TR201909110T4 - Sakarit-protein glikokonjugatları yapmaya yönelik yöntemler. - Google Patents

Sakarit-protein glikokonjugatları yapmaya yönelik yöntemler. Download PDF

Info

Publication number
TR201909110T4
TR201909110T4 TR2019/09110T TR201909110T TR201909110T4 TR 201909110 T4 TR201909110 T4 TR 201909110T4 TR 2019/09110 T TR2019/09110 T TR 2019/09110T TR 201909110 T TR201909110 T TR 201909110T TR 201909110 T4 TR201909110 T4 TR 201909110T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
polysaccharide
linker
group
antigen
carrier molecule
Prior art date
Application number
TR2019/09110T
Other languages
English (en)
Inventor
Saul Allan
Micoli Francesca
Original Assignee
Glaxosmithkline Biologicals Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Glaxosmithkline Biologicals Sa filed Critical Glaxosmithkline Biologicals Sa
Publication of TR201909110T4 publication Critical patent/TR201909110T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
    • A61K39/0275—Salmonella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/34—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Corynebacterium (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
    • C07K16/1285—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Corynebacterium (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
    • C08B37/0081—Reaction with amino acids, peptides, or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Buluş, bir karbonil grubunun, bir polisakaritin indirgeyici terminalinde indirgeyici aminasyonuna yönelik bir proses sağlar; burada indirgeyici aminasyon, 4 ile 5 arasındaki bir pH?de gerçekleştirilir. Buluş ayrıca bir polisakarit ve bir taşıyıcı molekül içeren bir konjugat hazırlanmasına yönelik, aşağıdaki adımları içeren bir proses de sağlar: (a) polisakaritin bir bağlayıcıya birleştirilmesiyle, bağlayıcının serbest terminalinin bir ester grubu olduğu bir polisakarit-bağlayıcı bileşik oluşturulması; ve (b) ester grubunun, taşıyıcı molekül içerisindeki bir primer amin grubu ile reaksiyona sokulmasıyla, bağlayıcının taşıyıcı moleküle bir amid bağlantısı vasıtasıyla birleştirilmiş olduğu bir polisakarit-bağlayıcı-taşıyıcı molekül konjugatı oluşturulması. Buluş ayrıca bir polisakarit-bağlayıcı bileşikteki reaksiyona girmemiş bağlayıcı kontaminasyonunun azaltılmasına yönelik, reaksiyona girmemiş bağlayıcının sulu koşullar altında 5?ten düşük bir pH?de çökeltildiği bir adımı kapsayan bir proses de sağlar. Buluş ayrıca bu proseslerle elde edilen veya elde edilebilen polisakarit-bağlayıcı-taşıyıcı molekül konjugatlarını ve ara bileşikleri de sağlar.

