CN110785433A - 预防和治疗尿失禁的方法 - Google Patents

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CN110785433A CN201880041948.8A CN201880041948A CN110785433A CN 110785433 A CN110785433 A CN 110785433A CN 201880041948 A CN201880041948 A CN 201880041948A CN 110785433 A CN110785433 A CN 110785433A
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Abstract

本披露内容涉及预防和/或治疗尿失禁的新颖用途和方法，其采用治疗有效量的ActRII受体拮抗剂，例如ActRII受体结合分子，例如ActRII受体抗体，如比马鲁人单抗抗体。

Description

预防和治疗尿失禁的方法
技术领域
本披露内容涉及激活素受体II型(ActRII)拮抗剂的领域，所述激活素受体II型拮抗剂是例如能够拮抗激活素、生长分化因子(GDF)、骨形态发生蛋白(BMP)和肌生成抑制蛋白与人ActRII受体结合的分子，例如针对ActRIIA和/或ActRIIB的拮抗剂抗体，例如比马鲁人单抗(bimagrumab)。具体地，本发明涉及通过向受试者施用治疗有效量的ActRII受体拮抗剂来治疗和预防尿失禁。
背景技术
激活素IIB型受体(ActRIIB)是转化生长因子β(TGF-β)超家族中各个成员的信号传导受体。这个家族的成员包括激活素A、nodal、BMP2、BMP6、BMP7、BMP9、GDF5、GDF8(肌生成抑制蛋白)和GDF11，它们都参与肌肉的负调节(Akpan等人,2009)。
肌生成抑制蛋白(GDF8)通过激活素受体II型(主要通过ActRIIB)发挥作用，并且其提出的信号传导是经过SMAD 2/3途径进行，所述SMAD 2/3途径参与对蛋白质合成以及肌细胞分化和增殖的抑制。肌生成抑制蛋白抑制或遗传切除增加肌肉质量和强度(Lee等人2005；Lee和McPherron 2001；Whittemore等人2003)。
比马鲁人单抗是被开发用于以大于激活素受体IIB型(ActRIIB)的天然配体肌生成抑制蛋白或激活素的亲和力竞争性结合至激活素受体IIB型(ActRIIB)的单克隆抗体(还称为BYM338或MOR08159)的INN(国际非专利名称)。比马鲁人单抗披露于WO 2010/125003中，将所述案如同完全陈述一般通过引用并入本文。WO 2010/1253003中披露的比马鲁人单抗序列列于表1中。
比马鲁人单抗是完全人抗体(经修饰的IgG1，234-235-Ala-Ala，λ2；Fc区中残基的编号是以下文献中的EU索引的编号：Kabat,E.A.等人,Sequences of proteins ofimmunological interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列].第5版-US Department ofHealth and Human Services[美国卫生与公众服务部],NIH公开号91-3242,第662、680、689页(1991))或根据Kabat编号***的232-233-Ala-Ala；比马鲁人单抗结合至ActRIIA和B的配体结合结构域(比马鲁人单抗是ActRII结合分子)，从而防止ActRIIA和B的配体(包括作为骨骼肌生长的天然抑制剂发挥作用的肌生成抑制蛋白和激活素)的结合与随后的信号传导。
比马鲁人单抗与人和小鼠ActRIIB具有交叉反应性，并且对人、食蟹猴、小鼠和大鼠的骨骼肌细胞有效。ActRIIB广泛分布于骨骼肌、脂肪组织和各种器官(包括心脏)中(Rebbapragada等人,Myostatin signals through a transforming growth factorβ-like signaling pathway to block adipogenesis[肌生成抑制蛋白经过转化生长因子β样信号传导途径进行信号传导以阻断脂肪生成].Molec and Cell Biol.[分子和细胞生物学]2003；23:7230-7242)。
骨盆底功能障碍影响患者的骨盆区。骨盆区包括多种解剖学结构，包括通过肌肉和韧带保持就位的膀胱和尿道。在这些组织受损、拉伸或以其他方式变弱时，可能导致尿失禁。尿失禁是定义为丧失膀胱控制的临床综合征。尿失禁通常是因为膀胱的内部压力大于尿道的阻力，导致调节尿道的能力下降而引起的。
例如作为较弱***、分娩或***切除术的结果，排尿节制的下降经常引起不能有效控制膀胱。丧失膀胱控制的严重程度的范围是从每24小时的排尿次数增加、到偶尔漏尿、到具有突发的强烈尿意、到夜尿发作。此外，丧失膀胱控制的症状是(i)突然咳嗽、打喷嚏、笑、举重物和运动后失禁；或(ii)膀胱肌肉壁不随意收缩，引起无法停止的强烈尿意；或(iii)膀胱无法容纳身体所产生的全部尿液，和/或膀胱无法完全排空，引起少量漏尿(患者经历尿液从尿道不断“滴下”)。
若干种类型的尿失禁(UI)是已知的。例如，压力性尿失禁(SUI)可能由于身体突然移动对膀胱造成压力而发生。急迫性尿失禁(例如人们无法足够长时间地憋尿以及时到达厕所)是膀胱肌肉变弱的结果。膀胱可能因为不适或疾病(如癌症、炎症、感染或膀胱结石)而漏尿。其他形式的失禁被称为反射性失禁、心因性失禁和神经源性失禁。
可用于治疗失禁的药物疗法是有限的。可以用于治疗女性压力性尿失禁的治疗描述于以下文献中：Rovner ES,Wein AJ.Treatment options for stress urinaryincontinence[压力性尿失禁的治疗选择].Reviews in Urology[泌尿学评论]2004,6:S29-S47。护理标准是骨盆底物理疗法和手术程序(例如，悬带；膀胱颈悬吊)。已经针对治疗压力性尿失禁症状测试了注射至尿道中的生物材料和其他材料，只有少数成功(Lee PE,Kumg RC,Drutz HP.Periurethral autologous fat injection as a treatment forfemale stress urinary incontinence-a randomized double-blind controlled trial[作为女性压力性尿失禁的治疗的尿道周自体脂肪注射-随机化双盲对照试验].J Urol[泌尿学杂志]2001,165:153-158)。在剂量递增研究中将自体肌肉源干细胞(AMDC)注射至尿道***中显示一些积极结果，但是只有接受最高剂量的AMDC的患者的平均护垫重量具有统计学上显著的降低(Peters KM,Dmochowski RR,Carr LK,Magali R,Kaufman MR,SirlsLT,Herschorn S,Birch C,Kultgen PL,Chancellor MB.Autologous muscle derivedcells for treatment of stress urinary incontinence in women[用于治疗女性压力性尿失禁的自体肌肉源细胞].J Urol[泌尿学杂志]2014,192:469-476.)。已经测试了使用度洛西汀治疗压力性尿失禁，结果各不相同(Norton PA,Zinner NR,Yalcin I,BumpRC.Duloxetine urinary incontinence study group[度洛西汀尿失禁研究组].Duloxetine versus placebo in the treatment of stress urinary incontinence[压力性尿失禁治疗中的度洛西汀与安慰剂].Am J Obstet Gynecol[美国产科与妇科学杂志]2002,187:40-48；Dmochowski RR,Miklos JR,Norton PA等人度洛西汀尿失禁研究组.Duloxetine versus placebo for the treatment of North America women withstress urinary incontinence[用于患有压力性尿失禁的北美女性的治疗的度洛西汀与安慰剂].J Urol[泌尿学杂志]2003,170:1259-1263)。
已经在压力性尿失禁的大鼠模型中研究了睾酮对尿动力学发现和骨盆底肌肉的组织病理形态学的影响。在所治疗大鼠中发现睾酮改良漏尿点压力并显著增加肌纤维的尺寸，表明睾酮对压力性尿失禁的大鼠模型同时具有预防性和治愈性效果(Mammadov R,Sinsir A,Tuglu I,Eyren V,Gurer E,Ozyurt C.The effect of testosteronetreatment on urodynamic findings and histopathomorphology of pelvic floormuscles in female rats with experimentally induced stress urinaryincontinence[在患有实验诱导的压力性尿失禁的雌性大鼠中睾酮治疗对尿动力学发现和骨盆底肌肉的组织病理形态学的影响].Int Urol Nephrol[国际泌尿学与肾病学]2011,43:1003-1008)。由于游离睾酮水平在经治疗组中也较高，关于补充类固醇睾酮在患有压力性尿失禁的女性中的副作用可能存在担忧。
已经广泛研究了雄激素在UI中的效果。这些研究表明，雄激素可能在压力性尿失禁中具有重要作用(Bai SW,Jung Bh,Chung BC等人Relationship between urinaryendogenous steroid metabolites and lower urinary tract function inpostmenopausal women[绝经后女性中尿液内源类固醇代谢物与下泌尿道功能之间的关系].Yonsei Med J[延世医学杂志]2003,44:279-287；Jung BH,Bai SW,Chung BC.Urinaryprofile of endogenous steroids in postmenopausal women with stress urinaryincontinence[患有压力性尿失禁的绝经后女性中内源类固醇的尿液谱].J Reprod Med[生殖医学杂志]2001,46:969-974；Bai SW,Jung Bh,Chung BS等人Relationship betweenurinary profile of the endogenous steroids and postmenopausal women withstress urinary incontinence[内源类固醇的尿液谱与患有压力性尿失禁的绝经后女性之间的关系].Neurourol Urodynam[神经泌尿学与尿动力学]2003,22:198-204)。可显示，由于运动引起的肌肉质量增加可以引起局部雄激素浓度升高(Aizawa K,Iemitsu M,MaedaS,Mesaki N,Ushida T,Akimoto T.Endurance exercise training enhances local sexsteroidogenesis in skeletal muscle[耐力运动锻炼增强骨骼肌中的局部性类固醇生成].Medicine and science in sports and exercise[体育运动中的医学和科学]2011,43(11):2072-2080)。然而，雄激素的作用是复杂的并且可能依赖于合成代谢作用、激素调节、受体表达、一氧化氮调节或者这些因素的组合(Ho MH,Bhatia NN,Bhasin S.Anaboliceffects of androgens on muscles of female pelvic floor and lower urinarytract[雄激素对女性骨盆底和下泌尿道的肌肉的合成代谢作用].Current Opinion inOstetrics and Gynecology[产科学与妇科学新见]2004,16(5):405-409)。合成代谢类固醇可以增加肌肉质量和强度，但是因为已知的潜在风险而限制了其应用。
使用切除卵巢的大鼠模型模拟压力性尿失禁的初步体内研究为SARM用于治疗压力性尿失禁的潜在应用提供了支持(Kadekawa等人,AUA Annual Meeting 2015[2015年AUA年会],路易斯安那州纽奥尔良市PD27-11)。可证实，如与媒介物对照相比，使用选择性雄激素受体调节剂(GSK2849466A)能够将尿道基线压力(UBP)和在打喷嚏期间的尿道反应幅度(AURS)分别增加64％和74％。在组织学上，SARM治疗的动物具有在对照组中观察到的尿道肌肉萎缩的逆转。
在1984年，A.Gruneberger、N.Tommen和D.Foster首次报道了用β2-肾上腺素能克仑特罗成功治疗了女性和儿童的尿失禁。根据这些作者，在大多数患者中，克仑特罗治疗的效果在治疗第一周已经变得明显(Gruneberger A.Treatment of motor urge-incontinence with clenbuterol,and flavoxate hydrohloride[用克仑特罗和盐酸黄酮哌酯治疗运动急迫性失禁].British Journal of Obstetrics and Gynaecology[英国产科学与妇科学杂志]1984；91:275-278)。Valrlev等人概述了其在1988年至1997年期间用克仑特罗治疗尿失禁的经历(B.Zozikov,S.I.Kunchev和Chr.Varlev:Application ofclenbuterol in the treatment of urinary incontinence[克仑特罗在尿失禁治疗中的应用]；International Urology and Nephrology[国际泌尿学与肾病学]33:413-416,2001)。Valrlev等人指出，尽管事实上已经宣布超过90种药物在治疗尿失禁中有效果，但是虽然有大量药物，却并没有报道过100％成功(例如，完全恢复有效控制膀胱的能力(根据患者膀胱状况感知(PPBC))，例如无突发性强烈尿意或者无夜尿发作)。尿失禁(UI)的大多数当前治疗调节神经***，并且包括非选择性抗胆碱能药物(如奥昔布宁和丙胺太林)或抗毒蕈碱(如托特罗定、曲司氯胺、索利那辛、达非那新和非索罗定)。用于UI的肾上腺素能调节剂包括三环抗抑郁药(例如，丙咪嗪和阿米替林)和β3肾上腺素能受体激动剂(例如，米拉贝隆)。其他尿失禁药剂是肌肉松弛药(例如，松弛逼尿肌)，如黄酮哌酯和双环维林。肉毒菌毒素(如肉毒杆菌毒素A(onabotulinumtoxin A))已经用于神经源性尿失禁中。
尽管FDA已批准多种用于治疗尿失禁的药剂，但是仍然需要具有新颖作用机制的新药剂，所述新药剂使尿道压力正常化并稳定尿量，并且将具有对压力性尿失禁的有益并且更显著的积极作用，或者对例如每24小时的失禁发作、每24小时的排尿次数、每次失禁***的体积、每24小时的夜尿发作或患者膀胱状况感知(PPBC)的改良的有益作用。
发明内容
在本披露内容之前，还没有将激活素II型受体(ActRIIA/B)的靶向抑制作为尿失禁的预防法或疗法来考虑或研究过，所述尿失禁是如压力性尿失禁(SUI)、急迫性尿失禁(UUI)、反射性尿失禁(RUI)或神经源性尿失禁(NUI)或上文所提及的病症。如本文所披露，人们已经深入了解，全身施用ActRIIA/B受体拮抗剂(如BYM338/比马鲁人单抗)对如压力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁等尿失禁具有有益效果。使用由***神经压榨(PNC)和***扩张(VD)(它们在雌性大鼠中引起比单独的PNC或VD更严重且持续更久的损伤)组成的双重损伤分娩模拟大鼠模型(Hai-Hong Jiang等人,Dual simulated childbirthinjuries result in slowed recovery of pudendal nerve and urethral function[双重模拟的分娩损伤导致***神经和尿道功能恢复减慢]；Neurourol Urodyn.[神经泌尿学与尿动力学]2009；28(3):229-235.；Song等人,Combination Histamine and SerotoninTreatment After Simulated Childbirth Injury Improves Stress Urinary[组胺与5-羟色胺组合治疗在模拟分娩损伤后改良压力性尿失禁]；Neurourology and Urodynamics[神经泌尿学与尿动力学]35:703-710(2016))，可以证实如比马鲁人单抗等ActRIIA/B受体拮抗剂的有益作用。如本文所披露，考虑到ActRIIA/B受体拮抗剂比马鲁人单抗在双重损伤分娩模拟大鼠模型中对尿失禁具有有益作用，并且因此提供了开发治疗人的压力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁的新方式的基础。
本文披露了用于治疗人的尿失禁、特别是压力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁的ActRII受体拮抗剂。还提供了使用此类ActRII拮抗剂治疗人的尿失禁、特别是压力性尿失禁、急迫性尿失禁或反射性尿失禁的方法。
本文披露了治疗和/或预防尿失禁的方法。所述方法包括向显示尿失禁的症状或患有尿失禁或者具有出现尿失禁症状(如失禁发作、排尿次数增加、夜尿或患者膀胱状况感知(PPBC)降低)的风险的受试者施用治疗有效量的ActRII受体拮抗剂(如例如比马鲁人单抗)。
本文披露的治疗和/或预防尿失禁的方法可以用于治疗以下症状：
i.突然需要排空膀胱(称为急迫性)
ii.必须比平常更多地排空膀胱(称为排尿频率增加)
iii.在要排空膀胱时无法控制(称为急迫性失禁)
本文披露了用于治疗和/或预防尿失禁的ActRII受体拮抗剂。尿失禁可能通过例如由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起或者与所述骨盆底障碍相关。
本文还披露了用于治疗如压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁等尿失禁病症的ActRII受体拮抗剂。
在一个实施例中，用ActRII受体拮抗剂治疗的尿失禁与分娩或绝经的影响相关或者由分娩或绝经的影响引起。
本文还披露了治疗通过例如由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起或者与所述骨盆底障碍相关的尿失禁的方法。所述方法包括向显示尿失禁症状的受试者施用有效量的ActRII受体拮抗剂。
在一些情况下，如本文所述的压力性尿失禁(SUI)、急迫性尿失禁(UUI)、反射性尿失禁(RUI)或神经源性尿失禁(NUI)的治疗是由于骨盆肌肉变弱或受损所致的，其中所述肌肉是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂是ActRII受体结合分子，其可以阻断ActRII相互作用配体(如肌生成抑制蛋白、GDF11和激活素A)接近ActRII。ActRII受体结合分子可以结合至ActRIIA和/或ActRIIB受体。ActRII结合分子的实例包括但不限于结合至ActRIIA和/或ActRIIB受体的抗体，例如抗ActRII受体抗体。优选地，抗ActRII受体抗体是BYM338，也称为比马鲁人单抗。
用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂的另一实例是ActRIIA或ActRIIB受体的细胞外结构域的可溶形式，其可以结合ActRII相互作用配体，如肌生成抑制蛋白、GDF11和激活素A。这种“接受体(receptory-body)”通过竞争ActRII受体的配体来抑制细胞结合的ActRII受体的功能。
本文披露了用于治疗尿失禁或本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII抗体，其结合至ActRIIB中由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成的表位。
本文披露了用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂，其中所述抗ActRII抗体结合至ActRIIB中包含以下或者由以下组成的表位：
(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)；
(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)；
(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)；
(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)；
(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)；
(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)；
(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)；或
(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)。
用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的其他抗ActRIIB抗体包括例如
a)抗ActRIIB抗体，其结合至ActRIIB中包含以下的表位：
(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)；
(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)；
(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)；
(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)；
(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)；
(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)；
(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)；或
(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)；以及
b)针对ActRIIB的拮抗剂抗体，其结合至ActRIIB中包含以下的表位：SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)；
(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)；
(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)；
(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)；
(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)；
(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)；
(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)；或
(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)，其中所述抗体具有约2pM的KD。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂是如下抗体，其以与其结合至ActRIIA相比约10倍或更高亲和力结合至ActRIIB。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是包含以下的抗体：包含选自由SEQ ID NO:1-14组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含选自由SEQ ID NO:15-28组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR2；包含选自由SEQ ID NO:29-42组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR3；包含选自由SEQ ID NO:43-56组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含选自由SEQ ID NO:57-70组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和包含选自由SEQ ID NO:71-84组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是包含以下的抗体：
(a)SEQ ID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3，
(b)SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3，
(c)SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3，
(d)SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3，
(e)SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3，
(f)SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3，
(g)SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3，
(h)SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3，
(i)SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3，
(j)SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3，
(k)SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3，
