鼠。(參見例如，Lonberg等人，1994 Nature 368(6474): 856-859)。另外參見美國專利案第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,789,650號、第5,877,397號、第5,661,016號、第5,814,318號、第5,874,299號、第5,770,429號及第5,545,807號；以及WO92/103918、WO93/12227、WO94/25585、WO97/113852、WO98/24884、WO99/45962及WO01/14424。
於另一實施例中，包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗體可使用於轉基因及轉染色體上攜帶人類免疫球蛋白序列之小鼠(諸如攜帶人類重鏈轉基因及人類輕鏈轉染色體之小鼠)培養。此小鼠(本文中稱作「KM小鼠」)詳述於WO02/43478中。
更進一步地，表現人類免疫球蛋白基因之替代轉基因動物系統係此項技術中可得且可用於培養本發明之抗ActRIIB抗體。例如，可使用稱作Xenomouse (Abgenix, Inc.)之替代轉基因系統。此小鼠述於(例如)美國專利案第5,939,598號、第6,075,181號、第6,114,598號、第6, 150,584號及第6,162,963號中。
包含於本發明組合物中之人類重組抗體亦可使用用於篩選人類免疫球蛋白基因庫之噬菌體顯示方法製備。用於單離人類抗體之此等噬菌體顯示方法係於此項技術中建立或述於以下實例中。參見例如：美國專利案第5,223,409號、第5,403,484號、第5,571,698號、第5,427,908號、第5,580,717號、第5,969,108號、第6,172,197號、第5,885,793號、第6,521,404號、第6,544,731號、第6,555,313號、第6,582,915號及第6,593,081號。
包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之人類單株抗體亦可使用SCID小鼠製備，人類免疫細胞已重構於SCID小鼠中使得人類抗體反應可在免疫後產生。此小鼠述於(例如)美國專利案第5,476,996號及第5,698,767號中。
產生人類單株抗體之融合瘤之產生 為產生產生包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之人類單株抗體之融合瘤，可將來自經免疫小鼠之脾細胞及/或淋巴結細胞單離並與適宜永生化細胞系(諸如小鼠骨髓瘤細胞系)融合。可篩選所得融合瘤用於抗原特異性抗體之產生。例如，可將來自經免疫小鼠之脾淋巴細胞之單細胞懸浮液與具有50% PEG之P3X63-Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤細胞(ATCC, CRL 1580)數目之六分之一融合。將細胞於平底微量滴定盤中以約2 x 145接種，接著於含有以下之選擇性培養基中培育兩週：20%胎兒純系血清、18% 「653」條件培養基、5%三甲氧唑辛(origen) (IGEN)、4 mM L-麩胺醯胺、1 mM丙酮酸鈉、5mM HEPES、0:055 mM 2-巰基乙醇、50單位/ml盤尼西林(penicillin)、50 mg/ml鏈黴素(streptomycin)、50 mg/ml慶大黴素(gentamycin)及1X HAT (Sigma；於融合後24小時添加HAT)。於約兩週後，可將細胞培養於用HT替換HAT之培養基中。然後可針對人類單株IgM及IgG抗體藉由ELISA篩選個別孔。一旦廣泛融合瘤生長發生，就可觀察培養基(通常於10至14天後)。分泌抗體之融合瘤可經再接種，再次篩選，及若針對人類IgG仍呈陽性，則可將單株抗體藉由有限稀釋次選殖至少兩次。然後可於活體外培養穩定亞純系以於組織培養基中產生少量抗體以用於表徵。
為純化人類單株抗體，所選融合瘤可於2 L旋轉瓶中生長以用於單株抗體純化。可過濾上清液並濃縮，接著利用蛋白A-瓊脂糖(Pharmacia)進行親和層析。可藉由凝膠電泳及高效液相層析法檢查經溶離之IgG以確保純度。可將緩衝液交換成PBS，及可藉由OD280 使用1.43消光係數測定濃度。可將單株抗體等分及在-80℃下儲存。
產生單株抗體之轉染瘤之產生 包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗體亦可於宿主細胞轉染瘤中使用(例如)重組DNA技術與此項技術中熟知之基因轉染方法之組合產生。
例如，為表現抗體或其抗體片段，編碼部分或全長輕鏈及重鏈之DNA可藉由標準分子生物學技術(例如，使用表現所關注抗體之融合瘤之PCR擴增或cDNA選殖)獲得且可將DNA***表現載體中使得基因可操作地連接至轉錄及轉譯控制序列。於此上下文中，術語「可操作地連接」意欲意指將抗體基因連接至載體中使得該載體內之轉錄及轉譯控制序列服務於調節抗體基因之轉錄及轉譯之其預期功能。選擇表現載體及表現控制序列以與所使用之表現宿主細胞相容。可將抗體輕鏈基因及抗體重鏈基因***分開載體中或更典型地，將兩種基因***相同表現載體中。藉由標準方法(例如，抗體基因片段及載體上之互補限制位點之連接或若限制位點不存在，則平端連接)將抗體基因***表現載體中。可使用本文中所述抗體之輕鏈及重鏈可變區藉由將其***已編碼所需同型之重鏈恆定區及輕鏈恆定區之表現載體使得VH 段可操作地連接至載體內之CH段且VL 段可操作地連接至載體內之CL段來創造任何抗體同型之全長抗體基因。此外或或者，重組表現載體可編碼促進抗體鏈自宿主細胞之分泌的信號肽。可將抗體鏈基因選殖至載體中使得信號肽同框連接至抗體鏈基因之胺基末端。該信號肽可為免疫球蛋白信號肽或異源信號肽(即，來自非免疫球蛋白蛋白質之信號肽)。
除了抗體鏈基因外，本發明之重組表現載體攜帶控制抗體鏈基因於宿主細胞中之表現之調節序列。術語「調節序列」意欲包括啟動子、增強子及控制抗體鏈基因之轉錄或轉譯之其他表現控制元件(例如，多腺苷酸化信號)。此等調節序列述於(例如) Goeddel (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 1990)中。熟習此項技術者應瞭解表現載體之設計(包括調節序列之選擇)可取決於諸如欲轉形之宿主細胞之選擇、所需蛋白質之表現程度等因素。用於哺乳動物宿主細胞表現之調節序列包括指導蛋白質於哺乳動物細胞中高程度表現之病毒元件，諸如衍生自巨細胞病毒(CMV)、猿猴病毒(Simian Virus) 40 (SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))及多瘤之啟動子及/或增強子。或者，可使用非病毒調節序列，諸如泛素啟動子或P-球蛋白啟動子。更進一步地，調節序列由來自不同來源(諸如SRa啟動子系統)之序列組成，該SRa啟動子系統含有來自SV40早期啟動子之序列及人類T細胞白血病1型病毒之長末端重複(Takebe, Y.等人，1988 Mol. Cell. Biol. 8:466-472)。
除了抗體鏈基因及調節序列外，重組表現載體可攜帶額外序列，諸如調節載體於宿主細胞中之複製之序列(例如，複製起源)及可選擇性標記基因。可選擇性標記基因促進已引入載體之宿主細胞之選擇(參見例如，美國專利案第4,399,216號、第4,634,665號及第5,179,017號)。例如，通常可選擇性標記基因賦予對已引入載體之宿主細胞對藥物(諸如G418、潮黴素(hygromycin)或胺甲喋呤(methotrexate))之抗性。可選擇性標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(用於利用胺甲喋呤選擇/擴增之dhfr-宿主細胞)及neo基因(針對G418選擇)。
對於輕鏈及重鏈之表現，藉由標準技術將編碼重鏈及輕鏈之表現載體轉染至宿主細胞中。術語「轉染」之各種形式意欲涵蓋用於將外源DNA引入原核或真核宿主細胞中常用之廣泛各種技術，例如，電穿孔、磷酸鈣沈澱、DEAE-右旋糖苷轉染等。理論上可於原核或真核宿主細胞中表現本發明之抗體。討論抗體於真核細胞(特定言之哺乳動物宿主細胞)中之表現，因為此等真核細胞及特定言之哺乳動物細胞較原核細胞更可能裝配並分泌適當摺疊且具免疫活性的抗體。已報導抗體基因之原核表現無法有效產生高產率活性抗體(Boss, M. A.及Wood, C. R., 1985 Immunology Today 6:12-13)。
用於表現包含於本發明組合物中之重組抗體之哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢(CHO細胞) (包括與DH FR可選擇性標記(例如，如R.J. Kaufman及P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621中所述)一起使用之Urlaub及Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220所述之dhfr- CHO細胞)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。於一實施例中，宿主細胞為CHO K1PD細胞。特定言之，用於與NSO骨髓瘤細胞一起使用，另一種表現系統為於WO87/04462、WO89/01036及EP 338,841中所示之GS基因表現系統。用於表現包含於本發明組合物中之重組抗體之哺乳動物宿主細胞包括缺乏FUT8基因表現(例如，如US6,946,292B2中所述)之哺乳動物細胞系。當將編碼抗體基因之重組表現載體引入哺乳動物宿主細胞中時，藉由培養宿主細胞一段足以允許抗體於宿主細胞中表現或抗體分泌至宿主細胞生長之培養基中之時間產生抗體。可使用標準蛋白質純化方法自培養基移除抗體。