Description

TARIFNAME SAKARIT-PROTEIN GLIKOKONJUGATLARI YAPMAYA YÖNELIK YÖNTEMLER TEKNIK SAHA Bu bulus, sakaritlerin, özellikle Gram-negatif bakterilerin lipopolisakaritinden nüve alaninin tasiyicilara, glikokonjugatlar olusturmak üzere konjuge edilmesi alaninda yer alir.
Glikokonjugatlar, immünizasyon için faydalidir.
TEKNIGIN ALT YAPISI Bakterilerden gelen sakaritler, yillardir asilarda kullanilmaktadir.
Bununla birlikte sakaritler, T”den bagimsiz antijenler olduklari için immünojeniklikleri zayiftir. Bir tasiyiciya konjugasyon, T”den bagimsiz antijenleri Tlye bagimli antijenlere dönüstürerek hafiza cevaplarini kuvvetlenmesini ve koruyucu immünitenin gelismesini saglayabilir. Dolayisiyla en etkili sakarit asilari, glikokonjugatlara dayanir ve prototip konjugat asi, Haemophi'lus influenzae tip b'ye ('Hib') karsi gelistirilmistir [örn., bakiniz ref. 64, bölüm 14].
Gram-negatif bakteriler, lipopolisakarit ihtiva eden bir dis membran ile çevrelenir. Lipopolisakaritler, endotoksinler gibi hareket eden ve memelilerde kuvvetli immün yanitlar ortaya çikarak farkli bir molekül grubudur. Her bir lipopolisakarit, üç bölüm içerir: bir O-antijen (O,ya özgü polisakarit veya O-polisakarit olarak da anilir), bir nüve alani ve bir lipit A alani. Bir özel Gram-negatif bakteriden O-antijene karsi antikorlar, 0 bakterinin neden oldugu enfeksiyona karsi koruma saglayabilir. Bu nedenle tasiyici proteinlere konjuge edilmis O- antijenler ihtiva eden asilar tasarlanmistir. Örnegin O-antijen bazli konjugat asilari, çesitli Salmonellae (örn.SaZm0nella enteri'ca7nin Salmonella Typhimurium ve Salmonella Paratyphi A serovarlari, ref. 1 ve 2); Shi'gella türleri [ref. 3, 4, 5, 6, 7, 8 ve 9]; ve Escherichz'a coli' [ref. 10 ve 11] türleri için önerilmistir. Bu asilarda O-antijen, tam uzunlukta lipopolisakaritten gelen nüve alanina baglanir (yani konjuge edilmis polisakarit, lipit A alani olmayan bir lipopolisakarittir).
Polisakarit, tasiyiciya, kendi nüve alani vasitasiyla konjuge edilir. Bu nüve alaninin kendisi, koruyucu antikorlar indükleyebilir ve bu nedenle bir O-antijene bagli olmayan bir nüve alani ihtiva eden konjugat asilar tasarlanmistir [ref. 12].
Nüve alani ihtiva eden polisakaritlerin bir tasiyici proteine konjuge edilmesi için çesitli yöntemler bilinir. Bazi yöntemler, polisakarit zincirinin (örn. Siyanojen bromür (CNBr) veya l-siyan0-4- dimetilaminopiridinyum tetrafloroborat (CDAP) ile), bir baglayici vasitasiyla konjuge edilmeden önce rastgele aktiflestirilmesini kapsayabilir (bakiniz örnegin ref. 1 ve 2). Zincir üzerinde bir spesifik tortunun oldugu diger yöntemler daha seçicidir (örn. nüve alaninin 2- keto-3-deoksioktan0ik asit (KDO) terminali). Örnegin referans l3°teki yöntemler, KDO terminalindeki karbonil grubu ile adipik asit dihidrazit (ADH) baglayici arasinda indirgeyici aminasyonu kapsar.
Indirgeyici aminasyonu kapsayan reaksiyonlar tipik olarak çok yavastir, örn. Ref. l3”te 7 günlük adim. Bu sefer l-etil-1-3-(3- dimetilaminopropil)karbodiimid (EDAC) ve ADH kullanilarak KDO,da karboksil grubu vasitasiyla birlestirmeyi kapsayan bir baska seçici yöntem de, ref. 9°da tarif edilir. Bu seçici olmayan ve seçici yöntemlerde tasiyici ile müteakip reaksiyon tipik olarak baglayici ile reaksiyona girmesi için protein içerisindeki karboksil gruplarini aktiflestiren EDAC kullanilarak gerçeklesir. Bu EDAC aktiflesmesi, KDO alt birimindeki karboksil grubunun aktiflesmesiyle sonuçlanarak istenmeyen yan reaksiyonlara yol açabilir. EDAC aktiflesmesi ayrica tasiyici proteinin çapraz baglanmasiyla da sonuçlanabilir çünkü protein içerisindeki aktiflesmis karboksil gruplari, baglayici içindekiler yerine protein içindeki primer amin gruplari ile reaksiyona girebilir.
Buna göre konjugatlarin, özellikle de Gram-negatif bakterilerin lipopolisakaritinden gelen nüve alaninin hazirlanmasina yönelik baska ve daha iyi yollara hala ihtiyaç vardir.
BULUSUN AÇIKLAMASI Bulus, önceki teknigin konjugasyon yöntemleri yerine kullanilabilecek konjugasyon yöntemlerine dayanir. Bu yöntemler, önceki teknigin yöntemlerinden, özellikle de indirgeyici aminasyonu kapsayan yöntemlerden daha hizli hayata geçirilebilir. Ayrica bu yöntemler, istenmeyen yan reaksiyonlari engelleyen EDAC kullanilmasini da gerektirmez. Bu yöntemleri gelistirirken mucitler, toksik bilesiklerin kullanilmasini gerektirmeyen ara bilesikleri saflastirma yollari bulmuslardir. Buna göre yöntemler, daha güvenli bir sekilde gerçeklestirilebilecektir. Sonuçta elde edilen konjugatlar, önceki teknigin konjugatlarina kiyasla farkli, tercihen gelismis immünolojik özelliklere sahip olabilecektir.
Bulusun birinci yönü Birinci bir yönde bulus, bir polisakarit ve bir tasiyici molekül içeren bir konjugat hazirlanmasina yönelik olup, asagidaki adimlari içeren bir proses saglar: (a) polisakaritin bir baglayiciya birlestirilmesiyle, baglayicinin serbest terminalinin bir ester grubu oldugu bir polisakarit-baglayici ara maddesi olusturulmasi; ve (b) ester grubunun, tasiyici molekül içerisindeki bir primer amin grubu ile reaksiyona sokulmasiyla, baglayicinin tasiyici moleküle bir amid baglantisi vasitasiyla birlestirilmis oldugu bir polisakarit-baglayici-tasiyici molekül konjugati olusturulmasi; burada adim (a), baglayiciya birlestirilmeden önce polisakariti türevlendirmek için kullanilan bir ilave baglayici ile gerçeklesir ve burada ilave baglayicinin her iki terminalinde de bir primer amin grubu vardir ve polisakarit, ilave baglayiciya, polisakaritin indirgeyici terminalindeki bir karbonil grubu kullanilarak, su iki adimi kapsayan bir prosesle birlestirilir: (al) karbonil grubunun, ilave baglayicidaki primer amin gruplarindan biri ile, indirgeyici aminasyon vasitasiyla reaksiyona sokulmasi suretiyle polisakaritin, ilave baglayiciya bir C-N baglantisi vasitasiyla birlestirilmis oldugu bir polisakarit-ilave baglayici bilesik olusturulmasi ve (az) ilave baglayicinin serbest terminalinin baglayici ile reaksiyona sokulmasi. Ref. l, 2 ve 13,te kullanilan konjugasyon proseslerinin aksine proses, tasiyici molekülün EDAC ile aktiflestirilmesini gerektirmez, böylelikle istenmeyen yan reaksiyonlarin önüne geçirilir. Bulus ayrica bu prosesle elde edilen veya elde edilebilen konjugati da sunar.
Bulusun birinci vönünün (a) adimi Bulusun birinci yönünün (a) adiminda polisakarit, bir baglayiciya birlestirilerek, baglayicinin serbest terminalinin bir ester grubu oldugu bir polisakarit-baglayici ara maddesi olusturulur. Bu nedenle baglayici, en az bir terminalinin bir ester grubu oldugu biridir. Diger terminal, asagida açiklandigi gibi, polisakarit ile reaksiyona girerek polisakarit-baglayici ara maddesi olusturabilecek sekilde seçilir. (a) adimindaki birlestirmenin direkt olarak gerçeklestigi yöntemler açiklanir. Bu yöntemlerde polisakarit tipik olarak baglayiciya, polisakarit içerisindeki bir primer amin grubu kullanilarak birlestirilir.
Bu yöntemlerde baglayicinin her iki terminalinde de tipik olarak bir ester grubu vardir. Bu, birlesmenin, ester gruplarindan birini, polisakarit içerisindeki primer amin grubu ile nükleofilik asil ikamesi vasitasiyla reaksiyona sokmak suretiyle gerçeklesmesini saglar.
Reaksiyon, polisakaritin, baglayiciya bir amid baglantisi vasitasiyla birlestirildigi bir polisakarit-baglayici ara maddesi ile sonuçlanir. Bu nedenle bu yöntemlerde baglayici, polisakarit içerisindeki primer amin grubu ile reaksiyona girmesi için bir birinci ester grubu ve tasiyici molekül içerisindeki primer amin grubu ile reaksiyona girmesi için bir ikinci ester grubu saglayan iki fonksiyonlu bir baglayicidir. Örnegin Xi-L-XZ formülüne ait iki fonksiyonlu bir baglayici kullanilabilir ki burada X1, polisakarit içerisindeki primer amin grubu ile reaksiyona girebilen bir ester grubudur; X2, tasiyici molekül içerisindeki primer amin grubu ile reaksiyona girebilen bir ester grubudur; ve L, baglayici içerisindeki bir baglayici yarimdir. Tipik L gruplari, 1 ila 10 karbon atomlu (örn. C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Cm) düz Zincirli alkiller, Özellikle de -(CH2)4-°tür. X-L-X formülüne ait homo-iki fonksiyonlu baglayicilar, özellikle uygundur ki burada iki X grubu, birbiriyle aynidir ve primer amin gruplarinin her ikisi ile de reaksiyona girebilir; ve burada L, baglayici içinde bir baglayici yarimdir. Bir tipik X grubu, N-oksisuksinimiddir. L tipik olarak L'-L2- L'- formülüne sahiptir ki burada L', karbonildir. Tipik L2 gruplari, 1 ila karbon atomlu (öm. C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Cm) düz Zincirli alkiller, özellikle de -(CH2)4-,tür. Dolayisiyla bir tipik baglayici, adipik asit N-hidroksisuksinimid diesterdir (SIDEA) ve mucitler, bu bilesigi, baglayici olarak özellikle uygun bulmustur: 0 O 0 N/OMO/N O 0 Bulusun düzeneklerinde adim (a)°daki birlestirme, dolayli olarak, yani' baglayiciya birlestirilmeden önce polisakariti türevlendirmek için kullanilan bir ilave baglayici ile gerçeklesir. Polisakarit, ilave baglayiciya, polisakaritin indirgeyici terminalindeki bir karbonil grubu kullanilarak birlestirilir. (a) adimindaki birlestirme, iki adimi kapsar: (al) karbonil grubunun ilave baglayici ile reaksiyona sokulmasi ve (az) ilave baglayicinin serbest terminalinin baglayici ile reaksiyona sokulmasi. Ilave baglayici, her iki terminalde de bir primer amin grubuna sahip oldugundan adim (al),in, primer amin gruplarindan birini, polisakarit içerisindeki karbonil grubu ile indirgeyici aminasyon yoluyla reaksiyona sokmak suretiyle gerçeklesmesi mümkün olur. Kullanilan bir primer amin grubu, polisakarit içerisindeki karbonil grubu ile reaktiftir. Mucitler, bir hidrazid (özellikle -C(=O)NHNH2) veya hidroksilamino (-ONH2) grubunun uygun oldugunu bulmuslardir. Ilave baglayicinin her iki terminalinde de tipik olarak ayni primer amin grubu mevcuttur. Reaksiyon, polisakaritin, ilave baglayiciya bir C-N baglantisi vasitasiyla birlestirildigi bir polisakarit-ilave baglayici ara maddesi ile sonuçlanir.
Bulusa ait proses, adim (a1)”den sonra bir polisakarit-ilave baglayici ara maddesi ile sonuçlanir. Ilave baglayicinin serbest terminali, bir primer amin grubudur. Adim (az), bu primer amin grubunu, primer amin grubunun, yukarida tarif edilen dogrudan birlestirmeyi kapsadigi açiklanan yöntemlerde kullanilmasiyla ayni sekilde, ayni baglayici, vb. ile kullanmak suretiyle gerçeklesir.
