(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМЕРНЫХ НОСИТЕЛЕЙ ПРОТЕИНОВ реакции с алкеноксидами с 2-8, предпочтительно 2-4 атомами углерода или со смес ми таких алкеноксидов, причем к- 1 молю не сущих гидроксильные группы соединений приполимеризовывагот , предпочтк«тельно алкеноксидных структурных элементов. В качестве пригод1гых алкенокси дов назвать окись этилена и окись п|эопилена. Можно использовать также про- дукты реакции по Церевитинову соединений, содержащих не менее двух активных атомов водорода и полученных не из спиртов или фенолов, с вышеназванными алкенокси- дами с получением ди- и/или поли(мет)акри атов. Используемые согласно изобретению дни поли(мет)акрипаты ди- и полиолов получают известными методами, например путем реакции ди- и/или полиолов с хлоридом (ме акриловой кислоты в присутствгии примерно эквимол рных (в расчете ,на хлорид кислоты количеств третичных аминсз, например трИчГ этиламина. Реакцию провод т при температурах шоке 20 С в присутствии бензола. В качестве ди- и полиолов, содержащих не менее 2, предпочтительно 2-12 атомов углерода, можно использовать этиленгликоль пропандиол-1,2; пропандиол-1,3; бугавдиолы в частности бутандрол-1,4, гександиолы, декандиопы, глицерин, триметилолпропан, пентаэригрит, сорбит, сукрозу и продукты их реакции с названными выше алкенсжси- дами. Пригодны также поли-бис-хлорметил- оксациклобутан или полистирол оксид. Можно примен ть смеси ди- и полиолов. Предпочтительно использовать диакрилаты и диметакрилаты диолов, имеющих 2-4 атома углерода, и/или продукты реакции 1 мол этих диолов с 1-20 мол ми алкеноксида с 2-4 атомами углерода в ;молекуле, а также триметилпропантриметакрилат. Особенно целесообразно примен ть диметакрилагы .; этиленгликол , диэтилен- гликол , триэтиленгликол , тетраэтиленглн- кол или высших полиалкенгликолей с мол. весом до 1ООО, а также указанных соединений. При желании нар ду с ди- и/или поли (мет)акрилатами можноиспользовать обычно примен емые сшивающие среды, имеющие не ivfeHee 2 несопр женных двойных св зей, а именно дивиниладипат, метилен бнс-акриламид , триакрилформаль или триаллчлиианурат , примешиваемые в количестве примерно 0,1-30% от веса смеси мономер Пользу сь возможностью весьма широко варьировать состав смеси мономеров, можно иамсн гь гидрофш1ьнсх;ть, плотность , набухаем ость и содержание ангидридных групп в получаемых сополимерах в соогаегствии с их конкретиы( «л;м ач«ниом . Сополймеры по предлагаемому способу могут быть попучеЕ1ы, папркмпр, путем (Х:ад(тельной полп.меризакии в органическом рас ТВ ор теле i причем полимеры начинают выпадать вскоре после начала полимеризаций. 8 принципе пригодны ;побые инертные к ангидридным группам растворители. Наиболее целесообразно использовать алифатические, циклоалифатические, ароматические углеводороды , а также галогензамещенныеуглеводороды , алкилароматические вещества и сложный эфир карбоновсй кислоты. Примеры подход щих растворителей: гептан , октан, изооктан, фракции бензина, кип щие примерно при 60-200 С, циклогексан, бензол, толуол, ксилол, хлорбензол, дихлор- бензол, этилацетат, бутилацетат. Растворители должны иметь точку кипени не менее 60 С и легко удал тьс в вакууме из осажденного полимера. На 1вес.ч. смеси мономеров примен5пот от 2 до 50, предпочтительно 5-20 вес.ч. растворител . Вид и количество использованного растворител существенно вли ют на насыпной вес, удельную поверхность и другие свсйства сополимеров . Во многих случа х желательно примен ть смеси названных растворителей. Полимеризацию можно начинать в растворителе полимера, а потом непрерывно в ходе полимеризации добавл ть осадитель полимера Осад и гель можно также вводить в определенные моменты однсй или несколькими.