醫藥組合物 於另一態樣中，本發明提供於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物(例如，醫藥組合物)，其含有與醫藥上可接受之載劑一起調配之上述抗體/單株抗體或其抗原結合部分中之一者或組合。此等組合物可包含(例如，兩種或更多種不同)所述抗體或免疫偶聯物或雙特異性分子中之一者或組合。例如，於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之醫藥組合物可包含與靶抗原上之不同抗原決定基結合或具有互補活性之抗體之組合。
於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之醫藥組合物亦可以組合療法(即，與其他藥劑組合)投與。例如，組合療法可包括本發明之抗ActRII抗體與以下至少一種其他肌肉質量/力量增強劑之組合：例如，IGF-1或IGF-1之變異體、抗肌肉生長抑制素抗體、肌肉生長抑制素前肽、結合ActRIIB但是不激活ActRIIB之肌肉生長抑制素誘捕蛋白、β2促效劑、Ghrelin促效劑、SARM、GH促效劑/擬似物或卵泡抑素。可用於組合療法中之治療劑之實例更詳細描述於以下本發明之抗體之用途部分中。
如本文中所用，「醫藥上可接受之載劑」包括生理上相容之任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑等。載劑應適用於靜脈內、肌肉內、皮下、非經腸、脊柱或表皮投與(例如，藉由注射或輸注)，較佳地用於靜脈內注射或輸注。取決於投與途徑，可將活性化合物(即，抗體、免疫偶聯物或雙特異性分子)包覆於材料中以保護該化合物免於酸及可使該化合物失活之其他自然條件之作用。
於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之醫藥組合物亦可包含醫藥上可接受之抗氧化劑。醫藥上可接受之抗氧化劑之實例包括：水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；及金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
可於本發明醫藥組合物中採用之適宜水性及非水性載劑之實例包括水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其適宜混合物、植物油(諸如橄欖油)及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。適宜流動性可(例如)藉由使用包衣物質(諸如卵磷脂)、在分散情況下藉由維持所需粒度、及藉由使用表面活性劑加以維持。
於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之此等組合物亦可含有佐劑(諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑及分散劑)。可藉由滅菌程序(見上)及藉由納入各種抗菌劑及抗真菌劑(例如，對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)二者確保防止微生物存在。亦可期望包含等滲劑(諸如糖、氯化鈉等)於組合物中。此外，可注射醫藥形式之延長吸收可藉由納入延遲吸收之藥劑(諸如單硬脂酸鋁及明膠)而實現。
醫藥上可接受之載劑包括無菌水性溶液或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。用於醫藥活性物質之此等介質及物劑之用途係此項技術中已知。除非任何習知介質或物劑與活性化合物不相容，否則考慮其於本發明醫藥組合物中之用途。補充活性化合物亦可併入組合物中。
治療組合物通常必須係無菌且在製造及儲存條件下穩定。組合物可調配成溶液、微乳液、脂質體或適用於高藥物濃度之其他定製結構。載劑可為溶劑或分散介質，其含有(例如)水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇等)及其適宜混合物。適宜流動性可(例如)藉由使用包衣(諸如卵磷脂)、在分散情況下藉由維持所需粒度、及藉由使用表面活性劑加以維持。於許多情況下，組合物中可包含等滲劑(例如，糖、聚醇(諸如甘露醇、山梨醇)或氯化鈉)。可注射組合物之延長吸收可藉由包含延遲吸收之藥劑(例如，單硬脂酸鹽及明膠)於組合物中而實現。
無菌可注射溶液可藉由將所需量之活性化合物與視需要以上列舉物劑中之一者或組合一起併入適宜溶劑中，接著滅菌微過濾來製備。一般而言，分散液係藉由將活性化合物併入含有基本分散介質及來自上述列舉之彼等之所需其他物劑之無菌載劑中來製備。於用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末之情況下，製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥(凍乾法)，其自先前無菌過濾溶液產生活性劑加上任何額外所需物劑之粉末。
可與載劑物質組合以產生單一劑型之活性劑之量將取決於所治療之個體及投與之特定方式而變化。可與載劑物質組合以產生單一劑型之活性劑之量一般為產生治療效果之組合物之量。一般而言，出自100%，此量範圍為由約0.01%至約99%之活性劑，由約0.1%至約70%或由約1%至約30%之活性劑與醫藥上可接受之載劑組合。
調整劑量方案以提供最佳所需反應(例如治療反應)。例如，可投與單一劑量(single bolus)，可隨時間投與若干分割劑量，或可按比例地減少或增加劑量，如治療情況之危急性指示。調配非經腸組合物成易於投與及劑量均一之單位劑型尤其有利。如本文中所用，單位劑型係指適用於欲治療個體之單位劑量之物理上離散單元；各單元含有經計算以產生所需治療效果之預定量之活性化合物與所需醫藥載劑組合。本發明之單位劑型之規格係由以下指示且直接取決於以下：活性化合物之獨特特性，及欲達成之特定治療效果，及調配此活性化合物用於治療個體敏感度之技術之固有限制。
對於投與包含抗體之組合物用於治療尿失禁之本發明方法或用於治療尿失禁，抗體劑量範圍由約0.0001至約100 mg/kg，更通常由約0.01至約30 mg/kg之宿主體重。例如，劑量為約1至10 mg/kg (例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 mg/kg)體重範圍內之約1 mg/kg體重、約3 mg/kg體重、約5 mg/kg體重或約10 mg/kg體重。劑量必要時重複且可於約每週一次至約每10週一次之範圍內，例如每4至8週一次。
投與係例如經靜脈內進行。用於治療尿失禁之本發明方法中或用於治療尿失禁之抗ActRII抗體(例如畢馬洛單抗)之劑量方案包括約1 mg/kg體重或約3 mg/kg體重或約10 mg/kg體重，藉由靜脈內投與每四週一次。
投與係例如經皮下進行。用於治療尿失禁之本發明方法中或用於治療尿失禁之抗ActRII抗體(例如畢馬洛單抗)之劑量方案包括約1 mg/kg體重或約3 mg/kg體重或約10 mg/kg體重，藉由皮下投與每週一次。
於一些方法中，具有不同結合特異性之兩種或更多種單株抗體包含於本發明組合物中及因此同時投與，在該情形下，所投與之各抗體之劑量落入指示範圍內。抗體通常在多種場合下投與。單一劑量之間之間隔可為(例如)每週、每月、每三個月、每六個月或每年。間隔亦可係不規則的，如藉由量測患者之靶抗原之抗體之血液濃度所指示。於一些方法中，調整劑量以達成約1至約1000 µg/ml之血漿抗體濃度及於一些方法中，約25至約300 µg/ml。例如，ActRII抗體可與抗肌肉生長抑制素抗體共投與。
劑量及頻率取決於抗體於患者之半衰期而變化。一般而言，人類抗體顯示最長半衰期，其次為人類化抗體、嵌合抗體及非人類抗體。投與之劑量及頻率可取決於治療是預防性還是治療性而變化。於預防性應用中，長期以相對不頻繁間隔投與相對低的劑量。一些患者繼續接受治療持續其餘生。於治療性應用中，有時需要以相對短的間隔投與相對高的劑量直至減少或結束疾病之進展或直至患者顯示疾病之症狀之部分或完全改善。此後，患者可投與預防性方案。
包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之組合物中之抗ActRII抗體之「治療上有效劑量」的投與可導致疾病症狀之嚴重度之減少、疾病無症狀期之頻率及持續時間之增加或預防由於疾病折磨(即，失禁功能之增加)所致之損傷或殘疾。疾病症狀為(i)於突然咳嗽、打噴嚏、笑、舉重及鍛煉後之失禁或(ii)引起不能停止之排尿衝動之膀胱肌肉壁之非自願收縮或(iii)膀胱不能貯存與身體產生一樣多之尿及/或膀胱不能完全清空，造成少量尿洩漏(患者經歷來自尿道之尿之不斷「滴漏」)。