Bu ikinci adim, polisakaritin, baglayiciya, ilave baglayici vasitasiyla birlestirildigi bir polisakarit-baglayici ara maddesi ile sonuçlanir ki bu ilave baglayici, baglayiciya, bir amid baglantisi vasitayla birlestirilmistir. Bu dolayli düzeneklerde ilave baglayici, polisakarit içerisindeki karbonil grubu ile reaksiyona girmesi için bir birinci primer amin grubu ve baglayici içerisindeki ester gruplarindan biri ile reaksiyona girmesi için bir ikinci primer amin grubu saglayan iki fonksiyonlu bir baglayicidir. Örnegin ilave baglayici olarak Yi-L-Yz formülüne ait iki fonksiyonlu bir baglayici kullanilabilir ki burada YI, polisakarit içerisindeki karbonil grubu ile reaksiyona girebilen bir primer amin grubunu kapsar; YZ, baglayici içerisindeki ester gruplarindan biri ile reaksiyona girebilen bir primer amin grubunu kapsar; ve L, ilave baglayici içerisindeki bir baglayici yarimdir. Tipik L gruplari, 1 ila 10 karbon atomlu (örn. C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Cm) düz Zincirli alkiller, özellikle de -(CH2)4-”tür. Y-L-Y formülüne ait homo-iki fonksiyonlu baglayicilar, ilave baglayici olarak özellikle uygundur ki burada iki Y grubu, birbiriyle aynidir ve hem karbonil grubu hem de ester grubu ile reaksiyona girebilir; ve burada L, ilave baglayici içinde bir baglayici yarimdir. Bir tipik Y grubu, bir -NHNHZ grubudur. L tipik olarak L'-L2-L'- formülüne sahiptir ki burada L', karbonildir. Tipik L2 gruplari, 1 ila 10 karbon atomlu (örn. C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, Cg, C9, Cm) düz Zincirli alkiller, özellikle de -(CH2)4-”tür. Dolayisiyla bir tipik ilave baglayici, adipik asit dihidraziddir (ADH) ve mucitler, bu bilesigi, bulus için ilave baglayici olarak özellikle uygun bulmuslardir. Bununla birlikte daha kisa ilave baglayicilar da kullanilabilir ve mucitler, karbodihidrazinin (CDH, yani' Y-L-Y, burada Y, -NHNHjdir ve L, karbonildir), bulus için ilave baglayici olarak özellikle uygun oldugunu bulmuslardir.
Bulusun birinci vönünün (b) adimi Adim (b)”de, polisakarit-baglayici ara maddesi içerisindeki baglayicinin serbest terminalinde bulunan ester grubu, tasiyici molekül içerisindeki bir primer amin grubu ile reaksiyona sokulur.
Reaksiyon, nükleofilik asil ikamesiyle gerçekleserek baglayicinin tasiyici moleküle bir amid baglantisi vasitasiyla birlestirildigi bir polisakarit-baglayici-tasiyici molekül konjugati olusturur.
Adim (a) ile adim (b) arasinda reaksiyona girmemis baglayici, polisakarit-baglayici ara maddesinden çikarilabilir. Tercihen bu çikarma islemi, bulusun üçüncü yönüne ait olup, asagida detayli bir sekilde tarif edilen prosesle gerçeklestirilir.
Polisakaritzprotein oraninin (a/a), 1:10 (yani fazla protein) ile 10:] (yani fazla polisakarit) arasinda oldugu konjugatlar, polisakaritin ve tasiyici molekülün moleküler agirliklarina bagli olarak bulusa ait proseslerle üretilebilir. Örnegin konjugatlarda, örn. 10:] ila 1:l araligindaki oranlarla fazla sakarit olabilir; 1.5: 1 ,in üzerindeki oranlar, CRM197”ye birlestirilmis S. Paratyphi”den O-antijen-nüve için tipiktir . &1 ile 1.511 arasindaki oranlar, daha spesifik olarak 6:1 ile 2:1 arasindaki oranlar, özel ilgi konusudur. Buna karsilik önceki teknigin prosesleriyle yapilmis olan konjugatlarda örn. Referans 13ate 1:17 ile 1:1.4 arasinda olmak üzere fazla protein olma egilimi vardir. Mucitler, 621 ile 221 arasindaki, özellikle 321 ile 421 arasindaki oranlarin, S.
Paratyphi°de O-antijen-nüve ve CRM197 ihtiva eden konjugatlar için faydali oldugunu bulmuslardir. Bu konjugatlar, verimli bir sekilde üretilebilir ve daha yüksek miktarlarda polisakarit ihtiva eden konjugatlara (öm. 521 ile 6:1 arasindaki oranlarda) benzer immünojeniklik gösterirler. Polisakarit:protein orani (mol/mol) bakimindan bulusa ait prosesler, birden fazla polisakarit zincirinin her bir tasiyici moleküle konjuge edilmesine izin verir, bu yüzden 1:1”in üzerindeki oranlar tipiktir.
Kompozisyonlar, az miktarda serbest tasiyici içerebilir [14]. Verilen bir tasiyici proteinin, bulusa ait bir kompozisyon içinde hem serbest hem de konjuge edilmis formda mevcut oldugu durumda konjuge edilmemis form tercihen bir bütün olarak kompozisyondaki tasiyici proteinin toplam miktarinin %5,inden fazla degildir, tercihen agirliga göre %2°den az bulunur ve daha fazla tercihen agirliga göre %l”den az bulunur.
Konjugasyondan sonra serbest ve konjuge edilmis polisakaritler ayrilabilir. Hidrofobik etkilesim kromatografisi (HIC), tegetsel akis filtrasyonu, boyut dislama kromatografisi, vb. dahil olmak üzere birçok uygun yöntem vardir [bakiniz ayni zamanda ref. 15 ve 16, vb.].
Konjugat tercihen su ve/veya bir fizyolojik tampon içinde çözülebilirdir.
Bulusun ikinci yönü Bir ikinci yönde bulus, bir karbonil grubunun, bir polisakaritin indirgeyici terminalinde indirgeyici aminasyonuna yönelik bir proses saglar ki burada polisakarit, bir nüve alani ve nüve alanina bagli bir Gram-negatif bakterinin bir lipopolisakaritinden bir O-antijen içerir ki burada indirgeyici aminasyon, 4 ile 5 arasindaki bir pH,de gerçeklestirilir. Indirgeyici aminasyon, 4.1 ile 4.9 arasindaki, öm., 4.2 ile 4.8 arasindaki, örnegin 4.3 ile 4.7 arasindaki bir pH,de, örn., 4.4 ile 4.6 arasindaki bir pH”de gerçeklestirilebilir. Mucitler, bu nispeten düsük pH°nin, reaksiyonun, ref. 133teki 7 günlük reaksiyona kiyasla hizli bir sekilde (örn. 30°Csde 1 saat içinde) gerçeklesmesine izin verdigini bulmuslardir.
Tercihen indirgeyici aminasyon, bulusun birinci yönüne ait prosese, spesifik olarak yukarida tarif edilen dolayli birlestirmeyi kapsayan düzenegin (al) adimina göre gerçeklestirilir.
Indirgeyici aminasyon, karbonil grubunun yukarida tarif edilen ilave baglayici ile reaksiyona sokulmasini kapsayabilir. Ilave baglayici tipik olarak her iki terminalde de bir primer amin grubuna sahip oldugundan indirgeyici aminasyonun, primer amin gruplarindan birini, karbonil grubu ile reaksiyona sokmak suretiyle gerçeklesmesi mümkün olur. Kullanilan bir primer amin grubu, polisakarit içerisindeki karbonil grubu ile reaktiftir. Mucitler, bir hidrazid (Özellikle -C(:O)NHNH2) veya hidroksilamino (-ONHZ) grubunun uygun oldugunu bulmuslardir. Ilave baglayicinin her iki terrninalinde de tipik olarak ayni primer amin grubu mevcuttur. Reaksiyon, polisakaritin, ilave baglayiciya bir C-N baglantisi vasitasiyla birlestirildigi bir polisakarit-ilave baglayici ara maddesi ile sonuçlanir.
Ilave baglayici özellikle Yl-L-Yz formülüne ait iki fonksiyonlu bir baglayici olabilir ki burada Yi, polisakarit içerisindeki karbonil grubu ile reaksiyona girebilen bir primer amin grubunu kapsar; YZ, tasiyici moleküle baglanmis olabilen bir ikinci reaktif grubu, örnegin bir primer amin grubunu veya bir -SH grubunu kapsar; ve L, ilave baglayici içerisinde bir baglayici yarimdir. Tipik L gruplari, 1 ila 10 karbon atomlu (örn. C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Cm) düz Zincirli alkiller, özellikle de -(CH2)4-”tür. Y-L-Y formülüne ait homo-iki fonksiyonlu baglayicilar, ilave baglayici olarak özellikle uygundur ki burada iki Y grubu, birbiriyle aynidir ve bunlar, karbonil grubu ile reaksiyona girebilir; ve burada L, ilave baglayici içinde bir baglayici yarimdir. Bir tipik X grubu, bir -NHNHZ grubudur. L tipik olarak L'- L2-L'- formülüne sahiptir ki burada L', karbonildir. Tipik L2 gruplari, 1 ila 10 karbon atomlu (örn. C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, Cm) düz Zincirli alkiller, özellikle de -(CH2)4-'tür. Dolayisiyla bir tipik ilave baglayici, adipik asit dihidraziddir (ADH) ve mucitler, bu bilesigi, bulus için ilave baglayici olarak özellikle uygun bulmuslardir.
Bununla birlikte daha kisa ilave baglayicilar da kullanilabilir ve mucitler, karbodihidrazinin (CDH, yani' Y-L-Y, burada Y, - NHNHzsdir ve L, karbonildir), bulus için ilave baglayici olarak özellikle uygun oldugunu bulmuslardir.
Bu proses, polisakaritin, S. Paratyphi A, S . Typhimurium veya S. Enteritidis°e ait bir lipopolisakaritten O-antijen-nüve oldugu durumda özellikle uygundur.
Indirgeyici aminasyon, organik kimya alaninda standart bir tekniktir ve asi kullanimi için O-antijen-nüvenin de dahil oldugu kapsüler polisakarit konjugatlarinin üretiminde yogun sekilde kullanilmaktadir
[13]. Bulusun ikinci yönünde, polisakarit içerisindeki bir karbonil grubu, örn. yukarida tarif edilen ilave baglayici içerisinde bir primer amin grubu ile reaksiyona girer. Bu adim, bulusun birinci yönüne ait proseste, spesifik olarak yukarida tarif edilen dolayli birlestirmeyi kapsayan düzeneklerin (al) adiminda da gerçeklesir. Indirgeyici aminasyona uygun sekilde polisakaritin primer amin grubu ile uygun bir indirgeyici ajan (örn. Siyanoborohidridler, örn., sodyum siyanoborohidrid NaBH3CN; boran-piridin; sodyum triasetoksiborohidrid; borohidrid degistirme resini; vb.) varliginda birlestirilmesi suretiyle ulasilabilir. Uzman kisiler, indirgeyici aminasyon için uygun kosullari tanimlayabilir. Örnegin mucitler, polisakaritin (S. Paratyphi , S. Typhimurium veya S. Enteritidis°ten O- antijen-nüve), m1 basina 40 mg,de 100 mM sodyum asetat içinde pH 4.5 ”te ilave baglayici (ADH veya CDH) ile, 2:1”lik bir polisakaritzilave baglayici oraninda (a/a) ve NaBH3CN ile, 2:131ik bir polisakaritzNaBHgCN oraninda isleme tabi tutulmasinin uygun oldugunu bulmuslardir. Reaksiyon tipik olarak 1 saat süreyle 30°C,de birakilir.
Bulusun üçüncü yönü Bir üçüncü yönde bulus, bulusun birinci yönüne ait proses sirasinda edinilmis olabilen bir polisakarit-baglayici ara maddesi kontaminasyonunun azaltilmasina yönelik olup, reaksiyona girmemis baglayicinin sulu kosullar altinda 5sten düsük bir pH,de çökeltildigi bir adimi kapsayan bir proses saglar. Bu proses, dioksan veya etil asetat gibi toksik solventler kullanilmasini gerektirmez. Özellikle proses, dekontaminasyonun sulu kosullar altinda gerçeklesmesine izin verirken polisakarit-baglayici ara maddesinin eylemsizlesmesini (örn. hidroliz yoluyla) engeller.
Bu proses, baglayicinin SIDEA oldugu durumda özellikle uygundur.
Polisakarit özellikle bir lipopolisakaritten, özellikle S. Paratyphi A, S.
Typhimurium veya S. Enteritidis°ten O-antijen-nüve olabilir.
Tipik olarak çökelmenin gerçeklestigi pH, 2 ile 5 arasidir. Bulusa ait düzeneklerde pH, 2-3, 3-4 veya 4-5 arasi olabilir. Bu leyi elde etmek için herhangi bir uygun sulu çözelti kullanilabilir. Örnegin mucitler, bir sulu tampon çözeltisi, örn. sulu sitrat tamponu ilavesinin uygun oldugunu bulmuslardir. Sitrat tamponu örnegin pH 3°te lOOmM sodyum sitrat olabilir. Ilave edilen sulu çözeltinin hacmi, reaksiyona girememis baglayicinin nihai karisim içinde çözülmemesini saglayacak sekilde seçilir. Örnegin mucitler, özellikle SIDEA baglayicisi için >%60”lik bir su içeriginin (hacim/hacim) (örn. %61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 vb.) uygun oldugunu bulmuslardir.
Bu kosullar, örnegin, reaksiyon karisiminin t0plam hacminin pH 3,te lOOmM sodyum sitrat çözeltisi ile üçe katlanmasi suretiyle elde edilebilir. Karisim tipik olarak yaklasik 30 dakika süreyle birakilir. Çökelti, örn. santrifüjleme yoluyla çikarilir.