(l)SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3，
(m)SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3，或
(n)SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是包含与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长重链氨基酸序列的抗体。
在另一实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是包含与选自由SEQ ID NO:141-145和151-155组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长轻链氨基酸序列的抗体。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是包含以下的抗体：
(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列和SEQ ID NO:85的可变轻链序列；
(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列和SEQ ID NO:86的可变轻链序列；
(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列和SEQ ID NO:87的可变轻链序列；
(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列和SEQ ID NO:88的可变轻链序列；
(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列和SEQ ID NO:89的可变轻链序列；
(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列和SEQ ID NO:90的可变轻链序列；
(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列和SEQ ID NO:91的可变轻链序列；
(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列和SEQ ID NO:92的可变轻链序列；
(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列和SEQ ID NO:93的可变轻链序列；
(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列和SEQ ID NO:94的可变轻链序列；
(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列和SEQ ID NO:95的可变轻链序列；
(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列和SEQ ID NO:96的可变轻链序列；
(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列和SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或
(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列和SEQ ID NO:98的可变轻链序列。
在本披露内容的另一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是包含以下的抗体：
(a)SEQ ID NO:146的重链序列和SEQ ID NO:141的轻链序列；
(b)SEQ ID NO:147的重链序列和SEQ ID NO:142的轻链序列；
(c)SEQ ID NO:148的重链序列和SEQ ID NO:143的轻链序列；
(d)SEQ ID NO:149的重链序列和SEQ ID NO:144的轻链序列；
(e)SEQ ID NO:150的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列；
(f)SEQ ID NO:156的重链序列和SEQ ID NO:151的轻链序列；
(g)SEQ ID NO:157的重链序列和SEQ ID NO:152的轻链序列；
(h)SEQ ID NO:158的重链序列和SEQ ID NO:153的轻链序列；
(i)SEQ ID NO:159的重链序列和SEQ ID NO:154的轻链序列；或(j)SEQ ID NO:160的重链序列和SEQ ID NO:155的轻链序列。
在又另一个实施例中，上文所提及的抗ActRII抗体包含(i)与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长重链氨基酸序列，(ii)与选自由SEQ ID NO:141-145和151-155组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长轻链氨基酸序列，或(iii)(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列和SEQ IDNO:85的可变轻链序列；(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列和SEQ ID NO:86的可变轻链序列；(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列和SEQ ID NO:87的可变轻链序列；(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列和SEQ ID NO:88的可变轻链序列；(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列和SEQ ID NO:89的可变轻链序列；(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列和SEQ ID NO:90的可变轻链序列；(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列和SEQ ID NO:91的可变轻链序列；(h)SEQID NO:106的可变重链序列和SEQ ID NO:92的可变轻链序列；(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列和SEQ ID NO:93的可变轻链序列；(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列和SEQ ID NO:94的可变轻链序列；(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列和SEQ ID NO:95的可变轻链序列；(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列和SEQ ID NO:96的可变轻链序列；(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列和SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列和SEQ ID NO:98的可变轻链序列。
还披露了用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂，其是抗ActRII受体抗体，其交叉阻断前文所述的至少一种抗体或者被所述至少一种抗体交叉阻断。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的ActRII受体拮抗剂可以是抗ActRII受体抗体，其通过Fc区的突变而具有改变的效应子功能。
用于治疗尿失禁或用于本文所述方法中的抗体的实例是由pBW522或pBW524(于2009年8月18日分别以保藏号DSM22873和DSM22874保藏于德国布伦瑞克英豪丰大街7B邮编D-38124的DSMZ(DSMZ,Inhoffenstr.7B,D-38124Braunschweig,Germany))编码的抗ActRII抗体。
此外，披露了比马鲁人单抗用于治疗和/或预防尿失禁或其具体形式(如压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁)的用途，其中所述尿失禁通过由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起。骨盆肌肉可以是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***，并且肌肉虚弱或受损通过分娩或绝经的影响引起。
本文所述的工作实例描述到，通过在双重损伤分娩模拟大鼠模型中使用比马鲁人单抗(Hai-Hong Jiang等人,Dual simulated childbirth injuries result in slowedrecovery of pudendal nerve and urethral function[双重模拟的分娩损伤导致***神经和尿道功能恢复减慢]；Neurourol Urodyn.[神经泌尿学与尿动力学]2009；28(3):229-235)，可以测试并证实所考虑的ActRII受体拮抗剂对压力性尿失禁的有益效果。本文所述的工作实例提供了基于ActRII受体拮抗剂开发治疗人的压力性尿失禁或急迫性尿失禁的新方式的基础。
定义
为了可以更容易地理解本披露内容，首先定义某些术语。另外的定义在整个具体实施方式中陈述。
术语“包含(comprising)”意指“包括(including)”，例如，“包含”X的组合物可以仅由X组成，或者可以包括另外的某物，例如X+Y。
关于数值x的术语“约”意指例如x+10％。
下文例示了可能的临床前治疗方案以评价用ActRII结合分子、更优选地针对ActRII的拮抗剂抗体(例如，比马鲁人单抗)治疗的可能效果。
所述治疗是通过使用作为尿失禁的常用实验模型的由***神经压榨(PNC)和***扩张(VD)(它们在雌性大鼠中引起比单独的PNC或VD更严重且持续更久的损伤)组成的双重损伤分娩模拟大鼠模型描述用于治疗尿失禁的ActRII受体抗体的见解和预期效果来例示的(例如，Hai-Hong Jiang等人,Dual simulated childbirth injuries result inslowed recovery of pudendal nerve and urethral function[双重模拟的分娩损伤导致***神经和尿道功能恢复减慢]；Neurourol Urodyn.[神经泌尿学与尿动力学]2009；28(3):229-235；Song等人,Combination Histamine and Serotonin Treatment AfterSimulated Childbirth Injury Improves Stress Urinary[组胺与5-羟色胺组合治疗在模拟分娩损伤后改良压力性尿失禁]；Neurourology and Urodynamics[神经泌尿学与尿动力学]35:703-710(2016))。技术人员了解如何为其他物种、特别是人建立合适的实验或给药方案。
术语“ActRIIA”和“ActRIIB”是指激活素受体。激活素通过受体丝氨酸激酶的异二聚复合物进行信号传导，所述受体丝氨酸激酶包括至少两种I型(I和IB)和两种II型(IIA和IIB，也称为ACVR2A和ACVR2B)受体。这些受体都是跨膜蛋白，由具有富半胱氨酸区的细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸特异性的细胞质结构域构成。I型受体是信号传导所必需的，而II型受体是结合配体以及I型受体的表达/募集所需的。I型和II型受体在配体结合后形成稳定的复合物，导致I型受体被II型受体磷酸化。激活素受体II B(ActRIIB)是肌生成抑制蛋白的受体。激活素受体II A(Act RIIA)也是肌生成抑制蛋白的受体。术语ActRIIB或Act IIB受体是指如SEQ ID NO:181(AAC64515.1，GI：3769443)中所定义的人ActRIIB。研究级多克隆和单克隆抗ActRIIB抗体是本领域中已知的，如由美国明尼苏达州R&D
Figure BDA0002330956200000171
所制造的那些。当然，抗体可以针对来自其他物种的ActRIIB而产生，并且用于治疗那些物种的病理病症。
“ActRII结合分子”意指能够结合至单独的或与其他分子缔合的人ActRII受体ActRIIA和/或ActRIIB的任何分子。结合反应可以通过标准方法(定性测定)来显示，所述标准方法(定性测定)包括例如用于确定对ActRII受体与肌生成抑制蛋白结合的抑制的结合测定、竞争测定或生物测定或者参照使用具有无关特异性但理想地具有相同同种型的抗体(例如，抗CD25抗体)的阴性对照测试的任何种类的结合测定。ActRII受体结合分子的非限制性实例包括设计为和/或易于结合所述受体的小分子(如适体或其他核酸分子)、配体诱饵和如由B细胞或杂交瘤产生的针对所述ActRII受体的抗体以及嵌合的、CDR移植的或人抗体或其任何片段(例如，F(ab')2和Fab片段)以及单链或单结构域抗体。优选地，ActRII受体结合分子拮抗(例如，降低、抑制、减少、延迟)天然配体与ActRII受体的结合。在所披露方法、方案、试剂盒、工艺和用途的一些实施例中，采用ActRIIB受体结合分子。
“信号传导活性”是指通常通过蛋白质-蛋白质相互作用(如生长因子与受体的结合)引起的生物化学因果关系，导致信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分。通常，所述传递涉及引起信号转导的系列反应中一种或多种蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特异性磷酸化。倒数第二个过程典型地包括细胞核事件，导致基因表达发生变化。
如本文所提及的术语“抗体”包括完整抗体和任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或其单链。天然存在的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每条重链由重链可变区(在本文缩写为VH)和重链恒定区构成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3构成。每条轻链由轻链可变区(在本文缩写为VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。VH和VL区可以进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其间穿插有被称为框架区(FR)的较保守的区域。每个VH和VL由从氨基末端排到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫***的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体***的第一组分(Clq)。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗原部分”)是指全长抗体或抗体的一个或多个片段，所述片段保留特异性结合至抗原(例如，ActRIIB的一部分)的能力。已经显示，全长抗体的片段可以执行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合部分”内所涵盖的结合片段的实例包括：Fab片段，一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，一种包含通过铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段，其中每个Fab片段结合至相同抗原；Fd片段，其由VH和CH1结构域组成；Fv片段，其由抗体的单臂的VL和VH结构域组成；dAb片段(Ward等人,1989Nature[自然]341:544-546)，其由VH结构域组成；以及分离的互补决定区(CDR)。
此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH是由单独基因编码，但是它们可以使用重组方法通过合成接头接合，所述合成接头使得能够使它们成为单条蛋白质链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等人,1988Science[科学]242:423-426；和Huston等人,1988Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)。此类单链抗体也旨在涵盖于术语抗体的“抗原结合区”内。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式针对效用来筛选所述片段。
术语“交叉阻断(cross-block、cross-blocked和cross-blocking)”在本文中可互换使用，以意指在标准竞争性结合测定中，抗体或其他结合剂干扰其他抗体或结合剂与ActRIIB(特别是配体结合结构域)的结合的能力。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指具有单一分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示对特定表位的单一结合特异性和亲和力。
如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有框架区和CDR区二者都衍生自人来源的序列的可变区的抗体。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也衍生自此类人序列，例如人种系序列或人种系序列的突变形式，或者抗体含有衍生自人框架序列分析的共有框架序列，例如如以下文献中所述：Knappik等人(2000.J Mol Biol[分子生物学杂志]296,57-86)。本披露内容的人抗体可以包括并非由人序列编码的氨基酸残基(例如，在体外通过随机或位点特异性诱变引入的突变或在体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括衍生自另一种哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。
人单克隆抗体是由包括融合至永生化细胞的从转基因非人动物(例如，转基因小鼠)获得的B细胞的杂交瘤产生，所述转基因非人动物(例如，转基因小鼠)具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。
如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组方式制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如从对于人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物(例如，小鼠)或从所述动物制备的杂交瘤分离的抗体；从经转化以表达人抗体的宿主细胞(例如从转染瘤)分离的抗体；从重组的组合人抗体文库分离的抗体；和通过涉及将人免疫球蛋白基因、序列的全部或一部分剪接到其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有框架区和CDR区衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区。然而，在某些实施例中，可以使此类重组人抗体经历体外诱变(或者，在使用对于人Ig序列转基因的动物时，经历体内体细胞诱变)，并且因此，重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是虽然衍生自人种系VH和VL序列且与其相关，但是可能并非天然存在于体内的人抗体种系库内的序列。
如本文所用，“同种型”是指依据重链恒定区基因提供的抗体类别(例如，IgM、IgE、IgG，如IgG1或IgG2)。
如本文所用，“结合至ActRIIB多肽”的抗体意图是指以约100nM或更低、约10nM或更低或约1nM或更低的KD结合至人ActRIIB多肽的抗体。“与不是ActRIIB的抗原交叉反应的”抗体意图是指以约10x 10-9M或更低、约5x 10-9M或更低或约2x 10-9M或更低的KD结合所述抗原的抗体。“不与特定抗原交叉反应的”抗体意图是指以约1.5x 10-8M或更高的KD或约5-10x 10-8M或约1x 10-7M或更高的KD结合至所述抗原的抗体。在某些实施例中，不与抗原交叉反应的此类抗体在标准结合测定中对这些蛋白质展现基本上检测不到的结合。KD可以使用生物传感器***(如
Figure BDA0002330956200000201
***)或溶液平衡滴定来确定。
如本文所用，术语“拮抗剂抗体”意图是指在肌生成抑制蛋白或其他ActRIIB配体(如激活素或GDF-11)存在下抑制ActRIIB诱导的信号传导活性的抗体；和/或是指在肌生成抑制蛋白或其他ActRIIA配体(如激活素或GDF-11)存在下抑制ActRIIA诱导的信号传导活性的抗体。检测这种拮抗剂抗体的测定的实例包括对肌生成抑制蛋白诱导的信号传导的抑制(例如通过Smad依赖性报道基因测定)、对肌生成抑制蛋白诱导的Smad磷酸化的抑制(P-Smad ELISA)和对肌生成抑制蛋白诱导的骨骼肌细胞分化的抑制(例如通过肌酸激酶测定)。
在一些实施例中，结合至ActRIIB多肽的抗体如在Smad依赖性报道基因测定中所测量，以约10nM或更低、约1nM或更低或约100pM或更低的IC50抑制肌生成抑制蛋白诱导的信号传导。
如本文所用，术语“KD”意在是指解离常数，其获得自Kd与Ka的比率(即Kd/Ka)并且表示为摩尔浓度(M)。可以使用本领域中充分确立的方法确定抗体的KD值。确定抗体的KD的方法是通过使用表面等离子体共振(如
Figure BDA0002330956200000211
的生物传感器***)或溶液平衡滴定(SET)来进行(参见Friguet B等人(1985)J.Immunol Methods[免疫学方法杂志]；77(2):305-319；和Hanel C等人(2005)Anal Biochem[分析生物化学]；339(1):182-184)。
如本文所用，术语“ADCC”或“抗体依赖性细胞毒性”活性是指人B细胞耗竭活性。ADCC活性可以通过本领域中已知的人B细胞耗竭测定来测量。
如本文所用，术语“优化的”意指核苷酸序列已经改变以使用在产生细胞或生物体中优选的密码子编码氨基酸序列，所述产生细胞或生物体通常是真核细胞，例如毕赤酵母属的细胞、木霉属的细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)或人细胞。将优化的核苷酸序列工程化以完全或尽可能多地保留最初由起始核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述起始核苷酸序列也称为“亲本”序列。已经将本文中优化的序列工程化以具有在CHO哺乳动物细胞中优选的密码子，然而本文也设想了这些序列在其他真核细胞中的优化表达。由优化的核苷酸序列编码的氨基酸序列也称为优化的。
如本文所用，术语本发明化合物的“治疗有效量”是指本发明化合物会引发受试者的生物或医学反应(例如，改善症状、减轻病症、减慢或延迟疾病进展或预防疾病等)的量。在一个非限制性实施例中，术语“治疗有效量”是指本发明化合物在被施用受试者时有效地至少部分地减轻、抑制、预防和/或改善与尿失禁相关的病症的量。尿失禁症状/病症是(i)突然咳嗽、打喷嚏、笑、举重物和运动后失禁；或(ii)膀胱肌肉壁不随意收缩，引起无法停止的强烈尿意；或(iii)膀胱无法容纳身体所产生的全部尿液，和/或膀胱无法完全排空，引起少量漏尿(患者经历尿液从尿道不断“滴下”)。
如本文所用，术语尿失禁是指所有程度或敏感度范围的丧失膀胱控制，如每24小时的失禁发作、每24小时的排尿次数、每次失禁***的体积、每24小时的夜尿发作或患者膀胱状况感知的改良。严重程度的范围是从咳嗽或打喷嚏时偶尔漏尿到具有突发性强烈尿意。尿失禁在膀胱的内部压力大于尿道阻力时发生。据报道，尿失禁通常是由于膀胱下垂、骨盆肌肉(包括肛提肌和球海绵体肌)延伸和尿道***虚弱导致调控尿道的能力下降所致的。存在若干种类型的尿失禁：压力性尿失禁(SUI)在身体移动突然对膀胱产生压力时发生；急迫性尿失禁(UUI)在人们由于膀胱肌肉的敏感性而无法足够长时间地憋尿以及时到达厕所时发生，以及在膀胱由于极端刺激而漏尿时发生，所述极端刺激是如医学病症，包括膀胱癌、膀胱炎症、膀胱出口梗阻、膀胱结石或膀胱感染；心因性失禁由于痴呆而发生；神经源性尿失禁(NUI)由于控制泌尿道的神经受损而发生。压力性失禁是较年轻和中年女性的膀胱控制问题的最常见类型。压力性尿失禁在膀胱于体育活动期间漏尿时发生。其可能在咳嗽、做运动或举重物时发生。易感因素是妊娠或绝经。男性可能在良性***增生或***癌手术治疗后发生压力性失禁。每次失禁***的尿量可以从几滴到100mL或更多变化。在一些情况下，其与分娩的影响相关。其还可能在绝经时间前后开始。反射性尿失禁涉及逼尿肌收缩和***松弛的神经控制机制的功能障碍。RUI可能由于中风、帕金森氏病、脑瘤、脊髓损伤或多发性硬化症而发生。RUI患者经历在不知道需要***的情况下定期排尿。
压力性尿失禁可以与急迫性尿失禁(UUI)共存。急迫性尿失禁是称为膀胱过度活动或膀胱过度敏感的复合症的一部分，所述复合症包括伴随或没有急迫性尿失禁的频率和/或急迫性的症状。75％的失禁患者是老年女性。压力性尿失禁(SUI)(即在增加腹部压力的活动(例如，咳嗽、打喷嚏、体育运动)期间不随意漏尿)影响多达35％的成年女性(LuberKM.The definition,prevalence,and risk factors for stress urinary incontinence[压力性尿失禁的定义、患病率和风险因素].Rev Urol[泌尿学评论](增刊)2004；6:S3)。
如本文所用，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”在一个实施例中是指改善疾病或障碍(即，减慢或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括不能被患者辨别的那些。在又另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定化)、在生理上(例如，身体参数的稳定化)或二者调节疾病或障碍。在又另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指预防或延迟疾病或障碍的发作或发展或进展。
