PL97554B1 - Srodek analityczny do wykrywania i oznaczania nadtlenkow i substancji dzialajacych nadtlenkowo - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest srodek analitycz¬ ny do wykrywania i oznaczania nadtlenków i sub¬ stancji dzialajacych nadtlenkowo.Reakcja nadtlenku wodoru ze wzkaznikami u- tleniania katalizowana peroksydaza lub substan¬ cjami dzialajacymi nadtlenkowo, prowadzaca do zwiazków barwnych, odgrywa w chemii anali¬ tycznej szczególna role, poniewaz poza wykrywa¬ niem nadtlenku wodoru i peroksydaz pozwala o- na takze na oznaczenie szeregu substancji, które z tlenem i oksydaza reaguja tworzac nadtlenek wodoru. Nizej wyliczono przykladowo niektóre z tych substancji a w nawiasach im odpowiadaja¬ ce oksydazy: glikoza (oksydaza glikozowa), galak- toza (oksydaza galaktozowa), L-aminokwas (oksy¬ daza Lr-aminokwasowa), cholesterol (oksydaza cho¬ lesterolowa) i kwas moczowy (oksydaza moczano¬ wa). Przede wszystkim sa to substancje, których wykrywanie i oznaczanie ma wazne znaczenie w diagnostyce medycznej i w chemii srodków spo¬ zywczych.Jako reakcja wykrywajaca peroksydazy nada¬ je sie ta metoda zwlaszcza przy oznaczaniu hemo¬ globiny, przy czym zamiast nadtlenku wodoru ja¬ ko utleniacz mozna stosowac wodoronadtlenki or¬ ganiczne.Ze wzgledu na swe wielkie znaczenie w szyb¬ kosciowej diagnostyce medycznej sa dla prawie wszystkich wyzej wymienionych reakcji opisane srodki analityczne, które umozliwiaja jakosciowe Z» i ilosciowe oznaczanie poszczególnych skladników reakcji. Stosuje sie przy tym nasaczalne nosniki lub filmy, które zawieraja wszystkie odczynniki i w których po zetknieciu z ciecza badana zachodzi reakcja barwna, o ile obecna jest w niej substan¬ cja poszukiwana. Utworzona barwe ocenia sie za pomoca porównawczych tablic barwnych lub na fotometrach remisyjnych tak, ze mozna wniosko¬ wac o stezeniu substancji reagujacych.Jako wskazniki utleniania dla tych srodków a- nalitycznych zalecano w literaturze fachowej i patentach szereg zwiazków, jednak tylko kilka z nich zyskalo uznanie w praktyce. Chodzi przy tym prawie wylacznie o zwiazki z szeregu benzydy- nowego i to zwlaszcza o o-tolidyne. Pomimo sze¬ rokiego rozpowszechnienia tego wskaznika i jego niewatpliwych zalet w porównaniu z innymi zna¬ nymi wskaznikami ma o-tolidyna jednak takze wady. Jedna z nich jest to, ze substancja ta w recepturach dla srodków analitycznych nie zaw¬ sze jest optymalnie trwala, co przy dluzszym skla¬ dowaniu moze prowadzic do niepozadanych zmian barwy i obnizen stopnia czulosci. Inna wada jest powstajacy w reakcji ze wskaznikiem, niezbyt trwaly niebieskozielony kation rodnika, który w warunkach dalszego utleniania przechodzi stosun¬ kowo latwo brunatna chinodwuimine. Barwy reakcyjne wskutek ubocznego brunatnego zabar¬ wienia maja zatem czesciowo brudny wyglad, przy tym ^mieniaja sie one szybko a stad tez prze- 97 55497 554 3 waznie juz w chwile po