200835791 十、申請專利範圍（1): 1·根據本發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由牛樟木料65%、馬鈴薯20%、 米糠10%、蔗糖3.5%、磷隨二鉀1%及硫瞧0.5%所組成。 1根據發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由牛樟木料65%、豆漿30% (該黄豆漿瓶和賴1:7 -1:14比率硏製而成）蔗糖3.5%、磷隨二鉀1%及硫賺 0.5%所組成。 3·根據本發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液3〇%(該 營養液係以酵母抽出物0.5-3%)、蔗糖3·5%、磷隨二鉀1%及硫麵0.5%所組成。 4·根據本發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液3〇% (該 營養液舰麥雜出物0.5-3% )、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵〇·5%所組成。
5·根據本發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液3〇% (該 營養液係以酵母抽出物0.5-2%、麥芽抽出物0.5-2%)、蔗糖15%、磷酸氫二鉀1% 及硫麟0.5%所組成。 6·根據本發明說明的第i項範圍之方法，該培養基係由樟木科（本棒、油棒、 芳樟、陰陽樟）木料65%、馬鈴薯20%、米糠10%、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫 麵〇·5%所組成。 7·根據本發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由滕香杉芝生長及金針菇繁育 的杉科（如香杉等）梢65%、馬鈴薯20%、雜10%、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1% 及硫難0.5%所組成。 8·根據本發明說明的第1項範圍之方法，該培養基係由適於各類香菇、木耳等薛菌繁 育的雜;^ (如相思樹、油桐樹等）65%、馬鈴薯20%、 10%、蔗糖3.5%、磷 驗二鉀1%及硫麵0.5%所組成。 9.根據本發明的第}項範圍之方法，該培養基係將馬鈴薯、米糠和水萃出之液，再加 入蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵〇·5%所組成營養液。 1〇· _本發明說明的第1項範圍之方法，牛樟等_4木料需經含水量、濕度管控，先 ^水【以烘箱控温65 C乾燥8小時，駐水ΐ〇·3-14·5% (Ave.12.5%)】，乾燥後賺 g乾淨水【浸泡3-8天（5天爲最佳），使吸附含水量約35%】，再浸塗經調配並已 均質攪碎之讎狀牛讎菌賺面。該培養總將馬鈴薯20%、雜腦以水萃出, ^加入蔗糖15%、讎氫二鉀1%及硫_ 〇·5%和甲素〇.5%-2%所組成之稠 200835791 十、申請專利範園（2): 11.根據本發明說明的第1項範圍之方法，牛樟等樟科木料含水量、濕係以自 然風乾之木料去浸泡乾淨水3-8天（5天爲最佳）使吸附含水量約35%，苒塗浸經 調配並已均質攪碎之翻狀牛_菌纖面。該培養麵將馬鈴^ 2〇% 以水萃出，再加入蔗糖3.5%、磷醜二鉀1%及硫纖α5%和甲基纖維素〇偏％ 所組成之稠狀營養液。 ΐ2·本發明，月的第1項範圍之方法，各a#科（香杉）、雜梅等，需經含水量、 濕度管控’先祛水【以烘箱控温65 C乾燥8小時，去水ι〇·3%44·5%( Ave.12.5%)】， 後再獅S調配之培養基面，該培養^^將馬鈴薯2〇%、ι〇%以 水萃出，再加入蔗糖3·5%、磷酸氫二鉀1%及硫酸鎂〇·5%所組成之營養液（浸泡3_8 天，5天爲最佳使吸附含水量約35%)，再經以攝氏121度殺菌60分鐘，備供^
13. 根據本發明說明的第1項範圍之方法，各種杉科（香杉）、雜木料等，含水量、濕 度管控，廳自然賺之賴去浸讎調配之培養基纖面，該培養麵將馬鈴薯 20%、雜10%以水萃出，再加入蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫_ 〇·5%所組成 之營養液（浸泡3-8天，5天爲最佳使吸附含水量約35%)，再經以攝氏121度殺菌 60分鐘，備供菌。 14. 根據本發明的第1項範圍之方法，其中菌絲體培養之溫度爲28°0 15. 根據本發明說明的第1項範圍之方法，其瓶中空氣溼度爲80% 〇 16. 根據本發明說明的第1項範圍之方法，其中該子實體栽培時之日間溫度爲24^261 ’ 而夜間溫度爲1042°C 〇 17. 根據本發明說明的第1項範圍之方法，其中其日夜間溫差爲15°C 〇 18·讎本發明說明的第1項範圍之方法，成長光線以七分陰三分陽爲佳，其菌絲體培 養進行4045天，而子實體培養須90420天（含以上）。 19.根據本發明說明的第1項範圍之方法，其於菌絲體培養階段前，可先處以一牛_ 種大量培養，步驟包含(1)自液態氮保存活化的菌種取一小塊洋雜絲塊，移入新鮮 培養基中顏溫下培養；_菌種生長至旺盛時，將該菌纖種至殺過菌之五穀雜 糧（例如；米粒、麥粒或麥片）之中續於怪溫下培養；（3府該五榖雜糧中之菌種長 猶絲時，取出雜菌絲塊，然後置入經調配之_狀營養液中，再以均質讎碎 成樟芝種菌液，即可提供大量接賴源。 