Mucitler ayrica pHsyi düsürmek için hidroklorik asit (HCl) içeren bir sulu çözeltinin de uygun oldugunu bulmuslardir. Örnegin reaksiyon karisimina, son karisimda 55 ppm”lik bir HCl konsantrasyonuna kadar 2 kat hacimde HCl 82.5 ppm ilave edilerek 2.3,lük bir pH elde edilir. Çözelti, 4°C°de 30 dakika süreyle karistirilir ve çözelti, santrifujleme yoluyla geri kazanilir.
Polisakarit-baglayici ara maddesi, çözeltiden, alkol ile çökeltme yoluyla geri kazanilabilir. Bu yolla polisakarit-baglayici ara maddesinin reaksiyona girmemis baglayici ile kontaminasyonu, öm. ara madde içinde baglayicinin mol sayisina göre reaksiyona girememis baglayicinin mol sayisi olarak %10,un altina düsürülür.
Alkol özellikle etanol olabilir, bununla birlikte diger alt alkoller (örn. metanol, propan-l-ol, propan-2-ol, butan-l-ol, butan-Z-ol, 2-metil- propan-l-ol, 2-metil-propan-2-ol, dioller vb.) de kullanilabilir.
Polisakarit-baglayici ara maddesi ihtiva eden çözeltiye tipik olarak etanol ilave edilerek %80 ile %95 arasi bir nihai etanol konsantrasyonuna (hacim/hacim) ulasilir. Optimum son etanol konsantrasyonu, polisakarit-baglayici ara maddesine bagli olabilir.
Polisakaritin S. Paratyphi A7dan O-antijen oldugu durumda mucitler, yaklasik %8571ik bir konsantrasyonun uygun oldugunu bulmuslardir.
Polisakarit-baglayici ara maddesi ihtiva eden çözeltiye etanol saf formda ilave edilebilir veya bir karistirilabilir solvent (örn. su) ile seyreltilmis bir formda ilave edilebilir. Çökmüs olan polisakarit- baglayici ara maddesi, örn. santrilîijleme yoluyla geri kazanilir. Bu, bir daha kullanilmadan önce yikanabilir.
Bir düzenekte SIDEA baglayicili ara madde, 2-propanol (%90 nihai konsantrasyon h/h) kullanilarak çökeltilir ve OAg-SIDEA çökeltisi, mutlak etanol ile yikanir.
Tercihen geri kazanilmis olan polisakarit-baglayici ara maddesi daha sonra yukarida tarif edilen bulusun birinci yönünün (b) adiminda kullanilir. Bulusun bu üçüncü yönüne ait proses özellikle bulusun birinci yönüne ait prosesin (a) ile (b) adimlari arasinda gerçeklesebilir.
Polisakarit Bulus, bir polisakariti kapsar. Tipik olarak polisakarit, bir KDO alt birimi olan bir indirgeyici terminale sahiptir. KDO alt birimi, bir karbonil grubu içerir. Bulusun birinci yönünde karbonil grubu, prosesin (a) adiminda polisakariti baglayiciya birlestirmek için kullanilir. Bulusun ikinci yönünde karbonil grubu, prosesin indirgeyici aminasyon bölümünde yer alir. Her iki yönde de her ne kadar polisakaritin bir KDO alt birimi olan bir indirgeyici terminale sahip olmasi tipik olsa da uzman kisi, indirgeyici terminallerinde bir karbonil grubu olan baska polisakaritlerin de kullanilabilecegini takdir edecektir. Örnegin mucitler, N. meningiti'dz's serogrup Xaten kapsüler polisakaritin kullanilabilecegini bulmuslardir. Bulusta kullanima uygun diger bakteriyel kapsüler polisakaritler, asagida tarif edilmistir.
Polisakarit, nüve alani ve nüve alanina baglanmis bir Gram-negatif bakterinin lipopolisakaritinden bir O-antijen içerir. Nüve alani, lip0p01isakaritin, Gram negatif bakterinin dis membraninda bulunan bir bilesenidir. Lipopolisakarit ayrica bir lipit A alanina nüve alani vasitasiyla baglanmis bir O-antijen de içerir. Nüve alaninda, dogal lipopolisakarit içerisindeki lipit A alanina baglanmis olan bir terminal KDO alt birimi bulunur. Bu KDO alt birimi, yukarida tarif edilen, bulusta kullanilan bir polisakaritin indirgeyici terminalinde bulunabilen KDO alt birimi olabilir. Bulusta kullanilan polisakarit, bir Gram-negatif bakterinin bir lipopolisakaritinden bir nüve alani ve nüve alanina baglanmis bir O-antijen (burada bir O-antijen-nüve olarak anilir) içerir. O-antijen-nüve özellikle bir spesifik lipopolisakaritten (yani lipit A alani olmayan lipopolisakaritten) O- antijen ve nüve alanidir. Bu O-antijen-nüvelerin saflastirilmasi için bir tipik proses, ilk olarak 1960,larda tarif edilmis olan Westphal ve Jannhn fenol-su yöntemine [ref. 17] ardindan lip0p01isakaritin asetik asit veya susuz hidrazin ile detoksifiye edilmesine dayanir. Örnegin bu yöntem, ref. l*de S. Typhimurium”a; ref. Zade S. Paratyphi A”ya; ref. 13,te S. Dysentery 'ye°ye ve ref. lOsda E. 6011' 01577ye uygulandi. Bu yöntemler, bakterilerin sedimente edilmesini; kültürün formalin sabitleme yoluyla eylemsizlestirilmesini; lipopolisakaritin sicak fenolle özümlenmesini; ve özümlenmis olan lipopolisakaritin asetik asit ile (lipit A”yi çikarmak için) veya susuz hidrazin ile (lipit A”y1 de- O-asile etmek için) isleme tabi tutulmasinin ardindan saflastirilmasini kapsar. Bu yöntemler ayrica bozulmus hücre kütlesinin veya özümlenmis lipopolisakaritin DNAse, RNAse ve proteinaz ile isleme tabi tutulmasiyla impüritelerin azaltilmasini da kapsayabilir.
Indirgeyici aminasyonun, burada tarif edilen KDO karbonil grubunda gerçeklestirilmesi için lipit A çikarilarak KDO grubu, reaksiyona girmek için serbest birakilmalidir. Bu amaçla polisakaritin özümlenmesi ve saflastirilmasi islemi tercihen örnegin referans 1-2- -13 ve 18°de tarif edildigi gibi asetik asit hidroliziyle gerçeklestirilebilir. Bununla birlikte bulus, farkli saflastirma yöntemleriyle elde edilen O-antijen-nüve de dahil olmak üzere uygun herhangi bir O-antijen-nüveye uygulanabilir.
Tipik olarak O-antijen ve nüve alani, bir Salmonella bakterisinin lipopolisakaritinden, örn. Salmonella serogruplari A, B veya D9den ve özellikle de Salmonella Paratyphi A,dan gelir. Salmonella serogruplari A, B ve D'nin O-antijenleri tarif edilmistir ve bunlarin, ortak bir omurgayi paylastigi düsünülür: -›2-0t-D-Manp-(l-›4)-0L-L- Rh&p-(l->3)-(1-D-Galp-(l->. Salmonella Paratyphi A”nin serogrup spesifisitesi, omurganin manozuna baglanmis (l-›3) olan bir (x-3,6- dideoksiglukoz (a-D-paratoz) tarafindan kazandirilir. Omurganin 0L-L- ramnozu, C-3,te kismen O-asetile edilir (ref. 2, Sekil la). Ot-D- paratozun da çesitli derecelerde O-asetilasyona sahip oldugu bildirilmistir. S. Paratyphi A7dan gelen O-antijen bazen O:2 olarak anilir. S. Paratyphi A°dan gelen O-antijen ve nüve alaninin yayinlanmis yapisi, nüve alaninda KDO alt birimi ve primer amin grubunun da oldugu durumda (bir pirofosfoetanolamin grubu içerisinde) Sekil 2,de gösterilmistir. Bulus dahilindeki O-antijen ayrica S. Typhimurium°dan da gelebilir. Bu O-antijenin tekrarlayan biriminin yayinlanmis yapisi (bazen 024,5 olarak anilir), Sekil lb,de gösterilmistir. O-antijen ayrica S. Enteriditis°ten de gelebilir (O:9, tekrarlayan birimin yayinlanmis yapisi, Sekil lc,de gösterilmistir).
Dogal olarak türetilen O-antijenler, bu O-antijenlerin yayinlanmis yapilarina kiyasla yapisal varyasyonlar ihtiva edebilir.
O-antijen ve nüve alani ayrica Shi'gella türünden, Örn., S.flexneri”den de gelebilir. Bulusta kullanilan O-antijen ve nüve alanini saglayan diger Shi'gella türleri, S. sonnei', S. dysenteriae ve S. B0ydii°dir [ref. l9]. O-antijen ve nüve alani ayrica E. coli, örn., E. 0011' 0157°den de gelebilir. Bulusta kullanilan O-antijen ve nüve alanini saglayabilen diger lipopolisakarit içerikli Gram-negatif bakteriler, Klebsiella pneumonia [ref. 20], Vibrio cholerae [ref. 21], Haemophilus influenzae ve Neisseri'a meningiti'di's [ref. 22],dir.
Polisakarit, dogada bulunan sekildeki polisakarite göre kimyasal olarak modifiye edilmis olabilir. Örnegin polisakarit, de-O-asetile edilmis (kismen veya tamamen) olabilir ancak O-antijen içeren polisakaritlerin de-O-asetile edilmis olmamasi tercih edilir. Eger bu olursa de-asetilasyon, diger isleme adimlarindan önce, o sirada veya sonra gerçeklesebilir ancak tipik olarak herhangi bir birlestirme adimindan önce gerçeklesir. De-asetilasyon, vb.°nin etkisi, rutin deneylerle degerlendirilebilir. Örnegin O-asetilasyonun S. Paratyphi A O-antijen ile alakasi, referans 2”de müzakere edilmistir. Bu dokümanda S. Paratyphi Alnin dogal O-antijeninin yaklasik %80 O- asetilasyona sahip oldugu söylenir. Konjuge edilmis de-O-asetile edilmis O-antijen, bakterisidal aktiviteye sahip anti-lipopolisakarit antikorlari ortaya çikarmadi. Buna göre mevcut bulusta kullanilan S.
Paratyphi A O-antijende O-asetilasyon, %0 ile 100 arasinda olabilir ancak O-antijenin O-asetile edilmis olmasi tercih edilir. O-asetilasyon seviyesi, O-antijen saglayan bakteri susuna bagli olabilir. Örnegin S.
Paratyphi A O-antijeninin O-asetilasyon derecesi, %lO-lOO, %20-100, %30-100, %40-100, %50-100, %55-95, %55-85, %60-80 veya %65- 75 arasinda olabilir. Tipik olarak S. Paratyphi A O-antijeninde O- asetilasyon derecesi, %55-85, özellikle de %65-75 arasindadir.
Bununla birlikte bazi suslarda daha yüksek, örn. %70-100, özellikle de %85-95 arasindaki O-asetilasyon dereceleri de tipiktir.
Polisakaritin O-asetilasyon derecesi, bu konuda bilinen herhangi bir yöntemle, örnegin proton NMRlsi (örn. referans 23”te tarif edildigi gibi), karbon NMR7si (öm. referans 2,de tarif edildigi gibi), Hestrin yöntemi [24] veya HPAEC-CD [25] ile belirlenebilir. O-asetil gruplari, hidroliz yoluyla, örnegin susuz hidrazin gibi bir baz ile isleme tabi tutularak çikarilabilir [2]. Polisakaritte yüksek 0- asetilasyon seviyelerini korumak için O-asetil gruplarinin hidrolizine yol açan islemler, örn. pH sinirlarindaki islemler minimum düzeye indirilir.
Polisakaritler, oligosakaritler formunda kullanilabilir. Bunlar, satlastirilmis polisakaritin parçalara ayrilmasi (öm., hidroliz yoluyla) ve genelde bunu takiben istenen büyüklükteki fragmanlarin saflastirilmasi yoluyla rahatlikla olusturulur.
Polisakaritler, bilinen tekniklerle saflastirilabilir. Bununla birlikte bulus, dogal kaynaklardan saflastirilmis polisakaritler ile sinirli degildir ve polisakaritler, toplam veya kismi sentez gibi baska yöntemlerle de elde edilebilir.
Tasiyici molekül Bulus, tipik olarak proteinler olan tasiyici moleküllerin kullanimini kapsar. Genel olarak sakaritlerin tasiyicilara kovalent konjugasyonu, sakaritleri T'den bagimsiz antijenlerden T”ye bagimli antijenlere çevirdiginden bunlarin immünojenikligini güçlendirir ve bu sekilde immünolojik hafizanin prime edilmesini saglar. Konjugasyon bilhassa pediatrik asilar için faydalidir [örn. ref. 26] ve iyi bilinen bir tekniktir [örn. ref. 27 ila 35] Tercih edilen tasiyici proteinler, difteri veya tetanos toksinleri gibi bakteriyel toksinler veya bunlarin toksoidleri veya mutantlaridir.
Bunlar, konjugat asilarda yaygin olarak kullanilir. CRM197 difteri toksini mutanti özellikle tercih edilir [36].