如本文所用，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中获益，则这名受试者是“需要”这种治疗的。
具体实施方式
考虑到针对ActRII受体的抗体(例如，比马鲁人单抗)可以降低通过这些受体进行的信号传导，并且导致尿失禁的预防和/或治疗。压力性尿失禁(SUI)在世界范围内的患病率正在增加，为受影响个体的生活质量带来巨大的不良后果。女性由于产伤、绝经和衰老所致的骨盆底肌肉***虚弱可以导致尿道缺少支撑，从而导致压力性失禁，并且神经支配变化和反馈机制可能导致急迫性失禁。治疗压力性失禁的有效药物干预是有限的。
因此，在一个方面中，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的ActRII结合分子(例如，比马鲁人单抗或包含所述抗体的抗原结合部分的功能性蛋白)。优选地，ActRII抗体结合人ActRIIB和ActRIIA蛋白。人ActRIIB的多肽序列列举于SEQ ID NO:181(AAC64515.1，GI：3769443)中。人ActRIIA蛋白具有Genbank登录号AAH67417.1(NP_001607.1，GI：4501897)。在一个实施例中，用于治疗尿失禁的抗体或功能性蛋白来自哺乳动物，具有如人或骆驼科动物等来源。因此，用于治疗尿失禁的抗体可以是嵌合、人或人源化抗体。在一个特定实施例中，用于治疗尿失禁的抗ActRII抗体的特征为，是具有对人靶蛋白ActRIIB具有特异性并结合至ActRIIB和ActRIIA的抗原结合区的人单克隆抗体或其片段。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的抗体是不具有拮抗活性的或具有低拮抗活性的ActRII拮抗剂。在另一个实施例中，抗体或其功能性片段结合靶蛋白ActRII并将肌生成抑制蛋白与ActRII的结合降低至基础水平。在这个实施例的另一方面中，用于本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体或其功能性片段完全防止肌生成抑制蛋白结合至ActRIIB。在另一实施例中，用于本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体或其功能性片段抑制Smad激活。在另一实施例中，用于本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体或其功能性片段抑制激活素受体IIB型介导的肌生成抑制蛋白诱导的对通过Smad依赖性途径进行的骨骼分化的抑制。
可以通过一种或多种测定确定所述结合，所述测定可以用于测量作为通过抗体进行的拮抗或激动的活性。优选地，所述测定测量抗体对ActRIIB的至少一种作用，所述作用包括：对肌生成抑制蛋白与ActRIIB的结合的抑制(通过ELISA)、对肌生成抑制蛋白诱导的信号传导的抑制(例如通过Smad依赖性报道基因测定)、对肌生成抑制蛋白诱导的Smad磷酸化的抑制(P-Smad ELISA)和对肌生成抑制蛋白诱导的骨骼肌细胞分化的抑制(例如通过肌酸激酶测定)。
在一个实施例中，包含特异性结合至ActRIIB的肌生成抑制蛋白结合区(即，配体结合结构域)的抗体的组合物可以用于治疗尿失禁的本发明方法中，或者用于治疗有需要的患者的尿失禁。这个配体结合结构域由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134组成，并且在本文中被指定为SEQ ID NO:182。所述配体结合结构域包含若干个下述表位。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体以约100nM或更低、约10nM或更低、约1nM或更低的KD结合至ActRIIB。优选地，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体以100pM或更低(即，约100pM、约50pM、约10pM、约2pM、约1pM或更低)的亲和力结合至ActRIIB。在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体以介于约1pM与约10pM之间的亲和力结合至ActRIIB。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体与ActRIIA交叉反应，并且所述抗体与其结合至ActRIIA相比以相当的亲和力、或约1、2、3、4或5倍的亲和力、更优选地约10倍、仍更优选地约20、30、40或50倍、仍更优选地约100倍的亲和力结合至ActRIIB。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体以100pM或更高(即，约250pM、约500pM、约1nM、约5nM或更高)的亲和力结合至ActRIIA。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体属于IgG2同种型。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体属于IgG1同种型。在另一实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体属于IgG1同种型并且通过Fc区的突变而具有改变的效应子功能。所述改变的效应子功能可以是降低的ADCC和CDC活性。在一个实施例中，所述改变的效应子功能是被沉默的ADCC和CDC活性。
在另一个相关实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体是不具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性或CDC活性的完全人或人源化IgG1抗体，并且结合至ActRIIB中由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134组成的区域。
在另一个相关实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体是具有降低的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性或CDC活性的完全人或人源化IgG1抗体，并且结合至ActRIIB中由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134组成的区域。
本披露内容还涉及包含人或人源化抗ActRII抗体的组合物用于预防和/或治疗尿失禁的用途。
在某些实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体衍生自特定重链和轻链序列和/或包含特定结构特征，如包含特定氨基酸序列的CDR区。本披露内容提供了分离的ActRIIB抗体、制备此类抗体的方法、包含此类抗体的免疫缀合物和多价或多特异性分子以及含有所述抗体、免疫缀合物或双特异性分子的药物组合物。
在另一个相关实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体是比马鲁人单抗。比马鲁人单抗是被开发用于以大于激活素受体IIB型(ActRII)的天然配体肌生成抑制蛋白或激活素的亲和力竞争性结合至激活素受体IIB型(ActRII)的单克隆人抗体(还称为BYM338或MOR08159)的INN(国际非专利名称)。比马鲁人单抗披露于WO 2010/125003中。WO 2010/1253003中披露的比马鲁人单抗序列列于表1中。
在另一个相关实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体是抗体MOR08213。MOR08213是被开发用于以大于激活素受体IIB型(ActRII)的天然配体肌生成抑制蛋白或激活素的亲和力竞争性结合至激活素受体IIB型(ActRII)的单克隆抗体。MOR08213披露于WO 2010/125003中。WO 2010/1253003中披露的MOR08213序列列示于表2中。
此外，本文所述的本发明治疗方法和用途可以与骨盆底肌肉训练运动组合。
表1
抗体 Ab区 SEQ ID NO:
比马鲁人单抗 HCDR1 SEQ ID NO:9
比马鲁人单抗 HCDR2 SEQ ID NO:23
比马鲁人单抗 HCDR3 SEQ ID NO:37
比马鲁人单抗 LCDR1 SEQ ID NO:51
比马鲁人单抗 LDCR2 SEQ ID NO:65
比马鲁人单抗 LCDR3 SEQ ID NO:79
比马鲁人单抗 VL SEQ ID NO:93
比马鲁人单抗 VH SEQ ID NO:107
比马鲁人单抗 DNA VL SEQ ID NO:121
比马鲁人单抗 DNA VH SEQ ID NO:135
比马鲁人单抗 优化的轻链IgG1 LALA SEQ ID NO:141
比马鲁人单抗 优化的重链IgG1 LALA SEQ ID NO:146
比马鲁人单抗 优化的轻链IgG2 SEQ ID NO:151
比马鲁人单抗 优化的重链IgG2 SEQ ID NO:156
比马鲁人单抗 DNA优化的轻链IgG1 LALA SEQ ID NO:161
比马鲁人单抗 DNA优化的重链IgG1 LALA SEQ ID NO:166
比马鲁人单抗 DNA优化的轻链IgG2 SEQ ID NO:171
比马鲁人单抗 DNA优化的重链IgG2 SEQ ID NO:176
包含比马鲁人单抗的VL和VH编码区的命名为pBW524的质粒已经于2009年8月18日以保藏号DSM22874保藏于德国布伦瑞克英豪丰大街7B邮编D-38124的DSMZ。
表2：
克隆 Ab区 SEQ ID NO:
MOR08213 HCDR1 SEQ ID NO:10
MOR08213 HCDR2 SEQ ID NO:24
MOR08213 HCDR3 SEQ ID NO:38
MOR08213 LCDR1 SEQ ID NO:52
MOR08213 LDCR2 SEQ ID NO:66
MOR08213 LCDR3 SEQ ID NO:80
MOR08213 VL SEQ ID NO:94
MOR08213 VH SEQ ID NO:108
MOR08213 DNA VL SEQ ID NO:122
MOR08213 DNA VH SEQ ID NO:136
MOR08213 优化的轻链IgG1 LALA SEQ ID NO:142
MOR08213 优化的重链IgG1 LALA SEQ ID NO:147
MOR08213 优化的轻链IgG2 SEQ ID NO:152
MOR08213 优化的重链IgG2 SEQ ID NO:157
MOR08213 DNA优化的轻链IgG1 LALA SEQ ID NO:162
MOR08213 DNA优化的重链IgG1 LALA SEQ ID NO:167
MOR08213 DNA优化的轻链IgG2 SEQ ID NO:172
MOR08213 DNA优化的重链IgG2 SEQ ID NO:177
包含MOR08213的VL和VH编码区的命名为pBW522的质粒已经于2009年8月18日以保藏号DSM22873保藏于德国布伦瑞克英豪丰大街7B邮编D-38124的DSMZ。
在替代性实施例中，本披露内容涉及以下方面：
1.一种用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，所述尿失禁包括与由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍相关或者通过所述骨盆底障碍引起的尿失禁。所述骨盆肌肉可以是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***，并且所述肌肉虚弱或受损通过分娩或绝经的影响引起。
2.根据方面1所述使用的ActRII受体拮抗剂，其中要将所述ActRII拮抗剂以约3-10mg/kg的剂量施用有需要的患者。
3.根据方面2所述使用的ActRII受体拮抗剂，其中要以约3或约10mg/kg体重的剂量施用所述肌生成抑制蛋白拮抗剂。
替代性地，要以约3、4、5、6、7、8、9或约10mg/kg体重的剂量施用所述ActRII受体拮抗剂。
4.根据方面1-3所述使用的ActRII受体拮抗剂，其中要静脉内或皮下施用所述ActRII受体拮抗剂。
5.根据方面1-4中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂，其中要每四周施用所述ActRII受体拮抗剂拮抗剂。
替代性地，可以每周皮下施用所述ActRII受体拮抗剂。
替代性地，可以每8周施用所述ActRII受体拮抗剂。
6.根据方面1-5中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂，其中要施用所述ActRII受体拮抗剂至少3个月。
7.根据方面1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂，其中要施用所述ActRII受体拮抗剂长达12个月。优选地，要施用所述ActRII受体拮抗剂拮抗剂至少或长达3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。
8.一种治疗和/或预防尿失禁的方法，所述方法包括将有效量的ActRII受体拮抗剂施用患有尿失禁或者有发生尿失禁的风险的受试者。
9.一种治疗尿失禁的方法，所述方法包括将有效量的ActRII受体拮抗剂施用显示尿失禁的症状/患有尿失禁的受试者。
10.根据方面8或9所述的方法，所述方法包括将所述ActRII受体拮抗剂以约3-10mg/kg的剂量施用有需要的患者。
11.根据方面8或9所述的方法，所述方法包括将所述ActRII受体拮抗剂以约3或约10mg/kg体重的剂量施用有需要的患者。
12.根据方面8或9所述的方法，所述方法包括静脉内或皮下施用所述ActRII受体拮抗剂。
13.根据方面8至10中任一项所述的方法，所述方法包括每四周施用所述ActRII受体拮抗剂。
替代性地，在根据方面13所述的方法中，可以每周皮下施用所述ActRII受体拮抗剂。
14.根据方面8至13中任一项所述的方法，所述方法包括施用所述ActRII受体拮抗剂至少3个月。
15.根据方面14所述的方法，所述方法包括施用所述ActRII受体拮抗剂长达12个月。
16.根据方面1-7中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据方面8-15中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分。
17.根据方面1-7中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据方面8-15中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗ActRII受体抗体是比马鲁人单抗或其抗原结合部分。
18.根据方面1-7中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据方面8-15中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体包含与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长重链氨基酸序列，并且其中所述抗体包含与选自由SEQ IDNO:141-145和151-155组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长轻链氨基酸序列。
19.根据方面1-7中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据方面8-15中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。
20.根据方面1-7中任一项所述使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分或根据方面8-15中任一项所述的治疗方法，其中要每四周以约3-10mg/kg体重的剂量静脉内施用比马鲁人单抗。
根据方面20所述使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分，其中要每周以约3-10mg/kg体重的剂量皮下施用比马鲁人单抗。
21.一种用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的组合物，所述组合物包含150mg/ml的比马鲁人单抗或其抗原结合部分。
22.一种用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的单一剂型，所述单一剂型包含150mg/ml的比马鲁人单抗或其抗原结合部分。在其他实施例中，所述单一剂型(即，小瓶)包含100-200mg/ml的比马鲁人单抗，优选地100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200mg/ml的比马鲁人单抗。
23.一种用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的输液袋，所述输液袋包含来自一个或多个小瓶的用溶液稀释的适当量的比马鲁人单抗。所述溶液优选地是葡萄糖溶液。
在一些其他实施例中，要以约1、2、3、4、5、5、6、7、8、9、10mg/kg体重的剂量施用用于本发明方法中或用于治疗和/或预防尿失禁的ActRII受体拮抗剂或抗ActRII抗体(如比马鲁人单抗)。
本文披露了用于制造治疗和/或预防尿失禁的药物的ActRII受体拮抗剂。
在另一个相关实施例中，用于制造治疗和/或预防尿失禁的药物的ActRII受体拮抗剂是比马鲁人单抗或MOR08213。
在其他实施例中，本文披露的所有方面都能以一个方面与任何其他方面的组合的形式来使用。
本披露内容的各个方面更详细地描述于以下小节中。评价抗体对各种物种的ActRII的结合能力的标准测定是本领域中已知的，包括例如ELISA、蛋白质印迹和RIA。抗体的结合亲和力也可以通过本领域中已知的标准测定来评估，如通过Biacore分析或溶液平衡滴定来评估。如Biacore等基于表面等离子体共振的技术可以确定结合动力学，从而允许计算结合亲和力。
因此，如根据本领域中已知和本文所述的方法所确定，“抑制”这些ActRII功能特性(例如，生物化学、免疫化学、细胞、生理学或其他生物学活性等)中的一种或多种的抗体将被理解为，相对于在所述抗体不存在时(例如，或在存在具有无关特异性的对照抗体时)观察到的特定活性，涉及所述特定活性在统计学上显著的降低。抑制ActRII活性的抗体实现所测量参数的至少10％、至少50％、80％或90％的这种统计学上显著的降低，并且在某些实施例中，本披露内容的抗体可以抑制超过95％、98％或99％的ActRIIB功能活性。
可以使用标准竞争结合测定来确定抗体或其他结合剂能够干扰另一种抗体或结合分子与ActRII的结合的能力或程度，并且因此确定是否可以称其根据本披露内容进行交叉阻断。一种合适的测定涉及使用Biacore技术(例如，通过使用BIAcore仪器(拜尔科公司(Biacore)，瑞典乌普萨拉)，其可以使用表面等离子体共振技术来测量相互作用的程度。用于测量交叉阻断的另一种测定使用基于ELISA的方法。另一测定使用FACS分析，其中测试各种抗体对结合至表达ActRIIB的细胞的竞争。
根据本披露内容，根据本披露内容的交叉阻断抗体或其他结合剂在所述BIAcore交叉阻断测定中结合至ActRIIB，使得所记录的抗体或结合剂的组合(混合物)的结合介于组合中两种抗体或结合剂的最大理论结合(如上文所定义)的80％与0.1％之间(例如，80％至4％)，具体地介于最大理论结合的75％与0.1％之间(例如，75％至4％)，并且更具体地介于70％与0.1％之间(例如，70％至4％)，并且更具体地介于最大理论结合的65％与0.1％之间(例如，65％至4％)。
如果在与阳性对照孔(即，相同的抗ActRIIB抗体和ActRIIB，但是无“测试”交叉阻断抗体)相比时，测试抗体能够引起抗ActRIIB抗体与ActRIIB的结合的介于60％与100％之间、具体地介于70％与100％之间、更具体地介于80％与100％之间的降低，则在ELISA测定中将抗体定义为本披露内容的交叉阻断抗ActRIIB抗体。如本文所引用的交叉阻断抗体的实例是比马鲁人单抗和MOR08213(披露于WO 2010/125003中)。
重组抗体
本披露内容内使用的组合物中所包含的抗体(例如，针对ActRII的拮抗剂抗体，如比马鲁人单抗)包括如本文所述分离并在结构上表征的人重组抗体。本发明组合物中所包含的抗体的VH氨基酸序列显示于SEQ ID NO:99-112中。本发明组合物中所包含的抗体的VL氨基酸序列分别显示于SEQ ID NO:85-98中。本发明组合物中所包含的抗体的优选全长重链氨基酸序列的实例显示于SEQ ID NO:146-150和156-160中。本发明组合物中所包含的抗体的优选全长轻链氨基酸序列的实例分别显示于SEQ ID NO:141-145和151-155中。本发明组合物中所包含的其他抗体包括已经通过氨基酸缺失、***或取代而突变的氨基酸，但在CDR区中仍与上述序列中所描绘的CDR区具有至少60％、70％、80％、90％、95％、97％或99％同一性。在一些实施例中，其包括其中在与上述序列中所描绘的CDR区相比时，在CDR区中不超过1、2、3、4或5个氨基酸已经通过氨基酸缺失、***或取代而突变的突变体氨基酸序列。
另外，可变重链亲本核苷酸序列显示于SEQ ID NO:127-140中。可变轻链亲本核苷酸序列显示于SEQ ID NO:113-126中。针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的全长轻链核苷酸序列显示于SEQ ID NO:161-165和171-175中。针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的全长重链核苷酸序列显示于SEQ ID NO:166-170和176-180中。用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的其他抗体包括已经突变的氨基酸或者由已经突变的核酸编码，但仍与上述序列具有至少60％或更高(即，80％、90％、95％、97％、99％或更高)同一性。在一些实施例中，其包括其中在与上述序列中所描绘的可变区相比时，在可变区中不超过1、2、3、4或5个氨基酸已经通过氨基酸缺失、***或取代而突变的突变体氨基酸序列。
由于这些抗体各自结合相同表位并且是来自相同亲本抗体的后代，可以将VH、VL、全长轻链和全长重链序列(核苷酸序列和氨基酸序列)“混合并匹配”，以产生本披露内容的其他抗ActRIIB结合分子。此类“混合并匹配的”抗体的ActRIIB结合可以使用上述结合测定并以熟知方法(如例如ELISA)中来测试。在将这些链混合并匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列应该用结构上类似的VH序列来替代。同样，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应该用结构上类似的全长重链序列来替代。同样，来自特定VH/VL配对的VL序列应该用结构上类似的VL序列来替代。同样，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应该用结构上类似的全长轻链序列来替代。因此，在一个方面中，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含具有以下的重组抗ActRII抗体或其抗原结合区：包含选自由SEQ ID NO:99-112组成的组的氨基酸序列的重链可变区；和包含选自由SEQ ID NO:85-98组成的组的氨基酸序列的轻链可变区。
在另一个方面中，本披露内容提供了可以用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含：
(i)具有以下的分离的重组抗ActRII抗体：包含选自由SEQ ID NO:99-112组成的组的氨基酸序列的全长重链；和包含选自由SEQ ID NO:85-98组成的组的氨基酸序列的全长轻链，或
(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白。
在另一个方面中，本披露内容提供了可以用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含：
(i)具有以下的分离的重组抗ActRII抗体：由选自由SEQ ID NO:127-140组成的组的已经针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的核苷酸序列编码的全长重链，和由选自由SEQ ID NO:113-126组成的组的已经针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的核苷酸序列编码的全长轻链，或
(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白。
本发明组合物中所包含的抗体的VH CDR1的氨基酸序列的实例显示于SEQ ID NO:1-14中。所述抗体的VH CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:15-28中。所述抗体的VH CDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:29-42中。所述抗体的VL CDR1的氨基酸序列显示于SEQ IDNO:43-56中。所述抗体的VL CDR2的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:57-70中。所述抗体的VLCDR3的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:71-84中。CDR区是使用Kabat***来描述(Kabat,E.A.等人,1991Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列],第5版,U.S.Department of Health and Human Services[美国卫生与公众服务部],NIH公开号91-3242)。确定CDR区的替代性方法使用由Chothia设计的方法(Chothia等人1989,Nature[自然],342:877-883)。Chothia定义是基于结构环区的位置。然而，由于Chothia所用编号***发生了变化(参见例如http://www.biochem.ucl.ac.uk/～martin/abs/GeneralInfo.html和http://www.bioinf.org.uk/abs/)，这个***现在已经较少使用了。存在用于定义CDR的其他***并且在这两个网站也有所提及。