200835791 十、申請專利範圍（3): 20·據本發明說明的第1項範圍之方法，菌絲體培養階段，包含一牛樟菌種大量培養步 驟，包含以液體培養發酵以大量培養菌種，斜面試管培養後，將大量繁殖好的菌種 接種之5 _瞒養液中，於24»261下以160 rpm旋剛隱培養約u天，續以90rpm 往返振盪培養約14天，又MM 20升液體發酵液中^^養天；其中發酵培養 液之配方爲0·1-1%酵母抽出物、0.1-1%麥芽抽獅、1-3%蔗糖、0·05»0·5%磷酸氫二鉀、 0.01-0.1% 硫酸鎂。 21.根據本發明說明的第1項範圍之方法’牛樟等形狀；不限於塊狀、條狀或 片狀 > 其尺寸大小 '長度 '鎌可視容嚣大小麵高决定。 22·根據本發明說明的第1項範圍之方法，容罷材質；不限於玻璃或塑膠。 23.根據本發明說明的第1項範圍之方法，容器形式;不限於瓶、罐或桶。 24·根據本發明說明的第1項範圍之方法，瓶塞材質；不限於橡膠或砂膠❶ 25·讎本發明說明的第1項範圍之方法，碳源;不酿蔗糖、黑糖、麵糖或果糖。 26·根據本發明說明的第1項範圍之方法，氮源；不限於米糠、黄豆、酵母抽出物、麥 芽抽出物。 27. 根據本發明說明的第1項範圍之方法，元素；不酸氯υ酸二氨· 28. 根據本申請專利範圍第20條之方法，其液體發酵培養，培養液之配方爲α5%酵母 抽出物、0.5%麥芽抽出物、2%蔗糖、0·1%ϋ酸氫二鉀及0 Q5%硫〇 29·根據本申請專利範圍第10條、第11條、第19條之方法，其粘稠狀營養液係將馬 鈴薯20%、雜10%以水萃出，再加入蔗糖3·5%、磷酸氫二鉀1%及硫_ 〇·5%和 甲基纖維素1%所組成之稠狀營養液。本粘稠狀營養液氮源；不限於米糠、黃豆、 酵母抽出物、麥芽抽娜❶碳源；不瞻薄糖、黑糖、麵糖或果糖。 30.根據本申請專利範圍第10條、第11條之方法，牛棒等各種木料_乾淨水5 天後，其自然釋出之樟樵出液（樟木層水），因含te^ed、safrolr、c卿hor成 分，可當替代水用於浸泡香杉、相思樹等木料。 200835791 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（1)圖。 (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：
八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 200835791 發明專利說明書
(本說明書格式、順序及粗體字，請勿任意更動，※記號部分請勿填寫） ※申請案號：096106426 ※申請日期：2007/02/26 焱1^0：分類： 一、 發明名稱： 一^>^纖F牛樟芝-子實體j之繁育方法 METHOD FOR PROPAGATING FRUIT BODY (STROMA) OF Antrodia camphorate 0 二、 申請人：（共1人） 姓名或名稱：李培榮/Li, Pei-Jung 代表人：李培榮/Li, Pei-Jung 住居所或營業所地址： 苗栗縣三灣鄕銅鏡村一鄰十四號 No.l4,Alleyl, Timg Ching Village Sanwan hsiang, Miaoli, 352 Taiwan (R.O.C·) 國籍：中華民國/R.O.C _三、發明人：（共1人) 姓名：李培榮/Li，Pei-Jung 國籍：中華民國/R.ac 200835791 發明專利說明書 卜年6月 --" ——一 (本說明書格式、順序及粗體字，請勿任意更動，※記號部分請勿填寫） ※申請案號：0961⑽426 ※申請日期：2007/02/26 兹1卩€分類：" 、 ^Olh Wo^O (2006.01)" 一、發明名稱： 一歡工纖"牛樟芝孑實體』之繁育方法 METHOD FOR PROPAGATING FRUIT BODY (STROMA) OF ⑩ .、申請人：（共1人） 姓名或名稱··李培榮/Li, Pei-Jung 代表人：李培榮/Li，Pei-Jung 住居所或營業所地址： 苗栗縣三灣鄉銅鏡村一鄰十四號 No. 14, Alley 1, Tung Ching Village Sanwan hsiang, Miaoli, 352 Taiwan (R.O.C.) 國籍：中華民國/R.O.C φ 三、發明人：（共1人） 姓名：李培榮/U, Pei-Jung 國籍：中華民國/R.O.C 200835791 四、聲明事項： 口主事=7期二為，二，/工-款㈣^ 口 = 前已向下列國家(地區)申曰請專利： 门^依x理國豕（地區）、巾請日、申請案號順序註記】 0料槪第二十七條第-卵際優先權： 籲 □無主張專利法第二十七條第-項國際優先權： □=張專利法第二十九條第一項國内優先權： 【式請依··申請曰、申請案SI順序註記】 0主張專利法第三十條生物材料： D須寄存生物材料者： 國内生物材料【格式請依：寄存機構、日期、號碼順序註記】 % S外生物材料【格式請依：寄存國家、機構、曰期、號碼順序註記】 0不須寄存生物材料者： 所屬技術倾中具有通常知識者綠獲㈣，不須寄存。 200835791 四、聲明事項： □主張專利法第二十二條第二項□第一款或□第二款規定之事實，其 事實發生曰期為：年月曰。 □申請前已向下列國家（地區）申請專利： 【格式請依：受理國家（地區）、申請曰、申讀案號順序註記】 口有主張專利法第二十七條第一項國際優先權： □無主張專利法第二十七條第一項國際優先權：