Diger uygun tasiyici proteinler arasinda Nmeningi'ti'di's dis membran protein kompleksi [37], sentetik peptitler [3839], isi soku proteinleri [40,41], bogmaca proteinleri [42,43], sitokinler [44], lenfokinler [44], hormonlar [44], büyüme faktörleri [44], çesitli patojen türevli antijenlerden çoklu insan CD4+ T hücre epitoplari içeren yapay proteinler [45], örn., N19 [46], Haemophilus influenzae'dan protein D [47-49], pnömolisin [50] veya bunun toksik olmayan türevleri [51], pnömokok yüzey proteini PspA [52], demir alimi proteinleri [53], Clostri'dium di'ßici'le'den toksin A veya B [54], rekombinant Pseudomonas aeruginosa eksoprotein A (rEPA) [55] vb. yer alir.
Tasiyici protein karisimlarinin kullanilmasi da mümkündür. Tek bir tasiyici protein, birçok farkli polisakariti tasiyabilir [56].
Konjugatlar ve baska antijenlerden kombinasyonlar Yukarida tarif edildigi gibi tek tek konjugatlar saglamanin yani sira bulus, bulusa ait bir konjugat ve bir veya daha fazla baska antijen içeren bir kompozisyon da saglar. Kompozisyon tipik olarak bir immünoj enik kompozisyondur.
Baska antij en tercihen Salmonella Typhi (Vi) veya Citrobacter Vi*dan kapsüler polisakarittir. Bu kapsüler sakarit, örn. Rekombinant mutant P. aeruginosa eksoproteini A3ya (ref. 57”de oldugu gibi) veya daha tercihen CRMlgfye [36, 58, 59] konjuge edilmis olabilir. Mevcut bulusta kullanilmasi tercih edilen bir Vi-CRM197 konjugati, referans 607ta tarif edilir.
Baska antijen(ler), bulusa ait bir proses yada farkli bir proses ile hazirlanmis baska konjugatlari kapsayabilir. Örnegin bir düzenekte mevcut bulus, S. Typhimurium O-antijen-nüve konjugatini ve bir S.
Enteriditis O-antijen-nüve konjugatini içeren bir kompozisyon saglar; burada konjugatlardan en az biri (daha tipik olarak ikisi de), bulusa ait bir proses ile hazirlanir. Bir baska düzenekte mevcut bulus, bir S.
Paratyphi A O-antijen-nüve konjugati, bir S. Typhimurium O-antijen- nüve konjugati ve bir S. Enteriditis O-antijen-nüve konjugati içeren bir kompozisyon saglar, burada konjugatlardan en az biri (örn. ikisi veya daha fazlasi, tipik olarak üçünün tamami), bulusa ait bir proses ile hazirlanir.
Diger düzeneklerde bir veya daha fazla baska antijen, sunlardan seçilir Streptococcus pneumoniaeüen bir sakarit antijeni [6777. ref. 61-63; ref. 64, bölüm 22 ve 23]. hepatit A virüsünden, örn., eylemsizlestirilmis virüsten bir antijen [6171. 65, 66; ref. 64, bölüm 15]. hepatit B Virüsünden bir antijen, öm., yüzey ve/Veya nüve antijenleri [ör/1. 66,67; ref. 64, bölüm 16]. hepatit C Virüsünden bir antijen [örn. 68].
Bordetella pertussi's'ten bir antijen, öm., B.pertussis'ten bogmaca holotoksini (PT) ve filamentöz hemaglutinin (FHA) ile istege bagli olarak kombinasyon halinde pertaktin ve/veya aglutinojenler 2 ve 3 [öm ref. 69 ve 70; ref. 64, bölüm 21]. bir difteri antijeni, örn., bir difteri toksoidi [örn. Ref. 64, bölüm 13]. bir tetanos antijeni, örn., bir tetanos toksoidi [örn. ref. 64, bölüm 27].
Haemophi'lus influenzae B”den bir sakarit antijeni [örn., ref. 64, bölüm 14]; N. gonorrhoeaeiden bir antijen; Chlamydi'a pneumoniadden bir antijen [örn., 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77].
Chlamydi'a trachomatis”ten bir antijen [örn., 78].
Porphyromonas gingivalis°ten bir antijen [örn., 79]. polio antijen(ler)i [örn., 80, 81; ref. 64, bölüm 24], örn., IPV. liyofilize edilmis eylemsizlestirilmis virüs gibi [öm., 83, RabAvertTM] kuduz antijen(ler)i [örn., 82]. kizamik, kabakulak ve/veya kizamikçik antijenleri [örn., ref. 64, bölüm 19, 20 ve 26]; influenza antijen(ler)i [örn., ref. 64, bölüm 17 ve 18], örn., hemaglutinin ve/Veya nöraminidaz yüzey proteinleri.
Moraxella catarrhalis'ten bir antijen [örn.84].
Streptococcus pyogenes'ten bir antijen (A grubu streptokok) [örn.85, 86, 87].
Streptococcus agalactiae'den bir antijen (B grubu streptokok) [öm 88, -90].
S. Epi'dermi'di'ssten bir antijen [örn. ATCC-31432, SE-360 ve SE-lO suslarindan elde edilebilen tip I, II ve/Veya III kapsüler polisakariti, ref. 91, 92 ve 93°te tarif edildigi gibi].
Bir sakarit veya karbonhidrat antijeninin kullanilmasi durumunda bu tipik olarak immünojenikligi güçlendirmek için bir tasiyiciya konjuge edilir. H. influenzae B ve pnömokok sakarit antijenlerinin konjugasyonu iyi bilinir.
Toksik protein antijenleri gerekirse detoksifiye edilebilir (örn., bogmaca toksininin kimyasal ve/Veya genetik vasitalarla detoksifikasyonu [70]).
Kompozisyon içine bir difteri antijeninin dahil edildigi durumlarda ayrica tetanos antijeni ve bogmaca antijenlerinin de dahil edilmesi tercih edilir. Benzer sekilde bir tetanos antijeninin dahil edildigi durumlarda ayni zamanda difteri ve bogmaca antijenlerinin de dahil edilmesi tercih edilir. Benzer sekilde bir bogmaca antijeninin dahil edildigi durumlarda ayni zamanda difteri ve tetanos antijenlerinin de dahil edilmesi tercih edilir. Bu kombinasyonlar ayrica hepatit B Virüsünden bir antij en ve/Veya H. influenzae B“den bir sakarit antij eni, tipik olarak her ikisini de içerebilir.
Kompozisyon içindeki antijenler tipik olarak her biri ml basina en az lug olacak bir konsantrasyonda bulunacaktir. Genel olarak verilen herhangi bir antijenin konsantrasyonu, o antijene karsi bir immün yanit ortaya çikarmak için yeterli olacaktir.
Bulusa ait kompozisyonda proteinlerin kullanilmasina bir alternatif olarak, antijeni sifreleyen nükleik asit de kullanilabilir [örn., ref. 94 ila 102]. Bulusa ait kompozisyonlarin protein bilesenleri yerine bu yüzden proteini sifreleyen nükleik asit (genellikle DNA, örn., bir plazmid formunda) konulabilir.
Farmasötik kompozisyonlar ve yöntemler Bulus, (a) bulusa ait bir konjugat ve (b) bir farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyici içeren bir farmasötik kompozisyon saglar. Tipik 'farmasötik açidan kabul edilebilir tasiyicilar', kompozisyonu alan kisi için zararli antikorlarin üretilmesini kendi basina saglamayan herhangi bir tasiyiciyi kapsar. Uygun tasiyicilar tipik olarak büyük, yavas metabolize edilen makromoleküller, örn., proteinler, polisakaritler, polilaktik asitler, poliglikolik asitler, polimerik amino asitler, amino asit kopolimerleri, sukroz [103], trehaloz [104], laktoz ve lipit agregatlaridir (öm., yag damlalari veya lipozomlar). Bu tür tasiyicilar, bu konuda siradan uzmanliga sahip olan kisilerce iyi bilinir.
Kompozisyonlar ayni zamanda su, tuzlu su, gliserol, vb. gibi seyrelticiler de ihtiva edebilir. Ek olarak, islatici veya emülsife edici ajanlar, pH tamponlama ajanlari ve benzerleri gibi yardimci maddeler de mevcut olabilir. Steril pirojensiz fosfat tamponlu fizyolojik tuz, tipik bir tasiyicidir. Farmasötik açidan kabul edilebilir eksipiyanlarin kapsamli bir müzakeresi, referans 105,te mevcuttur.
Bulusa ait kompozisyonlar, sulu formda (yani, çözeltiler veya süspansiyonlar) veya kurutulmus formda (örn., liyofilize edilmis) olabilir. Kurutulmus bir asi kullanilirsa bu, enjeksiyondan önce sivi bir ortam içinde yeniden sekillendirilmis olacaktir. Konjugat asilarinin liyofilizasyonu, bu konuda bilinir, örn. MenjugateTM ürünü, liyofilize edilmis formda sunulurken NeisVac-CTM ve MeningitecTM, sulu formda sunulmaktadir. Konjugatlarin liyofilizasyon sirasinda stabil kalmalarini saglamak için kompozisyona tipik olarak öm., `l mg/ml ile mg/ml arasinda (örn., yaklasik 25 mg/ml) bir seker alkolü (örn., manitol) ve/veya bir disakarit (örn., sukroz veya trehaloz) dahil edilebilir.
Kompozisyonlar, flakonlar içinde sunulabilir veya hazir doldurulmus siringalar içinde sunulabilir. Siringalar, igneli veya ignesiz satilabilir.
Bir siringa, tek bir doz kompozisyon içerirken bir flakon, tek bir doz veya çoklu dozlar içerebilir.
Bulusa ait sulu kompozisyonlar ayrica bir liyofilize edilmis formdan baska asilarin yeniden olusturulmasi için de uygundur. Bulusa ait bir kompozisyonun bu tür ekstemporane yeniden olusturma için kullanilacagi durumda bulus, iki flakon içerebilen veya bir hazir doldurulmus siringa ve bir flakon içerebilen bir kit sunar; siringanin içindekiler, enjeksiyondan Önce Ilakon içeriklerinin yeniden aktiflestirilmesinde kullanilir.
Bulusa ait kompozisyonlar, birim doz formunda veya çoklu doz formunda paketlenebilir. Çoklu doz formlari için flakonlar, önceden doldurulmus siringalara tercih edilir. Etkili dozaj hacimleri, rutin sekilde belirlenebilir ancak örn., intramüsküler enjeksiyon için kompozisyonun tipik bir insan dozu, 0.5ml hacme sahiptir.
Kompozisyonun pH,si tipik olarak 6 ile 8 arasinda, örn., yaklasik Tdir. Stabil pH, bir tampon kullanilarak korunabilir. Bir kompozisyonun, bir alüminyum hidroksid tuzu içermesi durumunda bir histidin tamponu kullanilmasi tipiktir [106]. Kompozisyon, steril ve/veya pirojensiz olabilir. Bulusa ait kompozisyonlar, insanlar söz konusu oldugunda izotonik olabilir.
Bulusa ait kompozisyonlar, immünojeniktir ve daha tercihen asi kompozisyonlaridir. Bulusa göre asilar, profilaktik (yani enfeksiyonu engellemek için) yada terapötik (yani enfeksiyonu tedavi etmek için) olabilir ancak tipik olarak profilaktik olacaktir. Asilar seklinde kullanilan immünojenik kompozisyonlar, immünolojik açidan etkili miktarda antijenin yani sira gerektiginde baska herhangi bir bilesen de içerir. 'Immünolojik açidan etkili miktar' ile bir kisiye tek bir dozda veya bir serinin bir parçasi halinde bu miktarin uygulanmasinin, tedavi veya engelleme için etkili olmasi kast edilir. Bu miktar, tedavi edilecek bireyin saglik ve fiziksel durumuna, tedavi edilecek kisinin yasina, taksonomik grubuna (öm. insan disi primat, primat Vb.), kisinin immün sisteminin antikorlari sentezleme kapasitesine, istenen koruma derecesine, asinin formülasyonuna, tedaviyi gerçeklestiren doktorun tibbi durum degerlendirmesine ve diger ilgili faktörlere bagli olarak degiskenlik gösterir. Miktarin, rutin deneylerle belirlenebilen, nispeten genis bir aralik içine girmesi beklenir.
Her bir doz içerisindeki bir münferit sakarit antijeni miktari genel olarak 1-50 ug arasinda (sakarit kütlesi olarak ölçülür), öm. yaklasik lpg, yaklasik 2.5ug, yaklasik 4ug, yaklasik 5 ug veya yaklasik lOug olacaktir.
Bulusa ait kompozisyonlar, çesitli formlarda hazirlanabilir. Örnegin kompozisyonlar, sivi çözeltiler yada süspansiyonlar halinde olmak üzere enjeksiyonluklar seklinde hazirlanabilir. Kompozisyon öm., bir inhaler olarak, bir ince toz veya bir sprey kullanilarak pulmoner uygulama için hazirlanabilir. Kompozisyon, bir fitil veya pesar halinde hazirlanabilir. Kompozisyon, örn., sprey, damla, jel veya toz halinde nazal, aural veya oküler uygulama için hazirlanabilir [örn., ref. 107 ve 108]. Pnömokok sakaritlerinin [lO9,llO], Hib sakaritlerinin
[111], MenC sakaritlerinin [112] ve Hib ve MenC sakarit konjugatlari karisimlarinin [113] nazal yoldan uygulanmasi ile basari saglandigi bildirilmistir.
Bulusa ait kompozisyonlar, özellikle çok dozlu formatta paketlendigi durumda bir antimikrobiyal içerebilir.
Bulusa ait kompozisyonlar, deterjan, örn. bir Tween (polisorbat), örnegin Tween 80 içerebilir. Deterjanlar genellikle düsük düzeylerde, örn.