鉴于这些抗体可以各自结合至ActRIIB并且抗原结合特异性主要由CDR1、2和3区提供，可以将VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列“混合并匹配”(即，可以将来自不同抗体的CDR混合并匹配，每种抗体含有VH CDR1、2和3以及VL CDR1、2和3)，产生本披露内容的其他抗ActRII结合分子。此类“混合并匹配的”抗体的ActRIIB结合可以使用上文和实例中所述的结合测定(例如，ELISA)来测试。在将VH CDR序列混合并匹配时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应该用一个或多个结构上类似的CDR序列来替代。同样，在将VLCDR序列混合并匹配时，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应该用一个或多个结构上类似的CDR序列来替代。对于普通技术人员来说容易清楚的是，新颖VH和VL序列可以通过用来自本文中针对单克隆抗体所示的CDR序列的结构上类似的序列取代一个或多个VH和/或VL CDR区序列来产生。
可以用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗ActRII抗体或其抗原结合部分具有：包含选自由SEQ ID NO:1-14组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含选自由SEQ ID NO:15-28组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR2；包含选自由SEQID NO:29-42组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR3；包含选自由SEQ ID NO:43-56组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含选自由SEQ ID NO:57-70组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和包含选自由SEQ ID NO:71-84组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQID NO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQID NO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQID NO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQID NO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQID NO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQID NO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQID NO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQID NO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQID NO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：(a)SEQ ID NO:85的可变重链序列和SEQ ID NO:99的可变轻链序列；(b)SEQ ID NO:86的可变重链序列和SEQ ID NO:100的可变轻链序列；(c)SEQ ID NO:87的可变重链序列和SEQ ID NO:101的可变轻链序列；(d)SEQ ID NO:88的可变重链序列和SEQID NO:102的可变轻链序列；(e)SEQ ID NO:89的可变重链序列和SEQ ID NO:103的可变轻链序列；(f)SEQ ID NO:90的可变重链序列和SEQ ID NO:104的可变轻链序列；(g)SEQ IDNO:91的可变重链序列和SEQ ID NO:105的可变轻链序列；(h)SEQ ID NO:92的可变重链序列和SEQ ID NO:106的可变轻链序列；(i)SEQ ID NO:93的可变重链序列和SEQ ID NO:107的可变轻链序列；(j)SEQ ID NO:94的可变重链序列和SEQ ID NO:108的可变轻链序列；(k)SEQ ID NO:95的可变重链序列和SEQ ID NO:109的可变轻链序列；(l)SEQ ID NO:96的可变重链序列和SEQ ID NO:110的可变轻链序列；(m)SEQ ID NO:97的可变重链序列和SEQ IDNO:111的可变轻链序列；或(n)SEQ ID NO:98的可变重链序列和SEQ ID NO:112的可变轻链序列。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体包含：(a)SEQ ID NO:146的重链序列和SEQ ID NO:141的轻链序列；(b)SEQID NO:147的重链序列和SEQ ID NO:142的轻链序列；(c)SEQ ID NO:148的重链序列和SEQID NO:143的轻链序列；(d)SEQ ID NO:149的重链序列和SEQ ID NO:144的轻链序列；(e)SEQ ID NO:150的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列；(f)SEQ ID NO:156的重链序列和SEQ ID NO:151的轻链序列；(g)SEQ ID NO:157的重链序列和SEQ ID NO:152的轻链序列；(h)SEQ ID NO:158的重链序列和SEQ ID NO:153的轻链序列；(i)SEQ ID NO:159的重链序列和SEQ ID NO:154的轻链序列；或(j)SEQ ID NO:160的重链序列和SEQ ID NO:155的轻链序列。
如本文所用，人抗体包含作为特定种系序列“的产物”或“衍生自”特定种系的重链或轻链可变区或全长重链或轻链，如果所述抗体的可变区或全长链是从使用人种系免疫球蛋白基因的***获得的话。此类***包括用感兴趣的抗原对携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠进行免疫或用感兴趣的抗原筛选展示在噬菌体上的人免疫球蛋白基因文库。作为人种系免疫球蛋白序列“的产物”或“衍生自”人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以通过以下方式来照此鉴定：比较人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列，并且选择序列中与人抗体的序列最接近(即，最高同一性％)的人种系免疫球蛋白序列。作为特定人种系免疫球蛋白序列“的产物”或“衍生自”特定人种系免疫球蛋白序列的人抗体可以由于例如天然存在的体细胞突变或有意引入定点突变而含有与种系序列相比的氨基酸差异。然而，所选人抗体的氨基酸序列典型地与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少90％相同，并且含有在与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠类种系序列)相比时将所述人抗体鉴定为是人抗体的氨基酸残基。在某些情况下，人抗体的氨基酸序列可以与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少80％、90％或至少95％相同，或甚至至少96％、97％、98％或99％相同。典型地，衍生自特定人种系序列的人抗体将展示与由人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列的不超过10个氨基酸差异。在某些情况下，人抗体可以展示与由种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列的不超过5个或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸差异。
在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体是由pBW522或pBW524(于2009年8月18日分别以保藏号DSM22873和DSM22874保藏于德国布伦瑞克英豪丰大街7B邮编D-38124的DSMZ)编码的所述抗体。
同源抗体
在又另一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体具有与本文所述抗体的氨基酸和核苷酸序列同源的全长重链和轻链氨基酸序列；全长重链和轻链核苷酸序列、可变区重链和轻链核苷酸序列或可变区重链和轻链氨基酸序列，并且其中所述抗体保留本披露内容的抗ActRIIB抗体的所需功能特性。
例如，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含含有重链可变区和轻链可变区的分离的重组抗ActRIIB抗体(或包含其抗原结合部分的功能性蛋白)，其中：所述重链可变区包含与选自由SEQ ID NO:99-112组成的组的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选地至少95％、97％或99％)相同的氨基酸序列；所述轻链可变区包含与选自由SEQ ID NO:85-98组成的组的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选地至少95％、97％或99％)相同的氨基酸序列；替代性地，所述组合物包含含有重链可变区和轻链可变区的重组抗ActRIIB抗体(或包含其抗原结合部分的功能性蛋白)，其中：所述重链可变区包含与选自由SEQ ID NO:99-112组成的组的氨基酸序列相比不超过5个氨基酸、或不超过4个氨基酸、或不超过3个氨基酸、或不超过2个或不超过1个氨基酸变化；所述轻链可变区包含与选自由SEQ ID NO:85-98组成的组的氨基酸序列相比不超过5个氨基酸、或不超过4个氨基酸、或不超过3个氨基酸、或不超过2个或不超过1个氨基酸变化，并且所述抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其在体外或在体内抑制肌生成抑制蛋白结合，(ii)降低对通过Smad依赖性途径进行的肌肉分化的抑制，和/或(iii)不诱导血液学变化，特别是红细胞绝对计数(RBC)无变化。在此上下文中，术语“变化”是指***、缺失和/或取代。
在另一实例中，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含含有全长重链和全长轻链的分离的重组抗ActRII抗体(或包含其抗原结合部分的功能性蛋白)，其中：所述全长重链包含与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选地至少95％、97％或99％)相同的氨基酸序列；所述全长轻链包含与选自由SEQ ID NO:141-145和151-155组成的组的氨基酸序列至少80％或至少90％(优选地至少95％、97％或99％)相同的氨基酸序列；替代性地，所述组合物包含含有重链可变区和轻链可变区的重组抗ActRII抗体(或包含其抗原结合部分的功能性蛋白)，其中：所述重链可变区包含与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的氨基酸序列相比不超过5个氨基酸、或不超过4个氨基酸、或不超过3个氨基酸、或不超过2个或不超过1个氨基酸变化；所述轻链可变区包含与选自由SEQ ID NO:141-145和151-155组成的组的氨基酸序列相比不超过5个氨基酸、或不超过4个氨基酸、或不超过3个氨基酸、或不超过2个或不超过1个氨基酸变化，并且所述抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其在体外或在体内抑制肌生成抑制蛋白结合，(ii)降低对通过Smad依赖性途径进行的肌肉分化的抑制，和/或(iii)不诱导血液学变化，特别是RBC无变化。优选地，这种抗体结合至ActRIIB和/或ActRIIA的配体结合结构域。在此上下文中，术语“变化”是指***、缺失和/或取代。
在另一个实例中，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含含有全长重链和全长轻链的分离的重组抗ActRII抗体(或包含其抗原结合部分的功能性蛋白)，其中：所述全长重链由与选自由SEQ ID NO:166-170和176-180组成的组的核苷酸序列至少80％或至少90％(优选地至少95％、97％或99％)相同的核苷酸序列编码；所述全长轻链由与选自由SEQ ID NO:161-165和171-175组成的组的核苷酸序列至少80％或至少90％(优选地至少95％、97％或99％)相同的核苷酸序列编码；替代性地，所述组合物包含含有重链可变区和轻链可变区的重组抗ActRIIB抗体(或包含其抗原结合部分的功能性蛋白)，其中：所述重链可变区包含与选自由SEQ ID NO:166-170和176-180组成的组的氨基酸序列相比不超过5个氨基酸、或不超过4个氨基酸、或不超过3个氨基酸、或不超过2个或不超过1个氨基酸变化；所述轻链可变区包含与选自由SEQ IDNO:161-165和171-175组成的组的氨基酸序列相比不超过5个氨基酸、或不超过4个氨基酸、或不超过3个氨基酸、或不超过2个或不超过1个氨基酸变化，并且所述抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其在体外或在体内抑制肌生成抑制蛋白结合，(ii)降低对通过Smad依赖性途径进行的肌肉分化的抑制，和/或(iii)不诱导血液学变化，特别是RBC无变化。优选地，这种抗体结合至ActRIIB的配体结合结构域。在此上下文中，术语“变化”是指***、缺失和/或取代。
在各个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体可以展现上文所讨论功能特性中的一种或多种、两种或更多种或三种。所述抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。优选地，所述抗体是完全人IgG1抗体。在其他实施例中，VH和/或VL氨基酸序列可以与上述序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同。在其他实施例中，除了在不超过1、2、3、4或5个氨基酸位置的氨基酸取代以外，VH和/或VL氨基酸序列可以相同。具有分别与SEQ ID NO:99-112和SEQ ID NO:85-98的VH和VL区具有高(即，80％或更高)同一性的VH和VL区的抗体可以通过核酸分子SEQ ID NO:127-140和113-126的分别诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)，之后使用本文所述的功能测定测试所编码的改变的抗体所保留的功能(即，上述功能)来获得。
在其他实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体的全长重链和/或全长轻链氨基酸序列可以与上述序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或者可以除了在不超过1、2、3、4或5个氨基酸位置的氨基酸变化以外是相同的。具有分别与SEQ ID NO:146-150和156-160中任一个的全长重链以及SEQ ID NO:141-145和151-155中任一个的全长轻链具有高(即，至少80％或更高)同一性的全长重链和全长轻链的抗体可以通过核酸分子SEQ ID NO:166-170和176-180以及SEQ ID NO:161-165和171-175的分别诱变(例如，定点诱变或PCR介导的诱变)，之后使用本文所述的功能测定测试所编码的改变的抗体所保留的功能(即，上述功能)来获得。
在其他实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体的全长重链和/或全长轻链核苷酸序列可以与上述序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同。
在其他实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体的重链和/或轻链核苷酸序列的可变区可以与上述序列至少80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同，或者可以除了在不超过1、2、3、4或5个氨基酸位置的氨基酸变化以外是相同的。
如本文所用，两个序列之间的同一性百分比是所述序列共有的相同位置数的函数(即，同一性％＝相同位置数/位置总数x 100)，将两个序列的最佳比对需要引入的空位数和每个空位的长度考虑在内。两个序列之间的序列比较和同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成，如下所述。
两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以使用已经并入ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.[生物科学中的计算机应用],4:11-17,1988)的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分为12、空位罚分为4来确定。另外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以使用已经并入GCG软件包(可在http://www.gcg.com获得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol,Biol.[分子生物学杂志]48:444-453,1970)算法，使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵，空位权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6来确定。
具有保守修饰的抗体
在某些实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体具有包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个具有基于本文所述的抗体或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列或其保守修饰的指定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留本披露内容的抗ActRIIB抗体的所需功能特性。因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含由包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区组成的分离的重组抗ActRIIB抗体或包含其抗原结合部分的功能性蛋白，其中：所述重链可变区CDR1氨基酸序列选自由SEQID NO:1-14或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组；所述重链可变区CDR2氨基酸序列选自由SEQ ID NO:15-28或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组；所述重链可变区CDR3氨基酸序列选自由SEQ ID NO:29-42或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组；所述轻链可变区CDR1氨基酸序列选自由SEQ ID NO:43-56或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组；所述轻链可变区CDR2氨基酸序列选自由SEQ ID NO:57-70或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组；所述轻链可变区CDR3氨基酸序列选自由SEQ ID NO:71-84或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组。优选地，所述抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其在体外或在体内抑制肌生成抑制蛋白结合，(ii)降低对通过Smad依赖性途径进行的肌肉分化的抑制，和/或(iii)不诱导血液学变化，特别是RBC无变化。
在各个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体可以展现上文所列功能特性中的一种或两种。此类抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在其他实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体针对在哺乳动物细胞中表达加以优化，具有全长重链序列和全长轻链序列，其中这些序列中的一个或多个具有基于本文所述的抗体或其保守修饰的指定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留本披露内容的抗ActRIIB抗体的所需功能特性。因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的由全长重链和全长轻链组成的分离的单克隆抗ActRII抗体，其中：所述全长重链具有选自由SEQ ID NO:146-150和156-160或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组的氨基酸序列；并且所述全长轻链具有选自由SEQ ID NO:141-145和151-155或其包含1、2、3、4或5个氨基酸变化的变体序列及其保守修饰组成的组的氨基酸序列；并且所述抗体展现以下功能特性中的至少一种：(i)其在体外或在体内抑制肌生成抑制蛋白结合，(ii)降低对通过Smad依赖性途径进行的肌肉分化的抑制，和/或(iii)不诱导血液学变化，特别是RBC无变化。
在各个实施例中，所述抗体可以展现上文所列功能特性中的一种或两种。此类抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
如本文所用，术语“保守序列修饰”意图是指不显著影响或改变含有所述氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。此类保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域中已知的标准技术将修饰引入本披露内容的抗体中，所述标准技术是如定点诱变和PCR介导的诱变。
保守氨基酸取代是氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替代的取代。具有类似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中进行了定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，本披露内容的抗体的CDR区内的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替代，并且可以使用本文所述的功能测定测试改变的抗体所保留的功能。
与所披露组合物中所包含的抗ActRII抗体结合至相同表位的抗体
在另一个实施例中，本披露内容提供了组合物在治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的用途，所述组合物包含与本文所述各种特定抗ActRII抗体结合至相同表位的抗体。实例中所述的能够阻断肌生成抑制蛋白与ActRIIA和ActRIIB结合的所有抗体都以高亲和力结合至ActRIIA和ActRIIB中的表位之一，所述表位包含于SEQ ID NO:181的氨基酸19-134之间。
因此，另外的抗体可以基于其在标准ActRIIB结合测定中与本披露内容的其他抗体交叉竞争(例如，以统计学上显著的方式竞争性抑制本披露内容的其他抗体的结合)的能力加以鉴定。测试抗体抑制本发明组合物中所包含的抗体与人ActRIIB结合的能力证实，所述测试抗体可以与所述抗体竞争结合至人ActRIIB；根据非限制性理论，这种抗体可以与其所竞争的抗体结合至人ActRIIB上的相同或相关(例如，结构上类似或空间上接近)的表位。在某一实施例中，与用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体结合至人ActRIIB和ActRIIA上的相同表位的抗体是人重组抗体。此类人重组抗体可以如实例中所述来制备和分离。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:85中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:99中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合和/或与所述抗体竞争结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:86中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:100中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:87中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:101中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:88中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:102中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:89中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:103中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:90中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:104中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:91中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:105中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:92中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:106中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:93中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:107中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:94中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:108中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:95中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:109中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:96中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:110中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:97中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:111中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与具有列举于SEQ ID NO:98中的可变重链序列和列举于SEQ ID NO:112中的可变轻链序列的抗体所识别的表位结合的抗体。