□主張專利法第二十九條第一項國内優先權： 【格式請依：申請日、申請案號順序註記】 3主張專利法第三十條生物材料： [□須寄存生物材料者： 國内生物材料【格式請依：寄存機構、日期、號碼順序註記】
國外生物材料【格式請依：寄存國家、機構、日期、號碼順序註記】 @不須寄存生物材料者： 所屬技術領域中具有通常知識者易於獲得時，不須寄存。 2 200835791 九、發明說明（1) 1·發明所羼之技麵域： 牛樟芝（Antrodia camphorate) 子菌 basidiomycete 多孔菌科 Myporaceae，生長季 節；春、夏、秋，棲息於中、低海拔之台灣國寶級保育樹種f牛樟樹Cinnamomum comphora』上，在腐朽之牛樟木材上，引起木材褐腐朽，是導致牛樟木腐朽中空的 元兒°牛樟芝是台之樟薄孔菌Antrodia dimamomea，享有森林中Γ台灣紅寶石j 之美譽。其子實年生至多年生，雖衄色，橘紅輕淡肉赌，味呈黃樟香 氣、性苦寒。產期在每年六月至十一月，十一月以後受温度之影響其成長緩慢。早 期原住民上山工作，在口中含一小片就可整天不用喝水、而且防止宿醉，民間傳說 、保肝、解毒功能。現代硏究證實；牛樟芝富含三蔽類、固醇類、多醣成 份，可增强肝功能、抗氧化、咖免疫力及抑制麵之效用。 由於牛樟芝野外數量不多，而民間需求有增無減，稱得上是全世界最昂貴的眞菌， 也因此導致「山老鼠（盜林者)」濫砍盜採的目標。目前生物繼已能人工培養樟芝 菌絲體（市面上；分有液態深臟酵繁麵絲體及固體培育牛樟菌絲體兩類）以菌 絲體商品當作代用品。但各種培養牛樟菌絲體之製程，均有其操控極限和困難，不 能也無法去完整臨摹野生子實體成長，導致產出之品質效用有麵限，難達野生子 實體相同標準 > 致價碼高漲難以滿足需求。 2·先前技術： 野生牛樟芝因受牛機保育已明令禁採，雖有人利用颱風過境擇取牛樟漂流木，鋸 成段木並灑上牛樟麵，經4-6個月削下牛樟芝子實體薄層販售，但生長和培育條件 管控困難，爲數仍有限無法滿足需求樟芝麵之保存紐氏零下80度液態氮 中。而繁殖以麥芽抽出物（ΜΕΑ)、甚至酵母抽出物培養基（YEA例:2%««糖〇.5% 酵母抽出物）或馬鈴薯培養基(PDA)等培養，並可於處方中添加0.1%磷酸氫二鉀 及0.05%硫酸鎂，借以促進菌絲之成長。該等培養基注入平版皿中呈固相並温控攝氏 15-32度，均適以靜置培養。 通常液態深臟酵繁殖牛樟芝菌絲體方法；先以特定培養基調製之固相平版皿靜置 培養2周，再將菌絲置於三角瓶中並以經調製液體培養基，以攝氏25-26度進行震盪 培養7-10天之後移入相似條件之種子罐鰣通氣培養，然後轉入相似條件、轉速 90rpm、通氣量爲(X5wm之小型（500公升）發酵槽培養，再轉入中型（5公噸）發 酵槽培養，再升級入更大型發酵槽中培養，其各級之攪拌通氣培養均約740天。 一般培養條件爲1%之接種量，轉速90rpm、通氣量爲0.5wm温度爲攝氏28度（例； 以五十噸槽進行三十五_培養，八天後可得紅色菌絲，再行固液分離，或有發酵全 液^温®攝氏55度減壓濃縮後進行冷凍乾燥，收率可達1.8%其多_含量則在8% 以上），且多醣體含量與菌絲多寡成正比❶ 惟一^深層液態發酵方法；均需進行固液分離，有廢液排放污染環境之問題。且因 該發酵廢液之排放常導_解於水中的小奸活性成分流失，麵發酵常僅能取得 菌絲細胞壁內所含之物質成分。 200835791 九、發明說明（1) 1·發明所羼之技術領域： 牛樟芝（Antrodia camj)hoiate>^8f basidiomycete 多孔菌科 Myporaceae ,生長季 節；春、夏、秋，棲息於中、低海拔之台灣國寶級保育Μ **牛樟樹Cimamomm amphoraj上，之牛樟树上,引起辅褐網，是導致牛樟木腐朽中空的 元兇。牛樟芝是台灣特有之樟薄孔菌AntaxMa dmamomea，享有森林中Γ台灣紅寶石」 之美譽。其子實體一年生至多年生，騰雌色，紅色至淡肉馳 > 味呈黃樟香 氣、性苦寒。產期在每年六月至十一月，十一月以後受温度之影響其成長緩慢◎早 期原住民上山工作，在口中含一小片就可整天不用喝水、而且防止宿醉，民間讎 類麵、保肝、解毒功能，現代硏究證實；牛樟芝富含三_、固_、多醣成 份，可增强肝功能、抗氧化、增加免疫力及抑制臟之效用。
由於牛樟芝野外數量不多，而民間需求有增無減，稱得上是全世界最昂貴的眞菌， 也因此導致「山老鼠（盜林者)j濫砍盜採的目標。目前生物科技已能人工培養樟芝 菌絲體（市面上；分有液態深臟酵繁麵絲體及固體培育牛樟菌絲體兩類）以菌 絲體商品當作代用品。但各種培養牛樟菌絲體之製程，均有其操控極限和困難，不 能也無法去完整臨摹野生子實體成長，導致產出之品質效用有難限，生子 實體相同標準，致價碼高漲難以滿足需求。 2·先前技術： 野生牛樟芝因受牛樟樹保育已明令禁採，雖有人利用颱風過境擇取牛樟漂流木，鋸 成段木並灑上牛樟菌種，經4-6個月削下牛樟芝子實體薄層販售，但生長和培育條件 管控困難，爲數仍有限無法滿足需求。-Μ樟芝菌種之保存麵氏零下80度液態氮 中。而繁雜麥芽抽出物（ΜΕΑ )、甚至酵母抽出物培養基（YEA例：2%麵糖0.5% 酵母抽出物）或馬鈴薯培養基（PDA)等培養，並可於處方中添加0.1%磷酸氫二鉀 及0.05%硫_，借以讎菌絲之成長。