SU611598A3 - Способ подсчета лейкоцитов - Google Patents

Способ подсчета лейкоцитов

Info

Publication number
SU611598A3
SU611598A3 SU711711809A SU1711809A SU611598A3 SU 611598 A3 SU611598 A3 SU 611598A3 SU 711711809 A SU711711809 A SU 711711809A SU 1711809 A SU1711809 A SU 1711809A SU 611598 A3 SU611598 A3 SU 611598A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
solution
cells
staining
reagent
hemolysis
Prior art date
Application number
SU711711809A
Other languages
English (en)
Inventor
Р. Анслей Гудсон
Орнстейн Леонард
Original Assignee
Моунт Синай Рисерч Фаундэйшн (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Моунт Синай Рисерч Фаундэйшн (Фирма) filed Critical Моунт Синай Рисерч Фаундэйшн (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU611598A3 publication Critical patent/SU611598A3/ru

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5094Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/30Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
    • G01N2001/305Fixative compositions
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/808Optical sensing apparatus
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10TTECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/11Automated chemical analysis
    • Y10T436/117497Automated chemical analysis with a continuously flowing sample or carrier stream
    • Y10T436/118339Automated chemical analysis with a continuously flowing sample or carrier stream with formation of a segmented stream

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

1
Изобретение относитс  к области медицины и может быть использовано в диагностической практике дл  определени  содержани  лейкоцитов в крови.
Известен способ подсчета лейкоцитов путем фиксации, ферментативного окрашивани  и гемолиза 1 .
Однако известный способ не обеспечивает дифференциального подсчета лейко1штов от других форменных элементов крови.
Целью изобретени   вл етс  дифференциальный подсчет лейкоцитов от других форменных злементов крови, например, с помощью фотометрии .
Эта цель достигаетс  тем, что фиксацию цельной крови провод т моноальдегидом с последующим гемолизом и окрашиванием цитохимическим субстратом, смешанным с хромогенным сопр гающим реагентом, который не образует внеклеточных макрочастиц, добавлением буферной смеси дл  регулировани  рН и подогревом полученной смеси от 20 до 55°С в течение 1-10 мин.
Кроме того, при окраишвании нейтрофилов и ЭОЗИНОФИ.ИОВ, в качестве цитохимического окрашивающего субстрата используют перекись, а хромогенного сопр гающего реагента - 4-хлор-1-нафтал , а дл  окрашивани  моноцитов в качестве цитохимического окрашивающего субстрата используют альфа-нафтилбутират, а хромогенного сопр гающего р .агента - гексазоний - парарозанилин.
Способ осуществл ют следующим образом.
Добавл ют отологический фиксирующий реактив к раствору, содержащему белые кров ные клетки (например, цельную кровь) дл  умерщвлени  содержащихс  там кров ных клеток и иммобилизации содержащихс  з клетках каталитических знзимов. Предпочтительными  вл ютс  пробы жидкости организма, такие, как цельна  кровь и спинномозгова  жидкость. После добавки фиксирующего реактива раствор обрабатьшают особым цитохимическим веществом, хромогенными осаждающим копулирующим реактивом и буфером.
Цитологический фиксирующий раствор) представл ет собой преимущественно 0,2-40%-ный водный раствор моноальдегида, такого как формальдегид , бутиральдегид, пропиональдегид и ацетальдегид . Диальдегиды непригодны, так как обуслоливают сетчатую структуру и вызывают внеклеточ ные осаждени .
Концентраци  моноальдегида Должна быть достаточно высока дл  умерщвлени  клеток, однако , без нарушени  активности энзим.
Низкие концентрации при 1шзких температурах требуют дополнительного времени. Так, например , при концентрации формальдегида в растворе равной 2%, при 4°С требуетс  12 ч, а при 4%-ной концентрации при 50°С требуетс  2 мин.
Так как обычно смецювают равные объемы жидкости организма и раствора моноальдегида, крепость альдегадного раствора  вл етс  двойной по сравнению с концентрацией во врем  фиксашш альдегида в растворе.
Предпочтительным  вл етс  37%-ный раствор формальдегида.
