SU680635A3 - Способ определени перекиси водорода - Google Patents

Description

3 дит к по влению нежелательных окрашиваний и потере чувсТвительности при длительном хранении. Кроме того катион радикала зелено-голубого цвета , образующийс  при вступлении в реакцию с индикатором, не очень стабилен , так как при дальнейшее окис;лении относительно легко переходит в хинодиимин коричневого цвета. Поэтому окраска анализируемых проб вследствие образовани  коричневого оттенка имеет нечистый тон, который быстро мен етс  и поэтому уже через непродолжительное врем  его нельз  правильно оценить. Хот  катион ради кала может быть стабилизирован в значйтёльном объеме анионными смачи вател ми, последние не всегда приме нимы, так как они могут разрушать оксидазы уже на первой стадии реакции , Целью изобретени   вл етс  получение экспресс-проб, которые имели бы устойчивые радикалы крас щих веществ . Поставленна  цель достигаетс  оп сьшаемым способом определе(ш  перекиси водорода, включающемобр аэование окрашенного соединени  с примен нием в качестве индикаторов окислени  3,3. ,5,5 -тетраалкилбензидинов общей формулы i - где R,R2,R3,R4 одинаковые или ра ные радикалы, представл ющие собой простые или разветвленные, цепи низших алкильных групп с 1-6, предпочтительно с l-4j атомш ш углерода. Отличие способа состоит в применении 3,З,5,5-тетраалкилбензидино общей . в качестве индикато ров окислени  в экспресс-пробах дл  обнаружени  и определени  перекиси водорода, соединений, которые взаимодействуют с образованием перекиси водорода и соединений, ведугдих себ  как перекиси. Способы получени  соединений .фор мулы : известны. Не описанные в литературе соединени  , 3,з -диметил-5,5 -диэтилбензидин и 3,3 ,5,5-тетраизопропилбен зидин могут быть получены из о-толи дина и этилена или бензидина и пропилена . По изобретению тетраалкилбензиди ны могут быть применены дл  обнаружени  глюкозы и крови в моче, холестерина в сыворотке, перекиси водорода в молоке или в пленках дл  про дл  определени  глюкозы в крови и сыворотке и во многих других пробах Все эти пробы отличаютс  тем, что цветные-реакции  рче, стабильнее и лучше оттенены, чем при применении -то.пидина, так как окраска катионов радикала тетраалкилбензидинов от зелено-голубой до зеленой не загр зн етс  примесью коричневых хинондииминов . В экспресс-пробах, описанных в примерах, четко про вл ютс  свойства тетраалкилбензидинов, причем у отдельных представителей этих соединений наблюдаетс  по сравнению с О-толидином повышенна  стойкость, например, при хранении индикаторной умаги дл  обнаружени  крови в моче. Благодар  повышенной стабильности катионов радикалов в пробных пленках при определении глюкозы анализ возможен в достаточно большой промежуток времени. Пример 1. Пробна  бумага дл  обнаружени  крови в моче. Фильтровальную бумагу (Шл йхер и 1г1юль № 23SL) последовательно пропитывают в растворах 1 и 2 и высушивают при 4 О С. Раствор 1. 1,2 М буферный раствор цитрата (рЙ 5,25) 35,0 мл Этилендиаминова  уксусна  кислота, динатриева  соль0,1 г Диоктилнатрийсульфосукцинат 0,5 г 2,5-Диметилгексан-2 ,5-дигидроокись (70%-на ) 1,6 г Триморфолид фосфорной кислоты 12,7 г Этанол30,0 мл Дистиллированна  вода До 100 мл Раствор 2. 3,3,5,5-тетраметилбензидин 0,3 г Фенантридин0,2 г ТолуолДо 100 мл Дл  пробы примен ют белую бумагу, котора  окрашиваетс  в зелено-голубой цвет при погружении в мочу, содержащую кровь, спуст  с. Если эритроциты в норме, то бумага окрашиваетс  в зелено-голубой цвет. Если происходит гемолиз или в моче находитс  гемоглобин, то бумага тотчас же окрашиваетс  также в зелено-голугбой цвет. Чувствительность 5 эритроцитов/2цм или соответствующего количества гемоглобина. Количество эритроцитов ниже нормы также может вызвать при известных услови х по вление отдельных зелено-голубых точек на пробной бумаге. Чувствительность по миоглобину соответствует чувствительности по гемоглобину. После трехдневной выдержки при 60 С пробные бумажки окрашиваютс  в жел- товатнй цвет, их чувствительность в основном остаетс  прежней, а брем  реакции увеличиваетс  на 60-90 с. Пробна  6yi.iara, пропитанна  о-тоЛидином , после такой же выдержки, как при пропитке тетраметилбензидином. 5 желто-коричневый цве окрашиваетс  в 20 эритроцитов ее чувствительность Бумаги такой же чувствительности и стабильности, которые взаимодейст вуют медленнее и дают чисто-зеленый цвет, получают при применении эквимол рных количеств 3 ,3 , 5, З-тетраэтил-З , 3- метил 5, 5-диэтил- или 3,3,5,5-тетраизопропиленбензидино Пример 2. Бумага дл  проб дл  обнаружени  глюкозы в моче. Фильтровальную бумагу (Шл йхер и Люль 597NF) пропитывают в раствора 1 и 2 и сушат при . Раствор 1. Глюкозаоксидаза (70 об/мг)222 мг Пероксидаза (70 об/мг) 28 мг Морфолиноэтансульфанат-буффер (рН 6,1,ОМ) 50 мл Татразин80 мг Поливинилпирролидин 300 мг .Дист иллированна  вода, до ЮО мл 5 Раствор 2. 3, З ,5,5-тетраметилбензидин600 мг ЭтанолДо 100 мл Бумажки дл  проб, которые содержат эквимол рные количества 3,3, 5,5-тетраэтилбензидина или о-толидина, получают по методике примера 1. Цвета реакций этих бумажек в моче, содержащей глюкозу, через 60-120 с после погружени  приведены в таблице. При применении тетраметилбензидина эти цвета не измен ютс  10-15 мин, при сушке они приобретают более голубоватый оттенок и остаютс  такими в течение всего дн . Цвет пробной бумаги, пропитанной тетраэтилбензидином, при cjmiKe слегка бледнеет, и остаетс  таким не сколько дней. Пробна  бумага, nportV танна  0-толидином, через 5-10 мин желтеет и бледхнеет, а после сушки в течение 2-4 ч после концентрации глюкозы совершенно бледнеет или окрашиваетс  в слабый коричнево-оливковый цвет.