Claims (1)

  1. ISTEMLER 1. Bir karbonil grubunun, bir polisakaritin indirgeyici terrninalinde indirgeyici aminasyonuna yönelik bir proses; burada polisakarit, bir nüve alani ve bir Gram-negatif bakterinin bir lipopolisakaritinden nüve alanina bagli bir O-antijen içerir ki burada indirgeyici aminasyon, 4 ile 5 arasindaki bir pH,de gerçeklestirilir. . Istem l”e ait proses olup, burada karbonil grubu, polisakaritin indirgeyici terminalinde bir KDO alt birimi içerisinde yer alir. . Istem 1 veya istem Z'ye proses olup, burada lipopolisakarit, bir Salmonella bakterisindendir. . Istem 3,e ait proses olup, burada lipopolisakarit, S. Paratyphi A, S.Typhimurium veya S. Enteritidis°tendir. . Bir polisakarit ve bir tasiyici molekül içeren bir konjugat hazirlanmasina yönelik, asagidaki adimlari içeren bir proses: (a) polisakaritin bir baglayiciya birlestirilmesiyle, baglayicinin serbest terminalinin bir ester grubu oldugu bir polisakarit- baglayici bilesik olusturulmasi; ve (b) ester grubunun, tasiyici molekül içerisindeki bir primer amin grubu ile reaksiyona sokulmasiyla, baglayicinin tasiyici moleküle bir amid baglantisi vasitasiyla birlestirilmis oldugu bir polisakarit-baglayici-tasiyici molekül konjugati olusturulmasi; burada polisakarit, bir Gram- negatif bakterinin bir lipopolisakaritinden bir nüve alani içerir; burada adim (a), baglayiciya birlestirilmeden önce polisakariti türevlendirmek için kullanilan bir ilave baglayici ile gerçeklesir ve burada ilave baglayicinin her iki terrninalinde de bir primer amin grubu vardir ve polisakarit, ilave baglayiciya, polisakaritin indirgeyici terrninalindeki bir karbonil grubu kullanilarak, su iki adimi kapsayan bir prosesle birlestirilir: (al) karbonil grubunun, ilave baglayicidaki primer amin gruplarindan biri ile, 4 ile 5 arasindaki bir pH”de indirgeyici aminasyon vasitasiyla reaksiyona sokulmasi suretiyle polisakaritin, ilave baglayiciya bir C-N baglantisi vasitasiyla birlestirilmis oldugu bir polisakarit-ilave baglayici bilesik olusturulmasi ve (az) ilave baglayicinin serbest terrninalinin baglayici ile reaksiyona sokulmasi. . Istem 5°e ait proses olup, burada baglayicinin her iki terminalinde de bir ester grubu vardir ve polisakarit, baglayiciya, ester gruplarindan birini nüve alanindaki bir primer amin grubu ile nükleofilik asil ikamesi yoluyla reaksiyona sokmak suretiyle birlestirilir, böylelikle polisakaritin baglayiciya bir amid baglantisi vasitasiyla birlestirilmis oldugu bir polisakarit-baglayici bilesik olusturulur. . Istem 5 veya 6adan herhangi birine ait proses olup, burada lipopolisakarit, S. Paratyphi A, S.Typhimurium veya S.Enteritidis,tendir ve primer amin grubu, bir pirofosfoetanolamin grubu içerisinde yer alir. 8. Istem 5 ila 77den herhangi birine ait proses olup, burada tasiyici molekül, bir difteri veya tetanos toksini veya bunun toksoidi veya mutantidir. 9. Istem 8,e ait proses olup, burada tasiyici molekül, CRM197 difteri toksini mutantidir. 10. Istem 5 ila 9,dan herhangi birine ait prosesle elde edilen veya elde edilebilen, bir polisakarit ve bir tasiyici molekül içeren bir konjugat. 11. Istem 5 ila 9”dan herhangi birine ait proses sirasinda edinilen veya edinilebilen bir polisakarit-baglayici bilesik kontaminasyonunun azaltilmasina yönelik, reaksiyona girmemis baglayicinin sulu kosullar altinda 5,ten düsük bir pH°de çökeltildigi bir adimi kapsayan bir proses.
TR2019/09110T 2011-09-14 2012-09-14 Sakarit-protein glikokonjugatları yapmaya yönelik yöntemler. TR201909110T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161534751P 2011-09-14 2011-09-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201909110T4 true TR201909110T4 (tr) 2019-07-22