該等培養基注入平顧中呈固相並温控攝氏 15-32度，均適以靜置培養。 通常麵深讎酵繁殖牛樟芝菌絲體方法；先以特定培養基調製之固相平臟靜置 培養2周，再將菌絲置於三角瓶中並以經調製液體培養基，以攝氏25-26度進行震盪 培養740天之後移入相似條件之種子罐攪拌通_養，然後轉入相似條件、轉速 90rpm、通氣量爲0.5vvm之小型（500公升）發酵槽培養，再轉入中型（5公噸）發 酵槽培養，再升級入更大型發酵槽中培養，其各級之攪持通氣培養均約7-10天。 一^養條件爲1%之接種量，轉速90rpm、通氣量爲a5wm温度爲攝氏28度（例； 以五十噸槽進行三十五噸培養，八天後可得紅色菌絲，再行固液分離，或有發酵全 液以温度攝氏55度減壓濃縮後進行冷凍乾燥，收率可達1挪其多醣體含量則在8% 以上），且多醒含量與菌絲多寡成正比。 惟一^深層液態發酵方法；均需進行固液分離，有廢液排放污染環境之問題。且因 該發酵廢液之排放常導致溶解於水中的小肝活性成分流失，液態發酵常僅能取得 菌絲細胞壁內所含之物質成分◊ 5 200835791 九、發明說明（2) 固體培養牛樟菌方法·，先將牛樟芝菌種以太空包進行菌絲體培養，並續於空氣中進 行子實體栽培，且利用該方法培養得之樟芝固體培養物（專利公告號⑻565430) 〇 該專利係一種培養固體樟芝之方法；以BCRC 35398爲菌種來源植在太空包內，且該 太空包內含之培養基係由你70%選自蕈類、植物之莖、梗、果實及木屑之纖維物、 2〜30%馬鈴薯、545%米糠、140%«^、0.5-2鑛酸二氫鉀及0.1-1%硫^1^組成， 其溼度爲胳80%之間，並調整其pH値爲中性；_該專利之方法’太空包之培養 基係由65%草本植物之莖、梗、果實或木屑、20%馬鈴薯、10%米糠、3·5%葡萄糖、 酸二氫鉀及0.5%硫組成。且其中子實體栽培期間之日間溫度係介於2〇 至30°C之間，而夜間溫度係介於844t：之間，且控制其日夜鬮溫差於12至16°C之 間。其溫度爲5至32°C間，含有0.24%之二氧化碳之空氣下進行菌絲體培養（培養 進行50*80天），隨之移除太空包，使之暴露於二氧化碳含量低於1%且空氣溼度介 於90*95%之間之空氣流通條件下，進行子實體栽培一段時間（子實體培養須2化50 天）至圓錐形子實體形成❹ 讎固體培養牛樟菌之方法，受限於太空包內所含培養基材，此謝在提供營養成 份後易軟化且此時已移除太空包，一方面易受雜菌汚染無法久置。故需在特定期內 行採收，致其圓錐形子實體形成時麵，形成之表層膜甚薄。 一^猫菌類均具極佳吸附金屬之能力，例;2006年日本麒麟啤酒之關係生技產品姬 松茸-巴西蘑菇j就發生過高重金屬含量而下市，而我國也發現國產雜r巴麵 菇』中亦隱藏有相同問題。究其因不外乎巴西蘑链、洋菇覆土性需求所造成。在現 今工業發達所造成空氣麵魅壤污染，導致野生之牛樟芝、錳、鋁、硼、 銻明顯高於人工培育牛樟芝菌絲體。 牛樟芝菌固、液態培養首見文獻於1997年師大MC源等之硏究，其中添加0.1^0.3% 樟腦結晶可助於菌絲體生長。其後1998年廖英明指出添加0娜之樟木萃出液（10% 之樟木屑水）可有最好的成長，2000年許勝傑等發現樟樹精油中常見如terpined、 safrole、camphor成分皆有助於樟芝菌絲體生長6爲防止環境污染導致野生牛樟芝商 品具高重金屬含量 > 以及撤牛穌 '纖牛樟芝 > 唯有ΛΧ培育牛樟薛體（子實 體）一途。如比一來；除了能供應市場之需求，還能爲台灣國寶Γ牛樟木j保育樹 及天然牛樟芝留下娜。 3.發明的內容： 本發明係提供一種人工栽培r牛樟芝-子實體j之繁育方法；本發明同時提供液相 發酵靜置培養基處方，可用於大部分真菌之生長。同時該方法包括將一樟芝菌麵 入以瓶容器裝盛且經調理減菌後之濕木料上進行菌絲體培養（第1圖），並續於含 有空氣之瓶中進行子實體培育。麵讎有孔洞之橡膠塞封口，並裝塡棉花入膠塞 孔洞中，一方面阻隔雜菌入侵並可確保培養瓶中樟芝菌成長所需之相對濕度，另一 方面可排放眞菌因發酵代謝所生氣體。不僅提高真菌之產量，同時刺激其衍生代謝 物，特別是含有醫藥活性成分的代謝物。 200835791 九、發明說明（2) 固體培養牛樟菌方法:先齡樟^^^太空儀行菌絲體培養，並續於空氣中進 行子實體栽培，且利用該方法培養得之樟芝固體培養物（專利公告號00565430)。 該專利係一種培養固體樟芝之方法；以BCRC 35398爲菌種來源植在太空包內，且該 太空包內含之培養基係由6(K70%選自蕈類、植物之莖、梗、果實及木肩之纖維物、 20·30%馬鈴薯、545%雜、140%葡纖、0.5-2%磷酸二氫鉀及0.1-1%硫組成， 其淫度爲60*80%之間，並調整其pH値爲中性；讎該專利之方法，太空包之培養 基係由65%草本植物之莖、梗、果實或木屑、20%馬鈴薯、10%米糠、3.5%葡萄糖、 1%磷酸二氫鉀及0.5%硫組成。且其中子實體栽培期間之日間溫度係介於20 至30°C之間，而夜間溫度係介於844°C之間，且控制其日夜間溫差於12至16°C之 間。其溫度爲5：至32°C間，含有0.24%之二氧化碳之空氣下進行菌絲體培養（培養 進行50观天），隨之移除太空包，使之暴露於二氧化碳含量低於1%且空氣溼度介 於90^95%之間之空氣流通條件下，進行子實體栽培一段時間（子實體培養須瓜50 天）至圓錐形子實體形成众 雛固體培酙樟菌之方法，受酸太空包內養謝，此紐營養成 份後易軟化且此時已移除太空包，一方面易受雜菌汚染無法久置。