Когда жидкость организма, содержаида  лейкоциты , представл ет собой цельную кровь, то необходимо осуществить гемолиз лейкоцитов, так как существует опасность, что совпадающее прохождение двух или большего количества красных клеток через фотометрическую счетную стандаю ошибочно может быть прин то как окрашенные лейкоциты или ненормальные клетки. Дл  этого осуиюствл ют гемолиз красных кров ных клеток путем добавлени  реагента к суспензии клеток, чтобы обусловить разрьш только красных клеток и вьоделение их содержимого (например, гемоглобина ) в .раствор.
Гемолиризующие реагенты не должны сверть1вать взвешенные клетки и не должны мешать протеканию Л1юбых последующих гистохимических реакций путем, например, взаимодействи  с какими-либо соединени ми; используемыми дл  окрашивани  клеток на послещшх этапах.
Гемолиз провод т либо до, либо после окрашивани . Если гемолиз провод т после окрашивани , то это не должно сушественио измен ть окраску или измен ть окрашенные или неокрашенны лейкоциты.
Гемолиз провод т введением в раствор, содержащий красные и белые кров ные клетки, водного раствора алифатической кислоты с величиной рН |3,0-5,5. Удовлетворительные результаты дает применение уксусной, пропионовой, масл ной и молочной кислот в концентрации 1-10%.
Предпочтительным  вл етс  раствор уксусной кислоты концентрации около 7%. Раствор может быть нагрет до температур, начина  от 40 (в течение 8 мин) до 55°С (в течение 1 мин), чем достигаетс  инактиваци  энзима катализы, снижение псевдопероксидазной активности гемоглобина и ускорение гемолиза. При более низких температурах дл  реак1ии требуетс  больше времени. Использование еще более высоких температур инактивирует энзимы пероксидазы и ускор ет свертывание после введени  гемолизирующего реагента.
Окрашивание клеток требует тщательного выбора реактивов. Используют большое ко;шчество
известных цитохимических субстратов. Так дл  окрашивани  клеток, содержащих пероксидазу, таких как эозинофилы или нейтрофилы, примен ют смес§ неорганической или органической перекиси и 4-хпоро-1-нафтала . Перекись и 4-хлоро.1-нафтал служат в качестве энзимных субстратов, а 4-хлоро-1нафтал служит также в качестве копулирующего реагента. 4-Хлрро-1-нафтал производит темно-синее окрашивание внутри содержащей пероксидазу клетки без введени  отдельного хромогенного осаждающего копулирующего реактива. Можно также использовать смесь (7-толидина и 4-хлоро-Ьнафтала дл  получени  пурпурно-красного красител , если используемый на ступени фиксировани  формальресид инактивирован.
Дл  избирательного окрашивани  контролируют рН раствора. Если рН раствора ниже 3,0, то т желые осадки красител  образуютс  только в зозинофилах. Если рН раствора находитс  в пределах 3,0-5,0, то т желые осадки красител  образуютс  только в нейтрофилах. Если рН находитс  в пределах 5,0-7,0, то т желые осадки красител  образуютс  только в эозинофилах и нейтрофилах.
ЕСЛИ окрашивают липазосодержащие клетки,
т.е. моноциты, то используют комбинации сложного эфира, нафтола, такого как 1-нафтилацетата или 1-нафтилбутирата и диамониевой соли, например , гексазоний - парарозанилии, который  вл етс  хромогенным осаждающим копулирующим реагентом; рН дл  этой реакции окрашивани  5,56 ,5, предпочтительно около 6,0, при такой рН т желые осадки красителей образуютс  только в моноцитах .
С целью адекватного цветного окрацшвани 
в моноцитах за короткий отрезок времени, например за 5 мин концентраци  субстрата должна превышать примерно 0,5 мг/мл в окончательном инкуба1шонном растворе. Сложные зфиры нафтал-AS и их производные и 1-нафтилбутират менее растворимы, чем 0,5 мг/мл, поэтому в них ввод т 2,2-оксидиэтанол (диэтиленгликоль) или другие водные спирты или эфиры, например этиленгликоль, пропиленгликоль, диметиловый эфир этиленгликол 
к диэтилкарбитол .
После этого 1-нафтилбутират и 1-нафтилацетат могут быть растворены в концентраци х до 1 мг/мл. Могут быть растворены также и другие
субстраты, такие как нафтилхлорацетат, сложные индоксильные эфиры, такие как сложные эфиры индоксилацетата, индоксилпропионата и индоксилбутирата , сложные эфиры 8-оксихино;тина, такие как 8-оксихинолинацетат, 7-оксихииолиниропиоиат
и 8-оксихинолинбутарат. При тех же услови х будет растворено только около 0,1 мг/мл нафтал-AS-ацетата , что приводит к значительно более слабому вы влению цветного окрашива1ш . Другие сложные зфиры производных иафтал-AS раствор ютс  даже в меньшей степени.
SU711711809A 1970-10-30 1971-10-29 Способ подсчета лейкоцитов SU611598A3 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8533370A 1970-10-30 1970-10-30