zaleconym okresie od¬ czytu nie daja sie prawidlowo ocenic. Jest to za¬ sadnicza wada w analizach seryjnych i dla do¬ kumentacji. Wprawdzie kation rodnika mozna w pewnym zakresie stabilizowac anionowymi srodka¬ mi zwilzajacymi, jednakze nie daja sie one sto¬ sowac w kazdym przypadku, poniewaz moga dzia¬ lac destabilizujaco na oksydazy w reakcji pier¬ wotnej.Stwierdzono, ze próbniki szybkosciowe powyz¬ szego rodzaju, daja trwalsze i stabilniejsze rodni¬ ki barwne^ gdy zamiast o-tolidyny stosuje sie 3,3' S^-czteroalkilobenzydyny o ogólnym wzorze przedstawionym na rysunku, w którym Rj, R2, R3 i R4 stanowia jednakowe lub rózne podstawniki i oznaczaja prostolancuchowe lub rozgalezione niz¬ sze rodniki alkilowe o 1—6, korzystnie o 1—4 a- tomach wegla.Oczekiwana na podstawie struktury, zasadnicza przydatnosc 3,3',5,5'-czterometylobenzydyny do wykrywania krwi utajonej w moczu i stolcu jest opisana w publikacji V.. R. Holland'a i wspólpra¬ cowników, przy czym jako zalete w porównaniu z tolidyna podkresla sie nizsza rakotwórczosc. Nie¬ oczekiwanie wieksza trwalosc aminy i kationu jej rodnika w srodku analitycznym nie zostala jed¬ nak przez Holland'a opisana, poniewaz nie prze¬ prowadzil on odpowiednich badan. Do takich ba¬ dan nie bylo zreszta bodzca, gdyz uzytkownicy te- - go typu srodków analitycznych nie manipuluja bezposrednio odczynnikami, a tym samym problem rakotwórczosci nie odgrywa przy tym praktycznie zadnej roli.Zwiazki o ogólnym wzorze przedstawionym na rysunku sa "takze wspomniane (kanadyjski opis patentowy nr 818 344) dla przypadku srodków a- nalitycznych do wykrywania halogenków wzgled¬ nie pseudohalogenków w plynach ustrojowych. Te srodki analityczne zawieraja dodatkowo zwiazki miedzi (II), które reaguja z halogenkami tworzac halogenki miedzi (I) i wolne chlorowce, a te ostat¬ nie natomiast utleniaja zwiazki benzydynowe. U- tlenianie to prowadzi oczywiscie do takich samych barwnych kationów rodnikowych jak katalizowane peroksydaza utlenianie wodoronadtlenkami. We wspomnianym opisie patentowym z licznych, za¬ strzezonych pochodnych benzydyny wyrózniono o- tolidyne (3,3'-dwumetylobenzydyne), z czego mozna wnioskowac, ze czteroalkilobenzydyny sa -mniej odpowiednie dla próbników szybkosciowych.Wieksza trwalosc zwiazków o wzorze przedsta¬ wionym na rysunku i ich kationów rodnikowych jest nadto o tyle zaskakujaca, ze raczej nalezaloby oczekiwac podwyzszonej zdolnosci do utleniania a tym samym dalszej reakcji do brunatnej chino- nodwuiminy, niz wplywu dodatkowych grup alki¬ lowych na cisnienie gazu elektronowego.Srodek analityczny wedlug wynalazku zawiera jako wskaznik utleniania 3,3',5,5'-czteroalkiloben- zydyne o ogólnym wzorze przedstawionym na ry¬ sunku, w którym R1? R2, R3 i R4 stanowia jedna¬ kowe lub rózne podstawniki i oznaczaja proste lub rozgalezione nizsze rodniki alkilowe o 1—6, korzystnie o 1—4 atomach wegla.Wedlug wynalazku mozna