故需在特定期內 行採收 > 致其圓錐形子實體形成時雖，形成之表層膜甚薄。 一般琏菌類均麵佳吸附金屬之能力，例；2006年曰本麒麟啤酒之關係生技產品 Γ姬松茸-巴西蘑菇j就發生過高重金屬含量而下市，而我國也發現國產生鮮 Γ巴西蘑菇《I中亦隱藏有相同問題。究其因不外乎巴西蘑菇、洋链覆土性需求所 造成。在現今工業發達所造成空氣和環社壤污染，致野生之牛樟芝發 鋁、硼、銻明顯高於人工培育牛樟芝菌絲體。 牛樟芝菌固、液態培養首見文獻於1997年師大簡秋源等之硏究，其中添加0.1-0.3% 樟腦結晶可助於菌絲體生長。其後1998年廖英明指出添加_%之樟辟出液(臟 之樟木屑水）可有最好的成長，2000年許勝傑等麵樟樹精油中常見如terpined、 safrole ~ camphor成分皆有助於樟芝菌絲體生長。爲防止環牺染導嚮生牛樟芝商 品具高重金屬含量，以及盜砍牛樟木、盜採牛樟芝，唯有人工培育牛樟_ (子實 體）一途❶如比一來；除了能供應市場之需求，麗爲台灣國寶p牛樟木j保育樹 及天然牛樟芝留下娜。 3.發明的內容： 本發明係提供一種人工f牛樟芝-子實體』之繁育方法；本發明同時提供液相發 _黯養基處方，可用於大部分真菌之生長❶同時該方贿括將一樟芝菌麵入 以瓶容嚣裝盛且經調理減菌後之濕木料上進行菌絲體培養（如附件），並續於含有空 氣之瓶中進行子實體培育。該瓶係嫌孔洞之橡膠塞封口，並裝塡棉花入膠塞孔洞 中，一方面阻隔雜菌入侵並可確保培養瓶中樟芝菌成長所需之相對濕度，另一方面 可排放眞菌因發酵代謝所生氣體。不僅提高真菌之產量，同時刺激其衍生代謝物， 特別是含有醫藥活性成分的代謝物。 6 200835791 九、發明說明（3): 4·實施方式： 本發明係將繁芽抽ffiti MEA，母抽出物培養基皿或馬鈴薯舰培養基 等·養樟芝菌絲》移ΛΜ調配處方之麥片培養基中擴大培養（一種繁殖真菌之固 態發酵培養方法，中華民國發明第1231825號專利），再將生長旺盛滿是樟芝菌絲之 麥片和無菌粘稠狀營養觀均質觀碎成樟芝種菌液。然後；再將稠狀樟芝菌液注 入或浸塗讎調理且減菌後容器內之濕木材上，借以羅菌絲在木材上之成長並温 控於攝氏15-32度，直至容器（玻璃）內之木材有牛樟芝子實體形成於表面。 當參照較佳實施所描述之有關發明細節後，則刪熟知相技術之xm進行之各種 ^^^讎，麵不脫離本發明申請專利範圍所述之精神及範圍。 5·【圖式簡單說明】：一種人工栽培『牛樟芝-子實體』之繁育方法製程圖。
—J f 5000ml往返Μ»培 成長變化 並取得菌 絲體及代 謝勸烘乾 燥供比對 供存·查d in - 通氣攪ί雜養 抬操作接種 取樣以HPLC定性定1 比對 ! 上架觀察並監視成長 Λ #得最诖之成分含董與 培育條沣 成品加工 培養室殺菌 消毒 —-- |類菌台操作 !接種 200835791 九、發明說明（3): 4·實施方式： 本發明係將繁芽抽出物MEA '酵母抽出物培養基YEA或馬鈴薯PDA培養基 等所培養樟芝菌絲’移入經調配處方之麥片培養基中擴大培養（一觀殖真菌之固 態發酵培養方法，中華民國發明第1231825號專利），再將生長旺盛滿是樟芝菌絲之 麥片和無菌翻狀營養雜均質麵碎成樟魏菌液。然後；再將稠狀樟芝菌液注 入或浸塗於經調理且減菌後容器內之濕木材上，借以促進菌絲在木材上之成長並温 控於攝氏15·32度，直至容嚣（玻璃等）內之木材有牛樟芝子實體形成於表面。 當參照_實施所插脱有關發明細節後，則獅熟知本項技術之人所進行之各種 修改及替換，將仍不脫離本發明申請專利範圍所述之精神及範圍。 • 5·【圖式簡單說明】： 第1圖：一種人工栽培r牛樺芝-子實體』之繁育方法製程圖❶ 200835791 五、中文發明摘要： 潑明之名稱：一默工纖f牛樟芝·子實體』之繁育方法） 本發明係提供一種人工11牛樟芝-子實體j之繁育方法；本發明同時提供液相 發酵靜置培養基處方，可用於大部分真菌之生長。同時該方^^將一樟魏觀 入以瓶容嚣裝盛且經調理減菌後之濕木料上進行菌絲體培養（第1圖）， 有空氣之瓶中進行子實體培育。觀讎有孔洞之橡膠塞封口，並_道^^二口 孔洞中一方面阻隔雜菌入侵並職保培養瓶中樟魏成長所需之入膠塞 方面可排放眞菌因發酵代謝所生氣體❶不讎高真菌之產裊，同時锻,另〜 物，特別是含有醫藥活性成分的代謝物。 、顯聰生代謝
六、英文發明摘要： METHOD FOR PROPAGATING FRUIT BODY (STROMA) OF Antrodia camphorate ° 200835791 五、中文發明摘要： 潑明之名稱：-®AX^ r牛樟芝孑實體j之繁育方法） 本發明係提供一種人工^ r牛樟芝-子實體j之繁育方法；本發明同時提供液相 發酵靜觀養基處方，可用於大部分真菌之生長。同時該方鮑括將一樟Μ讎 入以瓶容器麵且經麵減菌後之濕·上進行菌絲體培養（如附件），並續舱 有空氣之瓶中進行子實體培育。該瓶係似有孔洞之橡膠塞封口，並裝塡棉花入膠塞 孔洞中，一方面闘雜菌入侵並可確保培養瓶中樟芝菌成長所需之相對濕度，另-方面可排放眞菌因發酵代謝所生氣體。不讎高真菌之產量，同時刺激其衍生代謝 物，特別是含有醫藥活性成分的代謝物。 六、英文發明摘要： METHOD FOR PROPAGATING FRUIT BODY (STROMA) OF Antrodia camphorate ° 200835791 十、申請專利範圍（1): L 本發B月說B月的第3項內容之方法，該培養基係由牛棒木料65%、馬鈴馨2〇%、 米糠跳、蔗糖3.5%、磷醜二鉀1%及硫隨0.5%所組成。 