在更详细的表位定位实验后，已经更明确地定义了本发明组合物中优选抗体的结合区。
因此，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)或由所述氨基酸组成的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)或由所述氨基酸组成的表位结合的抗体。
本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与由这些序列组成的表位或包含这些表位区的组合的表位结合的抗体。
因此，本披露内容还提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物，所述组合物包含与包含SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)或由所述氨基酸组成的表位结合的抗体。
工程化和修饰的抗体
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体还可以使用具有本文所示VH和/或VL序列中的一个或多个的抗体作为起始材料来制备以工程化修饰的抗体，其可以具有从起始抗体改变的特性。可以通过修饰一个或两个可变区(即，VH和/或VL)内(例如一个或多个CDR区内和/或一个或多个框架区内)的一个或多个残基来工程化抗体。另外或替代性地，可以通过修饰一个或多个恒定区内的残基来工程化抗体，例如从而改变抗体的一种或多种效应子功能。
可以进行的一种类型的可变区工程化是CDR移植。抗体主要通过位于六个重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原相互作用。因此，在个别抗体之间，CDR内的氨基酸序列比CDR外部的序列更加多样化。由于CDR序列负责大多数抗体-抗原相互作用，因此可以通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体的特性的重组抗体，所述表达载体包括移植到来自具有不同特性的不同抗体的框架序列上的来自特定天然存在的抗体的CDR序列(参见例如，Riechmann,L.等人,1998Nature[自然]332:323-327；Jones,P.等人,1986Nature[自然]321:522-525；Queen,C.等人,1989Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]86:10029-10033；Winter的美国专利号5,225,539；以及Queen等人的美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
因此，本披露内容的另一个实施例涉及组合物在治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的用途，所述组合物包含含有重链可变区和轻链可变区的单克隆抗ActRII抗体或包含其抗原结合部分的功能性蛋白，所述重链可变区分别包含具有选自由SEQ ID NO:1-14组成的组的氨基酸序列的CDR1序列；具有选自由SEQ ID NO:15-28组成的组的氨基酸序列的CDR2序列；具有选自由SEQ ID NO:29-42组成的组的氨基酸序列的CDR3序列；并且所述轻链可变区分别包含具有选自由SEQ ID NO:43-56组成的组的氨基酸序列的CDR1序列；具有选自由SEQ ID NO:57-70组成的组的氨基酸序列的CDR2序列；和由选自由SEQ ID NO:71-84组成的组的氨基酸序列组成的CDR3序列。因此，此类抗体含有单克隆抗体的VH和VLCDR序列，还可以含有来自这些抗体的不同框架序列。
此类框架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开参考文献获得。例如，人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以发现于“VBase”人种系序列数据库(可在因特网上在www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase获得)中以及以下文献中：Kabat,E.A.等人[同上]；Tomlinson,I.M.等人,1992J.fol.Biol.227:776-798；和Cox,J.P.L.等人,1994Eur.J Immunol.[欧洲免疫学杂志]24:827-836。
用于本披露内容的抗体的框架序列的实例是结构上类似于本披露内容的所选抗体使用的框架序列的那些，例如本披露内容的单克隆抗体使用的共有序列和/或框架序列。可以将VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列移植到与在衍生出框架序列的种系免疫球蛋白基因中发现的框架区具有相同序列的框架区上，或者可以将CDR序列移植到如与种系序列相比含有一个或多个突变的框架区上。例如，已经发现，在某些情况下，使框架区内的残基突变以维持或增强抗体的抗原结合能力是有益的(参见例如，Queen等人的美国专利5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
另一种类型的可变区修饰是使VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基突变，从而改良感兴趣的抗体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)，被称作“亲和力成熟”。可以进行定点诱变或PCR介导的诱变以引入一个或多个突变，并且可以在如本文所述且在实例中提供的体外或体内测定中评价对抗体结合或其他感兴趣的功能特性的影响。可以引入保守修饰(如上文所讨论)。所述突变可以是氨基酸取代、添加或缺失。此外，CDR区内典型地不超过1、2、3、4或5个残基被改变。
因此，在另一个实施例中，本披露内容提供了由重链可变区组成的分离的人抗ActRII单克隆抗体或包含其抗原结合部分的功能性蛋白在治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的用途，所述重链可变区具有：由选自具有SEQ ID NO:1-14的组的氨基酸序列或如与SEQ ID NO:1-14相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列组成的VH CDR1区；具有选自由SEQ ID NO:15-28组成的组的氨基酸序列或如与SEQ ID NO:15-28相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR2区；具有选自由SEQ ID NO:29-42组成的组的氨基酸序列或如与SEQ ID NO:29-42相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR3区；具有选自由SEQ ID NO:43-56组成的组的氨基酸序列或如与SEQ ID NO:43-56相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR1区；具有选自由SEQ ID NO:52-70组成的组的氨基酸序列或如与SEQ ID NO:52-70相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR2区；和具有选自由SEQ ID NO:71-84组成的组的氨基酸序列或如与SEQ ID NO:71-84相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR3区。
骆驼科动物抗体
已经对从包括新大陆成员如美洲驼物种(羊驼(Lama paccos)、大羊驼(Lamaglama)和瘦驼)在内的骆驼和单峰骆驼家族(双峰驼和单峰驼(Camelus dromaderius))的成员获得的抗体蛋白关于尺寸、结构复杂性和对人类受试者的抗原性加以表征。如在自然界中发现的来自这个哺乳动物家族的某些IgG抗体缺少轻链，并且因此在结构上与来自其他动物的抗体的具有两条重链和两条轻链的典型四链四级结构不同(参见WO 94/04678)。
骆驼科动物抗体中作为鉴定为VHH的小单可变结构域的区域可以通过遗传工程化产生对靶标具有高亲和力的小蛋白质来获得，从而得到称为“骆驼科动物纳米抗体”的低分子量的抗体衍生的蛋白质(参见US5,759,808；Stijlemans,B.等人,2004J Biol Chem[生物化学杂志]279:1256-1261；Dumoulin,M.等人,2003Nature[自然]424:783-788；Pleschberger,M.等人2003Bioconjugate Chem[生物缀合化学]14:440-448；Cortez-Retamozo,V.等人2002Int J Cancer[国际癌症杂志]89:456-62；和Lauwereys,M.等人1998EMBO J[欧洲分子生物学学会杂志]17:3512-3520)。骆驼科动物抗体和抗体片段的工程化文库可例如从比利时根特的埃博灵克斯公司(Ablynx)商购获得。与非人来源的其他抗体一样，可以重组地改变骆驼科动物抗体的氨基酸序列以获得更接近地类似于人序列的序列，即纳米抗体可以是“人源化的”。因此，可以进一步降低骆驼科动物抗体对人的天然低抗原性。
骆驼科动物纳米抗体的分子量为人IgG分子的大约十分之一，并且所述蛋白质的物理直径仅为几纳米。小尺寸的一个结果是骆驼科动物纳米抗体结合至对于较大抗体蛋白在功能上不可见的抗原位点的能力，即，骆驼科动物纳米抗体可用作检测使用经典免疫学技术原本隐蔽的抗原的试剂，并且可用作可能的治疗剂。因此，小尺寸的又另一个结果是骆驼科动物纳米抗体可以由于结合至靶蛋白的沟或窄缝中的特异性位点而抑制，因此可以具有与经典抗体相比更接近地类似于经典低分子量药物的功能的能力。
低分子量和紧凑的尺寸还导致骆驼科动物纳米抗体极其热稳定，对极端pH和蛋白水解消化稳定，并且抗原性差。另一个结果是骆驼科动物纳米抗体容易从循环***移动到组织中，甚至穿过血脑屏障并且可以治疗影响神经组织的障碍。纳米抗体可以进一步促进跨越血脑屏障的药物转运(参见US 2004/0161738)。这些特征与对人的低抗原性相结合显示了巨大的治疗潜力。另外，这些分子可以在如大肠杆菌等原核细胞中完全表达，并且表达为与噬菌体的融合蛋白并且是功能性的。
因此，在一个实施例中，本披露内容涉及包含对ActRIIB具有高亲和力的骆驼科动物抗体或纳米抗体的组合物在治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的用途。在本文中的某些实施例中，骆驼科动物抗体或纳米抗体是使用本文针对其他抗体所述的技术在骆驼科动物中天然产生的，即是在用ActRIIB或其肽片段免疫后由骆驼科动物产生的。替代性地，将抗ActRIIB骆驼科动物纳米抗体工程化，即通过例如使用淘选程序以ActRIIB作为靶标，从展示适当诱变的骆驼科动物纳米抗体蛋白的噬菌体文库选择来产生，如本文实例中所述。工程化的纳米抗体可以通过遗传工程化进一步定制，以在受体受试者体内具有45分钟至2周的半衰期。在一个具体实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的骆驼科动物抗体或纳米抗体是通过将本披露内容的人抗体的重链或轻链的CDR序列移植到纳米抗体或单结构域抗体框架序列中来获得的，如例如在WO 94/04678中所述。
非抗体支架
已知的非免疫球蛋白框架或支架包括但不限于Adnectin(纤连蛋白)(化合物治疗剂公司(Compound Therapeutics,Inc.)，马萨诸塞州沃尔瑟姆)、锚蛋白(分子伴侣公司(Molecular Partners AG)，瑞士苏黎士)、结构域抗体(多曼蒂斯有限公司(Domantis,Ltd)(马萨诸塞州坎布里奇)和埃博灵克斯公司(Ablynx nv)(比利时津维纳拉德))、脂质运载蛋白(Anticalin)(皮里斯蛋白实验公司(Pieris Proteolab AG)，德国弗赖辛)、小模块免疫药物(特鲁比昂制药公司(Trubion PharmaceuticalsInc.)，华盛顿州西雅图)、maxybody(艾维迪亚公司(Avidia,Inc.)(加利福尼亚州山景城))、蛋白质A(艾菲波公司(AffibodyAG)，瑞典)和affilin(γ-晶体蛋白或泛素)(锡利蛋白有限责任公司(Scil ProteinsGmbH)，德国哈雷)、蛋白质表位模拟物(波利弗有限公司(Polyphor Ltd)，瑞士艾勒史威尔)。
(i)纤连蛋白支架
纤连蛋白支架优选地基于纤连蛋白III型结构域(例如，纤连蛋白III型的第十个模块(10Fn3结构域))。纤连蛋白III型结构域具有分布在两个β片层之间的7或8条β链，它们自身彼此包裹以形成蛋白质的核心且还含有将β链彼此连接且暴露于溶剂中的环(类似于CDR)。在β片层夹心的每个边缘处存在至少三个这样的环，其中所述边缘是垂直于β链方向的蛋白质的边界(US 6,818,418)。
这些基于纤连蛋白的支架不是免疫球蛋白，但整体折叠与最小功能性抗体片段(重链可变区)的折叠密切相关，所述最小功能性抗体片段包含骆驼和美洲驼IgG中的完整抗原识别单元。由于这种结构，非免疫球蛋白抗体模拟在性质和亲和力上与抗体的抗原结合特性相似的抗原结合特性。这些支架可以用于在体外进行环随机化和改组策略，其类似于体内抗体亲和力成熟的过程。这些基于纤连蛋白的分子可以用作可使用标准克隆技术用本披露内容的CDR替代分子的环区的支架。
(ii)锚蛋白–分子伴侣公司
所述技术基于使用具有锚蛋白衍生的重复模块的蛋白质作为支架，用于承载可用于结合至不同靶标的可变区。锚蛋白重复模块是33个氨基酸的多肽，其由两个反平行的α-螺旋和β-转角组成。可变区的结合主要通过使用核糖体展示来优化。
(iii)Maxybody/Avimer-艾维迪亚公司
Avimer衍生自含有天然A结构域的蛋白质，如LRP-1。这些结构域天然地用于蛋白质-蛋白质相互作用，并且在人类中超过250种蛋白质在结构上基于A结构域。Avimer由经由氨基酸接头连接的许多不同的“A结构域”单体(2-10)组成。可以使用例如以下文献中所述的方法产生可结合至靶抗原的Avimer：US 2004/0175756；US 2005/0053973；US2005/0048512；和US 2006/0008844。
(vi)蛋白质A–艾菲波公司
Figure BDA0002330956200000561
亲和配体是由基于蛋白质A的IgG结合结构域之一的支架的三螺旋束组成的小而简单的蛋白质。蛋白质A是来自细菌金黄色葡萄球菌的表面蛋白。所述支架结构域由58个氨基酸组成，其中13个氨基酸随机化以生成具有大量配体变体的
Figure BDA0002330956200000562
文库(参见例如，US5,831,012)。分子模拟抗体，其分子量为6kDa，而抗体的分子量为150kDa。尽管其尺寸小，但是
Figure BDA0002330956200000564
分子的结合位点与抗体的结合位点相似。
(v)Anticalin–皮里斯公司
Figure BDA0002330956200000565
是由皮里斯蛋白实验公司开发的产品。它们衍生自脂质运载蛋白，脂质运载蛋白是一组广泛分布的小而健壮的蛋白质，其通常参与化学敏感或不溶性化合物的生理运输或储存。几种天然脂质运载蛋白存在于人体组织或体液中。
蛋白质结构让人联想到免疫球蛋白，其中高变环在刚性框架的顶部。然而，与抗体或其重组片段相反，脂质运载蛋白由仅略微大于单免疫球蛋白结构域的具有160至180个氨基酸残基的单条多肽链组成。
构成结合口袋的四个环的组显示出明显的结构可塑性并且容许各种侧链。因此，结合位点可以在专有过程中重新成形，以便以高亲和力和特异性识别不同形状的规定靶分子。
脂质运载蛋白家族的一种蛋白质欧洲粉蝶(Pieris brassicae)的后胆色素结合蛋白(BBP)已被用于通过诱变四个环的组来产生anticalin。描述“anticalin”的专利申请的一个实例是WO 1999/16873。
(vi)Affilin–锡利蛋白公司
AFFILINTM分子是小的非免疫球蛋白，其针对对于蛋白质和小分子的特定亲和力而设计。可以极快地从两个文库中选择新的AFFILINTM分子，其中每个文库是基于不同的人源支架蛋白。
AFFILINTM分子不显示与免疫球蛋白的任何结构同源性。锡利蛋白公司采用两种AFFILINTM支架，其中一种是γ结晶，一种人结构性眼晶状体蛋白质；而另一种是“泛素”超家族蛋白质。两种人支架都非常小，显示出高温稳定性并且几乎耐受pH变化和变性剂。这种高稳定性主要是由于蛋白质的扩大的β片层结构。γ结晶衍生蛋白的实例描述于WO 2001/004144中，并且“泛素样”蛋白的实例描述于WO 2004/106368中。
(vii)蛋白质表位模拟物(PEM)
PEM是中等大小的环状肽样分子(MW 1-2kDa)，其模拟蛋白质的β-发夹二级结构，所述β-发夹二级结构是参与蛋白质-蛋白质相互作用的主要二级结构。
将抗原结合结构域移植到替代性框架或支架中
可以采用多种抗体/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包括至少一个特异性结合至ActRIIB的结合区即可。此类框架或支架包括5种主要独特型的人免疫球蛋白或其片段(如本文其他地方所披露的那些)，并且包括其他动物物种的免疫球蛋白，优选地具有人源化方面。就这点而言，单重链抗体(如在骆驼科动物中鉴定的那些抗体)特别令人感兴趣。本领域技术人员仍在继续发现和开发新颖框架、支架和片段。
在一个方面中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物可以包含使用可将所披露抗体的CDR移植到其上的非免疫球蛋白支架的基于非免疫球蛋白的抗体。可以采用已知的或未来的非免疫球蛋白框架和支架，只要其包含对SEQ ID NO:181的靶蛋白(优选地，如SEQ ID NO:182中所示的其配体结合结构域)具有特异性的结合区即可。此类化合物在本文中称作“包含靶标特异性结合区的多肽”。非免疫球蛋白框架的实例进一步描述于以下章节中(骆驼科动物抗体和非抗体支架)。
框架或Fc工程化
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的工程化的抗体包括已经对VH和/或VL内的框架残基进行修饰例如以改良抗体特性的那些抗体。典型地，进行此类框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”为相应的种系序列。更具体地，已经历体细胞突变的抗体可以含有与衍生出抗体的种系序列不同的框架残基。可以通过将抗体框架序列与衍生出抗体的种系序列进行比较来鉴定此类残基。为了使框架区序列恢复为其种系构型，可以通过例如定点诱变或PCR介导的诱变将体细胞突变“回复突变”为种系序列。此类“回复突变的”抗体也可以包含于本披露内容的组合物中。
另一种类型的框架修饰包括使框架区内或甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基突变以去除T细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。这种方法也称为“去免疫化”并且更详细地描述于US 2003/0153043中。
除了在框架或CDR区内进行的修饰以外或作为所述修饰的替代方案，可以将用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体工程化以包括Fc区内的修饰，典型地以改变所述抗体的一种或多种功能特性，如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本披露内容的组合物中所包含的抗体可以经化学修饰(例如，可以将一个或多个化学部分连接至抗体)或经修饰以改变其糖基化，从而再次改变抗体的一种或多种功能特性。下文更详细地描述了这些实施例中的每一个。Fc区中残基的编号是Kabat的EU索引的编号。
在一个实施例中，修饰CH1的铰链区，使得铰链区中的半胱氨酸残基数改变，例如增加或减少。这种方法进一步描述于US 5,677,425中。改变CH1铰链区中的半胱氨酸残基数，以例如促进轻链和重链的组装或者增加或降低抗体的稳定性。
在另一个实施例中，使抗体的Fc铰链区突变以缩短抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区域中，使得抗体具有相对于天然Fc-铰链结构域SpA结合而言受损的葡萄球菌蛋白质A(SpA)结合。这种方法更详细地描述于US 6,165,745中。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体经修饰以延长其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，可以引入以下突变中的一种或多种：T252L、T254S、T256F，如US6,277,375中所述。替代性地，为了延长生物半衰期，抗体可以在CH1或CL区域内改变以含有取自IgG的Fc区中CH2结构域的两个环的补救受体结合表位，如US 5,869,046和US 6,121,022中所述。
在又其他实施例中，通过用不同的氨基酸残基替代至少一个氨基酸残基来改变Fc区，以改变抗体的效应子功能。例如，可以用不同的氨基酸残基替代一个或多个氨基酸，使得抗体对效应配体具有改变的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。改变亲和力的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。这种方法更详细地描述于Winter等人的US5,624,821和US 5,648,260中。具体地，可以使残基234和235突变。具体地，这些突变可以针对丙氨酸。因此，在一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体在Fc区中具有在氨基酸234和235中的一处或两处的突变。在另一个实施例中，氨基酸234和235中的一个或两个可以被取代为丙氨酸。将氨基酸234和235二者取代为丙氨酸导致ADCC活性降低。
在另一个实施例中，选自所述抗体的氨基酸残基的一个或多个氨基酸可以用不同氨基酸残基替代，使得所述抗体具有改变的C1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。这种方法更详细地描述于US 6,194,551中。
在另一个实施例中，改变所述抗体的一个或多个氨基酸残基，从而改变所述抗体固定补体的能力。这种方法进一步描述于WO 94/29351中。
在又另一个实施例中，通过修饰一个或多个氨基酸来修饰所述抗体的Fc区以增强所述抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加所述抗体对Fcγ受体的亲和力。这种方法进一步描述于WO00/42072中。此外，已经定位了人IgG1上的FcγRl、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点并且已经描述了具有改良的结合的变体(参见Shields,R.L.等人,2001J.Biol.Chen.[生物化学杂志]276:6591-6604)。
在仍另一个实施例中，修饰本披露内容的组合物中所包含的抗体的糖基化。例如，可以制备无糖基化抗体(即，抗体缺少糖基化)。可以改变糖基化以例如增加抗体对抗原的亲和力。此类碳水化合物修饰可以通过以下方式来完成：例如，改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，这导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除所述位点的糖基化。这种无糖基化可以增加抗体对于抗原的亲和力。这种方法更详细地描述于Co等人的美国专利号5,714,350和6,350,861中。
本披露内容所考虑的对用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗体的另一种修饰是所述抗体的至少抗原结合区与血清蛋白(如人血清白蛋白)或其片段的缀合或蛋白质融合，以延长所得分子的半衰期(参见例如，EP 0322094)。
另一种可能性是本披露内容的组合物中所包含的抗体的至少抗原结合区与能够结合至血清蛋白(如人血清白蛋白)的蛋白质的融合，以延长所得分子的半衰期(参见例如，EP 0486525)。
工程化改变的抗体的方法
如上文所讨论，本文所示的具有CDR序列、VH和VL序列或全长重链和轻链序列的抗ActRIIB抗体可以用于通过修饰与其连接的CDR序列、全长重链和/或轻链序列、VH和/或VL序列或一个或多个恒定区来产生新的抗ActRIIB抗体。因此，在本披露内容的另一个方面中，使用用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗ActRIIB抗体的结构特征产生结构上相关的抗ActRIIB抗体，其保留用于本发明方法中的所述抗体的至少一种功能特性(如结合至人ActRIIB)，但也抑制ActRIIB的一种或多种功能特性(例如，抑制Smad激活)。