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU611598A3 true SU611598A3 (ru) 1978-06-15

Family

ID=22190904

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU711711809A SU611598A3 (ru) 1970-10-30 1971-10-29 Способ подсчета лейкоцитов

Country Status (12)

Country Link
US (1) US3741875A (ru)
JP (2) JPS576932B1 (ru)
AU (1) AU460469B2 (ru)
BE (1) BE774311A (ru)
CA (1) CA960947A (ru)
DE (1) DE2153479B2 (ru)
FR (1) FR2113336A5 (ru)
GB (1) GB1331568A (ru)
IT (1) IT961518B (ru)
NL (1) NL172463C (ru)
SE (1) SE372417B (ru)
SU (1) SU611598A3 (ru)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2125699B2 (de) * 1971-05-25 1973-05-17 Phywe AG, 3400 Gottingen Praeparation von zellen zur messung von dns
US4049381A (en) * 1976-03-23 1977-09-20 Technicon Instruments Corporation Apparatus and method of fluid sample analysis
US4099917A (en) * 1977-07-21 1978-07-11 Technicon Instruments Corporation Process for preparing a cell suspension from blood for discrimination of white blood cells and platelets from other blood particles
DE2826965A1 (de) * 1978-06-20 1980-01-17 Boehringer Mannheim Gmbh Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene
US4581223A (en) * 1980-03-12 1986-04-08 Lawrence Kass Individual leukocyte determination by means of differential metachromatic dye sorption
US4492752A (en) * 1982-09-03 1985-01-08 Ortho Diagnostics Systems Inc. Method for discriminating between unstained and absorbing dye stained cells
CA1254134A (en) * 1984-03-28 1989-05-16 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Specific binding flow cytometry method
US4654312A (en) * 1984-05-14 1987-03-31 Becton, Dickinson And Company Lysing agent for analysis of peripheral blood cells
US4751179A (en) * 1984-05-31 1988-06-14 Coulter Electronics, Inc. Method and reagents for differential determination of four populations of leukocytes in blood
AU602129B2 (en) * 1985-09-06 1990-10-04 Technicon Instruments Corportion Method for the determination of a differential white blood cell count
US4801549A (en) * 1985-09-06 1989-01-31 Technicon Instruments Corporation Method for the determination of a differential white blood cell count
US4978624A (en) * 1985-09-06 1990-12-18 Technicon Instruments Corporation Reagent for the determination of a differential white blood cell count
US5389549A (en) * 1987-05-29 1995-02-14 Toa Medical Electronics Co., Ltd. Method for classifying leukocytes and a reagent used therefor
AU3182289A (en) * 1988-02-10 1989-09-22 Nygene Corporation Process for producing biochemicals
US5316725A (en) * 1991-06-07 1994-05-31 Edward Lawrence Carver, Jr. Reagent system for the improved determination of white blood cell subpopulations
US5262329A (en) * 1991-06-13 1993-11-16 Carver Jr Edward L Method for improved multiple species blood analysis
US6046019A (en) * 1991-07-09 2000-04-04 Goumeniouk; Alexander P. Diagnostic kits and methods for making granulocyte cell counts
JP3359921B2 (ja) * 1992-02-24 2002-12-24 クールター インターナショナル コーポレイション 血液組成物用懸濁媒体及びその使用方法
US6509192B1 (en) * 1992-02-24 2003-01-21 Coulter International Corp. Quality control method
DE69329274T2 (de) * 1992-02-24 2001-04-12 Coulter Corp Hämatologisches Kontrollprodukt mit Leukozytenanalogen; und Methoden zu ihrer Herstellung und Anwendung
US6362003B1 (en) 1992-02-24 2002-03-26 Coulter Corporation Hematological reference control composition containing leukocyte analogs, methods of making, and uses thereof
US6812032B1 (en) * 1993-01-21 2004-11-02 Cdc Technologies, Inc. Apparatus and method for making a plurality of reagent mixtures and analyzing particle distributions of the reagent mixtures
US5599501A (en) * 1994-11-10 1997-02-04 Ciba Corning Diagnostics Corp. Incubation chamber
WO1996034283A1 (en) * 1995-04-27 1996-10-31 Hematronix, Inc. Lytic system utilizing propionic acid for leukocytes differentiation
US5639630A (en) * 1995-05-16 1997-06-17 Bayer Corporation Method and reagent composition for performing leukocyte differential counts on fresh and aged whole blood samples, based on intrinsic peroxidase activity of leukocytes
US5843608A (en) * 1995-06-08 1998-12-01 Coulter International Corp. Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood
US5686308A (en) * 1995-06-08 1997-11-11 Coulter Corporation Reagent and method for differential determination of leukocytes in blood
US6146901A (en) * 1997-06-16 2000-11-14 Hematronix, Inc. Composition for manipulating optical and electrical properties of particles to achieve target values for such properties and methods for using the composition
US6759246B1 (en) 2001-11-30 2004-07-06 Research & Diagnostic Systems, Inc. Hematology control composition including lymphocyte analogs and method for preparation and use
CA2428740A1 (en) 2002-05-20 2003-11-20 Bayer Corporation Automated method and reagent therefor for assaying body fluid samples such as cerebrospinal fluid (csf)
EP2525222A1 (en) 2011-05-17 2012-11-21 Markus M. Heiss Initial relative lymphocyte count as predictive biomarker
DE212017000208U1 (de) 2016-09-27 2019-04-08 Novelis, Inc. System für das berührungslose Spannen eines Metallstreifens