2·根據發明，明的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟木料65%、豆漿3〇% (該黃職觀和賴1:7 · 1:14比率硏製而成）蔗糖3.5%、磷賴二鉀1%及硫麵 〇·5%所組成。 3· _本發B月說明的第3項內容之方法，該培養基係由牛棒木料65%、營養液3〇% (該 營養液係以酵母抽出物〇·5·3%)、蔗糖3·5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵0.5%所組成。 4·麵本發明說明的第3項內容之方法，該培養麵由牛樟木料65%、營養液3〇% (該 • 營養液観麥雜出物0.5-3%)、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫隱0.5%所組成❶ 5·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液3〇% (該 營養液係以酵母抽_ 〇·5-2%、麥芽抽052% )、蔗糖3·5%、磷酸氫二郵1% 及硫麵0.5%所組成。 6·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養^^由樟_($#、油樟、芳樟、 陰陽樟）木料65%、馬鈴薯20%、米糠鹏、蔗糖3·5%、鱗醜二鉀1%及硫麵 0.5%所組成。 7·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由適於香杉芝生長及金針薛繁育 的杉科（如香杉等）槲65%、馬鈴薯20%、米糠10%、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1% 及硫麵0.5%所組成。 馨 8·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由逾於各類香菇、木耳等顏繁 育的雜桃（如相思樹、油桐«#) 65%、馬鈴薯20%、_ 10%、蔗糖3.5%、磷 酸氫二鉀1%及硫麵0·5%所組成。 λ根據本發明的第3項內容之方法，該培養基係將馬鈴薯、米糠和水萃出之液，再加 入蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵0.5%所組成營養液。 10·麵本發明說明的第4項實施方式之方法，牛樟等_祕需經含水量、濕度管 控，先祛水【以烘箱控温65 75 C乾燥8小時，祛水10.3445% (Ave.12.5%)】，乾 燥後再吸附乾淨水【浸泡3-8天（5天爲最佳），使吸附含水量約35%】。再浸塗經 調配並已均質攪碎之粘稠狀牛擁菌於表面。該培養基係將馬鈴薯20%、米糠10% 以水萃出，再加入蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫酸鎂〇·5%和甲基纖維素〇·5%-2% 所組成之稠狀營養液。 200835791 十、申請專利範園（1): 1.麵本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟木料65%、馬鈴薯20%、 米糠10%、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵〇·5%所組成。 1根據發明^月的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟# 65%、_ 30% (該黄豆漿瓶和水以1:7 -1:14比率硏製而成）蔗糖3.5%、磷醜二鉀1%及硫_ 0.5%所組成众 3·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液3〇%(該 營養液讎酵母抽出物0.5-3% )、蔗糖3‘5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵〇·5%所組成。 4·讎本翻說明的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液3〇% (該 Φ 營養液備麥芽抽0.5-3% )、蔗糖15%、磷酸氫二鉀1%及硫隱0.5%所組成。 5·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由牛樟木料65%、營養液30% (該 營養液係以酵母抽出物0·5·2%、麥芽抽出物0.5-2% )、蔗糖3.5%、磷醜二鉀1% 及硫麵0.5蕭組成。 6·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由樟木科(香樟、芳樟)木料65%、 馬鈴薯20%、雜10%、蔗糖15%、磷醜二鉀1%及硫麵0·5%所組成。 7·根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由適於金針薛、香链等繁育的杉 科（如紅杉等）木料65%、馬鈴薯20%、米糠10%、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫 瞧0·5%所組成❶ 8. 根據本發明說明的第3項內容之方法，該培養基係由適於各類香薛、木耳等蔽菌繁 • 育的雜木料（如相思樹、木棉花樹等)65%、馬鈴薯20%、米糠10%、蔗糖3.5%、 磷酸氫二鉀1%及硫纖0.5%所組成。 