ЖелтыйЖелтый Желтый

О

Светло-зеленыйСветло-зеленыйСветло-зеленый

50

Зеленый . .Зелено-голубойСредне-зеленый 100

Зелено-голубойГолубовато-Зеленый 250

Голубовато-Черно-голубойТемно-зеленый

500 зеленый

Черно-оливковый Черный 000

Бумажки дл  проб, которые содержат эквимол рные количества3,3-диметил-5 ,5 диэтилбензидина по устойчивости цвета практически не отличаютс  от бумажек, пропитанных тетраэтилбензидином .

Пример 3. Бумажки дл  проб дл  обнаружени  перекиси водорода.

Фильтровальную бумагу пропитывают в растворах 1 и 2 и высушивают при .

Раствор 1.

Тринатрийцитрат,

дигидрат

Лимонна  кислота,

моногидрат

Пероксидаза (70 об/мг)

Альгинат натри 

Полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат (твин) зеленый

Густой зеленый

Винилпирролидин-винилацетат-Мишполимеризат . 375 мг Дистиллированна  вода До 100 мл Раствор 2.

3,3 ,5,5-тетраметилбензидин 500 мг

АцетонДо 100 мл

Так, приготовленна  бумага дл  проб с перекисью водорода дает в водных растворах, например молоке, зелено-голубые цветовые реакции при концентраци х менее 0,1 мг %.

Пример 4. Бумага дл  проб 60 дл  обнаружени  холестерина и сложных эфиров холестерина в сыворотке. Фильтровальную бумагу (Шл йхер и 597NF, Инд) пропитывают растворами в определенной послсдовательнос65 ти и высушивают при температуре 40 Г.