活性化合物可利用將保護該化合物免於快速釋放之載劑製備，諸如可控釋放調配物，包括移植物、透皮貼片及微膠囊遞送系統。可使用可生物降解、生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。用於製備此等調配物之許多方法係被授予專利或一般為熟習此項技術者已知。參見，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson編輯，Marcel Dekker, Inc., New York, 1978。
治療性組合物可利用此項技術中已知之醫藥裝置投與。
本發明之用途及方法 於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之所揭示組合物及所揭示抗體具有治療功效，因為其對治療尿失禁或對改善患有尿失禁之患者之病狀或對減少與尿失禁相關聯之症狀有影響。
如本文中所用，術語「個體(subject/individual)」意欲係指人類，特定言之患有尿失禁之患者。
因此，本發明亦關於治療方法，其中本文中所揭示組合物或所揭示ActRII受體拮抗劑(例如，ActRII結合分子，更佳地ActRII之抗體(例如，畢馬洛單抗或BYM338))抑制(即，對抗) ActRII之功能且從而導致各種類型之尿失禁之改善。本發明提供預防及/或治療尿失禁之方法，其包括對患者投與治療上有效量之ActRII受體拮抗劑(例如，較佳地ActRIIB結合分子，更佳地ActRIIB之拮抗劑抗體(例如，畢馬洛單抗或BYM338))或所揭示組合物。
可用於所揭示治療方法中之ActRII受體拮抗劑(例如，ActRII結合分子，較佳地ActRIIB之拮抗劑抗體(例如，畢馬洛單抗或BYM338))之實例為彼等以上所揭示或詳述者。於某些實施例中，ActRII抗體(例如，畢馬洛單抗或BYM338)包含於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之本文中所揭示組合物中。
本發明亦關於ActRII受體拮抗劑(例如，ActRIIA或ActRIIB受體結合分子，較佳地ActRII之拮抗劑抗體(例如，BYM338))於製造用於治療如上文中所述之各種形式之尿失禁之藥劑中的用途。
ActRII結合分子(較佳地ActRII之拮抗劑抗體(例如，畢馬洛單抗或BYM338))可呈單獨活性劑或與以下其他藥物聯合(例如，呈佐劑或與以下其他藥物組合)投與：例如，IGF-1或IGF-1之變異體、抗肌肉生長抑制素抗體、肌肉生長抑制素前肽、結合ActRIIB但是不激活ActRIIB之肌肉生長抑制素誘捕蛋白、β2促效劑、Ghrelin促效劑、SARM、GH促效劑/擬似物或卵泡抑素。
根據上述，本發明於又一態樣中提供如上所定義之方法或用途，其包括(例如)同時或依序共投與治療上有效量之ActRII受體拮抗劑，較佳地ActRII結合分子(更佳地ActRII之拮抗劑抗體(例如，畢馬洛單抗或BYM338))及至少一種第二原料藥，該第二原料藥為IGF-1或IGF-1之變異體、抗肌肉生長抑制素抗體、肌肉生長抑制素前肽、結合ActRIIB但是不激活ActRIIB之肌肉生長抑制素誘捕蛋白、β2促效劑、Ghrelin促效劑、SARM、GH促效劑/擬似物或卵泡抑素。
套組 本發明亦涵蓋於用於治療尿失禁或於治療尿失禁中使用之本發明方法中使用之套組，其可包含ActRII受體拮抗劑(例如，ActRII受體結合分子(例如，ActRII受體抗體或其抗原結合部分，例如，畢馬洛單抗或BYM338)或ActRII受體(即，ActRIIB受體)結合分子(例如，抗ActRIIB抗體或其抗原結合部分))(例如，以液體或凍乾形式)或包含ActRII受體拮抗劑(上文所述)之醫藥組合物。此外，此等套組可包含用於投與ActRII拮抗劑之裝置(例如，注射器及小瓶、預填充注射器、預填充筆)及使用說明書。此等套組可含有額外治療劑(上文所述)，例如用於與封閉肌肉生長抑制素拮抗劑(例如，BYM338)組合遞送。
使用片語「用於投與之裝置」指示用於對患者全身投與藥物之任何可用工具，其包括(但不限於)預填充注射器、小瓶及注射器、注射筆、自動注射器、靜脈注射點滴及袋、泵等。利用此等物品，患者可自己投與藥物(即，代表其自己投與藥物)或醫師可投與藥物。
套組之各組件通常封閉於個別容器內，且所有各種容器與使用說明書一起置於單一包裝內。
預期ActRII拮抗劑可為治療尿失禁之理想候選，其具有治療優點，諸如下列中之一或多者： i.減少每24小時之失禁發作次數； ii.減少每24小時之排尿次數； iii.減少每次排尿/失禁發作之***體積； iv.減少急迫性失禁發作之次數； v.減少每24小時之夜尿症發作之次數； vi.減少伴隨急迫性或藉由急迫性立即進行之尿之非自願洩漏之次數； vii.患者膀胱狀況感知(PPBC)之改善。
PPBC量表為要求患者以來自以下之6點量表評價其目前膀胱狀況之其印象之全球評估工具：1：一點不引起吾人任何問題；2：引起吾人一些非常小的問題；3：引起吾人一些小的問題；4：引起吾人(一些)適度問題；5：引起吾人嚴重問題及6：引起吾人許多嚴重問題。改善可定義為自基線至基線後之至少1點改善及大的改善可定義為在PPBC分數方面自基線至基線後之至少2點改善。
熟習者知曉如何設計用於尿失禁之非手術治療之可控試驗。Shamliyan及同事公開用於尿失禁之非手術治療之96種隨機可控試驗(RCT)的系統評論(Tatyana A. Shamliyan, MD, MS、Robert L. Kane, MD、Jean Wyman, PhD及Timothy J. Wilt: Systematic Review: Randomized, Controlled Trials of Nonsurgical Treatments for Urinary Incontinence in Women；2008年3月18日Annals of Internal Medicine第148卷，第6期，第459至474頁)。例如，可類似於在臨床試驗政府識別號NCT00689104: Study to Test the Efficacy and Safety of the Beta-3 Agonist Mirabegron (YM178) in Patients With Symptoms of Overactive Bladder下進行之研究設計使用抗體畢馬洛單抗之臨床試驗。
序列 表3：序列表
所揭示方法、治療、方案、用途及套組之實施例採用ActRII受體拮抗劑(例如，ActRIIB結合分子)。於其他實施例中，ActRIIB結合分子為ActRIIB之拮抗抗體。
於所揭示方法、治療、方案、用途及套組之一些實施例中，抗體為畢馬洛單抗。
於以上伴隨描述中闡述本發明之一或多個實施例之細節。與彼等本文中所述者相似或等效之任何方法及材料可用於實踐或測試本發明中。本發明之其他特徵、目標及優點將自描述及自申請專利範圍顯而易見。於本說明書及隨附申請專利範圍中，除非上下文中另有明確指明，否則單數形式包括複數指代物。除非另有指定，否則本文中所用之所有技術及科學術語具有與一般技術(本發明所屬)者通常所理解之含義相同的含義。下列實例意指更充分說明本發明且意指不以任何方式限制其範圍。
實例 一般方法學
ActRIIB抗體，其表徵及與之相關的方法如(i)功能檢定，(ii)報導基因檢定(RGA)，(iii) HEK293T/17細胞系之培養，(iv)肌肉生長抑制素誘導之螢光素酶報導基因檢定，(v)特異性ELISA，(vi) ActRIIB/Fc-肌肉生長抑制素結合相互作用ELISA，(vii) hActRIIB-及hActRIIA-表現細胞之FACS滴定，(viii)與原生人類骨骼肌細胞結合，(ix)使用表面電漿共振(Biacore)之選定抗人類ActRIIB Fab之親和力測定，(x) CK檢定，(xi)動物模型，(xii)治療方案，(xiii)統計分析，(xiiii)淘選，(xv)抗體識別及表徵，(xvi) 衍生自第一次親和力成熟之抗體之最佳化，(xvii)親和力成熟之Fab (第一次成熟)之IgG2轉變，(xviiii)第二次親和力成熟，(xx) IgG2轉變及IgG2之表徵(第二次成熟)，(xxi)於活體內鼠研究中之抗ActRIIB抗體之表徵，(xxii)藉由SET之親和力之確認，(xxiii)交叉阻斷研究及(xxiv)抗原決定基定位細節及技術已揭示於WO 2010/125003中。
為研究ActRII受體拮抗劑畢馬洛單抗是否可用於開發壓力性尿失禁之治療，使用雙重損傷分娩模擬大鼠模型。該雙重損傷分娩模擬大鼠模型已揭示於Hai-Hong Jiang等人，Dual simulated childbirth injuries result in slowed recovery of pudendal nerve and urethral function ; Neurourol Urodyn. 2009 ; 28(3): 229-235及Song等人，Combination Histamine and Serotonin Treatment After Simulated Childbirth Injury Improves Stress Urinary ; Neurourology and Urodynamics 35:703-710 (2016)中。Jiang等人，2009之題名為Animal preparations, Childbirth simulation injury models and Leak point pressure (LPP) with simultaneous neuromuscular physiological recordings之材料及方法部分以引用的方式併入本文中如同完全闡述般。