9. 根據本發明的第3項內容之方法，該培養基係將馬鈴薯、米糠和水萃出之液，再加 入蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫隱0·5%所組成營養液。 10·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，牛樟等賴需經含水量、濕度管 控，先驗水【以_控温65 - 75 C乾燥8小時，餘水10.344.5% ( Aml2.5% )】，乾 燥後再吸附乾淨水【浸泡3-8天（5天爲最佳），使吸附含水量約35%】。再浸塗經 調配並已均質攪碎之棚狀牛麵菌織面。該培養麵將馬鈴薯20%、雜10% 以水萃出，再加入蔗糖3.5%、磷酸氣二鉀1%及硫瞧〇·5%和甲基纖維素〇.5%-2% 所組成之稠狀營養液。 8 200835791 十、申請專利範圍（2): 11·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，牛樟等樟科木料含水量、触等，探 均if牛Sf⑦以培養讎將馬鈴薯継、雜 0.5:2S成温 顧麵0.5%和甲咖素 12.根據本發明說明的第4項實施方式之方法，各種杉科（香杉）、雜^^菩，霱經含 水量、濕度管控，先駐水【以烘箱控温65-75C乾燥8小時駐 Ave.12.5%)】，乾燥後再吸附浸讎調配之培養基於表面，該培養基係馬 20%、雑10%以水萃出，再加入蔗糖3·5%、磷酸氫二鉀1%及硫“ ％
讎耐動35%)，麵贼121麟菌 13.讎本發明說明的第4項實施方式之方法，各種杉科(香杉）、雜雜等，含水量、 濕度管控’係以自然風乾之木料去浸泡經調配之培養基於表面3·8天(6天爲最佳）, 該培養基係將馬鈴薯20%、米糠10%以水萃出，再加入蔗糖3·5%、磷醜二鉀1% 及硫酸鎂0.5%所組成之營養液，再經以攝氏121度殺菌60分鐘，備供移接牛樟種 菌。 、 14.根據本發明的第4項實施方式之方法，其中菌絲體培養之溫度爲28它。 15·讎本發明說明的第4項實施方式之方法，其瓶中空氣^爲80% 〇 16·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，其中該子實體栽培時之日間溫度爲 24-26〇C，而夜間雛爲 10-12〇C ◊ 17·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，其中其日夜間溫差爲15°C。 18· _本發明說明的第4項實施方式之方法，成長光線以七分陰三分陽爲佳，其菌絲 體培養進行4045天，而子實體培養須9(M20天（含以上）。 19·讎本發明說明的第4項實施方式之方法，其於菌絲體培養階段前，可先顔一牛 樟菌歡難養，步媒包含⑴自灘氮保存活化的麵取一小塊洋菜菌_，移入 新鮮培養基中臟溫下培養；(2梅離生長至旺盛時，將該菌種接魅殺過菌之五 榖雜糧（例如；米粒、麥粒或麥片）之中續於恆溫下培養；⑶#該五榖雜糧中之菌 種長麵絲時，取出粒狀菌絲塊，然後置入經調配之粘稠狀營養液中，再以均質機 攪碎成樟芝種菌液，即可提供大量接麵源。 9 200835791 十、申請專利範圍（2): 11·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，牛樟等樟科木料含水量、濕度管控，係 以自然雌;去浸泡乾淨水孓8天（6瑶最佳）使酣含水量約35%。再塗 浸經調配並已均質攪碎之粘稠狀牛籠菌赚面❶該培養麵將馬鈴薯鶴、雜 10%以水萃出，再加入蔗糖3·5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵0.5%和甲基纖ϋ素 0.5%_2%所組成之稠狀營養液。 12·麵本發明說明的第4項實施方式之方法，各種杉科（紅杉）、雜木料（如相思樹、 木棉花樹）等，需經含水量、濕度管控，_水【以烘箱控温65-75C_ Μ傭 駐水10·3%-14·5% Ave.115%)】，_後再吸隱讎調配之培養基纖面，該培養 麵將馬鈴薯廳、雑10%财萃出，再加入蔗糖3·5%、磷_二鉀1%及硫酸 鎂〇·5%所組成之營養液（浸泡从天，5天爲最佳使吸附含水量約35%)，再經以攝 氏121度殺菌60分鐘，讎移接牛。 13·讎本發明說明的第4項實施方式之方法，各艱科（紅杉）、雜桃（如相思樹、 木棉花樹）等，含水量、濕度管控，係以自然雌之木料去浸泡經調配之培養基於 表面3-8天（6天爲最佳），該培養麵將馬鈴薯20%、米糠10%以水萃出，再加入 蔗糖3.5%、磷醜二鉀1%及硫讎0.5%所組成之營養液，再經以攝氏121度殺菌 60分鐘，備供移接牛樟種菌。 14·根據本發明的第4項實施方式之方法，其中菌絲體培養之溫度爲2ΤΟ 15·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，其瓶中空氣溼度爲80%。 16·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，其中該子實體栽培時之日間溫度爲 2冬26。(：，而夜間濉爲1042〇0 17·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，其中其日夜間溫_1〇45乞。 