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2807416A (en) * 1953-07-13 1957-09-24 Ohio Commw Eng Co Device for automatically counting blood cells
DE1200577B (de) * 1962-05-29 1965-09-09 Habil Hans Meyer Doering Dr Me Anordnung zum Zaehlen der in einem stroemungs-faehigen und lichtdurchlaessigen Medium mitgefuehrten, die Helligkeit eines auf sie gerichteten Lichtstrahles beeinflussenden Teilchen
US3413464A (en) * 1965-04-29 1968-11-26 Ibm Method for measuring the nucleic acid in biological cells after enhancement in an acidic solution
US3523733A (en) * 1966-01-05 1970-08-11 Technicon Corp Method and apparatus for particle counting
US3427135A (en) * 1966-07-11 1969-02-11 Technicon Instr Hematology apparatus

Also Published As

Publication number Publication date
BE774311A (fr) 1972-04-24
JPS576932B1 (ru) 1982-02-08
SE372417B (ru) 1974-12-23
FR2113336A5 (ru) 1972-06-23
DE2153479B2 (de) 1975-06-05
NL172463C (nl) 1983-09-01
AU460469B2 (en) 1975-04-24
US3741875A (en) 1973-06-26
IT961518B (it) 1973-12-10
NL7114995A (ru) 1972-05-03
JPS56163455A (en) 1981-12-16
GB1331568A (en) 1973-09-26
AU3484771A (en) 1973-05-03
CA960947A (en) 1975-01-14
DE2153479A1 (de) 1972-05-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU611598A3 (ru) Способ подсчета лейкоцитов
DE2153479C3 (ru)
Tracey Chitinase in some Basidiomycetes
ES2367979T3 (es) Procedimiento para detectar y enumerar microorganismos rápidamente en preparaciones de células de mamíferos usando la bioluminiscencia del atp.
US3630847A (en) Diagnostic agent for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances
Gallyas et al. Copper-H2O2 oxidation strikingly improves silver intensification of the nickel-diaminobenzidine (Ni-DAB) end-product of the peroxidase reaction.
JPS60259185A (ja) グリセリンオキシダ−ゼの取得法
US4493892A (en) Solvent system for peroxidase inhibitor reagent for fecal occult blood determinations
Edson The oxidation of lactic acid by Mycobacterium phlei
Schothorst et al. Metabolic aspects of the photodynamic effect of protoporphyrin in protoporphyria and in normal red blood cells
Goff A light and electron microscopic study of peroxidase localization in the onion root tip
Van Noorden et al. A sensitive cytochemical staining method for glucose-6-phosphate dehydrogenase activity in individual erythrocytes: I. Optimalization of the staining procedure
O'brien Identification of haemoglobin by its catalase reaction with peroxide and o-dianisidine
Gordon et al. Estimation of lactic acid in biological material by oxidation with ceric sulphate
Jung et al. An improved reagent system for the measurement of serum uric acid
US2990338A (en) Composition for determination of glucose in body fluids
Archer et al. Studies on the peroxidase reaction of living eosinophils and other leucocytes
US3616259A (en) Screening procedure for enzyme deficiencies
Gowenlock The estimation of tryptic activity in duodenal contents
US3362886A (en) Composition and method for the detection of galactose
Ribarov et al. A chemiluminescent method for measurement of activated oxygen forms in biological fluids and homogenates
Marques et al. Ascorbic acid biosensor using ascorbate oxidase immobilized on alkylamine glass beads
Begemann et al. Staining methods
Kierszenbaum et al. Alterations in the enzymatic activity of plasma of guinea pigs infected with Junin virus
US3348920A (en) Reagent and method for the quantitative determination of bilirubin