使用由雌性處女Sprague Dawley大鼠(200至250 g)之陰部神經擠壓及***擴張誘導之由Hai-Hong Jiang等人，2009及Song等人，2016描述之大鼠壓力性尿失禁模型研究畢馬洛單抗對壓力性尿失禁之作用。以對由雌性處女Sprague Dawley大鼠(200至250 g)之陰部神經擠壓及***擴張(PNC+ VD)誘導之壓力性尿失禁之上述實驗大鼠模型之洩漏點壓力(LPP)及尿道外括約肌(EUS)肌電圖(EMG)治療干預方式投與的畢馬洛單抗可對壓力性尿失禁具有有益效果。
為研究畢馬洛單抗對壓力性尿失禁之作用，將大鼠於手術後一週根據Hai-Hong Jiang等人，2009中所述之方案處理。 表4治療方案 1 由雌性處女Sprague Dawley大鼠(200至250 g)之陰部神經擠壓及***擴張(PNC + VD)誘導之壓力性尿失禁之大鼠模型；n=8至10隻 (總共32至40隻)；
功能讀出： 為檢測對LPP及/或EUSEMG干預後相較於PNC+VD媒劑組之任何潛在統計上顯著改善及探索用畢馬洛單抗與克侖特羅對壓力性尿失禁干預之間之差異，評估下列功能讀出： 1.對使用記錄之陰部神經運動分支電位(PNMBP)之洩漏點壓力(LPP)測試的反應以評估神經損傷及神經再生，及/或 2.記錄***外括約肌(EUS)肌電圖(EMG)以評估肌肉損傷及神經再支配，可記錄同時具有尿道外括約肌肌電圖(EUS EMG)及陰部神經運動分支電位(PNMBP)記錄之洩漏點壓力(LPP)測試。 3.體重監測、後肢骨骼肌重量(例如，四頭肌、腓腸肌複合體、脛骨前肌)；
於壓力性尿失禁中使用安慰劑及化合物 (R)-7-(2-(1-(4- 丁氧基苯基 )-2- 甲基丙 -2- 基胺基 )-1- 羥乙基 )-5- 羥基苯 并 [d] 噻唑 -2(3H)- 酮之乙酸鹽形式之臨床試驗。 使用化合物(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基胺基)-1-羥乙基)-5-羥基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮之乙酸鹽形式之臨床試驗可如Yasuda等人，A Double-Blind Clinical Trial of a/32-adrenergic Agonist in Stress Incontinence, Int Urogynecol J (1993) 4:146-151之公開中所述設計。
患者選擇： 選擇抱怨壓力性失禁之患者以及患有壓力性及急迫性失禁二者之患者。此外，選擇具有4及5之PPBC量表之患者。根據國際失禁學會(International Continence society)之規則進行尿動力學研究。
尿動力學研究： 為評估治療效果，進行下列研究/收集資料： · 尿道壓力分佈(例如，根據Brown及Wickham, JEA. The urethral pressure profile. Br J Urol 1969; 41:211-217) · 墊稱重測試(Joergense L.等人，One-hour pad weighing test for objective assessment of female urinary incontinence. Obstet Gynecol 1987; 69:39-42) · 失禁之每日頻率/墊變化頻率：指導患者在治療之前、期間及結束時按量表記錄失禁發作。 · 每24小時之失禁發作次數； · 每24小時之排尿次數； · 每次排尿/失禁發作之***體積； · 急迫性失禁發作之次數； · 每24小時之夜尿症發作之次數； · 伴隨急迫性或藉由急迫性立即進行之尿之非自願洩漏之次數； · PPBC量表評估
研究終點： 初級終點：在研究開始至研究結束(例如，12週)時，每日壓力性尿失禁發作之頻率自基線之變化。
二級終點： 1.每24小時之失禁發作次數之變化； 2.每24小時之排尿次數之變化； 3.每次排尿/失禁發作之***體積之變化； 4.急迫性失禁發作次數之變化； 5.每24小時之夜尿症發作次數之變化； 6.伴隨急迫性或藉由急迫性立即進行之尿之非自願洩漏之次數的變化；
藉由比較初始狀態及治療後狀態評估基於初級及二級終點結果之失禁嚴重度之改善。
其他較佳實施例： 1.一種用於治療顯示尿失禁症狀或有發展尿失禁風險之個體之ActRII受體拮抗劑。 2.如實施例1之用於治療尿失禁之ActRII受體拮抗劑，其中該尿失禁係由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成或與之相關聯。 3.如實施例1或2之用於治療尿失禁之ActRII受體拮抗劑，其中該尿失禁為選自由壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁組成之群之失禁。 4.如實施例3之用於治療尿失禁之ActRII受體拮抗劑，其中該尿失禁為壓力性尿失禁。 5.如實施例2之用於治療尿失禁之ActRII受體拮抗劑，其中該虛弱或受損骨盆肌為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌。 6.如實施例1至5之用於治療尿失禁之ActRII受體拮抗劑，其中該尿失禁係與分娩或更年期之影響有關或由其造成。 7.一種治療尿失禁之方法，該方法包括對顯示尿失禁症狀或有發展尿失禁風險之個體投與有效量之ActRII受體拮抗劑。 8.如實施例7之方法，其中該尿失禁係由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成或與之相關聯。 9.如實施例8之方法，其中該尿失禁為選自由壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁組成之群之失禁。 10.如實施例9之方法，其中該虛弱或受損骨盆肌為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌。 11.如實施例10之方法，其中該尿失禁係與分娩或更年期之影響有關或由其造成。 12.一種治療與選自由壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁組成之群之尿失禁病狀相關聯之骨盆肌異常的方法，該方法包括對患有該骨盆肌功能異常之個體投與有效量之ActRII受體拮抗劑。 13.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為ActRII受體結合分子。 14.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑與ActRIIA結合及/或與ActRIIB受體結合。 15.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分。 16.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該抗ActRII受體抗體為畢馬洛單抗或其抗原結合部分。 17.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為與由SEQ ID NO: 181之胺基酸19-134 (SEQ ID NO: 182)組成之ActRIIB之抗原決定基結合的抗ActRII抗體或其抗原結合部分。 18.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗ActRII抗體或其抗原結合部分與包含以下或由以下組成之ActRIIB之抗原決定基結合： (a) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)； (b) SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)； (c) SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)； (d) SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)； (e) SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)； (f) SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)； (g) SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)；或 (h) SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)。 19.