порци ми . Смесь мономеров можно вводить вместе с подход щим инициатором (в виде расгвора или без растворител ) в определенное количество растворител . Тогда в процессе полимеризации получаетс равномерна незна|1ительна концентраци мономера. Примен ( мет/акриловые мономеры с разной гидрофильностью и варьиру услови полимеризации , можно получать продукты с очень щироким , соответствующим их конкретному назначению , диапазоном набухаемости, плотности. уде ьнсй поверхности и с хорощей механическсй стабильностью. Сополимеры но изобретению могут быть получены также методом суспензионной полимеризации . Наиболее часто примен емый вид бисерной полимеризации, в ходе которой мономеры (при необходимости с добавкой органических растворителей) суспендируют в воде , в данном случае мало эффективен,поскольку ангидрид очень быстро .гидролизуетс , полученна дикарбонова кислота переходит в основном в водную фазур лишь в незначительной степени внедр етс в структуру полимера . Суспензионную полимеризацию целесообразно поэтому проводить в органичог:КОЙ сррде. Мономер и инициатор раствор ют в носмачивающемс парафинами, инертном к ангидридным группам растворителе, например ацетонитриле, димегилформамиде, диме-, тилсульфоксиде, триами е гексаметилфосфорной кислоты,и распредел ют - большей частью с добавкой диспергаторов - в св занней фазе. В качестве св занной фазы наиболее пригодны парафиновые углеводороды, например гептан, октан и их высшие хгомологи, циклоалифатические соединени , например пиклргексан,а также смеси парафине, например фракции бензина или парафиновое масло. Объемное соотношение св занна мономерна фаза составл ет от 1:1 до 10:1, предпочтительно JT 2:1 до 5:1. Дл стабилизации суспензии можно использовать , например, .глицеринмоно- или диолеаты и их смеси, сорбитанмоно- и триолеаты и стеараты, простой моноэфир полиэтиленгликол со стеарил- или/ лаурилспиртом или нонилфенолом, сложный моноэфир полиэтиленгликол с олеиновой, стеариновой и другими жирными кислотами, со;держащими более 1О атомов углерода, а также натриевые соли сложного диоктилсжого эфира сульфо нтарнсА кислоты. Зти, вещества примен ют предпочтительно в количестве 0,1-10% (в расчете на количество смеси мономеров); раствор ютс эни обыч- 1но в углеводорода ей фазе. Величина частиц суспензионных полимеров может быть уменьшена не только увеличением скорости переме шивани , но и добавкой 0,1-2,0% (в расчете на количество мономеров} дополнительного поверхностно-активного вещества, например алкилсульфоната. Полимеризаци возбуждаетс радикальным HHBnHatojxJM. Пригодными инициаторами вл ю с азосоединени преимушественк нитрил аз изомасл ной кислот 1, или персоединени , гла ным образам диацилперекиси, например дибензоилперекись , или перкарбонаты, например диизопропил- или дициклогексилперкарбонат. Дл инициировани полимеризации можно также испольасжать диалкилперекиси, гидро перекиси и эффективно действутогаие в органи ских растворител х сжислИтельно-восстане )вительные системы. Инициаторы ввод т в количестве 0,01-10 предпочтительно 0,1-3% от веса смеси моно меров. Полимеризацию осуществл ют при темпера турах 50-1ОО С (в :аавис мости от скорости- распада инициаторов), болыией частью ниже температуры кипени растворител . При бисерной полимеризации используетс гемпеpaVypa Ниже температуры смещени обеих фа Желательно осуишствл ть полимеризацию в атмосфере