例如，本披露内容的用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体的一个或多个CDR区或其突变可以与已知的框架区和/或其他CDR重组地组合，以产生本披露内容的组合物中所包含的另外的重组工程化的抗ActRIIB抗体，如上文所讨论。其他类型的修饰包括先前章节中描述的那些修饰。工程化方法的起始材料是本文所提供的VH和/或VL序列中的一个或多个，或者其一个或多个CDR区。为了产生工程化抗体，无需实际制备(即，表达为蛋白质)具有本文所提供的VH和/或VL序列中的一个或多个或者其一个或多个CDR区的抗体。相反，所述一个或多个序列中包含的信息用作起始材料以产生衍生自一个或多个初始序列的一个或多个“第二代”序列，然后将所述一个或多个“第二代”序列制备并表达为蛋白质。
改变的抗体序列还可以通过筛选具有选自由SEQ ID NO:29-42和SEQ ID NO:71-84组成的组的固定CDR3序列或如US 2005/0255552中所述的最小必需结合决定簇以及关于CDR1和CDR2序列的多样性的抗体文库来制备。所述筛选可以根据适合于从抗体文库中筛选抗体的任何筛选技术(如噬菌体展示技术)来进行。
可以使用标准分子生物学技术来制备并表达改变的抗体序列。由一个或多个改变的抗体序列编码的抗体是保留本文所述的抗ActRIIB抗体的一种、一些或所有功能特性的抗体，所述功能特性包括但不限于特异性结合至人ActRIIB和抑制Smad激活。
改变的抗体可以展现上文所讨论的功能特性中的一种或多种、两种或更多种或者三种或更多种。
改变的抗体的功能特性可以使用本领域中可获得的和/或本文中所述的标准测定来评估，所述标准测定是如实例中所述的那些(例如，ELISA)。
可以沿抗ActRIIB抗体编码序列的全部或部分随机地或选择性地引入突变，并且可以针对结合活性和/或如本文所述的其他功能特性筛选所得修饰的抗ActRIIB抗体。本领域中已经描述了突变方法。例如，WO 02/092780描述了使用饱和诱变、合成连接组装或其组合产生和筛选抗体突变的方法。替代性地，WO 03/074679描述了使用计算筛选方法来优化抗体的理化特性的方法。
编码本披露内容的组合物中所包含的抗体的核酸分子
针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的全长轻链核苷酸序列的实例显示于SEQID NO:161-165和171-175中。针对在哺乳动物细胞中表达加以优化的全长重链核苷酸序列的实例显示于SEQ ID NO:166-170和176-180中。
所述核酸可以存在于完整细胞中，存在于细胞裂解物中，或者可以是呈部分纯化或基本上纯的形式的核酸。在通过标准技术从其他细胞组分或其他污染物(例如，其他细胞核酸或蛋白质)纯化时，核酸是“分离的”或“变得基本上纯的”，所述标准技术包括碱/SDS处理、CsCl条带法、柱色谱、琼脂糖凝胶电泳和本领域中熟知的其他技术。参见，F.Ausubel,等人编辑1987Current Protocols in Molecular Biology[分子生物学实验室指南],GreenePublishing and Wiley Interscience[格林出版和韦利跨科学公司],纽约。核酸可以使用标准分子生物学技术来获得。对于杂交瘤(例如，从携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤，如下文进一步描述)表达的抗体，可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码由杂交瘤产生的抗体的轻链和重链的cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库(例如，使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可以从作为文库成员的多种噬菌体克隆中回收编码抗体的核酸。
一旦获得编码VH和VL区段的DNA片段，可以通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如以将可变区基因转化为全长抗体链基因、转化为Fab片段基因或转化为scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段可操作地连接至另一种DNA分子，或可操作地连接至编码另一种蛋白质(如抗体恒定区或柔性接头)的片段。如在此上下文中所用，术语“可操作地连接”意图意指，两个DNA片段以功能性方式接合，例如使得这两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在框内，或使得蛋白质在所需启动子的控制下表达。
可以通过将编码VH的DNA可操作地连接至编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一种DNA分子而将编码VH区的分离的DNA转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域中已知的(参见例如，Kabat,E.A.等人[同上])，并且涵盖这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增来获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。重链恒定区可以选自IgG1同种型。对于Fab片段重链基因，可以将编码VH的DNA可操作地连接至仅编码重链CH1恒定区的另一种DNA分子。
可以通过将编码VL的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一种DNA分子而将编码VL区的分离的DNA转化为全长轻链基因(以及转化为Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域中已知的(参见例如，Kabat,E.A.等人[同上])，并且涵盖这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增来获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
为了产生scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至编码柔性接头(例如，编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3)的另一种片段，使得可以将VH和VL序列表达为连续单链蛋白质(其中VL和VH区通过柔性接头接合)(参见例如，Bird等人,1988Science[科学]242:423-426；Huston等人,1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883；McCafferty等人,1990Nature[自然]348:552-554)。
单克隆抗体的生成
单克隆抗体(mAb)可以通过多种技术来产生，所述技术包括常规单克隆抗体方法，例如Kohler和Milstein(1975Nature[自然]256:495)的标准体细胞杂交技术。可以采用用于产生单克隆抗体的许多技术，例如B淋巴细胞的病毒或致癌转化。
用于制备杂交瘤的动物***是鼠类***。小鼠体内杂交瘤的产生是充分确立的程序。免疫方案和分离免疫脾细胞以供融合的技术是本领域中已知的。融合配偶体(例如，鼠类骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的嵌合或人源化抗体可以基于如上所述制备的鼠类单克隆抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以使用标准分子生物学技术从感兴趣的鼠类杂交瘤获得并进行工程化以含有非鼠类(例如，人)免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用本领域中已知的方法将鼠类可变区连接至人恒定区(参见例如，US 4,816,567)。为了产生人源化抗体，可以使用本领域中已知的方法将鼠类CDR区***人框架中(参见例如，美国专利号5225539；5530101；5585089；5693762和6180370)。
在某一实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体是人单克隆抗体。此类针对ActRIIB的人单克隆抗体可以使用携带人免疫***而不是小鼠***的部分的转基因或转染色体小鼠来生成。这些转基因和转染色体小鼠包括在本文中分别称为HuMAb小鼠和KM小鼠，并且在本文中统称为“人Ig小鼠”的小鼠。
(参见例如，Lonberg等人,1994Nature[自然]368(6474):856-859)。另外参见，美国专利号5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；5,770,429；和5,545,807；以及WO 92/103918；WO 93/12227；WO94/25585；WO 97/113852；WO 98/24884；WO 99/45962；和WO 01/14424。
在另一个实施例中，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的人抗体可以使用在转基因和转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠(如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠)来产生。在本文中称为“KM小鼠”的此类小鼠详细描述于WO 02/43478中。
仍进一步，表达人免疫球蛋白基因的替代性转基因动物***可在本领域中获得并且可以用于产生本披露内容的抗ActRIIB抗体。例如，可以使用称为Xenomouse(安根尼克斯公司(Abgenix,Inc.))的替代性转基因***。此类小鼠描述于例如以下文献中：美国专利号5,939,598；6,075,181；6,114,598；6,150,584和6,162,963。
本披露内容的组合物中所包含的人重组抗体还可以使用用于筛选人免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法来制备。用于分离人抗体的此类噬菌体展示方法在本领域中已确立或者描述于以下实例中。参见例如：美国专利号5,223,409；5,403,484；5,571,698；5,427,908；5,580,717；5,969,108；6,172,197；5,885,793；6,521,404；6,544,731；6,555,313；6,582,915和6,593,081。
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的人单克隆抗体还可以使用SCID小鼠来制备，已经将人免疫细胞在所述SCID小鼠中重建，使得可以在免疫时生成人抗体反应。此类小鼠描述于例如美国专利号5,476,996和5,698,767中。
产生人单克隆抗体的杂交瘤的生成
为了生成产生用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的人单克隆抗体的杂交瘤，可以分离来自经免疫小鼠的脾细胞和/或***细胞并与适当的永生化细胞系(如小鼠骨髓瘤细胞系)融合。可以针对抗原特异性抗体的产生筛选所得杂交瘤。例如，可以用50％PEG将来自经免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬浮液与六分之一数目的P3X63-Ag8.653非分泌小鼠骨髓瘤细胞(ATCC，CRL 1580)融合。将细胞以大约2x145铺板于平底微量滴定板中，之后在含有20％胎克隆血清、18％“653”条件化培养基、5％三甲氧唑辛(origen)(IGEN)、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、5mM HEPES、0:055mM 2-巯基乙醇、50单位/ml青霉素、50mg/ml链霉素、50mg/ml庆大霉素和1X HAT(西格玛公司(Sigma)；HAT是在融合后24小时时添加的)的选择培养基中孵育两周。在大约两周后，可以在用HT替代HAT的培养基中培养细胞。然后可以通过ELISA针对人单克隆IgM和IgG抗体筛选个别孔。一旦发生广泛杂交瘤生长，通常可以在10-14天后观察培养基。可以将分泌抗体的杂交瘤重新铺板，再次筛选，并且如果仍对人IgG呈阳性，则可以通过有限稀释将所述单克隆抗体亚克隆至少两次。然后可以在体外培养稳定的亚克隆以在组织培养基中生成少量抗体以供表征。
为了纯化人单克隆抗体，可以使所选杂交瘤在2升旋转烧瓶中生长用于单克隆抗体纯化。可以将上清液过滤并浓缩，之后用蛋白质A-琼脂糖(法玛西亚公司(Pharmacia))进行亲和色谱。可以通过凝胶电泳和高效液相色谱检查所洗脱的IgG以确保纯度。可以将缓冲溶液更换为PBS，并且可以通过OD280使用1.43消光系数来确定浓度。可以将单克隆抗体等分并储存于-80℃下。
产生单克隆抗体的转染瘤的生成
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗体还可以如本领域中所熟知的使用例如重组DNA技术与基因转染方法的组合在宿主细胞转染瘤中产生(例如，Morrison,S.(1985)Science[科学]229:1202)。
例如，为了表达抗体或其抗体片段，可以通过标准分子生物学技术(例如，使用表达感兴趣的抗体的杂交瘤的PCR扩增或cDNA克隆)获得编码部分或全长轻链和重链的DNA，并且可以将所述DNA***表达载体中，使得将基因可操作地连接至转录和翻译控制序列。在此上下文中，术语“可操作地连接”意图意指，将抗体基因连接至载体中，使得所述载体内的转录和翻译控制序列发挥其调节抗体基因的转录和翻译的预期功能。表达载体和表达控制序列经选择以与所用的表达宿主细胞相容。可以将抗体轻链基因和抗体重链基因***单独载体中，或者更典型地，将两种基因都***同一表达载体中。通过标准方法将抗体基因***表达载体中(例如，连接抗体基因片段和载体上的互补限制位点，或如果不存在限制位点则进行钝端连接)。本文所述抗体的轻链和重链可变区可以通过以下方式用于产生任何抗体同种型的全长抗体基因：将所述轻链和重链可变区***已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，使得VH区段可操作地连接至所述载体内的一个或多个CH区段，并且VL区段可操作地连接至所述载体内的CL区段。另外或替代性地，重组表达载体可以编码促进从宿主细胞分泌抗体链的信号肽。可以将抗体链基因克隆至载体中，使得信号肽框内连接至抗体链基因的氨基末端。所述信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因以外，本披露内容的重组表达载体携带控制抗体链基因在宿主细胞中的表达的调控序列。术语“调控序列”旨在包括启动子、增强子和控制抗体链基因的转录或翻译的其他表达控制元件(例如，多聚腺苷酸化信号)。此类调控序列描述于例如以下文献中：Goeddel(Gene Expression Technology[基因表达技术].Methods in Enzymology[酶学方法]185,Academic Press[学术出版社],加利福尼亚州圣地亚哥1990)。本领域技术人员应了解，表达载体的设计(包括调控序列的选择)可以取决于诸如以下等因素：要转化的宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平等。哺乳动物宿主细胞表达的调控序列包括在哺乳动物细胞中引导高水平蛋白质表达的病毒元件，如衍生自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒的启动子和/或增强子。替代性地，可以使用非病毒调控序列，如泛素启动子或P-球蛋白启动子。仍进一步，调控元件由来自不同来源的序列构成，如SRa启动子***，其含有来自SV40早期启动子的序列以及人T细胞白血病病毒1型的长末端重复序列(Takebe,Y.等人,1988Mol.Cell.Biol.[分子细胞生物学]8:466-472)。
除了抗体链基因和调控序列以外，重组表达载体可以携带另外的序列，如调控载体在宿主细胞中的复制的序列(例如，复制起点)和可选标记基因。可选标记基因促进对已经引入载体的宿主细胞的选择(参见例如，美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，典型地，可选标记基因为已经引入载体的宿主细胞赋予对如G418、潮霉素或甲氨蝶呤等药物的抗性。可选标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(以甲氨蝶呤选择/扩增用于dhfr-宿主细胞中)和neo基因(用于G418选择)。
对于轻链和重链的表达，通过标准技术将编码重链和轻链的一种或多种表达载体转染至宿主细胞中。各种形式的术语“转染”旨在涵盖多种常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。在原核或真核宿主细胞中表达本披露内容的抗体在理论上是可能的。讨论了抗体在真核细胞中(特别是在哺乳动物宿主细胞中)的表达，因为此类真核细胞(并且特别是哺乳动物细胞)比原核细胞更有可能组装并分泌适当折叠且具免疫活性的抗体。已经报道抗体基因的原核表达对于以高产率产生活性抗体是无效的(Boss,M.A.和Wood,C.R.,1985Immunology Today[今日免疫学]6:12-13)。
用于表达本披露内容的组合物中所包含的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括Urlaub和Chasin,1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]77:4216-4220中所述的与DH FR可选标记一起使用的dhfr-CHO细胞，例如如以下文献中所述：R.J.Kaufman和P.A.Sharp,1982Mol.Biol.[分子生物学]159:601-621)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。在一个实施例中，宿主细胞是CHO K1PD细胞。具体地，对于与NSO骨髓瘤细胞一起使用，另一种表达***是显示于WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841中的GS基因表达***。用于表达本披露内容的组合物中所包含的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括FUT8基因表达有缺陷的哺乳动物细胞系，例如如US 6,946,292B2中所述。在将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许在宿主细胞中表达所述抗体或将所述抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中的时间段来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
药物组合物
在另一个方面中，本披露内容提供了用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物(例如，药物组合物)，所述组合物(例如，药物组合物)含有与药学上可接受的载体配制在一起的上述抗体/单克隆抗体或其一个或多个抗原结合部分中的一种或组合。此类组合物可以包括所述抗体或免疫缀合物或双特异性分子中的一种或组合(例如，两种或更多种不同的所述抗体或免疫缀合物或双特异性分子)。例如，用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的药物组合物可以包含结合至靶抗原上的不同表位或者具有互补活性的抗体的组合。
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的药物组合物还能以组合疗法施用，即与其他药剂组合。例如，组合疗法可以包括与至少一种其他肌肉质量/强度增加剂组合的本披露内容的抗ActRII抗体，所述肌肉质量/强度增加剂是例如IGF-1或IGF-1的变体、抗肌生成抑制蛋白抗体、肌生成抑制蛋白前肽、结合ActRIIB但不激活它的肌生成抑制蛋白诱饵蛋白、β2激动剂、胃饥饿素(Ghrelin)激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或卵泡抑素。可以用于组合疗法中的治疗剂的实例更详细地描述于以下关于本披露内容的抗体的用途的章节中。
如本文所用，“药学上可接受的载体”包括在生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。载体应适合于静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)，优选地适合于静脉内注射或输注。根据施用途径，活性化合物(即抗体、免疫缀合物或双特异性分子)可以包被在材料中以保护所述化合物免受酸和可能使所述化合物失活的其他自然条件的作用。
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的药物组合物还可以包括药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁羟茴醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
可以用于本披露内容的药物组合物中的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。适当流动性可以例如通过以下方式来维持：通过使用包衣材料(如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒度，以及通过使用表面活性剂。
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以同时通过灭菌程序(同上)和通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚山梨酸等)来确保阻止微生物的存在。还令人希望的是在组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等。另外，可以通过包括延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射药物形式的延长吸收。
药学上可接受的载体包括无菌水性溶液或分散液、以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。此类介质和试剂用作药物活性物质的用途是本领域中已知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，考虑了所述介质或试剂在本披露内容的药物组合物中的使用。还可以将补充活性化合物并入组合物中。
治疗性组合物典型地必须在制造和储存条件下是无菌且稳定的。可以将组合物配制为溶液、微乳液、脂质体或适合于高药物浓度的其他有序结构。所述载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。适当流动性可以例如通过以下方式来维持：通过使用包衣(如卵磷脂)，在分散液的情况下通过维持所需粒度，以及通过使用表面活性剂。在许多情况下，可以在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)或氯化钠。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸盐和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。
无菌可注射溶液可以通过以下方式来制备：视需要将活性化合物以所需量并入含有上文所列举试剂中的一种或组合的适当溶剂中，之后进行灭菌微孔过滤。通常，分散液是通过以下方式来制备：将活性化合物并入含有基础分散介质和来自上文所列举的那些试剂的其他所需试剂的无菌媒介物中。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其从活性剂加上任何另外的所需试剂的事先经无菌过滤的溶液产生所述活性剂加上任何另外的所需试剂的粉末。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性剂的量将根据所治疗的受试者和特定的施用方式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性剂的量将通常为产生治疗效果的组合物的量。通常，在百分之百的范围内，这个量的范围将是从约0.01％至约99％的活性剂、从约0.1％至约70％或从约1％至约30％的活性剂与药学上可接受的载体组合。
调节剂量方案以提供最佳所需反应(例如，治疗反应)。例如，如由治疗情况的紧急状态所指示的，可以施用单次推注，可以随着时间的推移施用若干个分次剂量，或者可以按比例地减少或增加剂量。特别有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以便于施用和剂量统一。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于要治疗受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有经计算与所需药物载体联合产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本披露内容的剂量单位形式的规格是依据以下因素指定的并且直接取决于以下因素：活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗效果、以及混配这种活性化合物用于治疗个体的敏感性的技术中固有的限制。
对于用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的包含抗体的组合物的施用，抗体剂量的范围是从约0.0001mg/kg至约100mg/kg宿主体重，并且更通常地为约0.01mg/kg至约30mg/kg宿主体重。例如，剂量是在约1-10mg/kg(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/kg)体重范围内的约1mg/kg体重、约3mg/kg体重、约5mg/kg体重或约10mg/kg体重。剂量视需要进行重复并且可以在约每周一次直至约每10周一次的范围内，例如每4至8周一次。