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分係選自由以下組成之群： a)與包含以下之ActRIIB之抗原決定基結合之抗ActRIIB抗體或其抗原結合部分： i. SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)； ii. SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)； iii. SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)； iv. SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)； v. SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)； vi. SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)； vii. SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)；或 viii. SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)；及 b)與包含以下之ActRIIB之抗原決定基結合之ActRIIB之拮抗劑抗體： i. SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN – SEQ ID NO:188)； ii. SEQ ID NO: 181之胺基酸76-84 (GCWLDDFNC – SEQ ID NO:186)； iii. SEQ ID NO: 181之胺基酸75-85 (KGCWLDDFNCY – SEQ ID NO:190)； iv. SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR – SEQ ID NO:189)； v. SEQ ID NO: 181之胺基酸49-63 (CEGEQDKRLHCYASW – SEQ ID NO:187)； vi. SEQ ID NO: 181之胺基酸29-41 (CIYYNANWELERT– SEQ ID NO:191)； vii. SEQ ID NO: 181之胺基酸100-110 (YFCCCEGNFCN – SEQ ID NO:192)；或 viii. SEQ ID NO: 181之胺基酸78-83 (WLDDFN)及SEQ ID NO: 181之胺基酸52-56 (EQDKR)，其中該抗體具有約2 pM之KD 。 20.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分與人類ActRIIB結合較其與人類ActRIIA結合具有10倍或更大親和力。 21.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分包括包含選自由SEQ ID NO: 1-14組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、包含選自由SEQ ID NO: 15-28組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR2、包含選自由SEQ ID NO: 29-42組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR3、包含選自由SEQ ID NO: 43-56組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、包含選自由SEQ ID NO: 57-70組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR2及包含選自由SEQ ID NO: 71-84組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR3。 22.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分包括： (a) SEQ ID NO: 1之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 15之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 29之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 43之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 57之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 71之輕鏈可變區CDR3， (b) SEQ ID NO: 2之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 16之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 30之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 58之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 72之輕鏈可變區CDR3， (c) SEQ ID NO: 3之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 17之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 31之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 45之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 73之輕鏈可變區CDR3， (d) SEQ ID NO: 1之重鏈可變區CDR4、SEQ ID NO: 18之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 32之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 46之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 60之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 74之輕鏈可變區CDR3， (e) SEQ ID NO: 5之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 19之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 33之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 61之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 75之輕鏈可變區CDR3， (f) SEQ ID NO: 6之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 20之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 34之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 62之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 76之輕鏈可變區CDR3， (g) SEQ ID NO: 7之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 21之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 35之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 49之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 77之輕鏈可變區CDR3， (h) SEQ ID NO: 8之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 22之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 36之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 50之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 64之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 78之輕鏈可變區CDR3， (i) SEQ ID NO: 9之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 23之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 