Family

ID=47143982

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/09110T TR201909110T4 (tr) 2011-09-14 2012-09-14 Sakarit-protein glikokonjugatları yapmaya yönelik yöntemler.

Country Status (6)

Country Link
US (3) US9358284B2 (tr)
EP (1) EP2755683B1 (tr)
CN (1) CN103917245B (tr)
ES (1) ES2732708T3 (tr)
TR (1) TR201909110T4 (tr)
WO (1) WO2013038375A2 (tr)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
HUE058896T2 (hu) 2010-10-01 2022-09-28 Modernatx Inc N1-metil-pszeudo-uracilt tartalmazó ribonukleinsavak és azok felhasználásai
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
RU2648950C2 (ru) 2011-10-03 2018-04-02 Модерна Терапьютикс, Инк. Модифицированные нуклеозиды, нуклеотиды и нуклеиновые кислоты и их применение
EP2791160B1 (en) 2011-12-16 2022-03-02 ModernaTX, Inc. Modified mrna compositions
AU2013243951A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of secreted proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
SG11201407440WA (en) * 2012-05-22 2014-12-30 Novartis Ag Meningococcus serogroup x conjugate
EP2922554B1 (en) 2012-11-26 2022-02-23 ModernaTX, Inc. Terminally modified rna
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2015029056A1 (en) 2013-08-24 2015-03-05 Bharat Biotech International Limited A bacterial vaccine and methods for manufacture thereof
EA201690675A1 (ru) 2013-10-03 2016-08-31 Модерна Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности
CN105879020A (zh) * 2016-03-30 2016-08-24 北京成大天和生物科技有限公司 一种c群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法
MX2019002489A (es) 2016-09-02 2019-10-21 Sanofi Pasteur Inc Vacuna contra neisseria meningitidis.
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
CA3048981A1 (en) 2016-12-30 2018-07-05 Sutrovax, Inc. Polypeptide-antigen conjugates with non-natural amino acids
EP3492481A1 (en) * 2017-11-30 2019-06-05 Vaxxilon AG Vaccine against klebsiella pneumoniae
CN109879967A (zh) * 2017-12-15 2019-06-14 苏州和锐生物科技有限公司 一种乙酰氨基葡萄糖偶联物的制备方法及应用
EP4061412A1 (en) 2019-11-22 2022-09-28 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine
CN115721710A (zh) * 2021-08-27 2023-03-03 康希诺生物股份公司 一种肺炎球菌结合疫苗组合物
WO2024102605A1 (en) * 2022-11-07 2024-05-16 Merck Sharp & Dohme Llc Conjugation of saccharide antigens using acetoxyborohydrides