инертного газа, в отсутствие кислорода . Полученные путем осадительной полиморизации сополимеры имеют слегка желтоватый цвет или бесцветны. Это иорогпкосбрааные вещества с насыпным объемом от 1,5 до 30, чаще от 2 до 20 мл/г, удельней поверхнек;тью О,1-5ОО, чаще от 1 до . Титрометрически определенное после омылени ангидридных групп содержание карбоксильных групп составл ет от. 0,02 до 10, преимущественно от О,4 до 2 мг-экв./г. Сусйензионные полимеры представл ют собой белые или слегка окрашенные бусинки, иногда неправильной формы, диаметром 0,03-1, чаше от 0,О5 до 0,6 мм, с насыпным объемом ежещо 1,4-8, чаще 1,4-5 мл/г. Определенное после гидролиза ангидридных групп содержание гидроксильных групп составл ет О,О2 - 10, преимущественно от 0,4 до 4 мг-экв/г. Полученные по изобретению сополимеры содержат статистически распределенные сополимёризааионные структурные элементы. В св зи с высокой плотностью поперечных св зей эти сополимеры не раствор ютс ни в каких растворител х. Их молекул рный вес не поддаетс поэтому определению. Сополимеры набухают в воде до 1,1-2,5кратной величины их насыпного объема. Они прекрасно подход т дл использовани в качестве смол-носителей дл фиксировани веществ, способных вступать в реакцию с ангидридными группами сополимеров. Смолы-носители МОЖНО вводить при температуре от О до 30 С непосредственно в водный раствор св зываемого вещества, предпочтительно в водный раствор протеина; рН должен при эте)м поддерживатьс на посто нном уровне. Дл св зывани протеинов с сополимером целесообразно использовать рН-стат с уровнем рН от 3. до 10, предпочтительно от 5,5 до 9,0. При применении в качестве протеина пеницнллинанилазы рН целесообразно поддерживать на уровне 5,7-6,8. Дл поддержани посто нного рН в процессе реакции св зьгеани необходимо непрерывно добав/ л ть оснсфанйе. Дл этого можно «спользовать неорганические основани , например растворы едких щелочей, и органические новани , например третичные арганиче.ские Пример. 80 г гетраэтиленглккольдиметакрилата , 2О г ангидрида малеиткэвой кислоты и 1 г нитрила азоизомасл ной кислоты раствор ют в 1 л бензола и перемешивают в течение 4 час при 60°С. Затем добавл ют 1 г нитрила аао 13омасл псй кислоты и 200 мл бензина (т.кип. 100140°С ). Псшимериэшшю ггродолжают еще 5 час при 7 О С. Порошкообразный полимер отсасываЕОТэ взмучивают один раз в бензоле и три раза в пегролейном эфире (т кип. 3O-SO С) и сушат S вакууме. Выход 94 г. Свойства папимераг Насыпной объем, iWwi/r-Э б Объем набухани в воде, мл/г, 2 Удельна поверхность, м /г5,О Содержание карбоксильных групп после омылений ангидрид .ныхгрупп .3,5 П р и м е р 2. Раствор 9О г эгиленглй кольдиметилайрилата, 10 г ангидрида новой кислоты. И: 1 Г нитрила азоизомасл - ной кислоты в 1 л , бензола сначала переме шивают при 60 С. Спуст 4 час добавл ю 200 мл бензина (т.кип. 100-140 С) и Д. нитрила азоизомасл ной кислоты и полиме ризуют еще 2 час при 70 С и 2 час при . Полученный полимер отсасывают тщательно промывают петролейным эфиром ( т. кип. 30-5О°С)и сушат в вакууме. Вы ход 97 г. Свойства полимера:;.: Насыпной объем,: МП Ур6,4 Объем набухани и воде Мл/гSjO Удельна поверхность,, м /г298 Содержание карбоксильных групп после омылени ангид- рЙДНЫХ групп, МГ-ЭКВ./Г1,5 Пример 3. В результате сополимеризации 90 г диэтилеНгликольдиметакрилат с 10 г ангидрида малеиновой кислогьз Б услови х.