37之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 51之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 65之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 79之輕鏈可變區CDR3， (j) SEQ ID NO: 10之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 24之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 38之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 52之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 66之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 80之輕鏈可變區CDR3， (k) SEQ ID NO: 11之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 25之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 39之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 53之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 67之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 81之輕鏈可變區CDR3， (l) SEQ ID NO: 12之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 26之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 40之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 54之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 82之輕鏈可變區CDR3， (m) SEQ ID NO: 13之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 27之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 41之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 69之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 83之輕鏈可變區CDR3，或 (n) SEQ ID NO: 14之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 28之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 42之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 56之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 70之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 84之輕鏈可變區CDR3。 23.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體包含與選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之至少一個序列具有至少95%序列同一性之全長重鏈胺基酸序列及與選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之至少一個序列具有至少95%序列同一性之全長輕鏈胺基酸序列。 24.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分包含： (a) SEQ ID NO: 99之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 85之可變輕鏈序列； (b) SEQ ID NO: 100之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 86之可變輕鏈序列； (c) SEQ ID NO: 101之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 87之可變輕鏈序列； (d) SEQ ID NO: 102之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 88之可變輕鏈序列； (e) SEQ ID NO: 103之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 89之可變輕鏈序列； (f) SEQ ID NO: 104之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 90之可變輕鏈序列； (g) SEQ ID NO: 105之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 91之可變輕鏈序列； (h) SEQ ID NO: 106之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 92之可變輕鏈序列； (i) SEQ ID NO: 107之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 93之可變輕鏈序列； (j) SEQ ID NO: 108之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 94之可變輕鏈序列； (k) SEQ ID NO: 109之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 95之可變輕鏈序列； (l) SEQ ID NO: 110之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 96之可變輕鏈序列； (m) SEQ ID NO: 111之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 97之可變輕鏈序列；或 (n) SEQ ID NO: 112之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 98之可變輕鏈序列。 25. 如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例15至24中任一項之方法，其中該抗體包含： (a) SEQ ID NO: 146之重鏈序列及SEQ ID NO: 141之輕鏈序列； (b) SEQ ID NO: 147之重鏈序列及SEQ ID NO: 142之輕鏈序列； (c) SEQ ID NO: 148之重鏈序列及SEQ ID NO: 143之輕鏈序列； (d) SEQ ID NO: 149之重鏈序列及SEQ ID NO: 144之輕鏈序列； (e) SEQ ID NO: 150之重鏈序列及SEQ ID NO: 145之輕鏈序列； (f) SEQ ID NO: 156之重鏈序列及SEQ ID NO: 151之輕鏈序列； (g) SEQ ID NO: 157之重鏈序列及SEQ ID NO: 152之輕鏈序列； (h) SEQ ID NO: 158之重鏈序列及SEQ ID NO: 153之輕鏈序列； (i) SEQ ID NO: 159之重鏈序列及SEQ ID NO: 154之輕鏈序列；或 (j) SEQ ID NO: 160之重鏈序列及SEQ ID NO: 155之輕鏈序列。 26.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其為抗ActRII受體抗體，其中該抗體交叉阻斷實施例25之至少一種抗體與ActRIIB結合或被實施例25之至少一種抗體交叉阻斷與ActRIIB結合。 27.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其為抗ActRII受體抗體，其中該抗體具有通過Fc區之突變改變之效應功能。 28.如實施例1至6中任一項之用途之ActRII受體拮抗劑或如實施例7至12中任一項之治療方法，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體係藉由pBW522 (DSM22873)或pBW524 (DSM22874)編碼。 29. 