Family Cites Families (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5452794A (en) 1977-09-30 1979-04-25 Kousaku Yoshida Extracting of polysacchride from capusle containing epidermis staphylococus
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US6090406A (en) 1984-04-12 2000-07-18 The Liposome Company, Inc. Potentiation of immune responses with liposomal adjuvants
US5916588A (en) 1984-04-12 1999-06-29 The Liposome Company, Inc. Peptide-containing liposomes, immunogenic liposomes and methods of preparation and use
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
NZ241926A (en) 1988-08-25 1993-08-26 Liposome Co Inc Immunisation dosage form comprising a salt of an organic acid derivative of a sterol and an antigen
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
DE68907045T2 (de) 1989-01-17 1993-12-02 Eniricerche Spa Synthetische Peptide und deren Verwendung als allgemeine Träger für die Herstellung von immunogenischen Konjugaten, die für die Entwicklung von synthetischen Impfstoffen geeignet sind.
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
CA2063271A1 (en) 1989-07-14 1991-01-15 Subramonia Pillai Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
DE69113564T2 (de) 1990-08-13 1996-05-30 American Cyanamid Co Faser-Hemagglutinin von Bordetella pertussis als Träger für konjugierten Impfstoff.
US5153312A (en) * 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
JP3755890B2 (ja) 1992-06-25 2006-03-15 スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） アジュバント含有ワクチン組成物
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
EP0812593B8 (en) 1993-03-23 2010-11-10 SmithKline Beecham Biologicals S.A. Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
AU5543294A (en) 1993-10-29 1995-05-22 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
GB9326174D0 (en) 1993-12-22 1994-02-23 Biocine Sclavo Mucosal adjuvant
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
JPH07203950A (ja) 1994-01-26 1995-08-08 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 被覆されたファフィア・ロドチーマ酵母及びその造粒物
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
JP4233113B2 (ja) 1995-06-07 2009-03-04 グラクソスミスクライン・バイオロジカルス・ソシエテ・アノニム 多糖類抗原−キャリア蛋白接合体および遊離キャリア蛋白を有してなるワクチン
GB9513261D0 (en) 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
EP1005368B1 (en) 1997-03-10 2009-09-02 Ottawa Hospital Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide in combination with alum as adjuvants
US6818222B1 (en) 1997-03-21 2004-11-16 Chiron Corporation Detoxified mutants of bacterial ADP-ribosylating toxins as parenteral adjuvants
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
EP0977588B1 (en) * 1997-04-24 2004-10-06 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Coupling of unmodified proteins to haloacyl or dihaloacyl derivatized polysaccharides for the preparation of protein-polysaccharide vaccines
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
JP4426091B2 (ja) 1997-09-05 2010-03-03 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム サポニンを含有する水中油型エマルション
AU762606B2 (en) 1997-11-21 2003-06-26 Genset S.A. Chlamydia pneumoniae genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection
GB9725084D0 (en) 1997-11-28 1998-01-28 Medeva Europ Ltd Vaccine compositions
KR100735653B1 (ko) 1997-11-28 2007-07-06 세로노 제네틱스 인스티튜트 에스.에이. 클라미디아 트라코마티스 게놈 서열과 폴리펩티드, 이의단편 및 이의 용도, 특히, 감염의 진단, 예방 및 치료 용도
KR100585408B1 (ko) 1998-02-12 2006-06-01 와이어쓰 홀딩스 코포레이션 인터루킨-12로 제형된 폐렴구균 및 수막구균 백신
US7018637B2 (en) 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
US6645503B1 (en) * 1998-03-10 2003-11-11 Wyeth Holdings Corporation Antigenic conjugates of conserved lipopolysaccharides of gram negative bacteria
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
GB9817052D0 (en) 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CA2350775A1 (en) 1998-11-12 2000-05-18 The Regents Of The University Of California Chlamydia pneumoniae genome sequence
AU1626199A (en) 1998-12-04 2000-06-26 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The A vi-repa conjugate vaccine for immunization against salmonella typhi
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
US6146902A (en) 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
EP1034792A1 (en) 1999-03-11 2000-09-13 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Intranasal delivery of pneumococcal polysaccharide vaccines
JP4846906B2 (ja) 1999-03-19 2011-12-28 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン
FR2791895B1 (fr) 1999-03-23 2001-06-15 Pasteur Merieux Serums Vacc Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide
CA2365914A1 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
CA2396871A1 (en) 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
WO2001078787A2 (en) 2000-04-18 2001-10-25 Endobiologics, Incorporated Lipopolysaccharide-conjugate vaccine for sepsis treatment
DE60139690D1 (de) 2000-07-03 2009-10-08 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae
WO2002026757A2 (en) 2000-09-26 2002-04-04 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory activity of immunostimulatory oligonucleotide analogs by positional chemical changes
EP2189473A3 (en) 2000-10-27 2010-08-11 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Nucleic and proteins from streptococcus groups A & B
AU2002309706A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
RU2323002C2 (ru) 2001-07-26 2008-04-27 Чирон Срл. Вакцины, содержащие алюминиевые адъюванты и гистидин
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
GB0210128D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Chiron Spa Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
EP1597348A4 (en) 2002-08-26 2010-03-31 Novartis Vaccines & Diagnostic GENES OF STREPTOCOCCUS PRESERVED OR SPECIFIC
EP1551357B1 (en) 2002-09-13 2014-07-16 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Group b streptococcus vaccine
FR2850106B1 (fr) * 2003-01-17 2005-02-25 Aventis Pasteur Conjugues obtenus par amination reductrice du polysaccharide capsulaire du pneumocoque de serotype 5
DE602004029657D1 (de) 2003-03-24 2010-12-02 Intercell Ag Verbesserte impfstoffe
US8048432B2 (en) * 2003-08-06 2011-11-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
WO2005092928A1 (en) * 2004-03-11 2005-10-06 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
JP5393978B2 (ja) 2004-04-05 2014-01-22 ゾエティス・ピー・エルエルシー マイクロ流動化された水中油型乳剤及びワクチン組成物
GB0502095D0 (en) * 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Conjugation of streptococcal capsular saccharides
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
US8703095B2 (en) 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
GB0810894D0 (en) 2008-06-13 2008-07-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Conjugated saccharide
EP2519265B1 (en) * 2009-12-30 2018-11-14 GlaxoSmithKline Biologicals SA Polysaccharide immunogens conjugated to e. coli carrier proteins

Also Published As

Publication number Publication date
US10683370B2 (en) 2020-06-16
CN103917245A (zh) 2014-07-09
WO2013038375A2 (en) 2013-03-21
EP2755683B1 (en) 2019-04-03
WO2013038375A3 (en) 2013-06-20
US20180334515A1 (en) 2018-11-22
US10113009B2 (en) 2018-10-30
EP2755683A2 (en) 2014-07-23
US20140329998A1 (en) 2014-11-06
CN103917245B (zh) 2017-06-06
US9358284B2 (en) 2016-06-07
ES2732708T3 (es) 2019-11-25
US20160297895A1 (en) 2016-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201909110T4 (tr) Sakarit-protein glikokonjugatları yapmaya yönelik yöntemler.
JP7494276B2 (ja) 非天然アミノ酸とのポリペプチド抗原接合体
AU2021206895B2 (en) Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
AU2019208271B2 (en) Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
JP5818826B2 (ja) 連鎖球菌性莢膜糖の複合
EP2056871B1 (en) Protein matrix vaccines and methods of making and administering such vaccines
KR101897317B1 (ko) 면역원성 조성물
JP6170932B2 (ja) ｓｐｒ００９６抗原およびｓｐｒ２０２１抗原を含むキャリア分子
TR201808055T4 (tr) Kapsüler polisakaritlerin çözünürleştirilmesi ve kombinasyon aşıları.
TR201811681T4 (tr) İmmünojenik bileşimler.
JP2017214601A (ja) Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ．ａｕｒｅｕｓ５型および８型莢膜多糖の結合体
EP3174553B1 (en) Glycoconjugate vaccines comprising basic units of a molecular construct expressing multiple built-in epitopes for the formulation of a broad-spectrum vaccine against infections due to enteropathogenic bacteria
JP2013504588A (ja) 免疫原性の高いタンパク質マトリックスワクチン
KR20230135178A (ko) 네이세리아 메닌기티디스 백신
WO2020010016A1 (en) Self-adjuvanted immunogenic conjugates
Zou et al. Preparation of glycoconjugate vaccines
안소정 Development of efficient Vi polysaccharide conjugate vaccine and its vaccination strategy for prevention of typhoid fever