施用是例如静脉内地进行。用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗ActRII抗体(例如，比马鲁人单抗)的剂量方案包括约1mg/kg体重或约3mg/kg体重或约10mg/kg体重，每四周一次通过静脉内施用。
施用是例如皮下地进行。用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的抗ActRII抗体(例如，比马鲁人单抗)的剂量方案包括约1mg/kg体重或约3mg/kg体重或约10mg/kg体重，每周一次通过皮下施用。
在一些方法中，具有不同结合特异性的两种或更多种单克隆抗体包含于本披露内容的组合物中，并且因此被同时施用，在这种情况下，所施用的每种抗体的剂量落在所指示的范围内。抗体通常多次施用。单一剂量之间的间隔可以是例如每周、每个月、每三个月、每六个月或每年。间隔还可以是无规律的，如通过测量患者体内针对靶抗原的抗体的血液水平所指示。在一些方法中，调节剂量以获得约1μg/ml至约1000μg/ml并且在一些方法中约25μg/ml至约300μg/ml的血浆抗体浓度。例如，ActRII抗体可以与抗肌生成抑制蛋白抗体共施用。
剂量和频率根据抗体在患者体内的半衰期而变。通常，人抗体显示最长的半衰期，其次是人源化抗体、嵌合抗体和非人抗体。施用的剂量和频率可以根据治疗是预防性的还是治疗性的而变。在预防性应用中，在长时间段内以相对不频繁的间隔施用相对较低的剂量。一些患者在其余生中继续接受治疗。在治疗性应用中，有时需要以相对较短的间隔施用相对较高的剂量直至疾病进展减少或终止，或者直至患者显示疾病症状的部分或完全改善。此后，可以向患者施用预防性方案。
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的组合物中所包含的抗ActRII抗体的“治疗有效剂量”的施用可以导致疾病症状的严重程度降低、无疾病症状阶段的频率和持续时间增加、或防止因疾病折磨导致损伤或残疾(即控尿功能增强)。疾病症状是(i)突然咳嗽、打喷嚏、笑、举重物和运动后失禁；或(ii)膀胱肌肉壁不随意收缩，引起无法停止的强烈尿意；或(iii)膀胱无法容纳身体所产生的全部尿液，和/或膀胱无法完全排空，引起少量漏尿(患者经历尿液从尿道不断“滴下”)。
活性化合物可以与载体一起制备，所述载体将防止化合物快速释放，如控制释放配制品，包括植入物、透皮贴剂和微胶囊化递送***。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类和聚乳酸。用于制备此类配制品的许多方法是获得专利权的或是本领域技术人员通常已知的。参见例如，Sustainedand Controlled Release Drug Delivery Systems[持续释放和控制释放药物递送***],J.R.Robinson编辑,Marcel Dekker,Inc.[马塞尔德克尔公司],纽约,1978。
治疗性组合物可以用本领域中已知的医疗装置来施用。
本披露内容的用途和方法
用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的所披露组合物和所披露抗体具有治疗性效用，因为其对尿失禁的治疗或对患有尿失禁的患者的病症的改善或对与尿失禁相关的症状的减少有影响。
如本文所用的术语“受试者”或“个体”意图是指人，尤其是指患有尿失禁的患者。
因此，本披露内容还涉及治疗方法，其中本文所披露组合物或所披露ActRII受体拮抗剂(例如，ActRII结合分子，更优选地针对ActRII的抗体，例如比马鲁人单抗或BYM338)抑制(即拮抗)ActRII的功能，从而导致各种类型的尿失禁的改良。本披露内容提供了预防和/或治疗尿失禁的方法，所述方法包括将治疗有效量的ActRII受体拮抗剂(例如，优选地ActRIIB结合分子，更优选地针对ActRIIB的拮抗剂抗体，例如比马鲁人单抗或BYM338)或所披露组合物施用患者。
可以用于所披露治疗方法中的ActRII受体拮抗剂(例如，ActRII结合分子，优选地针对ActRIIB的拮抗剂抗体，例如比马鲁人单抗或BYM338)的实例是上文详细披露或描述的那些。在某些实施例中，ActRII抗体(例如，比马鲁人单抗或BYM338)包含于用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的本文所披露的组合物中。
本披露内容还涉及ActRII受体拮抗剂(例如，ActRIIA或ActRIIB受体结合分子，优选地针对ActRII的拮抗剂抗体，例如BYM338)在制造用于治疗如上文所述各种形式的尿失禁的药物中的用途。
ActRII结合分子(优选地针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比马鲁人单抗或BYM338)可以作为唯一活性剂或者与其他药物结合(例如，作为其他药物的佐剂或与其他药物组合)来施用，所述其他药物是例如IGF-1或IGF-1的变体、抗肌生成抑制蛋白抗体、肌生成抑制蛋白前肽、结合ActRIIB但不激活它的肌生成抑制蛋白诱饵蛋白、β2激动剂、胃饥饿素激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或卵泡抑素。
根据前文，本披露内容在又另一方面中提供了如上文所定义的方法或用途，其包括共施用(例如，并行或依序)治疗有效量的ActRII受体拮抗剂(优选地ActRII结合分子，更优选地针对ActRII的拮抗剂抗体，例如比马鲁人单抗或BYM338)和至少一种第二原料药，所述第二原料药是IGF-1或IGF-1的变体、抗肌生成抑制蛋白抗体、肌生成抑制蛋白前肽、结合ActRII但是不激活它的肌生成抑制蛋白诱饵蛋白、β2激动剂、胃饥饿素激动剂、SARM、GH激动剂/模拟物或卵泡抑素。
试剂盒
本发明还涵盖用于治疗尿失禁的本发明方法中或用于治疗尿失禁的试剂盒，所述试剂盒可以包含ActRII受体拮抗剂，例如ActRII受体结合分子(例如，ActRII受体抗体或其抗原结合片段，例如比马鲁人单抗或BYM338)或ActRII受体(即，ActRIIB受体)结合分子(例如，抗ActRIIB抗体或其抗原结合片段)(例如，呈液体或冻干形式)；或包含所述ActRII受体拮抗剂的药物组合物(上文所述)。另外，此类试剂盒可以包含用于施用ActRII拮抗剂的工具(例如，注射器和小瓶、预充式注射器、预充式笔)和使用说明书。这些试剂盒可以含有另外的治疗剂(上文所述)，例如用于与所封闭的肌生成抑制蛋白拮抗剂(例如，BYM338)组合递送。
短语“用于施用的工具”用于指示用于将药物全身施用患者的任何可用仪器，包括但不限于预充式注射器、小瓶和注射器、注射笔、自动注射器、静脉内滴注袋、泵等。使用此类物品，患者可以自己施用药物(即，代表自己施用药物)或者医生可以施用药物。
所述试剂盒的每种组分通常被封闭在单独容器内，并且所有各种容器都在单一包装内，并附有使用说明书。
已经考虑到，ActRII拮抗剂可以是治疗尿失禁的理想候选物，其具有多种治疗优势，如以下中的一种或多种：
i.每24小时的失禁发作次数减少；
ii.每24小时的排尿次数减少；
iii.每次排尿/失禁发作***的体积减小；
iv.急迫性失禁发作的次数减少；
v.每24小时的夜尿发作的次数减少；
vi.伴随急迫性失禁的不随意漏尿或在不随意漏尿后立即急迫性失禁的次数减少；
vii.患者膀胱状况感知(PPBC)改良
PPBC量表是让患者在6分式量表上对其目前膀胱状况的印象评级的全面评估工具，所述6分式量表为1：‘完全没有给我造成任何问题’；2：‘给我造成一些极小的问题’；3：‘给我造成一些小问题’；4：‘给我造成(一些)中等问题’；5：‘给我造成严重问题’和6：‘给我造成许多严重问题’。可以将改良定义为PPBC得分从基线到基线后至少1分改良，并且可以将重大改良定义为从基线到基线后至少2分改良。
技术人员了解如何设计尿失禁的非手术治疗的对照试验。Shamliyan和同事公开了对尿失禁的非手术治疗的96个随机化对照试验(RCT)的***性回顾(TatyanaA.Shamliyan,MD,MS；Robert L.Kane,MD；Jean Wyman,PhD；和Timothy J.Wilt:SystematicReview:Randomized,Controlled Trials of Nonsurgical Treatments for UrinaryIncontinence in Women[***性回顾：女性尿失禁的非手术治疗的随机化对照试验]；2008年3月18日Annals of Internal Medicine[内科医学年鉴]第148卷,第6期,第459至474页)。例如，可以设计与根据以下临床试验实施的研究类似的使用抗体比马鲁人单抗的临床试验：ClinicalTrials.gov Identifier NCT00689104:Study to Test the Efficacy andSafety of the Beta-3Agonist Mirabegron(YM178)in Patients With Symptoms ofOveractive Bladder[ClinicalTrials.gov标识符NCT00689104：测试β-3激动剂米拉贝隆(YM178)在患有膀胱过度活动的症状的患者体内的功效和安全性的研究]。
序列
表3：序列表
Figure BDA0002330956200000761
Figure BDA0002330956200000781
Figure BDA0002330956200000791
Figure BDA0002330956200000811
Figure BDA0002330956200000851
Figure BDA0002330956200000871
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Figure BDA0002330956200000901
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Figure BDA0002330956200001021
Figure BDA0002330956200001031
Figure BDA0002330956200001041
Figure BDA0002330956200001051
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Figure BDA0002330956200001071
Figure BDA0002330956200001111
Figure BDA0002330956200001121
Figure BDA0002330956200001131
Figure BDA0002330956200001141
Figure BDA0002330956200001151
Figure BDA0002330956200001161
Figure BDA0002330956200001171
所披露方法、治疗、方案、用途和试剂盒的实施例采用ActRII受体拮抗剂，例如ActRIIB结合分子。在其他实施例中，ActRIIB结合分子是针对ActRIIB的拮抗性抗体。
在所披露方法、治疗、方案、用途和试剂盒的一些实施例中，所述抗体是比马鲁人单抗。
本披露内容的一个或多个实施例的细节陈述于上文所附的说明书中。与本文所述的方法和材料相似或等效的任何方法和材料都可以用于本披露内容的实践或测试中。根据说明书并且根据权利要求书，本披露内容的其他特征、目标和优势将是清楚的。在本说明书和随附权利要求书中，单数形式包括复数指代物，除非上下文另外明确地说明。除非另外定义，否则本文所用的全部技术和科学术语具有与本披露内容所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的意义。以下实例意欲更充分地说明本披露内容并且不意欲以任何方式限制本披露内容的范围。
实例
一般方法
WO 2010/125003中已经披露了ActRIIB抗体、其表征和与其相关的方法，如(i)功能测定，(ii)报道基因测定(RGA)，(iii)HEK293T/17细胞系的培养，(iv)肌生成抑制蛋白诱导的荧光素酶报道基因测定，(v)特异性ELISA，(vi)ActRIIB/Fc-肌生成抑制蛋白结合相互作用ELISA，(vii)对表达hActRIIB和表达hActRIIA的细胞的FACS滴定，(viii)与原代人骨骼肌细胞的结合，(ix)使用表面等离子体共振(Biacore)的对所选抗人ActRIIB Fab的亲和力确定，(x)CK测定，(xi)动物模型，(xii)治疗方案，(xiii)统计学分析，(xiiii)淘选，(xv)抗体鉴定和表征，(xvi)衍生自第一亲和力成熟的抗体的优化，(xvii)亲和力成熟的Fab的IgG2转化(第1次成熟)，(xviiii)第二次亲和力成熟，(xx)IgG2转化和IgG2的表征(第2次成熟)，(xxi)在体内鼠类研究中对抗ActRIIB抗体的表征，(xxii)通过SET确认亲和力，(xxiii)交叉阻断研究和(xxiv)表位定位细节和技术。
为了研究ActRII受体拮抗剂比马鲁人单抗是否可以用于研发压力性尿失禁的治疗，使用双重损伤分娩模拟大鼠模型。所述双重损伤分娩模拟大鼠模型已经披露于以下文献中：Hai-Hong Jiang等人,Dual simulated childbirth injuries result in slowedrecovery of pudendal nerve and urethral function[双重模拟的分娩损伤导致***神经和尿道功能恢复减慢]；Neurourol Urodyn.[神经泌尿学与尿动力学]2009；28(3):229–235；和Song等人,Combination Histamine and Serotonin Treatment After SimulatedChildbirth Injury Improves Stress Urinary[组胺与5-羟色胺组合治疗在模拟分娩损伤后改良压力性尿失禁]；Neurourology and Urodynamics[神经泌尿学与尿动力学]35:703-710(2016)。Jiang等人,2009的标题为Animal preparations,Childbirth simulationinjury models and Leak point pressure(LPP)[动物制备、分娩模拟损伤模型和漏尿点压力(LPP)]的Material and Method[材料和方法]章节以及同时的神经肌肉生理学记录如同完全陈述一般通过引用并入本文。
使用由Hai-Hong Jiang等人,2009和Song等人,2016描述的在雌性处女SpragueDawley大鼠(200-250g)中通过***神经压榨和***扩张诱导的大鼠压力性尿失禁模型来研究比马鲁人单抗对压力性尿失禁的作用。在雌性处女Sprague Dawley大鼠(200-250g)中通过***神经压榨和***扩张(PNC+VD)诱导的上述实验性大鼠压力性尿失禁模型中，基于漏尿点压力(LPP)和尿道外***(EUS)肌电描记术(EMG)，以治疗性干预模式施用的比马鲁人单抗可以对压力性尿失禁具有有益作用。
为了研究比马鲁人单抗对压力性尿失禁的作用，根据Hai-Hong Jiang等人,2009中所述的方案，在手术后一周治疗大鼠。
表4治疗方案
Figure BDA0002330956200001191
Figure BDA0002330956200001201
1在雌性处女Sprague Dawley大鼠(200-250g)中通过***神经压榨和***扩张(PNC+VD)诱导的大鼠压力性尿失禁模型；n＝8-10(总计32-40)。
功能读数：
为了检测在干预后关于LPP和/或EUSEMG与PNC+VD媒介物组相比任何潜在的统计学上显著的改良并探索对于压力性尿失禁用比马鲁人单抗与克仑特罗干预之间的差异，评估以下功能读数：
1.对使用所记录的***神经运动分支电位(PNMBP)的漏尿点压力(LPP)测试的反应，以评估神经损伤和神经再生，和/或
2.尿道外***(EUS)肌电描记术(EMG)的记录以评估肌肉损伤和神经移植术，同时有可能记录同时具有尿道外***肌电图(EUS EMG)和***神经运动分支电位(PNMBP)记录的漏尿点压力(LPP)测试；
3.体重监测，后肢骨骼肌重量(例如，四头肌、腓肠肌复合体、胫骨前肌)。
在压力性尿失禁中使用安慰剂和化合物(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羟乙基)-5-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸盐形式的临床试验。
可以设计使用化合物(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羟乙基)-5-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮的乙酸盐形式的临床试验，如以下出版物中所述：Yasuda等人,A Double-Blind Clinical Trial of a/32-adrenergic Agonist in StressIncontinence[a/32-肾上腺素能激动剂在压力性失禁中的双盲临床试验],IntUrogynecol J[国际妇科泌尿学杂志](1993)4:146-151。
患者选择：
选择抱怨压力性失禁的患者以及患有压力性失禁和急迫性失禁二者的患者。此外，选择PPBC量表为4分和5分的患者。根据国际尿控协会的规则进行尿动力学研究。
尿动力学研究：
为了评估治疗效果，进行以下研究/收集数据：
·尿道压力分布图(例如，根据Brown和Wickham,JEA.The urethral pressureprofile[尿道压力分布图].Br J Urol[英国泌尿学杂志]1969；41:211-217)
·护垫称重测试(Joergense L.等人,One-hour pad weighing test forobjective assessment of female urinary incontinence[用于客观评估女性尿失禁的一小时护垫称重测试].Obstet Gynecol[产科与妇科学]1987；69:39-42)
·每日失禁频率/护垫更换频率：指导患者在治疗之前、期间和结束时在量表上记录失禁发作。
·每24小时的失禁发作次数；
·每24小时的排尿次数；
·每次排尿/失禁发作***的体积；
·急迫性失禁发作的次数；
·每24小时的夜尿发作次数；
·伴随急迫性失禁的不随意漏尿或在不随意漏尿后立即急迫性失禁的次数；
·PPBC量表评估
研究终点：
主要终点：从研究开始时的基线到研究结束时(例如，12周)的每日压力性尿失禁发作的频率变化。
次要终点：
1.每24小时的失禁发作的次数变化；
2.每24小时的排尿次数变化；
3.每次排尿/失禁发作***的体积变化；
4.急迫性失禁发作的次数变化；
5.每24小时的夜尿发作的次数变化；
6.伴随急迫性失禁的不随意漏尿或在不随意漏尿后立即急迫性失禁的次数变化；
通过比较初始状态与治疗后状态来评估基于主要和次要终点结果的失禁严重程度的改良。
其他优选实施例：
1.一种用于在治疗显示尿失禁症状或者有发生尿失禁的风险的受试者中使用的ActRII受体拮抗剂。
2.根据实施例1所述的用于在治疗尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，其中所述尿失禁通过由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起或者与所述骨盆底障碍相关。
3.根据实施例1或2所述的用于在治疗尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，其中所述尿失禁是选自由以下组成的组的失禁：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁。
4.根据实施例3所述的用于在治疗尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，其中所述尿失禁是压力性尿失禁。
5.根据实施例2所述的用于在治疗尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，其中所述变弱或受损的骨盆肌肉是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***。
6.根据实施例1-5所述的用于在治疗尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，其中所述尿失禁与分娩或绝经的影响相关或者由分娩或绝经的影响引起。
7.一种治疗尿失禁的方法，所述方法包括将有效量的ActRII受体拮抗剂施用显示尿失禁症状或者有发生尿失禁的风险的受试者。
8.根据实施例7所述的方法，其中所述尿失禁通过由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起或者与所述骨盆底障碍相关。
9.根据实施例8所述的方法，其中所述尿失禁是选自由以下组成的组的失禁：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁。
10.根据实施例9所述的方法，其中所述变弱或受损的骨盆肌肉是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***。
11.根据实施例10所述的方法，其中所述尿失禁与分娩或绝经的影响相关或者由分娩或绝经的影响引起。
12.一种治疗与尿失禁病症相关的骨盆肌肉异常的方法，所述尿失禁病症选自由以下组成的组：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁，所述方法包括将有效量的ActRII受体拮抗剂施用患有所述骨盆肌肉功能异常的受试者。
13.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是ActRII受体结合分子。
14.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂结合至ActRIIA和/或ActRIIB受体。
15.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分。
16.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述抗ActRII受体抗体是比马鲁人单抗或其抗原结合部分。
17.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是结合至ActRIIB中由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成的表位的抗ActRII抗体或其抗原结合部分。
18.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗ActRII抗体或其抗原结合部分结合至ActRIIB中包含以下或由以下组成的表位：
(a)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)；
(b)SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)；
(c)SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)；
(d)SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)；
(e)SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)；
(f)SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)；
(g)SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)；或
(h)SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)。
19.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分选自由以下组成的组：
a)抗ActRIIB抗体或其抗原结合部分，所述抗ActRIIB抗体或其抗原结合部分结合至ActRIIB中包含以下的表位：
i.SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)；
ii.SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)；
iii.SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)；
iv.SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)；
v.SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)；
vi.SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)；
vii.SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)；或
viii.SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)；以及
b)针对ActRIIB的拮抗剂抗体，所述拮抗剂抗体结合至ActRIIB中包含以下的表位：
i.SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN–SEQ ID NO:188)；
ii.SEQ ID NO:181的氨基酸76-84(GCWLDDFNC–SEQ ID NO:186)；
iii.SEQ ID NO:181的氨基酸75-85(KGCWLDDFNCY–SEQ ID NO:190)；
iv.SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR–SEQ ID NO:189)；
v.SEQ ID NO:181的氨基酸49-63(CEGEQDKRLHCYASW–SEQ ID NO:187)；
vi.SEQ ID NO:181的氨基酸29-41(CIYYNANWELERT–SEQ ID NO:191)；
vii.SEQ ID NO:181的氨基酸100-110(YFCCCEGNFCN–SEQ ID NO:192)；或
viii.SEQ ID NO:181的氨基酸78-83(WLDDFN)和SEQ ID NO:181的氨基酸52-56(EQDKR)，其中所述抗体具有约2pM的KD。
20.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分与其结合至人ActRIIA相比以10倍或更高亲和力结合至人ActRIIB。