畢馬洛單抗或其抗原結合部分於治療及/或預防尿失禁中之用途。 30.如實施例29之畢馬洛單抗或其抗原結合部分於治療及/或預防尿失禁中之用途，其中該尿失禁為壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁。 31.如實施例30之畢馬洛單抗或其抗原結合部分於治療及/或預防尿失禁中之用途，其中該尿失禁係由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成。 32.如實施例31之畢馬洛單抗或其抗原結合部分於治療及/或預防尿失禁中之用途，其中該虛弱或受損骨盆肌為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌。 33.如實施例32之畢馬洛單抗或其抗原結合部分於治療及/或預防尿失禁中之用途，其中該虛弱或受損骨盆肌係與分娩或更年期之影響有關或由其造成。 34.一種治療及/或預防尿失禁之方法，該方法包括對顯示尿失禁症狀或有發展尿失禁風險之個體投與有效量之畢馬洛單抗。 35.如實施例34之方法，其中該尿失禁為選自由壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁組成之群之失禁。 36.如實施例35之方法，其中該尿失禁係由虛弱或受損骨盆肌導致之骨盆底病症造成或與之相關聯。 37.如實施例36之方法，其中該虛弱或受損骨盆肌為肛提肌、球海綿體肌或尿道外括約肌。 38.如實施例37之方法，其中該尿失禁係與分娩或更年期之影響有關或由其造成。 39.一種治療與選自由壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁組成之群之尿失禁病狀相關聯之骨盆肌異常的方法，該方法包括對患有該骨盆肌功能異常之個體投與有效量之畢馬洛單抗。

Claims (12)

  1. 一種ActRII受體拮抗劑之用途，其用於製造用於治療顯示尿失禁症狀或有發生尿失禁風險之個體之藥劑。
  2. 如請求項1之用途，其中該尿失禁為選自由壓力性尿失禁、急迫性尿失禁及反射性尿失禁組成之群之失禁。
  3. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為ActRII受體結合分子。
  4. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分。
  5. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為與SEQ ID NO: 181之胺基酸19-134 (SEQ ID NO: 182)組成之ActRIIB之抗原決定基結合的抗ActRII抗體或其抗原結合部分。
  6. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分包括包含選自由SEQ ID NO: 1-14組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR1、包含選自由SEQ ID NO: 15-28組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR2、包含選自由SEQ ID NO: 29-42組成之群之胺基酸序列之重鏈可變區CDR3、包含選自由SEQ ID NO: 43-56組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR1、包含選自由SEQ ID NO: 57-70組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR2及包含選自由SEQ ID NO: 71-84組成之群之胺基酸序列之輕鏈可變區CDR3。
  7. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分包括： (a) SEQ ID NO: 1之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 15之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 29之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 43之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 57之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 71之輕鏈可變區CDR3， (b) SEQ ID NO: 2之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 16之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 30之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 44之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 58之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 72之輕鏈可變區CDR3， (c) SEQ ID NO: 3之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 17之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 31之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 45之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 59之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 73之輕鏈可變區CDR3， (d) SEQ ID NO: 4之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 18之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 32之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 46之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 60之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 74之輕鏈可變區CDR3， (e) SEQ ID NO: 5之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 19之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 33之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 47之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 61之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 75之輕鏈可變區CDR3， (f) SEQ ID NO: 6之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 20之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 34之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 48之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 62之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 76之輕鏈可變區CDR3， (g) SEQ ID NO: 7之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 21之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 35之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 49之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 63之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 77之輕鏈可變區CDR3， (h) SEQ ID NO: 8之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 22之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 