czteroalkilobenzydyny 4 stosowac we wszystkich tych przypadkach, w któ¬ rych dotychczas stosowano o-tolidyne, przy czym znane receptury ewentualnie mozna nieco zmody¬ fikowac. Stosowane w- celu stabilizacji zabarwie- nia, anionowe zwilzacze mozna ewentualnie zasta¬ pic mniej aktywnymi lub zaniechac ich wprowa¬ dzania. I tak, np. mozna czteroalkilobenzydyny stosowac w bibulach probierczych do wykrywania glikozy w moczu, cholesterolu w Osoczu, nadtlen¬ ku wodoru w mleku, albo stosowac w filmach probierczych do oznaczania glikozy w krwi i o- soczu i w wielu srodkach analitycznych. Wszyst¬ kie te srodki analityczne wyrózniaja sie. tym, ze reakcje barwne sa bardziej swiecace, trwalsze a niekiedy latwiej dajace sie stopniowac niz w przy¬ padku stosowania o-tolidyny, poniewaz niebiesko- zielone do zielonych zabarwienia kationów rodni¬ kowych czteroalkilobenzydyn nie sa zabrudzone o- becnoscia brunatnych chinonodwuimin.W przypadkach srodków analitycznych, opisa¬ nych w nizej podanych przykladach ujawniaja sie szczególnie wlasciwosci czteroalkilobenzydyn sto¬ sowanych wedlug wynalazku, przy czym poszcze¬ gólni przedstawiciele tej grupy zwiazków moga wykazywac jeszcze bardziej korzystne dzialanie.I tak np. pojawia sie podwyzszona trwalosc czte¬ roalkilobenzydyn o wzorze przedstawionym na ry¬ sunku, w porównaniu z o-tolidyna, zwlaszcza pod¬ czas skladowania bibul probierczych do wykrywa¬ nia krwi w moczu. Podwyzszona stabilnosc katio¬ nów rodnikowych prowadzi w przypadku filmów probierczych do tego, ze pomiar mozna prowa¬ dzic w stosunkowo dlugim okresie czasu.Zastosowanie czteroetylobenzydyny w próbach oznaczania glukozy w moczu na bibule probierczej pozwala na otrzymanie prawie niezmienionej przez dlugi okres czasu barwy reakcji, co ma szczegól¬ nie istotne znaczenie w przypadkach akcji wczes¬ nego rozpoznawania, w której osobnicy badan wy¬ sylaja- uzytkowane tasmy probiercze do centralne¬ go osrodka analitycznego.Sposoby wytwarzania zwiazków o wzorze przed¬ stawionym na rysunku sa znane, jednak dotych¬ czas sa blizej scharakteryzowane zaledwie 3,3% ,5'-czterometylobenzydyna [V. R. Holland i wspólpracownicy, Tetrahedron 30, 3299—3302 (1974)] i 3,3^5,5'^zteroetylofoenzyidyna' [R. Stron i wspól¬ pracownicy, Angew. Chem. 69, 124—131 (1957)].Wytwarzanie czterometylobenzydyny wedlug wy¬ zej cytowanego V. R. Holland'-a i wspólpracowni¬ ków prowadzono w znany sposób przez redukcje pylem cynkowym . znanego 2,2', 6,6'-czterometylo- benzenu i nastepnego przegrupowania benzydyno- wego.Dotychczas, nieopisane zwiazki, a mianowicie 3,3'-dwumetylo-5,5'-dwuetylobenzydyne i 3,3', 5,5'- czteroizopropylobenzydyne mozna wytwarzac we¬ dlug; wyzej cytowanego sposobu, podanego przez Stroh'a i wspólpracowników, z o-tolidyny i ety¬ lenu lub z benzydyny i propylenu.Inne drogi postepowania, zasadniczo mozliwe równiez do przeprowadzenia dla jeszcze nieopisa¬ nych wyzszych pochodnych alkilowych