18·根據本發明說明的第4項實施方式之方法，成長光線以七分陰三分陽爲佳，其菌絲 體培養進行4045天，而子實體培養須90420天（含以上）〇 19.讎本發明說明的第4項實施方式之方法，其於菌絲體培養階段前，可先處以一牛 樟Μλ量培養，步驟包含⑴自纖氮保存活化的菌種取一小塊洋菜菌絲塊，移入 新鮮培養基中於怪溫下培養；(2府菌種生長至旺盛時，將該菌麵種至殺過菌之五 g糧（例如；米粒、麥粒或麥片）之中續於怪溫下培養；(3府該五穀雜糧中之菌 種長漏絲時，取出雛菌絲塊,然後置ΛΙ莖調配之_狀營養液中，再以均質機 攪碎成樟雜菌液，即可麟大量接 9 200835791 十、申請專利範圍（3): 20· _：$：#明說B月的第3項內容之方法，菌絲體培養階段，包含一牛棒菌種大量培養步 驟，包含以液體培養發酵以大量培養麵，斜面試管培養後，將大量繁薪的菌種 接種515升發_養液中，於24-26°C下以1«)聊旋轉腿培養約14天，續以90ipm 往培養給14天，又接種至20升液體發酵液中養14天；其中發酵培養 液之配方爲0·Η爾母抽出物、〇·μ1%麥芽抽_、1-3%蔗糖、α〇5·0·5%磷隨二鉀、 0.01-0.1% 硫酸鎂。 21·根據本發明說明的第3項內容之方法，牛樟等形狀；不限於塊狀、條狀或片狀， 其尺寸大小、長度、趙可視容默小麵高决定。 22·根據本發明說明的第3項內容之方法，容嚣材質；不限於玻璃或塑膠。 23·根據本發明說明的第3項內容之方法，容器形式·，不限於瓶、罐或桶。 24·根據本發明說明的第3項內容之方法，容器封口不限於瓶塞或瓶蓋且其材質；不限 橡膠或麵或PU海綿亦或塑膠和鐵蓋。 25.根據本發明說明的第3項內容之方法，碳源·,不暇於蔗糖、黑糖、葡萄糖或果糖❶ 26·娜本發明說明的第3項內容之方法，氮源；不限於米糠、黄豆、酵母抽出物、 27·根據本發明說明的第3項內容之方法，微量元素；不限於磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀。 28.樹i本申請專利範圍第20條之方法，其液體發酵培養，培養液之配方爲0.5%酵母 抽出物、0.5%麥芽抽出物、2%蔗糖、0.1%磷醜二鉀及〇娜硫瞧。 29·根據本申請專利範圍第10條、第11條、第19條之方法，其粘稠狀營養液係將馬 鈴薯20%、雑10%以水萃出，再加入蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫隱〇·5%和 甲素1%所組成之稠狀營養液。本粘稠狀營養液氮源；不限於米糠、黄豆、 酵母抽出物、麥芽抽出物。碳源；不限於蔗糖、黑糖、麵糖或果糖。 30.根據本申請專利範圍第10條、第11條之方法，牛樟等各種樟科木料浸泡乾淨水5 天後’其自然釋出之樟木溶出液（樟木屑水），因含terpineol、safrole、camphor成 分，可當替代水用於浸泡香杉、相思樹等木料。 31·根據本申請專利範圍第1〇條、第lljp之方法，該培養基係由牛樟等各種樟科木料 65%、水30%、蔗糖3·5%、磷酸氫二鉀1%及硫薩0 5%所組成。 10 200835791 十、申請專利範圍（3): 20·據本發明說明的第3項內容之方法，菌絲體培養階段，包含一牛樟菌種大量培養步 驟，包含以液體培養發酵以大量培養麵，斜面試管培養後，將大量繁殖好的麵 接種之5 養液中，於24«26°C下以160 rpm旋轉培養約14天，續以9〇jpm 往養約14天，又接種至20升液體發酵液中^培養14天；其中發酵培養 液之配方爲0.14%酵母抽出物、0.14%麥芽抽出物、1-3%蔗糖、0·05-0·5%磷酸氫二鉀、 0则·赚酸鎂。 21.根據本發明說明的第3項內容之方法，牛樟等形狀；不限於塊狀、條狀或片狀， 其尺寸大小、長度、離可灘器大小纖高决定❶ 22·根據本發明說明的第3項內容之方法，容器材質；不限於玻璃或塑膠。 23·根據本發明說明的第3項內容之方法，容器形式•，不限於瓶、罐、桶或RP袋^ 24. 根據本發明說明的第3項內容之方法,容器封口不限於瓶塞、瓶蓋或繩，且其材質； 不限橡膠或砂膠或PU讎亦或塑膠和鐵蓋❶ 25. 根據本發明說明的第3項內容之方法，碳源;不_蔗糖、黑糖、葡萄糖或果糖。 26·根據本發明說明的第3項內容之方法，氮源；不限於米糠、黄豆、酵母抽出物、 麥芽抽出物。 27·根據本發明說明的第3項內容之方法，微量元素;不限於磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀。 28. 根據本申請專利範圍第20條之方法，其液體發酵培養，培養液之配方爲酵母 抽出物、0.5%麥芽抽出物、2%蔗糖、0.1%磷醜二鉀及〇·〇5%硫薩。 29. 根據本申請專利範圍第10條、第11條、第19條之方法，其粘稠狀營養液係將馬 鈴薯20%、雑10%以水萃出，再加入蔗糖3·5%、二鉀1%及硫麵〇·5%和 甲基纖維素1%所組成之稠狀營養液。本粘稠狀營養液氮源；不限於米糠、黄豆、 酵母抽出物、麥芽抽出物。碳源·，不限於蔗糖、黑糖、麵糖或果糖。 30. 根據本申請專利範圍第10條 '第11條之方法，牛樟等各種樟科木料浸泡乾淨水5 天後，其自然釋出之樟木溶出液（樟木屑水），因含t_eol、safrole、camphor成 分，可當替代水用於浸泡香杉、相思樹等木料。 31·根據本申請專利範圍第10條、第11條之方法，該培養基係由牛樟等各種樟科木料 65%、水30%、蔗糖3.5%、磷酸氫二鉀1%及硫麵0.5%所組成。 10