36之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 50之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 64之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 78之輕鏈可變區CDR3， (i) SEQ ID NO: 9之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 23之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 37之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 51之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 65之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 79之輕鏈可變區CDR3， (j) SEQ ID NO: 10之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 24之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 38之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 52之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 66之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 80之輕鏈可變區CDR3， (k) SEQ ID NO: 11之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 25之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 39之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 53之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 67之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 81之輕鏈可變區CDR3， (l) SEQ ID NO: 12之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 26之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 40之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 54之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 68之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 82之輕鏈可變區CDR3， (m) SEQ ID NO: 13之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 27之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 41之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 55之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 69之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 83之輕鏈可變區CDR3，或 (n) SEQ ID NO: 14之重鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 28之重鏈可變區CDR2、SEQ ID NO: 42之重鏈可變區CDR3、SEQ ID NO: 56之輕鏈可變區CDR1、SEQ ID NO: 70之輕鏈可變區CDR2及SEQ ID NO: 84之輕鏈可變區CDR3。
  8. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體包含與至少一個選自由SEQ ID NO: 146-150及156-160組成之群之序列具有至少95%序列同一性之全長重鏈胺基酸序列及與至少一個選自由SEQ ID NO: 141-145及151-155組成之群之序列具有至少95%序列同一性之全長輕鏈胺基酸序列。
  9. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體或其抗原結合部分包含： (a) SEQ ID NO: 99之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 85之可變輕鏈序列； (b) SEQ ID NO: 100之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 86之可變輕鏈序列； (c) SEQ ID NO: 101之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 87之可變輕鏈序列； (d) SEQ ID NO: 102之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 88之可變輕鏈序列； (e) SEQ ID NO: 103之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 89之可變輕鏈序列； (f) SEQ ID NO: 104之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 90之可變輕鏈序列； (g) SEQ ID NO: 105之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 91之可變輕鏈序列； (h) SEQ ID NO: 106之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 92之可變輕鏈序列； (i) SEQ ID NO: 107之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 93之可變輕鏈序列； (j) SEQ ID NO: 108之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 94之可變輕鏈序列； (k) SEQ ID NO: 109之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 95之可變輕鏈序列； (l) SEQ ID NO: 110之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 96之可變輕鏈序列； (m) SEQ ID NO: 111之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 97之可變輕鏈序列；或 (n) SEQ ID NO: 112之可變重鏈序列及SEQ ID NO: 98之可變輕鏈序列。
  10. 如請求項4之用途，其中該抗體包含： (a) SEQ ID NO: 146之重鏈序列及SEQ ID NO: 141之輕鏈序列； (b) SEQ ID NO: 147之重鏈序列及SEQ ID NO: 142之輕鏈序列； (c) SEQ ID NO: 148之重鏈序列及SEQ ID NO: 143之輕鏈序列； (d) SEQ ID NO: 149之重鏈序列及SEQ ID NO: 144之輕鏈序列； (e) SEQ ID NO: 150之重鏈序列及SEQ ID NO: 145之輕鏈序列； (f) SEQ ID NO: 156之重鏈序列及SEQ ID NO: 151之輕鏈序列； (g) SEQ ID NO: 157之重鏈序列及SEQ ID NO: 152之輕鏈序列； (h) SEQ ID NO: 158之重鏈序列及SEQ ID NO: 153之輕鏈序列； (i) SEQ ID NO: 159之重鏈序列及SEQ ID NO: 154之輕鏈序列；或 (j) SEQ ID NO: 160之重鏈序列及SEQ ID NO: 155之輕鏈序列。
  11. 如請求項1至2中任一項之用途，其中該ActRII受體拮抗劑為抗ActRII受體抗體或其抗原結合部分，且其中該抗體係由pBW522 (DSM 22873)或pBW524 (DSM22874)編碼。
  12. 一種畢馬洛單抗(Bimagrumab)或其抗原結合部分之用途，其用於製造用於治療及/或預防尿失禁之藥劑。
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