sa naste¬ pujace: 40 45 50 55 6097 554 a) utlenianie 2,6-dwualkiloaniliny zelazicyjan- kiem metalu alkalicznego i[porównaj wyzej cyto¬ wany V. R. Holland] G. Schulz, Ber. dtsch. chem.Ges. 17, 476—78 (1884); E. Haselbach, Helv. chem.Acta 53, 1526^3 (1970)]; fo) utlenianie 2,6-dwualkiloaniliny tlenkiem sre¬ bra (II) [porównaj B. Ortiz i wspólpracownicy, J.Org. Chem. 37, 2748—50 (1972)]; c) redukcja 2,6-dwualkilonitrobenzenu wodor¬ kiem litowoglinowym [porównaj R. F. Nystróm i H. C. Brown, J. Amer. chem. Soc. 70, 3738—40 (1948)]; d) reakcja soli 2,6-dwualkilobenzenodwuazonio- wych z amoniakalnym roztworem miedzi (I) [po¬ równaj D. V'orlander i F. Mayer, Liebigs Ann.Chem. 320, 122^144 (1902)].Dalsza redukcja otrzymanych w ten sposób azo- benzenów do hydrazobenzenów i ich (niekiedy równoczesne) przegrupowanie benzydynowe naste¬ puje w znany sposób (np. Houben-Weyl X/2, 705- 724 i X/l, 839^848).Sposób wytwarzania 3,3'-dwu!metylo-5,5'-dwuety- lobenzydyny i 3,3', 5,5'-czteroizopropylobenzydyny wedlug wynalazku polega na przegrupowaniu od¬ powiedniego zwiazku hydrazoben^enowego, albo na kondensacji o-tolidyny wzglednie benzydyny z etylenem wzglednie propylenem.Podane nizej przyklady objasniaja blizej wyna¬ lazek.Przyklad I. Bibula probiercza do wykrywa¬ nia krwi w moczu Bibule filtracyjna (np. firmy Schleicher und Schiill nr 23SL) impregnuje sie kolejno podany¬ mi nizej roztworami 1 oraz 2 i suszy w tempera¬ turze 40°C.Roztwór 1 zawiera 1,2 molarny bufor cytrynianowy o 35,0 ml pH = 5,25 sól dwusodowa kwa'su etylemodwu- 0,1 g aminoczterooctowego sulfobursztynian dwuoktylosodowy 0,5 g 2,5-dwuwodóronadtlenek 2,5-dwu- metyloheksanu (okolo 70%) 1,6 g trójtmorfolid kwasu fosforowego 12,7 g etanol 30,0 ml woda destylowana, uzupelniajaca do 100,0 ml objetosci Roztwór 2 zawiera 3,3' 5,5'-Gztetfame'tylo!beinzydyina 0,3 g fenantrydyna 0,2 g toluen uzupelniajacy do objetosci 100,0 ml Otrzymuje sie biala bibule probiercza, która po zanurzeniu w moczu, zawierajacym krew, zabar¬ wia sie po uplywie 5—20 sekund na niebieskozielo- ino. Jesli erytrocyty isa nienaruszone, to bibula jest niebieskozielona pocetkowana. Jesli zaszla hemoliza, albo jesli w moczu znajduje sie wolna hemoglobina, to bibula barwi sie równomiernie na niebieskozielono. Wykrywalnosc wynosi okolo 5 e- rytrocytów w 1 mm8 lub odpowiadajaca ilosc he¬ moglobiny. Nizsza ilosc nienaruszonych erytrocy¬ tów moze w pewnych warunkach wywolywac jeszcze poszczególne niebieskozielone punkty na papierku próbnym. Wykrywalnosc mioglobiny od¬ powiada hemoglobinie.Po trzydniowym utrzymywaniu w temperaturze 60°C bibuly probiercze sa* lekko zóltawo zabar¬ wione, ich stopien czulosci pozostaje zasadniczo ta¬ ki sam, jedynie czas trwania reakcji przedluza sie do okolo 60—90 sekund. Bibula probiercza o iden¬ tycznym skladzie, lecz zawierajaca o-tolidyne za¬ miast czterometylobenzydyny, po identycznej ob¬ róbce cieplnej zabarwia