примера 2 получедо 96 г продукт Свойства полимера: Насыпной объем, мл/гSjS Объем набухани в воде, му1/г6,7 Удельна поверхность, м7г9,2 Содержание карбоксильных групп после омылени ангидридных групп, мг-экв/г.1,9 Пример4.80 г тетраэтиленгликол димеТакрилата, 20 г ангидрида малеиновог кислоты и 1 г порофора раствор ют в 1 л бензола и медленно перемешивают 16 час при 8О С. Полимер подвергают обработке, аналогичной описанной в. примере 1. Выход продукта 95г. Свойства полимера: Насыпной объем, мл/г2,5 Объем набухани в воде, мл./г3,0 Содержание карбоксильных групп после омылени вЕПидридных групп, мг-эквУ г2,6 П р и м е р 5. В снабженном мешалкой сосуде нагревают в течение 1 час до 90°С 1л бевзша Ст.кип. ЮО-МО С) н 1 г нкфила, азокзомасп нсй кислоты. Загем прк. температуре 80 С в гече ие 3 час ввод т по капл м раствор 95 г этиленгликольдиметакрйлвт-Эа S г ангидрида малеиновой кислогы и 1 г Нитрила ааонзомас.п ной кислоты к перемешивают прк этсй же температуре еще 2 час. Полимер отсаеываютв многократно отмь®а ч ют бензолом и петролейньгм эфиром (т.кип. 3050 С) и сушат в вакууме. Выход продукта 96 . Свойства полимера: Насыпной объем, мл/г 15,0 Объем набухани в. воде, мл/г1852. Удельна поверхность, м /г7О Содержание карбоксильных групп 1П1Х;ле омылени ангидридных групп МГ/-ЭКВ/Г 0,5 Примере. Раствор 62,5 г тетраэтилeнгликoльди feтaкpилaтa , 37,5 г днгидрида малеиновой кислоты и 1 г нитрила азоиаомасл ной кислоты в 150 мл бугилацетата и 1 л бензина (т.кип. 1ОО-140 С.) перемешивают в течение 2 час при 7 О С, 2час при 75 Си 1,5 час при 90 С. Полимер отсасывают, экстрагируют в течение 24 час в экстракторе С оке лета и сушат в-вакууме.,Выход продукта 77 Г. Свойствадолимера: Насыпн.ой объем, мл/г 7,3 Объем набухани в воде, мл/г8,2 Удельна поверхность, м /г19,4 Содержание карбоксильных групп после омылени ангидридных групп, мг-экв, Приме р 7. Раствор 90 г тетраэтилен- гликольдиме -акрилата, Юг ангидрида малеиновой кислоты и 1 г нитрила азоизомасл ной кислоты Б 200 мл ацетонитрила суспендируют в 1000 мл бензина (т.кип. 100-140 C)i в котором было растворено 5 г смеси глипе- ринмоно-и диолеата. Реакционную смесь поли7 меризуют до образовани твердых бусин .око ло 2 час при и дополнительно 20 час при . . . . Полимер отфильтровывают, трижды промьк вают бензолом и трижды петролейнътм эфиром (т.кип. 30-50 С) и сушат в вакууме при 90 С Выход продукта со средним диаметром частиц около 0,35 мм составил 94 г, Свойства полимера: Насыпной объем, мл/г2,8 Объем набухани в воде, мл/г3,1 Удельна поверхность, м /г3,4 Содержание карбоксильных групп после омылени ангидридных групп,мг-акв./г1,5 П р и м е р 8. 18 г эфира диметакрнловой кислоты и окиси полипропилена с мол. весом 1000 (число ОН-групп 112), 2 г ангидрида малеиновой кислогы и 200 мг витрвла аао аамасп сй киспоты помещают в ампулу, воздух вытесн ют азотом и ампулу : паивают. После нагревани в течение 20 час до 65°С ампулу разрушают, полимернзатный блок измельчают, трижды суспендируют в ацетоне к сушат при температуре 50 С и давлении 5О торр. Выход полимера 18 г. CBdicTBa полимера: Насыпнсй объем, мл/г2,3 Объем набухани в воде, мл/г2,5 Содержание карбоксильных групп после омылени ангидридных групп, ./г1,6 ; 0 JS Формула обретени Способ получени полимерных носителей протеинов путем бисерной сополимеризапий «5С;уЭ-моноолефиновых ненасыщенных ангидридов дикарбоновой кислоты с ненасыщенным соединением в среде органических раствс ителей в присутствий инициаторов при нагревании, отличающийс тем, что, с целью получени сшитых полимеров, в качестве ненасыщенного соединени испол1 зуют ди- или полиакрилат или ди- или попиметакрилат ди- или полиолов в количестве ЗО-99% от веса мономеров и процесс провод т при 5О-100°С.