21.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分包含：包含选自由SEQ ID NO:1-14组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含选自由SEQ ID NO:15-28组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR2；包含选自由SEQ ID NO:29-42组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR3；包含选自由SEQ ID NO:43-56组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含选自由SEQ IDNO:57-70组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和包含选自由SEQ ID NO:71-84组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
22.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)SEQ ID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3，
(b)SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3，
(c)SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3，
(d)SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3，
(e)SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3，
(f)SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3，
(g)SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3，
(h)SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3，
(i)SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3，
(j)SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3，
(k)SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3，
(l)SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3，
(m)SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3，或
(n)SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ IDNO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。
23.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体包含与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长重链氨基酸序列和与选自由SEQ ID NO:141-145和151-155组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长轻链氨基酸序列。
24.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列和SEQ ID NO:85的可变轻链序列；
(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列和SEQ ID NO:86的可变轻链序列；
(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列和SEQ ID NO:87的可变轻链序列；
(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列和SEQ ID NO:88的可变轻链序列；
(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列和SEQ ID NO:89的可变轻链序列；
(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列和SEQ ID NO:90的可变轻链序列；
(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列和SEQ ID NO:91的可变轻链序列；
(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列和SEQ ID NO:92的可变轻链序列；
(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列和SEQ ID NO:93的可变轻链序列；
(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列和SEQ ID NO:94的可变轻链序列；
(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列和SEQ ID NO:95的可变轻链序列；
(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列和SEQ ID NO:96的可变轻链序列；
(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列和SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或
(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列和SEQ ID NO:98的可变轻链序列。
25.根据实施例15-24中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或所述的方法，其中所述抗体包含：
(a)SEQ ID NO:146的重链序列和SEQ ID NO:141的轻链序列；
(b)SEQ ID NO:147的重链序列和SEQ ID NO:142的轻链序列；
(c)SEQ ID NO:148的重链序列和SEQ ID NO:143的轻链序列；
(d)SEQ ID NO:149的重链序列和SEQ ID NO:144的轻链序列；
(e)SEQ ID NO:150的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列；
(f)SEQ ID NO:156的重链序列和SEQ ID NO:151的轻链序列；
(g)SEQ ID NO:157的重链序列和SEQ ID NO:152的轻链序列；
(h)SEQ ID NO:158的重链序列和SEQ ID NO:153的轻链序列；
(i)SEQ ID NO:159的重链序列和SEQ ID NO:154的轻链序列；或(j)SEQ ID NO:160的重链序列和SEQ ID NO:155的轻链序列。
26.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体，其中所述抗体交叉阻断至少一种根据实施例25所述的抗体结合至ActRIIB，或者被至少一种根据实施例25所述的抗体交叉阻断结合至ActRIIB。
27.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体，其中所述抗体通过Fc区的突变而具有改变的效应子功能。
28.根据实施例1-6中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据实施例7-12中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。
29.一种用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分。
30.根据实施例29所述的用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分，其中所述尿失禁是压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁。
31.根据实施例30所述的用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分，其中所述尿失禁通过由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起。
32.根据实施例31所述的用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分，其中所述变弱或受损的骨盆肌肉是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***。
33.根据实施例32所述的用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分，其中所述变弱或受损的骨盆肌肉与分娩或绝经的影响相关或者由分娩或绝经的影响引起。
34.一种治疗和/或预防尿失禁的方法，所述方法包括将有效量的比马鲁人单抗施用显示尿失禁症状或者有发生尿失禁的风险的受试者。
35.根据实施例34所述的方法，其中所述尿失禁是选自由以下组成的组的失禁：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁。
36.根据实施例35所述的方法，其中所述尿失禁通过由于骨盆肌肉变弱或受损所致的骨盆底障碍引起或者与所述骨盆底障碍相关。
37.根据实施例36所述的方法，其中所述变弱或受损的骨盆肌肉是肛提肌、球海绵体肌或尿道外***。
38.根据实施例37所述的方法，其中所述尿失禁与分娩或绝经的影响相关或者由分娩或绝经的影响引起。
39.一种治疗与尿失禁病症相关的骨盆肌肉异常的方法，所述尿失禁病症选自由以下组成的组：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁，所述方法包括将有效量的比马鲁人单抗施用患有所述骨盆肌肉功能异常的受试者。
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Figure IDA0002330956230000031
Figure IDA0002330956230000041
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Figure IDA0002330956230000241
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Figure IDA0002330956230000311
Figure IDA0002330956230000331
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Figure IDA0002330956230000511
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Figure IDA0002330956230000601
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Figure IDA0002330956230000701
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Claims (15)

1.一种用于在治疗显示尿失禁症状或者有发生尿失禁的风险的受试者中使用的ActRII受体拮抗剂。
2.根据权利要求1所述的用于在治疗尿失禁中使用的ActRII受体拮抗剂，其中所述尿失禁是选自由以下组成的组的失禁：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁。
3.一种治疗尿失禁的方法，所述方法包括将有效量的ActRII受体拮抗剂施用显示尿失禁症状或者有发生尿失禁的风险的受试者。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述尿失禁是选自由以下组成的组的失禁：压力性尿失禁、急迫性尿失禁和反射性尿失禁。
5.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是ActRII受体结合分子。
6.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分。
7.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是结合至ActRIIB中由SEQ ID NO:181的氨基酸19-134(SEQ ID NO:182)组成的表位的抗ActRII抗体或其抗原结合部分。
8.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分包含：包含选自由SEQ ID NO:1-14组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR1；包含选自由SEQ ID NO:15-28组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR2；包含选自由SEQ ID NO:29-42组成的组的氨基酸序列的重链可变区CDR3；包含选自由SEQ ID NO:43-56组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；包含选自由SEQ IDNO:57-70组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和包含选自由SEQ ID NO:71-84组成的组的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
9.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)SEQ ID NO:1的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:15的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:29的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:43的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:71的轻链可变区CDR3，
(b)SEQ ID NO:2的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:16的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:30的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:44的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:72的轻链可变区CDR3，
(c)SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:17的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:31的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:59的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:73的轻链可变区CDR3，
(d)SEQ ID NO:4的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:18的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:32的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:60的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:74的轻链可变区CDR3，
(e)SEQ ID NO:5的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:19的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:33的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:61的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:75的轻链可变区CDR3，
(f)SEQ ID NO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:20的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:34的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:48的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:62的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:76的轻链可变区CDR3，
(g)SEQ ID NO:7的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:21的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:35的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:49的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:63的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:77的轻链可变区CDR3，
(h)SEQ ID NO:8的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:22的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:36的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:50的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:64的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:78的轻链可变区CDR3，
(i)SEQ ID NO:9的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:23的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:37的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:51的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:65的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:79的轻链可变区CDR3，
(j)SEQ ID NO:10的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:38的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:52的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:66的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:80的轻链可变区CDR3，
(k)SEQ ID NO:11的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:39的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:53的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:67的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR3，
(l)SEQ ID NO:12的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:26的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:54的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:68的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3，
(m)SEQ ID NO:13的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:41的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:55的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:83的轻链可变区CDR3，或
(n)SEQ ID NO:14的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:42的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:56的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:84的轻链可变区CDR3。
10.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体包含与选自由SEQ ID NO:146-150和156-160组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长重链氨基酸序列和与选自由SEQ ID NO:141-145和151-155组成的组的至少一个序列具有至少95％序列同一性的全长轻链氨基酸序列。
11.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)SEQ ID NO:99的可变重链序列和SEQ ID NO:85的可变轻链序列；
(b)SEQ ID NO:100的可变重链序列和SEQ ID NO:86的可变轻链序列；
(c)SEQ ID NO:101的可变重链序列和SEQ ID NO:87的可变轻链序列；
(d)SEQ ID NO:102的可变重链序列和SEQ ID NO:88的可变轻链序列；
(e)SEQ ID NO:103的可变重链序列和SEQ ID NO:89的可变轻链序列；
(f)SEQ ID NO:104的可变重链序列和SEQ ID NO:90的可变轻链序列；
(g)SEQ ID NO:105的可变重链序列和SEQ ID NO:91的可变轻链序列；
(h)SEQ ID NO:106的可变重链序列和SEQ ID NO:92的可变轻链序列；
(i)SEQ ID NO:107的可变重链序列和SEQ ID NO:93的可变轻链序列；
(j)SEQ ID NO:108的可变重链序列和SEQ ID NO:94的可变轻链序列；
(k)SEQ ID NO:109的可变重链序列和SEQ ID NO:95的可变轻链序列；
(l)SEQ ID NO:110的可变重链序列和SEQ ID NO:96的可变轻链序列；
(m)SEQ ID NO:111的可变重链序列和SEQ ID NO:97的可变轻链序列；或
(n)SEQ ID NO:112的可变重链序列和SEQ ID NO:98的可变轻链序列。
12.根据权利要求6-11中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或所述的方法，其中所述抗体包含：
(a)SEQ ID NO:146的重链序列和SEQ ID NO:141的轻链序列；
(b)SEQ ID NO:147的重链序列和SEQ ID NO:142的轻链序列；
(c)SEQ ID NO:148的重链序列和SEQ ID NO:143的轻链序列；
(d)SEQ ID NO:149的重链序列和SEQ ID NO:144的轻链序列；
(e)SEQ ID NO:150的重链序列和SEQ ID NO:145的轻链序列；
(f)SEQ ID NO:156的重链序列和SEQ ID NO:151的轻链序列；
(g)SEQ ID NO:157的重链序列和SEQ ID NO:152的轻链序列；
(h)SEQ ID NO:158的重链序列和SEQ ID NO:153的轻链序列；
(i)SEQ ID NO:159的重链序列和SEQ ID NO:154的轻链序列；或
(j)SEQ ID NO:160的重链序列和SEQ ID NO:155的轻链序列。
13.根据权利要求1-2中任一项所述使用的ActRII受体拮抗剂或根据权利要求3-4中任一项所述的治疗方法，其中所述ActRII受体拮抗剂是抗ActRII受体抗体或其抗原结合部分，并且其中所述抗体由pBW522(DSM22873)或pBW524(DSM22874)编码。
14.一种用于在治疗和/或预防尿失禁中使用的比马鲁人单抗或其抗原结合部分。
15.一种治疗和/或预防尿失禁的方法，所述方法包括将有效量的比马鲁人单抗施用显示尿失禁症状或者有发生尿失禁的风险的受试者。
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