sie zóltobrunatnie, a sto¬ pien czulosci wynosi okolo 20 erytrocytów w io 1 mm3.Bibuly o identycznym stopniu czulosci i takiej samej trwalosci, lecz jedynie reagujace nieco wol¬ niej i z czysto zielonym zabarwieniem, otrzymuj ej sie stosujac równomolowa ilosc 3,3', 5,5'-czteroety- lobenzydyny, 3,3,-dwumetylo-5,5'-dwuetylobenzy- dyny lub 3,3', 5,5'-czteroizopropylobenzydyny.Przyklad II. Bibula probiercza do wykrywa¬ nia krwi w moczu.Sulfabursztynian dwuoktylosodowy w receptu- rze podanej w przykladzie I zastepuje sie taka sa¬ ma iloscia lauroilosarkozyny albo calkowicie po-, mija sie srodek powierzchniowo czynny, otrzymu¬ jac w ten sposób bibule probiercza-, która wpraw¬ dzie wykazuje nieco nizszy stopien culosci niz bi- bula z przykladu I ale nadal jeszcze wykazuje wyzszy stopien czulosci niz odpowiednie bibuly, zawierajace o-tolidyne. Reakcje barwne z mo¬ czem, zawierajacym 50 zhemolizowanych erytrocy-- tów w 1 mm3, sa przedstawione w podanym nizej zestawieniu. czterometylobenzy- bez zwiizacza lauroilosarkozyna dyna lekko zielone zielone o-tolidyna lekko zielonobru- lekko brunatno- natne zielone Przyklad III. Bibula probiercza do wykry¬ wania glikozy w moczu.Bibule filtracyjna (np. firmy Schleicher und.Schul nr 597 NF) nasyca sie roztworami 1 oraz 2 40 o podanych nizej skladach i suszy w tempera¬ turze 50°C.Roztwór 1 zawiera: oksydaza glikozowa [70 U/mg] 222 mg peroksydaza [70 U/m§] 28 mg 45 bufor morfolinoetanosulfonianowy (pH 6, 1, 0m) 50 ml tartrazyna 80 mg poliwinylopirolidyna 300 mg woda destylowana uzupelniajaca do 50 objetosci. ¦ 100 ml Roztwór 2 zawiera 3,3'—5,5'-czterometylobenzydyna 600 mg etanol uzupelniajacy do objetosci 100 ml W indentyczny sposób wytwarza sie bibuly, 55 probiercze, które zawieraja równomolowa ilosc 3,3', 5,5'-czteroetylobenzydyny lub o-tolidyny. Za¬ barwienia reakcyjne tych bibul probierczych z moczem, zawierajacym glikoze, po uplywie 60— 120 sekund od zanurzenia sa przedstawione w po- 60 danym nizej zestawieniu. W przypadku czterome¬ tylobenzydyny zabarwienia te pozostaja stale w ciagu okolo 10—15 minut, podczas suszenia przyj¬ muja one nieco bardziej niebieskawy charakter a w tej postaci trwale utrzymuja sie w ciagu wie- 65 lu dni. Zabarwienia z czteroetylobenzydyna bled- /97 554 8 na podczas "suszenia nieznacznie nie zmieniajac zabarwienia a nastepnie sa trwale w ciagu dnia.Zabarwienia otrzymane za pomoca o-tolidyny juz po uplywie 5—10 minut zaczynaja zólknac i plo¬ wiec, a po suszeniu sa w ciagu 2—4 godzin w za¬ leznosci od stezenia glikozy calkowicie wyblakle lub lekko oliwkowobrunatne. mg % glikozy 0 50 100 250 500 1000 o-tolidyna zólte jasnozielone zielone niebieskozie- lone zielononie- bieskie oliwkowo- czarne czterometylo- benzydyna zólte jasnozielone niebieskozie- lone zielononie- bieskie niebie iko- czarne czarne cztroetylo- ben^ydyna zólte jasnozielone srednio- zielone zielone ciemno¬ zielone gleboko- zielone / 225 mg 175 mg 50 mg 35 150 mg 1300 mg 375- mg 40 100 ml.Bibuly probiercze, zawierajace równomolowa ilosc S^-tiwumetylo-SjS^dwuetyldbenzydyny, za¬ chowuja sie pod wzgledem charakterystyki i trwalosci zabarwien reakcyjnych praktycznie tak samo jak bibuly zawierajace czteroetylobenzydy- ne.Przyklad IV. Bibuly probiercze do wykrywa¬ nia nadtlenku wodoru Bibule- filtracyjna nasyca sie podanymi nizej roztworami 1 oraz 2 i suszy w temperaturze 40°C.Roztwór 1 zawiera dwuwodzian cytrynianu trójsodowego wodzian kwasu cytrynowego peroksydaza [70 U/mgJ alginian sodowy monolaurynian polioksyetylenosor- bitanu (Tween 20) kopolimer winylopirolidyny z octanem winylu woda destylowana uzupelniajaca do objetosci Roztwór 2 zawiera 3,3'—5,5'-czterometylobenzydyna 500 mg aceton uzupelniajacy do objetosci 100 ml.Tak sporzadzona bibula probiercza daje z nad¬ tlenkiem wodoru w roztworach wodnych, jak mle¬ ko, niebieskozielone zabarwienie reakcyjne przy stezeniach do ponizej 0,1 mg°/o.Przyklad V. Bibuly probiercze do wykrywa¬ nia cholesterolu i estrów cholesterolu w osoczu.Bibule filtracyjna (np. firmy Schleicher und Schiill nr 597 NF Ind.) nasyca sie roztworami 1 oraz 2 o podanych nizej skladach i suszy w tem¬ peraturze 40°C.Roztwór 1 zawiera: 1 molarny bufor cytrynianowy o pH=7 oksydaza cholesterolowa [60 U/mg] esteraza cholesterolowa [18 U/mg] peroksydaza [70 U/mg] woda destylowana uzupelniajaca do objetosci Roztwór 2 zawiera 3,3', 5,5'-czterometylobenzydyna polietylenooktylowy eter fenolu 2,0 0,1 0,25 0,05 100,00 0,28 0,5 ml g g g ml g g 50 60 (Triton X 100) chlorek metylenu uzupelniajacy do objetosci 100,0 ml.Z osoczem, zawierajacym cholesterol i/lub es¬ try cholesterolu, reaguja tak otrzymane bibuly probiercze dajac zielone odcienie Jbarw, których intensywnosc odpowiada stezeniu cholesterolu. Im odpowiadajace Ibibuly probiercze, zawierajace o- tolidyne zamiast czterometylobenzydyny, reaguja dajac równiez zielone odcienie barw, jednak o mniejszej intensywnosci.Przyklad VI. Filmy probiercze do oznaczania malych zawartosci glikozy w krwi lub w osoczu.Skladniki zawiesina octanopropionianu poliwinylo¬ wego (o nazwie handlowej Propiofan 70D) 45,0 g 1,85% roztwór alginianiu sodowego w 0,5 m buforze fosforanowym o pH =5,5 35,5 g nonylosiarczan sodowy rozpuszczony w 5,0 ml wody 0,75 g dksydaza glikozowa [62,7 U/mg] 1 rozpuszczone0,189 g peroksydaza [6,8,8 U/mg] J10 ml wody 0,235 g 3,3', 5,5'-czterometylobenzydyna rozpuszczona w 5 ml acetonu 0,68 g.Skladniki starannie miesza sie razem, folie po¬ wleka sie warstwa mieszaniny o grubosci 200 \i i suszy w ciagu 35 minut w temperaturze 60°C. Na- /kroplenie krwi, zawierajacej glikoze, i starcie jej po uplywie 1 minuty daje po uplywie dalszych 2 minut, przy zakresie 5—100 mg °/o glikozy, nie¬ bieskozielone zabarwienie reakcyjne o wzrastaja¬ cej intensywnosci, która mozna mierzyc za pomo¬ ca dostepnych w handlu fotometrów remisyjnych (np. o nazwie Reflomat). Podane nizej zestawie¬ nie ujmuje kinetyke rozwijania zabarwienia za pomoca 60 mg °/o glikozy w porównaniu z filmem probierczym, który zamiast czterometylobenzydy¬ ny zawiera 500 mg o-tolidyny. Jesli film probier¬ czy ogrzewa sie w ciagu 12 dni w temperaturze 50°C, to praktycznie nie stwierdza sie zadnej zmiany zabarwienia, w przeciwienstwie do tego film probierczy zawierajacy o-tolidyne jest wówczas bardzo isilnie zabarwiony zóltobrunatnie. czas (minuty) 1 i intensywnosc czterometylo¬ benzydyny (TMB) intensywnosc | o-tolidyny 88 73 2 1 3 1 5 1 10 87 68 85 64 84 60 85 67 Przyklad VII. Film probierczy do oznacza¬ nia normalnej i podwyzszonej zawartosci glikozy w krwi lub w osoczu.Wedlug przykladu VI wytwarza sie film pro¬ bierczy, który dodatkowo zawiera 0,050 g dwu- chlorowodorku 9-(7-aminopropylo)-3-aminokarba- zolu. Nakroplenie krwi, zawierajacej glikoze, i starcie jej po uplywie L minuty daje po uply¬ wie' dalszej minuty nastepuje zabarwienie reak¬ cyjne: 60 mgtyo glikozy — ochra, 120 mg % gliko¬ zy — oliwkowe 180 mg °/o glikozy — niebiesko¬ zielone z rosnaca glebia barwy.97 554 Zabarwienia te nie zmieniaja sie same podczas dwudniowego przechowywania na powietrzu w la¬ boratorium. W przypadku analogicznego filmu probierczego, zawierajacego 0,600 g o-tolidyny i 0,005 g dwuchlorowodorku 9-(7-aminopropylo)-3-a- minokarbazolu, zmieniaja sie niebieskozielone za¬ barwienia w kierunku zóltozielonych odcieni.Dlugoterminowa trwalosc zabarwienia spowodo¬ wanego 150 mg % glikozy, zmierzona za pomoca fotometru remisyjnego (o nazwie Reflomat), jest przedstawiona w podanym nizej zestawieniu: 1 czas (godziny) 1 czterometyloben- zydyna (TMB) | o-tolidyna 0 61 51 1 62 52 2 62 51 4 62 50 8 62 47 24 62 42 Jezeli ten film probierczy ogrzewa sie w cia¬ gu 12 dni w temperaturze 50°C, to praktycznie nie stwierdza sie zadnych zmian zabarwienia i mo¬ zliwa jest bezbledna ocena za pomoca barw po¬ równawczych. W przeciwienstwie do tego tasmy probiercze, zawierajace o-tolidyne, zmieniaja bar¬ io we na silnie zóltobrunatna, a porównanie ze skala barw nie jest juz mozliwe. PL PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Srodek analityczny do wykrywania i oznacza¬ nia nadtlenków i substancji dzialajacych nadtlen- kowo, znamienny tym, ze jako wskaznik utlenia¬ nia zawiera 3,3', 5,5'-czteroalkilobenzydyiny o wzo¬ rze przedstawionym na rysunku, w którym Rx, R2, R3 i R4 stanowia jednakowe lub rózne pod¬ stawniki i oznaczaja proste albo rozgalezione niz¬ sze rodniki alkilowe o 1—6, korzystnie o 1—4 a- tomach wegla, na nasaczalnym nosniku lub fil¬ mie i ewentualnie inne substancje pomcrcnicze.

2. Srodek wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako wskaznik zawiera 3,3'-dwumetylo-5,5'-dwu- etylobenzydyne.

3. Srodek wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako wskaznik zawiera 3,3', 5,5'-czteroizopropylo- benzydyne. PL PL